JPH04295498A - 細胞障害性ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチン - Google Patents

細胞障害性ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチン

Info

Publication number
JPH04295498A
JPH04295498A JP3335158A JP33515891A JPH04295498A JP H04295498 A JPH04295498 A JP H04295498A JP 3335158 A JP3335158 A JP 3335158A JP 33515891 A JP33515891 A JP 33515891A JP H04295498 A JPH04295498 A JP H04295498A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
lipopeptide
acid
cytotoxic
lipopeptides
peptide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP3335158A
Other languages
English (en)
Other versions
JP3821305B2 (ja
Inventor
Christophe Boutillon
ブーティヨン クリストフ
Frederic Martinon
マルティノン フレデリック
Christian Sergheraert
クリスティヤン・セルゲラーエル
Remy Magne
マニエ ルミ
Helene Gras-Masse
エレーヌ　グラ−マッス
Elisabeth Gomard
ゴマール エリザベット
Andre Tartar
タルタル アンドレ
Jean-Paul Levy
ルヴィ ジャン−ポル
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institut Pasteur de Lille
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Original Assignee
Institut Pasteur de Lille
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=9403372&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JPH04295498(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Institut Pasteur de Lille, Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM filed Critical Institut Pasteur de Lille
Publication of JPH04295498A publication Critical patent/JPH04295498A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP3821305B2 publication Critical patent/JP3821305B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/554—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being a steroid plant sterol, glycyrrhetic acid, enoxolone or bile acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
    • C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新しい細胞障害性Ｔリ
ンパ球誘導リポペプチドに関するものである。
【０００２】さらに、本発明は、リポペプチドのワクチ
ンとしての使用に関するものである。
【０００３】
【従来の技術】使用されているほとんどのワクチンは、
抗体を介した反応を誘起する。しかし、細胞障害性リン
パ球は、種々の病原微生物から効率よくマウスを防護で
きることが示されている（シケールら、Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１９８２年，７９巻
；９６８ページ；リュカチャーら，Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１
９８４年，１６０巻；８１４ページ）。このような防護
能はサイトメガロウイルス感染により誘導されたヒト細
胞障害性Ｔリンパ球についてもまた明らかにされている
（クィンナンら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９８２
年，３０７巻：７ページ；ルックら，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ
．１９８４年，７６巻：３８５ページ）。しかしながら
、リンパ球により惹起される免疫性については、ほとん
ど不明である。
【０００４】ある研究者は、オバルブミン由来のペプチ
ドを使って、生体内に細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）
を誘導しようと試みた（カルボンら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．１６９巻：６０３ページ，イシオカら，１９８９年
，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３巻：１０９４ページ）。 これらの研究者達は免疫能を獲得することに成功したが
、獲得された免疫能はオバルブミン由来のペプチドに対
してだけの特異的なものであった。
【０００５】アイケルら（（１９９０年）Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．１７１巻；１８１５ページ）は、不完全フロイ
ドアジュバントに合成ペプチドを乳化したものをくり返
し投与することにより、細胞障害性Ｔ細胞の反応性を引
き出すことに成功した。彼らは、彼らの用いた免疫方法
におけるアジュバントの重要性を指摘していない。しか
し、彼らはそのような免疫反応を獲得するために、アジ
ュバントが必要であることを示唆している。
【０００６】ＥＰ２０３，６７６号の出願では、いくつ
かのペプチド脂肪酸結合体からなるＴ細胞反応を誘導す
るのに使用されるワクチンについての記載がある。
【０００７】出願人の知る限り、デレスら（Ｎａｔｕｒ
ｅ，３４２巻，３０ページ，１１月号，１９８９年）だ
けが、生体内で細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を誘導
するために合成リポペプチドが有用であることを述べて
いる。彼らの発表論文では、インフルエンザウイルスの
核蛋白質ＮＰのアミノ酸残基の１４７番から１５８番ま
でのペプチド断片が、トリパルミトイル−Ｓ−グリセリ
ル−システィニルセリルセリン（Ｐ３ＣＳＳ）に結合さ
れている。このＮＰ１４７−１５８ペプチド−Ｐ３ＣＳ
Ｓ脂質結合体がインフルエンザウイルス感染標的細胞に
対するＣＴＬ応答を誘起するが、ＮＰ１４７−１５８ペ
プチドだけ、あるいは、Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ−ＮＰ１４７
−１５８ペプチドで免疫されたマウスには、このインフ
ルエンザウイルスに対する細胞障害性Ｔリンパ球が誘起
されないことが示されている。
【０００８】また、リポペプチドは、特異抗原に対する
免疫反応を誘導するためにすでに使われているが、しか
し、その誘導された反応はＴリンパ球の反応ではなく、
抗体産生だけを意味していることを考慮しておかねばな
らない。ホップ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ，２１巻，１３−１６ページ，１９８４年）は
Ｂ型肝炎ウイルスの抗原決定基に対する抗体が、Ｂ型肝
炎ウイルスの抗原決定基に相当する１５アミノ酸を含む
ペプチドと疑似脂質であるジパルミトイルリジンから成
る分子で免疫したうさぎに獲得されることを示した。
【０００９】ＥＰ−９３　　８５１の出願では、疎水性
部分に結合するペプチド順列６ないし１５のアミンノ酸
よりなるいくつかのリポペプチドが記載されている。こ
の疎水性の部分は、パルミチン酸，ステアリン酸，ベヘ
ン酸，オレイン酸，ミコール酸などのごとき脂肪酸とす
ることができる。ここにはこれらのリポペプチドが抗体
合成を誘導することが示されている。
【００１０】ヴァイスミューラー３の文献（Ｖａｃｃｉ
