JP2003506026A - 哺乳動物サイトカイン；関連試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 哺乳動物に由来するサイトカインをコードする精製された遺伝子（単離されたポリヌクレオチドまたは組換えポリヌクレオチド）、それに関連する試薬（精製されたタンパク質、特異抗体、およびこの分子をコードする核酸を含む）が提供される。この試薬および診断キットを使用する方法もまた、提供される。本発明はまた、細胞または組織培養細胞の生理機能または発生を調節する方法を提供し、この方法は、その細胞を霊長類ＩＬ−Ｄ８０のアゴニストまたはアンタゴニストと接触させる工程を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本願は、１９９９年７月３０日に出願された、同一人物に譲渡された同時継続
米国特許出願ＵＳＳＮ０９／３６４，６７４；および１９９９年８月６日に出願
されたＵＳＳＮ０９／３６９，６３４に対する優先権を主張する。これらの各々
は、その全体が参考として本明細書中に援用される。

【０００２】 （発明の分野） 本発明は、哺乳動物細胞、例えば哺乳動物免疫系の細胞の生物学および生理学
を調節するのに機能するタンパク質に関連する組成物に関する。特に、それは、
例えば造血細胞を含む様々な細胞型の活性化、発生、分化、および機能を制御す
るのに有用な精製遺伝子、タンパク質、抗体、および関連する試薬を提供する。

【０００３】 （発明の背景） 組換えＤＮＡ技術は、一般的にはドナー供給源からの遺伝情報を、宿主への導
入によるような続く処理のためにベクターへ組み込み、それによって転移された
遺伝情報が新しい環境下で複製および／または発現される技術を指す。一般的に
、遺伝情報は、望ましいタンパク質産物をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍ
ＲＮＡ）由来の相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の形で存在する。担体は、多くの場合
、宿主細胞における後の複製のためにｃＤＮＡを組み込む、およびある場合には
ｃＤＮＡの発現を実際に制御し、そしてそれによって宿主におけるコードされた
産物の合成を指示する能力を有するプラスミドである。

【０００４】 しばらくの間、哺乳動物免疫応答は「免疫ネットワーク」と呼ばれる一連の複
雑な細胞相互作用に基づくことが知られていた。最近の研究が、このネットワー
クの内部作用に新たな洞察を提供した。反応の多くは実際リンパ球、マクロファ
ージ、顆粒球および他の細胞のネットワーク様相互作用を循環していることは明
らかなままであるが、免疫学者は現在一般的に、リンホカイン、サイトカイン、
またはモノカインとして知られる可溶性タンパク質が、これらの細胞相互作用の
制御に決定的な役割を果たしているという意見を持っている。従って、細胞調節
因子の単離、特徴付け、および作用メカニズムにかなりの興味があり、その理解
は多くの医学的異常、例えば免疫系疾患の診断および治療における重要な進歩を
導く。これら因子のいくつかは、造血系増殖および／または分化因子、例えば幹
細胞因子（ＳＣＦ）またはＩＬ−１１である。例えば、Ｍｉｒｅ−Ｓｌｕｉｓお
よびＴｈｏｒｐｅ（１９９８）Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅ
ｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ；Ｔｈｏｍｓｏｎ（編、１９９８）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏ
ｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第３版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ；ＭｅｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍ
ａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ
ｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；ならびにＡｇｇ
ａｒｗａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎ
ｅｓ、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌを参照のこと。

【０００５】 リンホカインは明らかに、様々な方法で細胞活性を媒介する。これらは多能性
造血幹細胞の、複雑な免疫系を作る多様な細胞系統を含む多数の祖先への増殖、
成長、および分化を支持することが示された。細胞成分間の適当なそしてバラン
スのとれた相互作用が、健康な免疫反応に必要である。リンホカインが他の薬剤
と共に投与された場合、異なる細胞系統は、多くの場合異なる様式で反応する。

【０００６】 免疫反応に特に重要な細胞系統は、２種類のリンパ球を含む：免疫グロブリン
（外来性物質を認識および結合してそれを除去する能力を有するタンパク質）を
産生および分泌し得るＢ細胞、そしてリンホカインを分泌して、そして免疫ネッ
トワークを形成するＢ細胞および様々な他の細胞（他のＴ細胞を含む）を誘導ま
たは抑制する様々なサブセットのＴ細胞。これらのリンパ球は多くの他の細胞型
と相互作用する。

【０００７】 別の重要な細胞系統は、体中の基部から毛細血管に位置する顆粒を含む結合組
織細胞である、肥満細胞である（これは全ての哺乳動物種で明確に同定されてい
ない）。これらの細胞は、肺、皮膚、および胃腸管および尿生殖路で特に高い濃
度で見出される。肥満細胞は、アレルギー関連障害、特に以下のようにアナフィ
ラキシーで中心的な役割を果たす：選択された抗原が、肥満細胞表面の受容体に
結合した１種類の免疫グロブリンを架橋すると、肥満細胞は脱顆粒し、そしてメ
ディエーター、例えばヒスタミン、セロトニン、ヘパリン、およびプロスタグラ
ンジンを放出し、それがアレルギー反応、例えばアナフィラキシーを引き起こす
。

【０００８】 様々な免疫障害をよりよく理解および治療するための研究は、一般的にインビ
トロで免疫系の細胞を維持できないことによって妨げられてきた。免疫学者は、
これらの細胞の培養は、多くのリンホカインを含む様々な増殖因子を含む、Ｔ細
胞および他の細胞の上清を使用することによって達成され得ることを発見した。

【０００９】 前述のことから、例えばＩＬ−１１に関連する新規リンホカインの発見および
開発は、直接または間接的に免疫系および／または造血細胞に関与する広い範囲
の変性または異常状態の新規治療に貢献し得ることが明らかである。特に、公知
のリンホカインの有用な活性を増強または強化するリンホカインの発見および開
発は、非常に有用である。本発明は新規インターロイキン組成物および関連する
化合物、およびその使用方法を提供する。

【００１０】 （発明の要旨） 本発明は、ＤＮＡＸ８０、またはＩＬ−Ｄ８０と番号をふられた哺乳動物、例
えばげっ歯類、イヌ、ネコ、霊長類のインターロイキンおよびその生物学的活性
に関する。それは、ポリペプチド自身をコードする核酸、およびその産生および
使用方法を含む。本発明の核酸は、部分的には本明細書中で開示された相補的Ｄ
ＮＡ（ｃＤＮＡ）配列との相同性によって、および／または代表的にはこれらの
核酸によってコードされるポリペプチドに適用される、増殖因子またはサイトカ
イン様活性、例えばＩＬ−１１（Ｔｈｏｍｓｏｎ（１９９８）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏ
ｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ 第３版、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏを参照のこと）に関する機能的アッセイによって特徴付けられる。
増殖因子依存的生理学または免疫反応の制御における修飾または介入の方法が提
供される。

【００１１】 本発明は、部分的にはＩＬ−１１に対する有意な配列および構造類似性を示す
新規サイトカイン配列の発見に基づく。特に、それは、霊長類、例えばヒト、お
よびげっ歯類、例えばマウス配列を提供する。有意な配列相同性を示す機能的同
等物が、他の哺乳動物、例えばウシ、ウマ、およびラット、マウス、ならびに非
哺乳動物種から入手可能である。

【００１２】 様々なタンパク質実施形態で、本発明は、配列番号２、４、８、または１０と
少なくとも約１２アミノ酸の長さで同一性を示す本質的に純粋なまたは組換えＩ
Ｌ−Ｄ８０ポリペプチド；配列番号２、４、８、または１０の天然配列ＩＬ−Ｄ
８０；および配列番号２、４、８、または１０のＩＬ−Ｄ８０配列を含む融合タ
ンパク質を提供する。特定の実施形態では、同一の部分は少なくとも約１４、１
７、または１９アミノ酸である。他の実施形態では、ＩＬ−Ｄ８０は、表１の配
列を含む成熟配列を含む；または天然ＩＬ−Ｄ８０とは違う翻訳後修飾パターン
を示す；またはポリペプチドは、霊長類を含む哺乳動物から選択された温血動物
由来である；配列番号２、４、８、または１０の少なくとも１つのポリペプチド
部分を含む；複数のアミノ酸残基断片を示す；ＩＬ−Ｄ８０の天然対立遺伝子改
変体である；少なくとも約３０アミノ酸の長さを有する；霊長類ＩＬ−Ｄ８０に
特異的な少なくとも２つの重複しないエピトープを示す；霊長類ＩＬ−Ｄ８０と
少なくとも約２０アミノ酸の長さで配列同一性を示す；グリコシル化されている
；天然糖鎖付加を有し少なくとも１０ｋＤの分子量を有する；合成ポリペプチド
である；固体基質に接着している；別の化学的分子に結合している；天然配列か
ら５倍かそれより少ない置換である；または天然配列の欠失または挿入変異体で
ある。好ましい実施形態は、以下のものを含む組成物を含む：滅菌ＩＬ−Ｄ８０
ポリペプチド；またはＩＬ−Ｄ８０ポリペプチドおよび担体、ここで担体は、水
、生理食塩水、および／または緩衝液を含む水性化合物である；および／または
経口、直腸内、鼻腔内、局所、または非経口投与のために処方される。融合タン
パク質実施形態では、タンパク質は、表１の成熟ポリペプチド配列；ＦＬＡＧ、
Ｈｉｓ６、またはＩｇ配列を含む検出または精製タグ；および／またはＩＬ−１
１を含む別のサイトカインまたはケモカインの配列を有し得る。

【００１３】 キット実施形態は、ＩＬ−Ｄ８０ポリペプチドを有するもの、およびポリペプ
チドを含む区画；および／またはキット中の試薬の使用または廃棄に関する指示
を含む。

【００１４】 結合化合物実施形態では、化合物は、天然ＩＬ−Ｄ８０ポリペプチドに特異的
に結合する、抗体由来の抗原結合部位を有し得る。ここで：ＩＬ−Ｄ８０は霊長
類タンパク質である；結合化合物はＦｖ、Ｆａｂ、またはＦａｂ２断片である；
結合化合物は別の化学部分に結合している；または抗体は：表１の成熟ポリペプ
チド部分のペプチド配列に対して惹起される；成熟ＩＬ−Ｄ８０に対して惹起さ
れる；精製霊長類ＩＬ−Ｄ８０に対して惹起される；免疫選択される；ポリクロ
ーナル抗体である；変性ＩＬ−Ｄ８０に結合する；少なくとも３０μＭのＫｄを
示す；ビーズまたはプラスチック膜を含む固体基質に結合している；滅菌組成物
である；または放射活性または蛍光標識を含んで検出可能に標識される。結合化
合物を含むキットは、結合化合物を含む区画；および／またはキット中の試薬の
使用および廃棄方法に関する指示を有するものを含む。多くの場合、キットは定
性または定量分析を行うことができる。好ましい組成物は、滅菌結合化合物；ま
たは結合化合物および担体を含む。ここで担体は、水、生理食塩水、および／ま
たは緩衝液を含む水性化合物である；および／または経口、直腸内、鼻腔内、局
所、または非経口投与のために処方される。

【００１５】 核酸実施形態は、ＩＬ−Ｄ８０ポリペプチドまたは融合タンパク質をコードす
る単離または組換え核酸を含む。ここでＩＬ−Ｄ８０は霊長類由来である；およ
び／または核酸は、表１の抗原性ペプチド配列をコードする；表１の複数の抗原
性ペプチド配列をコードする；その部分をコードする天然ｃＤＮＡと同一性を示
す；発現ベクターである；さらに複製開始点を含む；天然の供給源由来である；
検出可能標識を含む；合成ヌクレオチド配列を含む；６ｋｂより少ない、好まし
くは３ｋｂより少ない；ヒトを含む霊長類由来である；天然全長コード配列を含
む；ＩＬ−Ｄ８０をコードする遺伝子のハイブリダイゼーションプローブである
；またはＰＣＲプライマー、ＰＣＲ産物、または変異誘発プライマーである。本
発明はまた、そのような組換え核酸を含む細胞、組織、または臓器を提供する。
そして好ましくは、細胞は、原核細胞；真核細胞；細菌細胞；酵母細胞；昆虫細
胞；哺乳動物細胞；マウス細胞；霊長類細胞；またはヒト細胞である。

【００１６】 キット実施形態は、そのような核酸を有するもの、および核酸を含む区画；さ
らにＩＬ−Ｄ８０タンパク質またはポリペプチドを含む区画；および／またはキ
ット中の試薬の使用または廃棄に関する指示を含む。代表的には、キットは定性
または定量分析を行うことができる。

【００１７】 特定の実施形態では、核酸は、３０℃および２Ｍより少ない塩濃度、または４
５℃および／または５００ｍＭの塩濃度、または５５℃および／または１５０ｍ
Ｍの塩濃度の洗浄条件下で、配列番号１、３、７、または９にハイブリダイズす
る；または霊長類ＩＬ−Ｄ８０に対して少なくとも約３０、５５、または７５ヌ
クレオチドの長さで同一性を示す。

【００１８】 本発明は、細胞を霊長類ＩＬ−Ｄ８０のアゴニストまたはアンタゴニストと接
触させることを含む、細胞または組織培養細胞の生理学または発生を調節する方
法を含む。その方法は、接触はＩＬ−１１のアゴニストまたはアンタゴニストと
組み合わせる；または接触はＩＬ−Ｄ８０に特異的に結合する抗体結合部位を含
む結合組成物を含むアンタゴニストを用いるものであり得る。

【００１９】 （好ましい実施形態の詳細な説明） 本明細書中で引用される全ての参考文献は、個々の出版物または特許出願がそ
れぞれ明確におよび個々に参考文献に組み込まれると示されたように同じ程度、
本明細書中で参考として援用される。

【００２０】 （Ｉ．概要） 本発明は、サイトカインである、例えば免疫および他の細胞間のシグナルを伝
達し得る分泌分子である、様々な哺乳動物タンパク質をコードするアミノ酸配列
およびＤＮＡ配列を提供する。例えば、Ｐａｕｌ（１９９７）Ｆｕｎｄａｍｅｎ
ｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第３版）Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．を
参照のこと。全長サイトカイン、および断片、またはアンタゴニストが、受容体
を発現する細胞の生理学的調節に有用である。おそらくＩＬ−Ｄ８０は、Ｔ細胞
、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、樹状細胞、造血祖
先等のような、例えばリンパ性細胞を含む造血細胞に対して刺激または阻害効果
のいずれかを有する。そのタンパク質はまた、タンパク質上の様々なエピトープ
、直線および配座エピトープ両方に対する抗体を産生するために、抗原、例えば
免疫原として有用である。

【００２１】 ＩＬ−Ｄ８０をコードするｃＤＮＡは、染色体１６のＢＡＣの、様々な霊長類
、例えばヒトの配列から同定された。例えばＣＩＴ９８７ＳＫ−Ａ−５７５Ｃ２
、およびＣＩＴ９８７ＳＫ−Ａ−７６１Ｈ５を参照のこと。その分子はｈｕＩＬ
−Ｄ８０と呼ばれた。ヒトＥＳＴ、ヒトＥＳＴ ＡＩ０８５００７が同定および
記載された。マウスＥＳＴ ＡＡ２６６８７２も同定および記載された。

【００２２】 霊長類、例えばヒト遺伝子は、約２１６アミノ酸（配列番号２）または約２４
３アミノ酸（配列番号８）の小さい可溶性サイトカイン様タンパク質をコードす
る。表１および配列番号１、２、７、および８を参照のこと。ＩＬ−Ｄ８０は長
鎖サイトカインのメンバーに特徴的な構造モチーフを示す。例えばＧｅｎＢａｎ
ｋから入手可能なＩＬ−Ｄ８０およびＩＬ−１１配列を比較すること。またげっ
歯類配列および表２または３も参照のこと。

【００２３】 （表１：霊長類、例えばヒト由来のＩＬ−Ｄ８０をコードする核酸（配列番号
１））

【００２４】

【化１】 エキソン境界は、約２１９／２２０；３９３／３９４；４９２／４９３；および
５５１／５５２に対応するようである。それらの境界に対応するコード部分は、
特に興味深い。１９３から９１８までの翻訳アミノ酸配列は配列番号２である。

【００２５】

【化２】 予期されるシグナル切断部位は．．．ＶＷＧおよびＦＰＲ．．．間；へリックス
Ａ境界は約．．．ＧＲＰおよびＱＬＳ．．．間から約．．．ＲＫＬおよびＬＳＥ
．．．間まで；へリックスＢ境界は約．．．ＱＬＰおよびＤＶＳ．．．間から約
．．．ＴＬＱおよびＰＦＨ．．．間まで；へリックスＣ境界は約．．．ＧＬＧお
よびＴＱＧ．．．間から約．．．ＶＬＡおよびＡＧＦ．．．間まで；およびへリ
ックスＤ境界は約．．．ＳＴＹおよびＲＬＬ．．．間から約．．．ＨＳＶおよび
ＷＰＬ．．．間まで。出願人は、高度に反復される残基、例えばＬおよびＥ反復
（１３−２０、２２０−２２３、および１６３−１７５）にマッチする配列、お
よび対応するコード部分を但し書き（ｐｒｏｖｉｓｏ ｏｕｔ）するつもりであ
る。霊長類、例えばヒト由来の改変体ＩＬ−Ｄ８０をコードする核酸（配列番号
７）（注記、非コード配列は配列番号１のものと同一であるが、明確さのための
ここでは省いた）。

【００２６】

【化３】 翻訳されたアミノ酸配列は配列番号８である：

【００２７】

【化４】 予期されるシグナル切断部位は．．．ＶＷＧおよびＦＰＲ．．．間；へリックス
Ａ境界は約．．．ＧＲＰおよびＱＬＳ．．．間から約．．．ＲＫＬおよびＬＳＥ
．．．間まで；へリックスＢ境界は約．．．ＱＬＰおよびＤＶＳ．．．間から約
．．．ＴＬＱおよびＰＦＨ．．．間まで；へリックスＣ境界は約．．．ＧＬＧお
よびＴＱＧ．．．間から約．．．ＶＬＡおよびＡＧＦ．．．間まで；およびへリ
ックスＤ境界は約．．．ＳＴＹおよびＲＬＬ．．．間から約．．．ＨＳＶおよび
ＷＰＬ．．．間まで。出願人は、高度に反復される残基、例えばＬおよびＥ反復
（１３−２０、２２０−２２３、および１６３−１７５）にマッチする配列、お
よび対応するコード部分を但し書きするつもりである。 配列番号２および８の比較：

