JP2005318890A - 微生物を計数し特定するための方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】液体サンプルにおける微生物を検出し、計数しおよび特定するための試験が教示される。この試験では、液体サンプルが通過してその上に液体中の生物が堆積するフィルターを用いる。次いで、一種以上の検出試薬を含む試薬を用いる増幅手段で処理する。その後、フィルターを生物が存在か/非存在かを調べる試験に付す。同じサンプルおよびフィルターを同時にまたは連続して検出試験に付して、標的化生物を特定する。
【選択図】なし
Description
本発明は、膜によるろ過、標的の増幅と、蛍光検出または比色検出などによる標的の検出を利用する、液体における微生物を検出し、計数し、および特定するための方法に関する。本方法の鍵となる特質は、存在する生物の迅速な検出、計数および特定を可能とする増幅工程である。増幅は、そのDNAまたはRNAなどの、生物における精選された分子を標的とし、標的分子が存在することを確認するために、いくつもの利用可能な検出技術によって検出が可能なレベルにまで、存在する分子を増加させる。増幅試薬には、単数(または複数)の標的分子の存在を示すための一種以上の検出試薬が含まれ、増幅試薬によって、種のレベルまたは属のレベルで、さらには門や界のレベルで選択された標的間の区別が可能となる。
a)微生物の保持に適する膜によって液体サンプルをろ過すること、
b)一種以上の検出試薬を含む一種以上の試薬を用いる増幅工程で、その膜上の微生物を処理すること、および
c)一種以上の保持された微生物の存在/非存在を求め、検出された数を計数し、および選択された検出試薬が存在することによって、存在する微生物のタイプを特定することを含む方法を提供することである。
本発明は、液体または粉末、塩、クリーム、錠剤などの可溶性の固体における微生物を迅速に検出し、計数しおよび特定するための方法に関する。このような液体としては、飲料水またはその他の水、牛乳などの乳製品、ビール、ワイン、ソフトドリンク、果汁、医薬品、輸液、バクテリアルエアーカウントなどが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
Claims (13)
- (a)微生物の保持に適する膜によって液体サンプルをろ過すること、(b)一種以上の検出試薬を含む増幅工程でその膜を処理すること、および(c)一種以上の微生物の存在/非存在、検出された数およびタイプを検出することを含む、微生物を検出し、計数し、および特定するための方法。
- 液体サンプルが50から1000ミリリットルであり、膜が、疎水性の区画で隔てられた親水性の領域を有するPVDF膜からなる群より選択され、約30から約90分間の期間に増幅工程が生じ、および単数(または複数)の選択された検出試薬に適する装置によって検出を行う、請求項1に記載の方法。
- 増幅が核酸に基づいた増幅システムであり、検出試薬が蛍光標識化核酸、ペプチド核酸プローブおよびそれらの混合物からなる群より選択され、およびデジタル画像化システムによって検出試薬が読み取られる、請求項1に記載の方法。
- 増幅が核酸に基づいた、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)の形式の増幅システムであり、検出試薬が蛍光標識化核酸、ペプチド核酸プローブおよびそれらの混合物からなる群より選択され、およびデジタル画像化システムによって検出試薬が読み取られる、請求項1に記載の方法。
- 増幅が核酸に基づいた増幅システムであって試薬が標的DNAおよび標的RNAからなる群より選択されるものであり、検出試薬が蛍光標識化核酸、ペプチド核酸プローブおよびそれらの混合物からなる群より選択され、およびデジタル画像化システムによって検出試薬が読み取られる、請求項1に記載の方法。
- 増幅が核酸に基づいた、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)の形式の増幅システムであって試薬が標的DNAおよび標的RNAからなる群より選択されるものであり、検出試薬が蛍光標識化核酸、ペプチド核酸プローブおよびそれらの混合物からなる群より選択され、およびデジタル画像化システムによって検出試薬が読み取られる、請求項1に記載の方法。
- X線フィルム、膜上での比色反応による視覚的検出、蛍光性タグの視覚的検出からなる群より選択される方法によって、またはデジタル画像化によって検出試薬が読み取られる、請求項1に記載の方法。
- 増幅工程がポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、核酸配列に基づいた増幅(NASBA)、ストランド置換増幅(SDA)およびリンクドリニア増幅(LLA)からなる群より選択され、およびサーマルサイクラーまたはその他の温度制御装置内で室温程度の25℃から約90℃の温度にて、膜のインキュベーションを約30から約90分間行う、請求項1に記載の方法。
- 増幅の前に、膜のインキュベーションを1から約4時間行う、請求項6に記載の方法。
- 試薬が蛍光性タグである、請求項1に記載の方法。
- 試薬が放射性タグである、請求項1に記載の方法。
- 試薬が比色用タグである、請求項1に記載の方法。
- 試薬が酵素タグである、請求項1に記載の方法。
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