JP2005538050A - 脂質ａおよび他の炭水化物リガンド類似体 - Google Patents

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Abstract

ペンタエリスリトールのコア構造を脂質Ａ中の１または両方の糖の置換体として用い、一連の脂質Ａ類似体の産生へと導いた。これら脂質Ａ類似体はさらに、例えば、負に荷電した基の数、性質および位置、および脂質鎖の数、性質および位置に関して脂質Ａとは異なることができる。脂質Ａ類似体は免疫刺激剤として有用な脂質Ａアゴニスト、または敗血症ショックの治療に有用な脂質Ａアンタゴニストである。同様な方法で、ペンタエリスリチルアミンの残基は関心のある生物活性を有する炭水化物リガンド中のアミノ糖残基のための置換基として用いられ、一連のリガンド類似体を産生する。これらは、例えば、ハプテン、バクテリア宿主細胞付着のインヒビター、等として有用である。

Description

この出願はその全体を参考文献に組み込む２００３年５月９日出願の米国仮出願６０／３７８，６４５の非仮出願である。本発明はペンタエリスリトールの誘導体によって糖ユニットの置換により特徴づけられる脂質Ａ類似体に関する。またリピドＡを含む炭水化物リガンドの類似体に関し、ペンタエリスリチルアミンの誘導体によってアミノ糖ユニットを置換することを特徴とする。
関連した出願の相互参照
ビオミラ（ジアングら）が２０００年１１月１５日に出願した（特許文献１）はいくつかの新しい脂質Ａ類似体の設計と合成に関する。類似体はモノホスホリル化され、（１）少なくとも１の新規の非天然脂質（例えば脂質ＩまたはＩＩ）の化合物３３および１０２（その図３）、または（２）脂質の非天然組合せのいずれかを含んでいた。後者は均一な鎖長の脂質を運ぶ脂質−Ａ類似体に関する。その化合物５４と８６（その図４）はこのカテゴリイに入る。その化合物７０（その図１９）は類似するが、また３−Ｏ−位置でｎ−プロピル基を含み、非天然エーテル結合をもつ短い非天然アルキル基を組み込む脂質−Ａ類似体の例である。合成リポペプチド抗原、（図３４）、腫瘍−関連ＭＵＣ１ムチンから誘導された修飾２５−アミノ酸配列を用いることにより、出願人らはこの発明に開示された一定の合成脂質−Ａ類似体のアジュバントの性質を評価することができた。予備的インヴィヴォ／インヴィトロ研究により得られたＴ−細胞胚芽発生とＩＦＮ−γレベルのデーターに基づき、アジュバントとして、合成脂質Ａ構造４８、５４、７０、８６、１０２および１０４はバクテリア起源の脂質−Ａ製剤と同じ効果があることが示された。
コガンテイらの２００２年６月１１日出願（特許文献２）はペンタエリスリトールコアを用いる組み合わせペプチドとグリコペプチドライブラリーに関する。
ビオミラの２００３年４月９日出願（特許文献３、コガンテイら）はグリコリポペプチドが少なくとも１の病気関連エピトープからなり、少なくとも１の脂質化した内部アミノ酸またはＭＵＣ１エピトープの存在によって特徴づけられ、ワクチンにおいて、好ましくはリポソームと共に用いられる。
ビオミラの１９９５年４月１２日出願（特許文献４、ロンゲネッカーら）は一次エピトープと免疫調節ペプチドの共役体、または一次抗原と免疫調節ペプチドの混合物を用いてＣＭＩ特異的である免疫応答を顕在化することができることを開示する。
ビオミラの２００３年２月４日出願（特許文献５、ジアングら）はＣｐＧジヌクレオチドからなる共有的に脂質化したオリゴヌクレオチド、またはその類似体を、免疫刺激剤として用いることに関連がある。Ｐｅｔ構造を用いてそのようなユニットを結合できることが開示されている。
上記関連の出願はここにその全体を参考文献として組み込む。
ペンタエリスリトール
ペンタエリスリトール（Ｐｅｔ）およびジペンタエリスリトール（ジ−Ｐｅｔ）は共通のポリオールでありそれらは広くオイル工業で用いられ潤滑油その他のマクロ分子を製造する。誘導体、テトラキス−［１３−（２’−デオキシチミジン−３’−Ｏ−イル）−６，９−ジアザ−２−オキサ−５，１０，１３−トリオキソトリデシル］−メタン（ｄＴ４−ＰＥ−ＰＬＣ）は溶液中で大規模オリゴヌクレオチド合成のための液相キャリヤとして用いられた（Worl、Rら、1999、化合物６）。さらに、Ｐｅｔ誘導体、半フッ素化ペンタエリスリトールテトラベンゾエートを用いて液晶構造（Cheng，X.H.ら、2000）を設計し、そしてペンタエリスリトール脂質誘導体（例えば、ジミリストイル−トリメチルグリシンペンタエリスリトール）を哺乳類細胞（Nantz，M.H.ら、2001）に核酸を配るためにカチオン性リポソームを調製する際に用いられた。ペンタエリスリトールのトリアミン誘導体はキレート剤の調製に出発物質として用いられた（Dunn，ら、1990）。
ペンタエリスリトールの四方向コアは、例えば、多官能デンドリマー（Armspach，D.ら、1996およびKuzdzal，S.A.ら、1994）の合成において、カップリング剤として、および組合せ化学のための分子骨格として（Farcy，N.ら、2001）良く用いられた。さらに、ランガナサンらはＰｅｔユニットをコアとして用いツインナノチューブを構築するためのスピロ−自己−集合環状ペプチドを設計した（Ranganathan，D.ら、2001）。
特にＰＥＴユニットを糖ユニットをカップリングするために用いることは注目される。Lindhorst，ら、Eur．J．Org．Chem．2027−34（2000）はＰｅｔユニットを四マンノシドのクラスターのためのフレームワークとして用いた。Schmidtら、Eur．J．Org．Chem．669−674（2002）は似た構造を調製し、脂質基（Ｃ16Ｈ33）を４個の周辺炭素の一つにＯ−結合し、１ないし３個のマンノシド残基を、エチレンオキシオリゴマースペーサーを介して、周辺炭素の他のものにＯ−結合した。脂質または糖含有部分に結合しなかったこれら周辺炭素は簡単に水酸化された。最後に、Hanessianら、1996はペンタエリスリトール骨格を用いて２個のＴｎ（単糖類ＧａｌＮＡｃ）またはＴＦ（二糖類Ｄ−Ｇａｌβ（１−＞３）ＧａｌＮＡｃ）エピトープのクラスターを与え、Ｐｅｔコアの周辺炭素にスペーサーを介して各Ｏ−結合した。残りの２個の周辺炭素のうち、１個は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＡｃにＯ−結合し、他のはアリル（Hanessian３３）または１−オクテニル（Hanessian３７）にO-結合した。これら参照文献のいずれも任意の部分にＮ−結合したＰｅｔコアの周辺炭素ではない。
上述の種々の応用のなかで、Ｐｅｔユニットはコアとして働き他の部分を運ぶ。またオリゴ糖において糖ユニットを置換するために用いることもできる。しかし、脂質Ａ二糖類において糖ユニットを置換するために用いられていなかった。またＰｅｔ−ＮＨ−は任意の炭水化物リガンドにおいてアミノ糖を置換するために用いられていなかった。
Toepferらはセレクチン結合のために新しいリガンドとして１個のＰｅｔユニットを含むシアリル−ルイスＸおよびシアリル−ルイスＡ擬態を開示した（Toepferら、1995；Toepferら、2000）。従って、Toepferら、1995の化合物４において、Ｐｅｔユニットの周辺炭素の２個はヒドロキシル化され、１個は単糖ユニットからなる部分にＯ−結合され、最後のものは二糖類からなる部分にＯ−結合される。Toepferらの類似体において、Ｐｅｔユニットは、出願人の炭水化物リガンド類似体におけるようなアミノ糖ではなく、普通の糖ユニットを置換する。さらに、Toepferらによって予期された唯一の親油性基は有機合成において保護基として慣例上用いられる基、例えば−Ｏ−Ａｌｌ、−Ｏ−Ｔｆ、または−Ｏ−Ｂｎで糖ヒドロキシルの置換で得られるものである。
Aguileraら、1988は抗−有糸分裂活性のためのオリゴ糖の類似体のテストを報告した。元のオリゴ糖は四糖類α−Ｄ−ＧａｌＮａｃ−β−Ｄ−Ｇａｌ−（１−＞４）−［α−Ｌ−Ｆｕｃ−（１−＞３）］−β−Ｄ−ＧｌｃＯｍＭｅであり、関連した硫酸化した三糖類であり、ルイスＸ−タイプ構造を含む。三糖類の類似体では（Aguilera化合物１３−１６）、１の糖がＰｅｔユニットと置き換わった。四糖類（１７，１８）の類似体では、糖ユニットの2個がＰｅｔユニットと置き換わった。従って類似体は二糖類を含み、α−フコシル残基がＧｌｃＮａｃのＣ−３位置に結合した。すべての６個の類似体では、二糖類部分の１個のヒドロキシルは−Ｏ（ＣＨ２）７ＣＨ３と置き換わり、このようにして液体官能基を分与した。類似体１４，１６および１８、４個のＰｅｔユニットの３個では、周辺炭素はヒドロキシル化された（残りの炭素は二糖類からなる基に結合する）。Aguilera化合物１３、１５および１７では、２個の周辺Ｐｅｔ炭素がヒドロキシル化され三番目は硫酸化した。しかし、これら化合物は細胞タイプのすべてにおいて抗有糸分裂剤として不活性であることが見出され、従ってこの族の類似体において負に荷電した基を更に用いることは認められなかった。
リポ多糖類（細菌性）
リポ多糖類（ＬＰＳ）はグラム陰性バクテリアの外膜の外小葉に限定して見出される唯一の糖脂質である。構造的には、バクテリアＬＰＳ分子は３つの主領域をもつ：Ｏ−抗原領域、コア領域および脂質−Ａ領域（Stryer、1981；Raetz、WO86／05687）。Ｏ−抗原領域は菌株特異的多糖類部分であり、生物体の抗原性特異性を決定する。コア領域はオリゴ糖鎖であり外膜の統合性を維持する役割を演じる。脂質−Ａ領域は保存され適所にリポ多糖類を保持する疎水性アンカーとして働く。
ＬＰＳは、注入されるときまたはグラム陰性細菌感染により蓄積されるとき、哺乳類における多くの病態生理学現象を引き金にすることが知られている。ＬＰＳの脂質−Ａ成分の発見の前に、「エンドトキシン」の語は一般にＬＰＳの効果を記載するのに用いられた。グラム陰性細菌からのエンドトキシンは熱安定性、細胞結合、発熱性および潜在的致死性である。そのエンドトキシン活性に加えて、ＬＰＳはまた種々の生物活性を示し、これは免疫アジュバント活性、Ｂ−リンパ球有糸分裂誘発、マクロファージ活性、インターフェロン生成、腫瘍退行等を含む。Ｏ−抗原およびコア領域の両方がＬＰＳの毒性活性を調節するが、一般に疎水性脂質−Ａ部分がエンドトキシンのこれら病態生理学効果に応答できることが信じられている（Rietschel、1992：Takada、1992）。
脂質Ａおよびその合成類似体
脂質Ａはリポ多糖類（ＬＰＳ）の脂質アンカー、グラム陰性細菌の外細胞膜成分である。ＬＰＳは細菌感染に続く宿主の生得的免疫の強いアクチベーターであり、その脂質Ａ部分はインヴィトロおよびインヴィヴォテスト系の多数でＬＰＳの生物活性に応答できることを示した。脂質Ａとその類似体の構造活性関係は過去２０年以上詳細に研究されてきた（Rietschelら、1996；Takada ＆ Kotani、1989）。
脂質Ａは１−Ｏ−および４’−Ｏ−位置でホスホリル化したβ−（１，６）−結合Ｄ−グルコサミン二糖類からなる。ヒドロキシル化および非ヒドロキシル化した脂肪酸は二糖類のヒドロキシル基およびアミノ基に結合し、脂質Ａに疎水性を与える。ＰＣＴ／ＵＳ００／３１２８１（Jiang3A-PCT）の図１は天然脂質Ａ構造、大腸菌から単離した化合物Ａ（Imoto、1985a,b）、およびサルモネラ菌株から単離した化合物Ｂ（Rietschel、1984a,b；Seydel、1981；Strain、1985）の２例を示す。
大多数の合成脂質Ａ類似体が調製された。例えば、Lienら、2001はアゴニストER-112022を記載しており、脂質Ａの二糖類基幹が−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨＣＯ−（ＣＨ２）４−ＣＯＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−で置き換わる。２つのホスフェート基はこの置換基幹を脂質鎖に結合する。Christら、1995は脂質ＡアンタゴニストＥ５５３１を調製し、エンドトキシン−アンタゴニストRhodobacter capsulatus脂質Ａの構造の変更によって誘導し、Ｃ−３およびＣ−３’炭素での天然産アシル結合をエーテル結合と置き換え、そしてＣ−６’ヒドロキシル基をブロックした。Ｅ５５３１は安定性と純度において有利であった。
TakadaとKotaniは内毒性および他の生物活性のための脂質Ａの構造的必要性の徹底的研究を行い（Takada＆Kotani、1989）種々の基によって調製された合成脂質Ａ類似体を比較した（Kotani、1986a、b；Kiso、1986：Fujishima、1987；Charon、1985：Sato、1995）。彼らは免疫アジュバント活性に対し、脂質Ａの構造的必要性は内毒素活性およびＩＦＮ−α／βまたはＴＮＦアルファ誘発性に必要なものと同様に強固でないらしい（Takada、1989；Ribi、1982）。しかし、全脂肪酸の除去は脂質Ａに通常起因する全生物活性を抑止する。
Ribiら1982は毒性に必要な最小構造は長鎖脂肪酸が結合しているビスホスホリル化β−（１，６）結合ジ−グルコサミンコアであることを示した。脂質鎖の最適数が、ヒドロキシアシルまたはアシルオキシアシル基の何れかの形で、脂質Ａの強い内毒素および関連した生物活性を及ぼすために二糖類基幹に必要であることが明らかにされる（Kotani、1986a）。
さらに、いずれかのホスフェート基の除去はアジュバント活性の対応するロスなしで毒性をかなり失うことになる。モノホスホリル脂質Ａのバイオアッセイは、毒性そして発熱性応答を誘発する際にモルベースで１０００倍弱いことを示したが、免疫刺激活性におけるジホスホリル脂質Ａ（および内毒素それ自体）に匹敵した（Werner、1996）。大腸菌およびサルモネラ菌株からのジホスホリル脂質Ａの毒性が高いが、大腸菌からのモノホスホリル脂質Ａは毒性を減らしたが普通にＬＰＳと関連する多くの生物学的活性を保持することが知られている（Werner、1996；Takayama、1984；Ulrich、1995；Myerr、1990）。
最近、脂質Ａのアゴニストおよびアンタゴニスト活性が脂質Ａの内因性コンホメーションによって支配され、分子中のアシル鎖の数と分布が主として電荷の数によって決められることが示唆された（Syderら2000；Schrommら2000）。
さらに、脂質ＡはＴｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）に対するリガンド、ＬＰＳ／脂質Ａへの免疫応答の仲介に含まれるパターン−認識受容体であることが示唆された（Kutuzovaら、2001）。
国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ００／３１２８１号明細書 米国特許出願第６０／３８７，４３７号明細書 国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／１０７５０号明細書 国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９５／０４５４０号明細書 国際特許出願ＰＣＴ／ＣＡ０３／００１３５号明細書
脂質−Ａ／ＬＰＳ関連障害のための有効な治療、関連した毒性のない強力なアジュバントが必要である。天然源からの修飾していない脂質−Ａの高毒性は製薬としての一般的使
用を思いとどまらせる。
天然物由来の脂質−Ａのもつ別の主な欠点は製薬学的に受け入れられる純度、再現性の活性および安定性をもつ十分な物質を入手する際にある。天然由来の脂質−Ａは脂質鎖の数を変えた脂質−Ａの成分を含む細胞壁の複数成分の混合物である。天然脂質−Ａ生成物のそのような不均一性は次の２つの原因による：（１）脂質−Ａ部分のアセンブリーでの生合成可変性および（２）処理および精製中の脂質−Ａ基幹からの脂肪酸のロスである。従って、混合物の構成の再現性によって製造工程を制御することが困難であり、生物学的活性および毒性においてかなり関連がある。
発明の概要
脂質Ａ類似体
本発明の一つの目的は脂質Ａの設計、合成および使用であり、脂質Ａ二糖類の糖ユニットの１または両方が少なくともペンタエリスリトールの炭素骨格と置換している（Ｐｅｔコア）。これらの脂質Ａ類似体は天然物からの追加の相違、例えば、脂質鎖の数、構造および位置の変化、一つのホスフェート基の除去、１または両方のホスフェート基を関連する基（例えば、硫酸基）と置換すること、および糖ユニットのスペーシングまたは結合（またはそれらの置換）での変化に特徴がある。
本発明はまた脂質Ａ類似体を含み、脂質Ａの二糖類の糖ユニットの一つは少なくともペンタエリスリトールの炭素骨格と置換され、他のユニットはオミットされている。
図３は１または２のＰｅｔユニットを用いることによって得られた脂質Ａ二糖類の構造の類似物の数例を示す。
いくつかの具体例では、脂質Ａ類似物はペンタエリトリタミン（Ｐｅｔ−ＮＨ２）の誘導体であり、脂質Ａがグルコサミン、アミノ糖からなるので適当である。
脂質Ａアゴニスト活性（免疫刺激活性）をもつ脂質Ａ類似体は感染および癌の治療に免疫治療剤として有用である。ワクチンアジュバントとして、抗原とともに処方され、投与された抗原にさらに強い免疫応答を与え、これによってワクチン効力を改善する。また並ぶものがない製薬剤として（生得的な免疫を改善する）も用いられる。当然、標的とする病気の治療に他の製薬剤と組合せて用いることができる。
脂質Ａアンタゴニスト活性をもつ脂質Ａ類似体はＬＰＳ媒介の病態生理学障害の制御に用いられる。グラム陰性バクテリアから放出されたＬＰＳへの際立った応答により、バクテリア感染は時には敗血症と呼ばれる病態生理学現象のカスケードに導かれる。敗血症は致命的である；米国だけでも年間数万人が死ぬ。脂質ＡアンタゴニストはＬＰＳ−結合受容体、Ｔｏｌｌ−様受容体４（ＴＬＲ４）に結合するが、そのような結合は免疫系によって炎症性サイトカインの非制御放出へ導かないであろう。従って、これらアンタゴニストはＬＰＳ−介在の障害、例えば炎症および敗血症ショック徴候を治療するために有効な製剤である。
本発明では、Ｐｅｔコアからなる脂質Ａ類似体のクラスを設計し、いくつかの特別な例を合成した（化合物１−４、図５）。
予備的な生物学データーは脂質Ａ擬態１および２が、脂質Ａ二糖類の還元性末端グルコサミンを置換する１個のＰｅｔＮＨ２を含み、強い免疫刺激活性を示すことを示している（図１４および１５）。予期した類似体の生物活性を更に示すため、合成脂質Ａ類似体１および２の各々は、腫瘍関連ＭＵＣ１グリコプロテインから誘導された合成腫瘍関連リポペプチド抗原と共に、リポソーム処方に組み込まれた。このワクチン処方はマウスでは腫瘍成長に明らかな阻害効果を示す（図１６）。
従って、脂質Ａ類似体、特に化合物１および２は、この発明で開示するように、病気治療における免疫刺激アジュバントとして用いられる。好適例では、リポソーム構成に用いられ、種々の病気、例えば感染性病気および癌を免疫学的に治療するため、全体として合成免疫刺激アジュバントおよび全体として合成抗原からなる。
２つの他の脂質Ａ類似体、３および４を合成した。これらはジ−ペンタエリスリトール（ｄｉ−Ｐｅｔ）およびジ−ペンタエリトリトアミン（ｄｉ−ＰｅｔＮＨ２）ユニットの誘導体を含み、それぞれ、全脂質Ａ二糖類基幹を置換する。化合物３と４の生物学的性質は評価されなかった。
脂質Ａアンタゴニスト活性をもつ類似体はリポ多糖（ＬＰＳ）−エンドトキシン−関連障害、例えば敗血症ショックを治療する際に有用である。
炭水化物ハプテン類似体
本発明の別の対象は炭水化物リガンドの類似体の設計、合成および使用である。単糖類はいくつかのキラル中心をもつが、Ｐｅｔユニットはその高シンメトリーにより何もキラル中心をもたない。異なる立体化学の種々の単糖類をＰｅｔが擬態できるのはこの非キラル性のためである。同様に、Ｐｅｔの1本の腕がアミノ基と置換されると、得られるペンタエリトリトアミン（ＰｅｔＮＨ２）ユニットは、１−アミノ−１−デオキシ−（グリコシルアミン）、２−アミノ−２−デオキシ−（グリコサミン）、３−アミノ−３−デオキシ−単糖糖を含む種々のアミノ−置換単糖類を擬態できる。従って、ほぼ全部の天然産炭水化物分子の構造の擬態は天然単糖類およびＰｅｔユニットの組合せまたはＰｅｔユニット単独を用いて生成できる。
他のものはＰｅｔユニットを用い、炭水化物リガンドにおいて糖ユニットを置換するが、各場合において用いたＰｅｔユニットはヒドロキシル酸素、すなわち、（Ｐｅｔ炭素コア）（−Ｏ−）4のすべてを保持した。以下に示す例はペンタエリトリトアミン（ＰｅｔＮＨ２）の誘導体
が脂質Ａ二糖類の還元性末端グルコサミンを容易に擬態できることを示した。脂質Ａはアミノ糖からなる炭水化物リガンドであるから、ＰｅｔＮＨ2を用いて前記化３１と少なくとも１個のアミノ糖を置換して、アミノ糖からなる他の炭水化物リガンドの類似体を作ることができる。例えば化３１を用いてＮ−アセチル−グルコサミンおよびＮ−アセチル−ガラクトサミンを置き換えることができる。この形（Ｐｅｔ炭素コア）（−Ｏ−）3−ＮＨ−の誘導体は特に興味あるものである。
図１９は腫瘍関連炭水化物抗原の若干のＰｅｔＮＨ2−誘導類似体を示し、腫瘍を治療するため免疫治療の発展に潜在的に有用である。同様に、図２０は宿主へのバクテリアの付着に含まれる炭水化物リガンドの若干のＰｅｔＮＨ2−誘導類似体を示す。通常バクテリア感染は宿主細胞へのバクテリアのコロニー化でスタートし、その工程の間に炭水化物分子は結合リガンドとして用いられる。これら炭水化物の構造類似体はバクテリア付着のための強力なインヒビターであり、それゆえ、抗生物質として用いバクテリア感染を防ぐことができる。天然産炭水化物を超えるそのような類似体の１の利点は類似体が生物系において酵素分解にさらに耐性であり従ってそれらの生体利用度が改良されることである。
本発明の対象は背景技術の欠けているものを補うことを含む。
明快にするために、略語「Ｐｅｔ」は本発明の脂質Ａ類似体の構造成分の文脈で用いられ、ペンタエリスリトール「残基」、すなわち、その水素が１個またはそれ以上少ないペンタエリスリトールであり、さらに大きい化学存在物に組み込まれる。さらに、「Ｐｅｔ」の語は、この脈略で用いるとき、開示された修飾部分を含み、Ｐｅｔの５個の炭素コア（２，２−ジメチルプロパン）を保持するが、１個またはそれ以上のヒドロキシル酸素が下記に定義するようにスペーサー部分Ｙ１−Ｙ４で置き換えられている。
同様に、略語「ＰｅｔＮＨ2」は本発明の炭水化物リガンド類似体（脂質Ａ類似体）の構造成分の脈略で用いられ、意図するものはペンタエリトリトアミンの残基である、すなわち、後者はアミノ水素が１より少なく、選択的にはヒドロキシル水素が１またはそれ以上少ない。さらに、ここで用いられる場合、「Ｐｅｔ−ＮＨ２」の語は開示された修飾部分を含み、１またはそれ以上のヒドロキシル酸素が以下に定義するようにスペーサー部分Ｙ１−Ｙ４と置換される。シンボル（前記化３１）はアミノ官能基が存在しなければならないが、他の官能基は変更を必要とすることを示すために用いられることがある。
さらに「Ｐｅｔ」の語は特別な場合として「Ｐｅｔ−ＮＨ２」を含む、すなわち、１個のヒドロキシル酸素が窒素によって置換されることを明らかにしなければならない。Ｐｅｔ炭素のどれもアミノ化されない場合に特に言及する必要がある場合、「Ｐｅｔ−ＯＨ」または「Ｐｅｔ−ｃｈａｌ」を利用でき、「ｃｈａｌ」はカルコゲンを示す。
脂質Ａ類似体
バクテリア脂質Ａ組成物はワクチン製剤において用いられる種々の抗原への免疫応答を高めるためにアジュバントとして広く用いられる。
本発明は新規のバクテリア脂質Ａ、特に大腸菌脂質Ａの合成構造類似体、およびそのような類似体の合成法に関する。これら脂質Ａ類似体はバクテリア脂質Ａのアゴニストまたはアンタゴニストであってもよい。アゴニストはアンタガニストよりも脂質Ａに構造が類似する程度が高いらしい。
合成脂質Ａ類似体は天然産のアジュバント製剤よりもいくつかの利点がある。合成化合物は単一構造で化学的に定義され従って製造から最終処方までその追跡および制御が容易である。合成物はコストが効果的であり、品質および性能の両方で一貫性を保持するが、商業的スケールアップに容易に適合できる。
天然大腸菌脂質Ａ分子の不変の構造の特徴はそのβ−（１，６）−結合Ｄ−グルコサミン二糖類基幹である。しかし、単糖類類似体が内毒素活性を表すことができることが示された。参照、例えばMatsuuraら、Infect．＆ Immune．63：1446−51（1995）；Funatogawaら、Infect.＆ Immun.66：5792−98（1998）。さらに、脂質Ａアゴニストは全体の二糖類ユニットが非環式基幹で置換される、参照、Hawkins、J.Pharmacol．Exp.Therap.300：655−61（2002）。
本発明の脂質Ａ類似体は少なくとも１個の天然脂質Ａの糖ユニットをペンタエリスリトール（Ｐｅｔ）の５個の炭素基幹（コア）と置換する。これは４個の周辺炭素に単に結合した中心炭素を特徴とする：
これらの炭素は、また、他の部分に結合する。
残りの糖ユニットは（あるいは修飾した形で）保持でき、同様にＰｅｔで置換され、または全く省略できる。
従って、本発明の脂質Ａ類似体は次の構造式をもつ。
式中のＡ１−Ａ４を以下に定義する。Ａ１−Ａ４の各々は類似体の「一次分枝」であることができる。注、Ａ１−Ａ４のいずれも単に水素ではない。
糖ユニットの保存は重要ではないので、脂質Ａの１または両方の糖ユニットはＰｅｔユニットによって類似体において置換できるか、または1個は置換し他のものは置換しないでオミットする。
一般に、脂質Ａに似た構造を保持するには、次のさらなる制限をＡ１−Ａ４に適用する。
（１）Ａ１−Ａ４の少なくとも１は少なくとも１のホスフェート同等体（ホスフェート基、または下記のようなその類似体からなり、そして
（２）Ａ１−Ａ４の少なくとも１は下記のような少なくとも１の強親油性基からなる。
制限（１）に関しては、天然脂質Ａはジホスホリル化されるが、モノホスホリル化類似体は活性であり、出願人は一定のホスフェート類似体も効果があると信じている。
制限（２）に関しては、天然脂質Ａは、はっきりと、脂質化され、脱脂質化される場合は、その免疫刺激活性を失う。
好適例では、Ａ１はＹ１Ｒ１、Ａ２はＹ２Ｒ２、Ａ３はＹ３Ｒ３、そしてＡ４はＹ4Ｒ4であり、式中のＹ1−Ｙ4は以下に定義するようにスペーサーである。好ましくは、Ｒ1−Ｒ4の各々は、独立して、水素、有機基、または近隣Ｙ基と共に、ホスフェート、サルフェートまたはボレートを形成する基からなる群から選択される。ほかの方法では、好ましくは各Ｒ１−Ｒ４は独立して水素、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−Ｓ（＝Ｏ）（＝Ｏ）ＯＨ、−Ｂ（ＯＨ）ＯＨ、または有機基からなる群から選択される。好ましくは、これら有機基の各々は水素とは別に２００以下の原子、さらに好ましくは、１５０以下、またさらに好ましくは１００以下の原子を有する。
Ｐｅｔユニットは以下に定義するように、非修飾のＰｅｔのヒドロキシル酸素に対応するかまたは置換するＹ1−Ｙ4基とともに、Ｐｅｔ基幹であると考えられる。
さらに１または両方の脂質Ａの糖ユニットを置換するために用いられるものよりも類似体においてさらにＰｅｔユニットであることは特記される。そのような「外」Ｐｅｔユニットはホスフェート同等体、強親油性基、その他の有用な化学部分の付着のために骨格として有用であることができる。好ましくは、２以下の「外」Ｐｅｔユニット（すなわち、類似体が糖ユニットを含む場合３個のＰｅｔユニット全部、または含まない場合４個のＰｅｔユニット全部）がある。さらに好ましくは、丁度１個、最も好ましくは、「外」Ｐｅｔユニットがない。
類似体に２またはそれ以上のＰｅｔユニットがあるとき、隣接するか、または別の部分によって分離される。隣接する場合、１のＰｅｔユニットのスペーサーＹ１−Ｙ４の１はまた隣接ＰｅｔユニットのスペーサーＹ１−Ｙ４の１として働く、例えば図３の化合物ＶＩＩ−ＩＸ、および図５、化合物３および４。
あるいは、１のＰｅｔユニットのスペーサーと他のＰｅｔユニットのスペーサーを結合する別の化学部分がある。この部分は、しかし必要ないが、糖ユニット、強親油性基、および／またはホスフェート同等体からなる。
類似体に２以上のＰｅｔユニットがある場合、線状に（Ｐｅｔ１...Ｐｅｔ２...Ｐｅｔ３）、円筒状に（Ｐｅｔ１...Ｐｅｔ２...Ｐｅｔ３...Ｐｅｔ１）、または分枝形態に（Ｐｅｔ１...Ｐｅｔ２...（...Ｐｅｔ３）...Ｐｅｔ４）、またはそれらのいくつかの組合せで結合できる。上記で「...」はある他の化学部分に隣接してまたは通じていることができる。
好適例では、脂質Ａ類似体が脂質Ａ類似体が糖ユニットからなる場合、脂質類似体はSeydelら、Eur．J．Biochem．267：3032−39（2000）によって記載されたと同じ薄い多層フイルムを調製する場合、「膜」表面に関連して類似体の糖基幹の傾き角は、Seydelによって教示され、アゴニストが望ましい場合、少なくとも３５°、さらに好ましくは５０°以上であり、アンタゴニストが望ましい場合、傾き角は２５°以下である。これは単に好適例であり、傾き角を決定する必要はなく、または決定する場合、上に示唆した範囲であることが強調されなければならない。
一次アーム
一次アームＡ１−Ａ４およびそれらの成分Ｙ１−Ｙ４およびＲ１−Ｒ４のナンバリングは完全に自由裁量である。
類似体を類別する１のアプローチは１の糖ユニット、第二のＰｅｔコア、またはいずれでもないかどうかに基づく。
類別する別のアプローチはＨであるＲ基Ｒ１−Ｒ４の数に基づく。
類似体の第一のクラスでは、Ｒ１−Ｒ３はＨであり、Ｒ４は強親油性基、ホスフェート同等体、および、任意に、糖ユニットまたは第二のＰｅｔコアからなる。このクラスでは、Ａ１−Ａ３の全部が−ＯＨ、または２個が−ＯＨおよび3番目が−ＮＨ2のいずれかが好ましい。Ｒ４では、Ｐｅｔコアに隣接する成分は強親油性基、ホスフェート同等体、または、あるならば、糖ユニットまたは第二のＰｅｔコアであることができる。好ましくは、Ｒ４は糖または第二のＰｅｔコアを含み、さらに好ましくは、これは第一のＰｅｔコアに隣接する成分であり、ホスフェート同等体および少なくとも１の強親油性基はそれに結合する。
