JP2004256467A - プロパン−１，２，３−トリオール誘導体、その製造方法およびそれを含むα−グルコシダーゼ阻害剤 - Google Patents
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Abstract
【課題】取り扱いが平易で、しかも安全性の面で心配がないα−グルコシダーゼ阻害作用を有する物質を開発し、糖尿病の予防や肥満の予防と解消を図るために供すること。
【解決手段】下記化学式（１）または（２）で表されるプロパン−１，２，３−トリオール誘導体 （１）（２Ｓ，３Ｓ）１−Ｏ−β−Ｄ−６’−Ｏ−ｃｉｎｎａｍｏｙｌｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−３−（３’’，５’’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４’’−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｅ−１，２，３−ｔｒｉｏｌ
（２Ｓ，３Ｓ）１−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−３−（３’’，５’’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４’’−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｅ−１，２，３−ｔｒｉｏｌ （２）を提供すると共に、シソ科植物ヒソップ（Ｈｙｓｓｏｐｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の地上部から含水有機溶媒で抽出することを特徴とする当該プロパン−１，２，３−トリオール誘導体の製造方法及び当該化合物を含有することを特徴とするα−グルコシダーゼ阻害剤並びに当該α−グルコシダーゼ阻害剤を添加したことを特徴とする食品もしくは飲料を提供する。
【選択図】 なし
【解決手段】下記化学式（１）または（２）で表されるプロパン−１，２，３−トリオール誘導体 （１）（２Ｓ，３Ｓ）１−Ｏ−β−Ｄ−６’−Ｏ−ｃｉｎｎａｍｏｙｌｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−３−（３’’，５’’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４’’−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｅ−１，２，３−ｔｒｉｏｌ
（２Ｓ，３Ｓ）１−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−３−（３’’，５’’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４’’−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｅ−１，２，３−ｔｒｉｏｌ （２）を提供すると共に、シソ科植物ヒソップ（Ｈｙｓｓｏｐｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の地上部から含水有機溶媒で抽出することを特徴とする当該プロパン−１，２，３−トリオール誘導体の製造方法及び当該化合物を含有することを特徴とするα−グルコシダーゼ阻害剤並びに当該α−グルコシダーゼ阻害剤を添加したことを特徴とする食品もしくは飲料を提供する。
【選択図】 なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、プロパン−１，２，３−トリオール誘導体、その製造方法およびそれを含むα−グルコシダーゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
糖尿病の発症は生活習慣と密接に関係しており、その原因のひとつに、肥満や過食による高血糖等が挙げられている。また、肥満は糖尿病以外にも虚血性心疾患，高血圧，高脂血症等多くの疾患の原因と推定されている。糖尿病の予防や肥満の予防および解消法の一つとして、消化酵素であるα−グルコシダーゼの活性を阻害する物質を摂取することによる、血糖値の急激な上昇抑制および吸収エネルギー量の抑制がある。
代表的なα−グルコシダーゼ阻害活性剤としては、ノジリマイシンやアカルボース，ボグリボースが知られている。しかし、これらは微量で高い阻害活性をもつため、その投与量には厳密性が要求され、医師の観察下で使用されることが望ましい。また、腹部膨満，放屁の増加，軟便，下痢などの副作用を引き起こすことが多く、安全性に問題がある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、取り扱いが平易で、安全性の面で心配がない、α−グルコシダーゼ阻害作用を有する物質を提供し、上記の疾病の予防と解消に資することである。そこで、本発明者らは、天然物由来のα−グルコシダーゼ阻害活性物質を検索すべく、鋭意研究をすすめたところ、特定の植物中の成分が有用であることを見出した。すなわち、シソ科に属する植物で、香辛料などとして用いられているヒソップ（Ｈｙｓｓｏｐｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の地上部から抽出した成分がα−グルコシダーゼ阻害作用を有していることを究明するとともに、当該有効成分を分離することに成功した。また、この物質を含有する食品や飲料などを摂取すると、血糖値の上昇が緩慢となることや、吸収エネルギー量を減少させて肥満を改善し、糖尿病を予防する作用を有することを見出した。本発明は、これらの知見に基づいて完成されたものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
請求項１記載の本発明は、下記化学式（１）または（２）で表されるプロパン−１，２，３−トリオール誘導体である。
【０００５】
【化３】
（２Ｓ，３Ｓ）１−Ｏ−β−Ｄ−６’−Ｏ−ｃｉｎｎａｍｏｙｌｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−３−（３’’，５’’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４’’−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｅ−１，２，３−ｔｒｉｏｌ （１）
【０００６】
【化４】
（２Ｓ，３Ｓ）１−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−３−（３’’，５’’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４’’−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｅ−１，２，３−ｔｒｉｏｌ （２）
【０００７】
請求項２記載の本発明は、シソ科植物ヒソップ（Ｈｙｓｓｏｐｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の地上部から含水有機溶媒で抽出することを特徴とする請求項１に記載のプロパン−１，２，３−トリオール誘導体の製造方法である。
請求項３記載の本発明は、請求項１記載のプロパン−１，２，３−トリオール誘導体の一方もしくは両方、または当該化合物を含むシソ科植物ヒソップの抽出物を含有することを特徴とするα−グルコシダーゼ阻害剤である。
請求項４記載の本発明は、請求項３記載のα−グルコシダーゼ阻害剤を添加したことを特徴とする食品もしくは飲料である。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明に係る新規化合物のプロパン−１，２，３−トリオール誘導体は、上記の化学式（１）および（２）で表される。以下において、前者を化合物（Ａ）、後者を化合物（Ｂ）と称する。
