JP2003522153A - ブドウ球菌属ビルレンスの新規アミノ酸インヒビターおよびペプチドインヒビター - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ブドウ球菌のビルレンス因子の産生および発現のインヒビター、またはブドウ球菌を使用する細菌感染を処置もしくは予防する方法に関する。本発明は、被験体においてブドウ球菌感染を予防もしくは処置するのに使用するため、または被験体においてブドウ球菌感染を予防もしくは処置するための医薬の製造での使用のための、ブドウ球菌ビルレンスを抑制する単離された合成ペプチドを提供する。本発明は、被験体においてブドウ球菌感染を予防もしくは処置するのに使用するため、または被験体においてブドウ球菌感染を予防もしくは処置するための医薬の製造での使用のための、ブドウ球菌ビルレンスを抑制する単離された合成アミノ酸をさらに提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、ブドウ球菌のビルレンス因子の産生および発現のインヒビター、ま
たはブドウ球菌を使用する細菌感染を処置もしくは予防する方法に関する。

【０００２】 （参考文献）

【０００３】

【化１】 （発明の背景） ブドウ球菌は、表面腫瘍（腫脹、麦粒腫およびせつ種）および他の局在化した
腫瘍；より深刻な感染（例えば、骨髄炎、肺炎、心内膜炎、尿路感染症、敗血性
関節炎、髄膜炎、手術後創傷感染、敗血症および食中毒）に及ぶ広範の疾患を生
じさせるグラム陽性の細菌病原体である。Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、外科的創傷およ
びＳ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓの院内感染の主な原因であり、内在する医療デバ
イスに関連する感染を生じる（例えば、Ｓｉｌｖｅｒｓｔｅｉｎら、１９９０；
Ｐａｔｔｉら、１９９４；Ｄａｎｎら、１９９４を参照のこと）。

【０００４】 複数の抗生物質耐性は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ
において次第に一般的になっている。ブドウ球菌の院内菌株は、しばしば、多く
の異なる抗生物質および菌株に対して、しばしば耐性であり、そしてグリコペプ
チド抗生物質、バンコマイシンおよびテイコプラニンの他に、臨床的に最も有用
な薬物に対して耐性の菌株が、記載されている。病院（特に、３度の医療施設）
において、薬物耐性グラム陽性感染事件が増加している（Ｓｉｌｖｅｒら、１９
９３；Ｐｉｔｔｅｔら、１９９５；Ｍｏｓｅｓら、１９９５）。免疫抑制治療お
よび集中治療における抗生物質の予防の増加した使用、同様に、地域において新
規の広範の薬剤の使用は、問題を悪化させるようである（Ｇｏｕｌｄ、１９９４
）。

【０００５】 Ｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓの院内単離物は、メチシリンを含む数種の抗生物
質に対してしばしば耐性である。さらに、Ｓ ａｕｒｅｕｓは、防腐薬および消
毒薬（例えば、第４級アンモニウム化合物）に対して耐性であり、これは、病院
環境における生存を助け得る。

【０００６】 マルチ薬物耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓを有する数種の院内感染に関して、バンコマ
イシンは、唯一の現在有効な抗生物質である。バンコマイシン耐性は、実験室に
おいてＳ．ａｕｒｅｕｓに移される得る結合体プラスミドによって保持され（Ｎ
ｏｂｅｌら、１９９２）、そして腸球菌において天然で常に現れる（Ａｒｔｈｕ
ｒら、１９９３）。さらに、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ中の中間バンコマイシン耐性の出
現は、米国（Ｌｏｗｒｙ、１９９８）および日本（Ｈｉｒａｍａｔｓｕら、１９
９７）で既に報告されている。ワクチンが、それを産生する生物または外毒素を
標的するのに開発されているが、これらのアプローチは、常に成功するわけでは
なく（Ｍａｍｏら、１９９４）、ブドウ球菌感染を制御するための新規な方法を
開発するための緊急の必要性を強調する。

【０００７】 他のグラム陽性細菌と同様に、Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、溶血素、腸毒素、および
毒素ショック症候群の毒素のようなビルレンス因子の産生を介して、主に疾患を
生させ、これにより、感染した組織における、生物の生存、増殖および拡散を容
易にする（Ｍｅｋａｌｏｎｏｓ、１９９２）。Ｓ．ａｕｒｅｕｓにおけるほとん
どのビルレンス因子の合成は、付属の全レギュロン（ａｇｒ）遺伝子座によって
制御され、これは、分泌された自動誘発ペプチド（ＡＩＰ）により活性化される
（Ｎｏｖｉｃｋら、１９９３；Ｎｏｖｉｃｋら、１９９５）。

【０００８】 ａｇｒの存在およびＲＮＡ ＩＩＩによるビルレンスの制御は、これまで試験
されたＳ．ａｕｒｅｕｓの全菌株およびＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓ．ｌｕ
ｇｄｕｎｅｓｉｓ、Ｓ．ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ（Ｖａｎｄｅｎｅｓｈら、１９
９３）、およびＳ．ｗａｒｎｅｒｉ（Ｔｅｇｍａｒｋら、１９９８）のいくつか
の他の種において実証されている。従って、ＲＮＡ ＩＩＩ合成の汎用インヒビ
ターは、ブドウ球菌の多様の菌株によって生じる感染のための広範の治療適用を
有し得る。

【０００９】 ブドウ球菌に関して記載されたこれらの機構に加えて、自動誘導に関する同様
の制御機構は、他の細菌種に関して記載されている（Ｒａｐｐｕｏｌｉら、１９
９５）。

【００１０】 改良により、抗生物質による生物学的感染を制御または排除するのに成功した
にも係わらず、ヒトの医薬ならびに鳥および家畜産物の栄養補給の両方における
、抗体の広範の使用は、多くの病原性細菌において薬物耐性に導いた。

【００１１】 従って、ブドウ球菌感染は、医学的関心を残しており、従って、ブドウ球菌感
染の事件および生存度を減少させるのに有効性を示す治療方法を提供することが
所望されており、そして最小の副作用また副作用なしで、患者によって良好に寛
容である。この方法を実施するために、改良された化合物および組成物を提供す
ることがまた、所望されている。

【００１２】 （発明の要旨） 従って、本発明の一般的な目的は、ビルレンス因子産生に関連する微生物の感
染の処置のための組成物および方法を提供することである。

【００１３】 本発明は、被験体においてブドウ球菌感染を予防もしくは処置するのに使用す
るため、または被験体においてブドウ球菌感染を予防もしくは処置するための医
薬の製造での使用のための、ブドウ球菌ビルレンスを抑制する単離された合成ペ
プチドを提供し、このペプチドは、Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ
）ＴｈｒＡｓｎＰｈｅ（ここで、該改変Ｔｒｐは、トリプトファンのＳ−フェニ
ルチオカルバメート誘導体である）（配列番号２）；ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変
Ｔｒｐ）ＴｈｒＡｓｎＰｈｅ（ここで、該改変Ｔｒｐは、トリプトファンのＳ−
フェニルチオカルバメート誘導体である）（配列番号３）；Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳ
ｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ）ＴｈｒＡｓｎＰｈｅ（ここで、該改変Ｔｒｐは、環窒
素に結合されたＢＯＣ基を有する）（配列番号４）；Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰ
ｒｏ（改変Ｔｒｐ）（ここで、該改変Ｔｒｐは、トリプトファンのフェニルチオ
カルバメート誘導体である）（配列番号５）；Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（
改変Ｔｒｐ）（ここで、該改変Ｔｒｐは、環窒素に結合されたＢＯＣ基を有する
）（配列番号６）ならびにこのようなペプチドを含む薬学的組成物からなる群か
ら選択される。

【００１４】 本発明は、被験体においてブドウ球菌感染を予防もしくは処置するのに使用す
るため、または被験体においてブドウ球菌感染を予防もしくは処置するための医
薬の製造での使用のための、ブドウ球菌ビルレンスを抑制する単離された合成ア
ミノ酸をさらに提供し、このアミノ酸は、以下の構造： （Ｆｍｏｃ）ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯＯＨ からなる群から選択され、ここで、Ｆｍｏｃは、９−フルオレニルメトキシカル
ボニル基であり、そしてＲは、非極性側鎖である。

【００１５】 ブドウ球菌ビルレンスを抑制する、例示の単離された合成アミノ酸としては、
Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−２−アミノ安息香酸、Ｆｍｏｃ−１−アミン−シクロヘキサンカ
ルボン酸、（Ｒ，Ｓ）−Ｆｍｏｃ−３−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸
、Ｆｍｏｃ−Ｄ−テトラヒドロイソキノリン−１−カルボン酸、Ｆｍｏｃ−４−
ブロモ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍｏｃ−４−クロロ−Ｌ−フェニルアラニン
、Ｆｍｏｃ−５−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸、（Ｒ）−Ｆｍｏｃ−
４−アミノ−５−フェニル−ペンタン酸、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−１，２，３，４−テトラヒドロノルハルマン−３−カルボン
酸、Ｆｍｏｃ−２−Ｌ−スチリルアラニン、Ｆｍｏｃ−２−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−４−メチル−Ｌ−フェニルアラニンおよびＦｍｏｃ−Ｌ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨが挙げられる。

【００１６】 処置下でのブドウ球菌感染は、ブドウ球菌の抗生物質耐性株を含み得、例えば
、その耐性株は、メチシリン耐性またはバンコマイシン耐性であり、そしてその
使用は、抗生物質を用いた処置下にある被験体に関する。

【００１７】 その使用は、医療デバイスを用いてブドウ球菌感染を抑制するペプチドまたは
アミノ酸の取り込みをさらに含み得る。

【００１８】 本発明のこれらおよび他の目的は、本発明の以下の詳細な説明を、添付の図面
と共に読んだ場合により完全に理解される。

【００１９】 （発明の詳細な説明） （Ｉ．定義） 概して、本明細書において、ならびに細菌および細胞培養およびタンパク質化
学の実験手順において用いている専門用語は、当該分野で周知であり、そして通
常使用される用語である。他に規定しない限り、本明細書において用いる全ての
技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって通常理解されるのと
同じ意味を有する。

【００２０】 本発明のペプチドのアミノ酸配列は、天然に存在するアミノ酸についての従来
の１文字コードまたは３文字コード、ならびに本明細書において提供されるよう
な他のアミノ酸に関する省略形を用いて、ペプチドまたはタンパク質について通
常の様式で示され、そして左にアミノ末端および右にカルボキシ末端で記載され
る。これは、代表的に、正常なアミド、すなわち「ペプチド」結合を介して結合
されているアミノ酸に隣接する。

【００２１】 「Ｆｍｏｃ」は、９−フルオレニルメトキシカルボニル基の省略形である。「
Ｂｏｃ」は、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基の省略形である。省略形が３文字
または１文字のアミノ酸コードに先行する場合、それは、その置換基がαアミノ
基であることを示す。例えば、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐは、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−トリプ
トファンである；短縮形が３文字または１文字のコードの後ろでカッコ（）で囲
まれる場合、これは、この置換基が側鎖上であることを示す。例えば、Ｂｏｃ−
Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）は、Ｎ−α−Ｂｏｃ−Ｎ−ｇ−Ｆｍｏｃ−リジンである。

【００２２】 本明細書の処置方法において用いる場合、「治療上有効な量」の本発明のアミ
ノ酸またはペプチド組成物とは、任意の従来の技術（例えば、皮膚領域のサイズ
の減少を測定するＢｕｎｃｅモデル）で測定した場合、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ
ｃｕｓ感染の臨床的に有意な減少、好ましくは少なくとも３０％減少、より好ま
しくは少なくとも５０％減少、最も好ましくは少なくとも９０％減少、を達成す
るのに十分な量である。

【００２３】 本明細書における予防の方法において用いる場合、本発明のアミノ酸またはペ
プチド組成物の「治療上有効な量」とは、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染（
この状況では通常感染が生じることが予期される）の臨床的に有意な兆候の発現
を予防するかまたは有意に減少させるのに十分な量である。