ｎｅ　　第７巻，第１号，２９−３３，１９８９年）に
は抗体合成を誘導するためにＦＤＭＶ（ＶＰ１）ウイル
スおよびＰ３ＣＳＳ脂質の配列の部分を有するリポペプ
チドの使用についての記載がある。
【００１１】ヤコブらの文献の要約文（Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ　　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，第１０４巻，第２１号，４
７２，要約１８４．４５５　　Ｘ，１９８６）には破傷
風毒素を含むリポペプチドによって抗体合成を誘導する
ことが記載されている。
【００１２】ワタリらの文献の要約（Ｃｈｅｍｉｃａｌ
　　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，第１０６巻，５１６ページ，
要約第１５４　　３８１，１９８７）には、パルミチル
酸に結合するＨＳＶウイルスの糖蛋白ＤのＮ末端部分に
対応するいくつかのペプチドの使用についての記載があ
る。 ここには、反応するＴ細胞の誘導についての記載はある
が、この反応は細胞障害性Ｔリンパ球によるものではな
い。
【００１３】リポペプチドの合成および構造研究に関す
る他の二つの文献もある。
【００１４】国際出願ＷＯ　　８９　　１０３４８には
、アミノシコサニル酸，アミノデカノイル酸，アミノテ
トラデカノイル酸，ボロモデカノイル酸，ボロモドデカ
ノイル酸などのリポペプチド由来のいくつかの脂肪酸に
ついての記載がある。
【００１５】これらの化合物は、ウイルスのアジュバン
トやキャリアとして使用できることが記載されているだ
けであり、これらの化合物を使用する手法については何
も示されていない。
【００１６】マーシーらの文献の要約（Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ　　Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，第１０６巻，第２５号，２
６４，要約第２０９，６４３，１９８７）には、ウイル
スＧ蛋白質およびリジン−パルミトイル残基の断片より
なるリポペプチドの構造的解析についての記載がある。
【００１７】
【発明が解決しようとする課題】したがって、アジュバ
ンドとの併用投与を必要とせず、高率に細胞障害性Ｔリ
ンパ球の反応を誘導でき、かつ種々の抗原決定基に応用
できる技術はいまだ開発されていないことが課題であっ
た。
【００１８】
【課題を解決するための手段】出願人は、驚くべきこと
に、抗原に対する細胞障害性Ｔリンパ球の応答反応をた
だ１つの抗原決定基を含むリポペプチド複合体で免疫し
た生物体内に誘導することができた。
【００１９】さらに、驚くべきことに、出願人は、種々
の病原体の多くの抗原決定基に対しても、その誘導作用
を得ることができた。
【００２０】本発明に係わる細胞障害性Ｔリンパ球誘導
リポペプチドは、約１０個と４０個の間のアミノ酸そし
て好ましくは約１０個と２０個の間のアミノ酸を有する
ペプチド部分を包含すると共に少なくとも１つの抗原決
定基を包含し、さらに１０個ないし２０個の炭素原子を
含む脂肪酸由来の１またはそれ以上の鎖および／または
前記アミノ酸の−ＮＨ２もしくは−ＮＨ２官能基に改質
されそして結合された１またはそれ以上のステロイド類
を包含するものである。
【００２１】上記脂肪酸誘導体は次式（Ｉ）の２−アミ
ノヘキサデカノイル酸（Ｄ，Ｌ）：
【化１】
【００２２】次式（ＩＩ）のＮ−−パルミトイルリジン
（Ｌ）；
【化２】
【００２３】または次式（ＩＩ´）のその誘導体：
【化
３】
【００２４】次式（ＩＩＩ）のＮ，Ｎ´−ジパルミトイ
ルリジン（Ｌ）：
【化４】
【００２５】次式（ＩＶ）のピメラウチド（ｐｉｍｅｌ
ａｕｔｉｄｅ）：
【化５】
【００２６】次式（Ｖ）のトリメキサウチド（ｔｒｉｍ
ｅｘａｕｔｉｄｅ）：
【化６】
【００２７】あるいは、これらの誘導体の１つである。
【００２８】上記ステロイド群は次式（ＶＩ）のＮ−ε
−［（コレスト−５−エニル−３−オキシ）アセチル］
リジン（Ｌ）：
【化７】
【００２９】次式（ＶＩＩ）の（コレスト−５−エニル
−３−オキシ）酢酸；
【化８】
【００３０】あるいはそれらの誘導体の一つである。
【００３１】ペプチド部分は、抗原決定基を持つ病原体
由来の蛋白質断片である。
【００３２】そのような蛋白質は、特にＨＩＶ１あるい
はＨＩＶ２ウイルスの蛋白質、特にＥＮＶ遺伝子によっ
てエンコードされた蛋白質である。この場合、３１２−
３２７と３０２−３３６断片は、結合したリポペプチド
分子を形成するために、蛋白質のＨＩＶ１−ＢＲＵ配列
（ハイヤース，Ｃ．Ａ．Ｂ．ロブソン，Ｓ．Ｆ．ジョセ
フス，Ｔ．Ｆ．スミスとＥ．ワング−スタール（編集）
，１９８９年，ヒトレトロウイルスとＡＩＤＳ，ロス　
　アラモス研究所ＩＩ，５９ページ）に依存して都合よ
く使い分けられる。
【００３３】本発明は、さらに、上記リポペプチドの１
つを含むウイルスや寄生虫に対するワクチンに関するも
のでもあり、特に、ＨＩＶウイルスに関連した疾患に対
するワクチンに関するものであって、ＥＮＶ遺伝子の産
物である蛋白質断片を好都合に含む場合のワクチンに関
するものである。
【００３４】本発明はさらに、相容性および薬学的許容
性のある１種もしくは複数種の希釈剤もしくはアジュバ
ントと共に上述した化合物の少なくとも１つを有効量含
有している薬用組成物に関するものである。
【００３５】これらの薬用組成物は細胞障害性Ｔリンパ
球の誘導によるＨＩＶウイルスに関係する疾患の治療に
使用される。
【００３６】本発明はさらに、細胞障害性Ｔリンパ球を
誘導し、病原因子に対するヒトあるいは動物体の免疫能
を獲得するための上記ポリペプチドの使用に関するもの
である。そのような病原因子は、強い細胞障害活性を持
つウイルス、特に、ＨＩＶ１およびＨＩＶ２ウイルスや
ある種の寄生虫である。
【００３７】上記リポペプチドは、また、ある種の腫瘍
細胞に特異的に反応するＣＴＬを誘導するため、ある種
の癌に対しても使用できる。
【００３８】本発明に係わるリポペプチドは、当業者に
よって知られた方法で蛋白質と疑似脂肪から合成でき、
特にその方法は、樹脂に固定された疑似脂肪にペプチド
部分のアミノ酸を連結するいわば固相合成によるか、あ
るいは固相で合成されたペプチドに疑似脂肪を連結する
ことにより行うことができる。
【００３９】本発明に係わるリポペプチドの注目すべき
点は、どんな病原因子のいかなる抗原決定基に対しても
、細胞障害性Ｔリンパ球誘導を可能にすることができ得
ると考えられることである。
【００４０】さらに、本発明は次に示す合成中間体に関
するものである。
【００４１】次式（ＶＩＩＩ）の２−ｔｅｒｔ−ブチル
オキシカルボニルアミノヘキサデカノイル酸（Ｄ．Ｌ）
：
【化９】
【００４２】次式（ＩＸ）のＮ−α−ターブチルオキシ
カルボニル−ε−パルミトイルリジン（Ｌ）：
【化１０
】
【００４３】次式（Ｘ）のＮ−α−フルオレニルメチル
オキシカルボニル−ε−パルミトイルリジン（Ｌ）：
【
化１１】
【００４４】次式（ＸＩ）のＮ−α−ｔｅｒｔ−ブチル
オキシカルボニル−ε−［（コレスト−５−エニル−３
−オキシ）アセチル］リジン（Ｌ）：
【化１２】
【００４５】又は、次式（ＸＩＩ）のＮ−α−フルオレ
ニルメチルオキシカルボニル−ε−［（コレスト−５−
エニル−３−オキシ）アセチル］リジン（Ｌ）：
【化１
３】
【００４６】あるいはこれら誘導体の１つ。
【００４７】
【実施例】
実施例１ 疑似脂質残量（または疎水性分子）の合成１．　　２−
ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノヘキサデカ
ノイル酸の合成 １．１．　　２−アミノヘキサデカノイル酸の合成分子
式　　：Ｃ１６Ｈ３３ＮＯ２ 分子量：２７１．４４ 方法：０．０２９８モルの２−ブロモヘキサデカノイル
酸（１０ｇ）と１００ｍｌの２８％をＮＨ４ＯＨ溶液を
、５０％硝酸と１０％リン酸で前もって洗浄された圧力
釜に入れる。攪拌後、圧力釜を６０℃で１５時間加熱す
る。発生したアミノ誘導体は反応液中で沈殿する。冷却
後、圧力釜を洗浄し、水分散しそしてエタノール除去し
た。反応液を４号の多孔質ガラスロートで濾過する。 エタノール液中での種々の生成物の溶解性の違いに基づ
いて、洗浄により２−ブロモヘキサデカノイル酸を除去
できる。
【００４８】回収沈殿量：４．３７ｇ，収率：５４％注
意：　　アミノ誘導体の不溶性は多くの溶媒（水，エタ
ノール，低温酢酸，７０％ギ酸，エチルアセテート，ト
ルエン，トルエン／アセトニトリル，エチルアセテート
／アセトニトリル）中で試験された。試みられたすべて
の溶解試験の中で、アミノ誘導体は特別な洗浄剤（水酸
化トリメチルベンジルアンモニウム）あるいは煮沸酢酸
にだけ溶解した。
【００４９】乾燥沈殿を、帯黄色の溶液が得られるまで
還流した酢酸１５０ｍｌで処理する。有色素は植物性活
性炭で吸着された。折り重ねた炉紙で濾過後、溶出液の
