JP2005503813A - オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体を含む印刷物、その製造方法、ならびにその配送及び／又は保管方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体を含む印刷物。また、この印刷物を製造する方法、ならびに少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法。
【効果】本発明の印刷物は、その印刷物から目的のオリゴマー及び／又はポリマーを簡便かつ迅速に科学者に提供するのに有効である。
【選択図】図１
【効果】本発明の印刷物は、その印刷物から目的のオリゴマー及び／又はポリマーを簡便かつ迅速に科学者に提供するのに有効である。
【選択図】図１
Description
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体を含む印刷物、それを製造する方法、ならびに該オリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
分子性物質（例えばゲノムDNA、cDNA、RNA、mRNA及びPNA）の関心のあるクローンに関する科学刊行物又は科学論文を参照する科学者は、実験を行うためにこのクローンを使いたいと思う場合がある。そのクローンを入手するためには、かかる科学者は、その刊行物の著者と連絡をとり、それを入手するための一連の形式的な手続きを開始しなければならない。場合によっては、刊行物に載っている住所が変わっていたり、その科学者が別の研究室に移動していて、そのクローンの入手に長時間かかってしまうことがある。また、関心のある配列を含むベクター又は細胞がもはや入手不可能であり、科学者はそれをすぐに入手する可能性を絶たれて、再度それを作製しなくてはならない場合もありうる。
【０００３】
科学者が目的の分子性物質を依頼した後で、その分子性物質は、当該技術分野で公知の配送システムに従い、例えば試験管の形態でその科学者に配送される。また、依頼があり次第、目的の分子性物質は、RNA、PNA、他の高分子断片又はDNAを固定又は印字した複数のシート状支持体の形態で配送することもできる（米国特許第6,258,542号）。しかし、当該技術分野で公知のこれら全ての配送システムでは、興味を持った受取人からの依頼があると、所望の分子性物質を配送装置の発送及び製造に適する形態に調製する必要がある。さらに、この配送には数ヶ月かかることもある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、依頼する必要なしに少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを迅速かつ直接的に入手できる印刷物を提供することにより、当技術分野におけるこの問題を解決するものである。
【０００５】
本発明はまた、かかる印刷物を製造する方法も提供する。
【０００６】
本発明は更に、オリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、１種以上のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体（例えば紙）を含む様々な種類の刊行物を製造した。
【０００８】
本発明の主題は以下のとおりである。
【０００９】
１． 少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体を含む印刷物。
【００１０】
２． 綴じられていない形態である、１項に記載の印刷物。
【００１１】
３． 綴じられた形態である、１項に記載の印刷物。
【００１２】
４． 前記支持体が印刷物において綴じられていない、３項に記載の印刷物。
【００１３】
５． 前記支持体が綴じられた印刷物の１頁として綴じられている、３項に記載の印刷物。
【００１４】
６． 少なくとも２個の支持体を含み、これらの支持体が共に綴じられていない、１項に記載の印刷物。
【００１５】
７． 少なくとも１枚の印刷頁から構成される、１項に記載の印刷物。
【００１６】
８． 定期刊行物、雑誌、論文、冊子、小冊子、リーフレット、パンフレット、報告書、ポスター、カード及びラベルからなる群から選ばれる、１〜７項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００１７】
９． 前記支持体が非水溶性、水分解性及び／又は水溶性の支持体である、１〜８項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００１８】
１０． 前記非水溶性の支持体が主成分としてセルロースを含む、９項に記載の印刷物。
【００１９】
１１． 前記水溶性の支持体がオブラートの形態である、９項に記載の印刷物。
【００２０】
１２． 前記支持体がカードの形態である、１〜11項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００２１】
１３． 前記オリゴマーがオリゴヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴ糖、PNA、及びそれらの混合物からなる群から選ばれる、１〜12項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００２２】
１４． 前記ポリマーがポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖、PNA及びそれらの混合物からなる群から選ばれる、１〜12項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００２３】
１５． 前記オリゴマー又はポリマーが断片又は完全な分子である、１〜14項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００２４】
１６． 前記オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドがゲノムDNA、cDNA、RNA、mRNA、PNA、及びそれらの組合せからなる群から選ばれる、13又は14項に記載の印刷物。
【００２５】
１７． 前記オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドが断片、EST配列、長鎖配列、全コード配列、および全長配列からなる群から選ばれる、16項に記載の印刷物。
【００２６】
１８． 前記オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドが、１以上の増幅及び／又は連結プライマー及び／又はオリゴヌクレオチドプローブである、13〜17項のいずれか１項に記載の印刷物。
１９． ゲノムDNAに含まれる遺伝子のエクソンを増幅及び連結するための１セットのプライマーを含む、１〜１８項のいずれかに１項に記載の印刷物。
２０． 前記セットのプライマーが所望の遺伝子の各エクソンに対する１対のプライマーを含み、一つのエクソンに対する各対の少なくとも１個のプライマーが部分的に次のエクソンに相補的である、１９項記載の印刷物。
２１． 前記セットのプライマーが、遺伝子のエクソンの増幅及び連結によるゲノムDNAからのcDNA及び／又は全長cDNAの合成に適したものである、２０項記載の印刷物。
２２． １種以上の酵素及び／又はバッファーをさらに含む、１〜２１項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００２７】
２３． 少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体を含む印刷物の製造方法であって、印刷の前又は後にオリゴマー及び／又はポリマーを支持体に適用する工程を含む上記方法。
【００２８】
２４． 前記オリゴマー及び／又はポリマーを、それを前記支持体上に固定又は印字することにより該支持体に適用する、２３項に記載の方法。
２５． 前記オリゴマー及び／又はポリマー、並びに支持体が請求項１〜２２に規定したものである、２３項記載の方法。
【００２９】
２６． 印刷物に含まれる少なくとも１つの支持体に適用した少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法であって、１）印刷物を印刷する前又は後にオリゴマー及び／又はポリマーを支持体上に適用する工程；ならびに２）該印刷物を配送又は保管する工程を含む上記方法。
【００３０】
２７． オリゴマー及び／又はポリマーの溶液をピン、シリンジ又はインクジェットプリンターにより支持体に直接適用又は付着させることによって、前記オリゴマー及び／又はポリマーを前記支持体に適用する、２６項に記載の方法。
２８． 前記オリゴマー及び／又はポリマー、並びに支持体が請求項１〜２２に規定したものである、２６又は２７項に記載の方法。
【００３１】
２９． さらに、前記オリゴマー及び／又はポリマーを、前記支持体からの溶出により回収する工程を含む、２３〜２８項のいずれか１項に記載の方法。
【００３２】
３０． 前記の回収が、前記支持体を装置に挿入し、該装置により該支持体からの溶出及び回収を自動的に行うことにより実施される、２９項に記載の方法。
【００３３】
３１． 前記支持体がカードの形態である、３０項に記載の方法。
【００３４】
３２． 前記カードが、前記オリゴマー及び／又はポリマーの該カード上での位置に関する情報を含むバーコード、チップ又はラベルを含む、３１項に記載の方法。
【００３５】
３３． オペレーターが目的のオリゴマー及び／又はポリマーを選択し、前記装置が該目的のオリゴマー及び／又はポリマーを前記支持体から自動的に溶出させ回収する、２３〜３２項のいずれか１項に記載の方法。
３４． cDNAを合成する方法であって、
a)支持体及び／又は印刷物にエクソンの増幅及び／又は連結のための少なくとも１セットのプライマーを適用する工程、
b)前記支持体及び／又は印刷物から前記の少なくとも１セットのプライマーを回収する工程、
c)前記セットのプライマーを鋳型DNA、酵素及びバッファーと混合し、増幅及び／又は連結を行う工程
を含む前記の方法。
３５． 工程a)の後に、前記支持体及び／又は印刷物を保管及び／又は配送する、３４項記載の方法。
３６． 前記酵素及びバッファーが工程a)の間に支持体及び／又は印刷物に適用される、３４又は３５項に記載の方法。
３７． 増幅及び／又は連結の産物がcDNA及び／又は全長cDNAである、３４〜３６項のいずれか１項に記載の方法。
３８． 前記cDNA及び／又は全長cDNAが回収され、ヌクレオチドの挿入／欠失、SNP及び配列決定分析に用いられる、３７項記載の方法。
３９． 前記cDNA及び／又は全長cDNAが回収され、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質の発現に用いられる、３７項記載の方法。
４０． ヌクレオチドの挿入／欠失の決定、又はSNP分析の診断方法である、３８項記載の方法。
４１． 少なくとも１種のプライマー又は１セットのプライマーを適用した支持体及び／又は印刷物を含むキット。
４２． 前記支持体及び／又は印刷物がさらに、少なくとも１種の酵素、バッファー、ゲノムDNA、cDNA、RNA、mRNA、PNA、プラスミド、ベクター及び核酸を含む、４１項記載のキット。
４３． エクソンの増幅及び／又は連結のための少なくとも１セットのプライマーを適用した少なくとも１個の支持体及び／又は印刷物を含む、ゲノムの鋳型からcDNA及び／又は全長cDNAを合成するためのキット。
【００３６】
本発明の記載の目的のための「オリゴマー」なる用語は、少数個の構成単位を含む分子から構成される任意の物質又は任意の物質の種類として定義される。その単位は、１又は２以上の種からなるものであってもよい。本発明の記載の目的のための「ポリマー」なる用語は、多数個の構成単位（又は「マー(mer)」）を含む分子から構成される任意の物質として定義され、１又は２以上の種からなるものであってもよい。
【００３７】
本発明によるオリゴマーの例は、オリゴヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴ糖、PNA、又はそれらの混合物である。本発明によるポリマーの例は、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖、PNA、及びそれらの混合物である。従って、本発明によれば、支持体及び／又は印刷物に適用又は印刷されるオリゴマー及び／又はポリマーは、例えば、DNA、cDNA、RNA、PNA、プラスミド、プライマー、タンパク質、酵素、などでありうる。従って、本発明の印刷物は、迅速で、効率的で廉価なサンプル配送システムである。例えば、cDNAクローンはこの方法により有利に配送することができる。さらに、例えば、印刷物及び／又は支持体に適用又は吸着させるバッファーなどの溶液もまた本発明の範囲内である。しかしながら、これらの溶液はバッファーに限定されない。
本発明の印刷物としては、定期刊行物、雑誌、論文、冊子、巻物、小冊子、リーフレット、パンフレット、報告書、ポスター、アブストラクトを集めたもの、カード、ラベルなど当業界に知られているあらゆる種類の刊行物が挙げられる。
本発明の印刷物は、少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマー又はそれらの混合物を適用した少なくとも１つの支持体を含む。
支持体は、例えば、印刷物の頁、リーフレットの頁、予め決めておいた分割線又は印をつけた線で印刷物から取り去ったり、切り出したりする頁、印刷物に追加された固定されていない頁、印刷物の頁や表紙に添付又は固定されたり、頁や表紙の上に固定されたポケットに挿入されたカード、オブラードの形態などの任意の形態で、印刷物に添付、付加又は包含されうる。印刷物及び支持体の限定的ではないいくつかの例を図面に示す。しかしながら、本発明の印刷物及び支持体は図面に示したものに限定されない。
【００３８】
本発明において、支持体は、その上に少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーが適用されるならば、どのような物質から製造されてもよい。例えば、支持体は、水溶性、水分解性又は非水溶性の物質から製造できる。水溶性物質の例としては、オブラート（wafer）［アメリカン・ヘリテージ・ディクショナリー（American Heritage Dictionary）, 1980年版による］が挙げられる。水溶性物質は、例えばコムギ粉ペースト（ステッドマンの英和医学辞典、第３版）を含みうる。オブラートは、どのような形態であってもよい（例えば、アメリカン・ヘリテージ・ディクショナリーを参照）。オブラートは、好ましくは薄い紙様のシートの形態としうる。しかしながら、水溶性物質はオブラードに限定されない。水分解性(water-dissolvable)物質としては、水に溶解して、その構成成分がオリゴマー及び／又はポリマーを水中に放出するものが挙げられる。水分解性の紙の一例としては、三島製紙株式会社（日本）により製造された紙がある。三島紙はカルボキシメチルセルロースを用いて製造されている。この種類の紙に関する記載は、Japan. Soc. Col. Mater. 64(11), Nov.1991, pp.696-701にも見られる。この紙を水に浸漬すると、紙を構成している繊維が互いに分離し、その結果、オリゴマー及び／又はポリマーが水中に放出される。本発明においては、60MDP三島紙が用いられた。非水溶性物質の例としてはセルロース製の物質が挙げられる。
【００３９】
本発明では、セルロースを主成分として製造される物質、さらに具体的には通常の普通コピー（PPC）紙などが、支持体として用いることができる。上記のような水分解性の紙（例えば、三島紙）も用いることができる。
【００４０】
さらに、セルロースを別のシート上にコーティングしてフィルム状セルロースとして補強したものを、支持体として用いてもよい。この場合、本発明によるオリゴマー及び／又はポリマーの溶液（例えばDNA溶液）を、支持体のコーティングしたセルロースフィルムに付着させることが好ましい。
【００４１】
また、オリゴマー及び／又はポリマーを固定した支持体の表面は、プラスチックなどでコーティングして、該支持体を補強するようにしてもよい。
【００４２】
支持体の厚さは、例えば１mm以下とすることができる。この厚さを非常に薄くすれば（例えば0.1mm程度）、オリゴマー及び／又はポリマー固定支持体を多数枚積層して配布する場合にも、その作業性は向上する。なぜならば、それらは嵩張らないからである。
【００４３】
支持体は、印刷物とは別になっていてもよいし、印刷物の１頁であってもよい。支持体が印刷物とは別になっている場合、支持体には、支持体に適用したオリゴマー及び／又はポリマーの名称や支持体の番号などの任意の情報が印刷されていてもよい。本発明のオリゴマー及び／又はポリマーを含む印刷物を代表する例（限定する例ではない）は、異なる主題に関するいくつかの科学論文が掲載されているNature、Science又はGenome Researchのような科学定期刊行物である。少なくとも１つの論文は、支持体の上にスポットされたDNA、RNA、cDNA、プラスミド、プライマー、などを含み、その支持体は、刊行物に追加された独立の頁であったり、刊行物に添付されたり、包含される頁より小さいサイズの支持体であったり、定期刊行物の１頁、好ましくは科学論文の１頁であったりするかもしれない。科学者は、ある特定のDNAについて論じている科学論文を読んだ後、支持体からこのDNAをすぐに回収し、それを用いた実験をすることを望むかもしれない。本発明のさらなる見地として、印刷物は実験を行うために必要な一つ以上あるいはすべての成分を含むだろう。例えば、本発明の印刷物は、DNA、プライマー、酵素、バッファー、他の溶液、などを含んでもよく、その結果、科学者は、実験を行うための物質及び／又は適切な濃縮物をその紙から回収するだけで、すぐに入手することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４４】
以下、図面を参照しながら、本発明の印刷物の種々の実施形態の例を説明する。
【００４５】
図１には、オリゴマー及び／又はポリマー（例えば少なくとも１種のDNA、cDNA、RNA、mRNA、PNA、プライマー、プラスミド、ベクター、酵素、バッファーなど）のスポット（３）を含む論文である印刷物（１）を示す。
この論文は、折り畳んだリーフレットの形態である。論文の印刷用紙が支持体（２）であり、この上にオリゴマー及び／又はポリマーが適用されている。印刷用紙は、格子状の表の格子の中心にオリゴマー及び／又はポリマーのスポットを有する。科学者は、この論文を読み、そのオリゴマー及び／又はポリマーを用いて実験を行ないたいと思った時、リーフレットから該スポットを含むストリップを格子目（５）に沿って切り取り、オリゴマー及び／又はポリマーを該ストリップから溶出させることにより、この物質を迅速に得ることができる。オリゴマー及び／又はポリマーが核酸である場合には、当業界で公知の増幅技術、例えば、適当なプライマーを用いるPCRにより有利に回収することができる。これらのプライマーは印刷物の同じ支持体又は別々の支持体に包含させてもよい。回収した核酸は、例えば、Sambrookら、1989のような公知技術に従い、例えば、大腸菌のような原核又は真核宿主細胞に移すことができる。この論文では、読者がそれを読んだ後で、オリゴマー及び／又はポリマーを簡便かつ迅速に入手できるようになっている。読者は、オリゴマー及び／又はポリマーを所有する著者又は寄託機関に連絡を取り、それを手に入れるまで長時間待つ必要はない。
【００４６】
図２には、印刷物と組み合せた、支持体に適用したオリゴマー及び／又はポリマーの製品を示す。支持体（２）はカードの形態であり、印刷物（１）に添えてある。この印刷物はリーフレットの形態である。図２において、カードは、印刷物に設けられているスリット（９）に該カードの隅を挿入することによって印刷物に添えてある。このカードはオリゴマー及び／又はポリマーの１つ以上のスポット（３）を有する。各スポットは、カードからミシン目（６）に沿って切り取ることにより容易に切り離すことができる。好ましくは、オリゴマー及び／又はポリマーがオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドである場合、このカードはさらに、該オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドを増幅するのに必要なPCRプライマーのスポットを含んでもよい。印刷物は、該オリゴマー及び／又はポリマーに関する情報が印字されたもの、例えば該オリゴマー及び／又はポリマーの名称、DNA配列、アミノ酸配列などを含む。この製品は安定で、かつ嵩張らない。したがって、それは小さな場所で室温にて保管できる。また、それは簡便に配送できる。
