JP2005515151A - 結晶形成装置およびその使用方法 - Google Patents

Abstract

プレート（１００）と、フィルム（２００）とを含む結晶形成装置（３００）と、その装置（３００）の使用方法。プレート（１００）は、スクリーニング溶液（５０４）を保持するようにされた部位を有する。フィルム（２００）は、プレートに隣接した位置にある。フィルム（２００）は、部位を密封し、スクリーニング溶液（５０４）と沈殿溶液との間にエアギャップがある部位内に沈殿溶液（５０６）を含むようにされる。好適な実施形態において、フィルム（２００）は透過性である。別の好適な実施形態において、プレート（１００）は、格子構造によって支持された第２の透過性フィルム（５２８）を含み、沈殿溶液（５０６）は、２つのフィルム間に挟まれる。

Description

関連出願の表示

本願は、２００２年１月１８日に出願された米国仮特許出願第６０／３４９，２５２号の利益を享受し、その内容全体は、本願明細書に参照により援用されるものとする。

本発明は、一般的に、結晶化チャンバに関し、複数の結晶形成実験を行うための装置および方法に関する。

最小限の設置労力と少量の試料溶液とで、研究者が複数の結晶形成実験を行うことができる高速かつ高信頼でコスト効率が良い結晶化装置が従来技術において依然として必要とされている。タンパク質が希少であり非常に高価なものであるタンパク質の結晶化では、小さな試料サイズが特に重要であり、１種類のタンパク質が、例えば、２千種類の異なる結晶成長溶液とともに用いられて、どの溶液が結晶成長を促すかを確かめる。マルチウェル型のマイクロプレートを使用する結晶化装置（例えば、本願明細書に参照により援用されたものとする、Ｋｕｓｈｎｅｒ等の米国特許第５，２２１，４１０号を参照されたい）の特定の状況において、高速かつ高信頼性で、容易に自動化されるが、手動方法でも使用可能な結晶化装置が依然として必要とされている。さらに詳しく言えば、少量の試料溶液を投与して、非常に小さな結晶の存在を検出するロボットシステムに適合可能な装置が必要とされている。

典型的な実施形態によれば、本発明は、試料溶液を配置するために上部にフィルムを設けた結晶化装置およびその装置の使用方法である。この装置は、フィルムの他に、相補的な溶液を配置可能であり、フィルムとともに、複数の個々の結晶化環境または部位を形成する他の構成部品を含むことができる。この装置および方法は、例えば、ハンギングドロップ、シッティングドロップ、またはサンドイッチドロップ蒸気拡散結晶化を実行するように適応可能である。サンドイッチドロップは、本願明細書で使用する場合、上下面に接触するドロップをさす。

本発明の一実施形態により、プレートと、フィルムとを含む結晶形成装置が提供される。プレートは、スクリーニング溶液を保持するように適応された部位を有する。フィルムは、プレートに隣接した位置にある。フィルムは、部位を密封し、スクリーニング溶液と沈殿溶液との間にエアギャップがある部位内に沈殿溶液を含むように適応される。

この実施形態の一つの態様において、プレートは、マイクロプレートであり、部位は、マイクロプレートのウェルである。ウェルに、スクリーニング溶液試料が配置され、沈殿溶液試料が、フィルムによって保持され、スクリーニング溶液試料に懸濁され得る。

この実施形態の別の態様において、プレートは、第１の支持構造によって支持された第２のフィルムである。第１のフィルムは、第２の支持構造によって支持される。第２の支持構造は、第２のフィルムの上部に設けられる。第１のフィルムは、第２のフィルムの反対側の第２の支持構造の側に設けられる。第２の支持構造および第１のフィルムは、部位を密封するように適応される。第２の支持構造は、例えば、第１の貫通孔と、第２の貫通孔と、第１の貫通孔を第２の貫通孔に接続する通路とを有する格子である。

本発明の別の実施形態により、スクリーニング溶液をマイクロプレートのウェル内に配置することと、沈殿溶液をフィルムに配置することと、沈殿溶液がスクリーニング溶液に懸濁されるようにウェル上にフィルムを配置することとを含む結晶形成方法が提供される。

本発明の別の実施形態によれば、スクリーニング溶液を第１のフィルムに配置することと、沈殿溶液をスクリーニング溶液に隣接した第１のフィルムに配置することと、第１のフィルムと第２のフィルムとの間にある部位内に、スクリーニング溶液と沈殿溶液とを密封することと、部位内で、スクリーニング溶液と沈殿溶液との間にエアギャップを与えることとを含む結晶形成方法が提供される。

本発明の結晶化装置の一実施形態は、グリース処理されたリムを有するマイクロプレートと、フレームに接合されたフィルムとを含む。フレームは、マイクロプレートの上部に載置されることによって、フィルムは、マイクロプレートのグリース処理されたリムと接触して、結晶が形成されるであろう個々の独立した環境を作り出す。さらなる実施形態において、この装置は、フレーム、フィルム、およびマイクロプレートを保護し、１つの装置を別の装置の上部に積み重ねることができるようするためのフレーム上に配置された蓋を含む。

図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃは、本発明の一実施形態によるマイクロプレート１００を示す。図示するように、マイクロプレート１００は、各々がグリース層１０４で被覆されたリム１０２を有する。特定の実施形態において、マイクロプレート１００は、グリース処理されたリムを有するポリスチレン製の９６ウェルマイクロプレートである。グリース１０４は、フィルムとリム１０２との間のギャップを密封するのに適した任意の材料である。グリース１０４は、例えば、接着特性を備えた可鍛性の密封材であってよい。グリース１０４は、接着特性を備えたガスケットであってもよい。別の実施形態において、フィルムとリム１０２の材料が互いに接触して、十分な密封性を与えることができれば、グリース１０４は不要である。

マイクロプレート１００は、フレームを位置合わせし保持するための参照ピン１０６をさらに有する。この例では、マイクロプレート１００は、４本のピン１０６を有するが、マイクロプレート１００が、フレームを適切に位置合わせし保持するのに必要なだけの多数のピン（少なくとも２本であるが、３本、４本、またはそれ以上であってもよい）を有してよいことは言うまでもない。さらに、マイクロプレート１００は、接着剤、締まり嵌め、または構成部品または特徴の相互固定や相互配置などの他の位置合わせ／保持手段を用いてもよい。

