JP2004217532A - 桑葉抽出物及びその製造方法、並びに血糖値上昇抑制用組成物及び肥満防止用組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】コンズリトールＡを含有することを特徴とする桑葉抽出物。
【効果】本発明によれば、血糖値上昇抑制作用、過血糖による肥満防止作用を有し、なおこれらの効果が安定な桑葉抽出物、またその製造方法、並びに大量に供給でき安全性の高い血糖値上昇抑制用組成物、肥満防止用組成物を得ることができる。
【選択図】 なし
【効果】本発明によれば、血糖値上昇抑制作用、過血糖による肥満防止作用を有し、なおこれらの効果が安定な桑葉抽出物、またその製造方法、並びに大量に供給でき安全性の高い血糖値上昇抑制用組成物、肥満防止用組成物を得ることができる。
【選択図】 なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、コンズリトールＡを含有する桑葉抽出物及びその製造方法、並びに該桑葉抽出物を含有することを特徴とする血糖値上昇抑制用組成物、過血糖による肥満防止用組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
桑葉は、従来より制糖作用、すなわち血糖値上昇抑制作用及び糖吸収抑制作用を有することが知られており、古くから糖尿病を予防する目的などのため、健康茶として湯で煮出したりして利用されてきた（非特許文献１）。また、最近では桑葉を熱水などで抽出し、乾燥したものを錠剤、顆粒剤あるいは飲料などに配合した組成物を糖尿病の予防や肥満を予防する目的で飲食するようになってきた（特許文献１、特許文献２）。しかしながら、桑葉の血糖値上昇抑制作用を有する有効成分としては、１−デオキシノジリマイシン等の含窒素化合物がα−グルコシダーゼ阻害作用を示し（非特許文献２）、糖吸収抑制や肥満予防作用を有することが知られるのみである（非特許文献３）。しかも、１−デオキシノジリマイシン等は、桑葉中に極めて少量しか含有されず、ルーチン的な定量が無いため、人が桑葉や抽出物を飲食するに当り、人体に作用を及ぼす量まで摂取したかどうか不明であった。このため、桑葉の有効性を十分発揮させることができず、産業的な広がりが得られていなかった。
【０００３】
一方、コンズリトールＡは、ガガイモ科に属するコンズランゴ（Ｍａｒｓｄｅｎｉａ ｃｕｎｄｕｒａｎｇｏ Ｒｉｃｈｅｎｂａｃｈ ｆｉｌ）樹皮やギムネマ シルベスタ（Ｇｙｍｎｅｍａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ Ｒ．Ｂｒ．）葉に含まれることが知られている。コンズリトールＡの作用として腸管からの糖吸収抑制作用が知られ、血糖値上昇抑制作用を示すことが確認されている（特許文献３）。しかしながら、桑葉にコンズリトールＡが含まれていることは、全く知られていなかった。更に、コンズランゴ樹皮は医薬品として用いられ、日常的に食品として摂取することには安全性等に難があり、ギムネマ シルベスタはインド等の熱帯にしか生育せず、日本国内で多くの量を容易に入手することは困難である。
【０００４】
【特許文献１】
特開平５−１５３９４１号公報
【特許文献２】
特開平８−２９８９５２号公報
【特許文献３】
特許第３１１０５００号公報
【非特許文献１】
Ｍａｓａｙａｓｕ Ｋｉｍｕｒａ著、「和漢医薬学雑誌（Ｊ．Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ）」１２，２１４
−２１９，１９９５
【非特許文献２】
「Ｎａｔｕｒｗｉｓｓｅｎ ｓｃｈａｆｔｅｎ」Ｎｏ．６６、ｐ５８４−５８５、１９７９
【非特許文献３】
野田信三著、「Ｆｏｏｄ ｓｔｙｌｅ」２１ Ｖｏｌ．２，Ｎｏ．５，ｐ５０−５５，１９９８
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、血糖値上昇抑制作用、過血糖による肥満防止作用を有する桑葉抽出物及びその製造方法、並びに大量に供給でき安全性の高い血糖値上昇抑制用組成物、肥満防止用組成物を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段及び発明の実施の形態】
本発明者は、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、桑葉より安定した効果を有する抽出物を得るための研究を重ねる中で、桑葉にコンズリトールＡが含有されることを初めて見出し、コンズリトールＡを含有する桑葉抽出物が安定した血糖値上昇抑制作用、過血糖による肥満防止作用を示すこと、またその製造方法を知見し本発明をなすに至ったものである。
【０００７】
従って、本発明は、コンズリトールＡを含有することを特徴とする桑葉抽出物及びその製造方法、並びに桑葉抽出物を含有することを特徴とする血糖値上昇抑制用組成物及び過血糖による肥満防止用組成物を提供する。
【０００８】
なお、桑葉抽出物は、コンズリトールＡが、固形分中に０．５〜１０重量％含有することが好ましい。
【０００９】
以下、本発明につき更に詳しく説明する。
本発明の桑葉抽出物は、コンズリトールＡを含有するものである。
