JP2003523935A - 末梢血管疾患と肺高血圧症を治療するためのプロスタグランジン化合物、組成物および方法 - Google Patents

末梢血管疾患と肺高血圧症を治療するためのプロスタグランジン化合物、組成物および方法

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Abstract

(57)【要約】 末梢血管疾患と肺高血圧症の治療を目的に温血動物に投与するための、製薬上許容しえてかつ活性基の代謝率を低下させうる保護基を少なくとも1つの部位に結合させてなるプロスタグランジンとその類似物。図1は肺昇圧剤の静脈内投与により肺高血圧を誘発したヒツジに静脈内投与された一用量のmPEG20kDa-アミド-化合物Xの肺動脈圧に対する効果を鮮やかに示している。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 発明の技術分野 本発明は、末梢血管疾患および肺高血圧症治療用の変性プロスタグランジン類
、特に持効性プロスタグランジン含有組成物に関連する。 発明の背景 ほぼすべての体内組織はプロスタグランジン類を産生する。プロスタグランジ
ン類ほど数多くの、あるいは多様な、作用を示すオータコイドまたはホルモンは
他にない。ほとんどのプロスタグランジン類は、一般に血液と肺の中の酵素によ
り速やかに分解するため有効期間が3〜10分程度にすぎない。
【０００２】 プロスタグランジン類には、体内で産生され適正な血管機能の維持に関係して
いるプロスタグランジン類似物のプロスタサイクリンが含まれる。天然プロスタ
サイクリンは本来不安定であり、有効期間が約6分である。プロスタサイクリン
を含むプロスタグランジン類は次の3つの面で適正な血管機能を維持する働きを
しているように見受けられる：1)必要に応じて血管を拡張することにより、適正
な血流を可能にする、2)血小板の凝集を防ぐ、および3)血管を取り巻く平滑筋細
胞の増殖（これは放っておけば血管を収縮させ、血流を阻害することになる）の
調節に寄与する。
【０００３】 ある種の血管疾患は血管壁内層のぜい化、血小板凝集、および平滑筋細胞機能
の破壊を特徴とする。これらの症状は血管閉塞の原因となるし、また循環系内の
スムーズな血流を維持する血管機能に悪影響を及ぼす。これらの症状を伴う疾患
は末梢血管疾患と肺高血圧症である。それぞれの疾患は特有の血管系部位に影響
を及ぼすが、どちらの疾患も血管収縮を特徴とする。これは血管が無用の収縮を
起こして、血流の低下、血圧と血管抵抗の上昇を招くものである。さらに、この
種の疾患にはプロスタサイクリンなどのような天然プロスタグランジン類の産生
の減少も伴う。
【０００４】 肺高血圧症は進行性の致命的な血管疾患で、診断も治療も困難であり、現在の
ところ不治である。その特徴は、心肺間の血管（肺血管）の高血圧とそれ以外の
体内の正常血圧を特徴とする。これは肺血管の狭窄に起因する高血圧であり、患
部血管内でのプロスタサイクリン産生の減少を伴う。
【０００５】 肺高血圧は一般に、心臓が肺に血液を送るさいに心臓の右側に無理な負担をか
ける。初期肺高血圧症の患者は自覚症状がないのがふつうである。しかし病気が
進行するにつれて、患者は呼吸困難や失神の発作などに見舞われ、通常の日常活
動が困難になる。治療を受けずに肺高血圧症を進行させると患者はしばしば身体
傷害となり、心不全で死ぬこともある。
【０００６】 従来、肺高血圧症には原発性と続発性の2種類があると考えられている。原発
性肺高血圧症は具体的な原因が特定されない肺高血圧症であり、続発性肺高血圧
症は心、肺または肝機能障害、または結合組織の病気である硬皮症などのような
既知の原因を伴う肺高血圧症である。本書でいう「肺高血圧症」は原発性と続発
性の両方を含む。
【０００７】 米国では何千人もの人々が原発性肺高血圧症と診断されており、進行型の続発
性肺高血圧症と診断されている人々はさらに多い。米呼吸器科医師会の公式出版
物“Chest”に掲載された1989年報告によれば、米国の男子人口の肺高血圧症罹
患率は35〜44歳の年齢層で8〜13%、65歳以上の年齢層で20%超である。原発性肺
高血圧症と進行型の続発性肺高血圧症はプロスタサイクリンの存在に敏感である
ことがすでに証明されている。
【０００８】 肺循環系外で血管とリンパ管がおかされる症状は一般に末梢血管疾患という。
この疾患は虚血性脳血管疾患、動静脈フィステル、虚血性下腿潰瘍、静脈炎、静
脈不全、壊疽、肝腎症候群、動脈管非開存症、非閉塞性腸管膜虚血症、動脈炎、
リンパ管炎などを含むが、それだけに限らない。末梢血管疾患の正確な原因は不
明であるが、糖尿病、肥満症、アテローム性動脈硬化症、喫煙、運動不足、心疾
患としばしば関連している。初期段階の患者は自覚症状がないが、やがて歩行時
に軽いまたは激しい痛みを感じるようになる。病気の進行に伴い、休息中でも脚
の痛みを感じ、また傷の治癒に時間がかかるようになり、ときには潰瘍、壊疽、
脚の切断へと至る。末期末梢血管疾患の患者の平均生存期間は約6年である。
【０００９】 末梢血管疾患の患者は米国では約600万人である。加えて、新たに確認される
末梢血管疾患の症例が年間35万程度にのぼる。末梢血管疾患もまたプロスタサイ
クリンを含むプロスタグランジン類の存在に敏感である。
【００１０】 プロスタグランジン類は無用の血管収縮を防ぐことにより血流にプラスの効果
を及ぼすため、ヒトの末梢血管疾患と肺高血圧症の治療に有効である。しかし、
プロスタグランジンとプロスタサイクリンを含むその類似物は有効期間が非常に
短いために、患者に効果的な治療を施すためには連続的、持続的な投与を必要と
するものも多い。今日、末梢血管疾患と肺高血圧症の治療ではプロスタグランジ
ン類とその類似物は化学的不安定性、短い有効期間、および限られた投与形態の
ために使用がごく限られている。
【００１１】 プロスタグランジン類の有効期間が短いのはa)プロスタグランジン化合物の活
性基の、酵素による急速な失活、およびb)体外への容易な排出または排泄につな
がるその低分子量のためである。
【００１２】 プロスタグランジン類は、一般にヒドロキシル基およびカルボキシル基という
形の活性部位をもつ。化合物は、酵素類の作用でこれらの活性基が急速に失活す
るため、その有効性を失ってしまう。この問題を克服するために、高用量のプロ
スタグランジン類の連続注入または頻繁な投与により患者体内の化合物濃度を治
療有効レベルに維持する方式が採用されてきた。しかしそうした投与方式には、
治療が高価になるうえに副作用の可能性も比較的高いという難点がある。副作用
は吐き気、腫脹、胃腸障害、顎の痛み、発疹、頭痛などである。患者によっては
、副作用が激しすぎて治療を中止せざるをえなくなる場合もあった。
【００１３】 安定性、投与形態の範囲、有効活性および／または有効期間の改善をもたらす
ような製薬上許容しうる薬剤の発見を目標として多数のプロスタグランジン類と
その類似物（プロスタサイクリンなど）が調製されてきた。研究者たちは、より
低侵襲的で、より好都合な薬物療法を実現するために、効果的な経口投与が可能
なプロスタグランジン類とその類似物を追求してきた。現在の経口投与型プロス
タグランジン類とその類似物は一般に有効期間が最長でも1時間半程度、場合に
よってはほんの数分でしかない。有効期間がこのように短いため、患者は頻繁に
投与を受ける必要があり、したがって患者、特に慢性疾患をもつ患者への投与は
問題の多いものとなる。
【００１４】 活性物質の生体内有効期間、水溶性または抗原性を改善するためには、タンパ
ク質や酵素などのような生体活性物質を重合体に結合させるという方法が提案さ
れている。たとえば、ペプチドまたはポリペプチドをポリエチレングリコール（
PEG）や類似の水溶性ポリアルキレンオキシド（PAO）に結合させる方法は米国特
許第4,179,337で開示されているが、その開示は参照指示により本書に組み込ま
れる。また、Nucci M., Shorr RGL, Abuchowski A., “Advanced Drug Delivery
Reviews”, 6:133-151, 1991: Harris JM (ed.)および“Polyethylene Glycol
Chemistry: Biotechnical and Biomedical Application”, Plenum Press, NY,
1992を参照。結合体は一般に、治療用薬物を、たとえば末端結合基を含むように
あらかじめ改変しておいた数倍モル過剰量の重合体と反応させることによって形
成する。この結合基により活性物質は重合体に結合することができる。こうして
できた変性ポリペプチドは免疫原性／抗原性の低下を示し、また非変性ポリペプ
チドに比して血流中の有効期間が長くなる傾向もある。
【００１５】 ポリアルキレンオキシドを活性物質に結合させるには、末端ヒドロキシル基の
うちの少なくとも1つを活性官能基へと変換する。このプロセスはしばしば「活
性化」といい、またその生成物は「活性化ポリアルキレンオキシド」という。他
の実質的に無抗原性の重合体もまた同様にして「活性化」または「官能化」され
る。
【００１６】 活性化重合体を、結合部位として機能する求核官能基をもつ治療用物質と反応
させる。結合部位として一般的に使用される求核官能基の１つはリシンのεアミ
ノ基である。遊離カルボン酸基、適正に活性化されたカルボニル基、酸化炭水化
物部分およびメルカプト基もまた結合部位して使用されてきた。
【００１７】 重合体と生体活性親部分との間に加水分解結合をもつ生体活性重合体結合物を
形成してプロドラッグを生成し、後に親分子部分が生体内で遊離されるようにす
ることが可能である。いくつかのプロドラッグ調製法がすでに提案されている。
プロドラッグは、投与されるとやがて活性親化合物を生体内で遊離するような生
体活性親化合物の化学誘導体を含む。プロドラッグは、生体活性化合物の生体内
での作用発現および／または持続の変更を可能にするので有利である。プロドラ
ッグはしばしば活性化合物の生体内不活性形態または実質的不活性形態である。
活性薬物の放出速度は、生体活性化合物をプロドラッグ担体（たとえば、重合体
）に結合させるリンカーの加水分解速度などいくつかの要因に左右される。
【００１８】 プロスタグランジン類とその類似物（プロスタサイクリンなど）は治療剤とし
て有望であるものの、a)そうした化合物の安定性を高め、b)化合物の有効期間を
延長し、またc)化合物を現在の投薬方式よりももっと患者にやさしい方式で投与
できるようにすることが課題となっている。
【００１９】 したがって、一段と高い安定性、無理のない頻度での、かつプロスタグランジ
ン類とその類似物を使用する現行療法よりももっと患者にやさしい方式での投与
を可能にするに足る有効期間を実現したプロスタグランジン類とその類似物、お
よびそれらを含む組成物が開発されるとしたら、それは特に末梢血管疾患と肺高
血圧症の治療にとっては、薬物療法技術の著しい進歩となろう。 発明の要約 本発明は一般に、末梢血管疾患と肺高血圧症の治療に適した活性をもつ新規プ
ロスタグランジン化合物およびその類似物に向けられる。
【００２０】 本発明は末梢血管疾患と肺高血圧症の治療を目的とした化合物、組成物、およ
びそうした化合物と組成物の投与方法を提供する。本発明の化合物は温血動物の
体内における化学的安定性と有効期間を改善してあり、そのことは末梢血管疾患
と肺高血圧症の治療を目的とした、製薬上許容しうる組成物の形での化合物の投
与を改善することになろう。安定性の向上、有効期間の延長、および一段と許容
しうる投与形態および投薬方式は、既知プロスタグランジン化合物の1以上の活
性部位を変性させることによって実現される。
【００２１】 こうして、本発明の一態様では、本発明のプロスタグランジン化合物またはそ
の類似物の1以上の活性部位は、化合物の代謝率を低下させるような製薬上許容
しうる原子団によってもたらされる。代謝率が低下すると活性化合物の有効期間
が長くなるが、それはa)活性化合物の投与効率を一段と高め、b)一段と患者にや
さしい投薬方式を可能にする。
【００２２】 本発明の別の態様では、肺高血圧症および／または末梢血管疾患を示す温血動
物の治療方法であって、そうした動物に本発明の変性プロスタグランジン化合物
およびその類似物を治療有効量投与することを含む治療方法が提供される。
【００２３】 本発明の別の態様では、次の式IaまたはIbで示される化合物および製薬上許容
しうるその塩が提供される： [P―T]n―Z Ia P―[T―Z]n Ib （式中Pはプロスタグランジン化合物またはその類似物、TはPの変性活性基、Zは
Tと結合して前記化合物の代謝率を低下させる製薬上許容しうる原子団であり、
またnは1以上の整数である。） 発明の詳細な説明 本発明は新規のプロスタグランジン類とその類似物に向けられるが、それらの
化合物にあっては1以上の活性部位に不活性の非抗原・非免疫原基を結合させて
あり、その不活性基は化合物がヒトを含む温血動物に投与されたときに活性部位
を保護することにより化合物の有効期間を長くするような構造を備える。その結
果、より多量の化合物が、より長時間にわたって標的部位（肺動脈などのような
患部組織および脈管構造部）の治療のために存在することにより血管系疾患の治
療に有効に利用されるようになる。有効に利用される活性化合物の量が多くなる
ため、患者に対する負担の少ない投薬方式が可能になる。「有効期間」は本書で
は、本化合物が温血動物の体内で活性形態であり続ける時間を意味する。
【００２４】 1以上の活性基の保護は一般に、天然または非保護形態のプロスタグランジン
化合物と比較してプロスタグランジン化合物の有効期間を長くし、もって同化合
物を多様な投与形態により適合したものにする効果がある。
