JP2004345969A - Tyrosinase inhibitor and bleaching cosmetic using the same - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain a new tyrosinase inhibitor, and to prepare a bleaching cosmetic which has excellent bleaching effects for preventing or improving abnormal melamine pigmentation in the skin, and the like, little produces side effects, and has excellent safety for the skin. <P>SOLUTION: This tyrosinase inhibitor contains a compound represented by formula (I) (R is H or an alkyl) or its salt as an active ingredient, and the bleaching cosmetic contains the tyrosinase inhibitor. <P>COPYRIGHT: (C)2005,JPO&NCIPI

Description

【００１６】
（式中、Ｒは水素原子又はアルキル基を示す）
で表される化合物又はその塩を有効成分として含有するチロシナーゼ阻害剤。
【００１７】
項２ 一般式（Ｉ）のＲが水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基である項１に記載のチロシナーゼ阻害剤。
【００１８】
項３ 一般式（Ｉ）のＲが水素原子、メチル基又はエチル基である項２に記載のチロシナーゼ阻害剤。
【００１９】
項４ 項１、２又は３に記載のチロシナーゼ阻害剤を含む美白化粧料。
【００２０】
項５ 黒米糠からの抽出物を有効成分として含む美白化粧料。
【００２１】
項６ 上記抽出物が、水及び極性有機溶媒からなる群から選ばれた少なくとも一種の抽出溶媒を用いて抽出されたものである項５に記載の美白化粧料。
【００２２】
項７ 上記抽出溶媒が、水、アルコール、又はこれらの混合溶媒である項６に記載の美白化粧料。
【００２３】
項８ 抽出物が一般式（Ｉ）：
【００２４】
【化４】

【００２５】
（式中、Ｒは水素原子又はアルキル基を示す）
で示される化合物又はその塩を含む抽出物である項５に記載の美白化粧料。
【００２６】
項９ さらに、他の美白剤、紫外線吸収剤及び角化改善剤からなる群から選ばれる少なくとも１種を含有する項４〜８のいずれかに記載の美白化粧料。
【００２７】
【発明の実施の形態】
本発明のチロシナーゼ阻害剤は、黒米糠からの抽出物である、一般式（Ｉ）で表される化合物を有効成分とするものである。
【００２８】
黒米糠からの抽出物
本願における黒米糠の原料である黒米は、糠層にアントシアニン系の紫色色素を有する有色素米である。また、黒米糠とは、黒米のもみを通常乾燥した後、いわゆるもみすりして玄米とした後、搗米する際に生じる果皮、種皮、外胚乳等の粉砕物をいう。この際、粉砕の程度については、特に限定はないが、例えば、玄米の１５重量％程度までを粉砕物としたものを用いることができ、玄米の１０重量％程度までを粉砕物としたものが好ましい。黒米糠は、そのまま抽出に供することができるが、搗精後に得られた糠を乾燥し、更に、より細かく粉砕した後、抽出に供してもよい。
【００２９】
黒米糠の抽出溶媒としては、特に限定的ではなく、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等のグリコール類、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類等の極性有機溶媒、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の無極性有機溶媒等や水等を用いることができる。これらの抽出溶媒は、一種単独又は二種以上混合して用いることができる。これらの内で、水及び極性有機溶媒からなる群から選ばれた少なくとも一種の溶媒は、優れた抗変異原性活性を有する抽出物を効率よく得ることができる点で好ましい。特に、メタノール、エタノール等のアルコール、又は水をそれぞれ単独で用いるか、或いは、これらの混合溶液を用いる場合には、取り扱いが容易であり、しかも優れた活性を有する抽出物を得ることができる点で好ましい。この場合、特に抽出物を皮膚外用剤の用途で用いる場合には、アルコールとしては、エタノールを用いることが好ましい。
【００３０】
溶媒を混合して用いる場合には、各溶媒の混合比は、溶媒の種類に応じて適宜調整すればよいが、例えば、水とアルコールとの混合溶液として用いる場合には、水：アルコール（重量比）＝１：１００〜１００：１程度とすれば良く、１：５０〜５０：１程度とすることが好ましく、ほぼ等重量で用いることがより好ましい。
【００３１】
抽出方法については、特に限定されるものではなく、黒米糠に溶媒を加えた後、抽出物のチロシナーゼ阻害活性を失活させない程度に加温加熱する加熱抽出法や、超臨界抽出法等を適宜適用できる。また、一定量の溶媒に黒米糠を浸漬してバッチ処理する浸漬抽出法や連続的に溶媒を送り続ける連続抽出法等、公知の種々の抽出法を適用できる。
【００３２】
具体的な抽出方法の一例を挙げると、例えば、黒米糠の乾燥重量に対して、０．５〜５重量倍程度、好ましくは、０．８〜１．２重量倍程度の抽出溶媒を加えて浸漬して加熱し、３０〜６０分間程度溶媒を還流させることにより、チロシナーゼ阻害活性を有する成分を抽出することができる。或いは、黒米糠の乾燥重量に対して０．５〜５重量倍程度、好ましくは、０．８〜１．２重量倍程度の抽出溶媒を加えて浸漬し、室温で１〜１４日間程度放置するか、或いは４０〜６０℃程度に加熱して１０〜２０時間程度加熱することにより有効成分を抽出することも可能である、勿論、溶媒量や加熱温度、加熱時間等については、優れたチロシナーゼ阻害活性を有する成分を抽出できるように適宜調整すればよい。
【００３３】
上記した方法によって黒米糠から抽出物を得た後、通常、濾過、遠心分離等の常法によって残渣と固液分離することによって、抽出液を得ることができる。本発明では、得られた抽出液をそのままチロシナーゼ阻害剤として用いることが可能であるが、活性が低い場合もあるため、適宜濃縮又は溶媒を留去して、エキス状や粉末状として用いることもできる。更に、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、クロロホルム、酢酸エチル、トルエン、ヘキサン、ベンゼン等の有機溶媒を１種又は２種以上用いた溶媒分画操作により得られた抽出画分から、活性画分を分取したものをチロシナーゼ阻害剤として用いることも可能である。更に、必要に応じて、アルミナカラムクロマトグラフィーやシリカゲルクロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の適当な分離精製手段を１種若しくは２種以上組み合わせて、チロシナーゼ阻害活性作用のある画分又は化合物を取り出して、チロシナーゼ阻害剤とすることができる。これにより、少量の摂取で優れた活性を発揮させることができる。