【００２４】 本明細書において用いる場合、「薬学的に受容可能な」とは、ヒトに投与され
た場合、薬理学的に耐容であり、そして代表的には、アレルギーまたは類似の望
ましくない反応（例えば、胃亢進、目眩など）を生成しない、分子実体および組
成物をいう。薬学的に受容可能なキャリアは、製剤の分野で当業者に周知の、任
意の標準的な薬学的に受容可能なキャリアを包含する。適切なキャリアは、例え
ば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ（第１８版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ Ｐｅ
ｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、（１９９０））において見出され得る。代表的なキャリ
アとしては、例えば、ペースト、粉末、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質
、半固体ゲル、リン酸緩衝生理食塩水、水性エマルジョン（例えば、水中油型エ
マルジョンまたはトリグリセリドエマルジョン）が挙げられる。薬学的に受容可
能なキャリアおよび他の処方物のさらに詳細な説明は、本明細書のいずれかに提
供される。

【００２５】 「ＶＩＦペプチド」は、毒性（ビルレンス）阻害性因子ペプチドである。同様
に、「ＶＩＦアミノ酸」は、毒性阻害性因子アミノ酸、例えば、修飾トリプトフ
ァンすなわち「ｍｏｄＴｒｐ」である。本発明のＶＩＦペプチドおよびアミノ酸
は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ毒性因子の産生を阻害し、そして／またはＲ
ＮＡＩＩＩ誘導アッセイにおいて活性であり、そして／またはＳｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｕｓ感染についてのインビボモデルにおいて阻害活性を示す。

【００２６】 「ＶＩＦ−１」は、図１Ｂに示される構造を有する特定のＶＩＦペプチド、す
なわち、（Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ）−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ（フェニルチオカルバ
メート）−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｈｅである。

【００２７】 「Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ毒性因子の産生を阻害する」とは、化合物が
活性であり、１つ以上のインビトロまたはインビボアッセイにおいて、少なくと
も２０％まで、１つ以上のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ毒性因子の産生を減少
することを意味する。

【００２８】 「Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ毒性（ビルレンス）」とは、１つ以上のＳｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ毒性因子の少なくとも２０％までの産生の減少、また
はインビボにおいて、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌの病原性における減少を意
味する。

【００２９】 本明細書において用いる場合、「抗菌アミノ酸またはペプチド」とは、Ｓｔａ
ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ毒性因子の産生および／またはＲＮＡＩＩＩ誘導に関す
る１つ以上のインビトロアッセイにおいて、少なくとも２０％（例えば、２０％
減少）の阻害活性を示すか、あるいはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染に関す
るインビボモデルにおいて阻害性活性を示すアミノ酸またはペプチドをいう。

【００３０】 「アナログ（類似体）」とは、毒性阻害因子としての活性を有するペプチド、
および１または２の保存的アミノ酸置換によって配列ＹＳＰ（ｍｏｄＷ）ＴＮＦ
とは異なるアミノ酸配列を意図する。

【００３１】 「ＲＩＰ」は、細菌株ＲＮ８３３によって生成される天然に存在するＲＮＡＩ
ＩＩ誘導ペプチドであり、これは、アミノ酸配列ＴｙｒＳｅｒＰｒｏＣｙｓＴｈ
ｒＡｓｎＰｈｅを有する環状チオラクトン構造を形成する、７つのペプチド（ヘ
プタペプチド）であることが最近示されている。

【００３２】 「ＰＥＰ」は、Ｂａｌａｂａｎら（１９９８）によって記載される合成ヘプタ
ペプチドであり、改変アミノ酸配列ＴｙｒＳｅｒＰｒｏＴｒｐＴｈｒＡｓｎＰｈ
ｅを有する。

【００３３】 「単離された」とは、本発明のアミノ酸またはペプチドに関して言及する場合
、このペプチドの合成および／または改変の間に存在するかまたは作成される、
他の高分子または組成物から実質的に分離されている特定のアミノ酸またはペプ
チド分子を意味する。化学的技術によって合成されるかまたは全体に改変される
アミノ酸またはペプチドに関して、単離されたアミノ酸またはペプチドとは、合
成または改変反応の間に生成され得る他のアミノ酸またはペプチドから実質的に
分離されたものである。

【００３４】 組み換え技術によって少なくとも一部が合成されるペプチドに関して、この用
語はまた、組み換え合成の間に存在し得る、細胞性組成物（例えば、ＤＮＡ、Ｒ
ＮＡ、タンパク質）から実質的に取り除かれているペプチドを含む。「単離され
た」ペプチドは、実質的な同質性まで精製されたペプチドである。代表的に、ペ
プチドは、このペプチドが、サンプル中にペプチドおよび他の高分子の総数の少
なくとも８０％を含む場合に、「単離されて」いる。いくつかの適用に関して、
単離されたペプチドは、サンプル中にペプチドおよび他の高分子の総数の少なく
とも９０％、好ましくは少なくとも９５％を含む。

【００３５】 「合成の（ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ）」とは、本発明のアミノ酸およびペプチドに
関して言及する場合、インビトロで、少なくとも一部が合成されるか、または化
学的技術によって改変されているアミノ酸またはペプチドを意図する。合成ペプ
チドは、化学技術によって合成されそして全体的に改変されているペプチド、な
らびに組み換え的に（例えば、細胞システムにおいて）合成され、インビトロで
の化学技術によって生成および改変されるペプチドを含む。

【００３６】 「ＭｏｄＴｒｐ」、「改変（ｍｏｄｉｆｉｅｄ）Ｔｒｐ」および「ｍｏｄＷ」
とは全て、本明細書において詳述されるような、本発明のペプチドに有用な、改
変トリプトファン残基をいう。

【００３７】 （ＩＩ．自己誘導ペプチド（「ＲＩＰ」）および毒性阻害因子（「ＶＩＦ」）
ペプチド） ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉのａｇｒ自己誘導ペプチド（ＡＩＰ）は、７〜９
アミノ酸残基のペプチドであり、異なる株の間で、Ｃ末端の５アミノ酸の保存シ
ステイン残基を除いて、アミノ酸配列が変化していることが報告されている。Ａ
ＩＰペプチドは、翻訳後改変を受けて、保存システインおよびＣ末端アミノ酸を
連結するチオラクトン結合を含む環状構造を形成することが報告されている（Ｍ
ａｙｖｉｌｌｅら、１９９９）。活性に基づいて、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株は、少な
くとも４つの異なる群（グループＩ〜ＩＶ）に配置されている（Ｊｉら、１９９
７）。ＡＩＰの各々は、同じグループ内のａｇｒ応答を活性化し、そして異なる
グループに属する株におけるａｇｒ応答を阻害し得る。この作用は、細胞増殖の
阻害によるのではなく、毒性因子の発現を抑制することによる。

【００３８】 いくつかの研究によって、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ由来のＡＩＰの改変
が治療用インヒビターを生成する目的であることが記載されている。チオラクト
ン結合および環状構造は、合成Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＡＩＰのａｇｒ活性化機能に
必須であることが示された（Ｍａｙｖｉｌｌｅら、１９９９）。

【００３９】 １つの研究では、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ ＡＩＰの配列に基づく改変Ａ
ＩＰは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ第Ｉグループによって毒性因子の産生を阻害すること
が示され（Ｏｔｔｏら、１９９９）、そして別の研究では、逆相ＨＰＬＣによっ
て、ＲＮ８３３培養上清から精製された（Ｂａｌａｂａｎら、１９９８）「ＲＮ
Ａ ＩＩＩ阻害性ペプチド」または「ＲＩＰ」と名づけられたインヒビター（Ｂ
ａｌａｂａｎおよびＮｏｖｉｃｋ、１９９５）は、配列、ＴｙｒＳｅｒＰｒｏＸ
ａａＴｈｒＡｓｎＰｈｅを有することが示された。ここでＸａａは、未知のアミ
ノ酸である。２つの合成ペプチドＰｒｏＣｙｓＴｈｒＡｓｎＰｈｅ（ペプチドＩ
）およびＴｙｒＳｅｒＰｒｏＴｒｐＴｈｒＡｓｎＰｈｅ（ペプチド２または「Ｐ
ＥＰ」）を、ＲＩＰ配列に基づいて合成し、そしてペプチド２は、Ｓｔａｐｈｙ
ｌｏｃｏｃｃａｌ上清（Ｂａｌａｂａｎら、１９９８）から精製されたＲＩＰと
同じくらい有効にＲＮＡＩＩＩの誘導を阻害し、一方合成ペプチド１は同じアッ
セイで不活性であったすることが報告された。

【００４０】 本発明に従って、配列ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ）ＴｈｒＡｓｎＰｈｅ
またはＹｓｐ（ｍｏｄＷ）ＴＮＦを有するペプチドは、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ
ｃｕｓ毒性因子産生およびＲＮＡＩＩＩ誘導において活性を有することが発見さ
れている。

【００４１】 改変アミノ酸はまた、ＲＮＡＩＩＩ活性アッセイにおいて、ならびにα毒素（
αヘモリシン）および毒素ショック症候群毒素（「ＴＳＳＴ」）産生に関するア
ッセイにおいて、阻害活性を示すことがさらに発見されている（実施例２を参照
）。従って、本発明はまた、単一アミノ酸の誘導体を含む。

【００４２】 今日までに報告されている天然に存在するＡＩＰ（環状ペプチドである）と異
なり、本発明のＶＩＦペプチドは、直線状ペプチド分子である。

【００４３】 さらに、本明細書に記載されるペプチドおよびアミノ酸での競合試験によって
、配列ＹＳＰＷＴＮＦを有する未改変合成ＰＥＰ（図１Ａ）が、Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓ毒性因子産生またはＲＮＡＩＩＩ誘導のインヒビターとして有意
な活性を有さないことが示される。

【００４４】 （Ａ．ＶＩＦアミノ酸およびペプチドの構造） 本発明のＶＩＦアミノ酸は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ毒性因子の産生を
阻害し、そして／またはＲＮＡＩＩＩ誘導アッセイにおいて活性であり、そして
／またはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染に関してインビボモデルで阻害性活
性を示す。

【００４５】 本発明の単離された合成抗菌アミノ酸は、一般に以下の構造を有する：（Ｆｍ
ｏｃ）ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯＯＨ。ここでＦｍｏｃは、９−フルオレニルメトキシ
カルボニル基であり、そしてＲは非局性側鎖である。

【００４６】 より詳細には、このような単離された合成抗菌アミノ酸は、遊離のカルボキシ
ル基（ＣＯＯＨ）、Ｆｍｏｃ基置換αアミノ基および非局性基側鎖を有する（以
下の相対活性によって実証される：Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨ、ＩＣ_５０＝６
．５μｇ；Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＨ，ＩＣ_５０＝１．３μｇ；Ｆｍｏｃ−Ｌ
−Ｖａｌ−ＯＨ，ＩＣ_５０＝４．２μｇ；Ｆｍｏｃ−Ｌ−アゼチジン−２−カル
ボン酸，ＩＣ_５０＝１２μｇ；ラセミＦｍｏｃ−ｔｒａｎｓ−３−フェニル−ア
ゼチジン−２−カルボン酸，ＩＣ_５０＝３．９μｇ；Ｆｍｏｃ−β−シクロヘキ
シル−Ｌ−アラニン，ＩＣ_５０＝４．０μｇおよびＦｍｏｃ−３−（２−ナフチ
ル）アラニン、ＩＣ_５０＝４．２μｇ）。

【００４７】 本明細書において示される結果は、以下を実証する：（１）極性基は活性を低
下する（以下の相対活性によって実証される：Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｉ
Ｃ_５０＝１．３μｇ；Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ−ＯＨ，ＩＣ_５０＝９μｇ；Ｆｍｏ
ｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ，ＩＣ_５０＝１．０μｇ；Ｆｍｏｃ−Ｌ−３−
ピリジルアラニン、活性でない；およびＦｍｏｃ−β−（２−チエニル）−アラ
ニン、ＩＣ_５０＝２５μｇ）（２）天然アミノ酸は、活性に関しては必要ない（
以下の相対活性によって実証される：Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨ、ＩＣ_５０＝
６．５μｇ；ラセミＦｍｏｃ−ｔｒａｎｓ−３−フェニル−アゼチジン−２−カ
ルボン酸，ＩＣ_５０＝３．９μｇ；（２Ｓ，５Ｒ）−Ｆｍｏｃ−５−フェニル−
ピロリジン−２−カルボン酸，ＩＣ_５０＝１．０μｇ；（Ｒ）−Ｆｍｏｃ−４−
アミノ−５−フェニル−ペンタン酸、ＩＣ_５０＝１．７μｇ；（Ｒ，Ｓ）−Ｆｍ
ｏｃ−３−アミノ−３−（４−ブロモフェニル）−プロピオン酸、ＩＣ_５０＝１
．０μｇ；およびＦｍｏｃ−１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸，ＩＣ _５０ ＝０．９μｇ）；ならびに（３）Ｄ型またはＬ型は、活性に対して影響を有
さない（以下の相対活性によって実証される：Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）
−ＯＨ、ＩＣ_５０＝１．２μｇ；Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ，ＩＣ _５０ ＝１．０μｇ；Ｆｍｏｃ−Ｌ−フェニルグリシン，ＩＣ_５０＝５．０μｇお
よびＦｍｏｃ−Ｄ−フェニルグリシン，ＩＣ_５０＝５．５μｇ）。