【０００９】
本発明に係る化合物（Ａ）および化合物（Ｂ）は、ヒソップ地上部から得ることができる。本発明に使用することができるヒソップ（和名：ヤナギハッカ）の品種としては、ヒソップ，ホワイト・ヒソップ，ピンク・ヒソップなどを例示することができるが，これらの品種に限定されるものではない。また、地上部としては、葉，茎，芽等を例示できるが、有効成分について粉末化などの加工を施すには、葉部の使用が適している。
【００１０】
上記の植物から目的とする物質を抽出する方法としては、例えば以下に例示する方法が可能であるが、これに限定されるものではない。また、使用目的や使用濃度に応じて、各分画段階における粗抽出画分が利用可能である。
【００１１】
粗抽出工程として、ヒソップ乾燥葉などの原料を、アセトン，エタノール，ブタノール，アセトニトリル，テトラヒドロフランなどの有機溶媒の含水物を用いて抽出する。抽出する際の温度は常温でよく、抽出時間についてはヒソップ乾燥葉の場合、１週間乃至１０日ほどである。
【００１２】
抽出操作の終了後、濾紙やガラスフィルター等を用いる固−液分離手段で抽出物を濾液と残渣に分離する。次いで、濾液を減圧濃縮する。得られた濃縮液を有機溶媒可溶部と水可溶部に分配する。すなわち、酢酸エチルなどの有機溶媒と水を用いて有機溶媒可溶部と水可溶部に分配する。α−グルコシダーゼ阻害活性は両可溶部に観察され、有機溶媒可溶部から前記化合物（Ａ）が、水可溶部から化合物（Ｂ）が得られる。なお、この有機溶媒可溶部と水可溶部に分配する工程は、省略することができ、両化合物を含む混合物の形態で本発明に用いることができる。
【００１３】
上記化合物（Ａ）を分離する方法について説明すると、抽出第一段階として、有機溶媒可溶部を濃縮し、これを活性炭あるいはダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学（株）製）を担体に用いた吸着カラムクロマトグラフィーに供する。次いで、水，含水メタノール溶液，メタノールを用いて溶出し、阻害活性を有する含水メタノール溶液溶出区を濃縮する。
次に、これをシリカゲル（ｗａｋｏｇｅｌｃ−２００、和光純薬製）担体カラムクロマトグラフィーに供して有機溶媒混合液、例えばＣＨＣｌ３並びにＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３の混合液を用いて溶出する。目的とする阻害活性の確認された溶出区を減圧し、濃縮する。
【００１４】
上記化合物（Ａ）の抽出第二段階として、この分画をゲル濾過クロマトグラフィー、例えばセファデックスＬＨ−２０ （Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に供し、有機溶媒を用いて溶出し、阻害活性の高い溶出区を濃縮する。
次いで、化合物（Ａ）の抽出第三段階として、この分画を逆相中圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムとしては、例えば Ｌｐｂａｒ ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８ （Ｍｅｒｃｋ社製）等を使用することができる。移動層として含水有機溶媒、例えばメタノール：水：酢酸混液を用いて溶出し、阻害活性の高い溶出区を濃縮する。
さらに、化合物（Ａ）の抽出第四段階として、この分画を逆相高圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムとしては、例えば ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＭカラム （ＹＭＣ社製）等を使用することができる。移動層としては、含水有機溶媒、例えばメタノール：水：酢酸混液を用い、阻害活性の高い溶出区を得る。これを濃縮して上記化合物（Ａ）をシラップ状にて得る。
【００１５】
次に、前記化合物（Ｂ）を分離する方法について説明する。化合物（Ｂ）の抽出第一段階として、水可溶部を濃縮した後、エタノール等の有機溶媒を用いて適当な有機溶媒濃度になるように調製する。
得られた濃縮液を、低温、好ましくは−２５℃程度で１〜４日間、好ましくは２日間静置する。沈殿が生じた場合は、濾紙やガラスフィルター等を用いる固−液分離手段により当該沈殿を除去する。
【００１６】
上記化合物（Ｂ）の抽出第二段階として、濃縮液を活性炭あるいはダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学（株）製）を担体に用いた吸着カラムクロマトグラフィーに供する。吸着物質を含水有機溶剤、例えば含水メタノール溶液を用いて溶出し、目的とする阻害活性を有する溶出区を濃縮する。
次に、化合物（Ｂ）の抽出第三段階として、この分画をゲル濾過クロマトグラフィー、例えばセファデックスＬＨ−２０ （Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に供して、酢酸エチル等の含水有機溶媒を用いて溶出し、阻害活性の高い分画を得る。
【００１７】
また、化合物（Ｂ）の抽出第四段階として、この分画を逆相系中圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムとしては、例えば Ｌｐｂａｒ ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８ （Ｍｅｒｃｋ社製）等を使用することができる。含水有機溶媒、例えばメタノール：水：酢酸混液等を用いて溶出して、抗酸化活性の高い分画を得る。
さらに、化合物（Ｂ）の抽出第五段階として、この分画を濃縮し、逆相高圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。このとき用いるカラムとしては、例えばＩｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ カラム（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）等を使用することができる。移動層として、含水有機溶媒、例えばメタノール：水：酢酸混液を用いて阻害活性の高い溶出区を得る。これを濃縮し前記化合物（Ｂ）をシラップ状にて得る。
【００１８】
請求項３記載の本発明に係るα−グルコシダーゼ阻害剤は、プロパン−１，２，３−トリオール誘導体である化合物（Ａ）および／または化合物（Ｂ）、もしくはこれらの化合物を混合物として含むシソ科植物ヒソップの抽出物を含有することを特徴とする。
α−グルコシダーゼ阻害剤において、有効成分である上記化合物もしくは抽出物の含有量は、使用目的などにより異なるが、天然物に由来する成分であるため、副作用の心配がなく、厳しく定める必要はない。
α−グルコシダーゼ阻害剤は、経口的に投与されるが、所望により医薬用担体とともに製剤化し、液剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤などの形態で用いることができる。その場合、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、溶剤、懸濁化剤、安定化剤、着色料、甘味剤等の常用成分を適宜添加することができる。
【００１９】
その他、上記化合物もしくは抽出物の適量を食品や飲料に添加して用いることもできる。食品としては、例えばパン類、麺類、菓子・スナック類、乳製品などがあり、飲料としては、炭酸飲料、果実飲料、乳酸菌飲料などがある。
【００２０】
【実施例】
以下に実施例を示し，本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【００２１】
実施例１ ヒソップ葉部からの化合物（Ａ）の抽出、分離
