JP2003508496A

JP2003508496A - 哺乳動物ｃｃｒ６レセプターおよび関連試薬の新規使用

Info

Publication number: JP2003508496A
Application number: JP2001521346A
Authority: JP
Inventors: ドナルドクック，; セルジオエイ．リラ，; サトワントケイ．ナルラ，
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme Corp
Priority date: 1999-09-08
Filing date: 2000-09-07
Publication date: 2003-03-04
Also published as: MXPA02002478A; EP1214090A2; US20020138860A1; WO2001017558A3; CA2384076A1; AU6951300A; WO2001017558A2

Abstract

(57)【要約】個体の異常な生理状態を処置するための、哺乳動物のＣＣＲ６タンパク質およびＭＩＰ−３αタンパク質の使用に関する組成物および方法。本方法には、治療有効量のＣＣＲ６単独またはＭＩＰ−３α単独の投与、あるいは、他の治療薬剤と組み合わせて行う投与、または、ＣＣＲ６アンタゴニストまたはＭＩＰ−３αアンタゴニストと組み合わせて行う投与が含まれる。遺伝子操作した動物および分子機構モデルとしてのその動物の使用についてもまた提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の分野）本発明は、例えば哺乳動物免疫系細胞など、哺乳動物細胞の発生、分化、輸送
および生理機能を調節する際に作用するタンパク質の使用方法に関するものであ
る。特に、本発明は、細胞粘膜免疫を制御するタンパク質および類似物の使用方
法を提供する。

【０００２】本発明はまた、遺伝子操作した非ヒト動物、およびＣＣＲ６ケモカインレセプ
ターおよびＣＣＲ６の作用によって影響を及ぼされる分子の研究における分子モ
デルとしてのそれらの動物の使用に関連するものである。（発明の背景）脊椎動物の免疫系は、多くの器官およびいくつかの異なる細胞型から構成され
る。例えば、Ｐａｕｌ（編、１９９７）基礎免疫学（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）（第４版）ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ
．を参照すること。ホメオスタシスおよび炎症反応中におけるリンパ球の移動お
よび活性は、走化性タンパク質の大きなファミリーである、ケモカインによって
大きく仲介される。例えば、Ｓｃｈａｌｌら、１９９４、ＣｕｒｒｅｎｔＯｐ
ｉｎｉｏｎｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ６：８６５−８７３；Ｂａｃｏｎら
、１９９６、Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．ＡｌｌｅｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌ．１０
９：９７−１０９；Ｓｐｒｉｎｇｅｒら、１９９４，Ｃｅｌｌ７６：３０１−
３１４；Ｒｏｌｌｉｎｓら、１９９７、Ｂｌｏｏｄ９０：９０９−９２８を参
照すること。ケモカインは、活性化白血球そのものによって分泌され、また、炎
症性刺激時に内皮細胞および上皮細胞を含む間質細胞により分泌される。Ｏｐｐ
ｅｎｈｅｉｍ，１９９３，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３５１：１８３
−１８６；Ｓｃｈａｌｌら、１９９４、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
６：８６５−８７３；Ｒｏｌｌｉｎｓ，１９９７，Ｂｌｏｏｄ９０：９０９−
９２８；Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉら、１９９４、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５５：
９７−１７９を参照すること。ケモカインに対する反応は、７回膜貫通型Ｇ−タ
ンパク質結合レセプターを介して起こる（Ｒｏｌｌｉｎｓ，１９９７，Ｂｌｏｏ
ｄ９０：９０９−９２８；Ｐｒｅｍａｃｋら、１９９６、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２
：１１７４−１１７８；Ｍｕｒｐｈｙ，Ｐ．Ｍ．１９９４，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１２：５９３−６３３）。

【０００３】免疫系細胞の様々な生理的状態、発生学的状態または増殖状態を誘導、維持ま
たは調節する、ケモカインおよび他のシグナル分子の作用の役割および機構につ
いては、未だよく理解されていない。明らかに、免疫系および、様々なストレス
に対する免疫系の反応は、例えば、傷害、感染症、癌関連反応および治療後の細
胞または他の物質のクリアランス、およびアレルギー反応および移植拒絶反応な
ど、医薬に対する関連性を持っている。例えば、Ｔｈｏｒｎら、ハリソンの基礎
内科学（Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＩｎｔｅｒｎａ
ｌＭｅｄｉｃｉｎｅ）ＭｃＧｒａｗ／Ｈｉｌｌ，ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｚｉｅｇ
ｌｅｒら、（編、１９９７）成長因子および傷治癒：基礎科学および可能な臨床
アプリケーション（ＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒｓａｎｄＷｏｕｎｄＨｅ
ａｌｉｎｇ：ＢａｓｉｃＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｏｔｅｎｔｉａｌＣｌ
ｉｎｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ；
Ｃｌａｒｋ（編、１９９６）傷治癒の分子および細胞生物学（ＴｈｅＭｏｌｅ
ｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆＷｏｕｎｄ
Ｒｅｐａｉｒ）Ｐｌｅｎｕｍ；およびＰｅａｃｏｃｋ（１９８４）傷の治癒（
ＷｏｕｎｄＲｅｐａｉｒ）Ｓａｕｎｄｅｒｓを参照すること。

【０００４】医学は、環境因子への不十分または不適当な生理反応に対する治療の遂行にお
いて、免疫系の適切な処置または抑制に大きく依存している。しかしながら、ど
のように免疫系が調節されるのか、または分化するのかということが十分理解さ
れていないため、生物学的チャレンジ（つまり生体傷害に対する反応）に対する
免疫機構を望ましいように調節する制御能が十分発揮できていない。従って、関
連ある細胞の発生または生理機能における、異常または不適切な調節により起こ
る症状に対する治療は依然として困難なままである。特異的調節経路およびその
生理的影響が発見されその性質が明らかになれば、生体系、免疫細胞、および他
の細胞型に影響を及ぼす広範囲の変性または他症状に対する治療の発展に大きく
貢献することとなるだろう。様々な炎症性症状の進行における免疫細胞の役割お
よびそれらの全体の機能は、インビボのモデルがないために理解が困難な状態で
ある。本発明は、これらのいくつかおよび多くの他の問題に対する解決策を提供
する。

【０００５】（発明の要旨）本発明は、部分的に、免疫系の様々なモデルにおけるケモカインレセプターＣ
ＣＲ６およびそのリガンドであるＭＩＰ−３αの生理学的役割発見に基づくもの
である。特に、腸の炎症、アレルギー疾患または肺の炎症を含む他の呼吸疾患に
関連する経路におけるＣＣＲ６の役割を明らかにしている。本発明はまた、遺伝
子工学的に設計された機能的ＣＣＲ６遺伝子欠損動物を用いたＣＣＲ６レセプタ
ーの役割および機能を研究するための、モデル系の同定に関連するものである。

【０００６】本発明は、動物における白血球の輸送または活性化を調節する方法を提供し、
この方法は、動物体内で、治療上の量の哺乳動物ＣＣＲ６またはＭＩＰ−３αタ
ンパク質のアゴニスト、または哺乳動物ＣＣＲ６またはＭＩＰ−３αタンパク質
のアンタゴニストと白血球を接触する工程を包含する。好適な実施形態には、哺
乳動物ＣＣＲ６またはＭＩＰ−３αタンパク質が霊長類のタンパク質であるとい
うことが含まれる。さらに、実施形態には、アンタゴニストが哺乳動物ＣＣＲ６
またはＭＩＰ−３αに結合する抗体である、またはアンタゴニストが低分子イン
ヒビターであるということが含まれる。ある実施形態において、白血球にはＢ細
胞またはＴ細胞または樹状細胞が含まれるということ、または、動物が炎症状態
または白血球増殖状態の徴候または症状を示すということが含まれる。好適な実
施形態には、粘膜組織（例えば、肺または皮膚組織、神経組織、リンパ組織、骨
髄組織、膵臓、消化管組織、甲状腺組織、筋肉組織またはコラーゲン組織）にお
いて徴候または症状が観察される、ということが含まれる。

【０００７】本発明の方法には、調節するということが、ＣＣＲ６レセプター機能を阻害す
るということ、および／または、投与するものがアンタゴニストであるというこ
とが含まれる。好適に、アンタゴニストは、哺乳動物ＣＣＲ６またはＭＩＰ−３
αに結合する抗体、ＣＣＲ６またはＭＩＰ−３α機能をブロックする低分子イン
ヒビター、またはＣＣＲ６レセプターとの結合に対して哺乳動物ＭＩＰ−３αと
競合するが続いてシグナルを送らないような哺乳動物ＣＣＲ６またはＭＩＰ−３
αの突然変異タンパク質である。ある実施形態には、動物が、炎症性状態、また
は自己免疫、喘息、組織特異的自己免疫、変性自己免疫、慢性関節リウマチ、ア
テローム動脈硬化、多発性硬化症、遅延型過敏症、皮膚移植、乾癬、移植、脊椎
損傷、発作、神経変性または虚血の、徴候あるいは症状を起こしているというこ
とが含まれる。投与は、ＩＬ−１０などの抗炎症サイトカイン、サイトカインア
ゴニストまたはサイトカインアンタゴニスト、鎮痛剤、下痢止め薬、またはステ
ロイドを含む抗炎症剤と組み合わせて行われ得る。

【０００８】調節することが、ＭＩＰ−３α―ＣＣＲ６反応の機能を促進し、および／また
は投与する物質がアゴニストである場合、様々な他の方法が提供される。特定の
実施形態において、動物が、セアリック（ｃｉｌｉａｃ）病（スプルー）のよう
な炎症性疾患の徴候または症状を示す場合に、本方法が適用される。投与は、多
くの場合、ＩＬ−１０などの抗炎症サイトカイン、サイトカインアゴニストまた
はアンタゴニスト、鎮痛剤、下痢止め薬、またはステロイドを含む抗炎症剤と組
み合わせて行われることになるであろう。

