JP2004043501A - 細胞障害性ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチン - Google Patents

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Abstract

【課題】細胞障害性Ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチンならびに薬用組成物を提供すること。
【解決手段】１０個〜４０個のアミノ酸および少なくとも１つの抗原決定基を有するペプチドと、ピメラウチド、トリメキサウチド、ヘキサデカン酸および２−アミノヘキサデカン酸からなる群より選ばれた少なくとも１種のものに由来する少なくとも１種の鎖、ならびに／または上記アミノ酸のα−ＮＨ２および／もしくはε−ＮＨ２官能基と結合したステロイド類、を含有する細胞障害性Ｔリンパ球誘導リポペプチド。
【選択図】なし
　

Description

　本発明は、新しい細胞障害性Ｔリンパ球誘導リポペプチドに関するものである。
　さらに、本発明は、リポペプチドのワクチンとしての使用に関するものである。
　使用されているほとんどのワクチンは、抗体を介した反応を誘起する。しかし、細胞障害性リンパ球は、種々の病原微生物から効率よくマウスを防護できることが示されている（例えば、非特許文献１及び２参照。）。このような防護能はサイトメガロウイルス感染により誘導されたヒト細胞障害性Ｔリンパ球についてもまた明らかにされている（例えば、非特許文献３及び４参照。）。しかしながら、リンパ球により惹起される免疫性については、ほとんど不明である。
　ある研究者は、オバルブミン由来のペプチドを使って、生体内に細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を誘導しようと試みた（例えば、非特許文献５及び６参照。）。これらの研究者達は免疫能を獲得することに成功したが、獲得された免疫能はオバルブミン由来のペプチドに対してだけの特異的なものであった。
　アイケルら（（１９９０年）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７１巻；１８１５ページ）は、不完全フロイドアジュバントに合成ペプチドを乳化したものをくり返し投与することにより、細胞障害性Ｔ細胞の反応性を引き出すことに成功した。彼らは、彼らの用いた免疫方法におけるアジュバントの重要性を指摘していない。しかし、彼らはそのような免疫反応を獲得するために、アジュバントが必要であることを示唆している。
　ＥＰ２０３，６７６号の出願では、いくつかのペプチド脂肪酸結合体からなるＴ細胞反応を誘導するのに使用されるワクチンについての記載がある。
　出願人の知る限り、デレスら（Ｎａｔｕｒｅ，３４２巻，３０ページ，１１月号，１９８９年）だけが、生体内で細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を誘導するために合成リポペプチドが有用であることを述べている。彼らの発表論文では、インフルエンザウイルスの核蛋白質ＮＰのアミノ酸残基の１４７番から１５８番までのペプチド断片が、トリパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システィニルセリルセリン（Ｐ３ＣＳＳ）に結合されている。このＮＰ１４７−１５８ペプチド−Ｐ３ＣＳＳ脂質結合体がインフルエンザウイルス感染標的細胞に対するＣＴＬ応答を誘起するが、ＮＰ１４７−１５８ペプチドだけ、あるいは、Ｓｅｒ　Ｓｅｒ−ＮＰ１４７−１５８ペプチドで免疫されたマウスには、このインフルエンザウイルスに対する細胞障害性Ｔリンパ球が誘起されないことが示されている。
　また、リポペプチドは、特異抗原に対する免疫反応を誘導するためにすでに使われているが、しかし、その誘導された反応はＴリンパ球の反応ではなく、抗体産生だけを意味していることを考慮しておかねばならない。ホップ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１巻，１３−１６ページ，１９８４年）はＢ型肝炎ウイルスの抗原決定基に対する抗体が、Ｂ型肝炎ウイルスの抗原決定基に相当する１５アミノ酸を含むペプチドと疑似脂質であるジパルミトイルリジンから成る分子で免疫したうさぎに獲得されることを示した。
　ＥＰ−９３　８５１の出願では、疎水性部分に結合するペプチド順列６ないし１５のアミンノ酸よりなるいくつかのリポペプチドが記載されている。この疎水性の部分は、パルミチン酸，ステアリン酸，ベヘン酸，オレイン酸，ミコール酸などのごとき脂肪酸とすることができる。ここにはこれらのリポペプチドが抗体合成を誘導することが示されている。
　ヴァイスミューラー３の文献（Ｖａｃｃｉｎｅ　第７巻，第１号，２９−３３，１９８９年）には抗体合成を誘導するためにＦＤＭＶ（ＶＰ１）ウイルスおよびＰ３ＣＳＳ脂質の配列の部分を有するリポペプチドの使用についての記載がある。
　ヤコブらの文献の要約文（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，第１０４巻，第２１号，４７２，要約１８４．４５５　Ｘ，１９８６）には破傷風毒素を含むリポペプチドによって抗体合成を誘導することが記載されている。
　ワタリらの文献の要約（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，第１０６巻，５１６ページ，要約第１５４　３８１，１９８７）には、パルミチル酸に結合するＨＳＶウイルスの糖蛋白ＤのＮ末端部分に対応するいくつかのペプチドの使用についての記載がある。ここには、反応するＴ細胞の誘導についての記載はあるが、この反応は細胞障害性Ｔリンパ球によるものではない。
　リポペプチドの合成および構造研究に関する他の二つの文献もある。
　国際出願ＷＯ　８９　１０３４８には、アミノシコサニル酸，アミノデカノイル酸，アミノテトラデカノイル酸，ボロモデカノイル酸，ボロモドデカノイル酸などのリポペプチド由来のいくつかの脂肪酸についての記載がある。
　これらの化合物は、ウイルスのアジュバントやキャリアとして使用できることが記載されているだけであり、これらの化合物を使用する手法については何も示されていない。