【００２５】 「プロスタグランジン化合物とその類似物」（以下では一括して「プロスタグ
ランジン化合物」という）は本書では、1以上の活性基（たとえばCOOH基および
／またはOH基など）をもちかつ温血動物の末梢血管疾患と肺高血圧症の治療に少
なくとも最小限有効である諸々のプロスタグランジン化合物とその類似物をいう
。「本プロスタグランジン化合物」は本書では、本発明に準拠した変性処理済み
の前記定義のプロスタグランジン化合物をいう。「活性基」は本書では、プロス
タグランジン化合物上の部位であって、血管組織などのような標的組織と結合す
る、または他の形で契合することができる部位をいう。
【００２６】 本発明は本プロスタグランジン（PG）化合物のあらゆる種類を含む。たとえば
、本発明に使用される本プロスタグランジン化合物は変性済みのPGA、PGB、PGC
、PGD、PGE、PGFおよびPGI型プロスタグランジンおよびその諸々の亜類型を含む
。プロスタグランジン化合物は温血動物源から単離または抽出することが、また
は技術上周知の合成法で調製することができる。
【００２７】 好ましい本プロスタグランジン化合物は式II
【００２８】
【化４】
【００２９】 で示される（式中Z1とZ2は水素と式Ｉ中のZに関して前に定義した原子団群か
ら独立に選択されるが、ただしZ1とZ2のうちの少なくとも1つは水素でないもの
とする。またXはOまたはNHである）。
【００３０】 さらに一段と好ましい式II化合物は以下に定義するグループ1、グループ2およ
びグループ3の化合物である： グループ1化合物の場合、式中のZ1はXと結合して化合物の代謝率を低下させる
製薬上許容しうる重合体であり、XはOまたはNHであり、またZ2はHまたはアセチ
ル基である； グループ2化合物の場合、式中のZ1は水素、XはO、またZ2はエステル基を介し
てOと結合し化合物の代謝率を低下させる製薬上許容しうる重合体である； グループ3化合物の場合、式中のZ1はグループ1で定義済みの製薬上許容しうる
重合体であり、XはOまたはNHであり、またZ2はエステル基を介してOと結合した
、グループ2で定義済みの製薬上許容しうる重合体である。
【００３１】 好ましい化合物はまた式III
【００３２】
【化５】
【００３３】 でも示される（式中Z1とZ2は式IIで定義したのと同じ原子団を含み、fは1〜3
の整数であり、XはOまたはNHであり、またRは水素または炭素原子数が好ましく
は1〜6のアルキル基である）。
【００３４】 さらに一段と好ましい式III 化合物は以下に定義するグループ4、グループ5お
よびグループ6の化合物である： グループ4化合物の場合、式中のZ1はXと結合して化合物の代謝率を低下させる
製薬上許容しうる重合体であり、XはOまたはNHであり、またZ2はHまたはアセチ
ル基である； グループ5化合物の場合、式中のZ1は水素、XはO、またZ2はアセチル基である
か、あるいはエステルまたはエーテル基を介してOと結合し化合物の代謝率を低
下させる製薬上許容しうる重合体である； グループ6化合物の場合、式中のZ1はグループ4で定義済みの製薬上許容しうる
重合体であり、XはOまたはNHであり、またZ2はグループ5で定義済みの製薬上許
容しうる重合体である。
【００３５】 大いに好ましい化合物は、Z1および／またはZ2の原子団が式CH3OCH2CH2(OCH2C
H2)a（式中aは1〜約1000である）で示されるポリエチレングリコールである化合
物である。
【００３６】 特に好ましい本プロスタグランジン化合物群は式IV
【００３７】
【化６】
【００３８】 で示される化合物である（式中aとXは前に定義したとおりである。好ましくは
aは約6〜600、もっとも好ましくは約6〜460である）。
【００３９】 本発明はまた、末梢血管疾患や肺高血圧症などの血管系疾患を患う温血動物の
治療方法であって、有効量の式Ｉ化合物をその温血動物に投与することを含む治
療方法を提供する。前記目的のための温血動物への投与に適した前記化合物を含
んでなる組成物は本発明の一部である。
【００４０】 末梢血管疾患は、足脚への血流低下とそれに伴う虚血を特徴とする。血管内層
への血小板の沈積と主要動脈の進行性肥厚・硬化はこの疾患の特色である。器質
性末梢血管疾患には炎症や組織の損傷も伴う。末梢血管疾患には一般に慢性的な
軽痛〜激痛、歩行障害、壊疽、虚血性潰瘍、創傷治癒の遅延、下肢喪失などが伴
う。
【００４１】 肺高血圧症は肺血管の狭窄と危険なまでに高い肺動脈血圧を特徴とする。内皮
細胞と平滑筋細胞の間の異常な相互作用による平滑筋の収縮がこの疾患の特色で
ある。器質性肺高血圧症には炎症や組織の損傷も伴い、そのために瘢痕組織が生
じ、それが血管の狭窄と内層の肥厚をさらに促す結果となる。肺高血圧症には慢
性的な軽痛〜激痛、歩行障害、最終的な心不全および死が伴う。
【００４２】 どちらの血管系疾患も、血流低下と血管圧力の上昇を招く異常な血管収縮を特
徴とする。末梢血管疾患に悩む患者への本プロスタグランジン化合物の投与は、
患部血管の血流増大を促し、それによって虚血組織の酸素取り込みを増大させる
。さらに、本プロスタグランジン化合物の抗血小板凝集活性および細胞保護活性
は損傷組織の炎症反応を抑えることにより治癒を促進すると考えられている。
【００４３】 肺高血圧症では、本プロスタグランジン化合物により血管拡張が誘発され、結
果として肺小動脈の平滑筋弛緩、拡張期血圧の低下、血栓形成の防止、および肺
瘢痕の逆転がもたらされる。さらに、末梢血管疾患の場合と同様に、本プロスタ
グランジン化合物の固有の抗血小板凝集活性と細胞保護活性もまた損傷組織の炎
症反応を抑えることにより治癒を促進すると考えられる。
【００４４】 本発明の一態様では、本プロスタグランジン化合物の1以上の活性基（たとえ
ばCOOHやOHなど）を不活性、非抗原性、非免疫原性である線状、枝分かれおよび
／または環状重合体および共重合体に結合させる。さらに、この重合体は本プロ
スタグランジン化合物から、本プロスタグランジン化合物を温血動物の標的部位
に送達するに足る速度で分離しうるのでなければならない。重合体の一部がプロ
スタグランジン化合物に結合したままであれば、末梢血管疾患と肺高血圧症の治
療に悪影響を及ぼすことはないはずである。
【００４５】 プロスタグランジンをポリアルキレンオキシドなどのような重合体に結合させ
るためには、重合体の1以上のヒドロキシル基を、結合を可能にするような反応
性官能基へと変換する。
【００４６】 この活性化重合体をプロスタグランジン化合物と反応させて、好ましくは遊離
カルボキシル基および／またはヒドロキシル基で結合が起こるようにする。適正
に活性化されたカルボキシル基、酸化炭水化物部分およびメルカプト基もまた、
プロスタグランジン化合物上で利用可能になる、または利用可能にされるかぎり
、結合部位として使用できる。
【００４７】 本発明の好ましい態様では、カルボキシル基またはヒドロキシル基と活性化ポ
リアルキレンオキシドとの間にアミド結合またはエステル結合を形成させる。ウ
レタン形成リンカーなどにより活性化された重合体、およびカルボキシル基など
の原子団を介したプロスタグランジン化合物への結合を促進するような他の官能
基により活性化された重合体は本発明に包摂される。
【００４８】 実質的に非抗原性である重合体の例は、ポリアルキレンオキシド（PAO）、特
にアルキルを末端基とするモノ活性化ポリアルキレンオキシド、たとえばポリエ
チレングリコール（PEG）、特にモノメチルを末端基とするポリエチレングリコ
ール（mPEG）などである。ビス活性化ポリエチレンオキシドもまたプロスタグラ
ンジン化合物の架橋結合という目的への使用、または重合体−プロスタグランジ
ン結合物を標的部位、たとえば肺または下肢血管に局在させるためのターゲティ
ング剤などのような他の部分を結合させる手段の提供という目的への使用が見込
まれる。
【００４９】 適当な重合体特にPEGまたはmPEGは分子量の変動幅が大きいであろう。本発明
では一般に分子量約200〜約80,000 Daの重合体が使用される。その分子量は約2,
000〜42,000 Daが好ましく、また約5,000〜28,000 Daが特に好ましい。
【００５０】 本発明に保護基として使用されるのが好ましい重合体は室温で水溶性である。
その種の重合体は羅列すればきりがないが、PEGまたはmPEGまたはポリプロピレ
ングリコール、ポリエチレン化ポリオールなどのようなポリアルキレンオキシド
単独重合体、その共重合体およびそのブロック重合体などが挙げられる。mPEGに
加えてC1-4アルキルを末端基とする重合体も有用である。
【００５１】 PAO系重合体の代わりとして、実質的に非抗原性の物質、たとえばデキストラ
ン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、炭水
化物系重合体なども使用できる。プロスタグランジン化合物の変性にはさらに、
アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、アシル化など
が含まれるが、それだけに限らない。以上の例は一例にすぎず、本書で述べた性
質をもつ諸々の重合体物質が見込まれることは当業者には自明であろう。
【００５２】 プロスタグランジン化合物を前述のように保護基と結合させることにより本プ
ロスタグランジン化合物がえられるが、それは活性化合物を標的部位に効果的に
送達し標的部位内に、既知プロスタグランジン化合物によって実現されるよりも
長い時間にわたって維持する働きをもつ。したがって、本プロスタグランジン化
合物は末梢血管疾患と肺高血圧症の治療に特に適する。
【００５３】 前述のように、末梢血管疾患と肺高血圧症の治療に使用されている既知プロス
タグランジン化合物は温血動物体内での有効期間が一般に1時間未満とごく短く
ものも多い。本発明に基づいて提供される本プロスタグランジン化合物は最長数
時間にもおよぶ可能性のある有効期間を有する。本プロスタグランジン化合物は
有効期間がより長いため投与回数を減らせるため、投与の頻度と単位用量を小さ
くすることが可能となろう。
【００５４】 本プロスタグランジン化合物の活性基はCOOH基やOH基などである。1以上のこ
れらの活性基は、以下でもっと詳しく説明する保護基により保護される。保護基
は一般に分子量が最高500,000 Da以上であろう。本発明の好ましい形態では、OH
基を保護しない場合には分子量5,000 Da以上の、もっと好ましくは20,000 Da以
上の基をCOOHに結合させるのがよい。分子量5,000以上の保護基は化合物の排出
を遅らせ、それによって温血動物体内での有効期間の延長に寄与しうることもま
たすでに確認されている。
【００５５】 保護基は、活性基（COOHとOH）を早すぎる代謝から保護する役目を果たす一方
で制御されたやり方で活性基から容易に分離しうるような、および／または化合
物の機能を損なうことなく活性基に結合させられるような任意の基である。そう
した保護基はたとえば重合体、直鎖または枝分かれ鎖アルキル基、アラルキル基
、アリール基、アシル基、複素環式基、アルキレン基などであり、これらはいず
れもたとえばアルキル、アリール、アラルキルなどの基から選択される置換基で
置換されていてもよい。
【００５６】 活性基に結合させられる重合体はポリグリコール、ポリビニル重合体、ポリエ
ステル、ポリアミド、多糖類、およびポリ酸、脂質、アミノ酸、核酸、炭水化物
およびそれらの組み合わせなどである。
【００５７】 好ましいポリグリコールはポリエチレングリコールやポリプロピレングリコー
ルなどである。
【００５８】 好ましい多糖類は多糖類Bから選択される。
【００５９】 本発明に準拠して使用されるのが好ましいポリ酸はポリアミノ酸やポリ酢酸な
どである。
【００６０】 前記の重合体類のうち好ましい重合体はポリエチレングリコール（PEG）であ
る。
【００６１】 前記の重合体類とは別に、デキストラン、セルロース重合体、デンプンなどの
ような重合体もまた本発明に準拠して使用できる。
【００６２】 重合体は活性基COOHまたはOHに、アミド基、エステル基などのような基を介し
て結合させることになろう。
【００６３】 式Ｉ化合物は一般に、末梢血管疾患や肺高血圧症など血管系疾患の治療を目的
とした製薬上許容しうる担体を含んでなる製剤組成物の成分として使用される。
この目的のために使用される化合物の用量は一般に0.5〜100 mg/kg/日、好まし
くは約25〜35 mg/kg/日である。
【００６４】 少なくとも1種類の式Ｉ化合物を含んでなる製剤組成物は、たとえば通常の固
形または液体基剤または希釈剤、それに望ましい投与形態にふさわしい種類の製
剤添加物（たとえば賦形剤、結合剤、保存料、安定剤、香料など）を使用して、
技術上周知の製剤手法により製造することになろう。
【００６５】 式Ｉ化合物は任意の適当な手段により、たとえば錠剤、カプセル、顆粒または
粉末の形で経口的に；舌下に；頬腔内に；皮下、静脈内、筋内または胸腔内注射
または輸液法などにより、たとえば注射用滅菌水性または非水性溶液／懸濁液と
して非経口的に；吸入スプレーなどにより鼻内に；クリームまたは軟こうの形で
局所的に；または座薬などの形で直腸内に、製薬上許容しうる毒性のない基剤ま
たは希釈剤を含む単位用量製剤として投与することができる。本プロスタグラン
ジン化合物は即放、徐放いずれにも対応できるが、そのためには本化合物を含む
適当な製剤組成物を、または持効性の場合には皮下インプラントや浸透圧ポンプ
などのような装置を使用する。本プロスタグランジン化合物はリポソームに閉じ
込めて投与することもできる。
【００６６】 経口投与用組成物の例は、たとえば増量用の微晶性セルロース、懸濁剤として
のアルギン酸またはアルギン酸ナトリウム、増粘剤としてのメチルセルロース、
