JP2005512592A - 細胞性組成物ならびに細胞性組成物の作製法および細胞性組成物の使用法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明者らは、インビボおよびインビトロにおいて、多様な組織型の細胞へ分化し得る特有の細胞を同定している。この細胞は、選択された増殖条件下で、臍帯血に由来する造血細胞を増殖することによって産生された。この細胞は、胚性幹細胞と類似の特性を有する。
本発明に従って、当業者の間で、従来の分子生物学、微生物学および組換えDNA技術を使用され得る。このような技術は、文献で十分に説明される。例えば、Sambrook,Fritsch,& Maniatis(2);DNA Cloning:A Practical Approach,I巻およびII巻(D.N.Glover編、1985)(3);Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait編、1984)(4);Nucleic Acid Hybridization B.D.HamesおよびS.J.Higgins編(1985)(5);Transcription and Translation B.D.HamesおよびS.J.Higgins編(1984)(6);Animal Cell Culture R.I.Freshney編(1986)(7);Immobilized Cells and enzymes IRL Press,(1986)(8);ならびにB.Perbal,A Practical Guide to Molecular Cloning(1984)(9)を参照のこと。本発明はまた、当該分野で公知である、免疫学において標準的な方法(例えば、Stitesら(10);ならびにMishellおよびShigi(11)に記載)を使用し得る。
(a)CD45+HLA−ABC+;
(b)Lin−;
(c)幹細胞因子レセプター+
(d)FLT3リガンドレセプター+;
(e)FGFレセプター+;
(f)CD34+;
(g)CD38+;および
(h)CD33+。
(a)少なくとも50%のCD34+細胞、好ましくは、60%〜95%(の細胞)、より好ましくは、65%〜90%(の細胞)または最も好ましくは、約65%のCD34+細胞;
(b)(a)における細胞の約5%〜50%、好ましくは、5%〜25%;より好ましくは、5%〜15%、最も好ましくは、約10%がCD33−およびCD38−である;
(c)少なくとも50%のCD34−、好ましくは、15%〜40%、より好ましくは15%〜40%、または最も好ましくは、約35%のCD34+細胞;
(d)(c)中の細胞の約5%〜50%、好ましくは5%〜25%、より好ましくは5%〜15%、最も好ましくは、約10%(の細胞)が、CD33+またはCD38+であり、そして残りの細胞は、全ての造血細胞表面抗原に対してネガティブである;
(e)約5%〜50%、好ましくは5%〜25%、より好ましくは、5%〜20%、最も好ましくは、約5%がCD33+であり;そして
(f)約20%〜60%、好ましくは25%〜55%、より好ましくは35%〜45%、最も好ましくは40%がCD38+である。
(a)CD45+HLA−ABC+
(b)造血細胞または造血前駆細胞へ分化し得る;
(c)一つ以上、二つ以上、三つ以上、四つ以上、五つ以上、または六つ以上の異なる非造血細胞型(間葉幹細胞または間葉前駆細胞、神経幹細胞または神経前駆細胞、または内皮幹細胞または内皮前駆細胞を含む;特に、例えば、内皮細胞、破骨細胞、骨芽細胞、脂肪細胞、筋細胞、星状細胞および神経細胞)へ分化し得る;
(d)丸型および非接着の増殖必要条件;
(e)幹細胞因子レセプター(KIT)+;
(f)FLT3リガンドレセプター+;
(g)FGFレセプター+;
(h)胚性幹細胞タンパク質、例えば、Oct4、Stage Specific Embryonic Antigen−3(SSEA3)、および/またはStage Specific Embryonic Antigen−4(SSEA4)の発現;
(i)HoxB4+;
(j)Flk−1+;
(k)CD34±;
(l)非腫瘍形成性、すなわち、細胞が新生物または腫瘍を生じないか、あるいは新形成および癌がない;
(m)CD38±;および
(n)臍帯血から誘導される。
本発明の細胞調製物または細胞性組成物は、天然で、またはインビボもしくはインビトロでの遺伝子工学技術のいずれかにより、遺伝子的に改変している(形質導入されるかまたはトランスフェクトされる)細胞から誘導され得るか、またはこの細胞を含有し得る。
本発明の細胞調製物および組成物は、多様な方法(例えば、移植)において使用され得、そして、これらは、医学の領域で多数の用途を有する。これらは、外傷、年齢、代謝または毒性傷害、疾患、特発喪失、または任意の他の原因に起因する身体組織、器官、欠失または損傷した成分または構造の置換のために使用され得る。
a)造血細胞および前駆細胞を含む富化させた造血細胞調製物において、増殖条件下で細胞を培養し、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を含む細胞性組成物を得る工程;
b)必要に応じて、インビトロの分化条件下で、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を培養する工程;
c)工程(a)または(b)における培養細胞を試験物質に曝露する工程;および
d)細胞の生存または細胞の形態学的特徴、機能的特徴、または生理学的特徴、および/または分子生物学的特性に関して、試験物質の効果が存在するかまたは存在しないかを検出する工程であって、これにより、細胞の生存または細胞の形態学的特徴、機能的特徴、または生理学的特徴、および/または分子生物学的特性を変化する効果が、試験物質の活性を示す工程。
(a)非造血細胞を含む障害を有する患者由来のサンプルから、造血細胞を得る工程;
(b)造血細胞から造血幹細胞および造血前駆細胞を含む富化された造血細胞調製物を調製する工程;
(c)増殖条件下で、富化された造血細胞調製物を培養し、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を得る工程;
(d)必要に応じて、インビトロの分化条件下で、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を培養する工程;
(e)(c)または(d)において培養される細胞を潜在力のある新薬に曝露する工程;および
(f)細胞の生存または前記細胞の形態学的特徴、機能的特徴、または生理学的特徴、および/または分子生物学的特性に関して、潜在能力のある新薬の効果が存在するかまたは存在しないかを検出する工程であって、これにより、細胞の生存または細胞の形態学的特徴、機能的特徴、または生理学的特徴、および/または分子生物学的特性を変化させる効果が潜在力のある新薬の活性を表す工程。
遺伝子治療の別の適用は、この細胞へ薬物耐性遺伝子を運搬することによって、正常な造血幹細胞に薬物耐性を提供することにより、通常、危険と考えられる高濃度での薬物の使用を可能にする。特に、抗癌剤に対して薬剤耐性を有する遺伝子(例えば多剤耐性遺伝子)を造血幹細胞および造血前駆細胞を含む増殖された細胞調製物へ運搬することによって、高濃度での抗癌剤を用いる処置を実施し得る。
(a)造血細胞および非造血細胞を形成する能力を有する細胞を形成し得る造血細胞を含むクライアント由来のサイプルを受容し、そしてログインするためのサービス;
(b)このサンプルから分離した細胞を培養するためのシステムであって、このシステムは、造血細胞および非造血細胞を形成する能力を有する細胞を産生するための条件を提供する、システム;
(c)クライアントまたは第三者の代わりに後に回収するための、(b)のシステムにより生成された細胞を保存するための細胞保存システム;
を含む。この方法はさらに、クライアントまたはその医療保険提供者に請求書を発行するための請求書発行システムを含み得る。
(a)本発明の造血細胞および非造血細胞を形成する能力を有する細胞の、増殖、分化、機能または生存に影響を及ぼす1つ以上の因子を同定する工程;
(b)(a)で同定した因子;またはそのアナログの、動物における効能および毒性に関する治療的プロファイリングを行う工程;ならびに
(c)受容可能な治療的プロファイルを有すると(b)で同定された1つ以上の因子を含む薬学的組成物を処方する工程
を包含する。この方法はさらに、販売用の薬学的調製物を配送するための配送システムを確立する工程を包含し得る。この方法はまた、薬学的調製物を市販するための販売グループを確立する工程を包含する。本発明はまた、薬物送達ビジネスを実施する方法を企図する。この方法は、本発明の造血細胞および非造血細胞を形成する能力を有する細胞の増殖、分化、機能または生存に影響を及ぼす因子を同定する工程、およびさらなる開発に権利を与える工程をさらに包含する。
(材料および方法)
(母体血スクリーニング)
母体血を、妊娠34週の前の登録時点で、HIV I/II、HTLV−1/II、B型肝炎(HBs Ag)、C型肝炎(抗HVC)、CMVおよびVDRLに対してスクリーンした。臍帯血の採集およびプロセシングに関する承諾書は、登録時に入手した。資格のある病院職員で、Toronto General Hospitalおよびトロント大学のヒトの倫理委員会によって承認されたプロトコールに従って、分娩時点の臍帯血を回収した。
血液量を減少し、赤血球をFicollまたはPentaspan(デンプン)処置のいずれかを用いて除去した。サンプルは、抗凝血物質(10mlの血液(10% v/v)につき1mlのAcid Citrate Dextrose(ACD))を含む60mlシリンジを用いて回収するか、または250mlの血液バッグ(Baxter−Fenwal,Deerfield,II,USA)へ直接回収し、そしてPenicillin Gをこのバッグへ直接添加した。Ficoll(Histopaque−1077,Sigma,St.Louis,USA)濃度勾配遠心分離を、富化した単核細胞の集団を獲得するために使用した。簡潔には、血液をRPMI培地で1:1へ希釈し、30mlを15mlのFicoll(1.077)クッションの上にかぶせた。この濃度勾配を、室温で30分間、300gで遠心分離し、そして単核細胞(MNC)層を回収した。Ficoll層の下もまた回収した。MNC層およびFicoll層を、2×容量の洗浄溶液(ドナー臍帯血由来の12.5mlのフィルター処理した血漿、120ml Iscoves改変ダルベッコ培地、3ml ACD)に、両層を再懸濁した。このサンプルを、室温で10分間、300gで遠心分離した。細胞ペレットを回収し、合わせた。臍帯血サンプルの原体積は、10% v/vのACDを含んだ。従って、100mlの容量は、約90mlの血液および10mlのACDを含んだ。