【００２８】

【化５】 げっ歯類、例えばマウス由来のＩＬ−Ｄ８０をコードする核酸（配列番号３）。

【００２９】

【化６】 エキソン境界は、約１９８／１９９；３６０／３６１；４５９／４６０；および
６１８／６１９である。それらの境界に対応するコード部分は、特に興味深い。
１９９から８９１までの翻訳アミノ酸配列は配列番号４である。

【００３０】

【化７】 予期されるシグナル切断部位は．．．ＳＷＧおよびＦＰＴ．．．間；へリックス
Ａ境界は約．．．ＴＤＰおよびＬＳＬ．．．間から約．．．ＲＫＬおよびＬＳＥ
．．．間まで；へリックスＢ境界は約．．．ＨＬＰおよびＮＶＳ．．．間から約
．．．ＰＦＰおよびＡＭＬ．．．間まで；へリックスＣ境界は約．．．ＧＬＧお
よびＴＱＧ．．．間から約．．．ＶＬＡおよびＡＧＦ．．．間まで；およびへリ
ックスＤ境界は約．．．ＷＰＱおよびＬＬＹ．．．間から約．．．ＬＳＬおよび
ＰＲＲ．．．間まで。出願人は、高度に反復される残基、例えばＬおよびＥ反復
（残基４−７、２０９−２１２、および１５６−１６５）にマッチする配列、お
よび対応するコード部分を但し書きするつもりである。 改変体げっ歯類、例えばマウスＩＬ−Ｄ８０（配列番号９）

【００３１】

【化８】 １−７０２の翻訳；げっ歯類、例えばマウスＩＬ−Ｄ８０（配列番号１０）

【００３２】

【化９】 配列番号４および１０の比較：

【００３３】

【化１０】 表２：様々なＩＬ−１１実施形態のＩＬ−Ｄ８０との比較。ヒトＩＬ−１１は配
列番号５；マウスＩＬ−１１は配列番号６である。

【００３４】

【化１１】 配列の比較はまた、進化系統樹を提供する。これは、例えばＴｒｅｅＶｉｅｗプ
ログラムをＣｌｕｓｔａｌＸ分析ソフトウェアプログラムと組み合わせて使用す
ることによって産生され得る。Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．２５：４８７６−４８８２；およびＴｒｅｅＶｉｅｗ、Ｐａｇｅ、ＩＢＬＳ
、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｌａｓｇｏｗ、ｅ−ｍａｉｌ ｒｐａｇｅ＠
ｂｉｏ．ｇｌａ．ａｃ．ｕｋ；ｈｔｔｐ：／／ｔａｘｏｎｏｍｙ．ｚｏｏｌｏｇ
ｙ．ｇｌａ．ａｃ．ｕｋ．ｒｏｄ．ｔｒｅｅｖｉｅｗ．ｈｔｍｌを参照のこと。

【００３５】 表３：様々のＩＬ−１１実施形態と霊長類ＩＬ−Ｄ８０（表２の配列番号２の
代わりに配列番号８）およびげっ歯類ＩＬ−Ｄ８０（表２の配列番号４の代わり
に配列番号１０）とのさらなる比較。霊長類、例えばヒトＩＬ−１１は配列番号
５である；げっ歯類、例えばマウスＩＬ−１１は配列番号６である。ＣＬＵＳＴ
ＡＬ Ｘ（１．４ｂ）複数配列アラインメントプログラムを用いたＩＬ−１１と
のアラインメント。

【００３６】

【化１２】 上記のように、配列の比較はまた、進化系統樹を提供する。これは、例えばＴｒ
ｅｅＶｉｅｗプログラムをＣｌｕｓｔａｌＸ分析ソフトウェアプログラムと組み
合わせて使用することによって産生し得る。Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｎｕｃ．Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：４８７６−４８８２；およびＴｒｅｅＶｉｅｗ、Ｐａｇ
ｅ、ＩＢＬＳ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｌａｓｇｏｗ、ｅ−ｍａｉｌ
ｒｐａｇｅ＠ｂｉｏ．ｇｌａ．ａｃ．ｕｋ；ｈｔｔｐ：／／ｔａｘｏｎｏｍｙ．
ｚｏｏｌｏｇｙ．ｇｌａ．ａｃ．ｕｋ．ｒｏｄ．ｔｒｅｅｖｉｅｗ．ｈｔｍｌを
参照のこと。

【００３７】 ＩＬ−Ｄ８０の関連するサイトカインタンパク質に対する構造的相同性は、こ
の分子の関連する機能を示唆する。ＩＬ−Ｄ８０は、ＩＬ−１１と配列類似性を
示す長鎖サイトカインである。

【００３８】 ＩＬ−１１の生物学の多くの局面がよく認識されている。例えば、Ｓｏｎｉｓ
ら（１９９９）Ｌｅｕｋｅｍｉａ １３：８３１−８３４；Ｊａｃｑｕｅｓら（
１９９８）Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：７３７−７４０；Ｔｒｅｐｉｃｃ
ｈｉｏら（１９９８）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５６：１２−２１
；Ｔｈｏｍｓｏｎ、Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ中のＪａｃｏｂｓｅｎ（１９９８）；Ｍａｓｌａｋら（１９
９８）Ｓｅｍｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３５：２５３−２６０；Ｌｅｎｇら（１９
９７）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２９：１０５９−１
０６２；Ｄｕら（１９９７）Ｂｌｏｏｄ ８９：３８９７−３９０８；Ｇｏｌｄ
ｍａｎ（１９９５）Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ １３：４６２−４７１；およびＤｕ
ら（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２：１８２−１８８を参
照のこと。ＩＬ−Ｄ８０の生物学は同様であると予期され、例えばいくつかの生
物学的活性は重複し得る。

【００３９】 ＩＬ−Ｄ８０アゴニストまたはアンタゴニストもまた、機能的または受容体ア
ンタゴニストとして作用し得る。例えばそれはＩＬ−１１の各受容体への結合を
阻害し、または反対の作用を媒介する。従って、ＩＬ−Ｄ８０またはそのアンタ
ゴニストは、免疫障害、例えばＴ細胞免疫欠損症、慢性炎症、または組織の拒絶
を含む異常な医学的状態の治療に、または心血管または神経生理学的状態で有用
であり得る。ＩＬ−Ｄ８０およびＩＬ−１１関連試薬を組み合わせた組成物が多
くの場合使用される。

【００４０】 天然の抗原は、標的細胞において生物学的または生理学的反応を導く様々な生
化学的反応を媒介することができる。本明細書中で特徴付けられる好ましい実施
形態は、ヒト由来であるが、他の霊長類、または他の種の対応物が天然に存在す
る。他の哺乳動物種、例えば霊長類、イヌ、ネコ、およびげっ歯類、特に家畜種
におけるタンパク質のさらなる配列も、入手可能であるはずである。下記を参照
のこと。下記の説明は、例示の目的で、ヒトＩＬ−Ｄ８０に向けられるが、他の
種由来の関連する実施形態に同様に適用可能である。

【００４１】 （ＩＩ．精製されたＩＬ−Ｄ８０） 霊長類、例えばヒトＩＬ−Ｄ８０アミノ酸配列を、いくつかの実施形態、例え
ば配列番号２、４、８、または１０に示す。そのタンパク質をコードする他の天
然に存在する核酸を、提供された配列を用いて標準的な手順、例えばＰＣＲ技術
によって、またはハイブリダイゼーションによって単離し得る。アミノ末端から
カルボキシ末端まで提供される、これらのアミノ酸配列は、そのタンパク質抗原
を他のタンパク質および例示する多くの変異体から区別するのを可能にする、サ
イトカインの配列情報を提供するのに重要である。さらに、そのペプチド配列は
そのようなセグメントを認識する抗体を産生するペプチドの調製を可能にする、
そしてヌクレオチド配列はオリゴヌクレオチドプローブの調製を可能にする。こ
れらはどちらも、そのような配列をコードする遺伝子の検出または単離、例えば
クローニングの戦略である。

【００４２】 本明細書中で使用される場合、「ヒト可溶性ＩＬ−Ｄ８０」という用語は、タ
ンパク質の文脈で使用される場合、配列番号２、または８に示した可溶性ポリペ
プチドに対応するアミノ酸配列を有するタンパク質、またはその重要なフラグメ
ントを含む。好ましい実施形態は、指定された長さの複数の区別できる、例えば
重複しないセグメントを含む。代表的には、その数は少なくとも２、より通常は
少なくとも３、そして好ましくは５、７、またはそれ以上である。長さの最小値
が提供されるが、様々な大きさのより長い長さ、例えば１つの長さ７、および２
つの長さ１２が適当であり得る。

【００４３】 結合成分、例えば抗体は、代表的にはＩＬ−Ｄ８０に、例えば少なくとも約１
００ｎＭ、通常約３０ｎＭよりよい、好ましくは約１０ｎＭよりよい、そしてよ
り好ましくは約３ｎＭよりよい、高い親和性で結合する。対応するタンパク質が
、ヒト以外の哺乳動物種、例えば他の霊長類、有蹄動物、またはげっ歯類におい
て見出される。また、非哺乳動物種、例えば鳥類または両生類も構造的または機
能的に関連する遺伝子およびタンパク質を有するはずである。

【００４４】 本明細書中で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、重要なフラグ
メントまたはセグメントを含み、そして少なくとも約８アミノ酸、一般的には少
なくとも約１２アミノ酸、代表的には少なくとも約１６アミノ酸、好ましくは少
なくとも約２０アミノ酸、そして特に好ましい実施形態では、少なくとも約３０
以上のアミノ酸、例えば３５、４０、４５、５０、６０、７５、１００等の一連
のアミノ酸残基を含む。そのような断片は、実質的に全ての位置で始まる、およ
び／または終わる末端を有し得る。例えば、全ての実際的な組み合わせで、残基
１、２、３等で始まり、そして例えば１５０、１４９、１４８等で終わる。特に
興味深いペプチドは、構造ドメイン境界、例えばヘリックスＡ、Ｂ、Ｃおよび／
またはＤに対応する末端を有する。表１、２、および３を参照のこと。

【００４５】 「結合組成物」という用語は、例えば抗体−抗原相互作用で、ＩＬ−Ｄ８０に
特異性をもって結合する分子を指す。特異性は多かれ少なかれ包括的、例えば特
定の実施形態に対して、または関連する実施形態、例えば霊長類、げっ歯類等の
グループに対して特異的であり得る。それはまた、共有結合または非共有結合の
いずれか、天然の生理的に関連するタンパク質−タンパク質相互作用を含んで、
ＩＬ−Ｄ８０と特異的に結合する化合物、例えばタンパク質を含む。その分子は
ポリマー、または化学的試薬であり得る。機能的アナログは、構造的修飾を有す
るタンパク質であり得、またはそれは適当な結合決定基と相互作用する分子の形
を有する分子であり得る。その化合物は、受容体結合相互作用のアゴニストまた
はアンタゴニストとして作用し得る。例えば、Ｇｏｏｄｍａｎら（編）Ｇｏｏｄ
ｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂ
ａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（最新版）Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒ
ｅｓｓを参照のこと。

【００４６】 例えばタンパク質の文脈において、実質的に純粋なとは、代表的には、タンパ
ク質がもとの供給源有機体由来の、他の混入タンパク質、核酸、または他の生物
製剤を含まないことを意味する。純度は標準的な方法、代表的には重量によって
アッセイされ得、そして普通少なくとも約４０％純粋、一般的には少なくとも約
５０％純粋、多くの場合少なくとも約６０％純粋、代表的には少なくとも約８０
％純粋、好ましくは少なくとも約９０％純粋、そして最も好ましい実施形態では
少なくとも約９５％純粋である。担体または賦形剤が多くの場合加えられる。

【００４７】 ポリペプチドまたはフラグメントの可溶性は、環境およびポリペプチドに依存
する。温度、電解質環境、ポリペプチドのサイズおよび分子の特徴、および溶媒
の性質を含む多くのパラメーターがポリペプチドの可溶性に影響する。代表的に
は、ポリペプチドが使用される温度は約４℃から約６５℃の範囲である。通常使
用温度は約１８℃より高い。診断的目的のためには、温度は通常約室温であるか
またはより暖かいが、アッセイ中の成分の変性温度より低い。治療的目的のため
には、温度は通常体温、代表的にはヒトおよびマウスでは約３７℃であるが、特
定の状況下では、インサイチュまたはインビトロで温度を上昇または下降させ得
る。

【００４８】 ポリペプチドのサイズおよび構造は、一般的に、実質的に安定状態であり、そ
して通常変性状態ではない。ポリペプチドは、例えば可溶性を与えるために、４
次構造において他のポリペプチドと、または脂質または界面活性剤と結合し得る
。 溶媒および電解質は通常、生物学的活性の保存のために使用される型の、生
物学的に適合性の緩衝液であり、そして通常生理的水性溶媒に近似する。通常、
溶媒は、代表的には約５および１０の間、そして好ましくは約７．５の中性ｐＨ
を有する。いくつかの場合には、１つ以上の界面活性剤、代表的には弱い非変性
のもの、例えばＣＨＳ（コレステリルヘミスクシナート）またはＣＨＡＰＳ（３
−［３−コラミドプロピル］ジメチルアンモニオ）−１−プロパンスルホナート
）が、またはタンパク質の構造的または生理的性質の有意な崩壊を避けるために
十分低い濃度で加えられる。他の例では、有意な変性を起こすために強い界面活
性剤を使用し得る。

【００４９】 （ＩＩＩ．物理的改変体） 本発明はまた、ＩＬ−Ｄ８０抗原のアミノ酸配列と実質的なアミノ酸配列同一
性を有するタンパク質またはペプチドを含む。改変体は種、多型、または対立遺
伝子改変体を含む。

【００５０】 アミノ酸配列相同性、または配列同一性は、残基のマッチを最適化することに
よって、もし必要なら必要に応じてギャップを導入することによって決定される
。Ｎｅｅｄｌｅｈａｍら（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４
５３；Ｓａｎｋｏｆｆら（１９８３）Ｔｉｍｅ Ｗａｒｐｓ，Ｓｔｒｉｎｇ Ｅ
ｄｉｔｓ， ａｎｄ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ
ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍａｐｒｉｓｏｎの
第１章、Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ、Ｒｅａｄｉｎｇ、ＭＡ；およびＩｎｔ
ｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ；およびＵｎｉ
ｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩのソフトウェアパッケージも参照のこ
と。保存的置換をマッチと考えるならば、配列同一性は変化する。保存的置換は
、代表的には以下のグループ内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イ
ソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタ
ミン；セリン、スレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チ
ロシン。保存は、生物学的特徴、機能的特徴、または構造的特徴に当てはまり得
る。相同的なアミノ酸配列は、代表的にはタンパク質配列の天然の多型または対
立遺伝子および種間のバリエーションを含むように意図される。代表的な相同的
タンパク質またはペプチドは、ＩＬ−Ｄ８０のアミノ酸配列と２５−１００％の
同一性（もしギャップが導入され得るなら）から５０−１００％の同一性（もし
保存的置換が含まれるなら）を有する。同一性の測定値は、少なくとも約３５％
、一般的に少なくとも４０％、多くの場合少なくとも約５０％、代表的には少な
くとも約６０％、通常少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約８０％、そ
してより好ましくは少なくとも約９０％である。

【００５１】 単離されたＩＬ−Ｄ８０ＤＮＡは、ヌクレオチド置換、ヌクレオチド欠失、ヌ
クレオチド挿入、そして短いヌクレオチド区間の反転によって容易に修飾し得る
。これらの修飾は、これら抗原、その誘導体、または同様の生理的、免疫原的、
抗原的、または他の機能的活性を有するタンパク質をコードする新規ＤＮＡ配列
を産生する。これら修飾配列を、変異抗原を産生する、または発現を増強するた
めに使用し得る。増強された発現は、遺伝子増幅、増加した転写、増加した翻訳
、および他のメカニズムを含み得る。「変異ＩＬ−Ｄ８０」は、他の点では上記
で述べたＩＬ−Ｄ８０の配列同一性の定義にあてはまるが、欠失、置換、または
挿入のいずれかによって天然に通常見出されるＩＬ−Ｄ８０とは異なるアミノ酸
配列を有するポリペプチドを含む。これは一般的には、配列番号２、４、８、ま
たは１０の配列を有するタンパク質と有意な同一性を有する、そしてそれらの配
列と様々な生物学的活性、例えば抗原性または免疫原性を共有する、そして好ま
しい実施形態では天然全長開示配列のほとんどを含むタンパク質を含む。全長配
列が代表的には好ましいが、切断されたバージョンも有用であり、同様に、天然
の供給源から見出された遺伝子またはタンパク質が代表的には最も望ましい。同
様のコンセプトが異なるＩＬ−Ｄ８０タンパク質、特に様々な温血動物、例えば
哺乳動物および鳥類で見出されるものにあてはまる。これらの記載は一般的に、
多くのＩＬ−Ｄ８０タンパク質を含むことを意味し、具体的に議論される特定の
霊長類実施形態に制限されない。

【００５２】 ＩＬ−Ｄ８０変異誘発はまた、アミノ酸を挿入または欠失させることによって
行われ得る。置換、欠失、挿入、またはあらゆる組み合わせが、最終構築物に到
達するために産生される。挿入はアミノまたはカルボキシル末端融合を含む。無
作為変異誘発を標的コドンにおいて行い得、そして発現した変異体を次いで望ま
しい活性に関してスクリーニングし得る。例えば、Ｍ１３プライマー変異誘発ま
たはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術による、公知の配列を有するＤＮＡに
おいて、前もって決定した部位で置換変異を起こす方法は、当該分野で周知であ
る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）；Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７お
よび増刊）；およびＫｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚ
ｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２を参照のこと。好ましい実施形態は、例えば
１倍、２倍、３倍、５倍、７倍等の、好ましくは保存的置換をヌクレオチドまた
はアミノ酸レベルで含む。好ましくは、置換は保存されたシステインから遠く、
そして多くの場合ヘリックス構造ドメインから離れた領域にある。そのような改
変体は、特異的な抗体を産生するために有用であり得、そして多くの場合多くの
または全ての生物学的性質を共有する。