【０００９】本発明はまた、ゲノム中から機能的ＣＣＲ−６遺伝子を欠損している遺伝子操
作された非ヒト動物、および分子機構モデルとしてその動物を使用する方法も提
供する。

【００１０】（好適な実施形態の詳細な説明）（Ｉ．概要）ＣＣＲ６は、ヒト樹状細胞、記憶Ｔ細胞およびＢ細胞で発現するケモカインレ
セプターである（Ｚａｂａｌｌｏｓら、１９９６、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａ
ｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏ
ｎｓ２２７：８４６−８５３；Ｇｒｅａｖｅｓら、１９９７、Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ１８６：８３７−８４
４；Ｐｏｗｅｒら、１９９７、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌＭｅｄｉｃｉｎｅ１８６：８２５−８３５；Ｌｉａｏら、１９９９、Ｊｏ
ｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１６２：１８６−９４）。ＣＣＲ６
に対して唯一公知のリガンドは、ケモカインＭＩＰ−３αであり、ラーク（ｌａ
ｒｃ）またはエクソダスとしても公知である（Ｒｏｓｓｉら、１９９７、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１５８：１０３３−１０３６）。

【００１１】ＣＣＲレセプターは、最初、オーファンレセプターとしてヒトゲノムＤＮＡか
らクローニングされた（Ｚａｂａｌｌｏｓら、１９９６、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ
ｌａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａ
ｔｉｏｎｓ２２７：８４６−８５３）。ノーザンブロット解析により、ＣＣＲ
６が様々なヒト組織のうち、主に脾臓、リンパ節、虫垂および胎児肝臓で発現さ
れていることが明らかになっている（Ｂａｂａら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２７２：１４８９３−１４８９８）。様々な白血球分画の中で、リン
パ球（ＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺Ｔ細胞およびＢ細胞）においてＣＣＲ６ｍＲＮＡが
検出されているが、ナチュラルキラー細胞、単球、または顆粒球では検出されて
いない（Ｂａｂａら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１４８９
３−１４８９８）。

【００１２】インビボでのＣＣＲ６の生物学的役割を研究するために、マウスＣＣＲ６ｃ
ＤＮＡをマウス脾臓からクローニングした。１９ヶ所の異なるマウス組織でのＣ
ＣＲ６発現を調べるためにこれを使用した。ＣＣＲ６ＲＮＡのノーザンブロッ
ト解析を行った（分子クローニング、実験室マニュアル、第２版（Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ，ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ｓｅｃｏ
ｎｄｅｄｉｔｉｏｎ），１９８９，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｉｎｔｃｈ，Ｍａｎ
ｉａｔｉｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，１０Ｓｋ
ｙｌｉｎｅＤｒｉｖｅ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ１１８０３−２５００）
。この解析により、パイアー斑、脾臓およびリンパ節でＣＣＲ６ｍＲＮＡは高
レベル発現しており、また胸腺、精巣および脊髄での発現は低レベルであること
が明らかとなった。この発現特性は、概ね、脾臓、胸腺、小腸および末梢血白血
球（ＰＢＬ）で発現が見られるヒトＣＣＲ６の発現パターンと同様である（Ｂａ
ｂａら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１４８９３−１４８９
８）。ＭＩＰ−３αの発現について調べるために、マウスＭＩＰ−３αをクロー
ニングした。Ｒｏｓｓｉら、１９９７、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１５８：１
０３３−３６；Ｈｉｅｓｈｉｍａら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ２７
２：５８４６−５３を参照。ＭＩＰ−３α ｍＲＮＡ解析により、ＭＩＰ−３α
もまた、パイアー斑にて高発現しており、大腸および脊髄では発現レベルが低い
ということが明らかとなった。

【００１３】パイアー斑は、抗原を、小腸から取り込み、提示する主要部位である。小腸お
よび結腸のどちらも、微生物病原体に対する免疫反応と、食物抗原および共生細
菌に対する免疫寛容との間でバランスを維持しなければならない。腸に存在する
多くの抗原に対する反応は、パイアー斑、腸上皮、および上皮の下にある疎性結
合組織の領域である固有層にあるリンパ球を介して起こる。ネイティブＴ細胞が
組織にランダムに分布するのに対して、これらの各部位からの記憶Ｔ細胞は、血
液から腸へと戻る性質を持つ。Ｍａｃｋａｙら、１９９２、Ｅｕｒｏｐｅａｎ
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２２：８８７−８９５；Ｈａｍ
ａｎｎら、１９９４、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１５２：
３２８２−９３を参照。この粘膜特異的なリンパ球ホーミングは、部分的には、
パイアー斑の高内皮性細静脈（ＨＥＶ）および固有層の後毛細血管細静脈に提示
される粘膜アドレシン（ａｄｄｒｅｓｓｉｎ）細胞接着分子（ＭａｄＣＡＭ）と
相互作用する細胞表面α４β７インテグリンを介して起こる。ケモカインおよび
そのレセプターはまた、リンパ球ホーミングにおける役割も持ち（Ｓｐｒｉｎｇ
ｅｒ，Ｔ．，１９９４，Ｃｅｌｌ７６：３０１−３１４）、それによって、腸
粘膜に存在するリンパ球数およびリンパ球タイプに対するホメオスタシスに貢献
する。

【００１４】パイアー斑でのＣＣＲ６およびＭＩＰ−３αの発現を詳細に研究するために、
インサイチュハイブリダイゼーション実験を行った。低倍率での観察で、ＭＩＰ
−３α ＲＮＡは、小腸管腔およびパイアー斑の境界付近で観察され、パイアー
斑内部ではＭＩＰ−３αのメッセージはほとんど観察されなかった。より高倍率
での観察において、ＭＩＰ−３α発現はほとんど独占的にパイアー斑にある上皮
細胞に限定されていた。このケモカイン発現は、パイアー斑の下の上皮ドームま
たは小腸の絨毛を覆う上皮ではほとんど検出されなかった。

【００１５】ＭＩＰ−３αと同様に、ＣＣＲ６のメッセージはまた、腸管腔およびパイアー
斑の連結部近辺でも観察されたが、ＭＩＰ−３αのメッセージよりも拡散してい
た。高倍率観察により、殆どのＣＣＲ６メッセージが上皮細胞内ではなく、むし
ろ上皮下ドームの隣接細胞にあるが明らかとなった。従って、ＭＩＰ−３αおよ
びＣＣＲ６は、パイアー斑内の別々であるが隣接した細胞集団で発現される。

【００１６】マウスにおけるＣＣＲ６の生物学的役割を直接調べるために、特にＣＣＲ６−
ＭＩＰ−３α相互作用がリンパ球輸送の制御に関連するかどうかを調べるために
、ＣＣＲ６標的ベクターを作製した。１２９ｓｖ胚由来の胚性幹細胞（ＥＳ細胞
）において遺伝子ターゲティングを用いた（Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ
ａｎｄＥｍｂｒｙｏｎｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌ：Ａｐｒａｃｔｉｃａｌ
Ａｐｐｒｏａｃｈ．、ＩＬＲＰｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ，１９８７）
。ＣＣＲ６遺伝子の２個の領域からのＤＮＡがネオマイシン耐性遺伝子に隣接す
る標的化ベクターを構築した（図１Ａ）。このＤＮＡを、エレクトロポレーショ
ンによりＥＳ細胞へトランスフェクションし、その結果、Ｒａｍｉｒｅｚ−Ｓｏ
ｌｉｓら、１９９３、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ２２５：
８５５で記述されている方法と同様の方法でＣＣＲ６遺伝子を欠損させた。

【００１７】ＥＳ細胞由来キメラから得られたＣＣＲ６ヘテロ接合体（＋／−）間の交配は
、＋／＋ＣＣＲ６遺伝子型、＋／―ＣＣＲ６遺伝子型および―／−ＣＣＲ６遺伝
子型のメンデル比率を有する子孫をもたらした。−／−マウスは健康であるよう
であり、よく繁殖した。−／−マウスにおけるＣＣＲ６ｍＲＮＡ発現を調べる
ために、＋／＋および−／−の両方のマウスの脾臓からＲＮＡを調製した。ＣＣ
Ｒ６のコード領域に対応するプローブを用いたこのＲＮＡのノーザンブロット解
析により、ＣＣＲ６ｍＲＮＡが−／−マウスの脾臓では存在しないことが明ら
かになった（図１Ｂ）。−／−マウスが機能的にＣＣＲ６に関してヌルであるこ
とを確認するために、放射性標識したＭＩＰ−３αを用いた結合アッセイを行っ
た。ＭＩＰ−３αは、＋／＋マウスから調製された膜に結合したが、−／−マウ
ス由来の膜には結合しなかった。これにより、−／−マウスは機能的にヌルであ
り、マウス脾臓において他のどのレセプターも高い親和性でＭＩＰ−３αと結合
しないということが示された。

【００１８】 −／−マウスのどの主要器官の発生においても異常は全く見られず、全ての組
織が光学顕微鏡では正常に見えた。脾臓、血液、リンパ節、胸腺および骨髄にお
ける白血球のフローサイトメトリー解析において、−／−マウスと＋／＋マウス
と間の相違は明らかにならなかった。パイアー斑において、ＣＤ８⁺Ｔ細胞数の
ごくわずかな増加が見られた。さらに、Ｂ細胞数のごくわずかな減少が見られた
。野生型およびＣＣＲ６のパイアー斑のＢ細胞およびＴ細胞の数におけるこれら
の相違は非常に小さく、おそらく重要ではない。しかしながら、重要なことは、
最近の実験により、表面マーカーＣＤ１１ｃおよびＣＤ１１ｂを発現する樹状細
胞がＣＣＲ６−／−マウスの上皮下ドーム（ＳＥＤ）に存在しないということが
明らかになった。従って、ＣＣＲ６は、ＳＥＤにおけるこれらの細胞の正常な位
置決定に必要である。この発見により、腸およびおそらく粘膜組織一般における
免疫応答の特徴が、ＣＣＲ６により媒介されるパイアー斑内樹状細胞の位置決定
に影響を受けていることが示唆される。