結晶化操作により精製アミノ誘導体を得た。得られた白
色結晶は、４号の多孔性ガラスロート上で冷酢酸による
洗浄後、Ｐ２Ｏ５を入れたデシケーター内で乾燥された
。
【００５０】収率：４６％（酢酸塩としての生成物分子
量は３３０．４８である。）純度は８５％であった。
【００５１】１．２．　　２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシ
カルボニルアミノヘキサデカノイル酸の合成−分子式　
　：Ｃ２１Ｈ４１ＮＯ４ −分子量：３７１．５５７ −方法：２−アミノヘキサデカノイル酸の溶解１．１．
　　４０％“トリトン”（水酸化ベンジルトリメチルア
ンモニウム）メタノール溶液の１．１当量（２．９ｍｌ
）と１００ｍｌＤＭＦを５ｍｍｏｌ（１．６５５ｇ）の
アミノ酸酢酸塩に加えた。反応液が完全に溶解するまで
室温で攪拌した。ＤＭＦを真空下で蒸発後、残留物をＰ
２Ｏ５を入れたデシケーターで乾燥する。
【００５２】アミン官能基の保護 乾燥残留物を３６ｍｌの水と８ｍｌの１Ｎ　　ＫＨＣＯ
３と３０ｍｌのｔｅｒｔ−ブチルアルコールの混合液に
溶解し、２．５当量のターブチルカーボネート（分子量
＝２１８．２５）をこの溶液に加える。１Ｎ　　Ｎａ２
ＣＯ３溶液でｐＨを８から９の間に調製し、反応初期数
時間一定になるよう維持した。カップリングの状態は、
シリカゲルを用いた薄層クロマトグラフィーで調べた。
【００５３】真空下でｔｅｒｔ−ブチルアルコールを蒸
散後、生成物を１００ｍｌの水に溶解し、１Ｎ　　ＨＣ
ｌでその溶液のｐＨを３にした。Ｂｏｃ−アミノ酸をエ
チルアセテート（１００ｍｏｌ）で２回抽出し、有機層
を蒸留水で洗浄後、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。この
溶液を濾過後、ロータリーエバポレーターを用いて濃縮
した。４ｍｌのヘキサンを油状残留物に加え、低温下で
Ｂｏｃ−アミノ酸の結晶化を促進した。白色結晶を４号
の多孔性ガラスロート上に回収し、ヘキサンで洗浄後、
Ｐ２Ｏ５の入ったデシケーターで乾燥した。
【００５４】収率：１６から１８％ １．３．　　　　　　精製と特性 １．３．１．　　精製 再結晶化をくり返すことにより、純度を高めること（融
点の上昇）が可能であった。精製により、アミノヘキサ
デカノイル酸の場合は２％、保護アミノ酸の場合は１％
以上の収率の減少は認められなかった。
【００５５】１．３．２．　　特性 Ａ．　　融点 生成物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　融点測定値２−ブロモヘキサデカノイル
酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　５６℃２−アミノヘキサデカ
ノイル酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　１４４℃２−ｔｅｒｔ−ブ
チルオキシカルボニルアミノヘキサデカノイル酸　　　
　８５℃Ｂ．　　シリカゲル薄層クロマトグラフィー溶
液（１ｍｇ／ｍｌの濃度で１０から２０μｌ）を薄層シ
リカ上にスポットした（メルク社無蛍光シリカゲル６０
）。
【００５６】２−ブロモヘキサデカノイル酸をエタノー
ルに、２−アミノヘキサデカノイル酸を煮沸酢酸に、ｔ
ｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−２−アミノヘキサデ
カノエートをジクロロメタンにぞれぞれ溶解した。
【００５７】展開溶媒の選択 選択された種々の系は 系Ａ：ブタノール／エチルアセテート／酢酸／水，体積
比：１／１／１／１ 系Ｂ：エチルアセテート／ピリジン／酢酸／水，体積比
：５／５／１／３ 系Ｃ：クロロホルム／メタノール／酢酸，体積比：１０
／１／０．１ 顕色 適当な溶媒系で展開後、薄層を１２０℃，１５分間乾燥
し、発色剤を噴霧した後、発色させた。
【００５８】−　　１級アミノ官能基に特異的に反応す
るニンヒドリン試薬は、保護されていないアミノヘキサ
デカノイル酸を検出できる。また、Ｂｏｃ−アミノ酸は
、２０％酢酸噴霧後、１２０℃で乾燥することにより、
Ｂｏｃ基が遊離されるのでやはりニンヒドリン試薬で検
出可能となる。
【００５９】２０ｇの（ＮＨ４）２ＳＯ４，３ｍｌのＨ
２ＳＯ４，１００ｍｌのＨ２Ｏの混合溶液の噴霧により
、３つの生成物を同時に検出することができる。この技
法において、薄層クロマトグラフィーの噴霧後の乾燥は
エピラジエター（赤外線抵抗性磁器）を使って行った。
【００６０】 　　　　　　結果 生成物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　溶媒　　Ｒｆ値２−ブロモヘキサデカノイル
酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　系Ａ　　０．５　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｂ　　
１　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　系Ｃ　　１２−アミノヘキサデカノ
イル酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　系Ａ　　０．８２　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系
Ｂ　　０．９４　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　系Ｃ　　０２−ｔｅｒ
ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノ　　　　　　　　
　　　　　　ヘキサデカノイル酸　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　系Ａ　　１　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｂ　　１　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　系Ｃ　　０．６７Ｃ．質量分析（
ＰＤＭＳ　　ＢＩＯ−ＩＯＮ　　２０）２−ｔｅｒｔ−
ブチルオキシカルボニル−アミノヘキサデカノイル酸ス
ペクトラム ＭＭ（ｇ）　　　　　　（Ｍ−Ｈ）−　　　　　　　　
断片理論ＭＭ値　　　　　　　　３７０．５５７実験測
定ＭＭ値　　　　３７０．８　　　　　　　　２７０分
子イオンの実験測定値と理論値は同じ分子量を示した。 分子イオンは断片化され、Ｂｏｃ基（２７０のピーク）
が遊離された。２９６．６のピークは、ＣＮ基（ニトロ
セルロース）を含む２７０の質量をもつイオンを表して
いる。
【００６１】２．　　　　　　３−（２´−カルボキシ
メトキシ）−コレスト−５−エンの合成 ２．１．　　コレステリルトシレートの合成−分子式　
　：Ｃ３４Ｈ５３ＳＯ３ −分子量：５４０．８３ −方法：２５．８６ｍｍｏｌのコレステロール（１０ｇ
）を最少量のピリジン（５から１０ｍｌ）に溶解した後
、過剰量のトシルクロライド（１０ｇ，５２．６ｍｍｏ
ｌ）を加える。１２時間攪拌後、溶液を蒸発乾凅するこ
とにより、ピリジンを除いた。その残留物を２０ｍｌの
アセトンに高温で溶解した（オイル形成を避けるための
温度を５５℃以下に保つ）。反応混液を濾過し、濾液を
結晶化させることによりコレステロールトシレートを回
収した。回収した白色結晶を冷アセトンで洗浄し、Ｐ２
Ｏ５の入ったデシケーターで乾燥した。
【００６２】収率：８２から８５％ ２．２．　　３β−（２´−ハイドロキシエトキシ）−
コレスト−５−エンの合成 −分子式　　：Ｃ２９Ｈ５０Ｏ２ −分子量：４３０．７１ −方法：３０ｍｌのエチルグリコール（４８０ｍｍｏｌ
）を１７．５ｍｍｏｌのコレステリルトシレート（１０
ｇ）の１２０ｍｌのジオキサン溶液に加えた。この反応
混液を１２０℃で４時間還流し、冷却後１５０ｍｌの蒸
留水に溶解した。形成されたアルコール誘導体をジエチ
ルエーテル（３×２００ｍｌ）で抽出した。エーテル相
を５％ＮａＨＣＯ３（２×２００ｍｌ）および蒸留水（
２×２００ｍｌ）で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥
後、エーテル溶液はオイル状になるまで濃縮された。 ４ｍｌのヘキサンを添加後、冷却チャンバー（４℃）の
中でこすりあわせと冷却により、結晶化を開始した。白
色結晶は４号の多孔性ガラスロートに回収され、ヘキサ
ンで洗浄後、Ｐ２Ｏ５を入れたデシケーターで乾燥した
。
【００６３】収率：３２から３４％ ２．３．　　３β−（２´−カルボキシメトキシ）−コ
レスト−５−エンの合成 −分子式　　：Ｃ２９Ｈ４８Ｏ３ −分子量：４４４．６９ −方法：酸化溶液はあらかじめ次の様に調製した。２．
６７ｇの無水クロム酸と２．３ｍｌの濃硫酸に蒸留水を
加えて１０ｍｌにした。この酸化溶液を４．６６ｍｍｏ
ｌ（２ｇ）の３β−（２´−ハイドロキシエトキシ）−