類似体の第二のクラスでは、Ｒ１−Ｒ４のちょうど2個はＨ（そして好ましくは対応するＹ基は−Ｏ−）であり、従って強親油性基、ホスフェート同等体、そして任意に、糖ユニットまたは第二のＰｅｔコアは残り２本のアームの間に分布される。従って、化合物１では、１のアームはＮＨ結合強親油性基からなり、第二はＯ−結合ホスフェート化およびリピド化糖ユニットからなる。
類似体の第三のクラスでは、Ｒ１−Ｒ４のまさに一つはＨ（そして好ましくは対応するＹ基は−Ｏ−）であり、そして強親油性基、ホスフェート同等体、そして任意に、糖ユニットまたは第二のＰｅｔコアは残り３本のアームの間に分布される。
従って、化合物２では、1本のアームはホスフェートであり（ホスフェート酸素の１個はＹ基の二重の代用になることに注意）、第二のアームはＮＨ−結合強親油性基であり、最後のアームはＯ−結合糖であり、リピド化（−ＮＨ−によって）およびホスフェート化される。化合物４は、リピド化およびホスフェート化される糖ユニットよりはむしろ第二のＰｅｔコアであることを除き、似ている。化合物３は４とは異なり、脂質がＰｅｔコアにＮＨ−よりはＯ−結合している。
類似体の第四のクラスでは、Ｒ１−Ｒ４はいずれもＨではない。せいぜい１本のアームが糖ユニットまたは第二のＰｅｔコアからなるなら、これは他の３本のアームがホスフェート同等体および／または強親油性基からなることを意味する。次には、少なくとも２個のホスフェート同等体または少なくとも２個の強親油性基でなければならないことを意味する。
類別のための第三のアプローチはホスフェート同等体の数および位置に基づいている。次いでクラスは（１）１個のホスフェート同等体、（２）２個のホスフェート同等体、しかし同一アーム上、（３）異なるアームの２個のホスフェート同等体、または（３）２個以上のホスフェート同等体である。さらにホスフェート同等体が糖ユニットに結合するかまたはしないかを基礎として細分できる。
類別のための第四のアプローチは強親油性基の数と位置を基礎とする。例えば、化合物１および２では３個の強親油性基があり、化合物３および４では２個である。また、Ｐｅｔコアに（Ｙスペーサーを介して）または糖ユニットにまたはホスフェート同等体に結合できる。
主要な要素の結合
この特定化では、脂質Ａ類似体の４つの主要な要素：Ｐｅｔユニット、糖ユニット、強親油性基、およびホスフェート同等体を定義する。二つの主要な要素が結合していると言われるとき、それは他の主要な要素が介在しないことを意味する。いくつかの他の化学部分、例えば開示されたリンカーおよびスペーサー、中間的なものがある。
従って、強親油性基がホスフェート同等体に結合すると言われるとき、介在する糖ユニットまたはＰｅｔユニットのないことを意味する。同様に、強親油性基が糖ユニットに結合すると言われるとき、それは介在するＰｅｔユニットまたはホスフェート同等体のないことを意味する。逆に、強親油性基をＰｅｔユニットに結合すると言われるとき、それは介在する糖ユニットまたはホスフェート同等体のないことを意味する。同じような例は４種の主要要素の他の可能な二者間の結合に与えられる。
特定化はまた第三の要素によって結合されるような２つの要素を同定することができ、その場合に前者の要素の各々は後者に結合される。
スペーサー（Ｙ１−Ｙ４）
ペンタエリスリトールはＡ１−Ａ４がすべて−ＯＨである一般式Ｉの化合物であると考えられる。同様に、Ｙ１−Ｙ４がすべて−Ｏ−でありＲ１−Ｒ４がすべて−Ｈである式の化合物である。
ペンタエリスリトールそれ自体が本発明の脂質Ａ類似体の一つではないが、後者は−Ｏ−またはその類似体であるスペーサーＹ１−Ｙ４の結合を企図する。
好適例では、スペーサーＹ１−Ｙ４の各々は独立して−（ＣＨ２）ｎＯ−、−（ＣＨ２）ｎＳ−、および−（ＣＨ２）ｎＮＨ−からなる群から独立して選択され、ｎは独立して０ないし４である。さらに好ましくは、これらスペーサーの各々は−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＨ−である。さらに好ましくは、スペーサーの各々は−Ｏ−または−ＮＨ−である。最も好ましくは、（ａ）これらスペーサーのすべては−Ｏ−であり、または（ｂ）１個のスペーサーは−ＮＨ−であり他のスペーサーは−Ｏ−である。
脂質Ａ類似体でのホスフェート同等体
天然脂質Ａは２つのホスフェート基に特徴があり、各々は糖ユニットに結合する（脂質Ａは二糖類である）。しかし、モノホスフォリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）がアジュバントする活性を有し天然ジホスホリル化分子よりも毒性が少ないことが示された。また、我々は脂質ＡおよびＭＰＬＡの１またはそれ以上のホスフェート基が一定の関連する化学部分によって置換されると信じる。
従って、本発明の脂質Ａ類似体では、少なくとも１のＡ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４が少なくとも１の−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＯＳ（＝Ｏ）2−Ｏ−、または−Ｏ−Ｂ（ＯＨ）−Ｏ−部分からなり、これらは最も好ましいものからもっとも好ましくないものまで列挙される。ホスフェート類似体はここにそのような部分として定義されホスフェート自体とは別である。ホスフェート同等体はここにホスフェートおよびホスフェート類似体の両方を含むものと定義される。
好ましくは、脂質Ａ類似体が糖ユニットを不足する場合、少なくとも１のホスフェート同等体は−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ（＝Ｏ）2−Ｏ−、または−Ｏ−Ｂ（ＯＨ）−Ｏ−からなる。
前記３つの構造を用いてＰｅｔコアを、少なくとも１個の強親油性基、および／または糖ユニットおよび第二のＰｅｔコアからなる群から選択される糖同等体からなる化学部分に結合することができる。そのような場合、ホスフェート同等体の−Ｏ−の１個は他の場所で言及したスペーサーＹ１−Ｙ４であると考えられる。
あるいは、ホスフェート同等体は基本的に末端部分であることができる（常に−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨである）。従って、好適例では、少なくとも１のホスフェート同等体は−ＯＢ（ＯＨ）ＯＲ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＲまたは−ＯＳ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＲの形であり、式中Ｒは水素、または１−４個の炭素の置換または非置換アルキル基である。Ｒが水素である場合、これら部分の３つは無機部分：ボレート、ホスフェートおよびサルフェートまで変わる。Ｒが置換基である場合、置換体は好ましくは−ＯＨまたは−ＮＨ2である。特に関心のあるＲ基はＣＨ2ＣＨ2ＮＨ2である。関心のある他の構造はUlmerによって開示された−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−Ｒである。
他の好適例では、少なくとも１のホスフェート同等体が−Ｒ’−Ｃ（Ｏ）ＯＨの形であり、Ｒ’は１−４個の炭素の置換または非置換アルキル基である。さらに好ましくは、Ｒ’は−ＣＨ2−である。
本発明の脂質Ａ類似体は好ましくは１または２のホスフェート同等体を有し、1以上であるとき、同じかまたは異なってよい。従って、１のホスフェートおよび１のホスフェート類似体を持つことができる。1以上であるとき、ホスフェート同等体は同じかまたは、さらに好ましくは、異なる一次分枝の類似体に組み込まれる。
いくつかの好適例では、少なくとも１のＡ１−Ａ４がホスフェート同等体である。その場合、ホスフェート同等体の酸素のひとつはまたアームのためのＹ１−Ｙ４スペーサーとして働く。
他の好適例では、ホスフェート同等体は上記スペーサーに結合するより大きい部分の置換体である。特に好適な副次的例では、このより大きい部分は前記糖または糖類似体であり、天然脂質Ａでは、ホスフェート基は糖ユニットに結合する。大腸菌脂質Ａでは、ホスフェート基はコア二糖類のＣ−１およびＣ−４’炭素に結合する。
さらに好適な例では、少なくとも１のホスフェート同等体は少なくとも１の前記親油性基に組み込まれる。
脂質Ａ類似体の随意の糖ユニット
天然脂質Ａが二糖類であり、類似体の必要なＰｅｔユニットはその二糖類の２つの糖ユニットの一つを置換することは特記されなければならない。従って、脂質Ａ類似体は糖ユニットを１個有するかまたは有しない。糖ユニットを有しない場合、天然脂質Ａの第二の糖ユニットはＰｅｔコアによって置換されたか、または共にオミットされたからである。
類似体が糖を含む場合、天然脂質Ａにおけると同じ糖、グルコサミンである必要はない。しかし、ヘキソースおよび／または環状糖（特にピラノース）であることが好ましく、さらにグルコースまたはグルコース誘導体であることが好ましく、そしてさらにグルコサミンであることが好ましい。
類似体は唯一のＰｅｔユニットからなり、次いで好ましくはホスフェート同等体が−ＣＯＯＨではなく、そして好ましくは類似体は任意のネクレオベースを含まない。
脂質Ａ類似体の脂質補体
脂質多様性は天然脂質−Ａ構造間のもっとも有意な変化に断然貢献する。それぞれ糖のヒドロキシおよびアミノ基へのエステルおよびアミド結合を介してすべて結合するが、変化は結合した脂質の数、各脂質鎖の長さおよび脂質鎖内に含まれる官能基を含む。これら変化は全脂質−Ａ分子の種々の生物学的官能基そしてさらに重要にそのアジュバント性に貢献することが信じられている。
いくつかの好適例では、脂質Ａ類似体は天然脂質Ａ構造に生じる脂質鎖と同一である少なくとも１の強親油性基からなる。副次的な例では、脂質Ａ類似体の強親油性基のすべては天然脂質Ａ構造に生じる基であるが、すべてが同じ天然脂質Ａ分子において、または同じバクテリアの天然脂質Ａ分子に見出された脂質の付随事項においても生じる必要がない。しかし、これらのさらなる制限はさらなる副次的な例に考慮される。
脂質−Ａ類似体の合成によって与えられた主要な利点は、脂質鎖およびその結合を改変することによって、分子がアジュバントとしての有効性、安全性と安定性を達成するように設計することができる。
従って、他の好適例では、脂質Ａ類似体は、任意の天然脂質Ａ構造に見出されない少なくとも１の強親油性基からなる。相違は、制限されないが、鎖の長さの相違、鎖の分枝の程度、不飽和結合の存在または位置、または−ＣＯＯ−（エステル）、−Ｏ−（エーテル）または−ＮＨ−（アミノ）結合の存在または位置の相違であることができる。
化学的に言うと、エステル結合は生理学上の状態下に、加水分解に弱いので不安定である。脂質鎖の漸進的ロスはワクチンの長期貯蔵中にアジュバントの活性を徐々に減らすので、有効期間を減らす。従ってエステルの代わりに非天然であるが安定なエーテル結合の導入は有利である。
天然大腸菌脂質Ａの主要な形では、二糖類基幹は2個のグルコサミンからなり、われわれは糖ＩＩ（４’炭素にホスフェートを有する）および糖Ｉ（１の炭素にホスフェートを有する）と呼ぶ。脂質成分は６個の炭素鎖の形態をとり、糖ＩＩの２’と３’の炭素および糖Ｉの２と３の炭素に結合する。
分枝脂質は、３’−炭素にＯ−結合する。同様の分枝脂質は２’炭素にＮ−結合する。両方の分枝脂質では、一次鎖（糖環状炭素に結合したもの）はアシル鎖である。二次アシル鎖は一次アシル鎖（カルボニル炭素はＣ−１である）のＣ−３炭素にＯ−結合する。従って、全4個の炭素（アシル）鎖は直接または間接に糖ＩＩに結合する。
さらに、分枝ではないがヒドロキシル化したアシル鎖は糖環の３炭素にＯ−結合し、別のそのようなアシル鎖は糖環の２炭素にＮ−結合する。従って、全２個の炭素（アシル）鎖は糖Ｉに結合する。
１個の糖に４個のアシル鎖、および他のものには２個があるので、精製した大腸菌脂質Ａ（Alexander、2002、図２Ａ；Se3ydel、2000、図１Ａ、「ヘキサアシル脂質Ａ」）は非対称ヘキサアシル脂質成分、さらに特に４／２分布を有すると言われている。（「脂質Ａ」の参考文献は全て、限定しなければ上記のようにこの精製した大腸菌脂質Ａである。）
本脂質Ａ類似体の脂質成分は後述するように基本的に１またはそれ以上の強親油性基からなる。各強親油性基は好ましくは下記のような１またはそれ以上の主炭素鎖を与える。集合的に、本脂質Ａ類似体の脂質成分は好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上の主炭素鎖を与え、３ないし６が最も好ましい。好ましくは、各強親油性基は１、２または３の主炭素鎖を与える。好ましくは、これら主炭素鎖は各１０−２０、さらに好ましくは１２−１６の炭素である。
大腸菌脂質Ａでは、脂質基は８２の炭素原子を与え、Ｓ．minnesota脂質Ａでは、９８の炭素（７のアシル鎖）を与えるが、Ｒ．capsulatus脂質Ａでは、内毒素アンタゴニストであるが、６０の炭素原子を与える。脂質基が４２の炭素原子を与える単糖類類似体脂質Ａアゴニストがある。
従って、好ましくは、強親油性基の主炭素鎖は集合的に少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０の炭素原子を与える。望ましくは、１２０以下、１１０以下、１００以下、９０以下、８０以下、７０以下または６０以下である。
好ましくは強親油性基に対し予言されたｌｏｇＰｓ（下記）の合計は少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、または少なくとも５０である。好ましくは６０以下、５０以下、４０以下または３０以下である。
各強親油性基は好ましくは−Ｏ−、−Ｓ−、および−ＮＨ−からなる群から選択された隣接リンカーによって類似体の残りに結合する。
糖またはＰｅｔコアの炭素、または二価ホスフェート同等体のイオウ、リンまたはホウ素原子に結合することができる。糖への結合の場合、隣接リンカーは糖ヒドロキシルの酸素、チオ糖のイオウ、またはアミノ糖の窒素である。Ｐｅｔコアへの結合の場合、隣接リンカーはスペーサーＹ１−Ｙ４の位置である。ホスフェート同等体の前記原子への結合の場合、隣接リンカーは前記ホスフェート同等体の−Ｏ−である。
この隣接リンカーは下記に定義したような主炭素鎖に、または末端リンカーに直接結合することができる。末端リンカーは二価、三価、四価、等である。通常は少なくとも三価であり、従って類似体の残りを親油性基の少なくとも２種の主要炭素鎖に結合するのに役立つ。末端のリンカーは１−５の炭素原子のアルキル、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−ＮＨ−、および−Ｎ＜からなる群から独立して選択された２またはそれ以上の要素からなり、親油性基の主要炭素鎖に直接結合する末端リンカーの原子は炭素原子ではない（もしも炭素原子であるならば、それらの原子は末端リンカーの一部ではなく、炭素鎖の一部であろう）。
図４において、７番目と８番目の構造は末端リンカーを特徴とする。７番目の構造では、三価の−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ（−ＣＨ２−Ｏ−）−ＣＨ２−Ｏ−である。８番目の構造では、三価の−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ（−ＮＨ−）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−である。
糖に結合した基が強親油性基であるかどうかを決定するために、隣接リンカーを無視するが、末端リンカーは基の一部であると考えられる。同様に、Ｐｅｔコアに結合した基に対し、介在するスペーサーは無視される。
脂質Ａ類似体が糖を与えるならば、糖炭素骨格の少なくとも１の次の部位は強親油性基に結合できる：
（Ａ）アノマー環炭素
（Ｂ）環ヘテロ原子（通常は酸素）に直接隣接する他の環炭素
（Ｃ）上の（Ａ）または（Ｂ）とは別の環炭素
（Ｄ）環炭素とは別の糖
そのような結合は通常ここに定義した「隣接するリンカー」のようなリンカーによってあるが、リンカーなしの結合は（すなわち、Ｃ−置換アミノ酸）は無条件に除外される。
糖がヘキソースおよびピラノースであるならば、グルコースのように、少なくとも１の次の部位が強親油性基に結合することができる：
（１）糖環のＣ−２またはＣ−２’炭素（すなわち、天然脂質ＡがＮ−脂質化している部位のひとつ）；
（２）糖環のＣ−３またはＣ−３’炭素（すなわち、天然脂質ＡがＯ−脂質化している部位のひとつ）；
（３）糖ＩＩ環のＣ−１’（アノマー）炭素（天然脂質Ａでは、この炭素は糖ＩのＣ−６に結合するが、糖Ｉが省略されるならば、この炭素はフリーである）；
（４）糖Ｉ環のＣ−１（アノマー）炭素（天然脂質Ａでは、この炭素はホスホリル化である）；
（５）糖Ｉ環のＣ−６非環炭素（天然脂質Ａでは、この炭素は糖ＩＩのＣ−１に結合するが、糖ＩＩが省略されるならば、この炭素はフリーである）；
（６）糖ＩＩのＣ−６’非環炭素（天然脂質Ａに基づく脂質Ａ二糖類では、これはまさに−ＯＨであるが、通常はＬＰＳ分子の残りへの脂質Ａ二糖類の結合部位である）；
（７）糖ＩＩ環のＣ−４’炭素（天然脂質Ａでは、これはホスフェート化である）；
（８）糖Ｉ環のＣ−４炭素（天然脂質Ａでは、これはフリー炭素を運ぶ）。
好ましくは、強親油性基は糖ＩのＣ−２およびＣ−３、および糖ＩＩのＣ−２’およびＣ−３’に結合する。
ホスフェートリンカーの使用はホスフェート同等体の要求を満足するが、他のホスフェート同等体を、必要により提供することができる。ホスフェートリンカーの使用は４’環炭素での置換体の場合に好ましい。
−Ｏ−リンカーは４，３および３’炭素で、および−ＮＨ−リンカーは２および２’炭素で好ましい。これら炭素のＮＨ２基が脂質化されるならば、ＮＨ２はＮＨリンカーになることを評価すべきである。同様に、４−ＯＨが脂質化されるならば、−ＯＨは−Ｏ−リンカーになる。
アノマー炭素または糖の非環炭素でリンカーに関して特別な選択はない。
或いはまたは追加的に、少なくとも１の親油性基はＰｅｔユニットの１またはそれ以上の一次アームに組み込まれ、たとえあるとしても、糖ユニットの置換体になることはない。問題の一次アームは本質的に強親油性基からなることができる。
強親油性基は一般に１またはそれ以上の炭素鎖からなる。各炭素鎖は一重、二重または三重結合によって結合された炭素原子からなる。
長さが少なくとも６個の炭素である炭素鎖は「主」炭素鎖と考えられる。他の炭素鎖は「副次的」炭素鎖であると考えられる。強親油性基は好ましくは少なくとも１の主炭素鎖からなる。副次的炭素鎖の存在に関して１の方法または他の方法の選択はない。
副次的炭素鎖はリンカーの種であると考えられる。図４の７番目８番目の構造では副次的鎖がある。
好ましくは、特定の炭素鎖の１以下のボンドは二重または三重結合、さらに好ましくは、炭素鎖は完全に飽和している。二重結合は三重結合よりも好ましい。
炭素鎖の炭素原子は３，２，１または０個の水素に結合することができる。主炭素鎖では、−ＣＨ＜および＞Ｃ＜炭素は通常別の炭素鎖の（リンカーとのまたはリンカーなしの）結合に対し分枝点である。また側鎖基、例えばアミノまたはヒドロキシルと置換することができる。
純粋に定義付け事項として、強親油性基はＰｅｔユニットからなることができない（必要なスペーサーＹ１−Ｙ４の１またはそれ以上を不足するならば、Ｐｅｔコアからなることができる）。しかし、他の点ではＰｅｔユニットからなる１の大きい強親油性基として解釈されたことは、それに結合する１またはそれ以上のさらに小さい強親油性基をもつＰｅｔユニットとして再解釈することができる。
任意の主炭素鎖の炭素原子は１またはそれ以上のカルボニルまたはチオカルボニル炭素、すなわち、−Ｃ（＝Ｏ）または−Ｃ（＝Ｓ）−を含むことが出来るカルボニルが好ましい。唯一のカルボニルまたはチオカルボニル炭素があるならば、好ましくは鎖の開始にあるならば、鎖はアシル鎖（飽和または不飽和）である。従って、リンカーが−Ｏ−であるならば、カルボニルへの結合はエステル（−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−）を形成し、および−ＮＨ−であるならば、結合はアミド（−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−）を形成する。
特定の親油性基は簡単な（分枝がなく、非環式）脂質、または複雑な（分枝および／または環式、部分的芳香族を含む）脂質である。
親油性基が１個以上の主炭素鎖からなるならば、糖またはＰｅｔコアに近接して開始する主鎖は基の一次主鎖と考えられる。一次主鎖に結合した任意の鎖は二次主鎖と考えられる。二次主鎖に結合した任意の主鎖は三次の主鎖、等と考えられる。（以下、一次、二次、等の鎖は特に記述しなければ主鎖に言及するものである。）
いくつかの主鎖は糖またはＰｅｔコアに等しく近く、その場合に各々一次鎖であることが可能である。
二次鎖は一次鎖の末端（糖またはＰｅｔコアに関して）に結合することができ、その場合に親油性基は線状のままである（他の部分はない）。または一次鎖の内側炭素に結合することができ、その場合には親油性基は分枝脂質である。
二次鎖は一次鎖に簡単な−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＨ−リンカーにより結合でき、または直接リンカーなしで（すなわち、Ｃ−Ｃ）結合することができる。また複雑なリンカー、すなわち、簡単なリンカーと前記末端リンカーの組合せによって結合することができる。三次鎖は同じ方法で二次鎖に結合することができる、以下同様。高次の鎖の低次の鎖への（例えば、二次の一次への）結合の好ましい点は低次（例えば、一次）鎖のＣ−３炭素である。
一次鎖のように、二次または高次の鎖は二重または三重結合炭素原子、および／またはカルボニルまたはチオカルボニル炭素からなることができる。
上記の種々の炭素鎖はヒドロキシルまたはアミノ基と置換され、ヒロキシルが好ましい。ヒドロキシル基のための好ましい位置は鎖のＣ−２またはＣ−３炭素の置換基としてである。
強親油性基は性質が完全に脂肪族または部分的に芳香族である。芳香族構造を含む場合、その構造は直接脂肪族鎖に結合していても別々の主炭素鎖であると考える。完全に脂肪族基が好ましい。
−Ｏ−ＣＯ−Ｑの形の脂肪酸基は、Ｑが主としてアルキルであるがアルケニル、アルキニル、またはエーテル結合を含み、特に興味深い。脂肪酸はカルボン酸であり、多くは動物または植物脂肪または油から誘導されるかまたは含まれている。全脂肪酸は４ないし２２個の炭素原子を含む炭化水素基の鎖からなり、末端カルボキシルラジカルに特徴がある。それらは「炭素原子の数：二重結合の数」によって、任意にはシス／トランス異性体の位置によって命名される。従って、適当な脂肪酸は４：０、６：０、８：０、１０：０、１２：０、１４：０、１６：０、１６：１（９ｃ）、１８：０、１８：１（９ｃ）、１８：２（９ｃ、１２ｃ）、１８：３（９ｃ、１２ｃ、１５ｃ）、１８：４（６ｃ、９ｃ、１２ｃ、１５ｃ）、１８：３（９ｃ、１１ｔ、１３ｔ）、１８：１（９ｃ）１２−ＯＨ，２０：１（９ｃ）、２０：１（１１ｃ）、２０：４（８ｃ、１１ｃ、１４ｃ、１７ｃ）、２０：５（５ｃ、８ｃ、１１ｃ、１４ｃ、１７ｃ）、２２：０、２２：１（１１ｃ）、２２：１（１３ｃ）、２２：５（７ｃ、１０ｃ、１３ｃ、１６ｃ、１９ｃ）および２２：６（４ｃ、７ｃ、１０ｃ、１３ｃ、１６ｃ、１９ｃ）、の命名をもつものを含み、そのすべては天然産グリコシドに見られる。
種々の種からの天然脂質Ａに生じる脂質構造は１０：０、１２：０、１４：０、１６：０、１８：０、２０：０脂肪酸を含む。二次アシル基は通常３−Ｏ−結合である。ヒドロキシル化は通常３−ＯＨまたは２−ＯＨである。脂質Ａｓの数（例えば、Rhodobacter capsulatusおよびRhodobacter sphaeroides）は１４：１二次アシル基の１２：１を含む。参照Alexanderら、Trends in Glycoscience and Glycotechnology、14：69−86（2002年３月）。
好適例では、脂質Ａ類似体の少なくとも１の強親油性基は炭水化物合成での保護基として用いられない強親油性基である。炭水化物合成に用いられる保護基はメチル、ベンジル、アリル、トリチル（トリフェニルメチル）、種々のアセテート、ベンゾエート等を含む。ベンジリデンおよびイソプロピリデン保護基は同時に２個の近接ヒドロキシル酸素を保護する。参照、一般的にHarwood, Modern Methods in Carbohydrate Synthesis (1996)；Dekker，Preparative Carbohydrate Chemistry（1997）；Blackie，Carbohydrate Chemistry（1998）。
次の一般的構造は興味ある：
式中のＸは−ＣＯ−または−ＣＨ２−であり、ｋは整数４−３０；
式中のｎは整数０−６、ｋは整数０−３０、および２ｋ＋３ｎは整数４−３０である；
式中のｍおよびｎは整数（ｎは０−６、ｍは０−３０）、そしてｍ＋ｎ＋１は４−３０である；
式中のｍ＋ｎ＋１は４−３０である；
式中のＸ１およびＸ２は独立して−ＣＯ−または−ＣＨ２−、そしてｍ＋ｎ＋ｋ＋ｌは４−３０；
式中のＺは−ＮＨ−または−Ｏ−、そしてｋ＋ｍ＋２は４−３０である。
式中のｑは整数０−６、そしてｋ＋ｑ＋ｍ＋ｎは４−３０である。
式中のＸ１、Ｘ２、およびＸ３は独立して−ＣＯ−または−ＣＨ２−、ｒは整数０−６、そしてｒ＋ｋ＋ｑ＋ｍ＋ｎは５−３０である。
（ｉ）−（ｖｉｉｉ）の各場合には、先に定義したパラメーターがそれらの意味を保持する。
またＵＳＰ６，２３５，７２４に示唆された脂質Ａ類似体置換体を参照。
これらの基は強親油性基の資格があり、さらに上記パラメーターを束縛する。図４に示された脂質構造は特に興味あるものである。それら全ては強親油性基の資格がある。
他の炭水化物リガンド類似体の脂質成分
本発明の脂質Ａ類似体は少なくとも１の強親油性基からなる必要がある。脂質Ａ類似体ではない本発明の炭水化物リガンド類似体は、必要ではないが、強親油性基からなる。これはリポソームへの統合を容易にすることができる。特に、類似体が強親油性基からなるかどうか決定するため、必要なＰｅｔコアは無視される。
親油性および強親油性基の定義
基は親油性（疎水性）、非親油性（親水性）、または天然に類別される。基の親油性はＳＴＰで、非極性溶媒（例えば、エタノール、ジオキサン、アセトン、ベンゼン、ｎ−オクタノール）と水の間の分子ＨＺ（Ｚは問題の側鎖である）の分配係数を測定することにより決定することができる。親油性はこの分配係数の対数として定義される；そのとき非極性溶媒を好む分子に対し正である。従って、親油性基はｌｏｇＰがゼロよりも大きい。
分配係数（Ｐ）は二つの大いに混合することのできない溶媒からなる２相系に溶解した物質の平衡濃度の比として定義される。そのような系の一つはｎ−オクタノール：水であり；オクタノール相は約２０％の水と水相約０．００８％オクタノールを含む。従って、適切な分配係数（Ｐｏｗ）は水で飽和したオクタノール中の溶質のモル濃度とオクタノールで飽和した水中のモル濃度の比である。多くの膜成分のように、両親媒性であるからＮ−オクタノールは生物膜に有用な代用品である。（特記しないかぎり、ｌｏｇ Ｐはｌｏｇ Ｐｏｗを意味する。）
Ｐｏｗを決定する方法のさらなる情報は、Sangster，J．，Octanol-Water Partition Coefficients：Fundamentals and Physical Chemistry
(April 1997)(ISBN 0-741-9739)を参照。
オクタノール−水の分配係数の作表においては、EPA「Chemicals in the Environement：OPPT Chemicals Fact Sheets」、USDA農薬特性データベース、Sangster、J.、「Octanol-Water Partition Coefficients of Simple Organic Compounds」、J. Phys. Chem. Ref. Data、18：1111-1230（1989）；Verbruggen、E.M.J.ら、「Physiochemical Properties of Higher Nonaromatic Hydrocarbons：Literature Study」、J. Phys. Chem. Ref. Data、29：1435-46（2000）を参照。さらなるソースとして、Penn State University Libraries、Physical Sciences Library、octanol-water Partition Coefficients（最新更新日2001年8月21日）、ＵＲＬはlibraries.psu.edu／crsweb／physci／coefficients.htm。異なる化合物について編集されたPow値は、異なる方法によって決定されていることを留意しなければならない。
実験的なlog Powの決定を必要とすることを避けるために、本発明の目的に従って、Meylanの方法による予測log Pow値を使用することができる。
Meylanの方法では、予測log Powは各フラグメントの加重係数（未処理の係数にそのフラグメント数を乗ずる）に定数0.2290を加えることで得られる。考慮しているフラグメントは、−ＣＨ３（0.5473）、−ＣＨ２（0.4911）、−ＣＨ（0.3614）、−ＯＨ（1.4086）、−ＮＨ２（1.4148）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（0.5236）、−ＳＨ（0.0001）、−ＮＨ−（-1.4962）、−Ｎ＝Ｃ（0.0010）、−Ｏ−（-1.2566）、−ＣＨＯ（-0.9422）、３＋Ｃが付加した−三級Ｃ（0.2676）、Ｈがなく三級でないＣ（0.9723）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（0.9505）、−Ｃ（＝Ｏ）−（1.5586）、＝ＣＨまたはＣ＜（0.3836）、＃Ｃ（0.1334）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（0.5236）、−Ｏ−ＣＯ−Ｃ−Ｎ−ＣＯ（−0.5）、−ＳＯ−Ｏ（−９）、−Ｏ−Ｐ（−0.0162）；Ｏ＝Ｐ（−2.4239）、­リン酸付加−ＯＨ（0.475）；芳香Ｃ（0.2940）、芳香Ｎ（五員環）（-0.5262）、および芳香族付加−ＯＨ（-0.4802）からなる。
