CN1365391A

CN1365391A - 哺乳动物细胞因子以及相关试剂

Info

Publication number: CN1365391A
Application number: CN00810965A
Authority: CN
Inventors: J·C·蒂曼斯; R·A·卡斯特莱恩; J·F·巴赞
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 1999-07-30
Filing date: 2000-07-27
Publication date: 2002-08-21
Also published as: EP1200592A2; JP2010227120A; CA2379963C; SI1200592T1; JP2015180228A; ATE440953T1; CA2379963A1; CY1109583T1; WO2001009176A2; WO2001009176A3; EP2138510A1; ES2330406T3; PT1200592E; HK1042517A1; JP2014042524A; DK1200592T3; DE60042827D1; JP2003506026A; EP1200592B1; EP2138510B1

Abstract

本发明提供编码哺乳动物细胞因子的纯化基因及其相关试剂(包括纯化蛋白质、特异性抗体以及编码这种分子的核酸)。本发明还提供使用所述试剂和诊断试剂盒的方法。

Description

哺乳动物细胞因子以及相关试剂

本申请要求以下专利申请的优先权：1999年7月30日申请的普通转让的同时待审的美国专利申请USSN 09/364,674和1999年8月6日申请的USSN 09/369,634，所述各专利申请通过引用整体结合到本文中。

发明领域

本发明涉及具有调节哺乳动物细胞(例如哺乳动物免疫系统的细胞)的生物学和生理学功能的蛋白相关组合物。具体地说，本发明提供纯化基因、蛋白质、抗体以及有用的相关试剂，例如用以调节多种细胞类型(包括造血细胞)的活化、生长、分化和功能的试剂。

发明背景

重组DNA技术通常是指将供体来源的遗传信息整合到载体以进行后续处理的技术，例如通过将其导入宿主，在宿主新的环境中拷贝和/或在新的环境中表达所转移的遗传信息。一般来说，遗传信息是以互补DNA(cDNA)的形式存在的，互补DNA(cDNA)是由编码所需蛋白产物的信使RNA(mRNA)获得的。载体通常是能够掺入cDNA的质粒，以便随后cDNA在宿主中进行复制，在某些情况下，实际上载体控制cDNA的表达，因此操纵编码产物在宿主中的合成。

相当长的时间以来，已知哺乳动物免疫应答的基础是一系列复杂的细胞相互作用，称为“免疫网络”。最近的研究获得了对免疫网络内部相互作用的新认识。尽管已知免疫反应在相当的程度上实际上是围绕淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞和其他细胞网络样相互作用进行的，但是现在免疫学家一般认为：在调节细胞相互作用中起主要作用的是可溶性蛋白(称为淋巴因子、细胞因子、或单核因子)。因此，分离、鉴定细胞调节因子以及其作用机制引起人们极大的兴趣，对这些因素的了解将可以使许多医学异常(如免疫系统病症)的诊断和治疗获得显著进步。其中部分因子是造血生长因子和/或分化因子，例如干细胞因子(SCF)或IL-11。参见例如Mire-Sluis和Thorpe(1998)CytokinesAcademicPress，San Diego；Thomson(编著，1998)The CytokineHandbook(第3版)Academic Press，San Diego；Metcalf和Nicola(1995)The Hematopoietic Colony Stimulating FactorsCambridge UniversityPress；以及Aggarwal和Gutterman(1991)Human Cytokines Blackwell。

显然，淋巴因子影响多种途径的细胞活性。已经证明它们促进多能造血干细胞增殖、生长和分化成为无数祖细胞，包括构成复杂免疫系统的各种各样的细胞谱系。细胞组分间适当平衡的相互作用对正常的免疫应答是必须的。当淋巴因子和其他药物一起给予时，不同的细胞谱系通常以不同方式产生反应。

免疫应答特别重要的细胞谱系包括以下两类淋巴细胞：B-细胞，它可产生并分泌免疫球蛋白(具有识别并与外源物质结合以便将其清除的蛋白质)；不同亚群的T-细胞，T-细胞分泌淋巴因子并诱导或抑制B-细胞和其他构成免疫网络的不同细胞(包括其他T-细胞)。这些淋巴细胞与许多其他细胞类型互相作用。

另一个重要的细胞谱系是肥大细胞(它还没有在所有哺乳动物种中完全确定)，它是位于全身毛细血管附近的含颗粒结缔组织细胞。这些细胞特别集中存在于肺、皮肤、胃肠道和泌尿生殖道中。肥大细胞在变态反应相关病症、尤其是以下过敏反应中起重要作用：当选定抗原交联与肥大细胞表面受体结合的免疫球蛋白时，肥大细胞脱颗粒并释放各种介质，例如组胺、5-羟色胺、肝素和前列腺素，这些介质导致变态反应如过敏反应。

在体外一般不能长时间保持免疫系统细胞阻碍了深入了解和治疗各种免疫病症的研究。免疫学家发现，利用包含各种生长因子(包括许多淋巴因子)的T-细胞和其他细胞上清液可以培养这些细胞。

由上可见，新的淋巴因子(如IL-11相关性淋巴因子)的发现和开发可获得直接或间接牵涉到免疫系统和/或造血细胞的众多变性或异常病症的新的疗法。具体地说，发现和开发增强已知淋巴因子的有益活性的淋巴因子应是十分有利的。本发明提供新的白细胞介素组合物和相关化合物，以及它们的用法。

发明概述

本发明涉及哺乳动物(例如啮齿类动物、犬科动物、猫科动物、灵长类)编码为DNAX 80或IL-D80的白细胞介素及其生物活性。本发明包括编码多肽本身的核酸及其生产和使用方法。本发明核酸的特征部分在于其与本文公开的互补DNA(cDNA)序列的同源性和/或生长因子样或细胞因子样活性(例如IL-11)的功能测定(参见Thomson(1998)TheCytokine Handbook第3版Academic Press，San Diego)，所述功能测定适用于通常由所述核酸编码的所述多肽。本发明提供调节或干预控制生长因子依赖性生理学或免疫应答的方法。

本发明的部分基础在于发现：与IL-11具有显著序列和结构相似性的新细胞因子序列。本发明特别提供灵长类(例如人)和啮齿类动物(例如小鼠)的新细胞因子序列。具有显著序列同源性的功能等同物可从其他哺乳动物(例如牛、马、大鼠、小鼠以及非哺乳动物物种)获得。

在不同蛋白质实施方案中，本发明提供：与SEQ ID NO：2、4、8或10在至少约12个氨基酸的长度上具有同一性的基本纯或重组IL-D80多肽；SEQ ID NO：2、4、8或10的天然序列IL-D80；包含SEQ ID NO：2、4、8或10 IL-D80序列的融合蛋白。在某些实施方案中，所述同一性节段至少是约14、17或19个氨基酸。在其他实施方案中，所述IL-D80：包括含表1序列的成熟序列；或具有与天然IL-D80不同的翻译后修饰类型；或者所述多肽：来自选自哺乳动物(包括灵长类)的温血动物；包含SEQ ID NO：2、4、8或10中的至少一个多肽节段；具有多个氨基酸残基片段；是IL-D80的天然等位基因变异体；长度至少约30个氨基酸；具有至少两个非重叠的灵长类IL-D80特异性表位；在至少约20个氨基酸的长度上与灵长类IL-D80具有序列同一性；是糖基化多肽；存在天然糖基化时的分子量至少10kD；是一种合成多肽；与固体支持物连接；与另一个化学部分缀合；5倍或5倍以下取代天然序列；或是天然序列的缺失或插入变异体。优选实施方案包括一种组合物，该组合物包含：无菌的IL-D80多肽；或所述IL-D80多肽和载体，其中所述载体是：水性化合物，包括水、盐水和/或缓冲液；和/或配制用于口、直肠、鼻、局部或非肠道给药。在融合蛋白实施方案中，融合蛋白可以含有：表1的成熟多肽序列；检测或纯化标记(包括FLAG、His6或Ig序列)；和/或另一种细胞因子或趋化因子序列(包括IL-11)。

试剂盒实施方案包括IL-D80多肽和含有IL-D80多肽的隔室；和/或使用或处理试剂盒试剂的说明书。

在结合化合物实施方案中，所述化合物可以具有抗体的抗原结合位点，该位点特异性结合天然IL-D80多肽，其中：所述IL-D80是灵长类蛋白；所述结合化合物是Fv、Fab或Fab2片段；所述结合化合物与另一个化学部分缀合；或所述抗体：是针对表1成熟多肽部分的肽序列产生的抗体；是针对成熟IL-D80产生的抗体；是针对纯化灵长类IL-D80产生的抗体；是免疫选择性抗体；是多克隆抗体；结合变性的IL-D80；Kd至少30μM；与固体支持物(包括珠子或塑料膜)连接；为无菌组合物；或进行了检测性标记，包括放射性或荧光标记。含结合化合物的试剂盒包括：含有结合化合物的隔室；和/或使用或处理试剂盒试剂的说明书。试剂盒通常能进行定性或定量分析。优选组合物可以包括：无菌结合化合物；或所述结合化合物和载体，其中所述载体是：水性化合物，包括水、盐水和/或缓冲液；和/或配制用于口、直肠、鼻、局部或非肠道给药。

核酸实施方案包括编码IL-D80多肽或融合蛋白的分离或重组核酸，其中：所述IL-D80来自灵长类；和/或所述核酸：编码表1的抗原性肽序列；编码表1的多种抗原肽序列；与编码所述节段的天然cDNA具有同一性；是表达载体；还包括复制起点；来源于天然；含有检测标记；含有合成核苷酸序列；小于6kb，优选小于3kb；来自灵长类(包括人)；含有天然全长编码序列；是编码IL-D80基因的杂交探针；或是PCR引物、PCR产物或诱变引物。本发明还提供含有这种重组核酸的细胞、组织或器官，所述细胞优选为：原核生物细胞、真核生物细胞、细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞、哺乳动物细胞、小鼠细胞、灵长类细胞或人类细胞。

试剂盒实施方案包括所述核酸和含有所述核酸的隔室；还含有所述IL-D80蛋白或多肽的隔室；和/或使用或处理试剂盒试剂的说明书。通常试剂盒能进行定性或定量分析。

在某些实施方案中，所述核酸：在30℃和小于2M盐的洗涤条件下，或在45℃和/或500mM盐的洗涤条件下，或55℃和/或150mM盐的洗涤条件与SEQ ID NO：1、3、7或9杂交；或在至少约30、55或75个核苷酸的节段上者与灵长类IL-D80具有同一性。

本发明包括调节细胞或组织培养细胞的生理或生长的方法，该方法包括将所述细胞与灵长类IL-D80的激动剂或拮抗剂接触。该方法可以：所述接触是与IL-11的激动剂或拮抗剂结合；或所述接触与拮抗剂结合，包括含特异性结合IL-D80的抗体结合位点的结合组合物。

优选实施方案详述

本文引用的所有参考文献均通过引用结合到本文中，其引用程度正如具体个别指出各个公开出版物或专利申请的引用结合程度。I.概论

本发明提供氨基酸序列和编码各种哺乳动物蛋白(细胞因子)的DNA序列，例如所述蛋白为可在免疫或其他细胞间传递信号的分泌分子。参见例如Paul(1997)Fundamental Immunology(第3版)RavenPress，N.Y。全长细胞因子和片段或拮抗剂可用于生理性调节表达受体的细胞。很可能IL-D80对造血细胞具有刺激作用或抑制作用，造血细胞包括例如淋巴样细胞，例如T-细胞、B-细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、树突细胞、造血祖细胞等。所述蛋白还可用作抗原，例如免疫原，用于针对蛋白质上的不同表位(线性表位和构象表位)产生抗体。

编码IL-D80的cDNA是从不同灵长类例如人的染色体16的BAC序列中鉴定出来的。参见例如CIT987SK-A-575C2和CIT987SK-A-761H5。所述分子称作huIL-D80。已经鉴定和描述了人EST，即人ESTAI085007。还鉴定和描述了小鼠EST AA266872。

灵长类(例如人类)的基因可编码大约216个氨基酸(SEQ ID NO：1)或约243个氨基酸(SEQ ID NO：8)的可溶性细胞因子样小分子蛋白。参见表1和SEQ ID NO：1、2、7和8。IL-D80具有一个长链细胞因子成员特异性结构基元。例如可比较IL-D8与可从GenBank获得的序列IL-11。此外参见啮齿类动物序列和表2或3。表1：编码灵长类(例如人)IL-D80的核酸(SEQ ID NO：1)cactggcccacgctgaagataggggacttgagttccagtcttccttctgctaccgaccggctttgtgaccttgaacaagacttcccctccctgattccatcctcatgtcacatctgaagcctccaacttctgtcactgagctcaggattcccaggcaagcccacggagtgccccacagggtcagagccgtaaCAGGACTTGGAAAATAACCCGAAAATTGGGCTCAGCCTGTTGCTGCTTCCCTTGCTCCTGGTTCAAGCTGGTGTCTGGGGATTCCCAAGGCCCCCAGGGAGGCCCCAGCTGAGCCTGCAGGAGCTGCGGAGGGAGTTCACAGTCAGCCTGCATCTCGCCAGGAAGCTGCTCTCCGAGGTTCGGGGCCAGGCCCACCGCTTTGCGGAATCTCACCTGCCAGGAGTGAACCTGTACCTCCTGCCCCTGGGAGAGCAGCTCCCTGATGTTTCCCTGACCTTCCAGGCCTGGCGCCGCCTCTCTGACCCGGAGCGTCTCTGCTTCATCTCCACCACGCTTCAGCCCTTCCATGCCCCGCTGGGAGGGCTGGGGACCCCAGGGCCGCTGACCAACATGGAGAGGATGCAGCTGTGGGCCATGAGGCTGGACCTCCGCGATCTGCAGCGGCACCTCCGCTTCCAGGTGCTGGCTGCAGGATTCAACCTCCCGGAGGAGGAGGAGGAGGAAGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGAGGAAGGGGCTGCTCCCAGGGGCACTGGGCAGCGCCTTACAGGGCCCGGCCCAGGTGTCCTGGCCCCAGCTCCTCTCCACCTACCGCCTGCTGCACTCCTTGGAGCTCGTCTTATCTCGGGCCGTGCGGGAGTTGCTGCTGCTGTCCAAGGCTGGGCACTCAGTCTGGCCCTTGGGGTTCCCAACATTGAGCCCCCAGCCCTGAtcggtggcttcttagccccctgccccccaccctttagaactttaggactggagtcttggcatcagggcagccttcgcatcatcagccttggacaagggagggctcttccagccccctgccccaggccctacccagtaactgaaagcccctctggtcctcgccagctatttatttcttggatatttatttattgtttagggagatgatggtttatttattgtcttggggcccgatggtcctcctcgggccaagcccccatgctgggtgcccaataaagcactctcatccaaaa外显子边界可能相当于约219/220；393/394；492/493以及551/552。对应于这些边界的编码节段特别引人关注。从193到918的翻译氨基酸序列是SEQ ID NO：2。QDLENNPKIGLSLLLLPLLLVQAGVWGFPRPPGRPQLSLQELRREFTVSLHLARKLLSEVRGQAHRFAESHLPGVNLYLLPLGEQLPDVSLTFQAWRRLSDPERLCPISTTLQPFHAPLGGLGTQGRWTNMERMQLWAMRLDLRDLQRHLRFQVLAAGFNLPEEEEEEEEEEEEERKGLLPGALGSALQGPAQVSWPQLLSTYRLLHSLELVLSRAVRELLLLSKAGHSVWPLGFPTLSPQP预期信号切割位点在...VWG和FPR...之间；螺旋A边界在约...GRP和QLS...之间到约...RKL和LSE...之间；螺旋B边界在约...QLP和DVS...之间到约...TLQ和PFH...之间；螺旋C边界在约...GLG和TQG...之间到约...VLA和AGF...之间；螺旋D边界在约...STY和RLL...之间到约...HSV和WPL...之间。申请人的目的在于提出与高度重复的残基例如L和E重复序列(13-20、220-223和163-175)匹配的序列以及相应的编码节段。编码灵长类(例如人)的IL-D80变异体的核酸(SEQ ID NO：7)(注：非编码序列与SEQ ID NO：1相同，但为了更清楚而在此不包括在内)。ATGGGCCAGACGGCAGGCGACCTTGGCTGGCGGCTCAGCCTGTTGCTGCTTCCCTTGCTCCTGGTTCAAGCTGGTGTCTGGGGATTCCCAAGGCCCCCAGGGAGGCCCCAGCTGAGCCTGCAGGAGCTGCGGAGGGAGTTCACAGTCAGCCTGCATCTCGCCAGGAAGCTGCTCTCCGAGGTTCGGGGCCAGGCCCACCGCTTTGCGGAATCTCACCTGCCAGGAGTGAACCTGTACCTCCTGCCCCTGGGAGAGCAGCTCCCTGATGTTTCCCTGACCTTCCAGGCCTGGCGCCGCCTCTCTGACCCGGAGCGTCTCTGCTTCATCTCCACCACGCTTCAGCCCTTCCATGCCCCGCTGGGAGGGCTGGGGACCCAGGGCCGCTGGACCAACATGGAGAGGATGCAGCTGTGGGCCATGAGGCTGGACCTCCGCGATCTGCAGCGGCACCTCCGCTTCCAGGTGCTGGCTGCAGGATTCAACCTCCCGGAGGAGGAGGAGGAGGAAGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGAGGAAGGGGCTGCTCCCAGGGGCACTGGGCAGCGCCTTACAGGGCCCGGCCCAGGTGTCCTGGCCCCAGCTCCTCTCCACCTACCGCCTGCTGCACTCCTTGGAGCTCGTCTTATCTCGGGCCGTGCGGGAGTTGCTGCTGCTGTCCAAGGCTGGGCACTCAGTCTGGCCCTTGGGGTTCCCAACATTGAGCCCCCAGCCCTGA翻译氨基酸序列是SEQ ID NO：8：MGQTAGDLGWRLSLLLLPLLLVQAGVWGFPRPPGRPQLSLQELRREFTVSLHLARKLLSEVRGQAHRFAESHLPGVNLYLLPLGEQLPDVSLTFQAWRRLSDPERLCFISTTLQPFHAPLGGLGTQGRWTNMERMQLWAMRLDLRDLQRHLRFQVLAAGFNLPEEEEEEEEEEEEERKGLLPGALGSALQGPAQVSWPQLLSTYRLLHSLELVLSRAVRELLLLSKAGHSVWPLGFPTLSPQP预期信号切割位点在...VWG和FPR...之间；螺旋A边界在约...GRP和QLS...之间到约...RKL和LSE...之间；螺旋B边界在约...QLP和DVS...之间到约...TLQ和PFH...之间；螺旋C边界在约...GLG和TQG...之间到约...VLA和AGF...之间；螺旋D边界在约...STY和RLL...之间到约...HSV和WPL...之间。申请人的目的在于提出与高度重复的残基例如L和E重复序列(13-20、220-223和163-175)匹配的序列以及相应的编码节段。比较SEQ ID NO：2与SEQ ID NO：8：2 1 QDLENNPKIGLSLLLLPLLLVQAGVWGFPRPPGAPQLSLQELRREFTVS 498 1 MGQTAGDLGWRLSLLLLPLLLVQAGVWGFPRPPGRPQLSLQELRREFTVS 50