コンズリトールＡは、下記式（１）で表わされる単糖である。なお、桑葉抽出物に含有するコンズリトールＡには、誘導体であるジヒドロコンズリトールＡ、コンズリトールＡエポキサイドのものも含まれる。
【００１０】
【化１】
【００１１】
本発明において抽出液がコンズリトールＡを含有するとは、固形分中に０．２重量％以上含むことをいうものとし、固形分中の含有量とは、桑葉抽出物の乾燥物中に含まれるコンズリトールＡの含有量（重量％）をいう。コンズリトールＡの桑葉抽出物中の含有量は、特に限定されないが、固形分中に０．５〜１０重量％が好ましく、特に１〜８重量％が好ましい。含有量が少なすぎると効果が安定して得られない場合があり、多すぎても精製にコストがかかりすぎ、含有量に応じた効果の増大は期待できない場合がある。
【００１２】
本発明に用いられる桑葉は、桑（マグワ：Ｍｏｒｕｓ ａｌｂａ Ｌ．、ヤマグワ：Ｍ．ｂｏｎｂｙｃｉｓ Ｋｏｉｚｕｍｉ、ロソウ：Ｍ．Ｍｕｌｔｉｃａｕｌｉｓ）の葉の部分である。桑の根の皮は桑白皮と言われ、古くより漢方薬の重要な構成生薬として用いられてきた。また、桑の葉は、養蚕の飼料として古来より国内で大量に生産されてきたが、民間薬としても、糖尿病の予防に用いられてきた。本発明において、かかる桑葉は、通常自然乾燥させるか、温風乾燥させた物をそのまま又は粗砕した形で用いるが、生の葉を用いてもよい。
【００１３】
本発明の桑葉抽出物を得る方法は、桑葉を水又は含水アルコールで抽出した抽出液をハイポーラス型合成高分子吸着樹脂及び／又はイオン交換樹脂に通液し、前記樹脂に未吸着の画分からコンズリトールＡを含有する抽出物を得る方法である。
【００１４】
抽出溶媒は水又は含水アルコールである。用いるアルコールとしては、特に限定されないが、エタノール、メタノール、ｎ−プロパノ−ル、ｉｓｏ−プロパノ−ル等の低級一価アルコールが好ましい。含水アルコールのアルコール含有量は、５０重量％以下が好ましく、３０重量％以下が特に好ましい。アルコール含有量が５０重量％以上では、桑葉よりクロロフィル等が抽出され、二次工程の樹脂に不可逆的吸着を生じ、樹脂寿命を短くしてしまうため好ましくない。
【００１５】
抽出方法は、桑葉１重量部に対し抽出溶媒を好適には８〜２０重量部加え抽出する。この場合、抽出温度は一般に用いられる条件で行えばよく、特に限定されるものではないが、５０〜１００℃が好ましく、７０〜９５℃が特に好ましい。抽出時間は、好適には１〜１０時間、より好ましくは２〜５時間が適当であり、抽出時に軽く攪拌をしてもよい。
【００１６】
得られた抽出液は、ろ過等により不溶物を除去した後、必要に応じて濃縮を行う。抽出液にアルコールを含む場合は、減圧下で濃縮してアルコールを除き、次いでこの水溶液をハイポーラス型合成高分子吸着樹脂及び／又はイオン交換樹脂に通液する。これらの樹脂に未吸着の画分からコンズリトールＡを高含有する抽出液を得ることができる。
【００１７】
ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂としては、スチレン−ジビニルベンゼン系重合体やポリアクリル酸系重合体のものがあり、例えば、ダイヤイオンＨＰ２０、同ＳＰ８２５、同ＳＰ８５０等（三菱化学社製）やアンバーライトＸＡＤ−７、同ＸＡＤ−８（オルガノ社製）等が挙げられる。イオン交換樹脂の具体例としては、陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂どちらも用いることができ、具体的には、強酸性陽イオン交換樹脂としてダイヤイオンＰＫ２０８、同ＰＫ２１６、同ＳＫ１Ｂ、ＳＫ１１０等、強塩基性陰イオン交換樹脂としてダイヤイオンＰＡ３０８、同ＰＡ３１６、同ＳＡ１０Ａ等が挙げられ、弱塩基性陰イオン交換樹脂として、ダイヤイオンＷＡ２１、同ＷＡ３０等（以上、三菱化学社製）が例として挙げられる。イオン交換樹脂としては、ハイポーラス型、ゲル型のいずれも用いることができるが、コンズリトールＡ以外の不純物を多く除くことができる点で、ハイポーラス型のものが好ましい。
【００１８】
樹脂は、ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂、イオン交換樹脂をそれぞれ単独で用いてもよいし、一方の単独使用で目的とするコンズリトールＡ含有量の抽出液が得られない場合は、一方の樹脂の未吸着画分を続けて他方の樹脂に通液してもよい。また、ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂及びイオン交換樹脂から２種以上を組み合わせて用いてもよい。ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂及びイオン交換樹脂を両方使用する場合の順番は特に限定されないが、ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂を先に使用する方が、イオン交換樹脂の再生使用回数が長くなるため良好である。
【００１９】
樹脂の使用量は、抽出液固形物１容量部に対して、好適には１〜２０容量部、好ましくは２〜１０容量部である。
【００２０】
