JP2005528334A - Ｅｂｖ及びｋｈｓｖ感染並びにそれに伴う異常細胞増殖の治療 - Google Patents

Ｅｂｖ及びｋｈｓｖ感染並びにそれに伴う異常細胞増殖の治療 Download PDF

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Abstract

医薬的に許容され得る希釈剤または賦形剤中に場合により含まれる有効量の５−置換ウラシルヌクレオシド、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを投与することを含むエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＣ）に感染している宿主、特にヒトを治療、防疫及び／または予防のための方法及び組成物を提供する。

Description

本発明は、（ｉ）エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）またはカポジ肉腫関連ヘルペス（ＫＨＳＶ）陽性細胞の異常細胞増殖を治療または予防するための化合物、組成物及び方法、（ｉｉ）ＥＢＶまたはＫＨＳＶ感染の治療、及び（ｉｉｉ）ＥＢＶ及びＫＨＳＶ陰性細胞の異常細胞増殖の遺伝子治療に関する。
エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）は１９６４年にバーキットリンパ腫患者の腫瘍性Ｂ細胞中に発見された。よって、ＥＢＶはヒト腫瘍ウイルスの最初の候補者となった。初期の研究から、ウイルスゲノムが２つの地方流行性腫瘍、すなわちバーキットリンパ腫（フランス領赤道アフリカ）及び鼻咽腔癌（南中国及び沿岸アジア）中に存在していたことが分かった（Ｗ．Ｈｅｎｌｅ及びＧ．Ｈｅｎｌｅ，“エプスタイン−バーウイルス及びヒト悪性疾患（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ）”，Ａｄｖ．Ｖｉｒａｌ Ｏｎｃｏｌ．，５：２０１（１９８５））。１９７０年代の終わりに、実質臓器や骨髄移植レシピエント、ＨＩＶ感染患者及び先天性免疫不全を有している子供を含めたＴ細胞免疫低下患者においてＥＢＶがＢ細胞リンパ増殖性疾患／リンパ腫（ＢＬＰＤ）の発生に役割を果たすことが明らかとなった（Ｄ．Ｗ．Ｈａｎｔｏ，Ｋ．Ｊ．Ｇａｊｌ−Ｐｅｃｚａｌｓｋａ，Ｇ．Ｆｒｉｚｚｅｒａ，Ｄ．Ｃ．Ａｒｔｈｕｒ，Ｈ．Ｈ．Ｂａｌｆｏｕｒ Ｊｒ．，Ｋ．ＭｃＣｌａｉｎ，“腎移植後に起こるＥＢＶ誘導ポリクローナル及びモノクローナルＢ細胞リンパ増殖性疾患：臨床的、病理的及びウイルス学所見及び治療への関係（ＥＢＶ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｂ−ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ａｆｔｅｒ ｒｅｎａｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ， ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ， ａｎｄ ｖｉｒｏｌｏｇｉｃ ｆｉｎｄｉｎｇｓ ａｎｄ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ）”，Ａｎｎ Ｓｕｒｇ．，１９８：３５６−６９（１９８３））。最近、ホジキン病の約５０％、多数のＴリンパ腫及びまれなＮＫ／単球様／樹状細胞悪性疾患の症例の造血性腫瘍細胞並びに（特に胃癌及び多分攻撃的乳癌を含めた）散発性上皮癌中でＥＢＶが同定された（Ｅ．Ｋｉｅｆｆ，“ＥＢＶ及びその複製（ＥＢＶ ａｎｄ ｉｔｓ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）”，Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，ｐ．２５１１−２５７３，ペンシルバニア州フィラデルフィアに所在のＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ（２００１年）発行；Ｊ．Ｓ．Ｐａｇａｎｏ，“ＥＢＶ：第１ヒト腫瘍ウイルス及びそのガンにおける役割（ＥＢＶ： ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ）”，Ｐｒｏｃ．Ａｓｓｏｃ．Ａｍ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ，１１１：５７３−５８０（１９９９）；Ｍ．Ｂｏｎｎｅｔ，Ｊ．Ｍ．Ｇｕｉｎｅｂｒｅｔｉｅｒｅ，Ｅ．Ｋｒｅｍｍｅｒ，Ｖ．Ｇｒｕｎｅｗａｌｄ，Ｅ．Ｂｅｎｈａｍｏｕ，Ｇ．Ｃｏｎｔｅｓｓｏ，“侵襲性乳癌におけるＥＢＶの検出（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＥＢＶ ｉｎ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒｓ）”，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．，９１：１３７６−１３８１（１９９９））。免疫不全患者において平滑筋肉腫との関連も見られた（Ｈ．Ｒｏｇａｔｓｃｈ，Ｈ，Ｂｏｎａｔｔｉ，Ａ．Ｍｅｎｅｔ，Ｃ．Ｌａｒｃｈｅｒ，Ｈ．Ｆｅｉｃｈｔｉｎｇｅｒ，Ｓ．Ｄｉｒｎｈｏｆｅｒ，“心臓移植後の成人患者におけるＥＢＶ関連多中心性平滑筋肉腫：症例報告及び文献の検討（ＥＢＶ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｉｃ ｌｅｉｏｍｙｏｓａｒｃｏｍａ ｉｎ ａｎ ａｄｕｌｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｆｔｅｒ ｈｅａｒｔ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ： ｃａｓｅ ｒｅｐｏｒｔ ａｎｄ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ）”，Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｐａｔｈ．，２４：６１４−２１（２０００））。ウイルス遺伝子産物が上記した各種新生物の多段階腫瘍形成に寄与することを示す証拠も幾つかある。
ＥＢＶはヒトヘルペスウイルス科の１員である。子供への感染は通常無症候性である。しかしながら、遅発接触を受けた患者の約５０％は自己限定性リンパ増殖性症候群、急性感染性単核球症を呈している。他のヘルペスウイルスと同様に、ＥＢＶは宿主の人生の間潜伏形態を保持している。血清学的調査から、世界の人口の９０％以上がＥＢＶに感染していることが分かっている（Ｗ．Ｈｅｎｌｅ及びＧ．Ｈｅｎｌｅ，“ウイルスの血清疫学（Ｓｅｒｏｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ）”，Ｍ．Ａ．Ｅｐｓｔｅｉｎ及びＢ．Ｇ．Ａｃｈｏｎｇ編「エプスタイン−バーウイルス（Ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ）」，ｐ．６１−７３，ニューヨークに所在のＳｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９７９年）発行）。（免疫低下宿主及び正常宿主での）ウイルス関連悪性疾患における広い役割に関する多くの証拠と共に感染の偏在から、ＥＢＶ感染を制限する予防及び治療方法及びその効果を開発することが必要であることが分かる。
ＥＢＶ関連悪性疾患の発症を予防及び治療するための幾つかの方法が研究されている。この中には、ワクチンの作成（予防のため、この時点で存在していないが）、体液性及び細胞性免疫治療薬の送達、化学療法、遺伝子治療（治療のため）、及び間接的に腫瘍に発達し得るＥＢＶ感染細胞の数が減ると期待してＥＢＶ溶菌複製の低下に基づく抗ウイルス薬治療（予防のため）が含まれる。
ＥＢＶ及びＥＢＶ関連疾患の治療
Ｂ細胞リンパ増殖性疾患（ＢＬＰＤ）を治療するためにα−及びγ−インターフェロン、ＩＶＩＧ、レチン酸等の免疫調節薬が単独でまたは組み合わせて使用されてきたが、成功は一定でない。しかしながら、他のＥＢＶ関連腫瘍では応答は観察されなかった（Ｒ．Ｓ．Ｓｈａｐｉｒｏ，Ａ．Ｃｈａｕｖｅｎｅｔ，Ｗ．ＭｃＧｕｉｒｅ，Ａ．Ｐｅａｒｓｏｎ，Ａ．Ｗ．Ｃｒａｆｔ，Ｐ．ＭｃＣｌａｖｅ，Ａ．Ｆｉｌｉｐｏｖｉｃｈ，“Ｂ細胞リンパ増殖性疾患のインターフェロン−α及び静脈γ−グロブリンを用いる治療（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂ−ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｆａ ａｎｄ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｇａｍｍａ ｇｌｏｂｕｌｉｎ）”，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３１８，１３３４（１９８８）；Ｆ．Ｐｏｍｐｏｎｉ，Ｒ．Ｃａｒｉａｔｉ，Ｐ．Ｚａｎｃａｉ，Ｐ．ＤｅＰａｏｌｉ，Ｓ．Ｒｉｚｚｏ，Ｒ．Ｍ．Ｔｅｄｅｓｃｈｉ，“レチノイドはＥＢＶ不死化Ｂリンパ球のインビトロ増殖を不可逆的に抑制する（Ｒｅｔｉｎｏｉｄｓ ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ＥＢＶ−ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ Ｂ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）”，Ｂｌｏｏｄ，８８：３１４７−３１５９（１９９６））。
以前、ＥＢＶ感染Ｂリンパ腫を治療するために補体固定抗Ｂ細胞モノクローナル抗体を使用するとある程度の成功を収めた。現在ＣＤ２０に対するＢ細胞Ｍａｂ（リタキシマブ）が市販されており、今までＢＬＰＤ／リンパ腫の治療において大きな成功を収めている。しかしながら、幾つかの症例ではアナフィラキシー反応のために治療が制限され、Ｂ細胞腫瘍のすべてがＣＤ２０を有していない。更に、リタキシマブはウイルス感染細胞に対して特異性を与えず、新しい体液性免疫応答が長期間損なわれる。また、リタキシマブは非Ｂ細胞ＥＢＶ関連疾患に対して有効でない（Ａ．Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｓ．Ｂｌａｎｃｈｅ，Ｊ．Ｌｅ Ｂｉｄｏｉｓ，Ｐ．Ｂｏｒｄｉｇｏｎｉ，Ｊ．Ｌ．Ｇａｒｎｉｅｒ，Ｐ．Ｎｉａｕｄｅｒ，“骨髄移植及び臓器移植後の重篤なＢ細胞リンパ増殖性症候群の治療における抗−Ｂ細胞モノクローナル抗体（Ａｎｔｉ−Ｂ−ｃｅｌｌ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｖｅｒｅ Ｂ−ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ａｎｄ ｏｒｇａｎ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）”，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２４：１４５１−１４５６（１９９１）；Ｎ．Ｍｉｌｐｉｅｄ，Ｂ．Ｖａｓｓｅｕｒ，Ｎ．Ｐａｒｑｕｅｔ，Ｊ．Ｌ．Ｇａｒｎｉｅｒ，Ｃ．Ａｎｔｏｉｎｅ，Ｐ．Ｑｕａｒｔｉｅｒ，“移植後Ｂリンパ増殖性疾患におけるヒト化抗−ＣＤ２０モノクローナル抗体（リタキシマブ）：３２患者の遡及分析（Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ａｎｔｉ−ＣＤ２０ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ （Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ） ｉｎ ｐｏｓｔ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒ： ａ ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｎ ３２ ｐａｔｉｅｎｔ）”，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．，１１（補遺１）：１１３−１１６（２０００））。
個々の細胞性免疫方法が有望であるが、対宿主性移植片病気や細胞のエキソビボ増殖／生成中の病原体の伝播の危険性が生じ、高価である（Ｅ．Ｂ．Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ，Ｍ．Ｌａｄａｎｙｉ，Ｄ．Ｅｍａｎｕｅｌ，Ｓ．Ｍａｃｋｉｎｎｏｎ，Ｆ．Ｂｏｕｌａｄ，Ｍ．Ｈ．Ｃａｒａｂａｓｉ，“同種ＢＭＴ後のＥＢＶ関連リンパ増殖性疾患を治療するためのドナーリンパ球の注入（Ｉｎｆｕｓｉｏｎｓ ｏｆ ｄｏｎｏｒ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｔｏ ｔｒｅａｔ ＥＢＶ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｆｔｅｒ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ＢＭＴ）”，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３３０：１１８５−１１９１（１９９４）；Ｌ．Ｋ．Ａｇｕｉｌａｒ，Ｃ．Ｍ．Ｒｏｏｎｅｙ，Ｈ．Ｅ．Ｈｅｓｌｏｐ，“造血性幹細胞移植後のＥＢＶ関連リンパ増殖性疾患（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ＥＢＶ ａｆｔｅｒ ｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）”，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，１１：９６−１０１（１９９９））。
ＥＢＶ腫瘍性タンパク質を抑制する、ウイルス関連腫瘍形成にとって重要な細胞遺伝子を抑制する、または細胞毒性遺伝子産物を導入する（例えば、ＥＢＶ感染腫瘍細胞にＨＳＶ１−ＴＫ遺伝子を導入後ガンシクロビル治療）新規化合物を導入する遺伝子治療方法が研究中である。いずれも初期の開発にあり、一般的問題として適当な腫瘍部位への送達がある。
化学療法分野では、臨床的に有効であり且つ望ましくない副作用のない抗−ＥＢＶ剤は殆どまたは全くない。幾つかの候補薬物が細胞培養でＥＢＶ複製に対して有効であることが判明しているが、これらの抗ウイルス剤がＥＢＶ複製のみを標的としているために潜伏関連疾患の進行中に対する効果がないのでその臨床的応用は制限されてきた。
ＥＢＶ治療における最大の問題は潜伏感染である。作用メカニズムに関係なく、潜伏ＥＢＶまたは他のγ−ヘルペスウイルス感染に対して特異的効果を示すと判明している薬物は許可も研究もされていない（Ｊ．Ｃ．Ｌｉｎ，“エプスタイン−バーウイルスの抗ウイルス治療；先の挑戦（Ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ： ｔｈｅ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ａｈｅａｄ）”，Ｒｅｃｅｎｔ Ｒｅｓ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，３：１９１−２２３（１９９９）；Ｊ．Ｓ．Ｐａｇａｎｏ，“エプスタイン−バーウイルス：活動及び潜伏感染の治療（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ： ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｌａｔｅｎｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）”，Ｊｅｆｆｒｉｅｓ及びＤｅＣｌｅｒｃｑ編「抗ウイルス化学療法（Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）」，ｐ．１５５−１９５，チチェスターに所在のＪｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９９５）年発行）。
幾つかの化合物が培養において細胞増殖に対して非毒性の濃度でＥＢＶ複製に対して活性を有していることが判明している。これらには、アシクロビル（ＡＣＶ）、ガンシクロビル（ＤＨＰＧ）、ペンシクロビル、Ｄ−ＦＭＡＵ及びそのアナログ、５−ブロモビニルｄＵｒｄ、ホスホノホルメート及びホスホロチオエートオリグヌクレオチドが含まれる。Ｌｉｎら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏ．，３２：２６５−２６７（１９８８）；Ｌｉｎら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏ．，３２：１０６８−１０７２（１９８８）；Ｃｈｅｎｇら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０：２７６７−２７７０（１９８３）；Ｄａｔｔａら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：５１６３−５１６６（１９８０）；Ｄａｔｔａら，Ｖｉｒｏｌ，１１４：５２−５９（１９８１）；Ｌｉｎら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ＆ Ｃｈｅｍｏ．，３１：１４３１−１４３３（１９８７）；Ｏｌｋａ及びＣａｌｅｎｄａｒ，Ｖｉｒｏｌ．，１０４：２１９−２２３（１９８０）；Ｌｉｎら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，５０：５０−５５（１９８４）；Ｙａｏら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ＆ Ｃｈｅｍｏ．，３７：１４２０−１４２５（１９９３）；及びＹａｏら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．，５１：９４１−９４７（１９６６）を参照されたい。
米国特許第５，５６５，４３８号明細書、同第５，５６７，６８８号明細書及び同第５，５８７，３６２号明細書（Ｃｈｕら）は、Ｂ型肝炎及びエプスタイン−バーウイルスの治療における２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アラビノフラノリルウリジン（Ｌ−ＦＭＡＵ）の使用を開示している。
国際特許出願公開第９６／１３５１２号パンフレット（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．及びＬｉｐｉｔｅｋ，Ｉｎｃ．）は、抗腫瘍剤及び殺ウイルス剤としてのＬ−リボフラノシルヌクレオシドの製造を開示している。
Ｔｓａｉら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４８（７）：１４７７−８１（１９９４）は、ミトコンドリアＤＮＡの細胞含量及びラクテート産生に対する抗−ＨＩＶ剤２’−β−Ｄ−Ｆ−２’，３’−ジデオキシヌクレオシドアナログの効果を開示している。
国際特許出願公開第９６／４０１６４号パンフレット及び同第９５／０７２８７号パンフレット（エモリー大学、ＵＡＢ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ及びＣｅｎｔｒｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ ｌａ Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｑｕｅ）は、Ｂ型肝炎及びＨＩＶの治療に対する幾つかのβ−Ｌ−２’，３’−ジデオキシヌクレオシドを開示している。
国際特許出願公開第００／０９５３１号パンフレット（Ｎｏｖｉｒｉｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｌｔｄ．）は、β−Ｌ−デオキシリボチミジン（β−Ｌ−ｄＴ）やβ−Ｌ−デオキシリボウリジン（β−Ｌ−ｄＵ）を含めた２’−デオキシ−β−Ｌ−エリスロペント−フラノヌクレオシド（β−Ｌ−ｄＮまたはβ−Ｌ−２’−ｄＮとも称される）を開示している。
米国特許第５，７９２，７７３号明細書、同第６，０２２，８７６号明細書及び同第６，２７４，５８９号明細書（エール大学及びＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｏｒｇｉａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．）は、ＥＢＶ治療用の特定のβ−Ｌ−ジオキソラニルウラシルをベースとするヌクレオシドを開示している。これらの化合物は好ましくは５−ハロ置換ウラシル塩基を有し、ＥＢＶ、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）及びカポジ肉腫ウイルス（ＨＶ−８）に対して予期せぬほど高い活性を示すと報告されている。
遺伝子治療
癌に対する遺伝子治療の研究で、研究者らは病気と戦ったり化学療法のような切除治療に対して癌細胞をより感受性とするために免疫応答を回復すべく研究している。研究中の幾つかの遺伝子治療方法には、
不活性または欠損遺伝子を遺伝子の“作動”コピーで置換。例えば、この方法は欠損遺伝子（例えば、突然変異体ｐ５３）の癌細胞の発生を抑制または阻止する能力を回復させるために使用され得る；
多剤耐性（ＭＤＲ）遺伝子のような“生存遺伝子”の幹細胞（赤血球を生成する骨髄中の細胞）への導入。ＭＤＲ遺伝子は高用量の抗癌剤の副作用に対して幹細胞をより耐性とするために使用される；
癌細胞を抗癌剤での治療に対してより感受性とする遺伝子を前記癌細胞に注入。科学者らは薬物による治療が薬物感受性遺伝子を含む細胞のみが殺されることを期待している。これは自殺遺伝子治療として公知である；
が含まれる。
自殺遺伝子治療は、プロドラッグを毒性物質に変換する遺伝子の導入として定義される。遺伝子産物及びプロドラッグは独立して非毒性である。２つの系、すなわち大腸菌シトシンデアミナーゼ（ＣＤ）遺伝子＋５−フルオロシトシン（５−ＦＣ）及び単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子（ＨＳＶ１−ＴＫ）＋ガンシクロビル（ＧＣＶ）が広く研究されている。
ＣＤ遺伝子産物は５−ＦＣを化学療法剤の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）に変換し（Ｂ．Ｅ．Ｈｕｂｅｒ，Ｅ．Ａ．Ａｕｓｔｉｎ，Ｓ．Ｓ．Ｇｏｏｄ，ら，“シトシンデアミナーゼを発現するように遺伝的に修飾したヒト結腸直腸癌細胞に対する５−フルオロシトシンのインビボ抗腫瘍活性（Ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ５−ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｔｏ ｅｘｐｒｅｓｓ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５３：４６１９−４６２６（１９９３））、５−ＦＵが一般的に使用されている胃腸腫瘍の肝転移に対する治療として主に研究されている。有意なバイスタンダー効果が局所的に高レベルの自由に拡散し得る５−ＦＵを生じさせることにより機能する（Ｑ．Ｔ．Ｔｒｉｎｈ，Ｅ．Ａ．Ａｕｓｔｉｎ，Ｄ．Ｍ．Ｍｕｒｒａｙら，“酵素／プロドラッグ遺伝子治療：ヒト結腸直腸細胞株におけるシトシンデアミナーゼ／５−フルオロシトシン対チミジンキナーゼ／ガンシクロビル酵素／プロドラッグ系の比較（Ｅｎｚｙｍｅ／ｐｒｏｄｒｕｇ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ： Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ／５−ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ ｖｅｒｓｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ／ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｅｎｚｙｍｅ／ｐｒｏｄｒｕｇ ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎ ａ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５５：４８０８−４８１２（１９９５））。５−ＦＣを用いる全身治療によりＣＤ導入腫瘍の増殖が抑制されるが、高用量の全身５−ＦＵを用いても同一腫瘍の増殖を殆ど抑制しない（Ｂ．Ｅ．Ｈｕｂｅｒ，Ｅ．Ａ．Ａｕｓｔｉｎ，Ｓ．Ｓ．Ｇｏｏｄら，“シトシンデアミナーゼを発現するように遺伝的に修飾したヒト結腸直腸細胞に対する５−フルオロシトシンのインビボ抗腫瘍活性（Ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ５−ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｔｏ ｅｘｐｒｅｓｓ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５３：４６１９−４６２６（１９９３））。同一動物で増殖している非導入腫瘍では全身増殖抑制は見られなかったことは、抗腫瘍活性に十分な血清５−ＦＵレベルを欠いていることを示している。興味深いことに、他の研究者らはＣＤ導入腫瘍を５−ＦＣでうまく治療すると攻撃腫瘍に対して活性であり得ることを述べている（Ｃ．Ａ．Ｍｕｌｌｅｎ，Ｍ．Ｋｉｌｓｔｒｕｐ，Ｒ．Ｍ．Ｂｌａｅｓｅ，“シトシンデアミナーゼに対する細菌性遺伝子を哺乳動物細胞に導入すると５−フルオロシトシン：負選択系に対して致命的感受性が与えられる（Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｇｅｎｅ ｆｏｒ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｔｏ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｃｏｎｆｅｒｓ ｌｅｔｈａｌ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ５−ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ： ａ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：３３−３７（１９９２））。ＣＤ８＋ Ｔ細胞または顆粒球を除去するとＣＤ＋５−ＦＣの効果が妨げられる（Ｍ．Ｃｏｎｓａｌｖｏ，Ｃ．Ａ．Ｍｕｌｌｅｎ，Ａ．Ｍｏｄｅｓｔｉ，Ｐ．Ｍｕｓｉａｎｉ，Ａ．Ａｌｌｉｏｎｅ，Ｆ．Ｃａｖａｌｌｏ，Ｍ．Ｇｉｏｖａｒｅｌｌｉ，Ｇ．Ｆｏｒｎｉ，“シトシンデアミナーゼ自殺遺伝子を発現するように工学処理したネズミ腺癌の５−フルオロシトシン誘導根絶には宿主免疫能力が必要であり、有効な記憶を残す（５−Ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｔｏ ｅｘｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｓｕｉｃｉｄｅ ｇｅｎｅ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｈｏｓｔ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｅｔｅｎｃｅ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓ ａｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍｅｍｏｒｙ）”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４：５３０２−５３１２（１９９５））。このことは、前記系において免疫学的活性のふとした刺激がこの方法の効率を更に高め得ることを示している。
肝転移を治療するための方法は、ＣＤ遺伝子を転移を取り巻く特定領域へ送達することに焦点が当てられている（Ａ．Ｏｈｗａｄａ，Ｅ．Ａ．Ｈｉｒｓｃｈｏｗｉｔｚ，Ｒ．Ｇ．Ｃｒｙｓｔａｌ，“肝臓に転移性の結腸癌の増殖を抑制すべく５−フルオロシトシンの局部活性化を与えるための大腸菌シトシンデアミナーゼ遺伝子を含むアデノウイルスベクターの特定領域送達（Ｒｅｇｉｏｎａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｈｅ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｌｏｃａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ５−ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ ｔｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｃｏｌｏｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｔｏ ｌｉｖｅｒ）”，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，７：１５６７−１５７６（１９９６））。遺伝子の全身送達の更なる改善は、ＣＤベクターの肝動脈注入後肝腫瘍細胞への遺伝子発現を目的とする組織特異的プロモーター、例えば癌胎児性抗原（ＣＥＡ）オラ−デリバー−フェトプロテイン遺伝子を使用することにより探求されている（Ｃ．Ａ．Ｒｉｃｈａｒｄｓ，Ｅ．Ａ．Ａｕｓｔｉｎ．Ｂ．Ｅ．Ｈｕｂｅｒ，“癌胎児性抗原の転写調節配列：腫瘍特異的遺伝子治療のためのシトシンデアミナーゼの同定及び使用（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ： ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｓｅ ｗｉｔｈ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｆｏｒ ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｆｉｃｉｃ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ）”，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，６：８８１−８９３（１９９５）；Ｆ．Ｋａｎａｉ，Ｋ．Ｈ．Ｌａｎ，Ｙ．Ｓｈｉｒａｔｏｒｉら，“シトシンデアミナーゼ遺伝子のアデノウイルス媒介導入によるα−胎児タンパク質産生肝細胞癌に対するインビボ遺伝子治療（Ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ａｌｐｈａ−ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂｙ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５７：４６１−４６５（１９９７））。
遺伝子治療モデルにおいて殺腫瘍を促進するためにＨＳＶ−１−ＴＫを発現する細胞に対するガンシクロビル（ＧＣＶ）の選択的毒性も利用された。もとのリポート（Ｋ．Ｗ．Ｃｕｌｖｅｒ，Ｚ．Ｒａｍ，Ｓ．Ｗａｌｌｂｒｉｄｇｅ，Ｈ．Ｉｓｈｉｉ，Ｅ．Ｈ．Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｍ．Ｂｌａｅｓｅ，“実験的脳腫瘍を治療するためのレトロウイルスベクター−プロデューサー細胞を用いるインビボ遺伝子導入（Ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｗｉｔｈ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ−ｐｒｏｄｕｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒｓ）”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１５５０−１５５２（１９９２））では、急速に分裂するネズミ神経膠腫細胞にインビボでＨＳＶ−ＴＫを含む両栄養性レトロウイルスベクターを感染させた。その後、動物をＧＣＶで治療した。こうすると、ウイルスＴＫを発現する腫瘍細胞は死亡するが、効率的なレトロウイルス感染のためには遅くしか複製しなかった隣接正常細胞は残った。いわゆるバイスタンダー効果のために、この治療は１０％くらいしかＴＫ発現細胞を含まない腫瘍細胞を殺すには有効である。迅速に複製する隣接細胞も細胞毒性のリン酸化ヌクレオシドを吸収する。
ＨＳＶ１−ＴＫはＧＣＶをＧＣＶ−モノホスフェート（ＧＣＶ−ＭＰ）に律速段階でリン酸化し、後者は更に細胞酵素を介してＤＮＡ合成を阻害するヌクレオチドアナログに変換され得る（Ｆ．Ｌ．Ｍｏｏｌｔｅｎ，“挿入したヘルペスチミジンキナーゼ遺伝子により付与される腫瘍化学感受性：予測的癌コントロール方法のための範例（Ｔｕｍｏｒ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｔｉｖｉｔｙ ｃｏｎｆｅｒｒｅｄ ｂｙ ｉｎｓｅｒｔｅｄ ｈｅｒｐｅｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｇｅｎｅｓ： ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏｒ ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｒａｔｅｇｙ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，４６：５２７６−５２８１（１９８６））。この代謝的変化は、ギャップ結合は非拡散性リン酸化ＧＣＶを非導入細胞に運ぶ；非導入細胞は死細胞からリン酸化ＧＣＶを含む破片を飲食する；及び誘導免疫応答により殺腫瘍が生ずる；の幾つかのメカニズムにより有意なバイスタンダー効果を引き起こす（Ｒ．Ｇ．Ｖｉｌｅ，Ｊ．Ａ．Ｎｅｌｓｏｎ，Ｓ．Ｃａｓｔｌｅｄｅｎ，Ｈ．Ｃｈｏｎｇ，Ｉ．Ｒ．Ｈａｒｔ，“ＨＳＶｔｋ遺伝子の組織特異的発現を用いるネズミメラノーマの全身遺伝子治療は免疫成分を含む（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｍｅｌａｎｏｍａ ｕｓｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＨＳＶｔｋ ｇｅｎｅ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ａｎ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５４：６２２８−６２３４（１９９４）；Ａ．Ａ．Ｅｌｓｈａｍｉ，Ａ．Ｓａａｖｅｄｒａ，Ｈ．Ｚｈａｎｇら，“ギャップ結合はインビトロにおいて単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ／ガンシクロビル系のバイスタンダー効果において役割を果たす（Ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｐｌａｙｓ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ “ｂｙｓｔａｎｄｅｒ ｅｆｆｅｃｔ” ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ／ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｖｉｔｒｏ）”，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，３：８５−９２（１９９６）；Ｗ．Ｈａｍｅｌ，Ｌ．Ｍａｇｎｅｌｌｉ，Ｖ．Ｐ．Ｃｈｉａｒｕｇｉ，Ｍ．Ａ．Ｉｓｒａｅｌ，“バイスタンダー細胞の単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ／ガンシクロビル媒介のプログラム死（Ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ／ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｄｅａｔｈ ｏｆ ｂｙｓｔａｎｄｅｒ ｃｅｌｌｓ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５６：２６９７−２７０２（１９９６）；Ｍ．Ｍｅｓｎｉｌ，Ｃ．Ｐｉｃｃｏｌｉ，Ｇ．Ｔｉｒａｂｙ，Ｋ．Ｗｉｌｌｅｃｋｅ，Ｈ．Ｙａｍａｓａｋｉ，“単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子による癌細胞のバイスタンダー死滅はコネクシンにより媒介される（Ｂｙｓｔａｎｄｅｒ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｈｅｒｐｅｓ−ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｃｏｎｎｅｘｉｎｓ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：１８３１−１８３５（１９９６））。このタイプの遺伝子治療は、限局性脳腫瘍（Ｋ．Ｗ．Ｃｕｌｖｅｒ，Ｚ．Ｒａｍ，Ｓ．Ｗａｌｂｒｉｄｇｅ，Ｈ．Ｉｓｈｉ，Ｅ．Ｈ．Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｍ．Ｂａｌｅｓｅ，“実験的脳腫瘍の治療のためのレトロウイルスベクター産生細胞を用いるインビボ遺伝子導入（Ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｗｉｔｈ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｐｒｏｄｕｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒｓ）”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１５５０−１５５２（１９９２）；Ｄ．Ｂａｒｂａ，Ｊ．Ｈａｒｄｉｎ，Ｍ．Ｓａｄｅｌａｉｎら，“実験的脳腫瘍のチミジンキナーゼ媒介死滅後の抗腫瘍免疫の発生（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒｓ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：４３８４−５２（１９９４）；Ｓ．Ｃｈｅｎ，Ｈ．Ｄ．Ｓｈｉｎｅ，Ｊ．Ｃ．Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｒ．Ｇ．Ｇｒｏｓｓｍａｎ，Ｓ．Ｌ．Ｃ．Ｗｏｏ，“脳腫瘍のための遺伝子治療：インビボでのアデノウイルス媒介遺伝子導入による実験的神経膠腫の退行（Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒｓ： ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｌｉｏｍａｓ ｂｙ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｖｉｖｏ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：３０５４−３０５７（１９９４））、中皮腫（Ａ．Ａ．Ｅｌｓｈａｍｉ，Ａ．Ｓａａｖｅｄｒａ，Ｈ．Ｚｈａｎｇら，“ギャップ結合はインビトロで単純ヘルペスチミジンキナーゼ／ガンシクロビル系のバイスタンダー効果において役割を果たす（Ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｐｌａｙｓ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ “ｂｙｓｔａｎｄｅｒ ｅｆｆｅｃｔ” ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ／ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｖｉｔｒｏ）”，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，３：８５−９２（１９９６））、肝転移（Ｍ．Ｃａｒｕｓｏ，Ｙ．Ｐａｎｉｓ，Ｓ．Ｇａｇａｎｄｅｅｐ，Ｄ．Ｈｏｕｓｓｉｎ，Ｊ．Ｌ．Ｓａｌｚｍａｎｎ，Ｄ．Ｋｌａｔｚｍａｎｎ，“自殺遺伝子の現場導入後の樹立された巨視的肝転移の退行（Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｍａｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｌｉｖｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ａｆｔｅｒ ｉｎ−ｓｉｔｕ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｓｕｉｃｉｄｅ ｇｅｎｅ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７０２４−７０２８（１９９３））、及び腹膜播種性転移（Ｘ．Ｗ．Ｔｏｎｇ，Ａ．Ｂｌｏｃｋ，Ｓ．Ｈ．Ｃｈｅｎ，Ｓ．Ｌ．Ｃ．Ｗｏｏ，Ｄ．Ｇ．Ｋｉｅｂａｃｋ，“ヒト上皮卵巣癌細胞株へのアデノウイルス媒介チミジンキナーゼ遺伝子導入後のガンシクロビルへの接触（Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｏ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）”，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１６：１６１１−１６１７（１９９６）；Ｄ．Ｙｅｅ，Ｓ．Ｅ．ＭｃＧｕｉｒｅ，Ｎ．Ｂｒｕｎｎｅｒ，Ｔ．Ｗ．Ｋｏｚｅｌｓｋｙ，Ｄ．Ｃ．Ａｌｌｒｅｄ，Ｓ．Ｈ．Ｃｈｅｎ，Ｓ．Ｌ．Ｃ．Ｗｏｏ，“ヒト乳癌の腹水モデルにおける単純ヘルペスチミジンキナーゼのアデノウイルス媒介遺伝子導入（Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ａｎ ａｓｃｉｔｅｓ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）”，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，７：１２５１−１２５７（１９９６））を含めた各種の癌のために探求されている。これらの方法は世界中でヒト癌に対して３５以上の臨床試験に対して用いられている。ＨＳＶ−ＴＫ＋ＧＣＶの増殖抑制活性は有意であるが、現場導入（遺伝子送達）は不十分のままであり、バイスタンダー効果は一定でないので治癒率は遙かに低い。明らかに、ＣＤ及びＨＳＶ−ＴＫ系及びｐ５３遺伝子治療は癌細胞を放射線に対して更に感作し、進行癌をコントロールするための併用療法が示唆される（Ｊ．Ｈ．Ｋｉｍ，Ｓ．Ｈ．Ｋｉｍ，Ａ．Ｋｏｌｏｚｓｖａｒｙ，Ｓ．Ｌ．Ｂｒｏｗｎ，Ｏ．Ｂ．Ｌｉｍ，Ｓ．Ｏ．Ｆｒｅｙｔａｇ，“インビトロ及びインビボで抗ウイルス剤による単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ誘導９Ｌ神経膠肉腫細胞の放射線応答の選択的強化（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ ９Ｌ ｇｌｉｏｓａｒｃｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｂｙ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｇｅｎｔｓ）”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙ．，３３：８６１−８６８（１９９５）；Ｍ．Ｓ．Ｋｈｉｌ，Ｊ．Ｈ．Ｋｉｍ，Ｃ．Ａ．Ｍｕｌｌｅｉｎ，Ｓ．Ｈ．Ｋｉｍ，Ｓ．Ｏ．Ｆｒｅｙｔａｇ，“シトシンデアミナーゼ遺伝子を導入した培養ヒト結腸直腸癌細胞の５−フルオロシトシンによる放射線増感（Ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ ５−ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ ｗｉｔｈ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ）”，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２：５３−５７（１９９６））。
転移性疾患の治療のためにＨＳＶ−ＴＫ＋ＧＣＶを使用することは重大な問題を招く。腫瘍をＨＳＶ−ＴＫで治療すると親細胞株の攻撃注射に由来する腫瘍の増殖を抑制する。このことはある種のモデルでの全身抗腫瘍活性の誘導を示す（Ｄ．Ｂａｒｂａ，Ｊ．Ｈａｒｄｉｎ，Ｍ．Ｓａｄｅｌａｉｎら，“実験的脳腫瘍のチミジンキナーゼ媒介死滅後の抗腫瘍免疫性の発生（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒｓ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：４３４８−５２（１９９４）；Ｒ．Ｇ．Ｖｉｌｅ，Ｊ．Ａ．Ｎｅｌｓｏｎ，Ｓ．Ｃａｓｔｌｅｄｅｎ，Ｈ．Ｃｈｏｎｇ，Ｉ．Ｒ．Ｈａｒｔ，“ＨＳＶｔｋ遺伝子の組織特異的発現を用いるネズミメラノーマの全身遺伝子治療は免疫成分を含む（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｇｅｎｅ−ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｍｅｌａｎｏｍａ ｕｓｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＨＳＶｔｋ ｇｅｎｅ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ａｎ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５４：６２２８−６２３４（１９９４））。この抑制が免疫細胞により媒介されることを示す証拠が幾つかある（Ｒ．Ｇ．Ｖｉｌｅ，Ｊ．Ａ．Ｎｅｌｓｏｎ，Ｓ．Ｃａｓｔｌｅｄｅｎ，Ｈ．Ｃｈｏｎｇ，Ｉ．Ｒ．Ｈａｒｔ，“ＨＳＶｔｋ遺伝子の組織特異的発現を用いるネズミメラノーマの全身遺伝子治療は免疫成分を含む（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｇｅｎｅ−ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｍｅｌａｎｏｍａ ｕｓｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＨＳＶｔｋ ｇｅｎｅ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ａｎ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５４：６２２８−６２３４（１９９４）；Ｓ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｓ．Ｓｕｚｕｋｉ，Ａ．Ｈｏｓｈｉｎｏ，Ｍ．Ａｋｉｍｏｔｏ，Ｔ．Ｓｈｉｍａｄａ，“腫瘍細胞の単純ヘルペスチミジンキナーゼ／ガンシクロビル媒介死滅はマウスにおいて腫瘍特異的細胞毒性Ｔ細胞を誘導する（Ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ／ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ−ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｉｃｅ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，４：９１−９６（１９９７））が、これらの所見の有意性及び普遍性は未知である。更に、転移病巣に指向させるために静注ルート（Ｒ．Ｇ．Ｖｉｌｅ，Ｊ．Ａ．Ｎｅｌｓｏｎ，Ｓ．Ｃａｓｔｌｅｄｅｎ，Ｈ．Ｃｈｏｎｇ，Ｉ．Ｒ．Ｈａｒｔ，“ＨＳＶｔｋ遺伝子の組織特異的発現を用いるネズミメラノーマの全身遺伝子治療は免疫成分を含む（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｇｅｎｅ−ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｍｅｌａｎｏｍａ ｕｓｉｎｇ ｔｉｓｓｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＨＳＶｔｋ ｇｅｎｅ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ａｎ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５４：６２２８−６２３４（１９９４））または腹腔ルート（Ｘ．Ｗ．Ｔｏｎｇ，Ａ．Ｂｌｏｃｋ，Ｓ．Ｈ．Ｃｈｅｎ．Ｓ．Ｌ．Ｗｏｏ，Ｄ．Ｇ．Ｋｉｅｂａｃｋ，“ヒト上皮卵巣癌細胞株におけるアデノウイルス媒介チミジンキナーゼ遺伝子導入後のガンシクロビルへの接触（Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｏ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）”，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１６：１６１１−１６１７（１９９６）；Ｄ．Ｙｅｅ，Ｓ．Ｅ．ＭｃＧｕｉｒｅ，Ｎ．Ｂｒｕｎｎｅｒ，Ｔ．Ｗ．Ｋｏｚｅｌｓｋｙ，Ｄ．Ｃ．Ａｌｌｒｅｄ，Ｓ．Ｈ．Ｃｈｅｎ．Ｓ．Ｌ．Ｗｏｏ，“ヒト乳癌の腹水モデルにおける単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼのアデノウイルス媒介遺伝子導入（Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ａｎ ａｓｃｉｔｅｓ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）”，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，７：１２５１−１２５７（１９９６））によりＨＳＶ−ｔｋを全身に送達すると、肝臓が大きく損傷する恐れがある（Ｄ．Ｙｅｅ，Ｓ．Ｅ．ＭｃＧｕｉｒｅ，Ｎ．Ｂｒｕｎｎｅｒ，Ｔ．Ｗ．Ｋｏｚｅｌｓｋｙ，Ｄ．Ｃ．Ａｌｌｒｅｄ．Ｓ．Ｈ．Ｃｈｅｎ，Ｓ．Ｌ．Ｃ．Ｗｏｏ，“ヒト乳癌の腹水モデルにおける単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼのアデノウイルス媒介遺伝子導入（Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ａｎ ａｓｃｉｔｅｓ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）”，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，７：１２５１−１２５７（１９９６）；Ｋ．Ｂｒａｎｄ，Ｗ．Ａｒｎｏｌｄ，Ｔ．Ｂａｒｔｅｌｓ，Ａ．Ｌｉｅｂｅｒ，Ｍ．Ａ．Ｋａｙ，Ｍ．Ｓｔｒａｕｓｓ，Ｂ．Ｄｏｒｋｅｎ，“ＨＳＶ−ｔｋ／ＧＣＶアプローチ及びアデノウイルスベクターの肝関連毒性（Ｌｉｖｅｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ＨＳＶ−ｔｋ／ＧＣＶ ａｐｐｒｏａｃｈ ａｎｄ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，４：９−１６（１９９７）；Ｃ．Ｑｉａｎ，Ｍ．Ｉｄｏａｔｅ，Ｒ．Ｂｉｌｂａｏ，Ｂ．Ｓａｎｇｒｏ，Ｏ．Ｂｒｕｎａ，Ｊ．Ｖａｚｑｕｅｚら，“ジエチルニトロサミン誘導肝細胞癌を持つラットにおけるアデノウイルスベクターを用いる遺伝子導入及び治療（Ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｄｉｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）”，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，８：３４９−３５８（１９９７））。この遺伝子を安全に全身に送達するために組織特異的ベクターが必要であり得る。
エプスタイン−バーウイルスチミジンキナーゼ（ＥＢＶ−ＴＫ）
ＥＢＶ関連疾患は主にウイルスゲノムが存在するウイルス感染腫瘍として発症する。しかしながら、感染は潜伏性であり、ほとんどのＥＢＶ遺伝子は発現しない。高レベルのＥＢＶ溶菌複製が通常自己限定性リンパ増殖性疾患である急性感染性単核細胞症の環境及びＡＩＤＳ患者で主に見られる口腔の溶菌疾患である口腔毛状白斑において認められる。高レベルのＥＢＶ溶菌複製は免疫低下患者の血液で見られ、これらの患者でのその後のリンパ増殖性疾患の発生に関係している。これらの状態に対する標準治療はない。
ＥＢＶは、チミジン及びゲノムのＢａｍＨＩ Ｘ断片に存在するチミジンアナログをリン酸化する能力を有する厳密にキナーゼであるチミジンキナーゼ（ＴＫ）をコードしている（Ｐ．Ｐ．Ｔｕｎｇ及びＷ．Ｃ．Ｓｕｍｍｅｒｓ，“エプスタイン−バーウイルスチミジンキナーゼの基質特異性（Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｅｓｐｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，３８：２１７５−７９（１９９４）；Ｅ．Ａ．Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ，Ａ．Ｃ．Ｃｈｉｌｌｅｍｉ，Ｄ．Ｒ．Ｓａｇｅ，Ｊ．Ｄ．Ｆｉｎｇｅｒｏｔｈ，“エプスタイン−バーウイルスチミジンキナーゼはガシクロビルまたはアシクロビルをリン酸化せず、単純ヘルペスウイルスタイプＩチミジンキナーゼと比較して狭い特異性を示す（Ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｏｒ ａｃｙｃｌｏｖｉｒ ａｎｄ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ ａ ｎａｒｒｏｗ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ Ｉ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４２：２９２３−３１（１９９８））。ＥＢＶに潜伏感染したＢ細胞及びＥＢＶ＋腫瘍は通常ＥＢＶ−ＴＫを発現しないが、インビトロで潜伏感染した細胞を腫瘍プロモーターの（１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート）ＰＭＡ／ＴＰＡまたは極性有機化合物の酪酸ナトリウム（ＮａＢ）に暴露させると、ＥＢＶ−ＴＫ発現を伴う溶菌複製が中程度（細胞株に応じて細胞の１〜４０％）に誘導される（Ｔ．Ｓｔｉｎｃｈｃｏｂｅ及びＷ．Ｃｌｏｕｇｈ，“ＥＢＶは重感染及びウイルスプロデューサーＢ細胞株においてユニークなピリミジン２’−デオキシヌクレオシドキナーゼ活性を誘導する（ＥＢＶ ｉｎｄｕｃｅｓ ａ ｕｎｉｑｕｅ ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ ２’−ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ｋｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｓｕｐｅｒｉｎｆｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｄｕｃｅｒ Ｂ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ）”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２４：２０２１−２０３３（１９８５））。幾つかのＥＢＶ＋ Ｂ細胞株では、ＴＰＡとＮａＢを併用すると溶菌サイクルが相乗的に活性化されることが判明している（Ｅ．Ａｎｉｓｉｍｏｖａ，Ｋ．Ｐｒａｃｈｏｖａ，Ｊ．Ｒｏｕｂａｌ，Ｖ．Ｖｏｎｋａ，“ＥＢＶ抗原の誘導及び細胞分化に対するｎ−ブチレート及びホルボールエステル（ＴＰＡ）の影響（Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｎ−ｂｕｔｙｒａｔｅ ａｎｄ ｐｈｏｒｂｏｌ ｅｓｔｅｒ （ＴＰＡ） ｏｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＥＢＶ ａｎｔｉｇｅｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）”，Ａｒｃｈ．Ｖｉｒｏｌ．，８１：２２３−２３７（１９８４））。ウイルス産生が最小のときでも、溶菌サイクル中活性なＥＢＶ遺伝子が薬物処理により誘導され、このことは薬物誘導遺伝子発現が正常な産生性感染の過程でトリガーされる発現と同一でないことが示唆する。ヘルペスウイルス複製は規定シーケンスで初期（Ｅ）及び後期（Ｌ）遺伝子の前の前初期（ＩＥ）遺伝子の合成を伴って進行するが、産生性感染の人工インデューサーはウイルス遺伝子発現の正常化学量論を変化させ得る。誘導はしばしば後期タンパク質の非存在下で合成されたＩＥ及びＥタンパク質及びウイルス構築では成功しない。最近の研究で、ＮａＢ、アルギニンブチレート（ＡｒｇＢ）及び関連化合物が重大な副作用を呈することなく健康な成人及び小児に投与されている（Ｐ．Ｄａｎｉｅｌ，Ｍ．Ｂｒａｚｉｅｒ，Ｉ．Ｃｅｒｕｔｔｉ，Ｆ．Ｐｉｅｒｉ，Ｉ．Ｔａｒｄｉｖｅｌ，Ｇ．Ｄｅｓｍｅｔ，“ナトリウム及びアルギニン酪酸塩としてインビボ投与した酪酸の薬物動態研究（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｓ ｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ ａｒｇｉｎｉｎｅ ｂｕｔｙｒａｔｅ ｓａｌｔｓ）”，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１８１：２５５−２６３（１９８９）；Ｓ．Ｐ．Ｐｅｒｒｉｎｅ，Ｇ．Ｄ．Ｇｉｎｄｅｒ，Ｄ．Ｖ．Ｆａｌｌｅｒ，Ｇ．Ｈ．Ｄｏｖｅｒ，Ｔ．Ｉｋｕｔａ，Ｈ．Ｅ．Ｗｉｔｋｏｗｓｋａ，“β−グロビン疾患において胎仔グロビン遺伝子発現を刺激するためのブチレートの短期間トライアル（Ａ ｓｈｏｒｔ−ｔｅｒｍ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｂｕｔｙｒａｔｅ ｔｏ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ ｆｅｔａｌ ｇｌｏｂｉｎ−ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｂｅｔａ−ｇｌｏｂｉｎ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）”，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２８：８１−８６（１９９３））。ＡｒｇＢは、鎌状赤血球貧血及びβ−サラセミアを患っている小児において胎児ヘモグロビンを誘導し、溶血発作を抑えるためにＦＤＡで認可されている（Ｓ．Ｐ．Ｐｅｒｒｉｎｅ，Ｇ．Ｄ．Ｇｉｎｄｅｒ，Ｄ．Ｖ．Ｆａｌｌｅｒ，Ｇ．Ｈ．Ｄｏｖｅｒ．Ｔ．Ｉｋｕｔａ，Ｈ．Ｅ．Ｗｉｔｋｏｗｓｋａ，“β−グロビン疾患において胎児グロビン遺伝子発現を刺激するためのブチレートの短期間トライアル（Ａ ｓｈｏｒｔ−ｔｅｒｍ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｂｕｔｙｒａｔｅ ｔｏ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ ｆｅｔａｌ−ｇｌｏｂｉｎ−ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｅｔａ−ｇｌｏｂｉｎ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）”，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２８：８１−８６（１９９３））。加えて、ブリオスタチンのような腫瘍促進活性を欠くＴＰＡとは薬理学的に区別されるタンパク質キナーゼＣアクチベーターは現在癌患者の臨床試験にかけられている（Ｊ．Ｐｒｅｎｄｉｖｉｌｌｅ，Ｄ．Ｇｒｏｗｔｈｅｒ，Ｎ．Ｔｈａｔｃｈｅｒ，Ｐ．Ｊ．Ｗｏｌｌ，Ｂ．Ｗ．Ｆｏｘ，Ａ．ＭｃＧｏｗｎ，“進行癌患者における静注ブリオスタチン１の第１相試験（Ａ ｐｈａｓｅ １ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ １ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｃａｎｃｅｒ）”，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６８：４１８−４２４（１９９３））。
