JP2003252900A - 新規ヘムペプチド - Google Patents

新規ヘムペプチド

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Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＮＯの捕捉・定量に使用可能で、ＮＯが関与
する疾病の診断剤、予防剤もしくは治療剤として、研究
試薬として、環境中のＮＯ濃度の測定に用いる試薬とし
て、環境中のＮＯの除去に使用される処理剤として使用
することのできる、ＮＯ捕捉力の強いペプチドを提供す
る。 【解決手段】次式Ｉで表されるヘムペプチド。 【化１】 （式中、A1は水素原子または１〜２０個のアミノ酸残基
からなるペプチド鎖を表し、A2は水酸基または１〜５０
個のアミノ酸残基からなるペプチド鎖を表し、Hemeは次
式： 【化２】 で表されるヘム核を表し、X1,X2は各々独立に任意のア
ミノ酸残基を表し、X3は、His LysまたはArgを表す）及
びその製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規ヘムペプチ
ド、特にＮＯ捕捉能を有するヘムペプチド、該ヘムペプ
チドの製造方法、並びに該ヘムペプチドを含むＮＯ捕捉
剤及び医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、糖尿病、動脈硬化、癌等の生活習
慣病への一酸化窒素（ＮＯ）の関与が報告されている。
即ち、ＮＯの生産異常が多くの生理機能や病気に関与し
ていることが報告されている。例えば、ＮＯの不足が、
高血圧、高脂血症、動脈硬化、心不全、冠動脈攣縮等に
関与しており、ＮＯの過多が脳卒中、ハンチントン病、
パーキンソン病等に関与していることが知られている。
また、ＮＯは、環境汚染物質ＮＯｘの一つでもあり、Ｎ
Ｏを捕捉する物質の開発は、環境汚染の測定において、
また汚染された大気、水等の浄化においても重要であ
る。従って、ＮＯの定量や捕捉物質の開発が望まれてい
た。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、ＮＯは
常温でガス体であり、不安定であるため、取扱いや定量
が困難であり、有効なＮＯ捕捉物質も知られていなかっ
た。本発明者らは、これまでにシトクロムｃがＮＯ捕捉
能を有することを見出している（化学と生物３４(12),7
84-785(1996))。また、同様のC-typeシトクロムを紅藻
スサビノリ、緑藻クロレラ、光合成細菌など各種生物か
ら単離し、ＮＯ捕捉能を確認している（Biosci. Biotec
hnol. Biochem., 64(3), 628-632, 2000, Jap. J. Phar
macol., 75(Suppl.I), 113 P(1997))。さらに、本発明
者らは、紅藻スサビノリPorphyra yezoensis由来のシト
クロムｃ６のＸ線立体構造解析により三次構造を決定し
ており（Acta Cryst., D56, 1577-1582(2000))、またシ
トクロムｃ６の組換え大腸菌での発現系を構築してい
る。本発明者らは、ＮＯ捕捉能を有する物質についてさ
らに研究を進め、シトクロムｃに比べてさらに高いＮＯ
捕捉能を有するヘムペプチドを見出した。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は下記式Ｉで表さ
れるヘムペプチドに関する。
【０００５】
【化３】
【０００６】（式中、A1は水素原子または１〜２０個、
好ましくは１〜１０個、特に１〜５個のアミノ酸残基か
らなるペプチド鎖を表し、A2は水酸基または１〜５０
個、好ましくは１〜１０個、特に１〜５個のアミノ酸残
基からなるペプチド鎖を表し、Hemeは次式：
【０００７】
【化４】
【０００８】で表されるヘム核を表し、X1,X2は各々独
立に任意のアミノ酸残基を表し、X3は、His LysまたはA
rgを表す。）上記ヘム核は、3,8位のシステイニルチオ
エーテル結合を介してシステイン残基に結合することが
