JP2005170830A - Melanogenesis inhibiting composition - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、メラニン生成抑制組成物の製造方法及びそれにより得られるメラニン生成抑制組成物に関する。 The present invention relates to a method for producing a melanin production-suppressing composition and a melanin production-suppressing composition obtained thereby.
従来より、紫外線による皮膚の黒化防止や、シミ、ソバカスの生成防止、及び肌の美白と美肌効果の促進のために、皮膚の表皮におけるメラニンの生成を抑制することが重要であることが知られている。メラニンの生成は、ストレスや紫外線により、過剰の活性酸素が体内で作り出された場合に促進される。ここで、メラニンとは、表皮が紫外線を吸収すると、酵素であるチロシナーゼの働きが活発となり、アミノ酸であるチロシンが酸化及び重合されることによって生成される色素のことであり、過剰に生成されたメラニンは、表皮で色素沈着を起こす。また、活性酸素は、細菌などから体を守るために活性化された酸素のことである。しかし、この活性酸素が過剰に作り出されると、体内の細胞や遺伝子を攻撃し、新陳代謝を低下させ、過剰のメラニンを生成してしまう。 Conventionally, it has been known that it is important to suppress the production of melanin in the epidermis of the skin in order to prevent skin darkening by ultraviolet rays, to prevent the formation of spots and freckles, and to promote skin whitening and skin beautifying effects. It has been. Melanin production is promoted when excess active oxygen is produced in the body by stress or ultraviolet rays. Here, melanin is a pigment produced by the action of the enzyme tyrosinase when the epidermis absorbs ultraviolet rays, and the amino acid tyrosine is oxidized and polymerized. Melanin causes pigmentation in the epidermis. Active oxygen is oxygen activated to protect the body from bacteria and the like. However, when this active oxygen is produced in excess, it attacks the cells and genes in the body, lowers metabolism, and produces excess melanin.
そこで、メラニンの生成を抑制させる物質として、Ｌ−アスコルビン酸若しくはその誘導体、ハイドロキノン誘導体、コウジ酸、プラセンタエキス等の胎盤抽出物、グルタチオン、またはコロイドイオウ等が知られている。 Therefore, L-ascorbic acid or its derivatives, hydroquinone derivatives, kojic acid, placenta extracts such as placenta extract, glutathione, or colloidal sulfur are known as substances that suppress the production of melanin.
また、皮膚の黒化、シミ、及びソバカスの生成を防止し、かつ改善するのに有効なメラニン生成抑制物質を含む皮膚外用剤が開示されている（例えば、特許文献１）。この特許文献１では、アマの種子からメラニン生成抑制物質を抽出している。また、美白成分として、ハトムギ種子を脱穀して精白した「ヨクイニン」が皮膚外用剤に配合されている。 Further, an external preparation for skin containing a melanin production inhibitor effective for preventing and improving the formation of skin darkening, spots and freckles is disclosed (for example, Patent Document 1). In this patent document 1, the melanin production inhibitory substance is extracted from the seed of flax. Further, as a whitening component, “Yokuinin” obtained by threshing pearl barley seeds and blended is blended in the external preparation for skin.
さらに、紫外線による炎症を防ぎ、かつ紫外線障害によるメラニンの生成を抑制するハトムギからの抽出物を含有した美白化粧水が開示されている（例えば、特許文献２）。この特許文献２では、ハトムギの全草またはその葉、樹皮、根、枝等の１箇所以上を乾燥し、または乾燥することなく粉砕したのち抽出した抽出物が、美白化粧水に含有されている。
しかし、上記の物質の多くは、メラニン生成抑制効果が低い、酸化されやすく不安定である、更に特有の異臭や沈殿が生じる、等の問題から、美白及び美肌効果が十分であるとはいえない。 However, many of the above-mentioned substances cannot be said to have sufficient whitening and skin-beautifying effects due to problems such as low melanin production-suppressing effects, oxidization and instability, and the generation of a characteristic odor and precipitation. .
また、特許文献１に記載されているアマの種子の抽出物は、皮膚に塗るとアレルギー症状を引き起こす恐れがある。このため、敏感肌の人は、特許文献１に記載されている皮膚外用剤を皮膚に塗布することができない。また、特許文献１は、皮膚外用剤に限定しているため、服用及び飲食用に適さない。さらに、美白成分としての「ヨクイニン」を得るためには、ハトムギ種子から種皮を脱穀して精白する必要があるため、製造工程が煩雑となり、コストが高くなるという問題を抱えている。 Moreover, the extract of flaxseed described in Patent Document 1 may cause allergic symptoms when applied to the skin. For this reason, the person with sensitive skin cannot apply the skin external preparation described in patent document 1 to skin. Moreover, since patent document 1 is limited to a skin external preparation, it is not suitable for taking and eating and drinking. Furthermore, in order to obtain “Yokuinin” as a whitening component, it is necessary to thresh the seed coat from pearl seeds, and thus there is a problem that the production process becomes complicated and the cost is increased.
さらに、特許文献２に記載されている美白化粧水は、ハトムギの抽出物の他に、ジオスコリア・コンポジータという植物の抽出物を含有している。つまり、ジオスコリア・コンポジータという植物の抽出物と、ハトムギの抽出物とを併用しなければ、メラニンの生成を抑制することができないので、製造工程が煩雑となり、コストが高くなる。また、特許文献２に記載の美白化粧水は、皮膚外用剤に限定しているので、服用及び飲食用に適さない。さらに、特許文献２に記載の美白化粧水は、ハトムギ種子からの抽出物を含まない。 Furthermore, the whitening lotion described in Patent Document 2 contains a plant extract called geoscoria compositor in addition to the pearl barley extract. In other words, unless a plant extract called geoscoria compositor is used in combination with an extract of pearl barley, the production of melanin cannot be suppressed, resulting in a complicated manufacturing process and an increased cost. Moreover, since the whitening lotion of patent document 2 is limited to the skin external preparation, it is not suitable for taking and eating and drinking. Furthermore, the whitening lotion described in Patent Document 2 does not contain an extract from pearl barley seeds.
本発明は以上のような課題に鑑みてなされたものであり、その目的は、精白前のハトムギからの抽出物をメラニン生成抑制有効量含有し、外用のみならず服用及び飲食用も可能であり、さらにメラニンの生成を抑制することが可能なメラニン生成抑制組成物を提供することにある。 The present invention has been made in view of the problems as described above, and its purpose is to contain an effective amount of an extract from pearl barley before milling, which can be used not only for external use but also for eating and drinking. Another object of the present invention is to provide a melanin production-suppressing composition capable of suppressing the production of melanin.
以上のような課題を解決するために、本発明者らは、ハトムギ種子の抽出物が、メラニンの生成を抑制するのに有効であることを突き止め、メラニン生成抑制組成物の提供を実現するに至った。 In order to solve the problems as described above, the present inventors have found that an extract of pearl barley seeds is effective in suppressing the production of melanin, and realizes the provision of a composition for inhibiting melanin production. It came.
より具体的には、本発明は、以下のようなものを提供する。 More specifically, the present invention provides the following.
（１） 精白前のハトムギから抽出したハトムギ抽出物をメラニン生成抑制有効量含有するメラニン生成抑制組成物。 (1) A melanin production-suppressing composition comprising an effective amount of melanin production-suppressing pearl extract extracted from pearl barley before whitening.