Meylanアルゴリズムは、プログラムLogPow（KowWin）で実行される。このプログラムのオンラインバージョンは、esc.syrres.com／interkow／kowdemo.htmで利用でき、CAS登録番号またはSMILES構造記号のいずれも認識できる。このプログラムは、そのデータベースにある場合は、実験的に決定した値も報告している。
基のlogPが、Meylanアルゴリズムによって予測したところ、ゼロよりも大きい場合、その基は親油性であると予想される。
本願の目的のために、強親油性基は、水素以外の少なくとも５原子からなり、これについての予測log Powは少なくとも３である。
好ましくは、Meylanアルゴリズムによって予測されるlogPが少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも10、高いほどより好ましい。
好ましくは、強親油基は水素以外の100を越えない原子、より好ましくは80を越えない同様の原子、さらに好ましくは60を越えない同様の原子、いっそう好ましくは40を越えない同様の原子から構成される。
前記の通り、強親油基は水素以外の少なくとも５原子からならなければならない。好ましくは、少なくとも６、より好ましくは少なくとも８で、さらにより好ましくは少なくとも９で、いっそうより好ましくは、少なくとも11の同様の原子からなり、さらに好ましくは少なくとも13の同様の原子、もっとも好ましくは少なくとも21の同様の原子から構成される。
好ましくは、強親油基は、元素炭素、ケイ素、水素、酸素、窒素、硫黄、およびリンに制限された基本構成成分をもつ。好ましくは、水素に関与しない側鎖中の結合の大部分は、炭素−炭素結合である。
酸素、窒素、硫黄およびリンの存在は親油性を減じるので、強親油基中では、好ましくは非水素原子の50％を越える、より好ましくは75％を越える原子は炭素原子である。
同じ理由で、強親油基は好ましくは少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも10の炭素原子を包含する。
親油性の決定への応用
プログラムLogKowを使用することで、図４に示す構造または比較にふさわしいと考えられる構造のlog Pow値を計算した（下記参照）。
実験logPが使用できる場合でも、予測logPを使用した。たとえば、Ｐｅｔコアについてで、これは3.11である。
参照炭水化物リガンド；炭水化物リガンド類似体
本発明のための参照炭水化物リガンドは、一またはそれ以上の以下に記述するアミノ糖ユニットであり、Ｐｅｔコアを含まず、これは前記糖ユニットの存在のもと、少なくとも一部が、結果として受容体に特異的に結合することができる。この参照リガンドは必須ではないが天然産であることができる。
前記受容体は細胞受容体であることができ、または抗体受容体であることができる。この抗体は、そうである必要はないが、たとえば疾病に対する免疫反応の一部として、天然に生ずることができる。受容体が抗体である場合、リガンドは抗原と考えることができる。それ自体として免疫反応を誘発することができる場合、免疫原と考えることができる。そうでなければ、ハプテンと考えることができる。
この参照炭水化物リガンドは、好ましくはこのような受容体に対する特異的結合活性（好ましくは、Ｋｄを欠く、すなわち10-3リッター／モルよりも優れている、ことによって特徴付けられる結合親和性をもつ）をもち、さらに好ましくは、このような受容体結合に起因する生物学的活性または免疫学的活性をもつ。
いくつかの参照炭水化物リガンドは下記の「炭水化物ハプテン」セクションに記述され、そして他は図１９および２０に記述される。
加えて、炭水化物を含む抗生物質を考えることができ、たとえば純粋な糖のノジリマイシン、アミノグリコシドストレプトマイシン、カナマイシンおよびゲンタマイシンＣ、Ｎ−グリコシドストレプトチリキン、Ｃ−グリコシドバンコマイシン、およびグリコリピドモエノマイシンＡといったものである。
抗腫瘍リガンドであることもでき、たとえば種々の硫化オリゴサッカライドで、特に硫化ホスホマンノペンタオース（ＰＩ−８８）および硫化マルトヘキサオースである。参照Parishら、Cancer Res.、59：3433-41。
あるいは、これは抗ウイルス性リガンド、たとえばアザ糖６−Ｏ−ベンゾイルカスタノスペルミン、抗パーキンソン病薬、たとえばグリコリピドガングリオシドＧ、抗痙攣薬、たとえばトピラメート、または糖尿病治療のためのグリコシダーゼ阻害剤、たとえばアザ糖、または抗血栓剤、たとえばグリコシルアミノグリカンヘパリンといったものであることができる。
本発明の炭水化物リガンド類似体は、上で定義したように、受容体への結合について参照炭水化物リガンドと競合することができ、そして、参照炭水化物リガンドのアミノ糖ユニットの少なくとも一が（Ｐｅｔコア）−ＮＨ−成分に置換されているという点において参照炭水化物リガンドと異なる。このような置換を無視すれば、これらは通常実質的に参照炭水化物リガンドと同一である。
参照炭水化物リガンドはアミノ糖ではない糖ユニットを構成することができる。これはまた実質的に非炭水化物成分であることができ、たとえば、制限なく、リピド、サルフェート、ホスフェート、アミノ酸、および核酸である。このためグリコリピドまたはグリコペプチドであることができる。
炭水化物リガンド類似体は、次の場合実質的に参照炭水化物リガンドと同一であると考えることができる。
（１）参照リガンド中の各糖ユニットについて、それぞに対応して、実質的に同一の糖ユニットまたは対応するＰｅｔユニットが類似体中に存在する場合。
（２）参照リガンドの糖ユニットの基本トポロジーが、類似体において対応する糖またはＰｅｔユニットの基本トポロジーが実質的に同一である場合。
一の糖ユニットは他の糖ユニットと次の場合に実質的に同一であると考えられる。
（１）ともに開環または環状であり、
（２）ともに環状である場合は、環の大きさは同一でかつ環のヘテロ原子は同一（通常酸素）であり、
（３）環の水酸基の立体配置が参照リガンド糖において（軸性またはエクアトリアルに）束縛されている場合、この水酸基は類似糖ユニット中に保持されているか、またはハロゲンもしくはチオールに置換されているかのいずれかであり、
（４）束縛立体配置水酸基が類似糖ユニット中に保持されている場合、類似糖ユニット中に同様の方法（軸性またはエクアトリアル）で保持されていて、
（５）参照リガンド糖ユニット中でアミノ化されている環状炭素が類似糖ユニット中でアミノ化されていて、かつ他の環状炭素がアミノ化されておらず、
（６）参照リガンド糖ユニット中のアノマー炭素の立体配置（アルファまたはベータ）が類似糖ユニット中に保持されている。
許容できる修飾は、（１）参照リガンド糖ユニットの環状炭素上の、水酸基ではない置換基の置換または除去、（２）環状ヘテロ原子に直接隣接する環状炭素上の置換基の置換または除去である。もとの成分に比べて大きな化学的成分に置換することができる。
例として、すべて（６炭素糖ユニット）であるヘキソース、ガラクトース、グルコースならびにフコースと、アルドースならびにピラノース（６員環を持ち、一は酸素原子、五は炭素原子である）。これらは、Ｇａｌがアキシャルな４−ＯＨをもち、Ｇｌｃがエクアトリアルな４−ＯＨをもち、そしてＦｕｃがアキシャルな４−ＯＨをもつが６−ＯＨをもたない、すなわち６−デオキシ−Ｌ−ガラクトースであるという点で異なる。環酸素に直接隣接する炭素はＣ−１およびＣ−５炭素である。Ｃ−１置換基はＯＨで、そしてＣ−５置換基は、ＧａｌならびにＧｌｃではＣＨ２ＯＨで、ＦｕｃではＣＨ３である。
これらＣ−１およびＣ−５置換基は自由に除去または置換することができるが、直接アミノ化することはできない。Ｃ−２、Ｃ−３およびＣ−４原子はそれぞれ立体配置が束縛された水酸基を生じる。これらはチオールまたはハロゲンのみによって置換することができる。
置換基の置換または除去は、参照リガンド糖ユニットの環状炭素の置換基が他の糖ユニットを構成する場合にはさらに制限される。するとこの置換基は全体で除去することはできず、かつ糖ユニットまたはＰｅｔユニットを構成する置換基によってのみ置換することができる。
参照リガンド中で直接結合している糖ユニットの各対について、対応する糖ユニット（またはＰｅｔユニット）も類似体中で直接結合していなければならず、この場合基本トポロジーは実質的に同一である。結合が他の糖ユニットまたはＰｅｔユニットを構成しない場合、そして二つのユニット間の原子からなる直接の鎖がもとの結合長の三倍に満たない場合、結合は直接であると考えられる。結合の化学的性質が同一である必要はなく、たとえばグリコシド結合はエーテル結合に置換することができる。
例として、ルイスＸの類似体中、一のアミノ糖（ＧｌｃＮＡｃ）のみが存在するので、これがＰｅｔ−ＮＨ−によって置換されている。また、アミノ糖へのＦｕｃアルファ−Ｏ−結合１−＞４、そして同じ糖へのＧａｌベータ−Ｏ−結合１−＞３もそうである。類似体はＦｕｃアルファで、そのＣ−１炭素を経てＰｅｔを構成する成分に結合していて、後者はＧａｌベータのＣ−１炭素に結合している。両方に保持している糖中、Ｃ−５置換基が置換または脱離している（糖は次にヘキソースではなくペントースになる）。加えて、Ｃ−２、Ｃ−３およびＣ−４ヒドロキシルの任意のものがチオールまたはハロゲンに置換されることができる。
ルイス−Ｘ類似体はルイス−ａ類似体にもなりうるということが特筆される。
製薬的に許容できる塩
本発明のリガンド類似体は、開示した化合物の製薬的に許容できる塩も含む。製薬的に許容できる塩は、ナトリウム、リン、カルシウムおよびマグネシウム塩を含むが、これに限定されるものではない。
炭水化物
用語「炭水化物」（糖）は、単糖類、オリゴ糖および多糖類を含み、同様に、カルボニル基（アルジトール）の還元による単糖類由来の物質、一もしくはそれ以上の末端基をカルボン酸へ酸化した物質、または水素原子、アミノ基、チオール基、もしくは同様のヘテロ原子基によって一もしくはそれ以上の水酸基を置換した物質を含む。前記のものの誘導体も含む。
単糖類
親単糖類は、三もしくはそれ以上の炭素原子をもつポリヒドロキシアルデヒド（Ｈ［ＣＨＯＨ］ｎ−ＣＨＯ）またはポリヒドロキシケトン（Ｈ［ＣＨＯＨ］ｎ−ＣＯ−［ＣＨＯＨ］ｍ−Ｈ）である。用語「単糖類ユニット」、「炭水化物ユニット」または「糖ユニット」は単糖類の残基を示し、ここに企図した単糖類の誘導体を含む。
各単糖類ユニットは、好ましくはトリオース（たとえば、グリセルアルデヒド）、テトロース（たとえば、エリトロース、トレオース）、ペントース（たとえば、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース）、ヘキソース（たとえば、アォース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース）、ヘプトース、またはオクトースである。さらに好ましくはペントースまたはヘキソースである。
各単糖類ユニットは、アルドース（アルデヒドカルボニル基もしくは潜在的なアルデヒドカルボニル基をもつ）またはケトース（ケトンカルボニル基もしくは潜在的なケトンカルボニル基をもつ）であることができる。（フルクトースはケトースの一例である）。この単糖類ユニットはさらに、一より多いカルボニル（もしくは潜在的なカルボニル）基をもつことができ、このためジアルドース、ジケトース、またはアルドケトースになることができる。用語「潜在的なアルデヒドカルボニル基」は、閉環から生じるヘミアセタール、およびケトン対応物（ヘミケタール構造）を示す。
単糖類ユニットは環状ヘミアセタールまたはヘミケタールである。三員環を持つ環状構造はオキシロースで、四員環を持つのはオキセトースで、五員環をもつのはフラノースで、六員環を持つのはピラノースで、七員環を持つのはセプタノースで、八員環を持つのはオクタウイルスで、以下同様である。閉環の位置のロカントは変わることができる。より一般的な環状糖中においては、環状酸素および炭素である他の環状原子から構成され、従って、ピラノース中、一の環状酸素および五の環状炭素が存在する。
単糖類ユニットはさらにデオキシ糖（水素によってアルコール性ヒドロキシ基を置換）、アミノ糖（アミノ基によってアルコール性ヒドロキシ基を置換）、チオ糖（チオールによってアルコール性ヒドロキシ基を置換、もしくはＣ＝ＳによってＣ＝Ｏを置換、もしくは硫黄によって環状構造の環状酸素を置換）、セレノ糖、テルル糖、アザ糖（窒素によって環状炭素を置換）、イミノ糖（窒素によって環状酸素を置換）、ホスファノ糖（リンによって環状酸素を置換）、ホスファ糖（リンによって環状炭素を置換）、Ｃ−置換単糖類（炭素によって非末端炭素原子の水素を置換）、不飽和単糖類、アルジトール（ＣＨＯＨ基によってカルボニル基を置換）、アルドン酸（カルボキシ基によってアルデヒド基を置換）、ケトアルドン酸、ウロン酸、アルダリン酸、など。アミノ糖はグリコシルアミンを含み、この中ではヘミアセタールヒドロキシ基が置換されている。
これらの構造の誘導体は、Ｏ−置換誘導体を含み、この中ではアルコール性ヒドロキシ水素が何かによって置換されている。可能な置換は、アルキル、アシル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、およびサルフェートを含む。同様に、アミノ糖の誘導体は、Ｎ−置換誘導体を含み、そしてチオ糖の誘導体はＳ−置換誘導体を含む。
シアル酸は、Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）としても知られていて、特に興味深い。これはいくつかの腫瘍関連炭水化物エピトープ上の末端糖である。
組み合わせ
本発明の炭水化物リガンド類似体の任意は、互いに組み合わせて、他の炭水化物リガンド（参照炭水化物リガンドおよびそれ自体の他の類似物を含むが、それに限定されるものではない）と組み合わせて、および他の製薬的な薬剤と組み合わせて使用することができる。リガンド類似体が免疫剤として使用される場合、他の免疫剤と組み合わせて使用することができる。免疫剤は抗原（免疫原およびハプテン両方を含む）、アジュバント、および他の調節分子（サイトカインを含む）を含む。
本発明の脂質Ａ類似体の任意は、互いに組み合わせて、他の脂質Ａ類似体と組み合わせて、天然脂質Ａ分子と組み合わせて、および他の製薬的な薬剤と組み合わせて使用することができる。後者は免疫剤であることができる。
組み合わせは共有結合、非共有結合、単純な混合物であることができ、または投与される対象中で同時に活性になるような組み合わせの要素のすべてを使うことができる。同時活性は、同時投与によって達成されるが、これに限定されるものではない。化合物は、同時投与でない場合でも同時活性であることができ、たとえば、長い半減期をもつ化合物Ａを短い半減期をもつ化合物Ｂに先だって投与するが、しかしＢが投与されるときにもＡは体内で十分な水準で存在する。
免疫原
本発明の免疫原は、下記のように定義された少なくとも一の疾病関連のＢ細胞またはＴ細胞エピトープからなり、そして、対象（これは、ある場合には、リポソームとまたは抗原提示細胞と会合する）に対して適切に投与した場合、病気に対して保護性である体液性および／または細胞性免疫反応を誘発する。
本発明は以下を企図する。
（１）開示した脂質Ａ類似体を生得的免疫を刺激するために使用し、
（２）開示した脂質Ａ類似体を投与した免疫原に対する特異的免疫反応を賦活するために使用し、そして
（３）アジュバントとして開示した脂質Ａ／Ｐｅｔ類似体を使用または使用せずに、特異的免疫反応を誘発するために開示した炭水化物リガンド類似体の少なくとも一を含む免疫原を使用する（（３）の場合、炭水化物リガンド類似体は以下に定義する疾病関連炭水化物エピトープからなる）。
エピトープが炭水化物エピトープである場合、少なくとも一のアミノ糖を含む天然発生エピトープの類似体であることでき、この中では少なくとも一のアミノ糖がアミノ化Ｐｅｔユニットによって置換されている。
エピトープ
本発明のエピトープは、Ｂ細胞またはＴ細胞エピトープであることができ、制限なく、ペプチド、炭水化物、リピド、グリコペプチドおよびグリコリピドを含む任意の化学的性質であることができる。このエピトープは、天然エピトープと同一、または天然エピトープの修飾した形であることができる。
「ＭＵＣ１エピトープ」といった用語は、他の条件がない場合、ＭＵＣ１の天然エピトープのみならず、実質的に天然エピトープと同一である変異体エピトープを包含することを意図している。このような変異体エピトープは、天然ＭＵＣ１エピトープと交差反応するはずである。同様に、「腫瘍関連エピトープ」のような用語は、天然および変異体エピトープの両方を含むが、変異体エピトープは天然腫瘍関連エピトープと交差反応するものである。
Ｂ細胞エピトープ
Ｂ細胞エピトープは、Ｂ細胞によっておよび抗体によって認識されるエピトープである。Ｂ細胞ペプチドエピトープは、典型的には長さが少なくとも５つのアミノ酸で、さらにしばしば少なくとも６のアミノ酸であり、なおしばしば少なくとも７または８のアミノ酸であり、そして連続的（「直鎖」）または非連続的（「立体配置的」）（後者は、一次アミノ酸配列の物理的に近接していない部分の配列を、近接するところへ持ってくる、タンパク質の折りたたみによって形成される）であることができる。Ｂ細胞エピトープもまた、炭水化物エピトープであることができる。
Ｔ細胞エピトープ
Ｔ細胞エピトープは、もしあるとして、エピトープの細胞免疫反応を刺激もしくは強めるのに、予防上もしくは治療上有用であることができる程度に病害もしくは有害な状態と関連のある、ハプテンを含む抗原のＴ細胞エピトープと少なくとも実質的に同一である任意のＴ細胞エピトープであることができる。 このような疾病および状態は、住血吸虫症およびレーシュマニアといった寄生的疾患、カンジダ症といった真菌性疾患、ハンセン病といったバクテリア性疾患、ＨＩＶ感染症といったウイルス感染、、ならびに腫瘍、特に固形腫瘍を含むが、これに制限されるものではない。当然に、関連する疾患または有害な状態に対するエピトープの特異性の程度が上がるほど、そのエピトープの免疫反応の刺激は副作用が少なくなる。
このエピトープは、もちろん、Ｔ細胞受容体によって認識されて、細胞性免疫反応を生ずることができる。ペプチドについて、Ｔ細胞エピトープはクラスＩまたはクラスＩＩのＭＨＣ分子と反応する。クラスＩエピトープは、通常８から１５、さらに頻繁には９から１１のアミノ酸の長さである。クラスＩＩエピトープは、通常５から２４（２４マーは、クラスＩＩの溝に適合することができる最長のペプチドである）で、さらに頻繁には８から２４のアミノ酸である。免疫原がこれらのサイズよりも大きい場合、免疫系によって加工されて、ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子と反応するのにより適する大きさの断片になる。
炭水化物Ｔ細胞エピトープは、単糖ユニット（たとえば、Ｔｎ）と同じくらいの小ささであることができる。好ましくは五糖よりも短い。
多くのＴ細胞エピトープが知られている。付加的なＴ細胞エピトープを同定するいくつかの技術が既知である。一般的に、これらは、潜在的にＴ細胞エピトープを供することのできる分子を調整し、その分子に対する免疫反応を特徴付けることを含む。免疫反応を特徴付ける方法については、後のセクションで議論する。
ＨＬＡ−Ａ１といった、ＭＨＣクラスＩ分子の特定の対立遺伝子によって「制限」されるようなＣＴＬエピトープへの言及は、このようなエピトープが、問題となっている対立遺伝子形によって結合されて提示されることを示している。これは、前記エピトープが、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ｂ７、またはＨＬＡ−Ｂ４４といった、ＭＨＣの異なる対立遺伝子形によって結合されて提示されることができないということを意図するものではない。
疾病関連および疾病特異的エピトープ
疾病はウイルス、単細胞生物もしくは多細胞生物による感染もしくは寄生状態、またはガン（腫瘍）細胞の発生もしくは増殖によってもたらされる有害な臨床的な状態である。
単細胞生物は任意の単細胞病原体もしくは寄生虫であることができ、バクテリア、菌もしくは原虫を含む。多細胞生物は、任意の病原体または寄生虫であることができ、原虫、虫、もしくは節足動物を含む。多細胞生物は内部寄生者および外部寄生者をともに含む。内部寄生者は、免疫反応を誘発しやすいが、しかし、保護性の免疫反応を誘発する程度であり、外寄生生物およびその抗原は、本発明の範囲内にある。
エピトープは、ウイルス小片によって提示したか、またはウイルス性ゲノムによってエンコードされて感染細胞に発現された場合に、ウイルス性疾患に直接関連しているということができる。
エピトープは、原因生物の細胞内、表面、もしくは分泌抗原によって提示された場合に、単細胞もしくは多細胞生物による疾患に直接関連しているということができる。
エピトープは、特定の腫瘍の細胞内、表面、もしくは分泌抗原によって提示された場合に、その特定の腫瘍に直接関連しているということができる。問題となる腫瘍タイプのすべての株細胞によって、または特定の腫瘍の全細胞によって、または腫瘍の全生存期間を通じて提示される必要はない。問題となる腫瘍に特異的である必要はない。エピトープは、なんらかの腫瘍（ガン、新生物）と関連している場合は、一般的に「腫瘍に関連した」ということができる。
腫瘍は、間葉または上皮起源である。ガンは、大腸癌、直腸癌、頸癌、乳癌、肺癌、胃癌、子宮癌、皮膚癌、口癌、舌癌、口唇癌、喉頭癌、腎臓癌、膵臓癌、前立腺癌、脳腫瘍、および白血病を含む。
エピトープは、対象の感染細胞によって特異的に産生もしくは過剰産生される場合、または、たとえば腫瘍により分泌される調節物質の結果として近接の細胞から過剰産生される血管形成ファクターといった、疾病に対して特異的ではあるが、非免疫的に対象の他の細胞によって特異的に産生もしくは過剰産生される場合に、疾病に間接的に関連しているといえる。
用語「疾病に関連したエピトープ」は、天然の疾病エピトープを認識する抗体またはＴ細胞が類似の非天然エピトープをも認識するくらい、問題となる疾病に天然に関連したエピトープと十分に類似している任意の非天然産生エピトープをも包含する。特定の疾病または疾病のクラスに関連したエピトープについても同様のコメントを適用することができる。
エピトープが検出可能かつ臨床的に有用な程度に、他の原因よりもより頻繁に特定の原因に関連する場合、そのエピトープはその原因（疾病原因生物、または、より特定には、腫瘍といったもの）に特異的であるということができる。予防上、治療上または診断上の有用な効果が得られるならば、完全な特異性は必要ない。
「特異的腫瘍−特異的」エピトープの場合、他の腫瘍または正常細胞とよりも、その腫瘍とさらに頻繁に関連する。好ましくは、問題となる腫瘍と関連して発生する頻度ならびに、（ａ）腫瘍が除去されたタイプの正常細胞、および（ｂ）他の腫瘍の少なくとも一種に関連した発生頻度との間で、統計学的に有意な（ｐ＝0.05）違いが存在すべきである。エピトープは、正常細胞とともにある場合に比して、（どれかまたは全部の種類の）腫瘍とともにある場合により頻繁に関連する場合に、一般的に「腫瘍特異的」ということができる。すべての腫瘍と関連している必要はない。
用語「腫瘍特異的エピトープ」は、問題となる腫瘍に特異的な（適切なら、腫瘍一般に特異的な）天然産生エピトープに十分類似している、任意の非天然産生エピトープをも包含していて、このため、類似のエピトープによって刺激された抗体またはＴ細胞が、天然エピトープによって刺激されたＣＴＬｓと本質的に同様の特異性である。
一般的により高い特異性はより少ない副作用を導くので、一般的に、（投薬の経路および影響を受けた正常組織に依存して）腫瘍対正常特異性は、腫瘍対腫瘍特異性よりも重要である。腫瘍対腫瘍特異性は、治療的使用とは逆に診断的使用に重要である。
用語「特異的」は、完全な特異性を意味するよう意図しているのではなく、単に、対応する正常な対象に比べて病原体または腫瘍に関連する発生の確率が、臨床的に有用な違いであることを意味するように意図している。
一の実施例では、エピトープは寄生虫関連エピトープで、たとえばレーシュマニア、マラリア、トリパノソーマ症、バベシア症、または住血吸虫症に関連したエピトープといったものである。他の実施例では、エピトープはウイルスエピトープで、たとえばヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、または肝炎といったものである
このエピトープはバクテリア抗原に関連していて、たとえば結核バクテリア、ブドウ球菌、大腸菌または赤痢菌といったものである。
他の実施例において、エピトープはガン（腫瘍）に関連していて、呼吸器系（肺、気管、喉頭）、消化器系（口、食道、胃、腸）、排泄系（腎臓、膀胱、大腸、直腸）、神経系（脳）、生殖系（卵巣、子宮、子宮頸部）、分泌系（乳房、肝臓、膵臓、前立腺）、皮膚等のガンを含むが、これに限定するものではない。ガンの二つの主要な群は、間葉由来かつ骨および筋肉に影響する肉腫、ならびに上皮由来かつ乳腺、胃、子宮、皮膚および舌の腺ガンの大部分を作る癌腫である。肉腫は、線維肉腫、リンパ肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫および脂肪肉腫を含む。癌腫は、腺がん、基底細胞癌腫、および扁平上皮がんを含む。
ガン関連エピトープは、変異体p53、部位変異Rasオンコジーン生成物、her2／neu、c／erb2、およびMUC1コアタンパクといったペプチドエピトープ、ならびにシアリルTn（STn）、ＴＦ、Ｔｎ、ＣＡ125、シアリルＬｅｘ、シリアルＬｅａおよびＰ９７といった炭水化物エピトープを含むが、これに限定するものではない。
天然生成エピトープの同定
天然生成エピトープは、分割と検査プロセスによって同定できる。抗原性または免疫原性として既知のタンパク質からはじめる。次に免疫学的活性についてタンパク質の断片を検査する。これらのフラグメントは、タンパク質をタンパク分解性作用薬で処理することによってかた、または、ペプチド配列が既知の場合は、タンパク質の部分列に対応する小さめのペプチドを合成して調製することができる。検査した断片は、全タンパク質配列にわたることができ、またはその一部のみであることもでき、そして隣接することもでき、重複することもでき、または分離することもできる。
フラグメントのいずれかが免疫学的に活性の場合、活性化フラグメントそのものが分割と検査分析を受けることができ、そしてプロセスは、最小の長さの免疫学的に活性な配列が同定されるまで続けることができる。このアプローチは、検査法は異なることはもちろんだが、Ｂ細胞エピトープまたはＴ細胞エピトープのいずれを同定するのにも使用することができる。Geysenは、直鎖エピトープを同定するために、免疫学的な活性について特定のタンパク質の断片に隣接または重複するすべての可能なオリゴペプチド（参照、6-10 a.a.）を系統的にスクリーニングすることを教示している。参照ＷＯ84／03564。
アミノ酸配列が利用可能ならば、Ｂ細胞またはＴ細胞ペプチドエピトープの部位を予測することが可能である。Ｂ細胞エピトープは、局所的に高い親水性の平均値の部位にある傾向にある。HoppおよびWood、Proc. Nat. Acd. Sci. （ＵＳＡ）78：3824（1981）；JamesonおよびWolf、CABIOS、4：181（1988）。Ｔ細胞エピトープは、特定のハプロタイプの細胞のＭＨＣクラスＩ分子に結合するペプチドについての、既知のコンセンサス配列に基づいて予測することができる。たとえば、Slingluff、WO98／33810、特に15-16頁；Parkerら、「Scheme for ranking potential HLA-A2 binding peptides based on independent binding of individual peptide side chains」、J. Immunol. 152：163（1994）参照。
天然生成Ｔ細胞エピトープは、ＭＨＣクラスＩエピトープ分子との複合体から分離することで回収することができ、そしてたとえば質量分析技術によって、配列決定することができる。
一般的に、天然に発生する疾病または腫瘍特異的エピトープと同一のエピトープに加えて、本発明は、そのようなエピトープと異なってはいるが実質的に同一のエピトープを包含し、そしてこのため、当然に疾病または腫瘍特異的である。天然発生エピトープと実質的に同一ではないが、それでもなお三次元立体配座の類似性の結果として、天然発生と交差反応性である。
ペプチドエピトープ
ペプチドエピトープは、参照エピトープの免疫活性の少なくとも10％をもち、一をこえない非保存的置換によって参照エピトープと異なる場合に、参照ペプチドエピトープ（たとえば、天然生成エピトープ）と実質的に同一であると考えられる。
炭水化物ハプテン；エピトープ
本発明の炭水化物ハプテンは、炭水化物エピトープを構成する（そして好ましくは同一である）炭水化物で、しかしそれ自体では体液性免疫反応を誘発しないものである。
多糖類は普通その特性上免疫原性であるに十分な大きさなので、通常、炭水化物ハプテンは多糖類ではない。オリゴ糖および多糖類の境界腺は、固定したものではないが、しかし、我々はオリゴ糖を２ないし２０単糖（糖）ユニットからなるものと定義する。
ハプテンは単糖（他のそのようなユニットへのグリコシド結合はない）、またはオリゴ糖である。オリゴ糖の場合、10を越えないことが望ましい。
腫瘍関連炭水化物エピトープは特に興味深い。