【００５３】 本発明はまた、組換えタンパク質、例えばこれらタンパク質由来のセグメント
を使用した異種由来融合タンパク質を提供する。異種由来融合タンパク質は、天
然には通常同じ方法で融合しないタンパク質またはセグメントの融合である。同
様のコンセプトが異種由来核酸配列にあてはまる。

【００５４】 それに加えて、新規構築物を、他のタンパク質由来の、同様の機能的ドメイン
を組み合わせることから作成し得る。例えば、標的結合または他のセグメントを
、異なる新規融合ポリペプチドまたはフラグメントの間で「交換」し得る。例え
ば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１３３０−
１３３６；およびＯ’Ｄｏｗｄら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３
：１５９８５−１５９９２を参照のこと。

【００５５】 ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅ
ｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２によって記載されたホスホロアミダイト法は
、適当な合成ＤＮＡフラグメントを産生する。二本鎖断片は多くの場合、相補鎖
を合成することおよび適当な条件下で鎖を共にアニーリングすることによって、
または適当なプライマー配列と共にＤＮＡポリメラーゼを用いて相補鎖を加える
こと、例えばＰＣＲ技術のいずれかによって得られる。

【００５６】 構造的分析を、サイトカインのＩＬ−１１ファミリーと比較してこの遺伝子に
適用し得る。ヒトＩＬ−Ｄ８０配列の、他のＩＬ−１１ファミリーメンバーとの
アラインメントは、構造的特徴の決定を可能にするはずである。特に、βシート
およびαヘリックス残基を、例えばＲＡＳＭＯＬプログラムを用いて決定し得る
。Ｂａｚａｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３７９：５９１；Ｌｏｄｉら（１９
９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：１７６２−１７６６；ＳａｙｌｅおよびＭｉｌ
ｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ（１９９５）ＴＩＢＳ ２０：３７４−３７６；およびＧｒ
ｏｎｅｎｂｅｒｇら（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４
：２６３−２６９を参照のこと。置換に好ましい残基は、受容体と相互作用する
ことが予期される表面に露出した残基を含む。機能を保存する他の残基は、特に
表面露出残基から遠い位置では、保存的置換である。

【００５７】 （ＩＶ．機能的変異体） ＩＬ−Ｄ８０に対する生理的反応の阻害は、リガンドのその受容体に対する結
合の競合的阻害により起こり得る。

【００５８】 本発明のインビトロアッセイは、多くの場合単離タンパク質、これらタンパク
質の受容体結合部分を含む可溶性断片、または固相基板に結合した断片を使用す
る。これらのアッセイはまた、結合部分変異および修飾、またはサイトカイン変
異および修飾（例えばＩＬ−Ｄ８０アナログ）のいずれかの、効果の診断的決定
を可能にする。

【００５９】 本発明はまた、競合的薬剤スクリーニングアッセイの使用を企図する。例えば
ここで、サイトカインに対する中和抗体、または受容体結合断片が、試験化合物
と競合する。

【００６０】 ＩＬ−Ｄ８０抗原の「誘導体」は、天然に存在する形からのアミノ酸配列変異
体、糖鎖付加変異体、および他の化学的部分との共有結合物または凝集結合物を
含む。共有結合誘導体は、ＩＬ−Ｄ８０アミノ酸側鎖またはＮもしくはＣ末端に
おいて見出される基への官能基の結合によって、例えば標準的な手段によって調
製され得る。例えば、ＬｕｎｄｂｌａｄおよびＮｏｙｅｓ（１９８８）Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉ
ｏｎ、第１−２巻、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆ
Ｌ；Ｈｕｇｌｉ（編、１９８９）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、
ＣＡ；およびＷｏｎｇ（１９９１）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ Ｌｉｎｋｉｎｇ、ＣＲＣ Ｐ
ｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、ＦＬを参照のこと。

【００６１】 特に、糖鎖付加の変更が含まれ、例えば、その合成および処理の間、またはさ
らなる処理工程において、ポリペプチドの糖鎖付加パターンを修飾することによ
って産生される。例えば、Ｅｌｂｅｉｎ（１９８７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．５６：４９７−５３４を参照のこと。同じ一次アミノ酸配列を有し、リ
ン酸化アミノ酸残基（例えばホスホチロシン、ホスホセリン、またはホスホスレ
オニン）を含む他の小さい修飾を有するペプチドのバージョンも含まれる。

【００６２】 ＩＬ−Ｄ８０と他の同種タンパク質または異種タンパク質との間の融合ポリペ
プチドも提供される。多くのサイトカイン受容体または他の表面タンパク質は、
多量体（例えばホモ２量体実体）であり、そして反復構築物はタンパク質溶解切
断に対する減少した感受性を含む、様々な利点を有し得る。典型的な例は、融合
リガンドの存在または位置を容易に決定し得るような、リポーターポリペプチド
（例えばルシフェラーゼ）と、タンパク質のセグメントまたはドメイン、例えば
受容体結合セグメントとの融合である。例えば、Ｄｕｌｌら、米国特許第４，８
５９，６０９号を参照のこと。他の遺伝子融合パートナーは、細菌βガラクトシ
ダーゼ、ｔｒｐＥ、プロテインＡ、βラクタマーゼ、アルファアミラーゼ、アル
コールデヒドロゲナーゼ、酵母アルファ交配因子、およびＨｉｓ６配列のＦＬＡ
Ｇ配列のような検出または精製タグを含む。例えば、Ｇｏｄｏｗｓｋｉら（１９
８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：８１２−８１６を参照のこと。

【００６３】 融合ペプチドは、典型的には組換え核酸法または合成ポリペプチド法のいずれ
かによって作成される。核酸操作および発現の技術は、一般的に、例えばＳａｍ
ｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）、第１−３巻、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；およびＡｕｓｕｂｅｌら（編、１９９
３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ、ＮＹに記載されている。ポリペ
プチド合成の技術は、例えばＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３）Ｊ．Ａｍｅｒ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９８
６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：３４１−３４７；Ａｔｈｅｒｔｏｎら（１９８９
）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａ
ｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ；および
Ｇｒａｎｔ（１９９２）Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａ Ｕｓｅｒ
’ｓ Ｇｕｉｄｅ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ、ＮＹに記載されている。再フォー
ルディング法を合成タンパク質に適用し得る。

【００６４】 本発明はまた、アミノ酸配列における変化または糖鎖付加以外の、ＩＬ−Ｄ８
０タンパク質誘導体の使用を企図する。そのような誘導体は、化学的部分または
タンパク質担体との共有結合または凝集結合を含み得る。共有結合誘導体または
凝集誘導体は、免疫原として、イムノアッセイの試薬として、または結合パート
ナー（例えば他の抗原）のアフィニティー精製のような精製方法において有用で
ある。ＩＬ−Ｄ８０を、抗ＩＬ−Ｄ８０抗体または代替の結合組成物のアッセイ
または精製に使用するために、共有結合によって、臭化シアン活性化ＳＥＰＨＡ
ＲＯＳＥのような固体支持体へ、当該分野で周知の方法によって固定化し得るか
、またはグルタルアルデヒド架橋を用いて、または用いずにポリオレフィン表面
上へ吸着し得る。ＩＬ−Ｄ８０タンパク質をまた、例えば診断的アッセイで使用
するために、検出可能なグループで標識し得る。ＩＬ−Ｄ８０の精製は、固定化
抗体または相補的結合パートナー、例えば受容体の結合部分によって実施し得る
。

【００６５】 本発明の可溶化ＩＬ−Ｄ８０または断片を、結合に特異的な抗血清または抗体
の産生のために免疫原として使用し得る。精製抗原を、モノクローナル抗体また
は天然抗体の抗原結合断片、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）₂、等を含む
抗原結合断片をスクリーニングするために使用し得る。精製ＩＬ−Ｄ８０抗原を
また、上昇したレベルのサイトカインの存在に反応して産生された抗体を検出す
る試薬として使用し得、それは異常なまたは特定の生理的または疾患状態の診断
になり得る。本発明は、配列番号第１、３、７、または９番に示されたヌクレオ
チド配列によってコードされたアミノ酸配列、またはそれを含むタンパク質の断
片に対して産生された抗体を企図する。特に、本発明は特定のドメイン、例えば
ヘリックスＡ、Ｂ、Ｃ、またはＤに対して結合親和性を有するか、またはそれに
対して産生された抗体を企図する。

【００６６】 本発明は、さらに密接に関連した種変異体の単離を企図する。サザンブロット
およびノーザンブロット分析が、類似の遺伝子実体が他の哺乳類に存在すること
を確立する。ＩＬ−Ｄ８０は種変異体、例えばげっ歯類、ウサギ目、肉食動物、
偶蹄目、奇蹄目、および霊長類に広く存在するようである。

【００６７】 本発明はまた、構造、発現、および機能において差異および類似性を両方示す
関連抗原のグループを単離する手段を提供する。分子の多くの生理的効果を解明
することは、さらなる別の種またはその多型変異体の単離および特徴付けによっ
て非常に加速される。特に、本発明は、異なる種においてさらなる相同的遺伝子
実体を同定するために有用なプローブを提供する。

【００６８】 単離遺伝子は、ＩＬ−Ｄ８０の発現を欠く細胞（例えば対応するタンパク質を
欠きそして負のバックグラウンド活性を示す種の型または細胞）の形質転換を可
能にする。これは形質転換していないコントロール細胞と比較してＩＬ−Ｄ８０
の機能の分析を可能にする。

【００６９】 これらの抗原によって媒介される様々な生理的機能を可能にする、重要な構造
的エレメントの吟味は、近代分子生物学の標準的な技術を用いて、特に関連する
クラスのメンバーを比較して可能である。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１
９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１３３９−１３３６に記載されたホモログス
キャニング突然変異生成技術；およびＯ’Ｄｏｗｄら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２６３：１５９８５−１５９９２で使用されたアプローチ、および
Ｌｅｃｈｌｅｉｔｅｒら（１９９０）ＥＭＢＯ Ｊ．９：４３８１−４３９０を
参照のこと。

【００７０】 細胞内機能は、おそらく受容体シグナル伝達を含む。しかし、タンパク質の内
在化が特定の環境下で起こり得、そして細胞内成分およびサイトカイン間の相互
作用が起こり得る。相互作用している成分とのＩＬ−Ｄ８０の特異的な相互作用
セグメントを、突然変異生成または直接生化学的手段、例えば架橋またはアフィ
ニティー法によって同定し得る。結晶学的または他の物理的方法による構造的分
析も適用可能である。シグナル伝達メカニズムのさらなる調査は、アフィニティ
ー法または遺伝的手段、例えば変異体の相補分析による、単離可能な結合成分の
研究を含む。

【００７１】 ＩＬ−Ｄ８０の発現および調節に関するさらなる研究を追及する。抗原に結合
している調節エレメントは、特異な生理的、発生的、組織特異的、または他の発
現パターンを示す。上流または下流の遺伝領域、例えば調節エレメントが興味深
い。

【００７２】 ＩＬ−Ｄ８０抗原の構造的研究は、新規抗原、特に分子に対してアゴニストま
たはアンタゴニスト特性を示すアナログの設計を導く。これを、前に記載した望
ましい活性のスペクトルを示す抗原を単離するスクリーニング方法と組み合わせ
得る。

【００７３】 （Ｖ．抗体） 抗体は、種、多型、または対立遺伝子変異体を含むＩＬ−Ｄ８０タンパク質、
およびその断片の、天然に存在する形でおよびその組換えの形の両方で、様々な
エピトープに対して惹起され得る。さらに、抗体は、ネイティブまたは変性バー
ジョンを含む、その活性形態またはその不活性形態のいずれかのＩＬ−Ｄ８０に
対して惹起され得る。抗イディオタイプ抗体も企図される。

【００７４】 結合断片および一本鎖バージョンを含む、抗原の前もって決定された断片に対
する抗体は、動物を断片と免疫原性タンパク質の結合物で免疫することによって
産生し得る。モノクローナル抗体を、望ましい抗体を分泌する細胞から調製する
。これらの抗体を、正常または不完全なＩＬ−Ｄ８０への結合に関してスクリー
ニングし得る、または例えば受容体によって媒介されるアゴニストまたはアンタ
ゴニスト活性に関してスクリーニングし得る。抗体は、例えば受容体への結合を
立体的に阻害することによって、アゴニストまたはアンタゴニストであり得る。
これらのモノクローナル抗体は、通常少なくとも約１ｍＭ、より通常には少なく
とも約３００μＭ、典型的には少なくとも約１００μＭ、より典型的には少なく
とも約３０μＭ、好ましくは少なくとも約１０μＭ、そしてより好ましくは少な
くとも約３μＭかよりよいＫ_Dで結合する。

【００７５】 配列番号第２、４、８、または１０番のアミノ酸配列からなる免疫原のような
、規定された免疫原に対して産生された抗体に特異的に結合するか、またはそれ
と特異的に免疫反応性であるＩＬ−Ｄ８０タンパク質は、典型的にはイムノアッ
セイで決定される。イムノアッセイは典型的には、例えば配列番号第２、４、８
、または１０番のポリペプチドに対して産生されたポリクローナル抗血清を使用
する。この抗血清は、好ましくは同じ種由来の他のＩＬ−１１、例えばヒトまた
はげっ歯類ＩＬ−１１に対して低い交差反応性を有するように選択され、そして
そのような交差反応性は、イムノアッセイに使用する前に免疫吸収によって除去
される。

【００７６】 イムノアッセイで使用する抗血清を産生するために、配列番号２、４、８、も
しくは１０のタンパク質、またはこれらの組み合せを、本明細書中で記載したよ
うに単離する。例えば、組換えタンパク質を哺乳動物細胞系統で産生し得る。適
当な宿主、例えばＢａｌｂ／ｃのようなマウスの近交系の系統を、選択されたタ
ンパク質で、典型的にはフロイントアジュバントのような標準的なアジュバント
および標準的なマウス免疫プロトコールを用いて免疫する（Ｈａｒｌｏｗおよび
Ｌａｎｅ、前出を参照のこと）。あるいは、本明細書中で開示された配列由来で
、そしてキャリアタンパク質に結合した合成ペプチドを、免疫原として使用し得
る。ポリクローナル血清を回収し、そしてイムノアッセイ、例えば固体支持体に
固定化された免疫原を用いた固相イムノアッセイにおいて免疫原タンパク質に対
して滴定する。１０⁴以上の力価を有するポリクローナル抗血清を選択し、そし
て他のＩＬ−１１ファミリーメンバー（例えば、げっ歯類ＩＬ−１１）に対する
交差反応性に関して、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前出、５７０−５７３頁で
記載されているような競合的結合イムノアッセイを用いて試験する。好ましくは
、例えば霊長類ＩＬ−１１と組み合わせて、少なくとも１つの他のＩＬ−１１フ
ァミリーメンバーをこの決定に使用する。ＩＬ−１１ファミリーメンバーを、本
明細書中で記載されたように、標準的な分子生物学およびタンパク質化学技術を
用いて、組換えタンパク質として産生し、そして単離し得る。

【００７７】 競合的結合形式のイムノアッセイを、交差反応性決定のために使用し得る。例
えば、配列番号２または８のタンパク質を、固体支持体に固定化し得る。アッセ
イに加えられたタンパク質は、固定化抗原への抗血清の結合と競合する。固定化
タンパク質への抗血清の結合と競合する上記のタンパク質の能力を、配列番号２
または８のタンパク質と比較する。上記タンパク質の交差反応性パーセントを、
標準的な計算を用いて計算する。上記に挙げたタンパク質のそれぞれと１０％よ
り低い交差反応性を有する抗血清を選択およびプールする。次いで交差反応性抗
体を、プールした抗血清から上記で挙げたタンパク質を用いた免疫吸収によって
除去する。

【００７８】 免疫吸収しそしてプールしされた抗血清を次いで、２番目のタンパク質を免疫
原タンパク質（例えば、配列番号２、４、８、または１０のＩＬ−１１様タンパ
ク質）と比較するために、上記のように競合的結合イムノアッセイで使用する。
この比較を行うために、２つのタンパク質をそれぞれ広い範囲の濃度でアッセイ
し、そして固定化タンパク質への抗血清の結合を５０％阻害するのに必要とされ
る各タンパク質の量が決定される。２番目のタンパク質の必要とされる量が、選
択されたタンパク質の必要とされるタンパク質量の２倍より少なければ、２番目
のタンパク質は、免疫原に対して産生された抗体に特異的に結合すると言われる
。

【００７９】 本発明の抗体はまた、診断的適用において有用であり得る。捕獲または非中和
化抗体として、それらを受容体への結合を阻害することなく抗原に結合する能力
に関してスクリーニングし得る。中和化抗体として、それらは競合的結合アッセ
イで有用であり得る。それらはまた、ＩＬ−Ｄ８０タンパク質またはその受容体
を検出または定量するのに有用である。例えば、Ｃｈａｎ（編、１９８７）Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ、Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ、Ｏｒｌａｎｄｏ、ＦＬ；ＰｒｉｃｅおよびＮｅｗｍａｎ（編、１９
９１）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏ
ａｓｓａｙ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．；およびＮｇｏ（編、１
９８８）Ｎｏｎｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐ
ｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．を参照のこと。交差吸収、涸渇、または他の手段が、規定さ
れた選択性（例えば、独特のまたは共通の種特異性）の調製物を提供する。これ
らは様々なグループの抗原を同定する試験の基礎となり得る。

【００８０】 さらに、抗原結合断片を含む本発明の抗体は、抗原に結合し、そして例えば、
生物学的応答を誘発し得るレセプターへの機能的結合を阻害する強力なアンタゴ
ニストであり得る。それらはまた、非中和化抗体として有用であり得、そして抗
体が抗原に結合する場合、例えば、その抗原を表面に発現する細胞が殺傷される
ように、毒素または放射性核種と結合し得る。さらに、これらの抗体を薬物また
は他の治療的薬剤に、直接かまたはリンカーによって間接的かのいずれかでに結
合し得、そして薬剤標的化を行い得る。

【００８１】 抗原フラグメントを、免疫原として使用される融合または共有結合ポリペプチ
ドとして、他の材料、特にポリペプチドと結合し得る。抗原およびその断片を、
例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、破傷風毒素
等のような様々な免疫原と融合または共有結合し得る。ポリクローナル抗血清を
調製する方法の記載に関しては、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｏｅｂｅｒ Ｍ
ｅｄｉｃａｌ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、Ｈａｒｐｅｒ ａｎｄ Ｒｏｗ、１９６９；
Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ（１９６２）Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｓｅｒｏ
ｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、Ｄｏｖｅｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ
、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｗｉｌｌｉａｍｓら（１９６７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第１巻、Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＨａｒｌｏｗおよびＬ
ａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹを参照のこと。