（１）の発明によれば、メラニン生成抑制組成物は、精白前のハトムギから抽出したハトムギ抽出物をメラニン生成抑制有効量含有している。これにより、ハトムギの精白が不要であるため、製造工程が簡略化され、コストを抑えることができる。また、精白前のハトムギから抽出したハトムギ抽出物は、体内に摂取しても何ら問題がないため、外用のみならず服用及び飲用に適している。さらに、精白前のハトムギから抽出したハトムギ抽出物は、有用なアミノ酸を多く含むので栄養価が高い上に、抗潰瘍性成分を含み、抗酸化作用を有するので、メラニンの生成を抑制し、美白及び美肌効果が期待できる。したがって、製造工程を簡略化することができるのでコストを抑えることができ、外用のみならず服用及び飲食用に適し、さらにはメラニンの生成を抑制することが可能なメラニン生成抑制組成物を提供することができる。 According to the invention of (1), the melanin production inhibiting composition contains an effective amount of melanin production inhibiting pearl extract extracted from pearl barley before whitening. Thereby, since whitening of pearl barley is unnecessary, the manufacturing process is simplified and the cost can be suppressed. Moreover, the pearl barley extract extracted from the pearl barley before whitening has no problem even if it is taken into the body, and is therefore suitable not only for external use but also for taking and drinking. In addition, pearl extract extracted from pearl barley before whitening has high nutritional value because it contains a lot of useful amino acids, and also has anti-ulcer components and has an antioxidant action. In addition, skin effect can be expected. Therefore, the production process can be simplified, the cost can be reduced, and the composition for suppressing melanin production is provided which is suitable not only for external use but also for taking and eating, and further capable of suppressing the production of melanin. be able to.
（２） 前記ハトムギは、殻付ハトムギである（１）に記載のメラニン生成抑制組成物。 (2) The said pearl barley is a melamine production suppression composition as described in (1) which is a shelled pearl barley.
（２）の発明によれば、メラニン生成抑制組成物は、殻付ハトムギから抽出したハトムギ抽出物をメラニン生成抑制有効量含有している。これにより、ハトムギの脱穀及び精白が不要であるため、製造工程を簡略化することができるのでコストを抑えることができる。また、殻付ハトムギから抽出したハトムギ抽出物は、体内に摂取しても何ら問題がないため、外用のみならず服用及び飲用に適している。さらに、脱穀及び精白前の殻付ハトムギから抽出したハトムギ抽出物は、有用なアミノ酸を多く含むので栄養価が高い上に、抗潰瘍性成分を含み、抗酸化作用を有するので、メラニンの生成を抑制し、美白及び美肌効果が期待できる。したがって、製造工程を簡略化することができるのでコストを抑えることができ、外用のみならず服用及び飲用に適し、さらにはメラニンの生成を抑制することが可能なメラニン生成抑制組成物を提供することができる。 According to invention of (2), the melanin production suppression composition contains the effective amount of melanin production suppression of the pearl barley extract extracted from the shelled pearl barley. Thereby, since threshing and whitening of pearl barley are not required, the manufacturing process can be simplified and the cost can be suppressed. In addition, the pearl barley extract extracted from the shelled pearl barley is suitable for taking and drinking as well as external use because there is no problem even if it is taken into the body. Furthermore, the pearl barley extract extracted from the shelled pearl barley before threshing and milling has a high nutritional value because it contains a lot of useful amino acids, and also contains an anti-ulcer component and has an antioxidative action, so it does not produce melanin. Suppressing, whitening and skin-beautifying effects can be expected. Therefore, it is possible to simplify the production process, thereby reducing costs, providing a melanin production-suppressing composition that is suitable not only for external use but also for taking and drinking, and further capable of suppressing the production of melanin. Can do.
（３） 前記ハトムギは、生ハトムギまたは焙煎ハトムギを含む（１）または（２）に記載のメラニン生成抑制組成物。 (3) The said pearl barley is a melanin production suppression composition as described in (1) or (2) containing raw pearl barley or roasted pearl barley.
（３）の発明によれば、メラニン生成抑制組成物は、生ハトムギまたは焙煎ハトムギから抽出したハトムギ抽出物をメラニン生成抑制有効量含有している。これにより、ハトムギは、用途に応じて焙煎するか否かが選択できる。また、生ハトムギまたは焙煎ハトムギから抽出したハトムギ抽出物は、体内に摂取しても何ら問題がないため、外用のみならず服用及び飲用に適している。さらに、生ハトムギまたは焙煎ハトムギから抽出したハトムギ抽出物は、有用なアミノ酸を多く含むので栄養価が高い上に、抗潰瘍性成分を含み、抗酸化作用を有するので、メラニンの生成を抑制し、美白及び美肌効果が期待できる。したがって、用途に応じて生のハトムギまたは焙煎したハトムギを適宜選択することができ、外用のみならず服用及び飲用に適し、さらにはメラニンの生成を抑制することが可能なメラニン生成抑制組成物を提供することができる。 According to the invention of (3), the melanin production inhibitory composition contains an effective amount of melanin production inhibitory pearl barley extract extracted from raw pearl barley or roasted pearl barley. Thereby, it is possible to select whether or not the pearl barley is roasted depending on the application. In addition, the pearl extract extracted from raw pearl barley or roasted pearl barley is suitable for taking and drinking as well as for external use because there is no problem even if it is taken into the body. In addition, pearl extract extracted from raw pearl barley or roasted pearl barley has a high nutritional value because it contains a lot of useful amino acids, and also has anti-ulcer components and an antioxidant action, so it suppresses the production of melanin. , Whitening and skin effect can be expected. Therefore, it is possible to appropriately select raw pearl barley or roasted pearl barley according to the use, and it is suitable not only for external use but also for taking and drinking, and further, a melanin production inhibiting composition capable of suppressing the production of melanin. Can be provided.
（４） 美白用組成物または美肌用組成物である（１）から（３）いずれか記載のメラニン生成抑制組成物。 (4) The melanin production-suppressing composition according to any one of (1) to (3), which is a whitening composition or a skin-beautifying composition.
（４）の発明によれば、ハトムギ抽出物を含有するメラニン生成抑制組成物は、美白用組成物または美肌用組成物である。これにより、ハトムギ抽出物を含有するメラニン生成抑制組成物は、皮膚の黒化、シミ、及びソバカスの生成を防止し、かつ改善するのに有効である。また、ハトムギ抽出物を含有するメラニン生成抑制組成物は、更に抗酸化物質を含有する。これにより、抗酸化物質は、過剰に活性酸素が作り出されることを抑制するのに有用な物質であるため、メラニンの生成を抑制することができる。したがって、皮膚の黒化、シミ、及びソバカスの生成を防止し、かつ改善するのに有効であり、さらにメラニンの生成を抑制することが可能な美白用組成物または美肌用組成物であるメラニン生成抑制組成物を提供することができる。 According to invention of (4), the melanin production suppression composition containing a pearl barley extract is a whitening composition or a skin beautifying composition. As a result, the melanin production-suppressing composition containing the pearl barley extract is effective in preventing and improving the formation of skin darkening, spots, and freckles. Moreover, the melanin production suppression composition containing a pearl barley extract further contains an antioxidant substance. Thereby, since an antioxidant substance is a substance useful for suppressing that active oxygen is produced excessively, it can suppress the production | generation of melanin. Therefore, it is effective in preventing and improving the formation of skin blackening, spots and freckles, and further, the production of melanin that is a whitening composition or a skin-beautifying composition capable of suppressing the production of melanin. An inhibitory composition can be provided.