種々の炭水化物が本発明にしたがって接合し、特に腫瘍を検出・治療するのに使用される。Ｔｎ、Ｔ、シアリルＴｎおよびシアリル（２−＞６）Ｔハプテンが特に好ましい。
特に、腫瘍を検出・治療するために、通常のヒトガンに大いに発現する腫瘍関連炭水化物エピトープの３種がアミノ化化合物に接合する。これらは特に、ラクトシリーズタイプ１およびタイプ２鎖、ガン関連ガングリオ鎖、および中性スフィンゴ糖脂質を含む。
ラクトシリーズタイプ１鎖およびタイプ２鎖の例は、以下の通りである。すなわち、ルイスa、二量体ルイスａ、ルイスｂ、ルイスｂ／ルイスａ、ルイスｘ、ルイスｙ、ルイスａ／ルイスｘ、二量体ルイスｘ、ルイスｙ／ルイスｘ、トリフコシルルイスｙ、トリフコシルルイスｂ、シアロシルルイスｘ、シアロシルルイスｙ、シアロシル二量体ルイスｘ、Tn、シアロシルTn、シアロシルTF、TFである。ガン関連ガングリオ鎖の例は、以下の通りである。すなわち、ＧＭ３、ＧＤ３、ＧＭ２、ＧＭ４、ＧＤ２、ＧＭ１、ＧＤ−１ａ、ＧＤ−１ｂである。中性スフィンゴ糖脂質は、グロボトリオース、グロボテトラオース、グロボペンタオース、イソグロボトリオース、イソグロボテトラオース、ムコトリオース、ムコテトラオース、ラクトトリオース、ラクトテトラオース、ネオラクトテトラオース、ガングリオトリオース、ガングリオテトラオース、ガラビオース、および９−Ｏ−アセチル−ＧＤ３を含む。
多数の臨床的に重要な抗原は炭水化物決定基をもつ。このような抗原の一つの群は、腫瘍関連ムチンから構成される（Rousselら、Biochimie 70、1471、1988）。
一般的に、ムチンは唾液、胃液、等の中に見出される糖タンパク質で、粘性の溶液で、体の外部表面および内部表面上の潤滑剤または保護剤としてはたらく。ムチンは、典型的には高分子量（しばしば1,000,000ダルトンをこえる）で、大規模にグリコシル化されている。ムチンのグリカン鎖はＯ−結合（セリンまたはトレオニン残基に対して）で、糖タンパクの分子量の80％以上に達することができる。ムチンは管状上皮細胞および同一由来の腫瘍によって産生され、そして分泌され、または不可欠な膜タンパクとして細胞に結合する（Burchellら、Cancer Res.、47、5476、1987；Jeromeら、Cancer Res.、51、2908、1991）。
癌性の組織は、正常な対応物に比べて比較的グリコシル化されていないことが知られている異常なムチンを産生する（Hullら、Cancer Commun.、1、261、1989）。ガン細胞中のタンパク質グリコシル化機構の機能変化のために、腫瘍関連ムチンは典型的には短く、不完全なグリカンを含む。このため、ヒト乳脂肪小球に関連した正常なムチンが基本的に四糖グリカン、gal β1-4 glcNAcpl-6（gal β1-3）gal NAcαおよびそのシアル酸化類似体（Hullら）からなる一方で、腫瘍関連Tnハプテンは、単糖残基、α−２−アセトアミド−３−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノシル、および二糖類β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１−３）α−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノシルのＴ−ハプテンからのみなる。腫瘍関連ムチンの他のハプテンは、たとえばシアリル−Ｔｎおよびシアリル−（２−６）Ｔハプテンで、末端シアリル残基の短いＴｎおよびＴグリカンへの付加によって生じる（Hanischら、Biol. Chem. Hoppe-Seyler、370、21、1989；Hakormori、Adv. Cancer Res.、52：257、1989；Torbenら、Int. J.Cancer、45、666、1980；Samuelら、Cancer Res.、50、4801、1990）。
ＴおよびＴｎ抗原（Springer、Science、224、1198、1984）は、多くの初期癌腫細胞およびその転位（全ヒト癌腫の90％以上）の外表面膜上に免疫反応形で見出される。腫瘍マーカーとして、ＴおよびＴｎは、いくつかの癌腫の早期免疫組織化学的検出および予後判定を可能とする（Springer）。最近では、腫瘍組織上のシアリル−Ｔｎハプテンの存在が、好ましくない予後のパラメータとして同定されている（Itzkowitzら、Cancer、66、1960、1990； Yonezawaら、Am. J. Clin. Pathol.、98 167、1992）。異なる３種の腫瘍関連炭水化物抗原が、通常のヒト癌において高度に発現する。ＴおよびＴｎハプテンは、ラクト系列タイプ１鎖、およびタイプ２鎖中に含まれる。加えて、ガン関連ガングリオ鎖およびスフィンゴ糖脂質は、様々なヒトガン上に発現する。
腫瘍関連ムチンによって提示される変化したグリカン決定基は、患者の免疫系によって非自己または外部者として認識される（Springer）。特に、多くの患者において、Ｔハプテンに対する強力な自己免疫反応が観察される。これらの反応は、容易に測定することができ、従前可能だったよりも早期に、高い感応性および特異性で癌腫の検出が可能となる。最後に、ＴおよびＴｎの発現の程度は、癌腫の分化の程度としばしば関連する（Springer）。
炭水化物ハプテンの広範な議論が、Wong、USP 6,013,779において示されている。種々の炭水化物は、本発明に従っては、特に腫瘍の検出および治療における使用のために、合成糖リポタンパク免疫原中に組み込まれることができる。Ｔｎ、Ｔ、シアリルＴｎおよびシアリル（２→６）Ｔハプテンが特に好ましい。
特に、腫瘍を検出および治療するために、通常のヒト癌に高度に発現する３種類の腫瘍関連炭水化物エピトープがアミノ化化合物と接合する。これらは、特にラクト系列タイプ１鎖およびタイプ２鎖、ガン関連ガングリオ鎖、および中性スフィンゴ糖脂質を含む。
ラクト系列タイプ１鎖およびタイプ２鎖の例は以下の通りである。
上記に加えて本発明に従ってアミノ化した化合物に中性スフィンゴ糖脂質も接合できる。
選択した中性スフィンゴ糖脂質
球形トリオース： Galα→4Galβ1→4Glcβ1→
球形テトラオース： GalNAcβ1→3Galα→4Galβ1→4Glcβ1→
球形ペンタオース： GalNAcα1→3GalNAcβ1→3Galα→4Galβ1→4Glcβ1→
イソ球形トリオース： Galα→3Galβ1→4Glcβ1→
イソ球形テトラオース：GalNAcβ1→3Galα1→3Galβ1→4Glcβ1→
ムコトリオース： Galβ1→4Galβ1→4Glcβ1→
ムコテトラオース： Galβ1→3Galβ1→4Galβ1→4Glcβ1→
ラクトトリオース： GalNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→
ラクトテトラオース： GalNAcβ1→3GalNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→
ネオラクトテトラオース：Galβ1→4GlcNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→
ガングリオトリオース：GalNAcβ1→4Galβ1→4Glcβ1→
ガングリオテトラオース：Galβ1→GlcNAcβ1→4Galβ1→4Glcβ1→
ガラビオース： Galα→4Galβ1
9-O-アセチル-GD3： 9-O-Ac-NeuAcα2→8NeuAcα2→3Galβ1→4Glcβ1→
免疫複合体
本発明の免疫原は、一またはそれ以上のエピトープが他の化学的成分に結合して、体液性免疫反応を誘発する能力が増大するといった、異なる免疫学的性質をもつ分子を形成する免疫複合体であることができる。たとえば、一またはそれ以上のエピトープが、アルブミン、カサガイのヘモシアニン（ＫＬＨ）またはポリデキストランといった巨大分子担体に接合することができる。あるいは、いくつかのエピトープは、ＭＡＰ−４ペプチドといった分枝リシンコアに結合することができる。あるいは、いくつかのエピトープは、いくつかの他のリンカーまたは分子骨格を使用して単に結合することができる。
アジュバント
低分子量の合成抗原は、弱い免疫原であることができ、これは完全な合成ワクチンの成功に対する最大の障害であると一般的に理解される。このような合成抗原の免疫原としての性質を改善する一つの方法は、アジュバントの環境中に送達することである。
従来技術に通常知られているように、アジュバントは、特異的な抗原刺激と組み合わせてはたらいて、抗原に対する特異的な反応を強める物質である。理想的なアジュバントは、非特異的に宿主の免疫系を刺激するものと考えられていて、これは、任意の異質な抗原と連続して遭遇すると、その異質な抗原に対して強力かつ特異的な免疫反応を生じさせる。このような強力かつ特異的な免疫反応は、その記憶によっても特徴付けられるので、宿主免疫系のＴリンパ球（Ｔ細胞）が活性化したときのみ生じる。
Ｔ細胞ブラストジェネシスおよびＩＦＮ−γ生成は、免疫反応を測定する二つの重要なパラメータである。実験的に、Ｔ細胞ブラストジェネシスは、Ｔ細胞増殖と直接関連するＤＮＡ合成を測定し、これは次には、Ｔ細胞活性の直接の結果となる。一方、ＩＦＮ−γは、活性化されたＴ細胞によって分泌される主要なサイトカインである。このため、Ｔ細胞ブラストジェネシスおよびＩＦＮ−γ生成はＴ細胞活性化を誘導し、これは、宿主免疫系を助けて任意のタンパク質をもととする抗原に対する強力かつ特異的な免疫反応を誘導するアジュバントとしての能力を示唆する。
免疫原単独によって誘発される水準に比して、少なくとも一のリポソーム／免疫原コンビネーションに対する反応において、Ｔ細胞ブラストジェネシスの生成水準またはインターフェロンガンマの生成水準のいずれかを有意に（ｐ＝0.05）上昇させる場合、この化合物はアジュバントと考えられる。好ましくは、ともに上昇させる。好ましくは、上昇は、少なくとも10％であり、より好ましくは少なくとも50％であり、さらにより好ましくは少なくとも100％である。
好ましくは、本発明の脂質化合物の毒性は、前記天然脂質Ａ生成物の50％をこえず、さらに好ましくは後者の10％未満である。
多くのアジュバントが当業者に知られており、これはフロイントの完全アジュバント、サポニン、DETOX（Ribi Immunochemicals）、Montanide ISA-51、-50および-70、ＱＳ−２１、モノホスホリル脂質Ａ、およびそれらの類似体を含む。脂質アジュバントは、リポソームの状況で示されることができる。
このリポソームワクチンは、アジュバントとともに有利に製剤することができる。たとえば、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）は、Ｔリンパ球に特異的なリポソーム抗原の増加した提示を引き起こす効果的なアジュバントである。Alving、C. R.、Immunobiol.、187：430-446（1993）。当業者は、たとえばリピドＡおよびその誘導体といった、脂質に基づくアジュバントも適当であることを認識するであろう。ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）も、リポソームに組み込まれると、免疫賦活性の上昇を示した（Gupta RKら、「Adjuvants-A balance between toxicity and adjuvancity」、Vaccine、11、293-306（1993））。
アジュバントの使用は免疫に必須のもではない。
リポソーム製剤
リポソームは、水性区画の周りを囲む一またはそれ以上の脂質二重膜からなる顕微鏡的な小胞である。たとえば、Bakker-Woudenbergら、Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 12（補遺1）：S61（1993）およびKim、Drugs、46：618（1993）を参照。リポソームは天然の細胞膜にも見出される大量の脂質分子から調剤することができるので、リポソームは通常安全に与薬することができ、かつ生分解性である。
リポソームは、極性脂質の物理的な自己組織化による球形の粒子で、これはリポソーム中の膜組織化を決定する。リポソームは、一層または多層の種々の大きさをもつ小胞として形成することができる。このようなリポソームは、それ自体免疫原性の性質を持たない小さな分子から構成されるが、巨大分子の粒子のごとく振る舞い、かつ強力な免疫原性の特徴を示す。
調製の方法に依存して、リポソームは一層または多層であることができ、そして約0.02マイクロメーターから約10マイクロメーターを越える範囲の直径をもつサイズで変化する。種々の薬剤を、リポソーム中に封入することができる。疎水性の薬剤は二重膜により仕切られ、親水性の薬剤は内部水溶性スペース内に仕切られる。たとえば、Machyら、「Lipsomes in Cell Biology and Pharmacology（John Libbey、1987）、およびOstroら、「American J. Hosp. Pharm.」46：1576（1989）を参照。
リポソームは実質的に任意のタイプの細胞に吸収され、そして組み込まれた薬剤を放出する。代替的に、前記リポソームは標的細胞と融合して、それによってリポソームの内容物が標的細胞に移される。代替的に、リポソームは食細胞によりエンドサイトーシスによって取り込まれることができる。エンドサイトーシスに引き続き、リソソームによるリポソーム脂質の分解、そして封入薬剤の放出がある。Scherphofら、Ann. N. Y. Acad. Sci.、446：368（1985）。
本発明の方法に使用される他の適切なリポソームは、多重層膜小胞（ＭＬＶ）、少層膜小胞（ＯＬＶ）、単層膜小胞（ＵＶ）、小単層膜小胞（ＳＵＶ）、中型単層膜小胞（ＭＵＶ）、大型単層膜小胞（ＬＵＶ）、巨大単層膜小胞（ＧＵＶ）、多小胞小胞体（ＭＶＶ）、逆相蒸発法（ＲＥＶ）によって作られた単一層もしくは少層小胞体、逆相蒸発法によって作られた多重膜小胞体（ＭＬＶ−ＲＥＶ）、安定多数膜小胞体（ＳＰＬＶ）、凍結および解凍ＭＬＶ（ＦＡＴＭＬＶ）、押し出し法によって調製した小胞体（ＶＥＴ）、フレンチプレスによって調製された小胞体（ＦＰＶ）、融合により調製された小胞体（ＦＵＶ）、脱水−再水和小胞体（ＤＲＶ）、および気泡体（ＢＳＶ）を含む。当業者は、これらのリポソームの調製のための技術が従来技術に知られていることを認識する。「Colloidal Drug Delivery Systems」、66巻（J. Kreuter編、Marcel Dekker、Inc.、1994）参照。
「リポソーム製剤」は、インビトロで生成した脂質小胞体で、この中に本発明の例えば抗原を薬剤として組み込むことができる。このため、「リポソームに結合した」は、薬剤がリポソームに一部組み込まれまたは付着していることをしめす。本発明の免疫原は、リポソームに結合した抗原であるが、前記リポソームについては、免疫原ではなく、またはリポソームなしの状態でも免疫原となることができる。 幾つかの異なる薬剤が、同一のリポソームに、またはそれぞれが異なるリポソームに組み込まれるか付着することができ、そしてリポソームは対象に対して、一緒に投与されるかまたは個別に投与される。
分子の脂質部位は自然に脂質二重膜中に組み込まれるので、脂質含有分子はリポソームに組み込まれることができる。このため、脂質含有剤は、リポソームの「表面」上に提示されることができる。代替的に、薬剤はリポソーム内に封入されることもできる。
リポソームの形成には、一またはそれ以上の脂質を要する。単独または組み合わせで、リポソーム二重膜構造を形成することが可能な任意の脂質を使用することができる。一般的には、これらのリピドは少なくとも一のリン脂質を含む。前記リン脂質は、天然材料からのリン脂質、修飾された天然リン脂質、半合成リン脂質、完全合成リン脂質、または非天然頭部基をもったリン脂質（必然的に合成）であることができる。もっとも関心のあるリン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチド酸、およびホスファチジルイノシトールである。
前記リポソームは中性、正荷電、および／または負荷電脂質を含むことができる。ホスファチジルコリンは、中性リン脂質である。ホスファチジルグリセロールは負荷電糖脂質である。Ｎ−[１−（２，３−ジオレイロクス）プロピル]−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライドは正荷電合成脂質である。他は、３−ベータ−[Ｎ−（Ｎ’,Ｎ”−ジメチルアミノエタン）カルバモイル]−コレステロールである。
一般的に、脂質は、一またはそれ以上の脂肪酸群からなる。これらは飽和または不飽和であることができ、炭素数が変わることができ、一般的には12−24の炭素であることができる。特に関心のあるリン脂質は、下記脂肪酸をもつものである。C12：0、C14：0、C16：0、C18：0、C18：1、C18：2、C18：3（アルファおよびガンマ）、C20：0、C20：1、C20：3、C20：4、C20：5、C22：0、C22：5、C22：6、およびC24：0であり、ここで第一の数字は脂肪酸鎖中の総炭素数で、第二の数字は二重結合の数を表す。哺乳動物または植物材料由来の脂肪酸は、すべて偶数の炭素数をもち、その不飽和は３つの炭素間隔で離れていて、それぞれ介在性のメチレン基をもつ。
コレステロールは「液体−結晶状態」二重膜の浸透性を減じる。
リポソームは、特定の標的細胞に対して特別な親和性を含むことができる。たとえば、ラクトースセラミドは、肝細胞について（およびおそらく肝ガン細胞についても）特別の親和性を持つ。
好ましいリポソーム形成においては、成分脂質はホスファチジルコリンを含む。より好ましくは、コレステロールも含み、さらにより好ましくは、ホスファチジルグリセロールも含む。脂質の自己組織化性質の利用で、極性脂質に一またはそれ以上の免疫原を付加することができ、次々にリポソーム粒子の一部となる。各免疫原は一またはそれ以上の抗原決定基（エピトープ）を含む。これらのエピトープは、Ｂ細胞エピトープ（抗体によって認識される）またはＴ細胞エピトープ（Ｔ細胞によって認識される）であることができる。リポソームは関連する免疫原によって誘発された免疫反応を免疫賦活するようはたらくことができる。アジュバントを単に免疫原と混合するよりも、局所的に高い効果的な濃度をもつことで、より効果的になりやすくなる。
さらに、上述の免疫原の代わりに、ハプテンを付加することができる。免疫原のように、ハプテンは抗原決定基からなるが、しかしそれのみでは免疫反応を誘発するのには小さすぎる定義である（通常、ハプテンは5,000ダルトンよりも小さい）。この場合、脂質成分はアジュバントとしてのみならず、免疫原キャリアとしてはたらくことができ、ハプテンおよび脂質接合体は合成免疫原として振る舞う（すなわち、この物質に対して、体液性免疫反応および／または細胞免疫反応を誘発することができる）。
脂質が免疫原キャリアとしてはたらかない場合でも、ハプテンにになわれたリポソームはまだ合成抗原として振る舞うことができる（すなわち、たとえば抗体またはＴ細胞といった、体液性または細胞性免疫系の成分によって認識される物質である）。用語「抗原」はハプテンおよび免疫原の両方を含む。
このため、いくつかの具体化は、本発明では、ここに開示したような脂質Ａ類似体、および少なくとも一のＢ細胞もしくはＴ細胞エピトープからなる膜をもつリポソームを企図する。エピトープはリポペプチド、グリコリピドまたはグリコリポペプチドを備える。
免疫原の脂質化は、通常リポソームへの免疫原の組込みを促進し、これは次に免疫原の免疫提示を改善する。もっとも効率的な組込みは、免疫原の少なくとも一の強力な親油基が、リポソームの脂質成分の少なくとも一の大きさと類似であることが好ましい。たとえば、リポソームの参照脂質成分の大きさの50％ないし200％の範囲の大きさである。大きさは、おれぞれについて非水素原子の数を数えることによって、それぞれの分子量を計算することで、または（３Ｄ分子モデル技術を用いて）それぞれの分子体積もしくは最長ディメンションを計算することで測定することができる。
好ましくは、脂質化免疫原は、免疫原に対して体液性もしくは細胞性免疫反応を免疫賦活する親油性成分からなる。
細菌性免疫賦活調製と異なり、合成脂質Ａ類似体は、リポソーム膜への構造的によく限定された脂質を与える。このような限定された構造は、形成後に「活性」膜成分を再確認する重荷を減じるのみならず、リポソーム膜の限定に寄与する。このようなリポソームは「完全に合成のワクチン形成」と命名することができ、合成脂質Ａ類似体をアジュバントとして、および合成脂質含有抗原を含有する。
免疫反応の性質決定
細胞媒介性免疫反応は、インビトロまたはインビボでアッセイすることができる。通常のインビトロアッセイはＴ細胞増殖アッセイである。血液試料を関心のある疾病に罹患した患者からとり、その疾病に関連した、またはワクチン接種した個人からとる。この個人のＴ細胞はこのため、増殖によりその抗原にあらたにさらされることに反応するよう初回刺激を受ける。増殖は、ＤＮＡ複製におけるその役割のためにチミジンを要する。
一般的に、Ｔ細胞増殖はＢ細胞増殖に比して大規模であり、分離されていない細胞群においてさえも強いＴ細胞反応を検知することができる。しかしながら、Ｔ細胞の精製は、Ｔ細胞反応の検知を容易にするのに望ましい。その抗原特異的増殖に実質的に反対に影響しなければ、Ｔ細胞精製の任意の方法をとることができる。ここでの好ましい手順は、10.7の特別な密度の等密度の勾配で、すなわちFicoll-HypagueまたはPercoll勾配分離で、まず全リンパ球個体群を捕集により得る（血液、脾臓、リンパ節から）。この細胞の混合個体群を、次に数通りの方法を経てＴ細胞個体群にさらに精製する。もっとも簡便な分離は、Ｂ細胞および単球／マクロファージ個体群のナイロンウールカラムへの結合に基づくものである。Ｔ細胞個体群は、ナイロンウールを通過し、90％以上の精製Ｔ個体群を単一の経過により得ることができる。他の方法には、補体タンパク質の存在下、非Ｔ細胞個体群（ネガティブ選択）を溶解するために、Ｂ細胞に対する特異的抗原および／または単球抗原を使用することを含む。さらに他の方法は、抗Ｔ細胞抗体（ＣＤ３）が固相マトリックス（磁性ビーズといったもの）に結合して、このためＴ細胞が付着してこれを非Ｔ細胞個体群から分離する（すなわち、磁性的に）ことを可能にする、ポジティブ選択技術である。これらは機械的または化学的分裂によってマトリックスから回収することができる。
精製Ｔ細胞個体群を得れば、照射を受けた抗原提示細胞（脾臓マクロファージ、Ｂ細胞、樹状突起細胞はすべて存在）の存在下、培養される（これらの細胞は、トリチウム化チミジンに反応および組み込まれることを防止するために照射を受ける）。生存可能なＴ細胞（20ユニットでIL2で補充される100μl培地中のウェルあたり100,000-400,000）は、次に試験ペプチドまたは他の抗原とともに、3ないし7日間、試験抗原とともに1ないし100μg／mlの濃度で培養される。
抗原刺激期間の終わりに、幾つかの方法で反応を測定することができる。まず、細胞のない上清を収集して、特異的サイトカインの存在を試験する。αインターフェロン、IL2またはIL12の存在は、Ｔｈヘルパータイプ１個体群反応を示す。IL4、IL6およびIL10の存在はともに、Ｔヘルパータイプ２免疫反応を示す。このため、この方法は、ヘルパーＴ細胞サブセットの同定を可能にする。
ブラストジェネシスと名付けられた第２の方法は、抗原刺激期間の終わりに、トリチル化チミジンを培養に加え（たとえば、ウェルごとに1μキュリー）、4ないし16時間かけて放射性標識をつけた代謝生成物を細胞に組み込み、続いてシンチレーションカウントのためにフィルター上に集める。組み込まれた放射性チミジンの水準は、Ｔ細胞複製活性度の測定となる。ネガティブ抗原または抗原非存在対照ウェルが、刺激指標の面からブラストジェニック反応を算出するために使用される。これはＣＰＭテスト／ＣＰＭ対照である。好ましくは、達成する刺激指標は少なくとも2で、より好ましくは少なくとも3で、さらに好ましくは5で、もっとも好ましくは少なくとも10である。ＣＭＩは、標準的な実験動物、たとえばマウスの、インビボで測定することもできる。マウスは初回刺激抗原で免疫化される。Ｔ細胞の反応をまったあと、このマウスをテスト抗原のフットパッド注入によって攻撃する。ＤＴＨ反応（テストマウスの腫脹）は、たとえば、サリン溶液を注射した対照マウスと比較される。
好ましくは、反応は、少なくとも0.10mm、より好ましくは少なくとも0.15mm、さらにより好ましくは0.20mm、もっとも好ましくは少なくとも0.30mmである。
インビボで、体液性免疫反応は、免疫化したマウスからの血液をとり、関心のある抗原に結合する抗体の存在下、その血液をアッセイすることによって測定する。たとえば、テスト抗原は固定され試料とともに培養されて、それよって同族の抗体を捕獲し、そして捕獲抗体を次に、標識化した抗アイソタイプの抗体とともに固相で培養することによって測定する。
好ましくは、体液性免疫反応は、望まれる場合、少なくとも1／100の抗体タイターによって示されるのと少なくとも同じ強さで、より好ましくは少なくとも1／1000であり、さらにより好ましくは少なくとも1／10,000である。
免疫刺激剤としての脂質Ａ類似体
ＬＰＳ／脂質Ａ作用薬活性をもつ脂質Ａ類似体は、免疫刺激剤として使用することができる。これらは潜在的に、たとえば感染および腫瘍といった幅広い疾病の治療のための免疫療法薬として有用である。ここに示したように、これら脂質Ａ類似体はワクチンアジュバントの能力がある。免疫刺激性アジュバントは、免疫化した宿主中で、抗原特異的抗体反応のためのサイトカインの生成、および細胞毒性リンパ球を含む細胞性免疫反応を刺激する。
本発明の化合物は、注入および摂取のための、製薬的に許容できる担体とともに製剤することができる。製薬的に許容できる担体は、活性成分の免疫調節活性を妨害せず、かつ投与する宿主に対して毒性のない媒体である。製薬学的に許容できる担体は、水中の油もしくは油中の水懸濁液の制限なく、水溶性の成分、リポソーム、微小ビーズ、およびミクロソームを含む。ワクチンアジュバントとして、これらは抗原とともに製剤化して、より強力な免疫反応を供しかつワクチン効力を向上する。典型的には、抗原は、本発明中に開示したような免疫刺激性免疫賦活化合物と組み合わせてかもしくは別々に製剤化して、製薬的な組成を提供する。他の製剤においては、抗原は、本発明の免疫賦活化合物のアミノ、カルボキシル、ヒドロキシル、および／またはリン酸成分に共有的に結合することができる。
抗原は、病原体ならびに非病原体生物体、ウイルス、および菌類から抽出することができ、あるいはすべての生物体から抽出することができる。さらに特異的には、抗原薬剤は、（１）生きた、加熱殺菌した、または化学的に弱毒化したウイルス、バクテリア、マイコプラズマ、菌類、および原生動物、（２）断片、抽出物、サブユニット、代謝物および（１）の組換え作成物、（３）断片、サブユニット、代謝物ならびに哺乳動物のタンパク質および糖タンパク質の組換え作成物、（４）腫瘍関連および腫瘍特異的抗原、ならびに（５）核酸から構成されるグループから選択することができる。
治療的な組成は、任意の適切な抗原またはワクチン成分とアジュバントとしての本発明の免疫刺激化合物の組み合わせて使用することができる。このような治療的な組成は、治療学的に疾病状態および条件、たとえば腫瘍、マラリア、天然痘、炭疽、およびＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）に活性である、適切なタンパク質、ペプチド、糖ペプチドおよび糖脂質からなる。
投与方法は、免疫刺激性アジュバント、ワクチン含有アジュバント、もしくはアジュバントおよび／または抗原を宿主に送達する任意の適切な手段および／または方法の使用から構成することができる。送達方法は、皮下（ＳＣ）注射、経皮、鼻腔（ＩＮ）、眼、経皮性、筋肉内（ＩＭ）、皮内（ＩＤ）、腹腔内（ＩＰ）、腟内、肺、および直腸投与といった、非経口的な投与方法、ならびにたとえば経口投与といった非経口でない投与も同様に含むことができる。
本発明の免疫刺激剤は、通常、よりよい有効性を達成するために組み合わせの治療で、標的疾病の治療のための他の治療薬とともに宿主へ投与される。たとえば、抗体薬剤、抗ウイルス剤、および抗炎症剤を組み合わせて、感染および自己免疫疾患のためのよりよい治療を供する。本発明の免疫刺激化合物からなる製剤は、食塩水、油、スクアレン、およびムラミルペプチド類似体、バクテリアＤＮＡ、ＣｐＧ−オリゴヌクレオチド類似体、ＱＳ−２１（植物から抽出した免疫刺激性アジュバント）といった他の免疫刺激性化合物、ならびに本発明で開示していない他の脂質Ａ類似体といった付加的な成分を含むことができる。
細菌性エンドトキシンアンタゴニストとしての脂質Ａ類似体
ＬＰＳ／脂質Ａアンタゴニストとしての活性をもった脂質Ａ類似体活性は、ＬＰＳ−媒介病態生理学的な障害のコントロールのために使用される。ヒトにおけるグラム陰性バクテリア感染でバクテリアエンドトキシン、リポポロサッカライド（ＬＰＳ）、は血流に放出される。ＬＰＳに対する急性の炎症反応またはその活性原脂質Ａは、サイトカインならびに、モノサイトもしくはマクロファージからの腫瘍ネクローシスファクター−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−６およびロイコトリエンを含む他の細胞媒体の放出をもたらす。極度な水準で、これらのサイトカインおよび細胞媒体は、発熱、ショック、高血圧、および器官不全を含む病態生理学的な現象の引き金となることが知られている。（R. C. Bone、Clin. Microbiol. Rev. 1993、6、57）。これらの現象は通常敗血症と名付けられる。敗血症は致死性で、米国内のみで1000人のうち10人の死因となっている。