全工程を氷上で実施した。この細胞ペレットをIMDM/10%自己血清またはFBS/10% DMSO中に再懸濁した。6アリコートまで、−80℃の冷凍庫で一晩中、Nalgene凍結バイアル(Nalgenenunc,Rochester,NY)内にサンプルを置くことにより、サンプルごとに凍結した。長期間保存するために、サンプルを液体窒素(−196℃)へ移した。
二つの異なるカラムを使用する異なる方法を、幹細胞または前駆細胞の単離に対して使用した。
多様な細胞培養系を検査した。多くの培地を検査し、そして、主な構成要素は以下の通りである;
(A.)馴化培地:ヒト胎性線維芽細胞(HEF−CM)は、72時間、20%FBS(胎児ウシ血清)を含むαMEM中で増殖される。この培地を除去し、この細胞および破片を遠心分離およびフィルター(0.22μmフィルター)を用いて除去する。この培地を−20℃で保管する。
サンプルを種々の細胞表面マーカー(Beckman−Coulter)について染色し、フローサイトメトリー分析に供した;Coulter−Epics(Coulter.Burlington,Canada)。アイソタイプコントロールを全てのケースで使用した。全てのサンプルを、製造業者の指示書ごとに、4℃で10〜20分間標識し、洗浄し、そして10%ホルマリンで固定した。
あらかじめ作製したメチルセルロースベースのコロニーアッセイ培地(Stem Cell Technologies)を使用した。この培地を、原始前駆細胞を増殖するために、形式を定めた(カタログ番号H4435)。細胞を3mlの培地あたり、CD34+細胞を500個プレートするか、または、3mlの非選択細胞の培地あたり1500〜3000細胞をプレートした。全ての集団を二連でプレートし、そして、12日、14日、16日および18日目に記録した。
細胞はまた、初期造血前駆細胞を増殖させる長期培養−惹起細胞アッセイにおいて増殖した。このアッセイは、CFUアッセイとNOD/SCIDアッセイとを連続する。細胞を、造血細胞を長期増殖させる栄養支持細胞上で増殖する。
いくつかの実験に対して、この細胞をStem Sepカラム(Stem cell Technologies)を用いて、再選択した。組織培養細胞を適切な抗体カクテルを用いて標識化し、上記に記載されるように、カラムを通した。生産細胞は、カクテル中で標識化された表面マーカーに対してネガティブであると考えられ、そして、これらの細胞を、フローサイトメトリーによりポジティブな表面マーカーに対してチェックしたか、CFUアッセイにおいて配置したか、継続的な組織培養に対して再プレートしたか、またはNOD/SCIDマウスを移植するために使用したかのいずれかであった。
Non Obese Diabetic/Severe Combined Immune Deficient(NOD/SCID)マウスを、ヒト臍帯血幹細胞の移植の潜在力を試験するために使用した。全ての実験は、確立したプロトコールに従い、そして、動物倫理の承認を受けた。NOD/SCIDマウスを、クリーンルームの隔離棚で維持し、餌および水を与えた。マウスを、移植前に、Cs137源を用いて、360ラドで2時間照射した。次いで、このマウスに、200μlの細胞を尾部静脈から注入した。マウスに、i.m.注射により抗生物質を与え、毎日モニターした。生存率は、1実験につき80+%であった。2週、4週または6週で、動物を頚部脱臼によってと屠殺した。大腿骨を除去し、そして、骨髄を洗い流した。細胞をPBSで洗浄し、この細胞ペレットを3分間、Red Cell Lysis Bufferに供し、そして再度洗浄した。細胞を、再移植のために冷凍保存したか、フローサイトメトリーで分析したか、または、PCR分析もしくはDNAマイクロアレイ分析に対してRNA単離に供したかのいずれかをした。
全ての組織を4%パラホルムアルデヒドで固定後、PBSで洗浄した。この組織を脱水後、パラフィンワックス中に包埋した。6μmの切片を切断し、スライドガラス上に置いた。スライドを脱ろう化し、蛍光タグ化抗体を用いて染色した抗体に供した。スライドをデコンボリューション(deconvolution)顕微鏡の上で分析した。
破骨細胞形成は、IMDM+10%血清+GM−CSFに細胞を培養することにより、達成した。ポジティブな細胞活性は、細胞をカルシウムキレート基板上にプレートすることにより決定し、そして、活性化骨芽細胞が骨様基質を吸収する場合、基質の欠失を測定することにより決定した。
TRAP染色を、Minkin Cedric(28)に記載されるように、実施した。細胞を、いくつかの「因子」の影響下で、様々な期間、96ウェルプレートまたは24ウェルプレートのいずれかで増殖した。酒石酸(tartate)耐性酸フォスファターゼ染色を以下のように細胞に対して実施した。:
6.4mlのナフトール−as−Bi−リン酸(ジメチルホルムアミド中12.5mg/ml)
6.4ml酢酸溶液(2.5mol/L)pH=5.2
3.2ml酒石酸溶液(0.67mol/L)pH=5.2
Fast Red TR(0.1g)
64mlの蒸留水
上記の溶液を混合し、ろ過した。次いで、細胞を37℃で45分間インキュベートした。
細胞を、TRAPポジティブに対して好都合な条件下で、3週間増殖した。10,000細胞を骨学的スライド上にシードし、2〜3日ごとに培地交換をして、2週間増殖した。培地は、血清を含むIMDMおよびGM−CSFからなる。10日および14日目に、この実験を終了し、Von Kossa染色を実施した。
臍帯血細胞を、24ウェルプレートにおいて、21日間、上記の条件下で増殖した。次いで、細胞をスクラップし、マイクロチューブ内で5分間600gで遠心分離した。1時間、2%グルタールアルデヒド(gluteraldehyde)での再懸濁後、カコジル酸緩衝液へ移し、その後、電子顕微鏡下で見るために処理をした。
細胞を培養ディッシュで増殖するか、またはスライドチャンバーおよび3−D培養(キャピラリーネットワークの形成をさせる)中で増殖する。スライドチャンバー上での培養に対して、血清(10%)を含む内皮増殖因子サプリメント(Sigma)を補充されたM119培地に細胞をプレートした。細胞を、細胞の欠失がない培地の除去により、週に二回供給する。キャピラリー形成を、10μlのトロンビン(μg/ml)を含むM199培地に0.5mlの3mg/mlフィブリノーゲンを混合することによって作製した0.5mlマトリックスの上に2,000〜10,000細胞(5μl容量中)を置くことによって達成し、次いで、24ウェルプレートに第2の0.5mlのマトリックスで細胞を覆い、そして、1mlのM199 +5%血清で覆った。内皮細胞ネットワークが発達するまで、培地を3〜4週間の間、1週につき一回交換した。
上記に記載される条件下で増殖させた細胞に、脂肪が存在するか否かを決定するために、Sudan IV染色を実施した。簡潔には、細胞を5分間70%エタノールで固定後、さらなる5分間、Sudan IV(アセトン:エタノールを50:50中の2g/ml)溶液とともにインキュベーションした。
10−8M デキサメタゾン、10mM β−グリセロールリン酸、0.2mM アスコルビン酸;10%血清を含むα−MEM。細胞を3〜4週間増殖した。Alzirin Red染色に対して、細胞を30分間、70%氷冷却エタノール中に固定し、次いで、40mM Alzirin red(pH 4.0)を用いて10分間染色した。
細胞をDME+10%血清中へ置き、そして、1週につき二回の培地交換を伴い、3週間増殖した。いくつかの培養物に、10〜50nMのレチノイン酸を補充した。
細胞を2〜21日間、Stem Span培地(Stem Cell Technologies)中のFGF、SCF、FLT3リガンド中で増殖した。任意の時点で、間葉系細胞を産生するように、3週間、この細胞をDME中の20%血清の(高グルコース)へ移すか、または、以下の5つの列挙された条件のうち1つの条件において、37℃、33℃または6%酸素(37℃)でこの細胞を種々の培地へ直接移した:
A:αMEM+10%血清+50μM 2メルカプトエタノール
B:αMEM+10%血清+50μM 2メルカプトエタノール+5−アザシチジン
C:αMEM+10%血清+50μM 2メルカプトエタノール+10μg/mlインスリン+0.1〜1μMデキサメタゾン+0.5μMイソメチルブチルキサンチン
D:αMEM+10%血清+ニワトリ胎児抽出物(5%)
E:αMEM+1%血清+ニワトリ胎児抽出物(5%)。
尾部静脈注射によって細胞を受け取ったマウスから、肝臓を単離した。屠殺の際、肝臓をすばやく除去し、そして、10%ホルマリンで固定し、免疫組織学のためにパラフィンワックスを用いて処理するか、または単細胞懸濁液を産生し、細胞を抗HLA−ABC抗体および抗CD45抗体を用いて染色した。
以下に列挙された全ての実験において、細胞をヒト臍帯血から単離した。3つの初期細胞集団は、1)未分画の白血球、2)系統マイナス細胞(CD2、CD3、CD14、CD16、CD19、CD24、CD56、CD66およびGLYCOPHORIN Aマイナス)を試験した。系統マイナス細胞は、公知の成熟血液細胞を始めに除去することにより獲得し、これにより未熟な細胞および任意の公知の血液マーカー(同定されていない細胞)を欠失する細胞を残す。系統マイナスのこの細胞集団は、HLA−ABCポジティブ、CD45+(100%)、富化されたCD34(50〜80%)、富化されたCD38(50〜80%)および富化されたCD33(50%)、骨髄系マーカー、および3)系統ポジティブな細胞である。要約すれば、以下に詳述されるが、試験の大部分において、系統ポジティブの細胞は、任意の幹細胞特性を示さないので、主要な集団は、系統マイナス集団であり、未分画細胞集団で発見された幹細胞潜在力を有する細胞の出現率は、その中に含まれる系統マイナス集団由来であることを示唆する。
非血液細胞を、CD45+UCB細胞から産生した。まず、供給が減少している状態での長期培養の組み合わせは、細胞周期からこれらを離脱させることにより、これらの細胞の分化を引き起こしたことが観察された。この細胞は接着し始め、伸長した接着細胞のコロニーを混合し、そして、円形細胞にゆるく付着する。FGFが存在する限り、この細胞は、これらのコロニー(約3週の培養で出現する)を維持し得る。さらに3週後、この円形細胞は、死滅し始め、接着細胞は分裂を止めるが、生存し続ける。この細胞は、間葉系マーカー(ビメンチン)に対してポジティブに染色した。培養6〜10週(全ての時間)後、この接着細胞は存続し、内皮細胞、脂肪細胞(脂肪)および破骨細胞に類似する形態を示す。これらの特殊な細胞は、まれに生じる。培養条件を変更することにより(上記に言及され、そして以下に詳述されるように)、この細胞の運命は、より良好に制御され得る。最適なサイトカインの型、および幹細胞の増殖を促進するのに必要な濃度を決定するために、初期研究を実施した。成熟造血細胞ならびに組織および非造血細胞ならびに組織を生じる細胞の能力によって規定されるように、目標は、多能性細胞の特性を維持するために、血清、馴化培地または栄養支持細胞を必要としない増殖する細胞集団を産生することであった。これは、臨床的設定に適していないので、血清および馴化培地の必要性の両方を排除することが重要である。さらに、血清および馴化培地の依存を減少することは、細胞表現型および細胞増殖の維持に対するさらなる制御を提供する。