【００４８】 例示的な合成抗菌アミノ酸としては、Ｆｍｏｃ−ｌ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、ＦＭｏｃ−２−アミノ安息香酸、Ｆ
ｍｏｃ−１−アミン−シクロヘキサンカルボン酸、（Ｒ，Ｓ）−Ｆｍｏｃ−３−
アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸、Ｆｍｏｃ−Ｄ−テトラヒドロイソキノ
リン−１−カルボン酸、Ｆｍｏｃ−４−ブロモ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍｏ
ｃ−４−クロロ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍｏｃ−５−フェニル−ピロリジン
−２−カルボン酸、（Ｒ）−Ｆｍｏｃ−４−アミノ−５−フェニル−ペンタン酸
、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−１，２，３，４−テ
トラヒドロノルハルナン（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｎｏｒｈａｒｒｎａｎ）−３−
カルボン酸、Ｆｍｏｃ−２−Ｌ−スチリルアラニン、ＦＭｏｃ−２−Ｌ−Ｌｙｓ
（Ｚ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−４−メチル−Ｌ−フェニルアラニンおよびＦｍｏｃ−
Ｌ−Ｌｅｕ−ＯＨが挙げられる。（表４を参照のこと）。

【００４９】 適切なＮ末端αアミノ誘導体は、Ｆｍｏｃ αアミノ誘導体によって例示され
るが、他のＮ末端αアミノ誘導体もまた有効であり得る。

【００５０】 本発明の抗菌アミノ酸は、ＬまたはＤアミノ酸であり得、そして天然型または
合成型であり得る。

【００５１】 １つの例示的実施形態において、抗菌アミノ酸は改変トリプトファン（「ｍｏ
ｄＴｒｐ」）であり、Ｔｒｐのインドール窒素で改変を有する（例えば、Ｓ−フ
ェニルチオカルバメートまたはＢｏｃ）。ＶＩＦペプチドのＮ末端アミノ酸は、
代表的にαアミノ基で改変される。トリプトファンの他の小さい改変（例えば、
インドール窒素で）は、この改変がアミノ酸の阻害性活性を障害しない場合は、
可能である。

【００５２】 本発明のＶＩＦペプチドは、以下のアミノ酸配列のうちの１つを有する、線状
ペプチドである：Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ）ＴｈｒＡｓｎＰ
ｈｅ（ここで、改変Ｔｒｐとは、トリプトファンのＳ−フェニルチオカルバメー
ト誘導体である）（配列番号２）；Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ
）ＴｈｒＡｓｎＰｈｅ（ここで、改変Ｔｒｐは、環窒素に結合したＢＯＣ基を有
する）（配列番号４）；ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ）ＴｈｒＡｓｎＰｈｅ
（ここで、改変Ｔｒｐとは、トリプトファンのＳ−フェニルチオカルバメート誘
導体である）（配列番号３）；Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ）（
ここで、改変Ｔｒｐとは、トリプトファンのフェニルチオカルバメート誘導体で
ある）（配列番号５）；Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ）（ここで
、改変Ｔｒｐは、環窒素に結合したＢＯＣ基を有する）（配列番号６）；ＦＭＯ
Ｃ−改変Ｔｒｐ（「Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ」）（ここで、改変Ｔｒ
ｐは、環窒素に結合したＢｏｃ基を有する）；Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（ここで
、改変Ｔｒｐは、環窒素に結合したＢｏｃ基を有する）；Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ；Ｆ
ｍｏｃ−ｍｏｄＴｒｐ（ここで、改変Ｔｒｐとは、トリプトファンのフェニルチ
オカルバメート誘導体である）、およびｍｏｄ−Ｔｒｐ（ここで、改変Ｔｒｐと
は、トリプトファンのフェニルチオカルバメート誘導体である）。

【００５３】 改変トリプトファン（「ｍｏｄＴｒｐ」）は、Ｔｒｐのインドール窒素におい
て、改変（例えばＳ−フェニルチオカルバメートまたはＢｏｃ）を含む。ＶＩＦ
ペプチドのＮ末端アミノ酸もまた、αアミノ基において改変され得るか、または
改変されなくてもよい。適切なＮ末端αアミノ誘導体としては、Ｎ−Ｆｍｏｃ誘
導体が挙げられる。アミノ酸残基の他の少しの改変（例えば、ＶＩＦペプチドの
側鎖官能基において）もまた、その改変がそのペプチドの阻害活性を損なわない
ことを条件として、可能である。

【００５４】 １つの好ましい実施形態において、本発明のＶＩＦペプチドは、ペプチドＦｍ
ｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ−Ｔｒｐ（Ｓ−フェニルチオカルバメート）−Ｔｈｒ
ＡｓｎＰｈｅ（配列番号２）を含む。本発明のペプチドは、代表的に、タンパク
質中に天然に存在するアミノ酸から選択されるＬ−アミノ酸を含むが、Ｄ−アミ
ノ酸および／または遺伝的にコードされるアミノ酸以外のアミノ酸をもまた含み
得る。本発明のペプチドは、上記のように、線状ポリマーにおいて、アミドによ
って結合されるか、または天然に存在するペプチドにおいて代表的な「ペプチド
」結合によって、アミノ酸を含む。しかし、１つ以上のペプチド結合が、還元ま
たは脱離によって得られるもののような置換の結合によって、置き換えられ得る
。従って、１つ以上の−ＣＯＮＨ−ペプチド結合は、当該分野において公知の方
法によって、−ＣＨ_２ＮＨ−、ＣＨ_２Ｓ−、−ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−
（シスまたはトランス）、−ＣＯＣＨ_２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２−、またはＣ
Ｈ_２ＳＯ−のような他の型の結合で置き換えられ得る（例えば、Ｓｐａｔｏｌａ
Ａ．Ｆ．，１９８３；Ｓｐａｔｏｌａ，Ａ．Ｆ．，１９８３；Ｍｏｒｌｅｙ
Ｊ．Ｓ．，１９８０）を参照のこと）。

【００５５】 本発明はまた、本明細書中に記載されるＶＩＦアミノ酸およびペプチドの、薬
学的に受容可能な塩を包含する。このような塩は、有機付加塩または無機付加塩
を含み、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、アス
コルビン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、安息香酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩
、ステアリン酸塩およびパモ酸塩が挙げられる。

【００５６】 （ＩＩＩ．ＶＩＦアミノ酸およびペプチドの阻害活性） 本発明のアミノ酸およびペプチドは、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ細菌にお
けるＲＮＡＩＩＩの誘導または合成、特に、多数のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ株（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ，Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ，Ｓ．ｗａｒｎｅｒｉお
よびＳ．ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓを含む）のいずれかによる、ＲＮＡＩＩＩの誘
導または合成のインヒビターとして、有用である。本発明のＶＩＦアミノ酸およ
びペプチドはまた、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ種によるビルレンス因子の産
生のインヒビターとして、有用である。いかなる特定の理論にも限定されずに、
ビルレンス因子の産生の阻害は、ＲＮＡＩＩＩの産生の阻害を介して行われるよ
うである。ビルレンス因子の産生の阻害は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ細菌
による感染の抑制または低限を生じる。従って、本発明のペプチドは、Ｓｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ感染（特にＳ．ａｕｒｅｕｓ，Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉ
ｓ，Ｓ．ｗａｒｎｅｒｉまたはＳ．ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ感染）の処置および
予防において、有用である。

【００５７】 本発明のＶＩＦアミノ酸またはペプチドの、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ感
染の処置または予防における有効性は、多数の様式で決定され得る。例えば、こ
のペプチドが、細菌によるＲＮＡＩＩＩまたはビルレンス因子（例えば、α−毒
素（α−溶血素））の産生を阻害する能力を試験することによるか、あるいは動
物モデルにおけるＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ感染の阻害を研究することによ
る。本発明のアミノ酸およびペプチドを、ＲＮＡＩＩＩ阻害活性についてアッセ
イした。このことは、当該分野において周知であるかまたは本明細書中に詳細に
記載される多数のアッセイのいずれかによって、達成され得る。このアッセイは
、例えば、細菌ＲＮＡのノーザン分析またはＲＮＡＩＩＩ−レセプター融合構築
物によって直接的にか、あるいは例えば、インビボでのビルレンス因子産生また
はＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ感染の阻害についてアッセイすることによって
間接的に、ＲＮＡＩＩＩ産生の阻害を測定し得る。本発明の抗細菌アミノ酸およ
びペプチドの活性の評価は、実施例２（インビトロアッセイ）および実施例３（
インビボアッセイ）に記載されている。

【００５８】 ＲＮＡＩＩＩ合成の誘導を比色定量により測定するための、ＲＮＡＩＩＩ：β
−ラクタマーゼ融合構築物（ｒｎａｉｉｉ：ｂｌａＺ）が、記載された（Ｊｉら
、１９９５）。この融合構築物は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ宿主（例えば
、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＲＮ６３９０Ｂ）に、当該分野において公知の方法によっ
て、導入される。融合構築物を保有する細菌は、指数段階の後期に増殖する際に
、これらの細菌はＡＩＰを放出し、これが次いで、ＲＮＡＩＩＩの合成を自己誘
導して、β−ラクタマーゼの合成を生じる。上清におけるベータ−ラクタマーゼ
活性は、非色定量的に測定され得る。ＶＩＦアミノ酸またはペプチドの、増殖培
地への添加は、内因性ＡＩＰによるＲＮＡＩＩＩ合成の誘導を阻害して、このア
ミノ酸もペプチドも有さないコントロールと比較して、β−ラクタマーゼの活性
を減少させる。本発明のＶＩＦアミノ酸またはペプチドは、このアミノ酸もペプ
チドも有さないコントロールと比較して、β−ラクタマーゼの活性の、少なくと
も２０％の減少、好ましくは５０％以上の減少を生じる。代表的に、このアッセ
イは、以下のように実施される。マイクロタイタープレートにおいて、ｒｎａｉ
ｉｉ：ｂｌａＺ融合構築物を含む指数の中期のＳ．ａｕｒｅｕｓ細胞を、ＣＹブ
ロス中で、ＶＩＦアミノ酸またはペプチドとともに振盪しながら３７℃で５０分
間インキュベートして、アミノ酸またはペプチドの最終濃度を約０．０１〜５０
μｇ／ｍｌの間にする。アジ化ナトリウムを、β−ラクタマーゼ基質（例えば、
ニトロセフィン；０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ５．８）中１３２μｇ／ｍｌ
で５０μｌ）とともに、約０．０２％の濃度まで添加する。これらのサンプルを
、基質の添加後１〜３０分間の異なる時点に、マイクロタイタープレートリーダ
ーで５００ｎｍにおいて読み取った。以前に記載されたように、０．００１／分
のＯＤ_５００の増加は、１単位のβ−ラクタマーゼ活性に等しい（Ｊｉら、１９
９５）。

【００５９】 あるいは、ＶＩＦアミノ酸またはポリペプチドの存在下および非存在下でのＲ
ＮＡＩＩＩレベルは、Ｊｉら、１９９５およびＮｏｖｉｃｋら、１９９３に記載
されるように、^３２Ｐ−標識ＲＮＡＩＩＩプローブを使用して、ノーザンブロッ
ト分析においてアッセイされ得る。