　マーシーらの文献の要約（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，第１０６巻，第２５号，２６４，要約第２０９，６４３，１９８７）には、ウイルスＧ蛋白質およびリジン−パルミトイル残基の断片よりなるリポペプチドの構造的解析についての記載がある。
シケールら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１９８２年，７９巻；９６８ページ リュカチャーら，Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８４年，１６０巻；８１４ページ クィンナンら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９８２年，３０７巻：７ページ ルックら，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９８４年，７６巻：３８５ページ カルボンら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６９巻：６０３ページ イシオカら，１９８９年，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３巻：１０９４ページ
　したがって、アジュバンドとの併用投与を必要とせず、高率に細胞障害性Ｔリンパ球の反応を誘導でき、かつ種々の抗原決定基に応用できる技術はいまだ開発されていないことが課題であった。
　出願人は、驚くべきことに、抗原に対する細胞障害性Ｔリンパ球の応答反応をただ１つの抗原決定基を含むリポペプチド複合体で免疫した生物体内に誘導することができた。
　さらに、驚くべきことに、出願人は、種々の病原体の多くの抗原決定基に対しても、その誘導作用を得ることができた。
　本発明に係わる細胞障害性Ｔリンパ球誘導リポペプチドは、１０個〜４０個のアミノ酸および少なくとも１つの抗原決定基を有するペプチドと、ピメラウチド、トリメキサウチド、ヘキサデカン酸および２−アミノヘキサデカン酸からなる群より選ばれた少なくとも１種のものに由来する少なくとも１種の鎖、ならびに／または上記アミノ酸のα−ＮＨ２および／もしくはε−ＮＨ２官能基と結合したステロイド類、を含有するものである。
　本発明に係わる細胞障害性Ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチンによれば、アジュバントとの併用投与を必ずしも必要とせず、高能率で細胞障害性Ｔリンパ球の反応を誘導することが可能であり、種々の病原因子の数多くの抗原決定基にも応用することが可能である。
　上記脂肪酸誘導体は次式（Ｉ）の２−アミノヘキサデカノイル酸（Ｄ，Ｌ）：
Figure 2004043501
　次式（ＩＩ）のＮ−−パルミトイルリジン（Ｌ）；
Figure 2004043501
　または次式（ＩＩ´）のその誘導体：
Figure 2004043501
　次式（ＩＩＩ）のＮ，Ｎ´−ジパルミトイルリジン（Ｌ）：
Figure 2004043501
　次式（ＩＶ）のピメラウチド（ｐｉｍｅｌａｕｔｉｄｅ）：
Figure 2004043501
　次式（Ｖ）のトリメキサウチド（ｔｒｉｍｅｘａｕｔｉｄｅ）：
Figure 2004043501
　あるいは、これらの誘導体の１つである。
　上記ステロイド群は次式（ＶＩ）のＮ−ε−［（コレスト−５−エニル−３−オキシ）アセチル］リジン（Ｌ）：
Figure 2004043501
　次式（ＶＩＩ）の（コレスト−５−エニル−３−オキシ）酢酸；
Figure 2004043501
　あるいはそれらの誘導体の一つである。
　ペプチド部分は、抗原決定基を持つ病原体由来の蛋白質断片である。
　そのような蛋白質は、特にＨＩＶ１あるいはＨＩＶ２ウイルスの蛋白質、特にＥＮＶ遺伝子によってエンコードされた蛋白質である。この場合、３１２−３２７と３０２−３３６断片は、結合したリポペプチド分子を形成するために、蛋白質のＨＩＶ１−ＢＲＵ配列（ハイヤース，Ｃ．Ａ．Ｂ．ロブソン，Ｓ．Ｆ．ジョセフス，Ｔ．Ｆ．スミスとＥ．ワング−スタール（編集），１９８９年，ヒト　レトロウイルスとＡＩＤＳ，ロス　アラモス研究所ＩＩ，５９ページ）に依存して都合よく使い分けられる。
　本発明は、さらに、上記リポペプチドの１つを含むウイルスや寄生虫に対するワクチンに関するものでもあり、特に、ＨＩＶウイルスに関連した疾患に対するワクチンに関するものであって、ＥＮＶ遺伝子の産物である蛋白質断片を好都合に含む場合のワクチンに関するものである。
　本発明はさらに、相容性および薬学的許容性のある１種もしくは複数種の希釈剤もしくはアジュバントと共に上述した化合物の少なくとも１つを有効量含有している薬用組成物に関するものである。
　これらの薬用組成物は細胞障害性Ｔリンパ球の誘導によるＨＩＶウイルスに関係する疾患の治療に使用される。
　本発明はさらに、細胞障害性Ｔリンパ球を誘導し、病原因子に対するヒトあるいは動物体の免疫能を獲得するための上記ポリペプチドの使用に関するものである。そのような病原因子は、強い細胞障害活性を持つウイルス、特に、ＨＩＶ１およびＨＩＶ２ウイルスやある種の寄生虫である。
　上記リポペプチドは、また、ある種の腫瘍細胞に特異的に反応するＣＴＬを誘導するため、ある種の癌に対しても使用できる。
　本発明に係わるリポペプチドは、当業者によって知られた方法で蛋白質と疑似脂肪から合成でき、特にその方法は、樹脂に固定された疑似脂肪にペプチド部分のアミノ酸を連結するいわば固相合成によるか、あるいは固相で合成されたペプチドに疑似脂肪を連結することにより行うことができる。
　本発明に係わるリポペプチドの注目すべき点は、どんな病原因子のいかなる抗原決定基に対しても、細胞障害性Ｔリンパ球誘導を可能にすることができ得ると考えられることである。
　さらに、本発明は次に示す合成中間体に関するものである。
　次式（ＶＩＩＩ）の２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノヘキサデカノイル酸（Ｄ．Ｌ）：
Figure 2004043501
　次式（ＩＸ）のＮ−α−ターブチルオキシカルボニル−ε−パルミトイルリジン（Ｌ）：
Figure 2004043501
　次式（Ｘ）のＮ−α−フルオレニルメチルオキシカルボニル−ε−パルミトイルリジン（Ｌ）：
Figure 2004043501
　次式（ＸＩ）のＮ−α−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−ε−［（コレスト−５−エニル−３−オキシ）アセチル］リジン（Ｌ）：
