JP2004041042A

JP2004041042A - 抗ｄｎａモノクローナル抗体及びその産生ハイブリドーマ

Info

Publication number: JP2004041042A
Application number: JP2002201064A
Authority: JP
Inventors: Yoshiaki Onishi; 大西　芳秋
Original assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Current assignee: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology AIST
Priority date: 2002-07-10
Filing date: 2002-07-10
Publication date: 2004-02-12
Anticipated expiration: 2022-07-10
Also published as: JP3837510B2

Abstract

【課題】ＤＮＡの塩基配列の特異的認識性がなく、ＤＮＡ一般を識別可能な抗ＤＮＡモノクローナル抗体を提供する。
【課題解決手段】ＨｅＬａ細胞の核ホルマリン固定化物を抗原として、マウス脾細胞を免疫感作して得られた細胞、とミエローマ細胞とを融合して得たハイブリドーマから、上記特性を有する抗ＤＮＡモノクローナル抗体を得る。

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、塩基配列の特異的認識性がなく、長さ認識性を有する抗ＤＮＡモノクローナル抗体及びその産生ハイブリドーマに関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＤＮＡは生体内において異物として認識されにくいため抗原性が低く、動物に免役する通常の方法によりＤＮＡに対する抗体を作成することは、従来困難であった。しかしながら自己免疫疾患である全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ；　Ｓｙｓｔｅｍｉｃ　Ｌｕｐｕｓ　Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）の患者血清中には多くの高結合性抗ＤＮＡ抗体が存在していることが知られている。これらの中には一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＤＮＡ、Ｚ−ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ポリＡＤＰリボース等を認識する抗体が含まれている事が判明しており、またその他の自己免疫疾患患者血清中においてはヒストン、ＨＭＧタンパク、リボヌクレオプロテイン、ＲＮＡポリメレース、ｔＲＮＡ合成酵素、トポイソメレース等に対する抗体が含まれている事が既に報告されている。これら自己免疫疾患患者において見られる自己抗体がどのようにして作製されるのかは未だ充分解明されていないが、死細胞の核分解物が抗原刺激となっていると予想されている。
【０００３】
また、核分解産物の一つであるヌクレオソームは、抗ＤＮＡ抗体の作製を助けるＴ細胞を刺激することも報告されている。そこでこれまで多くの場合、抗ＤＮＡ抗体はＳＬＥ患者より供与された血清を用いて精製により得ることが多かった。この場合、抗体価、抗原ＤＮＡの特徴ならびに抗原に対する親和性、抗原抗体反応速度等の抗体の特徴が患者血清のロットの差が顕著であり、同一規格の抗体の安定供給を行うことが非常に困難であった。また日本においてはＳＬＥ患者の血清を入手することは困難であり、これら生体試料を全て輸入に頼ることは倫理面においても問題があった。また近年自己免疫疾患モデルマウス（ＭＲＬ／ｌｐｒマウスやＮＺＢ／ＮＺＷマウス）より脾細胞を調製し、これを用いて抗ＤＮＡモノクローナル抗体の作製も行われている。しかしながら本方法で得られる抗ＤＮＡモノクローナル抗体のクローン数は限られており、得られるモノクローナル抗体の種類も限定されている。
【０００４】
