JP2005170935A - 最終糖化産物の中間体とアマドリ転移後の阻害 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 ピリドキサミンを包含する薬剤。
【選択図】 なし
Description
政府の権利に関する陳述 本題に開示された成果のいくらかは、NIHの助成金DN43507号で一部援助されているので米国政府は本発明に特定の権利をもっている。
本発明は、最終糖化産物(Advanced Glycation End−product)(AGE)、その生成、検出、固定、阻害およびそのインヒビターの技術分野の発明である。
グルコースなどの還元糖による非酵素的グリケーションは、多様な病状に関与していることが分かってきているタンパク質の重要な翻訳後の修飾反応である。グルコースが誘発する緩慢なプロセスによる不可逆の非酵素的グリケーションと架橋反応は、糖尿病に付随する多数の合併症を仲介する。糖尿病に付随する慢性高血糖症は、慢性の組織損傷を起こして、網膜症、腎障害およびアテローム性動脈硬化症などの合併症をもたらすことがある(CohenおよびZiyadeh,J.Amer.Soc.Nephrol.,7巻、183〜190頁、1996年)。長期間の真性糖尿病に付随して起こる慢性の組織損傷は、一部は、非酵素的グリコシレーションによって最終糖化産物(AGE)が生成した長命の構造タンパク質に結合した免疫グロブリンおよび/または抗原が蓄積することによって、その場で免疫複合体が生成することが原因で起こる(Brownleeら,J.Exp.Med.,158巻、1739〜1744頁、1983年)。その主要なタンパク質の標的は細胞外マトリックス結合コラーゲンであると考えられる。タンパク質、脂質および核酸の非酵素的グリケーションは老化の自然のプロセスで重要な役割を演じているかもしれない。最近、タンパク質のグリケーションが、アルツハイマー症のβ−アミロイドの沈着および神経細線維もつれの生成、ならびにアミロイド症を含む可能性のある他の神経変性疾患に関連があることが分かった(ColacoおよびHarrington,Neuro Report、5巻、859〜861頁、1994年)。グリケーションを受けたタンパク質は、毒性であり抗原性でありかつ特異的な細胞受容体に取りこまれた後、細胞損傷の応答をトリガーすることができることも報告されている(例えば、Vlassara,BucalaおよびStriker,Lab.Invest.,70巻、138〜151頁、1994年;Vlassaraら,PNAS(USA),91巻、11704〜11708頁、1994年;DanielsおよびHauser,Diabetes,41巻、1415から1421年、1992年;Brownlee,Diabetes,43巻、836〜841頁、1994年;Cohenら,Kidney Int.,45巻、1673〜1679頁、1994年;Brettら,Am.J.Path.,143巻、1699〜1712頁、1993年;およびYanら,PNAS(USA),91巻、7787から7791頁、1994頁参照)。
生体内でのAGE形成阻害物質の有効性を実証するために、アロキサン誘発性糖尿病ルイス・ラットを蛋白質老化モデルとして使用してきた。後期糖尿病関連症とAGE形成阻害との間に相関関係があることが実証されている(Browlee,CeramiおよびVlassara,New Eng.J.Med.,318巻20号:1315〜1321頁、1988年)。ルイス・ラットにおけるストレプトゾトシンによる糖尿病誘発、糖尿病を誘発したニュージーランド白色ウサギ、遺伝的に糖尿病のBB/ウスター・ラット(BB/Worcester rat)も利用されており、たとえば米国特許第5,334,617号(参考文献として組み入れ)に述べられている。これらのモデル系の主な問題点は、AGE関連損傷を実証するのに長期間を要し、したがって化合物のAGE阻害について試験するのに長期間かかるという点である。たとえば、米国特許第5,334,617号で述べるラット試験には16週を要し、ウサギ試験には12週を要した。したがって、AGE関連損傷ならびにアマドリ後AGE形成阻害物質の有効性をより効率よくかつ迅速に実証できるようにするためには、より短期間で現れるようなAGE関連糖尿病性病理のモデル系が得られれば非常に望ましく、かつ有用であろう。
AGE形成について調べるのに重要な手段は、様々な標的蛋白質と数種の糖との反応によって引き起こされるAGEに特異的なポリクロナール抗体およびモノクロナール抗体を利用することである。抗体は、AGEの蛋白質成分の性質とは無関係に生じるAGEについての特異性度で選別される(Nakayamaら,Biochem.Biophys.Res.Comm.,162巻740〜745頁、1989年;Nakayamaら,J.Immunol.Methods,140巻119〜125頁、1991年;Moriuchiら,J.Biol.Chem.,266巻7329〜7332頁、1991年;Arakiら,J.Biol.Chem.,267巻10211〜10214頁、1992年;Makitaら,J.Biol.Chem.,267巻5133〜5138頁、1992年)。このような抗体を使って、生体内と生体外の双方でAGE形成について検討されてきた。
ビタミンB複合体の中で最初に確認されたチアミンは、通常の治療有効量で投与した場合は現実には薬力学的作用はもたらさない。大量に投与した場合でさえも、どんな作用があるかはわかっていない。チアミンピロリン酸はチアミンの生理学的活性体で、主としてα−ケト酸の脱炭酸における補酵素として炭水化物代謝で働く。塩酸チアミン錠剤は5mg剤から500mg剤まである。塩酸チアミン注射液は、100mg/ml含有液から200mg/l含有液まである。
様々な会社から出されている市販製剤では、ビタミンB6は塩酸ピリドキシンの形で含有されているのが標準的である。たとえばビーチ(Beach)製薬のビーリス(Beelith)錠には塩酸ピリドキシン25mgが含まれており、これはビタミンB6 20mgに相当する。この他、マーリンヘルスケア(Marlyn Health Care)のマーリンフォーミュラ50(Marlyn Formula 50)には塩酸ピリドキシン1mgが、マーリンフォーミュラ50メガフォルテ(Marlyn Formula 50 Mega Forte)には塩酸ピリドキシン6mgが含まれ、ワイエス−アイエルスト(Wyeth−Ayerst)のスチュアートプレネイタル(Stualrt Prenatal)(登録商標)錠には塩酸ピリドキシン2.6mgが、ジェイ・アンド・ジェイ−メルク社(J&J−Merck)のスチュアートフォルミュラ(Stuart Formula)(登録商標)錠には塩酸ピリドキシン2mgが含まれている。またチバ・コンシューマー・サンキスト・チルドレン(CIBA Consumer Sunkist Children)の噛める複合ビタミン剤には塩酸ピリドキシン1.05mgが含まれており、これは米国の2〜4歳幼児のRDA(1日摂取許容量)の150%、4歳以上から成人のRDAの53%に相当する。(医師向け非処方箋薬卓上必携(Physician’s Desk Reference for nonprescription drugs)第14版、Medical Economics Data Production(Medical Economics Data Production Co.)、ニュージャージー州モンベール、1993年)。
蛋白質がグルコースと反応してAGEを形成することを調べる標準的な研究は、抗原性AGEに対する抗体を使ったELISA法ならびに酸加水分解後にHPLCで酸に安定な蛍光AGEであるペントシジンの生成を検出することによって行われてきた。標的蛋白質(すなわちBSAまたはRNase A)のグルコースおよびリボースによるグリケーションを、ポリクロナールウサギ抗グルコース−AGE−RNase抗体および抗グルコース−AGE−BSA抗体のELISA反応性を監視して比較した。抗原は、グルコース1MをRNaseとは60日間、BSAとは90日間反応させて生成した。抗体(R618およびR479)を調べたところ、キャリヤー免疫原を除いてはAGEに対してのみ反応し、蛋白質には反応しないことがわかった。
チアミンピロリン酸およびピリドキサミンはグルコースの抗原性最終糖化産物の形成を阻害する:アミノグアニジンとの比較
一部のビタミンB6、特にピリドキサールリン酸(PLP)は、アルデヒドとしてそれ自体が蛋白アミノ基を有するシッフ塩基付加物を形成することができ(Katamiら,Life Sciences:43巻1725〜1731頁、1988年)、したがってグルコース付着に利用できるアミンの量を限定するところから、早期グリケーションの「競合的阻害物質」として働くことがすでに提唱されている。ただし、初期の糖付着限定の有効性からアマドリ産物からAGEへの変換の阻害を予測することはできない。本発明では、抗原性AGEの生体内形成(Boothら,Biochem.Biophys.Res.Com.220巻:113〜119頁、1996年)に対する作用で示される「後期」グリケーション反応の阻害物質について述べる。
ウシ膵臓リボヌクレアーゼA(RNase)は、クロマトグラフィーで純度が高く凝集しないものをウォーシントン・バイオケミカルズ(Worthington Biochemicals)から入手した。ウシ血清アルブミン(BSA;画分V、脂肪酸なし)、ヒトのメトヘモグロビン(Hb)、D−グルコース、ピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサール−5’−リン酸、ピリドキサミン、チアミン、チアミンモノリン酸、チアミンピロリン酸、ヤギアルカリホスファターゼ抱合抗ウサギIgGは、いずれもシグマ・ケミカルズ(Sigma Chemicals)から入手した。塩酸アミノグアニジンはアルドリッチ・ケミカルズ(Aldrich Chemicals)から購入した。
ウシ血清アルブミン、リボヌクレアーゼA、ヒトのヘモグロビンを、0.02%アジ化ナトリウムを含有するpH7.5の0.4Mリン酸ナトリウム緩衝液中で、37℃でグルコースとインキュベートした。蛋白質、グルコース(1.0M)、および阻害物質と予想されるもの(0.5、3、15、50mM)をインキュベーション混合液に同時に導入した。溶液は暗所でキャップをした試験管に保存した。液の一部を採って直ちに凍結し、反応終結時にELISA法で分析した。インキュベーション期間は3週間(Hb)または6週間(RNase、BSA)とした。