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）はヒト宿主において約１日の倍化時間で迅速に複製する。野生型株に対する抗−ＣＭＶ薬物のガンシクロビル（ＧＣＶ）の有効性は静注投与（５ｍｇ／ｋｇ １日に２回）したときには９１．５％であるが、経口投与（１ｇ １日３回）のときには４６．５％にすぎない。典型的なＧＣＶ耐性ウイルスに対する対応の数字はそれぞれ６２％及び３５％である。ＧＣＶの長期間治療の間、ＧＣＶ耐性の突然の出現はＣＭＶ複製を完全に抑制しないＧＣＶの用量で２つの指数増加集団（野生型及び変異体）の組合せにより説明される（Ｖ．Ｃ．Ｅｍｅｒｙ，Ｐ．Ｄ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，“抗ウイルス化学療法後のサイトメガロウイルス負荷及び耐性パターンの予測（Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｌｏａｄ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｐａｔｔｅｒｎｓ ａｆｔｅｒ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９７（１４）：８０３９−４４（２０００））。
ＥＢＶ（＋）バーキットリンパ腫細胞株を５−アザシチジンで処理するとウイルスチミジンキナーゼ（ＴＫ）及びホスホトランスフェラーゼ（ＰＴ）の発現を含めたＥＢＶ溶菌抗原発現が用量依存的に誘導されることが判明している。アザシチジンの２４時間処理により細胞株が試験した全てのヌクレオシドに対して中程度に感作した。２つのＥＢＶ ＴＫ発現クローンはコントロールクローンに比して高用量（６２．５〜５００μＭ）のアシクロビル及びペンシクロビル（ＰＣＶ）、低用量（１０〜１００μＭ）のガンシクロビル（ＧＣＶ）及びブロモビニルデオキシウリジン（ＢＶｄＵ）に対して中程度に感受性であり、ＧＣＶをリン酸化することが判明した。一時的過剰発現系における同様の実験で、コントロールの変異体ベクター（５０μＭ ＧＣＶを４日間）をトランスフェクトした細胞よりもＥＢＶ ＴＫ発現ベクターをトランスフェクトした細胞はより多く死滅することが判明した（Ｓ．Ｍ．Ｍｏｏｒｅ，Ｊ．Ｓ．Ｃａｎｎｏｎ，Ｙ．Ｃ．Ｔａｎｈｅｈｃｏ，Ｆ．Ｍ．Ｈａｍｚｅｈ，Ｒ．Ｆ．Ａｍｂｉｎｄｅｒ，“腫瘍細胞をヌクレオシドアナログに対して感作させるためのエプスタイン−バーウイルスキナーゼの誘導（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｋｉｎａｓｅｓ ｔｏ ｓｅｎｓｉｔｉｚｅ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ａｎａｌｏｇｕｅｓ）”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４５（７）：２０８２−９１（２００１））。
ヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ−８）がヌクレオシドアナログのガンシクロビル（ＧＣＶ）に対して感受性であることから、ＧＣＶの初期リン酸化を触媒するウイルスがコードするキナーゼの存在が示唆される。ヌクレオシドアナログのガンシクロビル（ＧＣＶ）に対して感受性を示すＨＨＶ−８ゲノムの分析から、ＧＣＶの初期リン酸化を触媒する２つの潜在的にウイルスコード化キナーゼ、すなわちヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＴＫ）に相同のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）２１によりコードされるタンパク質及びヘルペスウイルスホスホトランスフェラーゼ（ＰＴ）に相同のＯＲＦ３６によりコードされるタンパク質が同定された。ＯＲＦ２１もＯＲＦ３６もＧＣＶリン酸化及びＧＣＶ媒介細胞死で立証されるようにＧＣＶキナーゼ活性をコードする。両方に関して、ＰＴホモログＯＲＦ３６はＴＫホモログＯＲＦ２１よりも高活性であった。ＯＲＦ３６ではなく、ＯＲＦ２１はペンシクロビルに対する死滅に対して細胞を弱くしか感作しなかった（Ｊ．Ｓ．Ｃａｎｎｏｎ，Ｆ．Ｈａｍｚｅｈ，Ｓ．Ｍｏｏｒｅ，Ｊ．Ｎｉｃｈｏｌａｓ，Ｒ．Ｆ．Ａｍｂｉｎｄｅｒ，“ヒトヘルペスウイルス８−コード化チミジンキナーゼ及びホスホトランスフェラーゼホモログはガンシクロビルに対する感受性を付与する（Ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ８−ｅｎｃｏｄｅｄ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ ｃｏｎｆｅｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７３（６）：４７８６−９３（１９９９））。
ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）のＵ６９オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）によりコードされるタンパク質はタンパク質キナーゼであると予想されている。Ｕ６９ ＯＲＦが組換えバキュロウイルス（ＢＶ６ＡＵ６９及びＢＶ６ＢＵ６９）を用いることによりＨＨＶ−６変異体Ａ及びＢから発現された。これらのタンパク質を精製し、［γ−３２Ｐ］ＡＴＰとインキュベートすると両Ｕ６９タンパク質は主にセリン残基でリン酸化されるようになった。これらのデーターは、Ｕ６９が自己リン酸化するタンパク質キナーゼであることを強く示唆する。Ｕ６９は、抗ウイルス薬のガンシクロビル（ＧＣＶ）をリン酸化することが判明しているヒトサイトメガロウイルスによりコードされるＵ９７遺伝子のホモログである。Ｕ６９ ＯＲＦだけがバキュロウイルスＢＶ６ＡＵ６９及びＢＶ６ＢＵ６９に対してＧＣＶ感受性を付与できることが判明している（Ａ．Ａｎｓａｒｉ，Ｖ．Ｃ．Ｅｍｅｒｙ，“ヒトヘルペスウイルス６のＵ６９遺伝子はバキュロウイルスに対してガンシクロビル感受性を付与できるタンパク質キナーゼをコードする（Ｔｈｅ Ｕ６９ ｇｅｎｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ６ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｃｏｎｆｅｒ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７３（４）：３２８４−９１（１９９９））。
関連γ−ヘルペスウイルスＨＨＶ８はエプスタイン−バーウイルスに対する類似の基質特異性でチミジンキナーゼを発現する（Ｅ．Ａ．Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ，Ｒ．Ｆ．Ｓｃｈｉｎａｚｉ，Ｊ．Ｄ．Ｆｉｎｇｅｒｏｔｈ，“ヒトヘルペスウイルス８オープンリーディングフレーム２１は効果的にジドブジンをリン酸化するがガンシクロビルをリン酸化しない狭い基質特異性を有するチミジン及びチミジレートキナーゼである（Ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｒｖｉｒｕｓ ８ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ２１ ｉｓ ａ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ ｋｉｎａｓｅ ｏｆ ｎａｒｒｏｗ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｈａｔ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｓ ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７４：６８４−６９２（２０００））。このウイルスは現在文献中でＫＨＳＶと称されている。また、Ｓ．Ｍ．Ｍｏｏｒｅ．Ｊ．Ｓ．Ｃａｎｎｏｎ，Ｙ．Ｃ．Ｔａｎｈｅｈｃｏ，Ｆ．Ｍ．Ｈａｍｚｅｈ，Ｒ．Ｆ．Ａｍｂｉｎｄｅｒ，“腫瘍細胞をヌクレオシドアナログに対して感作させるためのエプスタイン−バーウイルスキナーゼの誘導（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｋｉｎａｓｅｓ ｔｏ ｓｅｎｓｉｔｉｚｅ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ａｎａｌｏｇｕｅｓ）”，Ａｎｔｉｍｉｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４５（７）：２０８２−９１（２００１）；Ａ．Ａｎｓａｒｉ，Ｖ．Ｃ．Ｅｍｅｒｙ，“ヒトヘルペスウイルス６のＵ６９遺伝子はバキュロウイルスに対してガンシクロビル感受性を付与し得るタンパク質キナーゼをコードする（Ｔｈｅ Ｕ６９ ｇｅｎｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ６ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｃｏｎｆｅｒ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７３（４）：３２８４−９１（１９９９）；Ｊ．Ｓ．Ｃａｎｎｏｎ，Ｆ．Ｈａｍｚｅｈ，Ｓ．Ｍｏｏｒｅ，Ｊ．Ｎｉｃｈｏｌａｓ，Ｒ．Ｆ．Ａｍｂｉｎｄｅｒ，“ヒトヘルペスウイルス８コード化チミジンキナーゼ及びホスホトランスフェラーゼホモログはガンシクロビルに対して感受性を付与する（Ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ８−ｅｎｃｏｄｅｄ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ ｃｏｎｆｅｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７３（６）：４７８６−９３（１９９９）；Ｖ．Ｃ．Ｅｍｅｒｙ，Ｐ．Ｄ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，“抗ウイルス化学療法後のサイトメガロウイルス負荷及び耐性パターンの予測（Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｌｏａｄ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｐａｔｔｅｒｎｓ ａｆｔｅｒ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９７（１４）：８０３９−４４（２０００））を参照されたい。
従って、本発明の１つの目的は、ＥＢＶ（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）に感染している宿主、特にヒト患者または他の宿主動物を治療または予防するための化合物、組成物及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、ＥＢＶ（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）の溶菌複製を伴う疾患を患っている宿主、特にヒト患者または他の宿主動物を治療または予防するための化合物、組成物及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、ＥＢＶ（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）に感染している異常増殖細胞を伴う疾患を患っている宿主、特にヒト患者または他の宿主動物を治療または予防するための化合物、組成物及び方法を提供することである。
本発明の別の目的は、遺伝子治療に使用され得る細胞株、特にＥＢＶ−ＴＫまたは関連γ−ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＫＨＳＶ−ＴＫ）をトランスフェクトした細胞株を提供することである。
本発明の更なる目的は、エプスタイン−バーウイルスに関連する癌または感染を呈している宿主、特にヒト患者または他の宿主動物の遺伝子治療のための化合物、組成物及び方法を提供することである。
最後に、本発明の目的は、導入細胞株を用いて異常細胞増殖を減ずる際の化合物及び／または組成物の効果を評価するためのキット及びアッセイを提供することである。
特定の５−置換ウラシルヌクレオシドはＥＢＶチミジンキナーゼ及び／またはＫＨＳＶチミジンキナーゼにより選択的にリン酸化されるが、ヒト細胞チミジンキナーゼによっては実質的にリン酸化されないことを知見した。従って、この知見及び他の所見に基づいて、本発明の幾つかの態様が提供される。
（ｉ）場合により医薬的に許容され得る担体中に含まれる１つ以上の本明細書に記載の５−置換ウラシルヌクレオシド、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを有効量投与することを含むＥＢＶまたはＫＨＳＶ陽性である細胞の異常細胞増殖または異常細胞疾患を有している宿主の治療方法。この実施態様では、宿主細胞ポリメラーゼに対する基質である５−置換ウラシルヌクレオシドが選択される。ウラシルヌクレオシドを細胞に投与したとき、該ヌクレオシドはウイルスチミジンキナーゼにより選択的にリン酸化され、その後細胞ポリメラーゼの作用により細胞ＤＮＡに取り込まれ、増殖が低下または停止する。これにより細胞修復メカニズムが開始し得、よってアポトーシスが生ずる。この代替または追加態様では、ウラシルヌクレオシドはチミジレートシンターゼの阻害剤として作用し得る。この方法は、腫瘍または癌増殖を含めた異常細胞増殖または疾患を治療するために使用し得、前記異常細胞はＥＢＶゲノムを含む。治療可能な疾患の例にはバーキットリンパ腫、鼻咽腔癌、Ｔ細胞免疫低下患者、移植レシピエント、ＨＩＶ感染患者や先天性免疫不全症の小児におけるようなＢ細胞リンパ増殖性疾患／リンパ腫（ＢＬＰＤ）、（腎臓を含めた）移植後に起こるＥＢＶ誘導ポリクローナル及びモノクローナルＢ細胞リンパ増殖性疾患、ホジキン病、Ｔリンパ腫及びまれなＮＫ／単球／樹状細胞悪性疾患、散発性上皮癌、免疫不全患者における平滑筋肉腫及び免疫低下患者における多中心性平滑筋肉腫が含まれる。ＫＨＳＶゲノムを有する異常細胞にはカポジ感染細胞、原発性滲出性リンパ腫（通常ＫＨＳＶ及びＥＢＶの両方を有する）、多中心性キャッスルマン病（通常ＫＨＳＶ感染した形質芽球変異体）及びゲルマニウム栄養性（ｇｅｒｍａｎｏｔｒｏｐｈｉｃ）リンパ腫が含まれる。
（ｉｉ）場合により医薬的に許容され得る担体中に含まれる１つ以上の本明細書に記載の５−置換ウラシルヌクレオシド、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを有効量投与することを含むＥＢＶまたはＫＨＳＶ感染を有している宿主を治療するための方法、使用、化合物及び組成物。この実施態様では、ウラシルヌクレオシドは細胞に対して投与され、ウイルスチミジンキナーゼにより選択的にリン酸化され、１つ以上のウイルス酵素、例えばＥＢＶまたはＫＨＳＶポリメラーゼの阻害剤として作用する。この実施態様では、５−置換ウラシルヌクレオシドはウイルス増殖の競合阻害剤として作用する。この実施態様で治療可能な疾患の例には、併発急性感染性単核細胞症を含めた単核細胞症（循環血液中で単核に類似している大型リンパ球を過剰に生成するＥＢＶに起因する疾患）、口腔毛状白斑、宿主がＥＢＶ関連リンパ腫に発症しやすくなり得る環境である医原性免疫抑制後のＥＢＶ溶菌複製の減少、及び他のウイルス感染の他の発症が含まれる。
（ｉｉｉ）ＥＢＶまたはＫＨＳＶ陰性である細胞の異常細胞増殖または異常細胞疾患を有している宿主を治療するための方法、使用、化合物及び組成物。この実施態様では、ＥＢＶ−チミジンキナーゼまたはＫＨＳＶ−チミジンキナーゼ遺伝子を遺伝子が正常な細胞核酸に導入されるように異常細胞またはその周囲に直接投与される。その後、ウイルスチミジンキナーゼは宿主細胞において発現し、別に投与された５−置換ウラシルヌクレオシドをリン酸化するように作用する。その後治療は上記（ｉ）に記載したように進む。
診断されたホジキン病の半分以上がＥＢＶに関連しすること及び実質的にリンパ増殖性疾患がＨＩＶ感染患者に関連していることは特に注目されたい。本明細書に記載されているウラシルヌクレオシドの一部はＨＩＶに対しても活性を有し、よってＨＩＶ感染及びリンパ増殖性疾患を呈している患者を治療するために使用され得る。
本発明の１実施態様において、特定化合物は式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
Figure 2005528334
 を有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。上記式中、
ｉ）ＸはＯ、Ｓ、ＮＲ４、ＣＨ２、ＣＨＦまたはＣＦ２であり、
ｉｉ）Ｒ１は水素、ハロゲン（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，Ｆ）、アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、ハロアルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、ハロアルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、ハロアルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、シクロアルキル（Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７及びＣ８を含む）、ＣＮ、ＣＦ３、Ｎ３、ＮＯ２、アリール（Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９及びＣ１０を含む）、ヘテロアリール（Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９及びＣ１０を含む）、アシル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、またはＣＯＲ５｛ここで、Ｒ５はＨ、ＯＨ、ＳＨ、アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アミノアルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルコキシ（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）またはチオアルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）から選択される｝であり、
ｉｉｉ）Ｒ２及びＲ２’は独立してＨ；アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）またはアリール（Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９及びＣ１０を含む）で置換されたカルボニル；フェニル基が場合により１つ以上の置換基で置換されていてもよいベンジル；ホスフェート（モノホスフェート、ジホスフェート、トリホスフェートまたは安定化ホスフェートプロドラッグを含む）；ホスフェートエステル；メタンスルホニルのようなアルキルまたはアリールアルキルスルホニルを含めたスルホネートエステル；リン脂質を含めた脂質；アミノ酸；ペプチド；コレステロール；または好ましくはインビボで投与したときにＲ２及び／またはＲ２’が独立してＨである化合物を生じ得るような他の医薬的に許容され得る離脱基であり、
ｉｖ）Ｒ３はＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｃｒ，Ｉ）、保護ヒドロキシ基またはＣＨ２ＯＲ４から選択され、
ｖ）各Ｒ４は独立してＨ、アシル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、またはシクロアルキル（Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７及びＣ８を含む）であり、
ｖｉ）ＹはＨ、ＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ）、Ｎ３、ＣＮまたはＯＲ２’から選択され、
ｖｉｉ）ＺはＯ、Ｓ、アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、ＣＨ２、ＣＨＦまたはＣＦ２である。
本発明の化合物はβ−Ｌまたはβ−Ｄ立体配置の形態であっても、ラセミ混合物を含めた２つの立体配置の混合物の形態であってもよい。
Ｒ２及びＲ２’は独立して水素、またはインビボで投与したときにＲ２及び／またはＲ２’が独立してＨである化合物を生じ得る医薬的に許容され得る離脱基である。例えば、Ｒ２及びＲ２’は独立して水素であるか、またはアルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アリール（Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９及びＣ１０を含む）で置換されたカルボニル；フェニル基が場合により細胞エステラーゼにより開裂され得る１つ以上の置換基で置換されていてもよいベンジルを含めたアシルであり得る。或いは、Ｒ２及びＲ２’は独立して水素であるかまたは酸または塩基不安定性離脱基であり得、ホスフェート（モノホスフェート、ジホスフェート、トリホスフェートまたは安定化ホスフェートプロドラッグを含む）；ホスフェートエステル；メタンスルホニルのようなアルキルまたはアリールアルキルスルホニルを含めたスルホネートエステル；リン脂質を含めた脂質；アミノ酸；ペプチドまたはコレステロールのような酸不安定性離脱基が好ましい。好ましい実施態様では、Ｒ２及び／またはＲ２’は独立して水素、またはインビボで投与したときにＲ２及び／またはＲ２’が独立してＨである化合物を生じ得る、特定化合物の活性、バイオアベイラビリティー及び／または安定性を増加させる基である。
特定ウラシルヌクレオシド誘導体は当業者に公知の合成方法により製造される。前記誘導体の幾つかを以下に記載する。
１つの好ましい実施態様では、β−Ｄ−２−デオキシ−５−ビニルウリジン（５−ビニル−ｄＵとも呼ぶ）を投与する。この化合物はＥＢＶ−ＴＫに対して選択性を示す。すなわち、ＥＢＶ−ＴＫにより特異的にリン酸化され、細胞毒性剤に変換される。特定化合物の別の具体例には、０．６１μＭのＥＣ５０でヒト免疫不全ウイルスタイプ１に対しても活性であるβ−Ｄ−２’−デオキシ−５−エチニルウリジン（５−エチニル−ｄＵ）が含まれる。
他の好ましい実施態様では、特定化合物はβ−Ｌ−２’−デオキシ−５−ビニルウリジン、β−Ｌ−５−ビニルウリジン、β−Ｌ−２’−デオキシ−５−ヨードウリジン、β−Ｄ−２’−デオキシ−５−（ヒドロキシメチル）ウリジン、β−Ｄ−５−ブチル−２’−デオキシウリジン、β−Ｄ−５−Ｅ−（２−カルボキシビニル）−２’−デオキシウリジン、（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル、（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモ−２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル、（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−チエニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル、（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモチエン−２−イル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル及び（２Ｓ，４Ｓ）−５−（３−ヒドロキシプロペニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである。これらの化合物はＥＢＶ−ＴＫに対して選択性を示す。すなわち、ＥＢＶ−ＴＫにより特異的にリン酸化され、細胞毒性剤に変換される。
別の実施態様では、本発明の治療はＥＢＶまたはＫＨＳＶ感染細胞に対する他の公知であるかまたは開発された治療を併用でまたは交互に使用する。その治療には、場合により酪酸アルギニンと併用されるガンシクロビル、バラシクロビル（Ｖａｌｔｒｅｘ）、ＥＢＶ感染細胞を殺すために実験室で処理されたドナー白血球、エプスタイン−バーウイルスに対して免疫性のあるドナーからの白血球、ＬＦＭＡＵ、及び米国特許第５，７９２，７７３号明細書、同第６，０２２，８７６号明細書及び同第６，２７４，５８９号明細書（エール大学及びＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｏｒｇｉａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．）に記載されている化合物が含まれるが、これらに限定されない。
遺伝子治療
本発明は、ＥＢＶ−ＴＫまたはＫＨＳＶ−ＴＫ遺伝子治療と本明細書に記載されている特定のウラシルヌクレオシド誘導体を用いる自殺遺伝子治療を包含する。ＥＢＶ−ＴＫまたはＫＨＳＶ−ＴＫ遺伝子は治療しようとする異常細胞増殖または疾患の範囲内及びそれを取り巻く領域に送達され、細胞により吸収され、細胞核酸に取り込まれ得る。その後、ウイルスは別に投与されたウラシルヌクレオシドをリン酸化するウイルスチミジンキナーゼを発現する。リン酸化ウラシルヌクレオシドを局所的に高レベルで生成させることによりバイスタンダー効果を達成し得る。このバイスタンダー効果のために、この治療は１０％くらいの少数しかＴＫ発現細胞を含んでいない腫瘍細胞を破壊するのに有効である。容易に複製する隣接細胞は細胞毒性リン酸化ヌクレオシドを吸収する。ＥＢＶ−ＴＫまたはＫＨＳＶ−ＴＫ遺伝子は更に異常細胞を放射線に対して感作し、このことから進行癌をコントロールするための可能な併用療法が示唆される。
よって、ＧＣＶ−ＨＳＶ−ＴＫ遺伝子治療と同様に、特定ヌクレオシドアナログ及びＥＢＶ−ＴＫを用いる遺伝子治療はＥＢＶ、ＥＢＶ関連疾患及びＥＢＶ−ＴＫをコードする遺伝子をトランスフェクトした癌細胞の治療において使用し得る。ヌクレオシドアナログがこれらのＥＢＶ−ＴＫ発現細胞によりリン酸化されると、ヌクレオシドトリホスフェートはその毒性を示し、トランスフェクトした癌または腫瘍細胞が死に至る。
ＥＢＶ−ＴＫまたはＫＨＳＶ−ＴＫの量は潜伏感染している細胞またはトランスフェクト細胞において酵素の発現を増加させる化合物を投与することにより増量され得る。化合物の例は腫瘍プロモーター（１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート）ＰＭＡ／ＴＰＡ及び極性有機化合物の酪酸ナトリウム（ＮａＢ）である。別の実施態様では、酪酸アルギニン（ＡｒｇＢ）が投与される。他の誘導剤にはアザシチジン、ヒドロキシウレア、インターフェロン、γ線、レチン酸及び関連レチノイドが含まれるが、これらに限定されない。
別の態様では、ＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトした細胞及びその遺伝子治療での使用も提供される。例えば、有効治療のために宿主中の問題の場所に最適に指向する細胞が選択され得る。細胞治療は自己または異種であり得る。自己治療では、宿主自身の細胞を取り出し、以下に詳記されているかまたは当業界で公知のようにＥＢＶ−ＴＫまたはＫＨＳＶ−ＴＫをトランスフェクトし、その後宿主に戻す。異種治療では第三者のドナー細胞に問題の遺伝子をトランスフェクトした後治療を要する宿主に移植する。
ＥＢＶ−ＴＫまたはＨＨ８Ｖ−ＴＫ遺伝子をトランスフェクトした細胞は宿主に移植後酵素を発現する。ウイルスチミジンキナーゼは細胞移植の前、その間及び／またはその後に投与されたウラシルヌクレオシドに対する選択的リン酸化剤として作用し、最後にトリリン酸化された形態でＥＢＶまたはＫＨＳＶ増殖を抑制する。こうすると、細胞感染の種類に関係なくＥＢＶゲノムを含み、発現する細胞に対して治療効果が発揮される。ＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトした細胞株はスクリーニング及び細胞毒性アッセイにおいて使用し得る。宿主動物に対して生物学的悪影響を与えないＥＢＶ−ＴＫまたはＫＨＳＶ−ＴＫ遺伝子をトランスフェクトした細胞を本発明の遺伝子治療において使用し得る。
非限定的例として、ウイルス株Ｂ−９８５由来のエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子をＥ．Ａ．Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ，Ａ．Ｃ．Ｃｈｉｌｌｅｍｉ，Ｄ．Ｒ．Ｓａｇｅ，Ｊ．Ｄ．Ｆｉｎｇｅｒｏｔｈ，“エプスタイン−バーウイルスチミジンキナーゼはガンシクロビルまたはアシクロビルをリン酸化せず、単純ヘルペスウイルスタイプ１チミジンキナーゼと比較して狭い基質特異性を示す（Ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｏｒ ａｃｙｃｌｏｖｉｒ ａｎｄ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ ａ ｎａｒｒｏｗ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４２（１１）：２９２３−３１（１９９８）に記載されているようにベクターｐＣＭＶにクローン化した。その後、ベクターをリポフェクタミン試薬を用いて２つのヒト細胞株にトランスフェクトした。細胞を選択し、ＴＫ遺伝子（ＲＮＡ及びタンパク質）の発現を調べた。この細胞は細胞を候補ヌクレオチドアナログに感作させるＥＢＶ−ＴＫの能力を評価するための２つのアッセイ系を作成するために使用した。ＫＨＳＶ−ＴＫを発現した細胞もアッセイのために同様に作成された。
別の非限定例として、不死化ヒト胚腎臓細胞（２９３細胞）を２９３ ＥＢＶ−ＴＫ細胞及び２９３ ＫＨＳＶ−ＴＫ細胞を作成するために使用した。２９３細胞にｐＣＭＶ ＥＢＶ−ＴＫ及びｐＳＶ２ ｎｅｏを同時トランスフェクトし、２９３ ＫＨＳＶ−ＴＫ細胞は同様にベクターｐＣＭＶ ＫＨＳＶ−ＴＫｓとｐＳＶ２ ｎｅｏ（同時トランスフェクション）を用いて、または１つのベクターｐｃＤＮＡ３−ＫＨＳＶ−ＴＫ（内因性選択可能なｎｅｏマーカーを含む）を用いて作成された。細胞を選択し、ＲＮＡブロットハイブリダイゼーションによりＫＨＳＶ−ＴＫを発現することが示された。
陽性ＥＢＶ−ＴＫクローンをバルク集団を作成するためにプールし、候補ヌクレオシドアナログをスクリーニングするための細胞毒性アッセイにおいて使用した。２つの細胞株を各ヌクレオシドの毒性を測定するための細胞毒性アッセイにおいて使用する。得られる情報は使用した系に依存している。１４３Ｂ ＴＫ細胞において、ＴＫによるリン酸化に依存する細胞毒性剤が容易に同定される。ＥＢＶ−ＴＫまたはｈＴＫ１を発現する１４３Ｂ ＴＫ細胞により、いずれの酵素が薬物を細胞毒性とし得るかどうかが評価できる。よって、非特異的細胞毒性を生じさせるｈＴＫ１により活性化され得る薬物が容易に同定されるけれども、これらの細胞はＴＫサルベージ経路（ＥＢＶ−ＴＫまたはｈＴＫ１）を介してヌクレオシドを強制し、偽陽性の可能性を与えるＨＡＴ培地で増殖させる。２９３細胞は内因性ｈＴＫ１を有し、ＥＢＶ−ＴＫはＧ４１８における選択により維持される。よって、正常なｈＴＫ１サルベージ経路は作動し、ヌクレオシドは細胞中を正常に流動すると予想され得る。薬物を、ネオマイシン（Ｎｅｏ）発現プラスミド（Ｎｅｏコントロール）及びＥＢＶ−ＴＫをも発現する同一プラスミドをトランスフェクトした細胞で形質転換した２９３細胞とインキュベートする。ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化されるヌクレオシドは２９３ ＥＢＶ−ＴＫに対して毒性を生じさせるが、２９３ Ｎｅｏコントロール細胞に対して毒性を生じさせてはならない。１４３Ｂ及び２９３細胞系において、毒性を細胞生存により評価する。
トランスフェクトした細胞株を使用し得るアッセイの例は２９３トランスフェクタントを用いて行われるコロニー形成アッセイである。このアッセイは、ＧＣＶに関して記載されているように（Ｌ．Ｚ．Ｒｕｂｓａｍ，Ｂ．Ｌ．Ｄａｖｉｄｓｏｎ及びＤ．Ｓ．Ｓｈｅｗａｃｈ，“単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ発現細胞におけるアシクロビル及び１−β−Ｄ−アラビノフラノシルチミンと比較したガンシクロビルを用いる優れた細胞毒性：細胞死滅に対する新規範例（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｗｉｔｈ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｙｃｌｏｖｉｒ ａｎｄ １−ｂｅｔａ−Ｄ−ａｒａｂｉｎｏｆｕｒａｎｏｓｙｌｔｈｙｍｉｎｅ ｉｎ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｃｅｌｌｓ： ａ ｎｏｖｅｌ ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｋｉｌｌｉｎｇ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５８（１７）：３８７３−８２（１９９８））、致死的病巣を形成する細胞ＤＮＡに取り込むために毒性を有するヌクレオシドを同定するために設計されている。前記毒性は薬物に対する一定暴露に依存せず、ｌｏｇ相増殖中の薬物に対する暴露だけに依存する。鎖停止または代謝経路における酵素阻害のような各種メカニズムにより作用するヌクレオシドはしばしば細胞増殖抑制性のみであり、細胞は薬物を除去後正常成長に戻り得る。このアッセイは細胞をｌｏｇ増殖で曝し、その後固定する。効果的に働くヌクレオシドにより、コロニーの数が低下する。コロニーの数は薬物を最初に接触した後生存及び複製し得る細胞の数の直接指標である。
（発明の詳細な説明）
特定の５−置換ウラシルヌクレオシドがＥＢＶチミジンキナーゼ及び／またはＫＨＳＶチミジンキナーゼにより選択的にリン酸化されるが、ヒト細胞チミジンキナーゼによっては実質的にリン酸化されないことが知見された。ＥＢＶ−ＴＫはチミジン及び幾つかのチミジンアナログをリン酸化する能力を有する厳密にチミジンキナーゼである。ＨＳＶ１−ＴＫとガンシクロビル（ＧＣＶ）の組合せと同様に、特定の５−置換ウラシルヌクレオシドはＥＢＶ−ＴＫ発現細胞を効果的に死滅させるが、前記酵素を発現しない細胞を死滅させない。本発明の１実施態様では、このヌクレオシドアナログは、ＥＢＶ−ＴＫによる選択的なリン酸化及び細胞ポリラーゼまたはトランスクリプターゼに対する化合物の特異性に応じて細胞に対して条件付きで毒性である。前記毒性により、ＥＢＶ−ＴＫを発現する腫瘍細胞が選択的に破壊されるが、ヒトＴＫ−１または−２或いは他のヒトヌクレオシドキナーゼまたはヌクレオチドキナーゼを破壊しない。明らかに、これによりウイルス複製サイクルを選択的に妨害するが細胞のウイルス複製サイクルには干渉しない従来の抗ウイルスヌクレオシドアナログと区別される。
本発明の幾つかの実施態様を示す：
（ｉ）場合により医薬的に許容され得る担体中に含まれる１つ以上の本明細書に記載の５−置換ウラシルヌクレオシド、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを有効量投与することを含むＥＢＶまたはＫＨＳＶ陽性である細胞の異常細胞増殖または異常細胞疾患を有している宿主の治療方法；
（ｉｉ）場合により医薬的に許容され得る担体中に含まれる１つ以上の本明細書に記載の５−置換ウラシルヌクレオシド、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを有効量投与することを含むＥＢＶまたはＫＨＳＶ感染を有している宿主を治療するための方法、使用、化合物及び組成物。この実施態様では、ウラシルヌクレオシドは細胞に対して投与され、ウイルスチミジンキナーゼにより選択的にリン酸化され、その後１つ以上のウイルス酵素、例えばＥＢＶまたはＫＨＳＶポリメラーゼの阻害剤として作用する。この実施態様では、５−置換ウラシルヌクレオシドはウイルス増殖の競合阻害剤として作用する；
（ｉｉｉ）ＥＢＶまたはＫＨＳＶ陰性である細胞の異常細胞増殖または異常細胞疾患を有している宿主を治療するための方法、使用、化合物及び組成物。この実施態様では、ＥＢＶ−チミジンキナーゼまたはＫＨＳＶ−チミジンキナーゼ遺伝子を遺伝子が天然細胞核酸に取り込まれるように異常細胞またはその周囲に直接投与される。その後、ウイルスチミジンキナーゼは宿主細胞において発現し、別に投与された５−置換ウラシルヌクレオシドをリン酸化するように作用する。その後治療は上記（ｉ）に記載したように進む。
本発明の１実施態様では、腫瘍細胞は既にＥＢＶ−ＴＫを発現しており、よってＨＳＶ１−ＴＫ及びＧＣＶ系とは異なり遺伝子送達を必要としない。
従って、本発明は、宿主、特にヒト患者または他の宿主動物においてＥＢＶ感染細胞の異常増殖を伴う疾患を含めたエプスタイン−バーウイルス（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）の感染または溶菌複製を伴う疾患を治療、抑制または予防するための化合物、医薬組成物及び方法を提供し、その方法は、場合により医薬的に許容され得る担体または賦形剤中に含まれる有効量の少なくとも１つの本発明の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを投与することを含む。
別の態様で、本発明は、宿主、特にヒト患者または他の宿主動物においてＥＢＶ感染細胞の異常増殖を伴う疾患を含めたエプスタイン−バーウイルス（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）の感染または溶菌複製を伴う疾患を治療、抑制及び／または予防するための医薬組成物を提供し、その方法は、場合により医薬的に許容され得る担体または賦形剤中に含まれる有効量の少なくとも１つの本発明の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグと共に、１つ以上の他の有効な抗−ＥＢＶ剤及び／またはＥＢＶ−ＴＫ発現を誘導及び／またはアップレギュレートし得る物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを投与することを含む。
更に別の態様で、本発明は、宿主、特にヒト患者または他の宿主動物においてＥＢＶ感染細胞の異常増殖を伴う疾患を含めたエプスタイン−バーウイルス（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）の感染または溶菌複製を伴う疾患を治療、抑制及び／または予防するための方法を提供し、その方法は場合により医薬的に許容され得る担体または賦形剤中に含まれる有効量の少なくとも１つの本発明の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを、場合により１つ以上の他の有効な抗−ＥＢＶ剤及び／またはＥＢＶ−ＴＫ発現を誘導及び／またはアップレギュレートし得る物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグと併用または交互投与で投与することを含む。
更に別の態様で、本発明は、宿主、特にヒト患者または他の宿主動物におけるＥＢＶ感染を治療、抑制及び／または予防するための、場合により１つ以上の他の有効な抗−ＥＢＶ剤及び／またはＥＢＶ−ＴＫ発現を誘導及び／またはアップレギュレートし得る物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグと併用または交互投与での、場合により医薬的に許容され得る担体または賦形剤中に含まれる少なくとも１つの本発明の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグの使用を提供する。
更に別の態様で、本発明は、宿主、特にヒト患者または他の宿主動物においてＥＢＶ感染細胞の異常増殖を伴う疾患を含めたエプスタイン−バーウイルス（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）の感染または溶菌複製を伴う疾患を治療、抑制及び／または予防するための、場合により１つ以上の他の有効な抗−ＥＢＶ剤及び／またはＥＢＶ−ＴＫ発現を誘導及び／またはアップレギュレートし得る物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグと併用または交互投与での、場合により医薬的に許容され得る担体または賦形剤中に含まれる少なくとも１つの本発明の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグの使用を提供する。
更に別の態様で、本発明は、宿主、特にヒト患者または他の宿主動物においてＥＢＶゲノムを有する細胞の異常増殖を伴う疾患を含めたエプスタイン−バーウイルス（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）の感染または溶菌複製を伴う疾患を治療、抑制及び／または予防するための薬剤の製造における、場合により１つ以上の他の有効な抗−ＥＢＶ剤及び／またはＥＢＶ−ＴＫ発現を誘導及び／またはアップレギュレートし得る物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグと併用または交互投与での、場合により医薬的に許容され得る担体または賦形剤中に含まれる少なくとも１つの本発明の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグの使用を提供する。
本発明の追加実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトした細胞株を提供する。本発明の別の実施態様で、宿主、特にヒト患者または他の宿主動物においてＥＢＶ感染細胞の異常増殖を伴う疾患を含めたエプスタイン−バーウイルス（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）の感染または溶菌複製を伴う疾患を治療、抑制及び／または予防するためのＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトした細胞株の使用を提供し、１つ以上の他の有効物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグと併用または交互投与で、場合により医薬的に許容され得る担体または賦形剤中に含まれる有効量のＥＢＶ−ＴＫにより選択的に細胞毒性物質に活性化される物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを有効量前記細胞に投与することを含む。本発明の好ましい実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質は本発明の化合物である。本発明の１実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質との併用または交互投与で投与される有効物質は有効な抗増殖剤である。本発明の追加実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたはその交互投与で投与される有効物質は有効な抗−ＥＢＶ剤であり、特にＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質である。本発明の別の実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用または交互投与で投与される有効物質はＥＢＶ−ＴＫ発現を誘導及び／またはアップレギュレートし得る有効物質である。
従って、ＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトした細胞を用いる異常細胞増殖の抑制を検出するためのアッセイ及びキットをも提供する。本発明の別の実施態様で、ＥＢＶ−ＴＫが細胞キナーゼのようなヌクレオシドアナログ基質を利用し、修飾する可能性があるウイルス及び細胞酵素と独立して、または一緒に発現される細胞における所望細胞毒性及びウイルス毒性活性を分析し、予測するアッセイ及びキットが提供される。
宿主、特にヒト患者または他の宿主動物においてＥＢＶ感染細胞の異常増殖を伴う疾患を含めたエプスタイン−バーウイルス（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）の感染または溶菌複製を伴う疾患を治療、抑制及び／または予防するための方法が提供され、その方法は所要により細胞にＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトし、場合により医薬的に許容され得る担体または賦形剤中に含まれる有効量のＥＢＶ−ＴＫにより選択的に細胞毒性物質に活性化される物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを、場合により１つ以上の他の有効物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグと併用でまたは交互に投与することを含む。本発明の好ましい実施態様で、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質は本発明の化合物である。本発明の１実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質は有効な抗増殖剤である。本発明の追加実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質は有効な抗−ＥＢＶ剤であり、特にＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質である。本発明の別の実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質はＥＢＶ−ＴＫ発現を誘導及び／またはアップレギュレートし得る有効物質である。
更に別の実施態様で、本発明は、宿主、特にヒト患者または他の宿主動物においてＥＢＶ感染細胞の異常増殖を伴う疾患を含めたエプスタイン−バーウイルス（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）の感染または溶菌複製を伴う疾患を治療、抑制及び／または予防するための、場合により１つ以上の他の有効な物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグと併用または交互投与での、代替としての場合により医薬的に許容され得る担体または賦形剤中に含まれる少なくとも１つの本発明の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグの使用を提供する。本発明の好ましい実施態様で、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質は本発明の化合物である。本発明の１実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質は有効な抗増殖剤である。本発明の追加実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質は有効な抗−ＥＢＶ剤であり、特にＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質である。本発明の別の実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質はＥＢＶ−ＴＫ発現を誘導及び／またはアップレギュレートし得る有効物質である。
本発明の別の実施態様で、本発明は、宿主、特にヒト患者または他の宿主動物においてＥＢＶ感染細胞（この細胞には所要によりＥＢＶ−ＴＫがトランスフェクトされている）の異常増殖を伴う疾患を含めたエプスタイン−バーウイルス（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）の感染または溶菌複製を伴う疾患を治療、抑制及び／または予防するための薬剤の製造における、場合により１つ以上の他の有効物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグと併用でまたは交互投与での、場合により医薬的に許容され得る担体または賦形剤中に含まれる少なくとも１つの本発明の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグの使用を提供する。本発明の好ましい実施態様で、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質は本発明の化合物である。本発明の１実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質は有効な抗増殖剤である。本発明の追加実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質は有効な抗−ＥＢＶ剤であり、特にＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質である。本発明の別の実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質はＥＢＶ−ＴＫ発現を誘導及び／またはアップレギュレートし得る有効物質である。
本発明の別の実施態様で、本発明は、宿主、特にヒト患者または他の宿主動物においてＥＢＶ感染細胞の異常増殖を伴う疾患を含めたエプスタイン−バーウイルス（または、関連γ−ヘルペスウイルスＫＨＳＶ）の感染または溶菌複製を伴う疾患を治療、抑制及び／または予防するための薬剤の製造におけるＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトした細胞株の使用を提供し、この治療、抑制および／または予防は、場合により１つ以上の他の有効物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグと併用でまたは交互投与での、場合により医薬的に許容され得る担体または賦形剤中に含まれる有効量のＥＢＶ−ＴＫにより選択的に細胞毒性物質に活性化される物質、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを前記細胞株に投与することによる。本発明の好ましい実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質は本発明の化合物である。本発明の１実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質は有効な抗増殖剤である。本発明の追加実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質は有効な抗−ＥＢＶ剤であり、特にＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質である。本発明の別の実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化される物質と併用でまたは交互に投与される有効物質はＥＢＶ−ＴＫ発現を誘導及び／またはアップレギュレートし得る有効物質である。
Ｉ 特定化合物
本発明の１実施態様において、特定化合物は式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
Figure 2005528334
 を有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。上記式中、
ｉ）ＸはＯ、Ｓ、ＮＲ４、ＣＨ２、ＣＨＦまたはＣＦ２であり、
ｉｉ）Ｒ１は水素、ハロゲン（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，Ｆ）、アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、ハロアルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、ハロアルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、ハロアルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、シクロアルキル（Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７及びＣ８を含む）、ＣＮ、ＣＦ３、Ｎ３、ＮＯ２、アリール（Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９及びＣ１０を含む）、ヘテロアリール（Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９及びＣ１０を含む）、アシル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、またはＣＯＲ５｛ここで、Ｒ５はＨ、ＯＨ、ＳＨ、アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アミノアルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルコキシ（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）またはチオアルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）から選択される｝であり、
ｉｉｉ）Ｒ２及びＲ２’は独立してＨ；アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）またはアリール（Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９及びＣ１０を含む）で置換されたカルボニル；フェニル基が場合により１つ以上の置換基で置換されていてもよいベンジル；ホスフェート（モノホスフェート、ジホスフェート、トリホスフェートまたは安定化ホスフェートプロドラッグを含む）；ホスフェートエステル；スルホネートエステル（メタンスルホニルのようなアルキルまたはアリールアルキルスルホニルを含む）；リン脂質を含めた脂質；アミノ酸；ペプチド；コレステロール；またはインビボで投与したときにＲ２及び／またはＲ２’が独立してＨである化合物を生じ得る他の医薬的に許容され得る離脱基であり、
ｉｖ）Ｒ３はＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｃｒ，Ｉ）、保護ヒドロキシ基またはＣＨ２ＯＲ４から選択され、
ｖ）各Ｒ４は独立してＨ、アシル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）またはシクロアルキル（Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７及びＣ８を含む）であり、
ｖｉ）ＹはＨ、ＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ）、Ｎ３、ＣＮまたはＯＲ２’から選択され、
ｖｉｉ）ＺはＯ、Ｓ、ＮＯ２、アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）
、アルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、ＣＨ２、ＣＨＦまたはＣＦ２である。
本発明の化合物はβ−Ｌまたはβ−Ｄ立体配置をとっても、またはラセミ混合物の形態であってもよい。
本発明の１実施態様では、ＥＢＶ−ＴＫ（または、関連ＨＫＳＶ−ＴＫ）により選択的に活性化される化合物が望ましい。よって、Ｒ２及びＲ２’は独立して水素、またはインビボで投与したときにＲ２及び／またはＲ２’が独立してＨである化合物を生じ得る医薬的に許容され得る離脱基である。例えば、Ｒ２及びＲ２’は独立して水素、またはアルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルケニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アルキニル（Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５及びＣ６を含む）、アリール（Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９及びＣ１０を含む）で置換されたカルボニル；フェニル基が場合により１つ以上の細胞エステラーゼにより開裂され得る置換基で置換されていてもよいベンジルであり得る。或いは、Ｒ２及びＲ２’は独立して水素であるかまたは酸もしくは塩基不安定性離脱基（好ましくは、酸不安定性離脱基）、例えばホスフェート（モノホスフェート、ジホスフェート、トリホスフェートまたは安定化ホスフェートプロドラッグを含む）；ホスフェートエステル；スルホネートエステル（メタンスルホニルのようなアルキルまたはアリールアルキルスルホニルを含む）；脂質（リン脂質を含む）；アミノ酸；ペプチドまたはコレステロールであり得る。好ましい実施態様で、Ｒ２及び／またはＲ２’は独立して水素であるかまたはインビボで投与したときにＲ２及び／またはＲ２’が独立してＨである化合物を生じ得る特定化合物の活性、バイオアベイラビリティー及び／または安定性を増加させる基である。
１つの好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有するβ−Ｄ−２’−デオキシ−５−ビニルウリジン（５−ビニル−ｄＵとも呼ぶ）、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
追加の実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有するβ−Ｄ−２’−デオキシ−５−エチニルウリジン（５−エチニル−ｄＵとも呼ぶ）、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。この化合物は０．６１μＭのＥＣ５０を有するヒト免疫不全ウイルスに対する活性をも示す。
１つの好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有するβ−Ｌ−２’−デオキシ−５−ビニルウリジン、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
別の好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有するβ−Ｌ−５−ビニルウリジン、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
別の好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有するβ−Ｌ−２’−デオキシ−５−ヨードウリジン、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
別の好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有するβ−Ｄ−２’−デオキシ−５−（ヒドロキシメチル）ウリジン、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
１つの好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有するβ−Ｄ−５−ブチル−２’−デオキシウリジン、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
１つの好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有するβ−Ｄ−５−Ｅ−（２−カルボキシビニル）−２’−デオキシウリジン、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
１つの好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有する（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
１つの好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有する（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモ−２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