【００８２】 ある場合には、マウス、げっ歯類、霊長類、ヒト等のような様々な哺乳動物宿
主からモノクローナル抗体を調製することが望ましい。そのようなモノクローナ
ル抗体を調製する技術の記載は、例えばＳｔｉｔｅｓら（編）Ｂａｓｉｃ ａｎ
ｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）、Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄ
ｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ、ＣＡ、およびそこ
で引用される参考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；Ｇ
ｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉ
ｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；および特にモノクローナル抗体を産生する１つの
方法を議論しているＮａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７のＫｏｈｌｅｒおよ
びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）に見出し得る。

【００８３】 他の適当な技術としては、リンパ球の抗原性ポリペプチドへのインビトロの曝
露、あるいはファージベクターまたは同様のベクターにおける抗体ライブラリー
の選択が挙げられる。Ｈｕｓｅら（１９８９）「ファージラムダにおける免疫グ
ロブリンレパートリーの大規模コンビナトリアルライブラリーの産生」Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕ
ｒｅ ３４１：５４４−５４６を参照のこと。本発明のポリペプチドおよび抗体
を、改変の有りまたは無しに使用し得、これには、キメラ抗体およびヒト抗体を
含む。しばしば、ポリペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナルを提供する物
質を共有結合かまたは非共有結合かのいずれかで結合することによって標識され
る。広範な種々の標識および結合技術が公知であり、そして科学文献および特許
文献の両方において広範囲に報告されている。適当な標識は、放射性核種、酵素
、基質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発光部分、磁気粒子等を含む。
そのような標識の使用を教示する特許は、米国特許第３，８１７，８３７号；同
第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５
号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；および同第４，３
６６，２４１号を含む。また、組換え免疫グロブリンを産生し得る。Ｃａｂｉｌ
ｌｙ、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｏｒｅら、米国特許第４，６４２
，３３４号；およびＱｕｅｅｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３を参照のこと。

【００８４】 本発明の抗体をまた、タンパク質の単離におけるアフィニティークロマトグラ
フィーに使用し得る。抗体が固体支持体に結合されるカラムを調製し得る。例え
ば、Ｗｉｌｃｈｅｋら（１９８４）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０４：３−５
５を参照のこと。抗体を精製するためにこの逆を使用し得る。

【００８５】 各ＩＬ−Ｄ８０に対して産生された抗体はまた、抗イディオタイプ抗体を惹起
するのに有用である。これらは、それぞれの抗原の発現に関連する様々な免疫学
的状態を検出または診断するのに有用である。

【００８６】 （ＶＩ．核酸） 記載されたペプチド配列および関連する試薬は、例えば天然の供給源からＩＬ
−Ｄ８０をコードするＤＮＡクローンを検出、単離、または同定するのに有用で
ある。典型的には、これらは哺乳動物から遺伝子を単離するのに有用であり、そ
して同様の手順を他の種、例えば鳥類および哺乳動物のような温血動物から遺伝
子を単離するのに適用する。クロスハイブリダイゼーションは、同じ、例えば多
型変異体、または他の種からＩＬ−Ｄ８０を単離することを可能にする。適当な
核酸クローンを首尾良く単離するために、多くの異なるアプローチが利用可能で
ある。

【００８７】 精製タンパク質または規定されたペプチドは、上記のように、標準的な方法に
よって抗体を産生するのに有用である。合成ペプチドまたは精製タンパク質を、
免疫系に提示して、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を産生し得る
。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；およびＨａｒｌｏｗ
およびＬａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照の
こと。

【００８８】 例えば、特異的結合組成物を、ＩＬ−Ｄ８０を発現する細胞株から作製された
発現ライブラリーをスクリーニングするために使用し得る。細胞内発現のスクリ
ーニングを、様々な染色または免疫蛍光手順によって行い得る。結合組成物を、
アフィニティー精製または表面融合タンパク質を発現する細胞を分類するために
使用し得る。

【００８９】 ペプチドセグメントをまた、ライブラリーをスクリーニングするための適切な
オリゴヌクレオチドを予測するために使用し得る。遺伝暗号を、スクリーニング
のプローブとして有用な適切なオリゴヌクレオチドを選択するために使用し得る
。例えば配列番号１、３、７、または９を参照のこと。ポリメラーゼ連鎖反応（
ＰＣＲ）技術と組み合わせて、合成オリゴヌクレオチドは、ライブラリーから正
しいクローンを選択するのに有用である。相補配列もまた、プローブ、プライマ
ー、またはアンチセンス鎖として使用する。例えば、アンカーベクターもしくは
ポリＡ相補ＰＣＲ技術または他のペプチドの相補的ＤＮＡと結合した、様々なフ
ラグメントが特に有用である。

【００９０】 本発明は、抗原性または生物学的に活性な対応するＩＬ−Ｄ８０ポリペプチド
、特に記載した配列の非翻訳５’部分をコードする部分を欠くものをコードする
、単離ＤＮＡまたは単離フラグメントの使用を意図する。それに加えて、本発明
は生物学的に活性なタンパク質またはポリペプチドをコードし、そして適当な条
件下で、本明細書中で記載されたＤＮＡ配列とハイブリダイズすることができる
、単離ＤＮＡまたは組換えＤＮＡを含む。上記の生物学的に活性なタンパク質ま
たはポリペプチドは、インタクトな抗原、またはフラグメントであり得、そして
例えば配列番号２、４、８、または１０で開示されたアミノ酸配列を有し、特に
成熟した分泌ポリペプチドを有する。さらに、本発明は、分泌ＩＬ−Ｄ８０と高
い同一性を示すタンパク質をコードする、単離もしくは組換えのＤＮＡ、または
それらのフラグメントの使用を含む。単離ＤＮＡは、５’および３’隣接部にそ
れぞれ調節配列、例えばプロモーター、エンハンサー、ポリＡ付加シグナルなど
を有し得る。あるいは、発現は、コードセグメントを異種プロモーターに作動可
能に連結することによって（例えば、内因性遺伝子由来の上流プロモーターを挿
入することによって）実施し得る。

【００９１】 「単離」核酸は、核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡまたは混合ポリマー）であり
、それは自然にネイティブな配列に付随する他の成分（例えば、リボソーム、ポ
リメラーゼ、および／またはもとの種由来の隣接するゲノム配列）から実質的に
分離している。その用語は、その天然に存在する環境から取り出された核酸配列
を含み、そして組換え体またはクローン化ＤＮＡ単離物および化学的に合成され
たアナログまたは異種由来の系によって生物学的に合成されたアナログを含む。
実質的に純粋な分子は、分子の単離された形を含む。一般的に、核酸はベクター
中または約５０ｋｂより短い、通常約３０ｋｂより短い、典型的には約１０ｋｂ
より少ない、そして好ましくは約６ｋｂより短い断片である。

【００９２】 単離核酸は、一般的には分子の均一な組成物であるが、ある実施形態では、少
ない不均一性を含む。この不均一性は、典型的にはポリマー末端または望ましい
生物学的機能または活性に重要でない部分に見出される。

【００９３】 「組換え」核酸は、その産生方法またはその構造のいずれかによって定義され
る。その産生方法、例えばある過程によって産生される産物に関して、その過程
は、ヌクレオチド配列におけるヒトの介入、典型的には選択または産生を含む、
組換え核酸技術の使用である。あるいは、それは、天然にはお互いに隣接しない
２つの断片の融合を含む配列の産生によって産生される核酸であり得るが、天然
の産物、例えば天然に存在する変異体を除くことを意味する。従って、任意の合
成オリゴヌクレオチド過程を用いて得られた配列を含む核酸と同様に、例えば任
意の天然に存在しないベクターを用いて細胞を形質転換することによって生成し
た産物が含まれる。同じかまたは保存的アミノ酸をコードする重複コドンでコド
ンを置換することが多くの場合行われるが、典型的には配列認識部位を導入また
は除去することが行われる。

【００９４】 あるいは、通常入手可能な天然の形で見出されない、所望の機能の組み合わせ
を含む単一の遺伝子（ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｎｔｉｔｙ）を産生するために、所望
の機能の核酸セグメントを一緒に結合させるためにそれを行う。制限酵素認識部
位は、しばしばそのような人工的操作の標的であるが、他の部位特異的標的、例
えばプロモーター、ＤＮＡ複製部位、調節配列、コントロール配列、または他の
有用な特徴を設計に組み込み得る。同様のコンセプトが組換え（例えば、融合）
ポリペプチドについて意図される。遺伝コードの重複性によって、これら抗原の
断片に類似したポリペプチドをコードする合成核酸、および様々な異なる種また
は多型変異体由来の配列の融合が特に含まれる。

【００９５】 核酸関連における有意な「断片」は、少なくとも約１７ヌクレオチド、一般的
に少なくとも約２２ヌクレオチド、普通少なくとも約２９ヌクレオチド、より多
くの場合少なくとも約３５ヌクレオチド、典型的には少なくとも約４１ヌクレオ
チド、通常少なくとも約４７ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５５ヌクレ
オチド、そして特に好ましい実施形態では少なくとも約６０以上のヌクレオチド
（例えば、６７、７３、８１、８９、９５等）の連続セグメントである。

【００９６】 ＩＬ−Ｄ８０タンパク質をコードするＤＮＡは、関連するかまたは同様のタン
パク質をコードする遺伝子、ｍＲＮＡ、およびｃＤＮＡ種、および異なる種由来
の相同的タンパク質をコードするＤＮＡを同定するのに特に有用である。霊長類
、げっ歯類、イヌ、ネコ、鳥類、および魚類を含む他の種においてホモログが存
在する。様々なＩＬ−Ｄ８０タンパク質が相同的であり、そして本明細書中に含
まれる。しかし、抗原に対してより遠い進化上の関係を有するタンパク質でさえ
、それらが十分相同性であるならば、これらの配列を用いて適当な条件下で容易
に単離し得る。霊長類ＩＬ−Ｄ８０タンパク質が特に興味深い。

【００９７】 例えばイントロンを含むゲノム配列に由来する組換えクローンは、例えばトラ
ンスジェニック細胞およびトランスジェニック生物を含むトランスジェニック研
究、および遺伝子治療に有用である。例えば、Ｒｏｉｔｔ（編）Ｅｎｃｙｃｌｏ
ｐｅｄｉａ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓ
ａｎ Ｄｉｅｇｏ、１５０２−１５０４頁のＧｏｏｄｎｏｗ（１９９２）「トラ
ンスジェニック動物」；Ｔｒａｖｉｓ（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１
３９２−１３９４；Ｋｕｈｎら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４５：７０７−
７１０；Ｃａｐｅｃｃｈｉ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２８８；Ｒ
ｏｂｅｒｔｓｏｎ（編、１９８７）Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ
Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐ
ｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９
９２）Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １０：１８０−１９９；およ
びＣｏｕｒｎｏｙｅｒおよびＣａｓｋｅｙ（１９９３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．１１：２９７−３２９を参照のこと。あるいは、発現は、例えば、内
因性遺伝子から上流にプロモーターを挿入することによって、コードセグメント
を異種由来のプロモーターに、作動可能に連結することによって実施され得る。
例えば、Ｔｒｅｃｏら、ＷＯ９６／２９４１１またはＵＳＳＮ０８／４０６，０
３０を参照のこと。

【００９８】 核酸配列比較関係における実質的な相同性（例えば、同一性）は、比較したと
き、適当なヌクレオチド挿入または欠失を伴って最適に整列した場合、そのセグ
メント、またはその相補鎖のいずれかが、少なくとも約５０％のヌクレオチド、
一般的に少なくとも約５８％、普通少なくとも約６５％、多くの場合少なくとも
約７１％、典型的には少なくとも約７７％、通常少なくとも約８５％、好ましく
は少なくとも約９５から９８％またはそれより多く、そして特定の実施形態では
約９９％またはそれ以上のヌクレオチドで同一であることを意味する。あるいは
、そのセグメントが、選択されたハイブリダイゼーション条件下で、鎖、または
その相補鎖に、典型的には例えば配列番号１、３、７、または９のＩＬ−Ｄ８０
の配列を用いて、ハイブリダイズする場合、実質的な相同性が存在する。典型的
には、少なくとも約３０ヌクレオチドの区間にわたり少なくとも約５５％、好ま
しくは約２５ヌクレオチドの区間にわたり少なくとも約７５％、そして最も好ま
しくは約２０ヌクレオチドにわたり少なくとも約９０％の同一性が存在する時、
選択的ハイブリダイゼーションが起こる。Ｋａｎｅｈｉｓａ（１９８４）Ｎｕｃ
．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：２０３−２１３を参照のこと。記載したように、
同一性比較の長さは、より長い区間にわたり得、そしてある実施形態では少なく
とも約１７ヌクレオチド、通常少なくとも約２８ヌクレオチド、典型的には少な
くとも約４０ヌクレオチド、そして好ましくは少なくとも約７５〜１００または
それ以上のヌクレオチドの区間である。

【００９９】 ハイブリダイゼーション関連の相同性に関して、ストリンジェントな条件は、
塩、温度、有機溶媒、および他のパラメーター、典型的にはハイブリダイゼーシ
ョン反応において調節される条件の、ストリンジェントな組み合わせた条件であ
る。ストリンジェントな温度条件は、通常、約３０℃を超える、通常約３７℃を
超える、典型的には約５５℃、６０℃、または６５℃を超える、そして好ましく
は約７０℃を超える温度を含む。ストリンジェントな塩条件は、普通約１０００
ｍＭより少なく、通常約４００ｍＭより少なく、典型的には約２５０ｍＭより少
なく、好ましくは、約１５０ｍＭより少なく、約１００ｍＭ、５０ｍＭ、または
２０ｍＭさえも含む。しかし、パラメーターの組み合わせが、任意の１つのパラ
メーターの計測値よりはるかに重要である。例えば、ＷｅｔｍｕｒおよびＤａｖ
ｉｄｓｏｎ（１９６８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１：３４９−３７０を参照の
こと。ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションは、バックグラウ
ンドに対して少なくとも２倍、好ましくは少なくとも３−５倍またはそれ以上の
バックグラウンドを与える。

【０１００】 配列比較に関して、典型的には１つの配列が、試験配列が比較される参照配列
として作用する。配列比較アルゴリズムを用いて、試験および参照配列がコンピ
ューターに入力される時、もし必要ならサブシークエンス座標が指定され、そし
て配列アルゴリズムプログラムパラメーターが指定される。配列比較アルゴリズ
ムは次いで、参照配列に関連する試験配列について配列同一性パーセントを、指
定されたプログラムパラメーターに基づいて計算する。

【０１０１】 比較のために配列の最適なアラインメントを、例えばＳｍｉｔｈおよびＷａｔ
ｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２の局所相同性
アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ
．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズムによっ
て、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性探索法によって、これらアル
ゴリズムのコンピューター化された実行によって（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎ
ｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＰａｃｋａｇｅのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、Ｆ
ＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏ
ｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ博士、ＷＩ）、または視覚的な
観察によって（一般的にはＡｕｓｕｂｅｌら、前出を参照のこと）行い得る。

【０１０２】 有用なアルゴリズムの１つの例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、累
進的な対のアラインメントを使用して、関連する配列のグループから複数の配列
アラインメントを作成し、関係および配列同一性パーセントを示す。それはまた
、アラインメントを作成するために使用された密集する関係を示すツリーまたは
系統樹をプロットする。ＰＩＬＥＵＰは、ＦｅｎｇおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ（
１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１−３６０の連続アラインメント
法の簡約化を使用する。その使用される方法は、ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒ
ｐ（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１−１５３により記載された方法と同様
である。そのプログラムは、それぞれ最長５，０００ヌクレオチドまたはアミノ
酸の、３００の配列までを整列し得る。複数アラインメント手順は、２つの整列
した配列の集団を産生する、２つの最も類似した配列の対のアラインメントから
始まる。この集団を次いで、次に最も関連した配列または整列配列の集団に対し
て整列させる。２つの配列の集団を、２つの個々の配列の、対のアラインメント
の単純な拡張によって整列させる。最終的なアラインメントを、一連の連続した
対のアラインメントによって達成する。そのプログラムは、配列比較の領域に関
して特定の配列およびそのアミノ酸またはヌクレオチド座標を指定することによ
って、およびプログラムパラメーターを指定することによって実行される。例え
ば、参照配列を他の試験配列と比較して、以下のパラメーターを使用して配列同
一性パーセントの関係を決定し得る：デフォルトギャップ重量（ｄｅｆａｕｌｔ
ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）（３．００）、デフォルトギャップ長重量（ｄｅｆａ
ｕｌｔ ｇａｐ ｌｅｎｇｔｈ ｗｅｉｇｈｔ）（０．１０）、および重量末端
ギャップ（ｗｅｉｇｈｔｅｄ ｅｎｄ ｇａｐｓ）。

【０１０３】 配列同一性パーセントおよび配列類似性を決定するのに適当な、他のアルゴリ
ズムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：
４０３−４１０に記載されているＢＬＡＳＴアルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ分
析を行うためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｎｃ
ｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を通して公に入手可能である。このアルゴリ
ズムは、まず問合せ（ｑｕｅｒｙ）配列中で長さＷの短いワードを同定すること
によって、ハイスコア配列対（ｈｉｇｈ ｓｃｏｒｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｐａｉｒｓ）（ＨＳＰｓ）を同定することを含む。これは、データベース配列に
おいて同じ長さのワードと整列した場合に、ある正の値の閾値スコアＴに一致す
るかまたは満たす。Ｔは隣接ワードスコア閾値（ｎｅｉｇｈｂｏｒｈｏｏｄ ｗ
ｏｒｄ ｓｃｏｒｅ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）と呼ばれる（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、
前出）。これら最初の隣接ワードヒット（ｎｅｉｇｈｂｏｒｈｏｏｄ ｗｏｒｄ
ｈｉｔｓ）は、それらを含むより長いＨＳＰｓを発見する探索を開始する種と
して作用する。ｗｏｒｄ ｈｉｔｓを次いで、累積アラインメントスコアが増加
し得る限り、各配列にそって両方向に拡張する。各方向へのｗｏｒｄ ｈｉｔｓ
の拡張は、以下の場合に停止される：累積アラインメントスコアがその最大達成
値よりＸ量だけ減少する場合；１つ以上のネガティブスコア残基アラインメント
の蓄積に起因して、累積スコアがゼロまたはそれ以下になる場合；またはいずれ
かの配列の末端に達した場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ、お
よびＸは、アラインメントの感受性およびスピードを決定する。ＢＬＡＳＴプロ
グラムは、デフォルトとして１１のワード長（ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ）（Ｗ）、
５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコア付けマトリックス（ｓｃｏｒｉｎｇ ｍａｔｒｉ
ｘ）（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５を参照のこと）アラインメ
ント（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、および両鎖の比較を使用す
る。