【００１９】ＣＣＲ６欠損の結果、腸におけるリンパ球ホメオスタシスの制御が不能になる
かどうかを調べるために、腸上皮および、結腸および小腸の固有層における白血
球のフローサイトメトリー解析を行った（Ｒｏｇｌｅｒら、１９９８、Ｃｌｉｎ
ｉｃａｌａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１１２
：２０５−２１５）。＋／＋マウスと−／−マウスとの間で、結腸から調製され
たリンパ球に相違は見られなかった。しかしながら、−／−マウスにおいて、小
腸でより多くの数の上皮内リンパ球（ＩＥＬ）および固有層リンパ球（ＬＰＬ）
が観察された。このＴ細胞数増加は、Ｔ細胞マーカーＣＤ３、ＣＤ８αおよび活
性化マーカーＣＤ６９⁺に対する細胞染色によるものである。腸におけるＢ細胞
の割合は、Ｂ細胞の絶対的細胞数としては変化がないにも関わらず、−／−マウ
スで変化している。

【００２０】二つの主要なＴリンパ球系列がある。一つは、αβＴ細胞レセプター（ＴＣＲ
αβ）を発現し、もう一方は、ＴＣＲγδを発現する。ＴＣＲγδ細胞は、殆ど
の末梢リンパ組織に存在するリンパ球の中では少ない集団であるが、マウス腸粘
膜におけるリンパ球ではおよそ半分を含む。Ｇｏｏｄｍａｎら、１９８８、Ｎａ
ｔｕｒｅ３３３：８５５−８５８。−／−マウスの腸で増加した細胞がＴＣＲ
αβまたはＴＣＲγδを発現するかどうかを調べるために、ＩＥＬおよびＬＰＬ
のフローサイトメトリー解析を行った。総生存細胞を入れた場合、−／−マウス
においてＴＣＲαβ細胞の著しい増加が見られたが、ＴＣＲγδ細胞では変化が
見られなかった。リンパ球の前方散乱特性および側面散乱特性を持つ細胞を入れ
た場合、＋／＋腸上皮および固有層における殆どの細胞がＴＣＲγδを発現した
。しかしながら、−／−マウスにおいて、殆どの細胞がＴＣＲαβを発現した。
従って、−／−マウスにおけるＩＥＬおよびＬＰＬの増加は、ＴＣＲαβＴ細胞
によるもので、粘膜組織に限定されるＴＣＲγδ細胞によるものではない。

【００２１】小腸におけるヘマトキシリン染色−エオシン染色切片の光学顕微鏡観察で炎症
性細胞の増殖巣は全く見られず、絨毛構造も正常であるようだった。−／−マウ
スにおいてＩＥＬおよびＬＰＬ増加の分布パターンを調べるために、凍結切片の
免疫組織化学染色を行った。免疫染色を行うために、８−１０ｍの新鮮な凍結切
片をまず氷冷アセトンで１０分間固定し風乾した。その切片を次に、ビオチンー
アビジンブロッキングキット（Ｖｅｃｔｏｒ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）、
３％Ｈ₂Ｏ₂および１０％正常マウス血清（Ｖｅｃｔｏｒ）でそれぞれ１５分
ずつ、連続的に処理しブロッキングした。０．５ｇ／ｍｌの抗ＣＤ８ｂ抗体を室
温で１時間インキュベーションし、ビオチン化マウス抗ラットＩｇＧ１／Ｉｇ
Ｇ２（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で３０分間インキュベーションを行った。次に、
ＶｅｃｔａｓｔａｉｎＥｌｉｔｅＡＢＣキット（Ｖｅｃｔｏｒ）を製造者か
らの説明書に従って用いた。組織切片を最終的にジアミノベンジジン（Ｖｅｃｔ
ｏｒ）で染色し、ヘマトキシリンで対比染色した。全ての希釈は、１ＸＰＢＳお
よび０．１％ＳＤＳを含む緩衝液で行った。

【００２２】これらの実験により、ＣＤ８⁺Ｔ細胞の増加が確認され、またこれらの細胞が
別々の増殖巣で密集していないことも明らかになった。むしろ、それら細胞は、
拡散したパターンで小腸全体に分布していた。この小腸における低倍率での病理
観察は、セリアック病（スプルー）に罹患しているヒトに関して示されているも
のと同様であった。これらの個体は正常に構築された小腸絨毛を持つが、小麦由
来たんぱく質グルテンによる感作の結果、高いＩＥＬ数を有すると考えられる。
Ｆｅｒｇｕｓｏｎら、１９９６、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７７８：
２０２−１６を参照。これらの個体の割合において、感作抗原および活性化粘膜
Ｔ細胞との結合の結果として、食事によりグルテンを摂取した後、数週間続き得
る重篤な腸疾患（ｅｎｅｒｏｐａｔｈｙ）および吸収不良が引き起こされる。−
／−マウスで見られる活性化ＩＥＬ増加が食事中の感作抗原の存在と関連してい
るのかどうかはっきりしない。

【００２３】腸粘膜における不制御ホメオスタシスの発見により、肺粘膜における免疫応答
の研究が促進された。オボアルブミンに対して感作されているマウスにエアロゾ
ル化したタンパク質でチャレンジすると、肺においてアレルギー性炎症反応が起
きる。Ｋｕｎｇら、１９９４、ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＡｒｃｈｉｖｅｓ
ｏｆＡｌｌｅｒｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１０５：８３−９０
を参照。これらのマウスの気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）における細胞浸潤は、殆ど
好酸球から成り、この反応は機能的Ｔリンパ球および樹状細胞の両方に依存する
。Ｇａｒｌｉｓｉら、１９９５、ＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ７
５：７５−８３。＋／＋および−／−マウスの両方に対してこの型の実験を行っ
た。非感作＋／＋マウスと比較して、感作＋／＋マウスでは、吸入処置後４８時
間でのＢＡＬにおける細胞総数および総好酸球数が大きく増加していた。しかし
ながら、同様の処置を行った−／−マウスでは、＋／＋コントロールマウスでの
結果と比較して総細胞数および総好酸球数が著しく減少していた（ｐ＜０．０５
）。−／−マウスにおけるこの肺浸潤減少は、＋／＋および−／−マウスでの循
環抗体のオボアルブミン特異的レベルでは差異が見られないので、免疫応答を開
始する能力がないためではなかった。従って、ＣＣＲ６欠損により、このアレル
ギー反応の炎症特異的成分に対して影響が及ぼされる。

【００２４】このＣＣＲ６相互作用の仮説的役割が正しいならば、この相互作用の操作には
重要な臨床的意味があり得る。ＣＣＲ６−ＭＩＰ３α相互作用を増強することが
望ましいとされる状況において、ＣＣＲ６のアゴニストまたはＭＩＰ３αのアゴ
ニストは有益である。反対に、ＣＣＲ６−ＭＩＰ３α相互作用が抑制されるべき
状況においては、ＣＣＲ６アゴニストまたはＭＩＰ３αアゴニストが有用である
。

【００２５】現在、アレルギー、一般的免疫、ウイルス免疫および自己免疫疾患の研究にお
いて、本発明ＣＣＲ６ＫＯマウスを使用し得る。使用し得るモデルの例には、
Ｓｗａｎｓｏｎら、１９８５、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ＆Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ７６（５）：７２４−２９；Ｓｔｅｖｅｎｓら、１９９９、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１６２（１２）：７５０１−９；Ｋｕｎｇら、１９９４、Ｉｎｔ
ｅｒｎａｔｉｏｎａｌＡｒｃｈｉｖｅｓｏｆＡｌｌｅｒｇｙ＆Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．１０５：８３−９０；Ｃａｍｐｂｅｌｌら，１９９８、Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１６１（１２）：７０４７−５３で記述されているモデルが含まれる。

【００２６】下記は、例示目的で、霊長類（例えばヒト）または、齧歯類（例えばマウスま
たはラット）のＣＣＲ６およびＭＩＰ３αに関するが、他種の関連実施形態に対
して同様に適用可能である。従って、リンパ球輸送に媒介されるかまたはそれと
関連することが知られている状態は、これらの試薬を用いて制御し得る。

【００２７】（ＩＩ．核酸）核酸の一般的記述、その操作および用途（例えば、相補的核酸およびアンチセ
ンス核酸を含む）については、次の参考文献で提供される。ＧｅｎＢａｎｋＡ
ｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．Ｕ４５９８４，Ｕ６００００（ＣＣＲ６）ＧｅｎＢａ
ｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．Ｕ９０４４７（ＭＩＰ３α）；国際特許出願
第ＷＯ９８／０１５５７；Ｚａｂａｌｌｏｓら、１９９６、Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２２７：８４６−８５３（ＣＣＲ６）；Ｈ
ｉｅｓｈｉｍａら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（９）：５８４
６−５８５３（ＭＩＰ３α）；Ｒｏｓｓｉら、１９９７、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ１５８：１０３３−１０３６（ＭＩＰ３α）；ＭｃＣａｕｇｈｅｉｎら、
’’ＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＡｎｉｍａｌｓ’’、Ｒｏｉｔｔ（編）、ＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓ
ｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，１５０２−１５０４頁；Ｔｒａｖｉｓ（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１３９２−１３９４；Ｋｕｈｎら、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５４：７０７−７１０；Ｃａｐｅｃｃｈｉ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４４：１２８８；Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ（編、１９８７）ＴｅｒａｔｏｃｒｃｉｎｏｍａｓａｎｄＥｍｂｒｙｏｎｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬＰｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ；
Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９２）Ｊ．ＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ１
０：１８０−１９９；ＣｏｕｒｎｏｙｅｒａｎｄＣｒａｓｋｅｙ（１９９３
）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：２９７−３２９；Ｗｅｔｍｕｒａ
ｎｄＤａｖｉｄｓｏｎ（１９６８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１：３４９−３
７０；Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ（１９９０）ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＡｍｅｒｉｃａｎ２６２：４０−４６；ＪａｒｏｓｚｅｗｓｋｉａｎｄＣｏｈｅｎ（１９
９１）ＡｄｖａｎｃｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖｉｅｗｓ６：
２３５−２５０；Ａｋｈｔａｒら、（１９９２）１３３−１４５頁、Ｅｒｉｃｋ
ｓｏｎａｎｄＩｚａｎｔ（編）ＧｅｎｅＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ：ＢｉｏｌｏｇｙｏｆＡｎｔｉｓｅｎｓｅＲＮＡａｎｄＤＮＡ、ＲａｖｅｎＰ
ｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｚｈａｏら、（１９９４）Ｂｌｏｏｄ８４：３
６６０−３６６６；Ｍｉｓｑｕｉｔｔａら、（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９６：１４５１−１４５６；および、Ｔｒｅｃｏ
ＷＯ９６／２９４１１（このそれぞれを参考として援用する）。本明細書中で
提供する教示を考慮して、当業者に対してさらなる局面が明らかとなるであろう
。