【００４７】
図３には、印刷物に適用したオリゴマー及び／又はポリマーの製品を示す。印刷物（１）は、左側に穴（７）が空いているルーズリーフ紙の形態である。このルーズリーフ紙が支持体（２）であり、この上にオリゴマー及び／又はポリマーが適用されている。このルーズリーフ紙は、格子状の表の格子の中心にオリゴマー及び／又はポリマーのスポット（３）を有する。ユーザーは、ルーズリーフ紙からスポットを含むストリップを格子目（５）に沿って切り取り、そのストリップから該オリゴマー及び／又はポリマーを溶出させることによって、該オリゴマー及び／又はポリマーを得ることができる。この印刷物は、オリゴマー及び／又はポリマーに関する情報が印字されたもの、例えばオリゴマー及び／又はポリマーの名称、DNA配列、アミノ酸配列などを含む。この製品は安定で、かつ嵩張らない。したがって、それは小さな場所で室温にて保管できる。また、それは簡便に配送できる。
【００４８】
図４には、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体（２）を添付シートとして有する冊子、定期刊行物、雑誌などである印刷物（１）を示す。この添付シートは、オリゴマー及び／又はポリマーの１つ以上のスポット（３）を有する。各スポットは、該シートからミシン目（６）に沿って切り取ることにより容易に切り離すことができる。また、このシートは、オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドを増幅するためのPCRプライマーを含んでもよい。この冊子は、オリゴマー及び／又はポリマーに関する情報が印字されたもの、例えばオリゴマー及び／又はポリマーの名称、ならびにDNA配列、アミノ酸配列、該アミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドの３次元構造などを含む。科学者達は、この冊子から目的のオリゴマー及び／又はポリマーに関する情報のみならず、該オリゴマー及び／又はポリマーの物質を入手し、実験の実施を容易かつ迅速に開始できる。このタイプの冊子は、冊子と添付シートを別々の工場で製造できるので、製造業者にとって都合が良い。添付シートを製造するためには、オリゴマー及び／又はポリマーを処理するための特殊な装置及び／又は設備を使用する必要があり、これらは通常は印刷工場には備わっていないからである。製造業者がオリゴマー及び／又はポリマーのスポットを含む添付シートを冊子とは別に販売してくれれば、ユーザーにとって都合が良い。この理由は、ユーザーは、オリゴマー及び／又はポリマーのスポットを全て使い切ってしまったら、シートをもう１枚だけ購入すればそのオリゴマー及び／又はポリマーを入手できるからである。
【００４９】
図５には、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体（２）を添付カードとして有する冊子である印刷物（１）を示す。カードは、冊子の頁に設けられているポケット（８）に入っている。好ましくは、このポケットは透明フィルムで作られる。このカードは、オリゴマー及び／又はポリマーの１つ以上のスポット（３）を有する。各スポットは、カードからミシン目（６）に沿って切り取ることにより容易に切り離すことができる。またこのカードは、オリゴヌクレオチド及び／又はポリヌクレオチドの増幅のためのPCRプライマーを含んでもよい。この冊子は、オリゴマー及び／又はポリマーに関する情報が印字されたもの、例えば名称、DNA配列、アミノ酸配列、該アミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドの３次元構造などを含むことができる。科学者達は、この冊子から目的のオリゴマー及び／又はポリマーに関する情報のみならず、該オリゴマー及び／又はポリマーの物質を入手し、実験の実施を容易かつ迅速に開始できる。このタイプの冊子は、冊子と添付カードが別々の工場で製造できるので、製造業者にとって都合が良い。添付カードを製造するためには、オリゴマー及び／又はポリマーを処理するための特殊な装置及び／又は設備を使用する必要があり、これらは通常は印刷工場には備わっていないからである。製造業者がオリゴマー及び／又はポリマーのスポットを含む添付カードを冊子とは別に販売してくれれば、ユーザーにとって都合が良い。この理由は、ユーザーは、オリゴマー及び／又はポリマーのスポットを全て使い切ってしまったら、カードをもう１枚だけ購入すればそのオリゴマー及び／又はポリマーを入手できるからである。
【００５０】
図６には、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体（２）を頁として有する冊子である印刷物（１）を示す。この頁は、オリゴマー及び／又はポリマーの１つ以上のスポット（３）、ならびに該オリゴマー及び／又はポリマーの名称が印字されたものを含む。各スポットは、冊子からミシン目（６）に沿って切り取ることにより容易に切り離すことができる。また、この頁は、オリゴヌクレオチド及び／又はポリヌクレオチドの増幅のためのPCRプライマーを含んでもよい。この冊子は、別の頁に、オリゴマー及び／又はポリマーに関する情報が印字されたものを含む。この情報の例としては、オリゴマー及び／又はポリマーの名称、DNA配列、アミノ酸配列、該アミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドの３次元構造などが挙げられる。科学者達は、この冊子から目的のオリゴマー及び／又はポリマーに関する情報のみならず、該オリゴマー及び／又はポリマーの物質を入手し、実験の実施を容易かつ迅速に開始できる。このタイプの冊子は、情報と物質が別々の頁に提供されているという点で、ユーザーにとって都合が良い。ユーザーは、多くの種類のオリゴマー及び／又はポリマーを手に入れたいと思った時、これらの物質を、各オリゴマー及び／又はポリマーの情報と物質が同一頁に提供されている場合よりも短時間に入手できる。
【００５１】
図７には、表紙（11）、綴じ込みリング（10）及び複数枚のルーズリーフ紙（12）から構成されるルーズリーフ型冊子である印刷物（１）を示す。ルーズリーフ紙は図３で説明したとおりである。しかしながら、表紙(11)は必須ではない。例えば、表紙のない綴じ込みリングを用いることができる。複数枚のルーズリーフ紙は、表紙に固定されている綴じ込みリングにより（あるいは、表紙のない綴じ込みリングにより）全て一緒に綴じられて、ルーズリーフ型冊子を形成している。その冊子に新たなオリゴマー及び／又はポリマーを追加する場合、製造業者は、ユーザーに補充用の紙を提供すればよい。また、例えばユーザーがオリゴマー及び／又はポリマーのスポットを全て使ってしまった場合には、製造業者は、そのユーザーに所望の頁をもう１枚提供すればよい。
【００５２】
図８には、オリゴマー及び／又はポリマーのスポット（３）を含む論文である印刷物（１）を示す。これは、図１の論文に変更を加えたものである。この論文の印刷用紙が支持体（２）であり、この上にオリゴマー及び／又はポリマーが適用されている。この印刷用紙は、格子状の表の格子の中心にオリゴマー及び／又はポリマーのスポットを有する。印刷用紙はまた、別の格子状の表の格子の中心に、オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドの増幅のために用いられるPCRプライマーのスポット（４）を含んでもよい。科学者は、この論文を読んで、オリゴマー及び／又はポリマーを用いて実験を実施したいと思った時には、オリゴマー及び／又はポリマーの所望のスポットを含むストリップを論文から格子目（５）に沿って切り取り、これらの物質を該ストリップから溶出させることにより、これらの物質を迅速に入手できる。
本発明のさらなる見地として、印刷物は、実験を行うために必要な１つ以上又は全ての成分を含んでもよい。例えば、本発明の印刷物は、少なくとも１つのDNA、プライマー、プラスミド、ベクター、酵素、バッファー、他の溶液などを含んでもよく、その結果、科学者は、実験を行うための物質及び／又は濃縮物を紙から回収するだけで、迅速に入手することができる。従って、また、本発明は、実験を行うために必要な一部又は全部の化合物及び溶液を含む印刷物に関する。
【００５３】
図９には、オリゴマー及び／又はポリマー（例えばDNA、cDNA、RNA、mRNA、PNA、プラスミド、酵素、バッファーなど）を含む印刷文字（21）と、オリゴヌクレオチド及び／又はポリヌクレオチドの増幅に使用するための特定のPCRプライマーをさらに含む印刷文字（20）とを有する論文である印刷物（１）を示す。この論文は折り畳んだ１枚のリーフレットの形態である。また、この論文は、折り畳んだ１枚以上のリーフレットを含んでもよい。この論文はフリーの形態でもありうるし、あるいは、例えば、当業界で通常知られている解除可能な留め具手段により互いに綴じられることもある。論文の印刷用紙が支持体（２）であり、この上にオリゴマー及び／又はポリマーが適用されている。この印刷用紙は、表の線と線との間の領域に、オリゴマー及び／又はポリマーを含む印刷文字（21）と、該プライマーを含む印刷文字（20）とを含む。科学者は、この論文を読んで、このオリゴマー及び／又はポリマーを用いて実験を実施したいと思った場合には、印刷文字を含むストリップをリーフレットから切り取り、これらの物質を該ストリップから溶出させることにより、これらの物質を迅速に入手できる。この論文では、読者がそれを読み終わった後で、そのオリゴマー及び／又はポリマーを容易かつ迅速に入手できるようになっている。読者は、オリゴマー及び／又はポリマーを所有する著者又は寄託機関に連絡を取り、それ（それら）を手に入れるまで長時間待つ必要がない。
【００５４】
図10には、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体（２）から構成される印刷物（１）の１つの実施形態を示す。この印刷物（支持体）はカードの形態である。このカードは、バーコード（30）、ならびにオリゴマー及び／又はポリマーの１つ以上のスポット（３）を有する。各スポットは、カードからミシン目（６）に沿って切り取ることにより容易に切り離すことができる。カードの番号（すなわち「100」）、オリゴマー及び／又はポリマーによりコードされるタンパク質の名称（すなわち「Lysozyme」）、ならびに該オリゴマー及び／又はポリマーの種類（すなわち「cDNA library」）がカードに印字されている。このカードは、PCRプライマーのような任意の別のオリゴマーのスポットを含んでもよい。バーコードから、バーコード読取り装置を用いてオリゴマー及び／又はポリマーに関する情報を得ることができる。この情報の例としては、DNA配列、アミノ酸配列、該アミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドの３次元構造などが挙げられる。このカードは、他のカードと一緒にされ、１つの箱にこれらのカードのリストと共にパッケージすることができる。このタイプのカードは、オリゴマー及び／又はポリマーを小さな場所で室温にて保管できる点で都合が良い。また、オリゴマー及び／又はポリマーを簡便に配送するのに有効である。
【００５５】
図10に示す印刷物の別バージョンでは、様々な種類のオリゴマー及び／又はポリマーをスポットとして支持体（カード）（２）に適用することができ、バーコード（30）は、該カード上のオリゴマー及び／又はポリマーの各々の位置に関する情報、ならびに他の情報、例えばオリゴマー及び／又はポリマーの各々の名称、DNA配列、アミノ酸配列、該アミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドの３次元構造などを含むことができる。オペレーターは、カードに適用したオリゴマー及び／又はポリマーに関する情報を得るためには、バーコード読取り装置でバーコードを読み取ればよい。この情報から、オペレーターは、目的のオリゴマー及び／又はポリマーを選択し、適当な装置に該カードから該目的のオリゴマー及び／又はポリマーを溶出させ回収するよう指示を与えればよい。
バーコードの使用はこの態様に限定されず、本発明のいかなる支持体にも用いることができる。
【００５６】
オリゴマー及び／又はポリマーがスポットとして支持体に固定される場合、１つ以上のスポットを含むストリップをハサミやカッターなどで切り取ることができ、そのストリップはマイクロテストチューブに移すことができ、該オリゴマー及び／又はポリマーは該ストリップから溶出させ、ポリメラーゼ連鎖反応により通常の条件下で増幅することができる。
【００５７】
この場合、ポリメラーゼ連鎖反応のためのプライマーはドット、粉末又は液体の形態で供給できる。
【００５８】
スポットの形態のプライマーは、どの頁のどの場所に配置してもよく、あるいは、付録として印刷物の最後に添えてもよい。
【００５９】
たとえオリゴマー及び／又はポリマーの種類が様々であったとしても、共通のプライマーをある程度使うことができてプライマーの種類の数を減らすことができる場合には、プライマーは、アンプルや小試験管に入れることにより、液体又は乾燥粉末の形態で供給することも可能である。公知の技術に従い（例えば、Sambrookら、1989）、プラスミド、ベクター及び／又は真核若しくは原核宿主細胞、例えば、大腸菌などに核酸を導入することにより、核酸を回収することもできる。核酸は、次に使用するまでこの形態で維持及び保管することができる。
本発明は、少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体を含む印刷物の製造方法であって、印刷の前又は後にオリゴマー及び／又はポリマーを支持体に適用する工程を含む上記方法を提供する。オリゴマー及び／又はポリマーは公知の技術に従い支持体に固定又は印刷することができる。
本発明は、また、印刷物に含まれる少なくとも１つの支持体に適用した少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法であって、i)印刷物を印刷する前又は後にオリゴマー及び／又はポリマーを支持体上に適用する工程；ならびにii)前記オリゴマー及び／又はポリマーを含む該印刷物を配送又は保管する工程を含む上記方法を提供する。オリゴマー及び／又はポリマーが核酸である場合、本発明は、印刷物及び／又は支持体に適用した核酸を含む前記印刷物及び／又は支持体を用意し、該核酸を宿主細胞に導入することによって回収し、該核酸を保管することにより、核酸を保管する方法を開示する。
従って、本発明は、印刷物の印刷の前又は後に支持体に少なくとも１種の核酸を適用する工程、該印刷物を配送する工程、溶出、増幅及び／又は支持体から宿主分子へ前記核酸を導入することにより、前記少なくとも１種の核酸を回収する工程を含む、生物学的分子の配送方法を開示する。支持体に適用された生物学的材料がcDNAを含むプラスミドである場合には、プラスミドは支持体から回収される。その後、プラスミドは、例えばPCRのような公知の技術に従って増幅処理され、ｃDNAが増幅される。その後、ゲル電気泳動が行われ（例えば、Sambrookら、1989)、cDNAがゲルから回収され、いかなる目的にも使用されうる。以上のように、増幅されたcDNAは宿主細胞に「保管」され、次に使用されるまでその形態で保存されうる。また、宿主細胞に含まれるDNAはこの形態でさらに配送されうる。
本発明は、また、実験に必要な一部又は全ての物質、例えば、核酸、プライマー、酵素及び／又は溶液（例えば、バッファー）を含む印刷物を提供する。これらの分子又は物質のすべては支持体に適用可能で、その後、読者や受取人により回収可能で、その結果、読者や受取人は実験を迅速に行うことができ、それぞれの物質を要求したり、その物質の濃度を測定したり、その物質を調製したりする必要がなくなる。
従って、本発明は、印刷物で実験を行うために必要なオリゴマー及び／又はポリマーを用意、配送及び／又は保管する方法に関する。
しかしながら、この態様は、印刷物に限定されない。実験を行うために必要な一部又は全ての物質、例えば、核酸、プライマー、酵素及びバッファーを一枚の支持体（例えば、カードやシート）に適用することができる。従って、本発明は、また、実験を行うために必要な１種以上又は全ての物質を含む一枚の支持体に関する。さらに、本発明は、支持体に適用した、実験を行うために必要な一種以上又は全ての物質を含む、実験を行うためのキットを提供する。一種以上の物質は、核酸、プライマー、酵素、バッファー、他の溶液などでありうる。好ましくは、実験を行うために必要な全ての物質を支持体に適用することができる。支持体は、本発明のある態様で記載したように、紙、カード、シートなどでありうる。好ましくは、キットは、本発明に従い、水分解性の紙（例えば、三島紙）に適用した、実験を行うための１種以上の物質及び溶液を含む。
本発明の支持体は、また、前述のようにオブラードでありうる。従って、本発明は、オブラードに適用したオリゴマー及び／又はポリマーを含む印刷物に関し、そして、オリゴマー及び／又はポリマーを適用したオブラードを含む印刷物を用意することにより、オリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法に関する。
さらに、本発明は、また、オリゴマー及び／又はポリマーを含むオブラードを提供し、そして、オブラードにオリゴマー及び／又はポリマーを適用し、それを配送及び／又は保管することにより、オリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法を提供する。オリゴマー及び／又はポリマーは、オブラードを水に溶解することにより回収することができる。さらに、本発明は、また、ゲノムDNAからcDNA、エクソン及び好ましくは全長cDNAを合成する方法を提供する。この方法は、一つの特定の遺伝子、例えばヒト黄体形成ホルモン(hLH)を含むゲノムDNAから行う（しかしながら、この方法は、この遺伝子の全長FL又はエクソンの調製に限定されず、任意の遺伝子又はエクソンが調製されうる。）。
出発物質は、細胞（例えば、ヒトの細胞）の全ゲノムDNAである。ゲノムDNAは（例えば、BD Bioscience Clontech, USから）購入したり、標準的な技術で調製することができる。ゲノムDNAの供給源は、患者から得られるいかなる材料（例えば、血液）であってもよい。本発明の目的のためには、ある形態のゲノムDNA（血液、体液、液体、又は他の任意の生物学的材料から調製されたゲノムDNA、購入されたゲノムDNA又は精製された形態で調製されたゲノムDNA）を本明細書では「鋳型」又は「鋳型DNA」として示す。
FL-hLH（全長のヒト黄体形成ホルモン、これは２つのエクソンから構成される）を調製するためにこの方法を実現する例を図１９及び実施例８に示す。所望の遺伝子のエクソンを増幅及び／又は連結可能な１セットのプライマーを用いる。このセットのプライマーは、各エクソンとハイブリダイゼーション可能な１対のプライマーから構成される。第一の１対のプライマーの一つが第一のエクソンとハイブリダイズし、同時に、他の（次の）エクソンの末端と部分的にハイブリダイズする。例えば、図１７において、プライマーHsLH1Rtはエクソン１とハイブリダイズしたが、エクソン２の末端と部分的に相補的でもある。プライマーHsLH2Fはエクソン２とハイブリダイズするが、エクソン１の末端と部分的に相補的でもある。最終増幅産物は、所望の遺伝子のすべてのエクソンを含むcDNAを含み、従ってFL-cDNA（全長cDNA）である。
図１９及び実施例８に示すように、鋳型DNAからcDNAを調製するために複数のセットのプライマーを用いることができる。この実施例において、エクソン１の増幅のためのプライマー対、エクソン２の増幅のためのプライマー対、これらのエクソンの増幅及び連結のためのプライマーセット（従って、全てのプライマーセットを含む）を同じ支持体にスポットすることができる。この場合、全長の遺伝子だけでなく、１種以上のエクソンを合成することになる（図２０に示す）。従って、本発明は、また、少なくとも１セットのプライマーを適用した印刷物及び／又は支持体であって、該セットのプライマーはゲノムDNAからFL-cDNAを合成することができる前記支持体を提供する。このセットのプライマーは、鋳型DNAに含まれる遺伝子のエクソンを増幅するためのプライマー及び増幅されたエクソンをFL-cDNAに連結するためのプライマーを含む。印刷物及び／又は支持体は、また、１種以上のエクソンを増幅するための１種以上のプライマーを含んでもよい。好ましくは、印刷物及び／又は支持体は、FL-cDNAの合成のための１セットのプライマーを含んでもよく、随意に、さらに、１種以上のエクソンを増幅するための１セット以上のプライマーを含んでもよい。
印刷物及び／又は支持体は、さらに、これらの反応を触媒する１種以上の酵素（例えば、Taqポリメラーゼ）及び／又は実験を行うために必要な任意の溶液（例えば、バッファー溶液）を含んでもよい。