図２は、本発明の一実施形態による、フレーム２０２に接合されたフィルム２００を示す。特定の実施形態において、フィルム２００は、Ｔｅｆｌｏｎ^ＴＭ（テフロン^ＴＭ）、例えば、０．００１”Ｔｅｆｌｏｎ^ＴＭである。図２に示すように、フィルム２００は、標識付けされた位置決めリング２０４を有することが好ましく、これらのリングは、例えば、フィルム２００の上部にインクでシルクスクリーン印刷される。これらの位置決めリング２０４は、フィルム２００とフレーム２０２が載置されることになるマイクロプレートのウェル構成に対応し、フィルム２００への沈殿溶液の配置を誘導するのに役立つ。標識付け（例えば、図２に示す例では、数字と文字）は、各部位の特定性をモニタする助けとなる。

本願明細書で使用する場合、沈殿溶液は、結晶化されることになる化合物の溶液をさし、スクリーニング溶液は、結晶化を促すために化合物を可溶化するか、または可溶化しない溶液をさす。例えば、タンパク質を可溶化する溶液を（候補となり得る多数のスクリーニング溶液の中から）特定することを目的とするタンパク質の結晶化スクリーニングにおいて、比較的濃縮されたタンパク質溶液が、典型的に、候補となり得るスクリーニング溶液の各々と５０：５０の割合で混合される。この５０：５０溶液は、沈殿溶液であり、対応する１００％スクリーニング溶液とともに部位内に配置され、その部位で、蒸気拡散が始まる。

位置決めリング２０４は、複数の結晶化部位を与える。本願明細書において、「テスト部位」または「部位」という用語は、沈殿溶液が配置されたフィルム上の輪郭描写されたスポットをさすために用いられる。部位の位置は、例えば、フィルム２００上のパターン２０６によって画定される。部位の位置を特定するパターン２０６は、フィルム上に刻印されたインクによって形成されてよく、プラスチックまたはシリコーンのパターン化されたフィルムであってよく、または、フィルムへのシルクスクリーン印刷または別の方法で塗布されたパターン化された疎水性のコーティングによって画定されてよい。コーティングは、テスト部位の位置を単に画定するものであってよく、または、沈殿流体を空間的に制限する疎水性のバリアとして機能してもよい。

フレーム２０２は、フィルム２００を平坦に維持できるだけの剛性を備えるものであり、構成部品の組み立て時、フィルム２００が、確実にマイクロプレート１００の各ウェルを十分に被覆するようにする（以下にさらに詳細に記載）。フィルム２００を平坦に維持しながら、同時に、フレーム２０２により、フィルム２００は、フィルム２００の面に対して、概して垂直な（直角を成す）方向に、またはそれに対してある一定の角度を成して、ある程度の移動（例えば、緩み、可撓性、または弾力性）が可能である。フレーム２０２は、参照孔２０８を含み、マイクロプレート１００の参照ピン１０６と係合させて、組み立て中に構成部品の位置合わせを行う。フレーム２０２は、プラスチック、ステンレス鋼、またはアルミニウムなどの任意の成形可能な材料であり得る。特定の実施形態において、フレーム２０２は、陽極処理されたアルミニウムフレームである。フィルム２００は、膠剤、接着剤、ヒートシール、超音波シール、または機械的手段を含む任意の適切な固定手段によって、フレーム２０２に付着され得る。

図３Ａは、本発明の一実施形態による組み立て後の複数部位結晶化装置を示す。図示するように、図１Ａのマイクロプレート１００の上部に図２のフレーム２０２が載置されて、複数部位結晶化装置３００が得られる。

この実施形態において、装置３００は、９６個のウェル３０２と、マイクロプレート１００の周囲にあるリム３０４と、４本の参照ピン１０６と、フレーム２０２に取り囲まれた重ね合わせたフィルム２００とを有するマイクロプレート１００を含む。図３Ａには示していないが、装置３００は、テスト部位を保護し、別のマイクロプレートを積み重ねるために上部に表面を与えるように、フレーム２０２上を覆う蓋を含んでもよい。

図３Ｂは、フレーム２０２とフィルム２００がマイクロプレート１００の上部にある状態の、線３Ｂ−３Ｂに沿って切り取った図３Ａの実施形態の断面図であり、任意に、フレーム２０２は、感圧接着剤層３０６でマイクロプレート１００に固定される。図３Ａは、参照ピン１０６がマイクロプレート１００とフレーム付きフィルム２００とをどのように位置合わせするかを示す。図３Ａおよび図３Ｂは、円筒状のウェルを有するものとしてマイクロプレート１００を示しているが、当業者であれば認識するように、ウェルは、任意の数の形状であってよく、例えば、ウェルは、長円形や立方体形で角に丸みを付けたものであってよい。

図３Ａにおいて、マイクロプレート１００のリム３０４が、フレーム２０２の下側にくるように、マイクロプレート１００上に、フレーム２０２が、付着されたフィルム２００とともに配置される。マイクロプレート１００は、スクリーニング溶液と生物学的または化学的に活性でなく、水溶性でない任意の剛性材料から製造されてよく、例えば、ガラス、サファイア、アクリル、ポリスチレン、またはポリカーボネートである。マイクロプレート１００は、複数のウェル３０２（この例では９６個）を有する。ウェルの位置と間隔は、標準的な間隔、例えば、９６ウェルマイクロプレートの場合の標準的な間隔（例えば、中心から中心が９ｍｍ）であることが好ましく、フレーム２０２の外形寸法は、標準的なマイクロプレートの寸法と同一のものであることが好ましく（必須ではない）、そうすることで、フレーム２０２とマイクロプレート１００とを取り扱うために、自動機器を使用することができる。

本発明の方法の一実施形態によれば、図１Ａから図３Ｂに示す例示的な結晶化装置は、以下のように使用される。まず、マイクロプレート１００のウェルに、適切な量の結晶成長（スクリーニング）溶液を充填する。特定の化合物（例えば、特定のタンパク質）に対して異なる結晶成長溶液の効能をテストするために、マイクロプレート１００の各ウェルには、異なる結晶成長（スクリーニング）溶液を充填することが好ましい。

次いで、フィルム２００を裏返しにして、位置決めリング２０４の中心に沈殿溶液を分注する。手持ち式のピペット、自動可変量ピペット、または自動分注機を用いて、フィルム２００上に適切にドロップを配置することができる。上記に参照により援用したＫｕｓｈｎｅｒ特許には、結晶成長手順のいくつかの例がある。

