JP2004502465A - ディップスティック検査のための改良された捕捉及び検出形式多用性 - Google Patents
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Abstract
試料液中の標的核酸の有無を検査するためのディップスティック類について説明がある。該ディップスティック類はディップスティックの捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブを含む。該万能捕捉プローブは、試料液中の標的核酸とハイブリダイズしたフック捕捉プローブとハイブリダイズしうる。ディップスティックの接触端を試料液に接触させて、標的核酸とハイブリダイズしたフック捕捉プローブを毛管作用で捕捉帯へと移動させ、そこで標的核酸が検出されるようにする。万能及びフック捕捉プローブの使用により、ディップスティックを任意の標的核酸の捕捉に使用できるように準備することが可能となり、ディップスティックの準備が単純化される。適切なフック捕捉プローブの使用により標的核酸の特異的捕捉が実現される。方法とキットについても説明がある。
Description
【０００１】
本発明はディップスティックによる核酸検出の改善に関する。本発明のディップスティックは、たとえばトラコーマ・クラミジア（Ｃｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）（ＣＴ）などの病原菌への感染の検査を目的とした試料液中の標的核酸の検出に使用される。
【０００２】
試料液中の標的核酸の存在を検出するための在来検査法には、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法による標的核酸の増幅に依拠するものがある。ＰＣＲ法では少量の標的核酸の検出が可能になるものの、結果の判明に数時間もかかる場合がある。これは大きな難点であり、なるべく短時間で結果が判明し、たとえば患者の待ち時間をできるだけ短くするのが好ましい。また、この種の方法はＰＣＲの実施に高価な専門装置や比較的高価な試薬を要するのも難点である。
【０００３】
それに対してディップスティックは、標的核酸を増幅せずに検出するため専門装置が不要であり、結果もＰＣＲに依拠した方法よりもずっと短時間で得られる。患者は検診と処置を一回の外来で済ますことができる。これは、患者に後日の再外来が見込めない又は不可能な場合には、特に有利である。
【０００４】
米国特許第５，３１０，６５０号で開示されている代表的な在来ディップスティックでは、一本鎖ＤＮＡ捕捉プローブがニトロセルロースフィルターの一端（接触端）から離れた捕捉帯内の該フィルター上に固定化してある。該捕捉プローブは検出対象の標的核酸の第１領域の配列と相補的である。該ニトロセルロースフィルターには捕捉帯と接触端の間に、標識付けした一本鎖ＤＮＡ検出プローブが固定化してある。該検出プローブは標的核酸の（第１領域とは異なる）第２領域の配列と相補的である。
【０００５】
存在が想定される試料液中の標的ＤＮＡを検出するには、ニトロセルロースフィルターの接触端を試料液に接触させる。試料液は毛管作用で該フィルター内を移動しプローブ帯と捕捉帯を通過する。試料液はプローブ帯を通過する際に検出プローブを可動化して試料液と共に捕捉帯へと移動させる。可動化された検出プローブはそこで、試料液中の任意の標的ＤＮＡの第２領域とハイブリダイズすることができる。
【０００６】
ハイブリダイズした検出プローブと標的ＤＡＮが捕捉帯に到達すると、標的ＤＮＡの第１領域は固定化捕捉プローブとハイブリダイズすることができる。こうして、標的核酸、捕捉プローブ及び標識付けした検出プローブの間で三元複合体が形成される。従って、捕捉帯に標識が存在すれば、それは試料液中に標的ＤＮＡが存在することを指示することになる。
【０００７】
第２のタイプの在来ディップスティックではニトロセルロースフィルター上に標識ＤＮＡ検出プローブを固定しない。その代わりに検出プローブを、試料液中の任意の標的核酸とのハイブリダイゼーションを可能にするような条件下で、試料液に添加する。次いでニトロセルロースフィルターの接触端を試料液に接触させる。試料液がディップスティック内を移動するうちに、標的核酸は検出プローブとハイブリダイズして、ニトロセルロースフィルターを移動し捕捉帯に至って捕捉プローブにより捕捉されよう。
【０００８】
上述の在来ディップスティック検出法の難点は、捕捉プローブが標的核酸と特異的にハイブリダイズするため、検出対象の標的核酸が異なるごとに、捕捉プローブを固定化した異なるディップスティックを用意しなければならないことにある。同様に、標識検出プローブもまた標的核酸と特異的にハイブリダイズするため、検出対象の標的核酸が異なるごとに異なる標識検出プローブを用意しなければならない。
【０００９】
本発明によれば、試料液中の標的核酸の有無を調べるディップスティック検査法への、標的核酸とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ及びフック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブの使用が提供される。
【００１０】
用語「ディップスティック検査法」はここでは、ディップスティックを使用する任意の検査法であって、試料液をディップスティックに接触させ、毛管作用により試料液をディップスティックの捕捉帯へと移動させ、もって捕捉帯において試料液中の標的核酸を万能及びフック捕捉プローブにより捕捉並びに検出することを可能にするような検査法を意味する。
【００１１】
本発明の第１の態様によれば、次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法が提供される：
ａ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸の第１領域と該万能捕捉プローブの両方とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを準備する；
ｃ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブを準備する；
ｄ） 検出プローブを試料液中の標的核酸と結合させるような条件下で、試料液を検出プローブとインキュベートし、また
フック捕捉プローブを試料液中の標的核酸の第１領域とハイブリダイズさせるような条件下で、試料液をフック捕捉プローブとインキュベートする；
ｅ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、フック捕捉プローブ、検出プローブ及び標的核酸の間で形成される複合体が毛管作用により捕捉帯へと移動し、該複合体のフック捕捉プローブと捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブとの相互作用で、捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｆ） 捕捉帯で検出プローブの有無を調べる。
【００１２】
この種の方法では、標的核酸に対して特異的なフック捕捉プローブを使用するだけで、異なる標的核酸の捕捉に同じクロマトグラフストリップを使用することが可能となる。
【００１３】
検出プローブとフック捕捉プローブは試料液と任意の順序でインキュベートしても、又は試料液に同時に添加してもよい。
【００１４】
プローブは単に試料液に接触させるという方法で試料液とインキュベートしても、それでハイブリダイゼーションを起こせるのであれば、かまわない。
【００１５】
本発明の第１態様によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティックもまた提供される：
試料液に接触させるための接触端；
接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブであって、標的核酸の第１領域に結合したフック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブ； 及び
クロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間の複合体形成帯に解離可能に固定化した検出部分であって、標的核酸の第２領域とハイブリダイズした検出プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる検出部分。
【００１６】
本発明の第１態様によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキットもまた提供される：
ｉ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティック；
ｉｉ） 標的核酸の第１領域及び万能捕捉プローブの両方とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ； 及び
ｉｉｉ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブ。
【００１７】
フック捕捉プローブは試料液とハイブリダイズさせる代わりに、クロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化してもよい。これはフック捕捉プローブ液をクロマトグラフストリップ上に点滴し乾燥させるだけで実現しうる。従って、捕捉帯に同じ万能捕捉プローブをそれぞれ固定化した数枚のクロマトグラフストリップを準備することができる。特定の標的核酸の捕捉を可能にするよう適切なフック捕捉プローブをクロマトグラフストリップに解離可能に固定化するだけで、標的核酸の検出にクロマトグラフストリップを使用する準備が整う。クロマトグラフストリップのこうした準備は、標的核酸に対して特異的な捕捉プローブを備えるクロマトグラフストリップを、クロマトグラフストリップに該捕捉プローブを不可逆的に固定化して準備するよりも容易である。
【００１８】
本発明の第２の態様によれば、次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法が提供される：
ａ） 試料液に接触させるための接触端、接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ、及び万能捕捉プローブとハイブリダイズさせた、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブを準備する；
ｃ） 試料液中の標的核酸を検出プローブに結合させうるような条件下で、試料液を検出プローブとインキュベートする；
ｄ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、検出プローブに結合した標的核酸が毛管作用により捕捉帯へと移動し、捕捉帯に固定化したフック捕捉プローブと標的核酸の第１領域との相互作用で、捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｅ） 捕捉帯で検出プローブの有無を調べる。
【００１９】
本発明の第２態様によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティックもまた提供される：