（５） （１）から（４）いずれか記載のメラニン生成抑制組成物をメラニン生成抑制有効量含有する飲料。 (5) A beverage containing a melanin production-inhibiting effective amount of the melanin production-inhibiting composition according to any one of (1) to (4).
（５）の発明によれば、飲料は、（１）から（４）いずれか記載のメラニン生成抑制組成物をメラニン生成抑制有効量含有している。これにより、コストを抑えることができ、用途に応じて生のハトムギまたは焙煎したハトムギを適宜選択することができ、皮膚の黒化、シミ、及びソバカスの生成を防止し、かつ改善するのに有効であり、さらにはメラニンの生成を抑制することが可能なメラニン生成抑制組成物をメラニン生成抑制有効量含有する飲料を提供することができる。 According to the invention of (5), the beverage contains a melanin production-inhibiting effective amount of the melanin production-inhibition composition according to any one of (1) to (4). As a result, costs can be reduced, raw pearl barley or roasted pearl barley can be selected as appropriate according to the application, and it is possible to prevent and improve skin blackening, spots, and freckles. It is possible to provide a beverage containing an effective amount of a melanin production-suppressing composition that is effective and can further suppress the production of melanin.
（６） 精白前及び／または殻付のハトムギの抽出により得られた、メラニン生成抑制物質を含有するハトムギ抽出物をメラニン生成抑制有効量含有する飲料。 (6) A beverage containing an effective amount of melanin production-suppressing sesame extract containing a melanin production-suppressing substance, obtained by extraction of pearled wheat before and / or after whitening.
（６）の発明によれば、飲料は、精白前及び／または殻付のハトムギの抽出により得られた、メラニン生成抑制物質を含有するハトムギ抽出物をメラニン生成抑制有効量含有する。これにより、ハトムギの精白及び／または脱穀が不要であるため、製造工程が簡略化され、コストを抑えることができる。また、メラニン生成抑制物質を含有するハトムギ抽出物は、体内に摂取しても何ら問題がないため、飲用に適している。さらにメラニン生成抑制物質を含有するハトムギ抽出物は、有用なアミノ酸を多く含むので栄養価が高い上に、抗潰瘍性成分を含み、抗酸化作用を有するので、メラニンの生成を抑制し、美白及び美肌効果が期待できる。したがって、製造工程を簡略化することができるのでコストを抑えることができ、さらにはメラニンの生成を抑制することが可能な飲料を提供することができる。 According to the invention of (6), the beverage contains an effective amount of melanin production-suppressing pearlyme extract containing a melanin production-suppressing substance obtained by extraction of pearled wheat before and / or after whitening. Thereby, since whitening and / or threshing of pearl barley is unnecessary, a manufacturing process is simplified and cost can be held down. Moreover, the pearl barley extract containing a melanin production inhibitor is suitable for drinking because there is no problem even if it is taken into the body. Furthermore, the pearl extract containing melanin production inhibitory substances contains a lot of useful amino acids, so it has high nutritional value and contains an anti-ulcer component, and has an antioxidative action, thereby suppressing the production of melanin, whitening and Expect skin benefits. Therefore, since a manufacturing process can be simplified, cost can be suppressed and the drink which can suppress the production | generation of melanin can be provided.
（７）精白前及び／または殻付のハトムギの抽出により得られた、メラニン生成抑制物質を含有するハトムギ抽出物からなる飲料。 (7) A beverage made of a pearl barley extract containing a melanin production inhibitor obtained before extraction and / or extraction of shelled pearl barley.
（７）の発明によれば、飲料は、精白前及び／または殻付のハトムギの抽出により得た、メラニン生成抑制物質を含有するハトムギ抽出物からなる。これにより、ハトムギの精白及び／または脱穀が不要であるため、製造工程が簡略化され、コストを抑えることができる。また、メラニン生成抑制物質を含有するハトムギ抽出物をそのまま飲料として用いることができるため、飲料の製造工程が更に簡略化され、コストを抑えることができる。さらに、メラニン生成抑制物質は、有用なアミノ酸を多く含むので栄養価が高い上に、抗潰瘍性成分を含み、抗酸化作用を有するので、メラニンの生成を抑制し、美白及び美肌効果が期待できる。したがって、製造工程を簡略化することができるのでコストを抑えることができ、さらにはメラニンの生成を抑制することが可能なメラニン生成抑制物質を含有するハトムギ抽出物からなる飲料を提供することができる。 According to invention of (7), a drink consists of a pearl barley extract containing the melanin production inhibitor obtained by the extraction of pearl barley before and / or whitening. Thereby, since whitening and / or threshing of pearl barley is unnecessary, a manufacturing process is simplified and cost can be held down. Moreover, since the pearl barley extract containing a melanin production inhibitory substance can be used as it is as a beverage, the manufacturing process of the beverage can be further simplified and the cost can be suppressed. Furthermore, since the melanin production-suppressing substance contains many useful amino acids, it has high nutritional value, and also contains an anti-ulcer component and has an antioxidant action, so it can suppress the production of melanin and can be expected to have whitening and skin-beautifying effects. . Therefore, since the manufacturing process can be simplified, the cost can be suppressed, and furthermore, a beverage made of a pearl barley extract containing a melanin production inhibitor capable of suppressing the production of melanin can be provided. .
（８） 前記ハトムギ抽出物は、生ハトムギまたは焙煎ハトムギを含む（６）または（７）に記載の飲料。 (8) The beverage according to (6) or (7), wherein the pearl extract includes raw pearl barley or roasted pearl barley.
（８）の発明によれば、（６）または（７）に記載の飲料は、生ハトムギまたは焙煎ハトムギを用いている。これにより、ハトムギは、用途に応じて焙煎するか否かが選択できる。また、生ハトムギまたは焙煎ハトムギから抽出したハトムギ抽出物は、体内に摂取しても何ら問題がないため、飲用に適している。さらに、生ハトムギまたは焙煎ハトムギから抽出したハトムギ抽出物は、有用なアミノ酸を多く含むので栄養価が高い上に、抗潰瘍性成分を含み、抗酸化作用を有するので、メラニンの生成を抑制し、美白及び美肌効果が期待できる。したがって、用途に応じて焙煎したハトムギまたは生のハトムギを適宜選択することができ、さらにはメラニンの生成を抑制することが可能な飲料を提供することができる。 According to the invention of (8), the beverage according to (6) or (7) uses raw pearl barley or roasted pearl barley. Thereby, it is possible to select whether or not the pearl barley is roasted depending on the application. Moreover, the pearl extract extracted from raw pearl barley or roasted pearl barley is suitable for drinking because there is no problem even if it is taken into the body. In addition, pearl extract extracted from raw pearl barley or roasted pearl barley has a high nutritional value because it contains a lot of useful amino acids, and also has anti-ulcer components and an antioxidant action, so it suppresses the production of melanin. , Whitening and skin effect can be expected. Therefore, roasted pearl barley or raw pearl barley can be appropriately selected according to the use, and furthermore, a beverage capable of suppressing the production of melanin can be provided.