次に、付着されたフィルム２００とともにフレーム２０２を逆さまにして、マイクロプレート１００の四角の参照ピン１０６に押し付ける。フレーム２０２をマイクロプレート１００に押し付けた状態で、各部位にあるリング１０２が、フィルム２００と完全に接触することが好ましい。何らかの理由で、リング１０２がフィルム２００と完全に接触しなければ、リング１０２が完全に接触するまでフィルム２００を軽く押し付ける。フレーム２０２は、フィルム２００を比較的平坦に維持するが、フィルム２００は、フィルム２００が移動してリング１０２と良好に接触できる多少の「撓み」（例えば、ある量の弾性、可撓性、または緩み）を備えたままであることで、良好な密封性が得られる。この密封性に必要であれば、上述したように、フィルム２００とリング２０２との間に、グリース１０４を配置することができる。

フレーム２０２を逆さまにして、マイクロプレート１００上に載置し、フィルム２００がマイクロプレート１００のウェルを密封すると、蒸気拡散プロセスが始まり得る。この構成において、各部位で、沈殿溶液（例えば、５０％タンパク質溶液および関連する部位の５０％スクリーニング溶液）は、マイクロプレート１００のウェルの底部にある結晶成長溶液（例えば、１００％スクリーニング溶液）にフィルム２００から懸濁される。エアギャップが２つの溶液を分離する。蒸気拡散中、蒸気は、沈殿溶液からエアギャップを通って結晶成長（スクリーニング）溶液に進行する。このような蒸気拡散プロセスで、沈殿溶液に化合物を濃縮させる。効能のある結晶成長溶液では、結晶化点に達し、結晶の形成が始まる。

本発明のさらなる実施形態は、マイクロプレート上にフレームが載置される前、グリースがリムからこすれ落ちないように保護するために、マイクロプレートを被覆する蓋を含む。図４Ａ、図４Ｂ、および図４Ｃは、図１Ａから図１Ｃに示すマイクロプレート１００を被覆する例示的な蓋４００を示す。蓋４００は、角に４つの参照開口４０２を有し、それらの開口が、マイクロプレート１００の四角の参照ピン１０６と適合する。したがって、ユーザは、マイクロプレート１００を使用する前に蓋４００をマイクロプレート１００上に維持できることにより、テスト部位、リング１０２、グリース層１０４、および部位にある任意の溶液を保護する（図１Ｂおよび図１Ｃを参照）。また、蓋４００は、溶液の追加後と、マイクロプレート１００上にフレーム２００を配置した後、テスト部位を保護する。また、蓋４００により、追加の装置を順に積み重ねることができるプラットフォームが得られ、これは、特に、自動化されたロボット式の応用に有益である。

本発明のさらなる実施形態において、沈殿溶液のドロップがフィルム２００上に配置されるとき、ドロップが、水平になって細長い形状を形成するのではなく、丸い形状を維持するような半疎水性材料でフィルム２００が被覆される。半疎水性材料は、フィルム２００が逆さまにされるとドロップが落ちるような疎水性のものではない。より正確に言えば、半疎水性材料は、フィルム２００を逆さまにしたとき、ドロップをフィルム２００に付着させた状態を維持でき、ドロップの丸い形状を保つようにする。この目的に合わせて適切な半疎水性材料の一例は、オハイオ州クリーブランドのＢｌｕｅ Ｃｏｒａｌ−Ｓｌｉｃｋ ５０，Ｌｔｄ．製のＲａｉｎ−Ｘ^ＴＭ Ｏｒｉｇｉｎａｌ Ｇｌａｓｓ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔなどの透明なポリマー材料である。

本発明のさらなる実施形態において、フィルム２００の一部分が、疎水性材料で被覆または部分的に被覆され（例えば、リングパターンなどのパターンで）、沈殿溶液を配置し保持するための領域をそこに画定する。例えば、図２を参照すると、位置決めリング２０４内の領域は、中央にある丸いスポットを被覆しないまま、疎水性材料で部分的に被覆されている。中央にあるスポットは、元々親水性であるか、または、親水性材料でコーティングすることによって親水性の状態にされる。親水性領域の直径は、所与の量の沈殿溶液に対して理想的なドロップ形状を生成するように変更される。例えば、１ｍｍのスポットは、０．５〜１．０マイクロリットルのドロップを保持するのに対して、２ｍｍ直径のスポットは、４〜６マイクロリットルのドロップを保持する。このような疎水性／親水性の構成により、沈殿溶液のドロップが、位置決めリング２０４内において自動調心し、フィルム２００上に配置されるときに理想的な形状になる。位置決めリング２０４は、リング内のより小さな親水性領域でドロップを正確に位置決めして、個々の部位でドロップを配置するさいのガイドとして作用する。

図３Ｂは、この実施形態の一例を示す。図示するように、フィルム２００の下面３０８は、パターン化された疎水性コーティング３１０で部分的に被覆される。疎水性コーティング３１０は、マイクロプレート１００のウェル３０２の位置に対応する多数のコーティングされていないテスト部位３１２を生成するようにパターン化される。沈殿溶液のドロップが、コーティングされていない部位３１２で表面３０８に分注されているとき（フィルム２００が逆さまにされているとき）、ドロップは、テスト部位の周囲の外側への移動および相互接触ができず、最適な形状にされる。

本発明のさらなる実施形態において、フィルム２００の一部分が、沈殿溶液を配置し保持するための領域を画定する材料層で被覆または部分的に被覆される（例えば、パターン化される）。さらに、材料層は、沈殿溶液を含む物理的バリアとして作用する。例えば、図２を参照すると、位置決めリング２０４の外側の領域、または任意の所望の領域が、測定可能な厚みの膜またはコーティングで被覆されてよい。位置決めリング２０４内の領域は、親水性であるか、または、親水性材料や沈殿溶液に対して高親和性の材料で被覆、部分的に被覆、またはコーティングされてよい。位置決めリング内の領域が透明であるか、透明材料でコーティング、部分的に被覆、または完全に被覆されていることが好ましい。このような疎水性／親水性または擬似ウェル／親水性／高親和性の構成により、沈殿溶液のドロップは、フィルム２００上に配置されるとき、位置決めリング２０４内に自動調心する。

本発明のさらなる実施形態において、スクリーニング溶液および各部位で結晶化される化合物を有する溶液を配置し、構成部品を組み立て、培養し、（可能性として）結晶を成長させた後、フィルム２００を、任意の部位の位置で切り取ることができる。次いで、フィルムのこの切り取り部分は、付着したサンプルとともに、残りのサンプルに害を与えないようにしながら、より厳密に検査するために除去することができる。さらに、この検査の後、フィルムとサンプルは、除去した部位に戻されて、結晶形成プロセスを継続することができる。