***************************************2 50 LHLARKLLSEVRGQAHRFAESHLPGVNLYLLPLGEQLPDVSLTFOAWRRL 998 51 LHLARKLLSEVRGQAHRFAESHLPGVNLYLLPLGEQLPDVSLTFQAWRRL 100

**************************************************2 100 SDPERLCFISTTLQPFHAPLGGLGTQGRWTNMERMQLWAMRLDLRDLQRH 1498 101 SDPERLCFISTTLQPFHAPLGGLGTQGRWTNMERMQLWAMRLDLRDLQRH 150

**************************************************2 150 LRFQVLAAGFNLPEEEEEEEEEEEEERKGLLPGALGSALQGPAQVSWPQL 1998 151 LRFQVLAAGFNLPEEEEEEEEEEEEERKGLLPGALGSALQGPAQVSWPQL 200

**************************************************2 200 LSTYRLLHSLELVLSRAVRELLLLSKAGHSVWPLGFPTLSPQP 2428 201 LSTYRLLHSLELVLSRAVRELLLLSKAGHSVWPLGFPTLSPQP 243

*******************************************编码啮齿类动物(例如小鼠)的IL-D80的核酸(SEQ ID NO：3)。nccaagntggtacgcctgcaggtaccggtccggaattcccgggtcgacccacgcgtccggggccaggtgacaggagaccttggctggcgaggactggacaggcaacctggccaggagcaggactaaacagacaaatgaagagtgtagagggaagaggctgagaaccgaggacagtcagaggaacggcacaggggagctGGGCTCAGCCTGTTGCTGCTACCCTTGCTTCTGGTACAAGCTGGTTCCTGGGGGTTCCCAACAGACCCCCTGAGCCTTCAAGAGCTGCGCAGGGAATTCACAGTCAGCCTGTACCTTGCCAGGAAGCTGCTCTCTGAGGTTCAGGGCTATGTCCACAGCTTTGCTGAATCTCGATTGCCAGGAGTGAACCTGGACCTCCTGCCCCTGGGATACCATCTTCCTAATGTTTCCCTGACTTTCCAGGCATGGCATCACCTCTCTGACTCTGAGAGACTCTGCTTCCTCGCTACCACACTTCGGCCCTTCCTTGCCATGCTGGGAGGGCTGGGGACCCAGGGGACCTGGACCAACATCAAGAGGATGCAGCAATGGAGACTCTCTCTGGTTCTTGATGTGGCCCTGTGTGTCTTTCGCTCACAGGTGCTGGCTGCAGGATTCAAATGTTCAAAGGAGGAGGAGGACAAGGAGGAAGAGGAAGAGGAGGAAGAAGAAGAAAAGAAGCTGCCCCTAGGGCGTCTGGGTGGCCCCAATCAGGTGTCATCCCAAGTGTCCTGGCCCCAGCTGCTCTATACCTACCAGCTCCTTCACTCCATGGAGCTTGTCCTGTCTCGGGCTGTTCGGGACCTGCTGCTGCTGTCCCTGCCCAGGCGCCCAGGCTCAGCCTTGGAGTTCCTAACACCTAGCTTCAAGCCCTGAtggagtgaccttccagctccctccctcgcccgttaagactctaaggctggagtctggccaatcacaggacaggctctagctcgtttgccttagaccaggcagggtttcactagctcccagccctgacccaataatttaaaagccctccagtccttaccagatatttatttcttggatatttatttatttttaagaaatggttta外显子边界约198/199；360/361；459/460；以及618/619。与这些边界对应的编码节段特别引人注目。从199到891的翻译氨基酸序列是SEQID NO：4。GLSLLLLPLLLVQAGSWGFPTDPLSLQELRREFTVSLYLARKLLSEVQGYVHSFAESRLPGVNLDLLPLGYHLPNVSLTFQAWHHLSDSERLCFLATTLRPFLAMLGGLGTQGTWTNIKRMQQWRLSLVLDVALCVFRSQVLAAGFKCSKEEEDKEEEEEEEEEEKKLPLGRLGGPNQVSSQVSWPQLLYTYQLLHSMELVLSRAVRDLLLLSLPRRPGSALEFLTPSFKP预期信号切割位点在...SWG和FPR...之间；螺旋A边界在约...TDP和LSL...之间到约...RKL和LSE...之间；螺旋B边界在约...HPL和NVS...之间到约...PFP和AML...之间；螺旋C边界在约...GLG和TQG...之间到约...VLA和AGF...之间；螺旋D边界在约...WPQ和LLY...之间到约...LSL和PRP...之间。申请人的目的在于提出与高度重复的残基例如L和E重复序列(4-7、209-212和156-165)匹配的序列以及相应的编码节段。啮齿类动物例如小鼠的IL-D80变异体(SEQ ID NO：9)。ATGGGCCAGACGGCAGGCGACCTTGGCTGGCGGCTCAGCCTGTTGCTGCTACCCTTGCTTCTGGTACAAGCTGGTTCCTGGGGGTTCCCAACAGACCCCCTGAGCCTTCAAGAGCTGCGCAGGGAATTCACAGTCAGCCTGTACCTTGCCAGGAAGCTGCTCTCTGAGGTTCAGGGCTATGTCCACAGCTTTGCTGAATCTCGATTGCCAGGAGTGAACCTGGACCTCCTGCCCCTGGGATACCATCTTCCCAATGTTTCCCTGACTTTCCAGGCATGGCATCACCTCTCTGACTCTGAGAGACTCTGCTTCCTCGCTACCACACTTCGGCCCTTCCCTGCCATGCTGGGAGGGCTGGGGACCCAGGGGACCTGGACCAGCTCAGAGAGGGAGCAGCTGTGGGCCATGAGGCTGGATCTCCGGGACCTGCACAGGCACCTCCGCTTTCAGGTGCTGGCTGCAGGATTCAAATGTTCAAAGGAGGAGGAGGACAAGGAGGAAGAGGAAGAGGAGGAAGAAGAAGAAAAGAAGCTGCCCCTAGGGGCTCTGGGTGGCCCCAATCAGGTGTCATCCCAAGTGTCCTGGCCCCAGCTGCTCTATACCTACCAGCTCCTTCACTCCCTGGAGCTTGTCCTGTCTCGGGCTGTTCGGGACCTGCTGCTGCTGTCCCTGCCCAGGCGCCCAGGCTCAGCCTGGGATTCCTAAcacctagcttcaagccctatggagtgaccttccagctccctccctcgcccgttaagactctaaggctggagtctggccaatcacaggacaggctctagctcgtttgccttagaccaggcagggcttcactagctcccagccctgacccaataatttaaaagccctccagtccttaccagatatttatttcttggatatttatttatttttaagaaatggtttatttattgtttcactcttgagttaggccaccatgctgggtgcctaataaagccatccagcccgg1-702的翻译；啮齿类动物例如小鼠的IL-D80(SEQ ID NO：10)MGQTAGDLGWRLSLLLLPLLLVQAGSWGFPTDPLSLQELRREFTVSLYLARKLLSEVQGYVHSFAESRLPGVNLDLLPLGYHLPNVSLTFQAWHHLSDSERLCFLATTLRPFPAMLGGLGTQGTWTSSEREQLWAMRLDLRDLHRHLRFQVLAAGFKCSKEEEDKEEEEEEEEEEKKLPLGALGGPNQVSSQVSWPQLLYTYQLLHSLELVLSRAVRDLLLLSLPRRPGSAWDS比较SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：10：10 1 MGQTAGDLGWRLSLLLLPLLLVQAGSWGFPTDPLSLQELRREFTVSLYLA 504 1 GLSLLLLPLLLVQAGSWGFPTDPLSLQELRREFTVSLYLA 40

***************************************10 51 RKLLSEVQGYVHSFAESRLPGVNLDLLPLGYHLPNVSLTFQAWHHLSDSE 1004 41 RKLLSEVQGYVHSFAESRLPGVNLDLLPLGYHLPNVSLTFQAWHHLSDSE 90

**************************************************10 101 RLCFLATTLRPFPAMLGGLGTQGTWTSSEREQLWAMRLDLRDLHRHLRFQ 1504 91 RLCFLATTLRPFLAMLGGLGTQGTWTNIKRMQQWRLSLVLDVALCVFRSQ 140

************ ************* * * * . * * * *10 151 VLAAGFKCSKEEEDKEEEEEEEEEEKKLPLGALGGPNQVSSQVSWPQLLY 2004 141 VLAAGFKCSKEEEDKEEEEEEEEEEKKLPLGRLGGPNQVSSQVSWPQLLY 190

******************************* ******************10 201 TYQLLHSLELVLSRAVRDLLLLSLPRRPGSAWDS 2344 191 TYQLLHSMELVLSRAVRDLLLLSLPRRPGSALEFLTPSFKP 231

*******.*********************** .表2：比较不同具体IL-11和IL-D80。人IL-11是SEQ ID NO：5；小鼠IL-11是SEQ ID NO：6。hIL-11 ---MNCVCRLVLVVLSLWPDTAVAPGPPPGP--P-RVSPDPRAELDSTVLmIL-11 ---MNCVCRLVLVVLSLWPDRVVAPGPPAGS--P-RVSSDPRADLDSAVLhIL-D80 DLENNPKIGLSLLLLPLLLVQAGVWGFPRPPGRPQLSLQELRREFTVSLHmIL-D80 --------GLSLLLLPLLLVQAGSWGFPTDP----LSLQELRREFTVSLY

* *::*.* . * * . : * :: ::hIL-11 LTRSLLADTRQLAAQLRDK-FPADGDHNLDS---LPTLAMSAGALGALQLmIL-11 LTRSLLADTRQLAAQMRDK-FPADGDHSLDS---LPTLAMSAGTLGSLQLhIL-D80 LARKLLSEVRGQAHRFAESHLPGVNLYLLPLGEQLPDVSLTFQAWRRLSDmIL-D80 LARKLLSEVQGYVHSFAESRLPGVNLDLLPLGYHLPNVSLTFQAWHHLSD

*:*.**::.: . : :. :*. . * ** :::: : *.hIL-11 PGVLTRLRADLLSYLRHVQWLRRAG-GSSLKTLEPELGTLQARLDRLLRRmIL-11 PGVLTRLRVDLMSYLRHVQWLRRAG-GPSLKTLEPELGALQARLERLLRRhIL-D80 PERLCFISTTLQPFHAPLGGLGTQGRWTNMERMQLWAMRLDLRDLQRHLRmIL-D80 SERLCFLATTLRPFLAMLGGLGTQGTWTNIKRMQQWRLSLVLDVALCVFR

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:: :* .:.*.*. *** ****.进行序列比较还可以提供进化树。例如应用TreeView程序和ClustalX分析软件程序可获得进化树。参见Thompson等，Nuc.Acids Res.25：4876-4882；以及TreeView，Page，IBLS，University of Glasgow，e-mailrpage@bio.gla.ac.uk；http∥taxonomy.zoology.gla.ac.uk.rod.treeview.html。表3：不同具体IL-11与灵长类IL-D80(SEQ ID NO：8代替表2的SEQ ID NO：2)和啮齿类IL-D80(SEQ ID NO：10代替表2的SEQ IDNO：4)的附加比较。灵长类IL-11(例如人)是SEQ ID NO：5；啮齿类IL-11(例如小鼠)是SEQ ID NO：6。应用CLUSTAL X(1.4b)多序列对比程序与IL-10进行比较。huIL-11 -----MNCVCRLVLVVLSLWPDTAVAPGPPPGP--P-RVSPDPRAELDSTmoIL-11 -----MNCVCRLVLVVLSLWPDRVVAPGPPAGS--P-RVSSDPRADLDSAhuIL-D80 MGQTAGDLGWRLSLLLLPLLLVQAGVWGFPRPPGRPQLSLQELRREFTVSmoIL-D80 MGQTAGDLGWGLSLLLLPLLLVQAGSWGFPTDP----LSLQELRREFTVS

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: :: :* .:.*.*. *** ****. : . . :如上所述，比较序列也可提供进化树。例如应用TreeView程序和ClustalX分析软件程序可获得进化树。参见Thompson等，Nuc.AcidsRes.25：4876-4882；以及TreeView，Page，IBLS，University of Glasgow，e-mail rpage@bio.gla.ac.uk；http//taxonomy.zoology.gla.ac.uk.rod.treeview.html。

IL-D80与相关细胞因子蛋白的结构同源性提示该分子具有相关功能。IL-D80是与IL-11具有序列相似性的长链细胞因子。

已经清楚了解了IL-11生物学的多方面。例如参见Sonis等(1999)Leukemia 13：831-834；Jacques等(1998)Res.Immunol.149：737-740；Trepicchio等(1998)Ann.N.Y.Acad.Sci.856：12-21；Jacobsen(1998)inThomson The Cytokine Handbook，Academic Press；Maslak等(1998)Semin.Hematol.35：253-260；Leng等(1997)Int.J.Biochem.Cell.Biol. 29：1059-1062；Du等(1997)Blood 89：3897-3908；Goldman(1995)StemCells 13：462-471；以及Du等(1995)Curr Opin.Hematol.2：182-188。预期IL-D80的生物学相似，例如部分生物活性可能一致。

IL-D80激动剂或拮抗剂也可作为功能或受体拮抗剂例如阻碍IL-11与其相应受体结合或产生反相作用。因此，IL-D80或其拮抗剂可以用于治疗包括免疫病症的异常医学病症，例如T细胞免疫缺陷、慢性炎症、或组织排异反应、或心血管病症或神经生理病症。通常使用IL-D80和IL-11相关试剂结合的组合物。

天然抗原能够介导不同生物化学反应，使靶细胞产生生物学反应或生理学反应。本发明特征鉴定的优选实施方案来自人类，而不是其他灵长类或天然存在对应物的其他物种。也可获得其他哺乳动物种例如灵长类、犬科动物、猫科动物以及啮齿类动物、特别是家畜的其他蛋白序列。为了举例说明，以下说明书涉及人IL-D80，但同样适用于其他物种的相关具体物质。II.纯化IL-D80

灵长类(例如人类)的IL-D80氨基酸序列在若干个实施方案中进行了介绍，例如SEQ ID NO：2、4、8或10。编码所述蛋白的其他天然核酸可使用所提供的序列通过标准方法例如PCR技术或通过杂交分离获得。这些从氨基端至羧基端提供的氨基酸序列，对于提供细胞因子的序列信息是重要的，从而可使所述抗原蛋白与其他蛋白区分开来以及例举众多变异体。此外，所述肽序列使得可以制备产生识别所述节段的抗体的肽，而核苷酸序列使得可以制备寡核苷酸探针，两者都是检测或分离例如克隆编码该序列的基因的策略。