【０１０４】 配列同一性パーセント計算することに加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた
、２つの配列間の、類似性の統計学的分析を行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎおよび
Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ９０：５８７３−５７８７を参照のこと）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによっ
て提供される類似性の１つの測定値は、最少和可能性（ｓｍａｌｌｅｓｔ ｓｕ
ｍ ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ）（Ｐ（Ｎ））である。これは、２つのヌクレオチ
ドまたはアミノ酸配列間のマッチが偶然に起こる可能性の指標を示す。例えば、
試験核酸の参照核酸に対する比較におけるｓｍａｌｌｅｓｔ ｓｕｍ ｐｒｏｂ
ａｂｉｌｉｔｙが約０．１より低い、より好ましくは約０．０１より低い、そし
て最も好ましくは約０．００１より低いならば、核酸は参照配列と類似している
と判断される。

【０１０５】 ポリペプチドの２つの核酸配列が実質的に同一であることのさらなる指標は、
下記で記載するように、最初の核酸によってコードされるポリペプチドが、２番
目の核酸によってコードされるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であること
である。従って、例えば２つのペプチドが保存的置換によってのみ異なる場合、
ポリペプチドは、典型的には第２のポリペプチドと実質的に同一である。２つの
核酸配列が実質的に同一であることの他の指標は、下記で記載するように、２つ
の分子がストリンジェントな条件下でお互いにハイブリダイズすることである。

【０１０６】 他の哺乳類種由来のＩＬ−Ｄ８０を、密接に関連する種の種間ハイブリダイゼ
ーションによってクローニングおよび単離し得る。相同性は、遠く関連する種の
間では比較的低くあり得、従って比較的密接に関連した種のハイブリダイゼーシ
ョンが賢明である。あるいは、あまり種特異性を示さない抗体製剤（ｐｒｅｐａ
ｒａｔｉｏｎ）の調製が、発現クローニングアプローチに有用であり得る。

【０１０７】 （ＶＩＩ．ＩＬ−Ｄ８０の作成；模倣物） ＩＬ−Ｄ８０またはその断片をコードするＤＮＡを、化学的合成、ｃＤＮＡラ
イブラリーのスクリーニング、または広範な種々の細胞系統または組織試料から
調製したゲノムライブラリーのスクリーニングによって得ることができる。例え
ば、ＯｋａｙａｍａおよびＢｅｒｇ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．
２：１６１−１７０；ＧｕｂｌｅｒおよびＨｏｆｆｍａｎ（１９８３）Ｇｅｎｅ
２５：２６３−２６９；およびＧｌｏｖｅｒ（編、１９８４）ＤＮＡ Ｃｌｏ
ｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、
Ｏｘｆｏｒｄを参照のこと。あるいは、本明細書中で提供される配列は、有用な
ＰＣＲプライマーを提供するか、または、ＩＬ−Ｄ８０をコードする適当な遺伝
子の合成または他の調製を可能にし、これらには、天然に存在する実施形態が挙
げられる。

【０１０８】 次に例えばポリクローナルまたはモノクローナル抗体を産生するために使用さ
れ得る全長ＩＬ−Ｄ８０または断片の合成のために；結合研究のために；修飾分
子の構築および発現のために；そして構造／機能研究のために、このＤＮＡを広
範な種々の宿主細胞に発現し得る。効果的な分泌のためにシャペロンタンパク質
の必要性が存在し得るか、または細胞内区画からタンパク質を回収するためにさ
らなる工程が必要であり得る。

【０１０９】 本明細書中で使用される場合、ベクターは、プラスミド、ウイルス、バクテリ
オファージ、組み込み可能なＤＮＡ断片、および宿主ゲノムへのＤＮＡ断片の組
み込みが可能な他の担体を含む。例えば、Ｐｏｕｗｅｌｓら（１９８５および補
遺）Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａ
ｌ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．；およびＲｏｄｒｉｇｕｅｚら（編、１９８８
）Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉ
ｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ、Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒ
ｔｈ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡを参照のこと。

【０１１０】 本発明の目的のために、ＤＮＡ配列は、それらが互いに機能的に関連している
時、作動可能に連結されている。例えば、シグナルペプチド（ｐｒｅｓｅｑｅｎ
ｃｅ）または分泌リーダーのＤＮＡは、それがプレタンパク質として発現される
か、または細胞膜へのポリペプチドの方向付けに関与するかまたはポリペプチド
の分泌に関与する場合、ポリペプチドに作動可能に連結されている。プロモータ
ーは、それがポリペプチドの転写を調節する場合、コード配列と作動可能に連結
しており；リボソーム結合部位は、それが翻訳を可能にするように位置する場合
、コード配列と実施可能に連結している。通常、作動可能に連結されて（して）
いるとは、隣接およびリーディングフレーム内であることを意味するが、リプレ
ッサー遺伝子のようなある遺伝エレメントは、隣接して連結していないが依然と
して発現を調節するオペレーター配列に結合する。例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ
ら、第１０章、２０５−２３６頁；ＢａｌｂａｓおよびＢｏｌｉｖａｒ（１９９
０）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５：１４−３７、およ
びＡｕｓｕｂｅｌら（１９９３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ、Ｎ
Ｙを参照のこと。

【０１１１】 適当な発現ベクターの代表的な例としては、ｐＣＤＮＡ１；ｐＣＤ（Ｏｋａｙ
ａｍａら（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５：１１３６−１１４２を
参照のこと）；ｐＭＣ１ｎｅｏ Ｐｏｌｙ−Ａ（Ｔｈｏｍａｓら（１９８７）Ｃ
ｅｌｌ ５１：５０３−５１２を参照のこと）；およびｐＡＣ３７３またはｐＡ
Ｃ６１０のようなバキュロウイルスベターが挙げられる。例えば、Ｍｉｌｌｅｒ
（１９８８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４２：１７７−１９９を参
照のこと。

【０１１２】 特異的または規定されたグリコシル化パターンを提供するシステムでＩＬ−Ｄ
８０ポリペプチドを発現することが、多くの場合望ましい。例えば、Ｌｕｃｋｏ
ｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：４７
−５５；およびＫａｕｆｍａｎ（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８５
：４８７−５１１を参照のこと。

【０１１３】 ＩＬ−Ｄ８０またはその断片は、細胞膜に結合したホスファチジルイノシトー
ル（ＰＩ）へ操作され得るが、ホスファチジルイノシトール切断酵素（例えば、
ホスファチジルイノシトールホスホリパーゼＣ）を用いた処理によって膜から除
取り出され得る。これは、抗原を生物学的に活性な形で放出し、そしてタンパク
質化学の標準的手順による精製を可能にする。例えば、Ｌｏｗ（１９８９）Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ９８８：４２７−４５４；Ｔｓｅら（
１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１００３−１００８；およびＢｒｕｎｎｅ
ｒら（１９９１）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１１４：１２７５−１２８３を参照
のこと。

【０１１４】 ここで、ＩＬ−Ｄ８０が特徴付けられ、その断片または誘導体を、ペプチド合
成の従来の処理によって調製し得る。これらは、ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎ
ｇ（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｓｔｈｅｓｉｓ
、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ；Ｂｏｄ
ａｎｓｚｋｙおよびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ
ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｓｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａ
ｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉ
ｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｓｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖ
ｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＶｉｌｌａｆｒａｎｃａ（編、１９９１
）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＩＩ、
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａで記載されているよ
うな手順を含む。 （ＶＩＩＩ．使用） 本発明は、例えばＩＬ−Ｄ８０が媒介する状態、または下記の診断キットの記
載において、本明細書中の他の場所で記載されるように、診断的適用において用
途を見出す試薬を提供する。その遺伝子は、例えば、げっ歯類をヒトと区別する
ために、または異なる発現または修飾パターンを示す、異なる細胞間を区別する
マーカーとして、法科学において有用であり得る。

【０１１５】 本発明はまた、有意な商業および／または治療的可能性を有する試薬を提供す
る。ＩＬ−Ｄ８０（天然に存在するまたは組換えの）、その断片、およびそれに
対する抗体は、ＩＬ−Ｄ８０に結合親和性を有すると同定された化合物とともに
、分子生物学、免疫学、または生理学の技術を教える試薬として有用である。適
切なキットを、例えばタンパク質、抗体、クローニング法、組織学等の産生また
は使用の実際的な研究室実習において、試薬とともに調製し得る。

【０１１６】 その試薬はまた、炎症性状態を含む異常な生理学または発症に関連する状態の
治療に有用である。それらは、相互作用する成分の存在または非存在に関するイ
ンビトロ試験に有用であり得る。それは特定の治療戦略の成功と関連し得る。特
に、様々な、例えば造血またはリンパ性細胞の生理機能の調節を、本明細書中で
提供される組成物を用いる適当な治療法によって達成する。例えば、Ｔｈｏｍｓ
ｏｎ（編、１９８８）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第３版）
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ；ＭｅｔｃａｌｆおよびＮ
ｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ
Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒ
ｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；およびＡｇｇａｒｗａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍａｎ（１
９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂを参照
のこと。

【０１１７】 例えば、異常な発現またはＩＬ−Ｄ８０による異常なシグナル伝達に関連する
疾患または障害は、アゴニストまたはアンタゴニストについての標的であるよう
である。その新規サイトカインは造血細胞（例えばリンパ球）の調節または発生
に役割を果たし、造血細胞は免疫学的反応（例えば、炎症および／または自己免
疫疾患）に影響を与える。あるいは、これは血管生理学または発生、または神経
効果に影響を与え得る。

【０１１８】 特に、そのサイトカインは、様々な関連で、細胞によるサイトカイン合成、増
殖等を媒介する。ＩＬ−Ｄ８０の天然に存在する形のムテイン改変体、または阻
害抗体のようなＩＬ−Ｄ８０のアンタゴニストは、例えば炎症性または自己免疫
反応のような状況において、免疫反応を阻害する選択的および強力な方法を提供
し得る。Ｓａｍｔｅｒら（編）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ
第１および２巻、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏ．をも参照のこと
。

【０１１９】 例えば、ノーザンブロット分析によるｍＲＮＡ発現によって評価されるように
、ＩＬ−Ｄ８０を産生する異なる細胞型における、様々な異常な状態が公知であ
る。Ｂｅｒｋｏｗ（編）Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎ
ｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｒａｈｗａｙ、Ｎ．
Ｊ．；Ｔｈｏｒｎら、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉ
ｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｍｃｇｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎ．Ｙ．；およ
びＷｅａｔｈｅｒａｌｌら（編）Ｏｘｆｏｒｄ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｅ
ｄｉｃｉｎｅ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒ
ｄを参照のこと。多くの他の医学的状態および疾患が、マクロファージまたは単
球による活性化を含み、そしてこれらの多くが、本明細書中で提供されるアゴニ
ストまたはアンタゴニストによる治療に反応性である。例えば、Ｓｔｉｔｅｓお
よびＴｅｒｒ（編、１９９１）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、Ｃ
ｏｎｎｅｔｉｃｕｔ；およびＳａｍｔｅｒら（編）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏを参照のこと。
これらの問題は、本明細書中で提供される組成物を使用する予防または治療に感
受性である。

【０１２０】 ＩＬ−Ｄ８０、アンタゴニスト、抗体等は、精製し次いで患者、獣医のまたは
ヒトに投与し得る。これらの試薬を、治療的使用のために、例えば伝統的な薬剤
学的に許容できる担体または希釈剤、例えば免疫原性アジュバント中で、生理学
的に無害な安定化剤、賦形剤、または保存剤とともに、さらなる活性または不活
性成分と組み合わせ得る。これらの組み合せを滅菌濾過し、そして投薬バイアル
中における凍結乾燥によるように投薬形式に配置、または安定化水性調製物中で
保存し得る。本発明はまた、補体結合をしない形を含む、抗体またはその結合フ
ラグメントの使用を企図する。

【０１２１】 ＩＬ−Ｄ８０またはそのフラグメントを用いた薬剤のスクリーニングを、関連
する成分の単離を含んで、結合親和性を有する、またはＩＬ−Ｄ８０機能に対し
て他の関連する生物学的効果を有する化合物を同定するために実施し得る。次い
で続く生物学的アッセイを、その化合物が内因性の刺激活性を有するかどうか、
および従ってそのサイトカインの活性を阻害する阻害剤またはアンタゴニストで
あるかどうかを決定するために利用し得る。同様に、内因性刺激活性を有する化
合物は、シグナル伝達経路を活性化し得、そして従ってＩＬ−Ｄ８０の活性を刺
激するアゴニストである。本発明はさらに、アンタゴニストとしてのＩＬ−Ｄ８
０に対する阻害抗体およびアゴニストとしての刺激抗体の治療的使用を企図する
。このアプローチは、他のＩＬ−Ｄ８０種変異体で特に有用であるはずである。

【０１２２】 有効な治療に必要な試薬の量は、投与手段、標的部位、患者の生理的状態、お
よび投与される他の薬剤を含む、多くの異なる因子に依存する。従って、治療投
与量は、安全性および有効性を最適化するために滴定されるべきである。代表的
には、インビトロで使用される投与量が、これらの試薬のインサイチュ投与に有
用な量の、有用な指標を提供し得る。特定の障害の治療に関する有効な投与量の
動物試験は、ヒト投与量のさらに予期される指標を提供する。例えば、Ｇｉｌｍ
ａｎら（編）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、最新版
、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、最新版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉ
ｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎに様々な考慮事項が記載されている。投
与方法は、例えば経口、静脈内、腹腔内、または筋肉内投与、経皮拡散、および
他に関して、その中および下記で議論される。薬剤学的に許容できる担体は、水
、生理食塩水、緩衝液、および例えばＭｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃ
ｏ．、Ｒａｈｗａｙ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙで記載されている他の化合物を含む
。投与量範囲は、適当な担体とともに、普通１ｍＭ濃度より低い、代表的には約
１０μＭ濃度未満、通常約１００ｎＭ未満、好ましくは約１０ｐＭ（ピコモル）
未満、そして最も好ましくは約１ｆＭ（フェムトモル）未満であることが予期さ
れる。徐放性の処方または徐放性の装置が、連続的または長期投与のために多く
の場合利用される。例えばＬａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：
１５２７−１５３３を参照のこと。

【０１２３】 ＩＬ−Ｄ８０、そのフラグメント、およびそれに対する抗体またはそのフラグ
メント、アンタゴニスト、およびアゴニストを、治療される宿主へ直接投与し得
るか、または化合物の大きさに依存して、投与の前にそれらを卵アルブミンまた
は血清アルブミンのような担体タンパク質に結合させることが望ましくあり得る
。治療的処方を、多くの伝統的な投薬処方で投与し得る。活性成分を単独で投与
することが可能であるが、それを薬剤学的処方として提供することが好ましい。
処方は、代表的には上記で定義されたような少なくとも１つの活性成分を、１つ
以上のその許容できる担体とともに含む。各担体は、他の成分と適合性であり、
そして患者に有害でないという意味で、薬剤学的にもおよび生理学的にも許容可
能であるべきである。処方は、経口、直腸内、鼻腔内、局所、または非経口（皮
下、筋肉内、静脈内、および皮内を含む）投与に適当なものを含む。処方は、単
位投薬形式で簡便に提供され得、そして薬学の分野で周知のあらゆる方法によっ
て調製され得る。例えば、Ｇｉｌｍａｎら（編、１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ ａ
ｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅ
ｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ
；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎ
ｃｅｓ、第１７版（１９９０）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅ
ａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ．；Ａｖｉｓら（編、１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉ
ｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉ
ｏｎｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９
０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔ
ｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＬｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９
９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅ
ｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。本発
明の治療は、他の薬剤、例えばＩＬ−１１を含む他のサイトカイン、またはその
アンタゴニストと組み合わせ得る、またはそれと共同して使用し得る。

【０１２４】 本発明のＩＬ−Ｄ８０の天然に存在する形式および組換え形式はどちらも、化
合物をそのタンパク質への結合活性に関してスクリーニングすることができるキ
ットおよびアッセイ方法で特に有用である。自動化アッセイのいくつかの方法が
最近開発され、短い期間で何万もの化合物のスクリーニングを可能にした。例え
ば、Ｆｏｄｏｒら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３を参照
のこと。それは固体基板上で合成された複数の規定されたポリマーによる、結合
親和性の試験方法を記載している。適当なアッセイの開発は、本発明によって提
供されるような、大量の精製、可溶性ＩＬ−Ｄ８０が入手可能であることによっ
て非常に促進され得る。

【０１２５】 ＩＬ−Ｄ８０−ＩＬ−Ｄ８０受容体相互作用において決定的な残基を決定する
ために、他の方法を使用し得る。相互作用および／またはシグナル伝達において
決定的な特定の残基を決定するために、突然変異分析を行い得る。例えば、Ｓｏ
ｍｏｚａら（１９９３）Ｊ．Ｅｘｐｔｌ．Ｍｅｄ．１７８：５４９−５５８を参
照のこと。ＰＨＤ（ＲｏｓｔおよびＳａｎｄｅｒ（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
１９：５５−７２）およびＤＳＣ（ＫｉｎｇおよびＳｔｅｒｎｂｅｒｇ（１９
９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．５：２２９８−２３１０）は、αヘリックス（
Ｈ）、β鎖（Ｅ）またはコイル（Ｌ）の２次構造の予測を提供し得る。受容体相
互作用においてヘリックスＡおよびＤが最も重要であり、Ｄヘリックスがより重
要な領域である。様々なヘリックスの境界を上記で示す。表面に曝露された残基
は、受容体結合に影響し、一方埋め込まれた残基は一般的な構造に影響する。