本発明のさらなる実施形態において、蓋４００およびマイクロプレート１００は、良好〜優良な光学的品質を備えた材料、例えば、ポリスチレン、ＴＰＸ、アクリル、および他のプラスチック、およびガラス、サファイア、および石英などから作られる。

本発明のさらなる実施形態において、１つまたは複数のフレームが、マイクロプレートまたは下側プレート様の構成部品に取り付けることができ、例えば、プレートのＸ次元またはＹ次元のいずれかにストリップ状に配向可能なフレームにフィルムが接合されて、装置を部分的にまたは時間差を設けて使用できるようにする。ストリップレイアウトのこのような複数フレーム構成の場合、フレームは、ウェルの底部でフィルムをフレームに接合させた、成形されたウェルを有する射出成形部品として作製されてよい。上述したグリースを使用する代わりに、ウェルは、Ｏリングまたは機能的に同等のものを用いて、下側プレートに密封されてよい。

本発明のさらなる実施形態において、マイクロプレート１００を、フィルムを接合させた別のフレームと取り替えて、複数の部位に溶液を保持するプレート様の構成部品を作り出す。部位は、例えば、疎水性材料、疎水性インク、グリースリング、または、フィルムに適用可能な他の化学的または物理的構造体によって画定することができる。この場合、フィルム２００とリム１０２との間のギャップを密封するグリース１０４の代わりに、グリース１０４、または何らかの機能的に同等のものが、２つのフィルム間のギャップを密封するであろう。

本発明のさらなる実施形態において、フレーム２０２には、例えば、図２に示す中空の中心部がない。その代わりに、フレーム２０２は、相互接続部分と空の空間を用いたパターンの任意の多数の組み合わせで、相互接続格子と、格子間にある空間とを有する。テスト部位は、空間内にある。図５Ａ〜図５Ｄは、本発明のこの実施形態の一例を示し、溶液は、格子模様のボトムプレートによって支持された第１のフィルムと、格子模様のトッププレートによって支持された第２のフィルムとの間に保持される。

図５Ａは、本発明のこの実施形態による装置５００の一部分の平面図を示す。この平面図は、この平面図は、透明なトップフィルム５２８を介して見下ろしたものであり、透明なトップフィルム５２８は、トッププレート５２６によって下方から支持され、結合剤５３２でトッププレート５２６に接合される（以下に記載する図５Ｃおよび図５Ｄを参照されたい）。貫通孔５０２は、トップフィルムの底面がトッププレートによって支持されていない領域、すなわち、トッププレートに孔がある領域である。スクリーニング溶液５０４（例えば、１００％スクリーニング溶液）と沈殿溶液５０６（例えば、５０％スクリーニング溶液と５０％タンパク質溶液）が、貫通孔５０２内に置かれる。領域５０８において、トップフィルムの底面は、トッププレートに支持され接合される。領域５０８において、トップフィルムの底面は、接着剤でトッププレートに接合されることが好ましい。

この例において、単一の部位５１０で示されているように、単一の結晶化部位に対して、４つの貫通孔５０２が使用されている。この部位５１０内において、エア通路５１２（またはエアギャップ）が、貫通孔５０２を接続する。エア通路５１２は、例えば、これらの領域にトッププレートをエッチングして、プレートの厚みの半分を除去することによって、または、トッププレートを形成する格子の上側にくぼみを成型することによって作ることができる。トッププレートとトップフィルムとの間の接着密封により、４つの貫通孔５０２と装置の残りの部位および貫通孔とを分離する密封性が単一の部位５１０に与えられることが好ましい。

図５Ｂは、ボトムプレートによって支持されたボトムフィルムの図を示す、トッププレートとフィルムを取り外した装置５００を示し、ボトムフィルムの上部にスクリーニング溶液５０４と沈殿溶液５０６がある。ボトムプレートの貫通孔５１４は、トッププレートの貫通孔５０２と実質的に整合する。貫通孔５１４は、ボトムフィルムの底面がボトムプレートによって支持されていない領域、すなわち、ボトムプレートに孔がある領域である。エッチ部位に、スクリーニング溶液５０４と沈殿溶液５０６が貫通孔５１４にわたって配置され、疎水性マスクを用いて適所に保持されることが好ましい。領域５１６において、ボトムフィルムの底面は、ボトムプレートによって支持される。領域５１６において、ボトムフィルムの底面は、接着剤でボトムプレートに部分的にまたは完全に接合されることが好ましい。

図５Ｃおよび図５Ｄは、線５Ｃ−５Ｃと線５Ｄ−５Ｄ（図５Ａに示す）のそれぞれに沿った装置５００の断面図を示す。図示するように、接着剤５２２を用いてボトムフィルム５２０にボトムプレート５１８が接合される。貫通孔５０２および５１４の領域のボトムフィルム５２０上に、スクリーニング溶液５０４と沈殿溶液５０６が配置される。溶液５０４および５０６を適所に保持するために、ボトムフィルム５２０に疎水性マスク５２４が適用されることが好ましい。

ボトムフィルム５２０の上部に、トッププレート５２６が配置される。好適な実施形態において、トッププレート５２６は、感圧接着剤またはグリース５３０でボトムフィルム５２０に接合される。トッププレート５２６は、ボトムフィルム５２０と反対側にあるトッププレート５２６の側に位置するトップフィルム５２８を支持する。トップフィルム５２８は、接着剤５３２でトッププレート５２６に接合されることが好ましい。

ボトムフィルム５２０の上部に、トッププレート５２６とそのトップフィルム５２８が配置されると、溶液５０４および５０６は、トッププレート５２６の貫通孔５０２内に配置され、トップフィルム５２８の底面とボトムフィルム５２０の上面との間に挟まれ、それらに接触した状態になる。図５Ｃおよび図５Ｄに示すように、この構成において、部位５１０の隣接する貫通孔５０２間に、エア通路５１２が生じる。これらの通路５１２を介した溶液５０４および５０６の周りでの蒸気拡散により、溶液５０６中の目的化合物の濃縮が促進され、うまくいけば、その化合物の結晶化が促進される。

図５Ａ〜図５Ｄの実施形態の例示的な実施形態は、トッププレート５２６とボトムプレート５１８に、３８４個の部位のプレートを用いている。この例において、図５Ｃに示すように、スクリーニング溶液５０４の幅５４０は、約１．０ｍｍであり、沈殿溶液５０６の幅５４２は、約０．５００ｍｍである。トップフィルム５２８の底部とボトムフィルム５２０の上部との間の距離５４４は、約０．３７５ｍｍである。一例として、この構成により、約１００ｎｍの沈殿溶液５０６と４００ｎｌのスクリーニング溶液５０４の試料用の空間が生じる。