できる。 （２）X1及びX2が各々独立にAla、Gln、Lys、Arg及びVa
lからなる群より選択されるアミノ酸残基を表す（１）
のヘムペプチド。 （３）X1がAlaであり、X2がGlnまたはAlaであり、X3がH
isである（１）のヘムペプチド。 （４）A1が、水素原子またはアミノ酸配列Val Gln Lys
を有するペプチド鎖であり、A2がアミノ酸配列Thr Val
Glu Lysまたはアミノ酸配列Thr Val Glu Lys Gly Gly L
ys His Lys Thr Gly Pro Asn Leuを有するペプチド鎖で
あり、X1がAlaであり、X2がGlnであり、X3がHisである
（１）のヘムペプチド。 （５）A1がアミノ酸配列Phe Ser Ala Asnを有するペプ
チド鎖であり、A2がアミノ酸配列Ala Gly Gly Asn Asn
Alaを有するペプチド鎖であり、X1がAlaであり、X2がAl
aであり、X3がHisである（１）のヘムペプチド。
【０００９】また、本発明は、シトクロムｃを制限酵素
で消化し、所望により塩折処理を行った後、ゲル濾過ク
ロマトグラフィーで精製することからなる（１）〜
（５）のヘムペプチドの製造方法に関する。制限酵素
は、好ましくはサーモライシン、トリプシン、キモトリ
プシン、AchromobacterプロテアーゼI及びStaphylococc
us aureus V8プロテアーゼからなる群から選択される。
さらに、本発明は、（１）〜（５）のヘムペプチドを含
むＮＯ捕捉剤に関する。本発明の上記ペプチドは、特
に、シトクロムｃの少なくとも１４番目のCysから１８
番目のアミノ酸までのアミノ酸配列、または該配列にお
いて１５番目、１６番目及び１８番目のアミノ酸残基が
置換されたアミノ酸配列を有するペプチドを含み、ヘム
核が１４番目のCysと１７番目のCysに3,8位のシステイ
ニルチオエーテル結合を介して結合しており、１８番目
のアミノ酸残基がHis、LysまたはArgであり、１５番目
及び１６番目のアミノ酸が好ましくはAla,Gln,Lys,Arg
またはValであり、１４番目のCysのＮ末端側のペプチド
鎖と１７番目のCysのＣ末端側のペプチド鎖が好ましく
は５０塩基以下、より好ましくは１０塩基以下であるこ
とを特徴とするものである。このようなヘムペプチドが
シトクロムｃよりも高いＮＯ捕捉能を有することは、本
発明者の鋭意研究により見出されたものであるが、これ
は、おそらく分子が小さくなることにより単位面積あた
りの溶媒分子数が増大することに加えて、ヘム核が溶媒
面に露出してＮＯとの衝突確率が高まったためであると
考えられる。
【００１０】
【発明の実施の形態】A1の具体例としては、例えば、配
列表の配列番号１（ウマ心筋シトクロムｃの配列）また
は配列番号２（紅藻スサビノリのシトクロムｃ６の配
列）のアミノ酸番号１〜１３のアミノ酸配列またはそれ
らの１〜数個のアミノ酸が置換、欠失または付加された
アミノ酸配列のうち、アミノ酸番号１３からＮ末端側に
連続する１〜１３個のアミノ酸残基からなるペプチド鎖
が挙げられる。A2の具体例としては、例えば、配列表の
配列番号１（ウマ心筋シトクロムｃの配列）または配列
番号２（紅藻スサビノリのシトクロムｃ６の配列）のア
ミノ酸番号１９〜７０のアミノ酸配列またはそれらにお
いて１〜数個のアミノ酸が置換、欠失または付加された
アミノ酸配列のうち、アミノ酸番号１９のアミノ酸から
Ｃ末端側に連続する１〜５０個のアミノ酸残基からなる
ペプチド鎖が挙げられる。
【００１１】本明細書において「ＮＯ捕捉剤」は、ＮＯ
の捕捉に用いられるものであれば、目的を問わない。典
型的には、生体内、例えば血中のＮＯ濃度の測定のため
の診断剤、生体内、例えば血中のＮＯの捕捉するＮＯの
過多に関連する疾病の予防剤・治療剤、研究用試薬、大
気中、排気ガス中、または水中のＮＯ濃度の測定のため
の試薬、また水処理または排気ガス処理のための処理剤
として使用されるものである。
【００１２】本発明のヘムペプチドは、シトクロムｃの
アミノ酸配列をコードする塩基配列を有するＤＮＡ、ま
たはこれに部位特異的変異を導入したＤＮＡを含むベク
ターを宿主細胞に導入し、該宿主細胞を培養し、培養物
