JP2004132989A - 改良された多重吸光度式細管電気泳動システムおよびその方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 光源と、細管の平面列と、この光源に対し偏って配置され、かつ、上記細管の平面列とは同軸的、かつ、平行に配置された光検出器とを具備してなる。他の態様において、検出速度を促進させるため、上記細管に真空源が接続されている。
【選択図】図3
Description
以下の実施例は単に説明のものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
図4Aは光源を検出器に対しオンアクセスで配置させたときの検出器出力を表している。X軸はPDAの個々のフォトダイオード(1画素=1ダイオード)を示している。Y軸は測定された光強度を示している。10個の細管が、選択された100−画素ウインドウ内で観察される。最も高い強度の曲線的ピークは細管間の間隙を通過する光に対応し、より小さいピークは細管内を通過する光に対応する。最小点(谷部)は細管の壁面を通過する光に対応する。
薬剤化合物のpKa値は薬剤の発見にとって基本的に重要である。このpKa値は、或る化合物の可イオン化化学的官能性が50%イオン化されたときのpH値であり、分子の重要な物理化学的特性であって、その溶解度、会合、錯化、生物学的活性などに影響を与える。対数Pow値と同様に、開発プロセスの初期において、薬剤化合物をそのpKa値について検査することを高く望まれる。多重波長UV分光分析法およびpH2−12からの線状pH勾配(文献、Analytica Chemica Acta 434,157-167(200))を使用する最近の分光分析法は1日当たり300種の化合物のpKa値を検査することができる。しかし、その方法は初期の薬剤発見でしばしば存在するサンプルの不純物を分別することができず、分子の異なるイオン化状態が異なる分光特性を有していることを必要とし、そのような特性は常に満たされるとは限らない。反対に、CEは分離方法であるから、不純物を所望の化合物から分離することができ、分子の分光差を必要としない。なぜならば、CEにおいては、化合物の電気泳動的運動性のみがpHの関数として測定されるからである。
この実施例は薬剤化合物の親油性判定に電気泳動運動性を補助するために真空の使用の必要性を説明するものである。相対的薬剤親油性は、オクタノール・水分配係数(対数Pow値)に殆どの場合、相関する。なお、このオクタノール・水分配係数は、1−オクタノール相と、水相との間の化合物の平衡濃度比として定義される。対数Pow値は、細胞膜を通過する薬剤の輸送特性を予測するのに使用され、定量的構造活性相関に適用されている。医薬工業では、医薬開発初期において有望な薬剤化合物の物理化学的特性を判定し、その情報に基づいて医薬発見の成功に役立てようとする傾向がますます盛んになっている。従って、組合せ方法を使用しての有望薬剤の合成の急速な発展を考慮したとき、物理化学的特性、例えばPow値およびpKa値を迅速に予測する分析的アプローチに対する要望は非常に大きいことが理解できよう。
この実施例は、本発明の使用によりCE分析法展開時間が可なり減少されることを実証するものである。殆どの分析技術と同様に、CEにおいて、分析法を最適化し、可能な限り最も短い分析時間でデータの質を可能な限り高くする必要がある。CEの場合、最もしばしば、それにはランニング緩衝塩および添加剤濃度の最適化並びにpHおよびイオン強度の最適化が含まれる。この実施例において、6つの異なる可能なランニング緩衝液の内のどれが最良の分解を与えるかを評価する時間が可なり減少される。それが可能な理由は、このシステムがオペレータにとって、異なる分離条件を単一の試験で同時に検査することを可能にするからである。図7はこの概念を実証するものであって、この場合、共通する出口貯蔵部がホウ酸塩緩衝液を収容し、他方、6種の異なるランニング緩衝液が、96−細管アレイの16の細管にそれぞれ充填される。96の細管の全ては最初に50mMホウ酸塩緩衝液(pH:9.0)で満たされ、その後、6種の異なる緩衝液が、15分間に亘り15kVの電圧を用いて電気泳動的にアレイの16の細管にそれぞれ充填される。このサンプルは、カフェイン、4−アセトアミドフェノール、2−アセトアミドフェノールおよびアセチルサリチル酸(移行のため)をそれぞれ250ppm含む混合物を含有している。このサンプルは真空度−0.3psiで10秒間、注入される。この分離は15kVの電圧で行われる。この緩衝液は次のような門である。すなわち、緩衝液1は、50mMのホウ酸(pH:9.0)であり;緩衝液2は、45mMのホウ酸(pH:9.0)で10%のメタノールを含むものであり;緩衝液3は、25mMのホウ酸(pH:9.0)と、25mMのSDSを含むものであり;緩衝液4は、25mMのホウ酸(pH:9.0)と、25mMのSDSと、10%のメタノールを含むものであり;緩衝液5は、25mMのホウ酸(pH:9.0)と、50mMのSDSを含むものであり;緩衝液6は、25mMのホウ酸(pH:9.0)と、50mMのSDSと、10%のメタノールを含むものである。6種類の異なる緩衝液の分離効率が同時にモニターされる。96までの異なるランニング緩衝液が1回の試験で潜在的に評価し得ることを容易に理解できる。