【００３４】
チロシナーゼ阻害活性化合物の精製・同定
次に、図１を参照して、黒米糠からのチロシナーゼ阻害活性化合物の精製・同定の手順を例示する。
【００３５】
黒米糠をアルコール性溶媒（例えば、メタノール、エタノール）で還流し、アルコール抽出物を得る。この抽出物を水に懸濁させ、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、及び水でそれぞれ再抽出し、それらの画分を減圧下濃縮して、ヘキサン画分、クロロホルム画分、酢酸エチル画分、及び水画分を得る。チロシナーゼ阻害活性作用のある酢酸エチル画分を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分画することにより、チロシナーゼ阻害活性作用のある活性化合物１を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分画は、必要に応じ溶出溶媒の極性を変えて数回繰り返してもよい。
【００３６】
各種スペクトル分析により、活性化合物１は、それぞれプロトカテク酸メチルエステル（ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃ ａｃｉｄ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ）と同定された。さらに、プロトカテク酸メチルエステルの構造類似化合物を合成し（図３）、それらのチロシナーゼ阻害活性について構造活性相関を調べたところ、プロトカテク酸についてもチロシナーゼ阻害活性作用のあることが確認された（図４）。
【００３７】
本発明のチロシナーゼ阻害剤
本発明のチロシナーゼ阻害剤は、上記の黒米糠からの抽出物又は一般式（Ｉ）：
【００３８】
【化５】

【００３９】
（式中、Ｒは水素原子又はアルキル基を示す）
で示される化合物又はその塩を有効成分とする。
【００４０】
上記一般式（Ｉ）におけるＲで表されるアルキル基としては、直鎖又は分岐鎖の炭素数１〜１０のアルキル基が挙げられ、好ましくは直鎖又は分岐鎖の炭素数１〜６のアルキル基が挙げられる。具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｉ−ヘキシル基等が例示される。より好ましいＲとしては、水素原子、メチル基、エチル基が挙げられ、特に、水素原子又はメチル基が好ましい。
【００４１】
換言すれば、一般式（Ｉ）で示される化合物の好ましいものとしては、プロトカテク酸、プロトカテク酸メチルエステル、プロトカテク酸エチルエステル等が挙げられる。本発明のチロシナーゼ阻害剤は、これらからなる群から選ばれる少なくとも一種を有効成分として含んでいてもよい。
【００４２】
なお、一般式（Ｉ）で示される化合物は、市販のプロトカテク酸から公知の方法により製造することができる。
【００４３】
一般式（Ｉ）で示される化合物のＲが水素原子の場合、即ち、プロトカテク酸の場合は、遊離カルボン酸の形でも塩の形でも本発明のチロシナーゼ阻害剤として供し得る。該塩としては、本発明の効果に悪影響を与えないものであれば特に制限はなく、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩；塩化アンモニウム、テトラエチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム等のアンモニウム塩：アミノ酸塩等が挙げられる。なお、上記一般式（Ｉ）で示される化合物の塩は、公知の手法により容易に製造することができる。
【００４４】
本発明の美白化粧料
上述の黒米糠からの抽出物及び一般式（Ｉ）で示される化合物は、優れたチロシナーゼ阻害作用を有し、表皮への異常なメラニン色素沈着予防効果等の美白効果に優れている。そのため、美白化粧料として好適に用いることができる。
【００４５】
本発明の美白化粧料において、黒米糠からの抽出物の含有量は、美白化粧料全体に対し、０．０１〜７０重量％程度、好ましくは１〜５０重量％程度である。
【００４６】
本発明の美白化粧料において、上記化合物（Ｉ）又はその塩は、それぞれ単独で又はぞれぞれの任意の２種以上を混合して用いられる。また、本発明の美白化粧料における上記化合物（Ｉ）又はその塩の含有量は、美白化粧料全体に対し、０．０００１〜５０重量％程度、好ましくは０．０１〜２０重量％程度である。
【００４７】
また、本発明の美白化粧料は、上記有効成分に、更に、他の美白剤、紫外線吸収剤及び角化改善剤からなる群から選ばれた１種又は２種以上を配合することにより、美白効果が更に向上し、また、メラニン抑制効果の向上のみならず、日焼けの予防効果を有する美白化粧料として用いることができる。
【００４８】
上記他の美白剤としては、アラントイン、ビタミンＥ誘導体、グリチルリチン、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩等のアスコルビン酸誘導体、コージ酸、アルブチン、パンテチン酸誘導体、プラセンタエキス、抗炎症剤、ヨクイニン、緑茶、葛根、桑白皮、甘草、オウゴン、アロエ、橙皮、カミツレ、霊芝等の各種生薬・植物抽出物等の公知の美白剤が挙げられる。上記美白剤の配合量は、美白化粧料全体に対し、好ましくは０．０００１〜４０重量％、更に好ましくは０．０１〜２０重量％である。
【００４９】
また、上記紫外線吸収剤としては、ジベンゾイルメタン誘導体、ケイ皮酸エステル誘導体、ベンゾフェノン誘導体、ｐ−アミノ安息香酸誘導体等の有機系紫外線吸収剤、及び亜鉛華、雲母、雲母チタン、酸化チタン、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム等の無機系紫外線吸収剤等が挙げられる。上記紫外線吸収剤の配合量は、美白化粧料全体に対し、好ましくは０．１〜２０重量％、更に好ましくは０．５〜１０重量％である。
【００５０】
また、上記角化改善剤としては、スフィンゴシン誘導体や特開平５−１９４１８５号公報に記載のアミン誘導体等が挙げられる。上記角化改善剤の配合量は、美白化粧料全体に対し、好ましくは０．０００１〜４０重量％、更に好ましくは０．０１〜２０重量％である。
【００５１】