従って、印刷物及び／又は支持体の読者や受取人は、印刷物及び／又は支持体から少なくとも１セットのプライマーを回収し、鋳型DNA、酵素及びバッファーを添加することができる。酵素及びバッファーも印刷物及び／又は支持体に適用されている場合には、受取人は、異なる供給源から酵素及びバッファーを得る必要なく、全ての要素をそこから回収することができる。その後、読者又は受取人は実験を行い、得られたFL-cDNAを回収することができる。実験の反応生成物は公知の技術（例えば、Sambrookら、1989）に従い、電気泳動ゲルにかけ、FL-cDNAのDNAバンド及びエクソンのバンドをゲル上で同定することができる。
従って、本発明は、ゲノムDNAからFL-cDNAを合成することができる少なくとも１セットのプライマーを印刷物及び／又は支持体に適用する工程、及び該印刷物及び／又は支持体を配送及び／又は保管するする工程を含む、印刷物及び／又は支持体を配送及び／又は保管する方法を提供する。
患者の１種以上の特定の遺伝子を解析することを望んでいる医者は、患者から血液又は他の生物学的材料のサンプル（鋳型）を得ることが可能である。その後、医者は、１セット以上のプライマー（各セットのプライマーは特定のFL-cDNA遺伝子の増幅及び連結に特異的である）が適用された支持体を含む本発明のキットを使用することができる。好ましくは、支持体は、さらに、酵素（例えば、Taqポリメラーゼ）、及びバッファー溶液を含む。医者又は補助者は、支持体からプライマーセット及び随意の酵素及びバッファーを回収し、それらを鋳型DNAと混合することができる。増幅（例えば、PCR)プロセス及び電気泳動を行う。電気泳動はFL-cDNA遺伝子を示す。特定の遺伝子の欠失／挿入がある場合には、医者は迅速に診断を行うことができる。
得られたFL-cDNAはSNP解析（例えば、配列決定）又はタンパク質発現アッセイに用いることもできる。
従って、本発明は、鋳型DNAからcDNA及び／又はFL-cDNAを合成するための少なくとも１セットのプライマーを含む支持体を含むキット及び／又は診断キットを提供する。本発明は、また、1)患者から鋳型DNA（血液、体液又は他の生物学的材料）を調製する工程、2)支持体から少なくとも１セットのプライマーを回収し、随意に支持体から酵素及びバッファーも回収する工程、3)鋳型、プライマーセット、酵素及びバッファーを混合する工程、4)増幅及び／又は連結プロセスを行う工程、5)電気泳動工程及び6)得られたcDNA（エクソン）及び／又はFL-cDNAに基づいて診断を決定する工程を含む、診断方法も提供する。
本発明は、また、1)支持体から少なくとも１セットのプライマー、随意に酵素及びバッファーを回収する工程、2)プライマーセット、酵素及びバッファーを鋳型と混合する工程、3)エクソンの増幅及び／又は連結を行う工程、4) 電気泳動工程、5)随意に電気泳動手段からcDNA及び／又はFL-cDNAを回収する工程を含む、鋳型からcDNA及び／又はFL-cDNAを調製する方法を提供する。
さらに、上記の方法は、得られたcDNA及び／又はFL-cDNAをSNPや欠失又は挿入の解析をする工程、又はペプチド、ポリヌクレオチド又はタンパク質を発現させる工程を含んでもよい。SNP及び異常解析は、cDNA及び／又はFL-cDNAの配列決定又は他の公知の技術により行うことができる。
ペプチド、ポリヌクレオチド又はタンパク質発現は、任意のペプチド、ポリヌクレオチド又はタンパク質発現アッセイ、例えば、Roche Diagnosticの「Protein truncation test」又は「Linked SP6/T7 in vitro transcription/translation kit」(それぞれ、2002カタログ番号188839及び1814346)として知られているアッセイにより行うことができる。
本発明に従い、ゲノムDNAからhLHの全長cDNAを調製する方法を実施例８でより詳細に説明する。
支持体は、粉末又は溶液製品の形態でもありうる。従って、本発明は、担体（例えば、メチルセルロース）と混合したオリゴマー及び／又はポリマーを含む粉末製品も提供する。担体は、オリゴマー及び／又はポリマーと混合するのに適したいかなる不活性担体（例えば、医薬品の調製に通常利用される任意の担体）であってもよい。粉末製品はさらに酵素及びバッファー溶液を含んでもよい。
担体と混合するオリゴマー及び／又はポリマーは核酸であってもよい。さらに、少なくとも１種のプライマー又は少なくとも１セットのプライマーを製品と混合することもできる。随意に、酵素及び／又はバッファーも製品と混合できる。
従って、本発明は、粉末製品の配送及び／又は保管方法であって、担体をオリゴマー及び／又はポリマーと混合する工程、及び製品を配送及び／又は保管する工程を含む、前記の方法を提供する。例えば、この方法は、核酸及び少なくとも１種のプライマー又は少なくとも１セットのプライマー及び随意に酵素及びバッファー溶液を不活性担体と混合する工程、そのような製品を配送及び／又は保管する工程を含む、製品製造工程を含む。特定の実現化によれば、核酸はゲノムDNAであり、少なくとも１セットのプライマーは上記のようにゲノムDNAから全長DNAを合成することができる。従って、本発明は、また、上記のような製品を用いて全長DNAを調製する方法に関する。
製品は溶液の形態であってもよい。従って、オリゴマー及び／又はポリマーは液体担体中で混合され、水溶性の殻に包含されてもよい。そのような水溶性の殻は、例えば、公知の技術に従い、殻を含む医薬品と同じ方法で製造することができる。液体製品は、核酸、少なくとも１種のプライマー又は少なくとも１セットのプライマーセット、随意のバッファー溶液を含有してもよい。あるいはまた、液体製品は、プライマー、酵素及びバッファーを含有するが、核酸を含有しなくてもよい。液体製品は、反応の開始に必要な物質（例えば、酵素）の添加により、水溶液に溶解させることができる。
【実施例】
【００６０】
本発明を、以下の実施例を参照しながら更に詳細に説明する。しかし、本発明の範囲はこれらの実施例により限定されないものとする。
【００６１】
実施例１
まず、それぞれ５mm×５mmの大きさ（Ａ）ならびに10mm×10mmの大きさ（Ｂ）の各種シートを準備した。
DNA試料としては、２種の溶液を調製した。一方の溶液（Ｈ溶液）は、約1.5kbpのプラスミドDNA断片（1377bpのλDNA断片をEcoRV部位でpBSに挿入したもの）を333ng/μlの濃度で含むものとした。他方の溶液（Ｆ溶液）は、同じプラスミドDNAと万年筆インクとをそれぞれ333ng/μl及び17％（v/v）の濃度で含むものとした。
【００６２】
次に、（Ａ）の大きさのシートには３μl（１μg）のＨ溶液又はＦ溶液の各々をスポットし、（Ｂ）の大きさのシートには６μl（２μg）のそれら溶液の各々をスポットし、これらのシートをそれぞれ65℃で30分間乾燥させた。その後、（Ａ）の大きさのシートについては200μlの水に浸し、（Ｂ）の大きさのシートについては300μlの水に浸した。これらの浸したシートを65℃で10分間乾燥させ、さらにそれらを室温で２時間処理して溶出を行った。
【００６３】
溶出液についてフェノール抽出（フェノール：クロロホルム：イソアミルアルコール＝25：24：１を用いて２度抽出）を繰り返し、次にエタノール沈殿法によりDNAを回収した。
【００６４】
得られたDNAを10μlの水に溶かし、次の通りPCRを行った。最終反応容量：25μl、反応組成：10μMのM13（配列番号１）プライマー（M3-30）：5’-CAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGT-3’を0.5μl、10μM のRV32（配列番号２）： 5’-GATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGAC-3’を0.5μl、ExTaq 10×緩衝液を2.5μl、2.5mMのdNTPを２μl、ExTaqを１unit及びDNAとして、最初の反応を94℃で３分間行った後、反応を94℃で１分および68℃で２分で40サイクル繰り返した。このDNAは、1377bpの大きさのλDNAと両末端に配置されたプラスミドDNA分子とを含む約1.5kbpの大きさのDNA鋳型とした。
【００６５】
DNA（配列番号３）の塩基配列は、次の通りであった。
GATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGAATTCGATATCGCATTTTTCACCATGCTCATCAAAGACAGTAAGATAAAACATTGTAACAAAGGAATAGTCATTCCAACCATCTGCTCGTAGGAATGCCTTATTTTTTTCTACTGCAGGAATATACCCGCCTCTTTCAATAACACTAAACTCCAACATATAGTAACCCTTAATTTTATTAAAATAACCGCAATTTATTTGGCGGCAACACAGGATCTCTCTTTTAAGTTACTCTCTATTACATACGTTTTCCATCTAAAAATTAGTAGTATTGAACTTAACGGGGCATCGTATTGTAGTTTTCCATATTTAGCTTTCTGCTTCCTTTTGGATAACCCACTGTTATTCATGTTGCATGGTGCACTGTTTATACCAACGATATAGTCTATTAATGCATATATAGTATCGCCGAACGATTAGCTCTTCAGGCTTCTGAAGAAGCGTTTCAAGTACTAATAAGCCGATAGATAGCCACGGACTTCGTAGCCATTTTTCATAAGTGTTAACTTCCGCTCCTCGCTCATAACAGACATTCACTACAGTTATGGCGGAAAGGTATGCATGCTGGGTGTGGGGAAGTCGTGAAAGAAAAGAAGTCAGCTGCGTCGTTTGACATCACTGCTATCTTCTTACTGGTTATGCAGGTCGTAGTGGGTGGCACACAAAGCTTTGCACTGGATTGCGAGGCTTTGTGCTTCTCTGGAGTGCGACAGGTTTGATGACAAAAAATTAGCGCAAGAAGACAAAAATCACCTTGCGCTAATGCTCTGTTACAGGTCACTAATACCATCTAAGTAGTTGATTCATAGTGACTGCATATGTTGTGTTTTACAGTATTATGTAGTCTGTTTTTTATGCAAAATCTAATTTAATATATTGATATTTATATCATTTTACGTTTCTCGTTCAGCTTTTTTATACTAAGTTGGCATTATAAAAAAGCATTGCTTATCAATTTGTTGCAACGAACAGGTCACTATCAGTCAAAATAAAATCATTATTTGATTTCAATTTTGTCCCACTCCCTGCCTCTGTCATCACGATACTGTGATGCCATGGTGTCCGACTTATGCCCGAGAAGATGTTGAGCAAACTTATCGCTTATCTGCTTCTCATAGAGTCTTGCAGACAAACTGCGCAACTCGTGAAAGGTAGGCGGATCCCCTTCGAAGGAAAGACCTGATGCTTTTCGTGCGCGCATAAAATACCTTGATACTGTGCCGGATGAAAGCGGTTCGCGACGAGTAGATGCAATTATGGTTTCTCCGCCAAGAATCTCTTTGCATTTATCAAGTGTTTCCTTCATTGATATTCCGAGAGCATCAATATGCAATGCTGTTGGGATGGCAATTTTTACGCCTGTTTTGCTTTGCTCGACATAAAGATATCAAGCTTGGCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTG
【００６６】
反応後、５μlの反応生成物を１％アガロース電気泳動にかけて、PCR産物（約1.5kbp）を検出した。その結果を図11に示す。
レーン１はDNAサイズマーカー（λ／StyI 200μg）であり、レーン２は（Ａ）の大きさの薬包紙にＦ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン３は（Ｂ）の大きさの薬包紙にＦ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン４は（Ａ）の大きさのコピー用紙にＦ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン５は（Ｂ）の大きさのコピー用紙にＦ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン６は（Ａ）の大きさの薬包紙にＨ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン７は（Ａ）の大きさの薬包紙にＨ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン８は（Ａ）の大きさのコピー用紙にＨ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン９は（Ｂ）の大きさのコピー用紙にＨ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン10はシートなしのもの（ポジティブコントロール）であり、レーン11はシートなしのもの（ネガティブコントロール）であり、レーン12はDNAサイズマーカー（λ／StyI 200μg）である。
【００６７】
レーン２、レーン３及びレーン６にはそれぞれ３μlのDNAを適用し、レーン４、レーン５、レーン７、レーン８及びレーン９にはそれぞれ１／50μlのDNAを適用した。
【００６８】
さらに詳細に述べると、上記した実験の結果によれば、支持体として通常のPPC用紙などのセルロースから製造されたものを用いて製造したDNA固定支持体では、該支持体に固定されたDNAは常温で保存可能であり、しかも、DNA固定支持体においては、支持体に固定されたDNAは該支持体から溶出により回収可能であり、さらには、こうして溶出回収されたDNAはポリメラーゼ連鎖反応により増幅可能であることが明らかになった。
【００６９】
支持体にDNAを付着させるには、次の方法を用いることができる。つまり、それらの方法は、ピンを用いてDNAを拾い、ピンに付いたDNAをさらに支持体に移す方法、シリンジに入れたDNA溶液を支持体に滴下してDNAを付着させる方法、及び既存の印刷技術を利用してDNA溶液を印字した状態で支持体に付着させる方法である。
【００７０】
この場合、既存の印刷システムとしては、例えば、インクジェットプリンターなどに用いられるインクジェット方式の印刷システムの印刷技術を用いることができる。
【００７１】
インクジェット方式の印刷システムなどの印刷技術を用いるには、印刷インキなどの着色剤の代わりにDNA溶液を用い、インクジェット方式の印刷システムに従って印刷用紙に該当する支持体に該DNA溶液を用いて印字すればよい。
【００７２】
このように、既存の印刷技術は、圧電素子や発熱素子を利用したインクジェット方式印刷システムに従い、印刷インキに代えてDNA溶液をそのまま使用できるので、本発明によるDNA固定支持方法に極めて簡便に用いることができる。
【００７３】
インクジェット方式印刷システムの印刷技術においては、一般的にそれぞれ約20μm〜100μmの大きさのドットを印字することができるので、DNA溶液を高密度で支持体に付着させることが可能となる。
さらに、乾燥状態のDNAは、タンパク質などの他の生体分子とは違って安定であり、100℃前後の温度に十分に耐え得るので、レーザープリンターにより実現されるものをはじめとする電子印刷や熱転写型の印刷技術も、本発明によるDNA固定支持方法に用いることができる。
【００７４】
実施例２
実施例１で用いたDNA分子に関連する論文を製造した。これは、タイトル、著者名、要約、緒言、材料及び方法、結果、考察、謝辞ならびに引用文献を含むものとした。論文の末尾に、実施例１のＦ溶液を用いてインクジェットプリンター（EPSON、PM-760C）により「TEMPLATE」という文字を印字した。その結果、論文に明瞭な印字が形成された。
本発明の印刷物及び支持体には当業界で知られている技術に従い印刷をすることができる。
科学的な主題の場合、冊子、定期刊行物、雑誌、論文、記事、支持体などには、例えば、研究の主題を記載している文字や図が印刷されうる。オリゴマー及び／又はポリマー、例えば、DNA溶液がその後に適用される。例えば、同じ紙のシート又は異なる大きさや形の異なる紙若しくは支持体のシート上の決められた位置又は印を付けた位置にスポットしたり、印刷したりする。随意に、不活性な染料（例えば、赤い染料）を支持体に適用されたオリゴマー及び／又はポリマー溶液に添加して、スポットの位置を支持体上で可視化することができる。
オリゴマー及び／又はポリマーが適用されたシートを冊子、定期刊行物などの形態に綴じて、書店を通してあるいはクーリエで読者に配送する。同封された遺伝子に興味がある研究者、学生及び読者は、その遺伝子をすぐに回収して、研究に用いることができる。
少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーが適用された少なくとも１個の支持体を含む成功した印刷物を提供するためには、いくつかの事項を考慮しなければならない。最初に、オリゴマー及び／又はポリマーは、許容できる程度に高い成功率で、読者や受取人によって容易に抽出可能でなければならない。第２に、印刷物又は支持体に適用されたオリゴマー及び／又はポリマーは、冊子を綴じたり、積み込んだりする間、安定な形態で保存されなければならない。第３に、汚染の危険を避けなければならない。
本発明の効率的な印刷物及び支持体の製造並びにオリゴマー及び／又はポリマーの効率的な保存及び回収を実施例３〜７で検討した。以下の実験において、DNAシートを形成するために水分解性の紙を用いた。60MDP紙（三島製紙株式会社、日本）を選んだが、この紙は室温で速やかに水に分解する。
〔実施例３〕
DNA 溶液の調製
種々のcDNAインサートサイズを持つ３種類の理研プラスミドcDNAクローン（744 bp, 2440 bp及び5460 bp)(それぞれ、配列番号４〜６に示した）を試験した。これらのcDNAを公知の技術（Sambrook ら、1989)に従ってpBluescriptに挿入した。
Qiagen Spin Miniprep キット（Qiagen、日本）を用いて、上記のcDNAクローンを含むプラスミドDNAを精製した。（あるいは、例えば、Sambrookら、1989に記載されているような超遠心分離法を用いることができる。）
プラスミドDNAをTE（10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA)に溶解した。DNA濃度を0.1μg/μlに調整した。
この工程で、回収の時に支持体上のスポットの位置を容易に確認できるように、不活性な染料、例えば、赤い染料を溶液に添加することができる。しかしながら、本実験においては、印をつけた場所にプラスミドDNA溶液をスポットしたので、このような染料は不要であった。
DNA シートの調製
96-ピンツール（Multi 96-multiblot replicator VP409, Bio Medical Science Inc., US)を用いて、DNAシートとして用いる60MDP（三島製紙株式会社、日本）（この紙に予め印刷をしておいてもしておかなくてもよい。）の上に、上記の調製したプラスミドDNA溶液約0.1μlを移した。これにより、決められた量のDNA溶液を紙上の決められた位置にスポットすることができた。紙上の印をつけた位置にスポットすることにより、スポットされた位置を容易に確認することができた。（あるいは、上記の「DNA溶液の調製」のところに記載したように、DNA溶液に混ぜた赤い染料の存在によって確認することもできる。）各スポットについて５回、プラスミドDNA溶液をスポットした。合計で、0.05μgのプラスミドを約0.5μlスポットした。
DNA の抽出及び回収
上記の紙を空気中で30秒以上乾燥させた後、以下のようにしてシートからDNAを抽出した。選択したDNAスポットを含む60MDP紙の１片（0.4 mm x 0.4 mm)をシートから切り出し、PCRチューブに入れた。次いで、PCR溶液50μLを添加した。PCR溶液には、KOD Plus DNAポリメラーゼ（東洋紡、日本）1.5 U、PCRプライマー0.2μM（-21M13（配列番号７）：5'-TGTAAAACGACGGCCAGT-3'及び1233-Rv（配列番号８）：5'-AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3'）、dATP, dGTP, dCTP及びdTTP各0.2 mMを含有し、種々の濃度のMgCl2（図１２に示すように、それぞれ、1 mM, 3.1 mM, 3.5 mM及び7.5 mM）が存在した。得られた溶液を遠心分離した後、PCRサイクルを開始した。PCRサイクルは、94℃で２分、29サイクルの変性（94℃、１分）、アニーリング（55℃、１分）及び伸長（75秒、68℃）、及び74℃で15分からなった。公知の技術(Sambrookら、1989）に従って行った1%アガロースゲル電気泳動を用いて、PCR溶液のアリコートを分析した。