免疫原は、これまでのプロトコルに従って調製した(Nakayamaら,Biochem.Biophys.Res.Comm.162巻:740〜745頁、1989年;Horiuchiら,J.Biol.Chem.266巻:7329〜7332頁、1991年;Makitaら,J.Biol.Chem.267巻:5133〜5138頁、1992年)。簡単に説明すると、0.05%アジ化ナトリウムを含有するpH7.5の0.4Mリン酸ナトリウム緩衝液中でpH7.4および37℃の条件で1.5Mグルコースを使って、15ml中に1.6gの蛋白質で60〜90日間BSA(R479抗体)またはRNase(R618抗体)のグリケーションを行って免疫原を作製した。8〜12週齢の雄ニュージーランド白色ウサギに、フロイントアジュバントに1mg/mlのグリコシル化蛋白質が入った溶液1mlを皮下注して免疫化した。最初の注射には完全アジュバントを使用し、それからフロイントの不完全アジュバントで3週間おきに3回追加注射をした。最後の追加注射後でウサギを3週間育種した。凝塊した全血を遠心分離して血清を採取した。抗体はAGE特異性で、天然蛋白質(キャリヤーを除く)にもアマドリ中間物質にも反応しなかった。ポリクロナール抗AGE抗体は、生体内でも生体外でも「後期」AGE形成の試験における分析ツールとして感度がよく価値あることが立証されている。支配抗原性AGEエピトープまたはハプテンの性質はまだ疑わしいが、最近では蛋白質グリコシル化産物であるカルボキシメチルリジン(CmL)が一部の抗体の支配抗原かもしれないと提唱されている(Reddyら,Biochem.,34巻10872−10878頁、1995年)。初期の研究では、モデルCmL化合物に対する反応性をELISA法で明らかにできていない(Makitaら,、J.Biol.Chem.267巻:5133〜5138頁、1992年)。
ELISA法にはエングバルの一般法(Methods Enzymol.70巻:419〜439頁、1981年)を使用した。標準的には、グリコシル化蛋白質試料をpH9.5〜9.7の0.1M炭酸ナトリウム緩衝液で約1.5μg/mlに希釈した。96ウェルのポリスチレンプレートの各ウェルに蛋白溶液200μl(0.3μg/ウェル)を分注して、室温で一晩被覆した。被覆後に、0.05%トゥイーン−20含有生理食塩液でウェルから蛋白質を洗い流した。それから1%カゼインの炭酸塩緩衝液溶液200μlを使って37℃で2時間ウェルをブロックし、洗浄した。ウサギ抗AGE抗体をインキュベーション緩衝液で1:350くらいの力価に希釈し、37℃で1時間インキュベートしてから洗浄した。バックグラウンド値をできるだけ小さくするために、グリコシル化RNaseの検出に使用する抗体R479をグリコシル化BSAに対して、またグリコシル化BSAおよびグリコシル化Hbの検出に使用する抗体R618をグリコシル化RNaseに対して高くした。その後、ウサギIgGに対するアルカリホスファターゼ抱合抗体を二次抗体として1:2000または1:2500(ロットによる)の力価で加え、37℃で1時間インキュベートしてから洗浄した。p−ニトロフェニルリン酸基質液(200μl/ウェル)をプレートに加え、ダイナテックMR 4000マイクロプレートリーダーを使って410nmで放出されるP−ニトロフェノレートの吸光度をモニターした。
図1のA〜Dは、グルコースでグリコシル化したウシ血清アルブミンにおけるアマドリ後AGE形成に対するビタミンB6誘導体の作用を示したグラフである。BSA(10mg/ml)を、示した様々な誘導体の存在する場合としない場合とで、pH7.5の0.4Mリン酸ナトリウム緩衝液中で1.0Mグルコースと37℃で6週間インキュベートした。液の一部を採って、R618抗AGE抗体を利用したELISA法で定量した。阻害物質の濃度は3mM、15mM、50mMであった。使用した阻害物質は、図(1A)がピリドキサミン(PM)、図(1B)がピリドキサールリン酸(PLP)、図(1C)がピリドキサール(PL)、図(1D)がピリドキシン(PN)である。
以上の結果から、ビタミンB1およびB6の一定の誘導体は「後期」アマドリ後AGE形成阻害能があることが実証される。これらのビタミン誘導体の一部はアミノグアニジンとは異なりアマドリ後AGE生成の最終レベルを抑えるのに成功しており、アマドリまたはアマドリ後の抗原性AGE前駆体との相互作用がより大きいことが示唆される。アマドリおよびアマドリ後中間物質は非常に重要な接合部であり、非酵素的グリケーションの「古典的」経路がここから基本的に不可逆的になる(概略図I)。以前の阻害研究では、「グリケーション」は形成されるシッフ塩基(標識したシアノボロハイドライドで還元後)として、あるいは形成されたアマドリ産物(標識した糖を使って酸析出後)としてのいずれかで測定するのが普通であった。このような定量法では「後期」アマドリ後AGE形成へ向けてのアマドリ後変換ステップの阻害に関する情報は得られない。というのもこのようなステップでは蛋白質に付着する標識をした糖の量に変化が生じないからである。他の「グリケーション」定量法は糖による非特異的蛋白蛍光の増加に依存してきたが、これもアマドリ産物形成とは無関係にグリコアルデヒドまたはグリオキサールなど遊離糖のジカルボニル酸化的フラグメントによって誘発することができる(Huntら,Biochem.256巻:205〜212頁、1988年)。
非酵素的グリケーションの動態:リボースによる逆説的阻害および迅速アマドリ後AGE形成についてのタンパク質中間体の容易な分離
高濃度のグルコースが使用されてタンパク質の非酵素的グリケーションが起る一方で、普通と異なり、高濃度でのリボースは、グリケーション反応のアマドリ後「後期」段階に作用することよって、リボヌクレアーゼ中でのアマドリ後AGE形成を阻害することが分かった。この予期せぬ阻害効果は、「初期」の反応性中間体、おそらくアマドリ生成物が「後期」アマドリ後AGE生成物(AGE;メイラード生成物)をほとんど形成しないで蓄積されうることを示唆する。この現象についての研究は、(1)アマドリ(またはアマドリ後)グリケーション中間体(類)の速度論的単離についての条件を定める能力、(2)このような中間体の蓄積の急速な動態を研究する能力、(3)遊離または可逆的に結合した糖の不存在下でこのような中間体をAGE生成物に返還する意外にも迅速な動態を研究する能力、(4)AGE形成のアマドリ後段階の阻害を研究し、特徴づけるためにこれらの中間体を使用する能力、したがってこれによりAGE形成を封鎖できた反応の機構および潜在的剤の効力を研究するための新規システムを供する、そして(5)この知見により、反応性中間体を研究し、様々なAGEs候補への変換を観察するために13C NMRを使用することもさらに可能であることを示した。(Khalifahら,Biochemistry 35巻15号:4645〜4654頁、1996年)。
アミノ酸分析は、ザ・バイオテクノロジー・サポート・ファシリティー・オブ・ザ・カンサス・ユニバーシティー・メディカル・センターで行われた。6N HClを用い、110℃で、18−24時間(シアノホウ水素化ナトリウムで還元された)グリケーション化タンパク質を加水分解した後、分析が行われた。誘導体化に、フェニル イソチオシアネートを使用し、そして応用バイオシステム・アミノ酸分析器(420Aデリバタイザー、130A分離系、920Aデータ分析系)に逆相HPLCをかけて、PTH誘導体を分析した。
HPLCによって、RNaseでのペントシジン生成物を定量した(SellおよびMonnier,J.Biol.Chem.,264巻:21597〜21602頁、1989年;Odettiら,Diabetes,41巻:153〜159頁、1992年)。リボース修飾タンパク質サンプルを、18時間、100℃で6N HClを用いて加水分解し、その後スピードバキュームで乾燥させた。その後、そのサンプルを再溶解し、そして一定量を0.1%トリフルオロ酢酸に取り、そして0.1%TFAで平衡化したビダックC−18カラムを使用したシマダ・システムでHPLCによって分析した。0−6%アセトニトリルの勾配を、約1ml/分の流速で30分かけて行った。335nm励起/385nm蛍光照射により、ペントシジンを検出し、そして合成標品を流すことでその溶出時間を測定した。予測されるペントシジンが極めて低濃度であるため(GrandheeおよびMonnier,J.Biol.Chem.,266巻:11649〜11653頁、1991年;Dyerら,J.Biol.Chem.,266巻:11654〜11660頁、1991年)、絶対濃度を定量する試みはなされなかった。ピーク領域から相対濃度のみを測定した。
リボースまたはグルコースでの修飾は、一般に37℃で、0.02%アジ化ナトリウムを含むpH7.5の0.4Mリン酸緩衝液中で行われた。高濃度の緩衝液は、常に0.5Mリボース修飾と一緒に使用された。その溶液を密栓付試験管に保存し、そして後に様々の分析を行うためにすぐに凍結されるのに適当な一定量量を取出すときのみに開けた。最初、タンパク質をリボースと一緒に、37℃で8または24時間インキュベートし、次に4℃に変えた反復冷緩衝液で即時および多量の透析を行うことによって、「中断グリケーション」試験を行った。その後、外因性リボースの不存在下ですばやく37℃に加温してそのサンプルを再度インキュベートした。一定量量を取り、そして後の分析のために種々の間隔で凍結した。低分子量排除透析管を使用した場合でさえ、透析後、低分子量のRNaseについて、タンパク質濃度を再度測定した。0.5Mリボースを含有する反応混合液からサンプルを100倍希釈することによる代替法も考案された。UVスペクトルからタンパク質濃度を算定した。UV吸光度で、グリケーションに伴う一般的な増加を補うために、ピーク(278nm)およびトラフ(谷)(250nm)の間のモル吸光度での差をRNase濃度の決定に使用した。UVスペクトルのグリケーションの寄与を特徴づけるために、時間依存UV差のスペクトル試験を行った。
動態データを、直線でない最小二乗法を用いた一次指数または二次指数関数に順次適合させた。反応の微分方程式の数量シュミレーションによって、概略図5−6の動態機構を試験した。観察された動態データのシュミレーションとの適合は、SCIENTIST2.0ソフトウエア・パッケージ(Micromath,Inc.)を用いて行った。動態データから明白な半減期(図6B)を測定するのは、MathCAD4.0ソフトウエア(Mathsoft,Inc.)の「解決」関数を用いて行った。
グルコースおよびリボースによるクルコシル化の比較