試料液に接触させるための接触端；
接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ； 及び
万能捕捉プローブとハイブリダイズさせた、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ。
【００２０】
本発明の第２態様によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキットもまた提供される：
ｉ） 試料液に接触させるための接触端、接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ、及び万能捕捉プローブとハイブリダイズさせた、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティック； 及び
ｉｉ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブ。
【００２１】
捕捉帯に同じ万能捕捉プローブをそれぞれ固定化した数枚のクロマトグラフストリップを準備することができる。特定の標的核酸の捕捉を可能にするよう適切なフック捕捉プローブを万能捕捉プローブとハイブリダイズさせるだけで、標的核酸の検出にクロマトグラフストリップを使用する準備が整う。この場合も、クロマトグラフストリップのこうした準備は、標的核酸に対して特異的な捕捉プローブを備えるクロマトグラフストリップを、クロマトグラフストリップに捕捉プローブを不可逆的に固定化して準備するよりも容易である。
【００２２】
検出プローブは標的核酸に共有結合でも非共有結合でも結合しうる。好ましくは、検出プローブは標的核酸の第２領域とのハイブリダイゼーションにより標的核酸に結合しうる核酸又は核酸類縁体を含む。
【００２３】
検出プローブは標識と結合させ、もって検出プローブの利用による標的核酸の直接検出を可能にしてもよい。しかし好ましくは、検出プローブは、標的核酸とハイブリダイズした後の検出プローブと結合しうる検出部分による標的核酸の間接検出を可能にする。
【００２４】
検出プローブが核酸又は核酸類縁体を含むとき、検出部分は、標的核酸とハイブリダイズした後の検出プローブと標的核酸の間で形成される二本鎖体と結合しうるような抗体又は抗体断片を含んでもよい。
【００２５】
しかし好ましくは、検出部分はリガンド結合部分であり、また検出プローブは検出部分の結合相手となりうる検出リガンドと結合したプローブを含む。検出プローブが検出リガンドを含むとき、検出部分は非抗体でも、好ましくは抗体又は抗体断片でもよい。
【００２６】
好ましくは検出リガンド、検出部分はそれぞれ、ビオチン、抗ビオチン抗体を含むか、又はフルオレセイン、抗フルオレセイン抗体を含むか、もしくは２，４−ジニトロフェノール（ＤＮＰ）、抗ＤＮＰ抗体を含む。
【００２７】
あるいは、検出リガンドはビオチンを含み、また検出部分はアビジン、ストレプタビジン、又はビオチン結合活性を保持するそれらの誘導体を含んでもよい。
【００２８】
検出部分はクロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に位置する複合体形成帯に解離可能に固定化して、検出プローブが毛管作用で捕捉帯へと移動する際に検出部分が解離され検出プローブと結合しうるようにしてもよい。
【００２９】
検出部分は好ましくは標識を含み、検出プローブの利用による標的核酸の間接検出が可能となるようにする。しかし代わりに、検出プローブと結合した検出部分と結合しうる標識付けした結合部分を使用して標的核酸を間接的に検出するようにしてもよい。
【００３０】
検出プローブ又は検出部分の標識は好ましくは非放射性とする。より好ましくは、該標識は色標識たとえば繊維染料、金コロイドなどの金属ゾル、又は着色ラテックス粒子などの着色粒子である。
【００３１】
検出プローブは１以上のプローブを含んでもよい。たとえば検出プローブは標的核酸の第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブ及び標的核酸とハイブリダイズした後のフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブを含んでもよい。
【００３２】
検出プローブが万能検出プローブとフック検出プローブを含むとき検出プローブの検出リガンド又は標識は万能プローブと結合するのがよい。
【００３３】
検出プローブが検出リガンドを結合した単一プローブを含む場合には、異なる標的核酸又は同じ標的核酸の異なる領域を検出する必要が生じるたびに、異なるプローブを検出リガンドに結合しなければならない。万能検出プローブに検出リガンドを結合して、それをフック検出プローブと併用するのが特に有利である。というのは検出リガンドを結合した万能検出プローブなら同じ万能検出プローブのままでも異なるフック検出プローブと併用することで、異なる標的核酸又は同じ標的核酸の異なる領域を検出することができるからである。従って、検出リガンドを結合したプローブをただ１種類調製すれば済むことになる。
【００３４】
本発明によれば、試料液中の標的核酸の有無を調べるディップスティック検査法への、標的核酸とハイブリダイズしうるフック検出プローブ及びフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブの使用もまた提供される。
【００３５】
用語「ディップスティック検査法」はここでは、ディップスティックを使用する任意の検査法であって、試料液をディップスティックに接触させ、試料液を毛管作用によりディップスティックの捕捉帯へと移動させ、もって捕捉帯で試料液中の標的核酸を万能検出プローブ及びフック検出プローブにより捕捉並びに検出することを可能にするような検査法を意味する。
【００３６】
本発明の第３の態様によれば、次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法が提供される：
ａ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうる捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブを準備する；
ｃ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズした後のフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような万能検出プローブを準備する；
ｄ） フック検出プローブが標的核酸の第２領域とハイブリダイズし万能検出プローブがフック検出プローブとハイブリダイズしうるような条件下で、試料液をフック検出プローブ及び万能検出プローブとインキュベートする；
ｅ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、万能検出プローブ、フック検出プローブ及び標的核酸の間で形成される複合体が毛管作用により捕捉帯へと移動し、該複合体の標的核酸と捕捉帯に固定化した捕捉プローブとの相互作用で、捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｆ） 捕捉帯で万能検出プローブの有無を調べる。
【００３７】
本発明の第３態様によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキットもまた提供される：
ｉ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうる捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティック；
ｉｉ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブ； 及び
ｉｉｉ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズした後のフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブであって、フック検出プローブとの併用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような万能検出プローブ。
【００３８】
万能検出プローブは試料液とハイブリダイズする代わりに、随意にフック検出プローブと共に、クロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化してもよい。該プローブは試料液が毛管作用で捕捉帯へと移動する際に試料液中に解離される。
【００３９】
他の実施態様では、試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させた後にフック検出プローブを随意に万能検出プローブと共に捕捉帯に接触させることにより、捕捉帯での標的核酸の捕捉を可能にしてもよい。これを実現するには、検出プローブ液を直接捕捉帯に接触させてもよいし、試料液の後で検出プローブ液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させ、もって検出プローブが毛管作用により捕捉帯へと移動するようにしてもよい。検出プローブ液が万能検出プローブを含まない場合には、フック検出プローブを捕捉帯に接触させた後に万能検出プローブをフック検出プローブと結合させる必要があろう。
【００４０】
あるいは、フック検出プローブを試料液とインキュベートするか又はクロマトグラフストリップに解離可能に固定化する場合には、試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させた後に万能検出プローブを捕捉帯に接触させてもよい。これを実現するにはやはり、万能検出プローブ液を捕捉帯に直接添加してもよいし、クロマトグラフストリップの接触端に接触させてもよい。
【００４１】
フック検出プローブが存在しなければ万能検出プローブは標的核酸と結合しえないことが理解されよう。
【００４２】
他タイプのディップスティック検査法では標的核酸は捕捉帯で、標的核酸とハイブリダイズした捕捉プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる捕捉部分により捕捉されよう。捕捉プローブは捕捉部分の結合相手となりうるリガンドを含んでもよい。捕捉プローブは一般に、標的核酸とハイブリダイズしうる捕捉プローブ部分に捕捉リガンドを共有結合させて調製する。
【００４３】
捕捉プローブは標的核酸と特異的にハイブリダイズするため、検出対象の標的核酸が異なるたびに、捕捉リガンドを備えた異なる捕捉プローブを調製しなければならない。
【００４４】
あるいは捕捉部分が、標的核酸とハイブリダイズしうる捕捉プローブ部分に直接、非塩基対合相互作用で結合する場合には、異なる標的核酸の捕捉に異なる捕捉プローブが使用されるたびに異なる捕捉部分を使用する必要があるかもしれない。たとえば、捕捉部分が捕捉プローブと標的核酸の間で形成されるハイブリッドと結合しうる抗体であるならば、該抗体はすべての捕捉プローブ／標的核酸ハイブリッドに対し高親和力をもつとは限らないであろう。
【００４５】
本発明の更なる実施態様によれば、次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法が提供される：