および当業者には自明の甘味料または香料を含む懸濁液；およびたとえば微晶性
セルロース、リン酸二カルシウム、リン酸塩、デンプン、ステアリン酸マグネシ
ウムおよび／またはラクトースおよび／または技術上周知の他の賦形剤、結合剤
、増量剤、崩壊剤、希釈剤および潤滑剤を含むような即放錠などがある。本化合
物は舌下および／またはバッカル投与による口腔経由で送達することもできる。
鋳造錠、圧縮錠または凍結乾燥錠は使用可能な剤形例である。組成物には、本化
合物を溶解作用が速やかな希釈剤、たとえばマンニトール、ラクトース、スクロ
ース、および／またはシクロデキストリンと配合した組成物などがある。この種
の製剤にはセルロース（avicel）などのような高分子賦形剤を含めてもよい。ま
た、粘膜への付着を助けるための賦形剤、たとえばヒドロキシプロピルセルロー
ス（HPC）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC）、カルボキシメチル
セルロースナトリウム（SCMC）無水マレイン酸共重合体（Gantrezなど）、およ
びポリアクリル共重合体のような徐放化剤（Carbopol 934など）を加えてもよい
。また、製造しやすく使いやすくするために潤滑剤、滑化剤、香料、着色料、安
定剤などを加えてもよい。
【００６７】 鼻内エーロゾルまたは吸入投与用の組成物例は生理食塩水溶液などがあり、こ
れにはたとえばベンジルアルコールまたは他の適当な保存料、生体利用率を高め
るための吸収促進剤、および／または技術上周知の他の溶解剤または分散剤を加
えてもよい。
【００６８】 非経口投与用組成物の例は注射用溶液または懸濁液などであり、これにはたと
えば非経口投与に許容しうる適当な無毒の希釈剤または溶媒（マンニトール、1,
3-ブタンジオール、水、リンガー液、塩化ナトリウム等張液など）、または他の
適当な分散／湿潤剤および懸濁剤（合成モノグリセリドまたはジグリセリド、オ
レイン酸を含む任意の脂肪酸など）を加えてもよい。
【００６９】 直腸内投与用の組成物例は座薬などであり、これにはたとえばココアバターま
たは合成グリセリドエステルなど常温では固体であるが直腸腔内では液化および
／または溶解して薬剤を放出するような適当な無刺激性補形剤を加えてもよい。
【００７０】 局所投与用組成物の例はPlastibase（ポリエチレンでゲル化した鉱油）などの
ような局所用担体を含む。
【００７１】 本プロスタグランジン化合物の有効量は当業者により決定されようが、成人男
性の場合の用量例は約0.5〜100 mg/kg-体重/日であり、これを単一用量として、
または個別分割用量として、1日1〜4回投与する。言うまでもなく、特定の被験
者に関する具体的な用量および投与回数は幅があり、個別化合物の活性、被験者
の種・年齢・体重・体調・性別・食餌療法、投与形態および時間、排出率、併用
薬剤、治療対象症状の重さなどを含むさまざまな要因に左右されよう。好ましい
被験者は血管系の疾患をもつ動物であり、もっとも好ましいのは哺乳類の種、た
とえばヒト、それにイヌ、ネコなどのような家畜である。
【００７２】 一般に、本プロスタグランジン化合物は既知の天然または非変性プロスタグラ
ンジン化合物と比べて著しい低用量で所望の効果、すなわち患部脈管構造の血管
拡張を実現する。既知の天然または非変性プロスタグランジン化合物は生体内代
謝が速いため、比較的高用量を長時間にわたり連続的に注入しなければ患者体内
の有効血中濃度を維持することができなかった。しかし、既知プロスタグランジ
ン化合物は高血中濃度で低血圧、頻拍、下痢などの副作用を招くためその投与可
能量は限られる。さらに、プロスタグランジン化合物は高価格であるため、そう
した高用量の静脈内投与は大変な高医療費になる。本発明の方法は本プロスタグ
ランジン化合物の効果的な低コスト、低副作用の投与に道を開く。
【００７３】 本発明の本プロスタグランジン化合物は凍結乾燥粉末からの還元液の形で、保
存料、緩衝液、分散剤などを新たに加えて皮下投与してもよい。プロスタグラン
ジン化合物の還元は好ましくは、静脈内注射に通常使用される溶媒たとえば無保
存料の滅菌水で還元する。投与方法は、連続式の静脈内または皮下注入でも静脈
内注射でもよい。連続式の注入では、日用量に通常の生理食塩水または他の溶液
を加えてから、機械式のポンプまたは重力式で注入する。
【００７４】 以下、実施例をもって本発明の実施態様を説明する。以下の実施例が、本書の
一部をなす請求項に明記した本発明の範囲と精神から逸脱することなく変更、修
正、変異を加えられることは当業者には自明であろう。実施例1 mPEG5kDa-アミド-化合物X（以下、化合物1）の合成 グループ4化合物（式中Z1は分子量約5,000 DaのmPEG、XはNH、Z2は水素である
）を次の要領で調製した。
【００７５】 次式で示される化合物X
【００７６】
【化７】
【００７７】 200 mgを、mPEG5kDaアミン(2.5 g)、2-ヒドロキシベンジルトリアゾール(HOBT
, 67 mg)、4-(ジメチルアミノ)ピリジン(DMAP, 61 mg)およびジシクロヘキシル
カルボジイミド(DCC, 140 mg)と共に丸底フラスコに入れた。これに無水塩化メ
チレン60 mlを混ぜ、室温で一晩かく拌してから、溶媒を蒸発除去した。残留物
を25 mlの1,4-ジオキサンに溶かし、不溶性固体をろ去した。溶媒を凝縮し、次
いで50:50エーテル／イソプロパノール混合液100 ml中に沈殿させた。沈殿をろ
取し、減圧乾燥させた。生成物の収量は2.5 g(93%)であった。1H-NMR(DMSO-d6)
：δ3.5(br m, PEG), 7.897 [t, -PEG-NH-CO-(化合物X)], 4.49[d, (化合物X)-O H 1 ], 4.24[d, (化合物X)-OH 2], 0.864[t, (化合物X)-CH 3], 4.436[s, (化合物X)
-CH 2CONH-PEG], 7.045(t, 化合物X芳香族プロトン), 6.7(d+d, 化合物X芳香族プ
ロトン)。実施例2 mPEG5kDa-エステル-化合物X二酢酸塩(以下、化合物2)の合成 グループ4化合物（式中Z1は分子量約5,000 DaのmPEG、XはO、Z2はアセチル基
である）を次の要領で調製した。
【００７８】 丸底フラスコに化合物X(400 mg)とピリジン(200 μl)を混ぜ無水塩化メチレン
35 mlに懸濁させた。この懸濁液に500 μlの無水酢酸を加えた。混合物は2、3時
間で均質化した。この混合溶液を室温で一晩かく拌した。溶媒を凝縮し、残留物
に緩衝リン酸溶液(0.1 M, pH 7.4)を加えた。この混合液を30分間急速かく拌し
てから、塩化メチレンで3回抽出した。有機相をひとまとめにして硫酸ナトリウ
ム上で乾燥させ、また溶媒を蒸発除去した。化合物Xの二酢酸塩が油状の生成物
としてえられた。収量は340 mg(80%)であった。1H-NMR(DMSO-d6)：1.91 [s, (化
合物X)-O1COCH 3], 2.00[s, (化合物X)-O2COCH 3], 0.84[t, (化合物X)-CH 3]。
【００７９】 丸底フラスコにmPEG5kDa(3.8 g)、前記ステップに由来する化合物X二酢酸塩(3
20 mg)、2-ヒドロキシベンジルトリアゾール(HOBT, 103 mg)、4-(ジメチルアミ
ノ)ピリジン(DMAP, 93 mg)およびジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC, 238 mg
)を50 mlの無水塩化メチレンに溶かした。溶液を室温で一晩かく拌し、溶媒を蒸
発除去した。残留物を35 mlの1,4-ジオキサンに溶かし、不溶性固体をろ去した
。溶媒を凝縮し、100 mlの50:50エーテル／イソプロパノール混合液中に沈殿さ
せた。沈殿をろ取し、減圧乾燥させた。生成物の収量は3.2 g(78%)であった。1H
-NMR(DMSO-d6)：δ3.5(br m, PEG), 4.23 [t, -PEG-OCH2CH 2O-CO-(化合物X)], 1
.91 [s, (化合物X)-O1COCH 3], 2.00[s, (化合物X)-O2COCH 3], 0.84[t, (化合物X
)-CH 3], 4.77[s, (化合物X)-CH 2COO-PEG], 7.03(t, 化合物X芳香族プロトン), 6
.7(d+d, 化合物X芳香族プロトン)。実施例3 mPEG20kDa-エステル-化合物X（以下、化合物3）の合成 グループ5化合物（式中各Z2は、-CO-(CH2)2-O-基を介して結合された分子量約
20,000 DaのmPEGである）を次の要領で調製した。
【００８０】 丸底フラスコに化合物X(200 mg)と水酸化ナトリウム(21 mg)を混ぜ無水アセト
ニトリル40 mlに懸濁させた。この懸濁液に90 mgの臭化ベンジルを加え、2日間
還流させた。固体をろ去し、溶媒を凝縮し、残留物を減圧乾燥させた。化合物X-
ベンジルエステルが油状の生成物としてえられた。収量は210 mg(100%)であった
。1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.37[s, C6 H 5-CH2-OCO-(化合物X)], 5.19 [s, C6H5-CH 2-
OCO-(化合物X)], 4.83 [s, (化合物X)-CH 2COOBz], 4.49 [d, (化合物X)-OH 1], 4
.24[d, (化合物X)-OH 2], 0.864[t, (化合物X)-CH 3], 7.025(t, 化合物X芳香族プ
ロトン), 6.7(d+d, 化合物X芳香族プロトン)。
【００８１】 丸底フラスコにmPEG20kDa(3 g)、前記ステップに由来する化合物X-ベンジルエ
ステル(100 mg)、HOBT(3 mg)、DMAP(25 mg)およびDCC(42 mg)を40 mlの無水塩化
メチレンに溶かした。溶液を室温で一晩かく拌し、溶媒を蒸発除去した。残留物
を30 mlの1,4-ジオキサンに溶かし、不溶性固体をろ去した。溶媒を凝縮し、100
mlの50:50エーテル／イソプロパノール混合液中に沈殿させた。沈殿をろ取し、
減圧乾燥させた。生成物の収量は2.7 g (90 %)であった。1H-NMR(DMSO-d6)：δ3
.5(br m, PEG), 2.48 [t, mPEG-OCH2CH 2COO-(化合物X)], 7.35 [s, C6 H 5-CH2-OC
O-(化合物X)], 5.17[s, C6H5-CH 2-OCO-(化合物X)], 4.83[s, (化合物X)-CH 2COOB
z]。0.857[t, (化合物X)-CH 3], 7.025(t, 化合物X芳香族プロトン), 6.7(d+d,
化合物X芳香族プロトン)。
【００８２】 mPEG-化合物Xベンジルエステル(前記ステップに由来、2.7 g)の1,4-ジオキサ
ン(30 ml)溶液をH2(2気圧)と1 gのPd/C(10%)で一晩水素添加処理した。触媒をろ
取し、新鮮な塩化メチレンで洗浄した。混合溶液を回転蒸発法で凝縮し、残留シ
ロップを300 mlのエチルエーテルに加えた。生成物をろ取し、減圧乾燥させた。
収量は2 g(74%)であった。1H-NMR(DMSO-d6)：δ3.5(br m, PEG), 2.48 [t, mPEG
-OCH2CH 2COO-(化合物X)], 4.61[s, mPEG-(化合物X)-CH 2-COOH], 0.857[t, (化合
物X)-CH 3], 7.025(t, 化合物X芳香族プロトン), 6.7(d+d, 化合物X芳香族プロト
ン)。実施例4 化合物Xおよび化合物1〜3のヒト血しょうに対する生体外抗血小板凝集効果 はじめに 健康なボランティアから採取したヒト血しょうに対する本発明の化合物Xおよ
び化合物1〜3の抗血小板凝集活性を以下のようにして測定した。さらに、血小板
希薄血しょう(PPP)との、および水性基剤（緩衝酢酸溶液）との種々の時間にわ
たる温置後の各化合物の抗血小板凝集反応を測定した。 方法 血小板濃厚血しょう（PRP）の調製 直前の少なくとも14日間はいっさいの医薬を投与されていない健康人のボラン
ティアから静脈穿刺法で3.15 %(w/v)クエン酸三ナトリウム中に採血した(9:1 v/
v)。この血液を800 gで15分、遠心にかけPRPをえた。PRPをさらに12,000 gで1分
、遠心にかけてPPPをえた。 血小板凝集の光度計による測定 光線透過率をPRP(0%)とPPP(100%)で校正したデュアルチャンネルPayton血小板
凝集計を用いて血小板凝集を測定した。シリコーン処理したキュベットにPRPを
分取(500 μl)し、かく拌（1000 rpm）後、37℃へと加温した。試験に先立ち安
定した基準値を確立するために血小板を1分間温置した。上限に近い濃度(1 μg/
ml)の凝集剤コラーゲンをPRPに加え、血小板凝集を4分間に観測される光線透過
率の上昇としてモニターした。 抗凝集反応 化合物X(1〜100 ng/ml)と化合物1〜3(0.1〜10 mg/ml)をそれぞれPRPと1分間温
置してから凝集剤のコラーゲン(1 μg/ml)を加えた。コラーゲン添加後の4分間
に観測された光線透過率の、対照との比較で見たピーク上昇幅を用いて血小板凝
集阻害率を計算した。少なくとも3人のボランティアからのPRPを使用してこの試
験を反復した。
【００８３】 試験結果を表1に示す。表1に示す結果は、前述の試験条件下でのヒト血小板凝
集に対する化合物Xおよび化合物1〜3の濃度依存効果を実証している。 水性基剤およびPPPとの温置後の抗凝集反応 別の試験で、化合物Xの試料(30および300 ng/ml)と化合物1の試料(0.3および3
mg/ml)、化合物2の試料(0.03、0.3および3 mg/ml)、化合物3の試料(3 mg/ml)を