本文使用的术语“人可溶性IL-D80”当用于蛋白质时，包括具有对应于SEQ ID NO：2或8所示的可溶性多肽的氨基酸序列的蛋白质或其有效片段。优选实施方案包括多个截然不同的(如非重叠)特定长度节段。一般多个是指至少2个，更普遍为至少3个，优选5个、7个或更多。尽管提供了最小长度，但是不同大小的更长长度可能是合适的，例如长度7的一个和长度12的两个。

结合成分(例如抗体)一般以高亲和力与IL-D80结合，例如至少约100nM，通常约30nM更好，优选约10nM更好，更优选约3nM更好。对应蛋白质可见于人类以外的其他哺乳动物物种，例如其他灵长类、有蹄类或啮齿类动物。非哺乳动物物种也应具有结构上或功能上相关的基因和蛋白质，例如鸟类或两栖类。

本文使用的术语“多肽”包括有效片段或节段，并包括一段氨基酸残基，该氨基酸残基节段至少约8个氨基酸，通常至少约12个氨基酸，一般至少约16个氨基酸，优选至少约20个氨基酸，在特别优选的实施方案中至少约30个或更多个(例如35、40、45、50、60、75、100等)氨基酸。在所有实际组合中，这些片段实际上可以在所有位置开始和/或结束，例如在残基1、2、3等处开始而在例如150、149、148等处结束。特别有意义的肽的两端对应于结构域边界，例如螺旋A、B、C和/或D。参见表1、2、3。

术语“结合组合物”是指例如以抗体-抗原相互作用方式特异性结合IL-D80的分子。所述特异性可以在不同程度上包括例如对特定实施方案的特异性，或对相关实施方案组的特异性，例如灵长类、啮齿类等。结合组合物还包括与IL-D80特异缔合的化合物(例如蛋白质)，包括以天然生理学相关蛋白-蛋白相互作用方式(共价或非共价)缔合。所述分子可以是聚合物或化学试剂。功能类似物可以是进行了结构修饰的蛋白质，或可以是具有与合适结合决定簇相互作用的分子型的分子。所述化合物可用作受体结合相互作用的激动剂或拮抗剂，参见例如Goodman等(编著)Goodman & Gilman′s：The Pharmacological Basesof Therapeutics(current ed.) Pergamon Press。

例如蛋白质的基本纯通常是指所述蛋白质不含其他杂质蛋白质、核酸、或初始来源生物的其他生物物质。纯度可用标准方法测定，一般按重量计，通常至少约40％纯度，普遍地至少约50％纯度，经常至少约60％纯度，一般至少约80％纯度，优选至少约90％纯度，在最优选实施方案中至少约95％纯度。通常加入载体或赋形剂。

多肽或片段的溶解度取决于环境和所述多肽。许多参数影响多肽的溶解度，包括温度、电解质环境、所述多肽的大小和分子特性、以及溶剂的性质。使用所述多肽的温度范围通常在约4℃到约65℃。通常使用温度在18℃以上。诊断目的温度通常是大约室温或温热，但是低于所述测定中的成分的变性温度。对于治疗目的，所述温度通常是体温，一般人类和小鼠的体温大约37℃，可是在原位或在体外某些情况下温度可能升高或降低。

所述多肽的大小和结构通常处于基本稳定状态，而一般不是处于变性状态。所述多肽可以与其他四级结构多肽结合(例如使其具有溶解性)或与脂质或去污剂结合。

所述溶剂和电解质通常是用于保存生物活性类型的生物相容性缓冲液，并且通常近似于生理水性溶剂。所述溶剂通常具有中性pH，一般在约5到10之间，优选约7.5。在某些情况下可加入一种或多种去污剂，一般用温和非变性的去污剂，例如CHS(胆甾醇半琥珀酸酯)或CHAPS(3-[3-乙醇胺基丙基)二甲基氨]-1-丙烷磺酸盐)，或为避免明显破坏所述蛋白结构或生理特性的低浓度。在其他情况下，强去污剂可用于实现显著变性。III.物理变异体

本发明还包括与IL-D80抗原氨基酸序列具有显著氨基酸序列同一性的蛋白或肽。所述变异体包括种变异体、多态性变异体或等位基因变异体。

氨基酸序列同源性或序列同一性通过优化残基匹配进行测定，如果需要的话，可以根据需要导入空位。另参见Needleham等(1970)J.Mol.Biol.48：443-453；Sankoff等(1983)Chapter One in Time Warps，String Edits，and Macromolecules：The Theory and Practice of SequenceComparison，Addison-Wesley，Reading，MA；IntelliGenetics，MountainView，CA的软件包；以及the University of Wisconsin Genetics ComputerGroup，Madison，WI。当认为保守取代匹配时，序列同一性就改变了。保守取代一般包括下列各组的取代：甘氨酸、丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、谷氨酸；天冬酰胺、谷氨酰胺；丝氨酸、苏氨酸；赖氨酸、精氨酸；以及苯丙氨酸、酪氨酸。所述保守可能与生物学特性、功能特性或结构特性有关。同源氨基酸序列一般包括天然多态性或等位基因变异蛋白序列和种间变异蛋白序列。典型同源蛋白质或肽与所述IL-D80氨基酸序列同一性为25-100％(如果可导入空位的话)到50-100％(如果包括保守取代的话)。同一性测量值至少约35％，普遍至少约40％，常常至少约50％，一般至少约60％，通常至少约70％，优选至少约80％，更优选至少约90％。

所述分离的IL-D80 DNA可通过核酸的取代、核酸缺失、核酸插入、以及短核酸段的倒位很容易地进行修饰。这些修饰产生新型DNA序列，这样的DNA序列编码所述抗原、其衍生物或具有相似生理学的、致免疫的、抗原的或其他功能活性的蛋白质。这些修饰序列可用来产生突变抗原或增强表达。表达增强可以包括基因扩增、增强转录、增强翻译以及其他机制。“突变IL-D80”包括符合上述IL-D80序列同一性定义、但是具有无论是因为缺失、取代还是因为插入而与通常天然存在的IL-D80氨基酸序列不同的氨基酸序列的多肽。突变IL-D80通常包括与具有SEQ ID NO：2、4、8或10序列的蛋白质具有显著同一性的蛋白质，而且与所述序列共有各种生物活性例如抗原性或免疫原性，在优选实施方案中突变IL-D80包括大部分的天然全长的公开序列。一般优选全长序列，但是也可用截短型，同样，通常大多需要天然来源存在的基因或蛋白质。相似的构思适用于不同的IL-D80蛋白质，特别是不同温血动物例如哺乳动物和鸟类存在的IL-D80。这些描述通常包括许多IL-D80蛋白质，而不限于特别论述的具有灵长类实施方案。

通过插入或缺失氨基酸也可进行IL-D80诱变。可以产生取代、缺失、插入或任何结合以获得最终构建物。插入包括氨基-末端或羧基-末端的融合。可对靶密码子进行随机诱变，然后可对表达的突变体筛选所需要的活性。在已知序列的DNA预定位点进行取代突变的方法在本领域是众所周知，例如M13引物诱变或聚合酶链式反应(PCR)技术。参见例如Sambrook等(1989)；Ausubel等(1987以及增刊)；和Kunkel等，(1987)Methods in Enzymol.154：367-382。优选实施方案包括在核酸或氨基酸水平例如1倍、2倍、3倍、5倍、7倍等优选保守取代。优选所述取代远离保守的半胱氨酸，通常位于远离螺旋结构结构域的区域。这样的变异体可用于产生特异性抗体，并且通常具有大多数或全部生物学特性。

本发明还提供重组蛋白质，例如应用这些蛋白质的节段的异源融合蛋白。异源融合蛋白是非天然融合的蛋白质或节段融合物。相似的构思适用于异源核酸序列。

此外，组合其他蛋白的相似功能结构域可获得新的构建物。例如靶结合或其他节段可以在不同的新融合多肽或片段之间“交换”。参见例如Cunningham等(1989)Science 243：1330-1336；和O′Dowd等(1988)J.Biol.Chem.263：15985-15992。

Beaucage和Carruthers(1981)Tetra.Letts.22：1859-1862介绍的亚磷酰胺方法可以产生合适的合成DNA片段。双链片段通常如下制得：合成互补链并在合适的条件下使所述链退火在一起，或使用DNA聚合酶和合适的引物序列加入互补链(例如PCR技术)。

与IL-11细胞因子家族比较的结构分析可用于该基因。人IL-D80序列与IL-11家族的其他成员的序列对比可定义结构特征。具体地说，例如应用RASMOL方法可测定β-折叠和α-螺旋残基，参见Bazan等(1996)Nature 379：591；Lodi等(1994)Science 263：1762-1766；Sayle和Milner-White(1995)TIBS 20：374-376；以及Gronenberg等(1991)Protein Engineering 4：263-269。优选取代残基包括预计与受体相互作用的表面暴露的残基。特别是在远离表面暴露残基的位置，保存功能的其他残基是保守取代。IV.功能变异体

竞争性抑制所述配体与其受体结合可阻碍IL-D80的生理学反应。

本发明的体外测定通常应用分离的蛋白质、包括所述蛋白质的受体结合节段的可溶性片段、或与固相支持物结合的片段。这些测定还使得可以诊断性确定结合节段突变和修饰的作用以及细胞因子突变和修饰(例如IL-D80类似物)的作用。

本发明还考虑了竞争性药物筛选测定的应用，例如抗细胞因子的中和抗体或受体结合片段与试验化合物的竞争。

IL-D80抗原的“衍生物”包括天然存在形式的氨基酸序列突变体、糖基化变异体以及与其他化学部分的共价缀合物或聚合缀合物。例如应用标准方法使官能度键合于存在于IL-D80氨基酸侧链或N-末端或C-末端的基团，从而可制备共价衍生物。参见例如Lundblad和Noyes(1988)Chemical Reagents for Protein Modification，第1-2卷，CRCPress，Inc.，Boca Raton，FL；Hugli(编著，1989)Technigues in ProteinChemistry，Academic Press，San Diego，CA；和Wong(1991)Chemistry ofProtein Conjugation and Cross Linking，CRC Press，Boca Raton，FL。

具体地说，包括糖基化改变，例如通过在其合成和加工过程中或在进一步的加工步骤中改变多肽的糖基化模式来制备。参见例如Elbein(1987)Ann.Rev.Biochem 56：497-534。本发明还包括具有相同一级氨基酸、但是具有其他次要修饰(包括磷酸化氨基酸残基例如磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸)的各种形式肽。

本发明还提供IL-D80和其他同源或异源蛋白质之间的融合多肽。许多细胞因子受体或其他表面蛋白质是多聚体例如同型二聚体，重复性结构具有多种好处，包括降低对蛋白水解切割的敏感性。典型的例子是指示剂多肽(例如荧光素酶)与蛋白质节段或结构域(例如受体结合节段)的融合物，以便可容易地检测融合配体的存在或定位。参见例如Dull等，美国专利号4,859,609。其他基因融合配对体包括细菌的β-半乳糖苷酶、trpE、A蛋白、β-内酰胺酶、α-淀粉酶、乙醇脱氢酶、酵母α-接合因子以及检测或纯化标记例如His6序列的FLAG序列。参见例如Godowski等(1988)Science 241：812-816。

融合肽一般可通过重组核酸方法或合成多肽方法制备。例如Sambrook等(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual(第二版)，第1-3卷，Cold Spring Harbor Laboratory；和Ausubel等(编著，1993)Current Protocols in Molecular Biology，Greene and Wiley，NY中全面介绍了核酸操作和表达技术。例如Merrifield(1963)J.Amer.Chem.Soc.85：2149-2156；Merrifield(1986)Science 232：341-347；Atherton等(1989)Solid Phase Peptide Synthesis：A Practical Approach，IRL Press，Oxford；以及Grant(1992)Synthetic Peptides：A User′s Guide，W.H.Freeman，NY中描述了合成多肽的技术。重折叠方法用于合成蛋白质。

本发明还考虑了氨基酸序列变异体或糖基化变异体以外的IL-D80蛋白衍生物的应用。这样的衍生物可能涉及与化学部分或蛋白质载体的共价结合或聚合结合。共价或聚合衍生物可用作免疫原、免疫分析的试剂或纯化方法的试剂例如用于结合配偶体(例如其他抗原)的亲和纯化。可如下固定IL-D80：与固体支持物(例如溴化氰活化的SEPHAROSE)共价结合、本领域已知的方法、或吸附在聚烯烃表面(应用或不用戊二醛交联)，以便用于抗IL-D80抗体或替代结合组合物的测定或纯化。例如为了用于诊断测定，所述IL-D80蛋白也可用可检测基团标记。通过固定抗体或互补结合配偶体(例如受体的结合部分)可纯化IL-D80。

本发明的溶解IL-D80或片段可用作制备抗血清或结合特异性抗体的免疫原。纯化抗体可用于筛选单克隆抗体或抗原结合片段，包括天然抗体的抗原结合片段，例如Fab、Fab′、F(ab)₂等。纯化IL-D80抗原也可用作检测所述细胞因子水平升高作用下产生的抗体的试剂，这可以诊断异常或特定生理状况或病症。本发明考虑了针对SEQ IDNO：1、3、7或9所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列或含所述序列的蛋白片段产生的抗体。具体地说，本发明考虑了具有结合亲和性的抗体或针对特定结构域(例如螺旋A、B、C或D)产生的抗体。

本发明考虑了分离其他密切相关的种变异体。DNA印迹分析和RNA印迹分析可建立其他哺乳动物存在的相似遗传实体。很可能IL-D80的种间变异体是普遍的，例如啮齿类、兔形目动物、食肉动物、偶蹄类、奇蹄目以及灵长类动物。

本发明还提供分离一组结构、表达和功能不同和类似的相关抗原的方法。分离和特征鉴定所述分子的其他不同种变异体或多态性变异体可大大的加速阐明其许多生理作用。具体地说，本发明提供用于鉴定不同物种的其他同源遗传实体的有用探针。

所述分离基因允许转化无IL-D80表达的细胞，例如缺乏相应的蛋白和呈现阴性背景活性的种型或细胞。与非转化对照细胞相比，这应可分析IL-D80的功能。

特别是比较相关类别的成员时，可用现代分子生物学标准技术分析通过这些抗原介导实现不同生理功能的关键结构元件。参见例如Cunningham等(1989)Science 243：1339-1336中描述的同系物扫描诱变技术；O′Dowd等(1988)J.Biol.Chem.263：15985-15992中使用的方法；和Lechleiter等(1990)EMBO J.9：4381-4390。

细胞内功能可能涉及受体信号转导。然而，蛋白质内在化可在某些条件下发生，并且可能发生细胞内组分和细胞因子之间的相互作用。可通过诱变或直接的生物化学方法(例如交联或亲和方法)鉴定IL-D80与互作组分相互作用的特定节段。结晶学结构分析或其他物理方法也适用。信号转导机制的进一步研究包括研究通过亲和方法或遗传方法(例如突变体的互补分析)可分离的相关成分。

可进一步研究IL-D80的表达和控制。所述抗原相关性控制元件应具有不同的生理学、发育、组织特异性或其他表达模式。值得注意的是上游或下游遗传区段(例如控制元件)。

IL-D80抗原的结构研究将使得可以设计新的抗原，特别是对所述分子具有激动剂或拮抗剂特性的类似物。这一点可与前面所述的筛选方法联合用于分离具有需要活性谱的抗原。V.抗体

可制备针对天然存在形式和重组形式的IL-D80蛋白(包括种变异体、多态性变异体或等位基因变异体)及其片段的不同表位的抗体。另外，可制备针对活性形式或非活性形式(包括天然或变性形式)的IL-D80的抗体。还考虑了抗独特型抗体。

可用所述片段与免疫原性蛋白的缀合物免疫动物来产生针对所述抗原抗原预定片段的抗体，包括结合片段和单链种抗体。可用分泌需要抗体的细胞制备单克隆抗体。可筛选这些抗体与正常或缺陷IL-D80的结合，或筛选这些抗体例如通过受体介导的激动剂活性或拮抗剂活性。抗体可以是激动剂或拮抗剂，例如通过空间性阻止与受体的结合。这些单克隆抗体通常以KD至少约1mM，更通常至少约300μM，一般至少约100μM，更一般至少约30μM，优选至少10μM，更优选至少3μM或更好的结合。

一般用免疫测定法测定特异结合或者也就是与针对特定免疫原(例如SEQ ID NO：2、4、8或10的氨基酸序列组成的免疫原)产生的抗体特异性免疫反应的IL-D80蛋白。一般免疫测定法用制备的例如抗SEQ ID NO：2、4、8或10多肽的多克隆抗血清。选择对其他IL-11(例如人IL-11或啮齿类IL-11)、优选为相同物种IL-11具有低交叉反应性的抗血清，在用于所述免疫测定法之前通过免疫吸附可去除任何这样的交叉反应。