【００２８】（ＩＩＩ．精製ＣＣＲ６タンパク質および精製ＭＩＰ−３αタンパク質）製薬学または生化学的背景におけるタンパク質およびポリペプチドの一般的説
明ついては、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎら、（編、１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ＆
Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：ＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｅｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（第８版）ＰｅｒｇａｍｏｎＰｒｅｓｓ；Ａ
ｖｉｓら、（編、１９９３）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：ＰａｒｅｎｔｅｒａｌＭｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎ
ｅｗＹｏｒｋ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、（編、１９９０）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅ
ｗＹｏｒｋ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら、（編、１９９０）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：ＤｉｓｐｅｒｓｅＳｙｓｔｅｍｓ、Ｄ
ｅｋｋｅｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｆｒｅｉｆｅｌｄｅｒ（１９８２）ＰｈｙｓｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（第２版）Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ；Ｃａｎ
ｔｏｒａｎｄＳｃｈｉｍｍｅｌ（１９８０）ＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，１−３部，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，ＳａｎＦ
ｒａｎｃｉｓｃｏで見出し得る。ＣＣＲ６特定の記述が、例えば、ＷＯ９８／０
１５５７（ヒト）で見られる。ＭＩＰ−３α特定の記述が、例えば、ＷＯ９８／
０１５５７（マウス）で見られる。タンパク質を生成するために用いる組み換え
法は周知である。合成法によるか、あるいは天然形態または組み換え形態の生化
学的切断による、断片の調製が利用可能である。

【００２９】（ＩＶ．ＣＣＲ６およびＭＩＰ−３αタンパク質、模倣物の生成）ＣＣＲ６またはＭＩＰ−３αタンパク質、またはその断片をコードするＤＮＡ
を、化学合成、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、または広範囲の細胞系
列または組織試料から調製したゲノムライブラリーのスクリーニングにより入手
し得る。

【００３０】このＤＮＡを広範囲の発現系で、例えば、Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０８／２５０，８
４６；Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ／０８／１７７，７４７；Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０８／０７７
，２０３；ＰＣＴ／ＵＳ９５／００００１；Ｋａｕｆｍａｎら、（１９８５）Ｍｏｌｅｃ．ａｎｄＣｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１７５０−１７５９；Ｐｏｕｗｅ
ｌｓら、（１９８５および補遺）ＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，Ｒｏｄｒｉｇｕ
ｅｚら、（編、１９８８）Ｖｅｃｔｏｒｓ：ＡＳｕｒｖｅｙｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓａｎｄＴｈｅｉｒＵｓｅｓ，Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚａｎ
ｄＤｅｎｈａｒｄｔ（編）Ｖｅｃｔｏｒｓ：ＡＳｕｒｖｅｙｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇＶｅｃｔｏｒｓａｎｄＴｈｅｉｒＵｓｅｓ、Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｃｈａｐｔｅｒ１０，２０５
−２３６頁；Ｏｋａｙａｍａら、（１９８５）Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．５
：１１３６−１１４２；ｐＭＣ１ｎｅｏＰｏｌｙ−Ａ（Ｔｈｏｍａｓら、（１
９８７）Ｃｅｌｌ５１：５０３−５１２参照）；Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙら、（１９
９２）、ＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＶｅｃｔｏｒｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、ＦｒｅｅｍａｎａｎｄＣｏ．，Ｃ
ＲＣＰｒｅｓｓ，ＢｏｃａＲａｔｏｎ，Ｆｌａ；Ｌｏｗ（１９８９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ９８８：４２７−４５４；Ｔｓｅら、（
１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３０：１００３−１００８；およびＢｒｕｎｎｅ
ｒら、（１９９１）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１４：１２７５−１２８３（こ
のそれぞれを本明細書中で参考として援用する）で記述されるように発現させ得
る。

【００３１】様々なＣＣＲ６タンパク質およびＭＩＰ−３αタンパク質の特徴が分かった上
は、ペプチドを合成するための従来のプロセスにより、融合ポリペプチド、その
断片または誘導体を調製し得る。ここには、ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ（
１９８４）ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｐ
ｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ；Ｂｏｄａｎ
ｓｚｋｙおよびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）ＴｈｅＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，
ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）ＴｈｅＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒ
ｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ；および、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら、（１９６３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６（このそれぞれを本明細
書中で参考として援用する）で記述されているようなプロセスが含まれる。本明
細書中で提供する教示を考慮して、当業者に対してさらなる局面が明らかとなる
だろう。

【００３２】（Ｖ．物理的改変体）ＣＣＲ６タンパク質またはＭＩＰ−３αタンパク質のアミノ酸配列と、実質的
なアミノ酸配列ホモロジーを持つタンパク質またはペプチドもまた考えられる。
改変体には、種改変体または対立遺伝子改変体が含まれる。ホモロジーまたは配
列同一性は、例えば、Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０８／２５０，８４６；Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ
．０８／１７７，７４７；Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０８／０７７，２０３；ＰＣＴ
／ＵＳ９５／００００１；Ｎｅｅｄｌｅｈａｍら、（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３；Ｓａｎｋｏｆｆら、（１９８３）Ｃｈａｐｔｅ
ｒＯｎｅ、ＴｉｍｅＷａｒｐｓ，ＳｔｒｉｎｇＥｄｉｔｓ，ａｎｄＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ＴｈｅＴｈｅｏｒｙａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＳｅｑｕｅｎｃｅＣｏｍｐａｒｉｓｏｎ、Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｌｓ
ｅｙ，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＭＡ；ＮＣＢＩからのソフトウェアパッケージ，ＮＩＨ
；およびｔｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅ
ｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩで定義されて
いる。

【００３３】ＣＣＲ６タンパク質またはＭＩＰ−３αタンパク質をコードする単離されたＤ
ＮＡを、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）；Ａｕｓｕｂｅｌら（１９
８７および増補）；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら、（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４
３：１３３０−１３３６；Ｏ’Ｄｏｗｄら、（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５９８５−１５９９２；および、Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９
８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２（そのそれぞれを本
明細書中で参考として援用する）で記述されているように、容易に改変し得る。
本明細書中で提供する教示を考慮して、当業者に対してさらなる方法が明らかと
なるだろう。

【００３４】（ＶＩ．機能的改変体）天然ＭＩＰ−３αの改変体またはＭＩＰ−３αに対する抗体の改変体によるか
、あるいは天然ＣＣＲ６の改変体またはＣＣＲ６に対する抗体の改変体によるレ
セプターへのリガンド結合阻害により、ＣＣＲ６とそのリガンドであるＭＩＰ−
３αとの間の生理的相互作用の阻害が起こり得る。そのような改変体を作製する
方法は、例えば、Ｇｏｄｏｗｓｋｉら、（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４１：
８１２−８１６；ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１
９８９）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（第２版）１−３巻，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３２：３４１−３４７；Ａｔｈｅｒｔｏｎら、（１９８９）ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ；Ｃｕｎｎｉｎｇ
ｈａｍら、（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４３：１３３９−１３３６；Ｏ’Ｄｏ
ｗｄら、（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５９８５−１５９９
２；およびＬｅｃｈｌｅｉｔｅｒら、（１９９０）ＥＭＢＯＪ．９：４３８１
−４３９０（そのそれぞれを本明細書中で参考として援用する）で記述されてい
る。本明細書中で提供する教示を考慮して、当業者に対してさらなる方法が明ら
かとなるだろう。

【００３５】（ＶＩＩ．特異的結合成分）（Ａ．抗体）本発明は、ＣＣＲ６、好適には哺乳動物、例えば霊長類、ヒト、ネコ、イヌ、
ラットまたはマウスのＣＣＲ６に特異的に結合する抗体または結合成分の使用を
提供する。抗体は、個別の、多型改変体、対立遺伝子改変体、系統改変体、また
は種改変体、およびそれらの断片を含む様々なＣＣＲ６タンパク質（その天然に
存在する（全長）形、または組み換え体の両方）に対して惹起され得る。さらに
、抗体は、それらのネイティブ（または活性）形態または不活性形態、例えば、
変性させた形態の両方のタンパク質に対して惹起され得る。抗イディオタイプ的
抗体もまた使用され得る。

【００３６】ＣＣＲ６タンパク質との結合に対して特異的反応性または選択性がある抗体を
産生するために、多くの免疫原を選択し得る。組み換えタンパク質は、モノクロ
ーナルまたはポリクローナル抗体産生に好適な免疫原である。例えば、霊長類、
げっ歯類など、適切な供給源から天然に存在するタンパク質も、精製または未精
製の形で使用し得る。本明細書中で記述したタンパク質配列を用いて作製した合
成ペプチドもまた、本タンパク質に対する抗体を作製するための免疫原として使
用し得る。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら、（編）（１９９５および定期的増補）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉｅｎｃｅ（
タンパク質科学最新プロトコール）ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，ＮＹ；およびＡｕｓｕｂｅｌら、（編）（１９８７および定期的増
補）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（分子生物学最新プロトコール），Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，ＮＹ．で記述されているようにして、真核細胞または原核細胞中で
組み換えタンパク質を発現させ精製し得る。必要に応じて、天然に折りたたまれ
た、または変性させた物質を抗体作製に使用し得る。例えば、引き続いての、タ
ンパク質を測定するためのイムノアッセイまたは免疫精製法での使用に対してモ
ノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれかを作製し得る。