ヒソップ乾燥葉（１００ｇ）を含水メタノール溶液（メタノール：水＝７：３）を用いて抽出した。抽出液を濾紙を用い濾過して得た濾液を減圧下、約１．５リットルになるまで濃縮した。得られた濃緑色シラップを有機溶媒（酢酸エチル）可溶部と水可溶部に分配した。α−グルコシダーゼ阻害活性は両可溶部に観察された。
【００２２】
得られた有機溶媒（酢酸エチル）可溶部を濃縮し、濃黒色シラップを得た。次いで、このシラップをダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学（株）製）を担体に用いたカラムクロマトグラフィーに供し、水，含水メタノール溶液（メタノール：水＝１：１および＝７：３）およびメタノールを用いて溶出した。阻害活性の確認された含水メタノール溶液（メタノール：水＝１：１）溶出区を濃縮してシラップを得た。阻害活性の確認は、下記の文献記載の方法により実施した。すなわち、市販のラット腸アセトンパウダーよりα−グルコシダーゼ活性を有する粗酵素溶液を作り、これに基質としてシュクロースを加え、被検試料を反応溶液に加えて反応させ、反応後の反応溶液中のグルコース量を測定することにより行った。
【００２３】
Ｎｉｓｈｉｏｋａ， Ｔ．；Ｋａｗａｂａｔａ， Ｊ．；Ａｏｙａｍａ，Ｙ． Ｂａｉｃａｌｅｉｎ， ａｎ β−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ． Ｊ． Ｎａｔ． Ｐｒｏｄ．，（１９８９），６１， ｐ．１４１３−１４１５ Ｔｏｄａ， Ｍ．， Ｋａｗａｂａｔａ， Ｊ．， ａｎｄ Ｋａｓａｉ， Ｔ．， Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｌｌａｇｉ− ａｎｄ ｇａｌｌｏｔａｎｎｉｎｓ ｏｎ ｒａｔ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌα−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ．Ｂｉｏｓｃｉ．． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ６５， ５４２−５４７ （２００１）
【００２４】
得られたシラップをシリカゲル（Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００， 和光純薬製）を担体に用いたカラムクロマトグラフィーに供した。カラムはＣＨＣｌ３ 並びにＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝５：９５， ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝５：９５，ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝１０：９０，ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝３０：７０，ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝４０：６０の５種類の溶媒で順次溶出した。阻害活性の確認されたＭｅＯＨ： ＣＨＣｌ３＝１：９， ３：７溶出区を減圧濃縮しシラップを得た。
得られたシラップをセファデッスクＬＨ−２０ （Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ製）を用いたカラムクロマトグラフィーに供した。有機溶媒混液（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝７：３）を用いて溶出し、活性の確認された溶出区を濃縮し、シラップを得た。
【００２５】
得られたシラップをＬｐｂａｒ ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８ （Ｍｅｒｋ社製）カラムを用いた中圧液体カラムクロマトグラフィーに供した。メタノール：水：酢酸＝５０：５０：０．１の溶液を用いてカラムを溶出し、活性の確認された溶出区を濃縮してシラップを得た。
次に、得られたシラップを高圧液体カラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に供した。使用したカラムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＭカラム（ＹＭＣ）、ＵＶ吸収（２１０ｎｍ）、移動層にメタノール：水：酢酸＝８０：２０：０．１溶液を用いた。阻害活性の確認された溶出区を濃縮したところ、化合物（Ａ）がシラップ状で９０ｍｇ得られた。
【００２６】
以下に、得られた化合物（Ａ）の化学的諸性質を記載した。
化合物（Ａ）：（１−Ｏ−β−Ｄ−６’−Ｏ−ｃｉｎｎａｍｏｙｌｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−３−（３”，５”−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４”−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｅ−１， ２， ３−ｔｒｉｏｌ，９０ｍｇ）：
［α］Ｄ ２５ ３１．５ ｏ （ｃ＝ １．０， ＭｅＯＨ）；
ＦＤＭＳ ｍ／ｚ （ｒｅｌ． ｉｎｔ．）： ５３６ ［Ｍ］＋ （１００）；
１Ｈ−ＮＭＲ （２７０ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：δ ７．５８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．１ Ｈｚ）， ７．４９ （２Ｈ， ｍ）， ７．３３ （３Ｈ， ｃｏｍｐｌｅｘ）， ６．６２ （２Ｈ， ｓ）， ６．４３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．１ Ｈｚ）， ４．５９ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ６．５ Ｈｚ）， ４．４６ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ＝ １３．０， ２．１ Ｈｚ）， ４．２２ （２Ｈ， ｃｏｍｐｌｅｘ）， ３．７３ （６Ｈ， ｓ）， ３．７３−３．５９ （３Ｈ， ｃｏｍｐｌｅｘ）， ３．５６−３．２４ （４Ｈ， ｃｏｍｐｌｅｘ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ （６７．５ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：δ １６８．２， １４８．８， １４６．４， １３５．７， １３５．５， １３３．５， １３１．４， １２９．９， １２９．２， １１８．４， １０５．１， １０４．９， ７７．７， ７５．９， ７５．３， ７５．２， ７５．１， ７２．０， ７１．８， ６４．９， ５６．７．
【００２７】
実施例２ ヒソップ葉部からの化合物（Ａ）の抽出、分離
実施例１で得られた粗抽出液の水可溶部についてさらに精製を進めた。
得られた水可溶部を約５００ｍｌまで濃縮し、この溶液に４倍量のエタノールを加え、８０％エタノール溶液になるように調製した。
得られた溶液を−２５℃の条件で２日間静置した。この工程により沈殿が生じたので、濾紙を用いて該沈殿を除去して濾液を得、これを濃縮した。
濃縮後、得られたシラップをダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学（株）製）を担体に用いたカラムクロマトグラフィーに供した。水，含水メタノール溶液（メタノール：水＝７：３）を用いて溶出した。活性の確認された含水メタノール溶液（メタノール：水＝７：３）溶出区を濃縮し、シラップを得た。