（９） 生ハトムギまたは焙煎ハトムギを、８０℃から１００℃の温度で熱水抽出を行うことにより得られた熱水抽出物であって、当該熱水抽出物と極性の高い溶出溶媒との混合液を、逆相カラムクロマトグラフィー（ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ２ＭＧ，Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ−７等の合成吸着剤）で分画した後、所定濃度の溶出溶媒を極性の高い順に使用して、当該逆相カラムクロマトグラフィーで更に分画することによって、メラニン生成抑制物質を得る方法。 (9) A hot water extract obtained by hot water extraction of raw pearl barley or roasted pearl barley at a temperature of 80 ° C. to 100 ° C., comprising the hot water extract and a highly polar elution solvent The mixture is fractionated by reverse-phase column chromatography (synthetic adsorbent such as DIAION HP2MG, Amberlite XAD-7), and then the elution solvent of a predetermined concentration is used in the order of polarity to perform the reverse-phase column chromatography. A method of obtaining a melanin production inhibitor by further fractionation.
（９）の発明によれば、生ハトムギまたは焙煎ハトムギから、８０℃から１００℃の熱水抽出を行うことにより、有用なアミノ酸及び抗潰瘍性成分を多く含む熱水抽出物が得られる。これにより、得られた熱水抽出物は、栄養価が高く、抗潰瘍作用及び抗酸化作用を有するので、メラニンの生成を抑制し、美白及び美肌効果が期待できる。次に、得られた熱水抽出物と極性の高い溶出溶媒との混合液を、逆相カラムクロマトグラフィー（ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ２ＭＧ，Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ−７等の合成吸着剤）で分画する。続いて、所定濃度の溶出溶媒を極性の高い順に透過し、逆相カラム中の熱水抽出物を更に分画する。これにより、熱水抽出物から、栄養価が高く、抗潰瘍作用及び抗酸化作用を有するメラニン生成抑制物質を効率よく分画することができる。さらに、逆相カラムクロマトグラフィーは、溶出溶媒の極性の違いを利用して分画するため、分画には種々の極性溶媒を用いることができる。したがって、逆相カラムクロマトグラフィーによって、美白及び美肌効果を有するメラニン生成抑制物質を効率よく分画することができるため、目的のメラニン生成抑制物質を得る方法を提供することができる。 According to the invention of (9), a hot water extract containing a lot of useful amino acids and anti-ulcer components can be obtained by performing hot water extraction at 80 ° C. to 100 ° C. from raw pearl barley or roasted pearl barley. Thereby, since the obtained hot water extract has a high nutritional value and has an anti-ulcer action and an antioxidant action, it suppresses the production of melanin, and can be expected to have a whitening effect and a skin beautifying effect. Next, the obtained liquid mixture of the hot water extract and a highly polar elution solvent is fractionated by reverse phase column chromatography (synthetic adsorbent such as DIAION HP2MG, Amberlite XAD-7). Subsequently, the elution solvent having a predetermined concentration is permeated in descending order to further fractionate the hot water extract in the reverse phase column. Thereby, it is possible to efficiently fractionate a melanin production inhibitor having a high nutritional value and having an anti-ulcer action and an antioxidant action from the hot water extract. Furthermore, since reverse phase column chromatography performs fractionation using the difference in polarity of the eluting solvent, various polar solvents can be used for fractionation. Therefore, since the melanin production inhibitor having whitening and skin beautifying effects can be efficiently fractionated by reverse phase column chromatography, a method for obtaining the target melanin production inhibitor can be provided.
（１０） 前記極性の高い溶出溶媒は、水である（９）に記載の方法。 (10) The method according to (9), wherein the highly polar elution solvent is water.
（１０）の発明によれば、生ハトムギまたは焙煎ハトムギから得られた熱水抽出物は、極性の高い水と混合している。これにより、極性の高い極性溶媒が水なので、分画後に得られた純水画分は、飲食用に用いても無害である。 According to the invention of (10), the hot water extract obtained from raw pearl barley or roasted pearl barley is mixed with highly polar water. Thereby, since a polar solvent with high polarity is water, the pure water fraction obtained after fractionation is harmless even if it is used for eating and drinking.
（１１） 前記所定濃度の溶出溶媒は、３０％、７０％、または１００％のエタノール水である（９）に記載の方法。 (11) The method according to (9), wherein the elution solvent having the predetermined concentration is 30%, 70%, or 100% ethanol water.
（１１）の発明によれば、生ハトムギまたは焙煎ハトムギから得られた熱水抽出物と極性の高い溶出溶媒との混合液を分画した後の逆相カラムクロマトグラフィーに、３０％、７０％、または１００％のエタノール水を透過することによって、熱水抽出物を更に分画することができる。また、濃度の異なるエタノール水を順に逆相カラムクロマトグラフィーに透過するため、目的のメラニン生成抑制物質を含む画分のみを分取することができる。さらに、得られた各画分中のエタノール水のみを蒸発させることによって、純粋なメラニン生成抑制物質を得ることができる。 According to the invention of (11), the reverse phase column chromatography after fractionating the mixed solution of the hot water extract obtained from raw pearl barley or roasted pearl barley and the highly polar elution solvent is subjected to 30%, 70% The hot water extract can be further fractionated by permeating through% or 100% ethanol water. In addition, since ethanol water having different concentrations is sequentially passed through reverse phase column chromatography, only a fraction containing the target melanin production inhibitor can be collected. Furthermore, a pure melanin production inhibitor can be obtained by evaporating only ethanol water in each of the obtained fractions.
（１２） 生ハトムギまたは焙煎ハトムギを、８０℃から１００℃の温度で熱水抽出を行うことにより得られた熱水抽出物であって、当該熱水抽出物と極性の高い溶出溶媒との混合液を、逆相カラムクロマトグラフィー（ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ２ＭＧ，Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ−７等の合成吸着剤）で分画した後、所定濃度の溶出溶媒を極性の高い順に使用して、当該逆相カラムで更に分画することによって、メラニン生成抑制物質を得る工程を含むメラニン生成抑制組成物の製造方法。 (12) A hot water extract obtained by performing hot water extraction of raw pearl barley or roasted pearl barley at a temperature of 80 ° C. to 100 ° C., comprising the hot water extract and a highly polar elution solvent The mixture is fractionated by reversed-phase column chromatography (synthetic adsorbent such as DIAION HP2MG, Amberlite XAD-7) and then further separated on the reversed-phase column using elution solvents of a predetermined concentration in descending order. The manufacturing method of the melanin production inhibitory composition including the process of obtaining a melanin production inhibitory substance by drawing.
（１２）の発明によれば、生ハトムギまたは焙煎ハトムギから、８０℃から１００℃の熱水抽出を行うことにより、有用なアミノ酸及び抗潰瘍性成分を多く含む熱水抽出物が得られる。これにより、得られた熱水抽出物は、栄養価が高く、抗潰瘍作用及び抗酸化作用を有するので、メラニンの生成を抑制し、美白及び美肌効果が期待できる。次に、得られた熱水抽出物と極性の高い溶出溶媒との混合液を、逆相カラムクロマトグラフィー（ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ２ＭＧ，Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ−７等の合成吸着剤）で分画する。続いて、所定濃度の溶出溶媒を極性の高い順に透過し、逆相カラムクロマトグラフィー中の熱水抽出物を更に分画する。これにより、熱水抽出物から、栄養価が高く、抗潰瘍作用及び抗酸化作用を有するメラニン生成抑制物質を効率よく分画することができる。したがって、逆相カラムクロマトグラフィーによって、美白及び美肌効果が期待できるメラニン生成抑制物質を分画し、目的のメラニン生成抑制物質を得る工程を含むメラニン生成抑制組成物の製造方法を提供することができる。 According to the invention of (12), a hot water extract containing a lot of useful amino acids and anti-ulcer components can be obtained by performing hot water extraction at 80 ° C. to 100 ° C. from raw pearl barley or roasted pearl barley. Thereby, since the obtained hot water extract has a high nutritional value and has an anti-ulcer action and an antioxidant action, it suppresses the production of melanin, and can be expected to have a whitening effect and a skin beautifying effect. Next, the obtained liquid mixture of the hot water extract and a highly polar elution solvent is fractionated by reverse phase column chromatography (synthetic adsorbent such as DIAION HP2MG, Amberlite XAD-7). Subsequently, the elution solvent having a predetermined concentration is permeated in descending order to further fractionate the hot water extract in the reverse phase column chromatography. Thereby, it is possible to efficiently fractionate a melanin production inhibitor having a high nutritional value and having an anti-ulcer action and an antioxidant action from the hot water extract. Therefore, the manufacturing method of the melanin production inhibitory composition including the process of fractionating the melanin production inhibitory substance which can anticipate whitening and the skin-beautifying effect by reverse phase column chromatography, and obtaining the target melanin production inhibitory substance can be provided. .