別法として、公知の技術(Sambrookら、1989）に従い、溶解したDNAシートを含有する溶液のアリコートを別のチューブ中でPCRにかけ、その後、大腸菌形質転換を行うこともできる。読者又は受取人は、バックアップとして、あるいは他の実験のために、残りの溶液をとっておくことができる。
結果： DNA シート上にスポットした DNA の PCR 回収
図１２は、ｃDNAインサート（レーン１、４、７及び１０の744 bp；レーン２、５、８及び１１の2,440 bp；レーン３、６、９及び１２の5,460 bp）が好ましくは5.3 mMのMg2+濃度で増幅に成功したことを示す。この試験により、選択した条件で効率的なDNAのスポッティング及び抽出が可能であることが確認された。２つのレーンにおいては、先端に、分子量（1、2、3、4及び5 kb)を示すマーカーが添加された。
実施例４〜７の目的
DNAシート及びDNA冊子は、製造業者又は出版社による冊子の製本プロセス、読者又は受取人への発送及び普通の部屋での保存を通じてさらされる種々の状態に耐えることができなければならない。温度、圧力、湿度、光及び物理的な摩擦は、DNAシートや冊子に質的影響を与える可能性がある主要な問題の代表例である。これらの条件を試験したので、その結果を以下の実施例４〜７で報告する。DNA及びDNAシートの調製は、実施例３と同じクローンを用いて、同じ方法で行った。実施例４〜７の実験において、図１３，１４，１６及び１８に示すように、以下のマーカーを用いた。0.253 bp, 0.75 bp, 1 kbp, 1.5 kbp, 2 kbp, 2.5 kbp, 3 kbp, 4 kbp, 5kbp, 6kbp, 8 kbp及び10 kbp。
〔実施例４〕
温度条件下での DNA シートの保存
DNAシートを、140℃で30秒間及び-40℃で12時間、それぞれ処理した。すべてのcDNAインサートはPCRで増幅及び回収に成功した。図１３において、シートから回収し、140℃で処理した実施例３の３個のクローンがレーン１、２及び３で可視化された（それぞれ、744、2440及び5460 bp)。レーン４、５及び６には、コントロール（高温で処理されていないクローン）が存在する。図１４は、-40℃で12時間処理されたシートから回収された、それぞれ、レーン１及び２の744 及び5460 bpのcDNAを示す。
図１３及び図１４は、厳しい温度の効果により何の問題も認められず、すべてのcDNAが増幅及び回収に成功したことを示している。
この結果により、シート及び冊子に適用されたDNAは、冊子の製本プロセスの間に経験されうる高温にも、空輸の間に経験されうる低温にも耐性があることが確認された。
〔実施例５〕
圧力条件下での DNA シートの保存
DNAシートを約90〜170 Kgf/cm2（圧力単位変換は10.2 kgf/cm2 = 1 Mpaである）の高圧条件下に維持した。図１５は、実験をどのように行ったかを簡略化した見本である。（図に示すような）２つの部分を持つ”vice”（英語では、”capstan”とも呼ばれ、日本語では「万力」と呼ばれる）として知られている器具を用いて、高圧をつくりだした。この器具は、２つの部分が互いに近づき、紙１及び紙２及び紙３の上に圧力が生じるように作動することができる。紙２は、DNAを適用した紙を表す。紙２としては、三島紙を用いた。紙１はDNAクローンを持たない紙である。紙１としては、科学の定期刊行物に通常利用される紙を用いた。紙３は特別な圧力測定紙であり、この紙は特定の圧力がかかると色が変化する。本実験に用いた特別な圧力測定紙は富士フィルム（日本）から購入したカタログ番号LWの紙である。
この実験の第１の目的は、高圧がかかっている間、DNAが紙２から紙１に移動しないことを調べることであった。これは、汚染危険試験を表す。この実験のさらなる目的は、紙２に適用されたcDNAクローンが高圧により損傷を受けず、回収及び増幅に成功することを調べることであった。図１６は試験の結果を有する電気泳動を示し、図１７はどのように実験を行ったかを説明するものである。
レーン１、２及び３はコントロールである。これらは、それぞれ、高圧をかけられていないDNA紙から回収されたクローン744 bp、2440 bp及び5460 bpを表す。
レーン４、５及び６は、異なる値の高圧をかけられた紙２から回収した３個のcDNAを示す。かけた圧力は、レーン４及び５のクローンについて、97.4 Kgf/cm2であり、レーン５について、125.2 Kgf/cm2であった。このことは、レーン４、５及び６のcDNAが増幅と回収に成功したことを示す。
レーン７、８及び９は、レーン４、５及び６と同じ実験において圧力をかけた紙１に関する。レーン７、８及び９において、汚染は観察されない。このことにより、紙２に適用されたcDNAはこれらの値の圧力で紙１に移らないことが確認された。
レーン１０、１１及び１２は、148.4、92.7及び170.9 Kgf/cm2の圧力下で紙２から回収された３個のcDNAに関する。すべてのcDNAはこれらの値の圧力下で回収された。
レーン１３、１４及び１５は、レーン１０、１１及び１３と同じ実験をした紙１に関する。レーン１３、１４及び１５において、汚染は観察されなかった。
この結果により、シート及び冊子に適用したDNAは、冊子の製本プロセスの間に経験されうる高圧に耐性があり、これらの条件下ではcDNAの汚染が生じないことが確認された。
〔実施例６〕
湿度条件下での DNA シートの保存
DNA及びDNAシートの調製は、実施例３と同じクローンを用いて、同じ方法で行った。DNAシートに３個のcDNAプラスミドをスポットして、37℃、70%の湿度で、12時間、加湿されたインキュベーター中に保存した。その後、上記のようにして、DNAインサートを回収し、PCRで増幅した。これらのDNAシートからのDNAの回収に成功した。図１８Bは、これら３個のcDNAのすべての増幅に成功したことを示す。
〔実施例７〕
摩擦条件下での DNA シートの保存
さらに、DNAシートの摩擦が何らかの問題（例えば、PCR増幅を妨げるとか、隣のDNAと接触するなど）を起こしうるかどうかを試験した。同じ３個のcDNAをスポットしたDNAシートを冊子に挿入し、回転するシェイカー（180 rpm)を用いて、37℃で12時間強く振り回した。その後、上記のように、DNAインサートを回収し、PCRで増幅した。
図１８Ｂに示すように、すべてのDNAインサート（744 bp、2440 bp及び5460 bp)の増幅に成功した。DNAスポットが隣のスポットで汚染されることはなかった。図１６Ｂのゲルの左側の最初のレーンはマーカーを示す。
〔実施例８〕
ゲノム DNA から全長 cDNA を調製する方法
本実施例で鋳型DNAとして用いたヒトゲノムDNAは、BD Biosciences Clontech（US)から購入した。ヒト黄体形成ホルモン(hLH)の全長cDNAを合成するためのプライマーは、Invitrogen (US)から購入した。
本実験の結果によると、ヒト黄体形成ホルモンの全長遺伝子は、503 bpで、以下の配列を有している（配列番号９にも示す。）（以下で、エクソン１に相当する配列を大文字で書き、エクソン２に相当する配列を小文字で書く）。
【００７５】
【表１】
エクソン１の配列を配列番号１０に示す。エクソン２の配列を配列番号１１に示す。プライマーの配列（下線は重なり合う領域を示す）は以下の通りである。
HsLH1F：CCAGGGGCTGCTGCTGTTG (配列番号12)
HsLH1Rt：cagcacgcgcatCATGGTGGGGCAGTAGCC (配列番号13)
HsLH2Ft：TGCCCCACCATGatgcgcgtgctgcaggcg (配列番号14)
HsLH2R：tgcggattgagaagcctttattg (配列番号15)
HsLH1F及びHsLH1Rtは、ヒト黄体形成ホルモンのエクソン１の各末端に相補的な配列を有し、HsLH2F及びHsLH2Rtは、同じ遺伝子のエクソン２の各末端に相補的な配列を有する。HsLH1Rt及びHsLH2Fは、互いに連結するために次のエクソンに相補的な追加の配列を有する（図１９）。
上記のプライマーを10 pmol/μlの最終濃度で10 μlのTE(10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA)に溶解した。
上記のように調製したプライマー溶液をスポット１、２及び３について混合した。
スポット１溶液：HsLH2F溶液とHsLH2Rt溶液を1:1の比で混合したもの。
スポット２溶液：HsLH1F溶液とHsLH1Rt溶液を1:1の比で混合したもの。
スポット３溶液：HsLH2F溶液、HsLH2Rt溶液、HsLH1F溶液及びHsLH1Rt溶液を1:1:1:1の比で混合したもの。
図２０に示すように、スポット１溶液0.4 μl、スポット２溶液0.4 μl、及びスポット３溶液0.8 μlを60MDP紙（三島製紙株式会社、日本）上の各対応スポット領域に移した。
上記の紙を空気中で30分以上乾燥させた後、プライマーを以下のようにしてシートから抽出した。選択したプライマースポットを含む60MDP紙の片（0.4 mm x 0.4 mm)をシートから切り出し、PCRチューブに入れ、次いで、PCR溶液50μLを添加した。PCR溶液には、10 mM Tris-HCl、pH 8.3、50 mM KCl、2.5 mM MgCl2、0.2 mM dNTP、100 ngの鋳型DNA（BD Biosciences Clontech, USから購入したヒトゲノムDNA)、及び2.5 UのTaq DNAポリメラーゼ（Roche Diagnostics)が含まれていた。PCRサイクルは、94℃で3分（50サイクル：94℃で30秒、40℃で、30秒、72℃で30秒）及72℃で1分であった。
3% NuSieve 3:1アガロース（タカラバイオ株式会社、日本）ゲル電気泳動を公知の技術(Sambrookら、1989)に従って行い、5μlの各PCR最終溶液（PCR溶液及びプライマー）を分析した。図２１は、電気泳動の結果を示す。レーン１は、DNAサイズマーカーとしてのpUC19/HpaIIであり（塩基対（bP）として報告）、各バンドのサイズはゲル写真の左側に示す（図２０）。レーン２及び３は、エクソン２(343 bp)及びエクソン１(184 bp)の増幅に成功したことを示す。レーン４は、ヒト黄体形成ホルモンの全長cDNA（503 bp)が得られたことを示す。レーン５、６及び７は、鋳型DNA以外はレーン２，３及び４と同じ物質を含有するコントロール試料であり、非特異的な増幅産物がないことを示している。この結果から、この技術を利用して、一つのチューブ中で、印刷物の支持体上のプライマーを用いた一工程のPCRにより、ゲノムDNAから全長cDNAが得られることが証明された。
本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願、特願2001‐291249号（出願日：2001年9月25日）の明細書、特許請求の範囲、図面及び要約書に記載される内容を包含する。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【産業上の利用可能性】
【００７６】
本発明によれば、少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体を含む印刷物が提供される。科学者達は、その印刷物から目的のオリゴマー及び／又はポリマーを簡便かつ迅速に入手できる。
【００７７】
本発明によれば、少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法が提供される。この方法により、オリゴマー及び／又はポリマーは、多大な労力や長い時間をかけずに、特殊な装置や設備を用いる必要もなしに、簡便に配送及び保管することができる。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】図１は、オリゴマー及び／又はポリマーのスポットを含む論文を示す。
【図２】図２は、印刷物と組み合わせた、支持体に適用したオリゴマー及び／又はポリマーの製品を示す。
【図３】図３は、印刷物にオリゴマー及び／又はポリマーを適用した製品を示す。
【図４】図４は、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体を添付シートとして有する冊子を示す。
【図５】図５は、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体を添付カードとして有する冊子を示す。
【図６】図６は、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体を頁として有する冊子を示す。
【図７】図７は、表紙と、綴じ込みリングと、複数枚のルーズリーフ紙とから構成されるルーズリーフ型の冊子を示す。
【図８】図８は、オリゴマー及びポリマー（高分子性及び低分子性の物質）のスポットを含む論文を示す。
【図９】図９は、オリゴマー及びポリマー（高分子性及び低分子性の物質）の印刷文字を含む論文を示す。
【図１０】図10は、オリゴマー及び／又はポリマーが適用されており、かつバーコードを含むカードを示す。
【図１１】図11は、実施例１の実験の結果を示す電気泳動の写真である。
【図１２】図12は、実施例３で説明したように、異なる量のMg++の存在下でDNAシート上にスポットしたcDNAのPCR回収を示すゲルである。可視のバンドの存在により、DNAが増幅及び回収されたことが確認できる。
【図１３】図13は、実施例４の実験に従い、140℃で30分間保存したDNAシートから回収した３個のcDNAクローンのゲルを示す。このcDNAの増幅及び回収に成功した。
【図１４】図14は、実施例４の実験に従い、-40℃で12時間保存したDNAシートから回収した３つのcDNAクローンのゲルを示す。このcDNAの増幅及び回収に成功した。
【図１５】図15は、万力を用いてどのように高圧をDNAにかけたかを示す。より詳細な説明を実施例５に報告する。
【図１６】図16は、実施例５の実験に従い、回収した３個のcDNAクローンのゲルを示す。このcDNAをDNAシート（高圧力下で保存）から増幅及び回収することに成功した。
【図１７】図17は、図16の実験の説明である。
【図１８Ａ】図18Aは、実施例６の実験に従い、回収した３個のcDNAクローンのゲルを示す。このcDNAをDNAシート（37℃、70%の湿度で12時間保存）から増幅及び回収することに成功した。
【図１８Ｂ】図18Bは、実施例７の実験に従い、回収した３個のcDNAクローンのゲルを示す。このcDNAをDNAシート（12時間摩擦下で保存）から増幅及び回収することに成功した。
【図１９】図19は、実施例８で報告したように、ゲノムDNAから遺伝子（この場合、hLH)の２つのエクソンを増幅及び連結した模式図である。各エクソンにつき１対のプライマーからなる１セットのプライマーにより、増幅及び連結を実施する。エクソン１のプライマーHsLH1Rtは部分的にエクソン２の先端に相補的である。エクソン２のプライマーHsLH2Fは部分的にエクソン１の先端に相補的である。
【図２０】図20は、ゲノムDNAからcDNAを製造するための１セットのプライマーをどのように支持体上にスポットすることができるかの一例である。説明は実施例８にある。
【図２１】図21は、実施例８で行った実験に従い、ゲノムDNAから調製したhLHの２つのエクソン及び全長cDNAのゲルである。レーン１は、マーカー及びそれらの相対数のbpを示す。レーン２は、回収されたエクソン２のバンドを示す。レーン３は、回収されたエクソン１のバンドを示す。レーン４は、最下位から最上部にかけて４つのバンド、すなわち、それぞれ、エクソン１、未同定のバンド、エクソン２及びhLHの全長cDNAを示す。レーン５、６及び７は、鋳型（ゲノムDNA）無でレーン２，３及び４と同様の実験を行った結果を示す。
【符号の説明】
【００７９】
１ 印刷物
２ 支持体
３ オリゴマー及び／又はポリマー（高分子性の物質）のスポット
４ オリゴマー及び／又はポリマー（低分子性の物質）のスポット
５ 格子目
６ ミシン目
７ 穴
８ ポケット
９ スリット
１０ 綴じ込みリング
１１ 表紙
１２ ルーズリーフ紙
２０ オリゴマー（低分子性の物質）を含む印刷文字
２１ オリゴマー及び／又はポリマーを含む印刷文字
３０ バーコード
【配列表フリーテキスト】
【００８０】
配列番号１は、実施例１で用いたM13プライマーの塩基配列を示す。
配列番号２は、実施例１で用いたRV32プライマーの塩基配列を示す。
配列番号３は、実施例１で用いた鋳型DNAの塩基配列を示す。
配列番号４〜６は、実施例３〜７で試験した３個のcDNAマウスクローンの配列を示す。
配列番号７は、実施例３〜７のDNAの増幅に用いた-21M13プライマーの配列を示す。
配列番号８は、実施例３〜７のDNAの増幅に用いた1233-RVプライマーの配列を示す。
配列番号９は、実施例８で得られた全長のヒト黄体形成ホルモン遺伝子（cDNA）の配列を示す。
配列番号１０〜１１は、それぞれ、ヒト黄体形成ホルモン(hLH)のエクソン１及び２の配列を示す。
配列番号１２〜１５は、hLHの２個のエクソンの増幅及び全長hLHの合成のためのプライマーHsLH1F、HsLH1Rt、HsLH2Ft、HsLH2Rの配列を示す。
【０００１】
本発明は、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体を含む印刷物、それを製造する方法、ならびに該オリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
分子性物質（例えばゲノムDNA、cDNA、RNA、mRNA及びPNA）の関心のあるクローンに関する科学刊行物又は科学論文を参照する科学者は、実験を行うためにこのクローンを使いたいと思う場合がある。そのクローンを入手するためには、かかる科学者は、その刊行物の著者と連絡をとり、それを入手するための一連の形式的な手続きを開始しなければならない。場合によっては、刊行物に載っている住所が変わっていたり、その科学者が別の研究室に移動していて、そのクローンの入手に長時間かかってしまうことがある。また、関心のある配列を含むベクター又は細胞がもはや入手不可能であり、科学者はそれをすぐに入手する可能性を絶たれて、再度それを作製しなくてはならない場合もありうる。
【０００３】
科学者が目的の分子性物質を依頼した後で、その分子性物質は、当該技術分野で公知の配送システムに従い、例えば試験管の形態でその科学者に配送される。また、依頼があり次第、目的の分子性物質は、RNA、PNA、他の高分子断片又はDNAを固定又は印字した複数のシート状支持体の形態で配送することもできる（米国特許第6,258,542号）。しかし、当該技術分野で公知のこれら全ての配送システムでは、興味を持った受取人からの依頼があると、所望の分子性物質を配送装置の発送及び製造に適する形態に調製する必要がある。さらに、この配送には数ヶ月かかることもある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、依頼する必要なしに少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを迅速かつ直接的に入手できる印刷物を提供することにより、当技術分野におけるこの問題を解決するものである。
【０００５】
本発明はまた、かかる印刷物を製造する方法も提供する。
【０００６】
本発明は更に、オリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、１種以上のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体（例えば紙）を含む様々な種類の刊行物を製造した。
【０００８】
本発明の主題は以下のとおりである。
【０００９】
１． 少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体を含む印刷物。
【００１０】
２． 綴じられていない形態である、１項に記載の印刷物。
【００１１】
３． 綴じられた形態である、１項に記載の印刷物。
【００１２】
４． 前記支持体が印刷物において綴じられていない、３項に記載の印刷物。
【００１３】
５． 前記支持体が綴じられた印刷物の１頁として綴じられている、３項に記載の印刷物。
【００１４】
６． 少なくとも２個の支持体を含み、これらの支持体が共に綴じられていない、１項に記載の印刷物。
【００１５】