臍帯血由来の白血球は、富化させた幹細胞集団および前駆細胞集団を残して全ての成熟細胞を枯渇させる。細胞増殖の大部分は、最初の28日で起こり、次いで次第に減少するが、これらの細胞は、約3ヶ月間、増殖因子補充を有する無血清の条件で維持され得る。7〜10日ごとの培養期間の初めに、あるいは連続ベースで実施されるように、培養は48時間ごとに供給することによって高い増殖状態で維持され得、そして、系統ポジティブの集団から系統マイナス細胞を分離し得る。非分化細胞の増殖を維持するために、マウス胎児の能力に起因するFGF−2およびFGF−4に焦点をあてた。さらに、FGF−2およびFGF−4は、細胞が分化を受ける前にダウンレギュレートされ、その結果、それは、幹細胞増殖に対して理想の候補になる。FGF−2およびFGF−4を、+/−血清と+/−サイトカインとの組み合わせで、異なる基質に対して試験した。この研究は、FGF−2とFGF−4との間での相違を示さなかった。しかし、ヒト胎性細胞株を維持するその用途に起因して、FGF−4単独を使用した。FGF−4を含む培地へのSCFおよびFLT−3リガンドの添加は、増殖率を増加した。FGF、SCFまたはFlt−3リガンドを、無血清の条件で単独で使用し、細胞増殖は減少し、その一方で、これらのサイトカインの組み合わせは、幹細胞の産生を改良した。FGF培地、Flt−3リガンド培地に添加した場合、SCFは、細胞増殖率に小さな効果を有したが、幹細胞プールの分化のブロッキングには重要であった(図1)。
試験したいくつかのサイトカイン補充プロトコールは、非常な増殖を生じたが、分化の速度はまた、総細胞集団の幹細胞数の減少を生じた。IL−3とFlt−3およびSCFは、非常な細胞増殖を生じたが、系統マイナス集団は、それらが迅速に分化するにつれてなくなった。TPOとFlt−3およびSCFは、細胞増殖および幹細胞維持のより良好なバランスを生じた。NGF、SCFおよびFLT−3リガンドはまた、FGFに対して類似の効果を与えた。TPO、SCFおよびFLT3リガンドで培養した細胞をまた、FGF、SCF、FLT3リガンド細胞と比較した。TPO処理細胞は、FGF細胞より遙かに良好に増殖するが(12〜20倍増加 対 4〜10倍増加)、TPO細胞は、非造血性系統を生じる範囲はより制限された。
頻繁ではない供給で現れるか、または血清条件において増殖している非分画臍帯血細胞の結果として現れる接着細胞集団は、骨髄吸引物中に見いだされる間葉細胞集団を想起させる。まず、もとの集団において観察された増殖の接着段階が、骨髄において見られたものと類似の間葉細胞集団であるか否かおよび2)非血液分化に向かう強制的工程を調査した。Jiangら(29)は、クローン性細胞集団由来の広範な細胞型を生成し得る、骨髄から単離されたCD45−(非血液)間葉細胞集団を報告した。本発明者らは、1)系統陰性細胞(幹細胞および前駆細胞)、2)系統陽性細胞(成熟血球)および3)非分画UCB細胞を試験した。
血清条件において増殖されたUCB細胞が、ビメンチン陽性細胞および形態的に非血液型に似た細胞を生じ得るという観察は、非血液マーカーの発現について異なる増殖段階でUBC細胞の試験を想起させた。0日目には、Lin−細胞は、試験した全ての非血液マーカーに対して陰性であった。接着性細胞は、FSF培地中での培養の21日目までに出現しないので、2日目、4日目、8日目、14日目および21日目での非接着性の早期段階細胞の能力を、試験した。少なくとも4日(1〜2回の細胞分裂)後のこれらの培養物において、非造血性胚性マーカーおよび早期組織特異的マーカーが生じる。
Fgf、Scf、Flt31細胞が、非血液マーカーを発現し得るという事実にも拘わらず、それらは、血液マーカーを発現するその能力をなお維持する。臍帯由来の細胞は、血液系統を再構成し得る細胞を単離するために使用される様式で収集される。非血液細胞を形成し得る幹細胞集団の成長および増殖はまた、血液細胞を形成するその能力を維持するべきである。造血性幹細胞の維持および増殖を、インビトロアッセイおよびインビボアッセイを使用して試験した。コロニー形成単位(CFU)アッセイ、LTC−ICおよび細胞表面マーカー分析を使用して、造血性幹細胞を示した。その後の実験において、NOD/SCIDアッセイを使用して、幹細胞表現型、およびこれらの細胞が骨髄を移植される能力を確認した。
細胞を、配置し、(培養物の一定の分割によって)単一の細胞の観察を可能にする非常に低い密度で維持した。間質様細胞(接着性平坦細胞)は、増殖の3〜4週間まで、培養物において観察されなかった。丸い細胞(個々の細胞は、反復観察のためにディッシュ中に特定される)を、増殖の3週間後に、より接着性になっていると観察した。その細胞をならし、それらの子孫は、丸い細胞および平坦な細胞の両方を生成し、これらの細胞は、混合したコロニーを形成する。さらに、12週まで懸濁液中で維持される細胞は、生存し続け、非接着性のままであった。1週間間隔で取り出したアリコートを、沈め、接着性にした。逆に、接着性細胞を、トリプシン処理し、懸濁培養に戻し、非接着性細胞として増殖させ続けた。
0日目に、臍帯血液幹細胞を、破骨細胞のマーカー(TRAP)に対して試験した。試験した全てのサンプルは、この破骨細胞マーカーに対して陰性であった。FGF−4、SCFおよびFLT−3L中で7、14、21および28日間増殖させた臍帯血液幹細胞(系統マイナス)は、TRAPに対して高度に陽性であり(50%+)、多核性であり、この両方は、破骨細胞に特徴的である(図6A)。最大数のTRAP陽性細胞が、21日目に出現し(80%)、28日目までには、横ばいになった。破骨細胞様細胞の機能性を測定するために、細胞を、クエン酸カルシウム基質に入れ、その基質の吸収について測定した。FGF、SCF、FLT3リガンド中で増殖させた細胞は、TRAP陽性であるにも拘わらず、機能的破骨細胞ではなかった。その細胞は、クエン酸カルシウム基質の再吸収により観察されるような(図6B)機能的破骨細胞に分化させるために、破骨細胞分化培地(GM−CSFを含む血清含有培地)に入れなければならなかった。従って、培養条件が、破骨細胞前駆体生成を強く誘導した。
分化培養物を使用して、骨芽細胞を生成した。骨芽細胞は、少なくとも14日間増殖因子と共に培養した[増殖培地]UCB Lin−細胞から生成し、次いで、骨特異的分化培地中に入れた。増殖培地中の細胞は、成熟骨マーカーおよび形態に対して陰性であるが、分化プログラムを完了して、骨芽細胞を示す特徴を有する成熟骨細胞を生じる能力を有する。増殖因子の量を増大または減少させて、長期化した培養期間は、アルカリ性の細胞も鉱化細胞も生じない。骨芽細胞をより成熟した骨細胞へと分化させるために、その細胞を、骨特異的培地へ移さなければならない。新たに単離したLin−UCB細胞を、骨培地に入れると、成熟した骨細胞を生成することなく死亡した。これらの同じ細胞を、Fgf、Scf、Flt3リガンド培地中で7日間培養し、次いで、骨特異的培地に移すと、アルカリホスファターゼ陽性の細胞が生じた。さらに、鉱化作用が、試験した細胞が、Alizirinレッド染色に対して陽性であるとして観察された。
UBClin−細胞を、無血清培地中で、FGF+SCF、FLT−3Lいずれかにおいて、7日間増殖させた。細胞は迅速に分裂し、造血性細胞のその丸い形態を維持した。8日の培養期間の最後には、胚性/初期筋肉マーカーデスミンに対して、RT−PCRにより細胞を試験した。陽性シグナルが、得られた(図7)。細胞をまた、成熟筋肉マーカーMyo−Dに対して試験したが、陰性のままであった。FGF中で増殖させた細胞を、筋肉特異的細胞培養培地に入れ、試験すると、免疫細胞学によりmyo−Dおよび筋肉特異的アクチンに対して陽性であった(図8)。
Flk−1は、中胚葉細胞ならびに血管芽細胞および内皮細胞のマーカーである。内皮細胞前駆体は、FLK−1陽性であり、このマーカーは、これらの細胞が機能的内皮細胞への成熟するにつれて失われる。0日目の臍帯血幹細胞は、flk−1に対して陰性である。血管の生成を可能にする3D培養系に入れた場合に、0日目の細胞は全て、死亡した。このことは、他の特異化培地に入れられたLin−UBC細胞の運命と似ている。このことは、未処理日のLin−UBC細胞が、内皮細胞能力を有さないことを示す。Lin−UCB細胞を、FGF−4、SCF、FLT−3LまたはTPO、SCF、FLT−3L中で最低4日間培養し、次いで、特異化内皮細胞培養に入れた場合、その細胞は、内皮細胞へと発生した。
ヒトUBC/Lin−細胞が、機能的肝臓細胞を生成する能力を試験した。この細胞を、良好なインビトロ肝細胞モデルがないので、インビボモデルで試験した。未処理であったか、またはFGF中で7日間培養したかのいずれかのUBC/Lin−細胞を、NOD/SCIDマウスに尾静脈を介して注射した。6〜10週間後、肝臓を単離し、単一の細胞懸濁液を、得た。ヒト血液細胞移植化に対して陽性であったマウスは、HLA−ABC+/CD45−である肝細胞を有した。このことは、その細胞が、ヒト非血液細胞であることを示唆する(5/25)。これらの細胞を、肝臓の単一の細胞懸濁液のFACS分類により単離し、CYP1A2発現について試験した。このサブグループ(2/5)のうち、CYP1A2陽性発現によって評価されるような、機能的肝細胞に対して陽性の細胞は非常に少なかった。その細胞を、ヒト血液細胞に対して特異的な抗CD45抗体および全てのヒト細胞に対して特異的な抗HLA−ABCで染色した。CD45陰性HLA−ABC陽性細胞を、マウス肝臓において同定した(図11A:矢印)。予備データにより、FGF−4処理細胞が、非処理細胞の3倍もの多くの細胞に貢献することが示唆される。この間接的アプローチは、ヒト細胞であるが、血液細胞でない、肝臓中の細胞のみの同定を可能にする。
細胞の間質的性質に起因して、その細胞を、星状細胞マーカーグリア繊維酸性タンパク質(GFAP)に対して試験した。上記の実験に関して、UBC Lin−細胞を、増殖因子を含有する無血清培地中で0〜7日間増殖させた。次いで、その細胞を、PCRによって、GFAP mRNAに対して試験した。0日目の細胞は、陰性であったが、7日間増殖させた細胞は、陽性であった(図13)。細胞をまた、免疫細胞学によりGFAPタンパク質発現に対して試験した。G−5星状細胞増殖補充物(星状細胞増殖を促進するために使用した)を補充した培地に入れた細胞はまた、GFAPに対して陽性であった。