コレスト−５−エンが溶解した５０ｍｌアセトン溶液に
滴下した。反応の進行は薄層クロマトグラフィで検査し
た。一度反応が完結すると、反応液は２５０ｍｌの蒸留
水に混和し、酸性誘導体をエチルアセテートで抽出した
（３×２００ｍｌ）。その有機相を蒸留水で洗浄し（２
×２００ｍｌ）、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水後、オイル状
になるまで濃縮した。４ｍｌの石油エーテルを添加後、
酸性誘導体の結晶化は、冷却チャンバー内（４℃）で冷
却することにより促進された。白色結晶は４号の多孔性
ガラスロートに回収され、石油エーテルで洗浄後、Ｐ２
Ｏ５を入れたデシケーターで乾燥した。
【００６４】収率：２９から３１％ ２．４．　　　　　　精製と特性 ２．４．１．　　精製 コレステリル　　Ｐ−トルエンスルホン酸をアセトン中
でくり返し再結晶することにより精製した。β−（２´
−ハイドロキシエトキシ）コレスト−５−エンとその酸
性誘導体は、シリカゲル厚層クロマトグラフィーにより
精製した。
【００６５】Ａ．シカゲル厚層クロマトグラフィー試料
の添加はシリカの厚層上に行われた（メルク社、蛍光指
示薬付シリカゲル　　６０　　ＰＦ２５４）。スポット
は、紫外線により検出された。
【００６６】ジクロロメタンに溶解した生成物の０．２
５０ｍｇを含む溶液をシリカ板に置いた。
【００６７】 生成物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　溶媒　　　　　　　　　　　
　　　Ｒｆ値３β−（２´−ハイドロキシエト　　　　
　　　　　　石油エーテル／　　　　０．４８キシ）−
コレスト−５−エン　　　　　　　　　　　　　　エチ
ルエーテル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　体積比：１
／１３β−（２´−カルボキシメトキ　　　　　　　　
　　石油エーテル／　　　　０．５２シ）−コレスト−
５−エン　　　　　　　　　　　　　　　　エチルエー
テル／　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　メタノール　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　Ｖ／Ｖ比：　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　１０／１０／３２つの生成物がシリカ
からメタノールで抽出された。生成物のおのおのに対し
てスポットされた量の約３０％相当量が失なわれた。
【００６８】２．４．２．　　特性 Ａ．融点 生成物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　融点　　　　　　　
　　　　　　　　　　　融点　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　（文献値）コレステリル　　パラ−トルエン−　
　　　　　スルホン酸　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　１３１．５℃−１３２．５℃　
　１２８℃３−（２´−ハイドロキシエトキシ）　　１
０２℃−１０４℃　　　　　　　　　　　　９９℃３−
（２´−カルボキシメトキシ）−　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　コレスト−５−エン　　　　　　　　　　　　　
　　　　　１６０−１６１℃　　　　　　　　　　　　
１５７℃Ｂ．薄層クロマトグラフィー １ｍｇ／ｍｌの溶液（１０から２０μｌ）を蛍光標識（
メルク社　　Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　　６０Ｆ２５４）を
含むシリカ薄層にスポットした。
【００６９】種々の生成分はジクロロメタンに溶解した
。
【００７０】適当な溶媒系で展開後、薄層を室温で乾燥
し、紫外線で検出するか、あるいは、ＨＣｌＯ４（２０
％）噴霧の後オーブンで乾燥（１２０℃，２０分間）し
た。
【００７１】 　　　　　　結果 種々の溶媒系 系Ａ：エチルエーテル／石油エーテル，体積比：１／１
系Ｂ：エチルエーテル／石油エーテル，体積比：１／２
系Ｃ：石油エーテル／エチルエーテル／メタノール，体
積比：５／５／１系Ｄ：石油エーテル／エチルエーテル
，メタノール，体積比１０／１０／３系Ｅ：石油エーテ
ル／エチルエーテル／メタノール，体積比：５／５／２
系Ｆ：エチルエーテル 生成物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　溶媒系　　　　Ｒｆ値コ
レステロール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　系Ａ　　　　　　０．５４　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　系Ｂ　　　　　　０．３　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｆ　　　　　　０
．９５コレステリル−パラ−トルエンスルホン酸　　　
　系Ａ　　　　　　０．８５　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　系Ｂ　　　　　　０．６２　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　系Ｆ　　　　　　１３β−（２´−
ハイドロキシエトキシ）−　　　　コレスト−５−エン
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系
Ａ　　　　　　０．４１　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　系Ｂ　　　　　　０．２４　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　系Ｆ　　　　　　０．９　　３−（２´
−カルボキシメトキシ）−　　　　　　　　コレスト−
５−エン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　系Ａ　　　　　　０　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　系Ｂ　　　　　　０　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｃ　　　　　　
０．１　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　系Ｄ　
　　　　　０．４２　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　系Ｅ　　　　　　０．７８　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　系Ｆ　　　　　　筋状の結果：　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｒｆ　　
０→０．５Ｃ．　　マススペクトロメトリ−（ＰＤＭＳ
）３−（２´−カルボキシメトキシ）コレスト−５−エ
ンの分析 ＭＭ（ｇ）　　　　　　　　（Ｍ−Ｈ）−理論値ＭＭ　
　　　　　　　４４３．６９実験測定値ＭＭ　　　　４
４３．１ 分子イオン分子量の測定値と理論値は同じであった。
【００７２】Ｄ．　　１３Ｃ核磁気共鳴３−（２´−カ
ルボキシメトキシ）コレスト−５−エンのスペクトラム
はコレステロールの１３Ｃ　　ＮＭＲスペックトラムと
比較することにより、分析された。
【００７３】コレステロールと３−（２´−カルボキシ
メトキシ）コレスト−５−エンは、重水素化したクロロ
ホルムに溶解した。
【００７４】 　　　　　　コレステロール　　スペクトラムピーク　
　　　　　　　測定値ｄ（ｐｐｍ）　　属性　　　　　
　　　　　理論値ｄ（ｐｐｍ）１　　　　　　　　　　
　　１４０．７６０６　　　　Ｃ５又はＣ６　　アルケ
ン官能基：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　１００から１４５　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　ｄ（ｐｐｍ）２　　　　　　　　　
　　　１２１．７０６４　　　　Ｃ５又はＣ６　　３　
　　　　　　　　　　　　　７８．５７１５　　　　Ｃ
ＤＣｌ３４　　　　　　　　　　　　　　７６．９９８
１　　　　ＣＤＣｌ３５　　　　　　　　　　　　　　
７５．４０１０　　　　ＣＤＣｌ３１´から２０´　　
７１から１１　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　アルカン官能基　　　　　　３β−（２´−カルボキ
シメトキシ）コレスト−５−エン　　スペクトラムピー
ク　　　　　　　　測定値ｄ（ｐｐｍ）　　属性　　　