７． 少なくとも１枚の印刷頁から構成される、１項に記載の印刷物。
【００１６】
８． 定期刊行物、雑誌、論文、冊子、小冊子、リーフレット、パンフレット、報告書、ポスター、カード及びラベルからなる群から選ばれる、１〜７項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００１７】
９． 前記支持体が非水溶性、水分解性及び／又は水溶性の支持体である、１〜８項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００１８】
１０． 前記非水溶性の支持体が主成分としてセルロースを含む、９項に記載の印刷物。
【００１９】
１１． 前記水溶性の支持体がオブラートの形態である、９項に記載の印刷物。
【００２０】
１２． 前記支持体がカードの形態である、１〜11項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００２１】
１３． 前記オリゴマーがオリゴヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴ糖、PNA、及びそれらの混合物からなる群から選ばれる、１〜12項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００２２】
１４． 前記ポリマーがポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖、PNA及びそれらの混合物からなる群から選ばれる、１〜12項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００２３】
１５． 前記オリゴマー又はポリマーが断片又は完全な分子である、１〜14項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００２４】
１６． 前記オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドがゲノムDNA、cDNA、RNA、mRNA、PNA、及びそれらの組合せからなる群から選ばれる、13又は14項に記載の印刷物。
【００２５】
１７． 前記オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドが断片、EST配列、長鎖配列、全コード配列、および全長配列からなる群から選ばれる、16項に記載の印刷物。
【００２６】
１８． 前記オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドが、１以上の増幅及び／又は連結プライマー及び／又はオリゴヌクレオチドプローブである、13〜17項のいずれか１項に記載の印刷物。
１９． ゲノムDNAに含まれる遺伝子のエクソンを増幅及び連結するための１セットのプライマーを含む、１〜１８項のいずれかに１項に記載の印刷物。
２０． 前記セットのプライマーが所望の遺伝子の各エクソンに対する１対のプライマーを含み、一つのエクソンに対する各対の少なくとも１個のプライマーが部分的に次のエクソンに相補的である、１９項記載の印刷物。
２１． 前記セットのプライマーが、遺伝子のエクソンの増幅及び連結によるゲノムDNAからのcDNA及び／又は全長cDNAの合成に適したものである、２０項記載の印刷物。
２２． １種以上の酵素及び／又はバッファーをさらに含む、１〜２１項のいずれか１項に記載の印刷物。
【００２７】
２３． 少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体を含む印刷物の製造方法であって、印刷の前又は後にオリゴマー及び／又はポリマーを支持体に適用する工程を含む上記方法。
【００２８】
２４． 前記オリゴマー及び／又はポリマーを、それを前記支持体上に固定又は印字することにより該支持体に適用する、２３項に記載の方法。
２５． 前記オリゴマー及び／又はポリマー、並びに支持体が請求項１〜２２に規定したものである、２３項記載の方法。
【００２９】
２６． 印刷物に含まれる少なくとも１つの支持体に適用した少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法であって、１）印刷物を印刷する前又は後にオリゴマー及び／又はポリマーを支持体上に適用する工程；ならびに２）該印刷物を配送又は保管する工程を含む上記方法。
【００３０】
２７． オリゴマー及び／又はポリマーの溶液をピン、シリンジ又はインクジェットプリンターにより支持体に直接適用又は付着させることによって、前記オリゴマー及び／又はポリマーを前記支持体に適用する、２６項に記載の方法。
２８． 前記オリゴマー及び／又はポリマー、並びに支持体が請求項１〜２２に規定したものである、２６又は２７項に記載の方法。
【００３１】
２９． さらに、前記オリゴマー及び／又はポリマーを、前記支持体からの溶出により回収する工程を含む、２３〜２８項のいずれか１項に記載の方法。
【００３２】
３０． 前記の回収が、前記支持体を装置に挿入し、該装置により該支持体からの溶出及び回収を自動的に行うことにより実施される、２９項に記載の方法。
【００３３】
３１． 前記支持体がカードの形態である、３０項に記載の方法。
【００３４】
３２． 前記カードが、前記オリゴマー及び／又はポリマーの該カード上での位置に関する情報を含むバーコード、チップ又はラベルを含む、３１項に記載の方法。
【００３５】
３３． オペレーターが目的のオリゴマー及び／又はポリマーを選択し、前記装置が該目的のオリゴマー及び／又はポリマーを前記支持体から自動的に溶出させ回収する、２３〜３２項のいずれか１項に記載の方法。
３４． cDNAを合成する方法であって、
a)支持体及び／又は印刷物にエクソンの増幅及び／又は連結のための少なくとも１セットのプライマーを適用する工程、
b)前記支持体及び／又は印刷物から前記の少なくとも１セットのプライマーを回収する工程、
c)前記セットのプライマーを鋳型DNA、酵素及びバッファーと混合し、増幅及び／又は連結を行う工程
を含む前記の方法。
３５． 工程a)の後に、前記支持体及び／又は印刷物を保管及び／又は配送する、３４項記載の方法。
３６． 前記酵素及びバッファーが工程a)の間に支持体及び／又は印刷物に適用される、３４又は３５項に記載の方法。
３７． 増幅及び／又は連結の産物がcDNA及び／又は全長cDNAである、３４〜３６項のいずれか１項に記載の方法。
３８． 前記cDNA及び／又は全長cDNAが回収され、ヌクレオチドの挿入／欠失、SNP及び配列決定分析に用いられる、３７項記載の方法。
３９． 前記cDNA及び／又は全長cDNAが回収され、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質の発現に用いられる、３７項記載の方法。
４０． ヌクレオチドの挿入／欠失の決定、又はSNP分析の診断方法である、３８項記載の方法。
４１． 少なくとも１種のプライマー又は１セットのプライマーを適用した支持体及び／又は印刷物を含むキット。
４２． 前記支持体及び／又は印刷物がさらに、少なくとも１種の酵素、バッファー、ゲノムDNA、cDNA、RNA、mRNA、PNA、プラスミド、ベクター及び核酸を含む、４１項記載のキット。
４３． エクソンの増幅及び／又は連結のための少なくとも１セットのプライマーを適用した少なくとも１個の支持体及び／又は印刷物を含む、ゲノムの鋳型からcDNA及び／又は全長cDNAを合成するためのキット。
【００３６】
本発明の記載の目的のための「オリゴマー」なる用語は、少数個の構成単位を含む分子から構成される任意の物質又は任意の物質の種類として定義される。その単位は、１又は２以上の種からなるものであってもよい。本発明の記載の目的のための「ポリマー」なる用語は、多数個の構成単位（又は「マー(mer)」）を含む分子から構成される任意の物質として定義され、１又は２以上の種からなるものであってもよい。
【００３７】
本発明によるオリゴマーの例は、オリゴヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴ糖、PNA、又はそれらの混合物である。本発明によるポリマーの例は、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖、PNA、及びそれらの混合物である。従って、本発明によれば、支持体及び／又は印刷物に適用又は印刷されるオリゴマー及び／又はポリマーは、例えば、DNA、cDNA、RNA、PNA、プラスミド、プライマー、タンパク質、酵素、などでありうる。従って、本発明の印刷物は、迅速で、効率的で廉価なサンプル配送システムである。例えば、cDNAクローンはこの方法により有利に配送することができる。さらに、例えば、印刷物及び／又は支持体に適用又は吸着させるバッファーなどの溶液もまた本発明の範囲内である。しかしながら、これらの溶液はバッファーに限定されない。
本発明の印刷物としては、定期刊行物、雑誌、論文、冊子、巻物、小冊子、リーフレット、パンフレット、報告書、ポスター、アブストラクトを集めたもの、カード、ラベルなど当業界に知られているあらゆる種類の刊行物が挙げられる。
本発明の印刷物は、少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマー又はそれらの混合物を適用した少なくとも１つの支持体を含む。
支持体は、例えば、印刷物の頁、リーフレットの頁、予め決めておいた分割線又は印をつけた線で印刷物から取り去ったり、切り出したりする頁、印刷物に追加された固定されていない頁、印刷物の頁や表紙に添付又は固定されたり、頁や表紙の上に固定されたポケットに挿入されたカード、オブラードの形態などの任意の形態で、印刷物に添付、付加又は包含されうる。印刷物及び支持体の限定的ではないいくつかの例を図面に示す。しかしながら、本発明の印刷物及び支持体は図面に示したものに限定されない。
【００３８】
本発明において、支持体は、その上に少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーが適用されるならば、どのような物質から製造されてもよい。例えば、支持体は、水溶性、水分解性又は非水溶性の物質から製造できる。水溶性物質の例としては、オブラート（wafer）［アメリカン・ヘリテージ・ディクショナリー（American Heritage Dictionary）, 1980年版による］が挙げられる。水溶性物質は、例えばコムギ粉ペースト（ステッドマンの英和医学辞典、第３版）を含みうる。オブラートは、どのような形態であってもよい（例えば、アメリカン・ヘリテージ・ディクショナリーを参照）。オブラートは、好ましくは薄い紙様のシートの形態としうる。しかしながら、水溶性物質はオブラードに限定されない。水分解性(water-dissolvable)物質としては、水に溶解して、その構成成分がオリゴマー及び／又はポリマーを水中に放出するものが挙げられる。水分解性の紙の一例としては、三島製紙株式会社（日本）により製造された紙がある。三島紙はカルボキシメチルセルロースを用いて製造されている。この種類の紙に関する記載は、Japan. Soc. Col. Mater. 64(11), Nov.1991, pp.696-701にも見られる。この紙を水に浸漬すると、紙を構成している繊維が互いに分離し、その結果、オリゴマー及び／又はポリマーが水中に放出される。本発明においては、60MDP三島紙が用いられた。非水溶性物質の例としてはセルロース製の物質が挙げられる。
【００３９】
本発明では、セルロースを主成分として製造される物質、さらに具体的には通常の普通コピー（PPC）紙などが、支持体として用いることができる。上記のような水分解性の紙（例えば、三島紙）も用いることができる。
【００４０】
さらに、セルロースを別のシート上にコーティングしてフィルム状セルロースとして補強したものを、支持体として用いてもよい。この場合、本発明によるオリゴマー及び／又はポリマーの溶液（例えばDNA溶液）を、支持体のコーティングしたセルロースフィルムに付着させることが好ましい。
【００４１】
また、オリゴマー及び／又はポリマーを固定した支持体の表面は、プラスチックなどでコーティングして、該支持体を補強するようにしてもよい。
【００４２】
支持体の厚さは、例えば１mm以下とすることができる。この厚さを非常に薄くすれば（例えば0.1mm程度）、オリゴマー及び／又はポリマー固定支持体を多数枚積層して配布する場合にも、その作業性は向上する。なぜならば、それらは嵩張らないからである。
【００４３】
支持体は、印刷物とは別になっていてもよいし、印刷物の１頁であってもよい。支持体が印刷物とは別になっている場合、支持体には、支持体に適用したオリゴマー及び／又はポリマーの名称や支持体の番号などの任意の情報が印刷されていてもよい。本発明のオリゴマー及び／又はポリマーを含む印刷物を代表する例（限定する例ではない）は、異なる主題に関するいくつかの科学論文が掲載されているNature、Science又はGenome Researchのような科学定期刊行物である。少なくとも１つの論文は、支持体の上にスポットされたDNA、RNA、cDNA、プラスミド、プライマー、などを含み、その支持体は、刊行物に追加された独立の頁であったり、刊行物に添付されたり、包含される頁より小さいサイズの支持体であったり、定期刊行物の１頁、好ましくは科学論文の１頁であったりするかもしれない。科学者は、ある特定のDNAについて論じている科学論文を読んだ後、支持体からこのDNAをすぐに回収し、それを用いた実験をすることを望むかもしれない。本発明のさらなる見地として、印刷物は実験を行うために必要な一つ以上あるいはすべての成分を含むだろう。例えば、本発明の印刷物は、DNA、プライマー、酵素、バッファー、他の溶液、などを含んでもよく、その結果、科学者は、実験を行うための物質及び／又は適切な濃縮物をその紙から回収するだけで、すぐに入手することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４４】
以下、図面を参照しながら、本発明の印刷物の種々の実施形態の例を説明する。
【００４５】
図１には、オリゴマー及び／又はポリマー（例えば少なくとも１種のDNA、cDNA、RNA、mRNA、PNA、プライマー、プラスミド、ベクター、酵素、バッファーなど）のスポット（３）を含む論文である印刷物（１）を示す。
この論文は、折り畳んだリーフレットの形態である。論文の印刷用紙が支持体（２）であり、この上にオリゴマー及び／又はポリマーが適用されている。印刷用紙は、格子状の表の格子の中心にオリゴマー及び／又はポリマーのスポットを有する。科学者は、この論文を読み、そのオリゴマー及び／又はポリマーを用いて実験を行ないたいと思った時、リーフレットから該スポットを含むストリップを格子目（５）に沿って切り取り、オリゴマー及び／又はポリマーを該ストリップから溶出させることにより、この物質を迅速に得ることができる。オリゴマー及び／又はポリマーが核酸である場合には、当業界で公知の増幅技術、例えば、適当なプライマーを用いるPCRにより有利に回収することができる。これらのプライマーは印刷物の同じ支持体又は別々の支持体に包含させてもよい。回収した核酸は、例えば、Sambrookら、1989のような公知技術に従い、例えば、大腸菌のような原核又は真核宿主細胞に移すことができる。この論文では、読者がそれを読んだ後で、オリゴマー及び／又はポリマーを簡便かつ迅速に入手できるようになっている。読者は、オリゴマー及び／又はポリマーを所有する著者又は寄託機関に連絡を取り、それを手に入れるまで長時間待つ必要はない。
【００４６】
図２には、印刷物と組み合せた、支持体に適用したオリゴマー及び／又はポリマーの製品を示す。支持体（２）はカードの形態であり、印刷物（１）に添えてある。この印刷物はリーフレットの形態である。図２において、カードは、印刷物に設けられているスリット（９）に該カードの隅を挿入することによって印刷物に添えてある。このカードはオリゴマー及び／又はポリマーの１つ以上のスポット（３）を有する。各スポットは、カードからミシン目（６）に沿って切り取ることにより容易に切り離すことができる。好ましくは、オリゴマー及び／又はポリマーがオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドである場合、このカードはさらに、該オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドを増幅するのに必要なPCRプライマーのスポットを含んでもよい。印刷物は、該オリゴマー及び／又はポリマーに関する情報が印字されたもの、例えば該オリゴマー及び／又はポリマーの名称、DNA配列、アミノ酸配列などを含む。この製品は安定で、かつ嵩張らない。したがって、それは小さな場所で室温にて保管できる。また、それは簡便に配送できる。
【００４７】
図３には、印刷物に適用したオリゴマー及び／又はポリマーの製品を示す。印刷物（１）は、左側に穴（７）が空いているルーズリーフ紙の形態である。このルーズリーフ紙が支持体（２）であり、この上にオリゴマー及び／又はポリマーが適用されている。このルーズリーフ紙は、格子状の表の格子の中心にオリゴマー及び／又はポリマーのスポット（３）を有する。ユーザーは、ルーズリーフ紙からスポットを含むストリップを格子目（５）に沿って切り取り、そのストリップから該オリゴマー及び／又はポリマーを溶出させることによって、該オリゴマー及び／又はポリマーを得ることができる。この印刷物は、オリゴマー及び／又はポリマーに関する情報が印字されたもの、例えばオリゴマー及び／又はポリマーの名称、DNA配列、アミノ酸配列などを含む。この製品は安定で、かつ嵩張らない。したがって、それは小さな場所で室温にて保管できる。また、それは簡便に配送できる。
【００４８】
図４には、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体（２）を添付シートとして有する冊子、定期刊行物、雑誌などである印刷物（１）を示す。この添付シートは、オリゴマー及び／又はポリマーの１つ以上のスポット（３）を有する。各スポットは、該シートからミシン目（６）に沿って切り取ることにより容易に切り離すことができる。また、このシートは、オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドを増幅するためのPCRプライマーを含んでもよい。この冊子は、オリゴマー及び／又はポリマーに関する情報が印字されたもの、例えばオリゴマー及び／又はポリマーの名称、ならびにDNA配列、アミノ酸配列、該アミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドの３次元構造などを含む。科学者達は、この冊子から目的のオリゴマー及び／又はポリマーに関する情報のみならず、該オリゴマー及び／又はポリマーの物質を入手し、実験の実施を容易かつ迅速に開始できる。このタイプの冊子は、冊子と添付シートを別々の工場で製造できるので、製造業者にとって都合が良い。添付シートを製造するためには、オリゴマー及び／又はポリマーを処理するための特殊な装置及び／又は設備を使用する必要があり、これらは通常は印刷工場には備わっていないからである。製造業者がオリゴマー及び／又はポリマーのスポットを含む添付シートを冊子とは別に販売してくれれば、ユーザーにとって都合が良い。この理由は、ユーザーは、オリゴマー及び／又はポリマーのスポットを全て使い切ってしまったら、シートをもう１枚だけ購入すればそのオリゴマー及び／又はポリマーを入手できるからである。
【００４９】
図５には、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体（２）を添付カードとして有する冊子である印刷物（１）を示す。カードは、冊子の頁に設けられているポケット（８）に入っている。好ましくは、このポケットは透明フィルムで作られる。このカードは、オリゴマー及び／又はポリマーの１つ以上のスポット（３）を有する。各スポットは、カードからミシン目（６）に沿って切り取ることにより容易に切り離すことができる。またこのカードは、オリゴヌクレオチド及び／又はポリヌクレオチドの増幅のためのPCRプライマーを含んでもよい。この冊子は、オリゴマー及び／又はポリマーに関する情報が印字されたもの、例えば名称、DNA配列、アミノ酸配列、該アミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドの３次元構造などを含むことができる。科学者達は、この冊子から目的のオリゴマー及び／又はポリマーに関する情報のみならず、該オリゴマー及び／又はポリマーの物質を入手し、実験の実施を容易かつ迅速に開始できる。このタイプの冊子は、冊子と添付カードが別々の工場で製造できるので、製造業者にとって都合が良い。添付カードを製造するためには、オリゴマー及び／又はポリマーを処理するための特殊な装置及び／又は設備を使用する必要があり、これらは通常は印刷工場には備わっていないからである。製造業者がオリゴマー及び／又はポリマーのスポットを含む添付カードを冊子とは別に販売してくれれば、ユーザーにとって都合が良い。この理由は、ユーザーは、オリゴマー及び／又はポリマーのスポットを全て使い切ってしまったら、カードをもう１枚だけ購入すればそのオリゴマー及び／又はポリマーを入手できるからである。