リボースおよびグルコースとのRnase Aの反応を、第一に、グルコース補足BSAによって発生したR479ラビットAGE特異的抗体を用いたELISA法で行った。最小範囲について、ペントシジンの生成物である唯一の公知の酸安定性蛍光AGEをHPLC続いて酸加水分解を行うことによって定量した。37℃での0.05Mリボースを使用した予備試験では、抗原AGE形成の速度は、そのpHが5.0から7.5に増やされる場合に、全ての場合で動態の始めに明白な少しの誘導期を伴って適度に増加する(明白な半減期によって測定された概ね2〜3倍)ように見えることを示した。pH7.5で0.05MリボースとのRNaseのグリケーション(半減時間6.5日付近)は、ほとんど1.0Mグルコースとのグリケーションのもの(半減時間30日を越える、図7Bを参照、実線)より早い大きさの桁であるように思われる。後者の動態も少しの誘導期を示したが、60日後でも横ばい状態に達しないで、真の半減時間を計算するのを困難にした。
見られた導入期がすくない点で、ELISA検出可能なアマドリ後抗原性AGEsを産成する能力があって、アマドリ中間体のような初期の前駆体の、反応中にいくらか蓄積があるかどうかを測定する試みがなされた。0.5Mの高濃度のリボースを用い、pH7.5で、37℃でRNaseをグリケーションし、そしてその反応を24時間後、4℃にただちに冷却して中断させ、24時間かけて数回冷緩衝液を変えて透析して遊離で可逆的に結合した(シッフ塩基)リボースを除去した。その後、このようなリボース不含のサンプルを再度いかなるリボースも添加せずに37℃まで急速に加温し、そして数日をかけて、アマドリ後AGE形成についてサンプリングした。この24時間「中断グリケーション」サンプルのAGE抗原産生は、図7Aで破線および白抜き三角によって示され、ただし、冷透析に使われた時間は含まれない。中断されていない対照(実線とべた塗り円形)も比較として示される。アマドリ後抗原性AGE形成の劇的に異なる動態は、この2つのサンプルで明白である。リボース不含の中断サンプルのAGE抗原産成の動態は、ここで(1)誘導期を伴わない一次指数動態、(2)10時間の桁の目立った半減時間を伴う非常に増加した速度の抗原性AGE形成、および(3)リボースの連続存在下で長期間インキュベートする場合に見られるものに匹敵する濃度の抗原の産成(図6Aを参照)を示す。同様に重要に、そのデータも、図7Aの時間1日で白抜き三角とべた塗り円形の間の少しの差によって示されるとおり、冷透析期間にごくわずかなAGE抗原が形成されることを例示する。「中断」手段自身によってAGEが形成される場合はいずれも、非常にすくない。これらの観察は、抗原性AGEに対して十分に相当な単離可能な中間体または前駆体が、遊離および可逆的に結合した糖を除去する前に、リボースとの24時間接触中に発生されることを示す。
ELISA法に付されたサンプルも、酸安定AGEであるペントシジンの産生について分析した。ペントシジンの含量を、ELISA法によって抗原の反応性について分析した同じRNaseサンプルについて測定した。pH7.5で0.4Mリン酸緩衝液中でリボースを用いたグリケーションにより、酸加水分解後蛍光物質によって定量されたRNase A中でペントシジンが産生された。図8Aは、未中断の条件下で、0.05Mリボースがペントシジンについて目覚しい増加を生じることを示す。しかし、グリケーションが0.5Mリボースを用いた「中断」条件下で行われると、過剰なリボースを除去した直後にペントシジン形成の速度に劇的な上昇が見られ(図8B)、それは、抗原性AGEの出現の動態と同様であるが、わずかに迅速である(図7A)。8時間と比べて、24時間中断でより多くの量のペントシジンも生成される。ペントシジンと抗原性AGEsの形成についての動態の間の再現できる差も、注目できる。24時間インキュベーション中、そして冷透析中にも、相当な量のペントシジンが形成されて、図8Bで垂直破線が急増する。したがって、我々の観察では、ペントシジン前駆体が、リボース除去後にペントシジンを急速に産生することができるリボースグリケーションの間に蓄積することが示される(比較、Odettiら,Diabetes,41巻:153〜159頁、1992年)。
上述の「中断グリケーション」試験は、アマドリ後抗原性AGEおよびペントシジンの両方に対する前駆体または前駆体類がリボースを用いたグリケーションの間に蓄積できるを例示する。この中間体の形成についての動態は、独立に行われ、そして上述の様々な試験によって定量できる。リボースとの接触時間の異なるRNaseで発生した中間体の量は、その中間体が中断後抗原性AGEを産生できる最大範囲によって分析される。グリケーションを開始した後の可変時間で、冷却透析または迅速な希釈により遊離および可逆的に結合したリボースを除去する(以下参照)。その後、アマドリ後抗原性AGEの最大限発生させるために37℃に加温した後十分な時間(5日、図7Aによって、いくつかの半減を示す)放置する。その後、中断点の5日後、最大のAGE発生を示すELISA読取りは、中断の時間に存在する中間体濃度に比例する。
中断および糖希釈後のAGE形成の速度が上がるのは、証明されてはいないが、高濃度のリボースが、おそらくアマドリ誘導体である第一の「安定な」中間体でまたはによってその反応を阻害していることを示唆する(概略図Iで囲まれた)。その後、アマドリ後反応について、直接的にリボースを添加することについての効果を調べることによって、これの試験を行った。中間体を製造するために、RNaseを最初24時間0.5Mリボース中でインキュベートした。その後2つのプロトコールを行って、様々の濃度のリボースで、アマドリ後形成の可能性のある阻害を測定した。第一の実験では、24時間補強されたサンプルを、0.005Mから0.505Mの範囲にある様々の最終濃度のリボースを含有する溶液に100倍希釈した(図10A)。AGE形成の速度と範囲は、リボース濃度を増加させることによって減少されることが明瞭に分かった。十分に、0.5Mリボースの最高濃度まで、その動態は、指数的に見え、そして未中断のグリケーション(図6A及び7A)に生じる誘導期を示さない。
中断グリケーション法を使用して、反応性中間体からのAGE形成のアマドリ後動態のpH依存性を調べた。これらの実験で、RNase Aを最初0.5Mリボースと、24時間、pH7.5で反応させて、反応性中間体を発生した。その後、ELISA法によって、AGEに対する中間体の半減期の動態を測定した。図11では、その動態を初期の速度によって測定する場合に、5.0−9.5の範囲の極めて広範なpH範囲が達成可能であることが示されている。目立った釣鐘型の依存性が観察され、それは、抗原性AGE形成の動態が酸性およびアルカリ性のpH範囲、pH8付近で最適に減少することを示している。
この中断グリケーション法、すなわち過剰で可逆的に結合したリボースを除去した後抗原性AGEのアマドリ後形成についての効果を試験することによって、アミノグアニジンの効力を試験した。図20Aは、これらの条件下でRNase中に抗原性AGEを形成するのを封鎖する上で、アミノグアニジンが、わずか50mM未満の阻害でもっとも穏やかな効果を示すことを例示している。たった100以上−250mMでおよそ50%阻害が達成される。この試験で再度注目されるのには、中断後のみにそのタンパク質をアミノグアニジンに曝露し、そして遊離で可逆可能に結合したリボースを除去した。BSAの中断グリケーションと比較しうる結果も得られた(図20B)。
0.5Mリボース(未透析)との24時間接触の後、24時間グリケーションサンプルを激しく透析した後、および37℃で後者のサンプルを5日間インキュベートした後のRNaseについてアミノ酸分析を行った。リシンまたは末端アミノ基に存在するシッフ塩基を還元する、シアノホウ水素化ナトリウム還元をした後、これらの例示を行った。アラニンでノーマライズされた(12残基)全てのこれらのサンプルは、同じ残基リシン含量を示した(RNase中初原の10の以外の4.0±0.5)。このことは、0.5Mリボースとの24時間接触の後、ほとんどの形成シッフ塩基アダクトは、アマドリまたは続く生成物に変換されていることを示す。修飾によってアルギニンまたはヒスチジン残基はなんら失われない。
迅速に反応するリボースを使用し、アマドリ後段階のその可逆可能な阻害を回復すると、RNase中でのタンパク質グリケーションの様々な段階の動態を解体し決定することを許した。タンパク質「グリケーション」についてのほとんどの先の動態研究は、実際には、シッフ塩基形成および連続アマドリ転換の「初期」段階に限定されてきた。ある種の動態研究は、合成フルクトシルアミン、すなわち、グルコースの小さなモデル化アマドリ化合物で出発して行われてきた(SmithおよびThornalley,Eur.J.Biochem.,210巻:729〜739頁、1992年、本願に引用された文献)が、ほとんど例外なく、このような研究は、タンパク質についてはこれまで可能でなかった。1つの注目すべき例外としては、リボースで部分的にグリケーションされたBSAはリボース除去後急速にペントシジンを産生するというMonnier(Odettiら,同上、1992年)による例示がある。リボースのより高い反応性も、AGE形成の時間経路を定量的に定義する上で際立った利益を証明した。グルコースおよびリボースが両方とも、ペントシジンのような同様のAGE生成物を産生する能力があることは注目され(Grandhee およびMonnier、1991年、同上;Dyerら,同上、1991年)、およびADP−リボースと一緒にある種の13C NMRモデル化合物の研究も行われた(Cervantee−Laureanら,Biochemistry,32巻:1528〜1534頁、1993年)。これらの研究では、抗AGE抗体とのリボースの十分な交差反応の抗原性AGE生成物が、グルコース修飾タンパク質に指向したことを示していて、そのことがリボースおよびグルコースが、同様の抗原性AGEを生成することを示唆する。これらの2つの糖で観察される第一の動的差異は、おそらく、その機構よりもむしろアマドリ後AGE形成を導く段階の速度定数における相対的差異によるものである。
リボヌクレアーゼAを24時間、C−2で99%富化した0.5Mリボースと反応させ、さらに過剰でシッフ塩基に結合したリボースを、冷却中に激しく透析することによって除去した。その後、2時間のNMRスキャンを行う直前に、そのサンプルを37℃に再度加温した。同じ条件で、天然に主要なリボースと反応したRNaseからの信号を、NMRスペクトルから減じる。したがって、全てのピークは、C−2の位置に元をたどる富化C−13による。いくつかのピークは、中間体の分解生成物から生じ、そしてこれらは、時間にわたってピーク強度で増加することによって同定されることもできる。図31は、得られたNMRスペクトルを示す。
抗原性最終糖化産物(AGE)の形成に対するビタミンB1およびB6誘導体ならびにアミノグアニジンによる生体外での阻害。アマドリ後動態の阻害は、全体的な糖化の阻害とは異なる