【０１２６】 例えば、一旦抗原が構造的に定義されれば、例えば３次構造データによって、
アンタゴニストは普通見出され得る。可能性のある相互作用アナログの試験は、
精製ＩＬ−Ｄ８０を用いた高度に自動化されたアッセイ方法の開発によって現在
可能である。特に、新規アゴニストおよびアンタゴニストが、本明細書中で記載
されるスクリーニング技術を用いて発見される。ある範囲のＩＬ−Ｄ８０分子に
対してあわせた結合親和性を有することが見出された化合物、例えばＩＬ−Ｄ８
０の種変異体に対してアンタゴニストとして作用し得る化合物が特に重要である
。

【０１２７】 薬剤スクリーニングの１つの方法は、ＩＬ−Ｄ８０を発現する組換えＤＮＡ分
子で安定に形質転換した真核または原核宿主細胞を利用する。他の分子と離れて
ＩＬ−Ｄ８０を発現する細胞を単離し得る。そのような細胞を、生存可能なまた
は固定された形式のいずれかで、標準的な結合パートナー結合アッセイで使用し
得る。Ｐａｒｃｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：２４３−２４７；お
よびＯｗｉｃｋｉら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ８７：４００７−４０１１も参照のこと。それは細胞反応を検出する鋭敏
な方法を記載している。

【０１２８】 薬剤スクリーニングの別の技術は、ＩＬ−Ｄ８０に対して適当な結合親和性を
有する化合物のハイスループットスクリーニングを提供するアプローチを含み、
そしてそれは１９８４年９月１３日に公開されたＧｅｙｓｅｎ、欧州特許出願第
８４／０３５６４号に詳しく記載されている。まず、多くの異なる小さなペプチ
ド試験化合物を固体基板、例えばプラスチックピンまたは他の適当な表面上に合
成する。Ｆｏｄｏｒら（１９９１）を参照のこと。次いで全てのピンを可溶化未
精製ＩＬ−Ｄ８０、または可溶化精製ＩＬ−Ｄ８０と反応させ、そして洗浄する
。次の工程は、結合したＩＬ−Ｄ８０を検出することを含む。

【０１２９】 合理的な薬剤設計も、ＩＬ−Ｄ８０および他のエフェクターまたはアナログの
分子形の構造的研究に基づき得る。エフェクターは、結合に反応して他の機能を
媒介する他のタンパク質、または通常ＩＬ−Ｄ８０と相互作用する他のタンパク
質、例えば受容体であり得る。特定の他のタンパク質とどの部位が相互作用して
いるか決定する１つの方法は、物理的構造決定、例えばＸ線結晶学、または２次
元ＮＭＲ技術である。これらは、例えば他のサイトカイン−受容体モデルに対し
てモデルを作ったときに、どのアミノ酸残基が分子接触領域を形成するかに関し
て指標を提供する。タンパク質構造決定の詳しい記載に関しては、例えば、Ｂｌ
ｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９７６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａ
ｌｌｏｇｒａｐｈｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照
のこと。

【０１３０】 （ＩＸ．キット） 本発明はまた、別のＩＬ−Ｄ８０または結合パートナーの存在を検出するため
の、様々な診断キットおよび方法において、ＩＬ−Ｄ８０タンパク質、そのフラ
グメント、ペプチド、およびその融合産物の使用を企図する。代表的には、キッ
トは、規定されたＩＬ−Ｄ８０ペプチドもしくは遺伝子セグメントのいずれか、
またはどちらか１つ（例えばＩＬ−Ｄ８０フラグメントもしくは抗体）を認識す
る試薬を含む区画を有する。

【０１３１】 試験化合物のＩＬ−Ｄ８０への結合親和性を決定するキットは、代表的には試
験化合物；標識化合物、例えばＩＬ−Ｄ８０に対して公知の結合親和性を有する
結合パートナーまたは抗体；ＩＬ−Ｄ８０の供給源（天然に存在するものまたは
組換え体）；および分子を固定化する固相のような、遊離標識化合物から結合し
たものを分離する手段を含む。一旦化合物をスクリーニングすると、抗原に対し
て適当な結合親和性を有するものを、当該分野で周知であるような適当な生物学
的アッセイで評価して、それらがＩＬ−Ｄ８０シグナル伝達経路に対してアゴニ
ストまたはアンタゴニストとして作用するかどうか決定し得る。組換えＩＬ−Ｄ
８０ポリペプチドが入手可能であることはまた、そのようなアッセイを較正する
、よく規定された標準を提供する。

【０１３２】 試料中の、例えばＩＬ−Ｄ８０の濃度を決定する好ましいキットは、代表的に
は標識化合物、例えば抗原に対して公知の結合親和性を有する結合パートナーま
たは抗体、サイトカインの供給源（天然に存在するものまたは組換え体）、およ
びＩＬ−Ｄ８０を固定化する固相のような、遊離標識化合物から結合したものを
分離する手段を含む。試薬および指示を含む区画が正常に提供される。

【０１３３】 ＩＬ−Ｄ８０またはフラグメントに特異的な、抗原結合フラグメントを含む抗
体は、上昇したレベルのＩＬ−Ｄ８０および／またはそのフラグメントの存在を
検出する診断的適用に有用である。そのような診断的アッセイは、溶解物、生き
た細胞、固定細胞、免疫蛍光、細胞培養物、体液を採用し得、そしてさらに血清
等におけるその抗原に関連する抗原の検出を含み得る。診断アッセイは、同種（
遊離試薬および抗原−結合パートナー複合体間の分離工程なし）または異種（分
離工程あり）であり得る。ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合イムノソ
ルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）、酵素増
幅免疫測定法（ＥＭＩＴ）、基質標識蛍光イムノアッセイ（ＳＬＦＩＡ）等のよ
うな様々な市販のアッセイが存在する。例えば、Ｖａｎ Ｖｕｎａｋｉｓら（１
９８０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７０：１−５２５；ＨａｒｌｏｗおよびＬ
ａｎｅ（１９８０）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ；およびＣｏｌｉｇａｎら（編、１９９３）
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅ
ｎｅおよびＷｉｌｅｙ、ＮＹを参照のこと。

【０１３４】 抗イディオタイプ抗体を、様々な異常状態の診断になり得るので、ＩＬ−Ｄ８
０に対する抗体の存在を診断するために同様に使用し得る。例えば、ＩＬ−Ｄ８
０の過剰産生は、特に癌または異常な活性化または分化のような増殖細胞状態に
おいて、異常な生理的状態の診断となり得る様々な免疫反応の産生を引き起こし
得る。さらに、入手可能な分布パターンは、そのサイトカインは膵島に発現され
ているという情報を提供し、そのサイトカインはその臓器の機能、例えば糖尿病
に関連する医学的状態に関連し得る可能性を示唆する。

【０１３５】 多くの場合、アッセイの感受性を最適化するために、診断アッセイの試薬はキ
ットで供給される。本発明のために、アッセイの性質に依存して、プロトコール
、および標識、標識化もしくは未標識化抗体または結合パートナーのいずれか、
または標識化ＩＬ−Ｄ８０が提供される。これは普通、緩衝剤、安定化剤、酵素
の基質のようなシグナル産生に必要な材料等のような、他の添加剤と組み合わせ
られる。好ましくは、キットはまた、適当な使用および使用後の内容物の廃棄に
関する指示を含む。代表的には、キットは各有用な試薬のための区画を有する。
望ましくは、試薬は凍結乾燥粉末として提供される。ここで試薬は、アッセイを
行うのに適当な試薬濃度を提供する水性溶媒中で再構築され得る。

【０１３６】 薬剤スクリーニングおよび診断アッセイの、多くの前述の成分は、修飾無しで
使用し得る、または様々な方法で修飾し得る。例えば、標識は、直接または間接
的に検出可能なシグナルを提供する部分と共有または非共有結合させることによ
って達成し得る。いかなるこれらのアッセイにおいても、結合パートナー、試験
化合物、ＩＬ−Ｄ８０、またはそれに対する抗体は、直接または間接的に標識し
得る。直接標識の可能性は、標識グループ：¹²⁵Ｉのような放射性標識、ペルオ
キシダーゼおよびアルカリホスファターゼのような酵素（米国特許第３，６４５
，０９０号）、および蛍光強度の変化、波長の変化、または蛍光の偏光をモニタ
ーすることができる蛍光標識（米国特許第３，９４０，４７５号）を含む。間接
的標識の可能性は、１つの成分のビオチン化、続く上記の標識グループの１つと
結合したアビジンへの結合を含む。

【０１３７】 遊離ＩＬ−Ｄ８０から結合したものを、あるいは遊離試験化合物から結合した
ものを分離する多くの方法も存在する。ＩＬ−Ｄ８０を様々なマトリックスに固
定化、続いて洗浄し得る。適当なマトリックスは、ＥＬＩＳＡプレートのような
プラスチック、フィルター、およびビーズを含む。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（
編、１９９３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ、第１巻、第２章、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ、ＮＹを参照のこと
。他の適当な分離技術は、制限無しに、Ｒａｔｔｌｅら（１９８４）Ｃｌｉｎ．
Ｃｈｅｍ．３０：１４５７−１４６１で記載されたフルオレセイン抗体磁化可能
粒子法、および米国特許第４，６５９，６７８号で記載されたような二重抗体磁
気粒子分離を含む。

【０１３８】 タンパク質またはそのフラグメントを様々な標識に結合させる方法は、文献に
広く報告されており、そしてここで詳しく議論する必要はない。その技術の多く
は、結合のために、ペプチド結合を形成するためにカルボジイミドまたは活性エ
ステルの使用による活性化カルボキシル基の使用、メルカプト基のクロロアセチ
ルのような活性化ハロゲンまたはマレイミドのような活性化オレフィンとの反応
によるチオエーテルの形成等を含む。融合タンパク質もこれらの適用において使
用される。

【０１３９】 本発明の別の診断的局面は、ＩＬ−Ｄ８０の配列から取られたオリゴヌクレオ
チドまたはポリヌクレオチド配列の使用を含む。これらの配列を、異常な状態、
例えば炎症または自己免疫を有することが疑われる患者由来の試料中で、ＩＬ−
Ｄ８０メッセージのレベルを検出するプローブとして使用し得る。サイトカイン
は活性化のマーカーまたはメディエーターとなり得るので、例えば効果が有意に
なりそして進行する前に予防的な様式で、例えばいつ追加治療が要求され得るか
を決定するために、活性化細胞の数を決定するのに有用であり得る。ＲＮＡおよ
びＤＮＡヌクレオチド配列の両方の調製、配列の標識、および配列の好ましいサ
イズは、文献において豊富に記載および議論されている。例えば、Ｌａｎｇｅｒ
−Ｓａｆｅｒら（１９８２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７９：
４３８１−４３８５；Ｃａｓｋｅｙ（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３６：９６
２−９６７；およびＷｉｌｃｈｅｋら（１９８８）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
１７１：１−３２を参照のこと。

【０１４０】 他の分子の定性または定量的発現を試験する診断キットもまた企図される。診
断または予後はマーカーとして使用される複数の指標の組み合わせに依存し得る
。従って、キットはマーカーの組み合わせに関して試験し得る。例えば、Ｖｉａ
ｌｌｅｔら（１９８９）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ
Ｒｅｓ．１：８９−９を参照のこと。他の細胞サブセットを評価するために他
のキットを使用し得る。

【０１４１】 （Ｘ．ＩＬ−Ｄ８０受容体の単離） 特異的なリガンド−受容体相互作用のリガンドが単離されたなら、受容体を単
離する方法が存在する。Ｇｅａｒｉｎｇら（１９８９）ＥＭＢＯ Ｊ．８：３６
６７−３６７６を参照のこと。例えば、その受容体への結合を阻害することなく
ＩＬ−Ｄ８０サイトカインを標識する手段を決定し得る。例えば、親和性標識を
リガンドのアミノまたはカルボキシル末端のいずれかに融合し得る。そのような
標識は、ＦＬＡＧエピトープタグ、または、例えばＩｇまたはＦｃドメインであ
り得る。発現ライブラリーを、例えば細胞分類、または他のスクリーニングによ
って、サイトカインに対する特異的な結合に関してスクリーニングして、そのよ
うな結合成分を発現する部分集団を検出し得る。例えば、Ｈｏら（１９９３）Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１１２６７−１１２７
１；およびＬｉｕら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１８２１−２９
を参照のこと。あるいは、パニング法を使用し得る。例えば、ＳｅｅｄおよびＡ
ｒｕｆｆｏ（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
４：３３６５−３３６９を参照のこと。

【０１４２】 標識とのタンパク質架橋技術を適用して、ＩＬ−Ｄ８０サイトカインの結合パ
ートナーを単離し得る。これは、例えばリガンド−受容体様の方法でサイトカイ
ンと特異的に相互作用するタンパク質の同定を可能にする。ＩＬ−Ｄ８０はＩＬ
−１１Ｒαサブユニットまたは密接に相同的な受容体サブユニットに結合するこ
とが予期される。受容体のβサブユニットは、ｇｐ１３０であるようであり、お
そらくＬＩＦ受容体がさらなる受容体成分として関与している。

【０１４３】 初期の実験は、予期されるように、公知のＩＬ−１１受容体成分がＩＬ−Ｄ８
０への反応に関与しているかどうかを決定するために行われる。これらの機能的
受容体複合体が、特異的受容体サブユニットまたは補助受容体サブユニットのい
ずれか、ＩＬ−Ｄ８０受容体複合体と多くのまたは全ての成分を共有し得ること
も、かなり可能性がある。

【０１４４】 （実施例） （Ｉ．一般的な方法） 下記の標準的な方法の多くは、例えばＭａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９
）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ（第２版）第１−３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｂ
ｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、
Ｂｒｏｏｋｌｙｎ、ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および増刊）Ｃｕ
ｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
、Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ、ＮＹ；Ｉｎｎｉｓら（編、１９９０）ＰＣＲ Ｐ
ｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌ
ｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹにおいて記載または参
照されている。タンパク質精製方法は、硫酸アンモニウム沈殿、カラムクロマト
グラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などのような方法を含む。例えば、Ａ
ｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期的な増刊）；Ｄｕｅｔｓｃｈｅｒ（１９９
０）「タンパク質精製ガイド」、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ
、第１８２巻、およびこのシリーズの他の巻；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９５およ
び増刊）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ
；Ｐ．Ｍａｔｓｕｄａｉｒａ（編、１９９３）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉ
ｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉ
ｏｎ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；およびタンパク質精製製品を使用する時の製造
業者の文献、例えばＰｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、または
Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡを参照のこと。組換え技術との組み合
わせは、例えばプロテアーゼで除去し得る配列による、適当なセグメント（エピ
トープタグ）の、例えば融合され得るＦＬＡＧ配列または同等物への融合を可能
にする。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９８９）Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅ Ｉｎｄｕｓ
ｔｒｉｅ １２：６９−７０；Ｓｅｔｌｏｗ（編）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎ
ｅｅｒｉｎｇ， Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２：８７
−９８、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹのＨｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「金属
キレート吸収物質による組換えタンパク質の精製」；およびＣｒｏｗｅら（１９
９２）ＯＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：Ｔｈｅ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ Ｅｘｐｒｅｓｓ
ｉｏｎ ＆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ、ＱＵ
ＩＡＧＥＮ Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡを参照のこと。

【０１４５】 標準的な免疫学的技術は、例えば、Ｈｅｒｔｚｅｎｂｅｒｇら（編、１９９６
）Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ、第１−４巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ；Ｃｏｌｉ
ｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ、ＮＹ；およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅ
ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ 第７０、７３、７４、８４、９２、９３、１０８、１１６
、１２１、１３２、１５０、１６２、および１６３巻において記載されている。
サイトカインアッセイは、例えば、Ｔｈｏｍｓｏｎ（編、１９９８）Ｔｈｅ Ｃ
ｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第３版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、
Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ；Ｍｉｒｅ−ＳｌｕｉｓおよびＴｈｏｒｐｅ（１９９８）Ｃ
ｙｔｏｋｉｎｅｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ；Ｍｅ
ｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉ
ｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ、Ｃａｍｂｒｉｄ
ｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；およびＡｇｇａｒｗａｌおよびＧｕ
ｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ、Ｂｌａｃｋｗｅ
ｌｌ Ｐｕｂ．において記載されている。

【０１４６】 血管生物学的活性に関するアッセイは、当該分野で周知である。それらは、腫
瘍、または他の組織、例えば動脈平滑筋の増殖（例えばＫｏｙｏｍａら（１９９
６）Ｃｅｌｌ ８７：１０６９−１０７８を参照のこと）、血管上皮に対する単
球の接着（ＭｃＥｖｏｙら（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：２０６９
−２０７７を参照のこと）等における血管形成および血管形成抑制性（ａｎｇｉ
ｏｓｔａｔｉｃ）活性を含む。Ｒｏｓｓ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６２：８
０１−８０９；ＲｅｋｈｔｅｒおよびＧｏｒｄｏｎ（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐａ
ｔｈｏｌ．１４７：６６８−６７７；Ｔｈｙｂｅｒｇら（１９９０）Ａｔｈｅｒ
ｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １０：９６６−９９０；およびＧｕｍｂｉｎｅｒ（１９
９６）Ｃｅｌｌ ８４：３４５−３５７も参照のこと。

【０１４７】 神経細胞生物学的活性に関するアッセイは、例えばＷｏｕｔｅｒｌｏｏｄ（編
、１９９５）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、モジュール１０
、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；およびＮｅｕｒｏｍｅｔｈｏｄｓ、Ｈｕｍａｎａ
Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪにおいて記載されている。発生系の方法論は
、例えばＭｅｉｓａｍｉ（編）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｒｏｗ
ｔｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓｓ；およびＣｈｒｉｓｐｅｅｌｓ（編）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ
Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅにおいて記載されている。

【０１４８】 ＦＡＣＳ分析は、Ｍｅｌａｍｅｄら（１９９０）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒ
ｙ ａｎｄ Ｓｏｒｔｉｎｇ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ、ＮＹ；Ｓｈａｐｉｒｏ（１９８８）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙ
ｔｏｍｅｔｒｙ、Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；およびＲｏｂｉｎｓｏｎ
ら（１９９３）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹにおいて記載され
ている。

【０１４９】 （ＩＩ．ヒトＩＬ−Ｄ８０のクローニング） 霊長類、例えばヒト遺伝子の配列が、表１で提供される。これらの配列は配列
データベースから得られる。これらの配列は、遺伝子の細胞分布を決定するため
のＰＣＲプライマー、またはプローブの調製を可能にする。これらの配列は、メ
ッセージをコードするゲノムＤＮＡの単離を可能にする。