【００６０】 ＶＩＦアミノ酸またはペプチドの活性を評価するために有用なさらなるアッセ
イは、ＲＮＡＩＩＩ誘導の下流産物（すなわち、ビルレンス因子であり、例えば
、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ α−毒素（α−溶血素）またはトキシックシ
ョック症候群毒素（ＴＳＳＴ）である）の決定を包含する。ＶＩＦアミノ酸また
はペプチドの阻害活性は、ＶＩＦアミノ酸もペプチドも欠くコントロールと比較
した、これらのアミノ酸またはペプチドの存在下でこの細菌によって産生される
ビルレンス因子の量の減少によって、決定される。ビルレンス因子は、当該分野
において周知であるかまたは本明細書中に記載される多数の様式の１つによって
、アッセイされ得る。例えば、ビルレンス因子の産生は、ビルレンス因子の存在
または活性を測定するアッセイによって決定され得る。一般に、このようなアッ
セイを実施する際に、アッセイされる特定のビルレンス因子を産生するＳｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ株が、ＣＹブロス中で、３７℃で振盪しながら、３×１０ ^８ ／ｍｌの指数段階の初期で開始して、増殖される。ＶＩＦアミノ酸またはペプ
チドがこの培養物に添加される。ＲＮＡＩＩＩが、これらの条件下での培養の２
〜３時間後に転写され、次いでビルレンス因子が産生される。約２〜７時間にわ
たる異なる時点において、上清のサンプルを除去して、ビルレンス因子を、につ
いて試験する（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ α−毒素のような溶血
毒素であり、ウサギ赤血球を使用するこれの検出は、記載されている（Ｂｅｒｎ
ｈｅｉｍｅｒ，１９８８））。代表的に、このアッセイは、以下のように実施さ
れる：適切な緩衝液中に懸濁させた赤血球を、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ上
清の種々の希釈物とともに、３７℃で３０分間インキュベートする。次いで、こ
れらの細胞をペレット化して、上清中のヘモグロビンの濃度を、５４５ｎｍにお
ける吸光度を読み取ることによって、推定する。放出されたヘモグロビンの量は
、細菌上清中のα−毒素の量に比例する。界面活性剤の添加を使用して、ヘモグ
ロビンの放出の１００％を決定する。このアッセイは、α−毒素に対して高度に
感受性であるが、細菌によって放出される他の溶血素をもまた検出し得る。

【００６１】 あるいは、ビルレンス因子の存在もしくは非存在は、例えば、ＥＬＩＳＡを使
用して、免疫アッセイにおいて決定され得る。ＥＬＩＳＡは、トキシックショッ
ク症候群毒素１（ＴＳＳＴ−１）に対する精製された抗体、および較正曲線を作
製するための精製されたＴＳＳＴ−１を使用して、開発された（両方の試薬を、
Ｔｏｘｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｓａｒａｓｏｔａ，ＦＬから入
手した）。類似のＥＬＩＳＡアッセイが、他のビルレンス因子のために開発され
得る。他のビルレンス因子に特異的な抗体が、公知であるか、または当該分野に
おいて周知の方法によって開発され得る。例示的なＥＬＩＳＡは、以下のように
実施される。マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中約４．０μｇ／ｍｌの、Ｔ
ＳＳＴ−１（または任意の他のビルレンス因子）に対する抗体（ポリクローナル
またはモノクローナル）の溶液でコーティングする。このプレートを室温で一晩
インキュベートし、そして水で数回洗浄する。次いで、ウェルにブロッキング緩
衝液（例えば、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）を充填し、そして室温で３０分
間インキュベートし、次いでさらに水でリンスする。次いで、試験サンプル（例
えば、ビルレンス因子を含んでいると疑われる細菌上清０．０５ｍｌ）を添加し
、そして室温で２時間インキュベートする。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ上清
の定量のために、標準曲線を、既知量の精製ビルレンス因子を参照点として添加
することによって調製する。ビルレンス因子に対する精製した抗体を、市販のキ
ット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用してビオチンに結合体化し得、そしてブロッキング
緩衝液中１．０μｇ／ｍｌの希釈でプレートに添加し得る。室温で２時間インキ
ュベートした後に、このプレートを再度水でリンスし、アルカリホスファターゼ
に結合体化したストレプトアビジンを添加し、そしてさらに２時間インキュベー
トする。このプレートをリンスし、そして色素形成アルカリホスファターゼ基質
（例えば、ｐ−ニトロフェニルホスフェート）を添加し、次いで、色の現像を可
能にするに十分な時間の後に、ＯＤを、プレートリーダー中で４０５ｎｍにおい
て読み取る。

【００６２】 本発明のＶＩＦアミノ酸およびペプチドもまた、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ感染のインビボ動物モデルにおいて、活性をアッセイされ得る。例えば、マウ
スモデルが、Ｔｈａｋｋｅｒら、１９９８によって記載された。代表的に、この
ようなインビボ動物モデルを使用して、本発明のＶＩＦアミノ酸またはペプチド
で処理したマウスは、ＶＩＦアミノ酸でもペプチドでも処理されていないコント
ロールマウスと比較して、少なくとも２０％、好ましくは５０％、またはそれよ
り大きな生存時間の増加を有する（実施例３を参照のこと）。

【００６３】 （ＩＶ．ＶＩＦアミノ酸およびペプチドの合成／産生） 本発明のペプチドは、任意の従来のペプチド合成法によって（例えば、Ｍｅｒ
ｒｉｆｉｅｌｄ，１９６３およびＡｔｈｅｒｔｏｎら、１９８９によって記載さ
れるような固相ペプチド合成によるか、Ｊｏｎｅｓ、１９９４によって記載され
るような溶液相合成によるか、または当該分野において公知であるように、固相
と溶液層との両方の方法による）好都合に合成され得る。固相合成法の有用な概
説は、Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｆｉｅｌｄｓ，Ｇ．編、第２８９巻、
１９９７に見出され得る。

【００６４】 代表的な固相ペプチド合成は、ペプチドのＣ末端から開始する。適切な出発物
質は、例えば、必要な保護をされたα−アミノ酸を、クロロメチル化樹脂、ヒド
ロキシメチル化樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂（ＢＨＡ）、またはパラ−メチ
ルベンズヒドリルアミン樹脂（ｐ−Ｍｅ−ＢＨＡ）に付着させることによって、
調製され得る。一例として、利用可能なクロロメチル化樹脂は、ＢｉｏＲａｄ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，Ｃａｌｉｆ．によるＢＩＯＢＥ
ＡＤＳ．ＲＴＭ．ＳＸ １である。ヒドロキシメチル樹脂の調製は、Ｂｏｄａｎ
ｓｋｙら、１９６６によって記載されている。ＢＨＡ樹脂は、Ｐｉｅｔｔａら、
１９７０によって記載されており、そしてＰｅｎｉｎｓｕｌａ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｅｌｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆ．により市販されている。

【００６５】 簡単にいえば、成長するペプチドのＣ末端は、合成の間、固体支持体、すなわ
ち樹脂に共有結合する。３つの化学反応が、ペプチド鎖に付加される各アミノ酸
に対して繰り返される：脱保護、活性化、およびカップリング。このプロセスの
間、アミノ酸は「保護されている」か、または誘導体化されて、それらのα−ア
ミノおよび側鎖官能基における所望でない反応が防止される。ペプチドへの付加
に続いて、この保護基が除去（「脱保護」）されて、ペプチド鎖の末端のαアミ
ノ基をアクセス可能にし、次いで「活性化」される。これによって、付加される
べき次のアミノ酸を活性エステルに転換し、そしてこの活性エステルが、ペプチ
ド鎖の末端の脱保護されたα−アミノ酸とアミド結合を形成する場合には、「カ
ップリング」する。カップリングの後に、合成の新たなサイクルが、次の脱保護
で開始する。自動化合成が完了すると、側鎖保護基を化学的にそのペプチドから
切断し、そして合成ペプチドを、樹脂支持体から切断する。ＢｏｃおよびＦｍｏ
ｃ基が、固相ペプチド合成のための最も広範に使用され、そして市販されている
、Ｎ−アミノ保護基である。

【００６６】 α−アミノ酸の保護基は、有機溶媒に溶解した種々の酸試薬（例えば、トリフ
ルオロ酢酸（ＴＦＡ）または塩酸（ＨＣｌ））によって、室温で除去され得る。
α−アミノ酸の保護基の除去の後に、残りの保護されたアミノ酸が、所望の順で
段階ごとにカップリングされ得る。所望のアミノ酸配列が構築された後に、この
ペプチドは、フッ化水素（ＨＦ）のような試薬（これは、ペプチドを樹脂から切
断するのみでなく、側鎖の保護基をもまた切断する）での処理によって、支持体
樹脂から切断される。クロロメチル化樹脂またはヒドロキシメチル化樹脂が使用
される場合には、ＨＦでの処理は、末端酸ペプチドの遊離形態での形成を導く。
ＢＨＡまたはｐ−Ｍｅ−ＢＨＡ樹脂が使用される場合には、ＨＦでの処理は、末
端アミドペプチドの遊離形態での形成を直接的に導く。

【００６７】 本発明のＶＩＦペプチドに組み込むためのｍｏｄＴｒｆを生成するためのトリ
プトファン残基の改変が、このペプチドの合成の前、最中または後のいずれかに
、実施され得る。フェニルチオカルバメート誘導体を形成するための、トリプト
ファンの改変は、当該分野において周知の反応によって実施され得る。例えば、
Ｂｏｃ保護されたトリプトファン部分を、フェニルチオール（Ｃ_６Ｈ_５−ＳＨ）
と、一般的にはＨＦの存在下で反応させる。１つの好ましい方法において、Ｎ−
シクロヘキシルオキシカルボニル基が、ｍｏｄＴｒｆを合成する際の保護基とし
て使用される（例えば、Ｎｉｓｈｉｕｃｈｉら、１９９６を参照のこと）。Ｆｍ
ｏｃ基は、当該分野において周知の多数の方法のいずれかによって、ＴｒｐのＮ
末端α−アミノ基に付加され得る。例えば、Ｆｍｏｃは、ペプチド合成において
慣用的に使用される方法によって、Ｎ末端アミノ基に付加され得る。

【００６８】 ペプチドの化学合成の代替として、特定の改変されていないペプチドが、当該
分野において周知の方法によって、細菌系において組換え的に産生され得る。こ
のような場合には、トリプトファン残基の改変は、化学的に合成されたペプチド
に関して上に記載したように、実施され得る。ペプチドのこのような組換え産生
は、多量のペプチドを提供するために所望であり得る。適切な未改変ペプチドを
コードする有用なＤＮＡ配列は、当業者によって容易に決定される。未改変ペプ
チドをコードするＤＮＡは、好ましくは、市販の核酸合成法を使用して調製され
る。組換え宿主中でのペプチドの産生のための発現系を構築する方法もまた、当
該分野において一般的に公知である。発現は、原核生物宿主または真核生物宿主
のいずれかにおいて、実施され得る。原核生物は、最も頻繁には、Ｅ．ｃｏｌｉ
の種々の株によって代表される。しかし、他の微生物株（例えば、杆菌（例えば
、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、シュードモナス属の種々の種、また
は他の細菌株）もまた使用され得る。このような原核生物系において、宿主と適
合性の種由来の複製部位および制御配列を含むプラスミドベクターが、使用され
る。Ｅ．ｃｏｌｉのための例示的なベクターとしては、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１
８およびこれらの誘導体が挙げられる。通常使用される原核生物制御配列は、転
写開始のためのプロモーターを、必要に応じてオペレーターとともに含み、リボ
ソーム結合部位配列とともに、β−ラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）およびラク
トース（ｌａｃ）プロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、
ならびにλ−由来Ｐ_ＬプロモーターおよびＮ−遺伝子リボソーム結合部位を含む
。しかし、原核生物と適合性の任意の利用可能なプロモーター系が、使用され得
る。

【００６９】 真核生物宿主において有用な発現系は、適切な真核生物遺伝子由来のプロモー
ターを含む。例えば、酵母において有用なクラスのプロモーターとしては、解糖
作用酵素の合成のためのプロモーター（例えば、３−ホスホグリセレートキナー
ゼに対するプロモーター）が挙げられる。他の酵母プロモーターとしては、ＹＥ
ｐ１３から得られるエノラーゼ遺伝子またはＬｅｕ２遺伝子由来のものが挙げら
れる。適切な哺乳動物プロモーターとしては、ＳＶ４０由来の初期および後期の
プロモーターまたは他のウイルス性プロモーター（例えば、ポリオーマ、アデノ
ウイルスＩＩ、ウシパピローマウイルスまたは鳥類肉腫ウイルス由来のプロモー
ター）が挙げられる。植物発現系における使用のための例示的なプロモーターは
、ノパリン合成プロモーターである。これらの発現系が構築され、そして制限、
連結および適切な宿主への形質転換が、形質転換される細胞の型に対して適切な
標準的な技術を使用して実施される。発現系を含む細胞が、ペプチドの産生のた
めに適切な条件下で培養され、次いで、このペプチドが回収され、そして精製さ
れる。