为了产生用于免疫测定的抗血清，可按本文所述分离SEQ IDNO：2、4、8或10的蛋白质或其组合蛋白。例如可在哺乳动物细胞系中生产重组蛋白质。一般使用标准佐剂如弗氏佐剂和标准小鼠免疫方法(参见Harlow和Lane，同上)，用选择蛋白免疫合适的宿主，例如小鼠近交品系(如Balb/c)。另外，得自本文公开序列而且与载体蛋白缀合的合成肽可用作免疫原。收集多克隆血清并以免疫测定测定其对免疫原蛋白的效价，例如免疫原固定在固体支持物上的固定相免疫测定。选择效价104或更高的多克隆抗血清，应用竞争性结合免疫测定(例如Harlow和Lane介绍的免疫测定，第570-573页，同上)检测他们与其他IL-11家族成员(例如啮齿类IL-11)的交叉反应性。优选至少一种其他IL-11家族成员和例如灵长类IL-11一起用于该测定中。可用本文所述的标准分子生物学和蛋白质化学技术生产并分离作为重组蛋白的IL-11家族成员。

竞争结合形式的免疫测定可以用于交叉反应性测定中。例如可将SEQ ID NO：2或8的蛋白质固定在固体支持物上。加入所述测定的蛋白质与抗血清竞争性结合固定抗原。比较上述蛋白与抗血清竞争结合固定抗原蛋白质的能力与SEQ ID NO：2或8蛋白质的竞争结合能力。用标准计算方法计算上述蛋白质的交叉反应性百分比。选择并合并与以上所列的各种蛋白质的交叉反应性低于10％的抗血清。然后，通过用以上列出的蛋白质进行免疫吸附从合并的抗血清中去除交叉反应性抗体。

然后所述免疫吸附并合并的抗血清用于如上所述的竞争性结合免疫测定，以比较第二种蛋白与免疫原蛋白(例如SEQ ID NO：2、4、8或10的IL-11样蛋白)。为了进行这种比较，分别在宽浓度范围测定两种蛋白质并且测定抑制50％的抗血清结合固定抗原蛋白质需要的各蛋白量。如果所需要的第二种蛋白量小于所要求的选定蛋白量的两倍，那么认为第二种蛋白是与免疫原产生的抗体特异性结合。

本发明的抗体也可用于诊断用途。作为捕获抗体或非-中和抗体，可筛选其结合所述抗原而不抑制结合受体的能力。作为中和抗体，它们可用于竞争性结合测定。它们还可用于测定或定量IL-D80蛋白质或其受体。参见例如Chan(编著，1987)Immunology：A Practical Guide.Academic Press，Orlando，FL；Price和Newman(编著，1991)Principles andPractical of Immunoassay，Stockton Press，N.Y.；和Ngo(编著，1988)Nonisotopic Immunoassay，Plenum Press，N.Y.。交叉吸附、去除、或其他方法可制备定义的选择性，例如独特或共有的种特异性。这些可是鉴别不同组群抗原的测试基础。

此外，本发明的抗体(包括抗原结合片段)可以是与所述抗原结合并抑制功能性结合(例如抑制对可引发生物反应的受体的功能性结合)的强拮抗剂。它们还可用作非-中和抗体，并可与毒素或放射性核素缀合，以便当抗体结合抗原时，可杀伤例如在其表面表达所述抗原的细胞。因此，这些抗体可以直接或利用接头间接地与药物或其他治疗因子缀合，并可以实现靶向给药。

关于用作免疫原的融合多肽或共价连接多肽，抗原片段可与其他物质、尤其是多肽结合。抗原及其片段可与多种免疫原融合或共价连接，例如匙孔血蓝蛋白、小牛血清白蛋白、破伤风类毒素等。参见Microbiology，Hoeber Medical Division，Harper和Row，1969；Landsteiner(1962)Specificity of Serological Reactions，Dover Publications，New York；Williams等(1967)Methods in Immunology and Immunochemistry，第1卷，Academic Press，New York；以及Harlow和Lane(1988)Antibodies：ALaboratory Manual，CSH Press，NY，介绍了制备多克隆抗血清的方法。

在某些情况下，需要从不同哺乳动物宿主(例如小鼠、啮齿类、灵长类、人类等)制备单克隆抗体。关于制备这样的单克隆抗体的技术的介绍可见例如Stites等(编著)Basic and Clinical Immunology(第四版)，Lange Medical Publications，Los Altos，CA，以及其中引用的参考文献；Harlow和Lane(1988)Antibodies：A Laboratory Manual，CSH Press；Goding(1986)Monoclonal Antibodies：Principles and Practice(第二版)Academic Press，New York；尤其可参见Kohler and Milstein(1975)，Nature 256：495-497，该文献阐述了一种制备单克隆抗体的方法。

其他合适技术包括体外将淋巴细胞暴露于抗原性多肽或选择噬菌体或相似载体的抗体文库。参见Huse等(1989)″Generation of a LargeCombinatorial Library of the Immunoglobulin Repertoire in PhageLambda，″Science 246：1275-1281；以及Ward等(1989)Nature 341：544-546。可使用经修饰或未修饰的本发明多肽和抗体，包括嵌合或人源化抗体。所述多肽和抗体常常通过共价或非共价连接一种提供可检测信号的物质来标记。已知多种标记和缀合技术，并在科学文献和专利文献中都有广泛的报道。合适的标记包括放射性核素、酶、底物、辅因子、抑制剂、荧光的部分、化学发光部分、磁性颗粒等等。介绍使用所述标记的专利包括：美国专利号3,817,837；3,850,752；3,939,350；3,996,345；4,277,437；4,275,149和4,366,241。也可以生产重组免疫球蛋白，参见Cabilly，美国专利号4,816,567；Moore等，美国专利号4,642,334；以及Queen等(1989)Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 86：10029-10033。

本发明的抗体还可用于分离所述蛋白的亲和色谱法。可将所述抗体连接在固定支持物上来制备柱子。参见例如Wilchek等(1984)Meth.Enzymol.104：3-55。反之可用于纯化抗体。

针对各IL-D80产生的抗体也可以用于产生抗独特型抗体。这些可用于检测或诊断相应抗原表达相关性不同免疫病症。VI.核酸

所述肽序列和相关试剂可用于从例如天然来源检测、分离或鉴别编码IL-D80的DNA克隆。通常可用于分离哺乳动物的基因，相似方法可用于分离其他物种的基因，例如温血动物(例如鸟类和哺乳类)。交叉杂交可分离相同类型(例如多态性变异体)或其他类型的IL-D80。许多不同的方法可供成功分离合适的核酸克隆。

如上所述，所述纯化蛋白或定义的肽可用于通过标准方法产生抗体。合成肽或纯化蛋白可提呈给免疫系统以产生单克隆或多克隆抗体。参见例如Coligan(1991)Current Protocols in ImmunologyWiley/Green；以及Harow和Lane(1989)Antibodies：A LaboratoryManual，Cold Spring Harbor Press。

例如特异性结合组合物可用于筛选由表达IL-D80的细胞系建立的表达文库。可通过不同的染色或免疫荧光方法进行细胞内表达的筛选。结合组合物可用于亲和纯化或选出表达表面融合蛋白的细胞。

所述肽节段也可用于预测合适的寡核酸以筛选文库。遗传密码可用于选择用作筛选探针的合适的寡核酸。参见例如SEQ ID NO：1、3、7或9。结合多聚酶链式反应(PCR)技术，合成寡核酸可用于从文库中选择正确的克隆。互补序列可用作探针、引物或反义链。各种片段应该特别有用，例如与锚载体或多聚-A互补PCR技术或其他肽的互补DNA结合。

本发明考虑了编码抗原性或相应的生物活性IL-D80多肽的分离DNA或片段的用途，尤其是缺乏编码所述序列的非翻译5’部分的分离DNA或片段的用途。此外，本发明包括编码生物活性蛋白或多肽而且能够在合适的条件下与本文所述DNA序列杂交的分离或重组DNA。所述生物活性蛋白或多肽可以是完整的抗原或片段，而且具有例如SEQ ID NO：2、4、8或10、特别是成熟分泌多肽公开的氨基酸序列。另外，本发明包括编码与分泌型IL-D80具有高度同一性的蛋白质的分离DNA或重组DNA或其片段的用途。所述分离DNA可在5’和3’侧具有相应的调控序列，例如启动子、增强子、多聚-A附加信号等。另一方面，可通过使编码节段与异源启动子有效连接(例如在内源基因上游插入启动子)来实现表达。

“分离的”核酸是基本上与其他成分分离的核酸，例如RNA、DNA或混合聚合物，所述其他成分天然伴随着天然序列，例如核糖体、聚合酶和/或起源物种的侧翼基因组序列。该术语包括与其天然环境分离的核酸序列，并包括重组或克隆的DNA分离物和化学合成的类似物或通过异源系统生物合成的类似物。基本纯化的分子包括所述分子的分离形式。一般所述核酸为载体或小于约50kb的片段，所述片段常常小于约30kb，通常小于约10kb，优选小于约6kb。

分离的核酸一般是分子的同源组合物，但是在某些实施方案中包括微量异源物质。这种异源物质通常见于聚合物两端或需要生物功能或活性不重要的部分。

“重组”核酸是根据它的制备方法或其结构定义的。关于制备方法，例如一种方法制备的一种产物，则所述方法是应用重组核酸技术，例如涉及人为干预核苷酸序列(一般是选择或生产)。另外，它可以是通过产生包含两个片段的融合物的序列而制备核酸，所述片段不是天然互相邻接的，但是不包括天然产物，例如天然发生的突变体。因此，包括例如用任何非天然载体转化细胞制备的产物，因为所述载体是包含应用任何合成寡核苷酸方法获得的序列的核酸。通常所述操作是用编码相同或保守氨基酸的重复密码子替代一个密码子，同时一般导入或去除序列识别位点。

或者，将需要功能的核酸节段连接在一起，以产生包括需要组合功能(不见于通常可获得的天然形式)的单一遗传实体。限制性内切酶识别位点通常是这样的人工操作的目标，但是也可以设计加入其他位点特异性目标(例如启动子、DNA复制位点、调节序列、控制序列或其他有用的特性)。相似的构思可用于重组(例如融合)多肽。本发明特别包括因为遗传密码丰余性而编码类似于所述抗原片段的多肽的合成核酸，以及各种不同物种序列的融合物或多态性变异体。

核酸序列有效“片段”是连续节段，这种连续节段含有至少约17个核苷酸的，一般至少约22个核苷酸，通常至少约29个核苷酸，更经常至少约35个核苷酸，一般至少约41个核苷酸，通常至少约47个核苷酸，优选至少约55个核苷酸，在特别优选实施方案中可以至少约60个或更多的核酸，例如67、73、81、89、95个核苷酸等。

编码IL-D80蛋白质的DNA可特别用于鉴别基因、mRNA、编码相关或相似蛋白质的cDNA种类以及编码不同物种的同源蛋白的DNA。其他物种可存在同源物，包括灵长类、啮齿类、犬科动物、猫科动物、鸟类和鱼。不同的IL-D80蛋白质应该是同源的并包括在本文中。然而，只要它们有足够的同源性，那么即使与所述抗原具有更远的进化关系的蛋白质也可以在合适的条件下应用这些序列实现分离。特别值得注意的是灵长类IL-D80蛋白。

得自基因组序列的重组克隆(例如包含内含子)可用于转基因研究，包括例如转基因细胞和转基因生物，以及用于基因治疗。参见例如Goodnow(1992)″Transgenic Animals″，载于：Roitt(编著)Encyclopedia of Immunology，Academic Press，San Diego，第1502-1504页；Travis(1992)Science 256：1392-1394；Kuhn等(1991)Science254：707-710；Capecchi(1989)Science 244：1288；Roberson(编著，1987)Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells：A Practical Approach，IRLPress，Oxford；Rosenberg(1992)J.Clinucal Oncology 10：180-199；以及Coumoyer和Caskey(1993)Ann.Rev.Immunol.11：297-329。或者，可通过使编码节段与异源启动子有效连接实现表达，例如通过在内源基因上游插入一个启动子。参见例如Treco等，WO 96/29411或USSN08/406,030。

核酸序列比较情况下的显著同源(例如同一性)是指当优化对比(插入或缺失合适的核苷酸)时，进行比较的所述节段或其互补链相同，所述节段相同为至少约50％的核苷酸，一般至少约58％，通常至少约65％，常常至少约71％，一般至少约77％，通常至少约85％，优选至少约95％-98％或更高，在特别实施方案中高达约99％或更多的核苷酸。或者，当所述节段在选择杂交条件下与一种链或其互补序列(一般用例如SEQ ID NO：1、3、7或9的IL-D80序列)杂交时说明存在显著同源性。一般选择性杂交发生在至少约30个核苷酸节段的同一性至少约55％时，，优选约25个核苷酸节段的同一性至少约75％，最优选约20个核苷酸节段的同一性至少约90％。参见Kanehisa(1984)Nuc.AcidsRes.12：203-213。正如所述，同一性比较的长度可以在较长的节段上进行，在某些实施方案中同一性比较在至少约17个核苷酸、通常至少约28个核苷酸、一般至少约40个核苷酸、优选至少约75-100或更多的核苷酸节段上进行。

关于杂交同源性的严格条件是盐、温度、有机溶剂和其他参数的严格组合条件，通常所述参数在杂交反应中是受控制的。严格的温度条件通常包括超过约30℃的温度，通常超过约37℃，一般超过约55℃、60℃或65℃，优选超过约70℃。严格的盐条件一般低于约1000mM，通常低于约400mM，一般低于约250mM，优选低于约150mM，包括约100mM、50mM甚至20mM。然而，参数组合比任何单独参数量值重要得多。参见例如Wetmur和Davidson(1968)J.Mol.Biol.31：349-370。在严格条件下的杂交应产生至少2倍以上的背景，优选至少3-5倍或更多。

为了进行序列比较，通常将一个序列作为参照序列，受试序列与其进行比较。当使用序列比较算法时，受试序列和参照序列输入计算机，如果需要的话随后指定坐标和序列算法程序参数。然后根据指定程序参数，序列算法程序计算受试序列与参照序列的序列同一性百分比。

可如下进行比较序列的最佳对比：例如应用Smith和Waterman(1981)Adv.Appl.Math.2：482的局部同源性算法；Needleman和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48：443的同源排列对比算法；Pearson和Lipman(1988)Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 85：2444的相似性检索法；所述算法的计算机化算法(Wisconsin Genetics软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group，575 ScienceDr.，Madison，WI)；或者肉眼检测(通常参见Ausubel等，同上)。

有用算法的一个例子是PILEUP。PILEUP利用递增性逐对对比获得一组相关序列的多序列对比，以了解序列关系和序列同一性百分比。它还描绘用来创建排列对比的树图或树状图。PILEUP应用简化的Feng和Doolittle(1987)J.Mol.Evol.35：351-360递增排列对比方法。所用的方法与Higgins和Sharp(1989)CABIOS 5：151-153所述的方法相似。所述程序可以排列对比高达300个序列，每个序列最大长度为5,000个核苷酸或氨基酸。多序列排列对比方法开始于两个最相似序列的成对排列对比，产生一簇两个排列对比的序列。然后这簇序列与下一个最相关的序列或一簇排列序列进行排列对比。两簇序列是通过两个个别序列的成对排列的简单延伸排列的。通过一系列递增的成对排列得到最终排列对比。通过指定序列比较区段的特定序列和其氨基酸或核苷酸坐标以及指定程序参数来运行所述程序。例如参照序列可与其他受试序列进行比较以便确定序列同一性百分比关系，应用下列参数：默认空位权数(3.00)，默认空位长度权数(0.10)以及加权末端空位。

另一个适合于测定序列同一性和序列相似性的百分比的算法实例是BLAST算法，它描述于Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215：403-410。执行BLAST分析的软件可通过国立生物技术信息中心(http：www.ncbi.nlm.nih.gov/)公开获得。这一算法包括：首先鉴定查询序列长度为W的短字串，从而鉴定高分序列对(HSP)，当与数据库序列相同长度的字串排列对比时，它达到某一正值阈值分T。T称为相邻字串分阈值(Altschul等，同上)。这些最初的相邻字串命中序列用作启始寻找包括所述字串的更长HSP的种子。然后字串命中序列沿着每个序列的两个方向延伸，前提是累加排列对比分增加。当：累加排列对比分从所达到最大值下降X量值时；由于一个或多个负分残基排列而使累加排列对比分为0或0以下时；或到达任一序列的末端时，两个方向的字串命中序列的延伸停止。BLAST算法参数W、T和X决定所述序列排列对比的敏感性和速度。BLAST程序使用的默认参数为：字串长度(W)为11，BLOSUM62计分矩阵(参见Henikoff和Henikoff(1989)Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 89：10915)排列对比(B)为50，期望值(E)为10，M＝5，N＝4以及比较两条链。

除了计算序列同一性百分比外，BLAST算法还可以进行两个序列之间的相似性的统计学分析(参见例如Karlin和Altschul(1993)Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 90：5873-5787)。BLAST算法提供的一个相似性测量值是最小总概率(P(N))，它说明两个核苷酸和氨基酸序列偶然发生匹配的概率。例如如果比较受试核酸和参照核酸的最小总概率小于约0.1，更优选小于约0.01，最优选小于约0.001，那么认为受试核酸与参照序列相似。