また、本発明の美白化粧料には、上記有効成分、上記の公知の美白剤、上記紫外線吸収剤、上記角化改善剤以外に、本発明の効果を損なわない範囲で、任意の成分を配合することができる。上記の任意の成分は、美白化粧料の剤型に応じて、公知の皮膚外用剤や顔面化粧用化粧料に通常配合される成分、例えば、精製水、エタノール、油状成分、保湿剤、増粘剤、防腐剤、乳化剤、薬効成分、粉体、香料、乳化安定剤、ｐＨ調整剤等が用いられる。
【００５２】
具体的には、上記油状成分としては、流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワラン、ミツロウ、カルナバロウ、オリーブ油、ラノリン、高級アルコール、脂肪酸、高級アルコールと脂肪酸の合成エステル油、シリコーン油、フッ素系油剤等が挙げられる。
【００５３】
また、上記保湿剤としては、ソルビトール、キシリトール、グリセリン、マルチトール、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、１，３−ブチレングリコール、１，４−ブチレングリコール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム、ポリオキシプロピレン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール等が挙げられる。
【００５４】
また、上記増粘剤としては、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、カラギーナン、ゼラチン等の水溶性高分子、塩化ナトリウム、塩化カリウム等の電解質等が挙げられる。
【００５５】
また、上記防腐剤としては、尿素、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム等が挙げられる。
【００５６】
また、上記乳化剤としては、レシチン、水素添加レシチン、α−モノアルキルグリセリルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、シリコーン乳化剤等が挙げられる。
【００５７】
また、上記薬効成分としては、抗ヒスタミン剤（塩酸ジフェドラミン、マレイン酸クロルフェニラミン、グリチルリチン酸誘導体等）、ホルモン類（エストラジオール、エストロン、エチルエストラジオール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン等）等が例示される。
【００５８】
また、上記粉体としては、タルク、セリサイト、マイカ、カオリン、シリカ、ベントナイト、バーミキュライト、硫酸バリウム、ベンガラ、酸化鉄、群青等が挙げられる。
【００５９】
また、上記香料としては、リモネン、リナノール、シトラール、β−イオノン、ベンジルベンゾエート、インドール、オイゲノール、オーランチオール、ゲラニオール、リラール、ダマスコン、ベンジルアセテート、ジャスミンラクトン、ガラクソリッド、精油等が挙げられる。
【００６０】
また、上記ｐＨ調整剤としては、乳酸−乳酸ナトリウム、クエン酸−クエン酸ナトリウム等の緩衝剤が挙げられる。
【００６１】
本発明の美白化粧料は、常法により種々の形態にすることができ、その形態には特に制限されないが、一般には、ローション状、乳液状、クリーム状、軟膏状、スティック状、有機溶媒や精製水などによる溶液状、パック状、ゲル状等とするのが好ましい。即ち、本発明の美白化粧料は、ローション、オイルエッセンス、Ｏ／Ｗ型又はＷ／Ｏ型のクリーム、乳化型化粧料、パック、軟膏、美白ファンデーション等の美白化粧料や、化粧乳液、化粧水、油性化粧料、口紅、ファンデーション、皮膚洗浄剤、ヘアトニック、整髪剤、養毛剤、育毛剤、浴用剤、シャンプー、リンス等の皮膚外用剤として使用される。
【００６２】
本発明の美白化粧料は、紫外線による皮膚の炎症、しみ、そばかす、日焼け後の色素沈着部等の患部に局所的に適用することにより、該部位を治療・改善し正常な皮膚色に戻すことができるものであり、また、予め局所的に適用した場合には、上記症状を予防することができるものである。
【００６３】
【発明の効果】
今回、黒米糠の抽出物に含まれるチロシナーゼ阻害活性を有する化合物（Ｉ）を精製・同定することに成功した。つまり、本発明のチロシナーゼ阻害剤及び美白化粧料は、この化合物（Ｉ）を有効成分とするものである。また、本発明の美白化粧料は、高い美白効果を有すると共に、黒米糠を原料としているため安全性が高いという特長を有している。
【００６４】
【実施例】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明する。
【００６５】
実施例１（チロシナーゼ阻害物質の同定）
（１）チロシナーゼ活性阻害の評価方法
Ｌ−チロシンを基質として用い、チロシナーゼ活性を分光光度計により評価した。０．１Ｍリン酸バッファ（ｐＨ６．８）１．７ｍｌ、２０％ポリオキシエチレン ノニルフェニルエーテル２００μＬ、０．０３％Ｌ−チロシン溶液２５０μＬ、及び試料化合物のジメチルスルホキシド溶液（サンプル溶液）１００μＬを試験管に入れて、３７℃で１０分間インキュベートした。その後、チロシナーゼ溶液（３０００ユニット／ｍＬ、水に溶解）２５０μＬを試験管に加えて、３７℃で６０分間インキュベートした。酵素活性は、波長４７５ｎｍの吸収を測定することにより定量した。チロシナーゼ活性は、次の式から求めた。
【００６６】
チロシナーゼ活性（％）＝［（Ａ−Ｂ）／（Ｃｐ−Ｃｎ）］×１００
Ａ：試料サンプルの吸収（０．１Ｍリン酸バッファ、ポリオキシエチレン ノニルフェニルエーテル、Ｌ−チロシン溶液及びサンプル溶液）
Ｂ：ブランクの吸収（０．１Ｍリン酸バッファ、ポリオキシエチレン ノニルフェニルエーテル、蒸留水及びサンプル溶液）
Ｃｐ：ポジティブコントロールの吸収（０．１Ｍリン酸バッファ、ポリオキシエチレン ノニルフェニルエーテル、Ｌ−チロシン溶液及びＤＭＳＯ）
Ｃｎ：ポジティブコントロールの吸収（０．１Ｍリン酸バッファ、ポリオキシエチレン ノニルフェニルエーテル、蒸留水及びＤＭＳＯ）
（２）黒米糠からのチロシナーゼ活性阻害化合物の単離
上記（１）のチロシナーゼ阻害活性試験を用いた黒米糠からの活性成分の抽出工程を図１に示す。黒米糠（４．０ｋｇ）をメタノールで１２時間還流しメタノール抽出物（６０６ｇ）を得た。この抽出物を水に懸濁させ、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル及び水でそれぞれ再抽出した。各画分を減圧下濃縮して、ヘキサン画分（１６３ｇ）、クロロホルム画分（３．６０ｇ）、酢酸エチル画分（１２．４ｇ）及び水画分（４２７ｇ）を得た。これらの画分をチロシナーゼ阻害活性試験に供したところ、図２に示すように酢酸エチル画分が最も強い阻害効果を示した。この酢酸エチル画分を、クロロホルム−メタノールの溶出液を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、画分１〜４に画分した。画分１がチロシナーゼ阻害活性を示した。この画分１を、クロロホルム−アセトンの溶出液を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、画分５〜８に画分した。阻害活性を有する画分６を、さらに再度シリカゲルを用いたクロマトグラフィーで精製することにより、白黄色オイルとして活性化合物１を３５９ｍｇ得た。