１つの好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有する（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−チエニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
１つの好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有する（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモチエン−２−イル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
１つの好ましい実施態様では、特定化合物は、構造式：
Figure 2005528334
 を有する（２Ｓ，４Ｓ）−５−（３−ヒドロキシプロペニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグである。
ＩＩ 定義
本明細書中、用語「独立して」は、独立して適用された変数が適用毎に独立して変わることを意味する。よって、Ｒ”ＸＹＲ”（式中、Ｒ”は独立して炭素または窒素である）のような化合物の場合、Ｒ”の両方が炭素であっても、Ｒ”の両方が窒素であっても、Ｒ”の一方が炭素でＲ”の他方が窒素であってもよい。
本明細書中、用語「エナンチオマー的に純粋」は、当該ヌクレオシドの１つのエナンチオマーを少なくとも約９５％、好ましくは約９７％、９８％、９９％または１００％含むヌクレオシド組成物を指す。
本明細書中、用語「実質的に含まない」または「実質的に非存在下」は、当該ヌクレオシドの指定エナンチオマーを少なくとも８５重量％または９０重量％、好ましくは９５〜９８重量％、更に好ましくは９９〜１００重量％含むヌクレオシド組成物を指す。好ましい実施態様では、本発明の方法及び化合物中その化合物は実質的にエナンチンマーを含まない。
同様に、用語「単離した」は、当該ヌクレオシドを少なくとも８５重量％または９０重量％、好ましくは９５〜９８重量％、更に好ましくは９９〜１００重量％含み、残りが他の化合物またはエナンチオマーからなるヌクレオシド組成物を指す。
本明細書中、用語「アルキル」は、特記しない限り、典型的にはＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９またはＣ１０の飽和の直鎖、分枝鎖または環状第１級、第２級または第３級炭化水素を指す。具体的には、メチル、トリフルオロメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、シクロペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、シクロヘキシル、シクロヘキシルメチル、３−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル及び２，３−ジメチルブチルが挙げられる。この用語には置換及び未置換のアルキル基が含まれる。アルキル基はヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、スルフェート、ホスホン酸、ホスフェートまたはホスホネートからなる群から選択される置換基で置換されていてもよく、所要により保護されていなくても、例えば参照により本明細書に含まれるとするＧｒｅｅｎｅら，「有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第２版（１９９１年）発行に教示されているように当業界で公知のように保護されていてもよい。
本明細書中、用語「低級アルキル」は、特記しない限りＣ１、Ｃ２、Ｃ３またはＣ４飽和直鎖、分枝鎖、または適当ならば環状（例えば、シクロアルキル）アルキル基を指し、置換及び未置換のいずれでもよい。本明細書中特記しない限り、アルキルが適当な基であるときには低級アルキルが好ましい。同様に、アルキルまたは低級アルキルが適当な基であるときには未置換のアルキルまたは低級アルキルが好ましい。
本明細書中、用語「アルキルアミノ」または「アリールアミノ」は、それぞれ１個または２個のアルキルまたはアリール置換基を有するアミノ基を指す。
本明細書中、用語「アルコキシ」は、アルキル部分を有する直鎖または分枝鎖オキシ含有基、例えばメトキシ基を指す。用語「アルコキシアルキル」は、モノアルコキシアルキル及びジアルコキシアルキル基を形成するようにアルキル基に結合して１個以上のアルコキシ基を有するアルキル基を包含する。「アルコキシ」基を更に１つ以上のハロ原子、例えばフッ素、塩素または臭素で置換して「ハロアルコキシ」基としてもよい。ハロアルコキシ基の例にはフルオロメトキシ、クロロメトキシ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ、フルオロエトキシ、テトラフルオロエトキシシ、ペンタフルオロエトキシ及びフルオロプロポキシが含まれる。
本明細書中、用語「保護されている」は、特記しない限り更なる反応を防止するためまたは他の目的で酸素、窒素またはリン原子に付加されている基を指す。いろいろな酸素及び窒素保護基が有機合成の分野の当業者に公知である。
本明細書中、用語「アリール」は、特記しない限りフェニル、ビフェニルまたはナフチルを指し、好ましくはフェニルである。この用語には置換及び未置換のアリール基が含まれる。アリール基はヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、スルフェート、ホスホン酸、ホスフェートまたはホスホネートからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい。所要により保護されていなくても、例えば参照により本明細書に含まれるとするＧｒｅｅｎｅら，「有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第２版（１９９１年）発行に教示されているように当業界で公知のように保護されていてもよい。
本明細書中、用語「アルカアリール」または「アルキルアリール」は、アリール置換基を有するアルキル基を指す。用語「アルアルキル」または「アリールアルキル」はアルキル置換基を有するアリール基を指す。
本明細書中、用語「ハロ」には塩素、臭素、ヨウ素及びフッ素が含まれる。
用語「アシル」は、エステル基の非カルボニル部分が直鎖、分枝鎖または環状アルキルまたは低級アルキル、アルコキシアルキル（例えば、メトキシメチル）、アルアルキル（例えば、ベンジル）；アリールオキシアルキル（例えば、フェノキシメチル）、場合によりハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３及びＣ４を含む）またはアルコキシ（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３及びＣ４を含む）で置換されたフェニルを含むアリールから選択されるカルボン酸エステル；アルキルまたはアルアルキルスルホニル（例えば、メタンスルホニル）のようなスルホネートエステル；モノ、ジまたはトリホスフェートエステル；トリチルまたはモノメトキシトリチル置換ベンジル、トリアルキルシリル（例えば、ジメチル−ｔ−ブチルシリル）及びジフェニルメチルシリルを指す。エステル中のアリール基としてはフェニル基が最適である。
本明細書中、用語「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」は、芳香環中に少なくとも１個の硫黄、窒素またはリンを含む芳香族を指す。
用語「低級アシル」は、非カルボニル部分が低級アルキルであるアシル基を指す。
本明細書中、用語「宿主」は、ウイルスが複製し得る単細胞または多細胞生物を指し、例えば細胞株及び動物であり、好ましくはヒトである。或いは、宿主はウイルスゲノムの一部を有し得、そのゲノムの複製または機能は本発明の化合物により変更され得る。用語「宿主」は、具体的には感染細胞、ウイルスゲノムの全部または一部がトランスフェクトされている細胞及び動物、特に霊長類及びヒトを指す。本発明の多くの動物用途において、宿主はヒト患者である。しかしながら、特定の適応において動物への適用が本発明により予測される。
ＩＩＩ 医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグ
本明細書中、用語「医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグ」は、患者に投与したときに活性化合物を与える化合物の医薬的に許容され得る形態、例えばエステル、リン酸エステル、エステルまたは関連基の塩を指す。医薬的に許容され得る塩には、医薬的に許容され得る無機もしくは有機塩基または無機もしくは有機酸から誘導されるものが含まれる。医薬的に許容され得るプロドラッグは宿主において本発明の化合物を形成するように代謝される、例えば加水分解または酸化される化合物を指す。プロドラッグの典型例には特定化合物の官能部分上に生物学的に不安定な保護基を有している化合物が含まれる。プロドラッグには酸化、還元、アミノ化、脱アミノ化、ヒドロキシル化、脱ヒドロキシル化、加水分解、脱加水分解、アルキル化、脱アルキル化、アシル化、脱アシル化、リン酸化、脱リン酸化されると活性化合物が生じ得る化合物が含まれる。本発明の化合物はエプスタイン−バーウイルスに対する抗ウイルス活性及び／またはＥＢＶ−ＴＫを発現する細胞、すなわちＥＢＶ感染細胞、特に異常増殖する（腫瘍となる）ＥＢＶ感染細胞またはＥＢＶ−ＴＫ導入細胞に対して細胞毒性活性を有するか、または前記活性を示す化合物に代謝される。
化合物が安定な非毒性酸または塩基塩を形成するのに十分な塩基性または酸性である場合には、化合物を医薬的に許容され得る塩として投与することが適当であり得る。医薬的に許容され得る塩の例は、生理的に許容され得るアニオンを形成する酸を用いて形成される有機酸付加塩、例えばトシル酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、α−ケトグルタル酸塩及びα−グリセロリン酸塩である。硫酸塩、硝酸塩、重炭酸塩や炭酸塩のような好適な無機塩も形成され得る。
或いは、医薬的に許容され得る塩は、例えば高塩基性化合物（例えば、アミン）を生理学的に許容され得るアニオンを与える適当な酸と反応させることにより得ることができる。カルボン酸のような化合物のアルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウムまたはリチウム）塩またはアルカリ土類金属（例えば、カルシウム及びマグネシウム）塩をも作成することができる。
本明細書中に記載されている化合物は活性、バイオアベイラビリティー、安定性を上昇されるかまたは選択化合物の諸特性を変化させるためのプロドラッグとして投与され得る。多数のプロドラッグリガンドが公知である。通常、化合物（例えば、ヌクレオシド）のモノ，ジまたはトリホスフェートをアルキル化、アシル化または他の親油性修飾させると当該化合物（例えば、ヌクレオシド）の安定性が向上する。ホスフェート部分上の１つ以上の水素原子を置換し得る置換基の例はアルキル、アリール、ステロイド、糖を含めた炭水化物、１，２−ジアシルグリセロール及びアルコールである。多くはＲ．Ｊｏｎｅｓ及びＮ．Ｂｉｓｃｈｏｆｉｂｅｒｇｅｒ，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２７：１−１７（１９９５）に記載されている。所望効果を達成するためにこれらを本発明のヌクレオシドと併用され得る。
特定化合物は、参照により本明細書に含まれるとする以下の文献に記載されているように５’−ホスホエーテル脂質または５’−エーテル脂質としても提供され得る：Ｌ．Ｓ．Ｋｕｃｅｒａ，Ｎ．Ｌｙｅｒ，Ｅ．Ｌｅａｋｅ，Ａ．Ｒａｂｅｎ，Ｅ．Ｋ．Ｍｏｄｅｓｔ，Ｌ．Ｗ．Ｄａｎｉｅｌ，Ｃ．Ｐｉａｎｔａｄｏｓｉ，“感染性ＨＩＶ−１産生を阻害し、防御的ウイルス形成を誘導する新規な膜相互作用的エーテル脂質アナログ（Ｎｏｖｅｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ ｅｔｈｅｒ ｌｉｐｉｄ ａｎａｌｏｇｓ ｔｈａｔ ｉｎｈｉｂｉｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ＨＩＶ−１ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｖｉｒｕｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ）”，ＡＩＤＳ Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ，６：４９１−５０１（１９９０）；Ｃ．Ｐｉａｎｔａｄｏｓｉ，Ｃ．Ｊ．Ｍａｒａｓｃｏ，Ｓ．Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓ−Ｎａｔｓｃｈｋｅ，Ｋ．Ｌ．Ｍｅｙｅｒ，Ｆ．Ｇｕｍｕｓ，Ｊ．Ｒ．Ｓｕｒｌｅｓ，Ｋ．Ｓ．Ｉｓｈａｑ，Ｌ．Ｓ．Ｋｕｃｅｒａ，Ｎ．Ｌｙｅｒ，Ｃ．Ａ．Ｗａｌｌｅｎ，Ｓ．Ｐｉａｎｔａｄｏｓｉ，Ｅ．Ｊ．Ｍｏｄｅｓｔ，“新規なエーテル脂質ヌクレオシドコンジュゲートの合成及び抗−ＨＩＶ活性についての評価（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｅｔｈｅｒ ｌｉｐｉｄ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ ａｎｔｉ−ＨＩＶ ａｃｔｉｖｉｔｙ）”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３４：１４０８−１４１４（１９９１）；Ｋ．Ｙ．Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒ，Ｄ．Ｄ．Ｒｉｃｈｍａｎ，Ｄ．Ａ．Ｃａｒｓｏｎ，Ｌ．Ｍ．Ｓｔｕｈｍｉｌｌｅｒ，Ｇ．Ｍ．Ｔ．ｖａｎ Ｗｉｊｋ，Ｈ．Ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｏｓｃｈ，“ＣＥＭ及びＨＴ４−６Ｃ細胞における３’−デオキシチミジンの脂質プロドラッグである３’−デオキシチミジンジホスフェートジミリストイルグリセロールによるヒト免疫不全ウイルスタイプＩ複製の非常に高い抑制（Ｇｒｅａｔｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ Ｉ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ＣＥＭ ａｎｄ ＨＴ４−６Ｃ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ３’−ｄｅｏｘｙｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ， ａ ｌｉｐｉｄ ｐｒｏｄｒｕｇ ｏｆ ３’−ｄｅｏｘｙｔｈｉｍｉｄｉｎｅ）”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，３６：２０２５−２０２９（１９９２）；Ｋ．Ｙ．Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒ，Ｌ．Ｍ．Ｓｔｕｈｍｉｌｌｅｒ，Ｈ．Ｂ．Ｌｅｎｔｉｎｇ，Ｈ．ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｏｓｃｈ，Ｄ．Ｄ．Ｒｉｃｈｍａｎ，“アジドチミジン及び他の抗ウイルスヌクレオシドのリン脂質アナログの合成及び抗レトロウイルス活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ａｎａｌｏｇｓ ｏｆ ａｚｉｄｏｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ）”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６５：６１１２７（１９９０）。
化合物に、好ましくは化合物の５’−ＯＨ位に、共有結合により導入し得る適切な親油性置換基及び親油性調製物を開示している米国特許明細書の非限定例には、いずれも参照により本明細書に含まれるとする米国特許第５，１４９，７９４号明細書（Ｙａｔｖｉｎら）、同第５，１９４，６５４号明細書（Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒら）、同第５，２２３，２６３号明細書（Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒら）、同第５，２５６，６４１号明細書（Ｙａｔｖｉｎら）、同第５，４１１，９４７号明細書（Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒら）、同第５，４６３，０９２号明細書（Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒら）、同第５，５４３，３８９号明細書（Ｙａｔｖｉｎら）、同第５，５４３，３９０号明細書（Ｙａｔｖｉｎら）、同第５，５４３，３９１号明細書（Ｙａｔｖｉｎら）及び同第５，５５４，７２８号明細書（Ｂａｓａｖａら）が含まれる。本発明のヌクレオシドに結合され得る親油性置換基または親油性調製物を開示している外国特許文献には、いずれも参照により本明細書に含まれるとする国際特許出願公開第８９／０２７３３号パンフレット、同第９０／００５５５号パンフレット、同第９１／１６９２０号パンフレット、同第９１／１８９１４号パンフレット、同第９３／００９１０号パンフレット、同第９４／２６２７３号パンフレット、同第９６／１５１３２号パンフレット、同第９１／１９７２１号パンフレット、欧州特許出願公開第０，３５０，２８７号明細書及び欧州特許出願第９３９１７０５４４．４号明細書が含まれる。
プロドラッグには本発明のヌクレオシドのアミノ酸エステルも含まれる。例えば、いずれも参照により本明細書に含まれるとする、アシクロビルそのものに比して高い水溶性を示すアシクロビルのアミノ酸エステル、具体的にはグリシン及びアラニンエステルを開示している欧州特許出願公開第９９４９３号明細書、及びアラニン及びグリシンエステルに比して経口投与後高いバイオアベイラビリティーを示すα−炭素原子に隣接する側鎖分枝を特徴とするアシクロビルのバリンエステルを開示している米国特許第４，９５７，９２４号明細書（Ｂｅａｕｃｈａｍｐ）を参照されたい。アミノ酸エステルの製造方法は参照により本明細書に含まれるとする米国特許第４，９５７，９２４号明細書（Ｂｅａｕｃｈａｍｐ）に記載されている。バリンそのものを使用する代わりに、アミノ酸の機能等価物（例えば、酸クロリドのような酸ハロゲン化物、または酸無水物）を使用することができる。そのような場合、望ましくない副作用を避けるためにアミノ保護した誘導体を使用することが有利であり得る。
ＩＶ 併用療法または交互療法
別の実施態様では、エプスタイン−バーウイルス感染の治療、防疫及び／または予防のために、特定化合物、またはその誘導体または塩が別の抗ウイルス剤、例えば上記した式を有するものを含めた抗−ＥＢＶ剤と併用でまたは交互に投与し得る。通常、併用療法では２つ以上の物質をそれぞれ有効量一緒に投与するのに対して、交互療法では有効量の各物質を逐次的に投与する。用量は薬物の吸収、不活性化及び排泄速度、並びに当業者に公知の要因に依存する。用量は緩解しようとする症状の重篤度によっても変化することに留意されたい。更に、特定被験者に対する特定用量レジメ及びスケジュールは当該被験者の必要性及び組成物を投与するかまたは組成物の投与を監督する人の専門的判断に従って経時的に調節され得ると理解されたい。
本明細書に記載されている化合物と併用され得る抗ウイルス剤の非限定例には、アシクロビル（ＡＣＶ）、ＡＺＴ、３ＴＣ、ｄ４Ｔ、ガンシクロビル（ＧＣＶまたはＤＨＰＧ）及びそのプロドラッグ（例えば、バリル−ガンシクロビル）、Ｅ−５−（２−ブロモビニル）−２’−デオキシウリジン（ＢＶＤＵ）、（Ｅ）−５−ビニル−１−β−Ｄ−アラビノシルウシル（ＶａｒａＵ）、（Ｅ）−５−（２−ブロモビニル）−１−β−Ｄ−アラビノシルウラシル（ＢＶ−ａｒａＵ）、１−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノシル）−５−ヨードシトシン（Ｄ−ＦＩＡＣ）、１−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｌ−アラビノシル）−５−メチルウラシル（Ｌ−ＦＭＡＵ）、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン［（Ｓ）−ＨＰＭＰＡ］、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）−２，６−ジアミノプリン［（Ｓ）−ＨＰＭＰＤＡＰ］、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニル−メトキシプロピル）シトシン［（Ｓ）−ＨＰＭＰＣまたはシドフィビル］及び（２Ｓ，４Ｓ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−ヨードウラシル（Ｌ−５−ＩｏｄｄＵ）が含まれる。
１実施態様では、本発明の化合物はポリメラーゼ阻害剤から選択される少なくとも１つの抗ウイルス剤と一緒に使用され得る。
加えて、本発明の化合物は本発明の他の化合物を含めた１つ以上の抗レトロウイルス剤、抗Ｂ型肝炎ウイルス剤（ＨＢＶ）、抗Ｃ型肝炎ウイルス剤（ＨＣＶ）、抗ＥＢＶ剤、抗ヘルペス剤、インターフェロン、抗癌剤、抗細菌剤と併用でまたは交互に投与し得る。本発明の特定化合物は他の化合物の代謝、異化または不活化を減ずるかまたは変化させることにより本発明の特定化合物の生物活性を強化するために有効であり得、所期効果のために同時投与される。
また、抗増殖剤が本発明の併用でまたは交互に投与され得る。本明細書中、「抗増殖剤」は細胞の過剰増殖を抑える物質である。以下にリストされていたり抗増殖効果を示すことが公知であるかまたは発見された他の物質が本発明で使用され得る。
増殖性疾患は現在各種化合物、例えば以下にリストされているようなアルキル化剤、代謝拮抗物質、天然産物、酵素、生物学的応答修飾剤、各種物質、ホルモン及びアンタゴニストにより治療されている。その非限定例を以下に示す。
（モノクローナル抗体）
増殖細胞に対するモノクローナル抗体、例えばＢ細胞腫瘍に対するリタキシマブ（抗−ＣＤ２０）。
（アルキル化剤）
ナイトロジェンマスタード：メクロレタミン（ホジキン病、非ホジキンリンパ腫）、シクロホスファミドイホスファミド（急性及び慢性リンパ性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽腫、乳房、卵巣、肺、ウイルムス腫、頚部、精巣、軟部組織肉腫）、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）（多発性骨髄腫、乳房、卵巣）、クロラムブシル（慢性リンパ性白血病、原発性マクログロブリン血症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫）；
エチレンイミン及びメチルメラミン：ヘキサメチルメラミン（卵巣）、チオテパ（膀胱、乳房、卵巣）；
アルキルスルホネート：ブスルファン（慢性顆粒球性白血病）；
ニトロソウレア：カルムスチン（ＢＣＮＵ）（ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、原発性脳腫瘍、多発性骨髄腫、悪性メラノーマ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）（ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、原発性脳腫瘍、小細胞肺）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）（原発性脳腫瘍、胃、結腸）、ストレプトゾシン（ストレプトゾシン）（悪性膵性インスリノーマ、悪性カルチノイド）；
トリアゼン：ダカルバジン（ＤＴＩＣ；ジメチルトリアゼノイミド−アゾールカルボキサミド）（悪性メラノーマ、ホジキン病、軟組織肉腫）。
（代謝拮抗物質）
葉酸アナログ：メトトレキサート（アメプテリン）（急性リンパ性白血病、絨毛癌、菌状息肉腫、乳房、頭首部、肺、骨肉腫）；
ピリミジンアナログ：フルオロウラシル（５−フルオロウラシル；５−ＦＵ）、フロクスウリジン（フルオロデオキシウリジン；ＦＵｄＲ）（乳房、結腸、胃、膵臓、卵巣、頭首部、膀胱、前悪性皮膚病巣）（局所）、シタラビン（システインアラビノシド）（急性顆粒球性及び急性リンパ性白血病）；
プリンアナログ及び関連阻害剤：メルカプトプリン（６−メルカプトプリン；６−ＭＰ）（急性リンパ性、急性顆粒球性及び慢性顆粒球性白血病）、チオグアニン（６−チオグアニン；ＴＧ）（急性顆粒球性、急性リンパ性及び慢性顆粒球性白血病）、ペントスタチン（２’−デオキシシオホルマイシン）（毛様細胞性白血病、菌状息肉腫、慢性リンパ性白血病）；
ビンカアルカロイド：ビンブラスチン（ＶＬＢ）（ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、乳房、精巣）、ビンクリスチン（急性リンパ性白血病、神経芽腫、ウイルムス腫、横紋筋肉腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、小細胞肺）；
エピプドフィル−ロトキシン：エトポシド（精巣、小細胞肺及び他の肺、乳房、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、急性顆粒球性白血病、カポジ肉腫）、テニポシド（精巣、小細胞肺及び他の肺、乳房、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、急性顆粒球性白血病、カポジ肉腫）。
（天然産物）
抗生物質：ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）（絨毛癌、ウイルムス腫、横紋筋肉腫、精巣、カポジ肉腫）、ダウノルビシン（ダウノマイシン；ルビドマイシン）（急性顆粒球性及び急性リンパ性白血病）、ドキソルビシン（軟部組織、骨肉腫及び他の肉腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、急性白血病、乳房、尿生殖器、甲状腺、肺、胃、神経芽腫）、ブレオマイシン（精巣、頭首部、皮膚、食道、肺、尿生殖器管、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫）、プリカマイシン（ミトラマイシン）（精巣、悪性高カルシウム血症）、マイトマイシン（マイトマイシンＣ）（胃、頸部、結腸、乳房、膵臓、膀胱、頭首部）；
酵素：Ｌ−アスパラギナーゼ（急性リンパ性白血病）；
生物学的応答修飾剤：α−インターフェロン（毛状細胞性白血病、カポジ肉腫、メラノーマ、カルチノイド、腎細胞、卵巣、膀胱、非ホジキンリンパ腫瘍、菌状息肉腫、多発性骨髄腫、慢性顆粒球性白血病）、γ−インターフェロン、ＩＬ−２及びＩＬ−１２。
（ホルモン及びアンタゴニスト）
エストロゲン：ジエチルスチルベストロールエチニルエストラジオール（乳房、前立腺）；
アンチエストロゲン：タモキシフェン（乳房）；
アンドロゲン：テストステロンプロピオネートフルキソマイエステロン（乳房）；
アンチアンドロゲン：フルタミド（前立腺）；
ゴナドトロビン関連ホルモンアナログ：ロイプロリド（前立腺）。
（各種物質）
白金配位複合体：シスプラチン（シス−ＤＤＰ）、カルボプラチン（精巣、卵巣、膀胱、頭首部、肺、甲状腺、頸部、子宮内膜、神経芽腫、骨肉腫）；
アントラセンジオン：ミキソトザントロン（急性顆粒球性白血病、乳房）；
置換ウレア：ヒドロキシウレア（慢性顆粒球性白血病、真性赤血球増加症、本態性血小板減少症、悪性メラノーマ）；
メチルヒドラジン誘導体：プロカルバジン（Ｎ−メチルヒドラジン，ＭＩＨ）（ホジキン病）；
副腎皮質抑制剤：ミオタン（ｏ，ｐ’−ＤＤＤ）（副腎皮質）、アミノグルテチミド（乳房）；
副腎皮質ステロイド：プレドニゾン（急性及び慢性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、乳房）；
プロゲスチン：カプロン酸ヒドロキシゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール（子宮内膜、乳房）；
脱メチル化剤：アザシチジン；
ＰＫＣアクチベーター：ブリオスタチン；
分化剤：ブチレート、レチン酸及び関連レチノイド；
微小管抑制剤：タキソール及びタキサン；
トポイソメラーゼ阻害剤：トポテカン；
その他：バルプロ酸、ＨＭＢＡ、ＮＦ−カッパＢ阻害剤。
（放射線治療）
ＣＤ系及びＨＳＶ−ＴＫ系は両方とも癌細胞を放射線に対して感作させ、進行癌をコントロールするための可能な併用療法を与える（Ｊ．Ｈ．Ｋｉｍ，Ｓ．Ｈ．Ｋｉｍ，Ａ．Ｋｏｌｏｚｓｖａｒｙ，Ｓ．Ｌ．Ｂｒｏｗｎ，Ｏ．Ｂ．Ｌｉｍ，Ｓ．Ｏ．Ｆｒｅｙｔａｇ，“インビトロ及びインビボで単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ導入９Ｌ神経膠肉腫細胞の放射線応答の抗ウイルス剤による選択的強化（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ ９Ｌ ｇｌｉｏｓａｒｃｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｂｙ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｇｅｎｔｓ）”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．，３３：８６１−８６８（１９９５）；Ｍ．Ｓ．Ｋｈｉｌ，Ｊ．Ｈ．Ｋｉｍ，Ｃ．Ａ．Ｍｕｌｌｅｉｎ，Ｓ．Ｈ．Ｋｉｍ，Ｓ．Ｏ．Ｆｒｅｙｔａｇ，“シトシンデアミナーゼ遺伝子を導入した培養ヒト結腸直腸癌細胞の５−フルオロシトシンによる放射線感作（Ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ ５−ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ ｗｉｔｈ ｃｙｔｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ）”，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５：５３−５７（１９９６））。従って、本発明の１態様で、この化合物は放射線治療と併用でまたは交互に投与される。すなわち、本発明において放射線は生存可能で有効な抗増殖剤として含まれる。
Ｖ 医薬組成物
エプスタイン−バーウイルスまたはその遺伝子断片が感染しているヒトを含めた宿主はは、その患者に対して医薬的に許容され得る担体または希釈剤の存在下で有効量の特定化合物、またはその医薬的に許容され得るプロドラッグまたは塩を投与することにより治療し得る。活性化合物は経口、非経口、静脈内、皮内、皮下または局所のような適当なルートを介して液体または固体形態で投与し得る。
化合物の好ましい１日用量は約１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。医薬的に許容され得る塩及びプロドラッグの有効用量は送達される親ヌクレオシドの重量に基づいて計算し得る。塩またはプロドラッグそれ自体が活性を示すならば、有効用量はその塩またはプロドラッグの重量を用いて上記したようにまたは当業者に公知の他の手段により推定し得る。
化合物は有利には適当な剤形で投与される。その剤形には１つの単位剤形あたり７〜３０００ｍｇ、好ましくは７０〜１４００ｍｇの活性成分を含むものが含まれるが、これに限定されない。５０〜１０００ｍｇの経口剤形が通常便利である。
理想的には、特定化合物のピーク血漿濃度が約０．２〜７０Ｍ、好ましくは約１．０〜１０Ｍとなるように活性成分を投与すべきである。このためには、例えば場合により食塩液中に活性成分を含む０．１〜５％溶液を静注するかまたは活性成分のボーラスとして投与する。
薬物組成物中の特定化合物の濃度は該薬物の吸収、不活化及び排泄速度及び当業者に公知の他の要因に依存する。用量は緩解させようとする状態の重篤度によっても変更されることに注目されたい。更に、特定の被験者に対する特定投薬レジメは個人の必要性及び組成物を投与したり監督する者の専門的判断に従って経時的に調節すべきであり、本明細書に記載されている濃度範囲は単なる例示であって、本発明の組成物の範囲または実施を限定する意図はないことも理解されるべきである。活性成分を１回で投与してもよく、或いはいろいろな時間間隔で少量を複数回にわけて投与してもよい。
特定化合物の好ましい投与ルートは経口である。経口組成物は通常不活性希釈剤または食用担体を含む。前記組成物をゼラチンカプセル中に封入させても、または錠剤に圧縮してもよい。経口用治療組成物では、特定化合物を賦形剤と一緒に配合され、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤の形態で使用され得る。医薬的に適合し得る結合剤及び／または佐剤を組成物の一部として配合し得る。
錠剤、ピル剤、カプセル剤、トローチ剤等は以下の成分または同種の化合物を含み得る：結合剤、例えば微晶質セルロース、トラガカントガムまたはゼラチン；賦形剤、例えばスターチまたはラクトース；崩壊剤、例えばアルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌまたはコーンスターチ；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓ；グリダント、例えばコロイド状二酸化チタン；甘味剤、例えばスクロースまたはサッカリン；フレーバー、例えばペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジフレーバー。剤形がカプセル剤のときには上記したタイプの材料に加えて脂肪油のような液体担体を含み得る。更に、剤形はその剤形の物理的形態を変更する他の各種物質、例えば糖、シェラックまたは他の腸溶性物質のコーティングを含み得る。
化合物はエリキシル、懸濁液、シロップ、ウェハー、チューイングガム等の成分として投与され得る。シロップは特定化合物に加えて甘味剤としてのスクロース、特定保存料、色素、着色剤及びフレーバーを含み得る。
化合物、またはその医薬的に許容され得るプロドラッグまたは塩を所望作用を損なわない他の活性物質または所望作用を補う物質、例えば他のヌクレオシド化合物を含めた抗生物質、抗真菌剤、抗炎症剤または他の抗ウイルス剤と混合してもよい。非経口、皮内、皮下または局所投与に使用される溶液または懸濁液は滅菌希釈液、例えば注射用蒸留水、塩類溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗細菌剤、例えばベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミンテトラ酢酸；緩衝剤、例えば酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩；張性調節剤、例えば塩化ナトリウムまたはデキストロースを含み得る。非経口製剤はガラスまたはプラスチック製アンプル、使い捨て注射器または多人数用バイアルに封入させてもよい。
静注投与する場合、好ましい担体は生理食塩液またはリン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）である。
好ましい実施態様では、特定化合物はインプラントやマイクロカプセル化送達システムを含めた徐放性処方物のように該化合物が身体から急速に除去されるのを防ぐ担体を用いて製造される。生分解性生適合性ポリマー、例えばエチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ボリオルトエステル及びポリ酢酸を使用し得る。前記処方物の製造方法は当業者に自明である。材料は商業的にも入手し得る。
（感染細胞にウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を指向させるリポソームを含めた）リポソーム懸濁液も医薬的に許容され得る担体として好ましい。リポソーム懸濁液は例えば参照により本明細書に含まれるとする米国特許第４，５２２，８１１号明細書に記載されているように当業者に公知に方法に従って製造され得る。例えば、リポソーム処方物は無機溶媒中に適当な脂質（例えば、ステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイルホスファチジルコリン及びコレステロール）を溶解させた後、前記溶媒を蒸発させ、容器の表面上に乾燥脂質の薄フィルムを残すことにより製造し得る。その後、特定化合物またはそのモノホスフェート、ジホスフェート及び／またはトリホスフェート誘導体の水溶液を溶液に導入する。次いで、容器を手で撹拌して溶液の側部から脂質材料を遊離させ、脂質凝集物を分散させることにより、リポソーム懸濁液が形成される。
ＶＩ 特定化合物の製造方法
本発明の化合物は当業者に公知の合成方法により製造され、その方法には化学的合成方法が含まれる。
５−置換ウラシルヌクレオシドの簡単な製造方法も提供する。
本明細書に記載されている５−置換ウラシルヌクレオシドは以下に詳記する方法かまたは当業者に公知の他のアッセイにより製造され得る。例えば、これらの方法は以下の文献に記載されている：Ｄ．Ｅ．Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ，Ｊ．Ｌ．Ｒｕｔｈの米国特許第４，２４７，５４４号明細書（１９８１）；Ｅ．Ｄ．Ａ．ＤｅＣｌｅｒｃｑ，Ｇ．Ａ．Ｖｅｒｈｅｌｓｔ，Ａ．Ｓ．Ｊｏｎｅｓ，Ｒ．Ｔ．Ｗａｌｋｅｒの米国特許第４，３８２，９２５号明細書（１９８４）；Ａ．Ｓ．Ｊｏｎｅｓ，Ｒ．Ｔ．Ｗａｌｋｅｒ，Ｅ．Ｄ．Ａ．ＤｅＣｌｅｒｃｑ，Ｐ．Ｊ．Ｂａｒｒの米国特許第４，４２４，２１１号明細書（１９８４）；Ｓ．Ｓａｋａｔａ，Ｈ．Ｍａｃｈｉｄａの米国特許第４，４５２，２１０号明細書（１９８５）；Ｒ．Ｔ．Ｗａｌｋｅｒ，Ｐ．Ｌ．Ｃｏｅの米国特許第５，３５６，８８２号明細書（１９９４）；Ｔ．Ｓｐｅｃｔｏｒ，Ｄ．Ｊ．Ｔ．Ｐｏｒｔｅｒ，Ｓ．Ｇ．Ｒａｈｉｍの米国特許第６，１７７，４３６号明細書（２００１）；Ｍ．Ｊ．Ｒｏｂｉｎｓ，Ｐ．Ｊ．Ｂａｒｒ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４８：１８５４−１８６２（１９８３）；Ｋ．Ｋ．Ｏｇｉｌｖｉｅ，Ｒ．Ｇ．Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍ．Ｆ．Ｇｉｌｌｅｎ，Ｂ．Ｋ．Ｒａｄａｔｕｓ，Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．，６２：１６−２１（１９８４）；Ｋ．Ａ．Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｔ．Ｌ．Ｓｕ，Ｕ．Ｒｅｉｃｈｍａｎ，Ｎ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｃ．Ｌｏｐｅｚ，Ｊ．Ｊ．Ｆｏｘ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２７：９１−９４（１９８４）；Ｄ．Ｐ．Ｃ．ＭａＧｅｅ，Ｊ．Ｃ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｄ．Ｆ．Ｓｍｅｅ，Ｔ．Ｒ．Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｐ．Ｈ．Ｖｅｒｈｅｙｄｅｎ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２８：１２４２−１２４５（１９８５）；Ｌ．Ｍ．Ｂｅａｕｃｈａｍｐ，Ｂ．Ｌ．Ｓｅｒｌｉｎｇ，Ｊ．Ｅ．Ｋｅｌｓｅｙ，Ｋ．Ｋ．Ｂｉｒｏｎ，Ｐ．Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｊ．Ｓｅｌｗａｙ，Ｊ．Ｃ．Ｌｉｎ，Ｈ．Ｊ．Ｓｃｈａｅｆｆｅｒ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３１：１４４−１４９（１９８８）；Ｊ．Ｂａｌｚａｒｉｎｉ，Ｈ．Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ，Ｍ．Ｂｏｄｅｎｔｅｉｃｈ，Ｅ．ＤｅＣｌｅｒｃｑ，Ｈ．Ｇｒｉｅｎｇｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３２：１８６１−１８６５（１９８９）；Ｍ．Ｒ．Ｄｙｓｏｎ，Ｐ．Ｌ．Ｃｏｅ，Ｒ．Ｔ．Ｗａｌｋｅｒ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３４：２７８２−２７８６（１９９１）；Ｔ．Ｓ．Ｌｉｎ，Ｍ．Ｚ．Ｌｕｏ，Ｍ．Ｃ．Ｌｉｕ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５１：１０５５−１０６８（１９９５）；Ｓ．Ｇ．Ｒａｈｉｍ，Ｎ．Ｔｒｉｖｅｄｉ，Ｍ．Ｖ．Ｂｏｇｕｎｏｖｉｅ−Ｂａｔｃｈｅｌｏｒ，Ｇ．Ｗ．Ｈａｒｄｙ，Ｇ．Ｍｉｌｌｓ，Ｊ．Ｗ．Ｔ．Ｓｅｌｗａｙ，Ｗ．Ｓｎｏｗｄｅｎ，Ｅ．Ｌｉｔｔｌｅｒ，Ｐ．Ｌ．Ｃｏｅ，Ｉ．Ｂａｓｎａｋ，Ｒ．Ｆ．Ｗｈａｌｅ，Ｒ．Ｔ．Ｗａｋｌｅｒ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３９：７８９−７９５（１９９６）；Ｔ．Ｍａ，Ｓ．Ｂ．Ｐａｉ，Ｙ．Ｌ．Ｚｈｕ，Ｊ．Ｓ．Ｌｉｎ，Ｋ．Ｓｈａｎｍｕｇａｎａｔｈａｎ，Ｊ．Ｄｕ，Ｃ．Ｗａｎｇ，Ｈ．Ｋｉｍ，Ｍ．Ｇ．Ｎｅｗｔｏｎ，Ｙ．Ｇ．Ｃｈｅｎｇ，Ｃ．Ｋ．Ｃｈｕ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３９：２８３５−２８４３（１９９６）；Ｉ．Ｂａｓｎａｋ，Ｇ．Ｐ．Ｏｔｔｅｒ，Ｒ．Ｊ．Ｄｕｎｃｏｍｂｅｒ，Ｎ．Ｂ．Ｗｅｓｔｗｏｏｄ，Ｍ．Ｐｉｅｔｒａｒｅｌｌｉ，Ｇ．Ｗ．Ｈａｒｄｙ，Ｇ．Ｍｉｌｌｓ，Ｓ．Ｇ．Ｒａｈｉｍ，Ｒ．Ｔ．Ｗａｌｋｅ，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１７：２９−３８（１９９８）；Ｙ．Ｃｈｏｉ，Ｌ．Ｌｉ，Ｓ．Ｇｒｉｌｌ，Ｅ．Ｇｕｌｌｅｎ，Ｃ．Ｓ．Ｌｅｅ，Ｇ．Ｇｕｍｉｎａ，Ｅ．Ｔｓｕｊｉｉ，Ｙ．Ｃ．Ｃｈｅｎｇ，Ｃ．Ｋ．Ｃｈｕ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４３：２５３８−２５４６（２０００）。
ＶＩＩ ＥＢＫ−ＴＫを用いるトランスフェクト細胞株の作成方法
ＥＢＶ−ＴＫ遺伝子は当業界で公知の方法により発現ベクターにクローン化し得る。特に、ウイルス株Ｂ−９５８由来のＥＢＶ−ＴＫ遺伝子は、Ｅ．Ａ．Ｇｕｓｔａｆｓｏｎら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４２（１１）：２９２３−３１（１９９８）に記載されているようにベクターｐＣＭＶにクローン化し得る。次いで、このベクターは所望の生存可能な細胞株に当業界で公知の試薬を用いて、例えばベクターをヒト細胞株にトランスフェクトするためにリポフェクタミン試薬を用いて導入し得る。
ＶＩＩＩ 遺伝子治療
ＥＢＶ−ＴＫの発現のために遺伝子を含むベクター（感染性ウイルス粒子またはプラスミド）を用いて導入され得る真核細胞には、一次有核赤血球、例えば白血球、顆粒球、単球、マクロファージ、（Ｔリンパ球及びＢリンパ球を含めた）リンパ球、全能幹細胞及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ細胞）；骨髄細胞；内皮細胞；上皮細胞；ケラチノサイト；幹細胞；肝細胞前駆細胞を含めた肝細胞；肝細胞前駆細胞を含めた肝細胞；線維芽細胞；間葉細胞；中皮細胞；実質細胞；及び腫瘍分化の他の細胞が含まれるが、これらに限定されない。
１実施態様では、細胞は特定部位に指向し得、これにより細胞はその部位で治療薬として機能する。或いは、細胞は特定部位に指向しない細胞であり得、その細胞は全身治療薬として機能する。
導入した細胞は、宿主、特にヒトにおいて例えば細胞が異常増殖している部位（例えば、癌）に特異的に指向する宿主細胞、例えば赤血球を導入することにより異常細胞増殖の治療において使用される（前記宿主細胞は癌患者から取り出され、培養で拡大させ、本発明に従ってＥＢＶ−ＴＫをコードする遺伝子を含むベクター（感染性ウイルス粒子またはプラスミド）を用いて導入されたもの。）。場合により、前記ベクターは細胞の抗腫瘍効果を高める遺伝子をも含む。前記細胞の数は、所望遺伝子を含むベクターを導入する前後に増加させ得る。よって、上記手順は患者に注入したときに形質転換細胞が患者体内で、好ましくは腫瘍そのものの部位でＥＢＶ−ＴＫを産生するように実施される。
導入細胞が保持する本発明の遺伝子は具体的にはＥＢＶ−ＴＫの配列を含むが、細胞の治療効果を直接または間接的に向上させる任意の配列をも含み得る。導入遺伝子が保持する遺伝子は、導入細胞が本来持たない治療効果を発揮し得る配列、例えば血友病の治療において有用な凝固因子をコードする遺伝子をも含み得る。前記遺伝子は治療効果を有する１つ以上の産物をコ−ドし得る。適当な遺伝子の例にはサイトカイン、例えばＴＮＦ、ＧＭＣＳＦ、インターロイキン（インターロイキン１〜１８）、インターフェロン（α−、β−、γ−インターフェロン）、Ｔ細胞受容体タンパク質及び抗体の抗原結合ドメイン、例えば免疫グロブリンに対するＦｃ受容体をコードする遺伝子が含まれる。適当な遺伝子の別の例には、細胞が元々指向しない体内の部位で細胞の治療特性が利用できるようにその部位に指向するように細胞を修飾する遺伝子が含まれる。例えば、ＴＩＬ細胞のような血球は、例えばこの細胞が選択抗原を認識できるように、この細胞に対するモノクローナル抗体のＦａｂ部分を導入することにより修飾し得る。また、治療特性を有する血球は例えば該血球が通常指向しない腫瘍を指向させるために使用し得る。癌治療において有用な他の遺伝子が、治療効果を有するように特定部位に炎症応答を生じさせる化学走性因子をコードするように使用し得る。適切な遺伝子の他の例には、ＡＩＤＳの治療で使用される可溶性ＣＤ４をコードする遺伝子及びα−１−アンチトリプシン欠乏に起因する気腫の治療で使用されるα−１−アンチトリプシンをコードする遺伝子が含まれる。
ＩＸ 遺伝子治療ベクター
通常、遺伝子は細胞に直接挿入し得ない。遺伝子は“ベクター”として公知のキャリアを用いて細胞に送達しなければならない。遺伝子治療において使用される最も一般的なタイプのベクターはウイルスである。科学者らは、ウイルスが細胞ＤＮＡに付着または進入する独自の能力を有しているのでウイルスを使用している。遺伝子治療においてベクターとして使用するウイルスは遺伝的に無能にされる。ウイルスはそれ自体複製できないが、細胞ＤＮＡを用いると協調的に複製できる。多くの遺伝子治療の臨床試験は所望遺伝子を送達するためにマウスレトロウイルスを用いている。ベクターとして使用される他のウイルスにはアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ポックスウイルス及びヘルペスウイルスが含まれる。
例えば、実験室において患者から細胞を取り出し、増殖させる。その細胞を所望遺伝子を有するウイルスと接触させる。前記ウイルスは細胞に入り、所望遺伝子は細胞ＤＮＡの一部となる。実験室で増殖させた細胞をその後患者に戻す。このタイプの遺伝子治療はエキソビボと称される。エキソビボとは体外を意味する。前記遺伝子は患者の体外の細胞に導入される。他の研究では、所望遺伝子を患者体内の細胞に送達するためにベクター（ウイルス、細菌）またはリポソーム（脂肪粒子）を使用する。このタイプの遺伝子治療はインビボと称される。なぜならば、遺伝子が患者体内の細胞に導入されるからである。
遺伝子を体内に運ぶために遺伝子送達ベクターを使用するときには、ベクターは所望細胞よりも多く改変するであろう。別の問題は、新しい遺伝子がＤＮＡの誤った場所に導入されて癌または他のダメージが生ずる恐れがあることである。インビボ遺伝子送達システムを用いたときには、ＤＮＡが生殖細胞に挿入されて遺伝的変化を生ずる場合がある。
他の問題として、導入された遺伝子が過剰発現されて有害なくらい多くのタンパク質が産生されること、病原体ベクターが炎症または免疫反応を生じさせる恐れがあること、ウイルスをベクターとして使用するときは、患者から他の者または環境に伝達される恐れがあることが挙げられる。
当業界で多くのベクターが公知である。公知のベクターを本発明で使用することができる。本発明の好ましい実施態様では、ベクターは特異的遺伝子送達のために特定細胞型に指向させ得る。
（アデノウイルスベクター）
いずれのアデノウイルスベクターも細胞及び／または細胞株にＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトするために使用し得る。アデノウイルスは線状二本鎖ＤＮＡゲノムを含む非エンベロープウイルスである。アデノウイルスの血清型株は４０以上あり、その多くはヒトにおいて良性気道感染を引き起こすが、サブグループＣ血清型２または５が主にベクターとして使用されている。生活周期は通常宿主ゲノムへの組込みを含まず、むしろ宿主細胞の核においてエピソーム要素として複製し、それ故に挿入変異の危険がない。野生型アデノウイルスゲノムは約３５ｋｂであり、そのうちの３０ｋｂまでが外来ＤＮＡで置換し得る（Ａ．Ｅ．Ｓｍｉｔｈ，“遺伝子治療におけるウイルスベクター（Ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｉｎ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ）”，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，４９：８０７−８３８（１９９５）；Ｉ．Ｍ．Ｖｅｒｍａ及びＮ．Ｓｏｍｉａ，遺伝子治療−見込み、問題及び考察（Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ−ｐｒｏｍｉｓｅｓ， ｐｒｏｂｌｅｍｓ ａｎｄ ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ），Ｎａｔｕｒｅ，３８９：２３９−２４２（１９９７））。調節機能を有する４つの初期転写単位（Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３及びＥ４）及び構造タンパク質をコードする後期転写物がある。先祖ベクターは不活化されたＥ１またはＥ３遺伝子を有し、ミッシング遺伝子はヘルペスウイルス、プラスミドによりトランスに供給されるかまたはヘルパー細胞ゲノムに組込まれている（ヒト胎児腎臓細胞，株２９３；Ｆ．Ｌ．Ｇｒａｈａｍ，Ｊ．Ｓｍｉｌｅｙ，Ｗ．Ｌ．Ｒｕｓｓｅｌ，Ｒ．Ｎａｉｒｎ，“アデノウイルス由来のＤＮＡによるヒト細胞株形質転換の特徴づけ（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｙ ＤＮＡ ｆｒｏｍ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）”，Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９−７２（１９９７））。第二世代ベクターは更に、Ｅ２ａ温度感受性変異体（Ｊ．Ｆ．Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ，Ｌ．Ｌｉｔｓｋｙ，Ｊ．Ｍ．Ｗｉｌｓｏｎ，“Ｅ２ａ欠損組換えアデノウイルスによるコトンラット肺における延長遺伝子発現（Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ ｒａｔ ｌｕｎｇ ｗｉｔｈ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｉｎ Ｅ２ａ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒｐｙ，５：１２１７−１２２９（１９９４））またはＥ４欠失（Ｄ．Ａｒｍｅｎｔａｎｏ，Ｊ．Ｚａｂｎｅｒ，Ｃ．Ｓａｃｋｓ，Ｃ．Ｃ．Ｓｏｏｋｄｅｏ，Ｍ．Ｐ．Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ａ．Ｓｔ．Ｇｅｏｒｇｅ，Ｓ．Ｃ．Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ，Ａ．Ｅ．Ｓｍｉｔｈ，Ｒ．Ｊ．Ｇｒｅｇｏｒｙ，“アデノウイルスベクターからの導入遺伝子発現の持続に対するＥ４領域の影響（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｅ４ ｒｅｇｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｆｒｏｍ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：２４０８−２４１６（１９９７））を用いている。最も最近の“ガットレス”ベクターは逆方向末端反復（ＩＴＲ）及び導入遺伝子の周りにパッケージング配列のみを含み、必要なウイルス遺伝子は全てヘルパーウイルスによりトランスで提供される（Ｈ．Ｃｈｅｎ，Ｌ．Ｍ．Ｍａｃｋ，Ｒ．Ｋｅｌｌｙ，Ｍ．Ｏｎｔｅｌｌ，Ｓ．Ｋｏｃｈａｎｅｋ，Ｐ．Ｒ．Ｃｌｅｍｅｎｓ，“すべてのウイルス遺伝子を欠くアデノウイルスベクターの筋における持続（Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｉｎ ｍｕｓｃｌｅ ｏｆ ａｎ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｔｈａｔ ｌａｃｋｓ ａｌｌ ｖｉｒａｌ ｇｅｎｅｓ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：１６４５−１６５０（１９９７））。
アデノウイルスベクターは、インビトロ及びインビボで標的細胞を形質導入するのに非常に有効であり、高力価（＞１０１１／ｍｌ）で生じ得る。ラット脳におけるＥ１欠失ベクターを用いた長期間導入遺伝子発現を示したＧｅｄｄｅｓら（Ｂ．Ｊ．Ｇｏｄｄｅｓ，Ｔ．Ｃ．Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｓ．Ｌ．Ｌｉｇｈｔｍａｎ，Ｊ．Ｂ．Ｕｎｅｙ，“ＣＮＳにおける長期間遺伝子治療：アルギニンバソプレシンを発現するアデノウイルスを用いるＢｒａｔｔｌｅｂｏｒｏラットにおける視床下部性尿崩症の逆転（Ｒｅｖｅｒｓａｌ ｏｆ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｉｎｓｉｐｉｄｕｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ ｒａｔ ｕｓｉｎｇ ａｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ａｒｇｉｎｉｎｅ ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ）”，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３：１４０２−１４０４（１９９７））を除いて、先祖ベクターからの導入遺伝子のインビボ発現は通常一過性である（Ｉ．Ｍ．Ｖｅｒｍａ及びＮ．Ｓｏｍｉａ，遺伝子治療−見込み、問題及び考察（Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ−ｐｒｏｍｉｓｅｓ， ｐｒｏｂｌｅｍｓ ａｎｄ ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ），Ｎａｔｕｒｅ，３８９：２３９−２４２（１９９７））。静注後、投与されたベクターの９０％は非免疫媒介メカニズムにより肝臓において分解される（Ｓ．Ｗｏｒｇａｌｌ，Ｇ．Ｗｏｌｆｆ，Ｅ．Ｆａｌｃｋ−Ｐｅｄｅｒｓｅｎ，Ｒ．Ｇ．Ｃｒｙｓｔａｌ，“先天性免疫メカニズムはインビボ投与後のアデノウイルスベクターの排除を支配する（Ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｄｏｍｉｎａｔｅ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，８：３７−４４（１９９７））。その後、ＭＨＣクラスＩ制限免疫応答はウイルス感染細胞を除去するためにＣＤ８＋ ＣＴＬ及び抗−アデノウイル抗体を生ずるＩＦＮ−αを分泌させるためにＣＤ４−細胞を用いると生ずる（Ｙ．Ｙａｎｇ，Ｊ．Ｍ．Ｗｉｌｓｏｎ，“インビボにおけるＭＨＣクラスＩ制限ＣＤ４− ＣＬＴｓによるアデノウイルス感染肝細胞のクリアランス（Ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｂｙ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ＣＤ４＋ ＣＴＬｓ ｉｎ ｖｉｖｏ）”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５：２５６４−２５６９（１９９５））。アデノウイルスベクターを改変すると幾つかのＣＴＬエピトープが除去し得るが、認識されるエピトープは宿主ＭＨＣハプロタイプと異なる（Ｔ．Ｅ．Ｓｐａｒｅｒ，Ｓ．Ｇ．Ｗｙｎｎ，Ｄ．Ｊ．Ｃｌａｒｋ，Ｊ．Ｍ．Ｋａｐｌａｎ，Ｌ．Ｍ．Ｃａｒｄｏｚａ，Ｓ．Ｃ．Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ，Ａ．Ｅ．Ｓｍｉｔｈ，Ｌ．Ｒ．Ｇｏｏｄｉｎｇ，“アデノウイルスベクターで多重免疫化後の免疫劣性エピトープに対する細胞毒性Ｔリンパ球の生成はハプロタイプに依存する（Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｓｓｉｖｅ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ａｆｔｅｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：２２７７−２２８４（１９９７）；Ｋ．Ｊｏｏｓｅ，Ｈ．Ｃ．Ｊ．Ｅｒｔｌ，Ｊ．Ｍ．Ｗｉｌｓｏｎ，“細胞毒性Ｔリンパ球指向タンパク質及びそのマウス肝に送達されるアデノウイルスベクターに応答した組織適合性複合体クラスＩ制限（Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｔａｒｇｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｌａｓｓ Ｉ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ ｔｏ ｍｏｕｓｅ ｌｉｖｅｒ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７２：２９４５−２９５４（１９９８））。これらの細胞において分解されない残りのベクターは不活化されたプロモーターを有し（Ｄ．Ａｒｍｅｎｔａｎｏ，Ｊ．Ｚａｂｎｅｒ，Ｃ．Ｓａｃｋｓ，Ｃ．Ｃ．Ｓｏｏｋｄｅｏ，Ｍ．Ｐ．Ｓｍｉｔｈ，Ｊ．Ａ．Ｓｔ．Ｇｅｏｒｇｅ，Ｓ．Ｃ．Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ，Ａ．Ｅ．Ｓｍｉｔｈ，Ｒ．Ｊ．Ｇｒｅｇｏｒｙ，“アデノウイルスベクターからの導入遺伝子発現の持続に対するＥ４領域の影響（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｅ４ ｒｅｇｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｆｒｏｍ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：２４０８−２４１６（１９９７））、持続抗体はベクターのその後の投与を妨げる。