【００２８】
次いで、得られたシラップをセファデッスクＬＨ−２０ （Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ製）を用いたカラムクロマトグラフィーに供した。含水メタノール溶液（メタノール：水＝７：３）を用いて溶出し、阻害活性の確認された溶出区を濃縮してシラップを得た。
得られたシラップをＬｐｂａｒ ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８ （Ｍｅｒｋ社製）を用いた中圧液体カラムクロマトグラフィーに供した。メタノール：水：酢酸＝５０：５０：０．１の溶液を用いカラムを溶出した。活性の確認された溶出区を濃縮しシラップを得た。
得られたシラップを高圧液体カラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に供した。使用したカラムはＩｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ カラム（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）、ＵＶ吸収（２１０ｎｍ）、移動層にメタノール：水：酢酸＝８０：２０：０．１溶液を用いた。活性の確認された溶出区を濃縮したところ、化合物（Ｂ）がシラップ状で５６５ｍｇ得られた。
【００２９】
以下に、得られた化合物（Ｂ）の化学的諸性質を記載した。
化合物（Ｂ）：［α］Ｄ ２５ １７．７ ｏ （ｃ＝ ０．５， ＭｅＯＨ）；
ＦＡＢＭＳ （ｐｏｓｉｔｉｖｅ， ｍａｔｒｉｘ： ｇｌｙｃｅｒｏｌ） ｍ／ｚ （ｒｅｌ． ｉｎｔ．）： ４２９ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ （１００）；
ＦＡＢＭＳ （ｎｅｇａｔｉｖｅ， ｍａｔｒｉｘ： ＴＥＡ） ｍ／ｚ （ｒｅｌ． ｉｎｔ．）： ４０５ ［Ｍ−Ｈ］− （１０．８）；
１Ｈ−ＮＭＲ （２７０ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：δ ６．６２ （２Ｈ， ｓ）， ４．５４ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ６．２ Ｈｚ）， ４．１５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ７．６ Ｈｚ）， ３．７７ （６Ｈ， ｓ）， ３．７３ （２Ｈ， ｍ）， ３．６３ （１Ｈ， ｍ）， ３．５５ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ＝ １１．６， ５．４ Ｈｚ）， ３．４７ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ＝ １０．０， ３．５ Ｈｚ）， ３．３−３．１ （４Ｈ， ｃｏｍｐｌｅｘ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ （６７．５ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：δ １４８．９， １３５．９， １３３．６， １０５．３， １０４．６， ７８．０， ７７．９， ７６．０， ７５．５， ７５．２， ７２．０， ７１．７， ６２．８， ５６．９．
【００３０】
実施例３ 化合物（Ａ）および化合物（Ｂ）のα−グルコシダーゼ阻害活性の測定
ラット腸アセトンパウダー（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｊａｐａｎ 社製）を用いて阻害活性試験に必要な粗酵素溶液を調製した。α−グルコシダーゼ阻害活性の測定方法は、西岡らの文献（Ｎｉｓｈｉｏｋａ， Ｔ．； Ｋａｗａｂａｔａ， Ｊ．； Ａｏｙａｍａ， Ｙ， Ｂａｉｃａｌｅｉｎ， ａｎ β−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ． Ｊ． Ｎａｔ． Ｐｒｏｄ．，（１９９８）， ６１，ｐ．１４１３−１４１５）に準じて実施した。すなわち、化合物（Ａ）および化合物（Ｂ）のそれぞれを３×１０−３ Ｍ、１×１０−３ Ｍおよび３×１０−４Ｍの濃度に調整し、Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌとして１−ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（和光純薬製）を用い、各化合物の阻害活性を評価した。その結果を図１に示した。なお、１−ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎの１×１０−８ Ｍおよび３×１０−７ Ｍでの阻害活性は、それぞれ２１％と５８％である。
したがって、化合物（Ａ）および化合物（Ｂ）は、３×１０−３ Ｍの濃度でコントロールの３×１０−７ Ｍと同等な活性を有することが分かる。
【００３１】
実施例４ ヒソップ葉部抽出画分におけるグルコース吸収抑制作用
本発明に係るヒソップ葉部抽出画分のグルコース吸収に対する作用を反転腸管法を用いて試験した。
動物はＷｉｓｔａｒ／ＳＴ系雄性ラット（ＳＰＦ，約３００ｇ）を使用した。エーテル麻酔下において小腸を摘出し、冷却したＫＲＢ（Ｋｒｅｂｓ−ｒｉｎｇｅｒ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ ｓｏｌｕｓｉｏｎ）中にて反転腸管を作製した。すなわち、トライツ靭帯から下部の小腸約２５ｃｍをＫＲＢ中にて約２ｃｍ断片とし、一方の断端を縫合糸で結紮した後、腸管を反転（粘膜側と奨膜側を反転）し、腸管内に１０ｍＭグルコースを含むＫＲＢを満たして袋状の反転腸管を作製した。
【００３２】
次に、ヒソップ葉部抽出画分（終濃度１．０，０．５および０．１ｍｇ／ｍｌ）を含むＫＲＢ液中に浸漬し、３７℃で１０分間の前処置の後、最終濃度５ｍＭマルトースあるいは１０ｍＭグルコースとなるように添加し、３７℃で１時間の反応を行った。
反応終了後、反転腸管外液（粘膜側）および反転腸管内液（奨膜側）のグルコース濃度を測定（グルコースＢ−ｔｅｓｔワコー，和光製）した。なお、実験中は混合ガス（９５％酸素および５％二酸化炭素含有）を通気しながら行った。
【００３３】
結果を図２および３に示した。腸管外液にマルトース（５ｍＭ）を添加し、１時間の反応を行うと、対照において腸管内グルコース濃度は約２５０ｍｇ／ｄｌを示し、有意なグルコース濃度の上昇が認められた。これに対し、ヒソップ葉部抽出画分は０．５および１ｍｇ／ｍｌの濃度で腸管内グルコース濃度の上昇を完全に抑制した（図２）。
一方、腸管外液にグルコース（１０ｍＭ）を添加した場合、グルコース濃度上昇に対する抑制効果は認められなかった（図３）。
すなわち、化合物（Ａ）および（Ｂ）を含むヒソップ葉部抽出画分は、マルトースから単糖であるグルコースへの分解を抑制（グルコシダーゼ阻害作用）し、グルコース濃度の上昇を抑制することが明らかとなった。
【００３４】
実施例５ 糖負荷マウスにおけるヒソップ葉部抽出画分の血糖値上昇抑制作用
本発明に係るヒソップ抽出画分の食後血糖値上昇抑制効果をショ糖負荷試験により検討を行った。
動物はＩＣＲ系雄性マウス（ＳＰＦ，５週齢）を使用し、２４時間の絶食後、尾静脈採血による空腹時血糖値を測定した。その後、ヒソップ葉部抽出画分（１００ｍｇ／ｋｇまたは３００ｍｇ／ｋｇ）を強制経口投与し、２０分後にショ糖（１ｇ／ｋｇ）を同様に経口投与した。
【００３５】
以下、投与３０，６０，９０および１２０分後に尾静脈採血を行って血糖値を測定した。なお、血糖値はメディセーフ血糖測定システム（テルモ）を用いて測定した。