进一步说明多肽的两个核酸序列基本相同的指标是：第一种核酸编码的多肽是与第二种核酸编码的多肽具有免疫交叉反应性，如下所述。因此，例如当两种肽仅因为保守取代而不同时，通常一种多肽与第二种多肽基本相同。说明两种核酸序列基本相同的另一个指标是在严格条件下两种分子相互杂交，如下所述。

其他哺乳动物物种的IL-D80可以通过近亲物种的种交叉杂交来克隆和分离。物种关系远的物种同源性较低，因此最好在关系密切的物种之间进行杂交。或者，制备种特异性较低的抗体制品可用于表达克隆方法。VII.制备IL-D80；模拟物

可如下获得编码IL-D80或其片段的DNA：化学合成，筛选cDNA文库或筛选从各种细胞系或组织样品制备的基因组文库。参见例如Okayama和Berg(1982)Mol.Cell.Biol.2：161-170；Gubler和Hoffman(1983)Gene 25：263-269；和Glover(编著，1984)DNA Cloning：A PracticalApproach，IRL Press，Oxford。或者，本发明提供的序列提供有用的PCR引物或可合成或用其他方法制备编码IL-D80的合适基因；包括天然存在的具体形式。

可使所述DNA在各种各样的宿主细胞中表达，其用途有：用于合成全长IL-D80或片段，然后可用IL-D80或其片段产生多克隆或单克隆抗体；用于结合研究；用于构建和表达修饰分子；以及用于结构/功能研究。可能需要陪伴分子蛋白以便有效分泌，或者额外步骤可能是从细胞内间隔回收所述蛋白所必需的。

本文使用的载体包括质粒、病毒、噬菌体、可整合DNA片段以及其他能够整合DNA片段到宿主基因组中的载体。参见例如Pouwels等(1985以及增刊)Cloning Vectors：A Laboratory Manual，Elsevier，N.Y.；和Rodriguez等(编著，1988)Vectors：A Survey of Molecular CloningVectors and Their Uses，Buttersworth，Boston，MA。

对于本发明目的，当DNA序列功能上相互联系时，可将其有效连接。例如如果前序列DAN或分泌型前导序列DNA表达为前蛋白或参与引导多肽到细胞膜或使多肽分泌时，可使其与多肽编码序列有效连接。如果启动子控制所述多肽的转录，那么将它与编码序列有效连接；如果核糖体结合位点的位置使得可以翻译，那么将它与编码序列有效连接。通常，有效连接意味着邻近并在阅读框中，然而某些遗传元件象阻遏物基因不是邻近连接，而是与操纵子序列结合，进而控制表达。参见例如Rodriguez等，第10章，第205-236页；Balbas和Boliver(1990)Methods in Enzymology 185：14-37；和Ausubel等(1993)CurrentProtocols in Molecular Biology，Greene和Wiley，NY。

合适表达载体的代表性实例包括pCDNA1；pCD，参见Okayama等(1985)Mol.Cell.Biol.5：1136-1142；pMClneo Poly-A，参见Thomas等(1987)Cell.51：503-512；以及杆状病毒载体如pAC 373或pAC 610。参见例如Miller等(1988)Ann.Rev.Microbiol.42：177-199。

常常需要用提供特定或明确糖基化形式的系统中表达IL-D80多肽。参见例如Luckow和Summers(1988)Bio/Technology 6：47-55；和Kaufman(1990)Meth.Enzymol.185：487-511。

可利用遗传工程使所述IL-D80或其片段工程改造为连接到细胞膜上的磷脂酰肌醇(PI)，但是可以通过用磷脂酰肌醇裂解酶(例如磷脂酰肌醇磷脂酶-C)处理从膜上去除。这就释放了生物活性形式的抗原，并且可通过蛋白质化学的标准方法纯化。参见例如Low(1989)Biochim.Biophys.Acta 988：427-454；Tse等(1985) Science 230：1003-1008；以及Brunner等(1991)J.Cell Biol.114：1275-1283。

既然已经特征鉴定了IL-D80，那么可通过常规合成肽的方法制备其片段或其衍生物。所述方法包括例如Stewart和Young(1984)SolidPhase Peptide Synthesis，Pierce Chemical Co.，Rockford，IL；Bodanszky(1984)The Practices of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，New York；Bodanszky(1984)The Principles of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，New York；以及Villafranca(编著，1991)Techniques in Protein ChemistryII，Academic Press，San Diego，Ca.中描述的方法。VIII.应用

本发明提供本文其他地方介绍的诊断用途(例如在IL-D80介导病症中的诊断性应用)的试剂或用于以下介绍的诊断试剂盒的试剂。所述基因可用于法医学，例如用以区别啮齿类和人类，或用作区分不同表达或修饰模式的不同细胞的标记。

本发明还提供具有显著商业和/或治疗潜力的试剂。所述IL-D80(天然或重组)、其片段及其抗体以及鉴定为对IL-D80具有结合亲和力的化合物可用作分子生物学、免疫学或生理学技术的试剂。用所述试剂可制备合适的试剂盒，例如用于实用实验室工作；蛋白质、抗体、克隆方法、组织学等生产或使用中的试剂盒。

所述试剂还可用于治疗与异常生理或发育相关性病症，包括炎性病症。它们可以用于体外测试是否存在相互作用组分，这可能关系到特定治疗策略的成功与否。具体来说，用本发明提供的组合物经合适的治疗方法调节各种细胞(例如造血细胞或淋巴样细胞)的生理。参见例如Thomson(编著，1998)The Cytokine Handbook(第3版)AcademicPress，San Diego；Metcalf和Nicola(1995)The Hematopoietic ColonyStimulating Factors Cambridge University Press；以及Aggarwal和Gutterman(1991)Human Cytokines Blackwell Pub.。

例如与IL-D80异常表达或异常信号传递有关的疾病或病症应是激动剂或拮抗剂的可能治疗目标。这种新的细胞因子应可在调节或促进影响免疫反应(例如炎性疾病和/或自身免疫性疾病)的造血细胞(例如淋巴样细胞)，。另一方面，它可以影响血管生理或生长或神经元的作用。

具体来说，细胞因子应可介导不同情况下细胞合成细胞因子、增殖等。IL-D80的拮抗剂(例如天然形式IL-D80的突变蛋白变异体或阻断性抗体)可提供阻碍免疫反应的选择性有效方法，例如在炎性或自身免疫反应原位阻止免疫反应。另参见Samter等(编著)ImmunologicalDisease第1和2卷，Little，Brown and Co.。

例如根据RNA印迹法分析mRNA表达的评价，已知产生IL-D80的不同细胞类型的不同异常病症。参见Berkow(编著)The MerckManual of Diagnosis and Therapy，Merck & Co.，Rahway，N.J.；Thorn等，Harrison′s Principles of Internal Medicine，McGraw-Hill，N.Y.；和Weatherall等(编著)Oxford Textbook of Medicine.Oxford UniversityPress，Oxford。许多其他医学病症和疾病涉及巨噬细胞或单核细胞活化，其中大多数病症对本发明提供的激动剂或拮抗剂治疗有效。参见例如Stites和Terr(编著，1991)Basic and Clinical Immunology Appletonand Lange，Norwalk，Connecticut；以及Samter等(编著)ImmunologicalDiseases Little，Brown and Co.。这些病症对应用本发明提供的组合物的预防或治疗敏感。

可纯化IL-D80、拮抗剂、抗体等，然后给予患者(兽医学或人类患者)。这些试剂可以与其他活性或惰性成分(例如常规药学上可接受的载体或稀释剂，如免疫佐剂)以及生理学上安全的稳定剂、赋形剂或防腐剂组合用于治疗用途。这些组合物可以过滤除菌并通过以剂量小瓶冷冻干燥或以稳定水性制剂保存而制成剂型。本发明还考虑了抗体或其结合片段的应用，包括不是互补结合的形式。

可应用IL-D80或其片段筛选药物，以鉴定与IL-D80具有结合亲和性的化合物或对IL-D80功能具有相关生物学影响的化合物，包括相关成分的分离。然后随后的生物测定可用来决定是否所述化合物具有内在刺激活性，并因此为阻断剂或拮抗剂，因为它阻碍所述细胞因子的活性。同样，具有内在刺激活性的化合物能够活化信号途径，因此为激动剂，因为它刺激IL-D80活性。本发明还考虑了作为拮抗剂的抗IL-D80阻断抗体和作为激动剂的刺激抗体的治疗用途。这种方法应特别适用于其他IL-D80种变异体。

有效治疗所必需的试剂量取决于许多不同的因素，包括给药方法、目标部位、患者生理状况以及给予的其他药物。因此治疗剂量应逐渐增加到最为安全和有效的剂量。一般体外使用的剂量为原位给予这些试剂的量提供有用的指导。用于治疗具体病症的有效剂量的动物试验进一步为人类剂量提供预测性指示。各种考虑描述于例如Gilman等(编著)Goodman and Gilman′s：The Pharmacological Bases ofTherapeutics，最新版，Pergamon Press；以及Remineton′s PharmaceuticalSciences，最新版，Mack Publishing Co.，Easton，Penn。其中以及下文论述了给药方法，例如口服、静脉内、腹膜内、或肌内给药、经皮扩散等。药学上可接受的载体包括水、盐水、缓冲液，以及例如the MerckIndex，Merck & Co.，Rahway，New Jersey描述的其他化合物。一般预期剂量范围为低于1mM浓度，通常低于约10μM浓度，常常低于约100nM，优选低于约10pM(皮摩尔)，最优选低于约1fM(飞摩尔)，以及合适的载体。缓释制剂或缓释装置通常用于持续给药或长期给药。参见例如Langer(1990)Science 249：1527-1533。

IL-D80、其片段、抗IL-D80抗体或其片段、拮抗剂和激动剂可直接给予需要治疗的宿主，或根据所述化合物的大小，可能在给药前需要将其与载体蛋白(例如卵白蛋白或血清白蛋白)缀合。治疗制剂可以许多常规的剂量制剂给予。虽然可以单独给予所述活性成分，但优选以药用制剂给予。制剂一般包括至少一种如以上定义的活性成分以及其一种或多种可接受的载体。每种载体应该在与所述其他成分相容的意义上既是药学上又是生理学上可接受的，并且对患者无害。制剂包括适合于口服、直肠、鼻、局部或胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)给药的制剂。所述制剂常规可以单位剂量形式提供，可通过制药领域众所周知的方法制备。参见例如Gilman等(编著，1990)Goodmanand Gilman′s：The Pharmacological Bases of Therapeutics，第8版，Pergamon Press；以及Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Penn.；Avis等(编著，1993)Pharmaceutical Dosage Forms：Parenteral Medications.Dekker，New York；Lieberman等(编著，1990)Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets，Dekker，New York；以及Lieberman等(编著，1990)Pharmaceutical Dosage Forms：Disperse Systems，Dekker，New York。本发明疗法可以与其他药物组合或与其他药物联合使用，例如其他细胞因子(包括IL-11)或其拮抗剂。

天然和重组形式的本发明IL-D80都特别可用于试剂盒和能够筛选与所述蛋白质具有结合活性的化合物的测定方法中。近年来研制了多种自动测定方法，以便可以在短期内筛选上万的化合物。参见例如Fodor等(1991)Science 251：767-773，它描述了测试在固体支持物上合成的无数明确聚合物结合亲和力的方法。通过获得本发明提供的大量纯化的可溶性IL-D80可大大推进合适测定方法的开发。

其他方法可以用来测定IL-D80-IL-D80受体相互作用中的关键残基。可进行突变分析来测定所述相互作用和/或信号传递中的关键性特定残基，例如参见Somoza等(1993)J.Exptl.Med.178：549-558。PHD(Rost和Sander(1994)Proteins 19：55-72)和DSC(King和Sternberg(1996)Protein Sci.5：2298-2310)可以提供α-螺旋(H)、β-链(E)、或卷曲(L)的二级结构预测。螺旋A和D在受体的相互作用中是最重要的，而D螺旋是更重要的区域。以上说明了不同螺旋的边界。表面暴露残基影响受体的结合，而嵌入的残基影响整体结构。

例如抗原一旦已经进行了结构定义，例如通过四级结构数据，那么一般可找到拮抗剂。现在只要应用纯化IL-D80开发了高度自动化测定方法，就可测试潜在的相互作用类似物的。具体地说，新型激动剂和拮抗剂可通过应用本发明所述的筛选技术来发现。特别重要的是发现对一系列IL-D80具有综合结合亲和力的化合物，例如可用作IL-D80种变异体拮抗剂的化合物。

一种药物筛选方法利用以表达IL-D80的重组DNA分子稳定转化的真核或原核宿主细胞。可以分离表达独立于其他分子的IL-D80的细胞。活的或固定形式的这样的细胞可用于标准结合配偶体结合测定。另参见Parce等(1989)Science 246：243-247；以及Owicki等(1990)Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 87：4007-4011，该文献描述了检测细胞反应的敏感方法。

另一种药物筛选方法涉及一种提供高效筛选对IL-D80具有合适结合亲和力的化合物的方法，并详细描述在1984年9月13日公布的Geysen，欧洲专利申请84/03564中。首先，大量不同的小肽受试化合物在固体支持物上合成，固体支持物例如塑料钉(pin)或某种其他适合的表面，参见Fodor等(1991)。然后所有的钉(pin)与溶解的未纯化IL-D80或溶解的纯化IL-D80反应，然后冲洗。下一步骤涉及检测结合IL-D80。

合理药物设计也可以以IL-D80和其他效应物或类似物的分子形状的结构研究为基础。效应物可以是介导结合作用的其他功能的其他蛋白质，或通常与IL-D80相互作用的其他蛋白例如受体。一种测定与特定其他蛋白相互作用的位点的方法是物理结构测定，例如X-射线晶体学或2维NMR技术。根据例如针对其他细胞因子-受体模型的建模，所述结构研究对关于什么氨基酸残基构成分子接触区域提供指导。关于蛋白质结构测定的详述，参见例如Blundell和Johnson(1976)ProteinCrystallography，Academic Press，New York。IX.试剂盒

本发明还考虑了IL-D80蛋白、其片段、肽及其融合产物在各种诊断试剂盒以及检测是否存在其他IL-D80或结合配偶体的方法中的用途。一般试剂盒具有含有定义的IL-D80肽或基因片段或识别一种或另一种试剂(例如IL-D80片段或抗体)的隔室。

用于测定受试化合物与IL-D80的结合亲和力的试剂盒一般包括受试化合物；标记化合物，例如对IL-D80具有已知结合亲和力的结合配偶体或抗体；IL-D80源(天然或重组IL-D80)；分离结合与游离标记化合物的材料，例如固定所述分子的固相。筛选出化合物时，对所述抗原具有合适的结合亲和力的化合物可以以本领域周知的合适生物测定进行测定，以便确定它们对IL-D80信号转导途径是激动剂还是拮抗剂。重组IL-D80多肽的使用也提供了充分定义的标准，以用于校准所述测定。

检测例如样品中的IL-D80浓度的优选试剂盒一般包括标记化合物(例如对所述抗原具有已知结合亲和力的结合配偶体或抗体)，细胞因子(天然或重组细胞因子)源，以及分离结合与游离标记化合物的材料，例如用于固定IL-D80的固相。一般提供含有试剂的隔室和说明书。

IL-D80或片段特异性抗体(包括抗原结合片段)可用于检测IL-D80和/或其片段的水平是否升高的诊断用途。这样的诊断测定可以应用溶胞产物、活细胞、固定细胞、免疫荧光、细胞培养物、体液，进一步可检测血清抗原相关性抗原等等。诊断测定可以是同源的(没有游离试剂和抗原-结合配偶体复合物的分离步骤)或异源的(有分离步骤)。存在各种商业测定，例如放射免疫测定(RIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶免疫测定(EIA)、酶多重免疫测定技术(EMIT)、底物标记荧光免疫测定(SLFIA)等等。参见例如Van Vunakis等(1980)Meth Enzymol.70：1-525；Harlow和Lane(1980)Antibodies：A Laboratory Manual，CSHPress，NY；以及Coligan等(编著，1993)Current Protocols in Immunology，Greene和Wiley，NY。

抗独特型抗体具有诊断抗IL-D80抗体存在与否的相似用途，因此可以诊断各种异常状态。例如过量产生的IL-D80可能导致产生不同免疫反应，所述免疫反应对异常生理状态具有诊断意义，特别是细胞增生性病症如癌症或异常活化或异常分化。此外，获得的分布形式提供了所述细胞因子在胰岛中表达的信息，提示所述细胞因子可能与该器官的功能有关，例如可能与糖尿病相关医学病症有关。

通常，诊断测定的试剂以试剂盒提供，以便优化所述测定的敏感性。对于所述主题本发明，根据所述测定的性质、测定方案和标记物，提供标记和未标记的抗体或结合配偶体、或标记的IL-D80。这通常与其他附加剂一起提供，例如缓冲剂、稳定剂、信号产生必须的物质如酶底物等等。试剂盒还优选包含正确使用和使用后正确处理内容物的说明书。一般试剂盒具有各有用试剂的隔室。最好是所述试剂以冻干粉提供，所述冻干试剂可以在水性介质中重新溶解，以提供进行所述测定的合适试剂浓度。