【００７０】 このような組換え産生されたペプチドのＮ末端αアミノ基は、当該分野で周知
の多くの方法のいずれかによって行われ得、例えば、Ｆｍｏｃは、ペプチド合成
において慣用的に使用される方法によって、そのＮ末端アミノ基に付加され得る
。

【００７１】 本発明のＶＩＦアミノ酸またはペプチドが、合成化学または組換え手段によっ
て産生された後、従来のタンパク質精製技術（例えば、逆相クロマトグラフィー
、ＨＰＬＣ分配および／またはイオン交換クロマトグラフィー）によって実質的
に均質に精製される。適切なマトリクスおよび緩衝液の選択は、当該分野で周知
であり、本明細書中に詳細には説明しない。

【００７２】 （Ｖ．インビボ送達のための抗細菌性のアミノ酸およびペプチド組成物） 本発明のＶＩＦアミノ酸およびペプチドは、ビルレンス因子を産生する細菌（
特に、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）による被験体の感染を処置または予防す
るための方法における有用性を見出す。１以上のＶＩＦアミノ酸またはペプチド
（単独であるかまたは薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物中のいず
れかでの）は、特定の感染に適切なように、被験体に投与され得るか、または治
療デバイスまたはプロテーゼデバイスに組み込まれて、そのデバイスの使用に関
連するブドウ球菌感染の発生を減少または予防し得る。

【００７３】 いくつかの場合において、本発明のＶＩＦアミノ酸およびペプチドは、抗生物
質と一緒に投与される。ブドウ球菌感染を処置するために使用されてきた抗生物
質としては、ジクロキサシリン；オキサシリン；アモキシリン；またはアンピシ
リン；セファロスポリン（例えば、第１世代のセファロスポリン（例えば、Ｃｅ
ｆａｄｒｏｘｉｌまたはＤｕｒｉｃｅｆ；ＣｅｐｈａｌｅｘｉｎまたはＫｅｆｌ
ｅｘ、およびＣｅｐｈｒａｄｉｎｅまたはＶｅｌｏｓｅｆ）、第２世代のセファ
ロスポリン（例えば、ＣｅｆａｃｌｏｒまたはＣｅｃｌｏｒ、Ｃｅｆｕｒｏｘｉ
ｍｅ ＡｘｔｅｌまたはＣｅｆｔｉｎ、ＣｅｆｐｒｏｚｉｌまたはＣｅｆｚｉｌ
およびＬｏｒａｃａｒｂｅｆまたはＬｏｒａｂｉｄ）および第３世代のセファロ
スポリン（例えば、ＣｅｆｉｘｉｍｅまたはＳｕｐｒａｘ、Ｃｅｆｐｏｄｏｘｉ
ｍｅ ｐｒｏｘｅｔｉｌまたはＶａｎｔｉｎ、ＣｅｆｔｉｂｕｔｅｎまたはＣｅ
ｄａｘ、ＣｅｆｄｉｎｉｒまたはＯｍｎｉｃｅｆ、および筋内使用のためのＣｅ
ｆｔｒｉａｘｏｎｅまたはＲｏｃｅｐｈｉｎ））；トリメトプリム／スルファメ
トキサゾール、バンコマイシンおよびメチシリンが挙げられるが、これらに限定
されない。

【００７４】 本発明の１以上のＶＩＦアミノ酸またはペプチドとの組み合わせ治療に好まし
い抗生物質としては、メチシリンまたはバンコマイシンが挙げられる。抗生物質
は、１以上のＶＩＦアミノ酸またはペプチドと一緒に投与され得るか、または別
々に投与され得る。このような投与は、同時に行い得るか、または連続的であり
得る。

【００７５】 ペプチド化合物は、中性または塩形態の組成物に処方される。薬学的に受容可
能な非毒性の塩としては、酸付加塩（遊離アミノ基によって形成される）および
無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸またはリン酸）または有機酸（例えば
、酢酸、コハク酸、アスコルビン酸、グルコン酸、安息香酸、リンゴ酸、フマル
酸、ステアリン酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸など）で形成される塩が挙げ
られる。遊離カルボキシル基で形成される塩は、無機塩基（例えば、水酸化ナト
リウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまたは水酸化
鉄（ＩＩＩ））および有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミ
ン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなど）から誘導され
得る。

【００７６】 インビボ送達のための組成物は、種々の形態をとる。これらとしては、例えば
、固体、半固体および液体投薬形態（例えば、錠剤、丸剤、粉末剤、液体の溶液
または懸濁液、リポソーム、ならびに注射可能な溶液および注入可能な溶液）が
挙げられる。好ましい形態は、意図される投与様式および治療適用に依存する。
組成物はまた、好ましくは、当業者に周知のような、従来の薬学的に受容可能な
キャリアおよびアジュバントを含む。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，第１８版、１９９０を参照のこと。投与は、
一般に、局所経路、経口経路または非経口（皮下、筋内、静脈内および皮内を含
む）経路によって行われる。本発明の治療的方法および薬剤は、もちろん、特定
の疾患または疾患状態を処置するための他の方法および薬剤（例えば、従来の抗
生物質（上記のような））と同時にかまたは組み合わせて使用され得る。

【００７７】 液体の薬学的に投与可能な組成物は、例えば、本発明の１以上のＶＩＦアミノ
酸またはペプチドの有効量および必要に応じて薬学的アジュバントを、賦形剤（
例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノール、オ
リーブ油、および他の親油性溶媒など）中に溶解、懸濁などを行い、溶液または
懸濁液を形成することによって調製され得る。所望の場合、投与される薬学的組
成物はまた、少量の非毒性補助物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤
、可溶化剤、懸濁剤、乳化剤、緩衝液、濃化剤、着色剤、粘度調節剤、保存剤、
安定化剤、および浸透圧調節剤など（例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸
ソルビタン、酢酸ナトリウムトリエタノールアミン、オレイン酸トリエタノール
アミンなど））を含み得る。このような投薬形態を調製する実際の方法は、公知
でありそして当業者に明らかである。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、前出を参照のこと。

【００７８】 ＶＩＦアミノ酸またはペプチド調製物の非経口投与のための液体キャリアの適
切な例としては、水（部分的に、添加剤（例えば、セルロース誘導体（好ましく
は、カルボキシメチルセルロースナトリウム溶液））を含む）、アルコール（一
価アルコールおよび多価アルコール（例えば、グリコール）を含む）およびそれ
らの誘導体、ならびに油（例えば、分留した（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ）ココ
ナッツ油およびラッカセイ油）が挙げられる。

【００７９】 ＶＩＦアミノ酸またはペプチドの非経口投与のために、キャリアはまた、油性
エステル（例えば、オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピル）であり
得る。滅菌キャリアが、非経口投与のための滅菌液体形態組成物において有用で
ある。

【００８０】 加圧組成物のための液体キャリアは、ハロゲン化炭化水素または他の薬学的に
受容可能な噴霧剤であり得る。このような加圧組成物はまた、吸入を介する送達
のために脂質カプセル化され得る。鼻内または気管支内の吸入またはガス注入に
よる投与のために、ＶＩＦアミノ酸またはペプチドは、水性または部分的に水性
の溶液中に処方され得、これは、次いで、エアロゾル形態で利用され得る。

【００８１】 固体組成物については、従来の非毒性固体キャリアが使用され得、これらには
、例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン
酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、ス
クロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。経口投与のために、薬学的に受
容可能な非毒性組成物は、任意の通常使用される賦形剤（例えば、先に列挙した
キャリア）、および一般には、０．１〜９５％の活性成分（好ましくは、約２０
％）を組み込むことによって形成される。

【００８２】 ＶＩＦアミノ酸およびペプチドは、活性化合物を含む薬学的に受容可能なビヒ
クルでの処方により、溶液、クリーム剤、粉末剤、軟膏剤またはローション剤と
して、局所的に投与され得る。ローション剤は、水性基剤または油性基剤で処方
され得、一般にはまた、以下の１以上を含む：安定化剤、乳化剤、分散剤、懸濁
剤、濃化剤、着色剤、香料など。粉末剤は、任意の適切な粉末基剤（例えば、タ
ルク、ラクトース、デンプンなど）の補助によって形成され得る。ドロップ剤は
、水性基剤または非水性基剤で処方され得、これらはまた、１以上の分散剤、懸
濁剤、可溶化剤などを含む。軟膏剤およびクリーム剤は、例えば、適切な濃化剤
および／またはゲル化剤の添加によって水性基剤または油性基剤を用いて処方さ
れ得る。このような基剤は、水および／または油（例えば、液体パラフィンまた
は植物油（例えば、ピーナッツ油またはヒマシ油））を含み得る。基剤の性質に
従って使用され得る濃化剤としては、軟性パラフィン、ステアリン酸アルミニウ
ム、セトステアリルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー
ル、羊毛脂、水素化ラノリン、蜜蝋などが挙げられる。

【００８３】 ＶＩＦアミノ酸およびペプチドはまた、リポソームキャリア中で投与され得る
。細胞取り込みを促進するためのリポソームの使用は、例えば、米国特許第４，
８９７，３５５号、米国特許第４，３９４，４４８号および米国特許第５，９０
８，６３５号に記載される。多くの刊行物が、リポソームの処方物および調製物
を記載する。

【００８４】 ＶＩＦアミノ酸およびペプチドでの処置についての投薬要件は、使用する特定
の組成物、投与経路、提示される症状の重篤度、ＶＩＦアミノ酸またはペプチド
の形態、および処置される特定の被験体に伴って変化する。一般には、本発明の
ＶＩＦペプチドおよびアミノ酸の適切な有効用量は、一般に、０．１〜１００ｍ
ｇ／ｋｇ体重／日の範囲であり、そして好ましくは、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体
重／日の範囲である。最適な用量は、多くの因子、特に、使用する組成物および
投与経路に依存することが、当業者に理解される。

【００８５】 所望の投薬は、好ましくは、１日を通して適切な間隔で投与される１回以上の
日用量において行われる。好ましくは、投薬は、有害な副作用を引き起こさずに
効果的な結果を与える量（例えば、薬理学的有効量）で、１日あたり１回で行わ
れる。このような濃度は、単回用量の投与によってか、または１日を通して適切
な間隔での投与についての簡便な部分用量に分けられた同じ日用量の投与によっ
て達成され得る。

【００８６】 （ＶＩ．抗細菌性のアミノ酸またはペプチドを使用する処置の方法） 本発明のペプチドは、代表的には、細菌感染（例えば、ブドウ球菌感染）を有
するかまたは有する危険性のある宿主に投与される。

【００８７】 １つの局面において、本発明は、ヒトまたは動物被験体においてインビボで細
菌感染（特に、ブドウ球菌感染）を緩徐化または制限すること、および／または
特定の細菌による感染に代表的に関連する検出可能な症状の減少または排除に関
する。

【００８８】 細菌感染の部位にＶＩＦアミノ酸またはペプチドを送達するためにかまたはＶ
ＩＦアミノ酸またはペプチドを血流に導入するために効果的な方法が、意図され
ることが理解される。

【００８９】 宿主は、代表的には、ヒト患者である。動物もまた、本発明のペプチドで処置
され得、これらには、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギ、イヌ、ネコのような商
業的または獣医学的に重要な動物、およびラット、マウスまたはモルモットのよ
うな実験動物が挙げられるが、これらに限定されない。

【００９０】 一般に、改変トリプトファン残基を有する少なくとも１つのＶＩＦアミノ酸ま
たはペプチドが、予防的処置および／または治療的処置のための局所投与、非経
口投与または経口投与によって投与される。

【００９１】 インビボに好ましいＶＩＦアミノ酸およびペプチドは、上記第ＩＩＡ節に詳述
される。

【００９２】 局所投与は、改変トリプトファン残基を有する少なくとも１つのＶＩＦアミノ
酸またはペプチドを、患者の全身循環中へのＶＩＦアミノ酸またはペプチドの経
皮的通過によって、被験体に送達するために使用される。皮膚部位としては、前
腕、腹部、胸部、背部、殿部、および乳房（ｍａｓｔｏｉｄａｌ）部のような、
化合物を経皮的に投与するための解剖学的領域が挙げられる。ＶＩＦアミノ酸ま
たはペプチドは、その化合物を含む局所処方物またはその化合物を投与する経皮
薬物送達デバイスのいずれかを皮膚に配置することによって、皮膚に投与される
。いずれかの実施形態において、送達ビヒクルは、配置の容易性および皮膚上で
の快適な保持のためにデザインされ、形付けられ、サイズ化され、そして適応さ
れる。