Figure 2004043501
　又は、次式（ＸＩＩ）のＮ−α−フルオレニルメチルオキシカルボニル−ε−［（コレスト−５−エニル−３−オキシ）アセチル］リジン（Ｌ）：
Figure 2004043501
　あるいはこれら誘導体の１つ。
実施例１
疑似脂質残量（または疎水性分子）の合成
　１．　２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノヘキサデカノイル酸の合成
　１．１．　２−アミノヘキサデカノイル酸の合成
分子式：Ｃ１６Ｈ３３ＮＯ２
分子量：２７１．４４
方法：０．０２９８モルの２−ブロモヘキサデカノイル酸（１０ｇ）と１００ｍｌの２８％をＮＨ４ＯＨ溶液を、５０％硝酸と１０％リン酸で前もって洗浄された圧力釜に入れる。攪拌後、圧力釜を６０℃で１５時間加熱する。発生したアミノ誘導体は反応液中で沈殿する。冷却後、圧力釜を洗浄し、水分散しそしてエタノール除去した。反応液を４号の多孔質ガラスロートで濾過する。エタノール液中での種々の生成物の溶解性の違いに基づいて、洗浄により２−ブロモヘキサデカノイル酸を除去できる。
回収沈殿量：４．３７ｇ，収率：５４％
注意：　アミノ誘導体の不溶性は多くの溶媒（水，エタノール，低温酢酸，７０％ギ酸，エチルアセテート，トルエン，トルエン／アセトニトリル，エチルアセテート／アセトニトリル）中で試験された。試みられたすべての溶解試験の中で、アミノ誘導体は特別な洗浄剤（水酸化トリメチルベンジルアンモニウム）あるいは煮沸酢酸にだけ溶解した。
　乾燥沈殿を、帯黄色の溶液が得られるまで還流した酢酸１５０ｍｌで処理する。有色素は植物性活性炭で吸着された。折り重ねた炉紙で濾過後、溶出液の結晶化操作により精製アミノ誘導体を得た。得られた白色結晶は、４号の多孔性ガラスロート上で冷酢酸による洗浄後、Ｐ２Ｏ５を入れたデシケーター内で乾燥された。
収率：４６％（酢酸塩としての生成物分子量は３３０．４８である。）
　純度は８５％であった。
　１．２．　２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノヘキサデカノイル酸の合成
−分子式：Ｃ２１Ｈ４１ＮＯ４
−分子量：３７１．５５７
−方法：
　２−アミノヘキサデカノイル酸の溶解
　１．１．　４０％“トリトン”（水酸化ベンジルトリメチルアンモニウム）メタノール溶液の１．１当量（２．９ｍｌ）と１００ｍｌＤＭＦを５ｍｍｏｌ（１．６５５ｇ）のアミノ酸酢酸塩に加えた。反応液が完全に溶解するまで室温で攪拌した。ＤＭＦを真空下で蒸発後、残留物をＰ２Ｏ５を入れたデシケーターで乾燥する。
　アミン官能基の保護
　乾燥残留物を３６ｍｌの水と８ｍｌの１Ｎ　ＫＨＣＯ３と３０ｍｌのｔｅｒｔ−ブチルアルコールの混合液に溶解し、２．５当量のターブチルカーボネート（分子量＝２１８．２５）をこの溶液に加える。１Ｎ　Ｎａ２ＣＯ３溶液でｐＨを８から９の間に調製し、反応初期数時間一定になるよう維持した。カップリングの状態は、シリカゲルを用いた薄層クロマトグラフィーで調べた。
　真空下でｔｅｒｔ−ブチルアルコールを蒸散後、生成物を１００ｍｌの水に溶解し、１Ｎ　ＨＣｌでその溶液のｐＨを３にした。Ｂｏｃ−アミノ酸をエチルアセテート（１００ｍｏｌ）で２回抽出し、有機層を蒸留水で洗浄後、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。この溶液を濾過後、ロータリーエバポレーターを用いて濃縮した。４ｍｌのヘキサンを油状残留物に加え、低温下でＢｏｃ−アミノ酸の結晶化を促進した。白色結晶を４号の多孔性ガラスロート上に回収し、ヘキサンで洗浄後、Ｐ２Ｏ５の入ったデシケーターで乾燥した。
収率：１６から１８％
　１．３．　　　精製と特性
　１．３．１．　精製
　再結晶化をくり返すことにより、純度を高めること（融点の上昇）が可能であった。精製により、アミノヘキサデカノイル酸の場合は２％、保護アミノ酸の場合は１％以上の収率の減少は認められなかった。
　１．３．２．　特性
Ａ．　融点
生成物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　融点測定値
２−ブロモヘキサデカノイル酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　５６℃
２−アミノヘキサデカノイル酸　　　　　　　　　　　　　　　　　１４４℃
２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノヘキサデカノイル酸　　８５℃
Ｂ．　シリカゲル薄層クロマトグラフィー
　溶液（１ｍｇ／ｍｌの濃度で１０から２０μｌ）を薄層シリカ上にスポットした（メルク社無蛍光シリカゲル６０）。
　２−ブロモヘキサデカノイル酸をエタノールに、２−アミノヘキサデカノイル酸を煮沸酢酸に、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−アミノヘキサデカノエートをジクロロメタンにぞれぞれ溶解した。
　展開溶媒の選択
　選択された種々の系は
系Ａ：ブタノール／エチルアセテート／酢酸／水，体積比：１／１／１／１
系Ｂ：エチルアセテート／ピリジン／酢酸／水，体積比：５／５／１／３
系Ｃ：クロロホルム／メタノール／酢酸，体積比：１０／１／０．１
　顕色
　適当な溶媒系で展開後、薄層を１２０℃，１５分間乾燥し、発色剤を噴霧した後、発色させた。
−　１級アミノ官能基に特異的に反応するニンヒドリン試薬は、保護されていないアミノヘキサデカノイル酸を検出できる。また、Ｂｏｃ−アミノ酸は、２０％酢酸噴霧後、１２０℃で乾燥することにより、Ｂｏｃ基が遊離されるのでやはりニンヒドリン試薬で検出可能となる。
　２０ｇの（ＮＨ４）２ＳＯ４，３ｍｌのＨ２ＳＯ４，１００ｍｌのＨ２Ｏの混合溶液の噴霧により、３つの生成物を同時に検出することができる。この技法において、薄層クロマトグラフィーの噴霧後の乾燥はエピラジエター（赤外線抵抗性磁器）を使って行った。
　　　結果
生成物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　溶媒　Ｒｆ値
２−ブロモヘキサデカノイル酸　　　　　　　　　　　　　　　系Ａ　０．５
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｂ　１
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｃ　１