一時的免疫抑制治療を含む免疫応答を避けるためのアプローチはうまく導入遺伝子発現を延長させ、二次遺伝子導入を達成させた（Ｋ．Ｊｏｏｓｓ，Ｙ．Ｙａｎｇ，Ｊ．Ｍ．Ｗｉｌｓｏｎ，“シクロホスファミドはアデノウイルスベクターをマウス肝及び肺に送達後炎症を抑え、発現を延長させる（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｄｉｍｉｎｉｓｈｅｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｏｎｇｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｔｏ ｍｏｕｓｅ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｌｕｎｇ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，７：１５５５−１５６６（１９９６）；Ｍ．Ａ．Ｋａｙ，Ｌ．Ｍｅｕｓｅ，Ａ．Ｍ．Ｇｏｗｎ，Ｐ．Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ｄ．Ｈｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ，Ａ．Ａｒｕｆｆｏ，Ｈ．Ｄ．Ｏｃｈｓ，Ｃ．Ｂ．Ｗｉｌｓｏｎ，“抗−ＣＤ４０リガンド及びＣＴＬＡ４１ｇによる一時的免疫調節はマウス肝への持続的な二次アデノウイルス媒介遺伝子導入を強化する（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｎｔｉ−ＣＤ４０ ｌｉｇａｎｄ ａｎｄ ＣＴＬＡ４１ｇ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｐｒｅｓｉｓｔｅｎｃｅ ａｎｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ ｍｏｕｓｅ ｌｉｖｅｒ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：４６８６−４６９１（１９９７））。低介入方法は宿主にＵＶ不活性化ベクターを与えることにより経口耐性を誘導した（Ｈ．Ｋａｇａｍｉ，Ｊ．Ｃ．Ａｔｋｉｎｓｏｎ，Ｓ．Ｍ．Ｍｉｃｈａｌｅｋ，Ｂ．Ｈａｎｄｅｌｍａｎ，Ｓ．Ｙｕ，Ｂ．Ｊ．Ｂａｕｍ，Ｂ．Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ，“耳下腺への反復アデノウイルス投与：免疫バリヤーの役割及び経口耐性の誘導（Ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｐａｒｏｔｉｄ ｇｌａｎｄ： ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｂａｒｒｉｅｒｓ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，９：３０５−３１３（１９９８））。しかしながら、宿主よりむしろベクターを操作することが望ましい。複製欠損ベクターのみを使用するが、免疫系に提示されるウイルスタンパク質は非常に低レベルで発現する。ウイルスコード配列を含まない“ガットレス”ベクターとなる幾つかの遺伝子を含むベクターの開発により、肝組織でのインビボ導入遺伝子発現が延長した（Ｇ．Ｓｃｈｉｅｄｎｅｒ，Ｎ．Ｍｏｒｒａｌ，Ｒ．Ｊ．Ｐａｒｋｓ，Ｙ．Ｗｕ，Ｓ．Ｃ．Ｋｏｏｐｍａｎｓ，Ｃ．Ｌａｎｇｓｔｏｎ，Ｆ．Ｌ．Ｇｒａｈａｍ，Ａ．Ｌ．Ｂｅａｕｄｅｔ，Ｓ．Ｋｏｃｈａｎｅｋ，“高能力アデノウイルスベクターでゲノムＤＮＡ導入するとインビボ遺伝子発現が改善され、毒性が低下する（Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｗｉｔｈ ａ ｈｉｇｈ−ｃａｐａｃｉｔｙ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ）”，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１８：１８０−１８３（１９９８））。大部分が分解し、免疫系に提示されるアデノウイルスタンパク質内にパッキングされているＤＮＡが大量に最初に送達されることから臨床試験のための問題が生じ得る。更に、ヒト集団はＭＨＣハプロタイプに関して異種であり、その集団の大部分はアデノウイルス株に既に曝されているであろう（Ｈ．Ｇａｈｒｙ−Ｓｄａｒｄ，Ｖ．Ｍｏｌｉｎｉｅｒ−Ｆｒｅｎｋｅｌ，Ｃ．ＬｅＢｏｕｌａｉｒｅ，Ｐ．Ｓａｕｌｎｉｅｒ，Ｐ．Ｏｐｏｌｏｎ，Ｒ．Ｌｅｎｇａｎｇｅ，Ｅ．Ｇａｕｔｉｅｒ，Ａ．ＬｅＣｅｓｎｅ，Ｌ．Ｚｉｔｖｏｇｅｌ，Ａ．Ｖｅｎｅｔ，Ｃ．Ｓｃｈａｔｚ，Ｍ．Ｃｏｕｒｔｎｅｙ，Ｔ．ＬｅＣｈｅｖａｌｉｅｒ，Ｔ．Ｔｕｒｓｚ，Ｊ．Ｇｕｉｌｌｅｔ，Ｆ．Ｆａｒａｃｅ，“肺癌における組換えアデノウイルス遺伝子導入の第Ｉ相試験（Ｐｈａｓｅ Ｉ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）”，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００：２２１８−２２２６（１９９７））。
最近まで、アデノウイルスが宿主細胞に指向するメカニズムは余り理解されていなかった。よって、組織特異的発現はミオシン軽鎖１プロモーター（Ｑ．Ｓｈｉ，Ｙ．Ｗａｎｇ，Ｒ．Ｗｏｒｔｏｎ，“アデノウイルスベクターにおける細胞プロモーターの特異性及び活性の調節（Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｉｎ ａｎ ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，８：４０３−４１０（１９９７））または平滑筋細胞ＳＭ２２ａプロモーター（Ｓ．Ｋｉｍ，，Ｈ．Ｌｉｎ，Ｅ．Ｂａｒｒ，Ｌ．Ｃｈｕ，Ｊ．Ｍ．Ｌｅｉｄｅｎ，Ｍ．Ｓ．Ｐａｒｍａｃｅｋ，“インビボで平滑筋細胞に対する複製欠損アデノウイルス導入遺伝子発現の転写ターゲッティング（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｔａｒｇｅｔｔｉｎｇ ｏｆ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ−ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｏ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｖｏ）”，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００：１００６−１０１４（１９９７））のような細胞プロモーター／エンハンサーを用いることにより、または局所領域に直接送達すること（Ｊ．Ｊ．Ｒｏｍｅ，Ｖ．Ｓｈａｙａｎｉ，Ｋ．Ｄ．Ｎｅｗｍａｎ，Ｓ．Ｆａｒｒｅｌｌ，Ｓ．Ｗ．Ｌｅｅ，Ｒ．Ｖｉｒｍａｎｉ，Ｄ．Ａ．Ｄｉｃｈｅｃｋ，“二重バルーンカテーテルを用いるヒツジ動脈へのアデノウイルスベクター媒介遺伝子導入（Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ ｓｈｅｅｐ ａｒｔｅｒｉｅｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｄｏｕｂｌｅ−ｂａｌｌｏｏｎ ｃａｔｈｅｔｅｒ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，５：１２４９−１２５８（１９９４））によってのみ可能であった。アデノウイルス粒子の摂取は、ＭＨＣクラスＩ分子（Ｓ．Ｓ．Ｈｏｎｄ，Ｌ．Ｋａｒａｙａｎ，Ｊ．Ｔｏｕｒｎｉｅｒ，Ｄ．Ｔ．Ｃｕｒｉｅｌ，Ｐ．Ａ．Ｂｏｕｌａｎｇｅｒ，“ヒト上皮及びＢリンパ芽球腫瘍細胞の表面でアデノウイルスタイブ５ファィバーノブはＭＨＣクラスＩ ａ２ドメインに結合する（Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ５ ｆｉｂｅｒ ｋｎｏｂ ｂｉｎｄｓ ｔｏ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ａ２ ｄｏｍａｉｎ ａｔ ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ａｎｄ Ｂ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄ ｃｅｌｌｓ）”，ＥＭＢＯ Ｊ．，１６：２２９４−２３０６（１９９７））及びコクサッキーウイルス−アデノウイルス受容体（Ｊ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅｌｓｏｎ，Ｊ．Ａ．Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，Ｇ．Ｄｒｏｇｕｅｔｔ，Ａ．Ｅ．Ｋｕｒｔ−Ｊｏｎｅｓ，Ａ．Ｋｒｉｔｈｉｖａｓ，Ｊ．Ｓ．Ｈｏｎｇ，Ｍ．Ｓ．Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ｒ．Ｌ．Ｃｒｏｗｅｌｌ，Ｒ．Ｗ．Ｆｉｎｂｅｒｇ，“コクサッキーウイルスＢウイルス及びアデノウイルス２及び５に対する共通受容体の単離（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｏｍｍｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ ｖｉｒｕｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ ２ ａｎｄ ５）”，Ｓｃｉｅｎｃｅ：２７５：１３０２−１３２３（１９９７）を含む細胞受容体とアデノウイルス中のファイバーコートタンパク質との初期相互作用を含む２段階プロセスであることが判明している。その後、アデノウイルス粒子のペントンベースタンパク質は細胞表面ヘテロダイマーのインテグリンファミリーに結合し（Ｔ．Ｊ．Ｗｉｃｋｈａｍ，Ｐ．Ｍａｔｈｉａｓ，Ｄ．Ａ．Ｃｈｅｒｅｓｈ，Ｇ．Ｒ．Ｎｅｍｅｒｏｗ，“インテグリンａｖｄ３及びａｖｄ５はアデノウイルス内在化を促進するがウイルス付着を促進しない（Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ａｖｂ３ ａｎｄ ａｂｖ５ ｐｒｏｍｏｔｅ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ ｂｕｔ ｎｏｔ ｖｉｒｕｓ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）”Ｃｅｌｌ，７３：３０９−３１９（１９９３））、受容体媒介エンドサイトーシスを介して内在化され得る。多くの細胞はアデノウイルスファイバーコートタンパク質に対する一次受容体を発現するが、内在化はより選択である（Ｊ．Ｄ．Ｈａｒｒｉｓ及びＮ．Ｒ．Ｌｅｍｏｉｎｅ，“標的化遺伝子治療の戦術（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ）”，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１２：４００−４０４（１９９６））。ウイルス摂取を増加させる方法には、適当なインテグリンを発現させるために標的細胞を刺激すること（Ｅ．Ｄａｖｉｓｏｎ，Ｒ．Ｍ．Ｄｉａｚ，Ｉ．Ｒ．Ｈａｒｔ，Ｇ．Ｓａｎｔｉｓ，Ｊ．Ｆ．Ｍａｒｓｈａｌｌ，“インテグリンａ５ｂ１媒介アデノウイルス感染はインテグリン活性化抗体ＴＳ２／１６により強化される（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａ５ｂ１−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒｉｎ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ＴＳ２／１６）”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，７１：６２０４−６２０７（１９９７））、標的細胞タイプに対する特異性を有する抗体をアデノウイルスにコンジュゲートすること（Ｔ．Ｊ．Ｗｉｃｋｈａｍ，Ｇ．Ｍ．Ｌｅｅ．Ｊ．Ａ．Ｔｉｔｕｓ，Ｊ．Ａ．Ｔｉｔｕｓ，Ｇ．Ｓｃｏｎｏｃｃｈｉａ，Ｔ．Ｂａｋａｃｓ，Ｉ．Ｋｏｖｅｓｄｉ，Ｄ．Ｍ．Ｓｅｇａｌ，“ＣＤ３を介するＴ細胞への指向性アデノウイルス媒介遺伝子送達（Ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ＣＤ３）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：７６６３−７６９（１９９７ｂ）；Ｃ．Ｋ．Ｇｏｌｄｍａｎ，Ｂ．Ｅ．Ｒｏｇｅｒｓ，Ｊ．Ｔ．Ｄｏｕｇｌａｓ，Ｂ．Ａ．Ｓｏｎｓｏｗｓｋｉ，Ｗ．Ｙｉｎｇ，Ｇ．Ｐ．Ｓｉｅｇｅｌ，Ａ．Ｂａｉｒｄ，Ｊ．Ａ．Ｃａｍｐａｉｎ，Ｄ．Ｔ．Ｃｕｒｉｅｌ，“線維芽細胞増殖因子受容体を介するカポジ肉腫細胞への指向性遺伝子送達（Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ Ｋａｐｏｓｉ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ｔｈｅ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５７：１４４７−１４５１（１９９７））が含まれる。抗体の使用はベクターの産生の困難さ及び補体系の活性化の潜在的危険性を高める。ファイバーコートタンパク質に受容体結合モチーフを加えることにより（Ｔ．Ｊ．Ｗｉｃｋｈａｍ，Ｅ．Ｔｚｅｎｇ，Ｌ．Ｌ．Ｓｈｅａｒｓ ＩＩ，Ｐ．Ｗ．Ｒｏｅｌｖｉｎｋ，Ｙ．Ｌｉ，Ｇ．Ｍ．Ｌｅｅ，Ｄ．Ｅ．Ｂｒｏｕｇｈ，Ａ．Ｌｉｚｏｎｏｖａ，Ｉ．Ｋｏｖｅｓｄｉ，“キメラファイバータンパク質を含むアデノウイルスベクターによる高いインビトロ及びインビボ遺伝子導入（Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｂｙ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｆｉｂｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：８２２１−８２２９（１９９７ａ））、損傷を受けた内皮または平滑筋細胞により発現するインテグリンまたは多くの細胞タイプにより発現するヘパリンスルフェート受容体にウイルスを結合させることができた。
（アデノ随伴ウイルスベクター）
アデノ随伴ウイルスベクターは細胞及び／または細胞株にＥＢＶ−ＴＫまたはＫＨＳＶ−ＴＫをトランスフェクトするために使用し得る。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は増殖のためにヘルパーウイルス（通常、アデノウイルス）に依存する非病原性ヒトパルボウイルスである。これらのウイルスは、分裂及び非分裂細胞の両方を感染させることができ、ヘルパーウイルスの非存在下ではヒト宿主ゲノム（１９ｑ１３→ｑｔｅｒ）の特定部分で高頻度で組込まれ（Ｒ．Ｍ．Ｋｏｔｉｎ，Ｍ．Ｓｉｎｉｓｃａｌｃｏ，Ｒ．Ｊ．Ｓａｍｕｌｓｋｉ，Ｘ．Ｄ．Ｚｈｕ，Ｌ．Ｈｕｎｔｅｒ，Ｃ．Ａ．Ｌａｕｇｈｌｉｎ，Ｓ．ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ，Ｎ．Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｍ．Ｒｏｃｃｈｉ，Ｋ．Ｉ．Ｂｅｒｎｓ，“アデノ随伴ウイルスによる部位特異的組込み（Ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｂｙ ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２２１１−２２１５（１９９０））。野生型ゲノムは、ウイルス複製、構造遺伝子発現及び宿主ゲノムへの組込みをコントロールするタンパク質をコードするｒｅｐ及びキャプシド構造タンパク質をコードするｃａｐの２つの遺伝子からなる一本鎖ＤＮＡ分子である。ゲノムの各端部にプロモーターを含有する１４５ｂｐ末端反復（ＴＲ）がある。
ベクターとして使用するとき、ｒｅｐ遺伝子及びｃａｐ遺伝子は導入遺伝子及びその関連調節配列により置換される。インサートの全長は野生型ゲノムの長さである４．７ｋｂを大きく越え得ない（Ａ．Ｅ．Ｓｍｉｔｈ，“遺伝子治療におけるウイルスベクター（Ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｉｎ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ）”，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，４９：８０７−８３８（１９９５））。組換えベクターの作成のためには、ヘルパー遺伝子産物（Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ２ａ、Ｅ４及びアデノウイルスゲノム由来のＶＡ ＲＮＡ）と一緒にｒｅｐ及びｃａｐがイントランスを提供する必要がある。一般的方法は、ベクターについてのプラスミド及びｒｅｐ及びｃａｐについてのプラスミドである２つのプラスミドをアデノウイルスを感染させた２９３細胞に同時トランスフェクトすることである（Ｒ．Ｊ．Ｓａｍｕｌｓｋｉ，Ｌ．Ｃｈａｎｇ，Ｔ．Ｓｈｅｎｋ，“組換えアデノ随伴ウイルスのヘルパー非含有ストック：正常組込みはウイルス遺伝子発現を必要としない（Ｈｅｌｐｅｒ ｆｒｅｅ ｓｔｏｃｋｓ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓｅｓ： ｎｏｒｍａｌ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｒｅｑｕｉｒｅ ｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６３：３８２２−３８２８（１９８９））。しかしながら、この方法は厄介で、低収率（＜１０４粒子／ｍｌ）であり、アデノウイルス及び野生型ＡＡＶで汚染される傾向にある。低収率の１つの理由はアデノウイルス複製に対するｒｅｐ遺伝子産物の抑制影響である（Ｋ．Ａ．Ｖｉｎｃｅｎｔ，Ｓ．Ｔ．Ｐｉｒａｉｎｏ，Ｓ．Ｃ．Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ，“組換えアデノ随伴ウイルスパッケージングの分析及びｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子産物に対する要件（Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｐａｃｋａｇｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｒｅｐ ａｎｄ ｃａｐ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：１８９７−１９０５（１９９７））。より最近のプロトコルは全てのアデノウイルス構造遺伝子を除去し、ｒｅｐ耐性プラスミドを使用する（Ｘ．Ｘｉａｏ，Ｊ．Ｌｉ，Ｒ．Ｊ．Ｓａｍｕｌｓｋｉ，“ヘルパーアデノウイルスの非存在下での高力価組換えアデノ随伴ウイルスベクターの産生（Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ−ｔｉｔｅｒ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ｈｅｌｐｅｒ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７２：２２２４−２２３２（１９９８））か、または感染前に成熟ウイルスにｒｅｐ発現プラスミドをコンジュゲートする（Ｋ．Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒ，Ｗ．Ｍ．Ｋｅｌｌｅｙ，Ｊ．Ｆ．Ｂｕｒｄａ，Ｊ．Ｍ．Ｗｉｌｓｏｎ，“ＡＡＶゲノムの効率的な救出及び送達を示す新規なアデノウイルス−アデノ随伴ウイルスハイブリッド（Ａ ｎｏｖｅｌ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｈｙｂｒｉｄ ｖｅｃｔｏｒ ｔｈａｔ ｄｉｓｐｌａｙｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅｓｃｕｅ ａｎｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＶ ｇｅｎｏｍｅ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，７：２０７９−２０８７（１９９６））。
ｒｅｐの非存在下において、ＡＡＶベクターは、末端反復が僅かに分解したなら、単一プロウイルスまたは頭−尾コンカタマーとしてランダムに組込まれる（Ｅ．Ａ．Ｒｕｔｌｅｄｇｅ及びＤ．Ｗ．Ｒｕｓｓｅｌｌ，“アデノ随伴ウイルスベクター組込みジャンクション（Ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：８４２９−８４３６（（１９９７））。ＡＡＶベクターの興味は長い導入遺伝子発現を可能とする宿主ゲノムへの組込みのためであった。血管内皮細胞（Ｙ．Ｍａｅｄａ，Ｕ．Ｉｋｅｄａ，Ｙ．Ｏｇａｓａｗａｒａ，Ｍ．Ｕｒａｂｅ，Ｔ．Ｔａｋｉｚａｗａ，Ｔ．Ｓａｉｔｏ，Ｐ．Ｃｏｌｏｓｉ，Ｇ．Ｋｕｒｔｚｍａｎ，Ｋ．Ｓｈｉｍａｄａ，Ｋ．Ｏｚａｗａ，“アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを用いる血管細胞への遺伝子導入（Ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌｓ ｕｓｉｎｇ ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ （ＡＡＶ） ｖｅｃｔｏｒ）”，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｓ．，３５：５１４−５２１（１９９７））、有紋筋（Ｋ．Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒ，Ｋ．Ｊｏｏｓｓ，Ｊ．Ａｌｓｔｏｎ，Ｙ．Ｙａｎｇ，Ｓ．Ｅ．Ｈａｅｃｋｅｒ，Ｋ．Ｈｉｇｈ，Ｒ．Ｐａｔｈａｋ，Ｓ．Ｅ．Ｒａｐｅｒ，Ｊ．Ｍ．Ｗｉｌｓｏｎ，“筋肉への遺伝子送達のための組換えアデノ随伴ウイルス（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｆｏｒ ｍｕｓｃｌｅ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）”，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３：３０６−３１６（１９９７）；Ｒ．Ｗ．Ｈｅｒｚｏｇ，Ｊ．Ｎ．Ｈａｇｓｔｒｏｍ，Ｓ．Ｋｕｎｇ，Ｓ．Ｊ．Ｔａｉ，Ｊ．Ｍ．Ｗｉｌｓｏｎ，Ｋ．Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒ，Ｋ．Ａ．Ｈｉｇｈ，“組換えアデノ随伴ウイルスの筋肉内注射後のヒト血液凝固因子ＩＸｌの安定な遺伝子導入及び発現（Ｓｔａｂｌｅ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｌｏｏｄ ｃｏａｇｌｕａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＩＸ ａｆｔｅｒ ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：５８０４−５８０９（１９９７））、及び肝細胞（Ｒ．Ｏ．Ｓｎｙｄｅｒ，Ｃ．Ｈ．Ｍｉａｏ，Ｇ．Ａ．Ｐａｔｉｊｎ，Ｓ．Ｋ．Ｓｐｒａｔｔ，Ｏ．Ｄａｎｏｓ，Ｄ．Ｎａｇｙ，Ａ．Ｍ．Ｇｏｗｎ，Ｂ．Ｗｉｎｔｅｒ，Ｌ．Ｍｅｕｓｅ，Ｌ．Ｋ．Ｃｏｈｅｎ，Ａ．Ｒ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｍ．Ａ．Ｋａｙ，“組換えＡＡＶベクターの肝遺伝子導入後のマウスにおけるヒト因子ＩＸの持続的治療濃度（Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｆａｃｔｏｒ ＩＸ ｉｎ ｍｉｃｅ ａｆｔｅｒ ｈｅｐａｔｉｃ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＡＡＶ ｖｅｃｔｏｒｓ）”，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１６：２７０−２７５（１９９７））への遺伝子導入が報告されており、導入遺伝子が異なる種に由来しないときには長い発現が見られる。ＡＡＶキャプシドに対する中和抗体が検出され得るが、ベクターの再投与を防止しないしプロモーター活性をシャットダウンもしない。多分ウイルスキャプシドの単純性のために免疫応答は非常に黙している。ＡＡＶ抗体はヒト集団中に存在するので、更なる研究が必要であろう。局在化ベクター送達による以外に特定細胞タイプに指向させることは試みられていない。
特に、参照により本明細書に含まれるとする米国特許第５，６９３，５３１号明細書に記載されているアデノ随伴ベクター、例えばＡＡＶｐ５ｎｅｏ、ｐＳＶ−β−ガラクトシダーゼ、ＴＲＦ１６９、ＬＺ１１、ｐＳＰ７２、ｐＳＰ７２ｎＬａｃＺ、ｐＡｄＲＳＶ４、ｐＡｄＲＳＶｎＬａｃＺ、ＡＡＶｒｎＬａｃ、ＳＶ４０、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ、ｐＳＶ４０ ｏｒｉ ＡＡＶ１及びｐＫＭＴ１１を使用することができる。
（レトロウイルスベクター）
レトロウイルスベクターを細胞及び／または細胞株にＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトするために使用することができる。レトロウイルスはゲノムとして１本鎖ＲＮＡ分子を含むエンベロープウイルス類である。感染後、ウイルスゲノムは二本鎖ＤＮＡに逆翻訳され、これは宿主ゲノムに組み込まれ、タンパク質として発現する。ウイルスゲノムは、（コアタンパク質をコードする）ｇａｂ、（逆転写酵素をコードする）ｐｏｌ及び（ウイルスエンベロープタンパク質をコードする）ｅｎｖの少なくとも３つの遺伝子を含む約１０ｋｂである。ゲノムの各末端にプロモーター／エンハンサー領域及び組込みに関与する配列を含む長末端反復（ＬＴＲ）がある。更に、ウイルスＤＮＡ（ｐｓｉ）及びＲＮＡスプライス部位をｅｎｖ遺伝子にパッケージするために必要な配列が存在する。幾つかのレトロウイルスは、変異したときに癌を引き起こし得るプロトオンコジーンを含む。しかしながら、プロトオンコジーンはベクター作成時に除去される。レトロウイルスはまた細胞にプロトオンコジーン近くに組込まれ、ＬＴＲから不適切な発現をさせるかまたは腫瘍抑制遺伝子を破壊することにより、細胞を形質転換し得る。挿入突然変異と称されるこの事象はレトロウイルスをベクターとして使用したときにはまれであるが起こり得る。
レトロウイルスは最も頻繁に、両種指向性ウイルスであり、マウス細胞を感染させることができ、マウスモデル及びヒト細胞でベクターを発生でき、ヒト治療ができるモロニーマウス白血病ウイルス（Ｍｏ−ＭＬＶ）をベースとする。ウイルス遺伝子（ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖ）は導入遺伝子で置換され、パッケージング細胞株においてプラスミドから発現する。非必須遺伝子はパッケージング配列（ｐｓｉ）を欠くので、これらはビリオン粒子に含まれない。複製コンピテントレトロウイルスを生ずる組換えを避けるために、ベクター骨格と相同の全ての領域は除去しなければならず、非必須遺伝子は少なくとも２つの転写単位で発現されなければならない（Ｄ．Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ，Ｓ．Ｇｏｆｆ，Ａ．Ｂａｎｋ，“遺伝子導入のための安全パッケージングライン：２つの異なるプラスミドでのウイルス遺伝子分離（Ａ ｓａｆｅ ｐａｃｋａｇｉｎｇ ｌｉｎｅ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ： ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ｖｉｒａｌ ｇｅｎｅｓ ｏｎ ｔｗｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｓｍｉｄｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６２：１１２０−１１２４（１９８８））。こうしても、複製コンピテントレトロウイルスが低頻度で生ずる。
必須領域は５’−ＬＴＲ及び３’−ＬＴＲを含み、パッケージング配列は５’−ＬＴＲの下流にある。導入遺伝子発現は５’−ＬＴＲのプロモーター／エンハンサー領域によるかまたは別のウイルス（例えば、サイトメガロウイルス、ラウス肉腫ウイルス）または細胞（例えば、β−アクチン、チロシン）プロモーターにより駆動され得る。変異分析から、多くとも全ｇａｐコード配列及び上流直前領域はウイルスパッケージングまたは導入遺伝子発現に影響を与えることなく除去し得る（Ｓ．Ｈ．Ｋｉｍ，Ｓ．Ｓ．Ｙｕ，Ｊ．Ｓ．Ｐａｒｋ，Ｐ．Ｄ．Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｃ．Ｓ．Ａｎ，Ｓ．Ｋｉｍ，“改善された安全性、遺伝子発現及び可変性を有するレトロウイルスベクターの構築（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｓａｆｅｔｙ， ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｖｅｒｓａｔｉｌｉｔｙ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７２：９９４−１００４（１９９８））。しかしながら、導入遺伝子スタートコドンの正確な位置及び５’−ＬＴＲの小さな変化が導入遺伝子発現に影響を及ぼす（Ｉ．Ｒｉｖｉｒｅ，Ｋ．Ｂｒｏｓｅ，Ｒ．Ｃ．Ｍｕｌｌｉｇａｎ，“遺伝的に修飾した細胞を移植したマウス骨髄移植片レシピエントにおけるヒトアデノシンデアミナーゼの発現に対するレトロウイルスベクター設計の影響（Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｄｅｓｉｇｎ ｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｄｅａｍｉｎａｓｅ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ ｅｎｇｒａｆｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｃｅｌｌｓ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：６７３３−６７３７（１９９５））。形質転換細胞の特定のために、ネオマイシン及びβ−ガラクトシダーゼのような選択マーカーを導入でき、また、導入遺伝子の発現は、内部リボソーム結合部位を付加することにより改善し得る（Ｍ．Ｓａｌｅｈ，“２つの遺伝子を同時発現できるレトロウイルスベクター及び代替選択マーカーの可変性（Ａ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｔｈａｔ ａｌｌｏｗｓ ｃｏ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｖｅｒｓａｔｉｌｉｔｙ ｏｆ ａｌｔｅｒｎａｔｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｍａｒｋｅｒｓ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，８：９７９−９８３（１９９７））。レトロウイルスベクターの利用可能な収容力は約７．５ｋｂであり（Ｉ．Ｍ．Ｖｅｔｍａ及びＮ．Ｓｏｍｉａ，“遺伝子治療−見込み、問題及び考察（ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ− ｐｒｏｍｉｓｅｓ， ｐｒｏｂｌｅｍｓ ａｎｄ ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ）”，Ｎａｔｕｒｅ，３８９：２３９−２４２（１９９７））、これはたとえｃＤＮＡを使用しても幾つかの遺伝子には小さすぎる。
レトロウイルエンベロープは特定の細胞タンパク質と相互作用して、指向細胞範囲を決定する。ｅｎｖ遺伝子またはその産物を改変することは、指向細胞範囲を操作する成功手段であることが分かった。エンベロープタンパク質及び細胞受容体との結合部位を直接修飾するアプローチもあるが、このアプローチはその後のウイルス粒子の内在化を妨害する傾向にある（Ｊ．Ｄ．Ｈａｒｒｉｓ及びＮ．Ｒ．Ｌｅｍｏｉｎｅ，“標的遺伝子治療の戦略（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ）”，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１２：４００−４０４（１９９６））。ｅｎｖ遺伝子の一部をエリスロポエチンタンパク質（ＥＰＯ）由来の１５０コドンで置換することにより、Ｋａｓａｈａｒａら（Ｎ．Ｋａｓａｈａｒａ，Ａ．Ｍ．Ｄｏｚｙ，Ｙ．Ｗ．Ｋａｎ，レトロウイルスリガンド−受容体相互作用の組織特異的ターゲッティング（Ｔｉｓｓｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔａｒｇｅｔｔｉｎｇ ｏｆ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｌｉｇａｎｄ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ），Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６６：１３７４−１３７６（１９９４））は高アフィニティーでＥＰＯ受容体を有する細胞に指向させることができた。抗体を第２の細胞特異的抗体に対してアフィニティーを有するウイルス粒子にストレプトアビジン架橋を介してカップリングさせるとウイルス摂取が改善されるが、内在化によりウイルス分解が生ずる傾向がある（Ｐ．Ｒｏｕｘ，Ｐ．Ｊｅａｎｔｅｕｒ，Ｍ．Ｐｉｅｃｈａｃｚｙｋ，“マウスエコトロピックマウス白血病ウイルス由来ウイルスによる主要組織適合複合体クラスＩ及びクラスＩＩ抗原を用いる特定細胞タイプのターゲッティングに対する可変性で潜在的に一般的な方法（Ａ ｖｅｒｓａｔｉｌｅ ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ｇｅｎｅｒａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔｔｉｎｇ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｅｌｌ ｔｙｐｅｓ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｌａｓｓ Ｉ ａｎｄ ｃｌａｓｓ ＩＩ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｂｙ ｍｏｕｓｅ ｅｃｏｔｒｏｐｉｃ ｍｕｒｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｖｉｒｕｓｅｓ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：９０７９−９０８３（１９８９））。Ｎｅｄａら（Ｈ．Ｎｅｄａ，Ｃ．Ｈ．Ｗｕ，Ｇ．Ｙ．Ｗｕ，“エコトロピックマウス白血病ウイルスを化学的修飾するとその指向細胞特異性が変化する（Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｅｃｏｔｒｏｐｉｃ ｍｕｒｉｎｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｔａｒｇｅｔ ｃｅｌｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６：１４１４３−１４１４６（１９９１））は、ウイルス粒子をラクトースで処理し、アシアログリコタンパク質受容体を発現する細胞（主に、肝細胞）により摂取させた。その後、多分エンドソームの酸性化のために効率的なウイルス導入遺伝子発現が生じ、ウイルスエンベロープをエンドソーム膜と融合させ得た。
ウイルスはその向性に関して異なっている。従って、ｅｎｖ遺伝子を別のウイルスの遺伝子で置換することによりシュードタイピングとして公知の技術で宿主範囲を拡張し得る。水疱性口内炎ウイルスＧタンパク質はＭｏ−ＭＬＶ誘導ベクターに含まれている（Ｊ．Ｃ．Ｂｕｒｎｓ，Ｔ．Ｍａｔｓｕｂａｒａ，Ｇ．Ｌｏｚｉｎｓｋｉ，Ｊ．Ｙｅｅ，Ｔ．Ｆｒｅｉｄｍａｎｎ，Ｃ．Ｈ．Ｗａｓｈａｂａｕｇｈ，Ｐ．Ａ．Ｔｓｏｎｉｓ，“培養イモリ肢細胞における凡親和性レトロウイルスベクター媒介遺伝子導入、組込み及び発現（Ｐａｎｔｒｏｐｉｃ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ， ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｎｅｗｔ ｌｉｍｂ ｃｅｌｌｓ）”，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，１６５：２８５−２８９（１９９４））。このベクターは超遠心により精製したときにより安定である。最近、Ｑｉｎｇら（Ｋ．Ｑｉｎｇ，Ｔ．Ｂａｃｈｅｌｏｔ，Ｐ．Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ，Ｘ．Ｗａｎｇ，Ｌ．Ｐｅｎｇ，Ｍ．Ｃ．Ｙｏｄｅｒ，Ｐ．Ｌｅｂｏｕｌｃｈ，Ａ．Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ，“エコトロピックレトロウイルス受容体ｃＤＮＡのアデノ随伴ウイルスタイプ２媒介導入により樹立及び初代ヒト細胞をエコトロピックレトロウイルス導入できる（Ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｅｃｏｔｒｏｐｉｃ ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃＤＮＡ ａｌｌｏｗｓ ｅｃｏｔｒｏｐｉｃ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａｎｄ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：５６６３−５６６７（１９９７））は、まずレシピエント細胞をレトロウイルスエンベロープタンパク質の細胞受容体を発現する（下記する）アデノ随伴ベクターで処理することにより、多数の細胞株への導入を改善した。
ウイルス遺伝子のレトロウイルスへの組込み及びウイルス遺伝子の発現のためには、指向細胞は分裂していなければならない。このためインビボまたはエキソビボでの増殖細胞への遺伝子治療が制限され、細胞を身体から取り出し、複製を刺激するために処理し、レトロウイルスベクターを導入した後患者に戻す。癌をインビボで治療すると、腫瘍細胞は優先的に指向目標となる（Ｊ．Ａ．Ｒｏｔｈ，Ｄ．Ｎｇｕｙｅｎ，Ｄ．Ｄ．Ｌａｗｒｅｎｃｅ，Ｂ．Ｌ．Ｋｅｍｐ，Ｃ．Ｈ．Ｃａｒｒａｓｃｏ，Ｄ．Ｚ．Ｆｅｒｓｏｎ，Ｗ．Ｋ．Ｈｏｎｇ，Ｒ．Ｋｏｍａｋｉ，Ｊ．Ｊ．Ｌｅｅ，Ｊ．Ｃ．Ｎｅｓｂｉｔｔ，Ｋ．Ｍ．Ｗ．Ｐｉｓｔｅｒｓ，Ｊ．Ｂ．Ｐｕｔｎａｍ，Ｒ．Ｓｃｈｅａ，Ｄ．Ｍ．Ｓｈｉｎ，Ｇ．Ｌ．Ｗａｌｓｈ，Ｍ．Ｍ．Ｄｏｌｏｒｍｅｎｔｅ，Ｃ．Ｉ．Ｈａｎ，Ｆ．Ｄ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｎ．Ｙｅｎ，Ｋ．Ｘｕ，Ｌ．Ｃ．Ｓｔｅｐｈｅｎｓ，Ｔ．Ｊ．ＭｃＤｏｎｎｅｌｌ，Ｔ．Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ，Ｄ．Ｃａｉ，“肺癌患者の腫瘍へのレトロウイルス媒介野生型ｐ５３遺伝子導入（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ ｐ５３ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｔｏ ｔｕｍｏｒｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）”，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２：９８５−９９１（１９９６）；Ｄ．Ｌ．Ｔａｉｔ，Ｐ．Ｓ．Ｏｂｅｒｍｉｌｌｅｒ，Ｓ．Ｒｅｄｌｉｎ−Ｆｒａｚｉｅｒ，Ｒ．Ａ．Ｊｅｎｓｅｎ，Ｐ．Ｗｅｌｃｓｈ，Ｊ．Ｄａｎｎ，Ｍ．Ｋｉｎｇ，Ｄ．Ｈ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｊ．Ｔ．Ｈｏｌｔ，“卵巣癌におけるレトロウイルスＢＲＣＡ １ｓｖ遺伝子治療の第Ｉ相試験（Ａ ｐｈａｓｅ Ｉ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ＢＲＣＡ １ｓｖ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｏｙ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ）”，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，３：１９５９−１９６８（１９９７））。しかしながら、エキソビボ細胞はより高いウイルス力価及び増殖因子に曝されるのでより効率的に導入され得る（Ｈ．Ｇｌｉｍｍ，Ｈ．Ｐ．Ｋｉｅｍ，Ｂ．Ｄａｒｏｖｓｋｙ，Ｒ．Ｓｔｏｒｂ，Ｊ．Ｗｏｌｆ，Ｖ．Ｄｉｅｈｌ，Ｒ．Ｍｅｒｔｅｌｓｍａｎｎ，Ｃ．Ｖ．Ｋａｌｌｅ，“ＧＡＬＶ−シュードタイプレトロウイルスベクターに長期間曝した後再選択した原始ＣＤ３４＋／ＣＤ３８ｌｏヒト骨髄細胞における効率的な遺伝子導入（Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ＣＤ３４＋／ＣＤ３８ｌｏ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｆｔｅｒ ｌｏｎｇ ｔｅｒｍ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｏ ＧＡＬＶ−ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅｄ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，８：２０７９−２０８６（１９９７））。更に、エキソビボ処理された腫瘍細胞は腫瘍塊に結びつき、殺腫瘍効果を導き得る（Ｅ．Ｈ．Ｏｌｄｆｉｅｌｄ及びＺ．Ｒａｍ，“軟膜癌腫症の治療のためのクモ膜下遺伝子治療（Ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｌｅｐｔｏｍｅｎｉｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｔｏｓｉｓ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，６：５５−８５（１９９５）；Ｚ．Ａｂｄｅｌ−Ｗａｈａｂ，Ｃ．Ｗｅｌｔｚ，Ｄ．Ｈｅｓｔｅｒ，Ｎ．Ｐｉｃｋｅｔｔ，Ｃ．Ｖｅｒｖａｅｒｔ，Ｊ．Ｒ．Ｂａｒｂｅｒ，Ｄ．Ｊｏｌｌｙ，Ｈ．Ｆ．Ｓｅｉｇｌｅｒ，“γ−インターフェロン遺伝子修飾自己メラノーマ細胞を用いる免疫治療の第Ｉ相臨床試験（Ａ ｐｈａｓｅ Ｉ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ ｇｅｎｅ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ）”，Ｃａｎｃｅｒ，８０：４０１−４１２（１９９７））。
導入遺伝子発現は通常インビトロ及び最初インビボで十分であるが、長期間発現を達成するのは困難である。レトロウイルスは、いずれもヒト血清中に存在するｃ１補体タンパク質及び抗−α−ガラクトシルエピトープ抗体により不活化される（Ｐ．Ｒ．Ｒｏｔｈｅｒ，Ｌ．Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊ．Ｐ．Ｓｐｒｉｎｇｈｏｒｎ，Ｗ．Ｃ．Ｂｉｒｋｓ，Ｍ．Ｓ．Ｓａｎｄｒｉｎ，Ｓ．Ｐ．Ｓｑｕｉｎｔｏ，Ｓ．Ａ．Ｒｏｌｌｉｎｓ，“抗−α−ガラクトシル天然抗体により媒介されるヒト血清中でのレトロウイルス不活化の新規メカニズム（Ａ ｎｏｖｅｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ａｎｔｉ−ａ−ｇａｌａｃｔｏｓｙｌ ｎａｔｕｒａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）”，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８２：１３４５−１３５５（１９９５）；Ｓ．Ａ．Ｒｏｌｌｉｎｓ，Ｃ．Ｗ．Ｂｉｒｋｓ，Ｅ．Ｓｅｔｔｅｒ，Ｓ．Ｐ．Ｓｑｕｉｎｔｏ，Ｒ．Ｐ．Ｒｏｔｈｅｒ，“ヒト血清でのレトロウイルスベクタープロデューサー細胞死は天然抗体及び補体により媒介される：体液免疫応答の回避方法（Ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｐｒｏｄｕｃｅｒ ｃｅｌｌ ｋｉｌｌｉｎｇ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｎａｔｕｒａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ： ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｅｖａｄｉｎｇ ｔｈｅ ｈｕｍｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，７：６１９−６２６（１９９６））。また、導入遺伝子発現は炎症性インターフェロン、特にウイルスＬＴＲに作用するＩＦＮ−α及びＩＦＮ−γによっても抑えられる（Ｓ．Ｇｈａｚｉｚａｄｅｈ，Ｊ．Ｍ．Ｃａｒｒｏｌｌ，Ｌ．Ｂ．Ｔａｉｃｈｍａｎ，“インターフェロンによるレトロウイルス媒介導入遺伝子発現の抑制；遺伝子治療に対する関係（Ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ： ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：９１６３−９１６９（１９９７））。レトロウイルスゲノムは宿主ゲノムに組込まれるので、ウイルスＬＴＲプロモーターが不活化されることが多いにあり得る。従って、１つのアプローチは宿主細胞遺伝子に対してプロモーター、例えばチロシンを使用する（Ｒ．Ｍ．Ｄｉａｚ，Ｔ．Ｅｉｓｅｎ，Ｉ．Ｒ．Ｈａｒｔ，Ｒ．Ｇ．Ｖｉｌｅ，“ウイルスプロモーター／エンハンサー要素を調節配列で交換してメラノーマ遺伝子治療のための標的化ハイブリッド長末端反復ベクターを作成した（Ｅｘｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｐｒｏｍｏｔｅｒ／ｅｎｈａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｈｙｂｒｉｄ ｌｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｅｌａｎｏｍａ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７２：７８９−７９５（１９９８））。明らかに、これはさらに研究すべき分野である。
レンチウイルスは増殖細胞及び非増殖細胞を感染させることができるレトロウイルスのサブクラスである。レンチウイルスは単純レトロウイルスよりもより複雑であり、更にｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｎｅｆ及びｖｉｆの６個のタンパク質を含む。現在のパッケージング細胞株はシュードタイプｅｎｖ遺伝子、導入遺伝子構築物、及び構造及び調節遺伝子をイントランスに供給するパッケージング構築物について別々のプラスミドを有する（Ｌ．Ｎａｌｄｉｎｉ，Ｕ．Ｂｌｍｅｒ，Ｐ．Ｇａｌｌａｙ，Ｄ．Ｏｒｙ，Ｒ．Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｆ．Ｈ．Ｇａｇｅ，Ｉ．Ｍ．Ｖｅｒｍａ，Ｄ．Ｔｒｏｎｏ，“レンチウイルスベクターによる非分裂細胞のインビボ遺伝子送達及び安定な導入（Ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｎ−ｄｉｖｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ）”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２：２６３−２６７（１９９６））。筋肉、肝臓及びニューロン組織での長いインビボ発現を示すマーカー遺伝子を用いた初期の結果は有望であった（Ｕ．Ｂｌｍｅｒ，Ｌ．Ｎａｌｄｉｎｉ，Ｔ．Ｋａｆｒｉ，Ｄ．Ｔｒｏｎｏ，Ｉ．Ｍ．Ｖｅｒｍａ，Ｆ．Ｈ．Ｇａｇｅ，“レンチウイルスベクターを用いる成人ニューロンにおける非常に効率的で持続的な遺伝子導入（Ｈｉｇｈｌｙ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗｉｔｈ ａ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：６６４１−６６４９（１９９７）；Ｈ．Ｍｉｙｏｓｈｉ，Ｍ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｆ．Ｈ．Ｇａｇｅ，Ｉ．Ｍ．Ｖｅｒｍａ，“ＨＩＶベースのレンチウイルスベクターを用いる網膜への安定で効率的な遺伝子導入（Ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｒｅｔｉｎａ ｕｓｉｎｇ ａｎ ＨＩＶ−ｂａｓｅｄ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：１０３１９−１０３２３（１９９７）；Ｔ．Ｋａｆｒｉ，Ｕ．Ｂｌｍｅｒ，Ｄ．Ａ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｆ．Ｈ．Ｇａｇｅ，Ｉ．Ｍ．Ｖｅｒｍａ，“レンチウイルスベクターにより肝臓及び筋肉へ送達された遺伝子の持続的発現（Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｍｕｓｃｌｅ ｂｙ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ）”，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１７：３１４−３１７（１９９７））。興味深いことに、導入遺伝子は、ＭｏＭＬＶベクターにおける状況とは異なり、活性化されない内部工学処理したサイトメガロウイルプロモーターにより駆動される。これは、食塩液コントロールと同等の程度であった、ベクター注入への限定された炎症応答のためであり得る（Ｕ．Ｂｌｍｅｒ，Ｌ．Ｎａｌｄｉｎｉ，Ｔ．Ｋａｆｒｉ，Ｄ．Ｔｒｏｎｏ，Ｉ．Ｍ．Ｖｅｒｍａ，Ｆ．Ｈ．Ｇａｇｅ，“レンチウイルスベクターを用いる成人ニューロンにおける非常に効率的で持続的な遺伝子導入（Ｈｉｇｈｌｙ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ ｓｕｔａｉｎｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗｉｔｈ ａ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：６６４１−６６４９（１９９７））。
使用するレンチウイルスベクターはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）から誘導され、非必須調節遺伝子の一部を除去する目的で安全性について評価されている。ｖｐｒ及びｖｉｆの変異体は低い効率でニューロンを感染させることができるが、筋肉または肝細胞を感染させることはできない（Ｕ．Ｂｌｍｅｒ，Ｌ．Ｎａｌｄｉｎｉ，Ｔ．Ｋａｆｒｉ，Ｄ．Ｔｒｏｎｏ，Ｉ．Ｍ．Ｖｅｒｍａ，Ｆ．Ｈ．Ｇａｇｅ，“レンチウイルスベクターを用いる成人ニューロンにおける非常に効率的な持続的遺伝子導入（Ｈｉｇｈｔｌｙ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗｉｔｈ ａ ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７１：６６４１−６６４９（１９９７）；Ｔ．Ｋａｆｒｉ，Ｕ．Ｂｌｍｅｒ，Ｄ．Ａ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｆ．Ｈ．Ｇａｇｅ，Ｉ．Ｍ．Ｖｅｒｍａ，“レンチウイルスベクターを用いて肝臓及び筋肉に送達される遺伝子の持続発現（Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｍｕｓｃｌｅ ｂｙ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｏｒｓ）”，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１７：３１４−３１７（１９９７））。
特定実施態様では、レトロウイルスｐＬＸＩＮ、ｐＳＩＲ、ｐＬＸＳＨ、ｐＬＮＣＸ、ｐＬＡＰＳＮ、ｐＦＢ及びｐＦＢ−Ｎｅｏが使用される。
（単純ヘルペスウイルスベクター）
単純ヘルペスウイルスベクターを細胞及び／または細胞株にＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトするために使用することができる。単純ヘルペスウイルスタイプ１（ＨＳＶ−１）はヒト向神経性ウイルスである。そのため、ＨＳＶ−１を神経系への遺伝子導入のためのベクターとして使用することが大いに注目されている。野生型ＨＳＶ−１ウイルスはニューロンを感染させることができ、溶菌生活周期に入っていくかまたは潜伏状態で核内エピソームとして存続させることができる。潜伏感染ニューロンは正常に機能し、免疫系により拒絶されない。潜伏ウイルスは転写的に殆どサイレントであるが、潜伏中機能し得るニューロン特異的プロモーターを有している。ＨＳＶ−１に対する抗体はヒト集団において共通である。しかしながら、脳炎のようなヘルペス感染による合併症は非常にまれである。
ウイルスゲノムは１５２ｋｂの線状二本鎖ＤＮＡ分子である。内部反復配列（ＩＲＬ及びＩＲＳ）によりそれぞれの方位で連結されている２つのユニーク領域、すなわち長いユニーク領域（ＵＬと呼ぶ）及び短いユニーク領域（ＵＳと呼ぶ）がある。ユニーク領域の非リンカー末端に末端反復（ＴＲＬ及びＴＲＳ）がある。最高８１個の遺伝子があり（Ｐ．Ｍａｒｃｏｎｉ，Ｄ．Ｋｒｉｓｋｙ，Ｔ．Ｏｌｉｇｉｎｏ，Ｐ．Ｌ．Ｐｏｌｉａｎｉ，Ｒ．Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｗ．Ｆ．Ｇｏｉｎｓ，Ｄ．Ａ．Ｆｉｎｋ，Ｊ．Ｃ．Ｇｌｏｒｉｏｓｏ，“インビボでの遺伝子導入のための複製欠損単純ヘルペスウイルスベクター（Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ−ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｖｉｖｏ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：１１３１９−１１３２０（１９９６））、そのうちの約半分は細胞培養での増殖にとって必須でない。これらの非必須遺伝子を欠失させたら、４０〜５０ｋｂの外因性ＤＮＡがウイルス内に収容し得る（Ｊ．Ｃ．Ｇｌｏｒｉｏｓｏ，Ｎ．Ａ．ＤｅＬｕｃａ，Ｄ．Ｊ．Ｆｉｎｋ，“ヒト遺伝子治療のための単純ヘルペスベクターの開発及び応用（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ）”，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，４９：６７５−７１０（１９９５））。ＨＳＶ−１遺伝子の３つの主なクラス、すなわち前初期（ＩＥまたはα）遺伝子、初期（Ｅまたはβ）遺伝子及び後期遺伝子（Ｌまたはγ）が同定されている。
感受性細胞を感染させ後の溶菌複製は、遺伝子転写の一時的に配位された配列により調節される。Ｖｍｗ６５（テグメント構造タンパク質）は、初期遺伝子を産生できるトランス活性化因子である前初期遺伝子（ＩＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７及びＩＣＰ４７７）を活性化する。初期遺伝子はヌクレオチド代謝及びＤＮＡ複製のためのタンパク質をコードする。後期遺伝子は初期遺伝子により活性化され、構造タンパク質をコードする。全周期は１０時間未満しか要せず、常に細胞死に到る。
潜伏性をもたらす分子事象は完全に解明されていない。潜伏中の遺伝子発現はゲノム中のＩＲＬ領域に位置する潜伏関連転写物（ＬＡＴｓ）により駆動される。２つのＬＡＴ（２．０及び１．５ｋｂ）はＩＥ遺伝子ＩＣＰ０と反対方向に転写される。ＬＡＴは、潜伏からのＨＳＶ−１再活性化（Ｉ．Ｓｔｅｉｎｅｒ，Ｊ．Ｇ．Ｓｐｉｖａｃｋ，Ｒ．Ｐ．Ｌｉｒｅｔｔｅ，Ｓ．Ｍ．Ｂｒｏｗｎ，Ａ．Ｒ．ＭａｃＬｅａｎ，Ｊ．Ｈ．Ｓｕｂａｋ−Ｓｈａｒｐｅ，Ｎ．Ｗ．Ｆｒａｓｅｒ，“単純ヘルペスウイルスタイプ１潜伏関連転写物は明らかに潜伏感染に必須でない（Ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １ ｌａｔｅｎｃｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ａｒｅ ｅｖｉｄｅｎｔｌｙ ｎｏｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｌａｔｅｎｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）”，ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ，８：５０５−５１１（１９８９））及び潜伏の樹立（Ｎ．Ｍ．Ｓａｗｔｅｌｌ及びＲ．Ｌ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，“単純ヘルペスウイルスタイプ１潜伏関連転写単位は解剖学的部位依存樹立及び潜伏からの再活性化を促進する（Ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １ ｌａｔｅｎｃｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｉｐｔｉｏｎ ｕｎｉｔ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ａｎａｔｏｍｉｃａｌ ｓｉｔｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｌａｔｅｎｃｙ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６６：２１５７−２１６９（１９９２））において役割を有する。ＬＡＴの発現を進める２つの潜伏活性プロモーターが同定され（Ｐ．Ｍａｒｃｏｎｉ，Ｄ．Ｋｒｉｓｋｙ，Ｔ．Ｏｌｉｇｉｎｏ，Ｐ．Ｌ．Ｐｏｌｉａｎｉ，Ｒ．Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｗ．Ｆ．Ｇｏｉｎｓ，Ｄ．Ａ．Ｆｉｎｋ，Ｊ．Ｃ．Ｇｌｏｒｉｏｓｏ，“インビボでの遺伝子導入のための複製欠損単純ヘルペスウイルスベクター（Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ−ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｖｉｖｏ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：１１３１９−１１３２０（１９９６））、ベクター導入遺伝子発現のために有用であると証明されよう。
ＨＳＶ−１ベクターを作成するために２つの基本的アプローチ、すなわちアンプリコン及び組換えＨＳＶ−１ウイルスが使用されてきた。アンプリコンは、ｃｏｌ Ｅ１ ｏｒｉ（大腸菌複製オリジン）、ＯｒｉＳ（ＨＳＶ−１複製オリジン）、ＨＳＶ−パッケージング配列、前初期プロモーターのコントロール下の導入遺伝子、及び選択マーカーを含む、細菌により産生されるプラスミドである（Ｈ．Ｊ．Ｆｅｄｅｒｏｆｆ，Ｍ．Ｄ．Ｇｅｓｃｈｗｉｎｄ，Ａ．Ｉ．Ｇｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ａ．Ｋｅｓｓｌｅｒ，“インビボでの欠損単純ヘルペスウイルス１ベクターからの神経因子の発現は交換神経節に対する陣索切断の影響を防止する（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｅｒｖｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｖｉｖｏ ｆｒｏｍ ａ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ １ ｖｅｃｔｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｘｏｔｏｍｙ ｏｎ ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｇａｎｇｌｉａ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９；１６３６−１６４０（１９９２））。アンプリコンは、イントランスにて全てのミッシング構造及び調節遺伝子を与えるヘルパーウイルスを含む細胞株（温度感受性変異体）にトランスフェクトされる。ヘルパー及びアンプリコン−含有ウイルス粒子はレシピエントに送達される。より最近のアンプリコンはプラスミドエピソーム維持のためのエプスタイン−バーウイルス誘導配列を含む（Ｓ．Ｗａｎｇ及びＪ．Ｖｏｓ，“インビトロ及びインビボでヒト細胞に遺伝子導入するためのエプスタイン−バーウイルス及び単純ヘルペスウイルスタイプ１をベースとするハイブリッドヘルペスウイルス感染性ベクター（Ａ ｈｙｂｒｉｄ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｖｅｃｔｏｒ ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７０：８４２２−８４３０（１９９６））。