からシトクロムｃを単離し、これを制限酵素で消化した
後、クロマトグラフィー等の方法により精製することに
より製造することもできる。この場合、形質転換に用い
るベクターとしては、バイオテクノロジーの分野で慣用
のプラスミド、ファージ等を使用することができる。宿
主細胞は、好ましくは原核生物の細胞、より好ましくは
細菌、特に大腸菌である。シトクロムｃの単離は、例え
ば培養細胞を採取し、物理的に破砕し、抽出し、精製す
ることにより行うことができる。培養細胞の採取は、固
体培地の場合は培養細胞をかきとることにより、また液
体培地の場合には遠心分離により行うことができる。な
お、本発明において、「シトクロムｃ」は、シトクロム
ｃ１、シトクロムｃ ２、シトクロムｃ６、シトクロムｃ
-551等、全てのc型シトクロムを含む。また、本発明の
ペプチドを構成する「アミノ酸残基」には、修飾された
アミノ酸残基も含まれる。
【００１３】
【実施例】以下の実施例において、試薬は特記しない限
り、和光純薬製のものを使用した。等電点は、Ampholin
e PAGplateゲル（Pharmacia社製、IEF用、pH3.5-9.5）
を用いた等電点電気泳動により解析した。吸収極大は、
HITACHI U-3310spectrophotometer (HITACHI社製）を用
いて測定した。酸化還元電位は、HITACHI U-3310spectr
ophotometer (HITACHI社製）、ＯＲＰ電極(Metrohm社
製）を用いて測定した。
【００１４】実施例１：ヘムペプチド（ｍｐ１５）の調
製 下記のアミノ酸配列を有するヘムペプチドを調製した。
【００１５】
【化５】
【００１６】（配列番号３の配列を有するペプチドの５
番目及び８番目のシステインに前記式IIのヘム核が結合
したもの） 紅藻スサビノリ（Porphyra yezonesis)より精製したシ
トクロムｃ６１ｍｇを０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液ｐＨ
７．８（２ｍＭ塩化カルシウムを含む）２００μｌに溶
解した。得られたシトクロムｃ６溶液を３７℃で５分間
保温し、これに０．１Ｍトリス塩酸緩衝液に溶解した１
ｍｇ／ｍｌサーモライシン溶液６２．５μｌを添加し、
さらに上記と同じ緩衝液３７．５μｌを添加した。この
反応溶液を、３７℃で４．５時間保温した。この反応溶
液を氷冷して反応を停止させた後、上記と同じ緩衝液７
００μｌを加えた。得られた反応溶液をゲル濾過カラム
クロマトグラフィー（Toyopearl HW-40F, 1.0 x 80cm,
東ソー社製）で精製し、標記のペプチドを得た。得られ
たペプチドを電気泳動にかけ、単一物質であることを確
認した。また、このペプチドのアミノ酸配列をアミノ酸
シーケンサーで調べ、標記の配列を有するペプチドであ
ることを確認した。
【００１７】また、得られたペプチドは、下記の物理学
的性質を有していた： 等電点：４．１５，酸化型の吸収極大：404, 526nm，還
元型の吸収極大：413.5,549.5nm，酸化還元電位-82.2m
V，分子量：2200。
【００１８】実施例２：ヘムペプチド（ｍｐ９）の調製 下記のアミノ酸配列を有するペプチドを調製した。
【００１９】
【化６】
【００２０】（配列番号４の配列を有するペプチドの１
番目及び４番目のシステインに前記式IIのヘム核が結合
したもの） ウマ心筋シトクロムｃ（和光純薬社製）１ｍｇを０．１
Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）１００μｌに溶解
した。得られたシトクロムｃ溶液を３７℃で５分間保温
し、これに０．１Ｍトリス塩酸緩衝液に溶解した１ｍｇ
／ｍｌトリプシン溶液４０μｌを添加し、さらに上記と
同じ緩衝液６０μｌを添加した。この反応溶液は、３７
℃で２４時間保温した。この反応溶液を氷冷して反応を
停止させた後、硫酸アンモニウム７８ｍｇを添加した
後、沈殿物を濾取し、ゲル濾過カラムクロマトグラフィ
ー（Toyopearl HW-40F, 1.0 x 80cm, 東ソー社製）で精
製し、標記のペプチドを調製した。得られたペプチドを