ＬＰＳ媒介疾病のコントロールは、ＬＰＳ／脂質Ａの不活性競合体（アンタゴニスト）によって、ＬＰＳ／脂質Ａの受容体への結合を妨害することである。本願に開示した脂質Ａ類似体は、天然脂質Ａ分子とのその構造類似性のために、ＬＰＳ結合受容体、すなわちトール様受容体４（ＴＬＲ４）に結合するが、免疫系による調節できない炎症性サイトカインの放出は引き起こさないことが期待される。ＬＰＳ／脂質Ａアンタゴニストとして、このような脂質Ａ類似体はサイトカインのＬＰＳ誘導生成を阻害し、かつこれによってＬＰＳ媒介病態生理学的疾病を調節することに寄与する。
細菌性エンドトキシンの毒性を中和するＬＰＳアンタゴニストとして、このような脂質Ａ組成は、細菌感染の初期段階において投与される場合により高い治療的有効性を示すことが期待される。加えて、このような脂質Ａ類似体は、感染によってもたらされる宿主の負荷量を軽減する通常の抗生剤と組み合わせて投与することができる。要するに、ＬＰＳアンタゴニストとしてここで述べた脂質Ａ類似体は、グラム陰性細菌感染によってもたらされるＬＰＳ媒介疾病の治療または予防のための治療薬として有用である。このような疾病は、発熱、全身性の炎症、播種性血管内血液凝固、高血圧、急性腎不全、急性呼吸窮迫症症候群、肝細胞破壊、および心不全を含むが、これに限定されるものではない。
本願で開示した脂質Ａ類似体を適用する他の具体例は、ＬＰＳ媒介ウイルス産生の抑制である。ＬＰＳは強力に、モノサイトまたはマクロファージに存在するウイルスの産生を刺激する（Ponerantzら、J. Exp. Med. 1990、127、253）。ＨＩＶ−１の場合、増大したウイルス産生は、おそらくＬＰＳによる直接的な活性化およびＬＰＳ媒介のＴＮＦ−αレベルの上昇の両方の結果である。細胞活性は、ＨＩＶ−１ＮＦ−ｋＢ結合部位へのトランス作用性因子の結合増大を促進し、この結果増大したウイルス転写および複製をもたらす（Duhら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1989、85、5974）。このため、ＬＰＳアンタゴニストとして、本明細書に開示した脂質Ａ類似体は、ＬＰＳ媒介のＨＩＶ−１複製における増大を抑制することができる。同様に、これらの脂質Ａ類似体は、その複製がＮＦ−ｋＢ調節部位によって直接的もしくは間接的にコントロールされている任意のウイルスの活性化を、抑制するために使用することができる。このようなウイルスは、サイトメガロウイルスまたはヘルペスウイルスを含むが、これに限定されるものではない。さらに、ＬＰＳは、インフルエンザウイルス活性化において関連付けられていて（Nainら、J. Immunol. 1990、145、1921）、そして観察されるインフルエンザおよび細菌感染の合併症に、増大したＴＮＦ−αの放出が関連することが示唆されている。このため、本明細書に開示したＬＰＳアンタゴニスト活性をもつ脂質Ａ類似体は、インフルエンザウイルス活性化を抑制することにも同様に使用することができる。要するに、本発明の組成は、たとえばＨＩＶ−１、サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルス、およびインフルエンザウイルスといった、潜在的もしくは活性化ウイルス感染のＬＰＳ媒介性の悪化を治療または予防するめの有用な治療を、供することができる。
製薬的な対象、調製および方法
本出願人は、WO98／33810の頁32ないし46の議論をここに参照として組み込む。
対象
本発明のワクチンのレシピエントは、体液性免疫反応または細胞免疫反応を経て特異的免疫を取得することできる任意の脊椎動物であることができる。
哺乳動物においては、霊長目（ヒト、類人猿およびサルを含む）、偶蹄類（馬、ヤギ、ウシ、ヒツジ、豚を含む）、齧歯類（マウス、ラット、ウサギ、およびハムスターを含む）、および食肉目（猫、および犬を含む）の哺乳動物が好ましいレシピエントである。鳥においては、七面鳥、ニワトリおよび同目の他のメンバーが好ましいレシピエントである。もっとも好ましいレシピエントはヒトである。
本発明の好ましい対象動物は霊長類の哺乳類である。用語「哺乳類」によっては、哺乳綱に属するそれぞれの個体を意味し、これは、もちろん、ヒトを含む。本発明は、獣医学への使用も同様に意図しているが、特に、ヒト被検者の治療に対して有用である。用語「非ヒト霊長類」は、ヒト科をのぞく類人猿亜目の任意のメンバーを意図している。このような非ヒト霊長類は、新世界サル上科、オマキザル科（オマキザル、ホエザル、クモザルおよびリスザルを含むアメリカ大陸のサル）；およびマーモセット科（マーモセットを含む）、オナガザル上科（マカク、マンドリル、ヒヒ、テングザル、モナザル、およびインドの聖ヒトザルを含む）；およびヒト上科、ショウジョウ科（テナガザル、オランウータン、ゴリラおよびチンパンジーを含む）を含む。アカゲザルはマカクの一メンバーである。
製薬的組成
本発明の製薬的な組成は、少なくとも一の免疫原を、保護性の免疫反応を誘発するのに十分な量含んでいる。この反応は、体液性、細胞性、またはその組み合わせである。この組成は複数の免疫原からなることができる。
少なくとも１の免疫原は本質的に免疫原性であるグリコリポペプチド、またはリポソームへの組み込みの結果として免疫原性であるグリコリポペプチドのいずれかである。
製薬的な組成は好ましくはさらにリポソームを含む。好ましいリポソームは、Jiangら、PCT／US00／31281、2000年11月15日出願（我々の整理番号JIANG3A-PCT）、およびLongeneckerら、08／229,606、1994年4月12日出願（我々の整理番号LONGENECKER5-USA、およびPCT／US95／04540、出願1995年4月12日（我々の整理番号LONGENECKER5-PCT）に含まれる。
組成は、抗原提示細胞を含むことができ、この場合免疫原は、投与前に先立ち、より効果的な提示のために、細胞上にパルスで送ることができる。
組成は、従来技術に既知の補助的な薬剤または賦形剤を含むことができる。たとえば、Berkowら編、「The Merck Manual、第15版」、Merck and Co.、Rahway、N. J.、1987；Goodmanら編、「Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics、第8版、Pergamon Press、Inc.、Elmsford、N. Y.、（1990）；Avery's Drug Treatment：Principles and Practice of Clinical Pharmacology and Therapeutics、第3版、ADIS Press、LTD.、Williams and Wilkins、Baltimore、MD.（1987）、Katzung編、Basic and Clinical Pharmacology、第5版、Appleton and Lange、Norwalk、Conn.（1992）、これら参考文献およびその中での引用は、ここに参照として完全に組み込まれる。
組成は、さらにアジュバントを含んで、非特異的に免疫反応を強めることができる。幾つかのアジュバントは、体液性免疫反応および細胞性免疫反応の両方を増強することができ、そして他のは一または他に特異的である。幾つかは一を増強し、他を阻害する。アジュバントの選択は、このため、所望の免疫反応に基づく。
組成は、細胞性もしくは体液性免疫反応のいずれかを支持または阻害するサイトカイン、またはこのようなサイトカインに対する阻害性抗体といった、他の免疫調節物質を含むことができる。
本発明に従う製薬的な組成は、少なくとも一のガン化学療法物質を含むことができ、たとえば抗代謝生成物、ブレオマイシンペプチド抗生物質、ポドフィリンアルカロイド、ビンカアルカロイド、アルキル化作用薬、抗生物質、シスプラチン、またはニトロソ尿素からなるグループから選択される。本発明に従う製薬的な組成は、ガンマグロブリン、アマンタジン、グアニジン、ヒドロキシベンズイミダゾール、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、チオセミカルバゾン、メチサゾン、リファンピン、リブビリン、ピリミジン類似体、プリン類似体、フォスカーネット、ホスホ酢酸、アシクロビル、ジデオキシヌクレオシド、またはガンシクロビルから選択される、少なくとも一のウイルス性化学的療法化合物をさらにまたは付加的に含むことができる。たとえば、Katzung、上記、およびそこで引用している参照、798ないし800頁および680ないし681頁を参照。それぞれ、参照はここに完全に参照として組み込まれる。
抗寄生虫薬は、節足動物、蠕虫（線虫、蟯虫、線虫、鈎虫、条虫、鞭虫、および住血吸虫を含む）、および原虫（アメーバ、およびマラリア、トキソプラズマ、およびトリコモナス生物体）に対して使われるのに適した薬剤を含む。実施例は、チアベナゾール、種々のピレトリン、プラジカンテル、ニクロスアミド、メベンダゾール、クロロキンＨＣｌ、メトロニダゾール、ヨードキノール、ピリメタミン、メフロキンＨＣｌ、およびヒドロキシクロロキンＨＣｌを含む。
製薬的な目的
本発明の目的は、疾病から対象を保護することである。「感染または疾病からの保護」にあるような、用語「保護」は、ここでは、「予防」、「抑制」または「治療」を包含して使用される。「予防」は、疾病の誘発に先立つ製薬的な組成の投与を含む。「抑制」は、疾病の臨床的な発現に先立つ製薬的な組成の投与を含む。「治療」は、疾病の出現後の製薬的な組成の投与を含む。治療は寛解性または治癒であることができる。
ヒトおよび獣医学的な医薬において、「予防」および「抑制」の間を区別することは常には可能でないということを理解しなければならない。なぜなら、究極的な誘導的な現象は知られていない、潜在的、または現象の出現後にしか患者をよく確かめられないからである。このため、用語「防御」を使用して、「治療」とは異なるが、ここに定義した「予防」および「抑制」の両方を包含するようにするのが通常である。ここで使用する用語「保護」は、「防御」を包含するよう意図している。たとえば、Berker、上記、Goodman、上記、Avery、上記およびKatzung、上記、を参照。これらおよびこれらで引用されている参照はここに完全に参照として組み込まれる。
与えられる「保護」は、完全である必要はなく、すなわち、疾病が完全に予防または根絶される必要はなく、対照個体群に比較して統計的に有意な改善（p＝0.05）が存在すればよい。保護は、疾病症状の発症の重症度または急性度を軽減することに限定することができる。競合的な薬剤に比して比較的小さい程度の保護しか供さない薬剤も、特定の個人について他の薬剤が効果的でない場合、他の薬剤と組み合わせて保護の程度を増大できる場合、または競合的な薬剤に比して安全な場合は価値がある。
好ましくは疾病ステージの時期を一致させて、非治療対照群と治療完了群の疾病の持続時間、重症度、等を比較することで、治療の効果を判定することができる。
防御の効果は、通常、処置群の疾病の発生率および対照群の発生率を比較することで確認することができ、ここで処置群および対照群は等しいリスクであると考えられて、またはリスクの予想される違いについて補正をかける。
一般的に、防御は、家族歴、個人の既往歴、または原因薬物への曝露の増大を鑑みて、疾病について高いリスクであると考えられた場合に与えられる。
製薬的な投与
本発明の少なくとも一の保護的薬剤を、前記の製薬的な組成を使用して、意図した目的を達成する任意の方法により、投与することができる。
投与は経口または非経口的であることができ、そして、非経口的な場合、局所的または組織的のいずれでもよい。たとえば、このような組成の投与は、皮下、静脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、経皮、または頬側経路といった種々の非経口的な経路によることができる。非経口的投与は、ボーラス注入によってまたは時間をかけての漸進的な灌流によることができる。本発明の製薬的組成を用いた好ましい方法は、皮下、筋肉内または静脈内による適用である。たとえば、Berker、上記、Goodman、上記、Avery、上記およびKatzung、上記を参照。これらは、その中に引用された参照も全て含んで、完全にここに参照として組み込まれる。
活性特異的免疫療法による免疫反応によって軽減することのできる疾病または状態を、予防、抑制、または治療するための典型的な療法は、上記の製薬的な組成の有効量投与することを含み、これは単一の治療として投与されるか、または増強またはブースター投与量として、一週間から約24ヶ月の間の期間内繰り返される。
効果的な投与量は、レシピエントの年齢、性別、健康、および体重、同時期に行う治療の性質、複数ならば治療の頻度、そして所望の効果の性質に依存すると理解される。以下に用意した効果的な投与量の範囲は、本発明を制限することを意図せず、好ましい投与量の範囲を説明するためのものである。しかしがら、もっとも好ましい投与量は、個々の対象にあわせられていて、これは当業者にとって、過度の実験をせずに、理解および決定できるものである。これは、典型的には、標準の投与量の調製を含み、たとえば、患者が低体重の場合は投与量を減少する。たとえば、Berkowら編、「The Merck Manual、第15版」Merck and Co.、Rahway、N. J.、1987；Goodmanら編、「Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics、第8版」Pergamon Press、Inc.、Elmsford、N.Y.、（1990）；「Avery's Drug Treatment：Principles and Practice of Clinical Pharmacology and Therapeutics、第3版」AIDS Press、LTD.、Williams and Wilkins、Baltimore、MD.（1987）、Ebadi、「Pharmacology」、Little、Brown and Co.、Boston、（1985）；Chabnerら、上記；De Vitaら、上記；Salmon、上記；Schroederら、上記；Sartorelliら、上記；およびKatsung、上記を参照。これら参照およびその中で引用された参照は、ここに完全に参照として組み込まれる。
ヒトに用いる前に、まず、安全性および効力について実験動物で評価する。ヒト臨床実験では、問題となる薬についての臨床前のデータに基づき、そして類似薬（あれば）についての通例の投与量に基づいて、ヒトで安全と考えられる投与量からはじめる。この投与量が効果的である場合、もし望まれるならば、投与量は減らされて、最小有効投与量を決定する。この投与量が有効でない場合、患者の副作用の徴候を観察しながら、慎重に増やされる。たとえば、Berkowら編、「The Merck Manual、第15版」、Merck and Co.、Rahway、N. J.、1987；Goodmanら編、「Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics、第8版」Pergamon Press、Inc.、Elmsford、N.Y.、（1990）；「Avery's Drug Treatment：Principles and Practice of Clinical Pharmacology and Therapeutics、第3版」ADIS Press、LTD.、Williams and Wilkins、Baltimore、MD.（1987）、Ebadi、「Pharmacology」、Little、Brown and Co.、Boston、（1985）を参照。これらの参照およびその中で引用された参照は、ここに完全に参照として組み込まれる。
各治療に要する全投与量は、予め決定したかまたは臨時の免疫化の予定に従って、複数回の投与（同一または異なることができる）または単一の投与で与薬することができる。この予定は、免疫学的に効果的になるように、すなわち抗原に対する効果的な免疫反応を誘発し、そしてそれによって、可能ならば他の薬剤と組み合わせて、保護を供するように選択される。これを達成する投与量を、「治療上効果的な投与量」として定義する（各投与量が、それだけで与薬した場合、効果的でなくとも、予定は免疫学的に有効であり、そして「治療上効果的な投与量」は免疫化の予定の前後関係においてもっともよく解釈されることに注意）。この使用に効果的な量は、たとえば、ペプチド成分、投与方法、治療する疾病の段階および重症度、患者の体重および一般的な健康状態、ならびに処方する医師の判断に依存する。
典型的には、70kgの大人について、医薬品の活性成分の一日量は、10ナノグラムから10グラムの範囲である。免疫原について、このような患者に対するより典型的な一日量は、10ナノグラムから10ミリグラムであり、さらに適当には1マイクログラムから10ミリグラムである。しかしながら、本発明はこれらの投与量の範囲に制限されるものではない。
留意すべきことは、本発明の組成は重篤な疾病段階においても、すなわち、生命を危うくするかまたは生命を危うくする可能性のある状況においても、一般的に使用することができる。このような状況では、外来性物質の最小化およびペプチドの相対的な無毒性の観点から、治療医師にとって、これらのペプチド組成の実質的な超過投与が好ましく感じる可能性がある。
効果的である任意の間隔で投与されることができる。間隔が短すぎる場合、免疫麻痺または他の副作用が生じうる。間隔が長すぎる場合、免疫が苦しくなりうる。最適な間隔は、個々の投与量が大きい場合に長くすることができる。典型的な間隔は、1週間、2週間、4週間（または1ヶ月）、6週間、8週間、（または2ヶ月）および1年である。付加的な投与量の与薬の妥当性、および間隔の増加または減少の妥当性は、患者の免疫適格性（たとえば関連する抗原に対する抗体の水準）の観点から、継続根拠を再評価することができる。
種々の方法がリポソームの調製について利用可能で、これはたとえば以下に記述されている。Szokaら、Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9：467（1980）、米国特許4,235,871、4,501,728、4,837,028および5,019,369。これはここに参照として組み込まれる。
好適な与薬形式は、疾病、免疫原、および投与方法に依存する。可能性として、錠剤、カプセル、トローチ剤、歯科ペースト剤、坐薬、吸入剤、溶剤、軟膏および非経口的デポを含む。たとえば、Berker、上記、Goodman、上記、Avery、上記、およびEbadi、上記。これらおよびその中で引用された参照は、ここに完全に参照として組み込まれる。
免疫原性を強める方法で免疫原を届けることができ、たとえば、抗原提示の「内在性経路」が生じるように、抗原性の物質を細胞内区画に届ける。たとえば、免疫原はリポソーム（これは細胞と融合する）によって閉じこめることができ、またはウイルス性ベクター（これは細胞に感染する）のコートタンパク質に組み込まれることができる。
他のアプローチは、免疫原がペプチドの場合に適応できるのだが、免疫原をエンコードしているむきだしのＤＮＡを、筋肉内注射で宿主に注入するものである。このＤＮＡは内部移行して発現する。
本発明の組成により、自己のＰＢＬｓを初回刺激することも可能である。ＰＢＬｓは顕著かつ所望の反応をもつことを確認し、そしてＰＢＬｓ、またはそのサブセットを対象に投与する。
実施例
全般：融点は補正していない。空気および水分感応性反応は、すべて窒素雰囲気下で行った。無水ＴＨＦ、ＤＭＦおよびジクロロメタンは、Aldrichから購入し、他の乾燥溶剤は通常の方法で調製した。ＡＣＳグレード溶媒はFisherから購入し、蒸留せずにクロマトグラフィーに使用した。カラムクロマトグラフィー用の、ＴＬＣプレート（シリカゲル６０Ｆ２５４、厚さ0.25mm、Merck）およびフラッシュシリカゲル６０（35-75μｍ）は、Rose Scientific、カナダ、から購入した。１Ｈおよび３１Ｐスペクトルは、Brucker AM 300MHz、Varian Unity 500MHz、またはBrucker DRX 600MHz分光器のいずれかを、プロトンケミカルシフトのための内部標準としてのＴＭＳとともに用いて記録した。旋光度をPerkin-Elmer241旋光計を用いて室温（20ないし22℃）で測定した。元素分析データを、アルバータ大学の微量分析研究所から得た。電子噴霧マススペクトル分析を、ＭＳ５０ＢまたはＭＳＤ１ＳＰＣマススペクトロメーターのいずれかを用いて行った。
化合物８の調製
化合物６（312mg、0.65mmol）、化合物７（200mg、0.44mmol）、ＤＣＣ（136mg、0.66mmol）およびＤＭＡＰ化合物６（27mg、0.22mmol）、を無水ジクロロメタン（5ml）に溶解した。混合物を室温にて4時間撹拌した。固体を濾過・除去し、酢酸エチル（5ml）で洗浄した。濾液を濃縮してから残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル、8：1）によって精製して化合物８を得た（398mg、98％）。ＴＬＣ：Ｒf=0.69（ヘキサン：酢酸エチル、３：１）。[α]D 22＝＋32.0（c 0.5、クロロホルム）。１H NMR（300MHz、CDCl3）：δ 0.90（t、J=6.5Hz、6H、2CH3）、1.25（m、38H、19CH2)、1.52（m、4H、2CH2）、2.16（t、J=7.5Hz、2H、CH2）、2.50（dd、J=16.0、6.0Hz、1H、CHH）、2.63（dd、J=16.0、6.0Hz、1H、CHH)、3.71（dd、J=9.5、9.5Hz、１H、H-4)、3.78（dd、J=10.0、l0.0Hz、1H、H-6a)、3.94（m、１H、H-5）、3.98-4.08（m、2H、H-2、CHHCH=CH2）、4.21（m、1H、CHHCH=CH2）、4.29（dd、J=10.0、5.0Hz、1H、H-6b）、4.69、4.76（2d、J=12.0Hz、各1H、Troc-CH2）、4.94（d、J=3.6Hz、1H、H-1）、5.16（m、1H、リピド-3-H）、5.30（m、2H、CH=CH2）、5.39（dd、J=9.5、9.5Hz、1H、H-3）、5.42（d、J=10.0 Hz、1H、NH）、5.53（s、1H、CHPh）、5.90（m、1H、CH=CH２）、7.30-7.35（m、15H、Ar-H）。Ｃ４７Ｈ７４Ｃｌ３ＮＯ１０（919.46）についての分析計算値：C、61.40；H、8.ll；N、1.52。実測値：C、61.40；H、8.19；N、l.58。
化合物９の調製
化合物８（1.45ｇ、1.60mmol）の無水ＴＨＦ（20ml）溶液に、分子篩（4Å、3.0ｇ）を加えた。混合物を窒素雰囲気下室温にて20分間撹拌した。シアノホウ素水素化ナトリウム（1.0ｇ、15.96mmol）を加えて、混合物を0℃に冷却した。ＨＣｌ（ｇ）／Ｅｔ２Ｏ溶液を気体が発生しなくなるまでゆっくり滴下して加えた。次に混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（50ml）に注ぎ、ジクロロメタンで抽出した（100ml×３）。合わせた有機層を飽和食塩水（20ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーで精製し（最初にヘキサン：酢酸エチル、５：１および次に４：１）、化合物９を得た（1.23ｇ、85％）。TLC：Rf=0.20（ヘキサン：酢酸エチル、4：1）。[α]D 20＝＋47.5（c 1.0、CHCl３）。１H NMR（300MHz、CDCl3）：δ 0.88（t、J=6.5Hz、6H、2CH3）、1.25（br s、38H、19CH2)、1.50（m、4H、2CH2）、2.28（t、J=7.5Hz、2H、CH2）、2.48（dd、J=14.0、4.0Hz、1H）、2.58（dd、J=14.0、7.5Hz、1H)、3.27（d、J=3.5Hz、1H、OH)、3.70-3.86（m、4H）、3.92−4.03（m、２H)、4.58（d、J=12.0Hz、１H)、4.64（d，J=12.0Hz、１H)、4.66（d、J=12.0Hz、１H)、4.76（d、J=12.0Hz、１H）、4.92（d、J=3.5Hz、1H、H-1）、5.13（m、2H）、5.19-5.31（m、2H、CH2=CH）、5.40（d、J=9.5Hz、1H、NH）、5.88（m、1H、CH2=CH）、7.30（m、5H、Ar-H）。Ｃ４７Ｈ７６Ｃｌ３ＮＯ１０についてのＥＳ−ＭＳ：919.5。実測値：920.8（Ｍ＋Ｈ）。
化合物１０の調製
化合物９（1.20ｇ、1.30mmol）の無水ジクロロメタン（20ml）溶液に、１Ｈ−テトラゾール（273mg、3.90mmol）およびジベンジルジイソプロピルホスホラミダイト（900mg、0.875ml、2.61mmol）を加えた。混合物を室温にて30分間撹拌し、次に0℃に冷却した。ｍ−クロロペル安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ、1.63ｇ、55％、5.22mmol）を加えた後、混合物を0℃で30分間撹拌した。この混合物を次に10％亜硫酸水素ナトリウム（40ml）に注入し、ジクロロメタンで抽出した（40ml×３）。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（20ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーを繰り返して精製し（最初にヘキサン：酢酸エチル、４：１および次に３：１）、化合物１０を得た（1.33ｇ、86％）。TLC：Rf=0.31（ヘキサン：酢酸エチル、3：1）。[α]D 20＝＋35.0（c 1.0、CHCl３）。１H NMR（300 MHz、CDCl3）：δ 0.88（t、J=6.5Hz、6H、2CH3）、1.24（br s、38H、19CH2)、1.50（m、4H、2CH2）、2.17（t、J=7.0Hz、2H、CH2）、2.41（dd、J=16.5、5.5Hz、1H）、2.51（dd、J=16.5、7.5Hz、1H)、3.66（dd、J=11.0、4.5Hz、1H)、3.74（dd、J=11.0、2.0Hz、１H）、3.91（m、１H）、4.00（m、２H）、4.20（m、１H）、4.44（d、J=12.0Hz、１H）、4.53（m、１H、H-4）、4.54（d、J=12.0Hz、１H）、4.63（d、J=12.0、１H）、4.88−4.95（m、5H)、5.ll（m、１H)、5.20−5.32（m、２H、CH2=CH）、5.35（dd、J=10.5、9.0Hz、1H、H-3)、5.41（dd、J=9.5Hz、1H、NH）、5.88（m、1H、CH2=CH）、7.30（m、15H、Ar-H）。Ｃ６１Ｈ８９Ｃｌ３ＮＯ１３ＰについてのＥＳ−ＭＳ計算値：1179.6。実測値：1181.0（Ｍ＋Ｈ）。
化合物１１の調製
［ビス（メチルジフェニルホスフィン）］（１、５−シクロオクタジエン）イリジウム（Ｉ）ヘキサフルオロホスフェート（14mg、0.0165mmol）を無水ＴＨＦ（5ml）中に懸濁して、水素ガスを5分間通気して黄色溶液を得た。これを無水ＴＨＦ（10ml）中の化合物１０の溶液（1.30ｇ、1.10mmol）に加えた。この混合物を室温にて2時間撹拌した。水（0.5ml）およびＮ−ブロモコハク酸イミド（ＮＢＳ、294mg、1.62mmol）を次に加えて、反応物を一時間強撹拌した。溶媒除去から得られた残部を酢酸エチル（200ml）に溶解して、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（20ml×２）で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（ヘキサン：酢酸エチル、２：１）、化合物１１を得た（950mg、76％）。TLC：Rf=0.31（酢酸エチル：ヘキサン、１：２）。[α]D 20＝＋17.5（c 1.0、CHCl３）。１H NMR（300 MHz、CDCl3）：δ 0.88（t、J=6.5Hz、6H、2CH3）、1.24（br s、38H、19CH2)、1.50（m、4H、2CH2）、2.18（t、J=7.0Hz、2H、CH2）、2.39（m、2H、CH2）、3.59（dd、J=11.0、6.0Hz、1H）、3.71（dd、J=11.0、1.5Hz、1H)、3.94（m、1H）、4.16（m、1H）、4.40（m、3H）、4.49（d、J=12.0Hz、1H）、4.65（d、J=12.0Hz、1H）、4.72（d、J=12.0Hz、1H）、4.90（m、4H）、5.09（m、1H）、5.39（t、J=3.5Hz、1H、H-1）、5.37（dd、J=10.0Hz、9.5Hz、1H、H-3）、5.70（d、J=9.5Hz、9.5Hz、1H、NH）、7.30（m、15H、Ar-H）。Ｃ５８Ｈ８５Ｃｌ３Ｎ２Ｏ１３ＰについてのＥＳ−ＭＳ計算値：1139.5。実測値：1141.0（Ｍ＋Ｈ）。
化合物１２の調製
トリクロロアセトニトリル（2ml）およびＤＢＵ（4滴）を、化合物１１（920mg、0.81mmol）の無水ジクロロメタン溶液（10ml）に加えた。この混合物を室温にて2時間撹拌し、真空中で濃縮した（乾燥はさせない）。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（ヘキサン：酢酸エチル、４：１、3.5：１および３：１で、0.5％トリエチルアミンとともに）、化合物１２を得た（700mg、68％）。TLC：Rf=0.36（ヘキサン：酢酸エチル、３：１）。[α]D 20＝＋12.5（c 0.4、CHCl３）。１H NMR（300MHz、CDCl3）：d 0.88（t、J=6.5Hz、6H、2CH3）、1.24（br s、38H、19CH2)、1.50（m、4H、2CH2）、2.19（t、J=7.0Hz、2H、CH2）、2.46（m、2H、CH2）、3.71（m、2H）、4.04（m、1H）、4.15（ddd、J=1.0、8.5、3.5Hz、1H、H-2）、4.43（d、J=12.0Hz、1H）、4.52（d、J=12.0Hz、1H）、4.61（d、J=12.0Hz、1H）、4.71（ddd、J=9.5、9.5、9.5Hz、1H、H-4）、4.77（d、J=12.0Hz、1H）、4.94（m、4H）、5.12（m、1H）、4.39（dd、J=10.0、9.5Hz、1H、H-3）、5.65（d、J=8.5Hz、1H、NH）、6.47（d、J=3.5Hz、1H、H-1）、7.32（m、15H、Ar-H）、8.72（s、1H、NH）。Ｃ６０Ｈ８５Ｃｌ６ＮＯ１３ＰについてのＥＳ−ＭＳ計算値：1282.4。実測値：1284.0（Ｍ＋Ｈ）。