通液は、樹脂をつめたカラム又はバッチ方式で行ってもよいが、カラムを用いることが好ましく、好適には通液速度ＳＶ０．５〜４、好ましくは０．５〜２で通液し、イオン物質や低極性の物質を吸着させる。ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂に通液する際の液のｐＨは好適には４〜８であり、温度は常温〜４０℃である。
【００２１】
ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂及びイオン交換樹脂のいずれを用いた場合においても、未吸着画分としてコンズリトールＡを高含有する桑葉抽出液（物）が得られる。
【００２２】
本発明の桑葉抽出物は、抽出物中のコンズリトールＡの含有を妨げない範囲において、色素や臭いを有する成分を取り除くため、活性炭、骨炭、水酸化カルシュウム等で処理してもよい。
【００２３】
本発明の桑葉抽出物は、更に、減圧濃縮し、真空乾燥、スプレー乾燥、凍結乾燥を行い、乾燥粉末とすることが好ましい。
【００２４】
本発明の桑葉抽出物は、コンズリトールＡを含有するため血糖上昇抑制作用と肥満防止作用を示す。また、コンズリトールＡ以外に、１−デオキシノジリマイシン等の糖吸収抑制作用を有した含窒素化合物も若干精製されて含まれるものと推定され、そのことによる相乗効果も期待されるが、コンズリトールＡを高含有することで、本発明の桑葉抽出物は効果が高く、安定な血糖上昇抑制作用と肥満防止作用を示す。また、通常水で桑葉を煮出しただけの抽出物に比べ、これらの化合物が精製されて高い効果を示すものである。
【００２５】
本発明の桑葉抽出物は、優れた血糖上昇抑制作用と肥満防止作用を示すため、桑葉抽出物を含有する血糖値上昇抑制用組成物、過血糖による肥満防止用組成物として用いることができる。
【００２６】
本発明の血糖値上昇抑制用組成物、過血糖による肥満防止用組成物には、上記桑葉抽出物以外に、本発明の効果を損なわない範囲において、通常、血糖値上昇抑制用組成物及び肥満防止用組成物に配合される成分や他の血糖値上昇抑制剤を併用してもよく、他の血糖値上昇抑制剤としては、ギムネマ、バナバ、小麦アルブミン、グァバポリフェノール、高麗ニンジン等が挙げられる。
【００２７】
本発明の血糖値上昇抑制用組成物及び過血糖による肥満防止用組成物は、食品、医薬品、医薬部外品として用いることができ、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、飲料等に配合し、日常的に飲食することで、血糖値上昇の抑制と肥満防止を実現することができる。
【００２８】
血糖値上昇抑制用組成物、過血糖による肥満防止用組成物における本発明の桑葉抽出物の配合量は、その剤形によって異なり、飲食品全量に対し０．００１〜８０重量％が好ましく、特に０．０１〜６０重量％が好ましい。飲料の場合、全量に対し０．０１〜５重量％、顆粒剤・錠剤・カプセル剤の場合は、全量に対し１〜６０重量％、シロップ剤の場合は、全量に対し０．５〜３０重量％が好ましい。
【００２９】
また、本発明の桑葉抽出物の成人による摂取量は、１日あたり１０ｍｇ〜５ｇ、好ましくは３０ｍｇ〜２ｇであるが、摂取する人の状態に応じて摂取量を増減すればよい。また、１日に３回、食事前に摂取することが好ましい。
【００３０】
【発明の効果】
本発明によれば、血糖値上昇抑制作用、過血糖による肥満防止作用を有する桑葉抽出物及びその製造方法、並びに大量に供給でき安全性の高い血糖値上昇抑制用組成物、肥満防止用組成物を得ることができる。
【００３１】
【実施例】
以下、実施例及び比較例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。なお、下記の例において部は重量部を示す。
【００３２】
［実施例１］
桑葉抽出物製造例１
乾燥桑葉（桑葉Ａ）１ｋｇに水１５Ｌを加え、８０℃に加熱し３時間抽出した。抽出液を１００メッシュの網に通したのち、更に珪藻土を用いて吸引ろ過して澄明な水抽出液を得た。別に５００ｍＬの合成吸着樹脂（ダイヤイオンＨＰ２０：三菱化学社製）を充填したカラムを準備し、これに得られた桑葉抽出液をＳＶ１で通液後カラムを水２Ｌで洗浄し、未吸着液と洗浄液を合わせて５０℃で減圧濃縮、次いで４０℃で２４時間真空乾燥して乾燥物（桑葉抽出物）１１３ｇを得た。
【００３３】
［実施例２］
桑葉抽出物製造例２
実施例１と同様の操作により、乾燥桑葉（桑葉Ａ）１ｋｇを用いて乾燥桑葉の水抽出液を得た。別に各々４００ｍＬの陽イオン交換樹脂（ダイヤイオンＰＫ２１６）及び陰イオン交換樹脂（ダイヤイオンＷＡ３０）を充填したカラムを準備し、これに、得られた桑葉抽出液をＳＶ２で通液後カラムを水２Ｌで洗浄し、未吸着液と合わせて実施例１と同様の操作にて濃縮・乾燥して乾燥物（桑葉抽出物）９８ｇを得た。
【００３４】
［実施例３］
桑葉抽出物製造例３
実施例１と同様の操作により、合成吸着樹脂（ダイヤイオンＨＰ２０）未吸着液と洗浄液を合わせた液を得た。この液を実施例２で用いたと同様の各々４００ｍＬの陽イオン交換樹脂及び陰イオン交換樹脂カラムに通液し、カラムを水２Ｌで洗浄後、未吸着液と洗浄液を合わせて実施例１と同様の操作により乾燥させ、乾燥物（桑葉抽出物）７３ｇを得た。
【００３５】
［実施例４〜６］
産地の異なる乾燥桑葉４種類（桑葉Ｂ、Ｃ、Ｄ）各１ｋｇを実施例３と同様の操作を行い、乾燥物（桑葉抽出物）を得た。得られた乾燥物の量を表１に示す。