さらに、従来の抗ＤＮＡモノクローナル抗体についての技術は、主にＤＮＡの塩基配列を特異的に認識する抗体の開発に向けられていたため、該抗体は特定の塩基配列を有する遺伝子の研究等にしか使えずその汎用性は低いものであった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
一方、ＤＮＡを、その塩基配列レベルで識別しなくとも、ＤＮＡ一般を識別する抗体は、例えばアフィニティクロマトにより、タンパク質、ＲＮＡあるいはその他夾雑物からＤＮＡのみ容易にかつ精度よく分離するために有用な手段であり、さらに後記する多様な用途に使用できるものである。そこで本発明の課題は、ＤＮＡの塩基配列の特異的認識性がなく、ＤＮＡ一般を識別可能な抗ＤＮＡ抗体を、上記従来技術等における血清等からの分離手段によらず、モノクローナル抗体として提供することにあり、また、このため、該抗体を容易にかつ多量に生産しうるハイブリドーマを提供しようとするものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明者等は、鋭意研究の結果、ＨｅＬａ細胞の核ホルマリン固定化物の破砕物を抗原として、マウス脾細胞を免疫感作して得られた細胞とミエローマ細胞とを融合して得られたハイブリドーマをスクリーニングすることにより、ＤＮＡの塩基配列の特異的認識性がなく、ＤＮＡ一般を識別可能な抗ＤＮＡモノクローナル抗体を高率に産生するとともに、かつ増殖性に優れたクローンを見いだし本発明を完成させるに至ったものである。
【０００７】
すなわち、本発明は以下（１）及び（２）に係るものである。
（１）　　ＨｅＬａ細胞の核ホルマリン固定化物の破砕物を抗原とし、ハイブリドーマ法により得られた抗ＤＮＡモノクローナル抗体であって、ＤＮＡの塩基配列に対する特異的認識性がなく、かつ、１０００塩基対以上の２本鎖ＤＮＡを認識する、長さ認識性を有する抗ＤＮＡモノクローナル抗体。
（２）　　ＨｅＬａ細胞の核ホルマリン固定化物の破砕物を抗原として、マウス脾細胞を免疫感作して得られた細胞とミエローマ細胞とを融合して得られたものであって、請求項１に記載の抗ＤＮＡモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ（ＦＥＲＭ　Ｐ−１８９１３）。
【０００８】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体は、ＨｅＬａ細胞の核ホルマリン固定化物の破砕物を抗原とし、ハイブリドーマ法により得られたものであるが、この製法についてさらに具体的に説明する。
使用する抗原は、ＨｅＬａ細胞から核を分離精製し、ホルムアルデヒドにより核内構造を固定化した後、超音波により破砕し断片化したものである。
該抗原による免疫感作は、マウスより取り出した脾細胞を用い、Ｂｏｓｓの方法（Ｂｏｓｓ，　Ｂ．　Ｄ．　（１９８４）　Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ．，　２９１，　１９３−１９６）に従って、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで行った。
【０００９】
Ｂｏｓｓの方法とは抗体を作製するにあたり、通常のマウスやウサギに抗原を免役する方法に代わり、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいて免疫感作する方法である。本方法の長所としては、▲１▼少ない抗原量においても免役することが可能、▲２▼免疫期間が短い、▲３▼通常の動物に感作した場合に観察される免疫寛容や免疫抑制を避けることができ、抗原性に依存することなく抗体を作製することが可能、▲４▼毒性の強い抗原においても免疫が可能、▲５▼免役した動物に対して為害性を示す抗体についても作成可能といった事があげられる。Ｂ細胞の抗体産生を誘導するためにはマクロファージ、Ｔ細胞による抗原提示やシグナルクロストークが必要とされるが、脾細胞中にはＢ細胞を始めとしてこれらの細胞が含まれている。そこでマウスより脾細胞を調製し、無血清培地中でアジュバントであるＮ−ａｃｅｔｙｌ−ｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−ａｌａｎｙｌ−Ｄ−ｉｓｏｇｌｕｔａｍｉｎｅと共に抗原刺激を行い、培地中で免疫感作する。
【００１０】