化合物１４の調製
化合物１３（672mg、2.97mmol）をアセトニトリル（10ml）に溶解し、２、２−ジメトキシプロパン（560mg、0.66ml、5.35mmol）およびｐ−トルエンスルホン酸（56mg、0.279mmol）を加えた。この混合物を室温にて1時間撹拌し、反応をクエンチするためにトリエチルアミン（0.5ml）を加えた。この混合物を真空で濃縮して、残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製して（ヘキサン：酢酸エチル、２：１）化合物１４を得た（614mg、82％）。Rf=0.67（ヘキサン：酢酸エチル、１：２）。１H NMR（300MHz、CDCl3）：δ＝1.41（s、３H、CH3）、1.42（s、３H、CH3）、2.40（br s、１H、OH)、3.59（s、２H、CH2）、3.69（s、２H、CH2）、3.74（s、４H、2CH2）、4.55（s、２H、CH2Ph）、7.30（m、５H、Ar-H）。
化合物１５の調製
化合物１４（572mg、2.26mmol）を無水ピリジン（3ml）に溶解し、0℃に冷却した。Ｐ−トルエンスルホニルクロライド（5.7mg、2.71mmol）を加えて、混合物を3時間撹拌した。さらにＰ−トルエンスルホニルクロライド（430mg、2.26mmol）を加えて、混合物を室温で一晩撹拌した。メタノールを次に加えて反応をクエンチし、溶媒をトルエンを用いて共蒸留により真空で除去した。残渣をジクロロメタン（100ml）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）（30ml）で洗浄した。水層をジクロロメタン（30ml）で抽出し、組み合わせの有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（ヘキサン：酢酸エチル、５：１）、化合物１５を得た（930mg、98％）。Rf=0.65（ヘキサン：酢酸エチル、２：１）。１H NMR（300MHz、CDCl3）：δ＝1.30（s、3H、CH3）、1.40（s、3H、CH3）、2.42（s、3H、CH3）、3.35（s、2H、CH２）、3.63（d、J=12.0Hz、2H）、3.72（d、J=12.0Hz、2H）、4.20（s、4H、2CH2）、4.50（s、2H、CH2Ph）、7.30（m、7H、Ar-H）、7.78（m、2H、Ar-H）。Ｃ２２Ｈ２８Ｏ６ＳについてのＥＳ−ＭＳ計算値：420.2。実測値：443.2（Ｍ＋Ｎａ）。
化合物１６の調製
化合物１５（907mg、2.16mmol）をトルエン（30ml）に溶解し飽和NaHCO3（aq.）（30ml）、アジ化ナトリウム（561mg、8.63mmol）、および相転移触媒ALIQUAT（433mg、0.49ml、1.08mmol）を添加した。混合物を16時間還流しさらにアジ化ナトリウム（1.40ｇ、21.60mmol）を添加した。反応を24時間続け次いで室温まで冷却した。有機層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した（30ml×３）。一緒にした有機層を水（30ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（ヘキサン：酢酸エチル、８：１）で精製し化合物１６（440mg、70％）および出発物質１５（163mg、18％）を得た。Rf＝0.34（ヘキサン：酢酸エチル、６：１）。1H NMR（500MHz、CDC13）：δ＝1.42（s、６H、２CH3）、3.40（s、２H、CH2）、3.52（s、２H、CH2）、3.64（d、J＝12.0Hz、２H）、3.73（d、J＝12.0Hz、２H）、4.50（s、２H、CH2Ph）、7.30（m、５H、Ar-H）。Ｃl5Ｈ21Ｎ3Ｏ3についてのＥＳ−ＭＳ計算値：291.2。実測値：314.1（Ｍ＋Na）。
化合物１７の調製
化合物１６（40 mg、0.137mmol）を酢酸（10ml）に溶解し、亜鉛粉末（1.0ｇ）を添加した。混合物を室温で１時間攪拌し固体を濾過し酢酸（10ml）で洗浄した。濾液を真空濃縮した。残渣をジオキサン−飽和ＮａＨＣＯ3（aq.）に溶解し（２：１、６ml、ｐＨ８−９）、２、２、２−トリクロロエトキシクロロホルメート（123mg、0.08ml、0.568mmol）を添加した。混合物を室温で6時間攪拌した。次いでジオキサンを真空除去し水（10ml）を添加した。混合物を酢酸エチル（10ml×３）で抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮した。残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（ヘキサン：酢酸エチル、４：１）化合物１７（28mg、47％）を得た。Rf=0.17（ヘキサン：酢酸エチル、６：１）。１H NMR（300MHz、CDCl3）：δ＝1.39（s、３H、CH3）、1.41（ｓ、３H、CH3）、3.32（ｄ、J＝6.0Hz、２H、CH2）、3.54（ｓ、２H、CH2）、3.67（ｄ、J＝12.0Hz、２H）、3.75（d、J＝12.0Hz、２H）、4.57（ｓ、２H）、4.72（ｓ、２H）、5.50（ｔ、J＝6.0Hz、１H、NH）、7.35（m、５H、Ar-H）。Ｃ１８Ｈ２４Ｃｌ３ＮＯ5についてのＥＳ−ＭＳ計算値：439.1。実測値：464.1（Ｍ＋Ｎａ、37Ｃｌ）、462.1（Ｍ＋Ｎａ）。
化合物１８の調製
化合物１７（18.3 mg、0.0417 mmol）を酢酸−水（４：１、10ml）に溶解し60℃で45分間処理した。溶媒を真空除去し残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（ヘキサン：酢酸エチル、１：１）、化合物１８を得た（15mg、90％）。１H NMR（300MHz、CDCl3）：δ＝3.03（ｔ、Ｊ＝6.5Hz、２H、２OH）、3.43（ｓ、２H、CH2）、3.44（ｄ、J＝6.5Hz、２H、CH2NH）、3.51（d、J＝6.5Hz、４H、２CH20H）、4.55（s、２H）、4.73（s、２H）、5.35（t、J＝6.5Hz、１H、NH）、7.35（m、５H、Ar-H）。Ｃ１５Ｈ２０Ｃｌ３ＮＯ5についてのＥＳ−ＭＳ計算値：399.0；実測値：422.0（Ｍ＋Na）、424.0（Ｍ＋Na、37Cl）。
化合物１９の調製
化合物１２（620mg、0.484mmol）および化合物１８（750mg、1.936mmol）の乾燥ジクロロメタン（15ml）溶液に分子篩（４Å、2.0ｇ）を添加し、混合物を１０分間室温で窒素下に攪拌した。トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（TMSOTf）溶液（ジクロロメタン中0.01M）（3.0ml）を５分間滴下した。混合物を室温1で１時間攪拌し飽和炭酸水素ナトリウム溶液（10ml）を添加し反応をクエンチした。通常の水性作業を行いフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって（ヘキサン：アセトン、2.8：１及び２：１）約１：１の比でジアステレオマー混合物として化合物１９（590mg、81％）を得た。Rf＝0.27（ヘキサン：アセトン、2.5：l）。［α］D 20＝−7.6（c 0.8、クロロホルム）。１H NMR（300MHz、CDCl3）：d＝0.88（t、J＝6.5Hz、６H、２CH3）、1.25（br s、36H、18CH2）、1.45（m、２H、CH2）、1.58（m、２H、CH2）、1.68（m、２H、CH2）、2.23（ｔ、J＝7.5Hz、２H、CH2）、2.41（m、２H、CH2）、3.10（m、0.5H）、3.30−3.62（m、7.5Hz）、3.68−3.83（m、2H）、4.40−4.56（m、７H）、4.65−4.80（m、５H）、4.90（m、５H）、5.19（m、２H）、5.53（ｄ、Ｊ＝9.0Hz、0.5H、NH）、5.72（m、1.5H、NH）、7.30（m、20H、Ar-H）。Ｃ７３Ｈ１０３Ｃ１６Ｎ２Ｏ１７ＰについてのＥＳ−ＭＳ計算値：1520.5；実測値：1543.5（Ｍ＋Na、42）、1544.4（Ｍ＋Na、13C−同位元素、34）、1545.5（Ｍ＋Na、37Cl−同位元素、100）。
化合物２０の調製
化合物１９（450mg、0.30mmol）を酢酸（50ml）に溶解し亜鉛粉末（4.0mg）を添加した。混合物を室温で１時間攪拌し固体を濾過した。固体をさらに酢酸（50ml）で洗浄し濾液を真空濃縮した。残渣をジクロロメタン（150ml）に溶解し溶液を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（20ml）で洗浄した。水層をジクロロメタン（20ml×２）で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し真空濃縮しジアミン中間体（346mg）を得た。乾燥ジクロロメタン（10ml）中ジアミン（346mg）と脂質酸７（545mg、1.20mmol）およびDCC（371mg、1.80mmol）の混合物を室温で20時間攪拌した。水（0.05ml）を添加し反応混合物を１０分間攪拌した。固体を硫酸ナトリウムを詰めた焼結ガラス漏斗に通過させて濾過した。濾液を濃縮し残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（ヘキサン：アセトン、５：１および4.5：１）化合物２０（390mg、64％）を得た。Rf=0.20（ヘキサン：アセトン、４：１）。［α］D 20＝−9.4（ｃ0.5、クロロホルム）。１H NMR（500MHz、CDCl3）：δ＝0.88（ｔ、J＝7.0Hz、18H、6CH3）、1.25−1.50（m、112H、56CH2）、1.58（m、11H）、1.71−1.81（m、３H）、1.97（m、１H、OH）、2.21（ｔ、J＝7.5Hz、２H、CH2）、2.24−2.63（m、10H、５CH2）、3.06（dd、J＝14.0、5.0Hz、0.5H）、3.17（dd、J＝14.0、6.0Hz、0.5Hz）、3.30−3.40（m、３H）、3.43−3.53（m、２H）、3.57−3.63（m、2.5H）、3.67−3.80（m、２H）、3.87（m、１H）、3.97（m、0.5H）、4.35（d、J＝8.0Hz、0.5H、H-1）、4.38−4.53（m、５H）、4.65（d、J＝8.0Hz、0.5H、H-1）、4.90（m、４H）、5.07−5.24（m、４H）、6.04（d、J＝8.5Hz、0.5H、NH）、6.38（d、J＝7.5Hz、0.5H、NH）、6.65（dd、J＝6.5、6.5Hz、0.5H、NH）、6.79（dd、J＝7.0、6.0Hz、0.5H、NH）、7.30（m、20H、Ar-H）。C１２３H２０５N２O１９PについてのＥＳ−ＭＳ計算値：2045.5；実測値：2068.5（Ｍ＋Na、63）2069.5（Ｍ＋Na、13C−同位体、100）。
化合物２１の調製
乾燥ジクロロメタン（５ml）中化合物２０（220 mg、0.l08 mmol）にジベンジルイソプロピルアミダイト（74.3mg、74.3μl、0.215mmol）および1H−テトラゾール（22.7mg、0.324mmol）を添加した。混合物を室温で３０分間攪拌し次いで０℃まで冷却した。ｍ−クロロ過安息香酸（m-CPBA、55％、118mg、0.379mmol）を添加し混合物を０℃で30分間攪拌した。混合物をジクロロメタン（100ml）で希釈し亜硫酸水素ナトリウム（10％、20ml）で洗浄し水層をジクロロメタン（20ml）で抽出した。合わせた有機層を次いで飽和炭酸水素ナトリウム（20ml）で洗浄し水層をジクロロメタン（20ml）で洗浄した。合わせた有機層を次いで硫酸ナトリウムで乾燥し真空濃縮した。残渣を繰り返しフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（ヘキサン：アセトン、５：１および次いで4.5：１、ジクロロメタン：メタノール、100：１および次いで100：1.5、ヘキサン：酢酸エチル、２：１および次いで1.5：１）約１：１の比でジアステレオマー混合物として化合物２１（200mg、８0％）を得た。Rf（上方スポット）＝0.29およびRf（下方スポット）＝0.25（ヘキサン：アセトン、３：１）。［α］D 20（〜１：１混合物）＝−7.6（ｃ0.5、クロロホルム）。１H NMR（300 MHz、CDCl3）：δ＝0.87（ｔ、J＝6.5Hz、18H、6CH3）、1.30（m、108H、54CH2）、1.48−1.70（m、18H）、2.lO−2.53（m、11H）、2.90−3.35（m、５H）、3.55（m、２H）、3.75〜3.90（m、４H）、4.00（m、１H）、4.36−4.52（m、６H）、4.85−5.01（m、８H）、5.08−5.22（m、４H）、6.30（m、１H、NH）、6.88（d、J
=8.5Hz、0.5H、NH）、7.00（d、J＝8.0Hz、0.5H、NH）、7.30（m、30H、Ar-H）。Ｃ１３７Ｈ２１８Ｎ２Ｏ２２ＰについてのＥＳ−ＭＳ計算値：2305.5；実測値：2328.5（Ｍ＋Na、78）、2329.5（Ｍ＋Na、13Ｃ−同位体、100）。
化合物１の調製
化合物２０（96 mg、0.047mmol） をＴＨＦ−ＨＯＡｃ（１０：１、77ｍｌ）に溶解しパラジウム炭素（100mg）を添加した。混合物を水素雰囲気下に２４時間攪拌した。次いで固体を濾過しクロロホルム：メタノール（１：１、30ml）で洗浄した。濾液を真空濃縮し残渣をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して（クロロホルム：メタノール：水、９：１：０、および次いで４：１：0.1）ｔｅｒｔ−ブタノールからフリーズドライにより化合物１を白色粉末として（200mg、100％）を得た。Rf＝0.16（クロロホルム：メタノール：水：酢酸、６：１：0.1：0.1）。［α］D 20＝−6.5（ｃ0.2、クロロホルム）。１H NMR（600 MHz、CDCl3−CD30D、１：１）：δ＝0.89（ｔ、J＝6.5Hz、18H、6CH3）、1.26（m、ll4H、57H）、1.60（m、12H、6CH2）、2.30（m、6H、3CH2）、2.37（dd、J=15.0、6.0Hz、１H）、2.45（dd、J＝15.0、7.0Hz、１H）、2.50（dd、J＝15.0、5.0Hz、1H）、2.54（dd、J＝15.0、8.0Hz、１H）、2.57（dd、J＝15.0、5.0Hz、１H）、2.67（dd、J＝15.0、7.0Hz、１H）、3.04（dd、J＝14.0、6.0Hz、１H）、3.18（dd、J＝14.0、6.0Hz、１H）、3.25（d、J＝l0.0Hz、１H）、3.29（d、J＝l0.0Hz、１H）、3.36（m、３H）、3.37（d、J＝l0.0Hz、１H）、3.64（d、J＝l0.0Hz、１H）、3.77（br d、J＝12.0Hz、１H）、3.89（dd、J＝l0.0、9.0Hz、１H）、3.96（br d、J＝12.0Hz、１H）、4.25（m、１H、H-4）、4.43（d、J＝8.5Hz、１H、H-1）、5.07（dd、H＝10.0、l0.0Hz、１H、H-3）、5.17（m、２H）、5.23（m、１H）。Ｃ９５Ｈ１８１Ｎ２Ｏ１９ＰについてのＥＳ−ＭＳ計算値：1685.3；実測値：1686.3（Ｍ＋Ｈ）、1708.3（Ｍ＋Na）、1730.3（Ｍ＋2Na−H）。
化合物２の調製
化合物1について記載したと同様の方法で化合物２１（l04 mg、0.045mmol）をＴＨＦ−ＨＯＡｃ（10：１、77ｍｌ）中パラジウム炭素（100ｍｇ）で水素雰囲気下２０時間処理しフラッシュクロマトグラフイ精製（クロロホルム／メタノール／水、９：１：０及び次いで６：４：0.5）後，化合物２（77mg、96％）を得た。Ｒf＝0.50（クロロホルム：メタノール：水、６：４：0.5）。［α］D 20＝−3.0（ｃ0.2、クロロホルム）。１H NMR（600MHz、CDCl3−CD3OD、１：１）：δ＝0.89（ｔ、Ｊ＝6.5Hz、18H、6CH3）、1.25（m、114H、57CH2）、1.60（m、12H、6CH2）、2.30（m、６H、3CH2）、2.37−2.70（m、６H、３CH2）、3.03（d、Ｊ＝14.0Hz、0.5H）、3.13（d、Ｊ＝14.0Hz、0.5H）、3.24（d、Ｊ＝14.0Hz、0.5H）、3.27（d、J＝14.0Hz、0.5H）、3.29−3.36（m、２H）、3.45（br s、１H）、3.55−3.95（m、6H）、4.06−4.32（m、２H）、5.14−5.27（m、４H）。Ｃ９５Ｈ１８１Ｎ２Ｏ１９ＰについてのＥＳ−ＭＳ計算値：1685.3；実測値：1686.3（Ｍ＋Ｈ）、1708.3（Ｍ＋Na）、1730.3（Ｍ＋２Na−H）。
化合物２２の調製
乾燥ＤＭＦ（10mL）中ジペンタエリスリトール（2.0ｇ、7.87mmol）にベンズアルデヒドジメチルアセタール（4.79ｇ、4.7ml、31.46mmol）およびトルエンスルホン酸（150mg、0.78mmol）を添加し混合物を５０℃で１時間攪拌した。ＴＬＣ（メタノール：ジクロロメタン、８：92）は生成物と上部不純物を示し、他の−ＯＨ部位も置換されたと考えられた。上部不純物を加水分解するため、トリエチルアミン（５滴）を添加し中和し、ＤＭＦを高真空下に蒸発させ、メタノールを添加した。第二のＴＬＣは上部スポットが消えたことを示した。混合物をきれいなシロップに濃縮しシリカゲルクロマトグラフィ（メタノール：ジクロロメタン、５：95）によって精製し化合物２２（1.91ｇ、57％）を３つの立体異性体の混合物として得た。ＴＬＣ：Ｒf＝0.38（上部スポット）およびＲf＝0.34（下部スポット）（７％、ジクロロメタン中メタノール）．１H NMR（500 MHz、CDCl3）：δ＝3.21、3.31、3.39（３ｓ、４H）；3.28、3.32、3.46、3.51（４br s、２H、２OH）；3.68、3.69、3.75（３d、Ｊ＝12.0Hz、４H）、3.81、3.92、3.98（３ｓ、４H）、4.10（m、４H）；5.39、5.41、5.43（３ｓ、２H、２CHPh）、7.38（m、６H、Ar−Ｈ）、7.50（m、４H、Ar−Ｈ）。
繰り返しのクロマトグラフィ（メタノール／ジクロロメタン、１％から10％の勾配溶出）によって、下部スポットを分離し単一成分を与えた。下部スポットについては１H NMR（300MHz、CDCl3）δ＝2.50（br s、２H、２OH）、3.45（br s、４H）、3.73（d、J＝12.0Hz、４H）、3.97（s、４H）、4.13（d、J＝12.0Hz、４H）、5.43（s、２H、２CHPh）、7.37（m、６H、Ar−Ｈ）、7.49（m、４H、Ar−Ｈ）。
化合物２３の調製
水酸化ナトリウム（0.426ｇ、17.7mmol）を乾燥ＤＭＦ（35ml）に添加し、０℃まで冷却した。化合物２２（1.524ｇ、3.54mmol、15mlのＤＭＦに溶解）を１滴ずつ添加し混合物を０℃で30分間攪拌しアルコキシドを生成させた。ｎ−１−ブロモーテトラデカン（3.16ml、l0.6mmol、５mlのＤＭＦに溶解）を添加し混合し室温で16時間攪拌した。ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル、15：１）はかなりの量の下部不純物が脂質アームのモノ置換体であることを示した。別の２当量の水素化ナトリウム（2.1ml）および２当量のｎ−１−ブロモテトラデカンを添加し混合物を５時間室温で攪拌した。さらにＤＭＦ（40ml）をスラリー混合物に添加し50℃で16時間以上反応を続けた。過剰のＮａＨを水（３ml）でクエンチして反応混合物をＨＣｌ（濃）で中和した。トルエン（２×30ml）と共蒸発でＤＭＦを蒸発させた。残渣を飽和塩化ナトリウム（100ｍl）に溶解し、ジクロロメタン（３×100ｍl）で抽出し飽和塩化ナトリウムで洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥し濃縮した。固体をシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル、15：１）で精製し、化合物２３（2.09ｇ、72％）を得た。ＴＬＣは２スポットを示し、分離した。上部スポットは２成分を含み下部スポットは1成分である。
化合物２３（上部スポット）：TLC：Ｒf＝0.43（ヘキサン：酢酸エチル、15：１）。1H NMR（500MHz、CDC13）：δ＝0.88（t、J＝6.5Hz、６H、２CH3）；l.26（br s、44H、22CH2）；1.54（m、４H、２CH2）；3.23、3.24、3.33（３s、４H）；3.34、3.37、3.45（３t、J＝6.5Hz、４H）；3.71、3.72、3.81（３s、４H）；3.90（m、４H）；4.lO（m、４H）；5.41、5.43（２s、２H、CHPh）、7.35（m、６H、Ar-H）；7.49（m、４H、Ar-H）。
化合物２３（下部スポット）：TLC：Ｒf＝0.36 （ヘキサン：酢酸エチル、15：１）。1H NMR（500 MHz、CDC13）：δ＝0.88（t、J＝6.5Hz、６H、２CH3）、l.26（br s、44H、22CH2）、1.58（m、4H、2CH2）、3.23（s、４H）、3.47（t、J＝6.5Hz、４H、２OCH2CH2）、3.72（s、４H）、3.87（d、J＝11.5Hz、４H）、4.ll（d、J＝11.5Hz、４H）、5.43（s、２H、２CHPh）、7.36（m、６H、Ar-H）、7.49（m、４H、Ar-H）。
化合物２４の調製
乾燥ＴＨＦ（20ｍＬ）中化合物２３（0.61lｇ、0.742mmol）に分子篩（４Å、２ｇ）を添加した。混合物を室温で窒素下１５時間攪拌した。ソジウムシアノボロハイドライド（0.932ｇ、14.84mmol）をすこしずつ添加し混合物を０℃まで冷却した。ＴＨＦ（60mL）に溶解したＴＦＡ（3.40ml、29.68mmol）をゆっくりと45分かけて滴下し室温で4時間攪拌した。混合物をセライトで濾過し真空下にＴＨＦを蒸発させた。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（75mL）に溶解し酢酸エチル（３×75mL）で抽出した。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム溶液（50mL）で洗浄し硫酸ナトリウムで乾燥し、黄色シロップに濃縮した。シロップをクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸メチルでの勾配溶出、５：１ないし３：１）で精製し化合物２４（364mg、59％）を得た。TLC：Ｒf＝0.19（ヘキサン：酢酸エチル、４：１）。1H NMR（３00MHz、CDC13）：δ＝0.89（t、J＝6.5Hz、６H、２CH3）、1.27（br s、44H、22CH2）、1.52（m、４H、２CH2）、2.97（br s、２H、２OH）、3.36（t、J＝6.5Hz、４H、２OCH2CH2）、3.44（s、８H）、3.48（s、４H）、3.69（br s、４H）、4.49（s、４H、２CH2Ph）、7.30（m、10H、Ar−H）。
化合物２５の調製
乾燥ジクロロメタン（５ml）中化合物２４（247mg、0.299mmol）に１H−テトラゾール（0.136ｇ、1.194mmol）およびジベンジルジイソプロピルホスホルアミダイト（0.310ｇ、0.3ml、0.896mmol）を添加した。混合物を室温で１時間攪拌しコンプレックスの生成をＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル、４：l、化合物２４の消費を示した）でチェックした。次いで混合物を０℃に冷却しｍ−クロロ過安息香酸を徐々に添加し気体を生成させた。３０分後、混合物を10％亜硫酸水素ナトリウム（40ml）に注入し、ジクロロメタン（３×40ml）で抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（20ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し黄色シロップに濃縮した。シロップを繰り返しクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル、３：１、ヘキサン：アセトン、６：l）で精製し化合物２５（248mg、62％）を得た。TLC：Ｒf＝0.21（ヘキサン：酢酸エチル、２：１）。1H NMR（400MHz、CDC13）：δ＝0.88（t、J＝6.5Hz、６H、２CH3）、1.22（br s、22H、11CH2）、1.24（br s、22H、11CH2）、1.44（m、４H、２CH2）、3.26（t、J＝6.5Hz、４H、２OCH2CH2）、3.32（s、４H）、3.34（s、４H）、3.40（s、４H）、4.07（d、J＝3.5Hz、４H）、4.38（s、４H）、4.99（d、J＝8.0Hz、８H、４CH2Ph）、7.30（m、30H、Ar-H）。
化合物３の調製
ＴＨＦ−ＨＯＡｃ（10：１、90ml）中化合物２５（150 mg、0.lllmmol）にパラジウム炭素（５％、105mg）を添加した。混合物を室温で水素雰囲気下16時間攪拌した。ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：水：酢酸、４：１：0.1：0.1）は部分的な水素化を示した。さらにＴＨＦ−ＨＯＡｃ（60ml）とPd／Ｃ（lOOmg）を混合物に添加し室温で水素雰囲気下に２晩攪拌した。ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：水酸化アンモニウム：水、１：１：８％：８％）は大部分生成されたことを示した。固体を濾過し濾液を高真空で濃縮した。残渣をクロマトグラフィ（クロロホルム：メタノール：水酸化アンモニウム：水、４：６：６％：６％ないし１：１：８％：８％）で精製し、アンモニウム塩として化合物３を得た。生成物はＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ（１：１：８％）に再溶解し小さいイオン交換カラム（IR-120、Na＋form）に通しナトリウム塩として化合物３（44mg、47％）
を得た。TLC：Ｒf＝0.41（クロロホルム：メタノール：水酸化アンモニウム：水、１：１：８％：８％）。Ｃ３８Ｈ８０O１３P２についてのES-MS計算値：806.5。実測値：805.5（M-H）および827.5（M+Na-2H）（負のモード）。ナトリウム塩について1H NMR（600MHz、CDC13＋CD３OD、１：１）：δ＝0.89（t、J=6.5Hz、６H、２CH3）、1.27（br s、44H、22CH2）、1.54（m、４H、２OCH2CH2）、3.35-3.43（m、８H）、3.45（m、１H）、3.50（m、２H）、3.53−3.59（m、３H）、3.66−3.71（m、２H）、3.77−3.83（m、４H）。アンモニウム塩について1H NMR（500MHz、CDC13＋CD3OD、１：１）：δ＝0.89（t、J＝7.0Hz、６H、２CH3）、1.27（br s、44H、22CH2）、1.55（m、４H、２CH2）、3.37−3.45（m、12H）、3.57−3.65（m、４H）、3.81−3.90（m、４H）。
化合物２６の調製
化合物２（9.50ｇ、22.08mmol）を乾燥ピリジン（57ml）に溶解した。ｐ−トルエンスルホニルクロライド（TsCl、7.16ｇ、37.54mmol）を０℃で反応フラスコに添加した。反応物を室温まで自然に温め一晩攪拌した。トシルクロライド（TsCl、5.46ｇ）
の別の部分を添加し混合物を室温で20時間攪拌した。溶液を真空濃縮した。残渣をトルエンと共蒸留した。粗生成物を酢酸エチル（600ｍl）に溶解し分液漏斗に移した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム（300ｍl）で洗浄した。水層を酢酸エチル（300ｍl）で洗浄し合わせた有機層を硫酸ナトリウム（Na2S04）で乾燥し濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル、３：１及び次いで２：１）で精製し化合物２６（9.18ｇ、59％）を得た。TLC：Ｒf＝0.25（ヘキサン：酢酸エチル、３：１）。1H NMR（400MHz、CDC13）：δ 2.41（s、３H、CH3）、2.44（s、３H、CH3）、3.27（s、２H）、3.70（ｓ、２H）、3.73（d、J＝12.0Hz、２H）、3.80（d、J＝12.0Hz、２H）、3.87（s、２H）、3.93（d、J=12.0Hz、２H）、4.00（d、J＝12.0Hz、２H）、4.32（s、２H）、5.30（s、２H、CHPh）、5.41（s、１H、CHPh）、7.28−7.48（m、14H、Ar-H）、7.81（m、４H、Ar-H）。
化合物２７の調製
化合物２６（9.12ｇ、12.91mmol）をトルエン（150ml）に溶解した。飽和炭酸水素ナトリウム（150ml）、相転移触媒ALIQUAT（登録商標）（１ml）、およびアジ化ナトリウム（33.58ｇ、516.47mmol）を反応フラスコに添加した。溶液を110℃まで加熱し終夜攪拌した。さらにALIQUAT（登録商標）（１ml）およびアジ化ナトリウム（16.79ｇ）を添加し混合物を110℃でさらに４時間攪拌した。反応は不完全であった。溶液を室温まで冷却し通常の水性操作でシロップを得た。
