JP2003250578A - 抗菌性ポリペプチドおよびこのポリペプチドを含有する抗菌剤 - Google Patents
抗菌性ポリペプチドおよびこのポリペプチドを含有する抗菌剤Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】真菌に対して抗菌性を発現する動物の生体防御
因子である抗菌性ポリペプチドあるいはそれを含有する
抗真菌剤を提供する。 【解決手段】脊椎動物、具体的にはウサギ由来のＣＡＰ
１８のＣ末端側フラグメントに着目し、各種態様のフラ
グメントを調製し、その抗菌活性を種々探索したとこ
ろ、特定のフラグメントが抗真菌活性を有すること、お
よび各種植物病害性菌（細菌および真菌を含む）に対し
て抗菌活性を有することが見出された。このフラグメン
トによれば、各種の真菌、特に植物病害に関連する糸状
菌に対して高い抗菌活性を有する抗菌剤が提供される。
因子である抗菌性ポリペプチドあるいはそれを含有する
抗真菌剤を提供する。 【解決手段】脊椎動物、具体的にはウサギ由来のＣＡＰ
１８のＣ末端側フラグメントに着目し、各種態様のフラ
グメントを調製し、その抗菌活性を種々探索したとこ
ろ、特定のフラグメントが抗真菌活性を有すること、お
よび各種植物病害性菌（細菌および真菌を含む）に対し
て抗菌活性を有することが見出された。このフラグメン
トによれば、各種の真菌、特に植物病害に関連する糸状
菌に対して高い抗菌活性を有する抗菌剤が提供される。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、ウサギ由来でα
−ヘリックス構造を有するカチオン性のポリペプチドを
有効成分として含有する抗真菌剤および植物病害防除
剤、形質転換植物および植物病害生物の防除方法に関す
る。
−ヘリックス構造を有するカチオン性のポリペプチドを
有効成分として含有する抗真菌剤および植物病害防除
剤、形質転換植物および植物病害生物の防除方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】ＣＡＰ１８（Cationic Antibacterial P
rotein, 18kDa）などに代表される動物産生の抗菌性ペ
プチドは、非特異的感染防御機構あるいは先天性の免疫
機構であり、動物における感染に対する第一のバリアー
として極めて重要であることがわかってきている。この
ような抗菌性ペプチドは、有効性が高い、動物由来であ
ることから動物に対して安全性が高い、病原体が耐性を
獲得しにくいことから、特に、治療用あるいは予防用の
抗菌剤として期待されている。しかしながら、各種ある
抗菌性ペプチドにおいては、抗菌性ペプチドの種類によ
って抵抗性を発現する菌の種類が異なっており、その抗
菌作用機構は解明されていない。したがって、抗菌性ペ
プチドがどのような菌に対して抗菌性を発現し、どのよ
うな環境下において抗菌性を発現するかを予測するのは
困難な状況である。
rotein, 18kDa）などに代表される動物産生の抗菌性ペ
プチドは、非特異的感染防御機構あるいは先天性の免疫
機構であり、動物における感染に対する第一のバリアー
として極めて重要であることがわかってきている。この
ような抗菌性ペプチドは、有効性が高い、動物由来であ
ることから動物に対して安全性が高い、病原体が耐性を
獲得しにくいことから、特に、治療用あるいは予防用の
抗菌剤として期待されている。しかしながら、各種ある
抗菌性ペプチドにおいては、抗菌性ペプチドの種類によ
って抵抗性を発現する菌の種類が異なっており、その抗
菌作用機構は解明されていない。したがって、抗菌性ペ
プチドがどのような菌に対して抗菌性を発現し、どのよ
うな環境下において抗菌性を発現するかを予測するのは
困難な状況である。
【０００３】例えば、ウサギ由来でカチオン性のポリペ
プチドがＣＡＰ１８として知られており、その遺伝子が
クローニングされている。そして、このウサギ由来のＣ
ＡＰ１８（特にＣ末端部位）が、グラム陰性およびグラ
ム陽性の細菌に対する抗菌性を有していることが既に確
認されている。（Alessandro Tossi et al., FEBS Lett
ers 339 (1994) 108-112, James W. Larrick et al., A
ntimicrobial Agentsand Chemotherapy, Dec. 1993, p.
2534-2539, James W. Larrick et al., Bacterial Endo
toxins: Basic Science to Anti-Sepsis Strategies, p
125-135, 1994、特表平８−５０４０８５号公報）。こ
れらの文献においては、代表的な病害性の真菌であるCa
ndida albicans に対する抗菌性が認められないことが
記載されている。
プチドがＣＡＰ１８として知られており、その遺伝子が
クローニングされている。そして、このウサギ由来のＣ
ＡＰ１８（特にＣ末端部位）が、グラム陰性およびグラ
ム陽性の細菌に対する抗菌性を有していることが既に確
認されている。（Alessandro Tossi et al., FEBS Lett
ers 339 (1994) 108-112, James W. Larrick et al., A
ntimicrobial Agentsand Chemotherapy, Dec. 1993, p.
2534-2539, James W. Larrick et al., Bacterial Endo
toxins: Basic Science to Anti-Sepsis Strategies, p
125-135, 1994、特表平８−５０４０８５号公報）。こ
れらの文献においては、代表的な病害性の真菌であるCa
ndida albicans に対する抗菌性が認められないことが
記載されている。
【０００４】一方、従来、細菌、糸状菌、線虫等の植物
病害生物による農作物の被害が問題となっている。植物
病害生物の防除方法としては、従来、（ａ）有機系化学
農薬を利用する化学的防除方法、（ｂ）拮抗微生物を利
用する生物的防除方法、（ｃ）病害生物に対して抵抗性
のある品質を用いる防除方法などが実施されている。上
記（ａ）としては、たとえは、イネいもち病に対するカ
スガマイシン塩酸塩等の利用、イネ紋古病などに対する
バリダマイシンＡやフルトラニルなどの使用がある。ま
た、上記（ｂ）としては、例えば、シュードモナス属細
菌の使用によるイネ苗立病の棒状（特開平４−１０４７
８３号公報）、同様な方法によるナス科植物の青枯病の
防除（特開平６−９３２５号公報）がある。また、上記
（ｃ）としては、双翅目昆虫由来の抗細菌性ペプチドを
導入して病害糸状菌への耐性を持たせたタバコ（特開平
７−２５０６５８号公報）や、セクロピン遺伝子を導入
した腐敗病抵抗性レタス（特開平１１−３１３６８０号
公報）がある。
病害生物による農作物の被害が問題となっている。植物
病害生物の防除方法としては、従来、（ａ）有機系化学
農薬を利用する化学的防除方法、（ｂ）拮抗微生物を利
用する生物的防除方法、（ｃ）病害生物に対して抵抗性
のある品質を用いる防除方法などが実施されている。上
記（ａ）としては、たとえは、イネいもち病に対するカ
スガマイシン塩酸塩等の利用、イネ紋古病などに対する
バリダマイシンＡやフルトラニルなどの使用がある。ま
た、上記（ｂ）としては、例えば、シュードモナス属細
菌の使用によるイネ苗立病の棒状（特開平４−１０４７
８３号公報）、同様な方法によるナス科植物の青枯病の
防除（特開平６−９３２５号公報）がある。また、上記
（ｃ）としては、双翅目昆虫由来の抗細菌性ペプチドを
導入して病害糸状菌への耐性を持たせたタバコ（特開平
７−２５０６５８号公報）や、セクロピン遺伝子を導入
した腐敗病抵抗性レタス（特開平１１−３１３６８０号
公報）がある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、上記（ａ）の
方法では、有機系化学農薬の過剰な使用による食品への
残留や、水質汚染等の問題が生じる恐れがある。また、
当該農薬に対する抵抗性のある病原生物の出現や優占化
を促進するなどの懸念もある。さらに、これらの農薬を
ポストハーベスト農薬として使用した場合には、食品中
への残留の懸念が一層強い。上記（ｂ）の方法では、拮
抗微生物の使用方法、施用時期、土壌条件等によっては
安定した効果を得られない場合がある。また、拮抗微生
物を一定の区域内のみに維持させておくことは困難であ
る。上記（ｃ）の方法では、抗菌スペクトラムが狭く特
定の細菌または糸状菌にしか効果がない、人体に対する
安全性が懸念されるなど問題点が多い。したがって、人
体への影響や抵抗性病原体の出現などのおそれがないこ
と、使用条件の制約がないこと、幅広い植物病害細菌や
植物病害糸状菌に対して有効で、しかもヒトを含めた動
物に対する安全性が確立されていること、を充足するよ
うな植物病害生物防除剤が要望されている。
方法では、有機系化学農薬の過剰な使用による食品への
残留や、水質汚染等の問題が生じる恐れがある。また、
当該農薬に対する抵抗性のある病原生物の出現や優占化
を促進するなどの懸念もある。さらに、これらの農薬を
ポストハーベスト農薬として使用した場合には、食品中
への残留の懸念が一層強い。上記（ｂ）の方法では、拮
抗微生物の使用方法、施用時期、土壌条件等によっては
安定した効果を得られない場合がある。また、拮抗微生
物を一定の区域内のみに維持させておくことは困難であ
る。上記（ｃ）の方法では、抗菌スペクトラムが狭く特
定の細菌または糸状菌にしか効果がない、人体に対する
安全性が懸念されるなど問題点が多い。したがって、人
体への影響や抵抗性病原体の出現などのおそれがないこ
と、使用条件の制約がないこと、幅広い植物病害細菌や
植物病害糸状菌に対して有効で、しかもヒトを含めた動
物に対する安全性が確立されていること、を充足するよ
うな植物病害生物防除剤が要望されている。
【０００６】そこで、本発明では、真菌に対して抗菌性
を発現する動物の生体防御因子である抗菌性ポリペプチ
ドあるいはそれを含有する抗真菌剤を提供することを目
的とする。また、本発明では、植物病害生物に抵抗性の
ある抗菌ポリペプチドおよびこの抗菌ポリペプチドを用
いた植物病害の防除技術を提供することを目的とする。
を発現する動物の生体防御因子である抗菌性ポリペプチ
ドあるいはそれを含有する抗真菌剤を提供することを目
的とする。また、本発明では、植物病害生物に抵抗性の
ある抗菌ポリペプチドおよびこの抗菌ポリペプチドを用
いた植物病害の防除技術を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、脊椎動
物、具体的にはウサギ由来のＣＡＰ１８のＣ末端側フラ
グメントに着目し、各種態様のフラグメントを調製し、
その抗菌活性を種々探索したところ、ある種のフラグメ
ントが抗真菌活性を有すること、および各種植物病害性
菌（細菌および真菌を含む）に対して抗菌活性を有する
ことを初めて見出した。従来、ＣＡＰ１８のＣ末端側フ
ラグメントにあっては、Candida albicansに対する抗真
菌活性が確認されていないかったが、本発明者らが見出
したある種のフラグメントは、従来抗細菌活性が見出さ
れていたフラグメントよりもさらに短いフラグメントで