次いで上記免疫感作された脾細胞とミエローマ細胞をポリエチレングリコールにより細胞融合させ、常法により、ＨＡＴ培地でハイブリドーマを選別し、さらに希釈法により得たハイブリドーマの各クローンの培養上澄みを、上記抗原の核ホルマリン固定化物を使用した酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により測定し陽性のハイブリドーマクローンを得る。さらに得られたクローンについて、ＨｅＬａ細胞核を細分化した、ＤＮＡ画分、ヌクレオソーム画分、ヒストン画分、核マトリックス画分を用いたＥＬＩＳＡにより認識抗原の決定を行い、ＤＮＡ画分に特異的に陽性反応を示すハイブリドーマクローンを得る。この後、抗体産生能力及び増殖性が良好なクローンをさらにスクリーニングし、本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを得る。
【００１１】
本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体産生ハイブリドーマ（ｍＡｂ　Ｄ−１−１）は、独立行政法人　産業技術総合研究所　特許生物寄託センターに受託番号　ＦＥＲＭ　Ｐ−１８９１３として寄託されている。
上記ハイブリドーマから得られた本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体は、一本鎖、二本鎖ＤＮＡに対しても同じように認識することができ、また特別な特異配列認識性は見られなかった。しかし、ＤＮＡの長さ選択性を有しており、二本鎖ＤＮＡにおいては１０００塩基対以上のＤＮＡに対して認識し、５００塩基対以下のＤＮＡは全く認識しない。また一本鎖ＤＮＡに対しても、１０００塩基対以上のＤＮＡを認識する。
【００１２】
本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体は、１本鎖あるいは２本鎖ＤＮＡの塩基配列に基づかず、これらＤＮＡ一般を認識するものであるから、例えばに本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体を使用したアフィニティクロマトを行うことにより、塩基配列の相違によらず、各種細胞破砕物等から１０００塩基対以上のｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡやｐｌａｓｍｉｄＤＮＡ等のＤＮＡのみを容易に分離精製できる。極めて汎用性に富む。また、該抗ＤＮＡ抗体を固定化した金薄膜チップを用いて、外からＤＮＡ溶液を加えたときの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ　；　Ｓｕｒｆａｃｅ　Ｐｌａｓｍｏｎ　Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）を測定することにより、本ＤＮＡ抗体と結合したＤＮＡ量を知ることができる。またチップ等の固相上に合成されたＤＮＡに対しては、該抗ＤＮＡ抗体を反応させた後、反応した抗体量を、２次抗体を用いて間接的に測定するか、もしくは該抗ＤＮＡ抗体を蛍光標識等でラベルすることにより直接測定することにより各種試料中の一本鎖および二本鎖ＤＮＡの定量を行うことができる。
【００１３】
本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体は上記用途のほかにも様々な用途に使用できる。これらについて以下に例示する。
（ａ）自己免疫疾患研究用モデルマウスの作製
ヒト自己免疫疾患、特にＳＬＥ患者血清中には、抗ＤＮＡ抗体が存在していることが知られている。またこれら疾患のモデルマウス（ＮＺＢ　ｘ　ＮＺＷ）Ｆ１、ＭＲＬ、ＢＸＳＢなどにおいても同様に、血清中に抗ＤＮＡ抗体が存在している。この血清中の抗ＤＮＡ抗体量と臨床症状に相関関係があり、抗ＤＮＡ抗体が自己免疫疾患の何らかの原因になっていると考えられている（Ｓｔｏｌｌａｒ，　Ｂ．　Ｄ．，　ＦＡＳＥＢ　Ｊ．　（１９９４），　８，　３３７−３４２）。またＳＬＥにおいて見られる抗ＤＮＡ抗体が、ＮＲ２グルタミン酸受容体と反応することが判明し、これによりＳＬＥにおける神経症状が誘起されることが示された（ＤｅＧｉｏｒｇｉｏ，　Ｌ．　Ａ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　（２００１），　７，　１１８９−１１９３）。よって今回樹立された抗ＤＮＡモノクローナル抗体をマウスに接種することにより、自己免疫疾患研究用モデルマウスが作成可能となる。