（１３） 前記極性の高い溶出溶媒は、水である（１２）に記載の方法。 (13) The method according to (12), wherein the highly polar elution solvent is water.
（１３）の発明によれば、生ハトムギまたは焙煎ハトムギから得られた熱水抽出物は、極性の高い水と混合している。これにより、極性の高い溶出溶媒が水なので、分画後に得られた純水画分は、飲食用に用いても無害である。 According to the invention of (13), the hot water extract obtained from raw pearl barley or roasted pearl barley is mixed with highly polar water. Thereby, since a highly polar elution solvent is water, the pure water fraction obtained after fractionation is harmless even if it is used for eating and drinking.
（１４） 前記所定濃度の溶出溶媒は、３０％、７０％、または１００％のエタノール水である（１２）に記載の方法。 (14) The method according to (12), wherein the elution solvent having a predetermined concentration is 30%, 70%, or 100% ethanol water.
（１４）の発明によれば、生ハトムギまたは焙煎ハトムギから得られた熱水抽出物と極性の高い溶出溶媒との混合液を分画した後の逆相カラムクロマトグラフィーに、３０％、７０％、または１００％のエタノール水を透過することによって、熱水抽出物を更に分画することができる。また、濃度の異なるエタノール水を順に逆相カラムクロマトグラフィーに透過するため、目的のメラニン生成抑制物質を含む画分のみを分取することができる。さらに、得られた各画分中のエタノール水のみを蒸発させることによって、純粋なメラニン生成抑制物質を得ることができる。 According to the invention of (14), the reverse phase column chromatography after fractionating the mixed solution of the hot water extract obtained from raw pearl barley or roasted pearl barley and the highly polar elution solvent is subjected to 30%, 70% The hot water extract can be further fractionated by permeating through% or 100% ethanol water. In addition, since ethanol water having different concentrations is sequentially passed through reverse phase column chromatography, only a fraction containing the target melanin production inhibitor can be collected. Furthermore, a pure melanin production inhibitor can be obtained by evaporating only ethanol water in each of the obtained fractions.
（１５） 所定の組成物に対して生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物を含有させることによって、当該所定の組成物に対してメラニン抑制作用を付与する方法。 (15) A method of imparting a melanin inhibitory action to the predetermined composition by containing a raw pearl extract or roasted pearl extract to the predetermined composition.
（１５）の発明によれば、栄養価が高く、抗潰瘍作用及び抗酸化作用を有するので、メラニンの生成を抑制し、美白及び美肌効果が期待できる生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物を、所定の組成物に含有することができる。これにより、所定の組成物に対してメラニン抑制作用を付与する方法を提供することができる。 According to the invention of (15), a raw pearl extract or roasted pearl extract that has high nutritional value, has an anti-ulcer action and an anti-oxidant action, suppresses the production of melanin, and can be expected to have a whitening and skin-beautifying effect. Can be contained in a predetermined composition. Thereby, the method of providing a melanin inhibitory effect with respect to a predetermined composition can be provided.
（１６） 精白前の生ハトムギまたは焙煎ハトムギをメラニン生成抑制組成物の製造のために使用する方法。 (16) A method of using raw pearl barley or roasted pearl barley before whitening for the production of a melanin production-suppressing composition.
（１６）の発明によれば、精白前の生ハトムギまたは焙煎ハトムギは、有用なアミノ酸を多く含むので栄養価が高い上に、抗潰瘍性成分を含み、抗酸化作用を有するので、メラニンの生成を抑制し、美白及び美肌効果が期待できる。これにより、精白前の生ハトムギまたは焙煎ハトムギをメラニン生成抑制組成物の製造のために使用する方法を提供することができる。 According to the invention of (16), raw pearl barley or roasted pearl barley before whitening has a high nutritional value because it contains a lot of useful amino acids, and also contains an anti-ulcer component and has an antioxidant action. Generation is suppressed, and whitening and skin beautifying effects can be expected. Thereby, the method of using the raw pearl barley or roasted pearl barley before whitening for manufacture of a melanin production suppression composition can be provided.
［定義等］
「ハトムギ」はイネ科の一年草であり、炭水化物栄養価が高く、米や麦に比べタンパク質を２倍近く含むため、体内の新陳代謝を活発化させることが知られている。また、「ハトムギ」は、抗潰瘍性成分としてのコイクセノライドと、ひきつけを抑制する成分としてのコイクソールとを含有する。「ハトムギ」の効用としては、抗酸化作用、美肌作用、イボとり作用等が知られている。
[Definition etc.]
It is known that pearl barley is an annual plant of the Gramineae family, has a high carbohydrate nutritional value and contains nearly twice as much protein as rice and wheat, and therefore activates metabolism in the body. Further, “pearl barley” contains koixenolide as an anti-ulcer component and koixol as a component that suppresses attracting. As the effect of “pearl barley”, an antioxidant action, a skin beautifying action, a wart removing action and the like are known.
「精白前のハトムギから抽出したハトムギ抽出物」とは、脱穀済みで精白前、または、脱穀前で精白前のハトムギから抽出した抽出物をいう。 The “barley extract extracted from pearl barley before whitening” refers to an extract extracted from barley before threshing and before whitening, or before whitening before threshing.
「生ハトムギ」とは、脱穀済みで精白前、または、脱穀前で精白前のハトムギをいう。これにより、脱穀以外の処理を施さないので、製造工程を簡略化することができるのでコストを抑えることができる。さらに、熱を加えないので、ハトムギ中に含まれる有効成分の熱変性を防止することができる。 “Raw pearl barley” refers to pearl barley that has been threshed and before milling, or before threshing but before milling. Thereby, since processes other than threshing are not performed, a manufacturing process can be simplified and cost can be suppressed. Furthermore, since heat is not applied, heat denaturation of the active ingredient contained in the pearl barley can be prevented.
「焙煎ハトムギ」とは、脱穀済みで精白前、または、脱穀前で精白前のハトムギを焙煎することにより、ハトムギ中の水分を減少させたり、風味を増加させたハトムギをいう。ここで、ハトムギ中の水分を減少させることにより、ハトムギの品質変化を遅らせ、賞味期限を長くすることができる。さらに、ハトムギを焙煎することにより、ハトムギに含まれる高分子量の有効成分が低分子量になり、体内に吸収されやすくなる。 The term “roasted pearl barley” refers to pearl barley that has been threshed and before whitening, or has reduced its moisture or increased its flavor by roasting pearl barley before whitening. Here, by reducing the moisture in the pearl barley, the quality change of the pearl barley can be delayed and the expiration date can be lengthened. Furthermore, by roasting pearl barley, the high molecular weight active ingredient contained in pearl barley has a low molecular weight and is easily absorbed into the body.