図４にショ糖負荷マウスの血糖値上昇の経時的変化を示した。対照において、ショ糖負荷３０分後に血糖値は約２１０ｍｇ／ｄｌを示し、その後血糖値は徐々に減少して２時間後には空腹時血糖値とほぼ同じ値に回復した。これに対し、ヒソップ抽出画分の投与群は、３０分後の値を有意に抑制した。
すなわち、化合物（Ａ）および（Ｂ）を含むヒソップ葉部抽出画分は、ショ糖負荷による血糖値の上昇を抑制し、糖尿病や食後血糖値の上昇が気になるヒトにとって有用であることが示唆される。なお、図中の＊はＰ＜０．０５を、＊＊はＰ＜０．０１を表している。
【００３６】
【発明の効果】
本発明により、プロパン−１，２，３−トリオール誘導体、化合物ＡおよびＢが提供される。
この化合物は、シソ科植物であるヒソップから抽出することによって得ることができる。当該プロパン−１，２，３−トリオール誘導体は、α−グルコシターゼ阻害活性効果を有しており、食品や飲料などに配合することにより、肥満を抑制したり、糖尿病、虚血性心疾患、高血圧症、高脂血症等の疾患の予防を図ることが期待される。しかも、この化合物は天然物由来であるので、副作用の心配がなく、安全性に優れている。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に係る化合物ＡおよびＢのα−グルコシターゼ阻害活性の測定結果を示す図である。
【図２】腸管内におけるヒソップ抽出画分のマルトースに対するα−グルコシターゼ阻害作用を示す図である。
【図３】腸管内におけるヒソップ抽出画分のグルコースに対するα−グルコシターゼ阻害作用を示す図である。
【図４】ショ糖負荷マウスにおけるヒソップ抽出画分の血糖値上昇抑制効果を示す図である。
【発明の属する技術分野】
本発明は、プロパン−１，２，３−トリオール誘導体、その製造方法およびそれを含むα−グルコシダーゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
糖尿病の発症は生活習慣と密接に関係しており、その原因のひとつに、肥満や過食による高血糖等が挙げられている。また、肥満は糖尿病以外にも虚血性心疾患，高血圧，高脂血症等多くの疾患の原因と推定されている。糖尿病の予防や肥満の予防および解消法の一つとして、消化酵素であるα−グルコシダーゼの活性を阻害する物質を摂取することによる、血糖値の急激な上昇抑制および吸収エネルギー量の抑制がある。
代表的なα−グルコシダーゼ阻害活性剤としては、ノジリマイシンやアカルボース，ボグリボースが知られている。しかし、これらは微量で高い阻害活性をもつため、その投与量には厳密性が要求され、医師の観察下で使用されることが望ましい。また、腹部膨満，放屁の増加，軟便，下痢などの副作用を引き起こすことが多く、安全性に問題がある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、取り扱いが平易で、安全性の面で心配がない、α−グルコシダーゼ阻害作用を有する物質を提供し、上記の疾病の予防と解消に資することである。そこで、本発明者らは、天然物由来のα−グルコシダーゼ阻害活性物質を検索すべく、鋭意研究をすすめたところ、特定の植物中の成分が有用であることを見出した。すなわち、シソ科に属する植物で、香辛料などとして用いられているヒソップ（Ｈｙｓｓｏｐｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の地上部から抽出した成分がα−グルコシダーゼ阻害作用を有していることを究明するとともに、当該有効成分を分離することに成功した。また、この物質を含有する食品や飲料などを摂取すると、血糖値の上昇が緩慢となることや、吸収エネルギー量を減少させて肥満を改善し、糖尿病を予防する作用を有することを見出した。本発明は、これらの知見に基づいて完成されたものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
請求項１記載の本発明は、下記化学式（１）または（２）で表されるプロパン−１，２，３−トリオール誘導体である。
【０００５】
【化３】
（２Ｓ，３Ｓ）１−Ｏ−β−Ｄ−６’−Ｏ−ｃｉｎｎａｍｏｙｌｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−３−（３’’，５’’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４’’−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｅ−１，２，３−ｔｒｉｏｌ （１）
【化４】
（２Ｓ，３Ｓ）１−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−３−（３’’，５’’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４’’−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｅ−１，２，３−ｔｒｉｏｌ （２）
請求項２記載の本発明は、シソ科植物ヒソップ（Ｈｙｓｓｏｐｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の地上部から含水有機溶媒で抽出することを特徴とする請求項１に記載のプロパン−１，２，３−トリオール誘導体の製造方法である。
請求項３記載の本発明は、請求項１記載のプロパン−１，２，３−トリオール誘導体の一方もしくは両方、または当該化合物を含むシソ科植物ヒソップの抽出物を含有することを特徴とするα−グルコシダーゼ阻害剤である。
請求項４記載の本発明は、請求項３記載のα−グルコシダーゼ阻害剤を添加したことを特徴とする食品もしくは飲料である。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明に係る新規化合物のプロパン−１，２，３−トリオール誘導体は、上記の化学式（１）および（２）で表される。以下において、前者を化合物（Ａ）、後者を化合物（Ｂ）と称する。
【０００９】
本発明に係る化合物（Ａ）および化合物（Ｂ）は、ヒソップ地上部から得ることができる。本発明に使用することができるヒソップ（和名：ヤナギハッカ）の品種としては、ヒソップ，ホワイト・ヒソップ，ピンク・ヒソップなどを例示することができるが，これらの品種に限定されるものではない。また、地上部としては、葉，茎，芽等を例示できるが、有効成分について粉末化などの加工を施すには、葉部の使用が適している。
【００１０】
上記の植物から目的とする物質を抽出する方法としては、例えば以下に例示する方法が可能であるが、これに限定されるものではない。また、使用目的や使用濃度に応じて、各分画段階における粗抽出画分が利用可能である。
【００１１】
粗抽出工程として、ヒソップ乾燥葉などの原料を、アセトン，エタノール，ブタノール，アセトニトリル，テトラヒドロフランなどの有機溶媒の含水物を用いて抽出する。抽出する際の温度は常温でよく、抽出時間についてはヒソップ乾燥葉の場合、１週間乃至１０日ほどである。
【００１２】
抽出操作の終了後、濾紙やガラスフィルター等を用いる固−液分離手段で抽出物を濾液と残渣に分離する。次いで、濾液を減圧濃縮する。得られた濃縮液を有機溶媒可溶部と水可溶部に分配する。すなわち、酢酸エチルなどの有機溶媒と水を用いて有機溶媒可溶部と水可溶部に分配する。α−グルコシダーゼ阻害活性は両可溶部に観察され、有機溶媒可溶部から前記化合物（Ａ）が、水可溶部から化合物（Ｂ）が得られる。なお、この有機溶媒可溶部と水可溶部に分配する工程は、省略することができ、両化合物を含む混合物の形態で本発明に用いることができる。
【００１３】
上記化合物（Ａ）を分離する方法について説明すると、抽出第一段階として、有機溶媒可溶部を濃縮し、これを活性炭あるいはダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学（株）製）を担体に用いた吸着カラムクロマトグラフィーに供する。次いで、水，含水メタノール溶液，メタノールを用いて溶出し、阻害活性を有する含水メタノール溶液溶出区を濃縮する。