【００１４】
（ｂ）細胞毒性物質の評価
培養細胞を、種々の細胞毒性物質で処理すると、細胞が死滅していく。この時死細胞核内から培地中に放出される遺伝子ＤＮＡを、本抗ＤＮＡモノクローナル抗体を用い、上記の手法で定量することにより、生細胞率（死滅率）を測定することができ、これにより、細胞毒性物質の評価を行うことができる。
【００１５】
（ｃ）ＰＣＲ反応時の偽反応物の生成の防止
ＰＣＲ法においては、反応時においては偽反応物の生成がしばしば問題になっている。これは多くの場合、一番最初の反応時に、溶液温度が上昇していく途中にプライマーがミスアニールしてしまうことに起因している。そこでＴａｑ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅに対する抗体を用いて不活化させておき、ある一定温度に達すると抗体が外れＴａｑ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅが活性化される方法がとられている。
これに対して、本抗ＤＮＡモノクローナル抗体を用いれば、抗体自身が基質ＤＮＡを保持しプライマーとのアニーリングを阻害することが可能となる。反応液がある一定温度に達すると抗体が外れ通常のＰＣＲ反応を行うことができ、本方法を用いることにより特異性の高いＰＣＲ反応を行うことが可能となる。
【００１６】
（ｄ）細胞あるいは核内への遺伝子やタンパク等の輸送
近年、ＳＬＥマウスより作製された抗ＤＮＡモノクローナル抗体やそれに由来するペプチドが、細胞質内や核内に物質を運ぶベクターとして働くことが報告されており（Ａｖｒａｍｅａｓ，　Ａ．，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ　（１９９８），　９５，　５６０１−５６０６）、本抗体も同様に物質を細胞内に輸送するキャリアーとして利用することが期待できる。すなわち、本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体は、ＤＮＡの塩基配列の特異的認識性がないため、様々な遺伝子やタンパク質等を担持でき、極めて広い汎用性を有するベクターとして、これら遺伝子を細胞あるいは核内へ輸送することを可能とする。
【００１７】
（ｅ）本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体の改変による各種ＤＮＡ抗体の作成
現在、抗体の遺伝子改変による各々特異性が異なる抗体を作成する手段が研究されており、これには、例えば、抗体産生細胞からモノクローナル抗体ｍＲＮＡを抽出し、抗原認識部位（Ｖａｒｉａｂｌｅ　ｒｅｇｉｏｎ）に変異を人工的に導入することにより、抗原の認識性を調節するものがある。本発明のハイブリドーマから得られる抗ＤＮＡモノクローナル抗体は、ＤＮＡ一般を認識し、塩基配列を特異的に認識しないので、本発明のハイブリドーマから抗ＤＮＡモノクローナル抗体ｍＲＮＡを抽出し、変異を加えることにより、種々の特異的塩基配列認識抗体あるいは特異的遺伝子構造認識抗体等のより広い範囲の特異性を有する抗体を作成できる可能性があり、この種の抗体改変技術の研究において、極めて有用な被験試料を提供できる。
【００１８】
実施例：
（１）抗原の調製
ＨｅＬａ細胞１　ｘ　１０^８個を１０　ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ　（ｐＨ　７．５），　１０　ｍＭ　ＮａＣｌ，　３　ｍＭ　ＭｇＣｌ溶液に懸濁し、ＮＰ−４０存在下においてホモジナイズした後１０００　ｘ　ｇ　５分間の遠心にて核を沈殿として分離精製する。１％ホルムアルデヒド溶液５　ｍｌ中に精製した核を懸濁し室温にて２０分間反応させることによりＤＮＡを含めた核内構造を固定した。この固定化核画分を２分間超音波破砕によりＤＮＡが平均３　ｋｂｐになるくらいまで断片化し、これを抗原として用いた。
【００１９】
（２）細胞融合及びクローニング