電気泳動にかけ、単一物質であることを確認した。ま
た、このペプチドのアミノ酸配列をアミノ酸シーケンサ
ーで調べ、標記の配列を有するペプチドであることを確
認した。また、得られたペプチドは、下記の物理学的性
質を有していた： 等電点：4.95，酸化型の吸収極大：395, 619nm，還元型
の吸収極大：412, 520,549nm，酸化還元電位-132mV，分
子量：1637。
【００２１】実施例３：ヘムペプチド（ｍｐ２２）の調
製 下記のアミノ酸配列を有するペプチドを調製した。
【００２２】
【化７】
【００２３】（配列番号５の配列を有するペプチドの４
番目及び７番目のシステインに前記式IIのヘム核が結合
したもの） ウマ心筋シトクロムｃ（和光純薬社製）１ｍｇを０．１
Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）１００μｌに溶解
した。得られたシトクロムｃ溶液を３７℃で５分間保温
し、これに０．１Ｍトリス塩酸緩衝液に溶解した１ｍｇ
／ｍｌキモトリプシン溶液４０μｌを添加し、さらに上
記と同じ緩衝液６０μｌを添加した。この反応溶液は、
３７℃で２４時間保温した。この反応溶液を氷冷して反
応を停止させた後、硫酸アンモニウム７８ｍｇを添加し
た後、沈殿物を濾取し、ゲル濾過カラムクロマトグラフ
ィー（Toyopearl HW-40F, 1.0 x 80cm, 東ソー社製）で
精製し、標記のペプチドを調製した。得られたペプチド
をＨＰＬＣにかけ、単一物質であることを確認した。ま
た、このペプチドのアミノ酸配列をアミノ酸シーケンサ
ーで調べ、標記の配列を有するペプチドであることを確
認した。また、得られたペプチドは、下記の物理学的性
質を有していた： 等電点：6.02，酸化型の吸収極大：398, 620nm，還元型
の吸収極大：416, 520,549nm，酸化還元電位-66.5mV，
分子量3065。
【００２４】実施例４：ヘムペプチド（ｍｐ６５）の調
製 下記のアミノ酸配列を有するペプチドを調製した。
【００２５】
【化８】
【００２６】（配列番号６の配列を有するペプチドの１
４番目及び１７番目のシステインに前記式IIのヘム核が
結合したもの） ウマ心筋シトクロムｃ（和光純薬社製）１ｍｇを１０ｍ
ｇ／ｍｌ臭化シアン（７０％ギ酸に溶解したもの）１０
０μｌに溶解し、反応チューブ内を窒素通気した。得ら
れたシトクロムｃ溶液を２０℃で２４時間保温した。こ
の反応溶液を水冷して反応を停止させた後、超純水４０
０μｌを加え、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー（To
yopearl HW-40F, 1.0 x 80cm, 東ソー社製）で精製し、
標記のペプチドを調製した。得られたペプチドを電気泳
動にかけ、単一物質であることを確認した。また、この
ペプチドのアミノ酸配列をアミノ酸シーケンサーで調
べ、標記の配列を有するペプチドであることを確認し
た。また、得られたペプチドは、下記の物理学的性質を
有していた： 等電点：9.52，酸化型の吸収極大：404, 535nm，還元型
の吸収極大：415, 520,549nm，酸化還元電位-62.1mV，
分子量8900。
【００２７】実施例５：制限酵素として、キモトリプシ
ンの代わりにAchromobacterプロテアーゼI（リシルエン
ドペプチダーゼ）を使用すること以外は、実施例３と同
様の方法により、下記式で表されるＮＯ捕捉ヘムペプチ
ドを調製した。
【００２８】
【化９】
【００２９】（配列番号７の配列を有するペプチドの１
番目及び４番目のシステインに前記式IIのヘム核が結合
したもの）
【００３０】実施例６：制限酵素として、サーモライシ
ンの代わりにAchromobacterプロテアーゼI（リシルエン
ドペプチダーゼ）を使用すること以外は、実施例１と同
様の方法により、下記式で表されるＮＯ捕捉ヘムペプチ
ドを調製した。
【００３１】
【化１０】
【００３２】（配列番号８の配列を有するペプチドの６
番目及び９番目のシステインに前記式IIのヘム核が結合
したもの）
【００３３】実施例７：制限酵素として、キモトリプシ