次に、これをシリカゲル（ｗａｋｏｇｅｌｃ−２００、和光純薬製）担体カラムクロマトグラフィーに供して有機溶媒混合液、例えばＣＨＣｌ３並びにＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３の混合液を用いて溶出する。目的とする阻害活性の確認された溶出区を減圧し、濃縮する。
【００１４】
上記化合物（Ａ）の抽出第二段階として、この分画をゲル濾過クロマトグラフィー、例えばセファデックスＬＨ−２０ （Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に供し、有機溶媒を用いて溶出し、阻害活性の高い溶出区を濃縮する。
次いで、化合物（Ａ）の抽出第三段階として、この分画を逆相中圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムとしては、例えば Ｌｐｂａｒ ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８ （Ｍｅｒｃｋ社製）等を使用することができる。移動層として含水有機溶媒、例えばメタノール：水：酢酸混液を用いて溶出し、阻害活性の高い溶出区を濃縮する。
さらに、化合物（Ａ）の抽出第四段階として、この分画を逆相高圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムとしては、例えば ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＭカラム （ＹＭＣ社製）等を使用することができる。移動層としては、含水有機溶媒、例えばメタノール：水：酢酸混液を用い、阻害活性の高い溶出区を得る。これを濃縮して上記化合物（Ａ）をシラップ状にて得る。
【００１５】
次に、前記化合物（Ｂ）を分離する方法について説明する。化合物（Ｂ）の抽出第一段階として、水可溶部を濃縮した後、エタノール等の有機溶媒を用いて適当な有機溶媒濃度になるように調製する。
得られた濃縮液を、低温、好ましくは−２５℃程度で１〜４日間、好ましくは２日間静置する。沈殿が生じた場合は、濾紙やガラスフィルター等を用いる固−液分離手段により当該沈殿を除去する。
【００１６】
上記化合物（Ｂ）の抽出第二段階として、濃縮液を活性炭あるいはダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学（株）製）を担体に用いた吸着カラムクロマトグラフィーに供する。吸着物質を含水有機溶剤、例えば含水メタノール溶液を用いて溶出し、目的とする阻害活性を有する溶出区を濃縮する。
次に、化合物（Ｂ）の抽出第三段階として、この分画をゲル濾過クロマトグラフィー、例えばセファデックスＬＨ−２０ （Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製）に供して、酢酸エチル等の含水有機溶媒を用いて溶出し、阻害活性の高い分画を得る。
【００１７】
また、化合物（Ｂ）の抽出第四段階として、この分画を逆相系中圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。カラムとしては、例えば Ｌｐｂａｒ ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８ （Ｍｅｒｃｋ社製）等を使用することができる。含水有機溶媒、例えばメタノール：水：酢酸混液等を用いて溶出して、抗酸化活性の高い分画を得る。
さらに、化合物（Ｂ）の抽出第五段階として、この分画を濃縮し、逆相高圧液体カラムクロマトグラフィーに供する。このとき用いるカラムとしては、例えばＩｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ カラム（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）等を使用することができる。移動層として、含水有機溶媒、例えばメタノール：水：酢酸混液を用いて阻害活性の高い溶出区を得る。これを濃縮し前記化合物（Ｂ）をシラップ状にて得る。
【００１８】
請求項３記載の本発明に係るα−グルコシダーゼ阻害剤は、プロパン−１，２，３−トリオール誘導体である化合物（Ａ）および／または化合物（Ｂ）、もしくはこれらの化合物を混合物として含むシソ科植物ヒソップの抽出物を含有することを特徴とする。
α−グルコシダーゼ阻害剤において、有効成分である上記化合物もしくは抽出物の含有量は、使用目的などにより異なるが、天然物に由来する成分であるため、副作用の心配がなく、厳しく定める必要はない。
α−グルコシダーゼ阻害剤は、経口的に投与されるが、所望により医薬用担体とともに製剤化し、液剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤などの形態で用いることができる。その場合、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、溶剤、懸濁化剤、安定化剤、着色料、甘味剤等の常用成分を適宜添加することができる。
【００１９】
その他、上記化合物もしくは抽出物の適量を食品や飲料に添加して用いることもできる。食品としては、例えばパン類、麺類、菓子・スナック類、乳製品などがあり、飲料としては、炭酸飲料、果実飲料、乳酸菌飲料などがある。
【００２０】
【実施例】
以下に実施例を示し，本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【００２１】
実施例１ ヒソップ葉部からの化合物（Ａ）の抽出、分離
ヒソップ乾燥葉（１００ｇ）を含水メタノール溶液（メタノール：水＝７：３）を用いて抽出した。抽出液を濾紙を用い濾過して得た濾液を減圧下、約１．５リットルになるまで濃縮した。得られた濃緑色シラップを有機溶媒（酢酸エチル）可溶部と水可溶部に分配した。α−グルコシダーゼ阻害活性は両可溶部に観察された。
【００２２】
得られた有機溶媒（酢酸エチル）可溶部を濃縮し、濃黒色シラップを得た。次いで、このシラップをダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学（株）製）を担体に用いたカラムクロマトグラフィーに供し、水，含水メタノール溶液（メタノール：水＝１：１および＝７：３）およびメタノールを用いて溶出した。阻害活性の確認された含水メタノール溶液（メタノール：水＝１：１）溶出区を濃縮してシラップを得た。阻害活性の確認は、下記の文献記載の方法により実施した。すなわち、市販のラット腸アセトンパウダーよりα−グルコシダーゼ活性を有する粗酵素溶液を作り、これに基質としてシュクロースを加え、被検試料を反応溶液に加えて反応させ、反応後の反応溶液中のグルコース量を測定することにより行った。
【００２３】
Ｎｉｓｈｉｏｋａ， Ｔ．；Ｋａｗａｂａｔａ， Ｊ．；Ａｏｙａｍａ，Ｙ． Ｂａｉｃａｌｅｉｎ， ａｎ β−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ． Ｊ． Ｎａｔ． Ｐｒｏｄ．，（１９８９），６１， ｐ．１４１３−１４１５ Ｔｏｄａ， Ｍ．， Ｋａｗａｂａｔａ， Ｊ．， ａｎｄ Ｋａｓａｉ， Ｔ．， Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｌｌａｇｉ− ａｎｄ ｇａｌｌｏｔａｎｎｉｎｓ ｏｎ ｒａｔ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌα−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ．Ｂｉｏｓｃｉ．． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ６５， ５４２−５４７ （２００１）