８週齡雌マウスより脾細胞５　ｘ　１０^８個を調製し、Ｂｏｓｓの方法（Ｂｏｓｓ，　Ｂ．　Ｄ．　（１９８４）Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ．，　２９１，　１９３−１９６）に従いＮ−ａｃｅｔｙｌ−ｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−ａｌａｎｙｌ−Ｄ−ｉｓｏｇｌｕｔａｍｉｎｅ存在下にて、先に調製した抗原を用いてｉｎ　ｖｉｔｒｏにて免疫感作を行った。３日間感作培養の後、６　ｘ　１０^７個の脾細胞と６　ｘ　１０^６個の８−アザグアニン耐性マウスミエローマ細胞であるＰ３Ｕ１　（Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８−Ｕ１）とを混合し、遠心後の沈査に５０％ポリエチレングリコール（平均分子量４０００）を添加し、２分間穏やかに反応させることにより細胞融合を行った。得られたハイブリドーマ含有液を９６ウェルマイクロカルチャープレートに植え込み、ＨＡＴ培地を用いて２週間培養を行った。増殖の認められたウェルの培養上清を採取して酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によりスクリーニングを行い、抗原として用いたＨｅＬａ細胞固定化核全画分に陽性を示したウェルの細胞についてクローニングを行った。ＥＬＩＳＡ陽性ウェル中の細胞を９６ウェルマイクロカルチャープレートに平均１ウェル当り０．１−１個を植え込んだ。培養開始後２週間でコロニーの形成が認められ、こうして得られたコロニーについて上記と同様にスクリーニング及びクローニングを行い、所期の反応性を示す抗体を産生しているハイブリドーマ（クローン）を得た。
【００２０】
（３）スクリーニング
上記（２）で得たハイブリドーマのうち、抗ＤＮＡ抗体を産生する所期のクローンを得るためのスクリーニングは、ＥＬＩＳＡ法を利用して行った。即ち、抗原に用いた核画分を更にＤＮＡ画分、ヌクレオソーム画分、核マトリックス画分、主にヒストンを含む硫酸抽出画分に分画し、それぞれ（１０μｇ／ｍｌの濃度で１００μｌ／ウェル）を９６ウェルマイクロプレートに固相化（４℃、一昼夜）させた後に、ＢＳＡでブロッキングしたウェルで培養上清を反応させ（室温、９０分間）、洗浄後にさらにパーオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ＋ＩｇＭ抗体を添加して室温で６０分間反応させ、次いでｏ−フェニレンジアミンを基質とした発色系で検出した。
【００２１】
（４）抗ＤＮＡ抗体産生ハイブリドーマの作製及び当該抗ＤＮＡ抗体の取得
上記（２）により、固定化核抗原認識抗体の産生能を有するハイブリドーマを２０クローン樹立することができたが、さらに、上記（３）のスクリーニングを行うことにより、上記ＤＮＡ画分に対して陽性の抗ＤＮＡ抗体産生ハイブリドーマは３クローン樹立された。このうちハイブリドーマ増殖性及び抗体産生能におけるバランスの面から最も優れていると考えられるクローンに係るハイブリドーマ（ｍＡｂ　Ｄ−１−１（ＦＥＲＭ　Ｐ−１８９１３））を血清無添加培地中もしくはプリスタン投与マウスの腹腔内において増殖させその培養上清もしくは腹水を回収した。これらを硫安塩析後、ＨＰＬＣハイドロキシアパタイトカラムクロマトグラフィーにより精製回収し、本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体を得た。
【００２２】
（５）抗ＤＮＡモノクローナル抗体の特性
（ａ）抗ＤＮＡモノクローナル抗体の基質特異性
種々の濃度のＨｅＬａ細胞遺伝子ＤＮＡ、λファージＤＮＡ、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫプラスミドＤＮＡ、ｔ−ＲＮＡを９６ウェルマイクロプレートに固相化（４。Ｃ、一昼夜）させた後に、ＢＳＡでブロッキングし、抗ＤＮＡモノクローナル抗体（１μｇ／ｍｌ）を１００μｌ各ウェルに加えて反応させた（室温、９０分間）。洗浄後にさらにパーオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ＋ＩｇＭ抗体を添加して室温で６０分間反応させ、次いでｏ−フェニレンジアミンを基質とした発色系を用い、４９２　ｎｍの吸光度を測定した。結果を第１図に示す。図示されるように、本抗ＤＮＡモノクローナル抗体はＨｅＬａ細胞遺伝子ＤＮＡのみならずλファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ等も認識することが判明した。以上のことから本抗体はＤＮＡ一般を認識しうることが示唆された。