組換えウイルスは、トランスに与えられる前初期遺伝子の１つ（例えば、ＩＣＰ４）を欠失させることにより複製欠損とされる。組換えウイルスは余り病原性でなく、脳組織で導入遺伝子を発現し得るが、培養ニューロンに対して毒性である（Ｐ．Ｍａｒｃｏｎｉ，Ｄ．Ｋｒｉｓｋｙ，Ｔ．Ｏｌｉｇｉｎｏ，Ｐ．Ｌ．Ｐｏｌｉａｎｉ，Ｒ．Ｒａｍａｋｒｉｓｈｍａｎ，Ｗ．Ｆ．Ｇｏｉｎｓ，Ｄ．Ａ．Ｆｉｎｋ，Ｊ．Ｃ．Ｇｌｏｒｉｏｓｏ，“インビボでの遺伝子導入のための複製欠損単純ヘルペスウイルスベクター（Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ−ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｖｉｖｏ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：１１３１９−１１３２０（１９９６））。多数の前初期遺伝子を欠失させると、細胞毒性は実質的に低下し、野生型潜伏ウイルスにおいてサイレントであるプロモーターから発現させることができる。前記プロモーターは長期間遺伝子発現において使用し得る。
複製条件付け変異体（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ−ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ ｍｕｔａｎｔｓ）は特定の細胞株においてのみ複製できる。許容細胞株は全て増殖性であり、ウイルス欠失を補うために細胞酵素を供給する。変異体にはチミジンキナーゼ（Ｍ．Ｊ．Ｄｕｒｉｎｇ，Ｊ．Ｒ．Ｎａｅｇｅｌｅ，Ｋ．Ｌ．Ｏ’Ｍａｌｌｅｙ，Ａ．Ｉ．Ｇｅｌｌｅｒ，“パーキンソンラットにおけるチロシンヒドロキシラーゼを発現するＨＳＶベクターによる長期間行動回復（Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｉｎ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａｎ ｒａｔｓ ｂｙ ａｎ ＨＳＶ ｖｅｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６６：１３９９−１４０３（１９９４））、リボヌクレアーゼレダクターゼ（Ｃ．Ｍ．Ｋｒａｍｍ，Ｍ．Ｃｈａｓｅ，Ｕ．Ｈｅｒｒｌｉｎｇｅｒ，Ａ．Ｊａｃｏｂｓ，Ｐ．Ａ．Ｐｅｃｈａｎ，Ｎ．Ｇ．Ｒａｉｎｏｖ，Ｍ．Ｓｅｎａ−ｅｓｔｅｖｅｓ，Ｍ．Ａｇｈｉ，Ｆ．Ｈ．Ｂａｒｎｅｔｔ，Ｅ．Ａ．Ｃｈｉｏｃｃａ，Ｘ．Ｏ．Ｂｒｅａｋｅｆｉｅｌｄ，“脳腫瘍遺伝子治療のための第二世代複製条件ＨＳＶ１ベクターの治療効果及び安全性（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ａ ｓｅｃｏｎｄ−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ−ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ ＨＳＶ１ ｖｅｃｔｏｒ ｆｏｒ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，８：２０５７−２０６８（１９９７））、ＵＴＰａｓｅ、または神経毒性因子ｇ３４．５（Ｓ．Ｋｅｓａｒｉ，Ｂ．Ｐ．Ｒａｎｄａｚｚｏ，Ｔ．Ｖａｌｙｉ−Ｎａｇｙ，Ｑ．Ｓ．Ｈｕａｎｇ，Ｓ．Ｍ．Ｂｒｏｗｎ，Ａ．Ｒ．ＭａｃＬｅａｎ，Ｖ．Ｍ．Ｌｅｅ，Ｊ．Ｑ．Ｔｒｏｊａｎｏｗｓｋｉ，Ｎ．Ｗ．Ｆｒａｓｅｒ，“神経弱毒化単純ヘルペスウイルス変異体を用いる実験的ヒト脳腫瘍の治療（Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｈｕｍａｎ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｎｕｅｒｏａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｍｕｔａｎｔ）”，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，７３：６３６−６４８（１９９５））が含まれる。前記変異体は他の細胞タイプよりも速く増殖する新生物細胞を死滅させるので癌の治療において特に有用である（Ｓ．Ｓ．Ａｎｄｒｅａｎｓｋｙ，Ｂ．Ｈｅ，Ｇ．Ｙ．Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ，Ｌ．Ｓｏｒｏｃｅａｎｕ，Ｊ．Ｍａｒｋｅｔ，Ｊ．Ｃｈｏｕ，Ｂ．Ｒｏｉｚｍａｎ，Ｒ．Ｊ．Ｗｈｉｔｌｅｙ，“実験的脳腫瘍の治療に対する遺伝的に工学処理した単純ヘルペスウイルスの適用（Ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒｓ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：１１３１３−１１３１８（１９９６）；Ｓ．Ｓ．Ａｎｄｒｅａｎｓｋｙ，Ｌ．Ｓｏｒｃｏｃｅａｎｕ，Ｅ．Ｒ．Ｆｌｏｔｔｅ，Ｊ．Ｃｈｏｕ，Ｊ．Ｍ．Ｍａｒｋｅｒｔ，Ｇ．Ｙ．Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ，Ｂ．Ｒｏｉｚｍａｎ，Ｒ．Ｊ．Ｗｈｉｔｌｅｙ，“ヒト悪性脳腫瘍の腫瘍崩壊剤としての遺伝的に工学処理した単純ヘルペスウイルスの評価（Ｅｖａｌｕｔａｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ａｓ ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒｓ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５７：１５０２−１５０９（１９９７））。
多数の神経疾患がＨＳＶ−１ベクターによる遺伝子治療により治療され得る（Ｐ．Ｇ．Ｅ．Ｋｅｎｎｅｄｙ，“神経疾患の遺伝子治療のための単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターの可能性ある使用（Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｕｓｅｓ ｏｆ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ （ＨＳＶ） ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）”，Ｂｒａｉｎ，１２０：１２４５−１２５９（１９９７））。癌に対する注目が高いが、線条体細胞においてチロシンヒドロキシラーゼを発現させ（Ａ．Ｉ．Ｇｅｌｌｅｒ，Ｍ．Ｊ．Ｄｕｒｉｎｇ，Ｊ．Ｙ．Ｏｈ，Ｆ．Ｆｒｅｅｓｅ，Ｋ．Ｏ’Ｍａｌｌｅｒｙ，“チロシンヒドロキシラーゼを発現するＨＳＶ−１ベクターは培養ラット線条体細胞からＬ−ＤＯＰＡを産生、放出させる（Ａｎ ＨＳＶ−１ ｖｅｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ ｃａｕｓｅｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｌ−ＤＯＰＡ ｆｒｏｍ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒａｔ ｓｔｒｉａｔａｌ ｃｅｌｌｓ）”，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，６４：４８７−４９６（１９９５）；Ｍ．Ｊ．Ｄｕｒｉｎｇ，Ｊ．Ｒ．Ｎａｅｇｅｌｅ，Ｋ．Ｌ．Ｏ’Ｍａｌｌｅｙ，Ａ．Ｉ．Ｇｅｌｌｅｒ，“パーキンソンラットにおけるチロシンヒドロキシラーゼを発現するＨＳＶベクターによる長期間行動回復（Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｉｎ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａｎ ｒａｔｓ ｂｙ ａｎ ＨＳＶ ｖｅｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６６：１３９９−１４０３（１９９４））、よって、Ｌ−ドーパの供給を置換することによりパーキンソン病で成功している例もある。Ｆｅｄｅｒｏｆｆら（Ｈ．Ｆｅｄｅｒｏｆｆ，Ｍ．Ｄ．Ｇｅｓｃｈｗｉｎｄ，Ａ．Ｉ．Ｇｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ａ．Ｋｅｓｓｌｅｒ，“欠損単純ヘルペスウイルス１ベクターからの神経因子のインビボ発現は交換神経節に対する陣索切断の影響を防止する（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｅｒｖｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｖｉｖｏ ｆｒｏｍ ａ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ １ ｖｅｃｔｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｘｏｔｏｍｙ ｏｎ ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｇａｎｇｌｉａ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：１６３６−１６４０（１９９２））は、神経成長因子を発現するベクターを注入することにより上頚神経節の陣索切断後の神経修復を誘導した。これにより、チロシンヒドロキシラーゼのレベルが回復した。
しかしながら、Ｗｏｏｄら（Ｍ．Ｊ．Ａ．Ｗｏｏｄ，Ａ．Ｐ．Ｂｙｒｎｅｓ，Ｄ．Ｗ．Ｐｆａｆｆ，Ｓ．Ｄ．Ｒａｂｋｉｎ，Ｈ．Ｍ．Ｃｈａｒｌｔｏｎ，“欠損ＨＳＶ−１ベクターを用いるＣＮＳへの遺伝子導入の炎症効果（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｅｎｅ−ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ＣＮＳ ｗｉｔｈ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ＨＳＶ−１ ｖｅｃｔｏｒｓ）”，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１：２８３−２９１（１９９４））は、注入の最初の部位及びその注入部位から神経線維により供給される第２部位の両方でＨＳＶ−１アンプリコンベクターに対する強い炎症応答を観察した。更に、理由は不明であるが、実験動物の２０％までがＨＳＶ−１ベクターを注射後すぐに死亡し得る（Ｊ．Ｃ．Ｋｕｃｈａｒｃｚｕｋ，Ｂ．Ｒａｎｄａｚｚｏ，Ｍ．Ｙ．Ｃｈａｎｇ，Ｋ．Ｍ．Ａｍｉｎ，Ａ．Ａ．Ｅｌｓｈａｍｉ，Ｄ．Ｈ．Ｓｔｅｒｍａｎ，Ｎ．Ｐ．Ｒｉｚｋ，Ｋ．Ｌ．Ｍｏｌｎａｒ−Ｋｉｍｂｅｒ，Ｓ．Ｍ．Ｂｒｏｗｎ，Ａ．Ｒ．ＭａｃＬｅａｎ，Ｌ．Ａ．Ｌｉｔｚｋｙ，Ｎ．Ｗ．Ｆｒａｓｅｒ，Ｓ．Ｍ．Ａｌｂｅｌｄａ，Ｌ．Ｒ．Ｋａｉｓｅｒ，“実験ヒト悪性中皮腫瘍を治療するための複製制限ヘルペスウイルスの使用（Ｕｓｅ ｏｆ ａ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｈｅｒｐｅｓ ｖｉｒｕｓ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｈｕｍａｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５７：４６６−４７１（１９９７））。ウイルス抗原提示を低下させるウイルスタンパク質ＩＣＰ４７が同定され、これにより細胞毒性を減らすためにＨＳＶ−１ベクター中に将来使用され得るであろう（Ｉ．Ａ．Ｙｏｒｋ，Ｇ．Ｒｏｏｐ，Ｄ．Ｗ．Ａｎｄｒｅｗｓ，Ｒ．Ｒｉｄｄｅｌｌ，Ｆ．Ｌ．Ｇｒａｈａｍ，Ｄ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，“細胞質ゾル単純ヘルペスウイルスタンパク質はＣＤ８＋ Ｔリンパ球への抗原提示を抑える（Ａ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｏ ＣＤ８＋ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）”，Ｃｅｌｌ，７７：５２５−５３５（１９９４））。
ニューロン組織に対する向性のために、細胞指向の問題が大きく見落とされている。しかしながら、野生型ＨＳＶ−１は他の非ニューロン細胞タイプ、例えば皮膚細胞に感染し、溶菌させ得（Ｓ．Ａ．Ａｌ−Ｓａａｄｉ，Ｇ．Ｂ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ，Ｊ．Ｈ．Ｓｕｂａｋ−Ｓｈａｒｏｅ，“ウイルス遺伝子はマウス足蹠及び神経知覚節の両方における単純ヘルペスウイルス潜伏性を修飾する（Ｖｉｒａｌ ｇｅｎｅｓ ｍｏｄｉｆｙ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｌａｔｅｎｃｙ ｂｏｔｈ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｆｏｏｔｐａｄ ａｎｄ ｓｅｎｓｏｒｙ ｇａｎｇｌｉａ）”，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，６４：１１７５−１１７９（１９８３））、ニューロンの特定サブセットに指向させるのに有利である。ＨＳＶ−１は神経に沿って移動するので、有効な指向細胞はベクターとして使用したときの安全プロフィールを改善するであろう。実際、複製制限ＨＳＶ−１ベクターはヒト悪性中皮腫を治療するために使用されている（Ｊ．Ｃ．Ｋｕｃｈａｒｃｚｕｋ，Ｂ．Ｒａｎｄａｚｚｏ，Ｍ．Ｙ．Ｃｈａｎｇ，Ｋ．Ｍ．Ａｍｉｎ，Ａ．Ａ．Ｅｌｓｈａｍｉ，Ｄ．Ｈ．Ｓｔｅｒｍａｎ，Ｎ．Ｐ．Ｒｉｚｋ，Ｋ．Ｌ．Ｍｏｌｎａｒ−Ｋｉｍｂｅｒ，Ｓ．Ｍ．Ｂｒｏｗｎ，Ａ．Ｒ．ＭａｃＬｅａｎ，Ｌ．Ａ．Ｌｉｔｚｋｙ，Ｎ．Ｗ．Ｆｒａｓｅｒ，Ｓ．Ｍ．Ａｌｂｅｌｄａ，Ｌ．Ｒ．Ｋａｉｓｅｒ，“実験ヒト悪性中皮腫瘍を治療するための複製制限ヘルペスウイルスの使用（Ｕｓｅ ｏｆ ａ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｈｅｒｐｅｓ ｖｉｒｕｓ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｈｕｍａｎ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５７：４６６−４７１（１９９７））。
（ポックスウイルスベクター）
ポックスウイルスベクター（例えば、ヤバ様病ウイルス：癌遺伝子治療のための代替複製ポックスウイルスベクター；Ｙ．Ｈｕ，Ｊ．Ｌｅｅ，Ｊ．Ａ．ＭｃＣａｒｔ，Ｈ．Ｘｕ，Ｂ．Ｍｏｓｓ，Ｈ．Ｒ．Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，Ｄ．Ｌ．Ｂａｒｔｌｅｔｔ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７５：１０３００−８）（２００１））も使用できる。
（非ウイルスベクター）
ウイルスベクターはすべてある程度の免疫応答を誘導し、挿入突然変異や直接毒性のような他の安全上のリスクを有する恐れがある。更に、大規模産生を達成することが困難であり得る。よって、本発明のある実施態様では、遺伝子導入の非ウイルス方法が使用され、この方法は、少数のタンパク質しか必要とせず、実質的に無限の能力を有し、感染性または変異能力を持たず、大規模産生が製薬技術を用いて可能である。非ウイルスＤＮＡ導入には、裸ＤＮＡ、リポソーム及び分子コンジュゲートを含めて少なくとも３つの方法がある。
裸ＤＮＡ（プラスミドの形態）は直接筋肉細胞に注入したり（Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ，Ｒ．Ｗ．Ｍａｌｏｎｅ，Ｐ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｗ．Ｃｈｏｎｇ，Ｇ．Ａｃｓａｄｉ，Ａ．Ｊａｎｉ，Ｐ．Ｌ．Ｆｅｌｇｎｅｒ，“インビボでのマウス筋肉への直接遺伝子導入（Ｄｉｒｅｃｔ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ ｍｏｕｓｅ ｍｕｓｃｌｅ ｉｎ ｖｉｖｏ）”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４７：１４６５−１４６８（１９９０））、組織に打ち込まれる金粒子に付着させる（Ｌ．Ｃｈｅｎｇ，Ｐ．Ｒ．Ｚｉｅｇｅｌｈｏｆｆｅｒ，Ｎ．Ｓ．Ｙａｎｇ，“粒子衝撃を用いて評価される哺乳動物体細胞におけるインビボでのプロモーター活性及び導入遺伝子発現（Ｉｎ ｖｉｖｏ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｓｏｍａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：４４５５−４４５９（１９９３））ことができる。余り有効でないが、こうするとインビボで長期間に低レベルの発現を達成することができる。この方法の簡潔さ及び持続発現からＤＮＡワクチンが開発された。従来の弱毒化されたタンパク質ベースのワクチンと比較して、ＤＮＡワクチンは母性抗体のために既存の免疫性により影響されず、比較的安価であり、１つのプラスミドに対して幾つかの病原体抗原を送達できる（Ｅ．Ｍａｎｉｃｋａｎ，Ｋ．Ｌ．Ｋａｒｅｍ，Ｂ．Ｔ．Ｒｏｕｓｅ，“ＤＮＡワクチン−ワクチン研究学に対する現代の仕掛けまたは利益（ＤＮＡ ｖａｃｃｉｎｅｓ− ａ ｍｏｄｅｒｎ ｇｉｍｍｉｃｋ ｏｒ ａ ｂｏｏｎ ｔｏ ｖａｃｃｉｎｏｌｏｇｙ）”，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７：１３９−１５４（１９９７））。ＤＮＡワクチンは、ＨＩＶ（Ｃ．Ｌｅｋｕｔｉｓ，Ｊ．Ｗ．Ｓｈｉｖｉｅｒ，Ｍ．Ａ．Ｌｉｕ，Ｌ．Ｎ．Ｌｅｔｖｉｎ，“アカゲザルに投与したＨＩＶ１ ｅｎｖ ＤＮＡワクチンはＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αを分泌するＭＨＣクラスＩＩ−制限ＣＤ４＋ Ｔヘルパー細胞を引き出す（ＨＩＶ１ ｅｎｖ ＤＮＡ ｖａｃｃｉｎｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｔｏ ｒｈｅｓｕｓ ｍｏｎｋｅｙｓ ｅｌｉｃｉｔｓ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ ＩＩ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ＣＤ４＋ Ｔ ｈｅｌｐｅｒ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｓｅｃｒｅｔｅ ＩＦＮ−ｇａｍｍａ ａｎｄ ＴＮＦ−ａｌｐｈａ）”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５８：４４７１−４４７７（１９９７））のような既存のワクチンがない病原体、またはインフルエンザ（Ｍ．Ｄ．Ｍａｃｋｌｉｎ，Ｄ．ＭｃＣａｂｅ，Ｍ．Ｗ．ＭｃＧｒｅｇｏｒ，Ｖ．Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｔ．Ｍｅｙｅｒ，Ｒ．Ｃａｌｌｅｎ，Ｖ．Ｓ．Ｈｉｎｓｈａｗ，Ｗ．Ｓ．Ｓｗａｉｎ，“インフルエンザＡウイルスに対する粒子媒介ワクチンでのブタの免疫化は同族ウイルスによる攻撃を防御する（Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｉｇｓ ｗｉｔｈ ａ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ ｔｏ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｗｉｔｈ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｖｉｒｕｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７２：１４９１−１４９６（１９９８））のような現在のワクチンが十分に有効でない病原体に対して開発されている。高保存遺伝子を使用することにより、Ｕｌｍｅｒら（Ｊ．Ｂ．Ｕｌｍｅｒ，Ｊ．Ｊ．Ｄｏｎｎｅｌｌｙ，Ｓ．Ｅ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｇ．Ｈ．Ｒｈｏｄｅｓ，Ｐ．Ｌ．Ｆｅｌｇｎｅｒ，Ｊ．Ｊ．Ｄｗａｒｋｉ，Ｓ．Ｈ．Ｇｒｏｍｋｏｗｓｋｉ，Ｒ．Ｄｅｃｋ，Ｃ．Ｍ．ＤｅＷｉｔｔ，Ａ．Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｌ．Ａ．Ｈａｗｅ，Ｋ．Ｒ．Ｌａｅｎｄｅｒ，Ｄ．Ｍａｒｔｉｎｚ，Ｈ．Ｃ．Ｐｅｒｒｙ，Ｊ．Ｓｈｉｖｅｒ，Ｄ．Ｌ．Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｍ．Ａ．Ｌｉｕ，“ウイルスタンパク質をコードするＤＮＡの注射によりインフルエンザに対する異種防御（Ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｂｙ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａ ｖｉｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ）”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５４：１７４５−１７４９（１９９３））は２つの血清学的に異なるインフルエンザウイルス株に対してマウスを免疫化することができた。しかしながら、多くの場合、ＤＮＡワクチンは既存のワクチンよりも良好でないことが判明している（Ｍ．Ｄ．Ｍａｃｋｌｉｎ，Ｄ．ＭａＣａｂｅ，Ｍ．Ｗ．ＭｃＧｒｅｇｏｒ，Ｖ．Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｔ．Ｍｅｙｅｒ，Ｒ．Ｃａｌｌａｎ，Ｖ．Ｓ．Ｈｉｎｓｈａｗ，Ｗ．Ｓ．Ｓｗａｉｎ，“インフルエンザＡウイルスに対する粒子媒介ワクチンでのブタの免疫化は同族ウイルスでの攻撃を防御する（Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｉｇｓ ｗｉｔｈ ａ ｐａｒｔｉｃｌｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ ｔｏ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｗｉｔｈ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｖｉｒｕｓ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７２：１４９１−１４９６（１９８８））。免疫応答の実際のタイプは適切なサイトカインをコードする遺伝子の同時形質転換によりコントロールされ得（Ｚ．Ｘｉａｎｇ，Ｈ．Ｃ．Ｅｒｔｌ，“サイトカインを発現するプラスミドの同時接種によるプラスミドコード化ウイルス抗原に対する免疫応答の操作（Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ａ ｐｌａｓｍｉｄ−ｅｎｃｏｄｅｄ ｖｉｒａｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｂｙ ｃｏ−ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ）”，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２：１２９−１３５（１９９５））、この方法は不適切な免疫応答を調製するのに有用であり得る（Ｅ．Ｍａｎｉｃｋａｎ，Ｋ．Ｌ．Ｋａｒｅｍ，Ｂ．Ｔ．Ｒｏｕｓｅ，“ＤＮＡワクチン−ワクチン研究学に対する現代の仕掛けまたは利益（ＤＮＡ ｖａｃｃｉｎｅｓ− ａ ｍｏｄｅｒｎ ｇｉｍｍｉｃｋ ｏｒ ａ ｂｏｏｎ ｔｏ ｖａｃｃｉｎｏｌｏｇｙ）”，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７：１３９−１４５（１９９７））。裸ＤＮＡの他の使用には、癌免疫強化（以下に詳記する；Ｍ．Ｃｏｒｒ，Ｈ．Ｔｉｇｈｅ，Ｄ．Ｌｅｅ，Ｊ．Ｄｕｄｌｅｒ，Ｍ．Ｔｒｉｅｕ，Ｄ．Ｃ．Ｂｒｉｎｓｏｎ，Ｄ．Ａ．Ｃａｒｓｏｎ，“ＤＮＡ免疫化により与えられる共刺激は抗腫瘍免疫性を強化する（Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｂｙ ＤＮＡ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｓ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ）”，Ｊ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１５９：４９９９−５００４（１９９７）も参照されたい）、膵インスリン機能の修復（Ｉ．Ｄ．Ｇｏｌｄｆｉｎｅ，Ｍ．Ｓ．Ｇｅｒｍａｎ，Ｈ．Ｔｓｅｎｇ，Ｊ．Ｗａｎｇ，Ｊ．Ｌ．Ｂｏｌａｆｆｉ，Ｊ．Ｃｈｅｎ，Ｄ．Ｃ．Ｏｌｓｏｎ，Ｓ．Ｓ．Ｒｏｔｈｍａｎ，“胃腸管の外分泌腺によるヒトインスリン及び成長ホルモンの内分泌（Ｔｈｅ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｎｓｕｌｉｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ ｂｙ ｅｘｏｃｒｉｎｅ ｇｌａｎｄｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ）”，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１５：１３７８−１３８２（１９９７））、及び側副血管発生の刺激（Ｓ．Ｔａｋｅｓｈｉｔａ，Ｙ．Ｔｓｕｒｕｍｉ，Ｔ．Ｃｏｕｆｆｉｎａｈｌ，Ｔ．Ａｓａｈａｒａ，Ｃ．Ｂａｕｔｅｒｓ，Ｊ．Ｓｙｍｅｓ，Ｎ．Ｆｅｒｒａｒａ，Ｊ．Ｍ．Ｉｓｎｅｒ，“血管内皮増殖因子の３つのイソ型をコードする裸ＤＮＡの遺伝子導入はインビボで側副発生を刺激する（Ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｎａｋｅｄ ＤＮＡ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｆｏｒ ｔｈｒｅｅ ｉｓｆｏｒｍｓ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｃｏｌｌａｔｅｒａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ ｖｉｖｏ）”，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，７５：４８７−５０１（１９９６））が含まれる。筋肉組織での遺伝子産物の発現はコラゲナーゼ、パパベリン及び虚血性状態の共投与により改善し得る（Ｖ．Ｂｕｄｋｅｒ，Ｇ．Ｚｈａｎｇ，Ｉ．Ｄａｎｋｏ，Ｐ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｊ．Ｗｏｌｆｆ，“ラット筋における血管内に送達したＤＮＡの効率的な発現（Ｔｈｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒｌｙ ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ ＤＮＡ ｉｎ ｒａｔ ｍｕｓｃｌｅ）”，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，５：２７２−２７６（１９９８））。筋特異的プロモーター（Ｍ．Ｓｋａｒｉ，Ａ．Ｋｉｒｉ，Ｇ．Ｖｒｂｏｖａ，Ｃ．Ａ．Ｌｅｅ，Ｇ．Ｇｏｌｄｓｐｉｎｋ，“筋肉内注射による遺伝子導入のためのベクターとしてのミオシン調節配列（Ｍｙｏｓｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ａｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｂｙ ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）”，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，５：５１４−５２０（１９９８））及び他の遺伝子内制御配列、例えばポリＡ及び転写停止配列（Ｊ．Ｈａｒｔｉｋｋａ，Ｍ．Ｓａｗｄｅｙ，Ｆ．Ｃｏｎｅｆｅｒｔ−Ｊｅｎｓｅｎ，Ｍ．Ｍａｒｇａｌｉｔｈ，Ｋ．Ｂａｒｎｈａｒｄｔ，Ｍ．Ｎｏｌａｓｃｏ，Ｈ．Ｌ．Ｖａｈｌｓｉｎｇ，Ｊ．Ｍｅｅｋ，Ｍ．Ｍａｒｑｕｅｔ，Ｐ．Ｈｏｂａｒｔ，Ｊ．Ｎｏｒｍａｎ，Ｍ．Ｍａｎｔｈｏｒｐｅ，“骨格筋への直接注射のための改良プラスミドＤＮＡ発現ベクター（Ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｆｏｒ ｄｉｒｅｃｔ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｉｎｔｏ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ）”，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，７：１２０５−１２１７（１９９６））の使用によっても導入遺伝子発現が改善される。
リポソームは水性流体のフラクションを捕捉する脂質二重層である。ＤＮＡはその電荷によりカチオン性リポソームの外表面に自然に会合し、リポソームは細胞膜と相互作用する（Ｊ．Ｈ．Ｆｅｌｇｎｅｒ，Ｒ．Ｋｕｍａｒ，Ｃ．Ｎ．Ｓｒｉｄｈａｒ，Ｃ．Ｊ．Ｗｈｅｅｌｅｒ，Ｙ．Ｊ．Ｔａｓｉ，Ｒ．Ｂｏｒｄｅｒ，Ｐ．Ｒａｍｓｅｙ，Ｍ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｐ．Ｌ．Ｆｅｌｇｎｅｒ，“新規な一連のカチオン性脂質処方物を用いる強化遺伝子送達システム及びメカニズム研究（Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｓｔｕｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ａ ｎｏｖｅｌ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｃａｔｉｏｎｉｃ ｌｉｐｉｄ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９：２５５０−２５６１（１９９４））。インビトロで特定細胞株の９０％までがトランスフェクトされ得る。カチオン性リポソームにアニオン性脂質を少量添加することにより、ＤＮＡはリポソームの内表面に導入され得、よって酵素分解から保護される（Ｓ．Ｆ．Ａｌｉｏ，“アニオン性及びカチオン性リポソームベクターを用いるマウスにおけるヒトα−１−アンチトリプシン遺伝子の長期間発現（Ｌｏｎｇ ｔｅｒｍ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ａｌｐｈａ−１−ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ ｇｅｎｅ ｉｎ ｍｉｃｅ ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ ａｎｉｏｎｉｃ ａｎｄ ｃａｔｉｏｎｉｃ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｖｅｃｔｏｒ）”，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５４：９−１３（１９９７））。エンドソームとしての細胞内への摂取を促進するために、抗−ＭＨＣ抗体（Ｃ．Ｗａｎｇ及びＬ．Ｈｕａｎｇ，“ｐＨ感受性イムノリポソームはマウスにおいて外来遺伝子の標的細胞特異性送達及び制御発現を媒介する（ｐＨ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｍｅｄｉａｔｅ ｔａｒｇｅｔ−ｃｅｌｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ ｆｏｒｅｉｇｎ ｇｅｎｅ ｉｎ ｍｏｕｓｅ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：７８５１−７８５５（１９８７））、トランスフェリン（Ｊ．Ｃ．Ｓｔａｖｒｉｄｉｓ，Ｇ．Ｄｅｌｉｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｏｓ，Ｍ．Ｃ．Ｐｓａｌｌｉｄｏｐｏｕｌｏｓ，Ｎ．Ｓ．Ａｒｍｅｎａｋａｓ，Ｄ．Ｊ．Ｈａｄｊｉｍｉｎａｓ，Ｊ．Ｈａｄｊｉｍｉｎａｓ，“家兎において外因性ＤＮＡの骨髄赤芽球へのインビボ輸送のためのトランスフェリン被覆リポソームの構築（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ−ｃｏａｔｅｄ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｆｏｒ ｉｎ ｖｉｖｏ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｏｆ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ＤＮＡ ｔｏ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｅｒｙｔｈｒｏｂｌａｓｔｓ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ）”，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１６４：５６８−５７２（１９８６））、及びセンダイウイルスまたはそのＦタンパク質（Ｊ．Ｖ．Ｄｚａｕ，Ｍ．Ｊ．Ｍａｎｎ，Ｒ．Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ，Ｙ．Ｋａｎｅｄａ，“心血管疾患の遺伝子治療のためのフシゲンウイルスリポソーム（Ｆｕｓｉｇｅｎｉｃ ｖｉｒａｌ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：１１４２１−１１４２５（１９９６））のような指向性タンパク質がリポソームに配合される。センダイウイルスにより、プラスミドＤＮＡはエンドソームから細胞質に逃げることができ、よって分解が避けられる。ＤＮＡ結合タンパク質（例えば、２８ｋＤａ高運動性グループ１タンパク質）を配合すると、プラスミドが核に運ばれることにより転写が強化される（Ｊ．Ｖ．Ｄｚａｕ，Ｍ．Ｊ．Ｍａｎｎ，Ｒ．Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ，Ｙ．Ｋａｎｅｄａ，“心血管疾患の遺伝子治療のためのフシゲンウイルスリポソーム（Ｆｕｓｉｇｅｎｉｃ ｖｉｒａｌ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：１１４２１−１１４２５（１９９６））。更に提案されている改良としては、プラスミド（ＨＳＶ−１アンプリコンについて上記した）をエピソーム要素として維持するためにプラスミドへのエプスタイン−バーウイルスＯｒｉ ｐ及びＥＢＮＡ１遺伝子の導入（Ｓ．Ｆ．Ａｌｉｏ，“アニオン性及びカチオン性リポソームベクターを用いるマウスにおけるヒトα−１−アンチトリプシン遺伝子の長期間発現（Ｌｏｎｇ ｔｅｒｍ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ａｌｐｈａ−１−ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ ｇｅｎｅ ｉｎ ｍｉｃｅ ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ ａｎｉｏｎｉｃ ａｎｄ ｃａｔｉｏｎｉｃ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｖｅｃｔｏｒ）”，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５４：９−１３（１９９７））が挙げられる。
分子コンジュケートはＤＮＡ結合剤が結合されているタンパク質または合成リガンドから構成される。細胞への送達はリポソームに対する方法と同様の方法を用いることにより改善し得る。指向性タンパク質にはアシアログリコタンパク質（Ｅ．Ｗａｇｎｅｒ，Ｍ．Ｃｏｔｔｅｎ，Ｒ．Ｆｏｉｓｎｅｒ，Ｍ．Ｌ．Ｂｉｒｎｓｔｉｅｌ，“トランスフェリン−ポリカチオン−ＤＮＡ複合体：複合体の構造に対するポリカチオンの影響及び細胞ヘのＤＮＡ送達（Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ−ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎ−ＤＮＡ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ： ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ａｎｄ ＤＮＡ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ ｃｅｌｌｓ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：４２５５−４２５９（１９９１））、トランスフェリン（Ｃ．Ｈ．Ｗｕ，Ｊ．Ｍ．Ｗｉｌｓｏｎ，Ｇ．Ｙ．Ｗｕ，“指向性遺伝子：インビボで哺乳動物調節要素により駆動される外来遺伝子の送達及び持続発現（Ｔａｒｇｅｔｔｉｎｇ ｇｅｎｅ： ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ ｆｏｒｅｉｇｎ ｇｅｎｅ ｄｒｉｖｅｎ ｂｙ ｍａｍｍｌｉａｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｉｎ ｖｉｖｏ）”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６４：１６９８５−１６９８７（１９８９））、ポリマーＩｇＡ（Ｔ．Ｆｅｒｋｏｌ，Ｃ．Ｓ．Ｋａｅｔｚｅｌ，Ｐ．Ｂ．Ｄａｖｉｓ，“ポリマー免疫グロブリン受容体に指向させることによる気道上皮細胞への遺伝子導入（Ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｔｉｎｇ ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）”，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９２：２３９４−２４００（１９９３））、及びアデノウイルス（Ｊ．Ｍａｄｏｎ及びＨ．Ｅ．Ｂｌｕｍ，“トリ肝細胞へのＢ型肝炎ウイルスＤＮＡ及びアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドの受容体媒介送達（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ＤＮＡ ａｎｄ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔｏ ａｖｉａｎ ｌｉｖｅｒ ｃｅｌｌｓ）”，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２４：４７４−４８１（１９９６））が含まれる。導入遺伝子発現は一過性の傾向にあり、エンドソーム／リソソーム分解により制限される。
Ｘ アッセイ及びキット
本発明の１態様において、トランスフェクト細胞は、細胞を候補活性化合物に感作させるＥＢＶ−ＴＫの能力を評価するための２つのアッセイ系を作成するために使用し得る。ＫＨＳＶ−ＴＫを発現する細胞もアッセイ目的のために同様に作成し得る。
下記実施例において本発明を説明する。当業者はこれらの実施例が限定するものではなく、本発明の趣旨及び範囲を逸脱することなく変更を加え得ることを理解している。
ヌクレオシド合成
試薬はすべて特記しない限り受領したまま使用した。無水溶媒はミルウォーキーに所在のＡｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．から購入した。融点（ｍｐ）はＥｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌ数字融点装置を用いて測定し、補正なしである。１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは室温においてＶａｒｉａｎ Ｕｎｉｔｙ Ｐｌｕｓ ４００分光計を用いて測定し、内部テトラメチルシランからのダウンフィールドをｐｐｍで報告した。重水素交換、脱カップリング実験または２Ｄ−ＣＯＳＹをプロトン帰属を確認するために実施した。シグナル多重度はｓ（一重項）、ｄ（二重項）、ｄｄ（二重二重項）、ｔ（三重項）、ｑ（四重項）、ｂｒ（幅広）、ｂｓ（幅広一重項）、ｍ（多重項）で示す。Ｊ値の単位はすべてＨｚである。マススペクトルはＪＥＯＬ ＪＭＳ−ＳＸ／ＳＸ１０２Ａ／Ｅ質量分析計を用いて記録した。元素分析はジョージア州ノールクロスに所在のＡｔｌａｎｔｉｃ Ｍｉｃｒｏｌａｂ Ｉｎｃ．により実施した。分析ＴＬＣはＷｈａｔｍａｎ ＬＫ６Ｆシリカゲルプレートにより実施し、分取ＴＬＣはＷｈａｔｍａｎｎ ＰＫ５Ｆシリカゲルプレートにより実施した。カラムクロマトグラフィーは大気圧においてシリカゲル（Ｆｉｓｈｅｒ，Ｓ７３３−１）を用いて実施した。
β−Ｄ−５−Ｅ−（２−カルボメトキシビニル）−２’−デオキシウリジン（２）
１，４−ジオキサン（９０ｍｌ）中にＰｄ（ＯＡｃ）２（９６ｍｇ，０．４２ミリモル）及びＰｈ３Ｐ（２４０ｍｇ，０．９２ミリモル）を含む溶液に２’−デオキシ−５−ヨードウリジン１（２．６８ｇ，７．５６ミリモル）及びアクリル酸メチル（１．６ｍｌ，１９．７８ミリモル）を順次添加した。混合物を窒素雰囲気下で１６時間還流加熱した。熱混合物をセライトパッドを介して濾過し、セライトを熱１，４−ジオキサンで濯いだ。合わせた濾液を真空下で濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（８５：１５から７５：２５）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物２を淡黄色固体として得た（２．１７ｇ，９２％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ８．４２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．３７、６．８５（２ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ）、６．１２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．２８（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ）、５．１９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ）、４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８１−３．７８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．６６−３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．１９−２．１５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２の製造と同様にして、β−Ｌ−２’−デオキシ−５−ヨードウリジン６（Ａ．Ｈｏｌｙ，“核酸成分及びそのアナログ ＣＬＩＩＩ．ピリミジン類の２’−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシドの製造（Ｎｕｃｅｌｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ＣＬＩＩＩ． Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ２’−ｄｅｏｘｙ−Ｌ−ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ ｓｅｒｉｅｓ）”，Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３７：４０７２−４０８６（１９７２）；Ｔ．Ｓ．Ｌｉｎ，Ｍ．Ｚ．Ｌｕｏ，Ｍ．Ｃ．Ｌｉｕ，“可能性ある抗ウイルス剤としての幾つかのピリミジンＬ−ヌクレオシドアナログの合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ Ｌ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｇｅｎｔｓ）”，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５１：１０５５−１０６８（１９９５）に従って製造）からβ−Ｌ−５−Ｅ−（２−カルボメトキシビニル）−２’−デオキシウリジン７を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ８．４２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．３７、６．８５（２ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨ）、６．１２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．２５（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ）、５．２０（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ）、４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７８−３．８１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．６６−３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．１９−２．１５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２の製造と同様にして、１−（β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル１０（核酸成分及びそのアナログ ＣＬＩＩＩ．ピリミジン類の２’−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシドの製造（Ｎｕｃｅｌｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ＣＬＩＩＩ． Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ２’−ｄｅｏｘｙ−Ｌ−ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ ｓｅｒｉｅｓ）”，Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，３７：４０７２−４０８６（１９７２）；Ｔ．Ｓ．Ｌｉｎ，Ｍ．Ｚ．Ｌｕｏ，Ｍ．Ｃ．Ｌｉｕ，“可能性ある抗ウイルス剤としての幾つかのピリミジンＬ−ヌクレオシドアナログの合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ Ｌ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ａｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｇｅｎｔｓ）”，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５１：１０５５−１０６８（１９９５）に従って製造）から１−（β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−Ｅ−（２−カルボメトキシビニル）ウラシル１１を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．３９、６．８５（２ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ）、６．０１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．５８（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．４７（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．２３（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．１５−３．９０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−３’）、３．６０−３．７０（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−５’）、３．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
化合物２の製造と同様にして、１６から１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−Ｅ−（２−カルボメトキシビニル）ウラシル１７を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．３９、６．８５（２ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨ）、６．０１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６０（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．４８（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．２４（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．１５−３．９０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−３’）、３．６０−３．７０（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−５’）、３．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
化合物２の製造と同様にして、４６から５−Ｅ−（２−カルボメトキシビニル）−１−［（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ）メチル］ウラシル５２を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．４０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．３８、６．８５（２ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨ）、７．１０、６．５０（２ｂｒ，２Ｈ，２ＯＨ）、５．１５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、４．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ）、３．６９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．５２（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯ）、３．４１（ｍ，２Ｈ，２ＣＨ２Ｏ）。
化合物２の製造と同様にして、（±）−（１’β，３’α，４’β）−１−［３−ヒドロキシ−（４−ヒドロキシメチル）シクロペンチル］−５−ヨードウラシル７２から（±）−（１’β，３’α，４’β）−５−Ｅ−（２−カルボメトキシビニル）−１−［３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）シクロペンチル］ウラシル７３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ８．４０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．３７、６．８５（２ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１６Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨ）、５．０−４．５（ｍ，３Ｈ，ＣＨＮ，２ＯＨ）、４．００（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯＨ）、３．７０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、３．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＯＨ）、２．２５−１．０５（ｍ，５Ｈ）。
化合物７２は、（±）−（１β，２α，３α，４β）−４−アミノ−２，３−ジヒドロキシ−１−シクロペンタンメタノール７１から公知方法（Ｙ．Ｆ．Ｓｈｅａｌｙ，Ｃ．Ａ．Ｏ’Ｄｅｌｌ，Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ．Ｃｈｅｍ．，１３：１０１５（１９７６）；Ｐ．Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｅ．ＤｅＣｌｅｒｃｑ，Ｊ．Ｂａｌｚａｒｉｎｉ，Ｈ．Ｖａｎｄｅｒｈａｅｇｈｅ，“炭素環アナログ（Ｅ）−５−（２−ハロビニル）−２’−デオキシウリジン及び（Ｅ）−５−（２−ハロビニル）−２’−デオキシシチジンの合成及び抗ウイルス活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｒｂｏｃｙｃｌｉｃ ａｎａｌｏｇｕｅｓ （Ｅ）−５−（２−ｈａｌｏｖｉｎｙｌ）−２’−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅｓ ａｎｄ （Ｅ）−５−（２−ｈａｌｏｖｉｎｙｌ）−２’−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅｓ）”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２８：５５０−５５５（１９８５））に従って製造した。
化合物７１は、Ｂ．Ｌ．Ｋａｍ及びＮ．Ｊ．Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒ，“炭素環式糖アミン類：ラセミ体α−及びβ−炭素環式リボフラノシルアミン、炭素環式リキソフラノシルアミン及び関連化合物の合成及び立体化学（Ｃａｃｂｏｃｙｃｌｉｃ ｓｕｇａｒ ａｍｉｎｅｓ： ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｒａｃｅｍｉｃ ａｌｐｈａ− ａｎｄ ｂｅｔａ−ｃａｒｂｏｃｙｃｌｉｃ ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌａｍｉｎｅ， ｃａｒｂｏｃｙｃｌｉｃ ｌｙｘｏｆｕｒａｎｏｓｙｌａｍｉｎｅ， ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）”Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４６：３２６８−３２７２（１９８１）に従って製造した。
化合物２の製造と同様にして、９９から（２Ｒ，４Ｒ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−Ｅ−（２−カルボメトキシ−ビニル）ウラシル１００を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．３６、６．８５（２ｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ）、６．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．２２（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、５．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．２５−４．０５（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−６’）、３．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
化合物２の製造と同様にして、１０７から（２Ｓ，４Ｓ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−Ｅ−（２−カルボメトキシ−ビニル）ウラシル１０８を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．３６、６．８５（２ｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ）、６．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．２１（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、５．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．２５−４．０５（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−６’）、３．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
β−Ｄ−２’−デオキシ−５−Ｅ−（２−クロロビニル）ウリジン（４）
無水ＮａＯＨ（１Ｎ，５０ｍｌ）中に２（１．２５ｇ，４．０ミリモル）を含む溶液を室温で一晩撹拌した。溶液を０℃に冷却し、４Ｎ ＨＣｌを添加してｐＨを２に調節した。混合物を氷中で３０分間放置し、白色沈殿を濾過した。濾液を真空下で蒸発乾固し、水を添加した。生じた沈殿を濾過し、水で洗浄した。合わせた沈殿をＫＯＡｃ（１．９６ｇ，２０ミリモル）と加熱することにより水（４０ｍｌ）に溶解し、Ｎ−クロロスクシンイミド（５３６ｍｇ，４．０ミリモル）を少しずつ添加した。溶液を３時間還流加熱した後真空下で濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物３を白色固体として得た（４３８ｍｇ，３８％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．０６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．１８、６．５９（２ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨ）、６．１３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．２８（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ−３’）、５．１２（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６３−３．５７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．１３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物４の製造と同様にして、７からβ−Ｌ−５−Ｅ−（２−クロロビニル）−２’−デオキシウリジン９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．０５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．１７、６．５８（２ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨ）、６．１３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．２７（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ−３’）、５．１１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６６−３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．１３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物４の製造と同様にして、１１から１−（β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−Ｅ−（２−クロロビニル）ウラシル１３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．８７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．１５、６．５８（２ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ）、６．０１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．５６（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．４５（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．０５（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．０５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物４の製造と同様にして、１７から１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−Ｅ−（２−クロロビニル）ウラシル１９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．８７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．１５、６．５８（２ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ）、６．０１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．５７（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．４４（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．０５（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．０５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物４の製造と同様にして、５２から５−Ｅ−（２−クロロビニル）−１−［（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ）メチル］ウラシル５３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．０３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６’）、７．２８、６．８５（２ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１３Ｈｚ，ＣＨ＝ＣＨ）、７．１０、６．５５（２ｂｒ，２Ｈ，２ＯＨ）、５．１８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、４．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ）、３．５０（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯ）、３．４１（ｍ，２Ｈ，２ＣＨ２Ｏ）。