　　　　　　　理論値ｄ（ｐｐｍ）１　　　　　　　　
　　　　１７２．２９２３　　　　Ｃ２´　　　　　　
　　酸性官能基：　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　１６０から１８５　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　ｄ（ｐｐｍ）２　　　　　　
　　　　　　１３９．８３９４　　　　Ｃ５又はＣ６　
　アルケン官能基：　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　１００から１４５　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　ｄ（ｐｐｍ）３　　　　　
　　　　　　　１２２．５２３３　　　　Ｃ５又はＣ６
　　アルケン官能基４　　　　　　　　　　　　　　８
０．５７４５　　　　Ｃ１´　　　　　　　　エーテル
官能基：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　４５から８０　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　ｄ（ｐｐｍ）５　　　　　　　　　　　　
　　７９．２９４３　　　　Ｃ１´　　　　　　　　や
や転置６　　　　　　　　　　　　　　７８．５９０３
　　　　ＣＤＣ１３７　　　　　　　　　　　　　　７
７．００８９　　　　ＣＤＣ１３８　　　　　　　　　
　　　　　７５．４１４６　　　　ＣＤＣ１３９から３
１　　　　　　６５から１１　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　アルカン官能基Ｅ．　　元素分析 ３−（２´−カルボキシメトキシ）コレスト−５−エン
の元素分析の結果は次のようになった。
【００７５】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　理論値　　　　　　実測値　　　　　　　　
　　　　　　　　　　％炭素　　　　　　７８．３　　
　　７６．２５　　　　　　　　　　　　　　　　　　
％水素　　　　　　１０．９　　　　１０．９　　　　
　　　　　　　　　　　　　　％酸素　　　　　　１０
．８　　　　１２．５実施例２：リポペプチドの合成 Ｉ．　　２−アミノヘキサデカノイル酸結合の方法細胞
障害性Ｔ細胞の誘導を検討するために、ＨＩＶ−１　　
ＬＡＶ−ＢＲＵウイルスのｇｐ１２０蛋白質の３１２か
ら３２７のアミノ酸配列をリポペプチド形成に用いた。 このアミノ酸配列を用いて、３回の調製を行った。
【００７６】合成は固相で行われた（メリフィールド　
　Ｒ．Ｂ．，１９６３年，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ
．８５巻，２１４９−２２１０ページ）。
【００７７】すべてのリポペプチドはベンズヒドリルア
ミン樹脂（０．７２ミリモル／グラムを含む）上で合成
された。すべての場合、始めに２−Ｂｏｃ−アミノヘキ
サデカノイル酸（２当量）を第一アミノ酸として結合し
た。この操作により、疎水性脂肪族鎖の近くに電荷を持
つことをさけるため、Ｃ末端アミノ酸がアミド型の２−
アミノヘキサデカノイル酸になった合成物を得ることが
できた。反応性部位を閉塞するための塩基性溶液中無水
酢酸によるアセチル化の後、Ｎ−末端Ｂｏｃを開裂し、
上記アミノ酸配列の第一アミノ酸の結合が行われた。
【００７８】すべてこれらの行程を手動で行った。その
理由は、疑似脂質アミノ酸と後者の第一アミノ酸の結合
を正確にコントロールできるようにするためであった。
【００７９】結合活性化因子として、ハイドロキシベン
ゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）とジイソプロピルエチルア
ミン（ＤＩＥＡ）の存在下でベンゾトリアゾリル−Ｎ−
オキシトリアジメチルアミノホスホニウム（ＢＯＰ）を
用いた。この効率的な結合方法により、これら２つの物
質の結合反応の収率は、２−Ｂｏｃ−アミノヘキサデカ
ノイル酸による立体障害にもかかわらずいつも９９．５
％以上であった。
【００８０】残りの合成は常法に従って最後のアミノ酸
まで自動的に行われた。この行程で、ペプチド−樹脂結
合体は、３つの画分に手動で分けられた。
【００８１】−　　第１の画分は、そのまま保存された
。
【００８２】−　　第２の画分は、２−Ｂｏｃ−アミノ
ヘキサデカノイル酸を用いて伸長された。後者のＢＯＰ
を使った手動結合反応の後、Ｎ末端Ｂｏｃの開裂とすべ
てのアミノ官能基のアセチル化を行った。この操作によ
り、疑似アミノ脂質の疎水性脂肪族鎖の近くに電荷を持
つことをさけることができた。
【００８３】−　　第３の画分は、ｄｉＢｏｃとＮα，
ε−リジンを使って伸長された。後者のＢＯＰを使った
手動伸長反応の後、２つのＢｏｃ基の開裂とＢＯＰを使
ったパルミチン酸の手動による結合を行った。この結果
、我々はＮ末端部位にジパルミトイルリジンを持ったペ
プチドを得た。
【００８４】これら手動で行った結合反応は、つねに９
９．５％以上の収率を得るような厳密な規制で行われた
。これらの結果は、ペプチド合成における活性化剤とし
てのＢＯＰ（特に疑似脂肪アミノ酸を結合するとき、ま
た、アミノ酸に結合するとき）の利用が有益であること
を確認した。合成リポペプチドを支持体よりはずし、３
１２−３２７アミノ酸配列由来のリポペプチドを無水ふ
っ化水素酸処理により開裂した。その開裂効率は低く、
４０から７０％であった。
【００８５】これらの値について、少なくとも次の２つ
の事が考えられる。１）ベンズヒドリルアミン樹脂上で
伸張されたペプチドの開裂は、通常条件下では完全では
なかった。２）樹脂と直接に接触している２−アミノヘ
キサデカノイル酸の存在がこの現象を助長している。
【００８６】２度のＴＦＡ−エータルによる洗浄後、リ
ポペプチドの酸加水分解物のアミノ酸分析とＰＤＭ質量
分析により、リポペプチドの同定を行った。リポペプチ
ドの同質性は、シリカ薄層クロマトグラフィーと分析用
逆相ＨＰＬＣで検査した。
【００８７】ＩＩ．　　ピメラウチドとトリメキサウチ
ドの連結方法 １）　　スクシニル連結を用いたピメラウチド（あるい
はトリメキサウチド）のペプチドＮ末端への結合方法こ
の方法は、樹脂に固定された固相状態で合成されたペプ
チドへ無保護のピメラウチド（あるいはトリメキサウチ
ド）を固定するため、また、保護された側鎖に対して適
用された。
【００８８】トリメキサウチドにもピメラウチド（Ｒｈ
ｏｎｅ　　Ｐｏｕｌｅｎｃ）にも遊離のカルボキシル官
能基と第１級アミノ官能基がある。ペプチドとピメラウ
チド（あるいはトリメキサウチド）間に想定されるアミ
ド結合を作るには、単にアミノパートナーとしてピメラ
ウチド（あるいはトリメキサウチド）を用いることによ
ってだけ成し遂げられる。
【００８９】樹脂上でのペプチドのスクシニル化ではピ
メラウチドをカルボキシルパートナーとして使うことが
できる。
【００９０】脱保護 樹脂上でペプチドＮ末端を一時的に保護するターブチル
オキシカルボニル基は、ジクロロメタン中の４０％トリ
フルオロ酢酸の作用により、２０分の攪拌操作で開裂さ
れる。
【００９１】樹脂は以下のように洗浄された。
【００９２】−２０ｍｌのジクロロメタンで２回−２０
ｍｌの５％ジイソプロピルエチルアミンのジクロロメタ
ン溶液で２回 −２０ｍｌのジメチルホルムアミドで２回（それぞれの
洗浄は３分間） スクシニル化 スクシニル化溶液中の樹脂を次の試薬と反応することに
よりカップリング（連結）を３度行った。
【００９３】−５倍量の無水スクシニル酸（５％Ｎ−メ
チルピロリドン溶液） −樹脂のアミンモル数に相当するジイソプロピルエチル
アミン（２０分間攪拌） 活性化 樹脂上のカルボキシ基の活性化は次のように行われた。
【００９４】樹脂を次の活性化溶液に作用させた（室温
で１５分間攪拌）。
【００９５】−ＢＯＰ（ベンゾトリアゾリルオキシトリ
スジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン酸）
：カルボキシルの３倍量 −ＨＯＢＴ（ハイドロキシベンゾトリアゾール）：カル
ボキシルの３倍量 −ジイソプロピルエチルアミン：Ｎ−メチルピロリドン
溶液中カルボキシルの７倍量 洗浄 溶液は次の様に洗浄した。
【００９６】−３０ｍｌのジメチルホルムアミドで３回
−３０ｍｌのジクロロメタンで３回 カップリング（連結） 樹脂は次のカップリング溶液で処理した。
【００９７】−ピメラウチド（あるいはトリメキサウチ
ド）：ハイドロキシベンゾトリアゾールの活性化エステ
ルの３倍量 −ジイソプロピルエチルアミン：活性化エステルの３倍
量 −１０％ジメチルスルホキサイド −９０％Ｎ−メチルピロリドン：ピメラウチド（または
トリメキサウチド）を溶解するための十分量飽和溶液に
おけるピメラウチドあるいはトリメキサウチドの濃度は
超音波処理と５０℃，２分間の保持の後、約４％であっ
た。