【００２３】
（ｂ）一本鎖および二本鎖ＤＮＡに対する反応性
５’末端ビオチン化一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ（ヒトβ−グロビン遺伝子由来の長さ１．３ｋｂｐＤＮＡ断片）溶液（５μｇ／ｍｌ）１００μｌをストレプトアビジン固相化ＥＬＩＳＡプレート中で４°Ｃにて一昼夜反応させる。ＢＳＡでブロッキングしたウェルに精製した様々な濃度の本ＤＮＡモノクローナル抗体（５０μｇ／ｍｌ−２５ｎｇ／ｍｌ）１００μｌを加え、室温で１時間反応させ、洗浄後にさらにパーオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ＋ＩｇＭ抗体を添加して室温で６０分間反応させ、次いでｏ−フェニレンジアミンを基質とした発色系を用い、４９２　ｎｍの吸光度を測定した。結果を第２図に示す。
図に示されるように、本抗ＤＮＡモノクローナル抗体は一本鎖、二本鎖ＤＮＡともに同様に認識する。
【００２４】
（ｃ）二本鎖ＤＮＡの長さに対する反応性
長さ２００　ｂｐおきに様々な長さの二本鎖ＤＮＡ（２００　ｂｐ　Ｌａｄｄｅｒ，　宝酒造社製）を［γ−^３２Ｐ］−ＡＴＰとＴ４　Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｋｉｎａｓｅを用いて５’末端をラベルした。４　ｎｇの^３２Ｐ標識されたＤＮＡと種々の量の本抗ＤＮＡモノクローナル抗体（１μｇ−２μｇ）を１６　ｍＭ　ＨＥＰＥＳ　（ｐＨ　７．５），　１５０　ｍＭ　ＫＣｌ，　１６％　Ｇｌｙｃｅｒｏｌ，　１．６　ｍＭ　ＭｇＣｌ２，　０．８　ｍＭ　ＤＴＴ，　０．４　ｍＭ　ＰＭＳＦ，　０．０１％　ＮＰ−４０，　１　ｍＭ　ＥＤＴＡ溶液中において室温で３０分間反応させた後、４％未変成ポリアクリルアミドゲル電気泳動にてＤＮＡ・抗体結合物を検出するゲルシフト解析を行った。結果を第３図に示す。これによれば２μｇの抗体を用いた場合１０００　ｂｐ以上の長さのＤＮＡは完全に本抗体と結合していた。以上の結果より本抗ＤＮＡモノクローナル抗体は１０００　ｂｐ以上の長さのＤＮＡを認識している事が判明した。
【００２５】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体は、ＤＮＡの塩基配列の特異的認識性がなく、ＤＮＡ一般を識別可能なものであるから、各種ＤＮＡの分離精製、定量等、極めて広い範囲の用途に適用可能なものである。また、本発明のハイブリドーマは、上記モノクローナル抗体を効率よく生産可能なものであり、本発明は、細胞、遺伝子操作技術等において極めて有用なものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体のＤＮＡ認識性を、各種ＤＮＡ及びｔＲＮＡについて試験した結果を示すグラフである。
【図２】一本鎖ＤＮＡ及び２本鎖ＤＮＡに対する本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体の結合性を試験した結果を示すグラフである。
【図３】各種長さの２本鎖ＤＮＡに対する本発明の抗ＤＮＡモノクローナル抗体の反応性をゲルシフト解析により試験した結果を示す電気泳動図である。

Claims

ＨｅＬａ細胞の核ホルマリン固定化物の破砕物を抗原とし、ハイブリドーマ法により得られた抗ＤＮＡモノクローナル抗体であって、ＤＮＡの塩基配列に対する特異的認識性がなく、かつ、１０００塩基対以上の２本鎖ＤＮＡを認識する、長さ認識性を有することを特徴とする抗ＤＮＡモノクローナル抗体。
ＨｅＬａ細胞の核ホルマリン固定化物の破砕物を抗原として、マウス脾細胞を免疫感作して得られた細胞とミエローマ細胞とを融合して得られたものであって、請求項１に記載の抗ＤＮＡモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。