濾液を真空濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル、５：１及び４：１）で精製し化合物２７（2.58ｇ、 ）およびモノ−アジド化物置換中間体（3.73ｇ）を得た。モノ−アジド化物置換中間体（3.73ｇ）をトルエン（40mL）中で飽和炭酸水素ナトリウム（40ｍL）、アリコート（１ｍL）、およびアジ化ナトリウム（16.34ｇ）と110℃７時間以上反応させて化合物２７（1.8lｇ）を得た。全収率は71％であった。TLC：Ｒf＝0.63（ヘキサン：酢酸エチル、３：１）。１の異性体について1H NMR（400MHz、CDC13）：δ3.30（s、４H）、3.78（d、J＝12.0Hz、４H）、3.90（s、４H）、4.lO（d、J＝12.0Hz、４H）、5.40（s、２H、２CHPh）、7.34−7.48（m、10H、Ar-H）。
化合物２８の調製
メタノール（８ml）中ジアゾ化合物２７（0.783ｇ、1.629mmol）に１，３−プロパンジチオール（3.27ml、32.586mmol）およびトリエチルアミン（4.54ml、32.586mmol）を滴下し混合物を終夜室温で攪拌した。ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル、２：１）
は反応が完了したことを示した。反応混合物をロータリエバポレターで蒸発させジチオールをクロロホルム（３×20mL）と共蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィで精製し化合物２８（0.322ｇ、46％、合計収量）を得た。TLC：Ｒf＝0.29（メタノール：ジクロロメタン：水：水酸化アンモニウム、９：1.5：0.1：0.1）。Ｃ２４Ｈ３２Ｎ２Ｏ５（428.23）。ＥＳ−ＭＳ（正のモード、ｍ／ｚ）実測値：429（Ｍ＋Ｈ）1H NMR（500MHz、CDC13）：δ2.60（s、２H）、3.15（s、２H）、3.35（s、２H）、3.70（d、J＝12.0Hz、２H）、3.77（s、４H）、3.81（d、J＝12.0Hz、２H）、4.09（d、J＝12.0Hz、４H）、5.40（s、２H）、7.32-7.47（m、10H）。
化合物２９の調製
化合物２８（0.160ｇ、0.376mmol）を乾燥ジクロロメタン（10mL）に溶解した。１、３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、0.465ｇ、2.254mmol）およびジ脂質酸７（0.513ｇ、1.128mmol）を添加し混合物を室温で60時間攪拌した。ＴＬＣｓ（クロロホルム：メタノール：水：水酸化アンモニウム、９：1.7：0.1：0.1、メタノール：ジクロロメタン、５：95；ヘキサン：酢酸エチル、３：１）は反応が完了したことを示した。過剰のＤＣＣを水（数滴）でクエンチし15分間攪拌した。反応混合物を２×Na2S04床に通して濾過し沈殿物をクロロメタンで洗浄した。黄色の粗シロップをローターエバポレーターで蒸発させた。シロップはシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル、３：１）で精製し化合物２９（0.324ｇ、66％収率）を得た。Ｃ８０Ｈ１３６Ｎ２Ｏ１１（1301.01）。ＥＳ−ＭＳ（正のモード、ｍ／ｚ）実験値：1302（M+H）、1324（M＋Na）。1H NMR（600MHz、CDC13）：δ0.86（t、J＝6.5Hz、12H、4CH3）、1.25（br s、80H）、1.60（m、８H）、2.25（m、４H）、2.46（m、２H）、2.58（m、２H）、3.06（s、２H）、3.14（m、２H）、3.63（m、２H）、3.72-3.80（m、６H）、3.94-4.02（m、４H）、5.18（m、１H）、5.26（m、１H）、5.38（s、１H）、5.43（s、１H）、6.08（t、J＝7.0Hz、１H、H）、7.30-7.46（m、10H）、7.84（t、J＝6.5Hz、１H、NH）。
化合物３０の調製
無水ＴＨＦ（10mL）中化合物２９（0.300ｇ、0.229mmol）の溶液に分子篩（４Å、１ｇ）およびソジウムシアノボロハイドライド（0.287ｇ、4.593mmol）を添加した混合物を０℃で窒素雰囲気下15分間攪拌した。エーテル−ＨＣｌ（飽和）を発泡が終るまで（１−２mL）滴下した。ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル、６：４）は若干の単環の開環を示した。さらに20当量（0.287ｇ）のソジウムシアノボロハイドライドを添加し、エーテル−ＨＣｌ（２mL）を滴下した。混合物をセライトで濾過しＴＨＦを高真空下にロータリーエバポレターで蒸発させた。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（75mL）に溶解しジクロロメタン（３×75ml）で抽出した。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム溶液（50ml）で洗浄し硫酸ナトリウムで乾燥し、黄色シロップに濃縮した。シロップはシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル、６：４）で精製し化合物３０を得た（0.212ｇ、71％）。ＴＬＣ：Ｒf＝0.17（ヘキサン：酢酸エチル、６：４）。
Ｃ８０Ｈ１４０Ｎ２Ｏ１１（1304.04）。1H NMR（300MHz、CDC13）：δ0.88（t、J＝6.5
Hz、12H、４CH3）、1.25（br s、80H）、1.60（m、８H）、1.94（br s、２H）、2.25（m、４H）、2.43（m、４H）、3.08（m、３H）、3.22（m、２H）、3.33（m、５H）、3.40-3.57（m、４H）、3.68（m、１H）、3.78（m、１H）、4.43（d、J＝12.0Hz、１H）、4.48（s、２H）、4.51（d、J＝12.0Hz、１H）、5.16（m、２H）、6.73（m、１H）、6.85（m、１H、NH）、7.30（m、10H）。
化合物３１の調製
無水ジクロロメタン（５ml）中、化合物３０（0.237ｇ、 0.181mmol）にテトラゾール（0.076ｇ、1.089mmol）を添加し、ジベンジルジイソプロピルホスホルアミダイト（0.250ｇ、0.24ml、0.724mmol）を滴下した。混合物を室温で１時間攪拌し、コンプレックスの形成をＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル、６：４）でチェックした。さらに３当量（0.038mg）のテトラゾールと2当量（0.125mg）のホスホルアミダイトを添加した。2時間後のＴＬＣは出発物質が完全に消費されたことを示した。次いで混合物を０℃まで冷却し３−クロロ過安息香酸（0.312ｇ、1.81mmol）を徐々に添加しガスを生成させた。30分後、混合物を10％硫化水素ナトリウム（40ml）に注入しジクロロメタン（３×40ml）で抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（20ml）で洗浄し硫酸ナトリウムで乾燥し黄色シロップに濃縮した。シロップを繰り返しクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル、７：３、ヘキサン：アセトン、４：１）で精製し化合物３１（198mg、60％）を得た。ＴＬＣ：Ｒf＝0.28（ヘキサン：酢酸エチル、３：１）。Ｃ１０８Ｈ１６６Ｎ２Ｏ１７Ｐ２（1825.16）。ＥＳ−ＭＳ（負のモード、ｍ／ｚ）実測値：1861（M+Cl）。1H NMR（500MHz、CDC13）：δ0.88（t、J＝6.5Hz、12H、4CH3）、1.25（br s、80H）、1.55（m、８H）、2.21（2t、J＝6.5Hz、各２H）、2.39（m、４H）、3.lO（m、２H）、3.16（m、４H）、3.31（m、６H）、3.95（m、４H）、4.37（m、４H）、4.98（m、８H）、5.19（m、２H）、7.08（t、J＝6.0Hz、２H、２NH）、7.22-7.31（m、30H）。
化合物４の調製
蒸留ＴＨＦ−ＡｃＯＨ（10：１、75mL）中化合物３１（28 mg、 0.015mmol）にパラジウム炭素（lO％、75mg）を添加した。混合物を室温で水素雰囲気下16時間攪拌した。ＴＬＣ（クロロホルム：メタノール：水酸化アンモニウム：水、２：３：0.5：0.5）は殆どの生成物が生成したことを示した。固体を重力濾過し濾液を高真空で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィで支持体としてイアトロビーズを用い（クロロホルム：メタノール、９：１ないしクロロホルム：メタンール：水、５：３：0.3）精製し化合物４（18mg、95％収率）を得た。ＴＬＣ：Ｒf＝0.20（クロロホルム：メタノール：水、４：２：0.3）。Ｃ６６Ｈ１３０Ｎ２Ｏ１７Ｐ２（1284.88）。ＥＳ−ＭＳ（負のモード、ｍ／ｚ）実験値：1284（Ｍ−Ｈ）。1H NMR（600MHz、CDC13＋ＣＤ３ＯＤ、１：１）：δ0.85（t、J＝6.5Hz、12H、４CH3）、1.28（br s、80H）、1.62（m、８H）、2.30（m、４H）、2.50-2.63（m、４H）、3.03-3.15（m、４H）、3.20-3.31（m、６H）、3.34-3.38（m、２H）、3.70−3.78（m、４H）、5.28（m、２H）。
脂質Ａ類似体によるサイトカイン分泌の誘発
ヒト末梢血液から単離された接着細胞を完全ＲＰＭＩ−１６４０媒体中でＧＭ−ＣＳＦとＩＬ−４の存在でインキュベーションした。３日間のインキュベーションの後、脂質Ａ類似体を10μｇ／mLの濃度で添加した。インキュベーション24時間後、上澄を採取しサイトカインの存在をＥＬＩＳＡキットを用いて決定した。ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６およびＩＬ−８レベルを測定し下表にまとめた（図１４も参照）。
表２は合成脂質Ａ擬態１、２、またはＲ５９５脂質Ａ＊で活性化したヒト接着細胞のインヴィトロサイトカインパターンを示す。
＊Ｒ５９５脂質Ａはサルモネラ・ミネソタ、R５９５（Avanti Polar Lipids，Inc．）から単離された天然脂質A生成物である。
リポソームワクチンで免疫化したマウス
Ｃ５７−ブラックマウスのグループは抗原としてＭＵＣ１−基礎25量体リポペプチド0.2−200μｇ、これはH2N-STAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPK（Pal）G-OHのペプチド配列をもつ、および１投与当り脂質Ａ類似体0.1−100μｇ（リポペプチド抗原の半分の量）を含むＢＬＰ25リポソームワクチンを用い皮下注射で免疫化した。ワクチン投与９日後、マウスを殺し排出するリンパ節（局所応答）または脾臓（全身応答）からリンパ球を取り出し各グループの免疫応答を決定した。免疫化したマウスから取り出したリンパ球はインヴィトロ培地でＭＵＣ１−基礎ブースト抗原ＢＰ１−151、これはペプチド配列H2N-STAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPK-OHをもつ、の存在でインキュベートした。
Ｔ−細胞増殖の測定
Ｔ−細胞増殖は標準３Ｈチミジン組込みアッセイを用いて評価した。簡単には、各マウスからのナイロンウールを通過した鼠径部リンパ節を、10６天然マイトマイシンＣ処理の同系の脾細胞を含有する培地、これは抗原表示細胞（ＡＰＣｓ）として働く、に添加した。各ウェルに20μｇのＭＵＣ１基礎ブーストペプチドＢＰ１−151、H2N-STAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPK-OH、を正のコントロールのために添加した；そして抗原またはペプチドＢＰ１−72、これはペプチド配列H2N-EAIQPGCIGGPKGLPGLPGP-OHをもつ、を含まない培地を負のコントロールとして用いた。培地は72時間、全量250μｇ／ウェルでインキュベートし、次いで50μｌの容量で１μＣｉの３Ｈ−チミジンを添加した。プレートをさらに18−20時間インキュベートした。細胞を収集し［３Ｈ］ｄＴｈ組込みを液体シンチレーションカウンターで測定した。Ｔ−細胞増殖は脂質Ａ擬態１、２、またはＲ595脂質Ａでアジュバントした種々のリポソームワクチンに対応する結果は表３および図１５に示される。
表３はＢＬＰリポソームワクチンを１回投与したＣ57ＢＬ／６匹マウスの免疫化後の抗原特異的Ｔ細胞増殖応答を示す。投与にはリポペプチド抗原を基礎とした25量体ＭＵＣ１を0.2μｇとアジュバントとして脂質Ａ類似体（１、２、およびＲ595脂質Ａ）を0.1μｇ含む。
合成脂質Ａ擬態によってアジュバントとなるリポソームワクチンによる腫瘍成長の阻害
C57BL／６マウスに０日目にMC38-MUCl腫瘍細胞を用い皮下注射により投与した。7日、１４日および２１日目に、マウスのグループに25量体リポペプチド抗原を基礎としたＭＵＣ１を200μｇ／1回投与および合成脂質Ａ擬態１、２、またはＲ595脂質Ａを100μｇ／1回投与を含むＢＬＰ25リポソームワクチンを用い皮内に免疫化させた。34日目に、腫瘍直径（長さと幅）をカリパスで計り、腫瘍サイズをmm２（長さ×幅）で表した。データーを表４および図１６に示す。
表４は脂質A類似体（１、２、およびＲ595脂質A）を含むＢＬＰ25リポソームワクチンで皮内に免疫化したMC38-MUCl腫瘍の活性特異的免疫療法を示す。ワクチン投与量は200μｇのＢＬＰ25リポペプチドおよび100μｇの脂質Ａ類似体をアジュバントとして含む。
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前述の特定の実施例は、本発明の一般的な性質を完全に明らかにして、他の者が、当業者の通常の知識（ここで引用した参考文献の内容を含む）を適用することにより、本発明の一般的な概念から離れることなく、過度の実験なく、特定の実施のための種々の応用に容易に修正および／または適応することができる。このため、このような適用および修正は、ここで示された教示およびガイダンスに基づき、開示した実施例の同等物の意味するところおよび範囲のなかにある。ここでの表現または用語は、記載の目的のためであって制限のためではないと理解すべきであり、したがって本明細書の用語および表現は、一般的な当業者の一の知識と組み合わせて、ここで示された教示およびガイダンスの知識の観点から当業者によって解釈されるべきである。
本発明の実施に有用または好ましいものとしての部門または範囲のいかなる記述も、前記部門または範囲の各個々のメンバーもしくは値のそれぞれの記述と同様に、任意の下位分類（たとえば、一またはそれ以上のメンバーの開示を省略したもの）またはそれに含まれる下位領域ものとして考えられるべきである。
最少の記述および最大の別々の記述は、ここで最大は最少よりも大きいが、好適な実施例では２つは合わせて完全な閉鎖終了範囲を形成する。最大が最少に等しい場合、好適な値が含まれる。
好適な実施例の各記述は、不可能な組み合わせ（たとえば、本発明の要素に相互に排他的）または本明細書の記載によって排除しているものを除いては、このような好適な実施例の任意の可能な組み合わせを意味していると考えられるべきである。
ここで請求項に用いられるような用語「からなる」は後に列挙される要素が必要であることを意味するが、追加の要素の包含はいくつかの多の制限によって特に排除されないならば許される。
語「ある、ひとつ（ａ）」は、特に限定しないならば「１またはそれ以上」を意味する。
本発明の実施例が先行技術によって開示されている場合、本発明の記述は、そのような実施例を除いてここに開示している発明を包含するものと考えられなければならない。
本発明は、出願人によって企図したように、添付の請求項に述べられたもの、そして現在請求していない組み合わせを含むがそれに限定するものではない。従来技術において開示された一またはそれ以上の欠点を克服する範囲において制限される範囲で、本発明はさらに対象を含むものである。従来技術によって開示または示唆された対象を請求項が侵食する範囲において、本願出願人は、その請求項から侵食する範囲を除いて対応する発明を企図するものである。
本明細書中の任意の場所で引用した特許、特許出願、文献、記事、およびオンライン情報を含む全ての参考文献は、ここに参考文献として組み込まれ、前記参考文献中に引用された参考文献も同様である。
ペンタエリスリトール（Ｐｅｔ）ユニットとペントースおよび／またはヘキソース間の構造上の類似性を示す図である。 グラム陰性バクテリアからのリポ多糖類の一般の脂質Ａを示す図である。脂質Ａは１−Ｏ−および４’−Ｏ−位置でホスホリル化したベータ−（１，６）−結合Ｄ−グルコサミン二糖類からなり、二糖類基幹のヒドロキシルおよびアミノ基に結合した多数の脂肪アシル基をもつ。構造Ａ（イモトら、１９８５）は大腸菌から単離され、構造Ｂ（セイデルら、１９８４）はサルモネラ・ミネソタから単離された。 脂質Ａのベータ−１，６−ジグルコサミン二糖類を擬態するＰｅｔとジ−Ｐｅｔユニットから導いた数個の構造を示す。構造１−ＩＶでは、脂質Ａ二糖類の還元末端でグルコサミンは１個のＰｅｔまたはＰｅｔＮＨ２ユニットによって置換された。構造Ｖ−ＶＩでは、非還元末端でグルコサミンユニットは１個のＰｅｔまたはＰｅｔＮＨ２ユニットによって置換された。そして構造ＶＩＩ−ＩＸでは、全ジ−グルコサミン二糖類はジ−Ｐｅｔ、ジ−ＰｅｔＮＨ２またはＰｅｔ−ＰｅｔＮＨ２ユニットによって置換された。構造ＩＩＩおよびＩＶでは、脂質Ａ二糖類の非還元末端グルコサミンはまたグルコースによって置換された。設計の合理性を示すために、数個の脂質Ａ擬態（図４と５）は構造Ｉ、ＶＩＩおよびＩＸに基づき調製された。 脂質Ａ分子に組み込まれる脂質構造の例を示す図である。天然産脂質または非天然脂質の両方を運ぶ脂質Ａ分子は免疫刺激に伴うその結合受容体（Ｔｏｌｌ様受容体４）によって良く耐容性を示す。脂質長はまた可変であるが、最も好ましくは１２ないし１６個の炭素範囲である。図４に示したこれら脂肪アシル基は脂質Ａ二糖類基幹のヒドロキシルおよびアミノ基の両方に結合できるが、アルキル基は好ましくはエーテル結合によってヒドロキシル基に結合する。 例として調製された４個の脂質Ａ擬態（１−４）を示す図である。１と２は天然脂質Ａ（化合物ＡまたはＢ、図２）の近い構造擬態として設計されている。化合物２は天然脂質Ａの両方のホスホリル基を保持するが、化合物１は１−Ｏ−デ−ホスホリル化類似体を示す。さらに、１のＰｅｔＮＨ２ユニットはその非キラル性を保持するが、２のＰｅｔＮＨ２はキラルになり、分離しないならば結局、２のジアステレオマー混合物の形成となる。構造３と４はジ−ペンタエリスリトール（ｄｉ−Ｐｅｔ）ユニットから誘導され、２個のホスホリル基をもつがさらに少ない数の脂質鎖をもつ。 ４−Ｏ−位置でベンジル保護ホスフェート基をもつグリコシル化ドナー１２の合成を記載する図である。６と脂質酸７のカップリングは高収率で８を与えた。ソジウムシアノボロヒドリドと乾燥ＨＣｌ（ｇ）を用いる８のベンジリデン環の選択的開環は好収率で化合物９を与えた。ベンジル保護ホスフェート基は次に４−Ｏ−位置に導入され８６％収率で１０を形成した。トリクロロアセトニトリルとＤＢＵの反応による脱アリル化はグリコシル化ドナー１２を与えた。 グリコシル化受容体１８、Ｐｅｔ誘導体の合成を記載する図である。ベンジル置換ペンタエリスリトール１３は文献の方法によって調製した（デュンら、１９９０）。１３からのジメチルアセタール形成はモノヒドロキシル化合物１４を与え、これはそのトシレート誘導体１５に変換された。相伝達触媒ＡＬＩＱＵＡＴ（登録商標）の存在で１５とアジドナトリウムとの反応はアジド−置換中間体１６を与え、その遊離アミンに還元し、次いでトリクロロエトキシカルボニルクロロホルメートと反応し１７を与えた。ジメチルアセタール保護基の脱離は、設計した脂質Ａ擬態１と２の調製のためにグリコシル化受容体としてジヒドロキシル化合物１８を与えた。 中間体２０の合成を記載する。１２と過剰の１８（４．０ｅｑ．）とのグリコシル化反応は触媒としてＴＭＳＯＴｆの存在で所望のモノ−グリコシル化生成物１９を８１％収率で与えた。酢酸中亜鉛粉末との１９の処理は両Ｔｒｏｃ−基を除去しジアミン中間体を与えることになり、次いで脂質酸７とカップルして中間体２０を与えた。２０の１ＨＮＭＲスペクトルデーターは２組の二重線をｄ４．３５（Ｊ＝８．０Ｈｚ）およびｄ４．６５（Ｊ＝８．０Ｈｚ）で示し、これは両方がｂ結合をもち、約１：１の割合で２つのジアステロ異性体が存在することを確認した。 所望の化合物１および２の最終調製を示す。パラジウム木炭の存在で２０の水素化分解脱ベンジル化は定量的収率で１を与えた。他方、他のベンジル保護ホスフェート基の２０の遊離ヒドロキシル基への導入は２１を与え、これは脱保護して最終生成物２を与えた。１と２の両方の構造は１ＨＮＭＲおよびＥＳＩＭＳスペクトルデーターにより確認された。 脂質Ａ擬態３の合成を記載する。ジ−ペンタエリスリトールは先ずジ−ベンジリデンアセタール２２として保護され、水素化ナトリウムの存在でテトラデシルブロマイドと反応し、ジ−脂質化化合物２３を与えた。ソジウムシアノボロンハイドライドとトリフルオルオロ酢酸で２３を処理することによるベンジリデンアセタールの還元的開環は、中程度の収率で２４を与えた。２個のベンジル保護ホスフェート基の２４への導入は前駆体２５を与え、これは水素雰囲気でパラジウム木炭で処理した際に所望の生成物３となる。 中間体２９の合成を記載する。化合物２２は塩化トシルおよび ピリジンで処理し、ジ−トシレート２６を与え、相触媒ａｌｉｑｕａｔ（登録商標）３３６の存在でアジ化ナトリウムと反応させてジ−アジド２７に変換した。ジチオプロパンを用いたアジド還元はジ−アミン化合物２８を与え、その際にジ−リポ酸７とのカップリングは中間体２９を６６％の収率で与えた。 ジ−Ｐｅｔ由来の脂質Ａ擬態４の合成を記載する。化合物３（図１０）の調製のために記載したと同じ反応工程によって、化合物２９を標的分子４に工程にて好収量で変換した。 ＰｅｔＮＨ２およびジ−ＰｅｔＮＨ２を含む脂質Ａ擬態（Ｘ−ＸＩＩ）として設計されたさらにいくつかの構造を示す。構造ＸおよびＸＩは非対称脂質分布のジ−Ｐｅｔ骨格に基づいている。構造ＸＩＩでは、ＰｅｔＮＨ２ユニットは脂質Ａ二糖類の非還元末端グルコサミンを置換した。 ヒト末梢血液から単離された接着細胞によってサイトカインのインヴィトロ分泌を引き出す際の脂質Ａ擬態１および２の力価を示す。Ｒ５９５脂質Ａ、サルモネラ・ミネソタから単離された天然脂質Ａ生成物、Ｒ５９５（アヴァンチ・ポーラー・リピズ社）もまた比較のためにテストした。分泌パターンは（ａ）腫瘍−ネクローシス因子−アルファ（ＴＮＦ−アルファ、ｐｇ／ｍＬ）分泌；（ｂ）ＩＬ−６の分泌（ｐｇ／ｍＬ）；（ｃ）ＩＬ−８の分泌（ｐｇ／ｍＬ）について決定した。データーは脂質Ａ擬態１および２は３つのサイトカイン、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−６およびＩＬ−８のすべての分泌の活性化においてＲ５９５脂質Ａに比較できることを示している。擬態１および２はこれらヒト単球を天然の対応物として類似のメカニズムで活性化すると考えることは当を得ている。 アジュバントとして脂質Ａ擬態１または２を含む合成リポソームワクチンＢＬＰ２５によって抗原特異的Ｔ細胞増殖応答の誘発を示す。２５量体リポペプチド、Ｈ２Ｎ−ＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＫ（パルミトイル）Ｇ−ＯＨが誘導されたＭＵＣ１を抗原として用いた。図１５に示したＴ細胞増殖データーは、ＢＬＰ２５リポソームワクチンの１投与で免疫化したＣ５７ＢＬ／６マウスはＭＵＣ１抗原に特異的な強力なＴ細胞応答を生じることをはっきりと示している。合成脂質Ａ擬態１または２を含むリポソーム製剤で免疫化したマウスの応答はＲ５９５脂質Ａを含む製剤で免疫化したマウス群のそれと比較できる。リポソーム製剤がアジュバントとして脂質Ａ類似体を含まないとき、抗原特異的Ｔ細胞増殖応答は極めて低い（データーは示されていない）。 アジュバントとして脂質Ａ類似体を含むリポソームワクチンの腫瘍成長の阻害効果を示す。リポソームワクチンＢＬＰ２５はＭＵＣ１由来の２５量体リポペプチドおよび脂質Ａ擬態１または２、またはＲ５９５脂質Ａを含む。ＭＣ−３８ＭＵＣ１腫瘍関連マウスの活性特異的免疫療法はＢＬＰ２５リポソーム製剤で皮内に免疫化して行った。マウスは０日目に腫瘍の免疫性をテストされ、７、１４および２１日目に免疫化された。３４日目に、腫瘍直径（長さと幅）を計り、腫瘍の大きさをｍｍ２（長さ×幅）として表した。図１６に示すように、合成脂質Ａ擬態１または２でアジュバントされたＢＬＰ２５リポソームワクチンは、Ｒ５９５脂質ＡでアジュバントしたＢＬＰ１５製剤によって生成したそれと比較できる腫瘍阻止効果を生じる。生理食塩水単独で免疫化したマウスのコントロール群では、腫瘍の大きさは、脂質Ａ擬態１または２でアジュバントされたＢＬＰ２５ワクチンで免疫化したものの約２倍であった。 １個のＰｅｔＮＨ２−含有炭水化物擬態、ＴＭを調製するための合成ストラテジーを示す。ＴＭは腫瘍結合Ｇｌｏｂｏ−Ｈ抗原の末端四糖類に基づき、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンはＰｅｔＮＨＡｃによって置換される。ＰｅｔＮＨ２−コアの1本のアームはエーテル結合によって還元性末端ガラクトースに結合するが、別のアームはグリコシド結合によって二糖類に結合する。異なる方法を用いてこの２つの異なるタイプの結合を構成する。エーテル結合は古典的なＳＮ１／ＳＮ２置換反応によって構成されるがグリコシド結合は多種のグリコシル化ドナー（例えば図１７に示されるようなトリクロロアセトイミデート法）によってグリコシル化反応により構成することができる。標準保護基操作、ステップワイドカップリング、および最終脱保護は完全な脱保護生成物ＴＭとなる。 ＭＵＣ１ムチンから引き出されたＢＬＰ２５リポペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）の構造を示す。リポペプチドは脂質Ａ擬態１および２の生物評価に用いられた合成腫瘍結合抗原である。ＢＬＰ２５リポペプチドおよび脂質Ａ擬態１または２のいずれかを含有するリポソーム製剤はマウスの腫瘍成長を阻害する際に治療効果を示す。 腫瘍結合炭水化物抗原から引き出されたＰｅｔ−ＮＨ２含有の新しい構造の数例を示す。これらの炭水化物は癌進行と関連し、通常細胞よりも癌細胞では高いレベルで発現する。これら炭水化物から癌治療のための強力な治療剤を開発するために大きい努力がなされた。（Ｓ．Ｊ．Danishefsky ＆ Ｊ．Ｒ．Allen，Angew．Chem．Int．Ed．2000，39，836−863）。構造擬態は類似の免疫学の有意性を与えることが期待される。これら擬態構造に向けられた免疫応答はそれらの天然対応物を認識すると考えられる。例えば、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ末端四糖類の擬態構造（ＴＭ、図１７）に対し生じた抗体はＧｌｏｂｏ−Ｈ抗原を発現する癌細胞と交叉反応することが期待される。 宿主細胞にバクテリア接着する場合に含まれる炭水化物から引き出されたいくつかの新しい構造を示す。グリコスフィンゴリピド（例えば、ＧＭ１、ＧＭ２、およびＧＭ３）およびルイスシリーズ炭水化物（例えば、Ｌｅａ、Ｌｅｂ、Ｌｅｘ、Ｌｅｙ、シアリルＬｅｘ等）は宿主細胞へのバクテリアコロニー化で重要な役割を演じることが良く知られている。このコロニー化プロセスを阻害する分子が、宿主へのバクテリアの侵入を妨げる有効な抗−バクテリア剤であることが信じられている。その天然形態での炭水化物リガンドは結合定数が低く酵素分解に対する不安定性により貧弱な阻害剤である。従って、これら天然炭水化物リガンドの合成擬態が低い結合定数と生物学系での低い生物学的利用能を改善する機会を提供する。例えば、ＨタイプＩ血液決定因子三糖類（図２０）は病原性バクテリアヘリコバクター・ピロリを含む接着に関係している。その構造上の擬態は代替の骨格を与え、さらに高い阻害効率をもつ新分子を見出すためにさらなる化学的変更を引き出すことができる。

Claims (183)

  1. 次式の脂質Ａ類似体である化合物。
    式中、分枝Ａ１−Ａ４の少なくとも１は強親油性の基からなり、分枝Ａ１−Ａ４の少なくとも１は−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＯＳ（＝Ｏ）（＝Ｏ）Ｏ−、および−ＯＢ（ＯＨ）Ｏ−からなる基から選択された部分からなるホスフフェート同等体からなり、Ａ１−Ａ４の各々は独立して無機または有機部分である。
  2. 分枝Ａ１−Ａ４の少なくとも１は糖ユニットまたは第二のＰｅｔコア
    からなる請求項１記載の化合物。
  3. エキストラＰｅｔユニットからなる請求項１または２記載の化合物。
  4. ２より多くないエキストラＰｅｔユニットからなる請求項３記載の化合物。
  5. 第二のＰｅｔコアでも糖ユニットでもなく、少なくとも１のホスフェート同等体が−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−、−ＯＳ（＝Ｏ）（＝Ｏ）Ｏ−、および−ＯＢ（ＯＨ）Ｏ−からなる基から選択された部分からなり、化合物がどんな核酸塩基でもない請求項１記載の化合物。