図５Ａ〜図５Ｄは、４つのサブ部位（すなわち、溶液が配置される貫通孔）を有する単一の結晶化部位を示しているが、当業者であれば、１つの部位が、２つ以上の貫通孔を含んでよいことを認識するであろう。

本発明の一実施形態によれば、図５Ａ〜図５Ｄに示す例示的な結晶化装置は、以下のように使用される。まず、疎水性マスク５２４の境界内にあるボトムフィルム５２０上にスクリーニング溶液５０４が置かれる。この例において、単一の部位５１０内のボトムプレート５１８の４つの貫通孔５１４の３つに対応する位置にあるボトムフィルム５２０上に、部位５２０に対して、同一のスクリーニング溶液５０４の３つの試料が置かれる。次に、疎水性マスク５２４の境界内にあるボトムフィルム５２０上に、沈殿溶液５０６が置かれる。この例において、部位５１０に対して、単一の部位５１０内のボトムプレート５１８の４つの貫通孔５１４に対応する位置にあるボトムフィルム５２０上に、沈殿溶液５０６の１つの試料が置かれる。

スクリーニングおよび沈殿試料が適所に置かれると、ボトムプレート５１８の貫通孔５１４とトッププレート５２６の貫通孔５０２の位置が合うように、ボトムフィルム５２０とボトムプレート５１８上に、トッププレート５２６とトップフィルム５２８が配置される。ボトムプレート５１８の参照ピンとトッププレート５２６にある対応する参照孔が、この位置合わせを容易にすることが好ましい。この代わりとして、ボトムプレート５１８が、キャリヤプレート（図示せず）に保持され位置決めされ、トッププレート５２６が、ボトムフィルム５２０とボトムプレート５１８の上部に配置されたときに、そのキャリヤプレートによってボトムプレート５１８上に正確に位置決めされる。ボトムフィルム５２０上にトッププレート５２６を配置すると、ボトムフィルム５２０、トッププレート５２６、およびトップフィルム５２８内で部位５１０が密封される。好適な実施形態において、この密封を行い易いように、ボトムフィルム５２０とトッププレート５２６との間に、密封材が用いられる。密封材は、例えば、感圧接着剤、接着特性を備えた可鍛性密封材、接着特性を備えたガスケット、グリース、オイル、ガスケット、他の密封材、またはこのような密封材の組み合わせであってよい。

ボトムフィルム５２０上にトッププレート５２６とトップフィルムが配置されると、ボトムフィルム５２０とトップフィルム５２６との間に、スクリーニング溶液５０４および沈殿溶液５０６の試料が挟まれる。その後、蒸気拡散プロセスが始まる。この構成において、エア通路５１２によって与えられたエアギャップが、各部位で、スクリーニング溶液試料と沈殿溶液試料とを分離する。沈殿溶液５０６からスクリーニング溶液５０４への蒸気拡散が、沈殿溶液５０６を濃縮し、場合によっては、結晶形成状態を作り出す。

図５Ａ〜図５Ｄに関連した結晶形成方法の代替実施形態において、まず、スクリーニング溶液と沈殿溶液の試料は、ボトムフィルム５２０の上面の上の代わりに、トップフィルム５２８の底面上に置かれる。トッププレート５２６とトップフィルム５２８は、この最初のステップで逆さまにされていることになる。さらに、トップフィルム５２８の底面は、試料を含み位置決めするための疎水性マスクを有することが好ましい。トップフィルム５２６の底面上に試料を配置した後、トッププレート５２６およびトップフィルム５２８は逆さまにされ、ボトムフィルム５２０上に配置される。それによって、試料は、ボトムフィルム５２０と、トッププレート５２６と、トップフィルム５２８との間に密封され、蒸気拡散プロセスが始まる。

図６は、格子模様のボトムプレートによって支持された第１のフィルムと、格子模様のトッププレートによって支持された第２のフィルムとを用いた本発明の別の実施形態を示す。図示するように、この実施形態は、トッププレートの単一の貫通孔６０４内にスクリーニング溶液６００と沈殿溶液６０２とを配置する。ボトムフィルムの上面の疎水性マスクが、貫通孔６０４内の適所に溶液６００および６０２を保持することが好ましい。貫通孔６０４は、エア通路６１０によって接続された第１のチャンバ６０６および第２のチャンバ６０８を含む。このようにして、蒸気溶液が、沈殿溶液６０２からエア通路６１０を通ってスクリーニング溶液６００へと流れることができ、第１のチャンバ６０６内での結晶成長が促される。また、貫通孔６０４は、貫通孔６０４の周りの接着密封材によって、周囲の貫通孔から分離されることが好ましい。図６の装置は、図５Ａ〜図５Ｄを参照して上述した方法に類似した方法で使用される。

図２に戻ると、本発明の別の実施形態において、フレーム２０２は、異なるフィルムを異なる部位に適用可能な構成部品のデザインを有する。例えば、単一部品ではなく、フレーム２０２は、１つ以上の内側フレームが挿入される外側フレームを含んでよい。外側フレームは、その開口の一部分がフィルムで覆われていてもよいし、フィルムがまったくなくてもよい。各内側フレームは、異なるタイプのフィルムを有してよく、外側フレーム内に交換可能に配置されてよい。このようにして、研究者が、さまざまな構成の内側フレームを用いて、異なるフィルムで単一の装置の異なるテスト部位を覆うことができる。

本発明のさらなる実施形態において、装置の構成部品は、シッティングドロップ方式とサンドイッチドロップ方式に対応するように構成される。例えば、図５Ａ〜図５Ｄのトッププレート５２６にさらに厚みをもたせた場合、装置は、シッティングドロップ形式になるか、または、この代わりに、沈殿溶液５０６の試料が、トッププレート５２６のトップフィルム５２８の底部に接触しないように減量されれば、装置は、シッティングドロップ形式になる。

しかしながら、好適な実施形態において、図５Ａ〜図５Ｄおよび図６の実施形態は、サンドイッチドロップ方式を用い、その理由として、目的化合物結晶の存在を、光学的に、または他の電磁放射やｘ線を用いて、最小限のひずみで検出できるということが挙げられる。図７は、この検出方法の一例を示し、装置７００の一方側にエミッタ７０２（例えば、電磁放射エミッタ）があり、反対側に検出器７０４（例えば、電磁放射検出器）がある。検出システムの感度は、平坦で透明な薄いフィルム７２０および７２８によって最適化され、これらのフィルムは、フィルム７２０および７２８を平行にし、検出ビーム７０６をフィルム７２０および７２８に対して垂直にしたサンドイッチ形式で試料を保持する。フィルムは、典型的に、電磁放射やｘ線などの結晶検出システムで用いられる。図５Ａ〜図５Ｄ、図６、および図７の実施形態の試みは、蒸気拡散／結晶成長プロセスを中断することなく、組み立てたプレートを検出システムによって繰り返し走査できるようにすることで、最も早い時点での結晶の自動検出を最適化することである。