化合物４の製造と同様にして、７３から（±）−（１’β，３’α，４’β）−５−Ｅ−（２−クロロビニル）−１−［３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）シクロペンチル］ウラシル７４を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．９６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２４、６．７５（２ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ）、５．０−４．６（ｍ，３Ｈ，ＣＨＮ，２ＯＨ）、４．０１（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯＨ）、３．４３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＯＨ）、２．２５−１．３５（ｍ，５Ｈ）。
１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）ウラシル（１５）
ウリジン１４（１３．２５ｇ，５４．５ミリモル）、炭酸ジフェニル（１５．４８ｇ，７２．５ミリモル）、無水ＮａＨＣＯ３（３４９ｍｇ，４．１５ミリモル）及びヘキサメチルリン酸トリアミド（５０ｍｌ）の混合物を窒素下２０分間撹拌しながら１５０℃で加熱した後室温に冷却した。混合物を冷水（４００ｍｌ）に注ぎ、ＣＨＣｌ３で洗浄した。Ｅｔ３Ｎ（２５ｍｌ）を添加し、水溶液を７０℃で５時間加熱した。溶媒を真空下で除去し、残渣をＭｅＯＨ／水から結晶化して、標記化合物１５を白色固体として得た（１１．１３ｇ，８４％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６）、５．９５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．５１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５’）、６．３０−５．３０（ｂｒ，２Ｈ，２ＯＨ）、４．１０−３．５０（ｍ，６Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−３’，Ｈ−４’，Ｈ−５’，ＯＨ）。
１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル（１６）
１５（１．２ｇ，４．９ミリモル）、ヨウ素（１．５０ｇ，５．９ミリモル）、ＣＨＣｌ３（６ｍｌ）及び１Ｎ ＨＮＯ３（２４ｍｌ）の混合物を２時間還流加熱した後冷却した。濾過により結晶性固体を集め、エーテルで洗浄して、標記化合物１６を白色固体として得た（１．１２ｇ，６２％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、５．９５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．５２（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ）、５．４０−５．１０（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ）、４．１５−３．９０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−３’）、３．８０−３．６０（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−５’）、３．６０−３．３０（ｍ，１Ｈ，ＯＨ）。
β−Ｄ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−２’−デオキシ−５−ヨードウリジン（２０）
０℃において無水ピリジン（１００ｍｌ）中に１（５．５６ｇ，２０ミリモル）を含む溶液に塩化ベンゾイル（６．１８５ｇ，４４ミリモル）を滴下した。添加後、反応溶液を室温となるまで放置した後、５０℃で２時間加熱し、真空下で蒸発乾固した。残渣をＣＨＣｌ３（２００ｍｌ）で処理し、有機相を１Ｎ Ｈ２ＳＯ４及び水で洗浄し、乾燥し、濾過し、真空下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝９５：５）にかけて、標記化合物２０を白色固体として得た（１０．３５ｇ，９２％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．０８−７．４３（ｍ，１１Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．３９−６．３６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７７（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．５９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．８３−２．７８、２．３８−２．３１（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２０の製造と同様にして、６からβ−Ｌ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−２’−デオキシ−５−ヨードウリジン２３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．０８−７．４２（ｍ，１１Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．３９−６．３７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７７（ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．５９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．８３−２．７８、２．３８−２．３０（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２０の製造と同様にして、１０から５−ヨード−１−（２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−アラビノフラノシル）ウラシル２６を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１０−７．４０（ｍ，１６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．２０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、５．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．４０−４．２０（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物２０の製造と同様にして、１６から５−ヨード−１−（２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）ウラシル２９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１０−７．４０（ｍ，１６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．２０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．３５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、５．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．４０−４．２０（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物２０の製造と同様にして、３２からβ−Ｄ−２’，３’，５’−トリ−Ｏ−ベンゾイル−５−ヨードウリジン３３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．３２（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１６−７．３６（ｍ，１６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．３７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．７５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．８６−４．８３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．７６−４．７０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
β−Ｄ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−２’−デオキシ−５−ビニルウリジン（２１）
１−メチルピロリジノン（ＮＭＰ，３ｍｌ）中に２０（５６２ｍｇ，１ミリモル）を含む溶液にトリ（２−フリル）ホスフィン（９ｍｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトニル）ビスパラジウム（９ｍｇ）及びトリブチルビニル錫（３５０ｍｇ，１．１ミリモル）を順次添加した。窒素雰囲気下室温で３日間撹拌した後、混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈し、水で洗浄し、乾燥し、濃縮した。残渣をヘキサン／ＥｔＯＡｃ（６：４）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物２１を黄褐色泡状物として得た（４５０ｍｇ，９７％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ８．３２−７．５０（ｍ，１１Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．３２−６．２４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２，Ｈ−１’）、５．９２、５．１３（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．６９−５．６５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．６９−４．５９（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−５’）、２．８４−２．６５（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２１の製造と同様にして、２３からβ−Ｌ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−２’−デオキシ−５−ビニルウリジン２４を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ８．３１−７．５０（ｍ，１１Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．３２−６．２４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２，Ｈ−１’）、５．９２、５．１３（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．６９−５．６５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．６９−４．５９（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−５’）、２．８４−２．６６（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２１の製造と同様にして、２６から１−（２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−ビニルウリジン２７を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１１−７．４０（ｍ，１６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．３２−６．２３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２，Ｈ−１’）、５．９２、５．１３（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．６５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．３５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、５．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．４０−４．２３０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物２１の製造と同様にして、２９から１−（２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ビニルウラシル３０を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１２−７．４０（ｍ，１６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．３２−６．２２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２，Ｈ−１’）、５．９２、５．１３（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．６４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．３５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、５．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．４０−４．２３０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物２１の製造と同様にして、３３からβ−Ｄ−２’，３’，５’−トリ−Ｏ−ベンゾイル−５−ビニルウリジン３４を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．３６（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６）、８．１３−７．３６（ｍ，１５Ｈ，芳香族）、６．４５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、６．０２−５．７２（ｍ，４Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２，Ｈ−４’）、５．００（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．８８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．７５−４．６７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物２１の製造と同様にして、４７から１−［［１，３−ビス（アセトキシ）−２−プロポキシ］メチル］−５−ビニルウラシル４８を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．３６（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．３７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．４０（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、６．００、５．３１（２ｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．２８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、４．２３、４．０８（２ｍ，５Ｈ，２ＣＨ２，ＣＨＯ）、２．０４（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３）。
化合物２１の製造と同様にして、５５からβ−Ｄ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−４’−チオ−５−ビニルウリジン５６を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ７．９５−７．２５（ｍ，８Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．６９（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、６．３１−６．２５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２，Ｈ−１’）、５．９０、５．１１（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．７６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．６８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．０５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．７５、２．４１（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、２．４２（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３）。
化合物２１の製造と同様にして、６３から（４−チオ−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ビニルウラシル６４を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．１０（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．８２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．４０−７．１５（ｍ，１５Ｈ，芳香族）、６．３２−６．２５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２，Ｈ−１’）、５．９０、５．１２（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、４．７０−４．４０（ｍ，６Ｈ，３ＣＨ２）、４．２２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−３’）、３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）。
化合物２１の製造と同様にして、７５から（±）−（１’β，３’α，４’β）−１−［３−アセトキシ−４−（アセトキシメチル）シクロペンチル］−５−ビニルウラシル７６を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．０２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．３６（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．９１、５．１２（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．００（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯ）、４．９２（ｍ，１Ｈ，ＣＨＮ）、４．１８、４．０５（２ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ）、２．０２（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３）、２．４５−１．８５（２ｍ，４Ｈ，２ＣＨ３）、１．５７（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりに２−（トリブチルスタンニル）フランを用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、２０からβ−Ｄ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−フラニルウリジン８０を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．１６（ｓ，１Ｈ．Ｈ−６）、８．０９−７．４１（ｍ，１０Ｈ，芳香族）、６．９３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ，フラニル）、６．８２（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ，フラニル）、６．５６（ｍ，１Ｈ，フラニル）、６．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．７１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７８（ｄ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．６５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．８５、２．５２（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりに２−（トリブチルスタンニル）チオフェンを用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、２０からβ−Ｄ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−（チエン−２−イル）ウリジン８１を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．０６−７．１９（ｍ，１３Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．８６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，チエニル）、６．４９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．８６−４．７７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．６５−４．６３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．８６、２．４４（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりに２−（トリブチルスタンニル）フランを用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、２３からβ−Ｌ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−（２−フラニル）ウリジン８７を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．１６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、８．１０−７．４０（ｍ，１０Ｈ，芳香族）、６．９３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ，フラニル）、６．８２（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ，フラニル）、６．５６（ｍ，１Ｈ，フラニル）、６．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．７１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７８（ｄ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．６５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．８５、２．５２（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりに２−（トリブチルスタンニル）チオフェンを用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、２３からβ−Ｌ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−（チエン−２−イル）ウリジン８８を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．０６−７．１９（ｍ，１３Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．８６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，チエニル）、６．４９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−３’）、４．８６−４．７７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．６５−４．６３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．８６、２．４４（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２１の製造と同様にして、９４（化合物９４はＪ．Ｓ．Ｌｉｎ，Ｔ．Ｋｉｒａ，Ｅ．Ｇｕｌｌｅｎ，Ｙ．Ｃｈｏｉ，Ｆ．Ｑｕ，Ｃ．Ｋ．Ｃｈｕ，Ｙ．Ｃ．Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４２：２２１２−２２１７（１９９９）に従って製造した）から（２Ｒ，４Ｒ）−１−［２−（ベンジルオキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−ビニルウラシル９５を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．１５（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２０−７．４０（ｍ，６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．４５−６．２５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２，Ｈ−２’）、６．０３、５．３１（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．３０−４．１０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−６’）。
化合物２１の製造と同様にして、１０２（化合物１０２はＪ．Ｓ．Ｌｉｎ，Ｔ．Ｋｉｒａ，Ｅ．Ｇｕｌｌｅｎ，Ｙ．Ｃｈｏｉ，Ｆ．Ｑｕ，Ｃ．Ｋ．Ｃｈｕ，Ｙ．Ｃ．Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４２：２２１２−２２１７（１９９９）に従って製造した）から（２Ｓ，４Ｓ）−１−［２−（ベンジルオキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−ビニルウラシル１０３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．１５（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２０−７．４０（ｍ，６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．４５−６．２５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２，Ｈ−２’）、６．０３、５．３１（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．３０−４．１０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−６’）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりに２−（トリブチルスタンニル）フランを用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、９４から（２Ｒ，４Ｒ）−１−［２−（ベンジルオキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−（２−フラニル）ウラシル１１０を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．１６（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１０−７．４１（ｍ，６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．９２（ｄ，１Ｈ，フラニル）、６．８２（ｄ，１Ｈ，フラニル）、６．５５（ｍ，１Ｈ，フラニル）、６．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．３０−４．１０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−６’）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりに２−（トリブチルスタンニル）チオフェンを用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、９４から（２Ｒ，４Ｒ）−１−［２−（ベンジルオキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−（２−チエニル）ウラシル１１１を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．０６−７．２０（ｍ，７Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．８５（ｔ，１Ｈ，チエニル）、６．２９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．２８−４．１０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−６’）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりに２−（トリブチルスタンニル）フランを用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、１０２から（２Ｓ，４Ｓ）−１−［２−（ベンジルオキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−（２−フラニル）ウラシル１１６を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．１６（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１０−７．４１（ｍ，６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．９２（ｄ，１Ｈ，フラニル）、６．８２（ｄ，１Ｈ，フラニル）、６．５５（ｍ，１Ｈ，フラニル）、６．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．３０−４．１０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−６’）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりに２−（トリブチルスタンニル）チオフェンを用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、１０２から（２Ｓ，４Ｓ）−１−［２−（ベンジルオキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−（２−チエニル）ウラシル１１７を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．０６−７．２０（ｍ，７Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．８５（ｔ，１Ｈ，チエニル）、６．２９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．２８−４．１０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−６’）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりにトリブチル（フェニル）錫を用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、２０からβ−Ｄ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−プロピニルウリジン１２７を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．１０−７．４５（ｍ，１１Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．４３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．８３−４．７１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．７９、２．３８（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、１．８７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりにトリブチル（フェニル）錫を用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、２０からβ−Ｄ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−（フェニルエチニル）ウリジン１２８を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．０９−７．２８（ｍ，１６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．４５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．８８−４．７６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．６３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．８３、２．４０（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりにトリブチル（フェニル）錫を用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、２０からβ−Ｄ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−フェニルウリジン１２９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．０９−７．２１（ｍ，１６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．３８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．７９、２．３２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
トリブチル（ビニル）錫の代わりにトリブチル（フェニル）錫を用いる以外は化合物２１の製造と同様にして、２３からβ−Ｌ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−フェニルウリジン１３３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．０９−７．２１（ｍ，１６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．３８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．７９、２．３２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
β−Ｄ−２’−デオキシ−５−ビニルウリジン（２２）
栓付きフラスコにおいてアンモニウム−ＭｅＯＨ溶液（２Ｍ，２５ｍｌ）中に２１（１８３ｍｇ，０．４１ミリモル）を含む溶液を室温において２０時間撹拌した後真空下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝９：１）にかけて、標記化合物２２を白色結晶性固体として得た（８８ｍｇ，８７％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．３７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．３６（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、６．１５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）５．９１、５．１１（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．２１、５．０９（２ｂｒ，２Ｈ，２ＯＨ）、４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．５９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’）、２．１５−２．１１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２２の製造と同様にして、２４からβ−Ｌ−２’−デオキシ−５−ビニルウリジン２５を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．３６（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、６．１５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．９１、５．１１（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．２１、５．１０（２ｂｒ，２Ｈ，２ＯＨ）、４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．５９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’）、２．１５−２．１１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２２の製造と同様にして、２７から１−（β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−ビニルウラシル２８を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．８９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．３７（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、６．０１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．８７、５．０８（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．６２（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．４８（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．１８（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．０５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．９３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物２２の製造と同様にして、３０から１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ビニルウラシル３１を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．９０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．３７（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、６．０１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．８７、５．０８（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．６２（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．４８（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．１８（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．０５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、３．９３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物２２の製造と同様にして、３４からβ−Ｄ−５−ビニルウリジン３５を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．３７（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．７８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．９２、５．１１（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．４４（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．２５（ｄ，１Ｈ，ＯＨ）、５．１０（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．０６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、４．０１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６９、３．６０（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物２２の製造と同様にして、４８から１−［（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ）メチル］−５−ビニルウラシル４９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．２５（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．９０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２０、６．６０（２ｂｒ，２Ｈ，２ＯＨ）、６．３６（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．９５、５．１２（２ｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．１９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ ２Ｎ）、４．６１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ）、３．５３（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯ）、３．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ）。
化合物２２の製造と同様にして、７６から（±）−（１’β，３’α，４’β）−１−［３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）シクロペンチル］−５−ビニルウラシル７７を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．９６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．３５（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．９０、５．１０（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、４．９５（ｍ，１Ｈ，ＣＨＮ）、４．７５、４．６３（２ｂｓ，２Ｈ，２ＯＨ）、４．００（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯＨ）、３．４３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＯＨ）、２．２５−１．７５（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、１．４０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）。
化合物２２の製造と同様にして、８０からβ−Ｄ−２’−デオキシ−５−（２−フラニル）ウリジン８２を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．３３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．６０（ｓ，１Ｈ，フラニル）、６．８４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ，フラニル）、６．５１（ｍ，１Ｈ，フラニル）、６．２０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＯＨ−３’）、５．１１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＯＨ−５’）、４．２７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．１６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２２の製造と同様にして、８１からβ−Ｄ−２’−デオキシ−５−（チエン−２−イル）ウリジン８３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．５７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．４５−７．４４（ｍ，１Ｈ，チエニル）、７．３９−７．３８（ｍ，１Ｈ，チエニル）、７．０５−７．０３（ｍ，１Ｈ，チエニル）、６．２１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．３１−５．２７（ｍ，２Ｈ，２ＯＨ）、４．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６８−３．６３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．２３−２．１７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２２の製造と同様にして、８７からβ−Ｌ−２’−デオキシ−５−（２−フラニル）ウリジン８９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．３３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．９０（ｓ，１Ｈ，フラニル）、６．８４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ，フラニル）、６．５１（ｍ，１Ｈ，フラニル）、６．２０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＯＨ−３’）、５．１１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＯＨ−５’）、４．２７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．１６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２２の製造と同様にして、８８からβ−Ｌ−２’−デオキシ−５−（チエン−２−イル）ウリジン９０を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．５７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．４５−７．４４（ｍ，１Ｈ，チエニル）、７．３９−７．３８（ｍ，１Ｈ，チエニル）、７．０５−７．０３（ｍ，１Ｈ，チエニル）、６．２１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．３１−５．２７（ｍ，２Ｈ，２ＯＨ）、４．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６８−３．６３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．２３−２．１７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２２の製造と同様にして、９５から（２Ｒ，４Ｒ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−ビニルウラシル９６を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４６（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．３６（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、６．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．９０、５．１１（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．３５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９３（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．１５−４．００（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物２２の製造と同様にして、９４から（２Ｒ，４Ｒ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−ヨードウラシル９９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．２２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．３５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９２（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．１５−４．００（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物２２の製造と同様にして、１０３から（２Ｓ，４Ｓ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−ビニルウラシル１０４を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４６（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．３６（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、６．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．９０、５．１１（２ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．３５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９３（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．１５−４．００（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物２２の製造と同様にして、１０２から（２Ｓ，４Ｓ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−ヨードウラシル１０７を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．２２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．３５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９２（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．１５−４．００（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物２２の製造と同様にして、１１０から（２Ｒ，４Ｒ）−５−（２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル１１２を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．３３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．６０（ｄ，１Ｈ，フラニル）、６．８４（ｄ，１Ｈ，フラニル）、６．５０（ｄ，１Ｈ，フラニル）、６．２２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．３５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９２（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．１５−４．００（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物２２の製造と同様にして、１１１から（２Ｒ，４Ｒ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−（チエン−２−イル）ウラシル１１４を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６７（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．５７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．４４（ｄｄ，１Ｈ，チエニル）、７．３８（ｄｄ，１Ｈ，チエニル）、７．０４（ｄｄ，１Ｈ，チエニル）、６．２２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．３５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９２（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．１５−４．００（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物２２の製造と同様にして、１１６から（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル１１８を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．３３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．６０（ｄ，１Ｈ，フラニル）、６．８４（ｄ，１Ｈ，フラニル）、６．５０（ｄ，１Ｈ，フラニル）、６．２２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．３５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９２（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．１５−４．００（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物２２の製造と同様にして、１１７から（２Ｓ，４Ｓ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−（チエン−２−イル）ウラシル１２０を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６７（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．５７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．４４（ｄｄ，１Ｈ，チエニル）、７．３８（ｄｄ，１Ｈ，チエニル）、７．０４（ｄｄ，１Ｈ，チエニル）、６．２２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．３５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９２（ｔ，１Ｈ，ＯＨ）、４．１５−４．００（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．６８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物２２の製造と同様にして、１２７からβ−Ｄ−２’−デオキシ−５−プロピニルウリジン１３０を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．１０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．２３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，ＯＨ−３’）、５．０９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＯＨ−５’）、４．２１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．５８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’）、２．１０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、１．９７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