500 μlの水性基剤(緩衝酢酸溶液)と種々の時間(15分間、1時間、4時間)にわた
り37℃で温置した。温置後に50 μl分取量の水性基剤＋対応する試料化合物を新
鮮PRP(450 μl)に加えて、コラーゲン添加後の抗凝集活性を求めた。この試験を
、少なくとも3人の健康なボランティアからのPPPを使用して反復した。水性基剤
(緩衝酢酸溶液)との、それぞれ15分間、1時間および4時間にわたる温置後の化合
物Xおよび化合物1〜3のヒト血小板凝集に対する効果を表2に示す。PPPとのそれ
ぞれ15分間、1時間および4時間にわたる温置後の化合物Xおよび化合物1〜3のヒ
ト血小板凝集に対する効果を表3に示す。表2と表3の両方のデータは供与者数nの
平均値および標準誤差(SEM)である。 結果 化合物Xの血小板凝集に対する効果 表1に示すように、コラーゲン添加前にPRPと1分間温置した化合物X(1〜100 ng
/ml)はコラーゲン誘発血小板凝集の濃度依存阻害を引き起こした。化合物Xは比
較的高濃度(30および100 ng/ml)では凝集反応を完全に阻害した(表1参照)。凝集
を50%阻害する化合物濃度(ID50)は20 ng/mlであった。
【００８４】 表3を見ると、化合物X(3および300 ng/ml)とPPPの15分間、1時間および4時間
の温置は抗血小板凝集活性に有意の効果を及ぼさなかった。同様に、化合物X(30
および300 ng/ml)と水性基剤だけの15分間、1時間および4時間の温置もまた抗血
小板凝集活性に有意の効果を及ぼさなかった(表2)。 化合物1の血小板凝集に対する効果 コラーゲン添加前にPRPと1分間温置した化合物1 (0.1〜3 mg/ml)は表1に示す
ように、血小板凝集の濃度依存阻害を引き起こした。化合物1は最高濃度(3 mg/m
l)ではコラーゲンに対する凝集反応を完全に阻害した(表1参照)。化合物1の1分
間温置後の抗凝集活性は化合物Xのそれと比較して約10-5も低かった。
【００８５】 表3に示すように、化合物1の抗凝集活性はPPPとの、それぞれ1時間および4時
間温置後には時間依存的に高まった。こうして、1分間温置後と比較して1時間温
置後の活性は7倍上昇したし、4時間温置後の活性は約22倍も上昇した(表3参照)
。
【００８６】 他方、化合物1の水性基剤だけとの温置はどの試験時点でも抗血小板凝集活性
に何らの効果も及ぼさなかった(表2参照)。 化合物2の血小板凝集に対する効果 表1に示すように、PRPと1分間温置した化合物2 は最高濃度(10 mg/ml)では血
小板凝集を約20%阻害した。それより低濃度の化合物2は1分間温置後では有意の
抗血小板凝集活性を示さなかった(表1参照)。
【００８７】 表3に示すように、化合物2の活性はPPPとの1時間および4時間温置後には時間
依存的に大幅に高まった。1分間温置後と比較して1時間温置後の活性は50倍上昇
したし、4時間温置後の活性は約3,500倍も上昇した(表3参照)。
【００８８】 しかし、化合物2の水性基剤だけとの温置はいずれの試験時点でも抗血小板凝
集活性に何らの効果も及ぼさなかった(表2参照)。 化合物3の血小板凝集に対する効果 表1に示すように、PRPと1分間温置した化合物3 (0.3〜10 mg/ml)は血小板凝集
の濃度依存阻害を引き起こした。化合物3は最高濃度(10 mg/ml)では凝集反応を
完全に阻害した(表1参照)。
【００８９】 化合物3(300 μg/ml)のPPPとの4時間温置は1分間温置後では無効であった濃度
で活性を上昇させ血小板凝集を40%阻害した(表3参照)。4時間温置後でも活性が
弱いため、それ以上の濃度は試験しなかった。
【００９０】 化合物3の水性基剤だけとの温置はいずれの試験時点でも抗血小板凝集活性に
何らの効果も及ぼさなかった(表2参照)。 結論 化合物Xと化合物1〜3の試料でえられた以上の試験結果は、分子量5,000〜20,0
00 DaのPEG部分と酢酸根の包摂が化合物Xの抗凝集活性を低下させることを示唆
する。しかし、これらの化合物の活性はヒト血しょうとの4時間温置では上昇す
るが、緩衝液だけとの温置では上昇しない。このことはこれらの誘導体の酵素的
加水分解の存在を示唆するが、そうした加水分解の存在は活性化合物の持続的放
出を示唆する。表１ 化合物Xおよび化合物1〜3のヒト血小板凝集に対する濃度依存効果
【００９１】
【表１】
【００９２】表２ 水性基剤(緩衝酢酸溶液)との温置後の化合物Xおよび化合物1〜3のヒト血小板凝
集に対する効果
【００９３】
【表２】
【００９４】表３ ヒトPPPとの温置後の化合物Xおよび化合物1〜3のヒト血小板凝集に対する効果
【００９５】
【表３】
【００９６】実施例5 麻酔ラットに静脈内投与した化合物Xおよび化合物1〜3の生体内全身血流力学効
果 はじめに この研究では、チオペントン麻酔したラットを使用して化合物1〜3の生体活性
の効能、作用および持続時間について化合物Xと比較しながら報告する。これら
の各化合物について静脈内ボーラス後の血圧(BP)と心拍数に対する効果を観測し
た。初期および最大反応までの時間、ならびに反応が基準値の50%に戻るまでの
所要時間を評価して、有効期間の比較ができるようにした。 材料と方法 オスのWistarラットをチオペントンナトリウム(INTRAVAL（登録商標）、120 m
g/kg、腹腔内注射)で麻酔した。気道にカニューレを挿入して呼吸が楽にできる
ようにした。右頸動脈にカニューレを挿入し圧力トランスデューサー(Spectrame
d P23XL)と接続して、平均動脈圧(MAP)と心拍数(HR)を測定し4チャンネルGrass
7D多元記録器(Grass, Mass., USA)で連続的に記録するようにした。左大腿静脈
または右頸静脈には薬物投与用のカニューレを挿入した。被験動物の体温は、血
液温度包括制御器(Harvard Apparatus Ltd.)に接続した直腸体温計を用いて37±
1℃に維持した。
【００９７】 15分の安定化期間をおいてから、各化合物の特定用量を被験動物に一度に静脈
内注入し、血流力学的パラメーターを3時間にわたって連続監視し、化合物の作
用持続時間を調べた。 結果 0.1 mg/kgおよび1 mg/kg用量の化合物Xの静脈内投与はそれぞれ投与関連の即
時MAP低下をもたらし、それには投与関連の心拍数上昇も伴った。約70 mm Hgの
最大MAP低下は化合物X投与後1分以内に起きた。基準値の50%に戻るまでのMAP反
応時間と直接相関する化合物Xの有効期間は0.1 mg/kg投与では約15分、1.0 mg/k
g投与では約30分であると判明した。
【００９８】 化合物1では、0.1 mg/kgおよび1 mg/kg用量の静脈内投与は投与関連の即時MAP
低下をもたらし、それには投与関連の心拍数上昇が伴った。約60 mm Hgの最大MA
P低下は化合物1投与後1分以内に起きた。基準値の50%に戻るまでのMAP低下持続
時間の関数である有効期間は10 mg/kg用量、30 mg/kg用量ではそれぞれ約15分、
約30分であった。
【００９９】 化合物2では、10 mg/kgおよび30 mg/kg用量の静脈内投与はいずれも投与関連
の即時MAP低下をもたらし、それには投与関連の心拍数上昇が伴った。化合物2の
10 mg/kg投与では約30 mm Hgの最大MAP低下が投与後10分以内に起きた。この10
mg/kg投与に起因するMAP低下持続時間の関数である有効期間は約125分であった
。化合物2の30 mg/kg投与では約30 mm Hgの最大MAP低下が投与後5分以内に起き
た。その後MAPは基準値に戻るかに見受けられたが、約30分の間をおいて2回目の
MAP低下(1回目と同様に顕著であった)が起きた。化合物2の30 mg/kg投与に起因
した二度にわたるMAP低下の有効期間はそれぞれ105〜160分であった。
【０１００】 化合物3では、30 mg/kg投与により小幅ながらも即時MAP低下が観察された。し
かし、化合物3投与の45分後および120分後にはMAPが徐々に低下した。MAPのこう
した遅延低下は化合物3投与の134〜165分後に基準値に戻った。約30 mm Hgの最
大MAP低下は投与後75分以内に起きた。30 mg/kg投与に起因するMAP低下の有効期
間は105分超であった。 結論 化合物Xは大幅な投与関連MAP低下を引き起こすことが確認された。化合物1も
また化合物Xと同様に、同程度の幅と持続時間の投与関連MAP低下を引き起こした
。化合物2および3はより小幅なMAP低下をもたらしたが、それぞれの持続時間は
比較的長かった。化合物2は有意の、より持効性の血圧低下を誘発するが、10 mg
/kg投与では顕著な心拍数上昇を伴わなかった。化合物2の投与に起因する即時MA
P低下は化合物Xおよび化合物1に起因する低下ほど大幅ではなかったという試験
結果は、安全性プロフィールの改善という面での利点を示唆する。実施例6 化合物X二酢酸塩(以下、化合物4)の合成 グループ5化合物（式中Z1はH、XはO、各Z2はアセチル基である）を次の要領で
調製した。
【０１０１】 丸底フラスコに化合物X(400 mg)とピリジン(200 μl)を混ぜ無水塩化メチレン
35 mlに懸濁させた。この懸濁液に500 μlの無水酢酸を加えた。混合物は2、3時
間で均質化した。この混合溶液を室温で一晩かく拌した。溶媒を凝縮し、残留物
に緩衝リン酸溶液(0.1 M, pH 7.4)を加えた。この混合液を30分間、急速かく拌
してから塩化メチレンで3回抽出した。有機相をひとまとめにして硫酸ナトリウ
ム上で乾燥させ、また溶媒を蒸発除去した。化合物Xの二酢酸塩が油状の生成物
としてえられた。収量は340 mg(80%)であった。1H-NMR(DMSO-d6)：1.91 [s, (化
合物X)-O1COCH 3], 2.00[s, (化合物X)-O2COCH 3], 0.84[t, (化合物X)-CH 3]。
実施例7 mPEG20kDa-エステル-化合物X二酢酸塩(以下、化合物5)の合成 グループ4化合物(式中Z1は分子量約20,000 DaのmPEG、XはO、各Z2はアセチル
基である)を以下の要領で調製した。
【０１０２】 丸底フラスコにmPEG20kDa(5.2 g)、化合物X二酢酸塩(140 mg)、1-ヒドロキシ
ベンジルトリアゾール(HOBT, 35 mg)、4-(ジメチルアミノ)ピリジン(DMAP, 30 m
g)およびジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC, 75 mg)を無水塩化メチレン60 m
lに溶かした。溶液を室温で一晩かく拌し、溶媒を蒸発除去した。残留物を35 ml
の1,4-ジオキサンに溶かし、不溶性固体をろ去した。溶液を減圧濃縮し、200 ml
の50:50エーテル／イソプロパノール混合液に加えた。えられた沈殿をろ取し、
減圧乾燥させた。生成物の収量は4.8 g(92%)であった。1H-NMR(DMSO-d6)：δ3.5
(br m, PEG), 4.23 [t, -PEG-OCH2CH 2O-CO-(化合物X)], 1.91 [s, (化合物X)-O1 COCH 3], 2.00[s, (化合物X)-O2COCH 3], 0.84[t, (化合物X)-CH 3]。4.77[s, (化
合物X)-CH 2COO-PEG], 7.03(t, 化合物X芳香族プロトン), 6.7(d+d, 化合物X芳香
族プロトン)。実施例8 化合物Xおよび化合物4〜7のヒト血しょうに対する生体外抗血小板凝集効果 はじめに 健康なボランティアから採取したヒト血しょうに対する本発明のアセチル化化
合物X(以下、化合物4)および化合物5〜7の抗血小板凝集活性を以下のようにして
測定し、また天然化合物Xの抗血小板凝集活性と比較した。さらに、血小板希薄
血しょう(PPP)との、および水性基剤（緩衝酢酸溶液）との種々の時間にわたる
温置後の各化合物の抗血小板凝集反応を測定した。
【０１０３】 なお、化合物6、7はそれぞれmPEG20kDa-アミド-化合物X、mPEG20kDa-アミド-
化合物X二酢酸塩であり、実施例1の化合物1と同様の要領で調製した。化合物6、
7はそれぞれグループ4化合物であり、式中Z1は分子量約20,000 DaのmPEGであり
、XはNHである。Z2は化合物6ではHであり、化合物7ではアセチル基である。 方法 血小板濃厚血しょう（PRP）の調製 直前の少なくとも14日間はいっさいの医薬を投与されていない健康人のボラン
ティアから静脈穿刺法で3.15 %(w/v)クエン酸三ナトリウム中に採血した(9:1 v/
v)。この血液を800 gで15分、遠心にかけPRPをえた。PRPをさらに12,000 gで1分
、遠心にかけてPPPをえた。この研究には合計12人のボランティアから献血があ
った。 血小板凝集の光度計による測定 光線透過率をPRP(0%)とPPP(100%)で校正したデュアルチャンネルPayton血小板
凝集計を用いて血小板凝集を測定した。シリコーン処理したキュベットにPRPを
分取(500 μl)し、かく拌（1000 rpm）後、37℃へと加温した。試験に先立ち安
定した基準値を確立するために血小板を1分間温置した。上限に近い濃度(1 μg/
ml)の凝集剤コラーゲンをPRPに加え、血小板凝集を4分間に観測される光線透過
率の上昇としてモニターした。 抗凝集活性 化合物X(1〜100 ng/ml)と化合物4(1〜300 mg/ml)およびPEG結合誘導体の化合
物5〜7(0.1〜10 mg/ml)をそれぞれPRPと1分間温置してから凝集剤のコラーゲン(
1 μg/ml)を加えた。コラーゲン添加後の4分間に観測された光線透過率の、対照
との比較で見たピーク上昇幅を用いて血小板凝集阻害率を計算した。各化合物に