ヒトUCB lin−細胞を、0〜7日間、増殖培地(Fgf,Scf,Flt3リガンド)で増殖し、初期神経マーカーネスチンについて試験した。0日目に試験したUCB/Lin−細胞は、ネスチンに対して陰性だった。一旦、細胞を7日間増殖すると、これらはPCRで陽性となった(図14)。これらの細胞は神経幹細胞潜在力を示していたので、この細胞を各種の培地で増殖し、成熟神経マーカーおよび神経形態学の発現を誘導する。あるポイントにおいて、この細胞は、ニューロスフィア形態を呈し得ることが予想された。神経幹細胞の増殖に関して公開されるように(31)、ニューロスフィアを誘導するために、この細胞をFGF/EGF/ヘパリン/DMEM/F12HAMS培地(血清有り、および血清無し)で増殖した。0日目の細胞および8日目の細胞は、無血清培地において3日後に死滅した(細胞は、血清ポジティブの培地中で生存したが、これらはニューロスフィアを形成しなかった)。上記に列挙された実験に関する限り、任意の神経培養物中の0日目の細胞は、任意の神経マーカーを発現しなかった。任意の神経マーカーまたは形態を発現するために、UBC/Lin−細胞を、明細書に記載される増殖培地中で、まず増殖しなければならなかった。
マウス骨髄誘導間質細胞は、同じ培養物中に破骨細胞および脂肪細胞を形成し得る。UCB Lin−細胞を、増殖培養物へ移し、そして脂肪細胞について様々な日に試験した。7〜28日間増殖された細胞は、Sudan IVで染色される場合、脂肪細胞に対して低いレベル(<1%)で陽性であった。1%未満の細胞が陽性に染色したが、増殖因子GM−CSFを欠失した同じ培養物の中に検出された細胞はないので、これは有意である(図16)。
少なくとも一つの組織特異的マーカーに対するポジティブな細胞の合わせた百分率は、最小限で、単一細胞が、少なくとも二つの無関係のマーカーを発現していることを示す。これは、一つの細胞が二つ以上の組織を生じ得ることを示唆する。7日間のみの増殖培地におけるUBC/Lin−細胞の増殖は、全ての細胞がCD45+/HLA−ABC+/CD33+であるという結果となり、これは、全ての観察された細胞型の原因となる単一集団、多能性集団、クローナルな集団の存在を示唆する。これを確認するために、単一細胞を、96ウェルプレートへ置き、そして増殖培地中で増殖した。平均して5/96ウェルのみが、14日の増殖後、健全な分裂細胞を含有した。1つのウェルのみが、21日後、増殖を継続し、そして、静止および死滅する前に、全部で10週間継続した。この実験を、1ウェルにつき10細胞を用いて、繰り返し行った。7日後、10/96ウェルが、増殖集団を含んだ。
臍帯血に由来する多能性幹細胞の産生を可能にする簡単な培養系を報告する。UCBの有用性および大量のサンプルのバンキングの容易さは、HLA適合サンプルの有用性を確実にする。さらに、簡易化された培養系は、造血用途を超える組織治療に対して、臍帯血細胞の増殖された使用を可能にする。
増殖因子は、増殖、誘導および組織のパターニングにおいて、直接的または間接的のいずれかで含まれる。細胞増殖を、細胞周期のG1期の間、細胞外シグナル(ホルモン、増殖因子およびサイトカイン)により調節する。これらのシグナル(セリン/スレオニンキナーゼの別個のセットによって、刺激性および抑制性の両方である)に応答する細胞は、サイクリンと呼ばれる短活動性調節タンパク質との結合に起因するサイクリン依存性キナーゼに対してcdkと称した。四つの哺乳類G1サイクリンは、D1、D2、D3およびEで特徴付けられている。各Dサイクリンは、一つ以上のキナーゼcdk2、cdk4およびcdk6に結合し得る(34)。さらに、これらは増殖因子刺激に対して直接応答し、そして、正常な内因性細胞周期シグナルに対してより小さく応答する(35)ので、Dサイクリンは特有であると思われる。Dサイクリンに対する決定的な応答期間は、酵母で定義された通り、G1(START)である。このポイント後、この細胞は、増殖因子にもはや依存せず細胞周期を継続する(36)。
増殖系は、造血組織および非造血組織を生じる能力を有するヒト臍帯血誘導性幹細胞の発達およびその後の増殖を可能にする記載される。
(造血幹細胞増殖)
本実施例において検討される実験は、一人の成人患者または複数の成人患者に対して、首尾よい骨髄移植を実施するのに十分な細胞を獲得するため、単一UCBサンプル由来の造血組織をより産生するように設計された。これが臨床設定に適さないので、これは血清および馴化培地の必要性の両方を排除するために重要である。さらに、血清培地および馴化培地に対する依存を減少することは、幹細胞表現型および細胞増殖の維持に対するさらなる制御を提供する。このために、ヒト胚性線維芽細胞株(CM−HEF)由来の馴化培地存在下で、UCB−HSCを維持するための種々の増殖因子の能力を試験した。次いで、無血清培地/馴化培地非含有培地において、細胞を試験した。幹細胞の維持および増殖を、コロニー形成単位(CFU)アッセイおよび細胞表面マーカー分析を幹細胞増殖の初期指標として用いて試験した(図17)。その後の実験において、LTC−ICアッセイおよびNOD/SCIDアッセイを、幹細胞表現型を確認するために、そしてこれらの細胞の移植の能力を確認するために使用した(図5)。
Claims (33)
- 単離された細胞組成物を産生する方法であって該組成物は、異なる型の非造血細胞を形成する潜在力または増強された潜在力を有する細胞を含むまたは本質的に含む組成物であって、該方法は以下:
(a)造血細胞を獲得する工程;
(b)ポジティブセレクションまたはネガティブセレクションによって、造血幹細胞および造血前駆細胞について造血細胞を富化し、富化された造血細胞調製物を獲得する工程;および
(c)増殖条件下で富化された造血幹細胞および造血前駆細胞を培養し、その結果、調製中の細胞が、潜在力または増強された潜在力を発揮し異なる型の非造血細胞を形成する工程、
を包含する方法。 - 工程(a)における前記造血細胞が、臍帯血から得られる、請求項1に記載の方法。
- 工程(c)における前記増殖条件が、前記富化された造血細胞調製物中の細胞が細胞周期を十分に完了するのに十分な時間の間、一つ以上のポジティブな増殖因子の存在下で該細胞を培養し、非造血細胞および非造血組織を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を獲得する工程を包含する、請求項1に記載の方法。
- 前記ポジティブな増殖因子が、線維芽細胞増殖因子(FGF)ファミリーのメンバーであり、該ファミリーは、FGF−4およびFGF−2、上皮増殖因子(EGF)、幹細胞因子(SCF)、トロンボポエチン(TPO)、FLT−3リガンド、インターロイキン−3(Il−3)、インターロイキン−6(IL−6)、神経増殖因子(NGF)、VEGF、顆粒球マクロファージ増殖因子(GM−CSF)、HGFまたはNotchを含む、請求項3に記載の方法。
- 前記ポジティブな増殖因子が、一つ以上のFGF−4、FGF−2、IL−3、SCF、FLT3リガンド、TPO、GM−CSFおよびNGFである、請求項4に記載の方法。
- 工程(c)における前記増殖条件が、前記富化される造血細胞調製物中の細胞が細胞周期を十分に完了するのに十分な時間の間、以下、
(i)FGF−2もしくはFGF−4、FLT3リガンドおよびSCF;
(ii)TPO、FLT−3リガンドおよびSCF;または、
(iii)NGF、SCFおよびFLT−3リガンド、
の存在下で該細胞を培養し、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を獲得する工程を包含する、請求項1に記載の方法。 - 前記富化された造血細胞調製物が、CD45+HLA−ABC+細胞を本質的に含み、該調製物が、好ましくは、CD45+HLA−ABC+Lin−細胞を含む、請求項1〜6のいずれかに記載の方法。
- 前記非造血細胞が、内皮細胞、破骨細胞、骨芽細胞、脂肪細胞、筋細胞、星状細胞、腎細胞、膵細胞、肝細胞、網膜細胞、角膜細胞、結合組織細胞または神経細胞である、請求項1〜7のいずれかに記載の方法。
- インビトロまたはインビボにおいて、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を誘導し、非造血細胞系統の細胞および非造血組織系統の組織へ分化する工程をさらに包含する、請求項1〜8のいずれかに記載の方法。
- 請求項1〜9のいずれかの方法によって産生された細胞性組成物。
- 細胞性組成物における前記細胞が、非造血細胞の形態学的特徴、生理学的特徴および/または免疫学的特徴を表す細胞へ分化する潜在力を有する、請求項10に記載の細胞性組成物。
- 細胞性組成物における前記細胞が、胚性組織マーカーまたは初期非造血組織マーカーを発現する、請求項10または11に記載の細胞性組成物。
- 単離された細胞性組成物および精製された細胞性組成物が、以下:
(a)CD45+HLA−ABC+;
(b)造血細胞または造血前駆細胞へ分化し得ること;
(c)一つ以上、二つ以上、三つ以上、四つ以上、五つ以上または六つ以上の異なる非造血細胞型へ分化し得ること;
(d)丸型および非接着性の増殖必要条件;ならびに
(e)幹細胞因子レセプター(KIT)+、
によって特徴付けられる細胞を含む、細胞性組成物。 - 単離された細胞性組成物および精製された細胞性組成物が、以下:
(a)CD45+HLA−ABC+;
(b)造血細胞または造血前駆細胞へ分化し得ること;
(c)一つ以上、二つ以上、三つ以上、四つ以上、五つ以上または六つ以上の異なる非造血細胞型へ分化し得ること;
(d)丸型および非接着性の増殖必要条件;
(e)幹細胞因子レセプター(KIT)+
(f)FLT3リガンドレセプター+;
(g)FGFレセプター+;
(h)胚性幹細胞タンパク質の発現;
(i)HoxB4+;
(j)Flk−1+;
(k)CD34±;
(l)非腫瘍形成性;
(m)CD38±;ならびに
(n)臍帯血に由来すること、
によって特徴付けられる細胞を含む、細胞性組成物。 - 細胞性組成物における前記細胞が、遺伝的に改変されている、請求項1〜14のいずれかの細胞性組成物。
- 外傷、年齢、代謝もしくは毒性損傷、疾患または特発性喪失に起因して損失したまたは損傷された体組織、器官、構成要素または構造を置換するために、請求項1〜15のいずれかに記載の細胞性組成物を使用する方法。
- 非造血細胞を含む障害および疾患の緩和に指向される細胞治療および遺伝子治療において、請求項1〜16のいずれかに記載の細胞性組成物を使用する方法。
- 造血細胞または免疫系細胞を含む障害および疾患の緩和に指向される細胞治療および遺伝子治療において、請求項1〜17のいずれかに記載の細胞性組成物を使用する方法。