「殻付ハトムギ」とは、脱穀前で精白前のハトムギをいう。 “Shelled pearl barley” refers to pearl barley before threshing and before whitening.
「抗酸化作用」とは、体内の細胞や遺伝子等の損傷の防止または遅延を促す作用をいう。また、活性酸素の活動を抑える作用も意味する。 “Antioxidant effect” refers to an action that promotes prevention or delay of damage to cells and genes in the body. Moreover, the effect | action which suppresses the activity of active oxygen is also meant.
「逆相カラムクロマトグラフィー」とは、移動相に、水、メタノール、アセトニトリル等の極性を有する溶出溶媒を用い、固定相に、オクタデシル基等を化学結合した無極性の充鎮剤を用いたカラムクロマトグラフィーのことである。移動相より固定相に溶け易い成分ほど遅く溶出するため、極性の大きいものほど早く溶出する。 "Reverse-phase column chromatography" is a column that uses a polar elution solvent such as water, methanol, acetonitrile, etc. as the mobile phase, and a nonpolar packing agent that chemically binds octadecyl groups, etc. to the stationary phase. It is chromatography. Since components that dissolve more easily in the stationary phase than the mobile phase elute later, the more polar one elutes earlier.
本発明によれば、焙煎ハトムギを、８０℃から１００℃の温度で熱水抽出を行うことによって得られた熱水抽出物と、極性の高い溶出溶媒との混合液を逆相カラムクロマトグラフィーで分画した後、所定濃度の溶出溶媒を極性の高い順に透過し、逆相カラムクロマトグラフィー中の熱水抽出物を更に分画し、その画分からメラニン生成抑制物質を得る工程等により、精白前の焙煎ハトムギ抽出物をメラニン生成抑制有効量含み、外用のみならず服用及び飲食用にも用いることが可能であり、さらにメラニンの生成を抑制することが可能なメラニン生成抑制組成物を提供することができる。 According to the present invention, a mixture of a hot water extract obtained by hot water extraction of roasted barley at a temperature of 80 ° C. to 100 ° C. and a highly polar elution solvent is subjected to reverse phase column chromatography. After the fractionation, the elution solvent of a predetermined concentration is permeated in the order of polarity, and the hot water extract in reverse phase column chromatography is further fractionated, and the melanin production inhibitory substance is obtained from the fraction. Provided is a melanin production-suppressing composition that contains an effective amount of melanin production suppression from the previous roasted pearl barley extract, can be used not only for external use but also for taking and eating, and can further suppress the production of melanin can do.
以下、本発明について詳しく説明する。 The present invention will be described in detail below.
本発明に用いるハトムギ種子は、精白前のハトムギ種子であることが好ましい。より好ましくは、殻付のハトムギ種子である。 The pearl seed used in the present invention is preferably pearl seed before whitening. More preferred are shelled pearl seeds.
生ハトムギまたは焙煎ハトムギの抽出方法は、熱水抽出等が用いられる。また、抽出の方式は、浸漬抽出、ドリップ抽出等がある。さらに、抽出温度は、８０℃から１００℃であることが好ましく、抽出時間は制限されない。 As a method for extracting raw pearl barley or roasted pearl barley, hot water extraction or the like is used. Extraction methods include immersion extraction and drip extraction. Furthermore, the extraction temperature is preferably 80 ° C. to 100 ° C., and the extraction time is not limited.
生ハトムギまたは焙煎ハトムギの抽出倍率は、１０倍から５０倍であることが好ましい。より好ましくは、１５倍から４０倍であり、更に好ましくは２０倍から４０倍である。 The extraction ratio of fresh pearl barley or roasted pearl barley is preferably 10 to 50 times. More preferably, it is 15 to 40 times, and further preferably 20 to 40 times.
生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物のＢｒｉｘは、０．１％から２．０％であることが好ましい。より好ましくは、０．３％から２．０％であり、更に好ましくは０．５％から２．０％である。 The Brix of the raw pearl extract or roasted pearl extract is preferably 0.1% to 2.0%. More preferably, it is 0.3% to 2.0%, and still more preferably 0.5% to 2.0%.
生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物は、抽出時に、ハトムギ、緑茶、玄米、大豆（黒豆）、烏龍茶、ハブ茶、昆布、霊芝、熊笹、柿の葉、アマチャヅル、ゴマ、紅花、キダチアロエ、アシタバ、ミカンの皮、グァバ茶、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、及び重炭素ナトリウムからなる群から選ばれる一種以上を配合することができる。 Raw pearl barley extract or roasted pearl barley extract is extracted at the time of extraction with pearl barley, green tea, brown rice, soybean (black beans), oolong tea, hub tea, kelp, ganoderma, bear cocoon, bamboo leaf, amacha mullet, sesame seeds, safflower, kidachi aloe, One or more selected from the group consisting of ashitaba, mandarin orange peel, guava tea, ascorbic acid, sodium ascorbate, and sodium heavy carbon can be blended.
生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物を含有するメラニン生成抑制組成物には、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、酸化防止剤、乳化剤、香料、酸味料、甘味料、着色料、保存料、ポリフェノール製剤、各種ビタミン、各種炭水化物、及びｐＨ調整剤を含有させることができる。 Melanin production-suppressing composition containing raw pearl extract or roasted pearl extract includes ascorbic acid, sodium ascorbate, antioxidant, emulsifier, fragrance, acidulant, sweetener, colorant, preservative, polyphenol preparation , Various vitamins, various carbohydrates, and pH adjusters.
生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物を含有するメラニン生成抑制組成物は、食品、薬品、化粧品の分野で使用することができる。例えば、生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物を含有するメラニン生成抑制組成物は、缶飲料、ＰＥＴボトル飲料、錠剤、化粧水等にメラニン生成抑制有効量含有させることができる。 A melanin production-suppressing composition containing a raw pearl extract or roasted pearl extract can be used in the fields of food, medicine and cosmetics. For example, a melanin production-suppressing composition containing a raw pearl extract or roasted pearl extract can be contained in a can beverage, a PET bottle beverage, a tablet, a lotion or the like in an effective amount for inhibiting melanin production.
生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物を含有するメラニン生成抑制組成物をメラニン生成抑制有効量含有した飲料の殺菌温度は、例えば、缶飲料に含有されている場合では１１０℃から１３０℃であり、ＰＥＴボトル飲料に含有されている場合では１２５℃から１４５℃である。また、殺菌時間は制限されないが、２秒から１時間が好ましい。 The sterilization temperature of a beverage containing a melanin production-suppressing composition containing a raw pearl extract or roasted pearl extract is 110 to 130 ° C when contained in a can beverage, for example. When contained in a PET bottle beverage, the temperature is 125 ° C to 145 ° C. The sterilization time is not limited, but is preferably 2 seconds to 1 hour.
生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物は、食品、薬品、化粧品の分野で使用することができる。例えば、生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物は、缶飲料中、ＰＥＴボトル飲料、錠剤、化粧水等に充填または含有させることができる。ここで、生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物の缶への充填または含有はホットパック法で行う。また、生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物のＰＥＴボトルへの充填または含有は常温無菌状態で行う。 The raw pearl extract or roasted pearl extract can be used in the fields of food, medicine and cosmetics. For example, fresh pearl barley extract or roasted pearl barley extract can be filled or contained in canned beverages, PET bottle beverages, tablets, lotions and the like. Here, the filling or containing of the raw pearl extract or roasted pearl extract into the can is performed by a hot pack method. Moreover, filling or containing the raw pearl extract or roasted pearl extract into a PET bottle is performed in a normal temperature aseptic condition.