ａ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した、フック捕捉プローブを介して標的核酸と結合した万能捕捉プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる捕捉部分とを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを準備する；
ｃ） フック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブを準備する；
ｄ） 試料液を
フック捕捉プローブと標的核酸をハイブリダイズさせるような条件下で、フック捕捉プローブと、また
万能捕捉プローブとフック捕捉プローブをハイブリダイズさせるような条件下で、万能捕捉プローブと
それぞれ接触させる；
ｅ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、万能捕捉プローブ、フック捕捉プローブ及び標的核酸の間で形成される複合体が毛管作用により捕捉帯へと移動し、複合体の捕捉リガンドを捕捉部分に（非塩基対合相互作用で）結合させることにより捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｆ） 捕捉帯で標的核酸の有無を調べる。
【００４６】
好ましくは、万能捕捉プローブは複合体を捕捉するための、捕捉部分の結合相手となりうる捕捉リガンドを含む。好適な捕捉リガンドの例はビオチン、フルオレセイン及びＤＮＰなどである。ビオチンにはアビジン、ストレプタビジン又は抗ビオチン抗体が結合しうる。フルオレセイン及びＤＮＰにはそれぞれ抗フルオレセイン抗体及び抗ＤＮＰ抗体が結合しうる。
【００４７】
異なるフック捕捉プローブを使用するだけで異なる標的核酸を捕捉しうることがわかろう。捕捉リガンドを結合した（又は捕捉部分が結合しうる）１種類のプローブを調製すれば済むことになる。
【００４８】
万能及びフック捕捉プローブは試料液とインキュベートする必要はない。他の方法では、万能捕捉プローブを随意にフック捕捉プローブと共に、クロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化してもよい。毛管作用で捕捉帯へと移動する試料液が万能捕捉プローブ（及びフック捕捉プローブ）を解離させ、解離したプローブが標的核酸と結合しうるようにする。クロマトグラフストリップに１以上のプローブを解離可能に固定化する利点は、それにより検査方法が単純化され、また試料液に添加する必要のある試薬の数が減ることである。これは、特に僻地でディップスティックを用いて患者由来の試料液（たとえば尿溶液）を検査し特定の疾患又は障害の有無を判定するような場合には大きな利点である。
【００４９】
明らかなように、フック捕捉プローブを万能捕捉プローブと共にクロマトグラフストリップに解離可能に固定化しない場合には、好ましくは試料液がフック捕捉プローブとのインキュベーション後にクロマトグラフストリップを移動するようにするのがよい。しかし代りに、別個のフック捕捉プローブ液をクロマトグラフストリップに接触させて、該プローブ液が毛管作用で捕捉帯へと移動し、もって万能捕捉プローブを解離し、捕捉帯で万能及びフック捕捉プローブが捕捉されるようにすることも可能である。試料液はその後でクロマトグラフストリップに接触させ、標的核酸が捕捉帯でフック捕捉プローブとのハイブリダイゼーションで捕捉されるようにする。
【００５０】
こうした方法の更なる変法では、たとえば万能及びフック捕捉プローブを捕捉帯に添加して、又は別個の万能及びフック捕捉プローブ液にクロマトグラフストリップを接触させて、万能及びフック捕捉プローブを捕捉帯に結合してから、クロマトグラフストリップの接触端を試料液に接触させることができる。あるいは、万能捕捉プローブを捕捉部分と結合させる限りで、フック捕捉プローブをクロマトグラフストリップに解離可能に固定化してから、試料液を接触端に接触させることもできる。
【００５１】
しかし、クロマトグラフストリップ上でのハイブリダイゼーション反応は非塩基対合相互作用よりも起こるのが遅いと考えられるため、万能及びフック捕捉プローブを試料液に添加してから試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させるのが好ましい。溶液中でのハイブリダイゼーションのほうがハイブリダイゼーション条件の制御も容易である。
【００５２】
本発明によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキットもまた提供される：
試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した捕捉部分であって、フック捕捉プローブを介して標的核酸に結合した万能捕捉プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる捕捉部分とを備えるクロマトグラフストリップを有するディップスティック；
標的核酸とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ； 及び
フック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブ。
【００５３】
該万能捕捉プローブ及び／又はフック捕捉プローブはクロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化してもよい。
【００５４】
標的核酸は前述のような検出プローブを用いて検出してもよい。
【００５５】
検出プローブ又は万能検出プローブが検出リガンドを含む本発明のキットは、検出リガンドと結合しうる標識検出部分であって、標的核酸の間接検出を可能にするような標識検出部分を更に含んでもよい。該標識検出部分はクロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化してもよい。
【００５６】
本発明によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するためのディップスティック又はキットの使用も提供される。
【００５７】
標的核酸は任意の核酸でよいが、好ましくは病原菌特に性感染症病原菌の核酸である。最も好ましくは、標的核酸はトラコーマ・クラミジアの核酸である。
【００５８】
本発明の好ましい方法では、プローブ類と標的核酸とのハイブリダイゼーションは（固定化万能捕捉プローブと標的核酸とのハイブリダイゼーションを除いて）試料液中で、試料液をクロマトグラフストリップと接触させる前に行う。最も好ましくは、プローブ類のハイブリダイゼーションは単段階で行う。これは方法を単純化し、もって方法の実行を大幅に迅速簡易化する。
【００５９】
多段階ハイブリダイゼーションは試料液中での異なるプローブと標的核酸の逐次ハイブリダイゼーションにより、又はクロマトグラフストリップをそれぞれ異なるプローブを含む異なる溶液と接触させることにより、行うことができる。通常、後者の多段階ハイブリダイゼーション法ではクロマトグラフストリップを、異なるプローブ液と接触させるたびに洗う必要がある。
【００６０】
多段階ハイブリダイゼーションが好ましい場合もあろうが、通常はより簡易迅速な単段階ハイブリダイゼーション形式のほうが好ましいのは言うまでもない。
【００６１】
最も好ましくは、試料液は単段階のハイブリダイゼーション反応を実現し、また（たとえば検出リガンドと検出リガンド結合部分の間の）非塩基対合反応を実現し、標的核酸、１以上のハイブリッド形成プローブ及び（随意に）リガンド結合部分を含む複合体の毛管作用によるクロマトグラフストリップ内移動を起こすうえで好適な組成とする。
【００６２】
そうした試料液を使用すれば、当然ながらハイブリダイゼーション反応は単段階反応となりうるし、また試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させる前に（試料液をまず希釈したり変化させたりする必要もなく）リガンド／リガンド結合部分の相互作用が起こりうる。必要なら、試料液をクロマトグラフストリップに接触させた後で、リガンド／リガンド結合部分の相互作用をクロマトグラフストリップ上で追加的又は代替的に起こすこともできる。結局、標的核酸の簡易迅速な検出はさらに楽になる。
【００６３】
そうした結果は標準ハイブリダイゼーション液（ＳＳＰＥ緩衝液又はＴｒｉｓ緩衝液など）に塩、洗剤及びブロッキング・タンパク質（ＢＳＡ又は粉ミルクなど）を加えた試料液により達成されることが既に判明している。本発明の検査法による標的核酸の検出感度は他ディップスティック検査法のそれとほぼ同等であることも判明している。
【００６４】
以下、本発明の実施態様をもっぱら実施例により説明する。
【００６５】
実施例はトラコーマ・クラミジア（ＣＴ）核酸の検出に関する。ＣＴは性感染症の最も一般的な原因に入る。ＣＴ感染は不妊の原因となりうるし、また妊娠中であれば自然流産、死産又は分娩後子宮内膜炎を招きかねない。新生児では、ＣＴ感染は失明や慢性呼吸器疾患の原因となりうる。男性感染者の約１０％と女性感染者の最高７０％はＣＴ感染の症候を示さない。従って、ＣＴ感染の正確な診断により早期治療の開始を可能にすることが大事である。
【００６６】
実施例で使用したプローブの配列は次のとおりである：
実施例１
万能捕捉プローブを使用してＣＴの標的核酸（８７２ ｂｐ ＤＮＡ、１０１１〜１０８コピー）を捕捉した。フック捕捉プローブとハイブリダイズした万能捕捉プローブをディップスティックに固定化した。フック捕捉プローブの配列は万能捕捉プローブの配列と、また標的核酸の配列とも相補的であった。検出はビオチンを結合したＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、３、５及び６の検出プローブ（１０１２コピー）と検出部分としての抗ビオチン抗体／染料複合体とを用いて実行した。検出限界は標的核酸１０９コピーであることが観測された。
【００６７】
実施例２
ディップスティックに固定化した捕捉プローブとしてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を使用してＣＴの標的核酸（８７２ ｂｐ ＤＮＡ、１０１１及び１０１０コピー）を捕捉した。標的核酸の検出にはフック検出プローブと万能検出プローブを使用した。フック検出プローブは（標的核酸とハイブリダイズしうる）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対応する配列と万能検出プローブと相補的な配列を有した。万能検出プローブには染料を結合して、万能検出プローブの検出が行えるようにした。標的核酸はわずか１０１０コピーでも検出された。
【００６８】
本発明ではディップスティックと検出プローブの準備を単純化することができる。
本発明はディップスティックによる核酸検出の改善に関する。本発明のディップスティックは、たとえばトラコーマ・クラミジア（Ｃｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）（ＣＴ）などの病原菌への感染の検査を目的とした試料液中の標的核酸の検出に使用される。
【０００２】