- 非造血細胞に関係する条件を有する患者を処置する方法であって、該方法は、請求項1〜18のいずれかの細胞性組成物を移す工程であって、該調製物は、患者へ非造血細胞を形成するための潜在力を有する細胞を含み、ここで、該細胞が非造血細胞へ分化する工程を包含する、方法。
- 請求項1〜19のいずれかに記載の細胞性組成物を使用し、非造血細胞を形成するための潜在力を有する細胞または該細胞から分化した細胞の成長または細胞の活性を調節する可能性のある治療法をスクリーンする方法。
- 請求項1〜20のいずれかの細胞性組成物を使用し、疾患のモデル系を調製するために、または増殖因子もしくはホルモンを産生する方法。
- 臍帯血から造血幹細胞および造血前駆細胞を増殖する方法であって、該方法は、以下(a)臍帯血から造血幹細胞および造血前駆細胞を獲得する工程;(b)増殖条件下で造血幹細胞および造血前駆細胞を培養する工程;ならびに(c)増大数の造血幹細胞および造血前駆細胞を単離する工程、を包含する、方法。
- 造血幹細胞および造血前駆細胞の数が、少なくとも約2倍増加される、請求項22に記載の方法。
- 造血幹細胞および造血前駆細胞が、CD45+HLA−ABC+であり、該細胞が好ましくはCD45+HLA−ABC+Lin−である、請求項22または請求項23に記載の方法。
- (b)において生じる培養細胞は、以下:
(a)CD45+HLA−ABC+;
(b)造血細胞または造血前駆細胞へ分化し得ること;
(c)一つ以上、二つ以上、三つ以上、四つ以上、五つ以上または六つ以上の異なる非造血細胞型へ分化し得ること;
(d)丸型および非接着性の増殖必要条件;ならびに
(e)幹細胞因子レセプター(KIT)+
、で特徴づけられる、請求項22、請求項23または請求項24に記載の方法。 - 造血細胞もしくは免疫系細胞を含む障害または疾患を緩和するために、増殖された造血幹細胞および造血前駆細胞を患者に投与する工程をさらに包含する、請求項22、請求項23、請求項24または請求項25に記載の方法。
- 混合された細胞集団において、請求項13に記載の細胞性組成物の細胞の存在を同定する方法であって、該方法は、以下:請求項13に記載のマーカー(a)またはマーカー(e)に対して、免疫遺伝学的に特異的な抗体またはそのフラグメントに該細胞集団を曝露する工程であって、該マーカーの存在が、該細胞集団における該細胞の存在を表示する工程、を包含する、方法。
- 請求項1〜27のいずれかの細胞性組成物を含む薬学的組成物であり、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤を含む薬学的組成物。
- 患者自身の造血細胞から自家移植のための非造血細胞を獲得する方法であって、該方法は、以下(a)該患者から造血細胞を含むサンプルを獲得する工程;(b)富化された細胞調製物より分離する工程であって該細胞調製物は、造血幹細胞および造血前駆細胞、好ましくはCD45+HLA−ABC+細胞、さらに好ましくはCD45+HLA−ABC+Lin−細胞を含む、工程;(c)潜在力または増強された潜在力を有する細胞を含む細胞性組成物を産生するための増殖条件下で、該細胞を培養し、非造血細胞を形成する工程、を包含する、方法。
- 試験物質の活性をアッセイする方法であって、該方法は以下:
(a)増殖条件下で造血幹細胞および造血前駆細胞を含む富化された造血細胞調製物において細胞を培養し、細胞性組成物を獲得する工程であって、該組成物は、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を含む、工程;
(b)必要に応じて、インビトロの分化条件下において、該非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を培養する工程;
(c)工程(a)または工程(b)において培養された該細胞を試験物質に曝露する工程;ならびに
(d)該細胞の生存あるいは該細胞の形態学的特性、機能的特性または生理学的特性および/もしくは分子生物学的特性に対する該試験物質の効果の存在または非存在を検出し、ここで該細胞の細胞生存特性、形態学的特性、機能的特性または生理学的特性および/もしくは分子生物学的特性を変える効果が、前記試験物質の活性を表す、工程、
を包含する、方法。 - 非造血細胞に関係する障害を処置する可能性をもつ新しい薬物をスクリーンするための方法であって、該方法は、以下:
(a)非造血細胞に関係する障害を有する患者由来のサンプルから造血細胞を獲得する工程;
(b)造血幹細胞および造血前駆細胞を含む富化された造血細胞調製物から造血細胞を調製する工程;
(c)増殖条件下で富化された造血細胞調製物を培養し、細胞性組成物を獲得する工程であって、該組成物は、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を含む、工程;
(d)必要に応じて、インビトロの分化条件下で、非造血細胞を形成する潜在力または増強された潜在力を有する細胞を培養する工程;
(e)(c)または(d)において培養された該細胞を、可能性をもつ新しい薬剤に曝露する工程;ならびに
(f)該細胞の生存あるいは該細胞の形態学的特性、機能的特性または生理学的特性および/もしくは分子生物学的特性に対する該可能性をもつ新しい薬剤の効果の存在または非存在を検出し、ここで該細胞の細胞生存特性、形態学的特性、機能的特性または生理学的特性および/もしくは分子生物学的特性を変える効果は、該可能性をもつ新しい薬剤の活性を表す工程、
を包含する、方法。 - 前記細胞性組成物が、請求項13または請求項14に規定される、請求項29、請求項30または請求項31に記載される方法。
- 請求項10〜15、および28のいずれかに記載される細胞性組成物を産生するキット、または請求項1〜9、16〜27、および29〜32のいずれかの方法を実施するキット。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012519005A (ja) * | 2009-02-27 | 2012-08-23 | セルラー ダイナミクス インターナショナル, インコーポレイテッド | 多能性細胞の分化 |
KR20160002969A (ko) * | 2013-04-26 | 2016-01-08 | 유니베르시테 피에르 에 마리에 쿠리에 (파리 6) | 망막 전구 세포, 망막 색소 상피 세포 및 신경 망막 세포를 얻기 위한 방법 |
JP2017506511A (ja) * | 2014-02-14 | 2017-03-09 | ナショナル ユニバーシティー オブ アイルランド, ゴールウェイ | 無血清培地 |
Families Citing this family (92)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7311905B2 (en) * | 2002-02-13 | 2007-12-25 | Anthrogenesis Corporation | Embryonic-like stem cells derived from post-partum mammalian placenta, and uses and methods of treatment using said cells |
EP2305795B1 (en) * | 2000-12-06 | 2019-07-03 | Celularity, Inc. | Method of collecting placental stem cells |
US20080152629A1 (en) * | 2000-12-06 | 2008-06-26 | James Edinger | Placental stem cell populations |
EP1367892B1 (en) | 2001-02-14 | 2013-10-30 | Anthrogenesis Corporation | Renovation and repopulation of decellularized tissues and cadaveric organs by stem cells |
US7129034B2 (en) * | 2001-10-25 | 2006-10-31 | Cedars-Sinai Medical Center | Differentiation of whole bone marrow |
DE60236016D1 (de) * | 2001-12-21 | 2010-05-27 | Mount Sinai Hospital Corp | Zelluläre zusammensetzungen und verfahren zur deren bereitung und verwendung |
KR20050086780A (ko) * | 2002-11-26 | 2005-08-30 | 안트로제네시스 코포레이션 | 세포요법제, 세포요법제 단위 및 이를 이용한 치료방법 |
ES2564045T3 (es) | 2003-06-27 | 2016-03-17 | DePuy Synthes Products, Inc. | Células derivadas del post-parto para su uso en el tratamiento de enfermedad del corazón y el sistema circulatorio |
US9572840B2 (en) | 2003-06-27 | 2017-02-21 | DePuy Synthes Products, Inc. | Regeneration and repair of neural tissue using postpartum-derived cells |
US9592258B2 (en) | 2003-06-27 | 2017-03-14 | DePuy Synthes Products, Inc. | Treatment of neurological injury by administration of human umbilical cord tissue-derived cells |
US7875272B2 (en) * | 2003-06-27 | 2011-01-25 | Ethicon, Incorporated | Treatment of stroke and other acute neuraldegenerative disorders using postpartum derived cells |
US8491883B2 (en) * | 2003-06-27 | 2013-07-23 | Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis using umbilical derived cells |