あるにも係わらず、各種の真菌、特に植物病害に関連す
る糸状菌に対して高い抗菌活性が見出された。しかも、
このフラグメントには、同時に、グラム陰性およびグラ
ム陽性細菌に対する高い抗菌活性も見出された。本発明
者らは、さらに、検討を進めた結果、植物組織内で有効
に抗細菌活性および抗真菌活性を発揮できる特定配列の
ポリペプチドを見出した。本発明者らは、これらの新た
な知見によれば、上記した課題を解決できることを見出
し、本発明を完成した。すなわち、本発明によれば、以
下の手段を提供することができる。
物、具体的にはウサギ由来のＣＡＰ１８のＣ末端側フラ
グメントに着目し、各種態様のフラグメントを調製し、
その抗菌活性を種々探索したところ、ある種のフラグメ
ントが抗真菌活性を有すること、および各種植物病害性
菌（細菌および真菌を含む）に対して抗菌活性を有する
ことを初めて見出した。従来、ＣＡＰ１８のＣ末端側フ
ラグメントにあっては、Candida albicansに対する抗真
菌活性が確認されていないかったが、本発明者らが見出
したある種のフラグメントは、従来抗細菌活性が見出さ
れていたフラグメントよりもさらに短いフラグメントで
あるにも係わらず、各種の真菌、特に植物病害に関連す
る糸状菌に対して高い抗菌活性が見出された。しかも、
このフラグメントには、同時に、グラム陰性およびグラ
ム陽性細菌に対する高い抗菌活性も見出された。本発明
者らは、さらに、検討を進めた結果、植物組織内で有効
に抗細菌活性および抗真菌活性を発揮できる特定配列の
ポリペプチドを見出した。本発明者らは、これらの新た
な知見によれば、上記した課題を解決できることを見出
し、本発明を完成した。すなわち、本発明によれば、以
下の手段を提供することができる。
【０００８】（１）ウサギ由来でα−へリックス構造を
有するカチオン性ポリペプチドの１種あるいは２種以上
を有効成分として含有する、抗真菌剤。 （２）前記ポリペプチドのアミノ酸残基数は１７〜３２
である、（１）記載の抗真菌剤。 （３）ウサギ由来でα−ヘリックス構造を有するカチオ
ン性ポリペプチドフラグメントと、このフラグメントの
Ｃ末端側にペプチド結合により結合される、Lys-Asp（K
-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R-D）、Arg-Glu（R-
E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-R)、Glu-Lys (E-K)
及びGlu-Arg (E-R)からなる群から選択される１種ある
いは２種以上のアミノ酸残基、とを有するポリペプチド
を有効成分として含有する、抗真菌剤。 （４）ウサギ由来でα−へリックス構造を有するカチオ
ン性ポリペプチドの１種あるいは２種以上を有効成分と
して含有する、植物病害生物防除剤。 （５）前記ポリペプチドのアミノ酸残基数は１７〜３２
である、（４）記載の植物病害生物防除剤。 （６）ウサギ由来でα−ヘリックス構造を有するカチオ
ン性ポリペプチドフラグメントと、このフラグメントの
Ｃ末端側にペプチド結合により結合される、Lys-Asp（K
-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R-D）、Arg-Glu（R-
E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-R)、Glu-Lys (E-K)
及びGlu-Arg (E-R)からなる群から選択される１種ある
いは２種以上のアミノ酸残基、とを有するポリペプチド
を有効成分として含有する、植物病害生物防除剤。 （７）抗真菌性を有する、以下のいずれかに記載される
ポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （８）抗真菌性を有する、以下のいずれかに記載される
ポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （９）抗真菌性を有する、以下のいずれかに記載される
ポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 （１０）抗真菌性を有する、以下のいずれかに記載され
るポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 （１１）ポリペプチドが抗真菌性を発現する真菌が植物
病害性真菌である、（７）〜（１０）に記載のポリペプ
チド。 （１２）（７）〜（１０）のいずれかに記載のポリペプ
チドの１種あるいは２種以上を含有する、抗菌剤。 （１３）抗植物病害菌性を有する、以下のいずれかに記
載のポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （１４）抗植物病害菌性を有する、以下のいずれかに記
載のポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （１５）抗植物病害菌性を有する、以下のいずれかに記
載されるポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 （１６）抗植物病害菌性を有する、以下のいずれかに記
載されるポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 （１７）（１３）〜（１６）のいずれかに記載のポリペ
プチドの１種あるいは２種以上を含有する、植物病害生
物防除剤。 （１８）抗真菌性を有するポリペプチドをコードする、
以下のいずれかに記載のポリヌクレオチド。 （ａ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド。 （ｂ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列を含むポリヌクレオチド。 （１９）抗真菌性を有するポリペプチドをコードする、
以下のいずれかに記載のポリヌクレオチド。 （ａ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列において１もしくは数個のアミノ酸が置
換、欠失、挿入、および／または付加したアミノ酸配列
からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。 （ｂ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェン
トな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド。 （２０）α−ヘリックス構造を有するカチオン性ポリペ
プチドであって抗菌活性を有するフラグメントと、この
フラグメントのＣ末端側にペプチド結合により結合され
る、Lys-Asp（K-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R-
D）、Arg-Glu（R-E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-
R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg (E-R)からなる群から
選択される１種あるいは２種以上のアミノ酸残基、とを
有するポリペプチド。 （２１）（２０）記載のポリペプチドの１種あるいは２
種以上を含有する、抗菌剤。 （２２）α−ヘリックス構造を有するカチオン性ポリペ
プチドであって抗菌活性を有するフラグメントと、この
フラグメントのＣ末端側にペプチド結合により結合され
る、Lys-Asp（K-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R-
D）、Arg-Glu（R-E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-
R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg (E-R)からなる群から
選択される１種あるいは２種以上のアミノ酸残基とから
なるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド。 （２３）前記抗菌活性フラグメントをコードするポリヌ
クレオチド部分は、下記（ａ）〜（ｄ）のいずれかであ
るポリヌクレオチド。 （ａ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド。 （ｂ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列を含むポリヌクレオチド。 （ｃ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が置
換、欠失、挿入、および／または付加したアミノ酸配列
を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。 （ｄ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェン
トな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド。 （２４）（１８）、（１９）、（２２）および（２３）
のいずれかに記載のポリヌクレオチドが挿入されたベク
ター。 （２５）（１８）、（１９）、（２２）および（２３）
のいずれかに記載のポリヌクレオチドまたはこれらのい
ずれかのポリヌクレオチドが挿入されたベクターを発現
可能に保持する形質転換体。 （２６）前記形質転換体は植物体である、（２５）記載
の形質転換体。 （２７）前記ポリペプチドを植物病害生物の存在する環
境中へ導入する、植物病害生物の防除方法。 （２８）前記ポリペプチドを発現するように操作された
形質転換植物を前記環境下で栽培する、（２７）記載の
防除方法。 （２９）前記植物病害生物が、細菌および真菌である、
（２７）又は（２８）記載の防除方法。
有するカチオン性ポリペプチドの１種あるいは２種以上
を有効成分として含有する、抗真菌剤。 （２）前記ポリペプチドのアミノ酸残基数は１７〜３２
である、（１）記載の抗真菌剤。 （３）ウサギ由来でα−ヘリックス構造を有するカチオ
ン性ポリペプチドフラグメントと、このフラグメントの
Ｃ末端側にペプチド結合により結合される、Lys-Asp（K
-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R-D）、Arg-Glu（R-
E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-R)、Glu-Lys (E-K)
及びGlu-Arg (E-R)からなる群から選択される１種ある
いは２種以上のアミノ酸残基、とを有するポリペプチド
を有効成分として含有する、抗真菌剤。 （４）ウサギ由来でα−へリックス構造を有するカチオ
ン性ポリペプチドの１種あるいは２種以上を有効成分と
して含有する、植物病害生物防除剤。 （５）前記ポリペプチドのアミノ酸残基数は１７〜３２
である、（４）記載の植物病害生物防除剤。 （６）ウサギ由来でα−ヘリックス構造を有するカチオ
ン性ポリペプチドフラグメントと、このフラグメントの
Ｃ末端側にペプチド結合により結合される、Lys-Asp（K