【００６７】
活性化合物１は、下記に示すスペクトルデータにより、プロトカテク酸メチルエステルと同定された。
ＥＩ−ＭＳ， ｍ／ｚ １６８ （［Ｍ］^＋， ３５．４ ％）， １３７ （１００ ％）， １０９ （２５．３ ％）， ８１ （１８．２ ％）， ６３ （１１．１ ％）， ５３ （１８．２ ％）； ＩＲ （ＫＢｒ， ν_ｍａｘ ｃｍ^−１） ３３３８， １６８５， １６０４， １５２１， １４３８， １３０１； ^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， アセトン−ｄ_６） δ ７．３９ （１Ｈ， ｄ ， Ｊ＝２．０ Ｈｚ， Ｈ−２），δ ７．３４ （１Ｈ， ｄｄ ， Ｊ＝２．０， ８．３ Ｈｚ， Ｈ−６）， δ ６．８０ （１Ｈ， ｄ ， Ｊ＝８．３ Ｈｚ， Ｈ−５），δ ３．８０ （３Ｈ， ｓ， Ｈ−８）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， アセトン−ｄ_６） δ １６６ （−ＣＯＯＣＨ_３），δ １５０ （Ｃ−４）， δ １４５ （Ｃ−３）， δ １２３ （Ｃ−６）， δ １２２ （Ｃ−１）， δ １１７ （Ｃ−２）， δ １１５ （Ｃ−５）， δ ５１ （−ＣＯＯＣＨ_３）．
実施例２（構造活性相関）
（１）構造類似化合物の合成
上記の活性化合物であるプロトカテク酸メチルエステルと構造類似化合物を、市販のものとして入手或いはそれらから公知の方法により合成した（図３）。具体的には、化合物３，５及び７は、それぞれ市販のバニリン酸（４）、イソバニリン酸（６）及びベラトルム酸（８）を、濃硫酸とメタノールによりメチルエステル化して製造した。
（２）チロシナーゼ活性阻害の比較
チロシナーゼ活性に対する化合物１〜８（図３）の阻害効果を図４に示す。化合物１及び２は、０．５０μｍｏｌ／ｍＬの濃度において、７５．４％及び６０．１％のチロシナーゼ阻害活性を示した。すなわち、これらのＩＤ_５０値はそれぞれ、０．２８及び０．４２μｍｏｌ／ｍＬとなる。これに対し、化合物３〜８はチロシナーゼ阻害活性を示さなかった。
【００６８】
この結果から、ベンゼン環上のＣ−３及びＣ−４位の水酸基が、チロシナーゼ活性阻害の重要なファクターであるといえる。
【図面の簡単な説明】
【図１】黒米糠からのチロシナーゼ活性阻害化合物の単離工程を示す図である。
【図２】黒米糠から各抽出画分のチロシナーゼ活性阻害効果を示すグラフである。
【図３】チロシナーゼ活性阻害を評価した化合物１〜８を示す図である。
【図４】化合物１〜８のチロシナーゼ活性阻害効果を示すグラフである。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a tyrosinase inhibitor containing an extract obtained from black rice bran as an active ingredient. Further, the present invention relates to a whitening cosmetic using the tyrosinase inhibitor.
[0002]
[Prior art]
Blots, freckles, and pigmentation on the skin after tanning are less likely to occur, increase, or disappear with age, and are annoying for middle-aged and elderly people. The mechanism of the onset of these pigmentation diseases has not been elucidated yet, but it is thought that the mechanism of melanin synthesis in epidermal melanocytes is enhanced by the action of sunlight, particularly ultraviolet rays, melanocyte stimulating hormone and the like.
[0003]
In addition, aging of epidermal keratinocytes (keratinocytes) with aging also delays the rate of excretion of melanin to the outside of the epidermis, and together with an increase in melanin synthesizing ability, increases the density of melanin granules in the epidermis. It is thought to cause a symptom that the pigmentation increases. In addition, these pigmentations are localized and may cause a distinct difference from the surrounding normal skin color.
[0004]
For this reason, a drug that restores the acquired pigmented part to a normal skin color and a drug that prevents pigmentation are strongly desired, and many drugs have been developed and commercialized so far. .
[0005]
For example, in recent years, cosmetics using a vitamin C (L-ascorbic acid) derivative having an excellent reducing ability have been proposed, but the vitamin C derivative has difficulty in stability and has almost no effect when used externally. Not.