【０１５０】 プローブまたはＰＣＲプライマーを用いて、様々な組織または細胞型を探索（
ｐｒｏｂｅ）して細胞分布を決定する。ＰＣＲ産物を、例えばＴＡクローニング
キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてクローニングする。できたｃＤＮＡプ
ラスミドを、自動化シーケンサー（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に
おいて両端から配列決定する。

【０１５１】 （ＩＩＩ．ＩＬ−Ｄ８０の細胞発現） 霊長類ＩＬ−Ｄ８０をコードするｃＤＮＡに特異的な、適切なプローブまたは
プライマーを調製する。典型的には、プローブを例えばランダムプライミングに
よって標識する。

【０１５２】 サザン分析：１次増幅したｃＤＮＡライブラリー由来のＤＮＡ（５μｇ）を、
適切な制限酵素で消化して挿入物を放出し、１％アガロースゲルに泳動して、そ
してナイロン膜へ転写した（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ、
Ｋｅｅｎｅ、ＮＨ）。

【０１５３】 ヒトｍＲＮＡ単離のための試料は、以下のものを含み得る：末梢血単核細胞（
単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球、Ｂ細胞）、休止（Ｔ１００）；末梢血単核細
胞、２、６、１２時間抗ＣＤ３で活性化してプール（Ｔ１０１）；Ｔ細胞、ＴＨ
０クローンＭｏｔ７２、休止（Ｔ１０２）；Ｔ細胞、ＴＨ０クローンＭｏｔ７２
、３、６、１２時間抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３で活性化してプール（Ｔ１０３）
；Ｔ細胞、ＴＨ０クローンＭｏｔ７２、２、７、１２時間特異的ペプチドでアネ
ルギー処理してプール（Ｔ１０４）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６、休止（
Ｔ１０７）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６、３、６、１２時間抗ＣＤ２８お
よび抗ＣＤ３で活性化してプール（Ｔ１０８）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０
６、２、６、１２時間特異的なペプチドでアネルギー処理してプール（Ｔ１０９
）；Ｔ細胞、ＴＨ２クローンＨＹ９３５、休止（Ｔ１１０）；Ｔ細胞、ＴＨ２ク
ローンＨＹ９３５、２、７、１２時間抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３で活性化してプ
ール（Ｔ１１１）；Ｔ細胞腫瘍株ＪｕｒｋａｔおよびＨｕｔ７８、休止（Ｔ１１
７）；Ｔ細胞クローン、プールしたＡＤ１３０．２、Ｔｃ７８３．１２、Ｔｃ７
８３．１３、Ｔｃ７８３．５８、Ｔｃ７８２．６９、休止（Ｔ１１８）；Ｔ細胞
ランダムγδＴ細胞クローン、休止（Ｔ１１９）；ＣＤ２８−Ｔ細胞クローン；
脾臓細胞、休止（Ｂ１００）；脾臓細胞、抗ＣＤ４０およびＩＬ−４で活性化（
Ｂ１０１）；Ｂ細胞ＥＢＶ株、プールしたＷＴ４９、ＲＳＢ、ＪＹ、ＣＶＩＲ、
７２１．２２１、ＲＭ３、ＨＳＹ、休止（Ｂ１０２）；Ｂ細胞株ＪＹ、１、６時
間ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性化してプール（Ｂ１０３）；プールしたＮ
Ｋ２０クローン、休止（Ｋ１００）；プールしたＮＫ２０クローン、６時間ＰＭ
Ａおよびイオノマイシンで活性化（Ｋ１０１）；ＮＫＬクローン、ＬＧＬ白血病
患者の末梢血由来、ＩＬ−２処理（Ｋ１０６）；造血前駆細胞株ＴＦ１、１、６
時間ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性化してプール（Ｃ１００）；Ｕ９３７前
単球株、休止（Ｍ１００）；Ｕ９３７前単球株、１、６時間ＰＭＡおよびイオノ
マイシンで活性化してプール（Ｍ１０１）；溶出（ｅｌｕｔｒｉａｔｅ）単球、
１、２、６、１２、２４時間ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０で活性化してプー
ル（Ｍ１０２）；溶出単球、１、２、６、１２、２４時間ＬＰＳ、ＩＦＮγ、Ｉ
Ｌ−１０で活性化してプール（Ｍ１０３）；溶出単球、４、１６時間ＬＰＳ、Ｉ
ＦＮγ、抗ＩＬ−１０で活性化してプール（Ｍ１０６）；溶出単球、４、１６時
間ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０で活性化してプール（Ｍ１０７）；溶出（ｅｌ
ｕｔｒｉａｔｅ）単球、１時間ＬＰＳで活性化（Ｍ１０８）；溶出単球、６時間
ＬＰＳで活性化（Ｍ１０９）；ＤＣ７０％ ＣＤ１ａ＋、ＣＤ３４＋ ＧＭ−Ｃ
ＳＦ由来、ＴＮＦα １２日間、休止（Ｄ１０１）；ＤＣ７０％ ＣＤ１ａ＋、
ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ由来、ＴＮＦα １２日間、１時間ＰＭＡおよびイオ
ノマイシンで活性化（Ｄ１０２）；ＤＣ７０％ ＣＤ１ａ＋、ＣＤ３４＋ ＧＭ
−ＣＳＦ由来、ＴＮＦα １２日間、６時間ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性
化（Ｄ１０３）；ＤＣ９５％ ＣＤ１ａ＋、ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ由来、Ｔ
ＮＦα １２日間、ＦＡＣＳ分類、１、６時間ＰＭＡおよびイオノマイシンで活
性化してプール（Ｄ１０４）；ＤＣ９５％ ＣＤ１４＋、ｅｘ ＣＤ３４＋ Ｇ
Ｍ−ＣＳＦ、ＴＮＦα １２日間、ＦＡＣＳ分類、１、６時間ＰＭＡおよびイオ
ノマイシンで活性化してプール（Ｄ１０５）；ＤＣ ＣＤ１ａ＋ ＣＤ８６＋、
ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ由来、ＴＮＦα １２日間、ＦＡＣＳ分類、１、６時
間ＰＭＡおよびイオノマイシンで活性化してプール（Ｄ１０６）；単球ＧＭ−Ｃ
ＳＦ由来ＤＣ、ＩＬ−４ ５日間、休止（Ｄ１０７）；単球ＧＭ−ＣＳＦ由来Ｄ
Ｃ、ＩＬ−４ ５日間、休止（Ｄ１０８）；単球ＧＭ−ＣＳＦ由来ＤＣ、ＩＬ−
４ ５日間、４、１６時間ＬＰＳで活性化してプール（Ｄ１０９）；単球ＧＭ−
ＣＳＦ由来ＤＣ、ＩＬ−４ ５日間、４、１６時間ＴＮＦα、単球スープ（ｓｕ
ｐｅ）で活性化してプール（Ｄ１１０）；上皮細胞、未刺激；上皮細胞、ＩＬ−
１β活性化；肺線維芽細胞肉腫株ＭＲＣ５、１、６時間ＰＭＡおよびイオノマイ
シンで活性化してプール（Ｃ１０１）；腎臓上皮癌細胞株ＣＨＡ、１、６時間Ｐ
ＭＡおよびイオノマイシンで活性化してプール（Ｃ１０２）。

【０１５４】 げっ歯類、例えばマウスの対応物が同定され、そしてその分布を同様に評価す
る。マウスｍＲＮＡ単離の試料は、以下の物を含み得る：休止マウス線維芽Ｌ細
胞株（Ｃ２００）；Ｂｒａｆ：ＥＲ（エストロゲンレセプターに融合したＢｒａ
ｆ）トランスフェクト細胞、コントロール（Ｃ２０１）；脾臓由来Ｍｅｌ１４＋
未処理Ｔ細胞、休止（Ｔ２０９）；脾臓由来Ｍｅｌ１４＋未処理Ｔ細胞、ＴＨ１
細胞へ分極化（ｐｏｌａｒｉｚｅｄ）させるためにＩＦＮγ、ＩＬ−１２、およ
び抗ＩＬ−４で刺激、６、１２、２４時間ＩＦＮγおよびＩＬ−４へ曝露してプ
ール（Ｔ２１０）；脾臓由来Ｍｅｌ１４＋未処理Ｔ細胞、Ｔｈ２細胞へ分極化さ
せるためにＩＬ−４および抗ＩＦＮγで刺激、６、１３、２４時間ＩＬ−４およ
び抗ＩＦＮγへ曝露してプール（Ｔ２１１）；Ｔ細胞、ＴＨ１分極化（脾臓由来
のＭｅｌ１４光（ｂｒｉｇｈｔ）ＣＤ４＋細胞、ＩＦＮγおよび抗ＩＬ−４で７
日間分極化；Ｔ２００）；Ｔ細胞、ＴＨ２分極化（脾臓由来のＭｅｌ１４光ＣＤ
４＋細胞、ＩＬ−４および抗ＩＦＮγで７日間分極化；Ｔ２０１）；Ｔ細胞、ト
ランスジェニックＢａｌｂ／Ｃ由来の高度にＴＨ１分極化３×（Ｏｐｅｎｓｈａ
ｗら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３５７−１３６７を参照のこ
と；２、６、２４時間抗ＣＤ３で活性化してプール；Ｔ２０２）；Ｔ細胞、トラ
ンスジェニックＢａｌｂ／Ｃ由来の高度にＴＨ２分極化３×（２、６、２４時間
抗ＣＤ３で活性化してプール；Ｔ２０３）；Ｔ細胞、トランスジェニックＣ５７
ｂｌ／６由来の高度にＴＨ１分極化３×（２、６、２４時間抗ＣＤ３で活性化し
てプール；Ｔ２１２）；Ｔ細胞、トランスジェニックＣ５７ｂｌ／６由来の高度
にＴＨ２分極化３×（２、６、２４時間抗ＣＤ３で活性化してプール；Ｔ２１３
）；Ｔ細胞、高度にＴＨ１分極化（トランスジェニックＢａｌｂ／Ｃ由来の未処
理ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＩＦＮγ、ＩＬ−１２、および抗ＩＬ−４で分極化３×；６
、１２、２４時間ＩＧＩＦ、ＩＬ−１２、および抗ＩＬ−４で刺激、プール）；
ＣＤ４４− ＣＤ２５＋ 前駆Ｔ細胞、胸腺から分類（Ｔ２０４）；ＴＨ１ Ｔ
細胞クローンＤ１．１、抗原による最後の刺激から３週間休止（Ｔ２０５）；Ｔ
Ｈ１ Ｔ細胞クローン Ｄ１．１、１５時間 １０μｇ／ｍｌのＣｏｎＡ刺激（
Ｔ２０６）；ＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５、抗原による最後の刺激から３
週間休止（Ｔ２０７）；ＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５、１５時間 １０μ
ｇ／ｍｌのＣｏｎＡ刺激（Ｔ２０８）；未刺激Ｂ細胞株ＣＨ１２（Ｂ２０１）；
未刺激成熟Ｂ細胞白血病細胞株Ａ２０（Ｂ２００）；脾臓由来の未刺激ラージＢ
細胞（Ｂ２０２）；全脾臓由来のＢ細胞、ＬＰＳ刺激（Ｂ２０３）；脾臓由来メ
トリザマイド濃縮樹状細胞、休止（Ｄ２００）；骨髄由来樹状細胞、休止（Ｄ２
０１）；抗Ｂ２２０、抗ＣＤ３、および抗クラスＩＩで枯渇した未刺激骨髄由来
樹状細胞、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４中で培養（Ｄ２０２）；抗Ｂ２２０、抗
ＣＤ３、および抗クラスＩＩで枯渇した骨髄由来樹状細胞、ＧＭ−ＣＳＦおよび
ＩＬ−４中で培養、１、５時間抗ＣＤ４０で刺激、プール（Ｄ２０３）；ＬＰＳ
で４時間活性化した単球細胞株ＲＡＷ２６４．７（Ｍ２００）；ＧＭおよびＭ−
ＣＳＦで得た骨髄マクロファージ（Ｍ２０１）；ＧＭ−ＣＳＦで得た骨髄マクロ
ファージ、２４時間ＬＰＳ、ＩＦＮγ、およびＩＬ−１０で刺激（Ｍ２０５）；
ＧＭ−ＣＳＦで得た骨髄マクロファージ、２４時間ＬＰＳ、ＩＦＮγ、および抗
ＩＬ−１０で刺激（Ｍ２０６）；腹腔マクロファージ（Ｍ２０７）；マクロファ
ージ細胞株Ｊ７７４、休止（Ｍ２０２）；０．５、１、３、６、１２時間のマク
ロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ−１０、プール（Ｍ２０３）；０．
５、１、３、５、１２時間のマクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋ＩＬ−１
０、プール（Ｍ２０４）；未刺激肥満細胞株ＭＣ−９およびＭＣＰ−１２（Ｍ２
０８）；脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株、未刺激（Ｅ２００）；脳
微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株、ＴＮＦαで一晩刺激（Ｅ２０１）；
脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株、ＴＮＦαで一晩刺激（Ｅ２０２）
；脳微小血管内皮細胞由来の不死化内皮細胞株、ＴＮＦαおよびＩＬ−１０で一
晩刺激（Ｅ２０３）；ｗｔＣ５７ｂｌ／６マウス由来の全大動脈；５ヶ月齢Ａｐ
ｏＥ ＫＯ マウス由来の全大動脈（Ｘ２０７）；１２ヶ月齢ＡｐｏＥ ＫＯ
マウス由来の全大動脈（Ｘ２０７）；ｗｔ胸腺（Ｏ２１４）；全胸腺、ｒａｇ−
１（Ｏ２０８）；全腎臓、ｒａｇ−１（Ｏ２０９）；全腎臓、ＮＺ Ｂ／Ｗマウ
ス；および全心臓、ｒａｇ−１（Ｏ２０２）。ＬＰＳで４時間活性化した単球細
胞株ＲＡＷ２６４．７（Ｍ２００）；Ｔ細胞、トランスジェニックＣ５７ｂｌ／
６由来の高度にＴＨ１分極化３×（２、６、２４時間抗ＣＤ３で活性化してプー
ル；Ｔ２１２）；およびＴ細胞、高度にＴＨ１分極化（トランスジェニックＢａ
ｌｂ／Ｃ由来の未処理ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＩＦＮγ、ＩＬ−１２、および抗ＩＬ−
４で分極化３×；ＩＧＩＦ、ＩＬ−１２、および抗ＩＬ−４で６、１２、２４時
間刺激してプール）で高いシグナルが検出された。

【０１５５】 （ＩＶ．ＩＬ−Ｄ８０の染色体マッピング） 単離されたＩＬ−Ｄ８０をコードするｃＤＮＡを使用する。染色体マッピング
は標準的な技術である。例えば、ＢＩＯＳ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｎｅｗ
Ｈａｖｅｎ、ＣＴ）およびマウス体細胞ハイブリッドパネルをＰＣＲと共に使
用する方法を参照のこと。

【０１５６】 （Ｖ．ＩＬ−Ｄ８０タンパク質の精製） 複数のトランスフェクトした細胞株を、他の細胞に比べて高いレベルでサイト
カインを発現するものに関してスクリーニングする。様々な細胞株を、操作に好
ましい性質に関してスクリーニングおよび選択する。天然ＩＬ−Ｄ８０を天然の
供給源から、または適切な発現ベクターを用いて形質転換した細胞からの発現に
よって単離し得る。発現タンパク質の精製は、標準的な手順によって達成され得
る、または細胞溶解物または上清から高い効率で効率的に精製するために遺伝子
工学の手段と組み合わせられ得る。ＦＬＡＧ、またはＨｉｓ₆セグメントをその
ような精製の特徴のために使用し得る。あるいは、アフィニティークロマトグラ
フィーを、特異的な抗体と共に使用し得る。下記を参照のこと。

【０１５７】 タンパク質を、望むように、大腸菌、昆虫細胞、または哺乳動物発現系で産生
する。ＩＬ−Ｄ８０構築物を、エピトープタグ付加（ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）、例
えばＦＬＡＧと共に調製した。その構築物を一過的に２９３細胞に発現させ、そ
してタグイムノアフィニティーカラム技術を用いて上清から精製した。高度に精
製されたタンパク質を得た。

【０１５８】 （ＶＩ．相同なＩＬ−Ｄ８０遺伝子の単離） ＩＬ−Ｄ８０ ｃＤＮＡ、または他の種の対応する配列を、望ましい供給源由
来のライブラリー、例えば霊長類細胞ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングす
るためのハイブリダイゼーションプローブとして使用し得る。多くの異なる種を
、容易なハイブリダイゼーションに必要なストリンジェンシーに関して、そして
プローブを用いて存在に関してスクリーニングし得る。適切なハイブリダイゼー
ション条件を、クロスハイブリダイゼーションの特異性を示すクローンを選択す
るために使用する。

【０１５９】 ペプチド配列に基づく縮重プローブを用いたハイブリダイゼーションによるス
クリーニングはまた、適切なクローンの単離を可能にする。あるいは、ＰＣＲス
クリーニングに適切なプライマーの使用は、適切な核酸クローンの濃縮を生じる
。

【０１６０】 種変異体、多型変異体、または対立遺伝子変異体のいずれかを単離するのに、
同様の方法を適用できる。種変異体を、プローブとして１つの種由来の全長単離
物またはフラグメントの単離に基づく種間ハイブリダイゼーション技術を用いて
単離する。

【０１６１】 あるいは、ヒトＩＬ−Ｄ８０に対して産生した抗体を、例えば適切なｃＤＮＡ
ライブラリーから交差反応性タンパク質を発現する細胞をスクリーニングするた
めに使用する。精製タンパク質または規定されたペプチドは、上記で記載された
ような、標準的な方法によって抗体を産生するのに有用である。合成ペプチドま
たは精製タンパク質を、免疫系に提示して、モノクローナルまたはポリクローナ
ル抗体を産生する。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；お
よびＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐ
ｒｅｓｓを参照のこと。生じた抗体を、記載されたように、スクリーニング、精
製、または診断に使用する。

【０１６２】 （ＶＩＩ．ＩＬ−Ｄ８０に特異的な抗体の調製） 合成ペプチドまたは精製タンパク質を免疫系に提示してモノクローナルまたは
ポリクローナル抗体を産生する。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒ
ｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒ
ｅｅｎｅ；およびＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。ポリクローナル血清、またはハイブリドー
マを調製し得る。適切な状況で、結合試薬は、例えば蛍光または他の方法で、上
記で記載されたように標識されるか、またはパニング法のために基材に固定化さ
れる。免疫選択、吸着、および関連する技術が、例えば結合の選択性の望ましい
スペクトルを示す選択的試薬を調製するために利用可能である。