試料液中の標的核酸の存在を検出するための在来検査法には、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法による標的核酸の増幅に依拠するものがある。ＰＣＲ法では少量の標的核酸の検出が可能になるものの、結果の判明に数時間もかかる場合がある。これは大きな難点であり、なるべく短時間で結果が判明し、たとえば患者の待ち時間をできるだけ短くするのが好ましい。また、この種の方法はＰＣＲの実施に高価な専門装置や比較的高価な試薬を要するのも難点である。
【０００３】
それに対してディップスティックは、標的核酸を増幅せずに検出するため専門装置が不要であり、結果もＰＣＲに依拠した方法よりもずっと短時間で得られる。患者は検診と処置を一回の外来で済ますことができる。これは、患者に後日の再外来が見込めない又は不可能な場合には、特に有利である。
【０００４】
米国特許第５，３１０，６５０号で開示されている代表的な在来ディップスティックでは、一本鎖ＤＮＡ捕捉プローブがニトロセルロースフィルターの一端（接触端）から離れた捕捉帯内の該フィルター上に固定化してある。該捕捉プローブは検出対象の標的核酸の第１領域の配列と相補的である。該ニトロセルロースフィルターには捕捉帯と接触端の間に、標識付けした一本鎖ＤＮＡ検出プローブが固定化してある。該検出プローブは標的核酸の（第１領域とは異なる）第２領域の配列と相補的である。
【０００５】
存在が想定される試料液中の標的ＤＮＡを検出するには、ニトロセルロースフィルターの接触端を試料液に接触させる。試料液は毛管作用で該フィルター内を移動しプローブ帯と捕捉帯を通過する。試料液はプローブ帯を通過する際に検出プローブを可動化して試料液と共に捕捉帯へと移動させる。可動化された検出プローブはそこで、試料液中の任意の標的ＤＮＡの第２領域とハイブリダイズすることができる。
【０００６】
ハイブリダイズした検出プローブと標的ＤＡＮが捕捉帯に到達すると、標的ＤＮＡの第１領域は固定化捕捉プローブとハイブリダイズすることができる。こうして、標的核酸、捕捉プローブ及び標識付けした検出プローブの間で三元複合体が形成される。従って、捕捉帯に標識が存在すれば、それは試料液中に標的ＤＮＡが存在することを指示することになる。
【０００７】
第２のタイプの在来ディップスティックではニトロセルロースフィルター上に標識ＤＮＡ検出プローブを固定しない。その代わりに検出プローブを、試料液中の任意の標的核酸とのハイブリダイゼーションを可能にするような条件下で、試料液に添加する。次いでニトロセルロースフィルターの接触端を試料液に接触させる。試料液がディップスティック内を移動するうちに、標的核酸は検出プローブとハイブリダイズして、ニトロセルロースフィルターを移動し捕捉帯に至って捕捉プローブにより捕捉されよう。
【０００８】
上述の在来ディップスティック検出法の難点は、捕捉プローブが標的核酸と特異的にハイブリダイズするため、検出対象の標的核酸が異なるごとに、捕捉プローブを固定化した異なるディップスティックを用意しなければならないことにある。同様に、標識検出プローブもまた標的核酸と特異的にハイブリダイズするため、検出対象の標的核酸が異なるごとに異なる標識検出プローブを用意しなければならない。
【０００９】
本発明によれば、試料液中の標的核酸の有無を調べるディップスティック検査法への、標的核酸とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ及びフック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブの使用が提供される。
【００１０】
用語「ディップスティック検査法」はここでは、ディップスティックを使用する任意の検査法であって、試料液をディップスティックに接触させ、毛管作用により試料液をディップスティックの捕捉帯へと移動させ、もって捕捉帯において試料液中の標的核酸を万能及びフック捕捉プローブにより捕捉並びに検出することを可能にするような検査法を意味する。
【００１１】
本発明の第１の態様によれば、次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法が提供される：
ａ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸の第１領域と該万能捕捉プローブの両方とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを準備する；
ｃ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブを準備する；
ｄ） 検出プローブを試料液中の標的核酸と結合させるような条件下で、試料液を検出プローブとインキュベートし、また
フック捕捉プローブを試料液中の標的核酸の第１領域とハイブリダイズさせるような条件下で、試料液をフック捕捉プローブとインキュベートする；
ｅ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、フック捕捉プローブ、検出プローブ及び標的核酸の間で形成される複合体が毛管作用により捕捉帯へと移動し、該複合体のフック捕捉プローブと捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブとの相互作用で、捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｆ） 捕捉帯で検出プローブの有無を調べる。
【００１２】
この種の方法では、標的核酸に対して特異的なフック捕捉プローブを使用するだけで、異なる標的核酸の捕捉に同じクロマトグラフストリップを使用することが可能となる。
【００１３】
検出プローブとフック捕捉プローブは試料液と任意の順序でインキュベートしても、又は試料液に同時に添加してもよい。
【００１４】
プローブは単に試料液に接触させるという方法で試料液とインキュベートしても、それでハイブリダイゼーションを起こせるのであれば、かまわない。
【００１５】
本発明の第１態様によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティックもまた提供される：
試料液に接触させるための接触端；
接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブであって、標的核酸の第１領域に結合したフック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブ； 及び
クロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間の複合体形成帯に解離可能に固定化した検出部分であって、標的核酸の第２領域とハイブリダイズした検出プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる検出部分。
【００１６】
本発明の第１態様によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキットもまた提供される：
ｉ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティック；
ｉｉ） 標的核酸の第１領域及び万能捕捉プローブの両方とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ； 及び
ｉｉｉ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブ。
【００１７】
フック捕捉プローブは試料液とハイブリダイズさせる代わりに、クロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化してもよい。これはフック捕捉プローブ液をクロマトグラフストリップ上に点滴し乾燥させるだけで実現しうる。従って、捕捉帯に同じ万能捕捉プローブをそれぞれ固定化した数枚のクロマトグラフストリップを準備することができる。特定の標的核酸の捕捉を可能にするよう適切なフック捕捉プローブをクロマトグラフストリップに解離可能に固定化するだけで、標的核酸の検出にクロマトグラフストリップを使用する準備が整う。クロマトグラフストリップのこうした準備は、標的核酸に対して特異的な捕捉プローブを備えるクロマトグラフストリップを、クロマトグラフストリップに該捕捉プローブを不可逆的に固定化して準備するよりも容易である。
【００１８】
本発明の第２の態様によれば、次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法が提供される：
ａ） 試料液に接触させるための接触端、接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ、及び万能捕捉プローブとハイブリダイズさせた、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブを準備する；
ｃ） 試料液中の標的核酸を検出プローブに結合させうるような条件下で、試料液を検出プローブとインキュベートする；
ｄ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、検出プローブに結合した標的核酸が毛管作用により捕捉帯へと移動し、捕捉帯に固定化したフック捕捉プローブと標的核酸の第１領域との相互作用で、捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｅ） 捕捉帯で検出プローブの有無を調べる。
【００１９】
本発明の第２態様によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティックもまた提供される：
試料液に接触させるための接触端；
接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ； 及び
万能捕捉プローブとハイブリダイズさせた、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ。
【００２０】
本発明の第２態様によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキットもまた提供される：
ｉ） 試料液に接触させるための接触端、接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ、及び万能捕捉プローブとハイブリダイズさせた、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティック； 及び
ｉｉ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブ。
【００２１】
捕捉帯に同じ万能捕捉プローブをそれぞれ固定化した数枚のクロマトグラフストリップを準備することができる。特定の標的核酸の捕捉を可能にするよう適切なフック捕捉プローブを万能捕捉プローブとハイブリダイズさせるだけで、標的核酸の検出にクロマトグラフストリップを使用する準備が整う。この場合も、クロマトグラフストリップのこうした準備は、標的核酸に対して特異的な捕捉プローブを備えるクロマトグラフストリップを、クロマトグラフストリップに捕捉プローブを不可逆的に固定化して準備するよりも容易である。
【００２２】