ンの代わりにStaphylococcus aureusV8プロテアーゼ
（エンドプロテナーゼGlu-C)を使用し、リン酸緩衝液の
代わりにアンモニウム系緩衝液を使用すること以外は、
実施例３と同様の方法により、下記式で表されるＮＯ捕
捉ヘムペプチドを調製した。
【００３４】
【化１１】
【００３５】（配列番号９の配列を有するペプチドの１
０番目及び１３番目のシステインに前記式IIのヘム核が
結合したもの）
【００３６】実施例８：制限酵素として、サーモライシ
ンの代わりにStaphylococcus aureusV8プロテアーゼ
（エンドプロテナーゼGlu-C)を使用し、リン酸緩衝液の
代わりにアンモニウム系緩衝液を使用すること以外は、
実施例１と同様の方法により、下記式で表されるＮＯ捕
捉ヘムペプチドを調製した。
【００３７】
【化１２】
【００３８】（配列番号１０の配列を有するペプチドの
６番目及び９番目のシステインに前記式IIのヘム核が結
合したもの）
【００３９】試験例１：ＮＯ捕捉能の測定 １０ｍｌのバイアルに、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）０．３ｍｌ、１０ｍＭ亜硝酸ナトリウム０．４
ｍｌ、上記各ペプチド溶液０．５ｍｌ、３ｍＭメチルビ
オロゲン（東京化成工業株式会社製）０．４ｍｌを入
れ、ブチルゴム栓とアルミシールで密封した。このバイ
アルを、アルゴンを通気しながら３７℃で５分間保温し
た後、１００ｍＭ亜ジチオン酸ナトリウム（５０ｍＭ炭
酸水素ナトリウムに溶解したもの）０．３ｍｌを添加す
ることにより、反応を開始した。一定の時間間隔で反応
液を０．２ｍｌずつ分取し、ボルテックスミキサーで空
気酸化させることにより反応を停止した。残存亜硝酸量
をジアゾ化法により測定した。反応液を０．０２ｍｌと
り、超純水を１．９８ｍｌ添加した後、１％スルファニ
ルアミド１ｍｌ、０．０２％のN-1-ナフチルエチレンジ
アミン塩酸塩１ｍｌ、超純水１ｍｌを添加し、室温で２
０分間放置した後、生成アゾ色素の５４０ｎｍにおける
吸光度を測定し、既知濃度の亜硝酸溶液から作製した検
量線より、残存亜硝酸量を算出した。測定は、SHIMADZU
UV-1600 UV-VISIBLE SPECTROPHOTOMETERを用いて行っ
た。反応速度論的解析は、２，４，６，８，１０ｍＭ亜
硝酸ナトリウムに対する比活性を求め、その後Lineweve
r-Burkプロットにより反応回転数ｋｃａｔ(s−１）を算
出することにより行った。各実施例で得られたペプチド
の反応速度定数を下記の表に示す。また、比較のために
ウマ心筋シトクロムｃ及び紅藻スサビノリシトクロムｃ
６の反応速度定数を併記した。
【００４０】
【表１】
【００４１】表より、本発明のヘムペプチドが、シトク
ロムｃと比較して、著しく高いＮＯ捕捉能を有すること
が明らかである。
【００４２】
【発明の効果】生体内でのＮＯの定量のための試薬、生
体内でＮＯを制御する医薬品組成物、環境中のＮＯ濃度
を測定するための試薬、汚染大気や汚染排水の浄化剤と
して利用可能なＮＯ捕捉剤が提供される。さらに、本発
明のヘムペプチドのうち、水溶性のものは、液体試料中
での用途に適している。
【００４３】
【配列表】 SEQUENCE LISTING 〈110〉 NIHON UNIVERSITY 〈120〉 Novel Heme peptide 〈130〉 PANU013 〈160〉 10 〈210〉 1 〈211〉 104 〈212〉 PRT 〈213〉 Horse 〈400〉 1 Gly Asp Val Glu Lys Gly Lys Lys Ile Phe Val Gln Lys Cys Ala Gln 1 5 10 15 Cys His Thr Val Glu Lys Gly Gly Lys His Lys Thr Gly Pro Asn Leu 20 25 30 His Gly Leu Phe Gly Arg Lys Thr Gly Gln Ala Pro Gly Phe Thr Tyr 35 40 45 Thr Asp Ala Asn Lys Asn Lys Gly Ile Thr