[0006]
In the United States and Europe, hydroquinone is used as a drug for treating spots and whitening black skin. However, hydroquinone has problems in its own safety (irritative and allergic), There is a problem in blending it with general-purpose drugs in that there may be cases where vitiligo is produced.
[0007]
In addition to these, various substances that are effective in a tyrosinase activity inhibition test in vitro have been reported as melanin inhibitors. Among them, for benzoic acid derivatives, salicylic acid derivatives having short-chain alkoxy groups have been reported to inhibit tyrosinase activity and whitening effect in vitro (see Patent Document 1). However, even with known melanin inhibitors such as short-chain alkoxy-substituted salicylic acid derivatives as reported, a sufficient whitening effect has not yet been obtained, and furthermore, safety such as skin irritation is not sufficient. .
[0008]
That is, a compound that sufficiently satisfies both the effect of improving pigmentation (whitening) and the safety on the skin has not been proposed yet, and is currently strongly demanded.
[0009]
On the other hand, black rice (Oryza Sativa L. Indica) is a black-purple grain, and is a major rice crop in South Asia and the People's Republic of China. And it is widely known as a nutritious rice with a medicinal effect.
[0010]
[Patent Document 1]
JP-A-6-40886 [0011]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a novel tyrosinase inhibitor. Further, it is an object of the present invention to provide a whitening cosmetic which has an excellent whitening effect such as preventing or improving abnormal melanin pigment deposition on the epidermis of a mammal and has excellent safety on skin with almost no side effects.
[0012]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have conducted intensive studies in order to achieve the above-mentioned object, and as a result, have found that an extract of black rice bran has an excellent tyrosinase inhibitory action. The present invention has been completed.
[0013]
That is, the present invention provides the following technical concept.
[0014]
Item 1 General formula (I):
[0015]
Embedded image

[0016]
(Wherein, R represents a hydrogen atom or an alkyl group)
A tyrosinase inhibitor comprising a compound represented by the formula or a salt thereof as an active ingredient.
[0017]
Item 2 The tyrosinase inhibitor according to Item 1, wherein R in the general formula (I) is a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms.
[0018]
Item 3 The tyrosinase inhibitor according to Item 2, wherein R in the general formula (I) is a hydrogen atom, a methyl group or an ethyl group.
[0019]
Item 4 A whitening cosmetic comprising the tyrosinase inhibitor according to Item 1, 2 or 3.
[0020]
Item 5 A whitening cosmetic containing an extract from black rice bran as an active ingredient.
[0021]
Item 6. The whitening cosmetic according to item 5, wherein the extract is extracted using at least one extraction solvent selected from the group consisting of water and a polar organic solvent.
[0022]
Item 7. The whitening cosmetic according to item 6, wherein the extraction solvent is water, alcohol, or a mixed solvent thereof.
[0023]
Item 8. The extract has the general formula (I):
[0024]
Embedded image

[0025]
(Wherein, R represents a hydrogen atom or an alkyl group)
Item 6. The whitening cosmetic according to item 5, which is an extract containing the compound represented by the formula or a salt thereof.
[0026]
Item 9. The whitening cosmetic according to any one of Items 4 to 8, further comprising at least one selected from the group consisting of other whitening agents, ultraviolet absorbers and keratinizing agents.
[0027]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The tyrosinase inhibitor of the present invention contains a compound represented by the general formula (I), which is an extract from black rice bran, as an active ingredient.
[0028]
Extract from black rice bran Black rice, which is a raw material of black rice bran in the present application, is pigmented rice having an anthocyanin-based purple pigment in the bran layer. In addition, the black rice bran refers to pulverized materials such as pericarp, seed coat, ectosperm and the like that are produced when the rice of black rice is usually dried, so-called milled into brown rice, and then ground. At this time, the degree of pulverization is not particularly limited. For example, a pulverized product of up to about 15% by weight of brown rice can be used, and a pulverized substance of up to about 10% by weight of brown rice can be used. preferable. The black rice bran can be subjected to the extraction as it is, but the bran obtained after the milling may be dried, further pulverized more finely, and then subjected to the extraction.
[0029]
The extraction solvent for black rice bran is not particularly limited. Examples thereof include alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol, glycols such as 1,3-butylene glycol, glycerin and propylene glycol, ethyl acetate, butyl acetate and the like. And non-polar organic solvents such as hexane, cyclohexane and petroleum ether, water, and the like. These extraction solvents can be used alone or in combination of two or more. Among them, at least one solvent selected from the group consisting of water and a polar organic solvent is preferable in that an extract having excellent antimutagenic activity can be efficiently obtained. In particular, when using alcohols such as methanol and ethanol, or water alone, or when using a mixed solution thereof, it is easy to handle, and an extract having excellent activity can be obtained. Is preferred. In this case, particularly when the extract is used for an external preparation for skin, it is preferable to use ethanol as the alcohol.
[0030]
When using a mixture of solvents, the mixing ratio of each solvent may be appropriately adjusted according to the type of the solvent. For example, when using a mixed solution of water and alcohol, water: alcohol (weight Ratio) = 1: 100 to 100: 1, preferably about 1:50 to 50: 1, and more preferably about the same weight.
[0031]
The extraction method is not particularly limited, and a heating extraction method in which a solvent is added to black rice bran and heated to such an extent that the tyrosinase inhibitory activity of the extract is not inactivated, or a supercritical extraction method or the like is appropriately used. Applicable. In addition, various known extraction methods such as an immersion extraction method in which black rice bran is immersed in a certain amount of a solvent and a batch treatment, and a continuous extraction method in which the solvent is continuously fed continuously can be applied.