【００９８】２）　　スクシニルＶ３ＧＰ１２０，３１
２−３２７の固相における合成 ａ）　　ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基によるピ
メラウチド（またはトリメキサウチド）のＮ−保護５０
０ミクロモルのピメラウチド（またはトリメキサウチド
）を１０ｍｌの０．１モル炭酸緩衝溶液（ｐＨ９．５）
に溶解した。
【００９９】１００ｍｍｏｌ／ｌのジターブチル　　ピ
ロカーボネート１０ｍｌを添加した。
【０１００】炭酸二ナトリウム添加により、１００時間
の間ｐＨを９から１０に維持した。
【０１０１】その後、反応液を１０ｍｌの水と１０ｍｌ
のジエチルエーテルで希釈し、洗浄水相を重硫酸カリウ
ムでｐＨ２．５に調製した。
【０１０２】１００ｍｌのジクロロメタンで抽出し、回
転エバポレーターで溶媒を蒸発し、Ｂｏｃ−ピメラウチ
ド（または、Ｂｏｃ−トリメキサウチド）の結晶を得た
。
【０１０３】固相ペプチド合成によりＢｏｃ−ピメラウ
チド（またはＢｏｃ−トリメキサウチド）の結合部位の
違う２つの異性体を得た。
【０１０４】ｂ）開裂と精製 合成終了後、ペプチドの遊離は、無水フッ化水素酸を用
いて行った。
【０１０５】その後、ペプチドをゲル濾過とＣ４逆相分
離ＨＰＬＣを用いて精製した。
【０１０６】図１はＨＣＯＯＨに溶解した２０ｍｇのリ
ポペプチドの２３５ｎｍの吸収における分離ＨＰＬＣ溶
出パターンを示している。
【０１０７】得られたリポペプチドは、酸加水分解，Ｃ
４分析用ＨＰＬＣクロマトグラフィーおよび質量分析に
より解析した。
【０１０８】図２は質量分析スペクトラムを示している
。リポペプチドの質量に相当する２４２２．２の位置に
明瞭なピークが見られた。
【０１０９】図３ａと３ｂは、それぞれリポペプチドと
リポペプチドを含まない対照の分析用Ｃ４ＨＰＬＣクロ
マトグラフィーによる溶出パターンを示している。
【０１１０】クロマトグラフィーの条件は次の様である
。
【０１１１】溶媒（Ａ）　　：０．５　　０／００　　
トリフルオロ酢酸 勾配：溶媒Ｂ：０．７５　　０／００　　アセトニトリ
ル０．５％　　トリフルオロ酢酸 １２０分間で１０から８０％のアセトニトリル勾配２１
５ｎｍの波長で測定 酸加水分解の間、ピメラウチドとトリメキサウチドに含
まれるジアミノピメル酸（Ｄａｐ）は、良い標準結合物
質となった。
【０１１２】 酸加水分解の結果 アミノ酸　　　　　　　　　　　　ナノモル　　　　　
　測定値　　　　理論値　　測定値と理論値の比スレオ
ニン　　　　　　　　　　３．２５００　　０．９７　
　　　１　　　　　　０．９７／１グルタミン酸　　　
　　　　　７．１０００　　２．１１　　　　２　　　
　　　１．０６／１プロリン　　　　　　　　　　　　
３．１８００　　０．９５　　　　１　　　　　　０．
９５／１グリシン　　　　　　　　　　１０．３５００
　　３．０８　　　　３　　　　　　１．０３／１アル
ギニン　　　　　　　　　　６．６９００　　１．９９
　　　　２　　　　　　１．００／１バリン　　　　　
　　　　　　　　　３．３９００　　１．０１　　　　
１　　　　　　１．０１／１イソロイシン　　　　　　
　　９．５８００　　２．８５　　　　３　　　　　　
０．９５／１フェニルアラニン　　　　３．３５００　
　１．００　　　　１　　　　　　１．００／１リジン
　　　　　　　　　　　　　　３．５２００　　１．０
５　　　　１　　　　　　１．０５／１アルギニン　　
　　　　　　　　９．９２００　　２．９５　　　　３
　　　　　　０．９８／１Ｄａｐ　　　　　　　　　　
　　　　３．５００　　　　１．０５　　　　１　　　
　　　１．０５／１実施例３ ＮＰ１４７−１５８ペプチドによる免疫マウスの免疫は
次の様にして行った。
【０１１３】免疫方法 分離したリポペプチドをマウスの腹腔（ｉ．ｐ）あるい
は皮下（ｓ．ｃ）にアジュバントと共にまたは単独で投
与した。
【０１１４】ＣＴＬを誘導するためには少なくとも２回
の投与（８日から３０日の間隔）が必要であった。
【０１１５】１回の投与量はリポペプチド５×１０−８
モルであった。
【０１１６】ＣＴＬの検出 最終投与の後８から２１日後、免疫されたマウスの脾臓
を摘出し、脾臓細胞をリポペプチド合成に用いられたペ
プチドの５μＭを含む培養液（ＤＭＥＭ＋１０％ＦｅＳ
＋ピルビン酸＋非必須アミノ酸＋β−２−メルカプトエ
タノール）に５×１０６細胞／２ｍｌの濃度で培養した
。
【０１１７】脾臓細胞培養５日目から、ＣＴＬ活性が既
知の５１Ｃｒ放出試験（マルチノンら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１４２巻，３４８９〜３４９４ページ，１９８９
年）により検出された。
【０１１８】ＣＴＬ活性は、ペプチド（ＮＰ１４７−１
５８Ｒ−，Ｐ３ＣＳＳ．ＰｅｐＮＰまたはＬ１−Ｐｅｐ
．ＮＰ）の存在下でいくつかの同族標的細胞に対してま
たはインフルエンザＡウイルスに感染したいくつかの同
族標的細胞に対して試験した。
【０１１９】得られた結果を表１にまとめた。表のはじ
めの部分は、インフルエンザウイルス粒子，インフルエ
ンザウイルスＮＰ１４７−１５８Ｒ蛋白質、さらにＮＰ
１４７−１５８ペプチドとトリパルミトイル−Ｓ−グリ
セリルシステイニルセリルセリンの結合物であるＰ３Ｃ
ＳＳ−ＰＥＰＮＰ（ＤＥＲＥＳら、前述）を用いてすで
に得られた結果を示してある。
【０１２０】一方、表の次の部分は、ＮＰ１４７−１５
８ペプチドを含んだリポソームとリポペプチドＬ１，Ｌ
２，Ｌ３を用いて行った免疫実験の結果を示している。 これらのリポペプチドはペプチド部分（ＮＰ１４７−１
５８）と脂質部分を含む分子であり、Ｌ１，Ｌ２そして
Ｌ３は以下の分子構造を有する。
【０１２１】
【化１４】
【０１２２】
【化１５】
【０１２３】
【化１６】
【０１２４】投与後５日，１２日，２１日以降の細胞融
解活性において、Ｌ１リポペプチドを用いた場合、他の
試験よりも非常に高い活性を得ることができた。
【０１２５】実施例４ ＥＮＶ３１２−３２７ペプチドによるＣＢ１，ＣＢ２お
よびＣＢ３での免疫 このペプチドはＨＩＶウイルスのＥＮＶ遺伝子により記
録された蛋白質である。
【０１２６】実験方法は例３で述べた方法と同一である
。
【０１２７】表ＩＩに得られた結果をまとめた。
【０１２８】この表にあるリポペプチドＣＢ１，ＣＢ２
，ＣＢ３は、ＥＮＶ蛋白質由来のペプチドと脂質から合
成された。
【０１２９】ＣＢ１，ＣＢ２，ＣＢ３の分子構造式を以
下に示す。
【０１３０】
【化１７】
【０１３１】
【化１８】
【０１３２】
【化１９】
【０１３３】表ＩＩの結果は、用いたリポペプチドの１
つ（ＣＢ１）において実質的活性が認められたことを示
している。
【０１３４】実施例５ ＥＮＶ３０２−３３５ペプチドによる免疫このペプチド
はＨＩＶウイルスのＥＮＶ蛋白質３０２から３３５のア
ミノ酸残基から成るペプチド断片である。
【０１３５】実験方法は例３で述べた方法と同じである
。
【０１３６】結果は表ＩＩＩに示した。
【０１３７】リポペプチドＣＢ６，ＣＢ７，ＣＢ８の分
子構造を次に示す。
【０１３８】
【化２０】
【０１３９】
【化２１】
【０１４０】
【化２２】
【０１４１】表ＩＩＩでは、２種のリポペプチドＣＢ６
とＣＢ７が対照より高い細胞融解活性を示した。
【０１４２】実施例６ ＣＢ１，ＣＢ４，ＣＢ５，ＣＢ１７，ＣＢ１９，ＣＢ２
１およびＣＢ２５でのＥＮＶ３１２−３２７ペプチドに
よる免疫 この実験方法は実施例３において述べたものとほとんど
同じである。
【０１４３】表４に得られた結果をまとめて示す。
【０１４４】ＣＢ１の分子構造式は実施例４に示してあ
る。
【０１４５】ＣＢ４，ＣＢ５，ＣＢ１７，ＣＢ１９，Ｃ
Ｂ２１およびＣＢ２５の構造式を以下に示す。
【０１４６】
【化２３】
【０１４７】
【化２４】
【０１４８】ＣＢ１７の構造式に置いて、ＨＩＶ−１（
ＬＡＶ−ＢＲＵ）の蛋白質ｇＰ１２０の３１２−３２７
配列のＣ末端はカルボキシ形態にある。ヘキサデカノイ
ルアミノ酸のラセミ化合物はＮ末端に結合している。 Ｎ末端基はアミノ形態にある。
【０１４９】
【化２５】
【０１５０】
【化２６】
【０１５１】
【化２７】
【０１５２】
【表１】
【０１５３】
【表２】
【０１５４】
【表３】
【０１５５】
【表４】
【０１５６】
【発明の効果】本発明に係わる細胞障害性Ｔリンパ球誘
導リポペプチドおよびワクチンによれば、アジュバント
との併用投与を必ずしも必要とせず、高能率で細胞障害
性Ｔリンパ球の反応を誘導することが可能であり、種々
の病原因子の数多くの抗原決定基にも応用することが可
能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＨＣＯＯＨに溶解した２０ｍｇのリポペプチド
の２３５ｎｍの吸収における分離ＨＰＬＣ溶出パターン
を示す図である。
【図２】質量分析スペクトラムを示す図である。
【図３】図３ａ，図３ｂはそれぞれリポペプチドとリポ
ペプチドを含まない対照の分析用Ｃ４　　ＨＰＬＣクロ
マトグラフィーによる溶出パターンを示す図である。