许多上述药物筛选和诊断测定的组分可以不加修饰直接使用或可以多种方法进行修饰。例如可以通过共价或非共价结合直接或间接提供可检测信号的部分来完成标记。对于任何一种上述测定，结合配偶体、受试化合物、IL-D80或其抗体可以直接或间接标记。可直接标记的包括以下各组标记物：放射标记物，如125I；酶(美国专利号3,645,090)如过氧化物酶和碱性磷酸酶，以及能够监测荧光强度、波长变化或荧光偏振变化的荧光标记物(美国专利号3,940,475)。可间接标记的包括使一种组分生物素化，然后使其结合与一种以上标记组标记物偶连的抗生物素蛋白。

也有许多分离结合IL-D80和游离IL-D80或者分离结合受试化合物和游离受试化合物的方法。IL-D80可固定在不同基体上，然后冲洗。合适的基体包括塑料(如ELISA板)、滤膜和珠子。参见例如Coligan等(编著，1993)Current Protocols in Immunology，第1卷，第2章，Green和Wiley，NY。其他合适的分离技术包括但不限于Rattle等(1984)Clin.Chem.30：1457-1461中介绍的荧光素抗体可磁化颗粒方法，以及在美国专利号4,659,678中介绍的双抗体磁性颗粒分离法。

将蛋白质或其片段与不同标记连接的方法在文献中已经广泛地报道，这里不需要详细讨论。许多技术涉及通过使用碳化二亚胺或活性酯而利用活化羧基形成肽键；通过巯基与活化卤素(如氯乙基)或活化烯烃(如马来酰亚胺)反应形成硫醚等等，以便实现所述连接。融合蛋白也可用于这些用途。

本发明的另一个诊断方面涉及取自IL-D80序列的寡核苷酸或多核苷酸的用途。这些序列可用作探针，以检测怀疑存在异常病症如炎症或自身免疫的患者的样品中的IL-D80水平。由于所述细胞因子可能为活化标记物或中介体，因此它可用来测定活化细胞数目，以确定(例如可能需要其他治疗时)例如在所述效应产生以及发展到明显之前的预防方式。RNA和DNA核苷酸序列的制备、所述序列的标记以及序列的优选大小在文献中有人们公认的充分描述和讨论。参见例如Langer-Safer等(1982)Proc.Nat′l.Acad.Sci.79：4381-4385；Caskey(1987)Science 236：962-967；以及Wilchek等(1988)Anal.Biochem.171：1-32。

本发明还考虑了同样测试其他分子的定性或定量表达的诊断试剂盒。诊断或预后可能取决于用作标记的多个指标的综合考虑。因此试剂盒可以测试组合的标记物。参见例如Viallet等(1989)Progress inGrowth Factor Res.1：89-90。其他试剂盒可以用于测定其他细胞亚群。X.分离IL-D80受体

分离了特定配体-受体相互作用的配体，就有了分离所述受体的方法。参见Gearing等(1989)EMBO J.8：3667-3676。例如可以确定标记IL-D80细胞因子而不干扰与其受体结合的方法。例如可使亲和标记与配体的氨基-或羧基-末端融合。所述标记可以是FLAG表位标记，或例如Ig或Fc结构域。例如通过细胞分选或检测表达这种结合组分的亚群细胞的其他筛选法，筛选表达文库对所述细胞因子的特异性结合。参见例如Ho等(1993)Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 90：11267-11271；以及Liu等(1994)J.Immunol.152：1821-29。或者，可以使用淘选法。参见例如Seed和Aruffo(1987)Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 84：3365-3369。

具有标记的蛋白质交联技术可以应用于分离IL-D80细胞因子的结合配偶体。这使得可鉴定例如以配体-受体样方式与所述细胞因子特异性相互作用的蛋白质。预测IL-D80将与IL-11Rα亚基结合即密切同源的受体亚基。受体的β亚基可能是gp130，可能涉及作为受体成分的LIF受体。

早期实验可以如期进行以确定已知IL-11受体成分是否参与对IL-D80的反应。也很有可能这些功能受体复合物可以与IL-D80受体复合物共有大多数或所有成分，无论是特异性受体亚基还是辅助的受体亚基。

实施例I.一般方法

下列文献描述或涉及下面的大多数标准方法：例如Maniatis等(1982)Molecular Cloning，A Laboratory Manual Cold Spring HarborLaboratory，Cold Spring Harbor Press，NY；Sambrook等(1989)MolecularCloning；A Laboratory Manual(第2版)第1-3卷，CSH Press，NY；Ausubel等，Biology Greene Publishing Associates，Brooklyn，NY；或Ausubel等(1987以及增刊)Current Protocols in Molecular Biology Wiley/Greene，NY；Innis等(编著，1990)PCR Protocols：A Guide to Methods andApplications Academic Press，NY。蛋白质纯化的方法包括如下方法：硫酸铵沉淀法、柱层析法、电泳法、离心法、结晶法以及其他方法。参见例如Ausubel等(1987以及定期增刊)；Deutscher(1990)″Guide toProtein Purification，″Methods in Enzymology第182卷，以及该系列的其他卷；Coligan等(1995以及增刊)Current Protocols in Protein ScienceJohn Wiley和Sons，New York，NY；P.Matsudaira(编著，1993)APractical Guide to Protein and Peptide Purification for Microsequencing，Academic Press，San Diego，CA；以及关于蛋白质纯化制品的使用的生产商文献，例如Pharmacia，Piscataway，NJ或Bio-Rad，Richmond，CA。联合使用重组技术可以与适合的节段段(表位标记)融合，例如可以与FLAG序列或可以融合的等同序列融合，例如通过蛋白酶-可去除序列。参见例如Hochuli(1989)Chemische Industrie 12：69-70；Hochuli(1990)″Purification of Recombinant Proteins with Metal Chelate Absorbent″载于：Setlow(编著)Genetic Engineering，Principle and Methods 12：87-98，Plenum Press，NY；以及Crowe等(1992)OIAexpress：The High LevelExpression & protein Purification System QUIAGEN，Inc.，Chatsworth，CA。

标准免疫技术描述于例如Hertzenberg等(编著，1996)Weir′sHandbook of Experimental Immunology第1-4卷，BlackwellScience；Coligan(1991)Current Protocols in Immunology Wiley/Greene，NY；以及Methods in Enzymology第70、73、74、84、92、93、108、116、121、132、150、162和163卷。细胞因子测定描述于例如Thomas(编著，1998)The Cytokine Handbook(第3版)Academic Press，San Diego；Mire-Sluis和Thorpe(1998) Cytokines Academic Press，San Diego；Metcalf和Nicola(1995)The Hematopoietic Colony Stimulating FactorsCambridge University Press；以及Aggarwal和Gutterman(1991)HumanCytokines Blackwell Pub.。

本领域众所周知用于血管的生物学活性测定。它们包括肿瘤或其他组织的血管生成和制管(angiostatic)活性，例如动脉平滑肌增殖(参见例如Koyoma等，(1996)Cell 87：1069-1078)，单核细胞对血管上皮的粘附(参见McEvoy等，(1997)J.Exp.Med.185：2069-2077)等。另参见Ross(1993)Nature 362：801-809；Rekhter和Gordon(1995)Am.J.Pathol.147：668-677；Thyberg等，(1990)Atherosclerosis 10：966-990；以及Gumbiner(1996)Cell 84：345-357。

神经细胞生物学活性的测定描述于例如Wouterlood(编著，1995)Neuroscience Protocols modules 10，Elsevier；Methods in NeurosciencesAcademic Press；以及Neuromethods Human Press，Totowa，NJ。发育系统的方法学描述于例如Meisami(编著)Handbook of Human Growth andDevelopmental Biology CRC Press；以及Chrispeels(编著)MolecularTechniques and Approaches in Developmental Biology Interscience。

FACS分析描述于Melamed等(1990)Flow Cytometry and SortingWiley-Liss，Inc.，New York，NY；Shapiro(1988)Practical Flow CytometryLiss，New York，NY；以及Robinson等(1993)Handbook of FlowCytometry Methods Wiley-Liss，New York，NY。II.人IL-D80的克隆

表1提供灵长类(例如人)的基因序列。这些序列得自一个序列数据库。这些序列使得可制备PCR引物或探针，以测定基因在细胞中的分布。这些序列使得可分离编码所述信息的基因组DNA。

应用所述探针或PCR引物，可探测不同的组织或细胞类型，以确定细胞分布。应用例如TA克隆试剂盒(Invitrogen)可克隆PCR产物。在自动测序仪(Applied Bio Systm)上从两端对获得的cDNA质粒进行测序。III.IL-D80的细胞表达

制备合适的探针或编码灵长类IL-D80的cDNA特异性引物。通常例如通过随机引发标记所述探针。

DNA印迹分析：用合适的限制性内切酶消化初步扩增的cDNA文库DNA(5μg)，以释放所述插入序列，在1％琼脂糖凝胶上电泳并转移到尼龙膜上(Schleicher and Schuell，Keene，NH)。

用于分离人mRNA的样品包括：静息的外周血液单核细胞(单核细胞、T细胞、NK细胞、粒细胞、B细胞)(T100)；用抗-CD3活化2小时、6小时、12小时混合的外周血单核细胞(T101)；静息的T细胞(T102)，TH0克隆Mot 72；用抗-CD28和抗-CD3活化3小时、6小时、12小时混合的T细胞(T103)，TH0克隆Mot 72；用特定肽无反应性处理2小时、7小时、12小时混合的T细胞(T104)，TH0克隆Mot 72；静息的T细胞(T107)，TH1克隆HY 06；用抗-CD28和抗-CD3活化3小时、6小时、12小时混合的T细胞(T108)，TH1克隆HY 06；用特定肽无反应性处理2小时、6小时、12小时混合的T细胞(T109)，TH1克隆HY 06；静息的T细胞(T110)，TH2克隆HY 935；用抗-CD28和抗-CD3活化2小时、7小时、12小时混合的T细胞(T111)，TH2克隆HY 935；静息的T细胞肿瘤系Jurkat和Hut 78(T117)；混合AD130.2、Tc783.12、Tc783.13、Tc783.58、Tc782.69的静息的T细胞克隆(T118)；静息的T细胞随机γδT细胞克隆(T119)；CD28-T细胞克隆；静息的脾细胞(B100)；用抗-CD40和IL-4活化的脾细胞(B101)；混合的WT49、RSB、JY、CVIR、721.221、RM3、HSY静息的B细胞EBV系(B102)；用PMA和离子霉素活化1小时、6小时的混合的B细胞系JY(B103)；静息的NK20混合克隆(K100)；用PMA和离子霉素活化6小时的NK20混合克隆(K101)；IL-2处理的得自LGL白血病患者外周血的NKL克隆(K106)；用PMA和离子霉素活化1小时、6小时的混合的造血前体系TF1(C100)；静息的U937前单核细胞系(M100)；用PMA和离子霉素活化1小时、6小时的混合的U937前单核细胞系(M101)；用LPS、IFNγ、抗-IL-10活化1小时、2小时、6小时、12小时、24小时混合的淘析单核细胞(M102)；用LPS、IFNγ、IL-10活化1小时、2小时、6小时、12小时、24小时混合的淘析单核细胞(M103)；用LPS、IFNγ、抗-IL-10活化4小时、16小时混合的淘析单核细胞(M106)；用LPS、IFNγ、IL-10活化4小时、16小时混合的淘析单核细胞(M107)；用LPS活化1小时的淘析单核细胞(M108)；用LPS活化6小时的淘析单核细胞(M109)；静息的来自CD34+GM-CSF、TNFα12天的DC 70％CD1a+(D101)；用PMA和离子霉素活化1小时的来自CD34+GM-CSF、TNFα12天的DC 70％CD1a+(D102)；用PMA和离子霉素活化6小时的来自CD34+GM-CSF的TNFα12天的DC 70％CD1a+(D103)；用PMA和离子霉素活化1小时、6小时混合的来自CD34+GM-CSF的TNFα12天FACS分选的DC 95％CD1a+(D104)；用PMA和离子霉素活化1小时、6小时混合的来自CD34+GM-CSF的TNFα12天FACS分选的DC 95％CD14+(D105)；用PMA和离子霉素活化1小时、6小时混合的来自CD34+GM-CSF的TNFα12天FACS分选的DC CD1a+CD86+(D106)；静息的来自单核细胞GM-CSF、IL-45天的DC(D107)；静息的来自单核细胞GM-CSF、IL-45天的DC(D108)；用LPS活化4小时、16小时混合的来自单核细胞GM-CSF、IL-4 5天的DC(D109)；用TNFα、单核细胞supe活化4小时、16小时混合的来自单核细胞GM-CSF、IL-4 5天的DC(D110)；未刺激的上皮细胞；IL-1β活化的上皮细胞；用PMA和离子霉素活化1小时、6小时混合的肺成纤维细胞肉瘤系MRC5(C101)；用PMA和离子霉素活化1小时、6小时混合的肾上皮癌细胞系CHA(C102)。

已经鉴定了啮齿类(例如小鼠)的相应物，同样测定了其分布。用于分离小鼠mRNA的样品可包括：静息的小鼠成纤维细胞L细胞系(C200)；Braf：ER(雌激素受体Braf融合物)转染细胞对照(C201)；静息的脾Mel 14+原初T细胞(T209)；用IFNγ、IL-12、和抗IL-4刺激极化为TH1细胞，暴露于IFNγ和IL-4 6小时、12小时、24小时混合的脾Mel 14+原初T细胞(T210)；用IL-4和抗IFNγ刺激极化为Th2细胞，暴露于IL-4和抗IFNγ6小时、13小时、24小时混合的脾脏的Mel 14+原初T细胞(T211)；TH1极化的T细胞(用IL-4和抗-IFN-γ极化7天的脾Mel 14亮CD4+细胞；T200)；TH2极化的T细胞(用IL-4和抗-IFN-γ极化7天的脾Mel 14亮CD4+细胞；T201)；转基因Bal b/c的高度TH1极化3x的T细胞(参见Openshaw等，(1995)J.Exp.Med.182：1357-1367；用抗-CD3活化2小时、6小时、24小时，混合物；T202)；转基因Bal b/c的高度TH2极化3x的T细胞(用抗-CD3活化2小时、6小时、24小时混合物；T203)；转基因C57 b1/6的高度TH1极化3x的T细胞(用抗-CD3活化2小时、6小时、24小时，混合物；T212)；转基因C57 b1/6的高度TH2极化3x的T细胞(用抗-CD3活化2小时、6小时、24小时，混合物；T213)；高度TH1极化的T细胞(转基因Bal b/c的原初CD 4+T细胞，用IFNγ、IL-12、和抗IL-4极化3x；用IGIF、IL-12和抗IL-4刺激6小时、12小时、24小时，混合物)；从胸腺分选的CD 44-CD25+前T细胞(T204)；最后1次抗原刺激后静息3周的TH1 T细胞克隆D 1.1(T205)；10μg/ml ConA刺激15小时的TH1T细胞克隆D 1.1(T206)；最后1次抗原刺激后静息3周的TH2 T细胞克隆CDC35(T207)；10μg/ml ConA刺激15小时的TH2 T细胞克隆CDC35(T208)；未刺激B细胞系CH12(B201)；未刺激的成熟B细胞白血病细胞系A20(B200)；脾脏的未刺激的大B细胞(B202)；LPS活化的全脾B细胞(B203)；静息的三碘苯甲酰氨基葡萄糖富集的脾树突细胞(D200)；静息的骨髓树突细胞(D201)；用抗B220、抗CD3和抗II类抗体耗竭的非刺激骨髓衍生树突细胞，以GM-CSF和IL-4培养(D202)；用抗B220、抗CD3和抗II类抗体耗竭的骨髓衍生树突细胞，以GM-CSF和IL-4培养，用抗CD40刺激1天、5天，混合物(D203)；用LPS活化4小时的单核细胞细胞系RAW 264.7(M200)；由GM和M-CSF衍生的骨髓巨噬细胞(M201)；用LPS、IFNγ和IL-10刺激24小时、由GM-CSF衍生的骨髓巨噬细胞(M205)；用LPS、IFNγ和抗IL-10刺激24小时的由GM-CSF衍生的骨髓巨噬细胞(M206)；腹膜巨噬细胞(M207)；静息的巨噬细胞细胞系J774(M202)；在0.5小时、1小时、3小时、6小时、12小时混合的巨噬细胞细胞系J774+LPS+抗-IL-10(M203)；在0.5小时、1小时、3小时、5小时、12小时混合的巨噬细胞细胞系J774+LPS+IL-10(M204)；未刺激的肥大细胞系MC-9和MCP-12(M208)；未刺激的脑微血管内皮细胞源永生化内皮细胞系(E200)；用TNFα刺激过夜的脑微血管内皮细胞源永生化内皮细胞系(E201)；用TNFα刺激过夜的脑微血管内皮细胞源永生化内皮细胞系(E202)；用TNFα和IL-10刺激过夜的脑微血管内皮细胞源永生化内皮细胞系(E203)；wt C57 b1/6小鼠整个主动脉；5月龄ApoE KO小鼠的整个主动脉(X207)；12月龄ApoE KO小鼠的整个主动脉(X207)；wt胸腺(0214)；rag-1全胸腺(0208)；rag-1全肾(0209)；NZ B/W小鼠全肾；rag-1全心脏(0202)。使用以下细胞检测高信号：用LPS活化4小时的单核细胞细胞系RAW 264.7(M200)；高度TH1极化3x的转基因C57b1/6的T细胞(用抗-CD3活化2小时、6小时、24小时，混合物；T212)；以及高度TH1极化的T细胞(转基因Bal b/c的原初CD4+T细胞，用IFNγ、IL-12和抗-IL-4极化3x；用IGIF、IL-12和抗IL-4刺激6小时、12小时、24小时，混合物)。IV.IL-D80染色体作图