【０１６３】 （ＶＩＩＩ．生物学的機能の範囲の評価） ＩＬ−Ｄ８０の生物学的活性を、部分的にはＩＬ−Ｄ８０とＩＬ−１１との間
の配列および構造的相同性に基づいて試験する。最初に、ＩＬ−１１の生物学的
活性を示すアッセイを試験する。例えば、Ｔｈｏｍｓｏｎ、Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋ
ｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ａｃａｄｅｍｉｃ ＰｒｅｓｓのＪａｃｏｂｓｅｎ
（１９９８）を参照のこと。

【０１６４】 （Ａ．前駆細胞の増殖／分化に対する効果） 様々な細胞型の増殖または分化に対する効果を、様々なサイトカイン濃度で評
価する。用量応答性分析を、ある場合には他のサイトカイン、例えば関連するサ
イトカインＩＬ−１１と相乗作用を示すものと組み合わせて実施する。これらは
、例えばＩＬ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＬＩＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ
−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＴＰＯ、Ｋｉｔリガンド、またはＦｌｔリ
ガンドを含む。

【０１６５】 特に、ＩＬ−１１は幹細胞において相乗的活性を示す。ＩＬ−Ｄ８０を臍帯血
細胞で試験し、ＩＬ−１１から得られた初期の前駆細胞の増殖または分化に効果
があるかどうかを見る。好ましくは、細胞は初期前駆細胞、例えば臍帯血、骨髄
、胸腺、脾臓、またはＣＤ３４＋前駆細胞由来の、例えば幹細胞である。サイト
カインを、Ｂ細胞前駆細胞を含む骨髄および／または赤血球前駆細胞に対する効
果に関して試験する。

【０１６６】 （Ｂ．巨核球の増殖に対するＩＬ−Ｄ８０の効果） 全ＰＢＭＣを、正常健康ドナーの軟膜から、記載されたようにフィコール−ハ
イパーク（ｆｉｃｏｌｌ−ｈｙｐａｑｕｅ）による遠心によって単離する（Ｂｏ
ｙｕｍら）。ＰＢＭＣを、ＩＬ−Ｄ８０の存在または非存在下で、単独または他
のサイトカインと組み合わせて、９６穴プレート（Ｆａｌｃｏｎ、Ｂｅｃｔｏｎ
−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＮＪ）で、１％のヒトＡＢ血清を含む２００μｌのＹｓ
ｓｅｌ培地（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｃａｌａｂａｓａｓ、Ｃ
Ａ）中で培養する。細胞を、培地単独または１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ
Ｓｙｓｔｅｍｓ）と組み合わせて１２０時間培養する。３Ｈ−チミジン（０．
１ｍＣｉ）を、培養の最後の６時間に加え、そして３Ｈ−チミジンの組み込みを
液体シンチレーション計測によって決定する。

【０１６７】 ネイティブ、組換え、および融合タンパク質を、多くの他の生物学的アッセイ
システムにおいて、例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ、マクロファージ、樹状細胞、
造血前駆体等におけるアゴニストおよびアンタゴニスト活性に関して試験する。

【０１６８】 ＩＬ−Ｄ８０を、ＩＬ−１１レセプターおよびコントロールを発現するトラン
スフェクトした細胞において、アゴニストまたはアンタゴニスト活性に関して評
価する。

【０１６９】 ＩＬ−Ｄ８０を、マクロファージ／樹状細胞活性化および抗原提示アッセイ、
抗原または同種異系刺激に反応するＴ細胞サイトカイン産生および増殖における
影響に関して、単独または他のサイトカインと組み合わせて評価する。例えば、
ｄｅ Ｗａａｌ Ｍａｌｅｆｙｔら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：
１２０９−１２２０；ｄｅ Ｗａａｌ Ｍａｌｅｆｙｔら（１９９１）Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．１７４：９１５−９２４；Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏら（１９９１）Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：３８１５−３８２２；Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏら（１
９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：３４４４−３４５１；およびＧｒｏｕｘ
ら（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：１９−２９を参照のこと。

【０１７０】 ＩＬ−Ｄ８０をまた、ＮＫ細胞刺激における効果に関して評価する。アッセイ
は、例えばＨｓｕら（１９９２）Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：５６
３−５６９；およびＳｃｈｗａｒｚら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．
１６：９５−１０４に基づき得る。細胞傷害性Ｔ細胞およびＬＡＫ細胞における
効果を評価するために、他のアッセイを適用する。例えば、Ｎａｍｉｅｎおよび
Ｍｉｒｅ−Ｓｌｕｉｓ（１９９８）を参照のこと。

【０１７１】 Ｂ細胞の増殖および分化効果を、例えば、ＩｇＧ２およびＩｇＡ２スイッチ因
子アッセイを含む、例えばＤｅｆｒａｎｃｅら（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ
．１７５：６７１−６８２；Ｒｏｕｓｓｅｔら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’
ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１８９０−１８９３において記載された
方法論によって、分析する。ＣＯＳ７上清と異なり、ＮＩＨ３Ｔ３およびＣＯＰ
上清は明らかにヒトＢ細胞アッセイを妨害しないことに注意すること。

【０１７２】 （Ｃ．ヒト単球の細胞表面分子の発現に対する効果） 単球を、正常健康ドナーの末梢血単核細胞からネガティブセレクションによっ
て精製する。簡単には、３×１０⁸のフィコールバンド化（ｂａｎｄｅｄ）単核
細胞を、氷上で例えば２００μｌのαＣＤ２（Ｌｅｕ−５Ａ）、２００μｌのα
ＣＤ３（Ｌｅｕ−４）、１００μｌのαＣＤ８（Ｌｅｕ ２ａ）、１００μｌの
αＣＤ１９（Ｌｅｕ−１２）、１００μｌのαＣＤ２０（Ｌｅｕ−１６）、１０
０μｌのαＣＤ５６（Ｌｅｕ−１９）、１００μｌのαＣＤ６７（ＩＯＭ ６７
；Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ、Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ、ＭＥ）、および抗グリコホリン
抗体（１０Ｆ７ＭＮ、ＡＴＣＣ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を含むモノクロー
ナル抗体の反応混液（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ
Ｖｉｅｗ、ＣＡ）と共にインキュベートする。抗体に結合した細胞を洗浄し、そ
して次いでヒツジ抗マウスＩｇＧを結合した磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ、Ｏｓｌｏ
、Ｎｏｒｗａｙ）と共に、ビーズ対細胞の比が２０：１でインキュベートする。
抗体に結合した細胞を、磁場の適用によって単球から分離する。続いて、ヒト単
球を、ＩＬ−Ｄ８０の存在または非存在下で、単独または他のサイトカインと組
み合わせて、１％ヒトＡＢ血清を含むＹｓｓｅｌ培地（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐ
ｒｏｄｕｃｔｓ、Ｃａｌａｂａｓａｓ、ＣＡ）中で培養する。

【０１７３】 細胞表面分子の発現の分析を、直接免疫蛍光検査によって行い得る。例えば、
２×１０⁵の精製ヒト単球を、１％のヒト血清を含むリン酸緩衝化生理食塩水（
ＰＢＳ）中で、氷上で２０分間インキュベートする。細胞を２００×ｇでペレッ
ト化する。細胞を２０ｍｌのＰＥまたはＦＩＴＣ標識ｍＡｂに再懸濁する。さら
に氷上で２０分間インキュベートした後、細胞を、１％ヒト血清を含むＰＢＳ中
で洗浄し、続いてＰＢＳ単独で２回洗浄する。細胞を、１％のパラホルムアルデ
ヒドを含むＰＢＳ中で固定化し、そしてＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（
Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）で分
析する。代表的なｍＡｂを使用する。例えば：Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏ
ｎからのＣＤ１１ｂ（抗ｍａｃ１）、ＣＤ１１ｃ（抗ｇｐ１５０／９５）、ＣＤ
１４（Ｌｅｕ−Ｍ３）、ＣＤ５４（Ｌｅｕ ５４）、ＣＤ８０（抗ＢＢ１／Ｂ７
）、ＨＬＡ−ＤＲ（Ｌ２４３）、およびＣＤ８６（ＦＵＮ１；Ｐｈａｒｍｉｎｇ
ｅｎ）、ＣＤ６４（３２．２；Ｍｅｄａｒｅｘ）、ＣＤ４０（ｍＡｂ８９；Ｓｃ
ｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ Ｆｒａｎｃｅ）。

【０１７４】 （Ｄ．ヒト単球によるサイトカイン産生におけるＩＬ−Ｄ８０の効果） ヒト単球を、記載したように単離し、そしてＩＬ−Ｄ８０（１／１００希釈バ
キュロウイルス発現材料）の存在または非存在下で１％ヒトＡＢ血清を含むＹｓ
ｓｅｌ培地（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｃａｌａｂａｓａｓ、Ｃ
Ａ）中で培養する。それに加えて、単球を、ＩＬ−Ｄ８０の存在または非存在下
でＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ ０１２７：Ｂ８ Ｄｉｆｃｏ）で刺激し、そして細胞
培養上清中のサイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦ、
およびＩＬ−１０）濃度をＥＬＩＳＡによって決定する。

【０１７５】 サイトカインの細胞質内染色のために、単球を、ＩＬ−Ｄ８０およびＬＰＳ（
Ｅ．ｃｏｌｉ ０１２７：Ｂ８ Ｄｉｆｃｏ）および１０ｍｇ／ｍｌのブレフェ
ルジンＡ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ、
ＷＩ）の存在または非存在下で、Ｙｓｓｅｌ培地中で１２時間培養する（１００
万／ｍｌ）。細胞をＰＢＳ中で洗浄して、そして２％のホルムアルデヒド／ＰＢ
Ｓ溶液中で、室温で２０分間インキュベートする。続いて細胞を洗浄し、透過化
処理緩衝液（ＰＢＳ／ＢＳＡ（０．５％）／アジド（１ｍＭ）中０．５％のサポ
ニン（Ｓｉｇｍａ））に再懸濁し、そして室温で２０分間インキュベートする。
細胞（２×１０⁵）を遠心分離して、そして透過化緩衝液中で１：１０に希釈し
た２０ｍｌの直接結合抗サイトカインｍＡｂに、室温で２０分間再懸濁する。以
下の抗体を使用し得る：ＩＬ−１α−ＰＥ（３６４−３Ｂ３−１４）；ＩＬ−６
−ＰＥ（ＭＱ２−１３Ａ５）；ＴＮＦα−ＰＥ（ＭＡｂ１１）；ＧＭ−ＣＳＦ−
ＰＥ（ＢＶＤ２−２１Ｃ１１）；およびＩＬ−１２−ＰＥ（Ｃ１１．５．１４；
Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）。続いて、細胞を透過化緩
衝液中で２回、およびＰＢＳ／ＢＳＡ／アジド中で１回洗浄し、そしてＦＡＣＳ
ｃａｎフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏｕｎｔ
ａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）で分析する。

【０１７６】 骨リモデリング、軟骨細胞（ｃｈｏｎｄｒｉｏｃｙｔｅ）、ニューロン、脂肪
細胞、胃腸上皮、または気管支上皮の領域で、さらなるアッセイを試験する。

【０１７７】 （ＩＸ．遺伝子改変した動物の作製および分析） トランスジェニックマウスを標準的な方法によって作製し得る。そのような動
物は、特定の組織における、または完全に生物体全体で、遺伝子の欠失の効果を
決定するのに有用である。そのようなものは、動物または特定の組織の、様々な
段階における発生に興味深い洞察を提供し得る。さらに、生物学的ストレスに対
する様々な反応に対する効果を評価し得る。例えば、Ｈｏｇａｎら（１９９５）
Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ：Ａ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。

【０１７８】 本明細書中で引用された全ての参考文献は、個々の出版物または特許出願それ
ぞれが、全体として全ての目的のために参考文献に援用されると明確にそして個
々に示されたように同じ程度、本明細書中で参考文献に援用される。

【０１７９】 当業者に明らかであるように、本発明の多くの修飾および変化が、その意図お
よび範囲から逸脱することなく行われ得る。本明細書中で記載された特定の実施
態様は、例示のためにのみ提供され、そして本発明は、このような請求が権利を
与えられる同等物の全範囲とともに、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ
制限される。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｑ 1/68 5/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ， ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，Ｌ Ｃ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ， ＲＯ，ＲＵ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，Ｔ Ｍ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者 ティマンズ， ジャクリン シー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94043， マウンテン ビュー， カンナ コート 1538 (72)発明者 キャステレイン， ロバート エイ． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94062， レッドウッド シティ， サミット ド ライブ 463 (72)発明者 バザン， ジェイ． フェルナンド アメリカ合衆国 カリフォルニア 94025， メンロ パーク， ユニバーシティ ド ライブ 775 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA21 BA31 BA41 CA01 GA11 HA12 HA15 4B063 QA01 QA18 QQ42 QR32 QR56 QS33 QS34 QX01 4B064 AG31 CA19 CC24 DA13 4B065 AA90Y AB01 AC14 BA02 BB19 CA24 CA44 CA46 4H045 AA11 BA17 BA18 CA40 DA86 EA20 EA50 FA74

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２、４、８、または１０に由来する成熟ポリペプチ
   ドに由来する少なくとも１７個連続したアミノ酸を含む抗原性ポリペプチドをコ
   ードする、単離されたポリヌクレオチドまたは組換えポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 配列番号２、４、８、または１０に由来する成熟ポリペプチ
   ドをコードする、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 ５５℃、５００ｍＭ未満の塩、および５０％ホルムアミドに
   おいて、配列番号１、３、７、または９のコード部分にハイブリダイズする、請
   求項１に記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 配列番号１、３、７、または９のコード部分の少なくとも３
   ５個連続したヌクレオチドを含む、請求項３に記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 請求項１に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
6. 【請求項６】 請求項５に記載の発現ベクターを含む宿主細胞であって、該
   宿主細胞は、真核生物細胞を含む、宿主細胞。
7. 【請求項７】 抗原性ポリペプチドを作製する方法であって、該方法は、請
   求項１に記載の組換えポリヌクレオチドを発現させる工程を包含する、方法。
8. 【請求項８】 請求項１に記載のポリヌクレオチドとの二重鎖を形成するた
   めの方法であって、該方法は、該ポリヌクレオチドを、ストリンジェントな条件
   下で、配列番号１、３、７、または９のコード部分の少なくとも２５個連続した
   ヌクレオチドにハイブリダイズするプローブと接触させて、それにより該二重鎖
   を形成する工程を包含する、方法。
9. 【請求項９】 請求項１に記載のポリヌクレオチドを検出するためのキット
   であって、該キットは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、
   請求項１に記載のポリヌクレオチドの少なくとも１７個連続したヌクレオチドに
   ハイブリダイズするポリヌクレオチドを備える、キット。
10. 【請求項１０】 前記プローブが検出可能に標識されている、請求項９に記
    載のキット。
11. 【請求項１１】 配列番号２、４、８、または１０に由来する、少なくとも
    １７個連続したアミノ酸と特異的に結合する抗体結合部位を含む、結合化合物。
12. 【請求項１２】 請求項１１に記載の結合化合物であって、ここで： ａ）前記抗体結合部位が、 １）配列番号２、４、８、もしくは１０のポリペプチドに対して特異的に免
    疫反応性であるか； ２）精製されたヒトＩＬ−Ｄ８０タンパク質もしくは組換えて産生されたヒ
    トＩＬ−Ｄ８０タンパク質に対して惹起されるか；または ３）モノクローナル抗体、Ｆａｂ、もしくはＦ（ａｂ）２内にあるか；ある
    いは ｂ）該結合化合物が、 １）抗体分子であるか； ２）ポリクローナル抗血清であるか； ３）検出可能に標識されるか； ４）滅菌されているか；または ５）緩衝化組成物内にある、結合化合物。
13. 【請求項１３】 請求項１１に記載の結合化合物を使用する方法であって、
    該方法は、該結合化合物を、抗原を含む生物学的サンプルと接触させる工程を包
    含し、ここで該接触させる工程が、結合化合物：抗原複合体の形成を生じる、方
    法。
14. 【請求項１４】 前記生物学的サンプルがヒト由来であり、そして前記結合
    化合物が抗体である、請求項１３に記載の方法。
15. 【請求項１５】 検出キットであって、該キットは、請求項１２に記載の結
    合化合物、および以下： ａ）前記検出のための該結合化合物の使用についての使用説明資料；または ｂ）該結合化合物の隔離を提供する区画、 を備える、検出キット。
16. 【請求項１６】 実質的に純粋な抗原性ポリペプチドまたは実質的に単離さ
    れた抗原性ポリペプチドであって、該ポリペプチドは、請求項１１に記載の結合
    組成物と結合し、そして配列番号２、４、８、または１０に由来する少なくとも
    １７個連続したアミノ酸をさらに含む、ポリペプチド。
17. 【請求項１７】 請求項１６に記載のポリペプチドであって、該ポリペプチ
    ドが、 ａ）霊長類ＩＬ−Ｄ８０タンパク質に由来する少なくとも２５個連続したアミ
    ノ酸残基の少なくとも１つのフラグメントを含むか； ｂ）可溶性ポリペプチドであるか； ｃ）検出可能に標識されているか； ｄ）滅菌組成物内にあるか； ｅ）緩衝化組成物内にあるか； ｆ）細胞表面レセプターに結合するか； ｇ）組換えて産生されるか；または ｈ）天然に存在するポリペプチド配列を有する、ポリペプチド。
18. 【請求項１８】 配列番号２、４、８、または１０の少なくとも１７個連続
    したアミノ酸を含む、請求項１７に記載のポリペプチド。
19. 【請求項１９】 細胞または組織培養細胞の生理機能または発生を調節する
    方法であって、該方法は、該細胞を霊長類ＩＬ−Ｄ８０のアゴニストまたはアン
    タゴニストと接触させる工程を包含する、方法。
20. 【請求項２０】 請求項１９に記載の方法であって、ここで： ａ）前記接触させる工程がＩＬ−１１のアゴニストもしくはアンタゴニストと
    の組み合わせであるか；または ｂ）該接触させる工程がアンタゴニストを用いるものであり、該アンタゴニス
    トとしては、ＩＬ−Ｄ８０と特異的に結合する抗体結合部位を含む結合組成物が
    挙げられる、方法。