【００３６】
［比較例１］
乾燥桑葉（桑葉Ｅ）１ｋｇに１５Ｌの水を加え、８０℃に加熱し３時間抽出した。抽出液を１００メッシュの網に通したのち、更に珪藻土を用いて吸引ろ過して澄明な液を得た。この液を減圧濃縮した後、凍結乾燥を行い乾燥物（桑葉抽出物）２８３ｇを得た。
【００３７】
［比較例２］
乾燥桑葉（桑葉Ｆ）１ｋｇに１５Ｌの水を加え、８０℃に加熱し３時間抽出した。抽出液を１００メッシュの網に通したのち、更に珪藻土を用いて吸引ろ過して澄明な液を得た。この液を減圧濃縮した後、凍結乾燥を行い乾燥物（桑葉抽出物）２４６ｇを得た。
【００３８】
実施例１〜６、比較例１、２で得られた桑葉抽出物について、下記測定方法でコンズリトールＡの含有量及びα−グルコシダーゼ阻害率を測定し、実施例１、３及び比較例２について血糖値上昇抑制作用、実施例２、４、６及び比較例１について、肥満防止作用を評価した。結果を１〜４に示す。
【００３９】
＜コンズリトールＡ含有量の測定＞
桑葉抽出物について、下記分析条件にてコンズリトールＡをガスクロマトグラフ法で定量分析した。
コンズリトールＡ定量分析方法
各桑葉抽出物１ｍｇに対し、ＴＭＳイミダゾール１０滴を加え、密栓したビンの中で、８０℃・３０分間加熱した、過熱後、水を加えヘキサン−水で分液しヘキサン層をサンプル液とした。
ガスクロマトグラフィーは、ＧＣ−２０１０（島津製作所社製）、カラムはＤＢ−１（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）、充填剤はＣ−Ｒ７Ａｐｌｕｓ（島津製作所社製）で、４０〜１７０℃に段階的に温度を上昇させコンズリトールＡの含有率を測定した。結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】
【００４１】
＜α−グルコシダーゼ阻害率の測定＞
ラット小腸粉末より調製した粗α−グルコシダーゼ溶液を用いて、α−グルコシダーゼ阻害試験を行った。ラット小腸アセトン粉末１ｇに対して０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍＬをスターラーで攪拌（４℃、１時間）し、３５００ｒｐｍ、１５分間遠心分離を行った。得られた上清を粗酵素液とした。
桑葉抽出物を各種水溶液濃度に調製し、サンプル液とした。そして、マルトースを基質として、上記粗酵素液及びコンズリトールＡ溶液を用いて、３７℃の水浴上で３０分静置後、沸騰水に２分間浸し、反応を停止させた。氷冷後、分解したグルコース量を測定した。
グルコースＣＩＩ−テストワコー（和光純薬工業社製）を用いて、５０５ｎｍの吸光度を測定して下記式によりα−グルコシダーゼ阻害率を求め、５０％阻害率濃度ＩＣ５０を求めた。結果を表２に示す。
【００４２】
【表２】
※ ＩＣ５０は測定されず
【００４３】
【数１】
【００４４】
＜血糖値上昇抑制試験＞
ショ糖５０ｇを１００ｍＬの蒸留水に溶かした。この溶液に桑葉抽出物それぞれ１２０ｍｇを添加したものを調製し、サンプル液とした。対照にはショ糖５０ｇを蒸留水１００ｍＬに溶かしたものを用いた。このサンプル液を、健常成人男性５名によるショ糖負荷試験に供した。即ち、試験前日の午後９時より絶食した被験者に前述の試料を経口負荷させ、簡易血糖測定器（デキスターＺ；バイエル・三共）を用いて経時的に（３０、６０、９０分後）血糖値を測定した。結果を表３に示す。
【００４５】
【表３】
【００４６】
明らかに実施例の桑葉抽出物は血糖値上昇抑制作用を示したが、比較例の桑葉抽出物は、血糖値上昇抑制傾向は示したが、対照との有意差は得られず効果は確認できなかった。
【００４７】
＜肥満防止試験＞
３週齢のｄｄｙ雄性マウスを１週間検疫訓化した後、健康状態のよさそうな１８匹を使用し、３群に分け１群６匹とした。飼育条件は２２±３℃、湿度５５±１５％、照明１２時間／日に設定し、ステンレス製ブランケット飼育ゲージに６匹ずつ収容した。桑葉抽出物を飼料中に各２０重量％含有させ、前述マウスに自由摂取、４５日間の肥満防止試験を行った。対照としては、これらが含まれていない通常の飼料を与えた。結果を表４に示す。
【００４８】
【表４】
【００４９】
実施例の桑葉抽出物には体重増加の抑制が見られたが、比較例の桑葉抽出物は対照とほぼ同等の体重増加を示し、肥満防止の効果は見られなかった。
【００５０】
［実施例７］
下記に示す処方の組成物（錠剤）を常法に準じて調製した。
錠剤 （２５０ｍｇ／粒）
桑葉抽出物（実施例１） ９７．５ｍｇ
ビタミンＣ １．５ｍｇ
緑茶カテキン １．５ｍｇ
マルチトール ９５．０ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル ２０．０ｍｇ
結晶セルロース ３５．０ｍｇ
【００５１】
［実施例８］
下記に示す処方の組成物（顆粒）を常法に準じて調製した。
顆粒 （１０００ｍｇ）
桑葉抽出物（実施例２） ７１．５ｍｇ
ビタミンＫ １．５ｍｇ
レシチン １．０ｍｇ
ナイアシン １．０ｍｇ
硫酸カルシウム １．５ｍｇ
ビートオリゴ糖 ９２３．５ｍｇ
【００５２】
［実施例９］
下記に示す処方の飲料を常法に準じて調製した。
飲料
桑葉抽出物（実施例３） １％
ビタミンＣ １％
ビタミンＫ １％
ルチン １％