AGE形成の以下のアマドリ後動態についての中断糖化法では、糖化反応の「後期」段階の迅速な定量試験が考慮されている。重要なことは、この方法が、概略図1に示すように、遊離糖またはシッフ塩基(Namiki経路)の糖酸化産物から生ずるAGE形成の経路を利用しない阻害試験を考慮に入れているということである。そのため、中断糖化法では、抗原性AGE形成を誘導する糖化の「後期」段階の阻害剤の迅速で独特な同定および性質検討が考慮されている。
ウシ血清アルブミン、リボヌクレアーゼAおよびヒトヘモグロビンを、0.02%アジ化ナトリウムを含有するpH7.5の0.4Mリン酸ナトリウム緩衝液中で37℃にてリボースと共にインキュベートした。タンパク質(10mg/mlまたは1mg/ml)、0.05Mリボースおよび予想阻害剤(0.5、3、15および50mM)をインキュベーション混合物中に同時に入れた。溶液は、蓋付き試験管に入れて暗所に保存した。一定量を採取し、反応終了時にELISA法により分析するまで、直ちに凍結した。インキュベーションは3週間(Hb)または6週間(RNase、BSA)とした。グリケーション反応では、実験期間中を通じてpHが一定であることを監視した。
グリケーションはまず、タンパク質(10mg/ml)を、0.2%アジ化ナトリウムを含有するpH7.5の0.4Mリン酸緩衝液中で37℃にて0.5Mリボースと共に阻害剤の非存在下で24時間インキュベートすることによって実施された。ついで、グリケーションを中断して、冷緩衝液を頻繁に交換しながら4℃で長時間透析することにより、可逆的に結合した(シッフ塩基)過剰の糖を除去した。その後、リボースを再添加することなく、最大量のアマドリ産物と少量のAGE(タンパク質に依存)を含有するグリケーションされた中間試料を速やかに37℃に加温した。これにより、種々の濃度(通常は3、15および50mM)の予想阻害剤の存在下および非存在下で、アマドリ中間産物のAGE産物への変換を開始した。種々の間隔で一定量を採取して凍結し、後に分析を行った。溶液は蓋付き試験管に入れ、決まった時間に一定量を採取する場合にのみ蓋を開け、採取物は直ちに凍結して、その後、種々の分析を行った。
動態的データ(経時的曲線)は、ユーザーが関数を決めてパラメータを制御することにより反復することができる、SCIENTIST 2.0マイクロマス社(MicroMath,Inc.)またはORIGINマイクロカル社(Microcal,Inc.)ソフトウェアを用いて、非線形最小二乗法により、一般的手順で一次または二次指数関数に適合させた。適合関数のパラメータの標準偏差(初期および最終縦座標値および速度定数)は、適合の精密度の測定値として回帰させた。二次指数的動態適合についての見かけ上の半減期は、MathCadソフトウェアマイクロソフト社(MathSoft,Inc.)の「解釈」機能を用いて決定した。
リボースからのAGE形成の全般的動態に対するビタミンB6誘導体による阻害
抗原性AGE形成の動態に対するビタミンB1およびB6誘導体の阻害作用は、AGEに特異的なポリクローナル抗体により評価した。初期阻害試験は、0.05Mのリボースの継続的存在下でウシのリボヌクレアーゼA(RNase)のグリケーションに対して行われ、このリボース濃度はAGE形成速度がほぼ最大となる場合のものである。図13(対照曲線、黒四角)は、0.05Mのリボースと共にインキュベートした場合、RNaseに対する抗原性AGEの形成が比較的迅速であることを示すもので、これらの条件下では半減期は約6日である。ピリドキサール−5’−リン酸(図13B)およびピリドキサール(図13C)は、濃度50mMおよび15mMでRNaseに対するAGE形成の速度を有意に阻害した。驚くべきことに、ビタミンB6のアルコール型であるピリドキシンも、RNaseに対するAGE形成を中等度に阻害した(図13D)。検討対象となったビタミンB6誘導体の中では、試験期間の6週間にわたり、50mMのピリドキサミンがRNaseに対するAGE形成の「最終」濃度で最良の阻害作用を示した(図13A)。
ビタミンB1はいずれも高濃度でRNaseに対する抗原性AGEを阻害したが、阻害作用はビタミンB6誘導体の場合に比べてより複雑であると思われた(図14C)。阻害剤としてのチアミンピロリン酸の例では(図14A)、AGE形成の速度およびプラトー状態での最終的なAGE産生量はいずれも低下していると思われた。阻害剤としてのチアミンリン酸(図14B)およびチアミン(図14C)の例では、AGE形成速度にはほとんど影響がないと思われたが、最高のうどの阻害剤の存在下では、形成されたAGEの最終濃度が実質的に低下していた。一般的に、チアミンピロリン酸は、検討対象となった低濃度では、他のふたつの化合物に比べて良好な阻害作用を示した。
アミノグアニジンによるAGE形成の阻害(図14D)は、B1およびB6の実験で認められたものとは明確に異なっていた。アミノグアニジンの濃度を上昇させるとRNaseに対するAGE形成の速度が低下したが、形成されたAGEの最終濃度は低下しなかった。6週間後に形成されたAGEの最終濃度は、検討対象となったいずれのアミノグアニジン濃度についても対照試験の最終濃度とほぼ同一であった。
BSAおよびヒトメトヘモグロビン(Hb)を用いて比較試験を実施し、観察された阻害がタンパク質特異的なものであるか否かを検討した。ビタミンB6(図15A−D)およびビタミンB1(図16A−C)の種々の誘導体は、各群の中で最も有効な阻害剤であるRNase、ピリドキサミンおよびチアミンピロリン酸と同様に、BSAと共にインキュベートした場合、類似の阻害傾向を示した。ピリドキシンはBSAに対するAGE形成を阻害しなかった(図15D)。ピリドキサールリン酸およびピリドキサール(図15B−C)は、AGE形成の速度をかなり阻害したが、AGEの最終形成濃度は阻害しなかった。ピリドキサミン(図15A)は低濃度である程度の阻害を示し、検討した最高濃度ではAGE形成の最終濃度を他のB6誘導体のいずれに比べても有効に阻害すると思われた。B1誘導体の場合は、BSAを用いたAGE形成の阻害の全体的な度合い(図16A−C)は、RNase(図14A−C)で観察されたものに比べて小さかった。チアミンおよびチアミンピロリン酸の濃度が高くなると、AGE形成速度には著しい影響を及ぼすことなく、形成されるAGEの最終濃度が阻害された(図16C)。ここでもアミノグアニジンはRNaseの場合に認められたと同様、BSAを用いた場合にある程度の阻害作用を示し(図16D)、形成されるAGEの最終濃度には有意な影響を及ぼすことなく、AGE形成速度を低下させると思われた。
「後期」アマドリ後AGE形成の阻害を測定するために中断グリケーションモデルを用い、RNaseまたはBSAの単離したアマドリ中間体を、遊離または可逆的に結合したリボースの非存在下で37℃にてインキュベートすることによって、動態を測定した。最初に中間体を調整するために使用されたリボースは、24時間の初期グリケーション反応後の冷透析により除去した。AGE形成を再開させると、阻害剤の存在下でのAGEの形成は極めて速やかである(半減期は約10時間)。図18に、BSAのアマドリ後動態に対するピリドキサミン(図18A)、ピリドキサールリン酸(図18B)およびピリドキサール(図18C)の影響を示す。ピリドキシンはまったく阻害を示さなかった(データに示さず)。RNaseに対して同様の実験を行った。ピリドキサミンは15mMおよび50mMのRNaseを用いたAGE形成にほぼ完璧な阻害を示した(図18D)。ピリドキサールは15mMでは有意な阻害を示さなかったが、ピリドキサールリン酸は15mMで有意な阻害を示した。ピリドキサールリン酸は、RNaseの活性部位に対し親和性標識能のあることが知られている(RaetzとAuld,Biochemistry,11巻:2229〜2236頁、1972年)。
チアミンピロリン酸は、RNaseおよびBSAを用いた場合とも、AGE形成を他のB1誘導体に比べて効果的に阻害した(図19)。チアミンは作用を示さなかったが、チアミンリン酸は中等度の作用を示した。B6測定と同様、アマドリ後阻害は、形成されるAGEの最終濃度の低下として最も顕著に出現するようであった。
図20に、BSAおよびRNaseを用いた場合のアマドリ後AGE形成動態の阻害に対しアミノグアニジンを検討した場合の結果を示す。50mMでは、阻害はBSAの場合には約20%で(図20B)、RNaseの場合には15%未満であった。遊離Nε−アミノ基のみを含有するNα−アセチル−L−リシンを用いて、単純なアミノ酸含有機能による阻害の可能性も検討した(図21)。Nα−アセチル−L−リシンは50mMまではAGE形成には有意な阻害を示さなかった。
多数の試験から、アミノグアニジンが非酵素的グリケーションの出現に対して強力な阻害作用を示すと思われることが立証されている(Brownleeら,Brownlee,1992、1994、1995頁、1986年)。糖を減少させることによって誘発される種々の現象に対するアミノグアニジンの阻害作用は、これらの現象の多くでグリケーションが関与している証拠であると、広く考えられている。アミノグアニジンは近年、高濃度の糖による結合組織タンパク質のグリケーションによって引き起こされると考えられる糖尿病合併症の改善についての、第III相臨床試験の第2ラウンドに投入されている。
AGE形成/阻害の生体内効果の動物モデル及び試験
高血糖は、ストレプトゾシン(別名、ストレプトゾトシン、STZ)又はアロキサンを投与することにより、ラットに迅速に誘発することができる(1もしくは2日以内)。これは糖尿病の一般的なモデルとなっている。しかしながら、これらのラットは高血糖を長い月日患った後、通常は最終段階の腎疾患(ESRD)による死の直前にのみ腎障害を示す。この症状は、基底膜のコラーゲンのような長命タンパク質の不可逆的なグルコース化学修飾によって引き起こされるものと信じられる。STZ−糖尿病ラットは、高血糖誘発から大きく遅れて約40週間で、通常は死の直前に、アルブミン尿を示す。
第I相プロトコル
各々6匹のラットの2つの群に以下のいずれかを1日に投与した。
b.50mMリボース(1回の注射)。
a.最終体重及び最終的な1個の腎臓の重量は低及び高リボース処置群で同じであった。
1日のリボース処置で、用量依存性の高血圧及び4日後に現われる糸球体クリアランス機能の用量依存性の低減が生じた。これらは、最後期のSTZ−糖尿病ラットにのみ見られる糖尿病の重大な代謝的な変化である。これらの減少は、生体内におけるリボースによるタンパク質の不可逆的化学修飾(グリケーション)によるものであると仮説を立てることができる。
第II相プロトコル