本発明の実施形態は、９６個、３８４個、または１５３６個のテスト部位を有する装置を示しているが、本発明は、任意の特定の数のテスト部位に限定されるものではないことを理解されたい。例えば、本発明の装置は、任意の数のテスト部位（例えば、２４個、４８個、９６個、３８４個、１５３６個、３４５６個など）で構成されてよい。実際、結晶化チャンバを設けるために２つのフィルムを使用する実施形態では、対応する少量の試料が可能であるとすると、フィルム上の疎水性インクにより、多数のテスト部位が得られる。

従来技術の結晶化デバイスとは異なり、本発明の装置は、少量の試料を投与する自動またはロボット式のマルチチャネル分注システムを用いて使用することができる。この利点の主な理由は、少量の試料（例えば、１μｌ未満）を配置するさい、自動投与システムは、試料の放出先である表面との接触を物理的に引き離さなければならない（試料をピペットから放出させるため）。試料を投与するために上部に硬い表面（例えば、ポリスチレン）を設ける従来技術の結晶化デバイスの場合、これを実行することは、特に、長さと真直性にばらつきがあり得る一般的なピペットチップを用いる場合、容易には達成できない。したがって、従来技術のデバイスでは、分注時に望ましくない一貫性の欠如が生じたり、自動機器が破損したりする場合がある。対照的に、本発明では、フィルムの柔軟性により、ピペットチップは、各場所での接触を確実に引き離すように、フィルムの表面内に押し込むことができる。（このような動作では、ピペットチップに垂直なフィルムの面を位置決めする代わりに、溶液を分離させやすいように、フィルムに、角度、例えば、３０度の角度をつけることが望ましい場合がある。）したがって、本発明は、より少量のタンパク質または他の沈殿物で実行可能であるため、結晶を成長させるコストを大幅に削減できる。さらに、本発明は、これらの少量を投与するロボットシステムに適用可能である。

本発明は、結晶学者、研究者、薬剤構造に基づいた創薬活動に携わる人々の需要の多くに応えるものである。本発明により、スクリーニング溶液が目的化合物の結晶を生成するであろうものを見つけ出すための高速かつ高信頼性で、反復可能であり、コスト効率が良い解決策が提供される。実際、本発明により、例えば、少なくとも１００ｎｌのタンパク質を用いて、一日に数千回の実験を手動または自動で準備でき、再現可能な結果を生じ得る。

本発明により、以下の利点のうちの１つ以上が得られる。
１）手動またはロボットシステムを用いた実験準備が可能―拡張性の付加
２）滴径の縮小―高価で希少な（タンパク質）試料の節約、週・月単位ではなく時間単位での結果の獲得
３）高速化―９６個の部位からなる実施形態で、一日８時間あたり自動で最大１２，０００回／手動で６，０００回の実験が準備され、高密度の実施形態では、９６個の部位からなる実施形態（自動の場合）より４倍および１６倍の増加が可能
４）ほぼ誰でも簡単に達成可能な密封性―蒸発により損失するウェルの削減
５）反応チャンパの小型化―試薬に関連するコストの削減、高密度の実施形態の場合、試料を１０倍以上減量
６）精密光学が施され整合された構成部品―ウェルまたは部位位置への適切なドロップ配置の確保
７）予め印刷されたウェル位置情報を有する識別表示の標識付け―実験結果の文書化および表示を簡易化
８）革新的なフィルム使用法―実験中、より厳密な検査用に結晶試料の除去が可能、元の部位位置に試料を戻し、隣接部位を乱すことなく再密封が可能
９）３８４個、１５３６個、および３４５６個の高密度サンドイッチドロップの実施形態で、高速自動検出システムの使用が可能

本発明の特定の応用により、高分子結晶を生成するために、タンパク質を結晶化する溶液のスクリーニングを手動または自動で行うための高スループットの方法が得られる。

本発明の好適な実施形態の前述の開示は、説明および記述を目的として与えられたものである。この開示は、完全なものであることを意図したものでも、本発明を開示された正確な形態に限定するように意図したものでもない。上記開示を鑑みて、当業者であれば、本願明細書に記載した実施形態の多数の変形および修正が明らかであろう。本発明の範囲は、特許請求の範囲およびそれらと同等のものによってのみ定義されるものである。

さらに、本発明の典型的な実施形態を記載するさい、本発明では、特定のステップ順序で本発明の方法および／またはプロセスを提示した場合がある。しかしながら、方法またはプロセスが、本願明細書に示す特定のステップ順序に依存しないものであれば、方法またはプロセスは、記載した特定のステップ順序に限定されるべきではない。当業者であれば、他のステップ順序が可能であることは認識するであろう。したがって、本願明細書に示す特定のステップ順序は、特許請求の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。さらに、本発明の方法および／またはプロセスに関する特許請求の範囲は、記載した順序でステップを実行することに限定されるべきではなく、当業者であれば、順序は変更されてよく、本発明の趣旨および範囲内のものであることは容易に認識できる。

本発明の一実施形態による、結晶化装置の例示的なマイクロプレートの略図的平面図である。 図１Ａに示す例示的なマイクロプレートの略図的平面図である。 図１Ａに示す例示的なマイクロプレートの略図的平面図である。 本発明の一実施形態による、結晶化装置の例示的なフィルムおよびフレームの略図である。 本発明の一実施形態による、例示的な結晶化装置の略図である。 線３Ｂ−３Ｂに沿った図３Ａに示す結晶化装置の断面図を示す略図である。 本発明の実施形態による、結晶化装置の例示的な蓋の略図である。 図４Ａに示す例示的な蓋の略図的側面図である。 図４Ａに示す例示的な蓋の略図的側面図である。 本発明の一実施形態による、２つのフィルムを有する例示的な結晶装置の一部分の略図的平面図である。 上部プレートと上部フィルムを取り外した、図５Ａの結晶化装置の略図である。 線５Ｃ−５Ｃに沿った図５Ａの結晶化装置の略図的断面図である。 線５Ｄ−５Ｄに沿った図５Ａの結晶化装置の略図的断面図である。 本発明の一実施形態による、２つのフィルムを有する別の例示的な結晶化装置の一部分の略図的平面図である。 本発明の一実施形態による、２つのフィルムを有する例示的な結晶化装置における結晶の検出を示す略図である。