应用编码IL-D80的分离cDNA。染色体作图是标准技术。参见例如BIOS Laboratories(New Haven，CT)以及应用小鼠体细胞杂交系列和PCR的方法。V.IL-D80蛋白的纯化

筛选多重转染细胞系与其他细胞比较以高水平表达所述细胞因子的细胞。筛选不同的细胞系，选择它们有利于处理的特性。天然IL-D80可以是从天然来源中分离的，或通过应用合适的表达载体转化的细胞的表达。通过标准方法纯化表达蛋白，或者表达蛋白的纯化可与工程方法联合，以从细胞溶解物或上清液中进行高效纯化。FLAG和His6节段可用于这样的纯化特性。或者，亲和层析可用于特定抗体，参见下文。

根据需要可用大肠杆菌、昆虫细胞或哺乳动物表达系统产生蛋白质。用表位标记延伸(例如FLAG)制备IL-D80构建物。所述构建物在293细胞中瞬时表达，应用标记免疫亲和柱技术从上清液中提纯。获得高度纯化的蛋白质。VI.同源IL-D80基因的分离

所述IL-D80 cDNA或其他物种相应物序列可以用作杂交探针，以便从需要来源中筛选文库，例如灵长类细胞cDNA文库。可以应用探针筛选许多不同物种的容易杂交必须的严格性以及存在与否。合适的杂交条件可以用于选择交叉杂交特异性克隆。

应用根据所述肽序列的简并探针的杂交筛选也可以分离合适克隆。或者，应用合适引物进行PCR筛选可以产生富集的合适核酸克隆。

相似的方法可用于分离种变异体、多态性变异体或等位基因变异体。从一个物种分离全长分离物或片段用作探针的基础上，应用种交叉杂交技术分离种变异体。

或者，针对人IL-D80产生的抗体可以用于从例如合适的cDNA文库中筛选表达交叉反应性蛋白的细胞。所述纯化蛋白或定义肽可用于通过如上所述的标准方法产生抗体。将合成肽或纯化蛋白提呈给免疫系统，以产生单克隆或多克隆抗体。参见例如Coligan(1991)CurrentProtocols in Immunology Wiley/Greene；以及Harlow和Lane(1989)Antibodies：A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Press。如上所述，获得的抗体可用于筛选、纯化或诊断。VII.IL-D80特异性抗体的制备

将合成肽或纯化蛋白提呈给免疫系统，以产生单克隆或多克隆抗体。参见例如Coligan(1991)Current Protocols in ImmunologyWiley/Greene；以及Harlow和Lane(1989)Antibodies：A LaboratoryManual Cold Spring Harbor Press。可以制备多克隆血清或杂交瘤。在合适的情况下，所述结合试剂可如上所述标记(例如荧光或其他)，或固定在支持物上以进行淘选法。免疫选择、吸附以及相关技术可以用于制备选择试剂，例如具有需要结合选择性范围的选择试剂。VIII.广泛的生物学功能评价

IL-D80和IL-11的序列和结构同源性作为部分依据，测试IL-D80的生物学活性。开始进行了显示IL-11生物学活性的测定。参见例如Jacobsen(1998)，载于：Thomson The Cytokine Handbook AcademicPress。A.对祖细胞增殖/分化的作用

用不同浓度的细胞因子评价对不同细胞类型的增殖或分化的作用。在某些情况下结合其他细胞因子(例如与相关细胞因子IL-11协同作用的细胞因子)进行剂量反应分析。其他细胞因子包括：例如IL-1、IL-4、IL-6、IL-12、LIF、G-CSF、M-CSF、GM-CSF、IL-3、TPO、试剂盒配体或Flt配体。

具体地说，IL-11对干细胞具有协同活性。测试了IL-D80对脐带血细胞的影响，以了解它是否对脐带血来源的早期祖细胞的增殖或分化产生作用。所述细胞优选早期前体细胞，例如来源于如脐带血、骨髓、胸腺、脾脏、或CD34+祖细胞的干细胞。测试所述细胞因子对髓系和/或红细胞系前体细胞(包括B细胞前体)的作用。B.IL-D80对巨核细胞增殖的作用

总PBMC是从正常健康供体的血沉棕黄层中通过如所述(Boyum，等)ficoll-hypaque离心分离的。在96孔板(Falcon，Becton-Dickinson，NJ)中，在不存在或存在单独IL-D80或与其他细胞因子联合的IL-D80的情况下，于200μl含1％人AB血清的Yssel培养液(GeminiBioproducts，Calabasas，CA)中培养PBMC。细胞在单独的培养基或含有100U/ml IL-2(R&D系统)的培养基中培养120小时。在培养的最后6小时加入3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(0.1mCi)并通过液体闪烁计数测定掺入的3H-胸腺嘧啶脱氧核苷。

可测试天然、重组和融合蛋白在许多其他生物测定系统(例如对T-细胞、B-细胞、NK、巨噬细胞、树突细胞、造血祖细胞等的作用)中的激动剂和拮抗剂活性。

评价IL-D80对表达IL-11受体的转染细胞和对照的激动剂或拮抗剂活性。

评价IL-D80单独或与其他细胞因子组合在巨噬细胞/树突细胞活化和抗原提呈测定、抗原或同种异体刺激物作用下T细胞细胞因子产生和增殖中的作用。参见例如de Waal Malefyt等(1991)J.EXp.Med.174：1209-1220；de Waal Malefyt等(1991)J.Exp.Med.174：915-924；Fiorentino等(1991)J.Immunol.147，3815-3822；Fiorentino等(1991)J.Immunol.146：3444-3451；以及Groux等(1996)J.Exp.Med.184：19-29。

还评价了IL-D80对NK细胞刺激的作用。测定可根据例如Hsu等(1992)Internat.Immunol.4：563-569；以及Schwarz等(1994)J.Immunother.16：95-104。其他测定用来评价对细胞毒性T细胞和LAK细胞的作用。参见例如Namien和Mire-Sluis(1998)。

例如用Defrance等(1992)J.Exp.Med.175：671-682；Rousset等(1992)Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 89：1890-1893所述方法学(包括IgG2和IgA2转换因子测定)分析B细胞生长和分化作用。注意：显然与COS7上清液不同的是，NIH3T3和COP上清液不干扰人B细胞测定。C.对人单核细胞细胞表面分子表达的作用

通过从正常健康供体的外周血液单核细胞中负选择来纯化单核细胞。简单地说，3×108 ficoll带单核细胞与单克隆抗体(Becton-Dickinson；Mountain View，CA)和抗-血型糖蛋白抗体(10F7MN，ATCC，Rockville，MD)的混合物一起冰浴，所述单克隆抗体包括例如200μlαCD2(Leu-5A)、200μlαCD3(Leu-4)、100μlαCD8(Leu-2a)、100μlαCD19(Leu-12)、100μlαCD20(Leu-16)、100μlαCD56(Leu-19)、100μlαCD67(IOM 67；Immunotech，Westbrook，ME)。冲洗抗体结合细胞，然后与绵羊抗小鼠IgG偶联磁珠(Dynal，Oslo，Norway)以20∶1珠∶细胞比一起孵育。通过应用磁场从单核细胞中分离抗体结合细胞。接着，在含1％人AB血清的Yssel培养液(Gemini Bioproducts，Calabasas，CA)中培养人单核细胞，所述培养液中不含或含有单独的IL-D80或与其他细胞因子组合的IL-D80。

细胞表面分子表达的分析可通过直接免疫荧光进行。例如2×10⁵纯化的人单核细胞在含1％人血清的磷酸缓冲盐液(PBS)中冰浴20分钟。细胞在200xg沉淀。细胞在20ml PE或FITC标记的mAb中重悬浮。接着再冰浴20分钟，细胞用含1％人血清的PBS冲洗，再用单独的PBS冲洗两次。在含1％多聚甲醛的PBS中固定细胞并在FACScan流式细胞仪(Becton Dickinson；Mountain View，CA)上分析。使用的典型的mAb，例如：CD11b(抗-macl)、CD11c(抗-gp150/95)、CD14(Leu-M3)、CD54(Leu 54)、CD80(抗-BB1/B7)、Becton-Dickinson的HLA-DR(L243)和CD86(FUN 1；Pharmingen)、CD64(32.2；Medarex)、CD40(mAb89；Schering-Plough France)。D.IL-D80对人单核细胞产生细胞因子的作用

人单核细胞如所述分离，并在不存在或存在IL-D80(1/100稀释的杆状病毒表达物质)的含1％人AB血清的Yssel培养液(GeminiBioproducts，Calabasas，CA)中培养。此外，在不存在或存在IL-D80的条件下用LPS(大肠杆菌0127：B8 Difco)刺激单核细胞，通过ELISA测定细胞培养上清液中的细胞因子(IL-1β、IL-6、TNFα、GM-CSF、IL-10)浓度。

为了胞浆内细胞因子染色，在不存在或存在IL-D80和LPS(大肠杆菌0127：B8 Difco)以及10mg/ml布雷菲德菌素A(Epicentretechnologies Madison WI)的Yssel培养液中培养(1百万/ml)12小时。用PBS冲洗细胞并在2％甲醛/PBS溶液中室温孵育20分钟。接着冲洗细胞，用渗透缓冲液(在PBS/BSA(0.5％)/叠氮化物(1mM)中0.5％皂甙(Sigma))重悬浮细胞并在室温孵育20分钟。离心细胞(2×10⁵)，并在室温用20ml以渗透缓冲液1∶10稀释的直接缀合抗-细胞因子mAb重悬浮20分钟。可以使用以下抗体：IL-1α-PE(364-3B3-14)；IL-6-PE(MQ2-13A5)；TNFα-PE(MAb11)；GM-CSF-PE(BVD2-21C11)；和IL-12-PE(C11.5.14；Pharmingen San Diego，CA)。接着，用渗透缓冲液冲洗细胞两次，用PBS/BSA/叠氮化物冲洗一次，并在FACScan流式细胞仪(Becton Dickinson；Mountain View，CA)上分析。

在骨重建、软骨细胞、神经元、脂肪细胞、胃肠道上皮或支气管上皮方面进行其他测定。IX.遗传改变动物的产生和分析

通过标准方法可产生转基因小鼠。这样的动物可用于测定特定组织或整个生物体缺失所述基因的作用。这样可深入了解动物或特定组织在不同阶段的发育。此外，可对生物胁迫不同反应的作用进行评价。参见例如Hogan等(1995)Manipulating the Mouse Embryo；A LaboratoryManual(第二版)Cold Spring Harbor Laboratory Press。

本发明引用的所有参考文献通过引用结合到本文中，其引用程度与具体个别指出各个公开出版物或专利申请为了所有目的而整体引用结合的程度相同。

在不偏离本发明宗旨和范围的情况下可对本发明进行许多改进和改变，这对本领域技术人员而言是显而易见的。本文所述的具体实施方案仅是为了举例说明本发明，并且本发明只受所附权利要求书条款的限制，同时要求属于所述权利要求书全部范围内的等同实施方案的权利。

说明书的核苷酸和氨基酸序列

序列表<110>Schering Corporation<120>哺乳动物细胞因子以及相关试剂<130>DX01040K1 PCT<140><141><150>US 09/364,674<151>1999-07-30<150>US 09/369,643<151> 1999-08-06<160>10<170>PatentIn Ver. 2.0<210>1<211>1213<212>DNA<213>灵长类；推定的人序列<400> 1cactggccca cgctgaagat aggggacttg agttccagtc ttccttctgc taccgaccgg 60ctttgtgacc ttgaacaaga cttcccctcc ctgattccat cctcatgtca catctgaagc 120ctccaacttc tgtcactgag ctcaggattc ccaggcaagc ccacggagtg ccccacaggg 180tcagagccgt aacaggactt ggaaaataac ccgaaaattg ggctcagcct gttgctgctt 240cccttgctcc tggttcaagc tggtgtctgg ggattcccaa ggcccccagg gaggccccag 300ctgagcctgc aggagctgcg gagggagttc acagtcagcc tgcatctcgc caggaagctg 360ctctccgagg ttcggggcca ggcccaccgc tttgcggaat ctcacctgcc aggagtgaac 420ctgtacctcc tgcccctggg agagcagctc cctgatgttt ccctgacctt ccaggcctgg 480cgccgcctct ctgacccgga gcgtctctgc ttcatctcca ccacgcttca gcccttccat 540gccccgctgg gagggctggg gacccagggc cgctggacca acatggagag gatgcagctg 600tgggccatga ggctggacct ccgcgatctg cagcggcacc tccgcttcca ggtgctggct 660gcaggattca acctcccgga ggaggaggag gaggaagagg aggaggagga ggaggagagg 720aaggggctgc tcccaggggc actgggcagc gccttacagg gcccggccca ggtgtcctgg 780ccccagctcc tctccaccta ccgcctgctg cactccttgg agctcgtctt atctcgggcc 840gtgcgggagt tgctgctgct gtccaaggct gggcactcag tctggccctt ggggttccca 900acattgagcc cccagccctg atcggtggct tcttagcccc ctgcccccca ccctttagaa 960ctttaggact ggagtcttgg catcagggca gccttcgcat catcagcctt ggacaaggga 1020gggctcttcc agccccctgc cccaggccct acccagtaac tgaaagcccc tctggtcctc 1080gccagctatt tatttcttgg atatttattt attgtttagg gagatgatgg tttatttatt 1140gtcttggggc ccgatggtcc tcctcgggcc aagcccccat gctgggtgcc caataaagca 1200ctctcatcca aaa 1213<210>2<211>242<212>PRT<213>灵长类；推定的人序列<400>2Gln Asp Leu Glu Asn Asn Pro Lys Ile Gly Leu Ser Leu Leu Leu Leu1 5 10 15Pro Leu Leu Leu Val Gln Ala Gly Val Trp Gly Phe Pro Arg Pro Pro

20 25 30Gly Arg Pro Gln Leu Ser Leu Gln Glu Leu Arg Arg Glu Phe Thr Val

35 40 45Ser Leu His Leu Ala Arg Lys Leu Leu Ser Glu Val Arg Gly Gln Ala

50 55 60His Arg Phe Ala Glu Ser His Leu Pro Gly Val Asn Leu Tyr Leu Leu65 70 75 80Pro Leu Gly Glu Gln Leu Pro Asp Val Ser Leu Thr Phe Gln Ala Trp

85 90 95Arg Arg Leu Ser Asp Pro Glu Arg Leu Cys Phe Ile Ser Thr Thr Leu

100 105 110Gln Pro Phe His Ala Pro Leu Gly Gly Leu Gly Thr Gln Gly Arg Trp

115 120 125Thr Asn Met Glu Arg Met Gln Leu Trp Ala Met Arg Leu Asp Leu Arg

130 135 140Asp Leu Gln Arg His Leu Arg Phe Gln Val Leu Ala Ala Gly Phe Asn145 150 155 160Leu Pro Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Arg