【００３７】ポリクローナル抗体を産生する方法は当業者にとって周知である。典型的に、
免疫原、好適には精製タンパク質を、アジュバントと混合し、その混合物を動物
に免疫する。その動物から試採血し、目的のタンパク質またはペプチドに対する
反応性の力価を測定することにより、その動物の免疫原調製物に対する免疫反応
をモニターする。例えば、通常、繰り返し免疫し、免疫原に対する適切に高い抗
体力価が得られた場合、血液を動物より回収し、抗血清を調製する。必要であれ
ば、このタンパク質に対する抗体反応性を強化するためにその抗血清をさらに分
画を行い得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（抗体、実験室マニュアル）；または
、Ｃｏｌｉｇａｎ（編）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（免疫学最新プロトコール）参照すること。例えば、ＤＮＡベクタ
ー免疫などの他の方法を用いても免疫を行い得る。例えば、Ｗａｎｇら、（１９
９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ２２８：２７８−２８４を参照すること。

【００３８】当業者が精通している様々な技術によってモノクローナル抗体を獲得し得る。
典型的に、通常、骨髄腫（ミエローマ）細胞と融合させて望ましい抗原で免疫さ
れた動物由来の脾臓細胞を不死化させる。ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ
（１９７６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９を参照すること
。その他の不死化の方法には、ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒＶｉｒｕｓ、癌遺伝
子、またはレトロウイルスとのトランスフォーメーション、または当該分野で公
知のその他の方法が含まれる。例えば、Ｄｏｙｌｅら、（編、１９９４および定
期的増補）ＣｅｌｌａｎｄＴｉｓｓｕｅＣｕｌｔｕｒｅ：ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（細胞と組織培養：実験室手技），ＪｏｈｎＷ
ｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹを参照すること。抗原に
対する望ましい特異性およびアフィニティーを持つ抗体を産生させるために、単
一の不死化細胞から生じたコロニーをスクリーニングする。そのような細胞によ
り産生されるモノクローナル抗体の回収率を、脊椎動物宿主の腹腔への注入を含
む様々な技術により向上させ得る。あるいは、例えば、Ｈｕｓｅら、（１９８９
）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１２７５−１２８１により述べられている一般的プロ
トコールに従ってヒトＢ細胞由来のＤＮＡライブラリーをスクリーニングするこ
とによりモノクローナル抗体またはその結合断片をコードするＤＮＡ配列を単離
し得る。

【００３９】ＣＣＲ６タンパク質の予め決定されている断片に対する抗体または、結合断片
および一本鎖バージョンを含む結合成分を、上記のように担体タンパク質との断
片の結合を伴う動物への免疫により作製し得る。望ましい抗体を分泌する細胞か
らモノクローナル抗体を調製する。これらの抗体を、正常または欠損型ＣＣＲ６
タンパク質との結合に関してスクリーニングし得る。これらのモノクローナル抗
体は、通常、少なくとも約１ｍＭのＫ_D、より通常的には、少なくとも約３００
μＭ、典型的には少なくとも約１００μＭ、より典型的には少なくとも約３０μ
Ｍ、好適にはより好適には少なくとも約１０μＭ、少なくとも約３μＭ、あるい
はそれより小さいＫ_Dで結合するであろう。

【００４０】ある例において、マウス、げっ歯類、霊長類、ヒトなどのような様々な哺乳動
物宿主からモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を調製することが望ましい。そのよう
なモノクローナル抗体調製技術の説明については、例えば、Ｓｔｉｔｅｓら、（
編）ＢａｓｉｃａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（基礎およ
び臨床免疫学）（第４版）ＬａｎｇｅＭｅｄｉｃａｌＰｕｂｌｉｃａｔｉｏ
ｎｓ．ＬｏｓＡｌｔｏｓ，ＣＡ，およびその文献で引用している参考文献；Ｈ
ａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（抗体：実験室マニュアル）ＣＳＨＰｒｅｓｓ；Ｇ
ｏｄｉｎｇ（１９８６）ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ（モノクローナル抗体：原理と実際
）（第２版）ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ；およ
び、特に、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５
６：４９５−４９７（モノクローナル抗体作製のある方法について考察している
）、で見出され得る。簡潔にまとめると、この方法は、動物への免疫原の注射に
関連する。次に、動物を屠殺し、脾臓から細胞を採取する。採取した細胞を骨髄
腫細胞と融合させる。その結果、ｉｎｖｉｔｒｏでの再生が可能なハイブリッ
ド細胞または「ハイブリドーマ」が得られる。次に、それぞれ免疫原に対する単
一の抗体種を分泌する個別のクローンを単離するためにハイブリドーマ集団をス
クリーニングする。この方法において、得られた個別の抗体種は、免疫原物質上
で認識される特異的部位に対する反応で生じる免疫動物由来の不死化およびクロ
ーン化単一Ｂ細胞の産物である。

【００４１】他の適切な技術は、ファージまたは同様のベクターにおける抗体ライブラリー
の分泌に関連する。例えば、Ｈｕｓｅら、（１９８９）「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｏｆａＬａｒｇｅＣｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌＬｉｂｒａｒｙｏｆ
ｔｈｅＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＲｅｐｅｒｔｏｉｒｅｉｎＰｈ
ａｒｇｅＬａｍｂｄａ（ラムダファージにおける免疫グロブリンレパートリー
の大きなコンビナトリアルライブラリー作製），」Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１
２７５−１２８１；およびＷａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４
４−５４６を参照。本発明におけるポリペプチドおよび抗体を、キメラ化または
ヒト化抗体を含む改変を行って、または改変なしで使用し得る。多くの場合、検
出可能なシグナルをもたらす物質と共有結合的または非共有結合的のいずれかで
連結させてポリペプチドおよび抗体を標識する。広く多様な標識および結合体化
技術が公知であり、科学的文献および特許文献両方において広く報告されている
。適切な標識には、放射性核種、酵素、基質、副因子、インヒビター、蛍光部分
、化学発光部分、磁性粒子などが含まれる。そのような標識の使用について教唆
する特許には、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号、
同第３，９３９，３５０号、同第３，９９６，３４５号、同第４，２７７，４３
７号、同第４，２７５，１４９号および同第４，３６６，２４１号が含まれる。
組み換え免疫グロブリンもまた産生し得る。Ｃａｂｉｌｌｙ，米国特許第４，８
１６，５６７号；およびＱｕｅｅｎら、（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３；またはトランスジェ
ニックマウスでの産生については、Ｍｅｎｄｅｚら、（１９９７）ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ１５：１４６−１５６を参照すること。

【００４２】本発明の結合断片を含む抗体結合化合物には、重要な診断的または治療的価値
があり得る。それら化合物は、非−中和結合化合物として有用であり得、結合化
合物が抗原と結合した場合、例えばその表面でそれを発現する細胞を殺傷するた
めに、毒物または放射性核種と結合させ得る。さらに、これらの結合化合物を、
リンカーを用いて直接または間接的のいずれかで薬物または他の治療剤と結合体
化させ、薬物の標的化に影響を与え得る。

【００４３】（Ｂ．他の分子）抗体は、特異的結合成分の単に一つの形である。多くの場合において同様に使
用されるだろう他の結合成分には、例えば、結合パートナー−結合パートナー様
式、抗体−抗原相互作用、または天然の生理的に適切なタンパク質−タンパク質
相互作用、例えば、特異的にＣＣＲ６タンパク質に結合するタンパク質など共有
または非共有結合でＣＣＲ６に対する特異性を持って結合する分子またはＣＣＲ
６のリガンドが含まれる。その分子は重合体または化学試薬であり得る。機能的
アナログは構造的に改変されたタンパク質または、例えば適切な結合決定因子と
相互作用する分子形を有する構造的に関連しない分子であり得る。

【００４４】ＣＣＲ６に対する結合アフィニティーを持つ化合物、またはリガンドとの天然
の相互作用を阻害する化合物を同定することを目的として、抗体またはＣＣＲ６
、またはそれらの断片を用いた薬物スクリーニングを行い得る。その化合物が固
有の阻害活性をもつかどうか、つまり、アンタゴニストであるかどうかを決定す
るためにその後の生物学的アッセイを利用し得る。同様に、固有の刺激活性を持
つ化合物は、ＣＣＲ６を介して細胞に信号を伝えることができ、従って、リガン
ドの活性を刺激するということからアゴニストである。

【００４５】上記のように、ＣＣＲ６に対する唯一の天然リガンドとして知られているのが
ＭＩＰ−３αである［Ｒｏｓｓｉら、１９９７、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１
５８：１０３３−１０３６］。レセプター結合を維持するがシグナル伝達を欠失
するように突然変異タンパク質アンタゴニストを開発し得る。

【００４６】リガンドの構造研究はまた、特に本レセプターに対するアゴニストまたはアン
タゴニスト的性質を示すアナログといった、新しい改変体の設計を導く。これを
以前に記述した、望ましい活性範囲を示す変異体を単離するためのスクリーニン
グ法と組み合わせ得る。