-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R-D）、Arg-Glu（R-
E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-R)、Glu-Lys (E-K)
及びGlu-Arg (E-R)からなる群から選択される１種ある
いは２種以上のアミノ酸残基、とを有するポリペプチド
を有効成分として含有する、植物病害生物防除剤。 （７）抗真菌性を有する、以下のいずれかに記載される
ポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （８）抗真菌性を有する、以下のいずれかに記載される
ポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （９）抗真菌性を有する、以下のいずれかに記載される
ポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 （１０）抗真菌性を有する、以下のいずれかに記載され
るポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 （１１）ポリペプチドが抗真菌性を発現する真菌が植物
病害性真菌である、（７）〜（１０）に記載のポリペプ
チド。 （１２）（７）〜（１０）のいずれかに記載のポリペプ
チドの１種あるいは２種以上を含有する、抗菌剤。 （１３）抗植物病害菌性を有する、以下のいずれかに記
載のポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （１４）抗植物病害菌性を有する、以下のいずれかに記
載のポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （１５）抗植物病害菌性を有する、以下のいずれかに記
載されるポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 （１６）抗植物病害菌性を有する、以下のいずれかに記
載されるポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 （１７）（１３）〜（１６）のいずれかに記載のポリペ
プチドの１種あるいは２種以上を含有する、植物病害生
物防除剤。 （１８）抗真菌性を有するポリペプチドをコードする、
以下のいずれかに記載のポリヌクレオチド。 （ａ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド。 （ｂ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列を含むポリヌクレオチド。 （１９）抗真菌性を有するポリペプチドをコードする、
以下のいずれかに記載のポリヌクレオチド。 （ａ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列において１もしくは数個のアミノ酸が置
換、欠失、挿入、および／または付加したアミノ酸配列
からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。 （ｂ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェン
トな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド。 （２０）α−ヘリックス構造を有するカチオン性ポリペ
プチドであって抗菌活性を有するフラグメントと、この
フラグメントのＣ末端側にペプチド結合により結合され
る、Lys-Asp（K-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R-
D）、Arg-Glu（R-E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-
R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg (E-R)からなる群から
選択される１種あるいは２種以上のアミノ酸残基、とを
有するポリペプチド。 （２１）（２０）記載のポリペプチドの１種あるいは２
種以上を含有する、抗菌剤。 （２２）α−ヘリックス構造を有するカチオン性ポリペ
プチドであって抗菌活性を有するフラグメントと、この
フラグメントのＣ末端側にペプチド結合により結合され
る、Lys-Asp（K-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R-
D）、Arg-Glu（R-E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-
R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg (E-R)からなる群から
選択される１種あるいは２種以上のアミノ酸残基とから
なるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド。 （２３）前記抗菌活性フラグメントをコードするポリヌ
クレオチド部分は、下記（ａ）〜（ｄ）のいずれかであ
るポリヌクレオチド。 （ａ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド。 （ｂ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列を含むポリヌクレオチド。 （ｃ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が置
換、欠失、挿入、および／または付加したアミノ酸配列
を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。 （ｄ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェン
トな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド。 （２４）（１８）、（１９）、（２２）および（２３）
のいずれかに記載のポリヌクレオチドが挿入されたベク
ター。 （２５）（１８）、（１９）、（２２）および（２３）
のいずれかに記載のポリヌクレオチドまたはこれらのい
ずれかのポリヌクレオチドが挿入されたベクターを発現
可能に保持する形質転換体。 （２６）前記形質転換体は植物体である、（２５）記載
の形質転換体。 （２７）前記ポリペプチドを植物病害生物の存在する環
境中へ導入する、植物病害生物の防除方法。 （２８）前記ポリペプチドを発現するように操作された
形質転換植物を前記環境下で栽培する、（２７）記載の
防除方法。 （２９）前記植物病害生物が、細菌および真菌である、
（２７）又は（２８）記載の防除方法。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明は、抗真菌性および／また
は抗細菌性を有するポリペプチド、およびこのポリペプ
チドを有効成分として含有する抗菌剤に関する。さら
に、これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドに関する。本発明により提供されるポリペプチドは、
真菌、細菌（グラム陰性および陽性）、および各種植物
病害菌（真菌および細菌を含む）のいずれかに対する細
胞障害性、すなわち、抗菌性を有している。好ましく
は、少なくとも真菌に対する抗菌性を有し、より好まし
くは、糸状菌に対して抗菌性を有する。また、好ましく
は、植物病害真菌（典型的には、糸状菌）に対して抗菌
性を有している。また、好ましくは、グラム陽性菌及び
グラム陰性菌を含む細菌に対して抗菌性を有し、なかで
も、グラム陰性菌に対して抗菌性を有している。また、
好ましくは、植物病害細菌（典型的には、グラム陰性
菌）に対して抗菌性を有している。
は抗細菌性を有するポリペプチド、およびこのポリペプ
チドを有効成分として含有する抗菌剤に関する。さら
に、これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドに関する。本発明により提供されるポリペプチドは、
真菌、細菌（グラム陰性および陽性）、および各種植物
病害菌（真菌および細菌を含む）のいずれかに対する細
胞障害性、すなわち、抗菌性を有している。好ましく
は、少なくとも真菌に対する抗菌性を有し、より好まし
くは、糸状菌に対して抗菌性を有する。また、好ましく
は、植物病害真菌（典型的には、糸状菌）に対して抗菌
性を有している。また、好ましくは、グラム陽性菌及び
グラム陰性菌を含む細菌に対して抗菌性を有し、なかで
も、グラム陰性菌に対して抗菌性を有している。また、
好ましくは、植物病害細菌（典型的には、グラム陰性
菌）に対して抗菌性を有している。
【００１０】抗菌性を発揮する真菌としては、特に限定
しない。例えば、一般的なcandidaalbicansなどのcandi
da属菌の他、植物（特に栽培植物）における病害性菌と
して知られる糸状菌類を例示することができる。糸状菌
としては、サツマイモの黒斑病菌であるCeratocyctis f
imbriataなどのCeratocyctis属菌、イネいもち病菌であ
るPyrucularia oryzae raceなどのPyrucularia属菌を挙
げることができる。また、抗菌性を発揮するグラム陰性
菌としてはも特に限定しない。大腸菌 Echrichia coli
などのEchrichia属菌や、サルモネラ菌 Salmonella typ
himuriumなどのSalmonella属菌などの細菌の他、ダイズ
斑点細菌病菌であるPseudomonas syringaeなどのPseudo
monas属菌を例示できる。また、グラム陽性菌として
は、特に限定しない。黄色ブドウ球菌 Streptococcus p
yrogenesなどのStreptococcus属菌を例示できる。
しない。例えば、一般的なcandidaalbicansなどのcandi
da属菌の他、植物（特に栽培植物）における病害性菌と
して知られる糸状菌類を例示することができる。糸状菌
としては、サツマイモの黒斑病菌であるCeratocyctis f
imbriataなどのCeratocyctis属菌、イネいもち病菌であ
るPyrucularia oryzae raceなどのPyrucularia属菌を挙
げることができる。また、抗菌性を発揮するグラム陰性
菌としてはも特に限定しない。大腸菌 Echrichia coli
などのEchrichia属菌や、サルモネラ菌 Salmonella typ
himuriumなどのSalmonella属菌などの細菌の他、ダイズ
斑点細菌病菌であるPseudomonas syringaeなどのPseudo
monas属菌を例示できる。また、グラム陽性菌として
は、特に限定しない。黄色ブドウ球菌 Streptococcus p
yrogenesなどのStreptococcus属菌を例示できる。
【００１１】本発明により提供されるポリペプチドは、
これらの真菌および／または細菌などに対して細胞障害
性を示すが、抗菌活性としては、対象菌に対する最少殺
菌濃度が、約１００μｇ／ｍｌ以下であることが好まし