ついて少なくとも3人のボランティアからのPRPを使用してこの試験を反復した。
水性基剤およびPPPとの温置後の抗凝集反応 別の試験で、化合物X(30および300 ng/ml)、化合物4および化合物5〜7の濃縮
物を500 μlのPPPまたは水性基剤(緩衝酢酸溶液)と種々の時間(15分間、1時間、
4時間)にわたり37℃で温置した。温置後に50 μl分取量のPPPまたは水性基剤を
新鮮PRP(450 μl)に加えて抗凝集活性を求めた。各化合物について少なくとも3
人の健康なボランティアからのPPPを使用してこの試験を反復した。 結果 化合物Xの血小板凝集に対する効果 PRPと1分間温置した化合物X(1〜100 ng/ml)はコラーゲン誘発血小板凝集の濃
度依存阻害を引き起こした。化合物Xは比較的高濃度(30および100 ng/ml)で凝集
反応を完全阻害した。凝集を50%阻害する化合物濃度(IC50)は19±1 ng/mlであっ
た。 化合物4の血小板凝集に対する効果 PRPと1分間温置した化合物4すなわち化合物X二酢酸塩 (1〜300 μg/ml)は、血
小板凝集の濃度依存阻害を引き起こした。化合物4は最高濃度(300 μg/ml)では
コラーゲンに対する凝集反応を完全に阻害し、そのIC50は68±2μg/mlであった
。化合物4の1分間温置後の抗凝集活性は化合物Xのそれと比較し約3×10-3も低か
った。
【０１０４】 化合物4の抗凝集活性はPPPとの温置後15分間は上昇した。15分経過後は活性が
約10-1も低下し、そのIC50は5±2 μg/mlであった。この効果は生理食塩水中で
の化合物の温置時にも観察された。しかし、PPPと最長4時間温置しても、それ以
上の活性の上昇は観察されなかった。 化合物5の血小板凝集に対する効果 PRPと1分間温置した化合物5 は試験最高濃度(10 mg/ml)では血小板凝集を約10
%阻害した。それより低濃度の化合物5は1分間温置後では有意の抗血小板凝集活
性を示さなかった。
【０１０５】 化合物5の活性はPPPとの1時間および4時間温置後には時間依存的に高まった。
1分間温置後と比較して4時間温置後の活性は10倍上昇し、そのIC50は513±18 μ
g/mlとなった。しかし、化合物5と水性基剤との温置はどの試験時点でも抗血小
板凝集活性に何らの効果も及ぼさなかった。 化合物6の血小板凝集に対する効果 PRPと1分間温置した化合物6 (0.1〜3 mg/ml)は血小板凝集の濃度依存阻害を引
き起こした。化合物6は最高濃度(3 mg/ml)では凝集反応をほぼ完全に阻害した。
そのIC50は600±34 μg/mlであった。
【０１０６】 化合物6(100 μg/ml)のPPPとの4時間温置は1分間温置後では無効であった濃度
で活性を上昇させ血小板凝集を85%阻害した。4時間温置後の化合物6のIC50は60
±5 μg/mlであった。4時間温置後でも低活性であったため、それ以上の濃度は
試験しなかった。
【０１０７】 化合物6の水性基剤との温置はいずれの試験時点でも抗血小板凝集活性に何ら
の効果も及ぼさなかった。 化合物7の血小板凝集に対する効果 PRPと1分間温置した化合物7 (10 mg/ml)は最高濃度でも凝集反応をあまり阻害
しなかった。
【０１０８】 化合物7(10 mg/ml)のPPPまたは水性基剤との4時間温置は活性を何ら高めなか
った。4時間温置後でも低活性であったため、それ以上の濃度は試験しなかった
。 結論 光学凝集計による測定に基づく以上の試験結果は、プロスタサイクリンのベン
ジンデン誘導体である化合物Xの、ヒト血小板濃厚血しょう中での強力な生体外
抗血小板凝集活性を確認する。以上の試験における血小板懸濁液との1分間温置
後のこの化合物の効能は前に実施例4で報告したものほぼ同じである。前の試験
の場合と同様に、抗血小板凝集活性は無血小板血しょうまたは水性基剤との37℃
での最長4時間にわたる温置による影響をまったく受けなかった。これは生理的
条件の下でのその化学的安定性を確認するものである。
【０１０９】 以上の研究結果は、化合物Xが二酢酸塩誘導体の化合物4よりも抗血小板凝集活
性が著しく高く、二酢酸塩のほうは約3×10-3も活性が低いことを示唆する。こ
のアセチル化誘導体は確かに血しょうまたは水性基剤との温置により当初の10分
間は約10倍も活性を増すが、この活性増大は4時間温置後には少しも大きくなか
った。こうした初期活性増大のメカニズムはPPP媒質中で温置したときの二酢酸
塩の一時的な不安定性を反映するのかもしれない。
【０１１０】 以上の試験結果はまた、化合物Xは化合物4〜7よりも抗血小板凝集活性が著し
く高いことを示唆する。化合物6はPRPとの1分間温置後の活性が3種類のPEG結合
誘導体(化合物5〜7)の中でもっとも高かったが、化合物Xと比べるとずっと低効
能であり、約3×10-4も低活性であった。
【０１１１】 化合物5〜7の抗血小板凝集活性はPPPとの最長4時間にわたる温置により不定の
影響を受けた。4時間を超える時点の試験はヒト血しょうを生体外で使用して行
うことはできなかった。というのは血小板凝集反応は採血後6時間を経過すると
急速に低下するからである。化合物5および6の活性は4時間の温置で10倍以上も
高まったが、同様の効果は生理食塩水中で温置した場合には見られなかった。以
上の事実は、これらのPEG結合誘導体(化合物5〜7)の活性部分が37℃での4時間に
わたる温置後にヒト血しょう中に存在する酵素類によって時間依存的に放出され
る、すなわちヒト血しょう中でこれらの分子上のエステル基と酢酸根にそれぞれ
加水分解が起こることを示唆する。しかし、これらの化合物で観察され活性の上
昇は実施例4の一部の化合物で観察された上昇よりもずっと小幅であった。
【０１１２】 化合物5〜7でえられた以上の試験結果は、分子量20,000 DaのPEG部分と酢酸根
の包摂が化合物Xの抗凝集活性を低下させることを示唆する。しかし、化合物5お
よび6の活性はヒト血しょうとの4時間にわたる温置で上昇するが、このことはこ
れらの置換原子団が加水分解されることを示唆する。これらの化合物の活性はヒ
ト血しょうとの4時間にわたる温置後に10倍も上昇するが、緩衝液だけとの温置
では上昇しない。このことはこれらの誘導体のエステル結合とアミド結合が酵素
的に加水分解され、活性部分を放出することを示唆する。これらの結果は、ヒト
血しょう中で活性化させることができるPEG置換を土台にした化合物Xの徐放性誘
導体が創出されたことを示唆する。実施例9 麻酔ラットに静脈内投与した化合物Xおよび化合物4〜7の生体内全身血流力学効
果 はじめに この研究ではチオペントン麻酔ラットを使って化合物4〜7の心血管活性を観測
した。これらの各化合物について静脈内ボーラス後の血圧(BP)と心拍数に対する
効果を測定した。初期および最大反応までの時間、ならびに反応が基準値の50%
に戻るまでの所要時間に注目した。各化合物は個別動物に単一用量を投与し、用
量−反応曲線を求めた。
【０１１３】 化合物4〜7は他の効能として、麻酔したラットに静脈内投与したときに平均動
脈圧(MAP)のかなりの低下を引き起こす腸管膜動脈の濃度依存的弛緩を誘発する
。出願人は化合物Xと比較した場合の化合物4〜7の有効期間の改善を確認するた
めに、MAPの経時変化を測定して、反応が基準値の50%に戻るまでの所要時間とし
て定義される化合物の有効期間を推定するようにした。 材料と方法 この研究には、チオペントンナトリウム(INTRAVAL（登録商標）、120 mg/kg、
腹腔内注射)で麻酔したオスのWistarラットを使用した。気道にカニューレを挿
入して呼吸が楽にできるようにした。右頸動脈にカニューレを挿入し圧力トラン
スデューサー(Spectramed P23XL)と接続して、平均動脈圧(MAP)と心拍数(HR)を
測定し4チャンネルGrass 7D多元記録器(Grass, Mass., USA)で連続的に記録する
ようにした。左大腿静脈または右頸静脈には薬物投与用のカニューレを挿入した
。血液温度包括制御器(Harvard Apparatus Ltd.)に接続した直腸体温計を用いて
体温を37±1℃に維持した。
【０１１４】 15分の安定化期間をおいてから、天然化合物Xおよび化合物4〜7の各特定用量
をラットに一度に静脈内注入し、血流力学的パラメーターを3時間にわたって連
続監視し、化合物の作用持続時間を調べた。 結果 1、3および10 mg/kg用量の化合物4の静脈内投与はそれぞれ投与関連の即時MAP
低下をもたらし、それには投与関連の心拍数上昇も伴った。1 mg/kg用量では化
合物投与の30分後に約30 mm Hgの最大MAP低下が起きた。化合物4の1 mg/kg投与
で引き起こされたMAP低下の有効期間は約110分であった。
【０１１５】 化合物Xの1 mg/kg用量の静脈内投与は、化合物4の最高用量(10 mg/kg)の静脈
内投与の場合と同様の最大MAP低下を引き起こした。MAP低下の持続時間は化合物
Xよりも化合物4のほうがずっと長く、その有効期間は化合物Xの30分に対して90
分超であった。化合物4の効果は化合物Xの10倍の最高用量によって誘発される効
果よりも長く持続した。これらの事実は、この誘導体で観察された作用持続時間
の増大が化合物Xでは超最高用量でも実現しえないことを示唆する。さらに、化
合物4に起因する頻拍は化合物Xに起因する頻拍よりも発現が遅かった。化合物4
に起因する頻拍は化合物投与後3時間でもなお著しかった。
【０１１６】 化合物5の投与(3、10 および30 mg/k、静脈内)は化合物4または化合物Xに起因
するものほど顕著ではなく心拍数の著しい増加も伴わない投与関連のMAP低下を
もたらした。反応は15分後に最大に達し、作用持続時間は非常に長く、有効期間
は約120分であった。
【０１１７】 化合物6の投与(3、10および30 mg/kg、静脈内)は投与関連の即時MAP低下を引
き起こしたが、この反応は発現が遅く、より高用量を要したし、ピークに達した
のは化合物投与の3時間後であったように見受けられる。最大の低下は約60 mm H
gで、10分以内に起きた。しかし、この反応の初期段階の持続時間は短く、安静
値へと向かうより穏やかな血圧回復期がそれに続いた。興味深いことに化合物6
は心拍数の変化をあまり引き起こさなかった。
【０１１８】 化合物4と化合物6はどちらも急速かつ大幅なMAP低下をもたらした。しかし、
化合物４の場合にはMAP低下に顕著な心拍数の上昇も伴った。化合物4によるMAP
低下は持続時間がより長かったが、MAPの急低下とその結果としての頻拍は安全
性プロフィールの面では不利であろう。
【０１１９】 対照的に、化合物7の投与(3、10および30 mg/kg、静脈内)は段階的なMAP低下
をもたらし、それが横ばいに推移し始めたのは実に135〜165分後であった。この
段階的な低下は漸進的であり、最大(約30 mm Hg)に達したのは3時間試験の終わ
り頃であった。このMAP低下は頻拍を伴わなかった。 結論 本化合物の心血管プロフィールは構造−活性関係についての若干の定義を、し
たがって長い作用持続を示す化合物Xのデザインを可能にする。加えて、その種
の化合物は、初期降圧危機の可能性を最小限に抑える緩慢な作用発現を伴うもの
に調製されよう。5,000または20,000 DaのPEGに結合された化合物のプロフィー
ル比較は、いずれのPEGサイズでもMAPプロフィールまたは降圧効果の持続時間に
違いはなさそうに見えるものの、20,000 Da PEGを含む化合物にして心拍数への
影響を少なくする傾向になることを示唆する。反射性頻拍の解消に関連する潜在
的な臨床上の利点または問題点についてはさらに考察する必要がある。
【０１２０】 アミド結合またはエステル結合を介してPEG置換基に結合された化合物のプロ
フィール比較によれば、エステル結合よりもアミド結合のほうが初期MAP低下が
穏やかであるとみられるし、現に反射性頻拍を引き起こさないことも観察された
。実施例10 麻酔ラットへの化合物の2皮下投与の全身血流力学効果 化合物2を皮下投与により評価した。オスのWistarラット(250〜330 g)をチオ
ペントンナトリウム(INTRAVAL（登録商標）、120 mg/kg、腹腔内注射)で麻酔し
た。気道にカニューレを挿入して呼吸が楽にできるようにした。右頸動脈にカニ
ューレを挿入し圧力トランスデューサー(Spectramed P23XL)と接続して、平均動
脈圧(MAP)と心拍数(HR)を測定し4チャンネルGrass 7D多元記録器(Grass, Mass.,
USA)で連続的に記録するようにした。血液温度包括制御器(Harvard Apparatus
Ltd.)に接続した直腸体温計を用いて体温を37±1℃に維持した。15分の安定化期
間をおいてから、化合物2を頸部に皮下注射した。
【０１２１】 化合物2の投与(30 mg/kg、皮下)はMAPの大幅な低下を引き起こした。MAP低下
は初めは緩慢であり、投与後45分で最大に達した。さらに、化合物２は心拍数の
上昇も引き起こした。実施例5の化合物2の静脈内投与と比較すると、MAP低下の
持続性は皮下投与のほうが顕著であったが、その発現は遅かった。3時間後の効
果は静脈内投与の場合よりも大きかった。化合物2や他化合物のいっそうの試験
が求められる。実施例11 化合物X、化合物4、化合物7およびmPEG5kDa-アミド-化合物X二酢酸塩の麻酔ラッ トへの皮下投与の生体内全身血流力学効果 化合物X、化合物4、化合物7およびmPEG5kDa-アミド-化合物X二酢酸塩(以下、
化合物8)を皮下投与により評価した。オスのWistarラット(250〜330 g)をチオペ
ントンナトリウム(INTRAVAL（登録商標）、120 mg/kg、腹腔内注射)で麻酔した
。気道にカニューレを挿入して呼吸が楽にできるようにした。右頸動脈にカニュ