２−アミノヘキサデカノイル酸　　　　　　　　　　　　　　　系Ａ　０．８２
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｂ　０．９４
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｃ　０
２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノ　　　　　　　
ヘキサデカノイル酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ａ　１
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｂ　１
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｃ　０．６７
Ｃ．質量分析（ＰＤＭＳ　ＢＩＯ−ＩＯＮ　２０）
２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノヘキサデカノイル酸スペクトラム
ＭＭ（ｇ）　　　（Ｍ−Ｈ）−　　　　断片
理論ＭＭ値　　　　３７０．５５７
実験測定ＭＭ値　　３７０．８　　　　２７０
　分子イオンの実験測定値と理論値は同じ分子量を示した。分子イオンは断片化され、Ｂｏｃ基（２７０のピーク）が遊離された。２９６．６のピークは、ＣＮ基（ニトロセルロース）を含む２７０の質量をもつイオンを表している。
　２．　３−（２´−カルボキシメトキシ）−コレスト−５−エンの合成
　２．１．　コレステリルトシレートの合成
−分子式　：Ｃ３４Ｈ５３ＳＯ３
−分子量：５４０．８３
−方法：２５．８６ｍｍｏｌのコレステロール（１０ｇ）を最少量のピリジン（５から１０ｍｌ）に溶解した後、過剰量のトシルクロライド（１０ｇ，５２．６ｍｍｏｌ）を加える。１２時間攪拌後、溶液を蒸発乾凅することにより、ピリジンを除いた。その残留物を２０ｍｌのアセトンに高温で溶解した（オイル形成を避けるための温度を５５℃以下に保つ）。反応混液を濾過し、濾液を結晶化させることによりコレステロールトシレートを回収した。回収した白色結晶を冷アセトンで洗浄し、Ｐ２Ｏ５の入ったデシケーターで乾燥した。
収率：８２から８５％
　２．２．　３β−（２´−ハイドロキシエトキシ）−コレスト−５−エンの合成
−分子式　：Ｃ２９Ｈ５０Ｏ２
−分子量：４３０．７１
−方法：３０ｍｌのエチルグリコール（４８０ｍｍｏｌ）を１７．５ｍｍｏｌのコレステリルトシレート（１０ｇ）の１２０ｍｌのジオキサン溶液に加えた。この反応混液を１２０℃で４時間還流し、冷却後１５０ｍｌの蒸留水に溶解した。形成されたアルコール誘導体をジエチルエーテル（３×２００ｍｌ）で抽出した。エーテル相を５％ＮａＨＣＯ３（２×２００ｍｌ）および蒸留水（２×２００ｍｌ）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後、エーテル溶液はオイル状になるまで濃縮された。４ｍｌのヘキサンを添加後、冷却チャンバー（４℃）の中でこすりあわせと冷却により、結晶化を開始した。白色結晶は４号の多孔性ガラスロートに回収され、ヘキサンで洗浄後、Ｐ２Ｏ５を入れたデシケーターで乾燥した。
収率：３２から３４％
　２．３．　３β−（２´−カルボキシメトキシ）−コレスト−５−エンの合成
−分子式　：Ｃ２９Ｈ４８Ｏ３
−分子量：４４４．６９
−方法：酸化溶液はあらかじめ次の様に調製した。２．６７ｇの無水クロム酸と２．３ｍｌの濃硫酸に蒸留水を加えて１０ｍｌにした。この酸化溶液を４．６６ｍｍｏｌ（２ｇ）の３β−（２´−ハイドロキシエトキシ）−コレスト−５−エンが溶解した５０ｍｌアセトン溶液に滴下した。反応の進行は薄層クロマトグラフィで検査した。一度反応が完結すると、反応液は２５０ｍｌの蒸留水に混和し、酸性誘導体をエチルアセテートで抽出した（３×２００ｍｌ）。その有機相を蒸留水で洗浄し（２×２００ｍｌ）、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水後、オイル状になるまで濃縮した。４ｍｌの石油エーテルを添加後、酸性誘導体の結晶化は、冷却チャンバー内（４℃）で冷却することにより促進された。白色結晶は４号の多孔性ガラスロートに回収され、石油エーテルで洗浄後、Ｐ２Ｏ５を入れたデシケーターで乾燥した。
収率：２９から３１％
　２．４．　　　精製と特性
　２．４．１．　精製
　コレステリル　Ｐ−トルエンスルホン酸をアセトン中でくり返し再結晶することにより精製した。β−（２´−ハイドロキシエトキシ）コレスト−５−エンとその酸性誘導体は、シリカゲル厚層クロマトグラフィーにより精製した。
Ａ．シカゲル厚層クロマトグラフィー
　試料の添加はシリカの厚層上に行われた（メルク社、蛍光指示薬付シリカゲル　６０　ＰＦ２５４）。スポットは、紫外線により検出された。
　ジクロロメタンに溶解した生成物の０．２５０ｍｇを含む溶液をシリカ板に置いた。
生成物　　　　　　　　　　　　　　　　　溶媒　　　　　　　Ｒｆ値
３β−（２´−ハイドロキシエト　　　　　石油エーテル／　　０．４８
キシ）−コレスト−５−エン　　　　　　　エチルエーテル
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　体積比：１／１
３β−（２´−カルボキシメトキ　　　　　石油エーテル／　　０．５２
シ）−コレスト−５−エン　　　　　　　　エチルエーテル／
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　メタノール
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｖ／Ｖ比：
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０／１０／３
　２つの生成物がシリカからメタノールで抽出された。生成物のおのおのに対してスポットされた量の約３０％相当量が失なわれた。
　２．４．２．　特性
Ａ．融点
生成物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　融点　　　　　　　　　融点
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（文献値）
コレステリル　パラ−トルエン−　　　