生ハトムギ抽出物または焙煎ハトムギ抽出物を充填した飲料の殺菌温度は、例えば、缶飲料に充填または含有されている場合では１１０℃から１３０℃であり、ＰＥＴボトル飲料に充填または含有されている場合では１２５℃から１４５℃である。また、殺菌時間は制限されないが、２秒から１時間が好ましい。 The sterilization temperature of the beverage filled with raw pearl extract or roasted pearl extract is, for example, 110 to 130 ° C. when filled or contained in a can beverage, and is filled or contained in a PET bottle beverage In some cases, the temperature is from 125 ° C to 145 ° C. The sterilization time is not limited, but is preferably 2 seconds to 1 hour.
以下、本発明の実施例について説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。 Examples of the present invention will be described below, but the present invention is not limited to these examples.
［実施例１］
＜生ハトムギからの抽出＞
精白前かつ殻付きの自然のハトムギ種子１００ｇを得た（以下、生ハトムギという）。得られた生ハトムギ１００ｇを浸漬抽出により抽出し、抽出後に得られた固体と液体の混合物をろ過した。ろ過後に得られた抽出液を、以下、生ハトムギ抽出物という。
[Example 1]
<Extraction from raw pearl barley>
100 g of natural pearl seed with unshelled and shelled was obtained (hereinafter referred to as raw pearl barley). 100 g of the obtained raw pearl barley was extracted by immersion extraction, and the solid and liquid mixture obtained after extraction was filtered. The extract obtained after filtration is hereinafter referred to as raw pearl barley extract.
＜生ハトムギ抽出物の分画＞
生ハトムギ抽出物は、逆相カラムクロマトグラフィー（３０φ×３１０ｍｍ、樹脂名ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ２ＭＧ、樹脂質量３００ｇ）を用いて分画した。まず、生ハトムギ抽出物０．９Ｌを含む純水２．４Ｌを逆相カラムクロマトグラフィーに透過し、純水画分を得た。次に、純水分画した逆相カラムクロマトグラフィーに、３０％エタノール水２．４Ｌを透過し、３０％エタノール画分を得た。続いて、純水分画及び３０％エタノール分画をした逆相カラムクロマトグラフィーに、７０％エタノール水２．４Ｌを透過し、７０％エタノール画分を得た。最後に、純水分画、３０％エタノール分画及び７０％エタノール分画をした逆相カラムクロマトグラフィーに、１００％エタノール２．４Ｌを透過し、１００％エタノール画分を得た。
<Fractionation of raw pearl barley extract>
The raw pearl barley extract was fractionated using reverse phase column chromatography (30φ × 310 mm, resin name DIAION HP2MG, resin mass 300 g). First, 2.4 L of pure water containing 0.9 L of fresh pearl barley extract was passed through reverse phase column chromatography to obtain a pure water fraction. Next, 2.4 L of 30% ethanol water was passed through reverse phase column chromatography with a pure water fraction to obtain a 30% ethanol fraction. Subsequently, 2.4 L of 70% ethanol water was passed through reverse phase column chromatography with a pure water fraction and 30% ethanol fraction to obtain a 70% ethanol fraction. Finally, 2.4 L of 100% ethanol was passed through reverse phase column chromatography with a pure water fraction, 30% ethanol fraction, and 70% ethanol fraction to obtain a 100% ethanol fraction.
＜各画分の濃縮＞
逆相カラムの分画により得た各画分は、真空エバポレータを用いて、５０℃の温浴下、水及び／またはエタノールを蒸発させ濃縮した後、凍結乾燥し、各画分の濃縮物を得た。
<Concentration of each fraction>
Each fraction obtained by fractionation on the reverse phase column was concentrated by evaporating water and / or ethanol in a 50 ° C. water bath using a vacuum evaporator, and then freeze-dried to obtain a concentrate of each fraction. It was.
＜高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による各画分の精製＞
各画分の濃縮物は、ＨＰＬＣ（Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ パックドカラム ＯＤＳ−ＨＧ−５、４．６φ×２５０ｍｍ）によりそれぞれ精製した。ここで、各画分の濃縮物を０．８ｍｇ含んだ３０％エタノール水２０μｌを精製試料とした。また、溶離液の流量は、１．０ｍｌ／ｍｉｎと一定になるようにした。さらに、溶離液のグラジエントは、試料導入時に１５％のアセトニトリルが、３０分後に３５％のアセトニトリルになるように設定した。また、溶離液には分離能を向上させるためトリフルオロ酢酸を０．０１％添加した。
<Purification of each fraction by high performance liquid chromatography (HPLC)>
The concentrate of each fraction was purified by HPLC (Develosil packed column ODS-HG-5, 4.6φ × 250 mm). Here, 20 μl of 30% ethanol water containing 0.8 mg of the concentrate of each fraction was used as a purified sample. The flow rate of the eluent was kept constant at 1.0 ml / min. Furthermore, the gradient of the eluent was set so that 15% acetonitrile became 35% acetonitrile after 30 minutes when the sample was introduced. In addition, 0.01% trifluoroacetic acid was added to the eluent to improve the resolution.
［実施例２］
＜焙煎ハトムギからの抽出＞
実施例１と同様に、精白前かつ殻付きのハトムギ種子を焙煎し、ハトムギの焙煎品１００ｇを得た（以下、焙煎ハトムギという）。得られた焙煎ハトムギ１００ｇは、抽出温度９０℃、抽出時間１２分の抽出条件下、純水３０００ｇに浸漬する浸漬抽出により抽出した。次に、抽出後に得られた固体と液体の混合物をろ過した（８０ｍｅｓｈステンレスフィルター及びＮｏ．２ろ紙）。ろ過後に得られた抽出液を、以下、焙煎ハトムギ抽出物という。
[Example 2]
<Extraction from roasted pearl barley>
In the same manner as in Example 1, pearl seeds with white shell before shelling were roasted to obtain 100 g of roasted pearl barley (hereinafter referred to as roasted pearl barley). 100 g of the obtained roasted pearl barley was extracted by immersion extraction immersed in 3000 g of pure water under extraction conditions of 90 ° C. and extraction time of 12 minutes. Next, the solid and liquid mixture obtained after extraction was filtered (80 mesh stainless steel filter and No. 2 filter paper). The extract obtained after filtration is hereinafter referred to as roasted pearl barley extract.
＜焙煎ハトムギ抽出物の分画＞
実施例１と同様に、焙煎ハトムギ抽出物は、逆相カラムクロマトグラフィーを用いて分画し、純水画分、３０％エタノール画分、７０％エタノール画分、及び１００％エタノール画分を得た。
<Fractionation of roasted barley extract>
As in Example 1, the roasted barley extract was fractionated using reverse-phase column chromatography, and the purified water fraction, 30% ethanol fraction, 70% ethanol fraction, and 100% ethanol fraction were separated. Obtained.
＜各画分の濃縮＞
実施例１と同様に、逆相カラムクロマトグラフィーの分画により得た各画分から濃縮物を得た。
<Concentration of each fraction>
In the same manner as in Example 1, concentrates were obtained from the fractions obtained by fractionation by reverse phase column chromatography.