【００５０】
図６には、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体（２）を頁として有する冊子である印刷物（１）を示す。この頁は、オリゴマー及び／又はポリマーの１つ以上のスポット（３）、ならびに該オリゴマー及び／又はポリマーの名称が印字されたものを含む。各スポットは、冊子からミシン目（６）に沿って切り取ることにより容易に切り離すことができる。また、この頁は、オリゴヌクレオチド及び／又はポリヌクレオチドの増幅のためのPCRプライマーを含んでもよい。この冊子は、別の頁に、オリゴマー及び／又はポリマーに関する情報が印字されたものを含む。この情報の例としては、オリゴマー及び／又はポリマーの名称、DNA配列、アミノ酸配列、該アミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドの３次元構造などが挙げられる。科学者達は、この冊子から目的のオリゴマー及び／又はポリマーに関する情報のみならず、該オリゴマー及び／又はポリマーの物質を入手し、実験の実施を容易かつ迅速に開始できる。このタイプの冊子は、情報と物質が別々の頁に提供されているという点で、ユーザーにとって都合が良い。ユーザーは、多くの種類のオリゴマー及び／又はポリマーを手に入れたいと思った時、これらの物質を、各オリゴマー及び／又はポリマーの情報と物質が同一頁に提供されている場合よりも短時間に入手できる。
【００５１】
図７には、表紙（11）、綴じ込みリング（10）及び複数枚のルーズリーフ紙（12）から構成されるルーズリーフ型冊子である印刷物（１）を示す。ルーズリーフ紙は図３で説明したとおりである。しかしながら、表紙(11)は必須ではない。例えば、表紙のない綴じ込みリングを用いることができる。複数枚のルーズリーフ紙は、表紙に固定されている綴じ込みリングにより（あるいは、表紙のない綴じ込みリングにより）全て一緒に綴じられて、ルーズリーフ型冊子を形成している。その冊子に新たなオリゴマー及び／又はポリマーを追加する場合、製造業者は、ユーザーに補充用の紙を提供すればよい。また、例えばユーザーがオリゴマー及び／又はポリマーのスポットを全て使ってしまった場合には、製造業者は、そのユーザーに所望の頁をもう１枚提供すればよい。
【００５２】
図８には、オリゴマー及び／又はポリマーのスポット（３）を含む論文である印刷物（１）を示す。これは、図１の論文に変更を加えたものである。この論文の印刷用紙が支持体（２）であり、この上にオリゴマー及び／又はポリマーが適用されている。この印刷用紙は、格子状の表の格子の中心にオリゴマー及び／又はポリマーのスポットを有する。印刷用紙はまた、別の格子状の表の格子の中心に、オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドの増幅のために用いられるPCRプライマーのスポット（４）を含んでもよい。科学者は、この論文を読んで、オリゴマー及び／又はポリマーを用いて実験を実施したいと思った時には、オリゴマー及び／又はポリマーの所望のスポットを含むストリップを論文から格子目（５）に沿って切り取り、これらの物質を該ストリップから溶出させることにより、これらの物質を迅速に入手できる。
本発明のさらなる見地として、印刷物は、実験を行うために必要な１つ以上又は全ての成分を含んでもよい。例えば、本発明の印刷物は、少なくとも１つのDNA、プライマー、プラスミド、ベクター、酵素、バッファー、他の溶液などを含んでもよく、その結果、科学者は、実験を行うための物質及び／又は濃縮物を紙から回収するだけで、迅速に入手することができる。従って、また、本発明は、実験を行うために必要な一部又は全部の化合物及び溶液を含む印刷物に関する。
【００５３】
図９には、オリゴマー及び／又はポリマー（例えばDNA、cDNA、RNA、mRNA、PNA、プラスミド、酵素、バッファーなど）を含む印刷文字（21）と、オリゴヌクレオチド及び／又はポリヌクレオチドの増幅に使用するための特定のPCRプライマーをさらに含む印刷文字（20）とを有する論文である印刷物（１）を示す。この論文は折り畳んだ１枚のリーフレットの形態である。また、この論文は、折り畳んだ１枚以上のリーフレットを含んでもよい。この論文はフリーの形態でもありうるし、あるいは、例えば、当業界で通常知られている解除可能な留め具手段により互いに綴じられることもある。論文の印刷用紙が支持体（２）であり、この上にオリゴマー及び／又はポリマーが適用されている。この印刷用紙は、表の線と線との間の領域に、オリゴマー及び／又はポリマーを含む印刷文字（21）と、該プライマーを含む印刷文字（20）とを含む。科学者は、この論文を読んで、このオリゴマー及び／又はポリマーを用いて実験を実施したいと思った場合には、印刷文字を含むストリップをリーフレットから切り取り、これらの物質を該ストリップから溶出させることにより、これらの物質を迅速に入手できる。この論文では、読者がそれを読み終わった後で、そのオリゴマー及び／又はポリマーを容易かつ迅速に入手できるようになっている。読者は、オリゴマー及び／又はポリマーを所有する著者又は寄託機関に連絡を取り、それ（それら）を手に入れるまで長時間待つ必要がない。
【００５４】
図10には、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体（２）から構成される印刷物（１）の１つの実施形態を示す。この印刷物（支持体）はカードの形態である。このカードは、バーコード（30）、ならびにオリゴマー及び／又はポリマーの１つ以上のスポット（３）を有する。各スポットは、カードからミシン目（６）に沿って切り取ることにより容易に切り離すことができる。カードの番号（すなわち「100」）、オリゴマー及び／又はポリマーによりコードされるタンパク質の名称（すなわち「Lysozyme」）、ならびに該オリゴマー及び／又はポリマーの種類（すなわち「cDNA library」）がカードに印字されている。このカードは、PCRプライマーのような任意の別のオリゴマーのスポットを含んでもよい。バーコードから、バーコード読取り装置を用いてオリゴマー及び／又はポリマーに関する情報を得ることができる。この情報の例としては、DNA配列、アミノ酸配列、該アミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドの３次元構造などが挙げられる。このカードは、他のカードと一緒にされ、１つの箱にこれらのカードのリストと共にパッケージすることができる。このタイプのカードは、オリゴマー及び／又はポリマーを小さな場所で室温にて保管できる点で都合が良い。また、オリゴマー及び／又はポリマーを簡便に配送するのに有効である。
【００５５】
図10に示す印刷物の別バージョンでは、様々な種類のオリゴマー及び／又はポリマーをスポットとして支持体（カード）（２）に適用することができ、バーコード（30）は、該カード上のオリゴマー及び／又はポリマーの各々の位置に関する情報、ならびに他の情報、例えばオリゴマー及び／又はポリマーの各々の名称、DNA配列、アミノ酸配列、該アミノ酸配列を含むタンパク質又はペプチドの３次元構造などを含むことができる。オペレーターは、カードに適用したオリゴマー及び／又はポリマーに関する情報を得るためには、バーコード読取り装置でバーコードを読み取ればよい。この情報から、オペレーターは、目的のオリゴマー及び／又はポリマーを選択し、適当な装置に該カードから該目的のオリゴマー及び／又はポリマーを溶出させ回収するよう指示を与えればよい。
バーコードの使用はこの態様に限定されず、本発明のいかなる支持体にも用いることができる。
【００５６】
オリゴマー及び／又はポリマーがスポットとして支持体に固定される場合、１つ以上のスポットを含むストリップをハサミやカッターなどで切り取ることができ、そのストリップはマイクロテストチューブに移すことができ、該オリゴマー及び／又はポリマーは該ストリップから溶出させ、ポリメラーゼ連鎖反応により通常の条件下で増幅することができる。
【００５７】
この場合、ポリメラーゼ連鎖反応のためのプライマーはドット、粉末又は液体の形態で供給できる。
【００５８】
スポットの形態のプライマーは、どの頁のどの場所に配置してもよく、あるいは、付録として印刷物の最後に添えてもよい。
【００５９】
たとえオリゴマー及び／又はポリマーの種類が様々であったとしても、共通のプライマーをある程度使うことができてプライマーの種類の数を減らすことができる場合には、プライマーは、アンプルや小試験管に入れることにより、液体又は乾燥粉末の形態で供給することも可能である。公知の技術に従い（例えば、Sambrookら、1989）、プラスミド、ベクター及び／又は真核若しくは原核宿主細胞、例えば、大腸菌などに核酸を導入することにより、核酸を回収することもできる。核酸は、次に使用するまでこの形態で維持及び保管することができる。
本発明は、少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体を含む印刷物の製造方法であって、印刷の前又は後にオリゴマー及び／又はポリマーを支持体に適用する工程を含む上記方法を提供する。オリゴマー及び／又はポリマーは公知の技術に従い支持体に固定又は印刷することができる。
本発明は、また、印刷物に含まれる少なくとも１つの支持体に適用した少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法であって、i)印刷物を印刷する前又は後にオリゴマー及び／又はポリマーを支持体上に適用する工程；ならびにii)前記オリゴマー及び／又はポリマーを含む該印刷物を配送又は保管する工程を含む上記方法を提供する。オリゴマー及び／又はポリマーが核酸である場合、本発明は、印刷物及び／又は支持体に適用した核酸を含む前記印刷物及び／又は支持体を用意し、該核酸を宿主細胞に導入することによって回収し、該核酸を保管することにより、核酸を保管する方法を開示する。
従って、本発明は、印刷物の印刷の前又は後に支持体に少なくとも１種の核酸を適用する工程、該印刷物を配送する工程、溶出、増幅及び／又は支持体から宿主分子へ前記核酸を導入することにより、前記少なくとも１種の核酸を回収する工程を含む、生物学的分子の配送方法を開示する。支持体に適用された生物学的材料がcDNAを含むプラスミドである場合には、プラスミドは支持体から回収される。その後、プラスミドは、例えばPCRのような公知の技術に従って増幅処理され、ｃDNAが増幅される。その後、ゲル電気泳動が行われ（例えば、Sambrookら、1989)、cDNAがゲルから回収され、いかなる目的にも使用されうる。以上のように、増幅されたcDNAは宿主細胞に「保管」され、次に使用されるまでその形態で保存されうる。また、宿主細胞に含まれるDNAはこの形態でさらに配送されうる。
本発明は、また、実験に必要な一部又は全ての物質、例えば、核酸、プライマー、酵素及び／又は溶液（例えば、バッファー）を含む印刷物を提供する。これらの分子又は物質のすべては支持体に適用可能で、その後、読者や受取人により回収可能で、その結果、読者や受取人は実験を迅速に行うことができ、それぞれの物質を要求したり、その物質の濃度を測定したり、その物質を調製したりする必要がなくなる。
従って、本発明は、印刷物で実験を行うために必要なオリゴマー及び／又はポリマーを用意、配送及び／又は保管する方法に関する。
しかしながら、この態様は、印刷物に限定されない。実験を行うために必要な一部又は全ての物質、例えば、核酸、プライマー、酵素及びバッファーを一枚の支持体（例えば、カードやシート）に適用することができる。従って、本発明は、また、実験を行うために必要な１種以上又は全ての物質を含む一枚の支持体に関する。さらに、本発明は、支持体に適用した、実験を行うために必要な一種以上又は全ての物質を含む、実験を行うためのキットを提供する。一種以上の物質は、核酸、プライマー、酵素、バッファー、他の溶液などでありうる。好ましくは、実験を行うために必要な全ての物質を支持体に適用することができる。支持体は、本発明のある態様で記載したように、紙、カード、シートなどでありうる。好ましくは、キットは、本発明に従い、水分解性の紙（例えば、三島紙）に適用した、実験を行うための１種以上の物質及び溶液を含む。
本発明の支持体は、また、前述のようにオブラードでありうる。従って、本発明は、オブラードに適用したオリゴマー及び／又はポリマーを含む印刷物に関し、そして、オリゴマー及び／又はポリマーを適用したオブラードを含む印刷物を用意することにより、オリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法に関する。
さらに、本発明は、また、オリゴマー及び／又はポリマーを含むオブラードを提供し、そして、オブラードにオリゴマー及び／又はポリマーを適用し、それを配送及び／又は保管することにより、オリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法を提供する。オリゴマー及び／又はポリマーは、オブラードを水に溶解することにより回収することができる。さらに、本発明は、また、ゲノムDNAからcDNA、エクソン及び好ましくは全長cDNAを合成する方法を提供する。この方法は、一つの特定の遺伝子、例えばヒト黄体形成ホルモン(hLH)を含むゲノムDNAから行う（しかしながら、この方法は、この遺伝子の全長FL又はエクソンの調製に限定されず、任意の遺伝子又はエクソンが調製されうる。）。
出発物質は、細胞（例えば、ヒトの細胞）の全ゲノムDNAである。ゲノムDNAは（例えば、BD Bioscience Clontech, USから）購入したり、標準的な技術で調製することができる。ゲノムDNAの供給源は、患者から得られるいかなる材料（例えば、血液）であってもよい。本発明の目的のためには、ある形態のゲノムDNA（血液、体液、液体、又は他の任意の生物学的材料から調製されたゲノムDNA、購入されたゲノムDNA又は精製された形態で調製されたゲノムDNA）を本明細書では「鋳型」又は「鋳型DNA」として示す。
FL-hLH（全長のヒト黄体形成ホルモン、これは２つのエクソンから構成される）を調製するためにこの方法を実現する例を図１９及び実施例８に示す。所望の遺伝子のエクソンを増幅及び／又は連結可能な１セットのプライマーを用いる。このセットのプライマーは、各エクソンとハイブリダイゼーション可能な１対のプライマーから構成される。第一の１対のプライマーの一つが第一のエクソンとハイブリダイズし、同時に、他の（次の）エクソンの末端と部分的にハイブリダイズする。例えば、図１７において、プライマーHsLH1Rtはエクソン１とハイブリダイズしたが、エクソン２の末端と部分的に相補的でもある。プライマーHsLH2Fはエクソン２とハイブリダイズするが、エクソン１の末端と部分的に相補的でもある。最終増幅産物は、所望の遺伝子のすべてのエクソンを含むcDNAを含み、従ってFL-cDNA（全長cDNA）である。
図１９及び実施例８に示すように、鋳型DNAからcDNAを調製するために複数のセットのプライマーを用いることができる。この実施例において、エクソン１の増幅のためのプライマー対、エクソン２の増幅のためのプライマー対、これらのエクソンの増幅及び連結のためのプライマーセット（従って、全てのプライマーセットを含む）を同じ支持体にスポットすることができる。この場合、全長の遺伝子だけでなく、１種以上のエクソンを合成することになる（図２０に示す）。従って、本発明は、また、少なくとも１セットのプライマーを適用した印刷物及び／又は支持体であって、該セットのプライマーはゲノムDNAからFL-cDNAを合成することができる前記支持体を提供する。このセットのプライマーは、鋳型DNAに含まれる遺伝子のエクソンを増幅するためのプライマー及び増幅されたエクソンをFL-cDNAに連結するためのプライマーを含む。印刷物及び／又は支持体は、また、１種以上のエクソンを増幅するための１種以上のプライマーを含んでもよい。好ましくは、印刷物及び／又は支持体は、FL-cDNAの合成のための１セットのプライマーを含んでもよく、随意に、さらに、１種以上のエクソンを増幅するための１セット以上のプライマーを含んでもよい。
印刷物及び／又は支持体は、さらに、これらの反応を触媒する１種以上の酵素（例えば、Taqポリメラーゼ）及び／又は実験を行うために必要な任意の溶液（例えば、バッファー溶液）を含んでもよい。
従って、印刷物及び／又は支持体の読者や受取人は、印刷物及び／又は支持体から少なくとも１セットのプライマーを回収し、鋳型DNA、酵素及びバッファーを添加することができる。酵素及びバッファーも印刷物及び／又は支持体に適用されている場合には、受取人は、異なる供給源から酵素及びバッファーを得る必要なく、全ての要素をそこから回収することができる。その後、読者又は受取人は実験を行い、得られたFL-cDNAを回収することができる。実験の反応生成物は公知の技術（例えば、Sambrookら、1989）に従い、電気泳動ゲルにかけ、FL-cDNAのDNAバンド及びエクソンのバンドをゲル上で同定することができる。
従って、本発明は、ゲノムDNAからFL-cDNAを合成することができる少なくとも１セットのプライマーを印刷物及び／又は支持体に適用する工程、及び該印刷物及び／又は支持体を配送及び／又は保管するする工程を含む、印刷物及び／又は支持体を配送及び／又は保管する方法を提供する。
患者の１種以上の特定の遺伝子を解析することを望んでいる医者は、患者から血液又は他の生物学的材料のサンプル（鋳型）を得ることが可能である。その後、医者は、１セット以上のプライマー（各セットのプライマーは特定のFL-cDNA遺伝子の増幅及び連結に特異的である）が適用された支持体を含む本発明のキットを使用することができる。好ましくは、支持体は、さらに、酵素（例えば、Taqポリメラーゼ）、及びバッファー溶液を含む。医者又は補助者は、支持体からプライマーセット及び随意の酵素及びバッファーを回収し、それらを鋳型DNAと混合することができる。増幅（例えば、PCR)プロセス及び電気泳動を行う。電気泳動はFL-cDNA遺伝子を示す。特定の遺伝子の欠失／挿入がある場合には、医者は迅速に診断を行うことができる。
得られたFL-cDNAはSNP解析（例えば、配列決定）又はタンパク質発現アッセイに用いることもできる。
従って、本発明は、鋳型DNAからcDNA及び／又はFL-cDNAを合成するための少なくとも１セットのプライマーを含む支持体を含むキット及び／又は診断キットを提供する。本発明は、また、1)患者から鋳型DNA（血液、体液又は他の生物学的材料）を調製する工程、2)支持体から少なくとも１セットのプライマーを回収し、随意に支持体から酵素及びバッファーも回収する工程、3)鋳型、プライマーセット、酵素及びバッファーを混合する工程、4)増幅及び／又は連結プロセスを行う工程、5)電気泳動工程及び6)得られたcDNA（エクソン）及び／又はFL-cDNAに基づいて診断を決定する工程を含む、診断方法も提供する。
本発明は、また、1)支持体から少なくとも１セットのプライマー、随意に酵素及びバッファーを回収する工程、2)プライマーセット、酵素及びバッファーを鋳型と混合する工程、3)エクソンの増幅及び／又は連結を行う工程、4) 電気泳動工程、5)随意に電気泳動手段からcDNA及び／又はFL-cDNAを回収する工程を含む、鋳型からcDNA及び／又はFL-cDNAを調製する方法を提供する。
さらに、上記の方法は、得られたcDNA及び／又はFL-cDNAをSNPや欠失又は挿入の解析をする工程、又はペプチド、ポリヌクレオチド又はタンパク質を発現させる工程を含んでもよい。SNP及び異常解析は、cDNA及び／又はFL-cDNAの配列決定又は他の公知の技術により行うことができる。
ペプチド、ポリヌクレオチド又はタンパク質発現は、任意のペプチド、ポリヌクレオチド又はタンパク質発現アッセイ、例えば、Roche Diagnosticの「Protein truncation test」又は「Linked SP6/T7 in vitro transcription/translation kit」(それぞれ、2002カタログ番号188839及び1814346)として知られているアッセイにより行うことができる。
本発明に従い、ゲノムDNAからhLHの全長cDNAを調製する方法を実施例８でより詳細に説明する。
支持体は、粉末又は溶液製品の形態でもありうる。従って、本発明は、担体（例えば、メチルセルロース）と混合したオリゴマー及び／又はポリマーを含む粉末製品も提供する。担体は、オリゴマー及び／又はポリマーと混合するのに適したいかなる不活性担体（例えば、医薬品の調製に通常利用される任意の担体）であってもよい。粉末製品はさらに酵素及びバッファー溶液を含んでもよい。