スルホン酸　　　　　　　　　　　　　１３１．５℃−１３２．５℃　１２８℃
３−（２´−ハイドロキシエトキシ）　１０２℃−１０４℃　　　　　　９９℃
３−（２´−カルボキシメトキシ）−
コレスト−５−エン　　　　　　　　　１６０−１６１℃　　　　　　１５７℃
Ｂ．薄層クロマトグラフィー
　１ｍｇ／ｍｌの溶液（１０から２０μｌ）を蛍光標識（メルク社　Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　６０Ｆ２５４）を含むシリカ薄層にスポットした。
　種々の生成分はジクロロメタンに溶解した。
　適当な溶媒系で展開後、薄層を室温で乾燥し、紫外線で検出するか、あるいは、ＨＣｌＯ４（２０％）噴霧の後オーブンで乾燥（１２０℃，２０分間）した。
　　　結果
種々の溶媒系
系Ａ：エチルエーテル／石油エーテル，体積比：１／１
系Ｂ：エチルエーテル／石油エーテル，体積比：１／２
系Ｃ：石油エーテル／エチルエーテル／メタノール，体積比：５／５／１
系Ｄ：石油エーテル／エチルエーテル，メタノール，体積比１０／１０／３
系Ｅ：石油エーテル／エチルエーテル／メタノール，体積比：５／５／２
系Ｆ：エチルエーテル
生成物　　　　　　　　　　　　　　　　　　溶媒系　　Ｒｆ値
コレステロール　　　　　　　　　　　　　　系Ａ　　　０．５４
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｂ　　　０．３
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｆ　　　０．９５
コレステリル−パラ−トルエンスルホン酸　　系Ａ　　　０．８５
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｂ　　　０．６２
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｆ　　　１
３β−（２´−ハイドロキシエトキシ）−　　
コレスト−５−エン　　　　　　　　　　　　系Ａ　　　０．４１
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｂ　　　０．２４
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｆ　　　０．９　
３−（２´−カルボキシメトキシ）−　　　　
コレスト−５−エン　　　　　　　　　　　　系Ａ　　　０　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｂ　　　０　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｃ　　　０．１　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｄ　　　０．４２
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｅ　　　０．７８
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｆ　　　筋状の結果：
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｒｆ　０→０．５
Ｃ．　マススペクトロメトリ−（ＰＤＭＳ）
３−（２´−カルボキシメトキシ）コレスト−５−エンの分析
ＭＭ（ｇ）　　　　（Ｍ−Ｈ）−
理論値ＭＭ　　　　４４３．６９
実験測定値ＭＭ　　４４３．１
　分子イオン分子量の測定値と理論値は同じであった。
Ｄ．　１３Ｃ核磁気共鳴
　３−（２´−カルボキシメトキシ）コレスト−５−エンのスペクトラムはコレステロールの１３Ｃ　ＮＭＲスペックトラムと比較することにより、分析された。
　コレステロールと３−（２´−カルボキシメトキシ）コレスト−５−エンは、重水素化したクロロホルムに溶解した。
　　　コレステロール　スペクトラム
ピーク　　　　測定値ｄ（ｐｐｍ）　属性　　　　　理論値ｄ（ｐｐｍ）
１　　　　　　１４０．７６０６　　Ｃ５又はＣ６　アルケン官能基：
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００から１４５
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｄ（ｐｐｍ）
２　　　　　　１２１．７０６４　　Ｃ５又はＣ６　
３　　　　　　　７８．５７１５　　ＣＤＣｌ３
４　　　　　　　７６．９９８１　　ＣＤＣｌ３
５　　　　　　　７５．４０１０　　ＣＤＣｌ３
１´から２０´　７１から１１　　　　　　　　　　アルカン官能基
　　　３β−（２´−カルボキシメトキシ）コレスト−５−エン　スペクトラム
ピーク　　　　測定値ｄ（ｐｐｍ）　属性　　　　　理論値ｄ（ｐｐｍ）
１　　　　　　１７２．２９２３　　Ｃ２´　　　　酸性官能基：
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１６０から１８５
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｄ（ｐｐｍ）
２　　　　　　１３９．８３９４　　Ｃ５又はＣ６　アルケン官能基：
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００から１４５
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｄ（ｐｐｍ）
３　　　　　　１２２．５２３３　　Ｃ５又はＣ６　アルケン官能基
４　　　　　　　８０．５７４５　　Ｃ１´　　　　エーテル官能基：
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４５から８０
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｄ（ｐｐｍ）
５　　　　　　　７９．２９４３　　Ｃ１´　　　　やや転置
６　　　　　　　７８．５９０３　　ＣＤＣ１３
７　　　　　　　７７．００８９　　ＣＤＣ１３
８　　　　　　　７５．４１４６　　ＣＤＣ１３
９から３１　　　６５から１１　　　　　　　　　　アルカン官能基
Ｅ．　元素分析
　３−（２´−カルボキシメトキシ）コレスト−５−エンの元素分析の結果は次のようになった。
　　　　　　理論値　　　実測値
％炭素　　　７８．３　　７６．２５
％水素　　　１０．９　　１０．９