165 170 175Lys Gly Leu Leu Pro Gly Ala Leu Gly Ser Ala Leu Gln Gly Pro Ala

180 185 190Gln Val Ser Trp Pro Gln Leu Leu Ser Thr Tyr Arg Leu Leu His Ser

195 200 205Leu Glu Leu Val Leu Ser Arg Ala Val Arg Glu Leu Leu Leu Leu Ser

210 215 220Lys Ala Gly His Ser Val Trp Pro Leu Gly Phe Pro Thr Leu Ser Pro225 230 235 240Gln Pro<210>3<211>1098<212>DNA<223>啮齿类；推定的小家鼠序列<220><221>misc_feature<222>(1)..(1098)<223>n可以为a、c、g或t<400> 3nccaagntgg tacgcctgca ggtaccggtc cggaattccc gggtcgaccc acgcgtccgg 60ggccaggtga caggagacct tggctggcga ggactggaca ggcaacctgg ccaggagcag 120gactaaacag acaaatgaag agtgtagagg gaagaggctg agaaccgagg acagtcagag 180gaacggcaca ggggagctgg gctcagcctg ttgctgctac ccttgcttct ggtacaagct 240ggttcctggg ggttcccaac agaccccctg agccttcaag agctgcgcag ggaattcaca 300gtcagcctgt accttgccag gaagctgctc tctgaggttc agggctatgt ccacagcttt 360gctgaatctc gattgccagg agtgaacctg gacctcctgc ccctgggata ccatcttcct 420aatgtttccc tgactttcca ggcatggcat cacctctctg actctgagag actctgcttc 480ctcgctacca cacttcggcc cttccttgcc atgctgggag ggctggggac ccaggggacc 540tggaccaaca tcaagaggat gcagcaatgg agactctctc tggttcttga tgtggccctg 600tgtgtctttc gctcacaggt gctggctgca ggattcaaat gttcaaagga ggaggaggac 660aaggaggaag aggaagagga ggaagaagaa gaaaagaagc tgcccctagg gcgtctgggt 720ggccccaatc aggtgtcatc ccaagtgtcc tggccccagc tgctctatac ctaccagctc 780cttcactcca tggagcttgt cctgtctcgg gctgttcggg acctgctgct gctgtccctg 840cccaggcgcc caggctcagc cttggagttc ctaacaccta gcttcaagcc ctgatggagt 900gaccttccag ctccctccct cgcccgttaa gactctaagg ctggagtctg gccaatcaca 960ggacaggctc tagctcgttt gccttagacc aggcagggtt tcactagctc ccagccctga 1020cccaataatt taaaagccct ccagtcctta ccagatattt atttcttgga tatttattta 1080tttttaagaa atggttta 1098<210>4<211>231<212>PRT<223>啮齿类；推定的小家鼠序列<400>4Gly Leu Ser Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Val Gln Ala Gly Ser1 5 10 15Trp Gly Phe Pro Thr Asp Pro Leu Ser Leu Gln Glu Leu Arg Arg Glu

20 25 30Phe Thr Val Ser Leu Tyr Leu Ala Arg Lys Leu Leu Ser Glu Val Gln

35 40 45Gly Tyr Val His Ser Phe Ala Glu Ser Arg Leu Pro Gly Val Asn Leu

50 55 60Asp Leu Leu Pro Leu Gly Tyr His Leu Pro Asn Val Ser Leu Thr Phe65 70 75 80Gln Ala Trp His His Leu Ser Asp Ser Glu Arg Leu Cys Phe Leu Ala

85 90 95Thr Thr Leu Arg Pro Phe Leu Ala Met Leu Gly Gly Leu Gly Thr Gln

100 105 110Gly Thr Trp Thr Asn Ile Lys Arg Met Gln Gln Trp Arg Leu Ser Leu

115 120 125Val Leu Asp Val Ala Leu Cys Val Phe Arg Ser Gln Val Leu Ala Ala

130 135 140Gly Phe Lys Cys Ser Lys Glu Glu Glu Asp Lys Glu Glu Glu Glu Glu145 150 155 160Glu Glu Glu Glu Glu Lys Lys Leu Pro Leu Gly Arg Leu Gly Gly Pro

165 170 175Asn Gln Val Ser Ser Gln Val Ser Trp Pro Gln Leu Leu Tyr Thr Tyr

180 185 190Gln Leu Leu His Ser Met Glu Leu Val Leu Ser Arg Ala Val Arg Asp

195 200 205Leu Leu Leu Leu Ser Leu Pro Arg Arg Pro Gly Ser Ala Leu Glu Phe

210 215 220Leu Thr Pro Ser Phe Lys Pro225 230<210>5<211>199<212>PRT<213>灵长类；推定的人序列<400>5Met Asn Cys Val Cys Arg Leu Val Leu Val Val Leu Ser Leu Trp Pro1 5 10 15Asp Thr Ala Val Ala Pro Gly Pro Pro Pro Gly Pro Pro Arg Val Ser

20 25 30Pro Asp Pro Arg Ala Glu Leu Asp Ser Thr Val Leu Leu Thr Arg Ser

35 40 45Leu Leu Ala Asp Thr Arg Gln Leu Ala Ala Gln Leu Arg Asp Lys Phe

50 55 60Pro Ala Asp Gly Asp His Asn Leu Asp Ser Leu Pro Thr Leu Ala Met65 70 75 80Ser Ala Gly Ala Leu Gly Ala Leu Gln Leu Pro Gly Val Leu Thr Arg

85 90 95Leu Arg Ala Asp Leu Leu Ser Tyr Leu Arg His Val Gln Trp Leu Arg

100 105 110Arg Ala Gly Gly Ser Ser Leu Lys Thr Leu Glu Pro Glu Leu Gly Thr

115 120 125Leu Gln Ala Arg Leu Asp Arg Leu Leu Arg Arg Leu Gln Leu Leu Met

130 135 140Ser Arg Leu Ala Leu Pro Gln Pro Pro Pro Asp Pro Pro Ala Pro Pro145 150 155 160Leu Ala Pro Pro Ser Ser Ala Trp Gly Gly Ile Arg Ala Ala His Ala

165 170 175Ile Leu Gly Gly Leu His Leu Thr Leu Asp Trp Ala Val Arg Gly Leu

180 185 190Leu Leu Leu Lys Thr Arg Leu

195<210>6<211>199<212>PRT<223>啮齿类；推定的小家鼠序列<400>6Met Asn Cys Val Cys Arg Leu Val Leu Val Val Leu Ser Leu Trp Pro1 5 10 15Asp Arg Val Val Ala Pro Gly Pro Pro Ala Gly Ser Pro Arg Val Ser

20 25 30Ser Asp Pro Arg Ala Asp Leu Asp Ser Ala Val Leu Leu Thr Arg Ser

35 40 45Leu Leu Ala Asp Thr Arg Gln Leu Ala Ala Gln Met Arg Asp Lys Phe

50 55 60Pro Ala Asp Gly Asp His Ser Leu Asp Ser Leu Pro Thr Leu Ala Met65 70 75 80Ser Ala Gly Thr Leu Gly Ser Leu Gln Leu Pro Gly Val Leu Thr Arg

85 90 95Leu Arg Val Asp Leu Met Ser Tyr Leu Arg His Val Gln Trp Leu Arg

100 105 110Arg Ala Gly Gly Pro Ser Leu Lys Thr Leu Glu Pro Glu Leu Gly Ala

115 120 125Leu Gln Ala Arg Leu Glu Arg Leu Leu Arg Arg Leu Gln Leu Leu Met

130 135 140Ser Arg Leu Ala Leu Pro Gln Ala Ala Pro Asp Gln Pro Val Ile Pro145 150 155 160Leu Gly Pro Pro Ala Ser Ala Trp Gly Ser Ile Arg Ala Ala His Ala

165 170 175Ile Leu Gly Gly Leu His Leu Thr Leu Asp Trp Ala Val Arg Gly Leu

180 185 190Leu Leu Leu Lys Thr Arg Leu

195<210>7<211>732<212>DNA<213>灵长类；推定的人序列<400>7atgggccaga cggcaggcga ccttggctgg cggctcagcc tgttgctgct tcccttgctc 60ctggttcaag ctggtgtctg gggattccca aggcccccag ggaggcccca gctgagcctg 120caggagctgc ggagggagtt cacagtcagc ctgcatctcg ccaggaagct gctctccgag 180gttcggggcc aggcccaccg ctttgcggaa tctcacctgc caggagtgaa cctgtacctc 240ctgcccctgg gagagcagct ccctgatgtt tccctgacct tccaggcctg gcgccgcctc 300tctgacccgg agcgtctctg cttcatctcc accacgcttc agcccttcca tgccccgctg 360ggagggctgg ggacccaggg ccgctggacc aacatggaga ggatgcagct gtgggccatg 420aggctggacc tccgcgatct gcagcggcac ctccgcttcc aggtgctggc tgcaggattc 480aacctcccgg aggaggagga ggaggaagag gaggaggagg aggaggagag gaaggggctg 540ctcccagggg cactgggcag cgccttacag ggcccggccc aggtgtcctg gccccagctc 600ctctccacct accgcctgct gcactccttg gagctcgtct tatctcgggc cgtgcgggag 660ttgctgctgc tgtccaaggc tgggcactca gtctggccct tggggttccc aacattgagc 720ccccagccct ga 732<210>8<211>243<212>PRT<213>灵长类；推定的人序列<400>8Met Gly Gln Thr Ala Gly Asp Leu Gly Trp Arg Leu Ser Leu Leu Leu1 5 10 15Leu Pro Leu Leu Leu Val Gln Ala Gly Val Trp Gly Phe Pro Arg Pro

20 25 30Pro Gly Arg Pro Gln Leu Ser Leu Gln Glu Leu Arg Arg Glu Phe Thr

35 40 45Val Ser Leu His Leu Ala Arg Lys Leu Leu Ser Glu Val Arg Gly Gln

50 55 60Ala His Arg Phe Ala Glu Ser His Leu Pro Gly Val Asn Leu Tyr Leu65 70 75 80Leu Pro Leu Gly Glu Gln Leu Pro Asp Val Ser Leu Thr Phe Gln Ala

85 90 95Trp Arg Arg Leu Ser Asp Pro Glu Arg Leu Cys Phe Ile Ser Thr Thr

100 105 110Leu Gln Pro Phe His Ala Pro Leu Gly Gly Leu Gly Thr Gln Gly Arg

115 120 125Trp Thr Asn Met Glu Arg Met Gln Leu Trp Ala Met Arg Leu Asp Leu

130 135 140Arg Asp Leu Gln Arg His Leu Arg Phe Gln Val Leu Ala Ala Gly Phe145 150 155 160Asn Leu Pro Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu

165 170 175Arg Lys Gly Leu Leu Pro Gly Ala Leu Gly Ser Ala Leu Gln Gly Pro

180 185 190Ala Gln Val Ser Trp Pro Gln Leu Leu Ser Thr Tyr Arg Leu Leu His

195 200 205Ser Leu Glu Leu Val Leu Ser Arg Ala Val Arg Glu Leu Leu Leu Leu

210 215 220Ser Lys Ala Gly His Ser Val Trp Pro Leu Gly Phe Pro Thr Leu Ser225 230 235 240Pro Gln Pro<210>9<211>991<212>DNA<223>啮齿类；推定的小家鼠序列<400>9atgggccaga cggcaggcga ccttggctgg cggctcagcc tgttgctgct acccttgctt 60ctggtacaag ctggttcctg ggggttccca acagaccccc tgagccttca agagctgcgc 120agggaattca cagtcagcct gtaccttgcc aggaagctgc tctctgaggt tcagggctat 180gtccacagct ttgctgaatc tcgattgcca ggagtgaacc tggacctcct gcccctggga 240taccatcttc ccaatgtttc cctgactttc caggcatggc atcacctctc tgactctgag 300agactctgct tcctcgctac cacacttcgg cccttccctg ccatgctggg agggctgggg 360acccagggga cctggaccag ctcagagagg gagcagctgt gggccatgag gctggatctc 420cgggacctgc acaggcacct ccgctttcag gtgctggctg caggattcaa atgttcaaag 480gaggaggagg acaaggagga agaggaagag gaggaagaag aagaaaagaa gctgccccta 540ggggctctgg gtggccccaa tcaggtgtca tcccaagtgt cctggcccca gctgctctat 600acctaccagc tccttcactc cctggagctt gtcctgtctc gggctgttcg ggacctgctg 660ctgctgtccc tgcccaggcg cccaggctca gcctgggatt cctaacacct agcttcaagc 720cctatggagt gaccttccag ctccctccct cgcccgttaa gactctaagg ctggagtctg 780gccaatcaca ggacaggctc tagctcgttt gccttagacc aggcagggct tcactagctc 840ccagccctga cccaataatt taaaagccct ccagtcctta ccagatattt atttcttgga 900tatttattta tttttaagaa atggtttatt tattgtttca ctcttgagtt aggccaccat 960gctgggtgcc taataaagcc atccagcccg g 991<210>10<211>234<212>PRT<223>啮齿类；推定的小家鼠序列<400>10Met Gly Gln Thr Ala Gly Asp Leu Gly Trp Arg Leu Ser Leu Leu Leu1 5 10 15Leu Pro Leu Leu Leu Val Gln Ala Gly Ser Trp Gly Phe Pro Thr Asp

20 25 30Pro Leu Ser Leu Gln Glu Leu Arg Arg Glu Phe Thr Val Ser Leu Tyr

35 40 45Leu Ala Arg Lys Leu Leu Ser Glu Val Gln Gly Tyr Val His Ser Phe

50 55 60Ala Glu Ser Arg Leu Pro Gly Val Asn Leu Asp Leu Leu Pro Leu Gly65 70 75 80Tyr His Leu Pro Asn Val Ser Leu Thr Phe Gln Ala Trp His His Leu

85 90 95Ser Asp Ser Glu Arg Leu Cys Phe Leu Ala Thr Thr Leu Arg Pro Phe

100 105 110Pro Ala Met Leu Gly Gly Leu Gly Thr Gln Gly Thr Trp Thr Ser Ser

115 120 125Glu Arg Glu Gln Leu Trp Ala Met Arg Leu Asp Leu Arg Asp Leu His

130 135 140Arg His Leu Arg Phe Gln Val Leu Ala Ala Gly Phe Lys Cys Ser Lys145 150 155 160Glu Glu Glu Asp Lys Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Lys

165 170 175Lys Leu Pro Leu Gly Ala Leu Gly Gly Pro Asn Gln Val Ser Ser Gln

180 185 190Val Ser Trp Pro Gln Leu Leu Tyr Thr Tyr Gln Leu Leu His Ser Leu

195 200 205Glu Leu Val Leu Ser Arg Ala Val Arg Asp Leu Leu Leu Leu Ser Leu

210 215 220Pro Arg Arg Pro Gly Ser Ala Trp Asp Ser225 230

Claims

1.一种编码抗原性多肽的分离或重组多核苷酸，所述抗原性多肽包含SEQ ID NO：2、4、8或10的成熟多肽的至少17个连续氨基酸。

2.权利要求1的多核苷酸，它编码SEQ ID NO：2、4、8或10的成熟多肽。

3.权利要求1的多核苷酸，它在55℃、500mM以内的盐和50％甲酰胺条件下与SEQ ID NO：1、3、7或9的编码部分杂交。

4.权利要求3的多核苷酸，它包含SEQ ID NO：1、3、7或9编码部分的至少35个连续核苷酸。

5.一种表达载体，它包含权利要求1的多核苷酸。

6.一种包含权利要求5的表达载体的宿主细胞，该宿主细胞包括真核细胞。

7.一种制备抗原性多肽的方法，该方法包括表达权利要求1的重组多核苷酸。

8.一种用权利要求1的多核苷酸形成双链体的方法，该方法包括使所述多核苷酸与一种探针接触，所述探针在严格条件下与SEQ IDNO：1、3、7或9编码部分的至少25个连续核苷酸杂交；由此形成所述双链体。

9.一种用于检测权利要求1的多核苷酸的试剂盒，该试剂盒包括在严格杂交条件下与权利要求1多核苷酸的至少17个连续核苷酸杂交的多核苷酸。

10.权利要求9的试剂盒，其中所述探针是进行了可检测性标记的探针。

11.一种结合化合物，它包含与SEQ ID NO：2、4、8或10的至少17个连续氨基酸特异性结合的抗体结合位点。

12.权利要求11的结合化合物，其中：

a)所述抗体结合位点是：

1)与SEQ ID NO：2、4、8或10的多肽特异性免疫反应的；

2)针对纯化或重组产生的人IL-D80蛋白产生的抗体结合

位点；或

3)单克隆抗体、Fab或F(ab)2；或

b)所述结合化合物是：

1)一种抗体分子；

2)一种多克隆抗血清；

3)可检测性标记的结合化合物；

4)无菌的；或

5)缓冲组合物。

13.一种使用权利要求11的结合化合物的方法，该方法包括使所述结合化合物和包含一种抗原的生物样品接触，其中所述接触导致形成结合化合物：抗原复合物。

14.权利要求13的方法，其中所述生物样品来自人类，并且其中所述结合化合物是一种抗体。

15.一种检测试剂盒，它包括权利要求12的所述结合化合物以及：

a)使用所述结合化合物进行所述检测的说明性材料；或

b)隔离所述结合化合物的隔室。

16.一种基本纯或分离的抗原性多肽，它结合权利要求11所述结合组合物，并且还包含SEQ ID NO：2、4、8或10的至少17个连续氨基酸。

17.权利要求16的多肽，它：

a)包含至少一个片段，该片段为灵长类IL-D80蛋白的至少25

个连续氨基酸残基的片段；

b)是一种可溶性多肽；

c)是可检测性标记的多肽；

d)是无菌组合物；

e)是缓冲组合物；

f)结合细胞表面受体；

g)是重组产生的多肽；或

h)具有天然多肽序列。

18.权利要求17的多肽，它包含SEQ ID NO：2、4、8或10的至少17个连续氨基酸。

19.一种调节细胞或组织培养细胞的生理或生长的方法，该方法包括使所述细胞与灵长类IL-D80的激动剂或拮抗剂接触。

20.权利要求19的方法，其中：

a)所述接触是与IL-11的激动剂或拮抗剂结合；或

b)所述接触是与包括结合组合物的拮抗剂接触，所述结合组合物包含特异性结合IL-D80的抗体结合位点。