[0032]
As an example of a specific extraction method, for example, about 0.5 to 5 times by weight, preferably about 0.8 to 1.2 times by weight based on the dry weight of black rice bran, an extraction solvent is added. By immersing and heating, and refluxing the solvent for about 30 to 60 minutes, a component having tyrosinase inhibitory activity can be extracted. Alternatively, an extraction solvent of about 0.5 to 5 times by weight, preferably about 0.8 to 1.2 times by weight of the dry weight of black rice bran is added and immersed, and left at room temperature for about 1 to 14 days. Alternatively, it is also possible to extract the active ingredient by heating to about 40 to 60 ° C. and heating for about 10 to 20 hours. Of course, the amount of the solvent, the heating temperature, the heating time, etc., are excellent in tyrosinase inhibition. What is necessary is just to adjust suitably so that the component which has activity can be extracted.
[0033]
After the extract is obtained from the black rice bran by the above-mentioned method, the extract can be usually obtained by subjecting the residue to solid-liquid separation by a conventional method such as filtration and centrifugation. In the present invention, the obtained extract can be used as it is as a tyrosinase inhibitor.However, since the activity may be low, the extract may be appropriately concentrated or the solvent is distilled off to be used as an extract or powder. it can. Further, the active fraction is separated from the extracted fraction obtained by a solvent fractionation operation using one or more organic solvents such as methanol, ethanol, propanol, butanol, chloroform, ethyl acetate, toluene, hexane, and benzene. The obtained product can be used as a tyrosinase inhibitor. Further, if necessary, one or a combination of two or more appropriate separation and purification means such as alumina column chromatography, silica gel chromatography, gel filtration chromatography, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, and high performance liquid chromatography are used. A fraction or a compound having a tyrosinase inhibitory activity can be taken out and used as a tyrosinase inhibitor. Thereby, excellent activity can be exhibited with a small amount of ingestion.
[0034]
Purification and identification of tyrosinase-inhibiting active compound Next, with reference to FIG. 1, a procedure for purifying and identifying a tyrosinase-inhibiting active compound from black rice bran is illustrated.
[0035]
The black rice bran is refluxed with an alcoholic solvent (eg, methanol, ethanol) to obtain an alcohol extract. This extract was suspended in water, re-extracted with hexane, chloroform, ethyl acetate, and water, and the fractions were concentrated under reduced pressure to obtain a hexane fraction, a chloroform fraction, an ethyl acetate fraction, and Obtain the water fraction. The ethyl acetate fraction having a tyrosinase inhibitory activity is fractionated by silica gel column chromatography to obtain an active compound 1 having a tyrosinase inhibitory activity. The fractionation by silica gel column chromatography may be repeated several times by changing the polarity of the elution solvent as needed.
[0036]
Through various spectral analyses, Active Compound 1 was identified as protocatechuic acid methyl ester. Furthermore, structurally similar compounds of protocatechuic acid methyl ester were synthesized (FIG. 3), and their tyrosinase inhibitory activity was examined for structure-activity relationship. As a result, it was confirmed that protocatechuic acid also has tyrosinase inhibitory activity (FIG. 4). ).
[0037]
Tyrosinase inhibitor of the present invention The tyrosinase inhibitor of the present invention can be obtained by extracting the above-mentioned black rice bran or the general formula (I):
[0038]
Embedded image

[0039]
(Wherein, R represents a hydrogen atom or an alkyl group)
Or a salt thereof as an active ingredient.
[0040]
Examples of the alkyl group represented by R in the general formula (I) include a linear or branched alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, and preferably a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms. Groups. Specifically, methyl group, ethyl group, n-propyl group, i-propyl group, n-butyl group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, n-pentyl group, i-pentyl group, n -Hexyl group, i-hexyl group and the like. More preferable R includes a hydrogen atom, a methyl group, and an ethyl group, and a hydrogen atom or a methyl group is particularly preferable.
[0041]
In other words, preferred examples of the compound represented by the general formula (I) include protocatechuic acid, protocatechuic acid methyl ester, and protocatechuic acid ethyl ester. The tyrosinase inhibitor of the present invention may contain at least one selected from the group consisting of these as an active ingredient.
[0042]
The compound represented by the general formula (I) can be produced from a commercially available protocatechuic acid by a known method.
[0043]
When R of the compound represented by the general formula (I) is a hydrogen atom, that is, when protocatechuic acid is used, the compound can be used as a tyrosinase inhibitor of the present invention in the form of a free carboxylic acid or a salt. The salt is not particularly limited as long as it does not adversely affect the effects of the present invention. Examples thereof include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt; alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium; ammonium chloride; Ammonium salts such as tetraethylammonium and tetramethylammonium: amino acid salts and the like. In addition, the salt of the compound represented by the general formula (I) can be easily produced by a known method.
[0044]
The whitening cosmetic of the present invention The above-mentioned extract from black rice bran and the compound represented by the general formula (I) have an excellent tyrosinase inhibitory effect and prevent abnormal melanin pigmentation on the epidermis and the like. Excellent whitening effect. Therefore, it can be suitably used as a whitening cosmetic.
[0045]
In the whitening cosmetic of the present invention, the content of the extract from black rice bran is about 0.01 to 70% by weight, preferably about 1 to 50% by weight, based on the whole whitening cosmetic.
[0046]
In the whitening cosmetic of the present invention, the compound (I) or a salt thereof is used alone or in combination of two or more of each. The content of the compound (I) or a salt thereof in the whitening cosmetic of the present invention is about 0.0001 to 50% by weight, preferably about 0.01 to 20% by weight, based on the whole whitening cosmetic. .
[0047]
In addition, the whitening cosmetic of the present invention may further comprise one or more selected from the group consisting of other whitening agents, ultraviolet absorbers and keratinizing agents, in addition to the above-mentioned active ingredients. The effect is further improved, and it can be used as a whitening cosmetic having not only an effect of suppressing melanin but also an effect of preventing sunburn.