グレープフルーツ果汁 ９％
プルーン果汁 ２％
ザクロ果汁 ５％
オリゴ糖 ５％
グレープフルーツフレーバー ０．７％
水 ７４．３％
合計 １００％
【発明の属する技術分野】
本発明は、コンズリトールＡを含有する桑葉抽出物及びその製造方法、並びに該桑葉抽出物を含有することを特徴とする血糖値上昇抑制用組成物、過血糖による肥満防止用組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
桑葉は、従来より制糖作用、すなわち血糖値上昇抑制作用及び糖吸収抑制作用を有することが知られており、古くから糖尿病を予防する目的などのため、健康茶として湯で煮出したりして利用されてきた（非特許文献１）。また、最近では桑葉を熱水などで抽出し、乾燥したものを錠剤、顆粒剤あるいは飲料などに配合した組成物を糖尿病の予防や肥満を予防する目的で飲食するようになってきた（特許文献１、特許文献２）。しかしながら、桑葉の血糖値上昇抑制作用を有する有効成分としては、１−デオキシノジリマイシン等の含窒素化合物がα−グルコシダーゼ阻害作用を示し（非特許文献２）、糖吸収抑制や肥満予防作用を有することが知られるのみである（非特許文献３）。しかも、１−デオキシノジリマイシン等は、桑葉中に極めて少量しか含有されず、ルーチン的な定量が無いため、人が桑葉や抽出物を飲食するに当り、人体に作用を及ぼす量まで摂取したかどうか不明であった。このため、桑葉の有効性を十分発揮させることができず、産業的な広がりが得られていなかった。
【０００３】
一方、コンズリトールＡは、ガガイモ科に属するコンズランゴ（Ｍａｒｓｄｅｎｉａ ｃｕｎｄｕｒａｎｇｏ Ｒｉｃｈｅｎｂａｃｈ ｆｉｌ）樹皮やギムネマ シルベスタ（Ｇｙｍｎｅｍａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｅ Ｒ．Ｂｒ．）葉に含まれることが知られている。コンズリトールＡの作用として腸管からの糖吸収抑制作用が知られ、血糖値上昇抑制作用を示すことが確認されている（特許文献３）。しかしながら、桑葉にコンズリトールＡが含まれていることは、全く知られていなかった。更に、コンズランゴ樹皮は医薬品として用いられ、日常的に食品として摂取することには安全性等に難があり、ギムネマ シルベスタはインド等の熱帯にしか生育せず、日本国内で多くの量を容易に入手することは困難である。
【０００４】
【特許文献１】
特開平５−１５３９４１号公報
【特許文献２】
特開平８−２９８９５２号公報
【特許文献３】
特許第３１１０５００号公報
【非特許文献１】
Ｍａｓａｙａｓｕ Ｋｉｍｕｒａ著、「和漢医薬学雑誌（Ｊ．Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ）」１２，２１４
−２１９，１９９５
【非特許文献２】
「Ｎａｔｕｒｗｉｓｓｅｎ ｓｃｈａｆｔｅｎ」Ｎｏ．６６、ｐ５８４−５８５、１９７９
【非特許文献３】
野田信三著、「Ｆｏｏｄ ｓｔｙｌｅ」２１ Ｖｏｌ．２，Ｎｏ．５，ｐ５０−５５，１９９８
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、血糖値上昇抑制作用、過血糖による肥満防止作用を有する桑葉抽出物及びその製造方法、並びに大量に供給でき安全性の高い血糖値上昇抑制用組成物、肥満防止用組成物を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段及び発明の実施の形態】
本発明者は、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、桑葉より安定した効果を有する抽出物を得るための研究を重ねる中で、桑葉にコンズリトールＡが含有されることを初めて見出し、コンズリトールＡを含有する桑葉抽出物が安定した血糖値上昇抑制作用、過血糖による肥満防止作用を示すこと、またその製造方法を知見し本発明をなすに至ったものである。
【０００７】
従って、本発明は、コンズリトールＡを含有することを特徴とする桑葉抽出物及びその製造方法、並びに桑葉抽出物を含有することを特徴とする血糖値上昇抑制用組成物及び過血糖による肥満防止用組成物を提供する。
【０００８】
なお、桑葉抽出物は、コンズリトールＡが、固形分中に０．５〜１０重量％含有することが好ましい。
【０００９】
以下、本発明につき更に詳しく説明する。
本発明の桑葉抽出物は、コンズリトールＡを含有するものである。
コンズリトールＡは、下記式（１）で表わされる単糖である。なお、桑葉抽出物に含有するコンズリトールＡには、誘導体であるジヒドロコンズリトールＡ、コンズリトールＡエポキサイドのものも含まれる。
【００１０】
【化１】
本発明において抽出液がコンズリトールＡを含有するとは、固形分中に０．２重量％以上含むことをいうものとし、固形分中の含有量とは、桑葉抽出物の乾燥物中に含まれるコンズリトールＡの含有量（重量％）をいう。コンズリトールＡの桑葉抽出物中の含有量は、特に限定されないが、固形分中に０．５〜１０重量％が好ましく、特に１〜８重量％が好ましい。含有量が少なすぎると効果が安定して得られない場合があり、多すぎても精製にコストがかかりすぎ、含有量に応じた効果の増大は期待できない場合がある。
【００１２】