化合物２２の製造と同様にして、１２８からβ−Ｄ−２’−デオキシ−５−（フェニルエチニル）ウリジン１３１を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．７０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．３７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．４７−７．３９（ｍ，５Ｈ，芳香族）、６．１２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．２６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，ＯＨ−３’）、５．１７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＯＨ−５’）、４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６３−３．５７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’）、２．１５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２２の製造と同様にして、１２９からβ−Ｄ−２’−デオキシ−５−フェニルウリジン１３２を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．５５−７．２９（ｍ，５Ｈ，芳香族）、６．２４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＯＨ−３’）、５．１３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＯＨ−５’）、４．２８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’）、２．２４−２．１５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物２２の製造と同様にして、１３３からβ−Ｌ−２’−デオキシ−５−フェニルウリジン１３４を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．５５−７．２９（ｍ，５Ｈ，芳香族）、６．２４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＯＨ−３’）、５．１３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，ＯＨ−５’）、４．２８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’）、２．２４−２．１５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
β−Ｄ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−［（２−トリメチルシリル）エチニル］ウリジン（３６）
ＴＨＦ（５０ｍｌ）中に２０（２．８１ｇ，５ミリモル）、ＰｄＣｌ２（８９ｍｇ，０．５ミリモル）、Ｐｈ３Ｐ（２６１ｍｇ，１ミリモル）及びＣｕＩ（９５ｍｇ，０．５ミリモル）を含む溶液にＥｔ３Ｎ（１．０１ｇ，１０ミリモル，１．３９ｍｌ）及びトリメチルシリルアセチレン（７３７ｍｇ，７．５ミリモル）を順次添加した。混合物をアルゴン下４０℃で４時間加熱した後、蒸発乾固させた。残渣をヘキサン／ＥｔＯＡｃ（９：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物３６を白色固体として得た（２．０８ｇ，７８％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．３１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、８．１０−７．４３（ｍ，１０Ｈ，芳香族）、６．３９−６．３６（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．８３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．６７−４．５７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．８１−２．７６、２．３０−２．２７（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、０．１４（ｓ，９Ｈ，３ＣＨ３）。
化合物３６の製造と同様にして、２３からβ−Ｌ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−５−［（２−トリメチルシリル）エチニル］ウリジン３８を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．３１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、８．１０−７．４２（ｍ，１０Ｈ，芳香族）、６．４０−６．３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．８３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．６７−４．５７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．８１−２．７６、２．３０−２．２７（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、０．１４（ｓ，９Ｈ，３ＣＨ３）。
化合物３６の製造と同様にして、２６から１−（２’，３’，５’−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−［（２−トリメチルシリル）エチニル］ウラシル４０を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１０−７．４０（ｍ，１６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．２３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．４１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．２８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．５０−４．２０（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−５’）、０．１５（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）３）。
化合物３６の製造と同様にして、２９から１−（２’，３’，５’−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−［（２−トリメチルシリル）エチニル］ウラシル４２を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１０−７．４０（ｍ，１６Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．２３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．４０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．２８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．５０−４．２０（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−５’）、０．１６（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）３）。
化合物３６の製造と同様にして、４７から１−［［１，３−ビス（アセトキシ）−２−プロポキシ］メチル］−５−［（２−トリメチルシリル）エチニル］ウラシル５０を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．４４（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、５．２７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、４．２１、４．０６（２ｍ，５Ｈ，２ＣＨ２，ＣＨ）、２．０９（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３）、０．２３（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）３）。
化合物３６の製造と同様にして、７５から（±）−（１’β，３’α，４’β）−１−［３−アセトキシ−４−（アセトキシメチル）シクロペンチル］−５−［（２−トリメチルシリル）エチニル］ウラシル７８を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．４０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、５．１−４．５（ｍ，２Ｈ，ＣＨＯ，ＣＨＮ）、４．３０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ）、２．０２（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３）、２．２５−１．０５（ｍ，５Ｈ，２ＣＨ２，ＣＨ）、０．１６（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）３）。
化合物３６の製造と同様にして、９４から（２Ｒ，４Ｒ）−１−［２−（ベンジルオキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−（２−トリメチルシリルエチニル）ウラシル９７を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、８．２０−７．４０（ｍ，５Ｈ，芳香族）、６．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．３０−４．１０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−６’）、０．１５（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）３）。
化合物３６の製造と同様にして、１０２から（２Ｓ，４Ｓ）−１−［２−（ベンジルオキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−（２−トリメチルシリルエチニル）ウラシル１０５を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、８．２０−７．４０（ｍ，５Ｈ，芳香族）、６．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．２０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．３０−４．１０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−６’）、０．１５（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）３）。
β−Ｄ−２’−デオキシ−５−エチニルウリジン（３７）
ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の３６（１．３３３ｇ，２．５ミリモル）を含む混合物にＴＢＡＦ（１Ｍ ＴＨＦ溶液，２．５ｍｌ，２．５ミリモル）を添加し、混合物を室温において３０分間撹拌した。溶媒を除去後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、ブラインで洗浄し、濃縮した。残渣をＮＨ３−ＭｅＯＨ（２．０Ｍ，５０ｍｌ）に溶解し、室温で２０時間保持した。溶媒を蒸発により除去した後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物３７を淡黄色固体として得た（４５３ｍｇ，７２％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．１０（ｔ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．２６（ｄ，１Ｈ，ＯＨ−３’）、５．１５（ｔ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．１２（ｓ，１Ｈ，エチニル）、３．７９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．１３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物３７の製造と同様にして、３８からβ−Ｌ−２’−デオキシ−５−エチニルウリジン３９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．１０（ｔ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．２６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、５．１５（ｔ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．１２（ｓ，１Ｈ，エチニル）、３．７９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．１３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物３７の製造と同様にして、４０から１−（β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−エチニルウラシル４１を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．３７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．０２（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６５、５．５４（２ｄ，２Ｈ，２ＯＨ）、５．０８（ｔ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．０２−３．９９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，エチニル）、３．９５−３．９３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８２−３．７８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６６−３．５５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物３７の製造と同様にして、４２から１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−エチニルウラシル４３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．３７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．０２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６５、５．５４（２ｄ，２Ｈ，２ＯＨ）、５．０８（ｔ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．０２−３．９９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，エチニル）、３．９５−３．９３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８２−３．７８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６６−３．５５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）。
化合物３７の製造と同様にして、５０から１−［（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ）メチル］−５−エチニルウラシル５１を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６３（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．４５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２０、６．６０（２ｂｒ，２Ｈ，２ＯＨ）、５．１８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、４．６６（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ）、４．１２（ｓ，１Ｈ，エチニル）、３．５４（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯ）、３．４０（ｍ，２Ｈ，２ＣＨ２Ｏ）。
化合物３７の製造と同様にして、７８から（±）−（１’β，３’α，４’β）−１−［３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシシメチル）シクロペンチル］−５−エチニルウラシル７９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．３（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．４２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、５．００−４．５５（ｍ，３Ｈ，ＣＨＮ，２ＯＨ）、４．１０（ｓ，１Ｈ，エチニル）、４．００（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯＨ）、３．４２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ＯＨ）、２．２５−１．４０（ｍ，５Ｈ）。
化合物３７の製造と同様にして、９７から（２Ｒ，３Ｒ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−エチニルウラシル９８を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．３８（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．８０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．１９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．８９（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ）、４．２２−４．０５（ｍ，３Ｈ，Ｈ−５’，エチニル）、３．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物３７の製造と同様にして、１０５から（２Ｓ，４Ｓ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−エチニルウラシル１０６を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．３８（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．８０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．１９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．８９（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ）、４．２２−４．０５（ｍ，３Ｈ，Ｈ−５’，エチニル）、３．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
１−［［１，３−ビス（ベンジルオキシ）−２−プロポキシ］メチル］−５−ヨードウラシル（４５）
室温において無水ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ）中に２−Ｏ−（アセトキシメチル）−１，３−ジ−Ｏ−ベンジルグリセロール４４（Ｌ．Ｃ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｃ．Ａ．Ｄｖｏｒａｋ，Ｄ．Ｆ．Ｓｍｅｅ，Ｔ．Ｒ．Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｊ．Ｐ．Ｈ．Ｖｅｒｈｅｙｄｅｎ，“９−［（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ）メチル］キアニン：新規な強力で選択的抗ヘルペス剤（９−［（１，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−２−ｐｒｏｐｏｘｙ）ｍｅｔｈｙｌ］ｑｕａｎｉｎｅ： ａ ｎｅｗ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｈｅｒｐｅｓ ａｇｅｎｔ）”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２６：７５９−７６１（１９８３）に従って製造した）（２．０３８ｇ，５．９ミリモル）及び５−ヨードウラシル（２．１０６ｇ，８．８５ミリモル）を含む懸濁液にＮ，Ｏ−ビス−（トリメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ，５．４６ｍｌ，２２．１３ミリモル）を添加し、混合物を窒素下室温で２時間撹拌した。生じた透明溶液を０℃に冷却し、ＳｎＣｌ４（１Ｍ ＣＨ２Ｃｌ２溶液，５．９ｍｌ，５．９ミリモル）を添加した。混合物を室温で一晩撹拌した後、飽和ＮａＨＣＯ３及びＣＨＣｌ３混合物に注いだ。水性層をＣＨＣｌ３で抽出し、合わせた有機相を蒸発させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９７：３）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物４５を黄色油状物として得た（２．９３５ｇ，９５％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．５９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．８２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．３６−７．２６（ｍ，１０Ｈ，芳香族）、５．２８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、４．５０（ｓ，４Ｈ，２ＣＨ３）、３．９９（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯ）、３．５２（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２Ｏ）。
１−［［１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ］メチル］−５−ヨードウラシル（４６）
−７８℃において無水ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍｌ）中に４５（１．９０ｇ，３．６４ミリモル）を含む溶液にＢＣｌ３（１Ｍ ＣＨ２Ｃｌ２溶液，３０ｍｌ，３０ミリモル）を滴下した。混合物を窒素下−７８℃で２時間撹拌した後−６０℃で更に４時間撹拌した。ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）を添加して反応を停止した後、１４％ ＮＨ４ＯＨ溶液を添加して混合物のｐＨを７に調節した。室温で１時間撹拌した後、混合物を真空下で濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物４６を淡黄色固体として得た（８１０ｍｇ，６５％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２０、６．６０（２ｂｒ，２Ｈ，２ＯＨ）、５．１５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、４．６０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ）、３．５３（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯ）、３．４１（ｍ，２Ｈ，２ＣＨ２Ｏ）。
１−［［１，３−ビス（アセトキシ）−２−プロポキシ］メチル］−５−ヨードウラシル（４７）
０℃において無水ＣＨ２Ｃｌ２（７ｍｌ）中に４６（４００ｍｇ，１．１７ミリモル）、ＤＭＡＰ（１０ｍｇ）及びＥｔ３Ｎ（１．０ｍｌ）を含む溶液にＡｃ２Ｏ（０．５ｍｌ）を滴下し、溶液を窒素下室温で撹拌した。溶媒を蒸発により除去した後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９７：３）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物４７を黄色油状物として得た（４９９ｍｇ，定量）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．６６（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、５．２６（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２Ｎ）、４．２３、４．０５（２ｍ，５Ｈ，２ＣＨ２，ＣＨＯ）、２．０７（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３）。
化合物４７の製造と同様にして、７２から（±）−（１’β，３’α，４’β）−１−［３−アセトキシ−４−（アセトキシメチル）シクロペンチル］−５−ヨードウラシル７５を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．２（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、５．００（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯ）、４．９０（ｍ，１Ｈ，ＣＨＮ）、４．１８、４．０５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２Ｏ）、２．０２（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３）、２．４５−１．８５（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、１．５９（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）。
β−Ｄ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−５−ヨード−４’−チオウリジン（５５）
ＨＭＤＳ（３０ｍｌ）中に５−ヨードウラシル（１．０７１ｇ，４．５ミリモル）及び硫酸アンモニウム（５ｍｇ）を含む懸濁液を窒素雰囲気下で２時間還流加熱した。過剰のＨＭＤＳを真空下で蒸発させた。この残渣に対して無水ＣＨ３ＣＮ（２０ｍｌ）中に１−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−４−チオ−α／β−Ｄ−リボフラノシド５４（Ｊ．Ａ．Ｓｅｃｒｉｓｔ ＩＩＩ，Ｋ．Ｎ．Ｔｉｗａｒｉ，Ｊ．Ｍ．Ｒｉｏｄａｎ，Ｊ．Ａ．Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，“２１’−デオキシ−４’−チオピリミジンヌクレオシドの合成及び生物学的活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ２１’−ｄｅｏｘｙ−４’−ｔｈｉｏ−ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ）”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３４：２３６１−２３６６（１９９１）に従って製造）（１．２８４ｇ，３ミリモル）を含む溶液を添加した。生じた混合物を０℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ（９０７ｍｇ，４ミリモル）を添加した。反応混合物を０℃で２０分間撹拌した後室温で２時間撹拌した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９９：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサンから再結晶して、標記化合物５５を固体として得た（５６３ｍｇ，３１％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ７．９６−７．２５（ｍ，９Ｈ，芳香族，Ｈ−６）、６．６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．７５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．６８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．０５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．７５、２．４１（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、２．４２（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３）。
化合物５５の製造と同様にして、５４及び５−［（２−トリメチルシリル）エチニル］ウラシル（Ｋ．Ｉｍａｍｕｒａ及びＹ．Ｙａｍａｍｏｔｏ，“ボロンキャリアーとしての５−クロソ−及び５−ニド−ｏ−カルボラニルウリジンの合成及びインビトロ評価（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ５−ｃｌｏｓｏ− ａｎｄ ５−ｎｉｄｏ−ｏｒｔｈｏｃａｒｂｏｒａｎｙｌｕｒｉｄｉｎｅｓ ａｓ ｂｏｒｏｎ ｃａｒｒｉｅｒｓ）”，Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，７０：３１０３−３１１０（１９９７）に従って製造）からβ−Ｄ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−４’−チオ−５−Ｅ−［（２−トリメチルシリル）エチニル］ウリジン５８を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．３６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．９４−７．２６（ｍ，９Ｈ，芳香族）、６．７０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．７３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．０５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．７６、２．４０（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、２．４２（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３）、０．１４（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）３）。
化合物５５の製造と同様にして、５４及び５−Ｅ−（２−クロロビニル）ウラシル（Ａ．Ｓ．Ｊｏｎｅｓ，Ｇ．Ｖｅｒｈｅｌｓｔ，Ｒ．Ｔ．Ｗａｌｋｅｒ，“強力な抗ヘルペスウイルス剤 Ｅ−５−（２−ブロモビニル）−２’−デオキシウリジン及び関連化合物の合成（Ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ−ｈｅｒｐｅｓ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔ， Ｅ−５−（２−ｂｒｏｍｏｖｉｎｙｌ）−２’−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）”，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，４５：４４１５−４４１８（１９７９）に従って製造）からβ−Ｄ−５−Ｅ−（２−クロロビニル）−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−４’−チオウリジン６０を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．９５−７．８５（ｍ，４Ｈ，芳香族）、７．４０−７．２０（ｍ，４Ｈ，芳香族）、７．１４（ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ，ビニル）、６．６４（ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ，ビニル）、６．４０（ｔ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．８２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．７０−４．５０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．９５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．８０−２．５０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、２．４０（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ３）。
化合物５５の製造と同様にして、１−Ｏ−アセチル−４−チオ−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−α／β−Ｄ−アラビノフラノシド６２（Ｊ．Ａ．Ｓｅｃｒｉｓｔ ＩＩＩ，Ｋ．Ｎ．Ｔｉｗａｒｉ，Ａ．Ｔ．Ｓｈｏｒｔｎａｃｙ−Ｆｏｗｌｅｒ，Ｌ．Ｍｅｓｓｉｎｉ，Ｊ．Ｍ．Ｒｉｏｄａｎ，Ｊ．Ａ．Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，“特定の４’−チオ−Ｄ−アラビノフラノシルプリンヌクレオシドの合成及び生物学的活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｅｒｔａｉｎ ４’−ｔｈｉｏ−Ｄ−ａｒａｂｉｎｏｆｕｒａｎｏｓｙｌｐｕｒｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ）”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４１：３８６５−３８７１（１９９８）に従って製造）から５−ヨード−１−（４−チオ−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）ウラシル６３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．１０（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．８０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．４０−７．１５（ｍ，１５Ｈ，芳香族）、６．３０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．７０−４．４０（ｍ，６Ｈ，３ＣＨ２）、４．２０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−３’）、３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）。
化合物５５の製造と同様にして、６２から１−（４−チオ−２，３，５−トリ−Ｏ−Ｄ−ベンジル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−［（２−トリメチルシリル）エチニル］ウラシル６６を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．４２−７．１５（ｍ，１５Ｈ，芳香族）、６．２９（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．７０−４．４０（ｍ，６Ｈ，３ＣＨ２）、４．１８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−３’）、３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、０．１４（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ３）３）。
化合物５５の製造と同様にして、６２から５−Ｅ−（２−クロロビニル）−１−（４−チオ−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）ウラシル６８を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．２（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．７５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．４０−７．１５（ｍ，１６Ｈ，芳香族，ビニル）、６．２８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、６．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３Ｈｚ，ビニル）、４．７０−４．４０（ｍ，６Ｈ，３ＣＨ２）、４．２０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−３’）、３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．４０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）。
β−Ｄ−２’−デオキシ−４’−チオ−５−ビニルウリジン（５７）
ＭｅＯＨ（５ｍｌ）中に５６（２２０ｍｇ，０．４３ミリモル）を含む混合物にＮａＯＭｅ（１．０Ｍ溶液，０．８７ｍｌ，０．８７ミリモル）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物５７を白色固体として得た（７８ｍｇ，６７％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．４（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、６．２８（ｔ，１Ｈ，Ｈ−１’）、６．００、５．１５（２ｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．２３（ｍ，２Ｈ，２ＯＨ）、４．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．６４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．３５−２．１５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物５７の製造と同様にして、６０からβ−Ｄ−５−Ｅ−（２−クロロビニル）−２’−デオキシ−４’−チオウリジン６１を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．１８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２３（ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ，ビニル）、６．７０（ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ，ビニル）、６．２５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．２７（ｄ，１Ｈ，ＯＨ−３’）、５．２１（ｔ，１Ｈ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７０−３．１５（ｍ，３Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−４’）、２．３０−２．１０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物５７の製造と同様にして、１２３からβ−Ｄ−２’−デオキシ−５−エチルウリジン１２４を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．１８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，ＯＨ−３’）、５．０６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＯＨ−５’）、４．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７７（ｍ，Ｈ−４’）、３．５７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．２１（ｑ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．０９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、１．０３（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３）。
化合物５７の製造と同様にして、１２５からβ−Ｄ−５−ブチル−２’−デオキシウリジン１２６を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．２４（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．１６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．２３、５．０４（２ｂｓ，２Ｈ，２ＯＨ）、４．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７５（ｍ，Ｈ−４’）、３．５５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．１７（ｑ，２Ｈ，ＣＨ２）、２．０７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、１．３８−１．２６（２ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、０．８６（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３）。
β−Ｄ−２’−デオキシ−５−エチニル−４’−チオウリジン（５９）
ＴＨＦ（５ｍｌ）中の５８（４４０ｍｇ，０．７６ミリモル）の混合物にＴＢＡＦ（１Ｍ ＴＨＦ溶液，０．７６ｍｌ，０．７６ミリモル）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をＭｅＯＨ（５ｍｌ）に溶解し、ＮａＯＭｅ（１．０Ｍ ＭｅＯＨ溶液，１．５３ｍｌ）を添加した。溶液を室温で１時間撹拌した後、溶媒を除去した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物５９を淡黄色固体として得た（９８ｍｇ，４８％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．２５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．２０（ｍ，２Ｈ，２ＯＨ）、４．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．２０（ｓ，１Ｈ，エチニル）、３．６２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．３０−２．１０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ビニルウラシル（６５）
−７８℃において無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中に６４（６６４ｍｇ，１．５ミリモル）を含む溶液にＢＢｒ３（１Ｍ ＣＨ２Ｃｌ２溶液，７．５ｍｌ）をゆっくり添加し、反応混合物を窒素雰囲気下−７８℃で４時間撹拌した。ＭｅＯＨ（５ｍｌ）を添加して反応を停止し、ピリジンで中和した。溶媒を蒸発により除去した後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（４：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物６５を得た（３０３ｍｇ，７７％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．４（ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、６．２７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、６．００、５．１５（２ｄ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ２）、５．７０（ｄ，１Ｈ，ＯＨ−２’）、５．４０（ｄ，１Ｈ，ＯＨ−３’）、５．２７（ｔ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．００−３．９５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−３’）、３．７５−３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）。
化合物６５の製造と同様にして、６８から５−Ｅ−（２−クロロビニル）−１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）ウラシル６９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２３（ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ，ビニル）、６．７０（ｄ，Ｊ＝１３Ｈｚ，１Ｈ，ビニル）、６．２６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６８（ｄ，１Ｈ，ＯＨ−２’）、５．４０（ｄ，１Ｈ，ＯＨ−３’）、５．２５（ｔ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．０２−３．９５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−３’）、３．７５−３．６０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．２１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）。
５−エチニル−１−（４−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）ウラシル（６７）
ＴＨＦ（１０ｍｌ）中に６６（９４０ｍｇ，１．５ミリモル）を含む混合物にＴＢＡＦ（１Ｍ ＴＨＦ溶液，１．５ｍｌ，１．５ミリモル）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）に溶解し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発乾固させた。次いで、残渣を無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）に溶解し、−７８℃に冷却した。ＢＢｒ３（１Ｍ ＣＨ２Ｃｌ２溶液，７．５ｍｌ）をゆっくり添加し、反応混合物を窒素雰囲気下−７８℃で４時間撹拌した。ＭｅＯＨ（５ｍｌ）を添加して反応を停止し、ピリジンで中和した。溶媒を蒸発により除去した後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（４：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物６７を得た（３１１ｍｇ，７３％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．３（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．４２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．２５（ｔ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６８（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ−２’）、５．４２（ｄ，１Ｈ，ＯＨ−３’）、５．２５（ｔ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．１０（ｓ，１Ｈ，エチニル）、４．０１−３．９４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−３’）、３．７２−３．６０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）。
β−Ｄ−５−（５−クロロチエン−２−イル）−２’−デオキシウリジン（８４）
無水ピリジン（１０ｍｌ）中に８１（６１８ｍｇ，１．１ミリモル）及びＮＣＳ（１４２ｍｇ，１．０５ミリモル）を含む溶液を７０℃で４時間加熱した。溶媒を除去した後、残渣をトルエンと共蒸発させ、ＮＨ３−ＭｅＯＨ溶液（２Ｍ溶液，４０ｍｌ）を添加した。溶液を栓付きフラスコにおいて室温で一晩撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、アセトン／ＣＨＣｌ３から再結晶して、標記化合物８４を黄褐色結晶として得た（２０８ｍｇ，５５％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．６７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，チエニル）、７．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，チエニル）、６．１９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．３７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＯＨ−５’）、５．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＯＨ−３’）、４．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．７１−３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．２５−２．１８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物８４の製造と同様にして、８８からβ−Ｌ−５−（５−クロロチエン−２−イル）−２’−デオキシウリジン９１を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．６７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，チエニル）、７．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，チエニル）、６．１９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．３７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＯＨ−５’）、５．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＯＨ−３’）、４．３１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．７１−３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．２５−２．１７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
β−Ｄ−５−（５−ブロモチエン−２−イル）−２’−デオキシウリジン（８５）