【００４７】レセプター特異的結合分子が提供される場合、スクリーニング法で同定された
低分子もまた含まれる。特に、例えば、頻繁に、レセプターに対して特異的に結
合し、天然リガンドによる結合を阻害することによりレセプターに対するリガン
ド結合を妨害する低分子をスクリーニングする方法は当該分野で公知である。例
えば、ＭｅｅｔｉｎｇｏｎＨｉｇｈＴｈｒｏｕｇｈｐｕｔＳｃｒｅｅｎ
ｉｎｇ，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＢｕｓｓｉｎｅｓｓＣｏｍｍｕｎｉｃ
ａｔｉｏｎｓ，Ｓｏｕｔｈｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ０１７７２−１７４９を参照
すること。そのような分子は天然リガンドと競合し、選択的にＣＣＲ６と結合し
得る。そのような特異的結合化合物を標識するかまたは毒性試薬と結合体化させ
得る。

【００４８】（ＶＩＩＩ．使用）哺乳動物ＣＣＲ６およびＭＩＰ−３α試薬は、様々な治療での使用を有する、
例えば、リンパ球ホメオスタシスの制御不全と関連している状態または疾患の処
置がいとされる。これらの状態、疾患には、例えば、アレルギーおよび喘息のよ
うな状態を含む腸または肺の粘膜炎症、炎症性腸疾患、およびセリアック病が含
まれる。

【００４９】好適には、投与方法は、許容できる程度の副作用の範囲で、患者に送達される
アゴニストまたはアンタゴニストの量を最大にする。従って、送達されるアゴニ
ストまたはアンタゴニスト量は部分的に特定のアゴニストまたはアンタゴニスト
、および治療する症状の重症度に依存する。適切な用量の選択に関する指針につ
いては、例えば、Ｂａｃｈら、ｃｈａｐｔｅｒ２２，ｉｎＦｅｒｒｏｎｅら、
（編）（１９８５）、ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（モノクローナル抗体ハンドブック）ＮｏｇｅｓＰｕｂｌｉ
ｃａｔｉｏｎｓ，ＰａｒｋＲｉｄｇｅ，ＮＪ；およびＲｕｓｓｅｌｌ，ｐｇｓ
．３０３−３５７，およびＳｍｉｔｈら、ｐｇｓ．３６５−３８９，ｉｎＨａ
ｂｅｒら、（編）（１９７７）ＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎＨｕｍａｎＤｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄＴｈｅｒａｐｙ（ヒト診断および治療における抗体）
，ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹなど、抗体の治療での使用
に関する文献で見出される。

【００５０】適切な用量の決定は、例えば、当該分野において治療に影響を与えるというこ
とが知られている、または治療に影響を与えると予想されるパラメーターまたは
要因を使用して臨床医により行われる。一般的に、用量は、最適投与量よりも幾
分少ない量で始め、その後少しずつ、任意の副作用を考慮に入れながら、望まし
いまたは最適効果に到達するまで増加させていく。好適に、使用するＣＣＲ６抗
体またはその結合組成物は、処置を施される動物と同種のものに由来し、それに
よって、投与薬剤に対する体液性反応を最小限に抑える。

【００５１】ＣＣＲ６またはＭＩＰ−３αに特異的に結合する抗体またはその断片の一週間
の総用量範囲は、一般的に、体重１ｋｇあたり約１ｎｇから、より一般的には、
約１０ｎｇから、一般的には、約１００ｎｇから、より一般的には、約１μｇか
ら、より一般的には、約１０μｇから、より一般的には、約１００μｇから、そ
してより好適には、１ｍｇである。量が多いほどより効果的であるが、低用量で
あるほど副作用が少なくなるであろう。一般的に、その用量範囲は、体重１ｋｇ
あたり１００ｍｇ未満、好適には５０ｍｇ未満、より好適には２５ｍｇ未満であ
る。

【００５２】例えば抗体、結合断片など、アンタゴニストの一週間の総用量の範囲は、体重
１ｋｇあたり約１０μｇから、好適には最低約５０μｇ、より好適には、最低約
１００μｇである。一般的に、その用量範囲は、体重１ｋｇあたり、約１０００
μｇ未満、好適には、約５００μｇ未満、より好適には、約１００μｇ未満であ
る。投薬は、望ましい処置効果を示すスケジュールで行い、より短いまたはより
長い期間に渡って断続的に行い得る。一般的に、その用量範囲は、体重１ｋｇあ
たり、少なくとも、約１０μｇから約５０ｍｇ、好適には、約１００μｇから約
１０ｍｇである。

【００５３】例えば、ムテインなどの、リガンドの他のアンタゴニストもまた考慮される。
ムテインの１時間の用量範囲は、１時間あたり最低約１０μｇから、一般的には
少なくとも約５０μｇ、典型的には、少なくとも１００ｍｇ、好適には、少なく
とも５００ｍｇである。一般的に、投薬は、１時間あたり約１００ｍｇ未満、典
型的には、約３０ｍｇ未満、好適には約１０ｍｇ未満、より好適には約６ｍｇ未
満である。一般的範囲は、１時間当たり少なくとも約１μｇから約１０００μｇ
、好適には約１０μｇから約５００μｇである。

【００５４】句「有効量」は、典型的には、少なくとも約１０％まで、通常は少なくとも約
２０％まで、好適には少なくとも約３０％まで、より好適には少なくとも５０％
程度の症状、または症状出現開始時間の緩和または改善に十分な量を意味する。
典型的哺乳動物宿主には、マウス、ラット、ネコ、イヌおよび、ヒトを含む霊長
類が含まれる。特定の患者に対する有効量は、処置を行う状態、患者の全身的健
康状態、投与の方法、経路および用量、副作用の重症度のような要因に依存して
変化し得る。組み合わせる場合、有効量は成分の組み合わせに比例し、その効果
は個々の成分のみに制限されない。

【００５５】本発明は、例えば、生理異常または発生異常の一般的説明または、下記の診断
キットの説明など、本明細書中で他の部分にて記述したような、さらなる診断お
よび治療適用における用途を見出す試薬を提供する。例えば、Ｂｅｒｋｏｗ（編
）ＴｈｅＭｅｒｃｋＭａｎｕａｌｏｆＤｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄＴｈｅｒａｐｙ（治療および診断メルクマニュアル），Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，
Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．；Ｔｈｏｒｎら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ（ハリソンの内科学基礎
）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹ；Ｇｉｌｍａｎら、（編、１９９０）ＧｏｏｄｍａｎａｎｄＧｉｌｍａｎ’ｓ：ＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｅｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（グッドマン、ギルマンの治
療の薬理学的基礎）第８版、ＰｅｒｇａｍｏｎＰｒｅｓｓ；（１９９０）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（レミ
ントンの製剤科学）（第１８版）ＭａｒｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅ
ａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ；Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５
２７−１５３３；ＭｅｒｃｋＩｎｄｅｘ（メルクインデックス），Ｍｅｒｃｋ
＆Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ；Ａｖｉｓら、（編、１９９３
）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：ＰａｒｅｎｔｅｒａｌＭｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ（製薬剤型：非経口投薬）（第２版）、Ｄｅｋ
ｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｂｅｒｍａｎら、（編、１９９０）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ（製薬剤型：錠剤）（
第２版）、Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｂｅｒｍａｎら、（編、１９９０）ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：ＤｉｓｐｅｒｓｅＳｙｓｔｅｍｓ（製薬剤型：分散系）（第２版）、Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｆｏｄ
ｏｒら、（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５１：７６７−７７３、Ｃｏｌｉｇａｎ
ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（免疫学
最新プロトコール）；Ｈｏｏｄら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（免疫学）Ｂｅｎｊ
ａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ；Ｐａｕｌ（編）ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（基礎免疫学）；ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（酵素学実験法）ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ（；Ｐａｒｃｅら、（１９８
９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：２４３−２４７；Ｏｗｉｃｋｉら、（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：４００７−４０１１；お
よびＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９７６）ＰｒｏｔｅｉｎＣｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ（タンパク質結晶学），ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅ
ｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ；を参照すること。それぞれの文献を参考として援用す
る。本明細書中で提供する教示を考慮して、当業者に対してさらなる使用法が明
らかとなる。

【００５６】（ＩＸ．キット）本発明はまた、例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（抗体：実験室マニュア
ル）ＣＳＨ；米国特許第３，６４５，０９０号；同第３，９４０，４７５号；
Ｒａｔｔｌｅら、（１９８４）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３０：１４５７−１４６１
；米国特許第４，６５９，６７８号；およびＶｉａｌｌｅｔら、（１９８９）ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＲｅｓ．１：８９−９７
；それぞれの文献を参考として援用する、で記述されているように、結合組成物
の存在を検出するための様々な診断キットおよび方法におけるＣＣＲ６およびＭ
ＩＰ−３αタンパク質、その断片、ペプチドおよびそれらの融合産物および関連
試薬の使用についても考慮する。

【００５７】以下の実施例と関連して本発明の広い範囲が余すところなく理解されるが、以
下の実施例は特定の実施形態に本発明を限定するものではない。

【００５８】（実施例Ｉ）（一般的方法）いくつかの標準的方法が、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら、（１９８２）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（分
子クローニング：実験室マニュアル）ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ
；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８８）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（分子クローニング、実験室マニュアル
）（第２版）（第１−３巻）、ＣＳＨＰｒｅｓｓ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら、
（１９８７および増補）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（分子生物学の最新プロトコール），Ｇｒｅｅｎｅ
／Ｗｉｌｅｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ；または、Ｉｎｎｉｓら、（編、１９９０）ＰＣＲＰｒｏｔｏｃｏｌｓ：ＡＧｕｉｄｅｔｏＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（ＰＣＲプロトコール：ガイドから方法と適用まで）
ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓＮ．Ｙ．などの文献で記述、言及されている
。タンパク質精製方法には、硫酸アンモニウム沈殿法、カラムクロマトグラフィ
ー、電気泳動、遠心、結晶化およびその他の方法が含まれる。例えば、Ａｕｓｂ
ｅｌら、（１９８７および定期的増補）；Ｃｏｌｉｇａｎら、（編、１９９５お
よび定期的増補）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉｅｎｃｅ（タンパク質科学の最新プロトコール）Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ
；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）「ＧｕｉｄｅｔｏＰｒｏｔｅｉｎＰｕ
ｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（タンパク質精製ガイド）」ｉｎＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（酵素学実験法），ｖｏｌ．１８２、およびこのシリ
ーズの他の巻、および例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ
．Ｊ．，またはＢｉｏ−Ｒａｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ．など、タンパク質精
製用製品における製造者の文献を参照すること。組み換え技術との組み合わせに
より、適正な部分、例えば、ＦＬＡＧ配列またはプロテアーゼにより除去可能な
配列を介して融合し得る同等物との融合が可能となる。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ
（１９９０）「ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＰ
ｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈＭｅｔａｌＣｈｅｌａｔｅＡｂｓｏｒｂｅｎｔ
（金属キレート吸収剤を用いた組み換えタンパク質の精製）」ｉｎＳｅｔｌｏ
ｗ（編）ＧｅｎｅｔｉｃＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＰｒｉｎｃｉｐｌｅａｎｄＭｅｔｈｏｄｓ（遺伝子工学、原理と方法）１２：８７−９８，Ｐｌｅｎｕ
ｍＰｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；およびＣｒｏｗｅら、（１９９２）ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：ＴｈｅＨｉｇｈＬｅｖｅｌＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ＆ＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ（ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：高発現
およびタンパク質精製システム）ＱＵＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒ
ｔｈ，ＣＡを参照すること。