ーレを挿入し圧力トランスデューサー(Spectramed P23XL)と接続して、平均動脈
圧(MAP)と心拍数(HR)を測定し4チャンネルGrass 7D多元記録器(Grass, Mass., U
SA)で連続的に記録するようにした。血液温度包括制御器(Harvard Apparatus Lt
d.)に接続した直腸体温計を用いて体温を37±1℃に維持した。15分の安定化期間
をおいてから、化合物X、化合物4、化合物7または化合物8を頸部に皮下注射した
。
【０１２２】 前記の化合物8は実施例1の化合物1と同様の要領で調製した。化合物はグルー
プ4化合物(式中Z1は分子量約20,000 DaのmPEG、XはNH、Z2はアセチル基)である
。 結果 化合物4の用量1、3および10 mg/kgの皮下投与はそれぞれ、投与関連のMAP低下
を引き起こしたが、それには投与関連の心拍数上昇も伴った。1 mg/kg投与後で
は、約26 mm Hgの最大MAP低下が投与の60分後に起こり、投与の210分後に28 mm
Hgへの再低下が起きた。上記3用量の投与に起因するMAP低下の有効期間はそれぞ
れ＞300分、＞330分、＞300分であった(表5参照)。
【０１２３】 化合物Xの投与(0.1、0.3および1 mg/kg、皮下)は投与関連のMAP急低下を引き
起こし、投与関連の心拍数上昇も招いた(表4参照)。1 mg/kg皮下投与後では、投
与15分後に約70 mm Hgの最大MAP低下が起きた。MAP低下は化合物Xと比較して化
合物4のほうが持続時間がずっと長かった。頻拍は化合物4のほうが発現がずっと
遅かった。化合物4に起因する頻拍が10 mg/kg用量では投与6時間後でもなお著し
かったのは注目に値する。もっと低用量の1 mg/kgおよび3 mg/kgでは心拍数はそ
れぞれ約5分後、45分後に安定した。
【０１２４】 化合物7の投与(3、10および30 mg/kg)は投与関連の段階的、漸進的なMAP低下
をもたらし、MAP低下は投与後6時間持続した。活性の大きさは天然化合物Xや化
合物4ほどではなかった。用量3、10および30 mg/kgに対応する最大MAP低下はそ
れぞれ35、29および25 mm Hgであった。いずれの場合も低下幅が最大となったの
は投与の約330〜360分後であった(表6参照)。
【０１２５】 化合物8の投与(3、10および30 mg/kg、皮下)は投与関連の緩慢なMAP低下を引
き起こしたが、最高用量の場合、低下が24 mm Hgの最大に達したのは投与の約24
0分後のように見受けられた。有効期間は120分を超えた(表7参照)。表４ 6時間にわたって測定した化合物X(皮下投与)の平均動脈圧(mm Hg)効果
【０１２６】
【表４】
【０１２７】表５ 6時間にわたって測定した化合物4(皮下投与)の平均動脈圧(mm Hg)効果
【０１２８】
【表５】
【０１２９】表６ 6時間にわたって測定した化合物7(皮下投与)の平均動脈圧(mm Hg)効果
【０１３０】
【表６】
【０１３１】表７ 6時間にわたって測定した化合物8(皮下投与)の平均動脈圧(mm Hg)効果
【０１３２】
【表７】
【０１３３】実施例12 mPEG350Da-アミド-化合物X二酢酸塩(以下、化合物9)の合成 グループ4化合物(式中Z1は分子量約350 DaのmPEG、XはNH、Z2はアセチル基で
ある)を以下の要領で調製した。
【０１３４】 丸底フラスコで化合物X(400 mg)、mPEG(350Da)アミン(360 mg)、HOBT(15 mg)
、およびDCC(267 mg)を20 mlの無水塩化メチレンに混ぜ、混合液を室温で一晩か
く拌した。不溶性固体をろ去し、有機溶液を5 wt%重炭酸ナトリウム溶液で洗浄
した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を減圧除去した。えられた生
成物をアセトニトリル10 mlに溶かし、不溶性固体をろ去した。この溶液に無水
酢酸(3 ml)とピリジン(0.3 ml)を加えた。えられた溶液を一晩40℃に加温した。
溶液に300 mlの5 wt%炭酸水素ナトリウム溶液を加え、混合液を室温で30分かく
拌した。混合液を塩化メチレンで抽出し、有機相を緩衝リン酸溶液(0.1 M, pH 2
)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を除去し、生成物を減圧乾燥
させた。収量は600 mg(70%)であった。1H-NMR(DMSO-d6)：δ3.5(br m, PEG), 7.
897[t, -PEGNH-CO-(化合物X)], 1.91 [s, (化合物X)-O1COCH 3], 2.00 [s, (化合
物X)-O2COCH 3], 0.864[t, (化合物X)-CH 3], 4.436[s, (化合物X)-CH 2CONH-PEG],
7.045(t, 化合物X芳香族プロトン), 6.7(d+d, 化合物X芳香族プロトン)。実施例13 mPEG350Da-エステル-化合物X二酢酸塩(以下、化合物10)の合成 グループ4化合物(式中Z1は分子量約350 DaのmPEG、XはO、各Z2はアセチル基で
ある)を以下の要領で調製した。
【０１３５】 丸底フラスコで化合物X(3 g)とトリエチルアミン(TEA, 1.5 μl)を無水アセト
ニトリル100 mlと混ぜた。この溶液に塩化アセチル3 mlを加えた。混合液を室温
で一晩かく拌した。次いで溶液に5 wt%の重炭酸ナトリウム溶液を混ぜ室温で30
分かく拌した。水相を塩化メチレンで抽出した。有機相を緩衝リン酸溶液(0.1 M
, pH 2)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。収量は3.3 g(80%)であった
。1H-NMR(DMSO-d6)：1.91 [s, (化合物X)-O1COCH 3], 2.00 [s, (化合物X)-O2COC H 3 ], 0.84[t, (化合物X)-CH 3]。
【０１３６】 丸底フラスコでmPEG(350Da)(550 mg)、前記ステップに由来する化合物X二酢酸
塩(750 mg)、HOBT(60 mg)、DMAP(150 mg)およびDCC(375 mg)を30 mlの無水塩化
メチレンに溶かした。この溶液を室温で一晩かく拌した。不溶性固体をろ去して
、溶液を5 wt%重炭酸ナトリウム溶液と緩衝リン酸溶液(0.1 M, pH2)で洗浄した
。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧濃縮した。えられた生成物をアセ
トニトリル10 mlに溶かし、不溶性固体をろ去した。溶媒を蒸発除去すると、生
成物が透明油としてえられた。収量は1 g(76%)であった。1H-NMR(DMSO-d6)：δ3
.5(br m, PEG), 4.23[t, -PEGOCH2CH 2O-CO-(化合物X)], 1.91 [s, (化合物X)-O1 COCH 3], 2.00 [s, (化合物X)-O2COCH 3], 0.84[t, (化合物X)-CH 3], 4.77[s, (化
合物X)-CH 2COOPEG], 7.03(t, 化合物X芳香族プロトン), 6.7(d+d, 化合物X芳香
族プロトン)。実施例14 mPEG350Da-アミド-化合物X二酢酸塩の麻酔ラットに対する生体内全身血流力学効 果の評価 この研究では、プロスタサイクリンの化学的に安定なベンジンデン類似物であ
る化合物Xの新規低ポリエチレングリコール(PEG)誘導体をラットに静脈内および
経口投与して、その心血管活性を評価した。このmPEG350Da-アミド-化合物X二酢
酸塩(以下、化合物9)は、経口投与に有効であるような誘導体を生成しようとの
試みから合成された。経口投与に有効な類似物は、多数の治療施設で安定したプ
ロスタサイクリン類似物の臨床的可能性を広げることになろう。
【０１３７】 これまでの研究では、種々の分子量部分を結合した化合物Xの多数の誘導体を
評価してきた。そこでは5,000 Daと20,000 Daという比較的高分子量のPEG重合体
をこの天然化合物のさまざまな部位にエステルまたはアミド結合で結合させたし
、また遊離ヒドロキシル基のアセチル化の効果を調べもした。また、麻酔ラット
を使用して静脈内ボーラスや皮下ボーラス後のそれら誘導体の血流力学的プロフ
ィールを調べた。この研究では、ラットへの静脈内または経口投与後の350 Da P
EG誘導体の全身動脈血圧に対する作用を評価した。 対象化合物 この研究に使用した化合物はアセチル化mPEG350Da-アミド-化合物X(mPEG 350-
NHCO-化合物X-Ac)(以下、化合物9)であり、そこでは分子量350 DaのPEGがアミド
結合によって化合物Xのカルボキシル基に結合され、また化合物Xのヒドロキシル
基はアセチル化されている。 一般的な方法論 ここで説明する一連の研究はチオペントン麻酔ラットにおけるこれらの化合物
の心血管活性に関するものである。これらの研究では静脈内および経口ボーラス
後の化合物9の血圧(BP)と心拍数に対する効果を観察した。初期および極大反応
に要する時間、ならびに反応が基準値の50%に戻るまでの所要時間を測定した。
各化合物を群内の個別ラットに単一用量として投与して、用量−反応関係を求め
、また静脈内投与の3時間後と経口投与の6時間後に心血管パラメーターを測定し
た。
【０１３８】 オスのWistarラット(250〜330 g)をチオペントンナトリウム(INTRAVAL（登録
商標）、120 mg/kg、腹腔内注射)で麻酔した。気道にカニューレを挿入して呼吸
が楽にできるようにした。右頸動脈にカニューレを挿入し圧力トランスデューサ
ー(Spectramed P23XL)と接続して、平均動脈圧(MAP)と心拍数(HR)を測定し4チャ
ンネルGrass 7D多元記録器(Grass, Mass., USA)で連続的に記録するようにした
。血液温度包括制御器(Harvard Apparatus Ltd.)に接続した直腸体温計を用いて
体温を37±1℃に維持した。 静脈内投与の方法論 化合物9を無水エタノールに溶かして200 mg/mlの原液とし、フリーザーに−20
℃で貯蔵した。分取量の原液を使用直前に取り出し生理食塩水に溶かした。こう
して、3、10および30 mg/kgの化合物投与を受けるラットはそれぞれ1.5%、5%お
よび15%エタノール0.3 mlを摂取した。対照群のラットは最高濃度すなわち15%エ
タノール溶液0.3 mlの静脈内投与を受けた。
【０１３９】 15分の安定化期間をおいてから化合物9の静脈内ボーラス(3、10および30 mg/k
g)投与が行われた。 経口投与の方法論 経口投与を行いやすくするためにゴムカテーテルを(食道経由で)胃に挿入した
。20分の安定化期間をおいてから、この管を通して化合物9を合計1 mlのボーラ
スとして投与した。
【０１４０】 化合物9を無水エタノールに溶かして200 mg/mlの原液とし、フリーザーに−20
℃で貯蔵した。分取量の原液を使用直前に取り出し生理食塩水に溶かした。こう
して、30 mg/kgの化合物9投与を受けたラットは15%エタノール1 mlを摂取した。
対照群のラットは15%エタノール溶液1 mlの投与を受けた。
【０１４１】 試験は、死体解剖時に胃に餌が入っている非断食ラットかまたは試験前15時間
程度、餌を遠ざけておいたラットを対象に行った。 静脈内投与試験の結果 麻酔ラットへの化合物9の静脈内投与(3、10および30 mg/kg)は投与関連の急速
なMAP低下を引き起こした(表8A参照)が、心拍数にはあまり影響がなかった。こ
の降圧反応は最高用量では15分以内にピーク値に達したが、作用は長く持続し、
有効期間は120分以上であった。化合物9の最高用量が心拍数の一時的な低下を引
き起こすように見受けられたのは注目に値する(表8B参照)。表８Ａ 化合物9の静脈内投与に由来する用量反応(平均動脈圧、mm Hg)
【０１４２】
【表８】
【０１４３】表８Ｂ 化合物9の静脈内投与に由来する用量反応(心拍数)
【０１４４】
【表９】
【０１４５】 経口投与試験の結果 麻酔した給餌または断食ラットへの化合物9の経口投与(30 mg/kg)はMAPの低下
を引き起こしたが、それは発現が遅く、漸進的で、持続時間が長かった(表9A参
照)。MAP低下は120分後にピークに達し、6時間の観察期間の終わりでもMAPは下
がったままであった。約33 mm Hgの最大MAP低下は6時間の観察期間の終わりに観
測された。しかし、エタノール(15%エタノール0.3 ml)を含む基剤もまた小幅な
、漸進的なMAP低下を引き起こしたことは注目に値する。この場合のMAP低下は発
現が遅く、6時間後に20 mm Hgの最大値に達した(表9A参照)。給餌ラットと断食
ラットでは化合物9に対する血管抑制反応に大差なさそうに見えた。
【０１４６】 エタノール系基剤は心拍数の漸進的低下も引き起こしたが、それは試験薬物自
体によって引き起こされる心拍数低下よりも顕著であった(表9B参照)。表９Ａ 化合物9の経口投与に由来する反応(平均動脈圧、mm Hg)
【０１４７】
【表１０】
【０１４８】表９Ｂ 化合物9の経口投与に由来する反応(心拍数)
【０１４９】
【表１１】
【０１５０】 結論 化合物9の静脈内投与後のラットに関する以上の研究結果は、この化合物が持
効性作用を急速に発現させることを示した。しかし、化合物9は、以前の実施例
で報告したmPEG5kDa-アミド化合物X(化合物1)に比し10分の1の低分子であるにも
かかわらず、血管抑制薬としての効能は化合物1並みでしかなかった。その理由
はすぐには明らかでないが、活性化学種への変換が遅いためかもしれない。そう
した可能性はPEG誘導体に関する現在の知見では説明しにくいであろうが、アミ
ド結合の酵素的加水分解ならびに保護アセチル部分のヒドロキシル基としての分