室温において８１（１１３ｍｇ，０．２ミリモル）及びＣＨＣｌ３（１０ｍｌ）の混合物にＢｒ２−ＣＣｌ４（ＣＣｌ４（２ｍｌ）中Ｂｒ２（３２ｍｇ））を１５分間かけて滴下した後、溶液を水で２回洗浄した。有機相を蒸発させ、トルエンと共蒸発させた後、ＮＨ３−ＭｅＯＨ溶液（２Ｍ溶液，３０ｍｌ）を添加した。溶液を栓付きフラスコにおいて室温で一晩撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、アセトン／ＣＨＣｌ３から再結晶して、標記化合物８５を淡黄色固体として得た（４９ｍｇ，６３％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．６７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，チエニル）、７．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，チエニル）、６．１９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．３７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＯＨ−５’）、５．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＯＨ−３’）、４．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．７１−３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．２５−２．１８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物８５の製造と同様にして、８８からβ−Ｌ−５−（５−ブロモチエン−２−イル）−２’−デオキシウリジン９２を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．６７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，チエニル）、７．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，チエニル）、６．１９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．３６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＯＨ−５’）、５．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＯＨ−３’）、４．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．７０−３．６５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．２５−２．１７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物８５の製造と同様にして、１１０から（２Ｒ，４Ｒ）−５−（５−ブロモ−２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル１１３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．８２、６．６０（２ｄ，２Ｈ，フラニル）、６．１９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．６２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９０（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ）、４．２０−４．０５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．１２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物８５の製造と同様にして、１１１から（２Ｒ，４Ｒ）−５−（５−ブロモ−チエン−２−イル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル１１５を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．８（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．６５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２０（ｄ，１Ｈ，チエニル）、７．１６（ｄ，１Ｈ，チエニル）、６．１９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．８９（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ）、４．２２−４．０５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物８５の製造と同様にして、１１６から（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモ−２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル１１９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．８２、６．６０（２ｄ，２Ｈ，フラニル）、６．１９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．６２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９０（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ）、４．２０−４．０５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．１２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物８５の製造と同様にして、１１７から（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモチエン−２−イル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシル１２１を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．８（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、８．６５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２０（ｄ，１Ｈ，チエニル）、７．１６（ｄ，１Ｈ，チエニル）、６．１９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、５．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．８９（ｂｒ，１Ｈ，ＯＨ）、４．２２−４．０５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、３．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６’）。
β−Ｄ−２’−デオキシ−５−（５−ヨードチエン−２−イル）ウリジン（８６）
無水ＭｅＣＮ（１０ｍｌ）中に８１（２２５ｍｇ，０．４ミリモル）を含む混合物に１２及び亜硝酸セリウムアンモニウム（６１ｍｇ，０．１１３ミリモル）を順次添加した。混合物を室温で３時間撹拌した後溶媒を除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）、５％ 亜硫酸水素ナトリウム（５ｍｌ）及びブライン（１０ｍｌ）に排出した。水性層をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機相を濃縮乾固させた。トルエン及びＥｔＯＨと共蒸発させた後２Ｍ ＮＨ３−ＭｅＯＨ溶液（３０ｍｌ）に溶解させた。溶液を栓付きフラスコにおいて室温で一晩撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、ＭｅＯＨ／アセトン／ＣＨＣｌ３から再結晶して、標記化合物８６を褐色固体として得た（９６ｍｇ，５５％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．６４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，チエニル）、７．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，チエニル）、６．１９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．３６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＯＨ−５’）、５．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＯＨ−３’）、４．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．７０−３．６４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．２６−２．１８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
化合物８６の製造と同様にして、８８からβ−Ｌ−２’−デオキシ−５−（５−ヨードチエン−２−イル）ウリジン９３を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、８．６４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，チエニル）、７．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，チエニル）、６．１９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１’）、５．３６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，ＯＨ−５’）、５．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，ＯＨ−３’）、４，３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．７０−３．６４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．２５−２．１７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
（２Ｒ，４Ｒ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−（３−ヒドロキシプロペニル）ウラシル（１０１）
−７８℃においてトルエン（１００ｍｌ）中に１００（４４７ｍｇ，１．５ミリモル）を含む溶液にＤＩＢＡＬＨ（１．０Ｍ ヘキサン溶液，１．８ｍｌ）を１０分間かけて添加した。−７８℃で３０分撹拌後、ＭｅＯＨ（２ｍｌ）を添加して反応を停止し、溶液を室温となるまで放置した。飽和酒石酸ナトリウムカリウム溶液を添加し、混合物をセライトの短パッドを介して濾過した。濾液を真空下で濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物１０１を白色固体として得た（２２６ｍｇ，５６％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．２５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−２’）、６．０９（ｄ，１Ｈ，ビニル）、５．７３（ｍ，１Ｈ，ビニル）、５．２０（ｔ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９０（ｍ，２Ｈ，２ＯＨ）、４．２９、４．０８（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，ＣＨ２）、３．６４（ｄｄ，２Ｈ，Ｈ−６’）。
化合物１００の製造と同様にして、１０８から（２Ｓ，４Ｓ）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−５−（３−ヒドロキシプロペニル）ウラシル１０９を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．６２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．２５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−２’）、６．０９（ｄ，１Ｈ，ビニル）、５．７３（ｍ，１Ｈ，ビニル）、５．２０（ｔ，１Ｈ，Ｈ−４’）、４．９０（ｍ，２Ｈ，２ＯＨ）、４．２９、４．０８（ｍ，４Ｈ，Ｈ−５’，ＣＨ２）、３．６４（ｄｄ，２Ｈ，Ｈ−６’）。
β−Ｄ−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−５−エチルウリジン（１２３）
ＨＭＤＳ（２０ｍｌ）中に５−エチルウラシル（４２０ｍｇ，３ミリモル）及び硫酸アンモニウム（１５ｍｇ）を含む懸濁液を窒素雰囲気下で２時間還流加熱した。過剰のＨＭＤＳを真空下で蒸発させた。室温で撹拌しながら残渣にＣＨＣｌ３（１０ｍｌ）、次いで２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−エリスロペントフラノシルクロリド１２２（７７８ｍｇ，２ミリモル；Ｍ．Ｈｏｆｆｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，９３：２７７１（１９６０）に従って製造）を少しずつ添加した。生じた溶液を室温で一晩撹拌した。溶媒を元の容量の半分まで濃縮し、ＥｔＯＨを添加した。ＣＨＣｌ３の残りを蒸発し、沈殿を濾過し、ＥｔＯＨで洗浄し、真空下で乾燥して、標記化合物１２３を白色粉末として得た（８９０ｍｇ，９０％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＨＣｌ３）δ ８．０８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．９７−７．９２（ｍ，４Ｈ，芳香族）、７．３０−７．２７（ｍ，４Ｈ，芳香族）、７．２２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．８２−４．６２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．７０，２．３４（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、２．４５（ｄ，６Ｈ，２ＣＨ３）、２．０７（ｑ，２Ｈ，ＣＨ２）、０．８９（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３）。
化合物１００の製造と同様にして、１２２からβ−Ｄ−５−ブチル−２’−デオキシ−３’，５’−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイルウリジン１２５を製造した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．１５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．９７−７．９２（ｍ，４Ｈ，芳香族）、７．３０−７．２７（ｍ，４Ｈ，芳香族）、７．２３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．６５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．８１−４．６１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、４．５３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、２．７０、２．３４（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）、２．４４（ｄ，６Ｈ，２ＣＨ３）、２．０２（ｑ，２Ｈ，ＣＨ２）、１．２７−１．０９（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ２）、０．７９（ｔ，３Ｈ，ＣＨ３）。
β−Ｄ−２’−デオキシ−５−（ヒドロキシメチル）ウリジン（１３６）
０．５Ｎ ＫＯＨ（１００ｍｌ）中に２’−デオキシウリジン１３５（１０ｇ，４３．８ミリモル）を含む溶液にｐ−ホルムアルデヒド（１２．５ｇ）を添加し、混合物を６０℃で１日間加熱した。更に０．５Ｎ ＫＯＨ（１５０ｍｌ）を添加し、混合物を６０℃で６日間撹拌した。混合物をＤｏｗｅｘ−５０ＷＸ−８−１００で中和し、濾過した。樹脂を水で濯ぎ、合わせた濾液を真空下で濃縮した。油状残渣をＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（４：１）を溶離液とするシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物１３６を黄色粘性泡状物として得た（４．３０ｇ，３８％）。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ １１．４（ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ）、７．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．１６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１’）、４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．１２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）、３．７６（ｍ，Ｈ−４’）、３．５７（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’）、２．０６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’）。
チミジンリン酸化の競合アッセイ
このアッセイは各ヌクレオシドに対する酵素の相対アフィニティーを間接的に測定するものであり、ここではＥＢＶ−ＴＫによるヌクレオシドアナログの認識を調べるために使用する（Ｅ．Ａ．Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ，Ａ．Ｃ．Ｃｈｉｌｌｅｍｉ，Ｄ．Ｒ．Ｓａｇｅ，Ｊ．Ｆｉｎｇｅｒｏｔｈ，“ＥＢＶ−ＴＫはＧＣＶもＡＣＶもリン酸化せず、ＨＳＶ−１ ＴＫと比較して狭い基質特異性を示す（Ｔｈｅ ＥＢＶ−ＴＫ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅ ＧＣＶ ｏｒ ＡＣＶ ａｎｄ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ ａ ｎａｒｒｏｗ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ＨＳＶ−１ ＴＫ）”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４２：２９２３−２９３１（１９８８）；Ｅ．Ａ．Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ，Ｒ．Ｆ．Ｓｃｈｉｎａｚｉ，Ｊ．Ｆｉｎｇｅｒｏｔｈ，“ＨＨＶ−８オープンリーディングフレーム２１は、ジドブジンを効率的にリン酸化するがガンシクロビルをリン酸化しない狭い基質特異性を有するチミジン及びチミジレートキナーゼである（ＨＨＶ−８ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ２１ ｉｓ ａ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｙｍｉｄｉｌａｔｅ ｋｉｎａｓｅ ｏｆ ｎａｒｒｏｗ ｓｕｂｓｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｈａｔ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｓ ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７４：６８４−６９２（２０００））。ＥＢＶ−ＴＫを最適化緩衝液中、１００μｌの最終容量で基質としての１５μＭ ３Ｈ−ｄＴとインキュベートした。酵素源は１４３Ｂ ＥＢＶ−ＴＫ−発現細胞由来のライゼートまたは大腸菌由来の精製ＧＳＴ ＥＢＶ−ＴＫのいずれかであった。酵素の量は反応が６０分間にわたり直線的に進行するように調節した。１０倍過剰量（１５０μＭ）の試験しようとするヌクレオシドアナログを実験に含めた。反応物５０μｌを正帯電ＤＥ−８１ディスク（Ｗｈａｔｍａｎ）にスポットすることにより反応を３０分で停止させた。５ｍＭ ギ酸アンモニウムで４回、９５％エタノールで１回洗浄した後、ディスクを乾燥し、シンチレーションカウンターで計数した。ヌクレオシドアナログを含まないポジティブコントロール反応物のＣＰＭを１００％活性と見做した。標識基質３Ｈ−ｄＴとの効果的競合によりＣＰＭ値が低下した。
細胞毒性アッセイ
このアッセイでは、薬物の連続存在下でのＥＢＶ感染細胞を特異的に排除する候補ヌクレオシドの能力を測定する。１４３Ｂ−ＴＫ−細胞はＴＫ−１を欠く。２９３細胞はヒトＴＫ−１を含む。従って、前記アッセイは毒性に対するヒトＴＫ発現の影響を比較して評価する。化合物のストック溶液（２０〜４０ｍＭ）を滅菌ＤＭＳＯ中で調製した後、増殖培地で所望濃度まで希釈した。細胞（１４３Ｂ ＴＫ−、２９３ ＥＢＶ−ＴＫまたはＮｅｏコントロール細胞）を薬物の存在下で５日間培養し、３日目に培地を薬物を含有する新鮮培地と交換した。次いで、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、４％ ホルムアルデヒド／１％ メタノールで固定し、細胞単層を可視化するために２０％ エタノール中１％ クリスタルバイオレッドで染色した。毒性を採点するために、“＋”は細胞が生存しなかったことを意味し、“−”は細胞が試験した薬物の最高濃度で増殖したことを示し、“±”は細胞は生きているが複製しないかまたは非常にゆっくりしか複製しなかったことを意味する。この培養物はなおピンクのままの培地をしばしば有している。このことは細胞代謝の減速を意味する。同一サンプルは３回ずつ測定する。
コロニー形成アッセイ
このアッセイは、ＧＣＶに関して記載されているように（Ｌ．Ｚ．Ｒｕｂｓａｍ，Ｂ．Ｌ．Ｄａｖｉｄｓｏｎ及びＤ．Ｓ．Ｓｈｅｗａｃｈ，“ＨＳＶ−ＴＫ−発現細胞におけるＡＣＶ及び１−β−Ｄ−アラビノフラノシルチミンと比較したＧＣＶによる高い細胞毒性：細胞死滅の範例（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｗｉｔｈ ＧＣＶ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＡＣＶ ａｎｄ １−ｂｅｔａ−Ｄ−ａｒａｂｉｎｏｆｕｒａｎｏｓｙｌｔｈｙｍｉｎｅ ｉｎ ＨＳＶ−ＴＫ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｃｅｌｌｓ： ａ ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｋｉｌｌｉｎｇ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５８：３８７３−３８８２（１９９８））、薬物に１回暴露後細胞ＤＮＡに取り込んで致死的損害を形成するために毒性を呈するヌクレオシドを同定するために設計されている。化合物のストック溶液（２０〜４０ｍＭ）を滅菌ＤＭＳＯ中で調製した後、増殖培地で所望濃度まで希釈した。指数関数的に増殖する細胞を問題のヌクレオシドと２４時間インキュベートし、２４ウェルプレートにおいて５０生存細胞／ウェルで平板培養し、薬物の非存在下で７〜９日間インキュベートする。細胞を上記したように固定、染色し、コロニーを計数する。ヌクレオシドはコロニーの数を低下させ得る。コロニーの数は薬物に初期暴露後に生存し、複製し得る細胞の数の直接指標である。
抗ＨＩＶ及び細胞毒性アッセイ
化合物の抗ＨＩＶ−１活性を、Ｒ．Ｆ．Ｓｃｈｉｎａｚｉ，Ａ．ＭｃＭｉｌｌａｎ，Ｄ．Ｃａｎｎｏｎ，Ｒ．Ｍａｔｈｉｓ，Ｒ．Ｍ．Ｌｌｏｙｄ Ｊｒ．，Ａ．Ｐｅｃｋ，Ｊ．Ｐ．Ｓｏｍｍａｄｏｓｓｉ，Ｍ．Ｓｔ．Ｃｌａｉｒ，Ｊ．Ｗｉｌｓｏｎ，Ｐ．Ａ．Ｆｕｒｍａｎ，Ｇ．Ｐａｉｎｔｅｒ，Ｗ．Ｂ．Ｃｈｏｉ，Ｄ．Ｃ．Ｌｉｏｔｔａ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，３６：２４２３（１９９２）；Ｒ．Ｆ．Ｓｃｈｉｎｚａｚｉ，Ｊ．Ｐ．Ｓｏｍｍａｄｏｓｓｉ，Ｖ．Ｓａａｌｍａｎｎ，Ｄ．Ｃａｎｎｏｎ，Ｍ．Ｙ．Ｘｉｅ，Ｇ．Ｈａｒｔ，Ｇ．Ｓｍｉｔｈ，Ｅ．Ｈａｈｎ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，３４：１０６１（１９９０）に既報されているようにヒト末梢血単核（ＰＢＭ）細胞中で測定した。化合物のストック溶液（２０〜４０ｍＭ）を滅菌ＤＮＳＯ中で調製した後、増殖培地で所望濃度まで希釈した。細胞に０．０１の感染の多重度で表現型ＨＩＶ−１ＬＡＩを感染させた。細胞上清から得たウイルスを感染から６日目に（ｒＡ）ｎ＊（ｄＴ）１２−１８を鋳型−プライマーとして用いる逆転写酵素アッセイにより定量した。希釈溶液（＜０．１％）中に存在するＤＭＳＯはウイルス収率に影響を持たなかった。ＡＺＴをポジティブコントロールとして含めた。幾つかの化合物の毒性を、Ｒ．Ｆ．Ｓｃｈｉｎａｚｉ，Ｊ．Ｐ．Ｓｏｍｍａｄｏｓｓｉ，Ｖ．Ｓａａｌｍａｎｎ，Ｄ．Ｌ．Ｃａｎｎｏｎ，Ｍ．Ｙ．Ｘｉｅ，Ｇ．Ｃ．Ｈａｒｔ，Ｇ．Ａ．Ｓｍｉｔｈ，Ｅ．Ｆ．Ｈａｈｎ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，３４：１０６１−１０６７（１９９０）に既報されているようにＶｅｒｏ、ヒトＰＢＭ及びＣＥＭ細胞において調べた。シクロヘキシミドをポジティブ細胞毒性コントロールとして含め、溶媒に暴露した未処理細胞をネガティブコントロールとして含めた。抗ウイルスＥＣ５０、ＥＣ９０及び細胞毒性ＩＣ５０をＴ．Ｃ．Ｃｈｏｕ，Ｐ．Ｔａｌａｌａｙ，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ．，２２：２７−５５（１９８４）；Ｍ．Ｓ．Ｂｅｌｅｎ’ｋｉｉ，Ｒ．Ｆ．Ｓｃｈｉｎａｚｉ，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．，２５：１−１１（１９９４）に既報されている半有効方法を用いて濃度−応答曲線から求めた。
ＥＢＶ−ＴＫ（または、ＫＨＳＶ−ＴＫ）を発現する細胞の作成
ウイルス株Ｂ−９５８由来のエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子を、Ｅ．Ａ．Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ，Ａ．Ｃ．Ｃｈｉｌｌｅｍｉ，Ｄ．Ｒ．Ｓａｇｅ，Ｊ．Ｄ．Ｆｉｎｇｅｒｏｔｈ，“エプスタイン−バーウイルスチミジンキナーゼはガンシクロビルまたはアシクロビルをリン酸化せず、単純ヘルペスウイルスタイプ１チミジンキナーゼと比較して狭い基質特異性を示す（Ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｏｒ ａｃｙｃｌｏｖｉｒ ａｎｄ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ ａ ｎａｒｒｏｗ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４２（１１）：２９２３−３１（１９９８）に記載されているようにベクターｐＣＭＶにクローン化した。次いで、ベクターをリポフェクタミン試薬を用いて２つのヒト細胞株にトラクスフェクトした。細胞を選択し、ＴＫ遺伝子（ＲＮＡ及びタンパク質）の発現を調べた。前記細胞を使用して、細胞を候補ヌクレオシドアナログに感作させるＥＢＶ−ＴＫの能力を評価するための２つのアッセイ系を作成した。ＫＨＳＶ−ＴＫを発現する細胞も同様にしてアッセイのために作成した。
ＥＢＶ−ＴＫ（または、ＫＨＳＶ−ＴＫ）を発現する１４３Ｂ ＴＫ−ヒト骨肉腫細胞の作成
１４３Ｂ ＴＫ−骨肉腫細胞はＡＴＣＣから入手した。これらの細胞は変異ヒトＴＫ１遺伝子を含むが、ヒトＴＫ１ ＲＮＡ／タンパク質を合成しない。前記細胞はヒトＴＫ２及びチミジレートシンターゼを合成する。前記細胞は、使用されていないときにＴＫ＋表現型への逆転を防止するために５−ブロモデオキシウリジンを含む培地において維持させる。細胞は有効なチミジンキナーゼ活性を有するタンパク質を導入しないならばチミジンサルベージ経路を利用できない。ＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトした細胞をＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を用いて選択した。アミノプテリン成分の葉酸拮抗薬はプリンヌクレオシドモノホスフェート及びチミジンモノホスフェートの正常なデノボ合成においてテトラヒドロフレートが関与する反応をブロックする。これにより、生存のためのサルベージ経路に対する依存が生ずる。
ＥＢＶ−ＴＫトランスフェクタントはクローンとして増殖する。各種実験で複数の各クローン及びバルク集団（クローンの混合物）を用いた。ＴＫを発現しない空コントロールベクターをトランスフェクトした細胞はＨＡＴにおいて全く増殖しなかった。
生存した細胞はすべてＥＢＶ−ＴＫを発現した。これは、２つの方法、すなわち（１）ＥＢＶ−ＴＫ ＲＮＡ（プローブとしてＥＢＶ−ＴＫを含むゲノム断片ＢＸＬＦ１を用いるＲＮＡドットブロットハイブリダイゼーションまたはノーザンブロットハイブリダイゼーション）及び／または（２）ＥＢＶ−ＴＫタンパク質の検出（ＥＢＶ−ＴＫに対する高力価抗体を有することが公知の上咽頭癌患者からのヒト異種抗血清またはより最近では精製ＥＢＶ−ＴＫに対する単特異性家兎異種抗血清を用いる免疫ブロット）により実証された。ＥＢＶ−ＴＫ担持細胞は選択後すぐに利用され、凍結させた。トランスフェクタントはＲＮＡブロットハイブリダイゼーションによりヒトＴＫ１陰性であることが繰り返し実証された。別のコントロール細胞株も樹立させた。１４３Ｂ ＴＫ−細胞にＨＳＶ−１ ＴＫ、ＫＨＳＶ（ＫＨＳＶ）ＴＫ及びヒトＴＫ−１を同様にトランスフェクトした。トランスフェクションのために使用した各プラスミドは、Ｅ．Ａ．Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ，Ａ．Ｃ．Ｃｈｉｌｌｅｍｉ，Ｄ．Ｒ．Ｓａｇｅ及びＪ．Ｄ．Ｆｉｎｇｅｒｏｔｈ，“エプスタイン−バーウイルスチミジンキナーゼはガンシクロビルまたはアシクロビルをリン酸化せず、単純ヘルペスウイルスタイプ１チミジンキナーゼと比較して狭い基質特異性を示す（Ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｏｒ ａｃｙｃｌｏｖｉｒ ａｎｄ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ ａ ｎａｒｒｏｗ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，４２（１１）：２９２３−３１（１９９８）及びＥ．Ａ．Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ，Ｒ．Ｆ．Ｓｃｈｉｎａｚｉ及びＪ．Ｄ．Ｆｉｎｇｅｒｏｔｈ，“ヒトヘルペスウイルス８オープンリーディングフレーム２１は効果的にジドブジンをリン酸化するがガンシクロビルをリン酸化しない狭い基質特異性を有するチミジン及びチミジレートキナーゼである（Ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｒｖｉｒｕｓ ８ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ２１ ｉｓ ａ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ ｋｉｎａｓｅ ｏｆ ｎａｒｒｏｗ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｈａｔ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｓ ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７４（２）：６８４−９２（２０００）に記載されているように作成した。発現はＲＮＡブロットハイブリダイゼーションにより実証された。
幾つかの実験でＨＡＴ選択の必要性を排除するために、ＥＢＶ−ＴＫ担持１４３Ｂ ＴＫ−細胞（及びコントロール、すなわち１４３Ｂ ＴＫ−細胞のみまたはそれぞれＨＳＶ１−ＴＫ、ＫＨＳＶ−ＴＫ、ヒトＴＫ１を発現する１４３Ｂ ＴＫ−細胞）をＨＡＴ選択から除去し、ジェネテシン（Ｇ４１８）耐性を付与するプラスミドｐＳＶ２ ｎｅｏをトランスフェクトした。次いで、細胞をＧ４１８を用いて選択した。ＥＢＶ−ＴＫのクローン発現がノーザンブロットハイブリダイゼーション及び／または免疫ブロットにより実証された。細胞を関連実験に対して上記したように再分析した。前記細胞を候補ヌクレオシドアナログをスクリーニングするために使用した。これらの細胞はインビボアッセイで各ＴＫにより与えられる活性を明らかに区別するので有効なスクリーニングが提供される。ＥＢＶ−ＴＫ−発現細胞に対して毒性であるが、（ＨＡＴ選択の存在または非存在下で）１４３Ｂ ＴＫ細胞または１４３Ｂ ヒトＴＫ１−発現細胞に対して毒性でない化合物がＥＢＶ−ＴＫ特異的細胞毒性活性を有する。候補化合物の活性は更にＨＳＶ１−ＴＫ及びＫＨＳＶ−ＴＫ発現１４３Ｂ ＴＫ−細胞と比較される。これにより、更なる治療用途を有し得る情報が得られる。
ＥＢＶ−ＴＫ（または、ＫＨＳＶ−ＴＫ）を発現する２９３ヒト胚腎細胞の作成
２９３細胞はＡＴＣＣから入手した。これらの細胞は剪断アドノウイルスＤＮＡで不死化したヒト胚腎細胞であり、アデノウイルスタンパク質Ｅ１Ａ及びＥ１Ｂを発現する。２９３細胞はヒトＴＫ１及びＴＫ２を発現する。２９３ ＥＢＶ−ＴＫ細胞を作成するために、２９３細胞にｐＣＭＶ ＥＢＶ−ＴＫ＋ｐＳＶ２ ｎｅｏまたはｐＣＭＶコントロール＋ｐＳＶ２ ｎｅｏを２０：１の比で同時トランスフェクトした（典型的には、ｐＣＭＶ ＥＢＶ−ＴＫ ２〜１０μｇ及びｐＳＶ２ｎｅｏ ０．１〜０．５μｇ）。導入した細胞をＧ４１８（１ｍｇ／ｍｌ）を用いて選択した。クローンは上記したようＥＢＶ−ＴＫを発現することが示された。
２９３ ＫＨＳＶ−ＴＫ細胞は、ベクターｐＣＭＶ ＫＨＳＶ−ＴＫとｐＳＶ２ ｎｅｏ（同時トランスフェクション）または（内在性ｎｅｏマーカーを含む）単一ベクターｐｃＤＮＡ３−ＫＨＳＶ−ＴＫを用いて同様に作成した。クローンはＲＮＡブロットハイブリダイゼーションによりＫＨＳＶ−ＴＫを発現することが示された。ポジティブコントロールもバルク集団を得るためにプールした。
２９３ ＥＢＶ−ＴＫ ｎｅｏ（クローン及びバルク）を、実施例２５及び２６に記載されている２つの独立アッセイにおいて候補ヌクレオシドアナログをスクリーニングするために使用した。
細胞毒性アッセイ（１４３Ｂ ＴＫ及び２９３トランスフェクタント）
２つの細胞系を使用して各ヌクレオシドの細胞毒性を調べる。得られた情報は使用した系に依存する。１４３Ｂ ＴＫ−細胞において、ＴＫによるリン酸化に依存する細胞毒性物質は容易に同定される。ＥＢＶ−ＴＫまたはｈＴＫ１のいずれかを発現する１４３Ｂ ＴＫ−細胞により、いずれの酵素が薬物を細胞毒性とし得るかどうかを評価できる。よって、非特異的細胞毒性を引き起こすであろうｈＴＫ１により活性化され得る薬物が容易に同定される。１つの欠点は、これらの細胞がヌクレオシドをＴＫサルベージ経路（ＥＢＶ−ＴＫまたはｈＴＫ１）に強制させるＨＡＴ培地において増殖することである。十分量のｄＴが細胞複製のために利用できないようにヌクレオシドがリン酸化についてｄＴを排除するならば偽陽性が生ずる恐れがある。この毒性は、ｄＴＴＰ生成に利用可能な合成経路及びサルベージ経路を有する細胞では低下する場合もある。このために、２９３系が開発された。前記細胞は内在性ｈＴＫ１を有し、ＥＢＶ−ＴＫはＧ４１８における選択により維持される。従って、正常なｈＴＫ１サルベージ経路は可動し、ヌクレオシドは細胞中を正常に流れると予想され得る。薬物を、ネオマイシン（Ｎｅｏ）発現プラスミド（Ｎｅｏコントロール）で形質転換した２９３細胞及びＥＢＶ−ＴＫをも発現する同一プラスミドをトランスフェクトした細胞とインキュベートする。ＥＢＶ−ＴＫにより選択的に活性化されるヌクレオシドは２９３ ＥＢＶ−ＴＫに対して細胞毒性を生じさせるが、Ｎｅｏコントロール細胞に対しては細胞毒性を生じさせてはならない。１４３Ｂ及び２９３細胞系では、毒性は細胞生存により評価される。細胞を薬物の存在下で５日間培養し、３日目に培地を薬物を含有する新鮮培地と交換する。次いで、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、４％ ホルムアルデヒド／１％ メタノールで固定し、細胞単層を可視化するために２０％ エタノール中１％ クリスタルバイオレッドで染色する。毒性を採点するために、“＋”は細胞が生存しなかったことを意味し、“−”は細胞が試験した薬物の最高濃度でもうまく増殖したことを示し、“±”は細胞は生きているが複製しないかまたは非常にゆっくりしか複製しなかったことを意味する（培地がピンクのままであり、このことは細胞代謝の減速を意味する）。死細胞を排除するためにトリプシンブルー染色剤の存在下で細胞を計数することにより直接定量した（盲検）。アッセイはすべて３回ずつ実施した。他の方法も利用可能であるが、トリプシンブルー排除は細胞死ではなく増殖抑制を効果的に示すアッセイ（例えば、ＭＴＴ）と比較して細胞死の優れた測定であることが分かっている。
コロニー形成アッセイ（２９３トランスフェクタント）
このアッセイは、ＧＣＶに関してＬ．Ｚ．Ｒｕｂｓａｍ，Ｂ．Ｌ．Ｄａｖｉｄｓｏｎ及びＤ．Ｓ．Ｓｈｅｗａｃｈ，“単純ヘルペスウイルスチミジンキゼ発現細胞におけるアシクロビル及び１−β−Ｄ−アラビノフラノシルチミンと比較したガンシクロビルによる高い細胞毒性：細胞死滅の新しい範例（Ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｗｉｔｈ ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｙｃｌｏｖｉｒ ａｎｄ １−ｂｅｔａ−Ｄ−ａｒａｂｉｎｏｆｕｒａｎｏｘｙｌｔｈｙｍｉｎｅ ｉｎ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｃｅｌｌｓ： ａ ｎｏｖｅｌ ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｋｉｌｌｉｎｇ）”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５８（１７）：３８７３−８２（１９９８）に記載されているように、細胞ＤＮＡに取り込んで致死的損傷を形成するために毒性を呈するヌクレオシドを同定するために設計されている。前記毒性は薬物に対する常時暴露に依存せず、ｌｏｇ相増殖中の薬物への暴露にのみ依存する。代謝経路での鎖停止または酵素の阻害のような各種メカニズムを介して作用するヌクレオシドはしばしば細胞増殖抑制性のみであり、細胞は薬物除去後正常増殖に戻ることがある。通常の細胞毒性スクリーニングとは異なり、前記ヌクレオシドはこのアッセイで高い細胞毒性を示さない。指数関数的に増殖する細胞を候補ヌクレオシドと２４時間インキュベートし、２４ウェルプレートにおいて５０生存細胞／ウェルで平板培養し、薬物の非存在下で７〜９日間インキュベートする。細胞を上記したように固定、染色し、コロニーを計数する。効果的に作用するヌクレオシドはコロニーの数を低下させる。コロニーの数は薬物に初期暴露後に生存し、複製し得る細胞の数の直接指標である。
本発明を好ましい実施態様を参照して説明してきた。本明細書の詳細記載から本発明の変更及び修飾は当業者に自明である。変更及び修飾はすべて本発明の範囲内に含まれると解される。
本発明の特定化合物の合成、特に５−Ｅ−（２−クロロビニル）ウラシルヌクレオシドの合成の非限定例である。 本発明の特定化合物の合成、特に５−ビニルウラシルヌクレオシドの合成の非限定例である。 本発明の特定化合物の合成、特に５−エチニルウラシルヌクレオシドの合成の非限定例である。 本発明の特定化合物の合成、特に非環式５−置換ウラシルヌクレオシドの合成の非限定例である。 本発明の特定化合物の合成、特に５−置換ウラシル４’−チオヌクレオシドの合成の非限定例である。 本発明の特定化合物の合成、特に５−置換ウラシル炭素環式ヌクレオシドの合成の非限定例である。 本発明の特定化合物の合成、特に５−置換ジオキソランヌクレオシドの合成の非限定例である。 本発明の特定化合物の合成、特に５−置換チエニルウラシルヌクレオシドの合成の非限定例である。 本発明の特定化合物の合成、特に５−チエニル置換ジオキソランヌクレオシドの合成の非限定例である。 本発明の特定化合物の合成、特に５−置換２’−デオキシウリジンヌクレオシドの合成の非限定例である。 特定化合物の精製ＧＳＴ ＥＢＶ−ＴＫ融合タンパク質との競合効果を示すグラフである。 ＥＢＶ−ＴＫを発現する１４３Ｂ ＴＫ−細胞と再導入したヒトＴＫ−１（ｈＴＫ−１）を発現する１４３Ｂ ＴＫ−細胞を比較する特定化合物の競合効果を示すグラフである。 ＥＢＶ−ＴＫ対内因性ｈＴＫ−１を発現する細胞におけるコロニー形成に対する５−ビニル−２’−デオキシウリジン（５−ビニル−ｄＵとも称する）の効果を示すグラフである。 ２０μＭ濃度でのＥＢＶ−ＴＫ、ｈＴＫ−１またはＴＫ欠乏（ＴＫ−）を発現する１４３Ｂ細胞に対する特定化合物の細胞毒性を示すグラフである。 ２９３ ＥＢＶ−ＴＫ細胞対２９３ Ｎｅｏ細胞に対する特定化合物の細胞毒性効果を直接示す。 ２９３ Ｎｅｏ細胞と比較したＥＢＶ−ＴＫをトランスフェクトした細胞（２９３ ＥＢＶ−ＴＫ細胞）に対する５−ビニル−２’−デオキシウリジン（５−ビニル−ｄＵ）の用量依存抑制を示す。 ２０μＭで５日治療後の特定化合物の１４３Ｂ対１４３ ＥＢＶ−ＴＫ細胞に対する細胞毒性を示すグラフである。 精製ＧＳＴ−ＥＢＶ−ＴＫ融合タンパク質を用いる特定化合物と放射標識チミジン間の競合アッセイを示すグラフである。

Claims (81)

  1. 有効量の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
    Figure 2005528334
     ［式中、
    ｉ）ＸはＯ、Ｓ、ＮＲ４、ＣＨ２、ＣＨＦまたはＣＦ２であり、
    ｉｉ）Ｒ１は水素、ハロゲン（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，Ｆ）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、ハロアルケニル、アルキニル、ハロアルキニル、シクロアルキル、ＣＮ、ＣＦ３、Ｎ３、ＮＯ２、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール、アシル、またはＣＯＲ５（ここで、Ｒ５はＨ、ＯＨ、ＳＨ、アルキル、アミノアルキル、アルコキシまたはチオアルキルから選択される）から選択され、
    ｉｉｉ）Ｒ２及びＲ２’は独立してＨ；アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリールで置換されたカルボニル；フェニル基が場合により１つ以上の置換基で置換されていてもよいベンジル；ホスフェート、ホスフェートエステルまたはスルホネートエステル；リン脂質を含めた脂質；アミノ酸；ペプチド；コレステロール；またはインビボで投与したときにＲ２及びＲ２’の一方または両方がＨである化合物を生じ得る他の医薬的に許容され得る離脱基であり、
    ｉｖ）Ｒ３はＨ、ＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｃｒ，Ｉ）、保護ヒドロキシ基またはＣＨ２ＯＲ４から選択され、
    ｖ）Ｒ４は独立してＨ、アシル、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはシクロアルキルであり、
    ｖｉ）ＹはＨ、ＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ）、Ｎ３、ＣＮまたはＯＲ２’から選択され、
    ｖｉｉ）ＺはＯまたはＳである］
    を有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを投与することを含むエプスタイン−バーウイルスまたはＫＨＳＶに感染している宿主の治療方法。
  2. 化合物が２’−デオキシ−５−ビニルウリジンである請求項１に記載の方法。
  3. 化合物が５−ビニルウリジンである請求項１に記載の方法。
  4. 化合物が２’−デオキシ−５−ヨードウリジンである請求項１に記載の方法。
  5. 化合物が２’−デオキシ−５−（ヒドロキシメチル）ウリジンである請求項１に記載の方法。
  6. 化合物が５−ブチル−２’−デオキシウリジンである請求項１に記載の方法。
  7. 化合物が５−Ｅ−（２−カルボキシビニル）−２’−デオキシウリジンである請求項１に記載の方法。
  8. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項１に記載の方法。
  9. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモ−２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項１に記載の方法。
  10. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−チエニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項１に記載の方法。
  11. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモチエン−２−イル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項１に記載の方法。
  12. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（３−ヒドロキシプロペニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項１に記載の方法。
  13. 宿主が急性単核細胞症を呈している請求項１に記載の方法。
  14. 宿主が口腔毛状白斑を呈している請求項１に記載の方法。
  15. 投与される化合物がβ−Ｌ−異性体であり、少なくとも９５％の純度である請求項１に記載の方法。
  16. 投与される化合物がβ−Ｄ−異性体であり、少なくとも９５％の純度である請求項１に記載の方法。
  17. 宿主がヒトである請求項１に記載の方法。
  18. 有効量の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
    Figure 2005528334
     ［式中、
    ｉ）ＸはＯ、Ｓ、ＮＲ４、ＣＨ２、ＣＨＦまたはＣＦ２であり、
    ｉｉ）Ｒ１は水素、ハロゲン（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，Ｆ）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、ハロアルケニル、アルキニル、ハロアルキニル、シクロアルキル、ＣＮ、ＣＦ３、Ｎ３、ＮＯ２、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール、アシル、またはＣＯＲ５（ここで、Ｒ５はＨ、ＯＨ、ＳＨ、アルキル、アミノアルキル、アルコキシまたはチオアルキルから選択される）から選択され、
    ｉｉｉ）Ｒ２及びＲ２’は独立してＨ；アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリールで置換されたカルボニル；フェニル基が場合により１つ以上の置換基で置換されていてもよいベンジル；ホスフェート、ホスフェートエステル、またはメタンスルホニルのようなアルキルまたはアリールアルキルスルホニルを含めたスルホネートエステル；リン脂質を含めた脂質；アミノ酸；ペプチド；コレステロール；またはインビボで投与したときにＲ２及びＲ２’の一方または両方がＨである化合物を生じ得る他の医薬的に許容され得る離脱基であり、
    ｉｖ）Ｒ３はＨ、ＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｃｒ，Ｉ）、保護ヒドロキシ基またはＣＨ２ＯＲ４から選択され、
    ｖ）Ｒ４は独立してＨ、アシル、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはシクロアルキルであり、
    ｖｉ）ＹはＨ、ＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ）、Ｎ３、ＣＮまたはＯＲ２’から選択され、
    ｖｉｉ）ＺはＯまたはＳである］
    を有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを投与することを含むエプスタイン−バーウイルスまたはＫＨＳＶゲノムを有している細胞の異常細胞増殖または細胞機能不全を有している宿主の治療方法。
  19. 化合物が２’−デオキシ−５−ビニルウリジンである請求項１８に記載の方法。
  20. 化合物が５−ビニルウリジンである請求項１８に記載の方法。
  21. 化合物が２’−デオキシ−５−ヨードウリジンである請求項１８に記載の方法。
  22. 化合物が２’−デオキシ−５−（ヒドロキシメチル）ウリジンである請求項１８に記載の方法。
  23. 化合物が５−ブチル−２’−デオキシウリジンである請求項１８に記載の方法。
  24. 化合物が５−Ｅ−（２−カルボキシビニル）−２’−デオキシウリジンである請求項１８に記載の方法。
  25. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項１８に記載の方法。
  26. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモ−２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項１８に記載の方法。
  27. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−チエニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項１８に記載の方法。
  28. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモチエン−２−イル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項１８に記載の方法。
  29. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（３−ヒドロキシプロペニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項１８に記載の方法。
  30. 宿主が鼻咽腔癌を呈している請求項１８に記載の方法。
  31. 宿主がＢ細胞リンパ腫を呈している請求項１８に記載の方法。
  32. 宿主がＢ細胞リンパ増殖性疾患を呈している請求項１８に記載の方法。
  33. 宿主がホジキン病を呈している請求項１８に記載の方法。
  34. 宿主がＴリンパ腫を呈している請求項１８に記載の方法。
  35. 宿主がＮＫ／単球様／樹状細胞悪性疾患を呈している請求項１８に記載の方法。
  36. 宿主が散発性上皮癌を呈している請求項１８に記載の方法。
  37. 宿主が平滑筋肉腫を呈している請求項１８に記載の方法。
  38. 宿主が多中心性平滑筋肉腫を呈している請求項１８に記載の方法。
  39. 宿主がカポジ肉腫を呈している請求項１８に記載の方法。
  40. 宿主が多中心性キャッスルマン病を呈している請求項１８に記載の方法。
  41. 宿主がゲルマニウム栄養性リンパ腫を呈している請求項１８に記載の方法。
  42. 投与される化合物がβ−Ｌ−異性体であり、少なくとも９５％の純度である請求項１８に記載の方法。
  43. 投与される化合物がβ−Ｄ−異性体であり、少なくとも９５％の純度である請求項１８に記載の方法。
  44. 宿主がヒトである請求項１８に記載の方法。
  45. （ｉ）酵素がＥＶＢもＫＨＳＶゲノムも有していない細胞において発現し得るように前記細胞または周辺細胞にＥＶＢ−ＴＫまたはＫＨＳ−ＴＫ遺伝子を投与した後、
    （ｉｉ）有効量の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
    Figure 2005528334
     ［式中、
    ｉ）ＸはＯ、Ｓ、ＮＲ４、ＣＨ２、ＣＨＦまたはＣＦ２であり、
    ｉｉ）Ｒ１は水素、ハロゲン（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，Ｆ）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、ハロアルケニル、アルキニル、ハロアルキニル、シクロアルキル、ＣＮ、ＣＦ３、Ｎ３、ＮＯ２、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール、アシル、またはＣＯＲ５（ここで、Ｒ５はＨ、ＯＨ、ＳＨ、アルキル、アミノアルキル、アルコキシまたはチオアルキルから選択される）から選択され、
    ｉｉｉ）Ｒ２及びＲ２’は独立してＨ；アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリールで置換されたカルボニル；フェニル基が場合により１つ以上の置換基で置換されていてもよいベンジル；ホスフェート、ホスフェートエステル、またはメタンスルホニルのようなアルキルまたはアリールアルキルスルホニルを含めたスルホネートエステル；リン脂質を含めた脂質；アミノ酸；ペプチド；コレステロール；またはインビボで投与したときにＲ２及びＲ２’の一方または両方がＨである化合物を生じ得る他の医薬的に許容され得る離脱基であり、
    ｉｖ）Ｒ３はＨ、ＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｃｒ，Ｉ）、保護ヒドロキシ基またはＣＨ２ＯＲ４から選択され、
    ｖ）Ｒ４は独立してＨ、アシル、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはシクロアルキルであり、
    ｖｉ）ＹはＨ、ＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ）、Ｎ３、ＣＮまたはＯＲ２’から選択され、
    ｖｉｉ）ＺはＯまたはＳである］
    を有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを投与することを含む細胞の異常細胞増殖または細胞機能不全を有している宿主の治療方法。
  46. 化合物が２’−デオキシ−５−ビニルウリジンである請求項４５に記載の方法。
  47. 化合物が５−ビニルウリジンである請求項４５に記載の方法。
  48. 化合物が２’−デオキシ−５−ヨードウリジンである請求項４５に記載の方法。
  49. 化合物が２’−デオキシ−５−（ヒドロキシメチル）ウリジンである請求項４５に記載の方法。
  50. 化合物が５−ブチル−２’−デオキシウリジンである請求項４５に記載の方法。
  51. 化合物が５−Ｅ−（２−カルボキシビニル）−２’−デオキシウリジンである請求項４５に記載の方法。
  52. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項４５に記載の方法。
  53. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモ−２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項４５に記載の方法。
  54. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−チエニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項４５に記載の方法。
  55. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモチエン−２−イル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項４５に記載の方法。
  56. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（３−ヒドロキシプロペニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項４５に記載の方法。
  57. 投与される化合物がβ−Ｌ−異性体であり、少なくとも９５％の純度である請求項４５に記載の方法。
  58. 投与される化合物がβ−Ｄ−異性体であり、少なくとも９５％の純度である請求項４５に記載の方法。
  59. 宿主がヒトである請求項４５に記載の方法。
  60. エプスタイン−バーウイルスまたはＫＨＳＶを有している細胞を処理するのに有効な量の式：
    Figure 2005528334
     ［式中、
    ｉ）ＸはＯ、Ｓ、ＮＲ４、ＣＨ２、ＣＨＦまたはＣＦ２であり、
    ｉｉ）Ｒ１は水素、ハロゲン（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，Ｆ）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、ハロアルケニル、アルキニル、ハロアルキニル、シクロアルキル、ＣＮ、ＣＦ３、Ｎ３、ＮＯ２、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール、アシル、またはＣＯＲ５（ここで、Ｒ５はＨ、ＯＨ、ＳＨ、アルキル、アミノアルキル、アルコキシまたはチオアルキルから選択される）から選択され、
    ｉｉｉ）Ｒ２及びＲ２’は独立してＨ；アルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリールで置換されたカルボニル；フェニル基が場合により１つ以上の置換基で置換されていてもよいベンジル；ホスフェート、ホスフェートエステル、またはメタンスルホニルのようなアルキルまたはアリールアルキルスルホニルを含めたスルホネートエステル；リン脂質を含めた脂質；アミノ酸；ペプチド；コレステロール；またはインビボで投与したときにＲ２及びＲ２’の一方または両方がＨである化合物を生じ得る他の医薬的に許容され得る離脱基であり、
    ｉｖ）Ｒ３はＨ、ＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｃｒ，Ｉ）、保護ヒドロキシ基またはＣＨ２ＯＲ４から選択され、
    ｖ）Ｒ４は独立してＨ、アシル、アルキル、アルケニル、アルキニルまたはシクロアルキルであり、
    ｖｉ）ＹはＨ、ＯＨ、ハロゲン（Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ）、Ｎ３、ＣＮまたはＯＲ２’から選択され、
    ｖｉｉ）ＺはＯまたはＳである］
    を有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグを含む医薬組成物。
  61. 化合物が２’−デオキシ−５−ビニルウリジンである請求項６０に記載の医薬組成物。
  62. 化合物が５−ビニルウリジンである請求項６０に記載の医薬組成物。
  63. 化合物が２’−デオキシ−５−ヨードウリジンである請求項６０に記載の医薬組成物。
  64. 化合物が２’−デオキシ−５−（ヒドロキシメチル）ウリジンである請求項６０に記載の医薬組成物。
  65. 化合物が５−ブチル−２’−デオキシウリジンである請求項６０に記載の医薬組成物。
  66. 化合物が５−Ｅ−（２−カルボキシビニル）−２’−デオキシウリジンである請求項６０に記載の医薬組成物。
  67. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項６０に記載の医薬組成物。
  68. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモ−２−フラニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項６０に記載の医薬組成物。
  69. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（２−チエニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項６０に記載の医薬組成物。
  70. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（５−ブロモチエン−２−イル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項６０に記載の医薬組成物。
  71. 化合物が（２Ｓ，４Ｓ）−５−（３−ヒドロキシプロペニル）−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］ウラシルである請求項６０に記載の医薬組成物。
  72. 宿主が急性単球細胞症を呈している請求項３０に記載の医薬組成物。
  73. 投与される化合物がβ−Ｌ−異性体であり、少なくとも９５％の純度である請求項５２に記載の医薬組成物。
  74. 投与される化合物がβ−Ｄ−異性体であり、少なくとも９５％の純度である請求項５２に記載の医薬組成物。
  75. ＥＢＶ−ＴＫまたはＫＨＳＶ−ＴＫ遺伝子がトランスフェクトされている不死化ヒト胚腎細胞。
  76. ２９３細胞である請求項７５に記載の細胞。
  77. ＥＢＶ−ＴＫがトランスフェクトされている請求項７５に記載の細胞。
  78. ＫＨＳＶ−ＴＫがトランスフェクトされている請求項７５に記載の細胞。
  79. （ｉ）ＥＢＶ−ＴＫまたはＫＨＳＶ−ＴＫ遺伝子を有し、発現する細胞を異常細胞に対してバイスタンダー効果を与え得る位置に投与し、その後（ｉｉ）有効量の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）を有する化合物を投与することを含むＥＢＶもＫＨＳＶゲノムも有していない細胞の異常細胞増殖または細胞機能不全を有している宿主の治療方法。
  80. エプスタイン−バーウイルスまたはＫＨＳＶに感染している宿主の治療用薬剤の製造における一般的（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
    Figure 2005528334
     （式中、変数は上に定義した通りである）
    を有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグの使用。
  81. エプスタイン−バーウイルスまたはＫＨＳＶゲノムを有している細胞の異常細胞増殖または細胞機能不全を有している宿主の治療用薬剤の製造における一般的（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）：
    Figure 2005528334
     （式中、変数は上に定義した通りである）
    を有する化合物、またはその医薬的に許容され得る塩またはプロドラッグの使用。
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