％酸素　　　１０．８　　１２．５
実施例２：リポペプチドの合成
　Ｉ．　２−アミノヘキサデカノイル酸結合の方法
　細胞障害性Ｔ細胞の誘導を検討するために、ＨＩＶ−１　ＬＡＶ−ＢＲＵウイルスのｇｐ１２０蛋白質の３１２から３２７のアミノ酸配列をリポペプチド形成に用いた。このアミノ酸配列を用いて、３回の調製を行った。
　合成は固相で行われた（メリフィールド　Ｒ．Ｂ．，１９６３年，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５巻，２１４９−２２１０ページ）。
　すべてのリポペプチドはベンズヒドリルアミン樹脂（０．７２ミリモル／グラムを含む）上で合成された。すべての場合、始めに２−Ｂｏｃ−アミノヘキサデカノイル酸（２当量）を第一アミノ酸として結合した。この操作により、疎水性脂肪族鎖の近くに電荷を持つことをさけるため、Ｃ末端アミノ酸がアミド型の２−アミノヘキサデカノイル酸になった合成物を得ることができた。反応性部位を閉塞するための塩基性溶液中無水酢酸によるアセチル化の後、Ｎ−末端Ｂｏｃを開裂し、上記アミノ酸配列の第一アミノ酸の結合が行われた。
　すべてこれらの行程を手動で行った。その理由は、疑似脂質アミノ酸と後者の第一アミノ酸の結合を正確にコントロールできるようにするためであった。
　結合活性化因子として、ハイドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）の存在下でベンゾトリアゾリル−Ｎ−オキシトリアジメチルアミノホスホニウム（ＢＯＰ）を用いた。この効率的な結合方法により、これら２つの物質の結合反応の収率は、２−Ｂｏｃ−アミノヘキサデカノイル酸による立体障害にもかかわらずいつも９９．５％以上であった。
　残りの合成は常法に従って最後のアミノ酸まで自動的に行われた。この行程で、ペプチド−樹脂結合体は、３つの画分に手動で分けられた。
−　第１の画分は、そのまま保存された。
−　第２の画分は、２−Ｂｏｃ−アミノヘキサデカノイル酸を用いて伸長された。後者のＢＯＰを使った手動結合反応の後、Ｎ末端Ｂｏｃの開裂とすべてのアミノ官能基のアセチル化を行った。この操作により、疑似アミノ脂質の疎水性脂肪族鎖の近くに電荷を持つことをさけることができた。
−　第３の画分は、ｄｉＢｏｃとＮα，ε−リジンを使って伸長された。後者のＢＯＰを使った手動伸長反応の後、２つのＢｏｃ基の開裂とＢＯＰを使ったパルミチン酸の手動による結合を行った。この結果、我々はＮ末端部位にジパルミトイルリジンを持ったペプチドを得た。
　これら手動で行った結合反応は、つねに９９．５％以上の収率を得るような厳密な規制で行われた。これらの結果は、ペプチド合成における活性化剤としてのＢＯＰ（特に疑似脂肪アミノ酸を結合するとき、また、アミノ酸に結合するとき）の利用が有益であることを確認した。合成リポペプチドを支持体よりはずし、３１２−３２７アミノ酸配列由来のリポペプチドを無水ふっ化水素酸処理により開裂した。その開裂効率は低く、４０から７０％であった。
　これらの値について、少なくとも次の２つの事が考えられる。１）ベンズヒドリルアミン樹脂上で伸張されたペプチドの開裂は、通常条件下では完全ではなかった。２）樹脂と直接に接触している２−アミノヘキサデカノイル酸の存在がこの現象を助長している。
　２度のＴＦＡ−エータルによる洗浄後、リポペプチドの酸加水分解物のアミノ酸分析とＰＤＭ質量分析により、リポペプチドの同定を行った。リポペプチドの同質性は、シリカ薄層クロマトグラフィーと分析用逆相ＨＰＬＣで検査した。
ＩＩ．　ピメラウチドとトリメキサウチドの連結方法
１）　スクシニル連結を用いたピメラウチド（あるいはトリメキサウチド）のペプチドＮ末端への結合方法
　この方法は、樹脂に固定された固相状態で合成されたペプチドへ無保護のピメラウチド（あるいはトリメキサウチド）を固定するため、また、保護された側鎖に対して適用された。
　トリメキサウチドにもピメラウチド（Ｒｈｏｎｅ　Ｐｏｕｌｅｎｃ）にも遊離のカルボキシル官能基と第１級アミノ官能基がある。ペプチドとピメラウチド（あるいはトリメキサウチド）間に想定されるアミド結合を作るには、単にアミノパートナーとしてピメラウチド（あるいはトリメキサウチド）を用いることによってだけ成し遂げられる。
　樹脂上でのペプチドのスクシニル化ではピメラウチドをカルボキシルパートナーとして使うことができる。
脱保護
　樹脂上でペプチドＮ末端を一時的に保護するターブチルオキシカルボニル基は、ジクロロメタン中の４０％トリフルオロ酢酸の作用により、２０分の攪拌操作で開裂される。
　樹脂は以下のように洗浄された。
　−２０ｍｌのジクロロメタンで２回
　−２０ｍｌの５％ジイソプロピルエチルアミンのジクロロメタン溶液で２回
　−２０ｍｌのジメチルホルムアミドで２回（それぞれの洗浄は３分間）
スクシニル化
　スクシニル化溶液中の樹脂を次の試薬と反応することによりカップリング（連結）を３度行った。
　−５倍量の無水スクシニル酸（５％Ｎ−メチルピロリドン溶液）
　−樹脂のアミンモル数に相当するジイソプロピルエチルアミン（２０分間攪拌）
活性化
　樹脂上のカルボキシ基の活性化は次のように行われた。
　樹脂を次の活性化溶液に作用させた（室温で１５分間攪拌）。
　−ＢＯＰ（ベンゾトリアゾリルオキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン酸）：カルボキシルの３倍量
　−ＨＯＢＴ（ハイドロキシベンゾトリアゾール）：カルボキシルの３倍量
　−ジイソプロピルエチルアミン：Ｎ−メチルピロリドン溶液中カルボキシルの７倍量
洗浄
　溶液は次の様に洗浄した。
　−３０ｍｌのジメチルホルムアミドで３回
　−３０ｍｌのジクロロメタンで３回
カップリング（連結）
　樹脂は次のカップリング溶液で処理した。
　−ピメラウチド（あるいはトリメキサウチド）：ハイドロキシベンゾトリアゾールの活性化エステルの３倍量
　−ジイソプロピルエチルアミン：活性化エステルの３倍量
　−１０％ジメチルスルホキサイド
　−９０％Ｎ−メチルピロリドン：ピメラウチド（またはトリメキサウチド）を溶解するための十分量
　飽和溶液におけるピメラウチドあるいはトリメキサウチドの濃度は超音波処理と５０℃，２分間の保持の後、約４％であった。
　２）　スクシニルＶ３ＧＰ１２０，３１２−３２７の固相における合成
　ａ）　ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基によるピメラウチド（またはトリメキサウチド）のＮ−保護