ラットの群(3−6)に、0.3M“低リボース用量”(LR)又は1.0M“高リボース用量”(HR)を、1日2回の注射により、(i)1日、(ii)4日間の“短期間”(S)、又は(iii)8日間の“長期間”(L)のいずれか投与した。加えて、これらの濃度のリボースを飲料水に含めた。
a.テイル−カフ血圧はリボース処置ラットの全ての群で増加し、これは第I相の結果を裏付ける(図23)。
4日という少ない期間リボースに晒すことによっても、高血圧と、クレアチニンクリアランスの減少及びアルブミン濾過の増加によって表されるように腎機能障害が生じる。これらの変化は糖尿病に典型的なものであり、STZ−糖尿病ラットにおいて最後期に見られるものである。
第III相プロトコル
60匹のラットを以下のように9つの異なる群に無作為に分けた。これらの群には、アミノグアニジン、ピリドキサミン、及びチアミンピロリン酸の存在下及び非存在下において1Mリボースに8日間晒したものが含まれる。
(i)処置無し;
(ii)高用量(250mg/体重kg)のピリドキサミン(“化合物−P”);
(iii)高用量(250mg/体重kg)のチアミンピロリン酸(“化合物−T”もしくは“TPP”);及び
(iv)低用量(25mg/体重kg)のアミノグアニジン(“AG”)。
(i)1Mリボース−生理食塩水(9日間、2×9ccを毎日IP)のみ;
(ii)リボースに加えて低用量(“LP”)のピリドキサミン(25mg/体重kgを9ccのリボースを含む5mlとして注射);
(iii)リボースに加えて高用量(“HP”)のピリドキサミン(250mg/体重kgを9ccのリボースを含む0.5mlとして注射);
(iv)リボースに加えて高用量(“HT”)のチアミンピロリン酸(250mg/体重kgを9ccのリボースを含む0.5mlとして注射);及び
(v)リボースに加えて低用量のアミノグアニジン(25mg/体重kgを9ccのリボースを含む0.5mlとして注射)。
a.血圧は3種類の化合物単独(対照群)によって非常に僅かに増加した;リボース上昇BPは化合物の同時投与によっては回復しなかった。これらの結果を図26の棒グラフに示す。
腎臓機能の2つの指標によって測定されるように、ピリドキサミン及びアミノグアニジンは、共に25mg/kgで、リボース誘発性のクレアチニンクリアランスの減少及びリボース誘発性のアルブミン尿の穏やかな増加の予防において明らかに有効であり、等しく有効である。
腎臓機能及び糖尿病
糖尿病における持続的な高血糖は、ヒト患者のおそらく1/3において、糖尿病性の腎障害につながる。臨床的には、糖尿病性腎障害は以下のものの存在によって定義される。
2.尿タンパクの増加(濾過の悪化)
3.高血圧の同時存在 腎臓機能は血流(測定せず)及び糸球体クリアランスに依存し、後者はイヌリンクリアランス(測定せず)又はクレアチニンクリアランスのいずれかによって測定することができる。糸球体透過率はアルブミン濾過速度によって測定するが、このパラメータは大きく変動する。これは対数分布関数でもあり、アルブミン排泄の100倍の増加は濾過能力の僅かに2倍の減少を示す。
上記基準により、リボースは、糖尿病性腎障害の徴候を、高血圧、クレアチニンクリアランス及びアルブミン尿に反映されるものとして、後に行くほど大きくはないものの、非常に迅速に誘発するものと思われる。確立されているSTZ糖尿病ラットにおいては、高血糖は1−2日で迅速に確立されるが、糖尿病性腎障害の臨床的徴候には非常に遅れて、アルブミン尿についてはおそらく40週も後に到達する。一般には、アルブミン尿は日毎及び動物毎に非常に変動し得るものであり、ヒトとは異なるが、大部分のSTZラットは結局は腎障害を発症しない。
リボース処置動物を用いて、ピリドキサミンは、25mg/体重kgで、通常糖尿病に起因する3つの徴候のうちの2つ、すなわちクレアチニンクリアランス及びアルブミン濾過の悪化、を有効に予防するように思われる。これは、アミノグアニジンと同様に有効であった。チアミンピロリン酸の有効性は明らかではなかったが、これは250mg/体重kgという高い濃度でそれを用いたことによるものである可能性があることは強調されるべきである。250mg/体重kgでの結果のみを考慮した場合、ピリドキサミンは有効性がより小さいように思われる。
全般的には、ラットはこれらの化合物に対して十分に寛容であるように思われる。腎臓の重量は異常なものではなく、高血圧はほとんど発症しなかった。これらの化合物の効果は250mg/kgでのみ試験した。チアミンピロリン酸はこの濃度でクレアチニンクリアランスを減少させるように思われるが、ピリドキサミンではそのようなことはない。両者はアルブミン尿を僅かに増加させるように思われたが、これらの測定はおそらくはほとんど信頼することはできないものであった。
平均のサイズの典型的な成人のヒトは体重が66−77kgである。典型的には、糖尿病患者は太り過ぎである傾向にあり、112kgを超えることもあり得る。66−77kgの成人男性に対する推奨される摂取許容量は、1989年の改訂では、1日あたり1.5mgのチアミン及び1日当り2.0mgのビタミンB6が必要とされた(Merck Manual of Diagnosis and Therapy,16版(Merck & Co.,Rathaway,N.J.,1992年)938〜939頁)。
Claims (6)
- 糖尿病性腎症、蛋白尿、糸球体クリアランス障害、および糖尿病性網膜症からなる群から選択される1またはそれ以上の疾患を治療するための、ピリドキサミンを包含する薬剤。
- 疾患が糖尿病性腎症である、請求項1の薬剤。
- 疾患が蛋白尿である、請求項1の薬剤。
- 疾患が糸球体クリアランス障害である、請求項1の薬剤。
- 疾患が糖尿病性網膜症である、請求項1の薬剤。
- アマドリ後の最終糖化産物(AGE)形成を阻害するための、ピリドキサミンを包含する薬剤。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015051956A (ja) * | 2013-09-09 | 2015-03-19 | 株式会社パーマケム・アジア | ピリドキサール・アミノグアニジン誘導体またはそれらの塩、及び、その製造方法 |
US9381223B2 (en) | 2010-02-10 | 2016-07-05 | Oryza Oil & Fat Chemical Co., Ltd. | Methods for inhibiting advanced glycation end product production, inhibiting fibroblast apoptosis, and/or promoting human fibroblast-collagen grating formulation using cherry blossom and cherry leaf extract |
Families Citing this family (73)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6228858B1 (en) * | 1995-09-12 | 2001-05-08 | University Of Kansas Medical Center | Advanced glycation end-product intermediaries and post-amadori inhibition |
US6740668B1 (en) | 1995-08-28 | 2004-05-25 | Kansas University Medical Center | Methods for inhibiting diabetic complications |
US6716858B1 (en) | 1995-08-28 | 2004-04-06 | Kansas University Medical Center | Methods for inhibiting diabetic complications |
US5744451A (en) * | 1995-09-12 | 1998-04-28 | Warner-Lambert Company | N-substituted glutamic acid derivatives with interleukin-1 β converting enzyme inhibitory activity |
US6730686B1 (en) | 1995-09-12 | 2004-05-04 | Kansas University Medical Center | Methods for inhibiting oxidative modification of proteins |
US6750209B1 (en) | 1995-09-12 | 2004-06-15 | Kansas University Medical Center | Advanced glycation end-product intermediaries and post-amadori inhibition |
US6436969B1 (en) * | 1995-09-12 | 2002-08-20 | Kansas University Medical Center Research Institute Inc. | Dialysis solutions and methods |
US7030146B2 (en) | 1996-09-10 | 2006-04-18 | University Of South Carolina | Methods for treating diabetic neuropathy |
US20030013746A1 (en) * | 1996-09-10 | 2003-01-16 | University Of Kansas Medical Center. | Advanced glycation end-product intermediaries and post-amadori inhibition |
US7071298B2 (en) | 1997-02-05 | 2006-07-04 | Fox Chase Cancer Center | Compounds and methods for treating glycogen storage disease and other pathological conditions resulting from formation of age-proteins |