本発明に用いられる桑葉は、桑（マグワ：Ｍｏｒｕｓ ａｌｂａ Ｌ．、ヤマグワ：Ｍ．ｂｏｎｂｙｃｉｓ Ｋｏｉｚｕｍｉ、ロソウ：Ｍ．Ｍｕｌｔｉｃａｕｌｉｓ）の葉の部分である。桑の根の皮は桑白皮と言われ、古くより漢方薬の重要な構成生薬として用いられてきた。また、桑の葉は、養蚕の飼料として古来より国内で大量に生産されてきたが、民間薬としても、糖尿病の予防に用いられてきた。本発明において、かかる桑葉は、通常自然乾燥させるか、温風乾燥させた物をそのまま又は粗砕した形で用いるが、生の葉を用いてもよい。
【００１３】
本発明の桑葉抽出物を得る方法は、桑葉を水又は含水アルコールで抽出した抽出液をハイポーラス型合成高分子吸着樹脂及び／又はイオン交換樹脂に通液し、前記樹脂に未吸着の画分からコンズリトールＡを含有する抽出物を得る方法である。
【００１４】
抽出溶媒は水又は含水アルコールである。用いるアルコールとしては、特に限定されないが、エタノール、メタノール、ｎ−プロパノ−ル、ｉｓｏ−プロパノ−ル等の低級一価アルコールが好ましい。含水アルコールのアルコール含有量は、５０重量％以下が好ましく、３０重量％以下が特に好ましい。アルコール含有量が５０重量％以上では、桑葉よりクロロフィル等が抽出され、二次工程の樹脂に不可逆的吸着を生じ、樹脂寿命を短くしてしまうため好ましくない。
【００１５】
抽出方法は、桑葉１重量部に対し抽出溶媒を好適には８〜２０重量部加え抽出する。この場合、抽出温度は一般に用いられる条件で行えばよく、特に限定されるものではないが、５０〜１００℃が好ましく、７０〜９５℃が特に好ましい。抽出時間は、好適には１〜１０時間、より好ましくは２〜５時間が適当であり、抽出時に軽く攪拌をしてもよい。
【００１６】
得られた抽出液は、ろ過等により不溶物を除去した後、必要に応じて濃縮を行う。抽出液にアルコールを含む場合は、減圧下で濃縮してアルコールを除き、次いでこの水溶液をハイポーラス型合成高分子吸着樹脂及び／又はイオン交換樹脂に通液する。これらの樹脂に未吸着の画分からコンズリトールＡを高含有する抽出液を得ることができる。
【００１７】
ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂としては、スチレン−ジビニルベンゼン系重合体やポリアクリル酸系重合体のものがあり、例えば、ダイヤイオンＨＰ２０、同ＳＰ８２５、同ＳＰ８５０等（三菱化学社製）やアンバーライトＸＡＤ−７、同ＸＡＤ−８（オルガノ社製）等が挙げられる。イオン交換樹脂の具体例としては、陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂どちらも用いることができ、具体的には、強酸性陽イオン交換樹脂としてダイヤイオンＰＫ２０８、同ＰＫ２１６、同ＳＫ１Ｂ、ＳＫ１１０等、強塩基性陰イオン交換樹脂としてダイヤイオンＰＡ３０８、同ＰＡ３１６、同ＳＡ１０Ａ等が挙げられ、弱塩基性陰イオン交換樹脂として、ダイヤイオンＷＡ２１、同ＷＡ３０等（以上、三菱化学社製）が例として挙げられる。イオン交換樹脂としては、ハイポーラス型、ゲル型のいずれも用いることができるが、コンズリトールＡ以外の不純物を多く除くことができる点で、ハイポーラス型のものが好ましい。
【００１８】
樹脂は、ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂、イオン交換樹脂をそれぞれ単独で用いてもよいし、一方の単独使用で目的とするコンズリトールＡ含有量の抽出液が得られない場合は、一方の樹脂の未吸着画分を続けて他方の樹脂に通液してもよい。また、ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂及びイオン交換樹脂から２種以上を組み合わせて用いてもよい。ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂及びイオン交換樹脂を両方使用する場合の順番は特に限定されないが、ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂を先に使用する方が、イオン交換樹脂の再生使用回数が長くなるため良好である。
【００１９】
樹脂の使用量は、抽出液固形物１容量部に対して、好適には１〜２０容量部、好ましくは２〜１０容量部である。
【００２０】
通液は、樹脂をつめたカラム又はバッチ方式で行ってもよいが、カラムを用いることが好ましく、好適には通液速度ＳＶ０．５〜４、好ましくは０．５〜２で通液し、イオン物質や低極性の物質を吸着させる。ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂に通液する際の液のｐＨは好適には４〜８であり、温度は常温〜４０℃である。
【００２１】
ハイポーラス型合成高分子吸着樹脂及びイオン交換樹脂のいずれを用いた場合においても、未吸着画分としてコンズリトールＡを高含有する桑葉抽出液（物）が得られる。
【００２２】
本発明の桑葉抽出物は、抽出物中のコンズリトールＡの含有を妨げない範囲において、色素や臭いを有する成分を取り除くため、活性炭、骨炭、水酸化カルシュウム等で処理してもよい。
【００２３】
本発明の桑葉抽出物は、更に、減圧濃縮し、真空乾燥、スプレー乾燥、凍結乾燥を行い、乾燥粉末とすることが好ましい。