【００２４】
得られたシラップをシリカゲル（Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００， 和光純薬製）を担体に用いたカラムクロマトグラフィーに供した。カラムはＣＨＣｌ３ 並びにＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝５：９５， ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝５：９５，ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝１０：９０，ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝３０：７０，ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝４０：６０の５種類の溶媒で順次溶出した。阻害活性の確認されたＭｅＯＨ： ＣＨＣｌ３＝１：９， ３：７溶出区を減圧濃縮しシラップを得た。
得られたシラップをセファデッスクＬＨ−２０ （Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ製）を用いたカラムクロマトグラフィーに供した。有機溶媒混液（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３＝７：３）を用いて溶出し、活性の確認された溶出区を濃縮し、シラップを得た。
【００２５】
得られたシラップをＬｐｂａｒ ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８ （Ｍｅｒｋ社製）カラムを用いた中圧液体カラムクロマトグラフィーに供した。メタノール：水：酢酸＝５０：５０：０．１の溶液を用いてカラムを溶出し、活性の確認された溶出区を濃縮してシラップを得た。
次に、得られたシラップを高圧液体カラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に供した。使用したカラムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＭカラム（ＹＭＣ）、ＵＶ吸収（２１０ｎｍ）、移動層にメタノール：水：酢酸＝８０：２０：０．１溶液を用いた。阻害活性の確認された溶出区を濃縮したところ、化合物（Ａ）がシラップ状で９０ｍｇ得られた。
【００２６】
以下に、得られた化合物（Ａ）の化学的諸性質を記載した。
化合物（Ａ）：（１−Ｏ−β−Ｄ−６’−Ｏ−ｃｉｎｎａｍｏｙｌｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−３−（３”，５”−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４”−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｅ−１， ２， ３−ｔｒｉｏｌ，９０ｍｇ）：
［α］Ｄ ２５ ３１．５ ｏ （ｃ＝ １．０， ＭｅＯＨ）；
ＦＤＭＳ ｍ／ｚ （ｒｅｌ． ｉｎｔ．）： ５３６ ［Ｍ］＋ （１００）；
１Ｈ−ＮＭＲ （２７０ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：δ ７．５８ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．１ Ｈｚ）， ７．４９ （２Ｈ， ｍ）， ７．３３ （３Ｈ， ｃｏｍｐｌｅｘ）， ６．６２ （２Ｈ， ｓ）， ６．４３ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ １６．１ Ｈｚ）， ４．５９ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ６．５ Ｈｚ）， ４．４６ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ＝ １３．０， ２．１ Ｈｚ）， ４．２２ （２Ｈ， ｃｏｍｐｌｅｘ）， ３．７３ （６Ｈ， ｓ）， ３．７３−３．５９ （３Ｈ， ｃｏｍｐｌｅｘ）， ３．５６−３．２４ （４Ｈ， ｃｏｍｐｌｅｘ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ （６７．５ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：δ １６８．２， １４８．８， １４６．４， １３５．７， １３５．５， １３３．５， １３１．４， １２９．９， １２９．２， １１８．４， １０５．１， １０４．９， ７７．７， ７５．９， ７５．３， ７５．２， ７５．１， ７２．０， ７１．８， ６４．９， ５６．７．
【００２７】
実施例２ ヒソップ葉部からの化合物（Ａ）の抽出、分離
実施例１で得られた粗抽出液の水可溶部についてさらに精製を進めた。
得られた水可溶部を約５００ｍｌまで濃縮し、この溶液に４倍量のエタノールを加え、８０％エタノール溶液になるように調製した。
得られた溶液を−２５℃の条件で２日間静置した。この工程により沈殿が生じたので、濾紙を用いて該沈殿を除去して濾液を得、これを濃縮した。
濃縮後、得られたシラップをダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学（株）製）を担体に用いたカラムクロマトグラフィーに供した。水，含水メタノール溶液（メタノール：水＝７：３）を用いて溶出した。活性の確認された含水メタノール溶液（メタノール：水＝７：３）溶出区を濃縮し、シラップを得た。
【００２８】
次いで、得られたシラップをセファデッスクＬＨ−２０ （Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ製）を用いたカラムクロマトグラフィーに供した。含水メタノール溶液（メタノール：水＝７：３）を用いて溶出し、阻害活性の確認された溶出区を濃縮してシラップを得た。
得られたシラップをＬｐｂａｒ ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８ （Ｍｅｒｋ社製）を用いた中圧液体カラムクロマトグラフィーに供した。メタノール：水：酢酸＝５０：５０：０．１の溶液を用いカラムを溶出した。活性の確認された溶出区を濃縮しシラップを得た。
得られたシラップを高圧液体カラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に供した。使用したカラムはＩｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ カラム（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）、ＵＶ吸収（２１０ｎｍ）、移動層にメタノール：水：酢酸＝８０：２０：０．１溶液を用いた。活性の確認された溶出区を濃縮したところ、化合物（Ｂ）がシラップ状で５６５ｍｇ得られた。
【００２９】
以下に、得られた化合物（Ｂ）の化学的諸性質を記載した。
化合物（Ｂ）：［α］Ｄ ２５ １７．７ ｏ （ｃ＝ ０．５， ＭｅＯＨ）；
ＦＡＢＭＳ （ｐｏｓｉｔｉｖｅ， ｍａｔｒｉｘ： ｇｌｙｃｅｒｏｌ） ｍ／ｚ （ｒｅｌ． ｉｎｔ．）： ４２９ ［Ｍ＋Ｎａ］＋ （１００）；
ＦＡＢＭＳ （ｎｅｇａｔｉｖｅ， ｍａｔｒｉｘ： ＴＥＡ） ｍ／ｚ （ｒｅｌ． ｉｎｔ．）： ４０５ ［Ｍ−Ｈ］− （１０．８）；