US8518390B2 (en) | 2003-06-27 | 2013-08-27 | Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc | Treatment of stroke and other acute neural degenerative disorders via intranasal administration of umbilical cord-derived cells |
US8790637B2 (en) | 2003-06-27 | 2014-07-29 | DePuy Synthes Products, LLC | Repair and regeneration of ocular tissue using postpartum-derived cells |
GB0329449D0 (en) * | 2003-12-19 | 2004-01-28 | Omnicyte Ltd | Stem cells |
EP1711598A4 (en) * | 2004-01-30 | 2009-04-08 | Lifecord Inc | METHOD OF ISOLATING AND CULTURING MULTIPOTENTED PRECURSOR / STEM CELLS FROM CORDIAL BLOOD BLOOD AND METHOD OF INDUCING THEIR DIFFERENTIATION |
US20050221482A1 (en) * | 2004-03-31 | 2005-10-06 | Burt Richard K | Methods and compositions for obtaining hematopoietic stem cells derived from embryonic stem cells and uses thereof |
US7622108B2 (en) * | 2004-04-23 | 2009-11-24 | Bioe, Inc. | Multi-lineage progenitor cells |
ATE506431T1 (de) * | 2004-04-23 | 2011-05-15 | Bioe Llc | Mehrfachlinien-vorläuferzellen |
HUE039132T2 (hu) * | 2004-12-14 | 2018-12-28 | Kwalata Trading Ltd | Õssejtek szabályozása |
US20060171930A1 (en) * | 2004-12-21 | 2006-08-03 | Agnieszka Seyda | Postpartum cells derived from umbilical cord tissue, and methods of making, culturing, and using the same |
US20060153815A1 (en) * | 2004-12-21 | 2006-07-13 | Agnieszka Seyda | Tissue engineering devices for the repair and regeneration of tissue |
WO2006083394A2 (en) * | 2004-12-21 | 2006-08-10 | Ethicon, Inc. | Postpartum cells derived from placental tissue, and methods of making, culturing, and using the same |
EP1835924B1 (en) | 2004-12-23 | 2013-08-21 | Ethicon, Incorporated | Treatment of parkinson's disease and related disorders using postpartum derived cells |
PL1831356T3 (pl) | 2004-12-23 | 2017-07-31 | DePuy Synthes Products, Inc. | Komórki poporodowe pochodzące z tkanki pępowinowej i sposoby ich wytwarzania i stosowania |
US9388382B2 (en) | 2005-10-05 | 2016-07-12 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Isolation of CD14 negative, CD45 positive and CD117 positive embryonic-like stem cells free of monocytes from human umbilical cord blood mononuclear cells |
NZ567335A (en) * | 2005-10-13 | 2012-02-24 | Anthrogenesis Corp | Immunomodulation using placental stem cells |
NZ569530A (en) * | 2005-12-13 | 2011-07-29 | Univ Kyoto | Nuclear reprogramming factor |
EP1971681B1 (en) * | 2005-12-16 | 2017-08-23 | DePuy Synthes Products, Inc. | Compositions and methods for inhibiting adverse immune response in histocompatibility-mismatched transplantation |
EP1976975B1 (en) * | 2005-12-19 | 2012-08-01 | Ethicon, Inc. | In vitro expansion of postpartum derived cells in roller bottles |
SG170789A1 (en) * | 2005-12-28 | 2011-05-30 | Ethicon Inc | Treatment of peripheral vascular disease using postpartum-derived cells |
US9125906B2 (en) | 2005-12-28 | 2015-09-08 | DePuy Synthes Products, Inc. | Treatment of peripheral vascular disease using umbilical cord tissue-derived cells |
AU2006332679A1 (en) * | 2005-12-29 | 2007-07-12 | Anthrogenesis Corporation | Co-culture of placental stem cells and stem cells from a second source |
KR20180105266A (ko) | 2005-12-29 | 2018-09-27 | 안트로제네시스 코포레이션 | 태반 줄기 세포 집단 |
TW200734462A (en) | 2006-03-08 | 2007-09-16 | In Motion Invest Ltd | Regulating stem cells |
CN102626517B (zh) * | 2006-03-24 | 2015-07-29 | 儿童医疗中心有限公司 | 调节造血干细胞生长的方法 |
EP2019858B1 (en) * | 2006-04-17 | 2012-06-13 | BioE LLC | Differentiation of multi-lineage progenitor cells to respiratory epithelial cells |
CA2666789C (en) * | 2006-10-18 | 2016-11-22 | Yong Zhao | Embryonic-like stem cells derived from adult human peripheral blood and methods of use |
EP2679221B1 (en) | 2006-10-20 | 2020-09-23 | Children's Medical Center Corporation | Method to enhance tissue regeneration |
JP2010507392A (ja) * | 2006-10-23 | 2010-03-11 | アントフロゲネシス コーポレーション | 胎盤細胞集団で骨欠損を治療するための方法及び組成物 |
EP2120977B1 (en) | 2007-02-12 | 2013-05-15 | Anthrogenesis Corporation | Treatment of inflammatory diseases using placental stem cells |
US20100143476A1 (en) * | 2007-02-14 | 2010-06-10 | March Keith L | Composition for stimulating formation of vascular structures |
WO2008104065A1 (en) * | 2007-02-26 | 2008-09-04 | Mount Sinai Hospital | Neural cell preparations and methods of making and using them |
CA2679178A1 (en) * | 2007-02-26 | 2008-09-04 | Mount Sinai Hospital | Compositions and methods for treating peripheral vascular diseases |
WO2008128069A1 (en) * | 2007-04-11 | 2008-10-23 | Roger Deutsch | Methods for diagnosing biological samples containing stem cells |
US9404084B2 (en) | 2007-06-20 | 2016-08-02 | Kwalata Trading Limited | Regulating stem cells |