WO1998043649A2 (en) * | 1997-03-28 | 1998-10-08 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Age production inhibitory composition comprising a maillard reaction inhibitor and vitamin b¿6? |
US7393663B2 (en) * | 1997-08-01 | 2008-07-01 | Serono Genetics Institute S.A. | Expressed sequence tags and encoded human proteins |
WO1999007419A1 (en) * | 1997-08-07 | 1999-02-18 | Ajay Gupta | Dialysis solutions containing water soluble vitamins and nutrients |
US7220717B2 (en) * | 1997-08-14 | 2007-05-22 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Interleukin-18 binding proteins, their preparation and use |
IL121860A0 (en) * | 1997-08-14 | 1998-02-22 | Yeda Res & Dev | Interleukin-18 binding proteins their preparation and use |
US7704944B2 (en) * | 1997-08-14 | 2010-04-27 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Interleukin-18 binding proteins, their preparation and use for the treatment of sepsis |
US6184210B1 (en) | 1997-10-10 | 2001-02-06 | Cytovia, Inc. | Dipeptide apoptosis inhibitors and the use thereof |
CN1297354A (zh) * | 1998-03-16 | 2001-05-30 | 西托维亚公司 | 二肽卡斯帕酶抑制剂及其用途 |
NZ528282A (en) | 1998-03-19 | 2005-05-27 | Vertex Pharma | Interleukin-1 beta converting enzyme inhibitors |
WO2000010606A1 (fr) | 1998-08-24 | 2000-03-02 | Kurokawa, Kiyoshi | Medicaments de sedation de l'agression du carbonyle et des dialysats peritoneaux |
US6753150B2 (en) * | 1998-10-05 | 2004-06-22 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method for determining whether a compound is capable of inhibiting the interaction of a peptide with rage |
AU1112500A (en) * | 1998-10-14 | 2000-05-01 | Kansas University Medical Center Research Institute, Inc. | Methods for inhibiting diabetic complications |
CA2347117C (en) * | 1998-10-22 | 2006-01-24 | University Of South Carolina | Methods for inhibiting diabetic complications |
AU773401C (en) * | 1998-10-28 | 2005-04-28 | Fox Chase Cancer Center | Compounds and their therapeutic use with diabetic complications |
US6121300A (en) * | 1998-11-10 | 2000-09-19 | Wagle; Dilip R. | Reversing advanced glycosylation cross-links using heterocyclic-substituted thiazolium salts |
EP1159273A1 (en) * | 1999-03-02 | 2001-12-05 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. | Compounds useful as reversible inhibitors of cathepsin s |
WO2000051987A2 (en) | 1999-03-05 | 2000-09-08 | Kansas University Medical Center | Inhibitors of advanced, post-amadori glycosylation reactions |
DE60030097T2 (de) * | 1999-03-16 | 2007-03-08 | Cytovia, Inc., San Diego | Substituierte 2-aminobenzamin caspase inhibitoren und ihre verwendung |
WO2000059493A2 (en) * | 1999-04-06 | 2000-10-12 | Kansas University Medical Center | Improved dialysis solutions and methods |
KR20020005665A (ko) * | 1999-04-09 | 2002-01-17 | 추후보정 | 카스파제 저해제 및 그것의 용도 |
US20020077276A1 (en) * | 1999-04-27 | 2002-06-20 | Fredeking Terry M. | Compositions and methods for treating hemorrhagic virus infections and other disorders |
CA2376029A1 (en) * | 1999-07-13 | 2001-01-18 | Medicure Inc. | Use of pyridoxin derivatives for the treatment of diabetes and related complications |
MXPA02002038A (es) | 1999-08-27 | 2002-10-31 | Cytovia Inc | Acidos alfa-hidroxi substituidores inhibidores de la caspasa y uso de los mismos. |
US6420364B1 (en) | 1999-09-13 | 2002-07-16 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. | Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases |
US6566338B1 (en) | 1999-10-12 | 2003-05-20 | Cytovia, Inc. | Caspase inhibitors for the treatment and prevention of chemotherapy and radiation therapy induced cell death |
ME00546B (me) * | 2000-02-21 | 2011-10-10 | Serono Lab | Korišćenje inhibitora il-18 |
PE20011350A1 (es) | 2000-05-19 | 2002-01-15 | Vertex Pharma | PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE) |
US6599940B2 (en) | 2000-09-13 | 2003-07-29 | Georgetown University | Synthesis of 2-hydroxymethylglutamic acid and congeners thereof |
EP1324779B1 (en) | 2000-09-29 | 2011-07-20 | Schering Corporation | Pegylated interleukin-10 |
US6521645B2 (en) | 2000-11-20 | 2003-02-18 | The University Of Kansas Medical Center | Methods for the treatment and prevention of urinary stone disease |
CA2433346A1 (en) * | 2000-12-29 | 2002-07-11 | John J. Egan | Method for treating glaucoma ib |
DE10134568C2 (de) * | 2001-07-16 | 2003-07-24 | Inst Chemo Biosensorik | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von alpha-Oxoaldehyd |
EP1534679A4 (en) * | 2002-08-30 | 2007-06-06 | Biostratum Inc | INHIBITORS OF POST-AMADORI ADVANCED GLYCATION ENDPRODUCTS |
US20090082407A1 (en) * | 2004-06-18 | 2009-03-26 | Biostratum, Inc. | Pyridoxamine for the Treatment of Diabetic Kidney Disease |
EP1643999B8 (en) * | 2003-06-20 | 2012-03-14 | NephroGenex, Inc. | Pyridoxamine for use in the treatment of diabetic nephropathy in type ii diabetes |