[0048]
Other whitening agents include allantoin, vitamin E derivatives, glycyrrhizin, ascorbic acid derivatives such as ascorbic acid phosphate magnesium salt, cordic acid, arbutin, pantethic acid derivatives, placenta extract, anti-inflammatory agents, yoquinin, green tea, kakkon Publicly known whitening agents such as various crude drugs and plant extracts such as mulberry, mulberry, licorice, gougon, aloe, orange peel, chamomile and reishi. The amount of the whitening agent is preferably 0.0001 to 40% by weight, more preferably 0.01 to 20% by weight, based on the whole whitening cosmetic.
[0049]
Examples of the ultraviolet absorber include organic ultraviolet absorbers such as dibenzoylmethane derivatives, cinnamate derivatives, benzophenone derivatives, and p-aminobenzoic acid derivatives; and zinc white, mica, mica titanium, titanium oxide, and oxides. Examples include inorganic ultraviolet absorbers such as magnesium and zirconium oxide. The compounding amount of the ultraviolet absorber is preferably 0.1 to 20% by weight, more preferably 0.5 to 10% by weight, based on the whole whitening cosmetic.
[0050]
Examples of the keratinizing agent include sphingosine derivatives and amine derivatives described in JP-A-5-194185. The compounding amount of the keratinizing agent is preferably 0.0001 to 40% by weight, more preferably 0.01 to 20% by weight, based on the whole whitening cosmetic.
[0051]
In addition, the whitening cosmetic of the present invention contains, in addition to the above-mentioned active ingredients, the above-mentioned known whitening agents, the above-mentioned ultraviolet absorbers, and the above-mentioned keratinization improvers, optional components within a range that does not impair the effects of the present invention. can do. The above-mentioned optional components are, depending on the form of the whitening cosmetic, components usually incorporated in known skin external preparations and facial cosmetics, for example, purified water, ethanol, oily components, humectants, and thickeners. Agents, preservatives, emulsifiers, medicinal ingredients, powders, fragrances, emulsion stabilizers, pH adjusters and the like are used.
[0052]
Specifically, examples of the oil component include liquid paraffin, petrolatum, paraffin wax, squalane, beeswax, carnauba wax, olive oil, lanolin, higher alcohols, fatty acids, synthetic ester oils of higher alcohols and fatty acids, silicone oils, fluorine oils and the like. Is mentioned.
[0053]
Examples of the humectant include sorbitol, xylitol, glycerin, maltitol, propylene glycol, 1,3-propanediol, 1,3-butylene glycol, 1,4-butylene glycol, sodium pyrrolidone carboxylate, lactic acid, and sodium lactate. , Polyoxypropylene fatty acid esters, polyethylene glycol and the like.
[0054]
Examples of the above thickener include water-soluble polymers such as carboxyvinyl polymer, carboxymethylcellulose, polyvinyl alcohol, carrageenan, and gelatin, and electrolytes such as sodium chloride and potassium chloride.
[0055]
Examples of the preservative include urea, methyl paraben, ethyl paraben, propyl paraben, butyl paraben, sodium benzoate and the like.
[0056]
Examples of the emulsifier include lecithin, hydrogenated lecithin, α-monoalkylglyceryl ether, polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, and polyoxyethylene. Ethylene glycerin fatty acid ester, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyoxyethylene sorbitol fatty acid ester, silicone emulsifier, and the like.
[0057]
Examples of the medicinal component include antihistamines (diphedamine hydrochloride, chlorpheniramine maleate, glycyrrhizinate derivatives, etc.), hormones (estradiol, estrone, ethylestradiol, cortisone, hydrocortisone, prednisolone, etc.).
[0058]
Examples of the powder include talc, sericite, mica, kaolin, silica, bentonite, vermiculite, barium sulfate, red iron oxide, iron oxide, ultramarine and the like.
[0059]
Examples of the flavor include limonene, linanol, citral, β-ionone, benzylbenzoate, indole, eugenol, aurantol, geraniol, liral, damascon, benzyl acetate, jasmine lactone, galact solid, essential oil, and the like.
[0060]
Examples of the pH adjuster include buffers such as lactic acid-sodium lactate and citric acid-sodium citrate.
[0061]
The whitening cosmetic of the present invention can be formed into various forms by a conventional method, and the form is not particularly limited. In general, lotions, emulsions, creams, ointments, sticks, organic solvents and It is preferably in the form of a solution with purified water, a pack, a gel, or the like. That is, the whitening cosmetic of the present invention is a whitening cosmetic such as a lotion, an oil essence, an O / W type or a W / O type cream, an emulsifying type cosmetic, a pack, an ointment, a whitening foundation, a cosmetic lotion, and a lotion. It is used as an external preparation for skin, such as oily cosmetics, lipstick, foundation, skin cleanser, hair tonic, hair styling agent, hair restorer, hair restorer, bath agent, shampoo, and rinse.
[0062]
The whitening cosmetic composition of the present invention is used for treating and improving the skin by returning to a normal skin color by topically applying to an affected area such as skin inflammation due to ultraviolet rays, spots, freckles, and pigmented areas after tanning. When applied topically in advance, the above-mentioned symptoms can be prevented.
[0063]
【The invention's effect】
This time, we succeeded in purifying and identifying the compound (I) having tyrosinase inhibitory activity contained in the extract of black rice bran. That is, the tyrosinase inhibitor and the whitening cosmetic of the present invention contain the compound (I) as an active ingredient. In addition, the whitening cosmetic of the present invention has a high whitening effect, and is characterized by high safety because it is made from black rice bran.
[0064]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples.
[0065]
Example 1 (Identification of tyrosinase inhibitor)
(1) Evaluation method of tyrosinase activity inhibition Using L-tyrosine as a substrate, tyrosinase activity was evaluated by a spectrophotometer. 1.7 ml of 0.1 M phosphate buffer (pH 6.8), 200 μL of 20% polyoxyethylene nonylphenyl ether, 250 μL of 0.03% L-tyrosine solution, and 100 μL of a dimethyl sulfoxide solution (sample solution) of a sample compound in a test tube And incubated at 37 ° C. for 10 minutes. Thereafter, 250 μL of a tyrosinase solution (3000 units / mL, dissolved in water) was added to the test tube, and incubated at 37 ° C. for 60 minutes. Enzyme activity was quantified by measuring absorption at a wavelength of 475 nm. Tyrosinase activity was determined from the following equation.