担体と混合するオリゴマー及び／又はポリマーは核酸であってもよい。さらに、少なくとも１種のプライマー又は少なくとも１セットのプライマーを製品と混合することもできる。随意に、酵素及び／又はバッファーも製品と混合できる。
従って、本発明は、粉末製品の配送及び／又は保管方法であって、担体をオリゴマー及び／又はポリマーと混合する工程、及び製品を配送及び／又は保管する工程を含む、前記の方法を提供する。例えば、この方法は、核酸及び少なくとも１種のプライマー又は少なくとも１セットのプライマー及び随意に酵素及びバッファー溶液を不活性担体と混合する工程、そのような製品を配送及び／又は保管する工程を含む、製品製造工程を含む。特定の実現化によれば、核酸はゲノムDNAであり、少なくとも１セットのプライマーは上記のようにゲノムDNAから全長DNAを合成することができる。従って、本発明は、また、上記のような製品を用いて全長DNAを調製する方法に関する。
製品は溶液の形態であってもよい。従って、オリゴマー及び／又はポリマーは液体担体中で混合され、水溶性の殻に包含されてもよい。そのような水溶性の殻は、例えば、公知の技術に従い、殻を含む医薬品と同じ方法で製造することができる。液体製品は、核酸、少なくとも１種のプライマー又は少なくとも１セットのプライマーセット、随意のバッファー溶液を含有してもよい。あるいはまた、液体製品は、プライマー、酵素及びバッファーを含有するが、核酸を含有しなくてもよい。液体製品は、反応の開始に必要な物質（例えば、酵素）の添加により、水溶液に溶解させることができる。
【実施例】
【００６０】
本発明を、以下の実施例を参照しながら更に詳細に説明する。しかし、本発明の範囲はこれらの実施例により限定されないものとする。
【００６１】
実施例１
まず、それぞれ５mm×５mmの大きさ（Ａ）ならびに10mm×10mmの大きさ（Ｂ）の各種シートを準備した。
DNA試料としては、２種の溶液を調製した。一方の溶液（Ｈ溶液）は、約1.5kbpのプラスミドDNA断片（1377bpのλDNA断片をEcoRV部位でpBSに挿入したもの）を333ng/μlの濃度で含むものとした。他方の溶液（Ｆ溶液）は、同じプラスミドDNAと万年筆インクとをそれぞれ333ng/μl及び17％（v/v）の濃度で含むものとした。
【００６２】
次に、（Ａ）の大きさのシートには３μl（１μg）のＨ溶液又はＦ溶液の各々をスポットし、（Ｂ）の大きさのシートには６μl（２μg）のそれら溶液の各々をスポットし、これらのシートをそれぞれ65℃で30分間乾燥させた。その後、（Ａ）の大きさのシートについては200μlの水に浸し、（Ｂ）の大きさのシートについては300μlの水に浸した。これらの浸したシートを65℃で10分間乾燥させ、さらにそれらを室温で２時間処理して溶出を行った。
【００６３】
溶出液についてフェノール抽出（フェノール：クロロホルム：イソアミルアルコール＝25：24：１を用いて２度抽出）を繰り返し、次にエタノール沈殿法によりDNAを回収した。
【００６４】
得られたDNAを10μlの水に溶かし、次の通りPCRを行った。最終反応容量：25μl、反応組成：10μMのM13（配列番号１）プライマー（M3-30）：5’-CAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGT-3’を0.5μl、10μM のRV32（配列番号２）： 5’-GATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGAC-3’を0.5μl、ExTaq 10×緩衝液を2.5μl、2.5mMのdNTPを２μl、ExTaqを１unit及びDNAとして、最初の反応を94℃で３分間行った後、反応を94℃で１分および68℃で２分で40サイクル繰り返した。このDNAは、1377bpの大きさのλDNAと両末端に配置されたプラスミドDNA分子とを含む約1.5kbpの大きさのDNA鋳型とした。
【００６５】
DNA（配列番号３）の塩基配列は、次の通りであった。
GATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGAATTCGATATCGCATTTTTCACCATGCTCATCAAAGACAGTAAGATAAAACATTGTAACAAAGGAATAGTCATTCCAACCATCTGCTCGTAGGAATGCCTTATTTTTTTCTACTGCAGGAATATACCCGCCTCTTTCAATAACACTAAACTCCAACATATAGTAACCCTTAATTTTATTAAAATAACCGCAATTTATTTGGCGGCAACACAGGATCTCTCTTTTAAGTTACTCTCTATTACATACGTTTTCCATCTAAAAATTAGTAGTATTGAACTTAACGGGGCATCGTATTGTAGTTTTCCATATTTAGCTTTCTGCTTCCTTTTGGATAACCCACTGTTATTCATGTTGCATGGTGCACTGTTTATACCAACGATATAGTCTATTAATGCATATATAGTATCGCCGAACGATTAGCTCTTCAGGCTTCTGAAGAAGCGTTTCAAGTACTAATAAGCCGATAGATAGCCACGGACTTCGTAGCCATTTTTCATAAGTGTTAACTTCCGCTCCTCGCTCATAACAGACATTCACTACAGTTATGGCGGAAAGGTATGCATGCTGGGTGTGGGGAAGTCGTGAAAGAAAAGAAGTCAGCTGCGTCGTTTGACATCACTGCTATCTTCTTACTGGTTATGCAGGTCGTAGTGGGTGGCACACAAAGCTTTGCACTGGATTGCGAGGCTTTGTGCTTCTCTGGAGTGCGACAGGTTTGATGACAAAAAATTAGCGCAAGAAGACAAAAATCACCTTGCGCTAATGCTCTGTTACAGGTCACTAATACCATCTAAGTAGTTGATTCATAGTGACTGCATATGTTGTGTTTTACAGTATTATGTAGTCTGTTTTTTATGCAAAATCTAATTTAATATATTGATATTTATATCATTTTACGTTTCTCGTTCAGCTTTTTTATACTAAGTTGGCATTATAAAAAAGCATTGCTTATCAATTTGTTGCAACGAACAGGTCACTATCAGTCAAAATAAAATCATTATTTGATTTCAATTTTGTCCCACTCCCTGCCTCTGTCATCACGATACTGTGATGCCATGGTGTCCGACTTATGCCCGAGAAGATGTTGAGCAAACTTATCGCTTATCTGCTTCTCATAGAGTCTTGCAGACAAACTGCGCAACTCGTGAAAGGTAGGCGGATCCCCTTCGAAGGAAAGACCTGATGCTTTTCGTGCGCGCATAAAATACCTTGATACTGTGCCGGATGAAAGCGGTTCGCGACGAGTAGATGCAATTATGGTTTCTCCGCCAAGAATCTCTTTGCATTTATCAAGTGTTTCCTTCATTGATATTCCGAGAGCATCAATATGCAATGCTGTTGGGATGGCAATTTTTACGCCTGTTTTGCTTTGCTCGACATAAAGATATCAAGCTTGGCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTG
【００６６】
反応後、５μlの反応生成物を１％アガロース電気泳動にかけて、PCR産物（約1.5kbp）を検出した。その結果を図11に示す。
レーン１はDNAサイズマーカー（λ／StyI 200μg）であり、レーン２は（Ａ）の大きさの薬包紙にＦ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン３は（Ｂ）の大きさの薬包紙にＦ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン４は（Ａ）の大きさのコピー用紙にＦ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン５は（Ｂ）の大きさのコピー用紙にＦ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン６は（Ａ）の大きさの薬包紙にＨ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン７は（Ａ）の大きさの薬包紙にＨ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン８は（Ａ）の大きさのコピー用紙にＨ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン９は（Ｂ）の大きさのコピー用紙にＨ溶液をスポットして得られたものを示し、レーン10はシートなしのもの（ポジティブコントロール）であり、レーン11はシートなしのもの（ネガティブコントロール）であり、レーン12はDNAサイズマーカー（λ／StyI 200μg）である。
【００６７】
レーン２、レーン３及びレーン６にはそれぞれ３μlのDNAを適用し、レーン４、レーン５、レーン７、レーン８及びレーン９にはそれぞれ１／50μlのDNAを適用した。
【００６８】
さらに詳細に述べると、上記した実験の結果によれば、支持体として通常のPPC用紙などのセルロースから製造されたものを用いて製造したDNA固定支持体では、該支持体に固定されたDNAは常温で保存可能であり、しかも、DNA固定支持体においては、支持体に固定されたDNAは該支持体から溶出により回収可能であり、さらには、こうして溶出回収されたDNAはポリメラーゼ連鎖反応により増幅可能であることが明らかになった。
【００６９】
支持体にDNAを付着させるには、次の方法を用いることができる。つまり、それらの方法は、ピンを用いてDNAを拾い、ピンに付いたDNAをさらに支持体に移す方法、シリンジに入れたDNA溶液を支持体に滴下してDNAを付着させる方法、及び既存の印刷技術を利用してDNA溶液を印字した状態で支持体に付着させる方法である。
【００７０】
この場合、既存の印刷システムとしては、例えば、インクジェットプリンターなどに用いられるインクジェット方式の印刷システムの印刷技術を用いることができる。
【００７１】
インクジェット方式の印刷システムなどの印刷技術を用いるには、印刷インキなどの着色剤の代わりにDNA溶液を用い、インクジェット方式の印刷システムに従って印刷用紙に該当する支持体に該DNA溶液を用いて印字すればよい。
【００７２】
このように、既存の印刷技術は、圧電素子や発熱素子を利用したインクジェット方式印刷システムに従い、印刷インキに代えてDNA溶液をそのまま使用できるので、本発明によるDNA固定支持方法に極めて簡便に用いることができる。
【００７３】
インクジェット方式印刷システムの印刷技術においては、一般的にそれぞれ約20μm〜100μmの大きさのドットを印字することができるので、DNA溶液を高密度で支持体に付着させることが可能となる。
さらに、乾燥状態のDNAは、タンパク質などの他の生体分子とは違って安定であり、100℃前後の温度に十分に耐え得るので、レーザープリンターにより実現されるものをはじめとする電子印刷や熱転写型の印刷技術も、本発明によるDNA固定支持方法に用いることができる。
【００７４】
実施例２
実施例１で用いたDNA分子に関連する論文を製造した。これは、タイトル、著者名、要約、緒言、材料及び方法、結果、考察、謝辞ならびに引用文献を含むものとした。論文の末尾に、実施例１のＦ溶液を用いてインクジェットプリンター（EPSON、PM-760C）により「TEMPLATE」という文字を印字した。その結果、論文に明瞭な印字が形成された。
本発明の印刷物及び支持体には当業界で知られている技術に従い印刷をすることができる。
科学的な主題の場合、冊子、定期刊行物、雑誌、論文、記事、支持体などには、例えば、研究の主題を記載している文字や図が印刷されうる。オリゴマー及び／又はポリマー、例えば、DNA溶液がその後に適用される。例えば、同じ紙のシート又は異なる大きさや形の異なる紙若しくは支持体のシート上の決められた位置又は印を付けた位置にスポットしたり、印刷したりする。随意に、不活性な染料（例えば、赤い染料）を支持体に適用されたオリゴマー及び／又はポリマー溶液に添加して、スポットの位置を支持体上で可視化することができる。
オリゴマー及び／又はポリマーが適用されたシートを冊子、定期刊行物などの形態に綴じて、書店を通してあるいはクーリエで読者に配送する。同封された遺伝子に興味がある研究者、学生及び読者は、その遺伝子をすぐに回収して、研究に用いることができる。
少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーが適用された少なくとも１個の支持体を含む成功した印刷物を提供するためには、いくつかの事項を考慮しなければならない。最初に、オリゴマー及び／又はポリマーは、許容できる程度に高い成功率で、読者や受取人によって容易に抽出可能でなければならない。第２に、印刷物又は支持体に適用されたオリゴマー及び／又はポリマーは、冊子を綴じたり、積み込んだりする間、安定な形態で保存されなければならない。第３に、汚染の危険を避けなければならない。
本発明の効率的な印刷物及び支持体の製造並びにオリゴマー及び／又はポリマーの効率的な保存及び回収を実施例３〜７で検討した。以下の実験において、DNAシートを形成するために水分解性の紙を用いた。60MDP紙（三島製紙株式会社、日本）を選んだが、この紙は室温で速やかに水に分解する。
〔実施例３〕
DNA 溶液の調製
種々のcDNAインサートサイズを持つ３種類の理研プラスミドcDNAクローン（744 bp, 2440 bp及び5460 bp)(それぞれ、配列番号４〜６に示した）を試験した。これらのcDNAを公知の技術（Sambrook ら、1989)に従ってpBluescriptに挿入した。
Qiagen Spin Miniprep キット（Qiagen、日本）を用いて、上記のcDNAクローンを含むプラスミドDNAを精製した。（あるいは、例えば、Sambrookら、1989に記載されているような超遠心分離法を用いることができる。）
プラスミドDNAをTE（10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA)に溶解した。DNA濃度を0.1μg/μlに調整した。
この工程で、回収の時に支持体上のスポットの位置を容易に確認できるように、不活性な染料、例えば、赤い染料を溶液に添加することができる。しかしながら、本実験においては、印をつけた場所にプラスミドDNA溶液をスポットしたので、このような染料は不要であった。
DNA シートの調製
96-ピンツール（Multi 96-multiblot replicator VP409, Bio Medical Science Inc., US)を用いて、DNAシートとして用いる60MDP（三島製紙株式会社、日本）（この紙に予め印刷をしておいてもしておかなくてもよい。）の上に、上記の調製したプラスミドDNA溶液約0.1μlを移した。これにより、決められた量のDNA溶液を紙上の決められた位置にスポットすることができた。紙上の印をつけた位置にスポットすることにより、スポットされた位置を容易に確認することができた。（あるいは、上記の「DNA溶液の調製」のところに記載したように、DNA溶液に混ぜた赤い染料の存在によって確認することもできる。）各スポットについて５回、プラスミドDNA溶液をスポットした。合計で、0.05μgのプラスミドを約0.5μlスポットした。
DNA の抽出及び回収
上記の紙を空気中で30秒以上乾燥させた後、以下のようにしてシートからDNAを抽出した。選択したDNAスポットを含む60MDP紙の１片（0.4 mm x 0.4 mm)をシートから切り出し、PCRチューブに入れた。次いで、PCR溶液50μLを添加した。PCR溶液には、KOD Plus DNAポリメラーゼ（東洋紡、日本）1.5 U、PCRプライマー0.2μM（-21M13（配列番号７）：5'-TGTAAAACGACGGCCAGT-3'及び1233-Rv（配列番号８）：5'-AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3'）、dATP, dGTP, dCTP及びdTTP各0.2 mMを含有し、種々の濃度のMgCl2（図１２に示すように、それぞれ、1 mM, 3.1 mM, 3.5 mM及び7.5 mM）が存在した。得られた溶液を遠心分離した後、PCRサイクルを開始した。PCRサイクルは、94℃で２分、29サイクルの変性（94℃、１分）、アニーリング（55℃、１分）及び伸長（75秒、68℃）、及び74℃で15分からなった。公知の技術(Sambrookら、1989）に従って行った1%アガロースゲル電気泳動を用いて、PCR溶液のアリコートを分析した。
別法として、公知の技術(Sambrookら、1989）に従い、溶解したDNAシートを含有する溶液のアリコートを別のチューブ中でPCRにかけ、その後、大腸菌形質転換を行うこともできる。読者又は受取人は、バックアップとして、あるいは他の実験のために、残りの溶液をとっておくことができる。
結果： DNA シート上にスポットした DNA の PCR 回収
図１２は、ｃDNAインサート（レーン１、４、７及び１０の744 bp；レーン２、５、８及び１１の2,440 bp；レーン３、６、９及び１２の5,460 bp）が好ましくは5.3 mMのMg2+濃度で増幅に成功したことを示す。この試験により、選択した条件で効率的なDNAのスポッティング及び抽出が可能であることが確認された。２つのレーンにおいては、先端に、分子量（1、2、3、4及び5 kb)を示すマーカーが添加された。
実施例４〜７の目的
DNAシート及びDNA冊子は、製造業者又は出版社による冊子の製本プロセス、読者又は受取人への発送及び普通の部屋での保存を通じてさらされる種々の状態に耐えることができなければならない。温度、圧力、湿度、光及び物理的な摩擦は、DNAシートや冊子に質的影響を与える可能性がある主要な問題の代表例である。これらの条件を試験したので、その結果を以下の実施例４〜７で報告する。DNA及びDNAシートの調製は、実施例３と同じクローンを用いて、同じ方法で行った。実施例４〜７の実験において、図１３，１４，１６及び１８に示すように、以下のマーカーを用いた。0.253 bp, 0.75 bp, 1 kbp, 1.5 kbp, 2 kbp, 2.5 kbp, 3 kbp, 4 kbp, 5kbp, 6kbp, 8 kbp及び10 kbp。
〔実施例４〕
温度条件下での DNA シートの保存
DNAシートを、140℃で30秒間及び-40℃で12時間、それぞれ処理した。すべてのcDNAインサートはPCRで増幅及び回収に成功した。図１３において、シートから回収し、140℃で処理した実施例３の３個のクローンがレーン１、２及び３で可視化された（それぞれ、744、2440及び5460 bp)。レーン４、５及び６には、コントロール（高温で処理されていないクローン）が存在する。図１４は、-40℃で12時間処理されたシートから回収された、それぞれ、レーン１及び２の744 及び5460 bpのcDNAを示す。
図１３及び図１４は、厳しい温度の効果により何の問題も認められず、すべてのcDNAが増幅及び回収に成功したことを示している。
この結果により、シート及び冊子に適用されたDNAは、冊子の製本プロセスの間に経験されうる高温にも、空輸の間に経験されうる低温にも耐性があることが確認された。
〔実施例５〕
圧力条件下での DNA シートの保存
DNAシートを約90〜170 Kgf/cm2（圧力単位変換は10.2 kgf/cm2 = 1 Mpaである）の高圧条件下に維持した。図１５は、実験をどのように行ったかを簡略化した見本である。（図に示すような）２つの部分を持つ”vice”（英語では、”capstan”とも呼ばれ、日本語では「万力」と呼ばれる）として知られている器具を用いて、高圧をつくりだした。この器具は、２つの部分が互いに近づき、紙１及び紙２及び紙３の上に圧力が生じるように作動することができる。紙２は、DNAを適用した紙を表す。紙２としては、三島紙を用いた。紙１はDNAクローンを持たない紙である。紙１としては、科学の定期刊行物に通常利用される紙を用いた。紙３は特別な圧力測定紙であり、この紙は特定の圧力がかかると色が変化する。本実験に用いた特別な圧力測定紙は富士フィルム（日本）から購入したカタログ番号LWの紙である。
この実験の第１の目的は、高圧がかかっている間、DNAが紙２から紙１に移動しないことを調べることであった。これは、汚染危険試験を表す。この実験のさらなる目的は、紙２に適用されたcDNAクローンが高圧により損傷を受けず、回収及び増幅に成功することを調べることであった。図１６は試験の結果を有する電気泳動を示し、図１７はどのように実験を行ったかを説明するものである。