離の重要な特徴を表すのかもしれない。比較的低分子量のPEGは、より硬直した
高分子量のPEG基よりも拘束が少ないであろうし、また化合物X上のアミド結合の
十分な暴露を許さないであろうから、化合物は化学的攻撃を受けにくく活性種を
放出しにくくなる。置換基サイズの違いが化合物Xのベンジンデン主鎖上の帯電
分布にどう影響するかは不明であるが、これもまた、PEG類似物の、または後に
放出される遊離天然化合物Xの（それが降圧反応を誘発する活性種である場合に
は）加水分解速度を調節するという可能性がある。
【０１５１】 アミド結合を介して5kDaまたは20kDaのPEGと結合したジアセチル化化合物の静
脈内投与による先の研究では、アセチル化が化合物に比較的小幅な、段階的なMA
P低下と緩慢な回復を生じさせることを示した。この段階的なMAP低下は反射性頻
拍を伴わなかった。それに対して、この研究では化合物9は急速な作用発現を示
し、また初期の心拍数低下を伴った。したがって、エステル基またはアミド基で
結合された5 kDaまたは20 kDaのPEGの場合のようなアセチル化によるヒドロキシ
ル基の保護は比較的低分子量の化合物の活性種放出を調節しないように見えよう
。これがもっと低分子量のアセチル化エステル誘導体にも当てはまるかどうかは
今後の研究にまつことになろう。しかし、アセチル化形態の、PEGに結合されて
いない化合物Xもまた急速な作用発現をもたらしたというのは当たっている。こ
れは、非経口投与後の急速な作用発現を和らげるためのこの化学的アプローチが
350 Da超のPEG誘導体に限って有効であることを示唆する。
【０１５２】 経口投与に関しては、最高用量の化合物9は確かに段階的なMAP低下をもたらし
たが、ただしこの効果の大きさは、油状化合物の可溶化に必要とされる溶媒のエ
タノールを含んだ基剤でも小幅な、段階的なMAP低下が生じているためはっきり
しなかった。この作用の大きさからして、より低用量のほうは試験しなかった。
しかし、この血管抑制作用は断食、給餌両ラットで比較したデータによればどち
らの条件下でも生体利用率がほぼ同じであることを示唆している。化合物9の血
圧プロフィールは静脈内投与と経口投与では性格が異なるため、この研究で経口
投与の場合の絶対的な生体利用率を求めるのは困難である。
【０１５３】 アセチル化mPEG 5kDaまたは20 kDa化合物Xアミド誘導体の血流力学プロフィー
ルは静脈内投与後と皮下投与後で類似するという先の研究結果は、これらの類似
物の緩慢な活性化とそれに続く緩慢な代謝または排出を示唆する。それに対して
、化合物9に関するこの研究は、化合物9が低分子量であるにもかかわらず効能の
改善も、非経口投与後の心血管事象への緩慢な作用の発現という潜在的利点もも
たらさないことを示唆している。しかし、低分子量のPEG誘導体の使用は新規、
持効性の経口投与型プロスタサイクリン誘導体の開発に対する合理的な化学的ア
プローチを提供してくれるかもしれない。実施例15 mPEG350Da-エステル-化合物X二酢酸塩の麻酔ラットに対する生体内全身血流力学 効果の評価 この研究では、プロスタサイクリンの化学的に安定なベンジンデン類似物であ
る化合物Xの新規低ポリエチレングリコール(PEG)誘導体をラットに静脈内投与し
て、その心血管活性を評価した。このmPEG350Da-エステル-化合物X二酢酸塩(以
下、化合物10)はその全身血流力学効果を調べようとの試みから合成された。 対象化合物 この研究に使用した化合物はアセチル化mPEG350Da-エステル-化合物X(化合物1
0)であり、そこでは分子量350 DaのmPEGがエステル結合によって化合物Xのカル
ボキシル基に結合され、また化合物Xのヒドロキシル基はアセチル化されている
。 方法 オスのWistarラット(250〜330 g)をチオペントンナトリウム(INTRAVAL（登録
商標）、120 mg/kg、腹腔内注射)で麻酔した。気道にカニューレを挿入して呼吸
が楽にできるようにした。右頸動脈にカニューレを挿入し圧力トランスデューサ
ー(Spectramed P23XL)と接続して、平均動脈圧(MAP)と心拍数(HR)を測定し4チャ
ンネルGrass 7D多元記録器(Grass, Mass., USA)で連続的に記録するようにした
。左大腿静脈または右頸静脈には薬物投与用のカニューレを挿入した。血液温度
包括制御器(Harvard Apparatus Ltd.)に接続した直腸体温計を用いて体温を37±
1℃に維持した。
【０１５４】 15分の安定化期間をおいてから、化合物10を静脈内ボーラス(0.3、3、10およ
び30 mg/kg)として投与した。
【０１５５】 化合物10はエタノールに溶かして原液とし−20℃で貯蔵した。原液は使用前に
分取量を取り出し、水性基剤で希釈した。 結果 化合物10の静脈内投与(0.3、3、10および30 mg/kg)は投与関連のMAP低下を引
き起こした(表10A参照)。高用量(10および30 mg/kg)の化合物10は小幅な心拍数
の上昇または反射性頻拍を引き起こしたが、それは投与後45分でピークに達した
(表10B参照)。 表１０Ａ 化合物10の静脈内投与に由来する用量反応(平均動脈圧、mm Hg)
【０１５６】
【表１２】
【０１５７】 表１０Ｂ 化合物10の静脈内投与に由来する用量反応(心拍数)
【０１５８】
【表１３】
【０１５９】 化合物10の全身血流力学効果を、実施例12の化合物9による誘発効果と比較し
た。
【０１６０】 用量3 mg/kgでは、化合物10に起因するMAP低下(約30 mm Hg)は化合物9の場合(
最大：約15 mm Hg)よりも顕著であった。心拍数への効果は両化合物とも同程度
であった。
【０１６１】 用量10 mg/kgでは、化合物10に起因するMAP低下(約33 mm Hg)は化合物9の場合
(最大：約25 mm Hg)よりも顕著であった。化合物10は小幅な心拍数上昇を引き起
こしたが、化合物9のほうは小幅な心拍数低下を引き起こすように見受けられた
。化合物9で観察された心拍数の低下は、化合物9の基剤の最終エタノール濃度(4
.5 % v/v)が化合物10の場合(2.5 % v/v)よりも高かったためかもしれない。
【０１６２】 用量30 mg/kgでは、化合物10と化合物9に起因する最大MAP低下幅はほぼ同じ(
約45 mm Hg)であった。化合物10は小幅な心拍数上昇を引き起こしたが、化合物9
は小幅な心拍数低下をもたらすように見受けられた。後者の効果もまた基剤の最
終エタノール濃度が化合物9(15 % v/v)と化合物10(8.5 % v/v)で違っていたため
かもしれない。
【０１６３】 化合物10の全身血流力学効果は、mPEG5kDa-エステル-化合物X二酢酸塩(化合物
2)またはmPEG20kDa-エステル-化合物X二酢酸塩(化合物5)によって誘発される効
果とも比較した。その比較結果によれば、MAPの低下は明らかにPEG部分のサイズ
に依存しており、PEG分子量がもっとも小さい化合物がもっとも大幅なMAP低下を
誘発した。たとえば、10 mg/kg用量では化合物10が引き起こす最大幅のMAP低下
は35 mm Hgであったが、化合物5の場合それは20 mm Hgであった。同様に、PEG分
子量が最低の化合物は最大の反射性頻拍をも引き起こした。
【０１６４】 用量30 mg/kgでは、化合物10に起因する最大MAP低下幅は約40 mm Hg、化合物5
に起因するそれは約30 mm Hgであった。心拍数に対する効果はいずれの化合物で
もほぼ同じであった。
【０１６５】 化合物9の全身血流力学効果とmPEG5kDa-アミド-化合物X二酢酸塩(化合物8)ま
たはmPEG20kDa-アミド-化合物X二酢酸塩(化合物7)によって誘発される効果との
比較も行った。
【０１６６】 最低分子量のPEGを含む化合物がもっとも急激なMAP低下を誘発したことからも
明らかなように、MAP低下はPEG部分のサイズに依存した。たとえば、10 mg/kg用
量では化合物9により1分以内に誘発されたMAP低下幅は約20 mm Hg(最大低下幅は
60分後の約25 mm Hg)であったが、化合物7に起因するMAP低下幅はゼロに等しか
った(最大低下幅は180分後の約30 mm Hg)。エタノール(4.5%)に溶かした化合物9
は小幅な心拍数低下を引き起こしたが、それ以外の化合物(緩衝酢酸溶液に溶解)
は心拍数には何の効果も及ぼさなかった。
【０１６７】 30 mg/kg用量では、化合物9により1分以内に誘発されたMAP低下幅は約45 mm H
g(最大低下幅は1分後の約45 mm Hg)であったが、化合物7により1分以内に誘発さ
れたMAP低下幅はゼロに等しかった(最大低下幅は180分後の約30 mm Hg)。エタノ
ール(15%)に溶かした化合物9は著しい心拍数低下を引き起こしたが、それ以外の
化合物(緩衝酢酸溶液に溶解)は心拍数には何の効果も及ぼさなかった。実施例16 ヒツジの肺動脈高血圧に対する化合物XとPEG結合化合物Xの生体内効果 ヒツジを一頭ずつモニターして肺動脈圧(PPA)、左心房圧(PLA)、全身動脈圧(P
SA)、心拍出量(CO)および心拍数(HR)を測定した。実験中終始、被験ヒツジから
血しょう試料を採取して血中の薬物濃度を測定した。実験は、既知の肺動脈高血
圧誘発剤の静脈内注入をもって開始した。誘発速度は、肺動脈抵抗(PVR)を初期
基準値の3〜4倍に高めるように調節した。PVRはPPAとPLAの差をCOで割った商と
して求められる。安定化期間をおいてから、本プロスタグランジン化合物の試料
を、MEDICATOR（登録商標）エーロゾル薬物送達システム(Healthline Medical I
nc., Baldwin Park, CA)を用いて外科的切開による気管開口部を介して、または
静脈内注入により、投与した。
【０１６８】 実験は、実施例1の化合物1と同様の要領で調製されたmPEG 20kDa-アミド-化合
物XおよびmPEG20kDa-エステル-化合物X(前掲実施例3の化合物3)の静脈内注入、
それにmPEG20kDa-エステル-化合物X(化合物3)のエーロゾル化投与の誘発肺高血
圧に対する効果を調べるために実施した。図1では、基準値が確定してから約15
分後に、既知の薬物(PGH2類似物、U44069すなわち9,11-ジデオキシ,9α,11α-エ
ポキシメタノプロスタグランジンF2α)をヒツジに静脈内投与して肺高血圧を誘
発した。約85分かけてヒツジに定常状態を実現させてから、mPEG20kDa-アミド-
化合物X(1.25 g, I.V.)を静脈内投与した。mPEG20kDa-アミド-化合物X投与の約7
5分後から残りの実験期間いっぱいにわたり肺動脈高血圧の完全な逆転が観察さ
れた。
【０１６９】 図2では、約30分おいてヒツジに定常状態を実現させてからmPEG20kDa-エステ
ル-化合物X(1.25 g, I.V.)の静脈内ボーラスを行った。PPA−PLAの示度は投与後
30分以内に約28 cmH2Oから約17 cmH2Oへと低下した。その後約5時間ほぼ同じ水
準にとどまり、その後4時間の間に約25 cmH2Oへと次第に上昇した。
【０１７０】 図3では、U44069投与後約30分かけてヒツジに定常状態を実現させてから、mPE
G20kDa-エステル-化合物X(0.625 g)を約1時間かけてエーロゾル投与した。PPA−
PLAは約32.5 cmH2Oから約21 cmH2Oへと急低下した。これはエーロゾル投与停止
前に約22.5 cmH2Oへとやや上昇し、その後さらに135分間にわたりほぼ22.5 cmH2 Oにとどまり、その後の105分間に約32.5 cmH2Oへとごくゆっくりと上昇した。
【０１７１】 図4では、U44069投与後約30分かけてヒツジに定常状態を実現させてから、mPE
G20kDa-エステル-化合物Xの静脈内ボーラス投与をより低用量(0.625 g, I.V.)で
行った。PPA−PLAは約1時間の間に最高示度の約37.5 cmH2Oから約31 cmH2Oへと
低下した。これはそのまま約90分間横ばいに推移した後、ゆっくりと上昇し始め
約1時間で約35 cmH2Oに達した。
【０１７２】 前記と同じ方法による別の実験に関する図5では、天然化合物Xと実施例3の化
合物3と同じ要領で調製したmPEG5kDa-エステル-化合物XのU44069誘発肺高血圧に
対する効果を比較している。約90分かけてU44069投与ヒツジに定常状態を実現さ
せてから、15分かけて天然化合物X を1 μg/kgエーロゾル投与した。図5ではPPA
−PLAレベルを正規化してある。天然化合物Xのエーロゾル投与停止の10分後に約
11.25 cmH2Oから約5 cmH2Oへの低下が観察された。その後、化合物Xの投与停止
からわずか30分で約10 cmH2Oへと急上昇した。
【０１７３】 約90分かけてU44069投与ヒツジに定常状態を実現させてから15分かけて天然化
合物X を1 mg/kgエーロゾル投与した。投与停止の30分後に約18.25 cmH2Oから基
準値下約1 cmH2Oへの劇的な降圧が観察された。その後さらに1時間にわたり、約
1.5 cmH2Oに下がったままであったが、次の2時間半の間に約7.5 cmH2Oへとごく
ゆっくり上昇した。PPA−PLAはmPEG5kDa-エステル-化合物Xのエーロゾル投与停
止後まる240分間、最大示度の50%を下回ったままであった。実施例17 本プロスタグランジン化合物のヒツジへのエーロゾル投与の生体内全身血流力学 効果 一般プロトコル 本プロスタグランジン化合物の被験ヒツジに対するエーロゾル投与を行って、
かかる化合物の全身血流力学に対する効果を調べる。
【０１７４】 ヒツジは一頭ずつモニターして肺動脈圧(PPA)、左心房圧(PLA)、全身動脈圧(P