検出プローブは標的核酸に共有結合でも非共有結合でも結合しうる。好ましくは、検出プローブは標的核酸の第２領域とのハイブリダイゼーションにより標的核酸に結合しうる核酸又は核酸類縁体を含む。
【００２３】
検出プローブは標識と結合させ、もって検出プローブの利用による標的核酸の直接検出を可能にしてもよい。しかし好ましくは、検出プローブは、標的核酸とハイブリダイズした後の検出プローブと結合しうる検出部分による標的核酸の間接検出を可能にする。
【００２４】
検出プローブが核酸又は核酸類縁体を含むとき、検出部分は、標的核酸とハイブリダイズした後の検出プローブと標的核酸の間で形成される二本鎖体と結合しうるような抗体又は抗体断片を含んでもよい。
【００２５】
しかし好ましくは、検出部分はリガンド結合部分であり、また検出プローブは検出部分の結合相手となりうる検出リガンドと結合したプローブを含む。検出プローブが検出リガンドを含むとき、検出部分は非抗体でも、好ましくは抗体又は抗体断片でもよい。
【００２６】
好ましくは検出リガンド、検出部分はそれぞれ、ビオチン、抗ビオチン抗体を含むか、又はフルオレセイン、抗フルオレセイン抗体を含むか、もしくは２，４−ジニトロフェノール（ＤＮＰ）、抗ＤＮＰ抗体を含む。
【００２７】
あるいは、検出リガンドはビオチンを含み、また検出部分はアビジン、ストレプタビジン、又はビオチン結合活性を保持するそれらの誘導体を含んでもよい。
【００２８】
検出部分はクロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に位置する複合体形成帯に解離可能に固定化して、検出プローブが毛管作用で捕捉帯へと移動する際に検出部分が解離され検出プローブと結合しうるようにしてもよい。
【００２９】
検出部分は好ましくは標識を含み、検出プローブの利用による標的核酸の間接検出が可能となるようにする。しかし代わりに、検出プローブと結合した検出部分と結合しうる標識付けした結合部分を使用して標的核酸を間接的に検出するようにしてもよい。
【００３０】
検出プローブ又は検出部分の標識は好ましくは非放射性とする。より好ましくは、該標識は色標識たとえば繊維染料、金コロイドなどの金属ゾル、又は着色ラテックス粒子などの着色粒子である。
【００３１】
検出プローブは１以上のプローブを含んでもよい。たとえば検出プローブは標的核酸の第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブ及び標的核酸とハイブリダイズした後のフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブを含んでもよい。
【００３２】
検出プローブが万能検出プローブとフック検出プローブを含むとき検出プローブの検出リガンド又は標識は万能プローブと結合するのがよい。
【００３３】
検出プローブが検出リガンドを結合した単一プローブを含む場合には、異なる標的核酸又は同じ標的核酸の異なる領域を検出する必要が生じるたびに、異なるプローブを検出リガンドに結合しなければならない。万能検出プローブに検出リガンドを結合して、それをフック検出プローブと併用するのが特に有利である。というのは検出リガンドを結合した万能検出プローブなら同じ万能検出プローブのままでも異なるフック検出プローブと併用することで、異なる標的核酸又は同じ標的核酸の異なる領域を検出することができるからである。従って、検出リガンドを結合したプローブをただ１種類調製すれば済むことになる。
【００３４】
本発明によれば、試料液中の標的核酸の有無を調べるディップスティック検査法への、標的核酸とハイブリダイズしうるフック検出プローブ及びフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブの使用もまた提供される。
【００３５】
用語「ディップスティック検査法」はここでは、ディップスティックを使用する任意の検査法であって、試料液をディップスティックに接触させ、試料液を毛管作用によりディップスティックの捕捉帯へと移動させ、もって捕捉帯で試料液中の標的核酸を万能検出プローブ及びフック検出プローブにより捕捉並びに検出することを可能にするような検査法を意味する。
【００３６】
本発明の第３の態様によれば、次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法が提供される：
ａ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうる捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブを準備する；
ｃ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズした後のフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような万能検出プローブを準備する；
ｄ） フック検出プローブが標的核酸の第２領域とハイブリダイズし万能検出プローブがフック検出プローブとハイブリダイズしうるような条件下で、試料液をフック検出プローブ及び万能検出プローブとインキュベートする；
ｅ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、万能検出プローブ、フック検出プローブ及び標的核酸の間で形成される複合体が毛管作用により捕捉帯へと移動し、該複合体の標的核酸と捕捉帯に固定化した捕捉プローブとの相互作用で、捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｆ） 捕捉帯で万能検出プローブの有無を調べる。
【００３７】
本発明の第３態様によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキットもまた提供される：
ｉ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうる捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティック；
ｉｉ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブ； 及び
ｉｉｉ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズした後のフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブであって、フック検出プローブとの併用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような万能検出プローブ。
【００３８】
万能検出プローブは試料液とハイブリダイズする代わりに、随意にフック検出プローブと共に、クロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化してもよい。該プローブは試料液が毛管作用で捕捉帯へと移動する際に試料液中に解離される。
【００３９】
他の実施態様では、試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させた後にフック検出プローブを随意に万能検出プローブと共に捕捉帯に接触させることにより、捕捉帯での標的核酸の捕捉を可能にしてもよい。これを実現するには、検出プローブ液を直接捕捉帯に接触させてもよいし、試料液の後で検出プローブ液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させ、もって検出プローブが毛管作用により捕捉帯へと移動するようにしてもよい。検出プローブ液が万能検出プローブを含まない場合には、フック検出プローブを捕捉帯に接触させた後に万能検出プローブをフック検出プローブと結合させる必要があろう。
【００４０】
あるいは、フック検出プローブを試料液とインキュベートするか又はクロマトグラフストリップに解離可能に固定化する場合には、試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させた後に万能検出プローブを捕捉帯に接触させてもよい。これを実現するにはやはり、万能検出プローブ液を捕捉帯に直接添加してもよいし、クロマトグラフストリップの接触端に接触させてもよい。
【００４１】
フック検出プローブが存在しなければ万能検出プローブは標的核酸と結合しえないことが理解されよう。
【００４２】
他タイプのディップスティック検査法では標的核酸は捕捉帯で、標的核酸とハイブリダイズした捕捉プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる捕捉部分により捕捉されよう。捕捉プローブは捕捉部分の結合相手となりうるリガンドを含んでもよい。捕捉プローブは一般に、標的核酸とハイブリダイズしうる捕捉プローブ部分に捕捉リガンドを共有結合させて調製する。
【００４３】
捕捉プローブは標的核酸と特異的にハイブリダイズするため、検出対象の標的核酸が異なるたびに、捕捉リガンドを備えた異なる捕捉プローブを調製しなければならない。
【００４４】
あるいは捕捉部分が、標的核酸とハイブリダイズしうる捕捉プローブ部分に直接、非塩基対合相互作用で結合する場合には、異なる標的核酸の捕捉に異なる捕捉プローブが使用されるたびに異なる捕捉部分を使用する必要があるかもしれない。たとえば、捕捉部分が捕捉プローブと標的核酸の間で形成されるハイブリッドと結合しうる抗体であるならば、該抗体はすべての捕捉プローブ／標的核酸ハイブリッドに対し高親和力をもつとは限らないであろう。
【００４５】
本発明の更なる実施態様によれば、次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法が提供される：
ａ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した、フック捕捉プローブを介して標的核酸と結合した万能捕捉プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる捕捉部分とを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを準備する；
ｃ） フック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブを準備する；
ｄ） 試料液を
フック捕捉プローブと標的核酸をハイブリダイズさせるような条件下で、フック捕捉プローブと、また
万能捕捉プローブとフック捕捉プローブをハイブリダイズさせるような条件下で、万能捕捉プローブと
それぞれ接触させる；
ｅ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、万能捕捉プローブ、フック捕捉プローブ及び標的核酸の間で形成される複合体が毛管作用により捕捉帯へと移動し、複合体の捕捉リガンドを捕捉部分に（非塩基対合相互作用で）結合させることにより捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｆ） 捕捉帯で標的核酸の有無を調べる。
【００４６】
好ましくは、万能捕捉プローブは複合体を捕捉するための、捕捉部分の結合相手となりうる捕捉リガンドを含む。好適な捕捉リガンドの例はビオチン、フルオレセイン及びＤＮＰなどである。ビオチンにはアビジン、ストレプタビジン又は抗ビオチン抗体が結合しうる。フルオレセイン及びＤＮＰにはそれぞれ抗フルオレセイン抗体及び抗ＤＮＰ抗体が結合しうる。