Trp Lys Glu Glu Thr Leu 50 55 60 Met Glu Tyr Leu Glu Asn Pro Lys Lys Tyr Ile Pro Gly Thr Lys Met 65 70 75 80 Ile Phe Ala Gly Ile Lys Lys Lys Thr Glu Arg Glu Asp Leu Ile Ala 85 90 95 Tyr Leu Lys Lys Ala Thr Asn Glu 100 〈210〉 2 〈211〉 85 〈212〉 PRT 〈213〉 Porphyra yezoensis 〈400〉 2 Ala Asp Leu Asp Asn Gly Glu Lys Val Phe Ser Ala Asn Cys Ala Ala 1 5 10 15 Cys His Ala Gly Gly Asn Asn Ala Ile Met Pro Asp Lys Thr Leu Lys 20 25 30 Lys Asp Val Leu Glu Ala Asn Ser Met Asn Thr Ile Asp Ala Ile Thr 35 40 45 Tyr Gln Val Gln Asn Gly Lys Asn Ala Met Pro Ala Phe Gly Gly Arg 50 55 60 Leu Val Asp Glu Asp Ile Glu Asp Ala Ala Asn Tyr Val Leu Ser Gln 65 70 75 80 Ser Glu Lys Gly Trp 85 〈210〉 3 〈211〉 15 〈212〉 PRT 〈213〉 Porphyra yezoensis 〈400〉 3 Phe Ser Ala Asn Cys Ala Ala Cys His Ala Gly Gly Asn Asn Ala 1 5 10 15 〈210〉 4 〈211〉 9 〈212〉 PRT 〈213〉 Horse 〈400〉 4 Cys Ala Gln Cys His Thr Val Glu Lys 1 5 〈210〉 5 〈211〉 22 〈212〉 PRT 〈213〉 Horse 〈400〉 5 Val Gln Lys Cys Ala Gln Cys His Thr Val Glu Lys Gly Gly Lys His 1 5 10 15 Lys Thr Gly Pro Asn Leu 20 〈210〉 6 〈211〉 65 〈212〉 PRT 〈213〉 Horse 〈400〉 6 Gly Asp Val Glu Lys Gly Lys Lys Ile Phe Val Gln Lys Cys Ala Gln 1 5 10 15 Cys His Thr Val Glu Lys Gly Gly Lys His Lys Thr Gly Pro Asn Leu 20 25 30 His Gly Leu Phe Gly Arg Lys Thr Gly Gln Ala Pro Gly Phe Thr Tyr 35 40 45 Thr Asp Ala Asn Lys Asn Lys Gly Ile Thr Trp Lys Glu Glu Thr Leu 50 55 60 Met 65 〈210〉 7 〈211〉 9 〈212〉 PRT 〈213〉 Horse 〈400〉 7 Cys Ala Gln Cys His Thr Val Glu Lys 1 5 〈210〉 8 〈211〉 21 〈212〉 PRT 〈213〉 Porphyra yezoensis 〈400〉 8 Val Phe Ser Ala Asn Cys Ala Ala Cys His Ala Gly Gly Asn Asn Ala 1 5 10 15 Ile Met Pro Asp Lys 20 〈210〉 9 〈211〉 17 〈212〉 PRT 〈213〉 Horse 〈400〉 9 Lys Gly Lys Lys Ile Phe Val Gln Lys Cys Ala Gln Cys His Thr Val 1 5 10 15 Glu 〈210〉 10 〈211〉 29 〈212〉 PRT 〈213〉 Porphyra yezoensis 〈400〉 10 Val Phe Ser Ala Asn Cys Ala Ala Cys His Ala Gly Gly Asn Asn Ala 1 5 10 15 Ile Met Pro Asp Lys Thr Leu Lys Lys Asp Val Leu Glu 20 25