【００２４】
本発明の桑葉抽出物は、コンズリトールＡを含有するため血糖上昇抑制作用と肥満防止作用を示す。また、コンズリトールＡ以外に、１−デオキシノジリマイシン等の糖吸収抑制作用を有した含窒素化合物も若干精製されて含まれるものと推定され、そのことによる相乗効果も期待されるが、コンズリトールＡを高含有することで、本発明の桑葉抽出物は効果が高く、安定な血糖上昇抑制作用と肥満防止作用を示す。また、通常水で桑葉を煮出しただけの抽出物に比べ、これらの化合物が精製されて高い効果を示すものである。
【００２５】
本発明の桑葉抽出物は、優れた血糖上昇抑制作用と肥満防止作用を示すため、桑葉抽出物を含有する血糖値上昇抑制用組成物、過血糖による肥満防止用組成物として用いることができる。
【００２６】
本発明の血糖値上昇抑制用組成物、過血糖による肥満防止用組成物には、上記桑葉抽出物以外に、本発明の効果を損なわない範囲において、通常、血糖値上昇抑制用組成物及び肥満防止用組成物に配合される成分や他の血糖値上昇抑制剤を併用してもよく、他の血糖値上昇抑制剤としては、ギムネマ、バナバ、小麦アルブミン、グァバポリフェノール、高麗ニンジン等が挙げられる。
【００２７】
本発明の血糖値上昇抑制用組成物及び過血糖による肥満防止用組成物は、食品、医薬品、医薬部外品として用いることができ、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、飲料等に配合し、日常的に飲食することで、血糖値上昇の抑制と肥満防止を実現することができる。
【００２８】
血糖値上昇抑制用組成物、過血糖による肥満防止用組成物における本発明の桑葉抽出物の配合量は、その剤形によって異なり、飲食品全量に対し０．００１〜８０重量％が好ましく、特に０．０１〜６０重量％が好ましい。飲料の場合、全量に対し０．０１〜５重量％、顆粒剤・錠剤・カプセル剤の場合は、全量に対し１〜６０重量％、シロップ剤の場合は、全量に対し０．５〜３０重量％が好ましい。
【００２９】
また、本発明の桑葉抽出物の成人による摂取量は、１日あたり１０ｍｇ〜５ｇ、好ましくは３０ｍｇ〜２ｇであるが、摂取する人の状態に応じて摂取量を増減すればよい。また、１日に３回、食事前に摂取することが好ましい。
【００３０】
【発明の効果】
本発明によれば、血糖値上昇抑制作用、過血糖による肥満防止作用を有する桑葉抽出物及びその製造方法、並びに大量に供給でき安全性の高い血糖値上昇抑制用組成物、肥満防止用組成物を得ることができる。
【００３１】
【実施例】
以下、実施例及び比較例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。なお、下記の例において部は重量部を示す。
【００３２】
［実施例１］
桑葉抽出物製造例１
乾燥桑葉（桑葉Ａ）１ｋｇに水１５Ｌを加え、８０℃に加熱し３時間抽出した。抽出液を１００メッシュの網に通したのち、更に珪藻土を用いて吸引ろ過して澄明な水抽出液を得た。別に５００ｍＬの合成吸着樹脂（ダイヤイオンＨＰ２０：三菱化学社製）を充填したカラムを準備し、これに得られた桑葉抽出液をＳＶ１で通液後カラムを水２Ｌで洗浄し、未吸着液と洗浄液を合わせて５０℃で減圧濃縮、次いで４０℃で２４時間真空乾燥して乾燥物（桑葉抽出物）１１３ｇを得た。
【００３３】
［実施例２］
桑葉抽出物製造例２
実施例１と同様の操作により、乾燥桑葉（桑葉Ａ）１ｋｇを用いて乾燥桑葉の水抽出液を得た。別に各々４００ｍＬの陽イオン交換樹脂（ダイヤイオンＰＫ２１６）及び陰イオン交換樹脂（ダイヤイオンＷＡ３０）を充填したカラムを準備し、これに、得られた桑葉抽出液をＳＶ２で通液後カラムを水２Ｌで洗浄し、未吸着液と合わせて実施例１と同様の操作にて濃縮・乾燥して乾燥物（桑葉抽出物）９８ｇを得た。
【００３４】
［実施例３］
桑葉抽出物製造例３
実施例１と同様の操作により、合成吸着樹脂（ダイヤイオンＨＰ２０）未吸着液と洗浄液を合わせた液を得た。この液を実施例２で用いたと同様の各々４００ｍＬの陽イオン交換樹脂及び陰イオン交換樹脂カラムに通液し、カラムを水２Ｌで洗浄後、未吸着液と洗浄液を合わせて実施例１と同様の操作により乾燥させ、乾燥物（桑葉抽出物）７３ｇを得た。
【００３５】
［実施例４〜６］
産地の異なる乾燥桑葉４種類（桑葉Ｂ、Ｃ、Ｄ）各１ｋｇを実施例３と同様の操作を行い、乾燥物（桑葉抽出物）を得た。得られた乾燥物の量を表１に示す。
【００３６】
［比較例１］
乾燥桑葉（桑葉Ｅ）１ｋｇに１５Ｌの水を加え、８０℃に加熱し３時間抽出した。抽出液を１００メッシュの網に通したのち、更に珪藻土を用いて吸引ろ過して澄明な液を得た。この液を減圧濃縮した後、凍結乾燥を行い乾燥物（桑葉抽出物）２８３ｇを得た。
【００３７】
［比較例２］
乾燥桑葉（桑葉Ｆ）１ｋｇに１５Ｌの水を加え、８０℃に加熱し３時間抽出した。抽出液を１００メッシュの網に通したのち、更に珪藻土を用いて吸引ろ過して澄明な液を得た。この液を減圧濃縮した後、凍結乾燥を行い乾燥物（桑葉抽出物）２４６ｇを得た。
【００３８】
実施例１〜６、比較例１、２で得られた桑葉抽出物について、下記測定方法でコンズリトールＡの含有量及びα−グルコシダーゼ阻害率を測定し、実施例１、３及び比較例２について血糖値上昇抑制作用、実施例２、４、６及び比較例１について、肥満防止作用を評価した。結果を１〜４に示す。