【００４７】
異なるフック捕捉プローブを使用するだけで異なる標的核酸を捕捉しうることがわかろう。捕捉リガンドを結合した（又は捕捉部分が結合しうる）１種類のプローブを調製すれば済むことになる。
【００４８】
万能及びフック捕捉プローブは試料液とインキュベートする必要はない。他の方法では、万能捕捉プローブを随意にフック捕捉プローブと共に、クロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化してもよい。毛管作用で捕捉帯へと移動する試料液が万能捕捉プローブ（及びフック捕捉プローブ）を解離させ、解離したプローブが標的核酸と結合しうるようにする。クロマトグラフストリップに１以上のプローブを解離可能に固定化する利点は、それにより検査方法が単純化され、また試料液に添加する必要のある試薬の数が減ることである。これは、特に僻地でディップスティックを用いて患者由来の試料液（たとえば尿溶液）を検査し特定の疾患又は障害の有無を判定するような場合には大きな利点である。
【００４９】
明らかなように、フック捕捉プローブを万能捕捉プローブと共にクロマトグラフストリップに解離可能に固定化しない場合には、好ましくは試料液がフック捕捉プローブとのインキュベーション後にクロマトグラフストリップを移動するようにするのがよい。しかし代りに、別個のフック捕捉プローブ液をクロマトグラフストリップに接触させて、該プローブ液が毛管作用で捕捉帯へと移動し、もって万能捕捉プローブを解離し、捕捉帯で万能及びフック捕捉プローブが捕捉されるようにすることも可能である。試料液はその後でクロマトグラフストリップに接触させ、標的核酸が捕捉帯でフック捕捉プローブとのハイブリダイゼーションで捕捉されるようにする。
【００５０】
こうした方法の更なる変法では、たとえば万能及びフック捕捉プローブを捕捉帯に添加して、又は別個の万能及びフック捕捉プローブ液にクロマトグラフストリップを接触させて、万能及びフック捕捉プローブを捕捉帯に結合してから、クロマトグラフストリップの接触端を試料液に接触させることができる。あるいは、万能捕捉プローブを捕捉部分と結合させる限りで、フック捕捉プローブをクロマトグラフストリップに解離可能に固定化してから、試料液を接触端に接触させることもできる。
【００５１】
しかし、クロマトグラフストリップ上でのハイブリダイゼーション反応は非塩基対合相互作用よりも起こるのが遅いと考えられるため、万能及びフック捕捉プローブを試料液に添加してから試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させるのが好ましい。溶液中でのハイブリダイゼーションのほうがハイブリダイゼーション条件の制御も容易である。
【００５２】
本発明によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキットもまた提供される：
試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した捕捉部分であって、フック捕捉プローブを介して標的核酸に結合した万能捕捉プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる捕捉部分とを備えるクロマトグラフストリップを有するディップスティック；
標的核酸とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ； 及び
フック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブ。
【００５３】
該万能捕捉プローブ及び／又はフック捕捉プローブはクロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化してもよい。
【００５４】
標的核酸は前述のような検出プローブを用いて検出してもよい。
【００５５】
検出プローブ又は万能検出プローブが検出リガンドを含む本発明のキットは、検出リガンドと結合しうる標識検出部分であって、標的核酸の間接検出を可能にするような標識検出部分を更に含んでもよい。該標識検出部分はクロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化してもよい。
【００５６】
本発明によれば、試料液中の標的核酸の有無を検査するためのディップスティック又はキットの使用も提供される。
【００５７】
標的核酸は任意の核酸でよいが、好ましくは病原菌特に性感染症病原菌の核酸である。最も好ましくは、標的核酸はトラコーマ・クラミジアの核酸である。
【００５８】
本発明の好ましい方法では、プローブ類と標的核酸とのハイブリダイゼーションは（固定化万能捕捉プローブと標的核酸とのハイブリダイゼーションを除いて）試料液中で、試料液をクロマトグラフストリップと接触させる前に行う。最も好ましくは、プローブ類のハイブリダイゼーションは単段階で行う。これは方法を単純化し、もって方法の実行を大幅に迅速簡易化する。
【００５９】
多段階ハイブリダイゼーションは試料液中での異なるプローブと標的核酸の逐次ハイブリダイゼーションにより、又はクロマトグラフストリップをそれぞれ異なるプローブを含む異なる溶液と接触させることにより、行うことができる。通常、後者の多段階ハイブリダイゼーション法ではクロマトグラフストリップを、異なるプローブ液と接触させるたびに洗う必要がある。
【００６０】
多段階ハイブリダイゼーションが好ましい場合もあろうが、通常はより簡易迅速な単段階ハイブリダイゼーション形式のほうが好ましいのは言うまでもない。
【００６１】
最も好ましくは、試料液は単段階のハイブリダイゼーション反応を実現し、また（たとえば検出リガンドと検出リガンド結合部分の間の）非塩基対合反応を実現し、標的核酸、１以上のハイブリッド形成プローブ及び（随意に）リガンド結合部分を含む複合体の毛管作用によるクロマトグラフストリップ内移動を起こすうえで好適な組成とする。
【００６２】
そうした試料液を使用すれば、当然ながらハイブリダイゼーション反応は単段階反応となりうるし、また試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させる前に（試料液をまず希釈したり変化させたりする必要もなく）リガンド／リガンド結合部分の相互作用が起こりうる。必要なら、試料液をクロマトグラフストリップに接触させた後で、リガンド／リガンド結合部分の相互作用をクロマトグラフストリップ上で追加的又は代替的に起こすこともできる。結局、標的核酸の簡易迅速な検出はさらに楽になる。
【００６３】
そうした結果は標準ハイブリダイゼーション液（ＳＳＰＥ緩衝液又はＴｒｉｓ緩衝液など）に塩、洗剤及びブロッキング・タンパク質（ＢＳＡ又は粉ミルクなど）を加えた試料液により達成されることが既に判明している。本発明の検査法による標的核酸の検出感度は他ディップスティック検査法のそれとほぼ同等であることも判明している。
【００６４】
以下、本発明の実施態様をもっぱら実施例により説明する。
【００６５】
実施例はトラコーマ・クラミジア（ＣＴ）核酸の検出に関する。ＣＴは性感染症の最も一般的な原因に入る。ＣＴ感染は不妊の原因となりうるし、また妊娠中であれば自然流産、死産又は分娩後子宮内膜炎を招きかねない。新生児では、ＣＴ感染は失明や慢性呼吸器疾患の原因となりうる。男性感染者の約１０％と女性感染者の最高７０％はＣＴ感染の症候を示さない。従って、ＣＴ感染の正確な診断により早期治療の開始を可能にすることが大事である。
【００６６】
実施例で使用したプローブの配列は次のとおりである：
万能捕捉プローブを使用してＣＴの標的核酸（８７２ ｂｐ ＤＮＡ、１０１１〜１０８コピー）を捕捉した。フック捕捉プローブとハイブリダイズした万能捕捉プローブをディップスティックに固定化した。フック捕捉プローブの配列は万能捕捉プローブの配列と、また標的核酸の配列とも相補的であった。検出はビオチンを結合したＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、３、５及び６の検出プローブ（１０１２コピー）と検出部分としての抗ビオチン抗体／染料複合体とを用いて実行した。検出限界は標的核酸１０９コピーであることが観測された。
【００６７】
実施例２
ディップスティックに固定化した捕捉プローブとしてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を使用してＣＴの標的核酸（８７２ ｂｐ ＤＮＡ、１０１１及び１０１０コピー）を捕捉した。標的核酸の検出にはフック検出プローブと万能検出プローブを使用した。フック検出プローブは（標的核酸とハイブリダイズしうる）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に対応する配列と万能検出プローブと相補的な配列を有した。万能検出プローブには染料を結合して、万能検出プローブの検出が行えるようにした。標的核酸はわずか１０１０コピーでも検出された。
【００６８】
本発明ではディップスティックと検出プローブの準備を単純化することができる。
Claims (63)
- 次のステップを含む、試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法：
ａ） 該試料液に接触させるための接触端と該接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ）捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 該標的核酸の第１領域と該万能捕捉プローブの両方とハイブリダイズしうるフック（鈎針）捕捉プローブを準備する；
ｃ） フック捕捉プローブを試料液中の標的核酸の第１領域とハイブリダイズさせるような条件下で、試料液をフック捕捉プローブとインキュベートする；
ｄ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、フック捕捉プローブ、検出プローブ及び標的核酸の間で形成される複合体が毛管作用により捕捉帯へと移動し、該複合体のフック捕捉プローブと捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブとの相互作用で捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｅ） 捕捉帯で標的核酸の有無を調べる。 - 次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法：
ａ） 次の構成要素を備えるクロマトグラフストリップを準備する：試料液に接触させるための接触端； 接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ； 及び接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化した、標的核酸の第１領域と該万能捕捉プローブの両方とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ；