い。より好ましくは、約３０μｇ／ｍｌ以下である。特
に、当該ポリペプチドを植物細胞あるいは組織内で発現
させるなどにより導入する場合には、最少殺菌濃度が約
１０μｇ／ｍｌ以下であることが好ましい。本発明のポ
リペプチドは、好ましくは、真菌（典型的には、サツマ
イモ黒斑病菌などの糸状菌）及び細菌（典型的には大腸
菌などのグラム陰性細菌や黄色ブドウ球菌などのグラム
陽性菌）に対して、それぞれ３０μｇ／ｍｌ以下の最少
殺菌濃度を有し、より好ましくは、それぞれに対して１
０μｇ／ｍｌ以下の最少殺菌濃度を有する。最少殺菌濃
度は、当業者であれば、容易に求めることができる。ま
た、本発明により提供されるポリペプチドを、植物細胞
あるいは組織内で発現させるには、植物内での安定性の
指標となる植物細胞間液（例えば、サツマイモ細胞間液
および／またはシロイヌナズナの細胞間液）液中の５時
間後の残存率％（温度：約２０〜約３０℃）が、植物由
来の抗菌性ペプチド（典型的にはチオニン）と、おおよ
そ同等であることが好ましい。また、特に、ヒトなどの
哺乳類への安全性を確保するには、ヒトに対する安全性
の指標となるＣＨＬ細胞などに対する５０％死滅濃度が
１００μｇ／ｍｌ以上であることが好ましい。ＣＨＬ細
胞に対する５０％死滅濃度は、後述する実施例に記載す
る方法の他、当業者に周知の方法によって測定すること
ができる。
これらの真菌および／または細菌などに対して細胞障害
性を示すが、抗菌活性としては、対象菌に対する最少殺
菌濃度が、約１００μｇ／ｍｌ以下であることが好まし
い。より好ましくは、約３０μｇ／ｍｌ以下である。特
に、当該ポリペプチドを植物細胞あるいは組織内で発現
させるなどにより導入する場合には、最少殺菌濃度が約
１０μｇ／ｍｌ以下であることが好ましい。本発明のポ
リペプチドは、好ましくは、真菌（典型的には、サツマ
イモ黒斑病菌などの糸状菌）及び細菌（典型的には大腸
菌などのグラム陰性細菌や黄色ブドウ球菌などのグラム
陽性菌）に対して、それぞれ３０μｇ／ｍｌ以下の最少
殺菌濃度を有し、より好ましくは、それぞれに対して１
０μｇ／ｍｌ以下の最少殺菌濃度を有する。最少殺菌濃
度は、当業者であれば、容易に求めることができる。ま
た、本発明により提供されるポリペプチドを、植物細胞
あるいは組織内で発現させるには、植物内での安定性の
指標となる植物細胞間液（例えば、サツマイモ細胞間液
および／またはシロイヌナズナの細胞間液）液中の５時
間後の残存率％（温度：約２０〜約３０℃）が、植物由
来の抗菌性ペプチド（典型的にはチオニン）と、おおよ
そ同等であることが好ましい。また、特に、ヒトなどの
哺乳類への安全性を確保するには、ヒトに対する安全性
の指標となるＣＨＬ細胞などに対する５０％死滅濃度が
１００μｇ／ｍｌ以上であることが好ましい。ＣＨＬ細
胞に対する５０％死滅濃度は、後述する実施例に記載す
る方法の他、当業者に周知の方法によって測定すること
ができる。
【００１２】本発明により提供されるポリペプチドの抗
菌性（抗真菌性および／または抗細菌性および／または
抗植物病害性菌性）に関しては、少なくともα−ヘリッ
クス構造を有すること、あるいは、これに加えてカチオ
ン性ポリペプチドであることが関連するものと考えられ
る。
菌性（抗真菌性および／または抗細菌性および／または
抗植物病害性菌性）に関しては、少なくともα−ヘリッ
クス構造を有すること、あるいは、これに加えてカチオ
ン性ポリペプチドであることが関連するものと考えられ
る。
【００１３】したがって、本発明のポリペプチドは、α
−ヘリックス構造を有するカチオン性ポリペプチドであ
ることが好ましい。より好ましくは、α−ヘリックス構
造を形成する、すなわち、そのポリペプチドの全体ある
いは大部分がα−ヘリックス構造を構成するポリペプチ
ドである。また、脊椎動物由来のポリペプチドであるこ
とが好ましい。由来する脊椎動物としては、ヒト、ウサ
ギ、ラット、ウシ、ブタ、モルモット等であるが、これ
に限定されない。好ましくは、ヒト、ウサギ、ブタであ
り、さらに好ましくはウサギ、ヒトである。もっとも好
ましくは、ウサギである。脊椎動物においては、このよ
うなペプチドは、ＣＡＰ１８ファミリーとして知られて
おり、顆粒球、好中球などに含まれている。
−ヘリックス構造を有するカチオン性ポリペプチドであ
ることが好ましい。より好ましくは、α−ヘリックス構
造を形成する、すなわち、そのポリペプチドの全体ある
いは大部分がα−ヘリックス構造を構成するポリペプチ
ドである。また、脊椎動物由来のポリペプチドであるこ
とが好ましい。由来する脊椎動物としては、ヒト、ウサ
ギ、ラット、ウシ、ブタ、モルモット等であるが、これ
に限定されない。好ましくは、ヒト、ウサギ、ブタであ
り、さらに好ましくはウサギ、ヒトである。もっとも好
ましくは、ウサギである。脊椎動物においては、このよ
うなペプチドは、ＣＡＰ１８ファミリーとして知られて
おり、顆粒球、好中球などに含まれている。
【００１４】以上のことから、本発明により提供される
ポリペプチドの第１の形態は、α−へリックス構造を有
するカチオン性ポリペプチドである。かかるポリペプチ
ドは、例えば、ヒト由来あるいはウサギ由来のＣＡＰ１
８のＣ末端側フラグメントとして知られている。この第
１のポリペプチドは全体としてあるいはその少なくとも
一部分は抗真菌性の他、抗植物病害菌性を有している。
このため、この第１のポリペプチドを有効成分として含
有する各種態様の抗菌剤が提供される。本発明のポリペ
プチドには、第１のポリペプチドのホモログも包含す
る。
ポリペプチドの第１の形態は、α−へリックス構造を有
するカチオン性ポリペプチドである。かかるポリペプチ
ドは、例えば、ヒト由来あるいはウサギ由来のＣＡＰ１
８のＣ末端側フラグメントとして知られている。この第
１のポリペプチドは全体としてあるいはその少なくとも
一部分は抗真菌性の他、抗植物病害菌性を有している。
このため、この第１のポリペプチドを有効成分として含
有する各種態様の抗菌剤が提供される。本発明のポリペ
プチドには、第１のポリペプチドのホモログも包含す
る。
【００１５】抗菌性の発現のための好ましいポリペプチ
ドは、当該ポリペプチドのＣ末端側の反応性窒素阻害ペ
プチド（ＲＮＩＰ）フラグメントを含むポリペプチドで
ある。配列番号：１にウサギ由来のＣＡＰ１８のアミノ
酸配列を示す。このアミノ酸配列において特定されるポ
リペプチドにおいて、本発明に好ましいフラグメント
は、そのＣ末端側であり、好ましくは、１００位以降、
さらに好ましくは、１０６位以降のフラグメントの全体
あるいはその一部である。好ましいＣ末端側フラグメン
トは、１３７位までであることが好ましく、より好まし
くは、１３２位までであり、さらに好ましくは、１２５
位から１２９位の間を末端とする。好ましいＣ末端側フ
ラグメントとしては、１０６位〜１３７位（アミノ酸の
数：３２）であり、さらに好ましくは１０６位〜１３２
位（アミノ酸の数：２７）であり、最も好ましくは１０
６位〜１２９位（アミノ酸の数：２４）および１０６位
〜１２５位（アミノ酸の数：２０）である。また、ポリ
ペプチドのアミノ酸の数としては、１７個以上３２個以
下であることが好ましいが、より好ましくは、２０個以
上２７個以下であり、さらに好ましくは２０個以上２４
個以下である。これらのいずれのポリペプチドも配列番
号：１に記載のアミノ酸配列の１０６位以降のフラグメ
ントとすることが好ましい。
ドは、当該ポリペプチドのＣ末端側の反応性窒素阻害ペ
プチド（ＲＮＩＰ）フラグメントを含むポリペプチドで
ある。配列番号：１にウサギ由来のＣＡＰ１８のアミノ
酸配列を示す。このアミノ酸配列において特定されるポ
リペプチドにおいて、本発明に好ましいフラグメント
は、そのＣ末端側であり、好ましくは、１００位以降、
さらに好ましくは、１０６位以降のフラグメントの全体
あるいはその一部である。好ましいＣ末端側フラグメン
トは、１３７位までであることが好ましく、より好まし
くは、１３２位までであり、さらに好ましくは、１２５
位から１２９位の間を末端とする。好ましいＣ末端側フ
ラグメントとしては、１０６位〜１３７位（アミノ酸の
数：３２）であり、さらに好ましくは１０６位〜１３２
位（アミノ酸の数：２７）であり、最も好ましくは１０
６位〜１２９位（アミノ酸の数：２４）および１０６位
〜１２５位（アミノ酸の数：２０）である。また、ポリ
ペプチドのアミノ酸の数としては、１７個以上３２個以
下であることが好ましいが、より好ましくは、２０個以
上２７個以下であり、さらに好ましくは２０個以上２４
個以下である。これらのいずれのポリペプチドも配列番
号：１に記載のアミノ酸配列の１０６位以降のフラグメ
ントとすることが好ましい。
【００１６】このようなウサギ由来のポリペプチドとし
ては、具体的には、配列番号：１の１０６位〜１２５位
（アミノ酸の数：２０）、１０６位〜１２９位（アミノ
酸の数：２４）、１０６位〜１３７位（アミノ酸の数：
３２）、１０６位〜１３２位（アミノ酸の数：２７）、
１０６位〜１２２位（アミノ酸の数：１７）のポリペプ
チドを例示することができる。これらのポリペプチド
は、それぞれ、配列番号：２〜６に示されるアミノ酸配
列からなる。サツマイモの黒斑病菌であるCeratocyctis
fimbriata、イネいもち病菌Pyrucularia oryzae race
などの糸状菌を含む真菌に高い抗菌活性（典型的には、
最少殺菌濃度が１０μｇ／ｍｌ以下）を有する観点から
は、配列番号：２及び３に示されるポリペプチドが好ま
しい態様である。大腸菌 Echrichia coliやダイズ斑点
細菌病菌であるPseudomonas syringaeなど植物病害性の
グラム陰性菌に対する抗菌性（典型的には、最少殺菌濃
度が１０μｇ／ｍｌ以下、好ましくは３μｇ／ｍｌ以
下）の観点からは、配列番号：３〜５で示されるポリペ
プチドが好ましい態様である。
ては、具体的には、配列番号：１の１０６位〜１２５位
（アミノ酸の数：２０）、１０６位〜１２９位（アミノ
酸の数：２４）、１０６位〜１３７位（アミノ酸の数：
３２）、１０６位〜１３２位（アミノ酸の数：２７）、
１０６位〜１２２位（アミノ酸の数：１７）のポリペプ
チドを例示することができる。これらのポリペプチド
は、それぞれ、配列番号：２〜６に示されるアミノ酸配
列からなる。サツマイモの黒斑病菌であるCeratocyctis
fimbriata、イネいもち病菌Pyrucularia oryzae race
などの糸状菌を含む真菌に高い抗菌活性（典型的には、
最少殺菌濃度が１０μｇ／ｍｌ以下）を有する観点から
は、配列番号：２及び３に示されるポリペプチドが好ま
しい態様である。大腸菌 Echrichia coliやダイズ斑点
細菌病菌であるPseudomonas syringaeなど植物病害性の
グラム陰性菌に対する抗菌性（典型的には、最少殺菌濃
度が１０μｇ／ｍｌ以下、好ましくは３μｇ／ｍｌ以
下）の観点からは、配列番号：３〜５で示されるポリペ
プチドが好ましい態様である。
【００１７】本発明により提供される第２のポリペプチ
ドは、配列番号：２〜６に示されるアミノ酸配列を有す
ることができる。配列番号：２〜６に示されるアミノ酸
配列を有するポリペプチドは、本発明のポリペプチドの
好ましい態様である。本発明のポリペプチドは、これら
のホモログも包含する。さらに、本発明により提供され
る第３のポリペプチドは、配列番号：７〜１０及び２２