[0066]
Tyrosinase activity (%) = [(AB) / (Cp-Cn)] × 100
A: Absorption of sample sample (0.1 M phosphate buffer, polyoxyethylene nonylphenyl ether, L-tyrosine solution and sample solution)
B: Blank absorption (0.1 M phosphate buffer, polyoxyethylene nonylphenyl ether, distilled water and sample solution)
Cp: absorption of positive control (0.1 M phosphate buffer, polyoxyethylene nonylphenyl ether, L-tyrosine solution and DMSO)
Cn: Absorption of positive control (0.1 M phosphate buffer, polyoxyethylene nonylphenyl ether, distilled water and DMSO)
(2) Isolation of Tyrosinase Activity Inhibiting Compound from Black Rice Bran FIG. 1 shows a step of extracting an active ingredient from black rice bran using the tyrosinase inhibitory activity test of the above (1). The black rice bran (4.0 kg) was refluxed with methanol for 12 hours to obtain a methanol extract (606 g). This extract was suspended in water and re-extracted with hexane, chloroform, ethyl acetate and water, respectively. Each fraction was concentrated under reduced pressure to obtain a hexane fraction (163 g), a chloroform fraction (3.60 g), an ethyl acetate fraction (12.4 g), and a water fraction (427 g). When these fractions were subjected to a tyrosinase inhibitory activity test, the ethyl acetate fraction showed the strongest inhibitory effect as shown in FIG. This ethyl acetate fraction was fractionated into fractions 1 to 4 by silica gel column chromatography using an eluate of chloroform-methanol. Fraction 1 showed tyrosinase inhibitory activity. This fraction 1 was fractionated into fractions 5 to 8 by silica gel column chromatography using an eluate of chloroform-acetone. Fraction 6 having inhibitory activity was further purified by chromatography again using silica gel to obtain 359 mg of active compound 1 as a white-yellow oil.
[0067]
Active compound 1 was identified as protocatechuic acid methyl ester based on the spectrum data shown below.
EI-MS, m / z 168 ([M] ⁺ , 35.4%), 137 (100%), 109 (25.3%), 81 (18.2%), 63 (11.1%), 53 (18.2%); IR (KBr, ν _max cm ^-1 ) 3338, 1685, 1604, 1521, 1438, 1301; ¹ H NMR (500 MHz, acetone-d ₆ ) δ 7.39 (1H, d , J = 2.0 Hz, H-2), δ 7.34 (1H, dd, J = 2.0, 8.3 Hz, H-6), δ 6.80 (1H, d, J = 8) .3 Hz, H-5), δ 3.80 (3H, s, H-8); 13 C NMR (125 MHz, acetone _{-d 6) δ 166 (- C} OOCH 3), δ 150 (C-4 ), Δ 145 (C-3), δ 123 (C-6), δ 1 2 (C-1), δ 117 (C-2), δ 115 (C-5), δ 51 (-COO C H 3).
Example 2 (structure-activity relationship)
(1) Synthesis of Structurally Similar Compounds The above-mentioned active compounds, protocatechuic acid methyl ester and structurally similar compounds, were obtained as commercial products or synthesized therefrom by known methods (FIG. 3). Specifically, Compounds 3, 5 and 7 were produced by methylesterification of commercially available vanillic acid (4), isovanillic acid (6) and veratramic acid (8) with concentrated sulfuric acid and methanol.
(2) Comparison of Tyrosinase Activity Inhibition The inhibitory effects of Compounds 1 to 8 (FIG. 3) on tyrosinase activity are shown in FIG. Compounds 1 and 2 exhibited 75.4% and 60.1% tyrosinase inhibitory activity at a concentration of 0.50 μmol / mL. That is, these ID ₅₀ values are 0.28 and 0.42 μmol / mL, respectively. In contrast, Compounds 3 to 8 did not show tyrosinase inhibitory activity.
[0068]
From these results, it can be said that the hydroxyl groups at the C-3 and C-4 positions on the benzene ring are important factors for inhibiting tyrosinase activity.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a diagram showing a step of isolating a tyrosinase activity-inhibiting compound from black rice bran.
FIG. 2 is a graph showing the tyrosinase activity inhibitory effect of each extracted fraction from black rice bran.
FIG. 3 shows compounds 1 to 8 evaluated for inhibition of tyrosinase activity.
FIG. 4 is a graph showing the tyrosinase activity inhibitory effects of Compounds 1 to 8.

Claims (9)

General formula (I):

(Wherein, R represents a hydrogen atom or an alkyl group)
A tyrosinase inhibitor comprising a compound represented by the formula or a salt thereof as an active ingredient. The tyrosinase inhibitor according to claim 1, wherein R in the general formula (I) is a hydrogen atom or an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms. The tyrosinase inhibitor according to claim 2, wherein R in the general formula (I) is a hydrogen atom, a methyl group or an ethyl group. A whitening cosmetic comprising the tyrosinase inhibitor according to claim 1. A whitening cosmetic containing an extract from black rice bran as an active ingredient. The whitening cosmetic according to claim 5, wherein the extract is extracted using at least one extraction solvent selected from the group consisting of water and a polar organic solvent. The whitening cosmetic according to claim 6, wherein the extraction solvent is water, alcohol, or a mixed solvent thereof. The extract has the general formula (I):

(Wherein, R represents a hydrogen atom or an alkyl group)
The whitening cosmetic according to claim 5, which is an extract containing the compound represented by the formula or a salt thereof. The whitening cosmetic according to any one of claims 4 to 8, further comprising at least one selected from the group consisting of another whitening agent, an ultraviolet absorber, and a keratinizing agent.

Images