この実施例は、本発明の使用が、鏡像異性体分離を生じさせるための最適キラルセレクターの迅速な判定を可能にすることを実証するものである。細管電気泳動は、鏡像異性体分離を行うために高価で、特別なカラムを必要とする従来のキラル液体クロマトグラフィ法アプローチと比較して、幾つかの実質的利点を提供する。CEにおいては、単一のユニバーサルカラムを使用することができ、分離を達成するために種々のキラルセレクターが背景電解質に添加される。ユニバーサルキラル分解剤が存在しないから、最良のセレクターが判定されるまで、多数のセレクターを連続的に評価しなければならない。これらのキラルセレクターは非常に高価であり得る。使用されるセレクターの数並びに最良のセレクターを選択するのに必要な時間を少なくすることにより、キラル分析のための総コストを可なり減少させることができる。
12 光源
14 光線
16 コリメータレンズ
18 アレイブロック
20 細管
22 平坦視野レンズ
26 検出器
Claims (59)
- マスク又はスリットを使用することなく、多数のサンプルを同時に分析するための多重吸光度式細管電気泳動システムであって、
細管の平面列と;
該細管を通過する光を検出するため、該細管の平面列を可視可能で、かつ、該細管の平面列と焦点が合う距離を以って、該細管の平面列と同軸的、かつ、平行に配置された光検出器と;
該細管の平面列中の細管間を通過する光の大部分が該光検出器に到達することがないようにして該光検出器と関連させて配置された光源と;
を具備してなることを特徴とするシステム。 - 該光検出器が、該細管の平面列に対し垂直方向の細管の断面距離の少なくとも10倍の距離を以って配置されている請求項1記載のシステム。
- 該光源が該光検出器との関連で偏って配置されている請求項1記載のシステム。
- 該光源の該光検出器に対する偏りが135°ないし180°の範囲内である請求項3記載のシステム。
- 該光源の該光検出器に対する偏りが160°ないし180°の範囲内である請求項3記載のシステム。
- 上記距離が約3cmないし約40cmである請求項1記載のシステム。
- 該細管の平面列が、少なくとも約10本の細管を有する請求項1記載のシステム。
- 該細管の平面列が、少なくとも約90本の細管を有する請求項1記載のシステム。
- 該光検出器が直線状フォトダイオード列である請求項1記載のシステム。
- 該光源が約180nmないし約1500nmの範囲の波長の光を発生させるものである請求項1記載のシステム。
- 該光源が約0.5mWないし約50mWの範囲の出力を発生させるものである請求項1記載のシステム。
- 該細管の平面列と、該光検出器との間に光学フィルターを更に配置させてなる請求項1記載のシステム。
- 該細管の平面列と、該光検出器との間にフラットフィールドレンズを更に配置させてなる請求項1記載のシステム。
- 該光源と、該細管の平面列との間にコリメータレンズを更に配置させてなる請求項1記載のシステム。
- マスク又はスリットを使用することなく、多数のサンプルを同時に分析するための多重吸光度式細管電気泳動システムであって、
入口端部と、出口端部とを有する細管の平面列と;
該細管を通過する光を検出するため、該細管の平面列を可視可能で、かつ、該細管の平面列と焦点が合う距離を以って、該細管の平面列と同軸的、かつ、平行に配置された光検出器と;
該細管の平面列中の細管間を通過する光の大部分が該光検出器に到達することがないようにして該光検出器と関連させて配置された光源と;
該細管の出口端部に操作可能に接続された真空源と;
を具備してなることを特徴とするシステム。 - 該光検出器が、該細管の平面列に対し垂直方向の細管の断面距離の少なくとも約10倍の距離を以って配置されている請求項15記載のシステム。
- 該光源が該光検出器との関連で偏って配置されている請求項15記載のシステム。
- 該光源の該光検出器に対する偏りが135°ないし180°の範囲内である請求項17記載のシステム。
- 該光源の該光検出器に対する偏りが160°ないし180°の範囲内である請求項17記載のシステム。
- 上記距離が約3cmないし約40cmである請求項15記載のシステム。
- 該細管の平面列が、少なくとも約10本の細管を有する請求項15記載のシステム。
- 該細管の平面列が、少なくとも約90本の細管を有する請求項15記載のシステム。
- 該光検出器が直線状フォトダイオード列である請求項15記載のシステム。
- 該光源が約180nmないし約1500nmの範囲の波長の光を発生させるものである請求項15記載のシステム。
- 該光源が約0.5mWないし約50mWの範囲の出力を発生させるものである請求項15記載のシステム。
- 該細管の平面列と、該光検出器との間に光学フィルターを更に配置させてなる請求項15記載のシステム。