Claims (50)

1. 結晶形成装置であって、
   スクリーニング溶液を保持するようにされた部位を有するプレートと、
   前記プレートに隣接したフィルムとを含み、前記フィルムが前記部位を密封し、前記フィルムが、前記スクリーニング溶液と沈殿溶液との間にエアギャップがある前記部位内に前記沈殿溶液を含むようにされる、装置。
2. 前記プレートがマイクロプレートであり、前記部位が前記マイクロプレートのウェルである、請求項１に記載の装置。
3. 前記ウェルが上側リムを有し、前記装置が、前記上側リム上に、前記フィルムを前記ウェルに密封する密封材をさらに含む、請求項２に記載の装置。
4. 前記密封材が、接着特性を備えた可鍛性密封材、接着特性を備えたガスケット、接着剤、グリース、オイル、ガスケット、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３に記載の装置。
5. 前記フィルムが、前記マイクロプレート上にのるフレームによって支持される、請求項２に記載の装置。
6. 前記ウェルにスクリーニング溶液試料をさらに含み、
   前記フィルムによって保持され、前記スクリーニング溶液試料に懸濁される沈殿溶液試料をさらに含む、請求項２に記載の装置。
7. 前記フィルムが第１のフィルムであり、
   前記プレートが、第１の支持構造によって支持された第２のフィルムを含み、
   前記第１のフィルムが、第２の支持構造によって支持され、前記第２の支持構造が、前記第２のフィルムの上部に配置され、前記第１のフィルムが、前記第２のフィルムとは反対の前記第２の支持構造の側に配置され、前記第２の支持構造と前記第１のフィルムが、前記部位を密封するようにされる、請求項１に記載の装置。
8. 前記第２のフィルムが、前記沈殿溶液と前記スクリーニング溶液とを引き離して保持するようにされた疎水性マスクを有する、請求項７に記載の装置。
9. 前記第２の支持構造が、第１の貫通孔と、第２の貫通孔と、前記第１の貫通孔を前記第２の貫通孔に接続する通路とを有する格子を含む、請求項７に記載の装置。
10. 前記第１の貫通孔に配置されたスクリーニング溶液試料と、前記第２の貫通孔に配置された沈殿溶液試料とをさらに含む、請求項９に記載の装置。
11. 前記部位が、前記第１の貫通孔と、前記第２の貫通孔と、前記通路とを含む、請求項９に記載の装置。
12. 前記格子が、第３の貫通孔と、第４の貫通孔と、前記第２の貫通孔を前記第３の貫通孔に接続する第２の通路と、前記第３の貫通孔を前記第４の貫通孔に接続する第３の通路と、前記第４の貫通孔を前記第１の貫通孔に接続する第４の通路とを有する、請求項９に記載の装置。
13. 前記第１の貫通孔に配置された沈殿溶液試料と、前記第２の貫通孔に配置された第１のスクリーニング溶液試料と、前記第３の貫通孔に配置された第２のスクリーニング溶液試料と、前記第４の貫通孔に配置された第３のスクリーニング溶液試料とをさらに含む、請求項１２に記載の装置。
14. 結晶形成方法であって、
    マイクロプレートのウェル内にスクリーニング溶液を配置することと、
    フィルムに沈殿溶液を配置することと、
    前記沈殿溶液が前記スクリーニング溶液に懸濁するように、前記ウェル上に前記フィルムを配置することとを含む、方法。
15. 前記フィルムが、前記ウェルに密封される、請求項１４に記載の方法。
16. 前記フィルムが、前記フィルムと前記ウェルとの間の密封材で前記ウェルに密封される、請求項１５に記載の方法。
17. 前記フィルムを配置することは、前記フィルムを逆さまにすることを含む、請求項１４に記載の方法。
18. 前記フィルムが疎水性マスクを含み、前記沈殿溶液が前記疎水性マスク内に含まれる、請求項１４に記載の方法。
19. 結晶形成装置であって、
    スクリーニング溶液を収容するようにされたウェルを有するマイクロプレートと、
    フレームに接合されたフィルムとを含み、前記フィルムが、前記ウェルを密封するように前記マイクロプレートに結合され、前記フィルムが、沈殿溶液を収容するようにされる、装置。
20. 前記フィルムと前記ウェルとの間にグリース層をさらに含む、請求項１９に記載の装置。
21. 前記フィルムが、前記ウェル内に前記沈殿溶液試料を保持するようにされた疎水性マスクを有する、請求項１９に記載の装置。
22. 前記ウェルに配された前記スクリーニング溶液の試料と、
    前記ウェル内において前記フィルムによって保持され、前記沈殿溶液と前記スクリーニング溶液との間にあるエアギャップで前記スクリーニング溶液試料に懸濁される前記沈殿溶液の試料と、をさらに含む、請求項１９に記載の装置。
23. 結晶形成装置であって、
    第１の支持構造によって支持され、スクリーニング溶液と沈殿溶液とを収容するようにされた第１のフィルムと、
    第２の支持構造によって支持された第２のフィルムとを含み、前記第２の支持構造が、前記第１のフィルムに隣接し、前記第２のフィルムが、前記第１のフィルムとは反対の前記第２の支持構造の側にあり、前記第１のフィルム、前記第２のフィルム、および前記第２の支持構造が、前記スクリーニング溶液と前記沈殿溶液との間にエアギャップがある部位内に前記スクリーニング溶液および前記沈殿溶液を密封するようにされる、装置。
24. 前記第１のフィルムが、前記部位内の別個のサブ部位で、前記スクリーニング溶液および前記沈殿溶液を保持するようにされた疎水性マスクを有する、請求項２３に記載の装置。
25. 前記別個のサブ部位が、前記第２の支持構造の貫通孔に対応させられる、請求項２４に記載の装置。
26. 前記第２の支持構造が、第１の貫通孔と、第２の貫通孔と、前記第１の貫通孔を前記第２の貫通孔に接続する通路とを有する格子構造を含む、請求項２３に記載の装置。
27. 前記第１の貫通孔に配置されたスクリーニング溶液試料と、前記第２の貫通孔に配置された沈殿溶液試料とをさらに含む、請求項２６に記載の装置。
28. 前記スクリーニング溶液試料および前記沈殿溶液試料が、サンドイッチドロップ形式で、前記第１のフィルムおよび前記第２のフィルムと接触した状態にある、請求項２７に記載の装置。
29. 前記第１の支持構造が、前記第２の支持構造の前記第１の貫通孔に対応させられた第３の貫通孔と、前記第２の支持構造の前記第２の貫通孔に対応させられた第４の貫通孔とを有する格子構造を含む、請求項２６に記載の装置。