　５００ミクロモルのピメラウチド（またはトリメキサウチド）を１０ｍｌの０．１モル炭酸緩衝溶液（ｐＨ９．５）に溶解した。
　１００ｍｍｏｌ／ｌのジターブチル　ピロカーボネート１０ｍｌを添加した。
　炭酸二ナトリウム添加により、１００時間の間ｐＨを９から１０に維持した。
　その後、反応液を１０ｍｌの水と１０ｍｌのジエチルエーテルで希釈し、洗浄水相を重硫酸カリウムでｐＨ２．５に調製した。
　１００ｍｌのジクロロメタンで抽出し、回転エバポレーターで溶媒を蒸発し、Ｂｏｃ−ピメラウチド（または、Ｂｏｃ−トリメキサウチド）の結晶を得た。
　固相ペプチド合成によりＢｏｃ−ピメラウチド（またはＢｏｃ−トリメキサウチド）の結合部位の違う２つの異性体を得た。
　ｂ）開裂と精製
　合成終了後、ペプチドの遊離は、無水フッ化水素酸を用いて行った。
　その後、ペプチドをゲル濾過とＣ４逆相分離ＨＰＬＣを用いて精製した。
　図１はＨＣＯＯＨに溶解した２０ｍｇのリポペプチドの２３５ｎｍの吸収における分離ＨＰＬＣ溶出パターンを示している。
　得られたリポペプチドは、酸加水分解，Ｃ４分析用ＨＰＬＣクロマトグラフィーおよび質量分析により解析した。
　図２は質量分析スペクトラムを示している。リポペプチドの質量に相当する２４２２．２の位置に明瞭なピークが見られた。
　図３ａと３ｂは、それぞれリポペプチドとリポペプチドを含まない対照の分析用Ｃ４ＨＰＬＣクロマトグラフィーによる溶出パターンを示している。
　クロマトグラフィーの条件は次の様である。
溶媒（Ａ）　：０．５　０／００　トリフルオロ酢酸
勾配：溶媒Ｂ：０．７５　０／００　アセトニトリル０．５％　トリフルオロ酢酸
１２０分間で１０から８０％のアセトニトリル勾配
２１５ｎｍの波長で測定
　酸加水分解の間、ピメラウチドとトリメキサウチドに含まれるジアミノピメル酸（Ｄａｐ）は、良い標準結合物質となった。
酸加水分解の結果
アミノ酸　　　　　　ナノモル　　　測定値　　理論値　測定値と理論値の比
スレオニン　　　　　３．２５００　０．９７　　１　　　０．９７／１
グルタミン酸　　　　７．１０００　２．１１　　２　　　１．０６／１
プロリン　　　　　　３．１８００　０．９５　　１　　　０．９５／１
グリシン　　　　　１０．３５００　３．０８　　３　　　１．０３／１
アルギニン　　　　　６．６９００　１．９９　　２　　　１．００／１
バリン　　　　　　　３．３９００　１．０１　　１　　　１．０１／１
イソロイシン　　　　９．５８００　２．８５　　３　　　０．９５／１
フェニルアラニン　　３．３５００　１．００　　１　　　１．００／１
リジン　　　　　　　３．５２００　１．０５　　１　　　１．０５／１
アルギニン　　　　　９．９２００　２．９５　　３　　　０．９８／１
Ｄａｐ　　　　　　　３．５００　　１．０５　　１　　　１．０５／１
実施例３
ＮＰ１４７−１５８ペプチドによる免疫
　マウスの免疫は次の様にして行った。
免疫方法
　分離したリポペプチドをマウスの腹腔（ｉ．ｐ）あるいは皮下（ｓ．ｃ）にアジュバントと共にまたは単独で投与した。
　ＣＴＬを誘導するためには少なくとも２回の投与（８日から３０日の間隔）が必要であった。
　１回の投与量はリポペプチド５×１０−８モルであった。
　ＣＴＬの検出
　最終投与の後８から２１日後、免疫されたマウスの脾臓を摘出し、脾臓細胞をリポペプチド合成に用いられたペプチドの５μＭを含む培養液（ＤＭＥＭ＋１０％ＦｅＳ＋ピルビン酸＋非必須アミノ酸＋β−２−メルカプトエタノール）に５×１０６細胞／２ｍｌの濃度で培養した。
　脾臓細胞培養５日目から、ＣＴＬ活性が既知の５１Ｃｒ放出試験（マルチノンら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２巻，３４８９〜３４９４ページ，１９８９年）により検出された。
　ＣＴＬ活性は、ペプチド（ＮＰ１４７−１５８Ｒ−，Ｐ３ＣＳＳ．ＰｅｐＮＰまたはＬ１−Ｐｅｐ．ＮＰ）の存在下でいくつかの同族標的細胞に対してまたはインフルエンザＡウイルスに感染したいくつかの同族標的細胞に対して試験した。
　得られた結果を表１にまとめた。表のはじめの部分は、インフルエンザウ
イルス粒子，インフルエンザウイルスＮＰ１４７−１５８Ｒ蛋白質、さらにＮＰ１４７−１５８ペプチドとトリパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイニルセリルセリンの結合物であるＰ３ＣＳＳ−ＰＥＰＮＰ（ＤＥＲＥＳら、前述）を用いてすでに得られた結果を示してある。
　一方、表の次の部分は、ＮＰ１４７−１５８ペプチドを含んだリポソームとリポペプチドＬ１，Ｌ２，Ｌ３を用いて行った免疫実験の結果を示している。これらのリポペプチドはペプチド部分（ＮＰ１４７−１５８）と脂質部分を含む分子であり、Ｌ１，Ｌ２そしてＬ３は以下の分子構造を有する。
Figure 2004043501
Figure 2004043501
Figure 2004043501
　投与後５日，１２日，２１日以降の細胞融解活性において、Ｌ１リポペプチドを用いた場合、他の試験よりも非常に高い活性を得ることができた。
実施例４
　ＥＮＶ３１２−３２７ペプチドによるＣＢ １ ，ＣＢ ２ およびＣＢ ３ での免疫
　このペプチドはＨＩＶウイルスのＥＮＶ遺伝子により記録された蛋白質である。
　実験方法は例３で述べた方法と同一である。
　表２に得られた結果をまとめた。
　この表にあるリポペプチドＣＢ１，ＣＢ２，ＣＢ３は、ＥＮＶ蛋白質由来のペプチドと脂質から合成された。
　ＣＢ１，ＣＢ２，ＣＢ３の分子構造式を以下に示す。
Figure 2004043501
Figure 2004043501
Figure 2004043501
　表２の結果は、用いたリポペプチドの１つ（ＣＢ１）において実質的活性が認められたことを示している。
実施例５
　ＥＮＶ３０２−３３５ペプチドによる免疫
　このペプチドはＨＩＶウイルスのＥＮＶ蛋白質３０２から３３５のアミノ酸残基から成るペプチド断片である。
　実験方法は例３で述べた方法と同じである。
　結果は表ＩＩＩに示した。
　リポペプチドＣＢ６，ＣＢ７，ＣＢ８の分子構造を次に示す。
Figure 2004043501
Figure 2004043501
Figure 2004043501
　表３では、２種のリポペプチドＣＢ６とＣＢ７が対照より高い細胞融解活性を示した。
実施例６