Claims (16)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】　　約１０個と４０個の間のアミノ酸そし
    て好ましくは約１０個と２０個の間のアミノ酸を有する
    ペプチド部分を包含すると共に少なくとも１つの抗原決
    定基を包含し、さらに１０個ないし２０個の炭素原子を
    含む脂肪酸由来の１またはそれ以上の鎖および／または
    前記アミノ酸の−ＮＨ２もしくは−ＮＨ２官能基に改質
    されそして結合された１またはそれ以上のステロイド類
    を包含することを特徴とする細胞障害性Ｔリンパ球誘導
    リポペプチド。
  2. 【請求項２】　　脂肪酸由来の鎖が２−アミノヘキサデ
    カノイル酸もしくはその誘導体の１つである請求項１に
    記載のリポペプチド。
  3. 【請求項３】　　脂肪酸由来の鎖がＮ−−パルミトイル
    リジンもしくはその誘導体の１つである請求項１に記載
    のリポペプチド。
  4. 【請求項４】　　脂肪酸由来の鎖がＮ，Ｎ´−ジパルミ
    トイルリジンである請求項３に記載のリポペプチド。
  5. 【請求項５】　　脂肪酸由来の鎖がピメラウチドもしく
    はトリメキサウチドもしくはそれらの誘導体の１つであ
    る請求項１に記載のリポペプチド。
  6. 【請求項６】　　ステロイド類がＮ−ε−［（コレスト
    −５−エニル−３−オキシ）−アセチル］リジンもしく
    はその誘導体の１つである請求項１に記載のリポペプチ
    ド。
  7. 【請求項７】　　ステロイド類が（コレスト−５−エニ
    ル−３−オキシ）酢酸もしくはその誘導体の１つである
    請求項１に記載のリポペプチド。
  8. 【請求項８】　　ペプチド部分がＨＩＶ１もしくはＨＩ
    Ｖ２ウイルスの蛋白質断片である請求項１ないし７のい
    ずれかに記載のリポペプチド。
  9. 【請求項９】　　ペプチド部分がＥＮＶ遺伝子によって
    エンコードされている蛋白質断片、とくに３１２−３２
    ７断片もしくは３０２−３３６断片である請求項８に記
    載のリポペプチド。
  10. 【請求項１０】　　請求項１ないし９のいずれかに記載
    のリポペプチドの１つを含む病原因子に対するワクチン
    。
  11. 【請求項１１】　　ＨＩＶウイルスに関連した疾患に対
    するものであって、請求項８ないし９のいずれかに記載
    の１もしくは複数のリポペプチドを含む請求項１０に記
    載のワクチン。
  12. 【請求項１２】　　細胞障害性Ｔリンパ球を誘導してヒ
    トあるいは動物体に病原因子に対する免疫能を付与する
    医薬品を製造するための請求項１ないし９のいずれかに
    記載のリポペプチドの使用。
  13. 【請求項１３】　　病原因子がウイルス、特にＨＩＶ１
    およびＨＩＶ２ウイルスであり、免疫付与が請求項８な
    いし９のいずれかに記載のリポペプチドにより実行され
    る請求項１２に記載のリポペプチドの使用。
  14. 【請求項１４】　　病原因子が寄生虫である請求項１２
    に記載のリポペプチドの使用。
  15. 【請求項１５】　　相容性および薬学的許容性のある１
    種もしくは複数種の希釈剤もしくはアジュバントと共に
    請求項１ないし９に記載の少なくとも１つの化合物を有
    効量含有していることを特徴とする薬用組成物。
  16. 【請求項１６】　　細胞障害性Ｔリンパ球の誘導による
    ＨＩＶウイルスに関係する疾患の治療に使用されること
    を特徴とする請求項１５に記載の薬用組成物。
JP33515891A 1990-12-18 1991-12-18 細胞障害性ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチン Expired - Lifetime JP3821305B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR90:15870 1990-12-18
FR9015870A FR2670787B1 (fr) 1990-12-18 1990-12-18 Lipopeptides inducteurs des lymphocytes t cytotoxiques et utilisation comme vaccins.