WO2005018649A1 (ja) * | 2003-08-25 | 2005-03-03 | Nagoya Industrial Science Research Institute | 最終糖化産物生成抑制剤 |
CN1886126A (zh) * | 2003-09-25 | 2006-12-27 | Dmi生物科学公司 | 利用n-酰基-l-天冬氨酸的方法和产品 |
WO2005077902A2 (en) * | 2004-02-09 | 2005-08-25 | Biostratum, Inc. | Methods for the synthesis of pyridoxamine |
US20060128696A1 (en) | 2004-05-15 | 2006-06-15 | Annamaria Vezzani | Treating seizures using ice inhibitors |
US7531570B2 (en) | 2004-05-27 | 2009-05-12 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Treatment of diseases using ICE inhibitors |
US20060035890A1 (en) * | 2004-08-10 | 2006-02-16 | Amit Banerjee | Compounds and methods for the treatment of ubiquitin conjugating disorders |
US20070060549A1 (en) * | 2004-08-10 | 2007-03-15 | Friesen Albert D | Combination therapies employing ace inhibitors and uses thereof for the treatment of diabetic disorders |
JPWO2006028007A1 (ja) * | 2004-09-06 | 2008-05-08 | 興和株式会社 | 糸球体疾患治療剤 |
DE102005020976A1 (de) * | 2005-04-29 | 2006-11-02 | WÖRWAG PHARMA GmbH & Co. KG | Prophylaxe und Behandlung von Erkrankungen |
US20090030047A1 (en) * | 2005-05-24 | 2009-01-29 | Tokai University Educational System | Peritoneum protecting agent |
WO2007044309A2 (en) * | 2005-10-05 | 2007-04-19 | Vasix Corporation | Device and method for inhibiting age complex formation |
WO2008013660A2 (en) | 2006-07-07 | 2008-01-31 | Biostratum, Inc. | Inhibitors of advanced glycation end products |
WO2012061786A1 (en) | 2010-11-05 | 2012-05-10 | Brandeis University | Ice cleaved alpha-synuclein a biomarker |
US9956260B1 (en) | 2011-07-22 | 2018-05-01 | The J. David Gladstone Institutes | Treatment of HIV-1 infection and AIDS |
CN103924249A (zh) * | 2013-01-11 | 2014-07-16 | 南京工业大学 | 一种席夫碱吡啶类碳钢酸洗缓蚀剂及其应用 |
EP2986306A4 (en) | 2013-04-18 | 2016-12-07 | Armo Biosciences Inc | METHOD FOR USE OF INTERLEUKIN-10 FOR THE TREATMENT OF ILLNESSES AND SUFFERING |
US9823255B2 (en) | 2013-06-17 | 2017-11-21 | Armo Biosciences, Inc. | Method for assessing protein identity and stability |
JP6509867B2 (ja) | 2013-08-30 | 2019-05-08 | アルモ・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド | 疾患及び障害を治療するためにインターロイキン−10を使用する方法 |
ES2862139T3 (es) | 2013-11-11 | 2021-10-07 | Armo Biosciences Inc | Procedimientos de uso de Interleucina 10 para el tratamiento de enfermedades y trastornos |
WO2015187295A2 (en) | 2014-06-02 | 2015-12-10 | Armo Biosciences, Inc. | Methods of lowering serum cholesterol |
EP3187185A4 (en) * | 2014-08-29 | 2018-04-11 | Project PM Co., Ltd. | Pharmaceutical composition formed by combining pyridoxamine compound and thiamine compound |
JP2017536098A (ja) | 2014-10-14 | 2017-12-07 | アルモ・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド | インターロイキン−15組成物及びその使用 |
KR20170084033A (ko) | 2014-10-22 | 2017-07-19 | 아르모 바이오사이언시스 인코포레이티드 | 질환 및 장애를 치료하기 위해 인터루킨-10을 사용하는 방법 |
WO2016126615A1 (en) | 2015-02-03 | 2016-08-11 | Armo Biosciences, Inc. | Methods of using interleukin-10 for treating diseases and disorders |
CN107847583A (zh) | 2015-05-28 | 2018-03-27 | 阿尔莫生物科技股份有限公司 | 用于治疗癌症的聚乙二醇化白细胞介素‑10 |
AU2016312510A1 (en) | 2015-08-25 | 2018-03-08 | Armo Biosciences, Inc. | Methods of using Interleukin-10 for treating diseases and disorders |
JP6105111B1 (ja) | 2016-03-02 | 2017-03-29 | 国立大学法人東北大学 | 自閉スペクトラム症改善用組成物 |
CN114502546A (zh) | 2019-08-01 | 2022-05-13 | 普拉特戈公司 | 晚期糖基化终产物的抑制剂 |
Family Cites Families (37)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR4673M (ja) | 1965-05-19 | 1966-12-19 | ||
FR7238M (ja) | 1968-03-27 | 1969-09-01 | ||
CH607773A5 (en) | 1974-12-24 | 1978-10-31 | Steigerwald Arzneimittelwerk | Process for the preparation of novel pyridoxine derivatives |
DE2461742C2 (de) | 1974-12-28 | 1983-01-27 | Steigerwald Arzneimittelwerk Gmbh, 6100 Darmstadt | Pyridoxin-5'-phosphorsäureester-Derivate sowie deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel |
FR2349330A1 (fr) | 1976-04-29 | 1977-11-25 | Savini Emile | Composition destinee au traitement des hyperlipidemies |
US5130324A (en) * | 1984-03-19 | 1992-07-14 | The Rockefeller University | 2-alkylidene-aminoguanidines and methods of use therefor |
US5100919A (en) * | 1984-03-19 | 1992-03-31 | The Rockefeller University | Biguanides and derivatives thereof as inhibitors of advanced glycosylation of a target protein |
US5218001A (en) * | 1984-03-19 | 1993-06-08 | The Rockefeller University | Inhibitors of the advanced glycosylation of proteins and methods of use therefor |
US4758583A (en) * | 1984-03-19 | 1988-07-19 | The Rockefeller University | Method and agents for inhibiting protein aging |