SA)、心拍出量(CO)および心拍数(HR)を測定する。実験中終始、被験ヒツジから
血しょう試料を採取して血中の薬物濃度を測定する。実験は、U44069(9,11-ジデ
オキシ,9α,11α-エポキシメタノプロスタグランジンF2α、PGH2類似物)の静脈
内注入による肺高血圧の人為的誘発をもって始まる。U44069注入速度は肺動脈抵
抗(PVR)を初期基準値の3〜4倍に高めるように調節する。PVRはPPAとPLAの差をCO
で割った商として求められる。安定化期間をおいてから、本プロスタグランジン
化合物の1試料を、MEDICATOR（登録商標）エーロゾル薬物送達システム(Healthl
ine Medical Inc., Baldwin Park, CA)を用いて外科的切開による気管開口部を
介して投与する。 個別プロトコル A. 第1シリーズの実験は、U44069誘発肺動脈高血圧を逆転させるような本プ
ロスタグランジン化合物の合理的有効用量を決定し本プロスタグランジン化合物
の特定投与量の有効期間を確認することを目的に実施する。
【０１７５】 リストに記載された諸々の変数の基準値を20分間で測定してから、PVRを基準
値の3〜4倍に高めるに足る速度でU44069を静脈内注入する。10分おいて昇圧反応
を比較的定常化させてから、本プロスタグランジン化合物の1試料を3000 ng/kg/
分の速度で60分間エーロゾル投与する(すなわち30 kgのヒツジの場合、総用量は
3000 ng*30*60＝5.4 mg-薬物または270 mg-薬物/PEG)。本プロスタグランジン化
合物が高PVRに対して測定可能な効果を及ぼす場合には、定常反応が観察される
までU44069を注入し続ける。定常反応に到達したら、U44069の注入を20分間停止
してから、さらに10分間の注入を再開する。U44069に誘発されたPVRの上昇が本
プロスタグランジン化合物の試料によってもはや減衰されなくなるまでこの手順
を繰り返す。
【０１７６】 試料化合物の投与が投与後30〜60分に効果を示さない場合には用量を3倍量だ
け増やす。試料化合物の投与が有効の場合には、新しい被験ヒツジを使用して前
の用量の3分の1の新用量で実験を繰り返す。この手順を最小有効用量まで繰り返
し、対応する有効用量を求める。 B. 第2の実験シリーズは、本プロスタグランジン化合物の対照ヒツジに対する
効果を決定することを目的に実施する。3用量の本プロスタグランジン化合物を
調製して追加実験を行う。第1用量は第1実験シリーズで最小有効用量と決定され
た用量である。第2用量は最小有効用量の2倍の用量であり、第3用量は最小有効
用量の5倍の用量である。対応する用量の投与を受けたヒツジを投与1回当たり最
低2時間モニターする。
【図面の簡単な説明】
【図１】 肺昇圧剤の静脈内注射により肺高血圧症を誘発されたヒツジに静脈内輸液とし
て投与された一用量のmPEG20kDa-アミド-化合物Xの肺動脈圧に対する効果を示す
グラフである。
【図２】 肺昇圧剤の静脈内注射により肺高血圧症を誘発されたヒツジの肺動脈圧に対す
る、静脈内ボーラスとして投与された一用量のmPEG20kDa-エステル-化合物Xの効
果を示すグラフである。
【図３】 肺昇圧剤の静脈内注射により肺高血圧症を誘発されたヒツジの肺動脈圧に対す
る、エーロゾルとして投与された一用量のmPEG20kDa-エステル-化合物Xの効果を
示すグラフである。
【図４】 肺昇圧剤の静脈内注射により肺高血圧症を誘発されたヒツジの肺動脈圧に対す
る、静脈内ボーラスとして投与された一用量のmPEG20kDa-エステル-化合物Xの効
果を示すグラフである。
【図５】 肺昇圧剤の静脈内注射により肺高血圧症を誘発されたヒツジの肺動脈圧に対す
る、それぞれエーロゾルとして投与されたmPEG20kDa-エステル-化合物Xおよび天
然化合物Xの効果を示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/00 Ａ６１Ｐ 9/00 9/12 9/12 11/00 11/00 Ｃ０７Ｃ 235/34 Ｃ０７Ｃ 235/34 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ロスブラット，マーチン アメリカ合衆国，メリーランド 20910， シルバー スプリング，ウッドサイド パ ークウェイ 1101 (72)発明者 ベントレー，マイケル ディー． アメリカ合衆国，アラバマ 25801，ハン ツビル，ノレン アベニュ 4017 (72)発明者 ツァオ，シュアン アメリカ合衆国，アラバマ 35801，ハン ツビル，サウスハースト ドライブ 2805 Ｆターム(参考） 4C076 AA29 AA31 AA37 AA53 BB01 BB02 BB13 CC11 CC15 CC42 EE23 FF63 4C086 AA02 AA03 BA05 MA05 MA35 MA37 MA41 MA43 MA52 MA66 NA12 NA15 ZA36 ZA42 ZA59 4C206 AA01 AA02 AA03 DB25 MA01 MA05 MA55 MA57 MA61 MA63 MA72 MA86 NA12 NA15 ZA36 ZA42 ZA59 4H006 AA01 AA03 AB20 BJ50 BP10 BP30

Claims (43)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式Iaまたは式Ibで示される化合物 [P−T]n−Z Ia P−[T−Z]n Ib (式中Pはプロスタグランジン化合物またはその類似物、TはPの活性基、ZはTに
    結合していて前記化合物の代謝率を低下させる製薬上許容しうる原子団であり、
    またnは1以上の整数である) およびその製薬上許容しうる塩。
  2. 【請求項２】 Tがカルボキシル基、ヒドロキシル基、カルボニル基、酸化
    炭水化物およびメルカプト基からなる群より選択される請求項1記載の化合物。
  3. 【請求項３】 Tがカルボキシル基かヒドロキシル基である請求項1記載の化
    合物。
  4. 【請求項４】 Zが製薬上許容しうる重合体またはアセチル基である請求項1
    記載の化合物。
  5. 【請求項５】 製薬上許容しうる重合体がポリアルキレンオキシド、デキス
    トラン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコールお
    よび炭水化物系重合体からなる群より選択される請求項4記載の化合物。
  6. 【請求項６】 製薬上許容しうる重合体がポリアルキレンオキシドから選択
    される請求項5記載の化合物。
  7. 【請求項７】 ポリアルキレンオキシドがポリエチレングリコールから選択
    される請求項6記載の化合物。
  8. 【請求項８】 ポリエチレングリコールの分子量が約200〜80,000である請
    求項7記載の化合物。
  9. 【請求項９】 ポリエチレングリコールの分子量が約2,000〜42,000である
    請求項7記載の化合物。
  10. 【請求項１０】 ポリエチレングリコールの分子量が約5,000〜25,000であ
    る請求項9記載の化合物。
  11. 【請求項１１】 式IIで示される請求項1記載の化合物 【化１】 (式中Z1とZ2はそれぞれ独立に、水素、製薬上許容しうる重合体およびアセチ
    ル基からなる群より選択されるが、ただしZ1とZ2のうち少なくも１つは水素では
    ないものとし、またXはOまたはNHである)。
  12. 【請求項１２】 Z1が製薬上許容しうる重合体であり、XがOまたはNHであり
    、また各Z2がそれぞれ独立に水素またはアセチル基であるグループ1化合物より
    選択される請求項11記載の化合物。
  13. 【請求項１３】 Z1が水素であり、XがOであり、また少なくとも1つのZ2が
    エステル基を介して酸素原子に結合した製薬上許容しうる重合体であるグループ
    2化合物より選択される請求項11記載の化合物。
  14. 【請求項１４】 Z1が製薬上許容しうる重合体であり、XがOまたはNHであり
    、また少なくとも1つのZ2がエステル基を介して酸素原子に結合した製薬上許容
    しうる重合体であるグループ3化合物より選択される請求項11記載の化合物。
  15. 【請求項１５】 式III で示される請求項1記載の化合物 【化２】 (式中Z1とZ2はそれぞれ独立に、水素、製薬上許容しうる重合体およびアセチ
    ル基からなる群より選択され、fは1〜3の整数であり、XはOまたはNHであり、ま
    たRは水素またはアセチル基である)。
  16. 【請求項１６】 Rが炭素原子数1〜6のアルキル基である請求項15記載の化
    合物。
  17. 【請求項１７】 Z1が製薬上許容しうる重合体であり、XがOまたはNHであり
    、また各Z2がそれぞれ独立に水素またはアセチル基であるグループ4化合物より
    選択される請求項15記載の化合物。
  18. 【請求項１８】 Z1が水素であり、XがOであり、また各Z2がアセチル基であ
    るか、またはエステル基かエーテル基を介して酸素原子に結合した製薬上許容し
    うる重合体であるグループ5化合物より選択される請求項15記載の化合物。
  19. 【請求項１９】 Z1が製薬上許容しうる重合体であり、XがOまたはNHであり
    、また各Z2がエステル基かエーテル基を介して酸素原子に結合した製薬上許容し
    うる重合体であるグループ6化合物より選択される請求項15記載の化合物。
  20. 【請求項２０】 製薬上許容しうる重合体が分子量約200〜80,000のポリエ
    チレングリコールである請求項11記載の化合物。
  21. 【請求項２１】 ポリエチレングリコールの分子量が約2,000〜42,000であ
    る請求項20記載の化合物。
  22. 【請求項２２】 製薬上許容しうる重合体が分子量約200〜80,000のポリエ
    チレングリコールである請求項15記載の化合物。
  23. 【請求項２３】 ポリエチレングリコールの分子量が約2,000〜42,000であ
    る請求項22記載の化合物。
  24. 【請求項２４】 式IVで示される請求項15記載の化合物 【化３】 (式中aは約6〜600である)。
  25. 【請求項２５】 Z1がメチル基を末端基とする分子量約5,000のポリエチレ
    ングリコールであり、XがNHであり、また各Z2が水素である請求項15記載の化合
    物。
  26. 【請求項２６】 Z1がメチル基を末端基とする分子量約5,000のポリエチレ
    ングリコールであり、XがOであり、また各Z2がアセチル基である請求項15記載の
    化合物。
  27. 【請求項２７】 Z1が水素であり、各Z2が、-O-(CH2)2-O-基を介して酸素原
    子に結合した、メチル基を末端基とする分子量約20,000のポリエチレングリコー
    ルである請求項15記載の化合物。
  28. 【請求項２８】 Z1が水素であり、各Z2がアセチル基である請求項15記載の
    化合物。
  29. 【請求項２９】 Z1がメチル基を末端基とする分子量約20,000のポリエチレ
    ングリコールであり、XがOであり、また各Z2がアセチル基である請求項15記載の
    化合物。
  30. 【請求項３０】 Z1がメチル基を末端基とする分子量約20,000のポリエチレ
    ングリコールであり、XがNHであり、また各Z2が水素である請求項15記載の化合
    物。
  31. 【請求項３１】 Z1がメチル基を末端基とする分子量約20,000のポリエチレ
    ングリコールであり、XがNHであり、また各Z2がアセチル基である請求項15記載
    の化合物。
  32. 【請求項３２】 Z1がメチル基を末端基とする分子量約5,000のポリエチレ
    ングリコールであり、XがNHであり、また各Z2がアセチル基である請求項15記載
    の化合物。
  33. 【請求項３３】 Z1がメチル基を末端基とする分子量約350のポリエチレン
    グリコールであり、XがNHであり、また各Z2がアセチル基である請求項15記載の
    化合物。
  34. 【請求項３４】 Z1がメチル基を末端基とする分子量約350のポリエチレン
    グリコールであり、XがOであり、また各Z2がアセチル基である請求項15記載の化
    合物。
  35. 【請求項３５】 有効量の請求項1記載の化合物と製薬上許容しうる担体と
    を含む製剤組成物。
  36. 【請求項３６】 有効量の請求項11記載の化合物と製薬上許容しうる担体と
    を含む製剤組成物。
  37. 【請求項３７】 有効量の請求項15記載の化合物と製薬上許容しうる担体と
    を含む製剤組成物。
  38. 【請求項３８】 請求項35記載の組成物を温血動物に投与することを含む、
    末梢血管疾患と肺高血圧症のうち少なくとも1つを治療する方法。
  39. 【請求項３９】 組成物を温血動物に約0.5〜100 mg/kg/日与えるに足る量
    を投与することを含む請求項38記載の方法。
  40. 【請求項４０】 組成物を温血動物に静脈内投与することを含む請求項35記
    載の方法。
  41. 【請求項４１】 組成物を温血動物に皮下投与することを含む請求項35記載
    の方法。
  42. 【請求項４２】 組成物を温血動物に吸入で投与することを含む請求項35記
    載の方法。
  43. 【請求項４３】 組成物を温血動物に経口投与することを含む請求項35記載
    の方法。
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