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2003356295A Division JP2004043501A (ja) 1990-12-18 2003-10-16 細胞障害性ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチン

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH04295498A true JPH04295498A (ja) 1992-10-20
JP3821305B2 JP3821305B2 (ja) 2006-09-13

Family

ID=9403372

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP33515891A Expired - Lifetime JP3821305B2 (ja) 1990-12-18 1991-12-18 細胞障害性ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチン
JP2003356295A Pending JP2004043501A (ja) 1990-12-18 2003-10-16 細胞障害性ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチン

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2003356295A Pending JP2004043501A (ja) 1990-12-18 2003-10-16 細胞障害性ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチン

Country Status (10)

Country Link
EP (3) EP0491628B1 (ja)
JP (2) JP3821305B2 (ja)
AT (1) ATE185148T1 (ja)
CA (1) CA2057828C (ja)
DE (1) DE69131662T2 (ja)
DK (1) DK0491628T3 (ja)
ES (1) ES2137160T3 (ja)
FR (1) FR2670787B1 (ja)
GR (1) GR3031889T3 (ja)
SG (1) SG63621A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002506001A (ja) * 1997-12-03 2002-02-26 アンスティテュ ナスィヨナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 免疫反応の誘導とその治療応用のための混合リポペプチドミセル

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0547681A2 (en) * 1991-12-18 1993-06-23 Merck & Co. Inc. Synthetic peptides comprising a cyclic HIV principal neutralizing determinant and a lipopeptide
FR2776926B1 (fr) * 1998-04-07 2003-10-24 Inst Nat Sante Rech Med Lipopeptides inducteurs de cytotoxicite t lymphocytaire portant au moins un epitope t auxiliaire, et leurs utilisations pour la vaccination
FR2821556B1 (fr) * 2001-03-02 2003-04-25 Aventis Pasteur Utilisation de lipopeptides pour l'immunotherapie des sujets vih+
ES2424131T3 (es) 2001-03-27 2013-09-27 Oncothyreon Inc. Vacuna para modular respuestas inmunitarias entre T1 y T2
TWI395591B (zh) 2004-04-01 2013-05-11 Oncothyreon Inc 黏液性糖蛋白（ｍｕｃ-１）疫苗
DK1896051T3 (en) 2005-06-28 2015-01-05 Oncothyreon Inc PROCESS FOR THE TREATMENT OF PATIENTS WITH A mucinous glycoprotein (MUC1) vaccine
WO2010104747A2 (en) 2009-03-10 2010-09-16 Baylor Research Institute Antigen presenting cell targeted vaccines
AU2010222928B2 (en) 2008-07-16 2012-11-29 Baylor Research Institute Antigen presenting cell targeted vaccines
DK2406286T3 (en) 2009-03-10 2016-08-22 Baylor Res Inst Anti-cd40 antibodies and uses thereof
CA2825972A1 (en) 2011-02-24 2012-08-30 Oncothyreon Inc. Muc1 based glycolipopeptide vaccine with adjuvant
WO2012135132A1 (en) 2011-03-25 2012-10-04 Baylor Research Institute Compositions and methods to immunize against hepatitis c virus
US9107904B2 (en) 2012-04-05 2015-08-18 Massachusetts Institute Of Technology Immunostimulatory compositions and methods of use thereof
JP7037884B2 (ja) 2014-01-13 2022-03-17 ベイラー リサーチ インスティテュート Ｈｐｖ及びｈｐｖ関連疾患に対する新規のワクチン
US10300145B2 (en) 2016-07-15 2019-05-28 Massachusetts Institute Of Technology Synthetic nanoparticles for delivery of immunomodulatory compounds
US10610585B2 (en) 2017-09-26 2020-04-07 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and compositions for treating and preventing HIV

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ZA831547B (en) * 1982-03-15 1984-10-31 New York Blood Center Inc Fatty acid carriers for synthetic vaccines
ATE72123T1 (de) * 1985-04-19 1992-02-15 Wistar Inst Impfstoff fuer die erzeugung einer gegen ein virus schuetzenden immunogenen t-zellen-antwort.
EP0306912A3 (en) * 1987-09-08 1989-07-05 Albany Medical College Immunogenic composites capable of selectively inducing antibody production and pharmaceutical compositions employing the same.
GB2217319A (en) * 1988-04-19 1989-10-25 Synpharm Ltd Racemic and optically active fatty amino acids, their homo- abd hetero-oligomers and conjugates, the process of their production, their pharmaceutical composi

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002506001A (ja) * 1997-12-03 2002-02-26 アンスティテュ ナスィヨナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 免疫反応の誘導とその治療応用のための混合リポペプチドミセル

Also Published As

Publication number Publication date
JP3821305B2 (ja) 2006-09-13
FR2670787A1 (fr) 1992-06-26
CA2057828A1 (en) 1992-06-19
EP0945461A1 (fr) 1999-09-29
EP0491628B1 (fr) 1999-09-29
DE69131662D1 (de) 1999-11-04
FR2670787B1 (fr) 1995-06-23
ES2137160T3 (es) 1999-12-16
CA2057828C (en) 2007-06-12
EP0491628A3 (fr) 1992-07-22
ATE185148T1 (de) 1999-10-15
EP0491628A2 (fr) 1992-06-24
DK0491628T3 (da) 2000-04-10
EP1065212A2 (fr) 2001-01-03
JP2004043501A (ja) 2004-02-12
GR3031889T3 (en) 2000-02-29
DE69131662T2 (de) 2000-04-06
SG63621A1 (en) 1999-11-16
EP1065212A3 (fr) 2001-01-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3821305B2 (ja) 細胞障害性ｔリンパ球誘導リポペプチドおよびワクチン
JP2594259B2 (ja) 膜アンカー／活性化合物接合体およびその製法
DEFOORT et al. A rational design of synthetic peptide vaccine with a built‐in adjuvant: A modular approach for unambiguity
Deprez et al. Comparative efficiency of simple lipopeptide constructs for in vivo induction of virus-specific CTL
WJESMÜLLER et al. Solid phase peptide synthesis of lipopeptide vaccines eliciting epitope‐specific B‐, T‐helper and T‐killer cell response
Zeng et al. Totally synthetic lipid-containing polyoxime peptide constructs are potent immunogens
JPH01146891A (ja) モノホスホリルリピドａの誘導体
US5871746A (en) Cytotoxic T lymphocyte-inducing lipopeptides and use as vaccines
US6074650A (en) Membrane anchor/active compound conjugate, its preparation and its uses
US6024964A (en) Membrane anchor/active compound conjugate, its preparation and its uses
Metzger et al. Synthetic S‐(2, 3‐dihydroxypropyl)‐cysteinyl peptides derived from the N‐terminus of the cytochrome subunit of the photoreaction centre of Rhodopseudomonas viridis enhance murine splenocyte proliferation
Drijfhout et al. A new synthetic functionalized antigen carrier
EP0339695A2 (en) A process for preparing an antigenic or immunogenic conjugate as well as the use of such conjugates
HU195620B (en) Process for producing conjugates with immunogenic effect and built up from haptenes and muramylpeptides and pharmaceutics comprising these conjugates
Huang et al. Lipophilic multiple antigen peptide system for peptide immunogen and synthetic vaccine
JP2006514981A (ja) Ｇｐ１２０特異抗原、その結合体；その調製と使用のための方法
US5993823A (en) Cytotoxic T lymphocyte-inducing lipopeptides and methods of use
Zeng et al. Synthesis of a new template with a built‐in adjuvant and its use in constructing peptide vaccine candidates through polyoxime chemistry
IE904051A1 (en) Synthetic vaccine for the specific induction of cytotoxic T-lymphocytes
Deprez et al. Pimelautide or trimexautide as built-in adjuvants associated with an HIV-1-derived peptide: synthesis and in vivo induction of antibody and virus-specific cytotoxic T-lymphocyte-mediated response
IT9019914A1 (it) Composti immunogenici, il procedimento per la loro sintesi e loro impiego per la preparazione di vaccini antimalaria
JP2001513120A (ja) ペプチドを含むポリマー
GB2282813A (en) Annular antigen scaffolds comprising thioether linkages
ES2322253T3 (es) Utilizacion de mezclas de lipopeptidos para la fabricacion de vacunas.
JPH026410A (ja) 口蹄疫に対する合成ワクチンおよびその製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
A911 Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911

Effective date: 20031127

A912 Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912

Effective date: 20040220

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20050404

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20050408

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20050705

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20050705

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20060224

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20060421

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20060615

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090630

Year of fee payment: 3

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100630

Year of fee payment: 4