  6. Ａ１がＹ１Ｒ１、Ａ２がＹ２Ｒ２、Ａ３がＹ３Ｒ３およびＡ４がＹ４Ｒ４であり、各スペーサーＹ１−Ｙ４が独立して−（ＣＨ２）ｎＯ−、−（ＣＨ２）ｎＳ−、および−（ＣＨ２）ｎＮＨ−からなる群から選択され、式中ｎは、独立して、０ないし４であり、Ｒ１−Ｒ４の各々は独立して水素、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＯＳ（＝Ｏ）（＝Ｏ）ＯＨ、および−ＯＢ（ＯＨ）ＯＨからなる群、または有機基から選択される請求項１記載の化合物。
  7. Ｒ１−Ｒ４の３つが水素である請求項６記載の化合物。
  8. Ａ１−Ａ４の３つが−ＯＨである請求項７記載の化合物。
  9. Ａ１−Ａ４の２つが−ＯＨであり１つが−ＮＨ２である請求項７記載の化合物。
  10. Ｒ１−Ｒ４の２つが水素である請求項６記載の化合物。
  11. Ａ１−Ａ４の２つが−ＯＨである請求項１０記載の化合物。
  12. Ａ１−Ａ４の１つが−ＯＨでありＡ１−Ａ４の１つが−ＮＨ２である請求項１０記載の化合物。
  13. Ｒ１−Ｒ４の１つが水素である請求項６記載の化合物。
  14. Ｒ１−Ｒ４のいずれもが水素ではない請求項６記載の化合物。
  15. Ｒ１−Ｒ４の１つが強親油性基である請求項６−１４のいずれか1項記載の化合物。
  16. Ｒ１−Ｒ４の少なくとも２つが強親油性基である請求項６−１４のいずれか1項記載の化合物。
  17. Ｒ１−Ｒ４の２つが強親油性基である請求項１６記載の化合物。
  18. Ｒ１−Ｒ４の少なくとも３つが強親油性基である請求項６−１４のいずれか1項記載の化合物。
  19. Ｒ１−Ｒ４の３つが強親油性基である請求項１８記載の化合物。
  20. Ｒ１−Ｒ４の４つ全部が強親油性基である請求項１９記載の化合物。
  21. 少なくとも１の強親油性基が、リンカーなしで、ホスフェート同等体に結合する請求項１−２０のいずれか1項記載の化合物。
  22. １つの糖ユニットがＰｅｔコアにホスフェート同等体からなる部分によって結合する請求項１−２１のいずれか１項記載の化合物。
  23. ２つのＰｅｔコアがホスフェート同等体からなる部分によって結合する請求項１−２２のいずれか１項記載の化合物。
  24. 少なくとも１つの強親油性基が順番にＰｅｔコアに結合する糖ユニットに結合する請求項１−２２のいずれか１項記載の化合物。
  25. 式中、ｎ＝０である請求項６−２４のいずれか１項記載の化合物。
  26. スペーサーＹ１−Ｙ４の各々が−Ｏ−である請求項２５記載の化合物。
  27. スペーサーＹ１−Ｙ４の３つが−Ｏ−であり残りのスペーサーが−ＮＨ−である請求項２５記載の化合物。
  28. １つのホスフェート同等体を提供する請求項１−２７のいずれか１項記載の化合物。
  29. ２つのホスフェート同等体を提供する請求項１−２７のいずれか１項記載の化合物。
  30. 各ホスフェート同等体が（ａ）−Ｒ’−Ｃ（Ｏ）ＯＨであり、式中Ｒ’が１−４個の炭素の置換または非置換アルキル基、または（ｂ）−Ｂ（ＯＨ）Ｒ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ、または−S（Ｏ）（ＯＨ）Ｒからなる群から独立して選択され、式中Ｒは水酸基、または１−４個の炭素の置換または非置換アルキル基である請求項１−２９のいずれか１項記載の化合物。
  31. （ｂ）が用いられ、Ｒが水酸基である請求項３０記載の化合物。
  32. （ｂ）が用いられ、前記ホスフェート同等体が−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−からなる請求項３０記載の化合物。
  33. （ｂ）が用いられ、前記ホスフェート同等体がホスホノ基（−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＨ）（ＯＨ））である請求項３２記載の化合物。
  34. （ｂ）が用いられ、Ｒが１−４個の炭素の置換または非置換アルキル基である請求項３０記載の化合物。
  35. Ｒが置換基であるならば、置換基が−ＯＨまたはＮＨ２である、請求項３４の化合物。
  36. ＲがＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２である請求項３４記載の化合物。
  37. （ａ）が用いられる、請求項３０記載の化合物。
  38. Ｒ’が−ＣＨ２−である請求項３７記載の化合物。
  39. どれかの糖ユニットが不足するが第二のＰｅｔコアからなる請求項１−４、６−３８のいずれか１項記載の化合物。
  40. １の糖ユニットをもつ請求項１−４、６−３８のいずれか１項記載の化合物。
  41. 糖がヘキソースである請求項４０記載の化合物。
  42. 糖が環状である請求項４０または４１記載の化合物。
  43. 糖がピラノースである請求項４２記載の化合物。
  44. 糖がグルコピラノースである請求項４３記載の化合物。
  45. 糖がアミノ糖である請求項４０−４４のいずれか１項記載の化合物。
  46. 糖がグルコースアミンである請求項４５記載の化合物。
  47. 少なくとも１のホスフェート同等体が同じ分枝に前記糖ユニットからなる１つとして組み込まれている請求項４０−４６のいずれか１項記載の化合物。
  48. 少なくとも１のホスフェート同等体が前記糖ユニットに結合する請求項４７記載の化合物。
  49. 少なくとも１のホスフェート同等体が前記糖ユニットのものとは異なる分枝に組み込まれている請求項４０−４６のいずれか１項記載の化合物。
  50. 少なくとも１の強親油性基が前記糖ユニットに結合する請求項４０−４９のいずれか１項記載の化合物。
  51. 複数の強親油性基が糖ユニットに結合し、１つは前記糖ユニットの複数の異なる環状炭素の各々に結合する請求項５０記載の化合物。
  52. 少なくとも１の強親油性基が少なくとも１の主炭素鎖からなる請求項１−５１のいずれか１項記載の化合物。
  53. 少なくとも１の強親油性基が唯一の主炭素鎖からなる請求項５２記載の化合物。
  54. 少なくとも１の強親油性基が唯２の主炭素鎖からなる請求項５２記載の化合物。
  55. 少なくとも１の強親油性基が唯３の主炭素鎖からなる請求項５２記載の化合物。
  56. その強親油性基が少なくとも２の主炭素鎖を集合的に与える請求項５２記載の化合物。
  57. その強親油性基が２の主炭素鎖を集合的に与える請求項５２記載の化合物。
  58. その強親油性基が３の主炭素鎖を集合的に与える請求項５２記載の化合物。
  59. その強親油性基が４の主炭素鎖を集合的に与える請求項５２記載の化合物。
  60. その強親油性基が５の主炭素鎖を集合的に与える請求項５２記載の化合物。
  61. その強親油性基が６の主炭素鎖を集合的に与える請求項５２記載の化合物。
  62. その強親油性基が７の主炭素鎖を集合的に与える請求項５２記載の化合物。
  63. その強親油性基が８の主炭素鎖を集合的に与える請求項５２記載の化合物。
  64. 各主炭素鎖が１０−２０の炭素である請求項１−６３のいずれか1項記載の化合物。
  65. 各主炭素鎖が１２−１６の炭素である請求項６４記載の化合物。
  66. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に少なくとも２０の炭素原子を与える請求項１−６５のいずれか１項記載の化合物。
  67. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に少なくとも３０の炭素原子を与える請求項１−６５のいずれか１項記載の化合物。
  68. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に少なくとも４０の炭素原子を与える請求項１−６５のいずれか１項記載の化合物。
  69. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に少なくとも５０の炭素原子を与える請求項１−６５のいずれか１項記載の化合物。
  70. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に少なくとも６０の炭素原子を与える請求項１−６５のいずれか１項記載の化合物。
  71. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に少なくとも７０の炭素原子を与える請求項１−６５のいずれか１項記載の化合物。
  72. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に少なくとも８０の炭素原子を与える請求項１−６５のいずれか１項記載の化合物。
  73. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に少なくとも９０の炭素原子を与える請求項１−６５のいずれか１項記載の化合物。
  74. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に９０よりも多くない炭素原子を与える請求項１−７２のいずれか１項記載の化合物。
  75. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に８０よりも多くない炭素原子を与える請求項１−７１のいずれか１項記載の化合物。
  76. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に７０よりも多くない炭素原子を与える請求項１−７０のいずれか１項記載の化合物。
  77. 強親油性基の主炭素鎖が集合的に６０よりも多くない炭素原子を与える請求項１−６９のいずれか１項記載の化合物。
  78. 強親油性基に対する予言したｌｏｇＰ’ｓの合計が少なくとも１０である請求項１−７７のいずれか１項記載の化合物。
  79. 強親油性基に対する予言したｌｏｇＰ’ｓの合計が少なくとも１５である請求項１−７７のいずれか１項記載の化合物。
  80. 強親油性基に対する予言したｌｏｇＰ’ｓの合計が少なくとも２０である請求項１−７７のいずれか１項記載の化合物。
  81. 強親油性基に対する予言したｌｏｇＰ’ｓの合計が少なくとも２５である請求項１−７７のいずれか１項記載の化合物。
  82. 強親油性基に対する予言したｌｏｇＰ’ｓの合計が少なくとも３０である請求項１−７７のいずれか１項記載の化合物。
  83. 強親油性基に対する予言したｌｏｇＰ’ｓの合計が少なくとも４０である請求項１−７７のいずれか１項記載の化合物。
  84. 強親油性基に対する予言したｌｏｇＰ’ｓの合計が少なくとも５０である請求項１−７７のいずれか１項記載の化合物。
  85. 強親油性基に対する予言したｌｏｇＰ’ｓの合計が６０よりも多くない請求項１−８４のいずれか１項記載の化合物。
  86. 強親油性基に対する予言したｌｏｇＰ’ｓの合計が５０よりも多くない請求項１−８３のいずれか１項記載の化合物。
  87. 強親油性基に対する予言したｌｏｇＰ’ｓの合計が４０よりも多くない請求項１−８２のいずれか１項記載の化合物。
  88. 強親油性基に対する予言したｌｏｇＰ’ｓの合計が３０よりも多くない請求項１−８１のいずれか１項記載の化合物。
  89. 各強親油性基が−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−からなる群から選択される隣接リンカーによって化合物の残余に結合する請求項１−８８のいずれか１項記載の化合物。
  90. 少なくとも１の強親油性基において、隣接リンカーが前記基の主炭素鎖に直接結合する、請求項８９記載の化合物。
  91. 少なくとも１の強親油性基において、基が主炭素鎖ではない末端リンカーからなり、隣接リンカーが末端リンカーに結合し、末端リンカーが少なくとも１の主炭素鎖に結合する請求項８９記載の化合物。
  92. 末端リンカーが、１−５の炭素原子、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（＝））−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−ＮＨ−および−Ｎ＜からなる群から独立に選択される２またはそれ以上の要素からなるが、基の主炭素鎖に直接結合した末端リンカーの原子が炭素原子ではない請求項９１記載の化合物。
  93. 末端リンカーが少なくとも三価である請求項９２記載の化合物。
  94. 少なくとも１の強親油性基がリンカーを介して糖ユニットアノマー炭素に結合する請求項１−９３のいずれか１項記載の化合物。
  95. 少なくとも１の強親油性基がリンカーを介して、アノマー炭素ではない、環状ヘテロ原子に隣接した糖ユニット環状炭素に結合する請求項１−９３のいずれか１項記載の化合物。
  96. 少なくとも１の強親油性基がリンカーを介して、ヘテロ原子に隣接していない糖ユニット環状炭素に結合する請求項１−９３のいずれか１項記載の化合物。
  97. 少なくとも１の強親油性基がリンカーを介して、環状炭素ではない糖ユニット炭素に結合する請求項１−９３のいずれか１項記載の化合物。
  98. 少なくとも１の主炭素鎖が−Ｃ（＝Ｏ）−で始まる請求項１−９７のいずれか１項記載の化合物。
  99. 少なくとも１の主炭素鎖がアルキル鎖である請求項１−９８のいずれか１項記載の化合物。
  100. 少なくとも１の主炭素鎖が一重、二重または三重結合を特徴とする請求項１−９９のいずれか１項記載の化合物。
  101. 少なくとも１の主炭素鎖がヒドロキシル化である請求項１−１００のいずれか１項記載の化合物。
  102. 少なくとも１の強親油性基において、二次主炭素鎖が与えられる請求項１−１０１のいずれか１項記載の化合物。
  103. 二次主炭素鎖が一次主炭素鎖に結合した−Ｏ−である請求項１０２記載の化合物。
  104. 二次主炭素鎖が一次主炭素鎖の３−炭素に結合する請求項１０３記載の化合物。
  105. 少なくとも１の強親油性基において、三次主炭素鎖が与えられる請求項１０２−１０４のいずれか１項記載の化合物。
  106. 少なくとも１の強親油性基が
    式中のＸは−ＣＯ−または−ＣＨ２−であり、ｋは整数４−３０である；
    式中のｎは整数０−６であり、ｋは整数０−３０であり２ｋ＋３ｎは整数４−３０である；
    式中のｍおよびｎは整数（ｎに対し０−６でありｍに対し０−３０である）、ｍ＋ｎ＋ｌは４−３０である；（ｉｖ）
    式中のｍ＋ｎ＋ｌは４−３０である；
    式中のＸ１およびＸ２は独立して−ＣＯ−または−ＣＨ２−であり、ｍ＋ｎ＋ｋ＋ｌは４−３０である；
    式中のＺは−ＮＨ−または−Ｏ−であり、ｋ＋ｍ＋ｎは４−３０である；
    式中のｑは整数０−６であり、ｋ＋ｑ＋ｍ＋ｎは４−３０である；そして
    式中のＸ１、Ｘ２、およびＸ３は独立して−ＣＯ−または−ＣＨ２−であり、ｒは整数０−６、そしてｒ＋ｋ＋ｑ＋ｍ＋ｎは５−３０である
    基から選択される請求項１−１０５のいずれか１項記載の化合物。
  107. 強親油性基のすべてが式（ｉ）−（ｖｉｉｉ）からなる群から選択される請求項１０６記載の化合物。
  108. 少なくとも１の強親油性基が式（ｉ）である請求項１０６または１０７記載の化合物。
  109. 少なくとも１の強親油性基が式（ｉｉ）である請求項１０６または１０７記載の化合物。
  110. 少なくとも１の強親油性基が式（ｉｉｉ）である請求項１０６または１０７記載の化合物。
  111. 少なくとも１の強親油性基が式（ｉｖ）である請求項１０６または１０７記載の化合物。
  112. 少なくとも１の強親油性基が式（ｖ）である請求項１０６または１０７記載の化合物。
  113. 少なくとも１の強親油性基が式（ｖｉ）である請求項１０６または１０７記載の化合物。
  114. 少なくとも１の強親油性基が式（ｖｉｉ）である請求項１０６または１０７記載の化合物。
  115. 少なくとも１の強親油性基が式（ｖｉｉｉ）である請求項１０６または１０７記載の化合物。
  116. 少なくとも１の強親油性基が図４に描いた式の１つである請求項１ないし５１記載のいずれか１項記載の化合物。
  117. 各強親油性基が独立して図４に描いた式の１つである請求項１ないし５１のいずれか１項記載の化合物。
  118. 強親油性基が炭水化物合成において標準保護基ではない請求項１ないし１１７のいずれか１項記載の化合物。
  119. 強親油性基のすべてが脂肪族である請求項１記載の化合物。
  120. 次式を有する請求項1記載の化合物。
    式中のグリコシド結合はαまたはβであり；Ｙ３、Ｙ５およびＹ６は独立して−Ｏ−または−ＮＨ−であり；Ｙ４は−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は独立して水素または次式からなる群から選択された親油性基である。
    式中のＸ、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３は独立して−ＣＯ−または−ＣＨ２−であり；Ｚは−ＮＨ−または−Ｏ−であり；ｋ、ｍ、およびｒは独立して０から３０までの整数であり、ｎおよびｑは独立して０から６までの整数であり；Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１は水素はない；Ｒ２およびＲ７は独立してＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、および−ＣＨ２ＣＯＯＨからなる群から選択され；Ｒ８はＨ、ＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ、およびＯＲ９からなる群から選択され、式中のＲ９は１ないし１０の炭素長のアルキルまたはアシル基であるか；または製薬学的に許容できるその塩である。
  121. さらに次式である請求項１２０記載の化合物。
    式中のＲ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は独立して水素または次式からなる群から選択される親油性基である
    式中のＸ、Ｘ1、Ｘ2およびＸ3は独立して−ＣＯ−または−ＣＨ2−；Ｚは−ＮＨ−または−Ｏ−；ｋ、ｍおよびｒは独立して０から３０までの整数、ｎおよびｑは独立して０から６までの整数であり；
    少なくともＲ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は水素ではなく；
    Ｒ2およびＲ7は独立してＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、および−ＣＨ２ＣＯＯＨからなる群から選択され；Ｒ9はＨ、または１ないし１０の炭素長のアルキルまたはアシル基である。
  122. Ｒ１およびＲ9は水素であり；Ｒ2は水素またはホスホノ基−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２であり；Ｒ７はホスホノ基−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）2であり；Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は同じかまたは異なる次式のアシル基である請求項１２１記載の化合物。
    式中、ｍおよびｎは独立して6から10までの整数である。
  123. Ｒ３、Ｒ５およびＲ６が同じである請求項１２２の化合物。
  124. 次式で表される請求項１２３の化合物。
  125. 次式で表される請求項１２３の化合物。
  126. 次式で表される化合物化またはその製薬学的に受容できる塩である。
    式中、Ｙ３、Ｙ５およびＹ６は独立して−Ｏ−または−ＮＨ−；Ｙ10は−Ｏ−、−ＮＨ−および−Ｓ−からなる群から選択され；Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は独立して水素または次式からなる群から選択される。
    式中のＸ、Ｘ1、Ｘ2およびＸ3は独立してＣＯまたはＣＨ2であり；ＺはＮＨまたはＯ；ｋ、ｍおよびｒは独立して０から３０までの整数であり、ｎおよびｑは独立して０から６までの整数であり；そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6の少なくとも１は水素原子ではなく；Ｒ2はＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、および−ＣＨ２ＣＯＯＨからなる群から選択され；そしてＲ10はＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、および−ＣＨ２ＣＯＯＨからなる群から選択され、そして１ないし１０の炭素長のアルキル基である。
  127. 構造式がさらに次式で表される請求項１２６の化合物。
    式中のＲ2およびＲ10は独立して水素またはホスホノ基−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、そしてそれらの少なくとも１はホスホノ基であり；
    Ｙ3は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、
    Ｒ３、Ｒ5およびＲ6は独立して水素または次式からなる群から選択される親油性基である。
    式中のＸ、Ｘ1、Ｘ2およびＸ3は独立してＣＯまたはＣＨ2であり；ＺはＮＨまたはＯであり；ｋ、ｍおよびｒは独立して０から３０までの整数であり、ｎおよびｑは独立して０から６までの整数であり；そしてＲ3、Ｒ5およびＲ6の少なくとも１は水素原子ではない。
  128. 構造式がさらに次式で表される請求項１２７の化合物。
    式中のＲ3、Ｒ5およびＲ6は次式の同じかまたは異なる基であり
    式中のｍおよびｎは独立して６から１０までの整数から選択される。
  129. 次式で表される請求項１記載の化合物か、または製薬学的に許容されるそれらの塩。
    式中のＹ1、Ｙ3、Ｙ11、およびＹ13は独立して−Ｏ−、−ＮＨ−および−Ｓ−からなる群から選択され；
    Ｒ1、Ｒ3、Ｒ11およびＲ13は独立して水素、または次式からなる群から選択される親油性基である。
    式中のＸ，Ｘ1、Ｘ2、およびＸ3は独立して−ＣＯ−または−ＣＨ2−であり；Ｚは−ＮＨ−または−Ｏ−であり；ｋ、ｍおよびｒは独立して０から３０までの整数であり、ｎおよびｑは独立して０から６までの整数であり；そしてＲ1、Ｒ3、Ｒ11およびＲ13の少なくとも１は水素原子ではなく；
    Ｒ2およびＲ12は独立してＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＳＯ３Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）（ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、および−ＣＨ２ＣＯＯＨからなる群から選択され、そしてＲ２およびＲ１2の少なくとも１は水素ではない。
  130. 構造式がさらに次式で表される請求項１２９の化合物。
    式中のＹ3およびＹ13は独立して−Ｏ−または−ＮＨ−であり；
    Ｒ3およびＲ13は同じ置換基であり次式からなる群から選択される強親油性基であり：
    式中のＸ，Ｘ1、Ｘ2、およびＸ3は独立してＣＯまたはＣＨ2であり；ＺはＮＨおよびＯであり；ｋ、ｍおよびｒは独立して０から３０までの整数であり、ｎおよびｑは独立して０から６までの整数である。
  131. 次の構造式を有する請求項１３０の化合物。
  132. 次の構造式を有する請求項１３０の化合物。
  133. 免疫刺激活性を有する請求項１−１３２のいずれか１項記載の化合物。
  134. 請求項１３３の化合物の免疫刺激量を前記対象に投与することからなる哺乳類対象の免疫系を刺激する方法。
  135. さらに免疫原の免疫学的有効量を対象に投与し、前記免疫原への免疫応答を前記化合物によって高めることからなる請求項１３４記載の方法。
  136. 免疫原が病気関連免疫原であり対象がその病気に罹る請求項１３５記載の方法。
  137. 免疫原が腫瘍関連免疫原である請求項１３５記載の方法。
  138. 免疫原が炭水化物エピトープからなる請求項１３５−１３７のいずれか１項記載の方法。
  139. 免疫原がＴｎ、ＴＦまたはシアリル−Ｔｎエピトープからなる請求項１３８記載の方法。
  140. 免疫原がペプチドエピトープからなる請求項１３５−１３９のいずれか１項記載の方法。
  141. 免疫原がＭＵＣ１エピトープからなる請求項１４０記載の方法。
  142. 免疫原が強親油性基からなる請求項１３５−１４１のいずれか１項記載の方法。
  143. 化合物がリポソーム製剤によって誘導される請求項１３５−１４２のいずれか１項記載の方法。
  144. 哺乳類対象の免疫系の刺激のための組成物の製造において請求項１３３記載の化合物の使用。
  145. 組成物がさらに免疫原からなる請求項１４４記載の化合物の使用。
  146. 組成物がリポソーム製剤である請求項１４４または１４５記載の使用。
  147. 脂質Ａ拮抗薬活性を有する請求項１−１３２のいずれか１項記載の化合物。
  148. 請求項１４７の化合物の抑制量を前記対象に投与することからなる哺乳類対象において有害な脂質Ａ活性を阻害する方法。
  149. 対象が敗血症ショックに罹っている請求項１４８記載の方法。
  150. 対象が感染症に罹っている請求項１４８記載の方法。
  151. 哺乳類対象での有害な脂質Ａ活性の阻害のための組成物の製造において請求項１４７記載の化合物の使用。
  152. 参照炭水化物リガンド共有の少なくとも１の特異的受容体−結合活性を有する化合物であり、前記参照炭水化物リガンドは少なくとも１のアミノ糖ユニットからなり、前記類似体は次式からなる部分をもつ少なくとも１のアミノ糖ユニットの実質的に同一の部分からなる炭水化物リガンド類似体。
    式中のＹ1は−ＮＨ−であり、Ｙ2−Ｙ4の各々は−（ＣＨ２）ｎＯ−、−（ＣＨ２）ｎＳ−、および−（ＣＨ２）ｎＮＨ−からなる群から独立して選択され、ｎは独立して０ないし４である。
  153. 前記化合物が前記アミノ糖置換を除き前記参照炭水化物リガンドに実質的に同一である請求項１５２記載の化合物。
  154. ｎ＝０である請求項１５２または１５３記載の化合物。
  155. Ａ２−Ａ４の各々が−Ｏ−である請求項１５２−１５４のいずれか１項記載の化合物。
  156. 少なくとも１の糖ユニットからなる請求項１５２−１５５のいずれか１項記載の化合物。
  157. 糖ユニットの全部がペントースまたはヘキソースである請求項１５６記載の化合物。
  158. 糖ユニットの全部が環状である請求項１５６−１５７のいずれか１項記載の化合物。
  159. 糖ユニットがピラノースである請求項１５８記載の化合物。
  160. どの糖ユニットも含まない請求項１５２−１５５のいずれか１項記載の化合物。
  161. ２つのＰｅｔコアを与える請求項１６０記載の化合物。
  162. 参照リガンドが病気関連炭水化物ハプテンである請求項１５２−１６１のいずれか１項記載の化合物。
  163. 参照リガンドが腫瘍−関連炭水化物ハプテンである請求項１６２記載の化合物。
  164. 参照リガンドがＴｎ、ＴＦ、シアリルＴｎ、Ｆ１αおよびＧｌｏｂｏ−Ｈ末端四糖類からなる群から選択される請求項１６３記載の化合物。
  165. 図１９に示される擬態である請求項１６４記載の化合物。
  166. 参照リガンドがバクテリア−宿主接着に含まれる請求項１５２−１６１のいずれか１項記載の化合物。
  167. 参照リガンドがアシアロ−ＧＭ１末端三糖類、ルイス−Ｘ、ルイス−ＹおよびＨタイプＩ血液決定因子からなる群から選択される請求項１６６記載の化合物。
  168. 図２０に示される擬態である請求項１６７記載の化合物。
  169. Ｒ２−Ｒ４の各々は独立して水素であり、または本質的に置換または非置換炭水化物からなり、そしてＲ２−Ｒ４の少なくとも１は本質的に炭水化物残基からなり；Ｒ１は水素、アセチル基、ｎ−プロピオニル基、およびアミノ酸残基からなる群から選択される請求項１５２記載の化合物。
  170. 酵素阻害剤である請求項１５２記載の化合物。
  171. グリコシダーゼ阻害剤である請求項１７０記載の化合物。
  172. Ａ１−Ａ４の各々が水素ではない原子２００個以下からなる請求項１−１３２、１４８、１５２−１７１のいずれか１項記載の化合物。
  173. Ａ１−Ａ４の各々が水素ではない原子1５０個以下からなる請求項１７２記載の化合物。
  174. Ａ１−Ａ４の各々が水素ではない原子１００個以下からなる請求項１７３記載の化合物。
  175. 請求項１５２−１７１のいずれか記載の化合物からなるリポソーム製剤。
  176. 前記化合物が少なくとも１の強親油性基からなる請求項１７５記載の製剤。
  177. 前記対象に請求項１６２−１６５のいずれか１項記載の化合物の免疫原有効量を投与することからなる哺乳類対象において特異的免疫応答を誘発する方法。
  178. 化合物がリポソーム製剤の一部として投与される請求項１７７記載の方法。
  179. 請求項１−１３２、１４８、１５２−１７１のいずれか１項記載の脂質Ａ類似体も投与される請求項１７７または１７８記載の方法。
  180. 哺乳類対象における特異的免疫応答の誘発のための組成物の製造において請求項１６２−１６５のいずれか１項記載の化合物の使用。
  181. 請求項１６６−１６８のいずれか１項記載の化合物の抑制的有効量に宿主細胞を暴露することからなるバクテリア−宿主細胞接着を阻害する方法。
  182. 請求項１６６−１６８のいずれか１項記載の化合物の抑制的有効量を哺乳類対象に投与することからなる哺乳類対象におけるバクテリア−宿主細胞接着を阻害する方法。
  183. 哺乳類対象におけるバクテリア−宿主細胞接着を阻害のための組成物の製造において請求項１６６−１６８のいずれか１項記載の化合物の使用。
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