のいずれかに示されるアミノ酸配列を有することができ
る。配列番号：７〜１０及び２２のいずれかに示される
アミノ酸配列を有するポリペプチドは、本発明のポリペ
プチドの好ましい態様であり、また、配列番号：３に示
されるアミノ酸配列を有するポリペプチドのホモログと
いうこともできる。さらに、本発明のポリペプチドは、
これら（配列番号：７〜１０及び２２のいずれかに示さ
れるアミノ酸配列を有するポリペプチド）のホモログも
包含する。
ドは、配列番号：２〜６に示されるアミノ酸配列を有す
ることができる。配列番号：２〜６に示されるアミノ酸
配列を有するポリペプチドは、本発明のポリペプチドの
好ましい態様である。本発明のポリペプチドは、これら
のホモログも包含する。さらに、本発明により提供され
る第３のポリペプチドは、配列番号：７〜１０及び２２
のいずれかに示されるアミノ酸配列を有することができ
る。配列番号：７〜１０及び２２のいずれかに示される
アミノ酸配列を有するポリペプチドは、本発明のポリペ
プチドの好ましい態様であり、また、配列番号：３に示
されるアミノ酸配列を有するポリペプチドのホモログと
いうこともできる。さらに、本発明のポリペプチドは、
これら（配列番号：７〜１０及び２２のいずれかに示さ
れるアミノ酸配列を有するポリペプチド）のホモログも
包含する。
【００１８】ポリペプチドのホモログとしては、もとの
アミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が置
換、欠失、挿入、および／または付加したアミノ酸配列
を有している。このホモログは、もとのポリペプチドの
有する抗菌活性を有している。抗真菌活性、抗細菌活性
あるいは抗植物病害性菌活性を有するか否かは、後述す
る実施例に記載の方法の他、当業者に周知の各種方法を
用いることができる。
アミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が置
換、欠失、挿入、および／または付加したアミノ酸配列
を有している。このホモログは、もとのポリペプチドの
有する抗菌活性を有している。抗真菌活性、抗細菌活性
あるいは抗植物病害性菌活性を有するか否かは、後述す
る実施例に記載の方法の他、当業者に周知の各種方法を
用いることができる。
【００１９】本発明により提供されるポリペプチドのホ
モログは、前記第１〜第３のポリペプチドのいずれかの
アミノ酸配列に、部位特異的変位導入法（Current Prot
ocols I Molecular Biology edit. Ausubel et al., (1
987) Publish . John Wily &Sons Sectoin 8.1-8.5）等
を用いて、適宜、置換、欠失、挿入、および／または付
加変位を導入することにより得ることができる。このよ
うなポリペプチドは、人工的に変異を導入し、あるいは
合成したものに限られず、人工的な変異処理に基づい
て、あるいは、限られず、自然界におけるアミノ酸の変
異によっても生じたものも包含される。例えば、配列番
号：２〜１０及び２２のいずれかに示されるアミノ酸配
列に対して当該操作を行うことなどにより、本発明のポ
リペプチドに包含されるホモログを得ることができる。
モログは、前記第１〜第３のポリペプチドのいずれかの
アミノ酸配列に、部位特異的変位導入法（Current Prot
ocols I Molecular Biology edit. Ausubel et al., (1
987) Publish . John Wily &Sons Sectoin 8.1-8.5）等
を用いて、適宜、置換、欠失、挿入、および／または付
加変位を導入することにより得ることができる。このよ
うなポリペプチドは、人工的に変異を導入し、あるいは
合成したものに限られず、人工的な変異処理に基づい
て、あるいは、限られず、自然界におけるアミノ酸の変
異によっても生じたものも包含される。例えば、配列番
号：２〜１０及び２２のいずれかに示されるアミノ酸配
列に対して当該操作を行うことなどにより、本発明のポ
リペプチドに包含されるホモログを得ることができる。
【００２０】本発明のポリペプチドにおけるアミノ酸の
変異数や変異部位は、本発明のポリペプチドの機能が保
持される限り制限はない。
変異数や変異部位は、本発明のポリペプチドの機能が保
持される限り制限はない。
【００２１】特に、本発明のポリペプチドとして好まし
い態様として、上記した各種の抗菌活性ポリペプチドか
らなるフラグメントと、このＣ末端側にペプチド結合に
より結合されたある種のアミノ酸配列とを備えるポリペ
プチドを挙げることができる。このようなアミノ酸配列
としては、プロテアーゼなどの分解に対して抵抗性を向
上させる、あるいは、細胞間液中などの生体環境あるい
はそれに近似した環境における安定性を向上させるアミ
ノ酸配列であることが好ましい。例えば、プロテアーゼ
に対する抵抗性あるいは各種細胞間液（例えば、植物細
胞間液や動物細胞間液など）における安定性が向上され
るアミノ酸配列（以下、抵抗性配列ともいう。）は、２
個あるいは３個以上のアミノ酸を有している。本発明者
らの研究によれば、このようなアミノ酸配列は、２個の
アミノ酸からなる最小単位を有する。最小単位は、抵抗
性配列の最もＣ末端側に位置される配列である。ここ
に、アミノ酸を、その側鎖Ｒ基により分類すると、疎水
性アミノ酸、親水性アミノ酸、生理的ｐＨで正電荷を有
するアミノ酸（以下、正電荷アミノ酸）、生理的ｐＨで
負電荷を有するアミノ酸（以下、負電荷アミノ酸）の４
種類に分類することができる。かかる分類に基づけば、
当該最小単位は、一つの正電荷アミノ酸と一つの負電荷
アミノ酸とが互いにペプチド結合により結合した構造を
備えている。これら２種のアミノ酸の配列は、一の順序
に限定されないで、２種類の順序での配列を採ることが
できる。すなわち、これらの２つのアミノ酸は、Ｎ末端
側からＣ末端側の方向において（本明細書において、全
てこの方向性に従って記載する。）、正電荷アミノ酸−
負電荷アミノ酸という配列（第１の配列）と負電荷アミ
ノ酸−正電荷アミノ酸（第２の配列）を有することがで
きる。例えば、第１の配列の最小単位は、Lys-Asp (K-
D)の他、Arg-Asp (R-D)、Lys-Glu (K-E)及びArg-Glu (R
-E)とすることができる。また、第２の配列の最少単位
は、Asp-Lys (D-K)の他、Asp-Arg (D-R)、Glu-Lys (E-
K) 及びGlu-Arg (E-R) とすることができる。
い態様として、上記した各種の抗菌活性ポリペプチドか
らなるフラグメントと、このＣ末端側にペプチド結合に
より結合されたある種のアミノ酸配列とを備えるポリペ
プチドを挙げることができる。このようなアミノ酸配列
としては、プロテアーゼなどの分解に対して抵抗性を向
上させる、あるいは、細胞間液中などの生体環境あるい
はそれに近似した環境における安定性を向上させるアミ
ノ酸配列であることが好ましい。例えば、プロテアーゼ
に対する抵抗性あるいは各種細胞間液（例えば、植物細
胞間液や動物細胞間液など）における安定性が向上され
るアミノ酸配列（以下、抵抗性配列ともいう。）は、２
個あるいは３個以上のアミノ酸を有している。本発明者
らの研究によれば、このようなアミノ酸配列は、２個の
アミノ酸からなる最小単位を有する。最小単位は、抵抗
性配列の最もＣ末端側に位置される配列である。ここ
に、アミノ酸を、その側鎖Ｒ基により分類すると、疎水
性アミノ酸、親水性アミノ酸、生理的ｐＨで正電荷を有
するアミノ酸（以下、正電荷アミノ酸）、生理的ｐＨで
負電荷を有するアミノ酸（以下、負電荷アミノ酸）の４
種類に分類することができる。かかる分類に基づけば、
当該最小単位は、一つの正電荷アミノ酸と一つの負電荷
アミノ酸とが互いにペプチド結合により結合した構造を
備えている。これら２種のアミノ酸の配列は、一の順序
に限定されないで、２種類の順序での配列を採ることが
できる。すなわち、これらの２つのアミノ酸は、Ｎ末端
側からＣ末端側の方向において（本明細書において、全
てこの方向性に従って記載する。）、正電荷アミノ酸−
負電荷アミノ酸という配列（第１の配列）と負電荷アミ
ノ酸−正電荷アミノ酸（第２の配列）を有することがで
きる。例えば、第１の配列の最小単位は、Lys-Asp (K-
D)の他、Arg-Asp (R-D)、Lys-Glu (K-E)及びArg-Glu (R
-E)とすることができる。また、第２の配列の最少単位
は、Asp-Lys (D-K)の他、Asp-Arg (D-R)、Glu-Lys (E-
K) 及びGlu-Arg (E-R) とすることができる。
【００２２】抵抗性配列は、かかる最小単位に対してさ
らにそのＮ末端側にアミノ酸を有することができる。例
えば、Ｎ末端側に、さらに１個の疎水性アミノ酸を有す
る３個のアミノ酸配列（疎水性アミノ酸−正電荷アミノ
酸−負電荷アミノ酸）とすることができる。かかる疎水
性アミノ酸としては、例えば、バリン（Val、V）、イソ
ロイシン（Ile、I）を挙げることができる。好ましく
は、イソロイシンである。なお既に示したように、例示
された３個のアミノ酸の配列における、前記正電荷アミ
ノ酸と前記負電荷アミノ酸との順序は、第２の配列に従
う順序に変えることができる。また、最小単位のＮ末端
側に２個の疎水性アミノ酸配列を有することもできる。
例えば、ロイシン（Leu）−バリン（Val）を前記最小単
位に付加することができる。これらの最少単位のＣ末端
側への付加によるプロテアーゼに対する抵抗性は、後述
する実施例において示されるようにすでに本発明者らよ
り確認されている。
らにそのＮ末端側にアミノ酸を有することができる。例
えば、Ｎ末端側に、さらに１個の疎水性アミノ酸を有す
る３個のアミノ酸配列（疎水性アミノ酸−正電荷アミノ
酸−負電荷アミノ酸）とすることができる。かかる疎水
性アミノ酸としては、例えば、バリン（Val、V）、イソ
ロイシン（Ile、I）を挙げることができる。好ましく
は、イソロイシンである。なお既に示したように、例示
された３個のアミノ酸の配列における、前記正電荷アミ
ノ酸と前記負電荷アミノ酸との順序は、第２の配列に従
う順序に変えることができる。また、最小単位のＮ末端
側に２個の疎水性アミノ酸配列を有することもできる。
例えば、ロイシン（Leu）−バリン（Val）を前記最小単
位に付加することができる。これらの最少単位のＣ末端
側への付加によるプロテアーゼに対する抵抗性は、後述
する実施例において示されるようにすでに本発明者らよ
り確認されている。
【００２３】抵抗性配列は、前記最小単位をタンデムで
含有することもできる。最小単位は、直接連結されるこ
ともできるが、適数個のアミノ酸を介して連結されてい
ることが好ましい。すなわち、最少単位を、所定間隔を
おいたリピートとして備えられていることが好ましい。
介在されるアミノ酸は、好ましくは１個あるいは２個以
上の疎水性アミノ酸である。この場合の疎水性アミノ酸
としては、イソロイシン、ロイシン、およびバリンのう
ちいずれか１個以上である。例えば、Leu-Valを介在配
列とする。かかる介在配列と前記最小単位の組み合わせ
によれば、抵抗性配列が存在していてもポリペプチドの
αヘリックス構造性が低減されにくい。
含有することもできる。最小単位は、直接連結されるこ
ともできるが、適数個のアミノ酸を介して連結されてい