１Ｈ−ＮＭＲ （２７０ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：δ ６．６２ （２Ｈ， ｓ）， ４．５４ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ６．２ Ｈｚ）， ４．１５ （１Ｈ， ｄ， Ｊ＝ ７．６ Ｈｚ）， ３．７７ （６Ｈ， ｓ）， ３．７３ （２Ｈ， ｍ）， ３．６３ （１Ｈ， ｍ）， ３．５５ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ＝ １１．６， ５．４ Ｈｚ）， ３．４７ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ＝ １０．０， ３．５ Ｈｚ）， ３．３−３．１ （４Ｈ， ｃｏｍｐｌｅｘ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ （６７．５ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）：δ １４８．９， １３５．９， １３３．６， １０５．３， １０４．６， ７８．０， ７７．９， ７６．０， ７５．５， ７５．２， ７２．０， ７１．７， ６２．８， ５６．９．
【００３０】
実施例３ 化合物（Ａ）および化合物（Ｂ）のα−グルコシダーゼ阻害活性の測定
ラット腸アセトンパウダー（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｊａｐａｎ 社製）を用いて阻害活性試験に必要な粗酵素溶液を調製した。α−グルコシダーゼ阻害活性の測定方法は、西岡らの文献（Ｎｉｓｈｉｏｋａ， Ｔ．； Ｋａｗａｂａｔａ， Ｊ．； Ａｏｙａｍａ， Ｙ， Ｂａｉｃａｌｅｉｎ， ａｎ β−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ． Ｊ． Ｎａｔ． Ｐｒｏｄ．，（１９９８）， ６１，ｐ．１４１３−１４１５）に準じて実施した。すなわち、化合物（Ａ）および化合物（Ｂ）のそれぞれを３×１０−３ Ｍ、１×１０−３ Ｍおよび３×１０−４Ｍの濃度に調整し、Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌとして１−ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（和光純薬製）を用い、各化合物の阻害活性を評価した。その結果を図１に示した。なお、１−ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎの１×１０−８ Ｍおよび３×１０−７ Ｍでの阻害活性は、それぞれ２１％と５８％である。
したがって、化合物（Ａ）および化合物（Ｂ）は、３×１０−３ Ｍの濃度でコントロールの３×１０−７ Ｍと同等な活性を有することが分かる。
【００３１】
実施例４ ヒソップ葉部抽出画分におけるグルコース吸収抑制作用
本発明に係るヒソップ葉部抽出画分のグルコース吸収に対する作用を反転腸管法を用いて試験した。
動物はＷｉｓｔａｒ／ＳＴ系雄性ラット（ＳＰＦ，約３００ｇ）を使用した。エーテル麻酔下において小腸を摘出し、冷却したＫＲＢ（Ｋｒｅｂｓ−ｒｉｎｇｅｒ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ ｓｏｌｕｓｉｏｎ）中にて反転腸管を作製した。すなわち、トライツ靭帯から下部の小腸約２５ｃｍをＫＲＢ中にて約２ｃｍ断片とし、一方の断端を縫合糸で結紮した後、腸管を反転（粘膜側と奨膜側を反転）し、腸管内に１０ｍＭグルコースを含むＫＲＢを満たして袋状の反転腸管を作製した。
【００３２】
次に、ヒソップ葉部抽出画分（終濃度１．０，０．５および０．１ｍｇ／ｍｌ）を含むＫＲＢ液中に浸漬し、３７℃で１０分間の前処置の後、最終濃度５ｍＭマルトースあるいは１０ｍＭグルコースとなるように添加し、３７℃で１時間の反応を行った。
反応終了後、反転腸管外液（粘膜側）および反転腸管内液（奨膜側）のグルコース濃度を測定（グルコースＢ−ｔｅｓｔワコー，和光製）した。なお、実験中は混合ガス（９５％酸素および５％二酸化炭素含有）を通気しながら行った。
【００３３】
結果を図２および３に示した。腸管外液にマルトース（５ｍＭ）を添加し、１時間の反応を行うと、対照において腸管内グルコース濃度は約２５０ｍｇ／ｄｌを示し、有意なグルコース濃度の上昇が認められた。これに対し、ヒソップ葉部抽出画分は０．５および１ｍｇ／ｍｌの濃度で腸管内グルコース濃度の上昇を完全に抑制した（図２）。
一方、腸管外液にグルコース（１０ｍＭ）を添加した場合、グルコース濃度上昇に対する抑制効果は認められなかった（図３）。
すなわち、化合物（Ａ）および（Ｂ）を含むヒソップ葉部抽出画分は、マルトースから単糖であるグルコースへの分解を抑制（グルコシダーゼ阻害作用）し、グルコース濃度の上昇を抑制することが明らかとなった。
【００３４】
実施例５ 糖負荷マウスにおけるヒソップ葉部抽出画分の血糖値上昇抑制作用
本発明に係るヒソップ抽出画分の食後血糖値上昇抑制効果をショ糖負荷試験により検討を行った。
動物はＩＣＲ系雄性マウス（ＳＰＦ，５週齢）を使用し、２４時間の絶食後、尾静脈採血による空腹時血糖値を測定した。その後、ヒソップ葉部抽出画分（１００ｍｇ／ｋｇまたは３００ｍｇ／ｋｇ）を強制経口投与し、２０分後にショ糖（１ｇ／ｋｇ）を同様に経口投与した。
【００３５】
以下、投与３０，６０，９０および１２０分後に尾静脈採血を行って血糖値を測定した。なお、血糖値はメディセーフ血糖測定システム（テルモ）を用いて測定した。
図４にショ糖負荷マウスの血糖値上昇の経時的変化を示した。対照において、ショ糖負荷３０分後に血糖値は約２１０ｍｇ／ｄｌを示し、その後血糖値は徐々に減少して２時間後には空腹時血糖値とほぼ同じ値に回復した。これに対し、ヒソップ抽出画分の投与群は、３０分後の値を有意に抑制した。
すなわち、化合物（Ａ）および（Ｂ）を含むヒソップ葉部抽出画分は、ショ糖負荷による血糖値の上昇を抑制し、糖尿病や食後血糖値の上昇が気になるヒトにとって有用であることが示唆される。なお、図中の＊はＰ＜０．０５を、＊＊はＰ＜０．０１を表している。
【００３６】
【発明の効果】
本発明により、プロパン−１，２，３−トリオール誘導体、化合物ＡおよびＢが提供される。
この化合物は、シソ科植物であるヒソップから抽出することによって得ることができる。当該プロパン−１，２，３−トリオール誘導体は、α−グルコシターゼ阻害活性効果を有しており、食品や飲料などに配合することにより、肥満を抑制したり、糖尿病、虚血性心疾患、高血圧症、高脂血症等の疾患の予防を図ることが期待される。しかも、この化合物は天然物由来であるので、副作用の心配がなく、安全性に優れている。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に係る化合物ＡおよびＢのα−グルコシターゼ阻害活性の測定結果を示す図である。
【図２】腸管内におけるヒソップ抽出画分のマルトースに対するα−グルコシターゼ阻害作用を示す図である。
【図３】腸管内におけるヒソップ抽出画分のグルコースに対するα−グルコシターゼ阻害作用を示す図である。
【図４】ショ糖負荷マウスにおけるヒソップ抽出画分の血糖値上昇抑制効果を示す図である。
Claims (4)
- 下記化学式（１）または（２）で表されるプロパン−１，２，３−トリオール誘導体。
- シソ科植物ヒソップ（Ｈｙｓｓｏｐｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の地上部から含水有機溶媒で抽出することを特徴とする請求項１に記載のプロパン−１，２，３−トリオール誘導体の製造方法。
- 請求項１記載のプロパン−１，２，３−トリオール誘導体の一方もしくは両方、または当該化合物を含むシソ科植物ヒソップの抽出物を含有することを特徴とするα−グルコシダーゼ阻害剤。
- 請求項３記載のα−グルコシダーゼ阻害剤を添加したことを特徴とする食品もしくは飲料。
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