30. 前記第２の支持構造が、接着特性を備えた可鍛性密封材、接着特性を備えたガスケット、接着剤、グリース、オイル、ガスケット、およびそれらの組み合わせからなる群から選択された密封材を用いて、前記第１のフィルムおよび前記第２のフィルムに接合される、請求項２３に記載の装置。
31. 前記第１の支持構造が、接着特性を備えた可鍛性密封材、接着特性を備えたガスケット、接着剤、グリース、オイル、ガスケット、およびそれらの組み合わせからなる群から選択された密封材を用いて、前記第１のフィルムに接合される、請求項３０に記載の装置。
32. 前記第１のフィルムおよび前記第２のフィルムが、電磁放射に対して透過性である、請求項２３に記載の装置。
33. 結晶形成方法であって、
    スクリーニング溶液を第１のフィルムに配置することと、
    沈殿溶液を前記スクリーニング溶液に隣接した前記第１のフィルムに配置することと、
    前記第１のフィルムと第２のフィルムとの間の部位内に前記スクリーニング溶液および前記沈殿溶液を密封することと、
    前記部位内で、前記スクリーニング溶液と前記沈殿溶液との間にエアギャップを設けることとを含む、方法。
34. 結晶が存在するかを決定することをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
35. 結晶が存在するかを決定することが、自動検出システムを使用することを含む、請求項３４に記載の方法。
36. 前記自動検出システムが、検出手段として、電磁放射およびＸ線のうちの１つを使用する、請求項３５に記載の方法。
37. 前記スクリーニング溶液および前記沈殿溶液を密封することが、
    第１の貫通孔と、第２の貫通孔と、前記第１の貫通孔と前記第２の貫通孔とを接続する通路とを有する格子構造を備えた前記第２のフィルムを支持することと、
    前記スクリーニング溶液を前記第１の貫通孔内に配置することと、
    前記沈殿溶液を前記第２の貫通孔内に配置することと、
    前記格子構造の両側に前記第１のフィルムおよび前記第２のフィルムを密封することとを含む、請求項３３に記載の方法。
38. 前記第１のフィルム上の疎水性マスク内に前記スクリーニング溶液および前記沈殿溶液を含むことをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
39. 前記スクリーニング溶液および前記沈殿溶液を密封することが、前記第１のフィルムと前記第２のフィルムとを分離する支持構造を用いて、前記第１のフィルム上に前記第１のフィルムを配置することを含む、請求項３３に記載の方法。
40. 前記スクリーニング溶液および前記沈殿溶液を密封することが、前記第１のフィルムを逆さまにすることと、前記第１のフィルムを前記第２のフィルム上に配置することとを含む、請求項３３に記載の方法。
41. 前記第１のフィルム上の疎水性マスク内に前記スクリーニング溶液および前記沈殿溶液を含むことをさらに含む、請求項４０に記載の方法。
42. 前記疎水性マスクが、前記第２のフィルムを支持する支持構造の貫通孔に対応させられた前記第１のフィルム上の位置で、前記スクリーニング溶液および前記沈殿溶液を保持する、請求項４１に記載の方法。
43. 化合物を結晶成長させることが可能な溶液を特定するための方法であって、
    複数のスクリーニング溶液をマイクロプレートのウェル内に配置することを含み、
    複数の沈殿試料を前記マクロプレートの前記ウェルに対応する位置にあるフィルムに配置することを含み、各沈殿試料が、前記化合物の溶液および前記対応するウェルにある前記スクリーニング溶液の混合物を含み、
    前記沈殿試料が、前記対応するウェルで懸濁されるように、前記フィルムを前記マイクロプレート上に配置することを含む、方法。
44. 結晶成長が生じたかを決定するために、前記フィルムを介して、前記複数の沈殿試料の少なくとも一部分を観察することをさらに含む、請求項４３に記載の方法。
45. 化合物を結晶成長させることが可能な溶液を特定するための方法であって、
    複数のスクリーニング溶液を別個の部位で第１のフィルムに配置することを含み、
    複数の沈殿試料を前記第１のフィルムに配置することを含み、前記複数の沈殿試料の各個々の沈殿試料が、別個の部位で対応するスクリーニング溶液に隣接し、各沈殿試料が、前記化合物の溶液および前記スクリーニング溶液の混合物を含み、
    前記複数の沈殿試料および前記複数のスクリーニング溶液が、前記第２のフィルムに接触するように、第２のフィルムを前記第１のフィルム上に配置することを含み、
    別個の部位内に各個々の沈殿試料および対応するスクリーニング溶液を密封することを含み、
    各別個の部位で、前記個々の沈殿試料と対応するスクリーニング溶液との間にエア通路を設けることを含む、方法。
46. 結晶を有する部位を特定するために、前記別個の部位を走査することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
47. 前記別個の部位が、電磁放射およびｘ線のうちの１つを用いて走査される、請求項４６に記載の方法。
48. 化合物を結晶成長させることが可能な溶液を特定するための方法であって、
    各々が２つ以上のサブ部位を含む複数の別個の部位を第１のフィルムに設けることを含み、
    各別個の部位の１つ以上のサブ部位で、複数のスクリーニング溶液を前記第１のフィルムに配置することを含み、
    各別個の部位の１つ以上のサブ部位で、複数の沈殿溶液を前記第１のフィルムに配置することによって、各別個の部位の前記１つ以上のサブ部位が、少なくとも１つの沈殿試料および少なくとも１つのスクリーニング試料を含むようにすることを含み、前記少なくとも１つの沈殿試料が、前記化合物の溶液および前記少なくとも１つのスクリーニング試料の混合物を含み、
    前記複数の沈殿溶液および前記複数のスクリーニング溶液が、前記第２のフィルムと接触するように、第２のフィルムを前記第１のフィルム上に配置することを含み、
    各別個の部位で、別個の部位内に前記少なくとも１つの沈殿試料および前記少なくとも１つのスクリーニング試料を密封することを含み、
    各別個の部位の前記サブ部位間にエア通路を設けることを含む、方法。
49. 結晶を有する部位を特定するために、前記複数の別個の部位を走査することをさらに含む、請求項４７に記載の方法。
50. 前記複数の別個の部位が、電磁放射およびｘ線のうちの１つを用いて走査される、請求項４９に記載の方法。

Images