【００５９】ＦＡＣＳ解析は、Ｍｅｌａｍｅｄら、（１９９０）ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙａｎｄＳｏｒｔｉｎｇ（フローサイトメトリーソーティング）Ｗｉｌ
ｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ；Ｓｈａｐｉｒｏ（１９８
８）ＰｒａｃｔｉｃａｌＦｌｏｗＣｙｔｐｍｅｔｒｙ（実践的フローサイト
メトリー）Ｌｉｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ；およびＲｏｂｉｎｓｏｎら、
（１９９３）ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙＭｅｔｈｏｄｓ（フローサイトメトリー法ハンドブック）Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｎ
ｅｗＹｏｒｋ，ＮＹにより記述されている。

【００６０】（実施例ＩＩ）（ＣＣＲ６タンパク質をコードするＤＮＡクローンの単離）マウス脾臓ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）より、以下の変性プライマーを用い
てマウスｃＤＮＡの一部をクローニングした：５−ｔａｙａｔｈｇｃｎａｔｈｇｔｎｃａ−３（配列番号１）および５−ｇｇｒｔｔｎａａｒｃａｒｃａｒｔｇ−３（配列番号２）ＰＣＲ産物をクローニングベクターｐＴＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）にサブクローニ
ングし、配列を決定した。この配列を基にして、以下のプライマー：ＤＰ８２（５−ＧＴＴＧＡＣＣＧＣＡＧＴＣＡＣＧＡＧＧＡＧＧＡ−３）（
配列番号３）およびＤＰ８３（５−ＣＡＧＧＡＴＣＧＴＧＡＴＧＴＣＴＧＴＧＡＧＣＣＡ−３）
（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）を設計し、マウス脾臓由来のＣｌｏｎｔｅｃｈＲＡＣＥ−ｒｅａｄｙｃＤＮ
Ａを用いたＰＣＲ反応に使用した。これらのＰＣＲ産物をｐＴＡベクターにクロ
ーニングし、元のＰＣＲ６クローン内部のプライマーとベクターに対応するプラ
イマーを用いてＤＮＡの配列決定を行なった。これらのＤＮＡの配列を、全長マ
ウスＣＣＲ６ｃＤＮＡ調製に用いた。

【００６１】ゲノムＤＮＡからＣＣＲ６遺伝子配列を、またはｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡから
ＣＣＲ６もしくは断片を増幅するために標準的ＰＣＲ技術を使用し得る。記述さ
れた配列から適切なプライマーを選択し、全長クローンを単離する。様々なプラ
イマー、様々な長さおよび可能であれば異なる配列を持つ組み合わせを調製し得
る。ストリンジェントまたはわずかにストリンジェントなハイブリダイゼーショ
ン条件を用いて他の相同遺伝子をスクリーニングするために、全長クローンをハ
イブリダイゼーションプローブとして使用し得る。

【００６２】別の方法において、ライブラリーのスクリーニングにオリゴヌクレオチドを使
用し得る。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術と組み合わせて、ライブラリー
から正しいクローンを選択するために、適切な方向の合成オリゴヌクレオチドを
プライマーとして使用し得る。

【００６３】（実施例ＩＩＩ）（ＣＣＲ６に特異的な抗体の調製）近交系Ｂａｌｂ／ｃマウスに、例えば、第０日に、Ｆｒｅｕｎｄ完全アジュバ
ントで乳化した１ｍｌの精製ＣＣＲ６を免疫し、Ｆｒｅｕｎｄ不完全アジュバン
トで乳化した精製ＣＣＲ６を第１５日および２２日に免疫する。そのマウスに、
０．５ｍｌの精製ＣＣＲ６を静脈注射して追加免疫する。

【００６４】ハイブリドーマを、例えば、非―分泌性骨髄腫細胞株ＳＰ２／０−Ａｇ８お
よび融合剤としてポリエチレングリコール１０００（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕ
ｉｓ，ＭＯ）を用いて作製する。ハイブリドーマ細胞を９６ウェルのＦａｌｃｏ
ｎ組織培養プレート（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＮＪ）に入れ、８
０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン、２ｍＭグルタミン、１０％ウマ血清（Ｇｉ
ｂｃｏ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）、１％ＡＤＣＭ（ＣＲＴＳ，Ｌｙ
ｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）、１０^-5Ｍアザセリン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ
，ＭＯ）および５Ｘ１０^-5Ｍヒポキサンチンを補ったＤＭＥＭＦ１２（Ｇｉ
ｂｃｏ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を添加する。例えば、アセトン固定
ＣＣＲ６トランスフェクションＣＯＳ−７細胞を用いた免疫細胞化学（ＩＣＣ）
および（または）コーティング剤としてＣＯＳ−７上清から精製したＣＣＲ６を
用いたＥＬＩＳＡにより、ハイブリドーマ上清を、ＣＣＲ６に対する抗体産生に
関してスクリーニングする。陽性細胞クローンのアリコートを６日間増殖させ、
凍結保存し、プリスタン（２，６，１０，１４−テトラメチルペントデカン、Ｓ
ｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ．ＭＯ）処置したＢｌｂ／ｃマウス（１５日前にプ
リスタンを腹腔内注射する）の腹水で増殖させる。１ｍｌのＰＢＳ中に約１０⁵
個のハイブリドーマ細胞が存在する液を腹腔内投与し、１０日後にそれぞれのマ
ウスから腹水を回収する。

【００６５】採取した腹水を遠心後、硫酸アンモニウム沈殿および、２０ｍＭＴｒｉｓ
ｐＨ８．０で平衡化したＺｅｐｈｙｒ−Ｄｓｉｌｉｃｉｕｍカラム（ＩＢＦ
Ｓｅｐｒａｃｏｒ）を用いたアニオン交換クロマトグラフィーにより、抗体分画
を単離し得る。ＮａＣｌ勾配（０から１ＭＮａＣｌの範囲）によりタンパク質
を溶出する。２ｍｌの分画を回収し、抗ＣＣＲ６抗体の存在についてＥＬＩＳＡ
により試験し得る。特異的抗ＣＣＲ６活性を含む分画を集め、透析して凍結する
。

【００６６】（実施例ＩＶ）ＭＩＰ−３αに対する特異的な抗体の調製近交配系Ｂａｌｂ／ｃマウスに、例えば、第０日に、Ｆｒｅｕｎｄ完全アジュ
バントで乳化させた１ｍｌの精製ＭＩＰ−３αを免疫し、Ｆｒｅｕｎｄ不完全ア
ジュバントで乳化した精製ＭＩＰ−３αを第１５日および２２日に免疫する。そ
のマウスに、０．５ｍｌの精製ＭＩＰ−３αを静脈注射して追加免疫する。

【００６７】ハイブリドーマを、例えば、非―分泌性骨髄腫細胞株ＳＰ２／０−Ａｇ８およ
び融合剤としてポリエチレングリコール１０００（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉ
ｓ，ＭＯ）を用いて作製する。ハイブリドーマ細胞を９６ウェルのＦａｌｃｏｎ
組織培養プレート（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＮＪ）に入れ、８０
μｇ／ｍｌのゲンタマイシン、２ｍＭグルタミン、１０％ウマ血清（Ｇｉｂ
ｃｏ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）、１％ＡＤＣＭ（ＣＲＴＳ，Ｌｙｏ
ｎ、Ｆｒａｎｃｅ）、１０^-5Ｍアザセリン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，
ＭＯ）および５Ｘ１０^-5Ｍヒポキサンチンを補ったＤＭＥＭＦ１２（Ｇｉｂ
ｃｏ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を添加する。例えば、アセトン固定Ｃ
ＣＲ６トランスフェクションＣＯＳ−７細胞を用いた免疫細胞化学（ＩＣＣ）お
よび（または）コーティング剤としてＣＯＳ−７上清から精製したＣＣＲ６を用
いたＥＬＩＳＡにより、ハイブリドーマ上清を、ＭＩＰ−３αに対する抗体産生
に関してスクリーニングする。陽性細胞クローンのアリコートを６日間増殖させ
、凍結保存し、プリスタン（２，６，１０，１４−テトラメチルペントデカン、
Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ．ＭＯ）処置Ｂｌｂ／ｃマウス（１５日前にプリ
スタンを腹腔内注射する）の腹水で増殖させる。１ｍｌのＰＢＳ中に約１０⁵個
のハイブリドーマ細胞が存在する液を腹腔内投与し、１０日後にそれぞれのマウ
スから腹水を回収する。