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/00 Ａ６１Ｐ 9/04 9/04 9/10 9/10 １０１ １０１ 9/12 9/12 25/14 25/14 25/16 25/16 35/00 35/00 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 河内 隆 東京都千代田区九段南四丁目８番24号日本 大学内 (72)発明者 駿河 康平 東京都千代田区九段南四丁目８番24号日本 大学内 Ｆターム(参考） 4B064 AG35 BA10 BA11 BA12 BF03 BF05 BF08 BH06 BH20 CA02 CA10 CA11 CA21 CB06 CE04 CE07 CE10 DA01 DA16 4C084 AA02 AA06 AA07 BA01 BA08 BA17 BA18 BA19 BA20 BA21 BA26 BA44 CA07 CA17 NA14 ZA152 ZA362 ZA422 ZA452 ZA532 ZB262 ZC022 ZC332 ZC352 4H045 AA10 AA20 AA30 BA10 BA52 CA30 CA40 EA20 FA70 GA06 GA22 HA03 HA04 HA14 HA16 HA19

Claims (8)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】次式Ｉで表されるヘムペプチド。 【化１】 （式中、A1は水素原子または１〜２０個のアミノ酸残基
    からなるペプチド鎖を表し、 A2は水酸基または１〜５０個のアミノ酸残基からなるペ
    プチド鎖を表し、 Hemeは次式： 【化２】 で表されるヘム核を表し、 X1,X2は各々独立に任意のアミノ酸残基を表し、 X3は、His LysまたはArgを表す。）
  2. 【請求項２】上記式Ｉ中、X1及びX2が各々独立にAla、G
    ln、Lys、Arg及びValからなる群より選択されるアミノ
    酸残基を表す請求項１のヘムペプチド。
  3. 【請求項３】上記式Ｉ中、X1がAlaであり、X2がGlnまた
    はAlaであり、X3がHisである請求項１のヘムペプチド。
  4. 【請求項４】上記式Ｉ中、A1が、水素原子またはアミノ
    酸配列Val Gln Lysを有するペプチド鎖であり、 A2がアミノ酸配列Thr Val Glu Lysまたはアミノ酸配列T
    hr Val Glu Lys Gly Gly Lys His Lys Thr Gly Pro Asn
    Leuを有するペプチド鎖であり、 X1がAlaであり、X2がGlnであり、X3がHisである請求項
    １のヘムペプチド。
  5. 【請求項５】上記式Ｉ中、A1がアミノ酸配列Phe Ser Al
    a Asnを有するペプチド鎖であり、 A2がアミノ酸配列Ala Gly Gly Asn Asn Alaを有するペ
    プチド鎖であり、 X1がAlaであり、X2がAlaであり、X3がHisである請求項
    １のヘムペプチド。
  6. 【請求項６】シトクロムｃを制限酵素で消化し、ゲル濾
    過クロマトグラフィーで精製することからなる請求項１
    〜５のいずれか１項に記載のヘムペプチドの製造方法。
  7. 【請求項７】前記制限酵素が、サーモライシン、トリプ
    シン、キモトリプシン、AchromobacterプロテアーゼI及
    びStaphylococcus aureus V8プロテアーゼからなる群か
    ら選択される請求項６のヘムペプチドの製造方法。
  8. 【請求項８】請求項１〜５のいずれか１項に記載のヘム
    ペプチドを含むＮＯ捕捉剤。
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