レーン１、２及び３はコントロールである。これらは、それぞれ、高圧をかけられていないDNA紙から回収されたクローン744 bp、2440 bp及び5460 bpを表す。
レーン４、５及び６は、異なる値の高圧をかけられた紙２から回収した３個のcDNAを示す。かけた圧力は、レーン４及び５のクローンについて、97.4 Kgf/cm2であり、レーン５について、125.2 Kgf/cm2であった。このことは、レーン４、５及び６のcDNAが増幅と回収に成功したことを示す。
レーン７、８及び９は、レーン４、５及び６と同じ実験において圧力をかけた紙１に関する。レーン７、８及び９において、汚染は観察されない。このことにより、紙２に適用されたcDNAはこれらの値の圧力で紙１に移らないことが確認された。
レーン１０、１１及び１２は、148.4、92.7及び170.9 Kgf/cm2の圧力下で紙２から回収された３個のcDNAに関する。すべてのcDNAはこれらの値の圧力下で回収された。
レーン１３、１４及び１５は、レーン１０、１１及び１３と同じ実験をした紙１に関する。レーン１３、１４及び１５において、汚染は観察されなかった。
この結果により、シート及び冊子に適用したDNAは、冊子の製本プロセスの間に経験されうる高圧に耐性があり、これらの条件下ではcDNAの汚染が生じないことが確認された。
〔実施例６〕
湿度条件下での DNA シートの保存
DNA及びDNAシートの調製は、実施例３と同じクローンを用いて、同じ方法で行った。DNAシートに３個のcDNAプラスミドをスポットして、37℃、70%の湿度で、12時間、加湿されたインキュベーター中に保存した。その後、上記のようにして、DNAインサートを回収し、PCRで増幅した。これらのDNAシートからのDNAの回収に成功した。図１８Bは、これら３個のcDNAのすべての増幅に成功したことを示す。
〔実施例７〕
摩擦条件下での DNA シートの保存
さらに、DNAシートの摩擦が何らかの問題（例えば、PCR増幅を妨げるとか、隣のDNAと接触するなど）を起こしうるかどうかを試験した。同じ３個のcDNAをスポットしたDNAシートを冊子に挿入し、回転するシェイカー（180 rpm)を用いて、37℃で12時間強く振り回した。その後、上記のように、DNAインサートを回収し、PCRで増幅した。
図１８Ｂに示すように、すべてのDNAインサート（744 bp、2440 bp及び5460 bp)の増幅に成功した。DNAスポットが隣のスポットで汚染されることはなかった。図１６Ｂのゲルの左側の最初のレーンはマーカーを示す。
〔実施例８〕
ゲノム DNA から全長 cDNA を調製する方法
本実施例で鋳型DNAとして用いたヒトゲノムDNAは、BD Biosciences Clontech（US)から購入した。ヒト黄体形成ホルモン(hLH)の全長cDNAを合成するためのプライマーは、Invitrogen (US)から購入した。
本実験の結果によると、ヒト黄体形成ホルモンの全長遺伝子は、503 bpで、以下の配列を有している（配列番号９にも示す。）（以下で、エクソン１に相当する配列を大文字で書き、エクソン２に相当する配列を小文字で書く）。
【００７５】
【表１】
HsLH1F：CCAGGGGCTGCTGCTGTTG (配列番号12)
HsLH1Rt：cagcacgcgcatCATGGTGGGGCAGTAGCC (配列番号13)
HsLH2Ft：TGCCCCACCATGatgcgcgtgctgcaggcg (配列番号14)
HsLH2R：tgcggattgagaagcctttattg (配列番号15)
HsLH1F及びHsLH1Rtは、ヒト黄体形成ホルモンのエクソン１の各末端に相補的な配列を有し、HsLH2F及びHsLH2Rtは、同じ遺伝子のエクソン２の各末端に相補的な配列を有する。HsLH1Rt及びHsLH2Fは、互いに連結するために次のエクソンに相補的な追加の配列を有する（図１９）。
上記のプライマーを10 pmol/μlの最終濃度で10 μlのTE(10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA)に溶解した。
上記のように調製したプライマー溶液をスポット１、２及び３について混合した。
スポット１溶液：HsLH2F溶液とHsLH2Rt溶液を1:1の比で混合したもの。
スポット２溶液：HsLH1F溶液とHsLH1Rt溶液を1:1の比で混合したもの。
スポット３溶液：HsLH2F溶液、HsLH2Rt溶液、HsLH1F溶液及びHsLH1Rt溶液を1:1:1:1の比で混合したもの。
図２０に示すように、スポット１溶液0.4 μl、スポット２溶液0.4 μl、及びスポット３溶液0.8 μlを60MDP紙（三島製紙株式会社、日本）上の各対応スポット領域に移した。
上記の紙を空気中で30分以上乾燥させた後、プライマーを以下のようにしてシートから抽出した。選択したプライマースポットを含む60MDP紙の片（0.4 mm x 0.4 mm)をシートから切り出し、PCRチューブに入れ、次いで、PCR溶液50μLを添加した。PCR溶液には、10 mM Tris-HCl、pH 8.3、50 mM KCl、2.5 mM MgCl2、0.2 mM dNTP、100 ngの鋳型DNA（BD Biosciences Clontech, USから購入したヒトゲノムDNA)、及び2.5 UのTaq DNAポリメラーゼ（Roche Diagnostics)が含まれていた。PCRサイクルは、94℃で3分（50サイクル：94℃で30秒、40℃で、30秒、72℃で30秒）及72℃で1分であった。
3% NuSieve 3:1アガロース（タカラバイオ株式会社、日本）ゲル電気泳動を公知の技術(Sambrookら、1989)に従って行い、5μlの各PCR最終溶液（PCR溶液及びプライマー）を分析した。図２１は、電気泳動の結果を示す。レーン１は、DNAサイズマーカーとしてのpUC19/HpaIIであり（塩基対（bP）として報告）、各バンドのサイズはゲル写真の左側に示す（図２０）。レーン２及び３は、エクソン２(343 bp)及びエクソン１(184 bp)の増幅に成功したことを示す。レーン４は、ヒト黄体形成ホルモンの全長cDNA（503 bp)が得られたことを示す。レーン５、６及び７は、鋳型DNA以外はレーン２，３及び４と同じ物質を含有するコントロール試料であり、非特異的な増幅産物がないことを示している。この結果から、この技術を利用して、一つのチューブ中で、印刷物の支持体上のプライマーを用いた一工程のPCRにより、ゲノムDNAから全長cDNAが得られることが証明された。
本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願、特願2001‐291249号（出願日：2001年9月25日）の明細書、特許請求の範囲、図面及び要約書に記載される内容を包含する。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【産業上の利用可能性】
【００７６】
本発明によれば、少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体を含む印刷物が提供される。科学者達は、その印刷物から目的のオリゴマー及び／又はポリマーを簡便かつ迅速に入手できる。
【００７７】
本発明によれば、少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法が提供される。この方法により、オリゴマー及び／又はポリマーは、多大な労力や長い時間をかけずに、特殊な装置や設備を用いる必要もなしに、簡便に配送及び保管することができる。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】図１は、オリゴマー及び／又はポリマーのスポットを含む論文を示す。
【図２】図２は、印刷物と組み合わせた、支持体に適用したオリゴマー及び／又はポリマーの製品を示す。
【図３】図３は、印刷物にオリゴマー及び／又はポリマーを適用した製品を示す。
【図４】図４は、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体を添付シートとして有する冊子を示す。
【図５】図５は、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体を添付カードとして有する冊子を示す。
【図６】図６は、オリゴマー及び／又はポリマーを適用した支持体を頁として有する冊子を示す。
【図７】図７は、表紙と、綴じ込みリングと、複数枚のルーズリーフ紙とから構成されるルーズリーフ型の冊子を示す。
【図８】図８は、オリゴマー及びポリマー（高分子性及び低分子性の物質）のスポットを含む論文を示す。
【図９】図９は、オリゴマー及びポリマー（高分子性及び低分子性の物質）の印刷文字を含む論文を示す。
【図１０】図10は、オリゴマー及び／又はポリマーが適用されており、かつバーコードを含むカードを示す。
【図１１】図11は、実施例１の実験の結果を示す電気泳動の写真である。
【図１２】図12は、実施例３で説明したように、異なる量のMg++の存在下でDNAシート上にスポットしたcDNAのPCR回収を示すゲルである。可視のバンドの存在により、DNAが増幅及び回収されたことが確認できる。
【図１３】図13は、実施例４の実験に従い、140℃で30分間保存したDNAシートから回収した３個のcDNAクローンのゲルを示す。このcDNAの増幅及び回収に成功した。
【図１４】図14は、実施例４の実験に従い、-40℃で12時間保存したDNAシートから回収した３つのcDNAクローンのゲルを示す。このcDNAの増幅及び回収に成功した。
【図１５】図15は、万力を用いてどのように高圧をDNAにかけたかを示す。より詳細な説明を実施例５に報告する。
【図１６】図16は、実施例５の実験に従い、回収した３個のcDNAクローンのゲルを示す。このcDNAをDNAシート（高圧力下で保存）から増幅及び回収することに成功した。
【図１７】図17は、図16の実験の説明である。
【図１８Ａ】図18Aは、実施例６の実験に従い、回収した３個のcDNAクローンのゲルを示す。このcDNAをDNAシート（37℃、70%の湿度で12時間保存）から増幅及び回収することに成功した。
【図１８Ｂ】図18Bは、実施例７の実験に従い、回収した３個のcDNAクローンのゲルを示す。このcDNAをDNAシート（12時間摩擦下で保存）から増幅及び回収することに成功した。
【図１９】図19は、実施例８で報告したように、ゲノムDNAから遺伝子（この場合、hLH)の２つのエクソンを増幅及び連結した模式図である。各エクソンにつき１対のプライマーからなる１セットのプライマーにより、増幅及び連結を実施する。エクソン１のプライマーHsLH1Rtは部分的にエクソン２の先端に相補的である。エクソン２のプライマーHsLH2Fは部分的にエクソン１の先端に相補的である。
【図２０】図20は、ゲノムDNAからcDNAを製造するための１セットのプライマーをどのように支持体上にスポットすることができるかの一例である。説明は実施例８にある。
【図２１】図21は、実施例８で行った実験に従い、ゲノムDNAから調製したhLHの２つのエクソン及び全長cDNAのゲルである。レーン１は、マーカー及びそれらの相対数のbpを示す。レーン２は、回収されたエクソン２のバンドを示す。レーン３は、回収されたエクソン１のバンドを示す。レーン４は、最下位から最上部にかけて４つのバンド、すなわち、それぞれ、エクソン１、未同定のバンド、エクソン２及びhLHの全長cDNAを示す。レーン５、６及び７は、鋳型（ゲノムDNA）無でレーン２，３及び４と同様の実験を行った結果を示す。
【符号の説明】
【００７９】
１ 印刷物
２ 支持体
３ オリゴマー及び／又はポリマー（高分子性の物質）のスポット
４ オリゴマー及び／又はポリマー（低分子性の物質）のスポット
５ 格子目
６ ミシン目
７ 穴
８ ポケット
９ スリット
１０ 綴じ込みリング
１１ 表紙
１２ ルーズリーフ紙
２０ オリゴマー（低分子性の物質）を含む印刷文字
２１ オリゴマー及び／又はポリマーを含む印刷文字
３０ バーコード
【配列表フリーテキスト】
【００８０】
配列番号１は、実施例１で用いたM13プライマーの塩基配列を示す。
配列番号２は、実施例１で用いたRV32プライマーの塩基配列を示す。
配列番号３は、実施例１で用いた鋳型DNAの塩基配列を示す。
配列番号４〜６は、実施例３〜７で試験した３個のcDNAマウスクローンの配列を示す。
配列番号７は、実施例３〜７のDNAの増幅に用いた-21M13プライマーの配列を示す。
配列番号８は、実施例３〜７のDNAの増幅に用いた1233-RVプライマーの配列を示す。
配列番号９は、実施例８で得られた全長のヒト黄体形成ホルモン遺伝子（cDNA）の配列を示す。
配列番号１０〜１１は、それぞれ、ヒト黄体形成ホルモン(hLH)のエクソン１及び２の配列を示す。
配列番号１２〜１５は、hLHの２個のエクソンの増幅及び全長hLHの合成のためのプライマーHsLH1F、HsLH1Rt、HsLH2Ft、HsLH2Rの配列を示す。
Claims (43)
- 少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体を含む印刷物。
- 綴じられていない形態である、請求項１に記載の印刷物。
- 綴じられた形態である、請求項１に記載の印刷物。
- 前記支持体が印刷物において綴じられていない、請求項３に記載の印刷物。
- 前記支持体が綴じられた印刷物の１頁として綴じられている、請求項３に記載の印刷物。
- 少なくとも２個の支持体を含み、これらの支持体が共に綴じられていない、請求項１に記載の印刷物。
- 少なくとも１枚の印刷頁から構成される、請求項１に記載の印刷物。
- 定期刊行物、雑誌、論文、冊子、小冊子、リーフレット、パンフレット、報告書、ポスター、カード及びラベルからなる群から選ばれる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の印刷物。
- 前記支持体が非水溶性、水分解性及び／又は水溶性の支持体である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の印刷物。
- 前記非水溶性の支持体が主成分としてセルロースを含む、請求項９に記載の印刷物。
- 前記水溶性の支持体がオブラートの形態である、請求項９に記載の印刷物。
- 前記支持体がカードの形態である、請求項１〜11のいずれか１項に記載の印刷物。
- 前記オリゴマーがオリゴヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴ糖、PNA、及びそれらの混合物からなる群から選ばれる、請求項１〜12のいずれか１項に記載の印刷物。
- 前記ポリマーがポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖、PNA及びそれらの混合物からなる群から選ばれる、請求項１〜12のいずれか１項に記載の印刷物。
- 前記オリゴマー又はポリマーが断片又は完全な分子である、請求項１〜14のいずれか１項に記載の印刷物。
- 前記オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドがゲノムDNA、cDNA、RNA、mRNA、PNA、及びそれらの組合せからなる群から選ばれる、請求項13又は14に記載の印刷物。
- 前記オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドが断片、EST配列、長鎖配列、全コード配列、および全長配列からなる群から選ばれる、請求項16に記載の印刷物。
- 前記オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドが、１以上の増幅及び／又は連結プライマー及び／又はオリゴヌクレオチドプローブである、請求項13〜17のいずれか１項に記載の印刷物。
- ゲノムDNAに含まれる遺伝子のエクソンを増幅及び連結するための１セットのプライマーを含む、請求項１〜１８のいずれかに１項に記載の印刷物。
- 前記セットのプライマーが所望の遺伝子の各エクソンに対する１対のプライマーを含み、一つのエクソンに対する各対の少なくとも１個のプライマーが部分的に次のエクソンに相補的である、請求項１９記載の印刷物。
- 前記セットのプライマーが、遺伝子のエクソンの増幅及び連結によるゲノムDNAからのcDNA及び／又は全長cDNAの合成に適したものである、請求項２０記載の印刷物。
- １種以上の酵素及び／又はバッファーをさらに含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の印刷物。
- 少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを適用した少なくとも１つの支持体を含む印刷物の製造方法であって、印刷の前又は後にオリゴマー及び／又はポリマーを支持体に適用する工程を含む上記方法。
- 前記オリゴマー及び／又はポリマーを、それを前記支持体上に固定又は印字することにより該支持体に適用する、請求項２３に記載の方法。
- 前記オリゴマー及び／又はポリマー、並びに支持体が請求項１〜２２に規定したものである、請求項２３記載の方法。
- 印刷物に含まれる少なくとも１つの支持体に適用した少なくとも１種のオリゴマー及び／又はポリマーを配送及び／又は保管する方法であって、１）印刷物を印刷する前又は後にオリゴマー及び／又はポリマーを支持体上に適用する工程；ならびに２）該印刷物を配送又は保管する工程を含む上記方法。
- オリゴマー及び／又はポリマーの溶液をピン、シリンジ又はインクジェットプリンターにより支持体に直接適用又は付着させることによって、前記オリゴマー及び／又はポリマーを前記支持体に適用する、請求項２６に記載の方法。
- 前記オリゴマー及び／又はポリマー、並びに支持体が請求項１〜２２に規定したものである、請求項２６又は２７に記載の方法。
- さらに、前記オリゴマー及び／又はポリマーを、前記支持体からの溶出により回収する工程を含む、請求項２３〜２８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記の回収が、前記支持体を装置に挿入し、該装置により該支持体からの溶出及び回収を自動的に行うことにより実施される、請求項２９に記載の方法。
- 前記支持体がカードの形態である、請求項３０に記載の方法。
- 前記カードが、前記オリゴマー及び／又はポリマーの該カード上での位置に関する情報を含むバーコード、チップ又はラベルを含む、請求項３１に記載の方法。
- オペレーターが目的のオリゴマー及び／又はポリマーを選択し、前記装置が該目的のオリゴマー及び／又はポリマーを前記支持体から自動的に溶出させ回収する、請求項２３〜３２のいずれか１項に記載の方法。
- cDNAを合成する方法であって、
a)支持体及び／又は印刷物にエクソンの増幅及び／又は連結のための少なくとも１セットのプライマーを適用する工程、
b)前記支持体及び／又は印刷物から前記の少なくとも１セットのプライマーを回収する工程、
c)前記セットのプライマーを鋳型DNA、酵素及びバッファーと混合し、増幅及び／又は連結を行う工程
を含む前記の方法。 - 工程a)の後に、前記支持体及び／又は印刷物を保管及び／又は配送する、請求項３４記載の方法。
- 前記酵素及びバッファーが工程a)の間に支持体及び／又は印刷物に適用される、請求項３４又は３５に記載の方法。
- 増幅及び／又は連結の産物がcDNA及び／又は全長cDNAである、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記cDNA及び／又は全長cDNAが回収され、ヌクレオチドの挿入／欠失、SNP及び配列決定分析に用いられる、請求項３７記載の方法。
- 前記cDNA及び／又は全長cDNAが回収され、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質の発現に用いられる、請求項３７記載の方法。
- ヌクレオチドの挿入／欠失の決定、又はSNP分析の診断方法である、請求項３８記載の方法。
- 少なくとも１種のプライマー又は１セットのプライマーを適用した支持体及び／又は印刷物を含むキット。
- 前記支持体及び／又は印刷物がさらに、少なくとも１種の酵素、バッファー、ゲノムDNA、cDNA、RNA、mRNA、PNA、プラスミド、ベクター及び核酸を含む、請求項４１記載のキット。
- エクソンの増幅及び／又は連結のための少なくとも１セットのプライマーを適用した少なくとも１個の支持体及び／又は印刷物を含む、ゲノムの鋳型からcDNA及び／又は全長cDNAを合成するためのキット。
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