ることが好ましい。すなわち、最少単位を、所定間隔を
おいたリピートとして備えられていることが好ましい。
介在されるアミノ酸は、好ましくは１個あるいは２個以
上の疎水性アミノ酸である。この場合の疎水性アミノ酸
としては、イソロイシン、ロイシン、およびバリンのう
ちいずれか１個以上である。例えば、Leu-Valを介在配
列とする。かかる介在配列と前記最小単位の組み合わせ
によれば、抵抗性配列が存在していてもポリペプチドの
αヘリックス構造性が低減されにくい。
【００２４】抵抗性配列は、ポリペプチドのＣ末端側に
備えられているが、なかでも、生理活性ペプチド領域に
隣接するＣ末端側に備えられていることが好ましい。こ
の態様によれば、活性領域が確実にプロテアーゼ作用な
どからブロックされる。また、抵抗性配列は、活性領域
に直接連結された状態で備えられていてもよいし、ま
た、適数個のアミノ酸を介して備えられていてもよい。
さらに、活性領域の重大な活性低下を引き起こさない程
度に当該領域のＣ末端側に一部含まれる形で備えられて
いてもよい。いずれの場合においても、活性化領域に必
要とされる１次構造や２次以上の高次構造性を低下させ
ないように抵抗性配列が備えられていることが好まし
い。例えば、抵抗性配列としてLys-Asp（K-D）、 Arg-A
sp (R-D)、Lys-Glu (K-E)、Arg-Glu (R-E)の他、Asp-Ly
s (D-K)、Asp-Arg (D-R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg
(E-R)の存在は、αヘリックス構造の維持に好ましい。
また、Lys-Asp- Leu-Val-Lys-Aspの存在も、αヘリック
ス構造の維持に好ましい。以上のことから、抵抗性配列
は、以下の構成を備えることができる。すなわち、抵抗
性配列は、Lys-Asp（K-D）、 Arg-Asp (R-D)、Lys-Glu
(K-E)、Arg-Glu (R-E)、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-
R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg (E-R)からなる群から
選択される１あるいは２種類以上の配列を有することが
できる。当該群は、好ましくは、Lys-Asp（K-D）、 Arg
-Asp (R-D)、Lys-Glu (K-E)、Arg-Glu (R-E)及びAsp-Ly
s (D-K)から構成される。また、好ましくは、この抵抗
性配列は、上記群から選択される１種類の配列を有し、
さらに好ましくは、上記群から選択される１種類の配列
のみを有している。
備えられているが、なかでも、生理活性ペプチド領域に
隣接するＣ末端側に備えられていることが好ましい。こ
の態様によれば、活性領域が確実にプロテアーゼ作用な
どからブロックされる。また、抵抗性配列は、活性領域
に直接連結された状態で備えられていてもよいし、ま
た、適数個のアミノ酸を介して備えられていてもよい。
さらに、活性領域の重大な活性低下を引き起こさない程
度に当該領域のＣ末端側に一部含まれる形で備えられて
いてもよい。いずれの場合においても、活性化領域に必
要とされる１次構造や２次以上の高次構造性を低下させ
ないように抵抗性配列が備えられていることが好まし
い。例えば、抵抗性配列としてLys-Asp（K-D）、 Arg-A
sp (R-D)、Lys-Glu (K-E)、Arg-Glu (R-E)の他、Asp-Ly
s (D-K)、Asp-Arg (D-R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg
(E-R)の存在は、αヘリックス構造の維持に好ましい。
また、Lys-Asp- Leu-Val-Lys-Aspの存在も、αヘリック
ス構造の維持に好ましい。以上のことから、抵抗性配列
は、以下の構成を備えることができる。すなわち、抵抗
性配列は、Lys-Asp（K-D）、 Arg-Asp (R-D)、Lys-Glu
(K-E)、Arg-Glu (R-E)、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-
R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg (E-R)からなる群から
選択される１あるいは２種類以上の配列を有することが
できる。当該群は、好ましくは、Lys-Asp（K-D）、 Arg
-Asp (R-D)、Lys-Glu (K-E)、Arg-Glu (R-E)及びAsp-Ly
s (D-K)から構成される。また、好ましくは、この抵抗
性配列は、上記群から選択される１種類の配列を有し、
さらに好ましくは、上記群から選択される１種類の配列
のみを有している。
【００２５】抵抗性配列は、ポリペプチドのＣ末端に露
出されて備えられていると、抵抗性配列を有するポリペ
プチド自体がプロテアーゼに対する抵抗性を保持するこ
とになる点において好ましい。しかし、かならずしも抵
抗性配列がＣ末端に露出されていることを要しない。抵
抗性配列よりもＣ末端側に、適数個のアミノ酸配列を有
していてもよい。例えば、かかる抵抗性配列をマスクす
るようなアミノ酸配列を含んでいてもよい。例えば、適
度な抵抗性あるいは感受性を有するようなアミノ酸を備
えるようにして、プロテアーゼの作用を遅延し、又は、
ポリペプチド中の活性化領域による活性発現を調節する
ようにすることもできる。かかる配列としては、例え
ば、ＦＬＲＮＬＶ、ＰＲＴＥＳ等を挙げることができる
（いずれもアミノ酸１文字コードで表記してある）。
出されて備えられていると、抵抗性配列を有するポリペ
プチド自体がプロテアーゼに対する抵抗性を保持するこ
とになる点において好ましい。しかし、かならずしも抵
抗性配列がＣ末端に露出されていることを要しない。抵
抗性配列よりもＣ末端側に、適数個のアミノ酸配列を有
していてもよい。例えば、かかる抵抗性配列をマスクす
るようなアミノ酸配列を含んでいてもよい。例えば、適
度な抵抗性あるいは感受性を有するようなアミノ酸を備
えるようにして、プロテアーゼの作用を遅延し、又は、
ポリペプチド中の活性化領域による活性発現を調節する
ようにすることもできる。かかる配列としては、例え
ば、ＦＬＲＮＬＶ、ＰＲＴＥＳ等を挙げることができる
（いずれもアミノ酸１文字コードで表記してある）。
【００２６】抵抗性配列は、プロテアーゼ、例えば、植
物細胞間液や植物細胞質液に存在するプロテアーゼに対
する抵抗性を有しており、ポリペプチドのＣ末端側から
の分解が当該配列部位において抑制される。したがっ
て、当該アミノ酸配列をＣ末端側に有するポリペプチド
は、プロテアーゼの存在下で当該配列を有しないポリペ
プチドよりも安定であり、この結果、抗菌活性を安定し
て、あるいは確実に発現することができる。なお、これ
らの抵抗性配列は、抗菌活性を低下させることがないか
あるいは抗菌活性の低下が抑制されている。推測であっ
て理論的に本発明を拘束するものではないが、当該抵抗
性配列自体が、α−ヘリックス構造の維持に寄与してい
ることが考えられる。なお、このような抵抗性配列をＣ
末端側に有するポリペプチドは、天然に存在する場合も
あるし、また、本ポリペプチドあるいはそのホモログの
Ｃ末端側に当該付加アミノ酸配列を備えるポリペプチド
を合成によりあるいは遺伝子工学的手法により人工的に
取得することもできる。このようなポリペプチドもま
た、本発明のポリペプチドに包含される。このような抵
抗性配列などのアミノ酸をＣ末端側に導入することは、
当業者であれば、容易に実施することができるものであ
る。
物細胞間液や植物細胞質液に存在するプロテアーゼに対
する抵抗性を有しており、ポリペプチドのＣ末端側から
の分解が当該配列部位において抑制される。したがっ
て、当該アミノ酸配列をＣ末端側に有するポリペプチド
は、プロテアーゼの存在下で当該配列を有しないポリペ
プチドよりも安定であり、この結果、抗菌活性を安定し
て、あるいは確実に発現することができる。なお、これ
らの抵抗性配列は、抗菌活性を低下させることがないか
あるいは抗菌活性の低下が抑制されている。推測であっ
て理論的に本発明を拘束するものではないが、当該抵抗
性配列自体が、α−ヘリックス構造の維持に寄与してい
ることが考えられる。なお、このような抵抗性配列をＣ
末端側に有するポリペプチドは、天然に存在する場合も
あるし、また、本ポリペプチドあるいはそのホモログの
Ｃ末端側に当該付加アミノ酸配列を備えるポリペプチド
を合成によりあるいは遺伝子工学的手法により人工的に
取得することもできる。このようなポリペプチドもま
た、本発明のポリペプチドに包含される。このような抵
抗性配列などのアミノ酸をＣ末端側に導入することは、
当業者であれば、容易に実施することができるものであ
る。
【００２７】例えば、配列番号：７に記載されるアミノ
酸配列は、配列番号：３に示されるアミノ酸配列のＣ末
端にLys-Asp(K-D)配列を有している。すなわち、配列番
号：７に示されるアミノ酸配列は、ウサギ由来のＣＡＰ
１８のＣ末端側配列（第１０６位のアミノ酸から第１２
９位までのアミノ酸からなるアミノ酸配列）であるＣＡ
Ｐ１８106−129のＣ末端に当該付加アミノ酸配列（K-
D）を備えている。また、配列番号：８〜１０に示され
るアミノ酸配列は、配列番号：３に示されるアミノ酸配
列のＣ末端に、Lys-Glu（K-E）配列、Arg-Asp（R-D）配
列、Arg-Glu（R-E）配列をそれぞれ有している。また、
例えば、配列番号：２２に記載されるアミノ酸配列は、
配列番号：３に示されるアミノ酸配列のＣ末端にAsp-Ly
s(D-K)配列を有している。サツマイモの黒斑病菌である
Ceratocyctis fimbriata、イネいもち病菌Pyrucularia
oryzae raceなどの糸状菌を含む真菌に高い抗菌活性
（典型的には、最少殺菌濃度が１０μｇ／ｍｌ以下）を
有する観点からは、配列番号：７〜１０及び２２に示さ
れるポリペプチドはいずれも好ましい態様である。大腸
菌 Echrichiacoliやダイズ斑点細菌病菌であるPseudomo
nas syringaeなど植物病害性のグラム陰性菌に対する抗
菌性（典型的には、最少殺菌濃度が１０μｇ／ｍｌ以
下、好ましくは３μｇ／ｍｌ以下）の観点からも、配列
番号：７〜１０及び２２に示されるポリペプチドはいず
れも好ましい態様である。
酸配列は、配列番号：３に示されるアミノ酸配列のＣ末
端にLys-Asp(K-D)配列を有している。すなわち、配列番
号：７に示されるアミノ酸配列は、ウサギ由来のＣＡＰ
１８のＣ末端側配列（第１０６位のアミノ酸から第１２
９位までのアミノ酸からなるアミノ酸配列）であるＣＡ
Ｐ１８106−129のＣ末端に当該付加アミノ酸配列（K-
D）を備えている。また、配列番号：８〜１０に示され
るアミノ酸配列は、配列番号：３に示されるアミノ酸配
列のＣ末端に、Lys-Glu（K-E）配列、Arg-Asp（R-D）配
列、Arg-Glu（R-E）配列をそれぞれ有している。また、
例えば、配列番号：２２に記載されるアミノ酸配列は、
配列番号：３に示されるアミノ酸配列のＣ末端にAsp-Ly
s(D-K)配列を有している。サツマイモの黒斑病菌である
Ceratocyctis fimbriata、イネいもち病菌Pyrucularia