＜高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による各画分の精製＞
実施例１と同様に、各画分の濃縮物はＨＰＬＣによりそれぞれ精製した。
<Purification of each fraction by high performance liquid chromatography (HPLC)>
As in Example 1, each fraction concentrate was purified by HPLC.
生ハトムギ及び焙煎ハトムギからの抽出液回収量（ｇ）、抽出液Ｂｒｉｘ（％）、抽出液中固形分量（ｇ）、固形分量回収率（％）の各項目に関して調査し、比較した。その結果を、表１に示す。 The amount of extract recovered from raw and roasted barley (g), extract Brix (%), solid content in extract (g), and solid content recovery rate (%) were investigated and compared. The results are shown in Table 1.
表１に示すように、同様の抽出条件下において抽出を行ったにも関わらず、焙煎ハトムギの抽出液Ｂｒｉｘ（％）は高い値を示した。このことから、焙煎ハトムギ抽出物中の糖度が高いことが確認された。これは、生ハトムギと焙煎ハトムギとの抽料量が同じであっても、焙煎ハトムギ中の水分は蒸発しているので、焙煎ハトムギ中の有効成分が高濃度に濃縮されていることに起因する。 As shown in Table 1, the extract Brix (%) of roasted pearl barley showed a high value even though extraction was performed under the same extraction conditions. From this, it was confirmed that the sugar content in the roasted barley extract was high. This is because even if the amount of raw pearl barley and roasted pearl barley is the same, the moisture in the roasted pearl barley has evaporated, so the active ingredients in the roasted pearl barley are concentrated to a high concentration caused by.
次に、焙煎ハトムギ抽出物の７０％エタノール画分のＨＰＬＣクロマトグラムを図１に示す。図１に示すように、ＨＰＬＣにより精製した７０％エタノール画分は、種々の成分から構成されていることが分かった。 Next, FIG. 1 shows an HPLC chromatogram of a 70% ethanol fraction of roasted barley extract. As shown in FIG. 1, it was found that the 70% ethanol fraction purified by HPLC was composed of various components.
［実施例３］
実施例１及び実施例２で抽出、分画、濃縮及び精製した生ハトムギ抽出物及び焙煎ハトムギ抽出物を用いて、メラニン生成抑制試験を行った。
[Example 3]
A melanin production inhibition test was performed using the raw pearl extract and roasted pearl extract extracted, fractionated, concentrated and purified in Example 1 and Example 2.
＜メラニン生成抑制試験＞
試験に使用した細胞は、マウスに自然発生した悪性黒色腫から分離された細胞からメラニン産生能が高い株を分離して培養したＢ１６メラノーマ細胞を用いた。このＢ１６メラノーマ細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＳＭ）で培養した。
<Melanin production inhibition test>
B16 melanoma cells obtained by isolating and culturing a strain having a high melanin production ability from cells isolated from malignant melanoma naturally occurring in mice were used as cells used in the test. The B16 melanoma cells were cultured in Dulbecco's modified Eagle medium (DMSM) containing 10% fetal bovine serum (FBS).
培養したＢ１６メラノーマ細胞は、５×１０４個／ｍｌとなるように播種し、一日培養後、培地交換を行った。この培地に、各画分の濃縮物を添加した。３日間培養後、トリプシン処理したのち、Ｂ１６メラノーマ細胞を集め、細胞数とメラニン生成量を測定した。ここで、細胞数は、セルカウンターにて測定した。また、メラニン生成量は、集めたＢ１６メラノーマ細胞を遠心分離後、上清を除き沈殿した細胞ペレットに、１規定の水酸化ナトリウムを加えて溶解し、４７５ｎｍの吸光度で測定した。ここで、メラニン生成量は、標準メラニンから作成した検量線により定量化した。 The cultured B16 melanoma cells were seeded so as to be 5 × 10 4 cells / ml, and the medium was changed after culturing for one day. To this medium, the concentrate of each fraction was added. After culturing for 3 days, after trypsin treatment, B16 melanoma cells were collected, and the number of cells and the amount of melanin produced were measured. Here, the number of cells was measured with a cell counter. The amount of melanin produced was measured by measuring the absorbance at 475 nm after centrifuging the collected B16 melanoma cells, dissolving the supernatant by adding 1N sodium hydroxide to the precipitated cell pellet. Here, the amount of melanin production was quantified using a calibration curve prepared from standard melanin.
焙煎ハトムギ抽出物７０％エタノール画分、及び生ハトムギ抽出物７０％エタノール画分の画分量（ｇ）、回収率（％）、濃縮度（倍）、固形分必要量（ｇ／Ｌ）、及び抽料配合量（ｇ／Ｌ）の各項目に関して調査し、比較した。また、焙煎ハトムギ抽出物７０％エタノール画分、生ハトムギ抽出物７０％エタノール画分、及びアルブチンの有効濃度（ｐｐｍ）、有効濃度（％）、及びメラニン生成抑制率（％）の各項目に関して調査し、比較した。その結果を、表２に示す。ここで、アルブチンは、ハイドロキノン誘導体の一つであり、メラニン生成抑制効果を有する代表的な物質として一般に知られている。 70% ethanol fraction of roasted pearl extract and fraction (g) of raw pearl extract 70% ethanol fraction, recovery rate (%), concentration (times), solid content required (g / L), And each item of the blending amount (g / L) of the lottery was investigated and compared. In addition, regarding roasted pearl extract 70% ethanol fraction, raw pearl extract 70% ethanol fraction, and arbutin effective concentration (ppm), effective concentration (%), and melanin production inhibition rate (%) Investigated and compared. The results are shown in Table 2. Here, arbutin is one of hydroquinone derivatives, and is generally known as a representative substance having a melanin production inhibitory effect.
表２に示すように、生ハトムギ抽出物７０％エタノール画分と比べて、焙煎ハトムギ抽出物７０％エタノール画分は、画分量及び回収率が高い値を示した。これにより、焙煎ハトムギ抽出物は、７０％エタノール水の極性で分画されることが確認された。また、抽料配合量から、メラニン生成を抑制するために必要な生ハトムギ抽出物７０％エタノール画分及び焙煎ハトムギ抽出物７０％エタノール画分の最低抽料配合量が確認された。さらに、メラニン生成抑制率から、焙煎ハトムギ抽出物７０％エタノール画分は、生ハトムギ抽出物７０％エタノール画分、及びアルブチンと同程度の濃度でメラニン生成抑制効果を有する。これにより、メラニン生成抑制効果を有する代表的な物質であるアルブチンと似た効果を示す物質が、焙煎ハトムギ抽出物７０％エタノール画分から得られたことが確認された。 As shown in Table 2, compared with the raw pearl extract 70% ethanol fraction, the roasted pearl extract 70% ethanol fraction showed higher values of the fraction amount and the recovery rate. This confirmed that the roasted pearl extract was fractionated with the polarity of 70% ethanol water. Moreover, the minimum amount of the extract of the raw pearl extract 70% ethanol fraction and the roasted pearl extract 70% ethanol necessary for suppressing the melanin production was confirmed from the amount of the extract. Furthermore, from the melanin production suppression rate, the roasted pearl extract 70% ethanol fraction has a melanin production inhibitory effect at a concentration similar to that of the raw pearl extract 70% ethanol fraction and arbutin. Thereby, it was confirmed that the substance which shows the effect similar to arbutin which is a typical substance which has a melanin production inhibitory effect was obtained from the roasted pearl extract 70% ethanol fraction.
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