【００３９】
＜コンズリトールＡ含有量の測定＞
桑葉抽出物について、下記分析条件にてコンズリトールＡをガスクロマトグラフ法で定量分析した。
コンズリトールＡ定量分析方法
各桑葉抽出物１ｍｇに対し、ＴＭＳイミダゾール１０滴を加え、密栓したビンの中で、８０℃・３０分間加熱した、過熱後、水を加えヘキサン−水で分液しヘキサン層をサンプル液とした。
ガスクロマトグラフィーは、ＧＣ−２０１０（島津製作所社製）、カラムはＤＢ−１（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）、充填剤はＣ−Ｒ７Ａｐｌｕｓ（島津製作所社製）で、４０〜１７０℃に段階的に温度を上昇させコンズリトールＡの含有率を測定した。結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】
＜α−グルコシダーゼ阻害率の測定＞
ラット小腸粉末より調製した粗α−グルコシダーゼ溶液を用いて、α−グルコシダーゼ阻害試験を行った。ラット小腸アセトン粉末１ｇに対して０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍＬをスターラーで攪拌（４℃、１時間）し、３５００ｒｐｍ、１５分間遠心分離を行った。得られた上清を粗酵素液とした。
桑葉抽出物を各種水溶液濃度に調製し、サンプル液とした。そして、マルトースを基質として、上記粗酵素液及びコンズリトールＡ溶液を用いて、３７℃の水浴上で３０分静置後、沸騰水に２分間浸し、反応を停止させた。氷冷後、分解したグルコース量を測定した。
グルコースＣＩＩ−テストワコー（和光純薬工業社製）を用いて、５０５ｎｍの吸光度を測定して下記式によりα−グルコシダーゼ阻害率を求め、５０％阻害率濃度ＩＣ５０を求めた。結果を表２に示す。
【００４２】
【表２】
【００４３】
【数１】
＜血糖値上昇抑制試験＞
ショ糖５０ｇを１００ｍＬの蒸留水に溶かした。この溶液に桑葉抽出物それぞれ１２０ｍｇを添加したものを調製し、サンプル液とした。対照にはショ糖５０ｇを蒸留水１００ｍＬに溶かしたものを用いた。このサンプル液を、健常成人男性５名によるショ糖負荷試験に供した。即ち、試験前日の午後９時より絶食した被験者に前述の試料を経口負荷させ、簡易血糖測定器（デキスターＺ；バイエル・三共）を用いて経時的に（３０、６０、９０分後）血糖値を測定した。結果を表３に示す。
【００４５】
【表３】
明らかに実施例の桑葉抽出物は血糖値上昇抑制作用を示したが、比較例の桑葉抽出物は、血糖値上昇抑制傾向は示したが、対照との有意差は得られず効果は確認できなかった。
【００４７】
＜肥満防止試験＞
３週齢のｄｄｙ雄性マウスを１週間検疫訓化した後、健康状態のよさそうな１８匹を使用し、３群に分け１群６匹とした。飼育条件は２２±３℃、湿度５５±１５％、照明１２時間／日に設定し、ステンレス製ブランケット飼育ゲージに６匹ずつ収容した。桑葉抽出物を飼料中に各２０重量％含有させ、前述マウスに自由摂取、４５日間の肥満防止試験を行った。対照としては、これらが含まれていない通常の飼料を与えた。結果を表４に示す。
【００４８】
【表４】
実施例の桑葉抽出物には体重増加の抑制が見られたが、比較例の桑葉抽出物は対照とほぼ同等の体重増加を示し、肥満防止の効果は見られなかった。
【００５０】
［実施例７］
下記に示す処方の組成物（錠剤）を常法に準じて調製した。
錠剤 （２５０ｍｇ／粒）
桑葉抽出物（実施例１） ９７．５ｍｇ
ビタミンＣ １．５ｍｇ
緑茶カテキン １．５ｍｇ
マルチトール ９５．０ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル ２０．０ｍｇ
結晶セルロース ３５．０ｍｇ
【００５１】
［実施例８］
下記に示す処方の組成物（顆粒）を常法に準じて調製した。
顆粒 （１０００ｍｇ）
桑葉抽出物（実施例２） ７１．５ｍｇ
ビタミンＫ １．５ｍｇ
レシチン １．０ｍｇ
ナイアシン １．０ｍｇ
硫酸カルシウム １．５ｍｇ
ビートオリゴ糖 ９２３．５ｍｇ
【００５２】
［実施例９］
下記に示す処方の飲料を常法に準じて調製した。
飲料
桑葉抽出物（実施例３） １％
ビタミンＣ １％
ビタミンＫ １％
ルチン １％
グレープフルーツ果汁 ９％
プルーン果汁 ２％
ザクロ果汁 ５％
オリゴ糖 ５％
グレープフルーツフレーバー ０．７％
水 ７４．３％
合計 １００％
Claims (5)
- コンズリトールＡを含有することを特徴とする桑葉抽出物。
- コンズリトールＡを、固形分中に０．５〜１０重量％含有することを特徴とする請求項１記載の桑葉抽出物。
- 桑葉を水又は含水アルコールで抽出した抽出液をハイポーラス型合成高分子吸着樹脂及び／又はイオン交換樹脂に通液し、前記樹脂に未吸着の画分からコンズリトールＡを含有する抽出物を得ることを特徴とする請求項１又は２記載の桑葉抽出物の製造方法。
- 請求項１又は２記載の桑葉抽出物を含有することを特徴とする血糖値上昇抑制用組成物。
- 請求項１又は２記載の桑葉抽出物を含有することを特徴とする過血糖による肥満防止用組成物。
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