【００９３】 種々の経皮薬物送達デバイスが、本発明のアミノ酸およびペプチドと共に使用
され得る。例えば、裏打ち材料およびアクリレート接着剤を含む、単一の接着パ
ッチが、調製され得る。このアミノ酸またはペプチドおよび透過増強剤は、接着
剤成形溶液に処方され得る。この接着剤成形溶液は、裏打ち材料上に直接キャス
ティングされ得るか、または皮膚に適用されて接着性コーティングを形成し得る
。例えば、米国特許第４，３１０，５０９号；同第４，５６０，５５５号；およ
び同第４，５４２，０１２号を参照のこと。

【００９４】 他の実施形態において、本発明のＶＩＦアミノ酸またはペプチドは、液体レザ
バシステム薬物送達デバイスを使用して送達される。これらのシステムは、代表
的に、裏打ち材料、膜、アクリレートベースの接着剤、および放出ライナーを含
む。膜は、裏打ちにシールされ、レザバを形成する。化合物および任意のビヒク
ル、増強剤、安定化剤、ゲル化剤などが、次いで、このレザバに組み込まれる。
例えば、米国特許第４，５９７，９６１号；同第４，４８５，０９７号；同第４
，６０８，２４９号；同第４，５０５，８９１号；同第３，８４３，４８０号；
同第３，９４８，２５４号；同第３，９４８，２６２号；同第３，０５３，２５
５号；および同第３，９９３，０７３号を参照のこと。

【００９５】 裏打ち、薬物／透過増強剤マトリクス、膜および接着剤を含むマトリクスパッ
チもまた、本発明のＶＩＦアミノ酸またはペプチドを経皮的に送達するために使
用され得る。マトリクス材料は、代表的に、ポリウレタン発泡体を含む。アミノ
酸またはペプチド、任意の増強剤、ビヒクル、安定化剤などは、この発泡体前駆
物質と合わせられる。この発泡体を硬化させて、粘着性のエラストマーマトリク
スを生成し、これは、裏打ち材料に直接付加され得る。例えば、米国特許第４，
５４２，０１３号；同第４，４６０，５６２号；同第４，４６６，９５３号；同
第４，４８２，５３４号；および同第４，５３３，５４０号を参照のこと。

【００９６】 本発明のＶＩＦアミノ酸またはペプチドはまた、粘膜を介して送達され得る。
経粘膜（例えば、舌下、頬腔および膣内）薬物送達は、全身循環への活性物質の
効果的な進入を提供し、そして肝臓および腸壁微生物叢による即時の代謝を減少
する。経粘膜薬物投薬形態（例えば、錠剤、坐剤、軟膏剤、ペッサリー、膜およ
び粉末剤）は、代表的に、粘膜との接触下に保持され、そして即時の全身的な吸
収を可能にするように迅速に崩壊および／または溶解し、そして患者が、処置組
成物を経口的に消化することができない場合に使用され得る。

【００９７】 頬腔または舌下の膜への送達のために、代表的には、経口処方物（例えば、ロ
ゼンジ、錠剤、またはカプセル剤）が、使用される。これらの処方物を製造する
方法は、当該分野で公知であり、これらは、予備製造した錠剤への薬理学的薬剤
の添加；不活性充填剤、結合剤および薬理学的薬剤またはその薬剤を含む物質の
冷却圧縮成形（米国特許第４，８０６，３５６号に記載されるような）；および
カプセル化を含むが、これらに限定されない。別の経口処方物は、接着剤（例え
ば、セルロース誘導体ヒドロキシプロピルセルロース）を用いて経口粘膜に適用
され得る（例えば、米国特許第４，９４０，５８７号に記載のように）。このよ
うな頬腔接着組成物は、頬腔粘膜に適用された場合に、口内へのおよび頬腔粘膜
を通す薬理学的薬剤の制御された放出を可能にする。

【００９８】 非経口投与は、一般に、皮下、筋内または静脈内への注射によって特徴付けら
れる。従って、本発明は、受容可能なキャリア中に溶解または懸濁された本発明
のＶＩＦアミノ酸またはペプチドの溶液を含む、静脈内投与のための組成物を提
供する。注射剤は、従来の形態（液体の溶液または懸濁液、注射前の液体中への
溶解または懸濁に適切な固体形態、またはエマルジョンのいずれかとして）で調
製され得る。適切な賦形剤は、例えば、水、緩衝化水、生理食塩水、デキストロ
ース、グリセロール、エタノールなどである。これらの組成物は、従来の周知の
滅菌技術（例えば、濾過滅菌）によって滅菌される。得られた溶液は、使用用に
パッケージされ得るか、または凍結乾燥化され、この凍結乾燥化調製物は、投与
前に滅菌溶液と合わせられる。さらに、所望の場合、投与される薬学的組成物は
また、少量の非毒性の補助物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝化剤な
ど（例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタ
ノールアミンなど））を含み得る。

【００９９】 非経口投与は、徐放システムまたは持続放出システムの埋め込みを使用し、そ
の結果、一定レベルの投薬量が維持される。例えば、米国特許第３，７１０，７
９５号を参照のこと。

【０１００】 （ＶＩＩ 抗細菌デバイス） 別の実施形態において、本発明は、医療デバイス（例えば、治療デバイスまた
はプロテーゼデバイス）の使用に関連する細菌感染（特に、ブドウ球菌感染）の
発生を予防または減少するための方法を提供する。

【０１０１】 留置医療デバイス（血管カテーテルを含む）は、静脈へのアクセスを提供する
ことによる入院患者の処置において、頻度を増加しながら使用される。これらの
カテーテルおよび他の型の医療デバイス（例えば、腹膜カテーテル、心臓血管デ
バイス、整形外科移植片および他のプロテーゼデバイス）に由来する利点は、し
ばしば、感染性の合併症によって相殺される。これらの感染性の合併症を引き起
こす最も一般的な生物は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄ
ｉｓおよびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓである。

【０１０２】 本発明の方法は、このような医療デバイスの使用に一般に関連するブドウ球菌
感染の発生を予防または減少するための手段を提供する。この方法は、本発明の
アミノ酸またはペプチドを医療デバイスに組み込むことを包含する。ＶＩＦアミ
ノ酸またはペプチドは、処置下の条件に適切な任意の様式（その多くは、当該分
野で公知である）でそのデバイス内に組み込まれ得る。例えば、デバイスは、Ｖ
ＩＦアミノ酸またはペプチドの任意の適切な処方物でコートされ得るか、または
このアミノ酸またはペプチドは、このデバイスに接着するかまたはこのデバイス
内に吸収される条件下で、ＶＩＦアミノ酸またはペプチドの溶液を接触され得る
。このデバイスはまた、このアミノ酸またはペプチドが組み込まれた材料から製
造され得る。アミノ酸またはペプチドをデバイスに組み込むためのいくつかの方
法が、米国特許第５，９０２，２３８号、同第５，７４６，１４５号、同第５，
８５３，７４５号および同第５，７８８，９７９号に見出され得る。

【０１０３】 本発明のアミノ酸またはペプチドを組み込むために特に適切な特定のデバイス
は、末梢に挿入可能な中心静脈カテーテル、透析カテーテル、長期間通される（
ｔｕｎｎｅｌｅｄ）中心静脈カテーテル、末梢静脈カテーテル、短期中心静脈カ
テーテル、動脈カテーテル、肺動脈Ｓｗａｎ−Ｇａｎｚカテーテル、尿カテーテ
ル、長期の尿デバイス、組織結合尿デバイス、陰茎のプロテーゼ、脈管移植片、
脈管カテーテルポート、創傷排出管、水頭シャント、腹膜カテーテル、ペースメ
ーカーカプセル、人工尿括約筋、小さなまたは一時的な間接置換、尿拡張器、心
臓弁などが挙げられる。

【０１０４】 以下の実施例は例示であるが、いかようにも本発明を限定するように意図され
ない。

【０１０５】 （実施例１） （病原阻害因子（ＶＩＦ）の発見） 合成ＰＥＰ（ＹＳＰＷＴＮＦ、配列番号１）（市販のタンパク質合成研究室（
Ｐｅｎｔａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｆｏｓｔｅｒ ｃｉｔｙ，ＣＡ）から入手した）
を、以前に高レベルのα−毒素を生じると決定されたＳ．ａｕｒｅｕｓ（「野生
のブドウ球菌」または「ＷＳ」）の臨床単離体による、α−毒素の産生について
のその影響について試験した。ＷＳ細胞を、３×１０^８／ｍｌで培養物中で開始
し、そして試験ペプチドの存在下または非存在下で、２〜３時間培養した。２〜
３時間後、この培養物の上清を、以前に公開された手順（Ｂｅｒｎｈｅｉｍｅｒ
，１９８８）に従って、ウサギの赤血球についての溶血活性についてアッセイし
、このアッセイは、α−毒素に対して高度に感受性であるが、存在する場合、他
の溶血性毒素も検出し得る。

【０１０６】 以前に観察された活性とは対照的に、精製された合成ＰＥＰ（配列番号１）は
、α−毒素の産生およびＲＮＡ ＩＩＩアッセイにおいて、かき集められたペプ
チドコントロール（これは、同じアミノ酸をＰＥＰとして含む）と同様の活性を
有した。

【０１０７】 従来のＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相ペプチド合成ペプチドを、配列ＴｙｒＳｅｒ
ＰｒｏＴｒｐＴｈｒＡｓｎＰｈｅを有するペプチドを合成するために保持（ｃａ
ｒｒｙ）した（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，１９６３）。次いで、この反応生成物を
、Ｃ４逆相ＨＰＬＣカラム上での分画に供し、そして各画分を、α−毒素産生の
阻害について試験した。強力な阻害活性は、３６分で溶出する物質のピークに相
関したが、主な成分は、単一成分を含むようでありそして４１分で溶出する物質
のピークである。４１分の画分のアミノ酸配列決定によって、ＴｙｒＳｅｒＰｒ
ｏＴｒｐＴｈｒＡｓｎＰｈｅの配列（ＰＥＰペプチドの配列）を得た。

【０１０８】 ３６分で溶出する物質（近接して溶出する２つの成分からなるようである）の
ピークを、Ｃ１８カラムでさらに分離した。後に溶出するピークは、α−毒素ア
ッセイにおいて活性な物質を含んだ。精製した活性な物質を、アミノ酸配列決定
に供し、そしてこの配列をＴｙｒＳｅｒＰｒｏＴｒｐＴｈｒＡｓｎＰｈｅと決定
した（ＰＥＰペプチドの配列と同一である）。しかし、質量分析（ＭＳ）によっ
て決定される分子量は１２７３であり、これはＰＥＰ（ＴｙｒＳｅｒＰｒｏＴｒ
ｐＴｈｒＡｓｎＰｈｅ）について予想される質量９１３よりも大きい。質量にお
ける差異は、トリプトファン残基がインドール側鎖で改変され、Ｔｒｐが改変さ
れてフェニルチオカルバメート誘導体を形成することと一貫することを示唆した
。この機構は本発明の一部ではないが、ＴｒｐのＳ−フェニルチオカルバメート
誘導体の形成は、固相ペプチド合成法と一貫する。このペプチドの固相合成の最
後の工程において、強酸条件下で、チオアニソールはフェニルチオールに変換さ
れ得、これはＢｏｃ保護Ｔｒｐのカルボニル基とさらに反応して、フェニルチオ
カルバメート誘導体を形成し得る。改変されたＴｒｐ（ｍｏｄＴｒｐ）を含むこ
の活性なペプチドは、病原性阻害因子１について「ＶＩＦ−１」と名付けられる
。