　ＣＢ １ ，ＣＢ ４ ，ＣＢ ５ ，ＣＢ １７ ，ＣＢ １９ ，ＣＢ ２１ およびＣＢ ２５ でのＥＮＶ３１２−３２７ペプチドによる免疫
　この実験方法は実施例３において述べたものとほとんど同じである。
　表４に得られた結果をまとめて示す。
　ＣＢ１の分子構造式は実施例４に示してある。
　ＣＢ４，ＣＢ５，ＣＢ１７，ＣＢ１９，ＣＢ２１およびＣＢ２５の構造式を以下に示す。
Figure 2004043501
Figure 2004043501
　ＣＢ１７の構造式に置いて、ＨＩＶ−１（ＬＡＶ−ＢＲＵ）の蛋白質ｇＰ１２０の３１２−３２７配列のＣ末端はカルボキシ形態にある。ヘキサデカノイルアミノ酸のラセミ化合物はＮ末端に結合している。Ｎ末端基はアミノ形態にある。
Figure 2004043501
Figure 2004043501
Figure 2004043501
Figure 2004043501
Figure 2004043501
Figure 2004043501
Figure 2004043501
ＨＣＯＯＨに溶解した２０ｍｇのリポペプチドの２３５ｎｍの吸収における分離ＨＰＬＣ溶出パターンを示す図である。 質量分析スペクトラムを示す図である。 図３ａ，図３ｂはそれぞれリポペプチドとリポペプチドを含まない対照の分析用Ｃ４　ＨＰＬＣクロマトグラフィーによる溶出パターンを示す図である。

Claims (17)

  1. 　１０個〜４０個のアミノ酸および少なくとも１つの抗原決定基を有するペプチドと、
    　ピメラウチド、トリメキサウチド、ヘキサデカン酸および２−アミノ−ヘキサデカン酸からなる群より選ばれた少なくとも１種のものに由来する少なくとも１種の鎖、
    　ならびに／または上記アミノ酸のα−ＮＨ２および／またはε−ＮＨ２官能基と結合したステロイド類、を含有することを特徴とする細胞障害性Ｔリンパ球誘導リポペプチド。
  2. 　ステロイド類がＮ−リジンであるである請求項１に記載のリポペプチド。
  3. 　ステロイド類が（コレスト−５−エニル−３−オキシ）酢酸である請求項１に記載のリポペプチド。
  4. 　ペプチドがＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２ウイルスの蛋白質断片である請求項１に記載のリポペプチド。
  5. 　温血動物（ただし、ヒトを除く）に十分な量のリポペプチドを投与して細胞障害性Ｔリンパ球を誘導するに当たり、
    　上記リポペプチドが１０個〜４０個のアミノ酸および少なくとも１つの抗原決定基を有するペプチドと、
    　ピメラウチド、トリメキサウチド、ヘキサデカン酸、２−アミノ−ヘキサデカン酸、ステロイド類ならびに上記アミノ酸のα−ＮＨ２および／またはε−ＮＨ２官能基と結合したステロイド類の誘導体からなる群より選ばれた少なくとも１種の鎖、を有することを特徴とする細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  6. 　鎖が２−アミノ−ヘキサデカン酸またはその誘導体である請求項５に記載の細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  7. 　ヘキサデカン酸がヘキサデカン酸またはその誘導体である請求項５に記載の細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  8. 　鎖がＮ−パルミトイルリジンである請求項５に記載の細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  9. 　ヘキサデカン酸誘導体がＮ，Ｎ’−ジパルミトイルリジンである請求項５に記載の細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  10. 　鎖がピメラウチドまたはトリメキサウチドである請求項５に記載の細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  11. 　ステロイド類がＮ−［（コレスト−５−エニル−３−オキシ）−アセチル］−リジンである請求項５に記載の細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  12. 　ステロイド類が（コレスト−５−エニル−３−オキシ）酢酸である請求項５に記載の細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  13. 　ペプチドがＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２ウイルスの蛋白質断片である請求項５に記載の細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  14. 　ペプチド部分が１０個〜２０個のアミノ酸を有する請求項５に記載の細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  15. 　温血動物（ただし、ヒトを除く）に十分な量のリポペプチドを投与して細胞障害性Ｔリンパ球を誘導するに当たり、
    　上記リポペプチドが１０個〜４０個のアミノ酸および少なくとも１つの抗原決定基を有するペプチドと、
    　ピメラウチド、トリメキサウチド、ヘキサデカン酸、２−アミノ−ヘキサデカン酸、ステロイド類ならびに上記アミノ酸のα−ＮＨ２官能基と結合したステロイド類の誘導体から成る群より選ばれた少なくとも１種の鎖、を有することを特徴とする細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  16. 　温血動物（ただし、ヒトを除く）に十分な量のリポペプチドを投与して細胞障害性Ｔリンパ球を誘導するに当たり、
    　上記リポペプチドが１０個〜４０個のアミノ酸および少なくとも１つの抗原決定基を有するペプチドと、
    　ピメラウチド、トリメキサウチド、ヘキサデカン酸、２−アミノ−ヘキサデカン酸、ステロイド類ならびに上記アミノ酸のε−ＮＨ２官能基と結合したステロイド類の誘導体から成る群より選ばれた少なくとも１種の鎖、を有することを特徴とする細胞障害性Ｔリンパ球の誘導方法。
  17. 　請求項１〜４のいずれか１つの項に記載のリポペプチドを含有することを特徴とする細胞障害性Ｔリンパ球誘導用ワクチン組成物。
    　
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