US4983604A (en) * | 1987-11-13 | 1991-01-08 | The Rockefeller University | Inhibitors of nonenzymatic cross-linking |
US5262152A (en) * | 1984-03-19 | 1993-11-16 | The Rockefeller University | Amidrazones and derivatives thereof |
US5221683A (en) * | 1984-03-19 | 1993-06-22 | The Rockefeller University | Diaminopyridine compounds and methods of use |
US5318982A (en) * | 1984-03-19 | 1994-06-07 | The Rockefeller University | Inhibition of the advanced glycosylation of proteins using substituted-1,2,4-triazoles |
US5358960A (en) * | 1984-03-19 | 1994-10-25 | The Rockefeller University | Method for inhibiting advanced glycosylation of proteins using aminosubstituted imidazoles |
US5272165A (en) * | 1984-03-19 | 1993-12-21 | The Rockefeller University | 2-alkylidene-aminoguanidines and methods of use therefor |
US5258381A (en) * | 1984-03-19 | 1993-11-02 | The Rockefeller University | 2-substituted-2-imidazolines |
US5140048A (en) * | 1984-03-19 | 1992-08-18 | The Rockefeller University | Inhibitors of nonenzymatic cross-linking |
US5272176A (en) * | 1984-03-19 | 1993-12-21 | The Rockefeller University | Advanced glycation inhibitors containing amino-benzoic acids and derivatives, and methods of use |
US4665192A (en) * | 1984-03-19 | 1987-05-12 | The Rockefeller University | 2-(2-furoyl)-4(5)-2(furanyl)-1H-imidazole |
US5137916A (en) * | 1985-11-14 | 1992-08-11 | The Rockefeller University | Advanced glycation inhibitors containing amino-benzoic acids and derivatives, and methods of use |
US5334617A (en) * | 1984-03-19 | 1994-08-02 | The Rockefeller University | Amino acids useful as inhibitors of the advanced glycosylation of proteins |
US4908446A (en) * | 1985-11-14 | 1990-03-13 | The Rockefeller University | Inhibitors of nonenzymatic cross-linking |
US5175192A (en) * | 1984-03-19 | 1992-12-29 | The Rockefeller University | Inhibitors of the advanced glycosylation of proteins and methods of use therefor |
US5254572A (en) * | 1987-11-27 | 1993-10-19 | Vesta Medicines (Pty) Ltd. | Method and composition for supplementing vitamin B6 where the PN-PLP pathway is disturbed |
US5288716A (en) * | 1987-02-18 | 1994-02-22 | Ulrich Speck | Use of pyridoxine derivatives in the prevention and treatment of hyperlipidaemia and atherosclerosis |
DE3705549A1 (de) | 1987-02-18 | 1988-09-01 | Ulrich Speck | Verwendung von pyridoxin-derivaten bei der prophylaxe und therapie von hyperlipidaemien und atherosklerose |
US5017696A (en) * | 1987-09-17 | 1991-05-21 | The Rockefeller University | Advanced glycosylation end products and associated methods |
US5010175A (en) * | 1988-05-02 | 1991-04-23 | The Regents Of The University Of California | General method for producing and selecting peptides with specific properties |
US5242593A (en) * | 1988-12-09 | 1993-09-07 | Oberkofler Joerg | Method for reducing the build-up of slime and/or film in water circulation systems |
DE69113938T2 (de) | 1990-02-19 | 1996-04-11 | Senju Pharma Co | Zusammensetzungen von Maillard-Reaktion inhibitoren. |
CA2055990A1 (en) | 1990-11-22 | 1992-05-23 | David G. Schena | Phospholipid-vitamin derivatives and methods for preparation thereof |
JPH06510986A (ja) * | 1991-06-14 | 1994-12-08 | カイロン コーポレイション | ピコルナウイルスプロテアーゼのインヒビター |
US5552400A (en) * | 1994-06-08 | 1996-09-03 | Sterling Winthrop Inc. | Fused-bicyclic lactams as interleukin-1β converting enzyme inhibitors |
US5716929A (en) * | 1994-06-17 | 1998-02-10 | Vertex Pharmaceuticals, Inc. | Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme |
WO1996030395A2 (en) * | 1995-03-31 | 1996-10-03 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Cysteine protease inhibitor |
US6228858B1 (en) | 1995-09-12 | 2001-05-08 | University Of Kansas Medical Center | Advanced glycation end-product intermediaries and post-amadori inhibition |
US5744451A (en) * | 1995-09-12 | 1998-04-28 | Warner-Lambert Company | N-substituted glutamic acid derivatives with interleukin-1 β converting enzyme inhibitory activity |
-
1996
- 1996-08-13 US US08/700,716 patent/US5744451A/en not_active Expired - Lifetime
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1999
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-
2004
- 2004-11-18 JP JP2004334202A patent/JP3769003B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9381223B2 (en) | 2010-02-10 | 2016-07-05 | Oryza Oil & Fat Chemical Co., Ltd. | Methods for inhibiting advanced glycation end product production, inhibiting fibroblast apoptosis, and/or promoting human fibroblast-collagen grating formulation using cherry blossom and cherry leaf extract |
JP2015051956A (ja) * | 2013-09-09 | 2015-03-19 | 株式会社パーマケム・アジア | ピリドキサール・アミノグアニジン誘導体またはそれらの塩、及び、その製造方法 |
Also Published As
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