【０１０９】 （ＶＩＦ−１は、試験された全てのＳ．ｇｒｏｕｐｓおよびＳ．ｗａｒｎｅｒ
ｉによって病原性因子の産生を阻害する。） ＶＩＦ−１（配列番号２）を、４つの異なる干渉グループを表すＳ，ａｕｒｅ
ｕｓの菌株で試験することによって、インビトロで病原性因子産生におけるその
影響について評価した（Ｊｉら，１９９７）。この結果は、ＶＩＦ−１が、０．
０６〜０．１５μｇ／ｍｌの範囲のＩＣ_５０値で、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの４つ全て
のグループによってα−毒素の産生を用量依存的に阻害したことを実証する（表
１）。ＶＩＦ−１ペプチドの濃度が、カラム精製前の合成ペプチドの試験に基づ
くと仮定すると、純粋なＶＩＦ−１についての実際のＩＣ_５０値は低く、おそら
く観察されたレベルのおよそ２０％である。かき集められたコントロールペプチ
ドは、不活性であった。この合成ペプチドは、ＷＳ培養物において２４時間細菌
の増殖を阻害しなかった（データは示さず）。

【０１１０】 Ｓ．ｗａｒｎｅｒｉは頻繁な病原ではないが、感染を引き起こし、そしていく
つかの単離体は、α−およびδ−毒素のようなエキソタンパク質（ｅｘｏｐｒｏ
ｔｅｉｎ）を産生することが報告されている（Ｌａｍｂｅら，１９９０）。Ｓ．
ｗａｒｎｅｒｉによって分泌された溶血活性は検出されたが、その量はＳ．ａｕ
ｒｅｕｓによって産生されたものより少なかった。しかし、ＶＩＦ−１は、Ｓ．
ｗａｒｎｅｒｉによる溶血素の産生を強力に阻害した。この結果は有意である。
なぜなら、以前に報告された他の改変ＡＩＰ（Ｍａｙｖｉｌｌｅら，１９９９；
Ｏｔｔｏら，１９９９）は、いずれも、改変ＡＩＰが由来する自己菌株によって
ａｇｒの活性化および病原因子の産生を阻害し得なかったためである。

【０１１１】 表１：ＶＩＦ−１による溶血素産生の阻害についてのＩＣ_５０値

【０１１２】

【表１】 ａｇｒの制御下でのトキシックショック症候群毒素−１（ＴＳＳＴ−１）に対
するＶＩＦ−１の影響、およびＳ．ａｕｒｅｕｓ感染の多くの場合における重要
な病原因子を評価した。この結果は、ＶＩＦ−１が、０．２μｇ／ｍｌの低い濃
度で、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの４つ全てのグループによるＴＳＳＴ−１の放出を抑制
することを示す（表２）。Ｓ．ｗａｒｎｅｒｉはこの実験では試験しなかった。
なぜなら、これは検出可能な量のＴＳＳＴ−１を産生しないためである。

【０１１３】 ＶＩＦ−１を用いて、または用いずに４時間培養した細胞の上清におけるＴＳ
ＳＲ−１の量を、ＥＬＩＳＡで測定した。ＶＩＦ−１を、０．０４μｇ／ｍｌ、
０．２μｇ／ｍｌまたは１．０μｇ／ｍｌの濃度で、細菌培養物に添加した。Ｔ
ＳＳＴ−１ならびに精製したＴＳＳＴ−１に対して指向されたウサギポリクロー
ナル抗体を、Ｔｏｘｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｓａｒａｓｏｔａ
，Ｆｌａ）から入手した。マイクロタイタープレートを、０．０５ｍｌのＴＳＳ
Ｔ−１に対して指向されたウサギ抗体（ＰＢＳ中４．０μｇ／ｍｌ）でコートし
た。プレートを、室温で一晩インキュベートし、そして水で３回洗浄した。次い
で、ウェルにブロッキング緩衝液（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）を満たし、
そして３０分間室温でインキュベートした後、水で３回リンスした。試験サンプ
ル（０．０５ｍｌ）を添加し、そして室温で２時間インキュベートした。上清を
定量するために、既知量の精製ＴＳＳＴ−１を添加することによって標準曲線を
調製した。ウサギ抗ＴＳＳＴ−１抗体を、市販のキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用
してビオチンと結合体化し、そしてプレートに、ブロッキング緩衝液で希釈して
１．０μｇ／ｍｌで添加した。２時間室温でインキュベートした後、このプレー
トを水で３回リンスし、次いでアルカリホスファターゼと結合体化したストレプ
トアビジン０．０５ｍｌを２００μｇ／ｍｌで添加し、２時間インキュベートし
、そして３回リンスした。次いで、０．０７５ｍｌのｐ−ニトロフェニルホスフ
ェート（０．２μｇ／ｍｌ）を添加し、そして室温で１時間インキュベートした
後、プレートリーダーにおいて４０５ｎｍでＯＤを読み取った。この結果を、表
２に示した。

【０１１４】 表２：ＶＩＦ−１によるＴＳＳＴ−１産生の阻害

【０１１５】

【表２】 （実施例２） （ＶＩＦアミノ酸およびペプチドのインビトロ抗Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａ
ｌ活性） 多くの市販のアミノ酸およびペプチド（Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ，ＩＬ）の抗Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ活性を、インビトロ
ＲＮＡＩＩＩ誘導アッセイによって、そして上記のようなα−毒素病原因子産生
についてのアッセイにおいて評価した。さらに、多くの改変アミノ酸を、当業者
に慣用的に使用される技術を使用して合成した。例示的な化合物を表３に示す。

【０１１６】 表３：抗細菌活性について試験した合成のアミノ酸およびペプチド

【０１１７】

【表３】 ＲＮＡ ＩＩＩ誘導アッセイを、ＲＮＡＩＩＩ：β−ラクタマーゼ融合構築物
（ｍａｉｉｉ：ｂｌａＺ）を使用して行い、そして上清におけるβ−ラクタマー
ゼ活性を比色測定した。表４、５および６に示される結果は、ＶＩＦ−１（配列
番号２）および多数の合成アミノ酸が、有意な抗ブドウ球菌活性を有することを
示した。対照的に、表３に示される多数の合成アミノ酸は、α溶血素アッセイに
おいて活性ではなく、５０μｇ／ｍｌより大きいＩＣ_５０を有した。 表４． 改変アミノ酸によるＲＮＡ ＩＩＩ活性化およびα溶血素酸性の阻害

【０１１８】

【表４】 ＶＩＦ−１（配列番号２）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、および抗菌
活性を示すことが以前に示された多数の選択されたアミノ酸（参照番号４、８６
、１６、１１３および１２４）、および抗菌活性を欠くことが示された合成アミ
ノ酸（参照番号９８）の、インビトロビルレンス因子産生における相対活性を、
４つの異なる干渉群を提示するＳ．ａｕｒｅｕｓ（Ｊｉら、１９９７）、Ｓ．ｗ
ａｒｎｅｒｉｉ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓおよびＳ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃ
ｕｓの株を使用して、αトキシン生成を試験することによって評価した。

【０１１９】 表５に示される結果は、ＶＩＦ−１、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（Ｆ
ＴＢ）、Ｆｍｏｃ−２−アミノ安息香酸（参照番号４）；Ｆｍｏｃ−１−アミン
−シクロヘキサンカルボン酸（参照番号８６）；Ｆｍｏｃ−Ｄ−テトラヒドロイ
ソキノリン−１−カルボン酸（参照番号１６）；Ｆｍｏｃ−５−フェニル−ピロ
リジン−２−カルボン酸（参照番号１１３）；およびＦｍｏｃ−２−Ｌ−スチリ
ルアラニン（参照番号１２４）は、４つ全ての群のＳ．ａｕｒｅｕｓおよびＳ．
ｗａｒｎｅｒｉｉによるαトキシン産生を阻害し、そしてこのＦｍｏｃ−Ｌ−ピ
リジルアラニン（参照番号９８）は、阻害性ではなかったことを示す。 表５．αトキシン生成に対する抗菌アミノ酸およびＶＩＦ−１の効果

【０１２０】

【表５】 ^１ 参照番号４は、Ｆｍｏｃ−２−アミノ安息香酸である。^２ 参照番号８６は、Ｆｍｏｃ−１−アミン−シクロヘキサンカルボン酸である
。^３ 参照番号１６は、Ｆｍｏｃ−Ｄ−テトラヒドロイソキノリン−１−カルボン
酸である。^４ 参照番号１１３は、Ｆｍｏｃ−５−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸
である。^５ 参照番号１２４は、Ｆｍｏｃ−２−Ｌ−スチリルアラニンである。^６ 参照番号９８は、Ｆｍｏｃ−Ｌ−ピリジルアラニンである。

【０１２１】 ＶＩＦ−１（配列番号２）、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（ＦＴＢ）お
よび多数の選択された合成アミノ酸の相対活性を、ブドウ球菌増殖のアッセイに
よってさらに評価した。ブドウ球菌のアリコートを、平底マイクロタイタープレ
ートのウェルに、様々な希釈度の試験される化合物と共にプレートした。このプ
レートを、一晩インキュベートし、そして次の日に混濁度により示される増殖に
ついて試験した。ブドウ球菌の増殖を阻害し、非混濁ウェルを生じる化合物の最
低希釈度は、最小阻害濃度（ＭＩＣ）とみなした。バンコマイシンを、増殖阻害
の陽性コントロールとして使用した（表６を参照のこと）。表６に示される結果
は、これらの化合物が増殖インヒビターではないことを示す。 表６．ＶＩＦアナログによるブドウ球菌増殖の阻害

【０１２２】

【表６】 ^７ ＭＩＣは、最小阻害濃度を意味する。

【０１２３】 （実施例３） （ＶＩＦアミノ酸およびペプチドのインビボ抗ブドウ球菌活性） インビトロアッセイに基づくＶＩＦアミノ酸およびＶＩＦペプチド（ＶＩＦ−
１；配列番号２）の抗ブドウ球菌活性を、インビボマウスモデルにおいてブドウ
球菌感染についてさらに評価した。

【０１２４】 このアッセイは、Ｔｈａｋｋｅｒら、１９９８により記載される方法に基づい
て、一定量のＳ．ａｕｒｅｕｓ培地（典型的には、早期対数増殖段階培地由来の
約５×１０^９の細胞を含む）を、マウスに腹腔内（ＩＰ）注射により注入するこ
とによって、行った。

【０１２５】 １つの研究において、Ｓ．ａｕｒｅｕｓをＩＰ注射の前に、ＶＩＦ−１または
ＦＴＢと混合した。表７に示される結果は、３または１５ｍｇ／ｋｇのＶＩＦ−
１、および１、２または５ｍｇ／ｋｇのＦＴＢが、注射後２４時間において生存
するマウスの数を有意に増加するのに効果的であったことを示す。 表７．ＩＰ注射の前（２４時間）に薬物と混合したブドウ球菌を有するマウスモ
デルにおける活性

【０１２６】

【表７】 （Ｂ．抗菌治療との組み合わせにおけるＶＩＦアミノ酸およびペプチドのイン
ビボ抗ブドウ球菌活性） 別のアプローチにおいて、Ｓ．ａｕｒｅｕｓを、ＶＩＦ−１またはＦＴＢの腹
腔内注射の２０分前に、腹腔内注射した。表６に示される結果は、２０または１
５ｍｇ／ｋｇのＶＩＦ−１、および１０ｍｇ／ｋｇのＦＴＢは、ビヒクルコント
ロールと比較して、注射後２４時間で生存したマウスの数を有意に増加するのに
効果的であったことを示す。

【０１２７】 一般的に使用される抗ブドウ球菌抗体、メチシリンおよびバンコマイシンを、
このモデルで試験した。１ｍｇ／ｋｇ用量のメチシリンおよび０．５ｍｇ／ｋｇ
用量のバンコマイシンは、２４時間の時点において、マウスの１７％の生存を生
じた。しかし、１ｍｇ／ｋｇ用量のメチシリンおよび０．５ｍｇ／ｋｇのバンコ
マイシンをある用量のＶＩＦ（６ｍｇ／ｋｇ）またはＦＴＢ（２ｍｇ／ｋｇ）（
これは、単独で与えられた場合、２４時間の時点におけるマウスの１３％および
２５％の生存を生じる）と共に投与した場合、増加した生存が観察され、このこ
とは、相乗効果は、ＶＩＦまたはＦＴＢとメチシリンおよびバンコマイシンとの
組み合わせに基づくことを示唆している（表８） 表８．薬物注射（ＩＰ）の２０分前にブドウ球菌を注射したマウスモデルの累積
結果