oryzae raceなどの糸状菌を含む真菌に高い抗菌活性
（典型的には、最少殺菌濃度が１０μｇ／ｍｌ以下）を
有する観点からは、配列番号：７〜１０及び２２に示さ
れるポリペプチドはいずれも好ましい態様である。大腸
菌 Echrichiacoliやダイズ斑点細菌病菌であるPseudomo
nas syringaeなど植物病害性のグラム陰性菌に対する抗
菌性（典型的には、最少殺菌濃度が１０μｇ／ｍｌ以
下、好ましくは３μｇ／ｍｌ以下）の観点からも、配列
番号：７〜１０及び２２に示されるポリペプチドはいず
れも好ましい態様である。
【００２８】このように、第１〜第３のポリペプチドの
Ｃ末端あるいはＣ末端側に対して、さらに、上記抵抗性
配列を付加したものは、本発明の好ましい態様のホモロ
グを構成する。したがって、配列番号：２〜１０及び２
２のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドのＣ末
端側に抵抗性配列を付加したものも本発明の態様に含ま
れる。
Ｃ末端あるいはＣ末端側に対して、さらに、上記抵抗性
配列を付加したものは、本発明の好ましい態様のホモロ
グを構成する。したがって、配列番号：２〜１０及び２
２のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドのＣ末
端側に抵抗性配列を付加したものも本発明の態様に含ま
れる。
【００２９】なお、本発明によれば、生体内安定性に寄
与する上記抵抗性性配列を含むペプチドフラグメントも
提供される。好ましくは、上記した各種抵抗性配列のみ
からなるペプチドフラグメント（ジペプチド、トリペプ
チド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチ
ド）が提供される。このようなペプチドフラグメント
は、対象とするポリペプチドのＣ末端側に備えられるこ
とにより、生体内安定性、特にプロテアーゼ（典型的に
はエンドプロテアーゼ）に対する安定性が向上あるいは
付与される。また、対象とするポリペプチドのα−ヘリ
ックス構造を安定化しあるいは維持することができる。
与する上記抵抗性性配列を含むペプチドフラグメントも
提供される。好ましくは、上記した各種抵抗性配列のみ
からなるペプチドフラグメント（ジペプチド、トリペプ
チド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチ
ド）が提供される。このようなペプチドフラグメント
は、対象とするポリペプチドのＣ末端側に備えられるこ
とにより、生体内安定性、特にプロテアーゼ（典型的に
はエンドプロテアーゼ）に対する安定性が向上あるいは
付与される。また、対象とするポリペプチドのα−ヘリ
ックス構造を安定化しあるいは維持することができる。
【００３０】本発明のポリペプチドあるいはそのホモロ
グは、また、本発明のポリヌクレオチドの塩基配列に基
づいて、当業者に周知のハイブリダイゼーション技術あ
るいは遺伝子増幅技術などによっても得ることができ
る。すなわち、本発明のポリヌクレオチドあるいはその
ホモログによってコードされるポリペプチドは、本発明
のポリペプチドあるいはそのホモログを構成する。
グは、また、本発明のポリヌクレオチドの塩基配列に基
づいて、当業者に周知のハイブリダイゼーション技術あ
るいは遺伝子増幅技術などによっても得ることができ
る。すなわち、本発明のポリヌクレオチドあるいはその
ホモログによってコードされるポリペプチドは、本発明
のポリペプチドあるいはそのホモログを構成する。
【００３１】本発明のポリヌクレオチドは、抗菌性（抗
真菌性および／または抗細菌性（グラム陰性およびグラ
ム陽性）および／または抗植物病害菌性）を有する抗菌
性ポリペプチドをコードしている。本発明のポリヌクレ
オチドは、配列番号１１〜１９及び２３のいずれかに記
載の塩基配列を含むことができる。典型的には、これら
の塩基配列のみからなる。配列番号：１１に示す塩基配
列は、配列番号：２に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチドをコードし、配列番号：１２に示す塩基配列
は、配列番号：３に記載のアミノ酸配列からなるポリペ
プチドをコードし、配列番号：１３に示す塩基配列は、
配列番号：４に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチ
ドをコードしている。配列番号：１４に示す塩基配列
は、配列番号：５に記載のアミノ酸配列からなるポリペ
プチドをコードし、配列番号：１５に示す塩基配列は、
配列番号：６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチ
ドをコードし、配列番号：１６に示す塩基配列は、配列
番号：７に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドを
コードしている。配列番号：１７に示す塩基配列は、配
列番号：８に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド
をコードし、配列番号：１８に示す塩基配列は、配列番
号：９に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコ
ードし、配列番号：１９に示す塩基配列は、配列番号：
１０に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコー
ドしている。また、配列番号２３に示す塩基配列は、配
列番号２２のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコー
ドしている。アミノ酸をコードするコドンは、単一でな
く、縮重により複数のコドンが対応していることは周知
の事実である。したがって、配列番号：２〜１０及び２
２のいずれかに記載されるアミノ酸配列を有するポリペ
プチドをコードする塩基配列には、それぞれ、配列番
号：１１〜１９及び２３に示す塩基配列のみならず、異
なるコドンに基づくあらゆる塩基配列を包含することに
なる。例えば、配列番号：２０にＣａｐ１８の第１０６
位〜１３７位に対応するコドン用法を考慮した塩基配列
を示す。この塩基配列のｒは、ａあるいはｇとすること
ができ、ｙはｃあるいはｔとすることができ、ｍはａあ
るいはｃとすることができ、ｈはａあるいはｔあるいは
ｃとすることができ、ｎは、ａあるいはｔあるいはｃあ
るいはｇとすることができる。好ましいコドンは、発現
宿主の種類等に応じて選択することができる。なお、配
列番号：２０に示す塩基配列において示される置換可能
な塩基を塩基配列：１１〜１９及び２３のＣａｐ１８由
来の塩基配列部位に適用することができる。なお、本発
明におけるポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、ＲＮＡである
ことができ、１本鎖でも、その相補鎖を有する２本鎖で
あってもよい。また、天然のあるいは人工のヌクレオチ
ド誘導体で構成されていてもよい。さらに、ゲノム、ｃ
ＤＮＡの他、人工的に合成されたポリヌクレオチドも包
含している。
真菌性および／または抗細菌性（グラム陰性およびグラ
ム陽性）および／または抗植物病害菌性）を有する抗菌
性ポリペプチドをコードしている。本発明のポリヌクレ
オチドは、配列番号１１〜１９及び２３のいずれかに記
載の塩基配列を含むことができる。典型的には、これら
の塩基配列のみからなる。配列番号：１１に示す塩基配
列は、配列番号：２に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチドをコードし、配列番号：１２に示す塩基配列
は、配列番号：３に記載のアミノ酸配列からなるポリペ
プチドをコードし、配列番号：１３に示す塩基配列は、
配列番号：４に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチ
ドをコードしている。配列番号：１４に示す塩基配列
は、配列番号：５に記載のアミノ酸配列からなるポリペ
プチドをコードし、配列番号：１５に示す塩基配列は、
配列番号：６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチ
ドをコードし、配列番号：１６に示す塩基配列は、配列
番号：７に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドを
コードしている。配列番号：１７に示す塩基配列は、配
列番号：８に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド
をコードし、配列番号：１８に示す塩基配列は、配列番
号：９に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコ
ードし、配列番号：１９に示す塩基配列は、配列番号：
１０に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコー
ドしている。また、配列番号２３に示す塩基配列は、配
列番号２２のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコー
ドしている。アミノ酸をコードするコドンは、単一でな
く、縮重により複数のコドンが対応していることは周知
の事実である。したがって、配列番号：２〜１０及び２
２のいずれかに記載されるアミノ酸配列を有するポリペ
プチドをコードする塩基配列には、それぞれ、配列番
号：１１〜１９及び２３に示す塩基配列のみならず、異
なるコドンに基づくあらゆる塩基配列を包含することに
なる。例えば、配列番号：２０にＣａｐ１８の第１０６
位〜１３７位に対応するコドン用法を考慮した塩基配列
を示す。この塩基配列のｒは、ａあるいはｇとすること
ができ、ｙはｃあるいはｔとすることができ、ｍはａあ
るいはｃとすることができ、ｈはａあるいはｔあるいは
ｃとすることができ、ｎは、ａあるいはｔあるいはｃあ
るいはｇとすることができる。好ましいコドンは、発現
宿主の種類等に応じて選択することができる。なお、配
列番号：２０に示す塩基配列において示される置換可能
な塩基を塩基配列：１１〜１９及び２３のＣａｐ１８由
来の塩基配列部位に適用することができる。なお、本発
明におけるポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、ＲＮＡである
ことができ、１本鎖でも、その相補鎖を有する２本鎖で
あってもよい。また、天然のあるいは人工のヌクレオチ
ド誘導体で構成されていてもよい。さらに、ゲノム、ｃ
ＤＮＡの他、人工的に合成されたポリヌクレオチドも包
含している。
【００３２】本発明のポリヌクレオチドには、上記特定
配列のポリヌクレオチドのホモログも包含している。当
該ホモログとしては、配列番号：２〜１０及び２２のい
ずれかに記載されるアミノ酸配列において、１個もしく
は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／または
付加されたアミノ酸配列を含み、かつ、抗真菌性および
／または抗細菌性および/または抗植物病害菌性を有す
るポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んで