- 該細管の平面列と、該光検出器との間にフラットフィールドレンズを更に配置させてなる請求項15記載のシステム。
- 該光源と、該細管の平面列との間にコリメータレンズを更に配置させてなる請求項15記載のシステム。
- 該細管の入口端に関連する別々の入口貯蔵部を有し、該細管の各出口端に共通の出口貯蔵部を有する請求項15記載のシステム。
- マスク又はスリットを使用することなく、多数のサンプルを同時に分析するための多重吸光度式細管電気泳動システムであって、
入口端部と、出口端部とを有する細管の平面列と;
該細管を通過する光を検出するため、該細管の平面列を可視可能で、かつ、該細管の平面列と焦点が合う距離を以って、該細管の平面列と同軸的、かつ、平行に配置された光検出器と;
該細管の平面列に向けて光が照射されるように配置された光源と;
該細管の出口端部に操作可能に接続された真空源と;
を具備してなることを特徴とするシステム。 - 該光検出器が、該細管の平面列に対し垂直方向の細管の断面距離の少なくとも約10倍の距離を以って配置されている請求項30記載のシステム。
- 上記距離が約3cmないし約40cmである請求項30記載のシステム。
- 該細管の平面列が、少なくとも約10本の細管を有する請求項30記載のシステム。
- 該細管の平面列が、少なくとも約90本の細管を有する請求項30記載のシステム。
- 該光検出器が直線状フォトダイオード列である請求項30記載のシステム。
- 該光源が約180nmないし約1500nmの範囲の波長の光を発生させるものである請求項30記載のシステム。
- 該光源が約0.5mWないし約50mWの範囲の出力を発生させるものである請求項30記載のシステム。
- 該細管の平面列と、該光検出器との間に光学フィルターを更に配置させてなる請求項30記載のシステム。
- 該細管の平面列と、該光検出器との間にフラットフィールドレンズを更に配置させてなる請求項30記載のシステム。
- 該光源と、該細管の平面列との間にコリメータレンズを更に配置させてなる請求項30記載のシステム。
- 該細管の入口端に関連する別々の入口貯蔵部を有し、該細管の各出口端に共通の出口貯蔵部を有する請求項30記載のシステム。
- 吸光度の検出により、多数のサンプルを同時に分析するための方法であって、
入口端部と、出口端部とを有すると共に、サンプルを充填してなる細管の平面列に対し、該サンプルにより吸収される少なくとも1つの波長の光を光源を用いて照射する工程と;
該光源と非同軸的に配置され、かつ、該細管の平面列と同軸的、かつ、平行に配置されると共に、該細管の平面列に対し垂直方向の細管の断面距離の少なくとも約10倍の距離を以って配置された光検出器を用いて光の吸収を検出する工程と;
を具備してなることを特徴とする方法。 - より迅速な分離を行うため、該細管の出口端部に対し、真空を適用する工程を更に具備してなる請求項42記載の方法。
- 上記距離が約3cmないし約40cmである請求項42記載の方法。
- 該細管の平面列が、少なくとも約10本の細管を有する請求項42記載の方法。
- 該細管の平面列が、少なくとも約90本の細管を有する請求項42記載の方法。
- 該光検出器が直線状フォトダイオード列である請求項42記載の方法。
- 該光源が約180nmないし約1500nmの範囲の波長の光を発生させるものである請求項42記載の方法。
- 該光源が約0.5mWないし約50mWの範囲の出力を発生させるものである請求項42記載の方法。
- 該細管の入口端に関連する別々の入口貯蔵部を有し、該細管の各出口端に共通の出口貯蔵部を有する請求項42記載の方法。
- 吸光度の検出により、多数のサンプルを同時に分析するための方法であって、
入口端部と、出口端部とを有すると共に、サンプルを充填してなる細管の平面列に対し、該サンプルにより吸収される少なくとも1つの波長の光を光源を用いて照射する工程と;
該細管の平面列と同軸的、かつ、平行に配置されると共に、該細管の平面列に対し垂直方向の細管の断面距離の少なくとも10倍の距離を以って配置された光検出器を用いて光の吸収を検出する工程と;
より迅速な分離を行うため、該細管の出口端部に対し、真空を適用する工程と;
を具備してなることを特徴とする方法。 - 該光検出器が該光源との関連で偏って配置されている請求項51記載の方法。
- 上記距離が約3cmないし約30cmである請求項51記載の方法。
- 該細管の平面列が、少なくとも約10本の細管を有する請求項51記載の方法。
- 該細管の平面列が、少なくとも約90本の細管を有する請求項51記載の方法。
- 該光検出器が直線状フォトダイオード列である請求項51記載の方法。
- 該光源が約180nmないし約1500nmの範囲の波長の光を発生させるものである請求項51記載の方法。
- 該光源が約0.5mWないし約50mWの範囲の出力を発生させるものである請求項51記載の方法。
- 該細管の入口端に関連する別々の入口貯蔵部を有し、該細管の各出口端に共通の出口貯蔵部を有する請求項51記載の方法。
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