US20080318314A1 (en) * | 2007-06-20 | 2008-12-25 | Valentin Fulga | Production from blood of cells of neural lineage |
CN101835479A (zh) * | 2007-07-25 | 2010-09-15 | 佰欧益有限公司 | 多系祖细胞分化为软骨细胞 |
CA2701435C (en) * | 2007-10-05 | 2017-06-20 | Ethicon, Inc. | Repair and regeneration of renal tissue using human umbilical cord tissue-derived cells |
US8236538B2 (en) * | 2007-12-20 | 2012-08-07 | Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc | Methods for sterilizing materials containing biologically active agents |
EP2271748B1 (en) * | 2008-03-20 | 2018-01-17 | University of Florida Research Foundation, Inc. | Enhancing vessel lesion homing and repair potential of stem cells |
US20090291494A1 (en) * | 2008-05-21 | 2009-11-26 | Bioe, Inc. | Differentiation of Multi-Lineage Progenitor Cells to Pancreatic Cells |
WO2009155041A2 (en) * | 2008-05-28 | 2009-12-23 | Children's Medical Center Corporation | Method to modulate hematopoietic stem cell growth |
DK2331109T3 (da) | 2008-08-22 | 2013-09-08 | Anthrogenesis Corp | Fremgangsmåder og sammensætninger til behandling af knogledefekter med placentale cellepopulationer |
GB0818725D0 (en) | 2008-10-13 | 2008-11-19 | Habib Nagy A | Pharmaceutical composition |
PL2379088T3 (pl) | 2008-12-19 | 2018-07-31 | DePuy Synthes Products, Inc. | Leczenie płuca oraz chorób i zaburzeń płucnych |
US10179900B2 (en) * | 2008-12-19 | 2019-01-15 | DePuy Synthes Products, Inc. | Conditioned media and methods of making a conditioned media |
AU2009327383B2 (en) * | 2008-12-19 | 2014-08-28 | DePuy Synthes Products, LLC | Regeneration and repair of neural tissue following injury |
WO2010071862A1 (en) * | 2008-12-19 | 2010-06-24 | Ethicon, Incorporated | Umbilical cord tissue derived cells for treating neuropathic pain and spasticity |
US9056085B2 (en) | 2009-02-03 | 2015-06-16 | Children's Medical Center Corporation | Methods for enhancing hematopoietic stem/progenitor cell engraftment |
WO2010091052A2 (en) | 2009-02-03 | 2010-08-12 | Children's Medical Center Corporation | Methods for enhancing hematopoietic stem/progenitor cell engraftment |
PL2411504T3 (pl) * | 2009-03-26 | 2017-10-31 | Depuy Synthes Products Inc | Komórki ludzkiej tkanki pępowinowej jako terapia choroby Alzheimera |
WO2011127113A1 (en) | 2010-04-08 | 2011-10-13 | Anthrogenesis Corporation | Treatment of sarcoidosis using placental stem cells |
SG10201913920PA (en) | 2010-05-12 | 2020-03-30 | Abt Holding Co | Modulation of splenocytes in cell therapy |
WO2011143411A1 (en) * | 2010-05-12 | 2011-11-17 | Abt Holding Company | Modulation of splenocytes in cell therapy for traumatic brain injury |
WO2012046065A2 (en) * | 2010-10-06 | 2012-04-12 | Omnicyte Limited | Culture method |
WO2012048298A2 (en) | 2010-10-08 | 2012-04-12 | Caridianbct, Inc. | Methods and systems of growing and harvesting cells in a hollow fiber bioreactor system with control conditions |
US9884909B2 (en) | 2010-12-01 | 2018-02-06 | Alderbio Holdings Llc | Anti-NGF compositions and use thereof |
US9078878B2 (en) | 2010-12-01 | 2015-07-14 | Alderbio Holdings Llc | Anti-NGF antibodies that selectively inhibit the association of NGF with TrkA, without affecting the association of NGF with p75 |
EP3434691A1 (en) | 2010-12-01 | 2019-01-30 | AlderBio Holdings LLC | Anti-ngf compositions and use thereof |
US9067988B2 (en) | 2010-12-01 | 2015-06-30 | Alderbio Holdings Llc | Methods of preventing or treating pain using anti-NGF antibodies |
US11214610B2 (en) | 2010-12-01 | 2022-01-04 | H. Lundbeck A/S | High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as Pichia pastoris |
US9539324B2 (en) | 2010-12-01 | 2017-01-10 | Alderbio Holdings, Llc | Methods of preventing inflammation and treating pain using anti-NGF compositions |
US8969315B2 (en) | 2010-12-31 | 2015-03-03 | Anthrogenesis Corporation | Enhancement of placental stem cell potency using modulatory RNA molecules |
US20130331326A1 (en) * | 2011-02-21 | 2013-12-12 | Duke University | Method of inducing hematopoietic reconstruction |
WO2012166844A2 (en) | 2011-06-01 | 2012-12-06 | Anthrogenesis Corporation | Treatment of pain using placental stem cells |
WO2013055476A1 (en) | 2011-09-09 | 2013-04-18 | Anthrogenesis Corporation | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis using placental stem cells |
EP3381456A1 (en) | 2011-12-02 | 2018-10-03 | Fate Therapeutics, Inc. | Improved methods for treating ischemia |
CA2857640C (en) | 2011-12-02 | 2021-11-16 | Fate Therapeutics, Inc. | Enhanced stem cell composition |
CA2869681A1 (en) | 2011-12-23 | 2013-06-27 | Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc | Detection of human umbilical cord tissue-derived cells |
WO2014150602A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Fate Therapeutics, Inc. | Cell potency assay for therapeutic potential |