【００６８】採取した腹水を遠心後、硫酸アンモニウム沈殿および、２０ｍＭＴｒｉｓ
ｐＨ８．０で平衡化したＺｅｐｈｙｒ−Ｄカラム（ＩＢＦＳｅｐｒａｃｏｒ）
を用いたアニオン交換クロマトグラフィーにより、抗体分画を単離し得る。Ｎａ
Ｃｌ勾配（０から１ＭＮａＣｌの範囲）によりタンパク質を溶出する。２ｍｌ
の分画を回収し、抗ＭＩＰ−３α抗体の存在についてＥＬＩＳＡにより試験し得
る。特異的抗ＭＩＰ−３α活性を含む分画を集め、透析して凍結する。

【００６９】（実施例Ｖ）（ＣＣＲ６欠損マウスの作製）ＣＣＲ６ノックアウト（ＫＯ）マウスを作製するために、１２９個のマウスゲ
ノムＤＮＡの、１−Ｃ細菌性人工染色体（ＢＡＣ）ライブラリーに対して、ＤＰ
８２（配列番号３およびＤＰ８３（配列番号４）プライマーを用いたＰＣＲによ
り生成させたＤＮＡ断片を用いてスクリーニングした。ＣＣＲ６遺伝子を含む８
ｋｂのＨｉｎｄＩＩＩ断片をこのライブラリーからサブクローニングした。単
純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子を含むカセット
において、ＣＣＲ６の５’フランキングＤＮＡの１．１ｋｂ断片および３’フラ
ンキングＤＮＡの５ｋｂ断片をネオマイシン耐性遺伝子に隣接して配置した（Ｓ
．Ｌ．Ｍａｎｓｏｕｒ，Ｋ．Ｒ．Ｔｈｏｍａｓ，Ｍ．Ｒ．Ｃａｐｅｃｃｈｉ，Ｎ
ａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３３６，３４８（１９８８））。Ｇ４１８（ネオマ
イシン）およびガンシクロビルの両方に耐性のあるコロニー由来のＤＮＡを、ネ
オマイシン耐性遺伝子および５’相同性領域のすぐ上流にある領域に対応するプ
ライマーを用いてＰＣＲアッセイでスクリーニングした。標的とするＥＳ細胞ク
ローンを、ＣＣＲ６遺伝子の５’および３’領域に対応するプローブを使用した
サザンブロット解析により確認し、ＭａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇｔｈｅＭｏｕｓｅＥｍｂｒｙｏ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（マウス胚操作
：実験室マニュアル），（第１版および第２版）、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨ
ａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨ
ａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８６，１９９４）で記述されているようにしてＣ５７Ｂ
Ｌ／６マウス由来の胚盤胞に注入した。

【００７０】（実施例ＶＩ）（ＣＣＲ６−／−（ノックアウト）マウスにおける初期観察）ＣＣＲ６−／−対野生型マウスの分析により、顕微鏡的には異常性がないこと
が明らかになった。小腸におけるリンパ球内容物の分析は、Ｔリンパ球数の増加
、およびＢリンパ球数の減少を示した。ロタウイルスまたはＫＬＨのいずれかを
用いたＣＣＲ６−／−マウスへの経口免疫により、このマウスでは反応性のある
Ｂ細胞数および抗原特異的ＩｇＡ免疫グロブリンレベルが減少していることが明
らかになった。このデータから、パイエル板におけるＣＣＲ６発現の崩壊により
、腸での体液性反応の減少が起こり、常在性腸内Ｔ細胞が増加したことが示唆さ
れる。

【００７１】肺炎症のアレルギーモデルにおけるオボアルブミンを用いるＣＣＲ６−／−マ
ウスのエアロゾルチャレンジでは、そのような動物において好酸球の浸潤が減少
しているが、正常なＩｇＥ反応があることが明らかとなった。この観察から、Ｃ
ＣＲ６が、肺でのアレルゲンを介した好酸球浸潤の重要な制御因子であることが
示唆される。ＫＬＨの皮下投与に対する反応のような他の免疫反応系が正常であ
ることから、ＣＣＲ６が特異的に粘膜免疫に関連していることが示唆される。

【００７２】本明細書中で引用している全ての文献は、それぞれの個々の刊行物または特許
出願が特異的におよび個別に参考として本明細書中で援用されることを示したの
と同程度まで本明細書中で参考として援用される。

【００７３】本発明に対する多くの改変および変化が、当業者に対して明らかであるように
、その精神および範囲から離れることなくもたらされ得る。本明細書中で記述さ
れている特定の実施形態は、単に例示として提示しているものであり、本発明は
、特許請求の範囲による権利範囲と等価な全範囲と共に、添付の特許請求の範囲
の用語によってのみ制限されるべきである。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ＣＣＲ６遺伝子ターゲッティングを示す。図１ＡはＣＣＲ６遺伝子座
を描いたものである。制限部位は、ＨｉｎｄＩＩＩ（Ｈ）、ＢａｍＨＩ（Ｂ）、
およびＮｏｔＩ（Ｎ）である。サイズ単位はキロベースである。単一ＣＣＲ６エ
クソンは黒長方形で、転写方向は矢印で示す。図１Ｂは、標的化構築物を示す。
ネオマイシン耐性遺伝子（ｎｅｏ）は、５．５ｋｂおよび１．１ｋｂのＤＮＡ断
片および単純性ヘルペスチミジンキナーゼ遺伝子（ＨＳＶＴＫ）に隣接して存
在する。ＮｏｔＩで線状化したプラスミドをＡＶ３ＥＳ細胞にエレクトロポレ
ーションした。図１Ｃは、標的遺伝子座の構造を提供する。予想される断片の大
きさは、キロベース単位で示す。矢尻は、標的とするＥＳ細胞クローンを同定す
るためのポリメラーゼ連鎖反応で使用したプライマーを示す。サザンブロットに
よる標的クローンの確認に使用したプローブを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 11/06 Ａ６１Ｐ 11/06 17/06 17/06 19/02 19/02 25/00 25/00 25/28 25/28 29/00 29/00 １０１１０１ 37/02 37/02 37/06 37/06 37/08 37/08 43/00 １０５ 43/00 １０５１１１１１１ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者クック，ドナルドアメリカ合衆国ニュージャージー 07016，クランフォード，ベスラーアベニュー 10 (72)発明者リラ，セルジオエイ．アメリカ合衆国ニュージャージー 07928，チャサム，ツリートップレーン５ (72)発明者ナルラ，サトワントケイ．アメリカ合衆国ニュージャージー 07006，ウエストキャルドウェル，ナタリードライブ 26 Ｆターム(参考） 4C084 AA17 AA20 MA01 MA02 NA05 NA14 ZA011 ZA151 ZA361 ZA451 ZA591 ZA891 ZA961 ZB071 ZB081 ZB111 ZB131 ZB151 ZB212 ZC022 ZC751 4C085 AA13 BB11

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】動物におけるリンパ球の輸送または活性化を調節する方法で
あって、該方法は、該動物における白血球を、治療量の：ａ）哺乳動物ＣＣＲ６レセプターのアゴニスト；ｂ）哺乳動物ＣＣＲ６レセプターのアンタゴニスト；ｃ）哺乳動物ＭＩＰ−３αタンパク質のアゴニスト；またはｄ）哺乳動物ＭＩＰ−３αタンパク質のアンタゴニスト；と接触させる工程を包含する、方法。
【請求項２】請求項１に記載の方法であって、前記哺乳動物ＣＣＲ６また
はＭＩＰ−３αが霊長類タンパク質である、方法。
【請求項３】請求項１に記載の方法であって、前記アンタゴニストが、前
記哺乳動物ＣＣＲ６またはＭＩＰ−３αに結合する抗体である、方法。
【請求項４】請求項１に記載の方法であって、前記アンタゴニストが低分
子インヒビターである、方法。
【請求項５】請求項１に記載の方法であって、前記動物が、炎症状態また
は白血球増殖状態の、徴候または症状を示す、方法。
【請求項６】請求項５に記載の方法であって、前記徴候または症状が粘膜
組織における徴候または症状である、方法。
【請求項７】請求項１に記載の方法であって、前記調節する工程が、ＣＣ
Ｒ６−ＭＩＰ−３α相互作用の機能を阻害することである、方法。
【請求項８】請求項７に記載の方法であって、前記動物が、炎症状態もし
くは自己免疫；喘息；組織特異的自己免疫；変性自己免疫；慢性関節リウマチ；
アテローム動脈硬化；多発性硬化症；遅延型過敏症；皮膚移植；乾癬；移植片；
脊椎損傷；発作；神経変性；または虚血の、徴候または症状を経験中である、方
法。
【請求項９】請求項７に記載の方法であって、前記投与する工程が、ａ）抗炎症性サイトカインアゴニストもしくは抗炎症性サイトカインアンタゴ
ニスト；ｂ）鎮痛剤；ｃ）抗炎症剤；ｄ）下痢止め薬；またはｅ）ステロイドと組み合わされている、方法。
【請求項１０】請求項１に記載の方法であって、前記調節する工程が、前
記ＣＣＲ６−ＭＩＰ−３α相互作用の機能を増強することである、方法。
【請求項１１】請求項１０に記載の方法であって、前記投与する工程がＣ
ＣＲ６またはＭＩＰ−３αのアゴニストである、方法。
【請求項１２】請求項１１に記載の方法であって、前記動物がセリアック
病の徴候または症状を経験している、方法。
【請求項１３】遺伝子操作した非ヒト動物であって、該動物のゲノムが機
能的ＣＣＲ６遺伝子を欠損している、遺伝子操作した動物。
【請求項１４】前記動物が齧歯類である、請求項１３に記載の遺伝子操作
した動物。
【請求項１５】前記齧歯類がマウスである、請求項１４に記載の遺伝子操
作した動物。
【請求項１６】遺伝子操作した非ヒト動物胚であって、該胚の体細胞およ
び生殖細胞が機能的ＣＣＲ６遺伝子を欠損している、遺伝子操作したｄ動物胚。