ｂ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、試料液が毛管作用により捕捉帯へと移動してフック捕捉プローブを解離し、解離されたフック捕捉プローブが捕捉帯へと移動してくる試料液中の標的核酸とハイブリダイズしうるようにし、もって標的核酸とフック捕捉プローブを含む複合体が捕捉帯で該複合体のフック捕捉プローブと万能捕捉プローブのハイブリダイゼーションにより捕捉されるようにする； 及び
ｃ） 捕捉帯で標的核酸の有無を調べる。 - 次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法：
ａ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸の第１領域と万能捕捉プローブの両方とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを準備する；
ｃ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブを準備する；
ｄ） 検出プローブを試料液中の標的核酸と結合させるような条件下で、試料液を検出プローブとインキュベートし、また
フック捕捉プローブを試料液中の標的核酸の第１領域とハイブリダイズさせるような条件下で、試料液をフック捕捉プローブとインキュベートする；
ｅ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、フック捕捉プローブ、検出プローブ及び標的核酸の間で形成される複合体が毛管作用により捕捉帯へと移動し、該複合体のフック捕捉プローブと捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブとの相互作用で捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｆ） 捕捉帯で検出プローブの有無を調べる。 - 次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法：
ａ） 試料液に接触させるための接触端、接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ、及び万能捕捉プローブとハイブリダイズした、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、試料液中の標的核酸が毛管作用により捕捉帯へと移動し、捕捉帯に固定化したフック捕捉プローブと標的核酸の第１領域との相互作用で捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｃ） 捕捉帯で標的核酸の有無を調べる。 - 次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法：
ａ） 試料液に接触させるための接触端、接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ、及び万能捕捉プローブとハイブリダイズした、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブを準備する；
ｃ） 検出プローブを試料液中の標的核酸と結合させるような条件下で、試料液を検出プローブとインキュベートする；
ｄ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、検出プローブに結合した標的核酸が毛管作用により捕捉帯へと移動し、捕捉帯に固定化したフック捕捉プローブと標的核酸の第１領域との相互作用で捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｅ） 捕捉帯で検出プローブの有無を調べる。 - 検出プローブが標的核酸の第２領域とハイブリダイズすることにより標的核酸と結合しうる請求項３又は５の方法。
- 検出プローブが、標的核酸の第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブ、及び標的核酸とハイブリダイズした後のフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブを含む請求項６の方法。
- 検出プローブ又は万能検出プローブが標識を含み、もって検出プローブ又は万能検出プローブの利用による標的核酸の直接検出を可能にするような請求項６又は７の方法。
- 検出プローブ又は万能検出プローブを、標的核酸とハイブリダイズした後の検出プローブに非塩基対合相互反応で結合しうる検出部分に接触させ、もって検出プローブ又は万能及びフック検出プローブの利用による標的核酸の間接検出が可能となるようにするステップを更に含む請求項６又は７の方法。
- 検出プローブ又は万能検出プローブが、検出部分の結合相手となりうる検出リガンドを含む請求項９の方法。
- 検出部分が抗体又は抗体断片を含む請求項９又は１０の方法。
- 検出リガンドがビオチンを含み、検出部分が抗ビオチン抗体を含むか、又は検出リガンドがフルオレセインを含み、検出部分が抗フルオレセイン抗体を含むか、もしくは検出リガンドが２，４−ジニトロフェノール（ＤＮＰ）を含み、検出部分が抗ＤＮＰ抗体を含む請求項１２の方法。
- 検出部分をクロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間の複合体形成帯に解離可能に固定し、もって複合体が毛管作用で捕捉帯へと移動する際に検出部分が解離され検出プローブと結合しうるようにする請求項９〜１２の任意の方法。
- 検出部分がその検出を可能にする標識を含む請求項９〜１３の任意の方法。
- 標識が非放射性である請求項８又は１４の方法。
- 標識が色標識である請求項１５の方法。
- 色標識が繊維染料、金コロイドなどの金属ゾル、又は着色ラテックス粒子などの着色ラテックスを含む請求項１６の方法。
- 次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法：
ａ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうる捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブを準備する；
ｃ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズした後のフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような万能検出プローブを準備する；
ｄ） フック検出プローブが標的核酸の第２領域とハイブリダイズし万能検出プローブがフック検出プローブとハイブリダイズしうるような条件下で、試料液をフック検出プローブ及び万能検出プローブとインキュベートする；
ｅ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、万能検出プローブ、フック検出プローブ及び標的核酸の間で形成される複合体が毛管作用により捕捉帯へと移動し、該複合体の標的核酸と捕捉帯に固定化した捕捉プローブとの相互作用で捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｆ） 捕捉帯で万能検出プローブの有無を調べる。 - 次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法：
ａ） 次の構成要素を備えるクロマトグラフストリップを準備する：試料液に接触させるための接触端； 接触端から離れた捕捉帯に固定化した、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうる捕捉プローブ； 及び接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化した万能検出プローブ；
ｂ） 標的核酸の該第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブを該第２領域とハイブリダイズさせるような条件下で、試料液を該フック検出プローブとインキュベートする；
ｃ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、試料液が毛管作用で捕捉帯へと移動して万能検出プローブを解離させ、解離された万能検出プローブが捕捉帯へと移動してくる試料液中のフック検出プローブとハイブリダイズしうるようにし、また万能検出プローブ、フック検出プローブ及び標的核酸の間で形成される複合体が該複合体の標的核酸と捕捉帯に固定化された捕捉プローブとの相互作用で捕捉帯に結合しうるようにする；
ｆ） 捕捉帯で万能検出プローブの有無を調べる。 - 次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法：
ａ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうる捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブを準備する；
ｃ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズした後のフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブを準備し、もって万能及びフック検出プローブの利用による標的核酸の直接又は間接検出が可能となるようにする；
ｄ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、試料液が毛管作用により捕捉帯へと移動し、捕捉帯で捕捉プローブにより捕捉されうるようにする；
ｅ） 捕捉帯をフック検出プローブ及び万能検出プローブに接触させる； 及び
ｆ） 捕捉帯で万能検出プローブの有無を調べる。 - 万能検出プローブが標識を含む請求項１８、１９又は２０の方法。
- フック検出プローブとハイブリダイズした後の万能検出プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる検出部分に万能検出プローブを接触させるステップを更に含む請求項２０の方法。
- 万能検出プローブが検出部分の結合相手となりうる検出リガンドを含む請求項２２の方法。
- 検出部分が抗体又は抗体断片を含む請求項２２又は２３の方法。
- 検出リガンドがビオチンを含み、検出部分が抗ビオチン抗体を含むか、又は検出リガンドがフルオレセインを含み、検出部分が抗フルオレセイン抗体を含むか、もしくは検出リガンドが２，４−ジニトロフェノール（ＤＮＰ）を含み、検出部分が抗ＤＮＰ抗体を含む請求項２４の方法。
- 検出部分をクロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間の複合体形成帯に解離可能に固定し、もって複合体が毛管作用で捕捉帯へと移動する際に検出部分が解離され万能検出プローブと結合しうるようにする請求項２２〜２５の任意の方法。
- 次のステップを含む試料液中の標的核酸の有無に関する検査方法：
ａ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した捕捉部分であって、フック捕捉プローブを介して標的核酸と結合した万能捕捉プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる捕捉部分とを備えるクロマトグラフストリップを準備する；