US9943545B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-04-17 | Fate Therapeutics, Inc. | Stem cell culture media and methods of enhancing cell survival |
WO2015073751A1 (en) * | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Applied Stemcell, Inc. | Methods for isolating lineage-specific cells |
US9617506B2 (en) | 2013-11-16 | 2017-04-11 | Terumo Bct, Inc. | Expanding cells in a bioreactor |
US11008547B2 (en) | 2014-03-25 | 2021-05-18 | Terumo Bct, Inc. | Passive replacement of media |
CN106715676A (zh) | 2014-09-26 | 2017-05-24 | 泰尔茂比司特公司 | 按计划供养 |
WO2017004592A1 (en) | 2015-07-02 | 2017-01-05 | Terumo Bct, Inc. | Cell growth with mechanical stimuli |
US11685883B2 (en) | 2016-06-07 | 2023-06-27 | Terumo Bct, Inc. | Methods and systems for coating a cell growth surface |
US11104874B2 (en) | 2016-06-07 | 2021-08-31 | Terumo Bct, Inc. | Coating a bioreactor |
CN110612344B (zh) | 2017-03-31 | 2023-09-12 | 泰尔茂比司特公司 | 细胞扩增 |
US11624046B2 (en) | 2017-03-31 | 2023-04-11 | Terumo Bct, Inc. | Cell expansion |
WO2019055817A1 (en) * | 2017-09-14 | 2019-03-21 | The Regents Of The University Of California | EX VIVO CONSERVATION AND EXPANSION OF STEM CELLS |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5091206A (en) * | 1987-10-26 | 1992-02-25 | Baxter Diagnostics Inc. | Process for producing magnetically responsive polymer particles and application thereof |
US5677136A (en) * | 1994-11-14 | 1997-10-14 | Systemix, Inc. | Methods of obtaining compositions enriched for hematopoietic stem cells, compositions derived therefrom and methods of use thereof |
US5665557A (en) * | 1994-11-14 | 1997-09-09 | Systemix, Inc. | Method of purifying a population of cells enriched for hematopoietic stem cells populations of cells obtained thereby and methods of use thereof |
US5728581A (en) * | 1995-06-07 | 1998-03-17 | Systemix, Inc. | Method of expanding hematopoietic stem cells, reagents and bioreactors for use therein |
WO1998018486A1 (en) | 1996-10-25 | 1998-05-07 | Icogen Corporation | Use of leptin to stimulate hematopoiesis |
US20020155108A1 (en) * | 1998-05-04 | 2002-10-24 | Biocrystal, Ltd. | Method for ex vivo loading of antigen presenting cells with antigen, and a vaccine comprising the loaded cells |
CA2328524A1 (en) * | 1998-05-29 | 1999-12-02 | Osiris Therapeutics, Inc. | Human cd45+ and/or fibroblast + mesenchymal stem cells |
AU6056299A (en) * | 1998-09-21 | 2000-04-10 | Musc Foundation For Research Development | Non-hematopoietic cells, including cardiomyocytes and skeletal muscle cells, derived from hematopoietic stem cells and methods of making and using them |
EP1218487A2 (en) | 1999-09-23 | 2002-07-03 | Cell Science Therapeutics | Methods and devices for obtaining non-hematopoietic lineage cells from hematopoietic progenitor cells |
JP2004500824A (ja) | 2000-03-09 | 2004-01-15 | クリオ−セル インターナショナル インコーポレーティッド | 脳および脊髄の修復のための神経組織源としてのヒト臍帯血 |
WO2001071016A1 (en) | 2000-03-23 | 2001-09-27 | Stemcells, Inc. | Pluripotential stem cells |
WO2003038077A1 (fr) * | 2001-10-30 | 2003-05-08 | Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. | Procede d'amplification des cellules hematopoietiques souches |
DE60236016D1 (de) * | 2001-12-21 | 2010-05-27 | Mount Sinai Hospital Corp | Zelluläre zusammensetzungen und verfahren zur deren bereitung und verwendung |
US20050221482A1 (en) * | 2004-03-31 | 2005-10-06 | Burt Richard K | Methods and compositions for obtaining hematopoietic stem cells derived from embryonic stem cells and uses thereof |
CA2679178A1 (en) * | 2007-02-26 | 2008-09-04 | Mount Sinai Hospital | Compositions and methods for treating peripheral vascular diseases |
-
2002
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2009
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-
2012
- 2012-10-12 US US13/650,596 patent/US20130064801A1/en not_active Abandoned
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012519005A (ja) * | 2009-02-27 | 2012-08-23 | セルラー ダイナミクス インターナショナル, インコーポレイテッド | 多能性細胞の分化 |
KR20160002969A (ko) * | 2013-04-26 | 2016-01-08 | 유니베르시테 피에르 에 마리에 쿠리에 (파리 6) | 망막 전구 세포, 망막 색소 상피 세포 및 신경 망막 세포를 얻기 위한 방법 |
KR102146007B1 (ko) | 2013-04-26 | 2020-08-19 | 유니베르시테 피에르 에 마리에 쿠리에 (파리 6) | 망막 전구 세포, 망막 색소 상피 세포 및 신경 망막 세포를 얻기 위한 방법 |
JP2017506511A (ja) * | 2014-02-14 | 2017-03-09 | ナショナル ユニバーシティー オブ アイルランド, ゴールウェイ | 無血清培地 |
US10472605B2 (en) | 2014-02-14 | 2019-11-12 | National University Of Ireland, Galway | Serum-free medium |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2470707C (en) | 2014-07-08 |
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Kelley et al. | Collection and Expansion of Stem Cells |
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