【０１２８】

【表８】 表８．配列表

【０１２９】

【表９】 全ての刊行物、特許および特許出願は、各個の刊行物、特許または特許出願、
詳細かつ個別に、その全体が参考として援用されている場合と同じ程度まで、そ
の全体が本明細書中で参考として援用される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１Ａは、ネイティブな配列のペプチド、Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−
Ｔｈｒ−Ａｓｎ−ＰｈｅすなわちＹＳＰＷＴＮＦ（「ＰＥＰ」）を示す； 図１Ｂは、合成ＶＩＦペプチドの配列、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−
（修飾Ｔｒｐ）−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｈｅを示す。ここで修飾Ｔｒｐは、トリプ
トファンのフェニルチオカルバメート誘導体（「ＶＩＦ−１」、配列番号２）で
ある。

【図２】 図２は、Ｎ末端でＦｍｏｃ基を、およびこの環状窒素に連結したｔ−ＢＯＣ基
を有する合成Ｔｒｐアナログを示す（「Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ」す
なわち「ＦＴＢ」）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １２１ Ｃ０７Ｄ 209/20 // Ｃ０７Ｄ 209/20 Ｃ０７Ｋ 5/087 Ｃ０７Ｋ 5/087 7/06 7/06 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ワン， ユーチァン アメリカ合衆国 カリフォルニア 94040， マウンテン ビュー， モンロー ドラ イブ 278 ナンバー17 (72)発明者 エムレン， ジェイ． ウッドラフ アメリカ合衆国 カリフォルニア 94065， レッドウッド シティ， レイクショア ドライブ 846 (72)発明者 ファン フラッセレア， ピーター アメリカ合衆国 カリフォルニア 94087， サニーベイル， ヒッコリーナット コ ート 1065 (72)発明者 スパック， エドワード ジー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94043， マウンテン ビュー， ライト アベニ ュー 1725 ナンバー27 Ｆターム(参考） 4C084 AA01 AA02 BA01 BA08 BA09 BA10 BA16 BA17 CA04 CA59 DA44 DC50 NA05 NA14 ZB351 ZC752 4C086 AA01 AA02 BC14 CC04 NA05 NA14 ZB35 ZC75 4C204 BB01 CB02 DB19 DB20 EB02 FB27 GB01 4C206 AA01 AA02 HA23 MA01 MA02 MA04 NA14 ZB35 ZC75 4H045 AA10 AA30 BA12 BA14 EA29 FA10 FA33 GA25 HA03

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 被験体においてブドウ球菌感染を予防または処置するための
   、ブドウ球菌ビルレンスを抑制する単離された合成アミノ酸の使用であって、こ
   こで、該アミノ酸は、以下の構造： （Ｆｍｏｃ）ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯＯＨ を有し、ここで、Ｆｍｏｃは、９−フルオレニルメトキシカルボニル基であり、
   そしてＲは、非極性側鎖である、 使用。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の使用であって、前記単離された合成アミノ
   酸は、からなる群から選択される、使用。
3. 【請求項３】 請求項１に記載の使用であって、前記単離された合成アミノ
   酸は、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（ＦＴＢ）であって、ここで、改変Ｔ
   ｒｐは、環窒素に結合したＢＯＣ基を有し、そしてＦｍｏｃは、Ｎ−末端α−ア
   ミノ基に結合されている、使用。
4. 【請求項４】 被験体においてブドウ球菌感染を予防または処置するための
   、ブドウ球菌ビルレンスを抑制する単離された合成ペプチドの使用であって、こ
   こで、該ペプチドは、Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ）ＴｈｒＡｓ
   ｎＰｈｅ（ここで、該改変Ｔｒｐは、トリプトファンのＳ−フェニルチオカルバ
   メート誘導体である）（配列番号２）；Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔ
   ｒｐ）ＴｈｒＡｓｎＰｈｅ（ここで、該改変Ｔｒｐは、環窒素に結合されたＢＯ
   Ｃ基を有する）（配列番号４）；ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ）ＴｈｒＡｓ
   ｎＰｈｅ（ここで、該改変Ｔｒｐは、トリプトファンのＳ−フェニルチオカルバ
   メート誘導体である）（配列番号３）；Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔ
   ｒｐ）（ここで、該改変Ｔｒｐは、トリプトファンのフェニルチオカルバメート
   誘導体である）（配列番号５）；Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ）
   （ここで、該改変Ｔｒｐは、環窒素に結合されたＢＯＣ基を有する）（配列番号
   ６）；ＦＭＯＣ−改変Ｔｒｐ（「Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ」）（ここ
   で、該改変Ｔｒｐは、環窒素に結合されたＢｏｃ基を有する）；Ｔｒｐ（Ｂｏｃ
   ）−ＯＨ（ここで、該改変Ｔｒｐは、環窒素に結合されたＢｏｃ基を有する）；
   Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ；Ｆｍｏｃ−改変Ｔｒｐ（ここで、該改変Ｔｒｐは、トリプト
   ファンのフェニルチオカルバメート誘導体である）、ならびに改変Ｔｒｐ（ここ
   で、該改変Ｔｒｐは、トリプトファンのフェニルチオカルバメート誘導体である
   ）からなる群から選択される、使用。
5. 【請求項５】 請求項４に記載の使用であって、前記単離した合成ペプチド
   は、Ｆｍｏｃ−ＴｒｙＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ）ＴｈｒＡｓｎＰｈｅ（配列番
   号２）として表される配列を有し、ここで、改変Ｔｒｐは、トリプトファンのＳ
   −フェニルチオカルバメート誘導体であり、そしてＦｍｏｃは、Ｎ末端αアミノ
   基に結合される、使用。
6. 【請求項６】 被験体においてブドウ球菌感染を予防または処置するための
   医薬の製造における、ブドウ球菌ビルレンスを抑制する単離された合成アミノ酸
   の使用であって、ここで、該アミノ酸は、以下の構造： （Ｆｍｏｃ）ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯＯＨ を有し、ここで、Ｆｍｏｃは、９−フルオレニルメトキシカルボニル基であり、
   そしてＲは、非極性側鎖である、 使用。
7. 【請求項７】 請求項６に記載の使用であって、前記単離された合成アミノ
   酸は、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ
   ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−２−アミノ安息香酸、Ｆｍｏｃ−１−アミン−シクロヘキ
   サンカルボン酸、（Ｒ，Ｓ）−Ｆｍｏｃ−３−アミノ−１−シクロヘキサンカル
   ボン酸、Ｆｍｏｃ−Ｄ−テトラヒドロイソキノリン−１−カルボン酸、Ｆｍｏｃ
   −４−ブロモ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍｏｃ−４−クロロ−Ｌ−フェニルア
   ラニン、Ｆｍｏｃ−５−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸、（Ｒ）−Ｆｍ
   ｏｃ−４−アミノ−５−フェニル−ペンタン酸、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ
   ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−１，２，３，４−テトラヒドロノルハルマン−３−カ
   ルボン酸、Ｆｍｏｃ−２−Ｌ−スチリルアラニン、Ｆｍｏｃ−２−Ｌ−Ｌｙｓ（
   Ｚ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−４−メチル−Ｌ−フェニルアラニンおよびＦｍｏｃ−Ｌ
   −Ｌｅｕ−ＯＨからなる群から選択される、 使用。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の使用であって、前記単離された合成アミノ
   酸は、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（ＦＴＢ）であって、ここで、改変Ｔ
   ｒｐは、環窒素に結合したＢＯＣ基を有し、そしてＦｍｏｃは、Ｎ−末端α−ア
   ミノ基に結合されている、使用。
9. 【請求項９】 被験体においてブドウ球菌感染を予防または処置するための
   医薬の製造における、ブドウ球菌ビルレンスを抑制する単離された合成ペプチド
   の使用であって、ここで、該ペプチドは、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｏ
   Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−２−アミノ安息香酸、
   Ｆｍｏｃ−１−アミン−シクロヘキサンカルボン酸、（Ｒ，Ｓ）−Ｆｍｏｃ−３
   −アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸、Ｆｍｏｃ−Ｄ−テトラヒドロイソキ
   ノリン−１−カルボン酸、Ｆｍｏｃ−４−ブロモ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍ
   ｏｃ−４−クロロ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍｏｃ−５−フェニル−ピロリジ
   ン−２−カルボン酸、（Ｒ）−Ｆｍｏｃ−４−アミノ−５−フェニル−ペンタン
   酸、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−１，２，３，４−
   テトラヒドロノルハルマン−３−カルボン酸、Ｆｍｏｃ−２−Ｌ−スチリルアラ
   ニン、Ｆｍｏｃ−２−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−４−メチル−Ｌ−フ
   ェニルアラニンおよびＦｍｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＯＨからなる群から選択される、
   使用。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載の使用であって、前記単離された合成ペプ
    チドは、Ｆｍｏｃ−ＴｙｒＳｅｒＰｒｏ（改変Ｔｒｐ）ＴｈｒＡｓｎＰｈｅ（配
    列番号２）として表される配列を有し、ここで、該改変Ｔｒｐは、トリプトファ
    ンのＳ−フェニルチオカルバメート誘導体であり、そしてＦｍｏｃは、Ｎ−末端
    α−アミノ基に結合されている、使用。
11. 【請求項１１】 被験体においてブドウ球菌感染を予防または処置するため
    の、ブドウ球菌ビルレンスを抑制する単離された合成アミノ酸の使用であって、
    ここで、該アミノ酸は、以下の構造： （Ｆｍｏｃ）ＮＨ−ＣＨＲ−ＣＯＯＨ を有し、ここで、Ｆｍｏｃは、９−フルオレニルメトキシカルボニル基であり、
    そしてＲは、非極性側鎖であり、そして該被験体は、抗生物質で処置されている
    、使用。
12. 【請求項１２】 請求項１１に記載の使用であって、前記単離された合成ア
    ミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｂ
    ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−２−アミノ安息香酸、Ｆｍｏｃ−１−アミン−シクロ
    ヘキサンカルボン酸、（Ｒ，Ｓ）−Ｆｍｏｃ−３−アミノ−１−シクロヘキサン
    カルボン酸、Ｆｍｏｃ−Ｄ−テトラヒドロイソキノリン−１−カルボン酸、Ｆｍ
    ｏｃ−４−ブロモ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍｏｃ−４−クロロ−Ｌ−フェニ
    ルアラニン、Ｆｍｏｃ−５−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸、（Ｒ）−
    Ｆｍｏｃ−４−アミノ−５−フェニル−ペンタン酸、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｈｉｓ（Ｔ
    ｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−１，２，３，４−テトラヒドロノルハルマン−３
    −カルボン酸、Ｆｍｏｃ−２−Ｌ−スチリルアラニン、Ｆｍｏｃ−２−Ｌ−Ｌｙ
    ｓ（Ｚ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−４−メチル−Ｌ−フェニルアラニンおよびＦｍｏｃ
    −Ｌ−Ｌｅｕ−ＯＨからなる群から選択される、使用。
13. 【請求項１３】 被験体においてブドウ球菌感染を予防または処置するため
    の、ブドウ球菌ビルレンスを抑制する単離された合成ペプチドの使用であって、
    ここで、該ペプチドは、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ
    −Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−２−アミノ安息香酸、Ｆｍｏｃ−１−ア
    ミン−シクロヘキサンカルボン酸、（Ｒ，Ｓ）−Ｆｍｏｃ−３−アミノ−１−シ
    クロヘキサンカルボン酸、Ｆｍｏｃ−Ｄ−テトラヒドロイソキノリン−１−カル
    ボン酸、Ｆｍｏｃ−４−ブロモ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍｏｃ−４−クロロ
    −Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍｏｃ−５−フェニル−ピロリジン−２−カルボン
    酸、（Ｒ）−Ｆｍｏｃ−４−アミノ−５−フェニル−ペンタン酸、Ｆｍｏｃ−Ｌ
    −Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ−１，２，３，４−テトラヒドロノル
    ハルマン−３−カルボン酸、Ｆｍｏｃ−２−Ｌ−スチリルアラニン、Ｆｍｏｃ−
    ２−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−４−メチル−Ｌ−フェニルアラニンお
    よびＦｍｏｃ−Ｌ−Ｌｅｕ−ＯＨからなる群から選択され、そして該被験体は、
    抗生物質で処置されている、使用。
14. 【請求項１４】 請求項１１、１２または１３に記載の使用であって、前記
    抗生物質が、メチシリンまたはバンコマイシンである、使用。
15. 【請求項１５】 請求項１１，１２または１３に記載の使用であって、前記
    ブドウ球菌が、抗生物質耐性である、使用。