ｂ） 標的核酸とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを準備する；
ｃ） フック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブを準備する；
ｄ） 試料液を
フック捕捉プローブと標的核酸をハイブリダイズさせるような条件下で、フック捕捉プローブと、また
万能捕捉プローブとフック捕捉プローブをハイブリダイズさせるような条件下で、万能捕捉プローブと
それぞれ接触させる；
ｅ） 試料液をクロマトグラフストリップの接触端に接触させて、万能捕捉プローブ、フック捕捉プローブ及び標的核酸の間で形成される複合体が毛管作用により捕捉帯へと移動し、該複合体の捕捉リガンドに捕捉部分を（非塩基対合相互作用で）結合させることにより捕捉帯に結合しうるようにする； 及び
ｆ） 捕捉帯で標的核酸の有無を調べる。 - 次の構成要素を備えるクロマトグラフストリップを含む、試料液中の標的核酸の有無を検査するためのディップスティック：
試料液に接触させるための接触端；
接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ； 及び
万能捕捉プローブとハイブリダイズした、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ。 - 次の構成要素を備えるクロマトグラフストリップを含む、試料液中の標的核酸の有無を検査するためのディップスティック：
試料液に接触させるための接触端；
接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ； 及び
接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化した、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ。 - クロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間の複合体形成帯に解離可能に固定化した検出部分であって、標的核酸の第２領域とハイブリダイズした検出プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる検出部分を更に含む請求項２８又は２９のディップスティック。
- 次の構成要素を備えるクロマトグラフストリップを含む、試料液中の標的核酸の有無を検査するためのディップスティック：
試料液に接触させるための接触端；
接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブであって、標的核酸の第１領域に結合したフック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブ； 及び
接触端と捕捉帯の間の複合体形成帯に解離可能に固定化した検出部分であって、標的核酸の第２領域とハイブリダイズした検出プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる検出部分。 - 検出部分が標識を含む請求項３０又は３１のディップスティック。
- 標識が非放射性である請求項３２のディップスティック。
- 標識が色標識である請求項３３のディップスティック。
- 色標識が繊維染料、金コロイドなどの金属ゾル、又は着色ラテックス粒子などの着色ラテックスを含む請求項３４のディップスティック。
- 検出部分が抗体又は抗体断片を含む請求項３０〜３５の任意のディップスティック。
- 検出部分が抗ビオチン抗体、抗フルオレセイン抗体又は抗ＤＮＰ抗体を含む請求項３６のディップスティック。
- 検出部分がアビジン、ストレプタビジン、又はビオチン結合活性を保持するそれらの誘導体を含む請求項３０〜３５の任意のディップスティック。
- 次の構成要素を備えるクロマトグラフストリップを含む、試料液中の標的核酸の有無を検査するためのディップスティック：
試料液に接触させるための接触端；
接触端から離れた捕捉帯に固定化した、標的核酸に直接的又は間接的に結合しうる捕捉プローブ；
接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化した、フック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブ； 及び随意に
接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化した、標的核酸とハイブリダイズしうるフック検出プローブ。 - クロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間の複合体形成帯に解離可能に固定化した検出部分であって、万能検出プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる検出部分を更に含む請求項３９のディップスティック。
- 次の構成要素を含む、試料液中の標的核酸の有無を検査するためのディップスティック：
試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した検出部分であって、フック捕捉プローブを介して標的核酸に結合した万能捕捉プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる検出部分とを備えるクロマトグラフストリップを有するディップスティック； 及び
クロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間に解離可能に固定化したフック捕捉プローブ及び／又は万能捕捉プローブであって、標的核酸とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ及び／又はフック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブ。 - 標的核酸が病原菌好ましくは性感染症病原菌の核酸である請求項２８〜４１の任意のディップスティック。
- 標的核酸がトラコーマ・クラミジアの核酸である請求項４２のディップスティック。
- 試料液中の標的核酸の有無に関する検査への請求項２８〜４３の任意のディップスティックの使用。
- 試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキット：
ｉ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティック；
ｉｉ） 標的核酸の第１領域と万能捕捉プローブの両方とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ； 及び随意に
ｉｉｉ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブ。 - 試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキット：
ｉ） 試料液に接触させるための接触端、接触端から離れた捕捉帯に固定化した万能捕捉プローブ、及び万能捕捉プローブとハイブリダイズさせた、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブを備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティック； 及び
ｉｉ） 標的核酸と結合しうる検出プローブであって、その利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような検出プローブ。 - 検出プローブが標的核酸の第２領域とのハイブリダイゼーションにより標的核酸と結合しうる請求項４５又は４６のキット。
- 検出プローブが標的核酸の第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブ、及び標的核酸とハイブリダイズした後のフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブを含む請求項４７のキット。
- 試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキット：
ｉ） 試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した、標的核酸の第１領域とハイブリダイズしうる又は標的核酸と間接的に結合しうる捕捉プローブとを備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティック；
ｉｉ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズしうるフック検出プローブ； 及び
ｉｉｉ） 標的核酸の第２領域とハイブリダイズした後のフック検出プローブとハイブリダイズしうる万能検出プローブであって、検出プローブの利用による標的核酸の直接又は間接検出を可能にするような万能検出プローブ。 - 検出プローブ又はフック検出プローブが標識を含み、もって検出プローブ又は万能及びフック検出プローブの利用による標的核酸の直接検出を可能にするような請求項４５〜４９の任意のキット。
- 検出プローブ又は万能検出プローブが検出部分の結合相手となりうる検出リガンドを含み、もって検出プローブ又は万能及びフック検出プローブの利用による標的核酸の間接検出を可能にするような請求項４５〜４９の任意のキット。
- 検出リガンドに結合しうる検出部分を更に含む請求項５１のキット。
- 検出部分が抗体又は抗体断片を含む請求項５２のキット。
- 検出リガンドがビオチンを含み、検出部分が抗ビオチン抗体を含むか、又は検出リガンドがフルオレセインを含み、検出部分が抗フルオレセイン抗体を含むか、もしくは検出リガンドが２，４−ジニトロフェノール（ＤＮＰ）を含み、検出部分が抗ＤＮＰ抗体を含む請求項５３のキット。
- 検出部分をクロマトグラフストリップの接触端と捕捉帯の間の複合体形成帯に解離可能に固定化した請求項５２〜５４の任意のキット。
- 検出部分が標識を含み、もって検出部分の検出を可能にするような請求項５２〜５５の任意のキット。
- 標識が非放射性である請求項５０又は５５のキット。
- 標識が色標識である請求項５７のキット。
- 色標識が繊維染料、金コロイドなどの金属ゾル、又は着色ラテックス粒子などの着色ラテックスを含む請求項５８のキット。
- 試料液中の標的核酸の有無を検査するための、次の構成要素を含むキット：
試料液に接触させるための接触端と接触端から離れた捕捉帯に固定化した捕捉部分であって、フック捕捉プローブを介して標的核酸と結合した万能捕捉プローブに非塩基対合相互作用で結合しうる捕捉部分とを備えるクロマトグラフストリップを含むディップスティック；
標的核酸とハイブリダイズしうるフック捕捉プローブ； 及び
フック捕捉プローブとハイブリダイズしうる万能捕捉プローブ。 - 試料液中の標的核酸の有無に関するディップスティック検査への万能及びフック捕捉プローブの使用。
- 試料液中の標的核酸の有無に関するディップスティック検査への万能及びフック検出プローブの使用。
- 試料液中の標的核酸の有無に関する検査への請求項４５〜６０の任意のキットの使用。
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