いる。このようなホモログは、本発明のポリペプチドホ
モログのアミノ酸配列に対応する塩基配列を有するポリ
ヌクレオチドを合成によりあるいは遺伝子工学的手法に
より得ることができる。また、このようなポリヌクレオ
チドホモログは、当業者においては、配列番号：１１〜
１９及び２３のいずれかに示すＤＮＡに、部位特異的変
異導入法などを用いて、適宜、置換、欠失、挿入および
／または付加変異を導入することにより得ることができ
る。このような変異は、自然界における突然変異によっ
て生じることもある。
配列のポリヌクレオチドのホモログも包含している。当
該ホモログとしては、配列番号：２〜１０及び２２のい
ずれかに記載されるアミノ酸配列において、１個もしく
は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／または
付加されたアミノ酸配列を含み、かつ、抗真菌性および
／または抗細菌性および/または抗植物病害菌性を有す
るポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んで
いる。このようなホモログは、本発明のポリペプチドホ
モログのアミノ酸配列に対応する塩基配列を有するポリ
ヌクレオチドを合成によりあるいは遺伝子工学的手法に
より得ることができる。また、このようなポリヌクレオ
チドホモログは、当業者においては、配列番号：１１〜
１９及び２３のいずれかに示すＤＮＡに、部位特異的変
異導入法などを用いて、適宜、置換、欠失、挿入および
／または付加変異を導入することにより得ることができ
る。このような変異は、自然界における突然変異によっ
て生じることもある。
【００３３】さらに、本発明のポリヌクレオチドのホモ
ログは、配列番号：１１〜１９及び２３に示される塩基
配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブ
リダイズでき、かつ、上記抗菌活性を有するポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチドである。ストリンジェ
ントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドと
は、配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに示され
る塩基配列の任意の少なくとも１７個、好ましくは２０
個、より好ましくは少なくとも３０個の連続した配列を
一つあるいは複数個選択したＤＮＡをプローブＤＮＡと
して、当業者の周知のハイブリダイセーション技術（Cu
rrent Protocols I Molecular Biology edit. Ausubel
et al., (1987) Publish . John Wily & Sons Sectoin
6.3-6.4）などを用いて、ハイブリダイズするポリヌク
レオチドである。ハイブリダイズは、より詳しくは、１
本鎖のポリヌクレオチドが、配列番号：１１〜１９及び
２３のいずれかに記載の塩基配列のＤＮＡ鎖あるいはこ
れに相補的なＤＮＡ鎖にハイブリダイズすることを意味
する。ハイブリダイゼーションにおけるストリンジェン
トな条件としては、通常、４２℃であり、より厳しい条
件としては、６５℃であり、さらに厳しい条件として
は、７０℃である。
ログは、配列番号：１１〜１９及び２３に示される塩基
配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブ
リダイズでき、かつ、上記抗菌活性を有するポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチドである。ストリンジェ
ントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドと
は、配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに示され
る塩基配列の任意の少なくとも１７個、好ましくは２０
個、より好ましくは少なくとも３０個の連続した配列を
一つあるいは複数個選択したＤＮＡをプローブＤＮＡと
して、当業者の周知のハイブリダイセーション技術（Cu
rrent Protocols I Molecular Biology edit. Ausubel
et al., (1987) Publish . John Wily & Sons Sectoin
6.3-6.4）などを用いて、ハイブリダイズするポリヌク
レオチドである。ハイブリダイズは、より詳しくは、１
本鎖のポリヌクレオチドが、配列番号：１１〜１９及び
２３のいずれかに記載の塩基配列のＤＮＡ鎖あるいはこ
れに相補的なＤＮＡ鎖にハイブリダイズすることを意味
する。ハイブリダイゼーションにおけるストリンジェン
トな条件としては、通常、４２℃であり、より厳しい条
件としては、６５℃であり、さらに厳しい条件として
は、７０℃である。
【００３４】配列番号：１１〜１９及び２３に記載の塩
基配列は、ウサギのＣＡＰ１８由来であるが、これらの
塩基配列等に基づいて、他の脊椎動物からハイブリダイ
ゼーションによりホモログを取得することができる。す
なわち、他の脊椎動物由来α−へリックス構造を有する
カチオン性のポリペプチド、典型的には顆粒球由来のポ
リペプチド（具体的にはＣＡＰ１８）であって、配列番
号：１１〜１９及び２３のいずれかに示されるＤＮＡ鎖
あるいはこれに相補的なＤＮＡ鎖にハイブリダイズし、
抗真菌性および／または抗細菌性を有するポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドは本発明のポリヌクレオ
チドのホモログである。
基配列は、ウサギのＣＡＰ１８由来であるが、これらの
塩基配列等に基づいて、他の脊椎動物からハイブリダイ
ゼーションによりホモログを取得することができる。す
なわち、他の脊椎動物由来α−へリックス構造を有する
カチオン性のポリペプチド、典型的には顆粒球由来のポ
リペプチド（具体的にはＣＡＰ１８）であって、配列番
号：１１〜１９及び２３のいずれかに示されるＤＮＡ鎖
あるいはこれに相補的なＤＮＡ鎖にハイブリダイズし、
抗真菌性および／または抗細菌性を有するポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドは本発明のポリヌクレオ
チドのホモログである。
【００３５】また、本発明のポリヌクレオチドのホモロ
グは、配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
のポリヌクレオチドの一部に基づいて設計したプライマ
ーを設計し、このプライマーを利用した遺伝子増幅技術
（ＰＣＲ）（Current Protocols I Molecular Biology
edit. Ausubel et al., (1987) Publish . John Wily&
Sons Sectoin 6.1-6.4）により、もとの配列と相同性の
高いホモログを得ることもできる。与えられた塩基配列
に基づいて、その配列やそのホモログを増幅できるディ
ジェネレイティブプライマーを設計することは、当業者
が日常的に行っていることである。
グは、配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
のポリヌクレオチドの一部に基づいて設計したプライマ
ーを設計し、このプライマーを利用した遺伝子増幅技術
（ＰＣＲ）（Current Protocols I Molecular Biology
edit. Ausubel et al., (1987) Publish . John Wily&
Sons Sectoin 6.1-6.4）により、もとの配列と相同性の
高いホモログを得ることもできる。与えられた塩基配列
に基づいて、その配列やそのホモログを増幅できるディ
ジェネレイティブプライマーを設計することは、当業者
が日常的に行っていることである。
【００３６】さらに、本発明のポリヌクレオチドのホモ
ログは、配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに示さ
れるアミノ酸配列と少なくとも７０％、好ましくは少な
くとも８０％または９０％、より好ましくは９５％以上
のホモロジーを有するポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドを包含している。ポリペプチドのホモロジー
検索は、ＢＬＡＳＴ検索アルゴリズムなどを用いて行う
ことができる。
ログは、配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに示さ
れるアミノ酸配列と少なくとも７０％、好ましくは少な
くとも８０％または９０％、より好ましくは９５％以上
のホモロジーを有するポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドを包含している。ポリペプチドのホモロジー
検索は、ＢＬＡＳＴ検索アルゴリズムなどを用いて行う
ことができる。
【００３７】以上のようにして単離したポリヌクレオチ
ドを公知の発現ベクターに挿入することにより、本発明
の抗菌性ポリペプチドをコードするDNA配列を保持する
ＤＮＡ構築物（典型的には、ベクターである）が提供さ
れる。ベクターには、ポリペプチドに対応するＤＮＡ配
列に加えて、ホスト細胞の種類に応じた分泌シグナル遺
伝子を備えていてもよい。分泌シグナル遺伝子を備えて
いることにより、細胞外や細胞間隙へ移送されやすく、
細胞表面上にタンパク質を局在化、あるいは細胞外へタ
ンパク質を分泌させることが容易となる。
ドを公知の発現ベクターに挿入することにより、本発明
の抗菌性ポリペプチドをコードするDNA配列を保持する
ＤＮＡ構築物（典型的には、ベクターである）が提供さ
れる。ベクターには、ポリペプチドに対応するＤＮＡ配
列に加えて、ホスト細胞の種類に応じた分泌シグナル遺
伝子を備えていてもよい。分泌シグナル遺伝子を備えて
いることにより、細胞外や細胞間隙へ移送されやすく、
細胞表面上にタンパク質を局在化、あるいは細胞外へタ
ンパク質を分泌させることが容易となる。
【００３８】ベクターには、ポリペプチドをコードする
ＤＮＡを発現させるためのＤＮＡ配列を同時に備えるこ
ともできる。具体的には、ポリペプチドをコードする配
列の上流に配置されるプロモーター配列、コード配列の
下流に配置されるターミネション配列、ポリアデニレー
ションシグナルである。プロモーター配列としては、特
に限定しないで、ホスト細胞で当該コード配列を発現可
能なものを使用すればよいが、必要に応じて各種プロモ
ーター配列を使用しうる。さらに、エンハンサーも含め
ることもできる。さらに、当該ＤＮＡ配列を保有する細
胞を選択するためのマーカー遺伝子も同時に導入される
ことが好ましい。選択マーカー遺伝子配列はベクターに
備えられていてもよいし、同時トランスフェクションに
よって導入してもよい。
ＤＮＡを発現させるためのＤＮＡ配列を同時に備えるこ
ともできる。具体的には、ポリペプチドをコードする配
列の上流に配置されるプロモーター配列、コード配列の
下流に配置されるターミネション配列、ポリアデニレー
ションシグナルである。プロモーター配列としては、特
に限定しないで、ホスト細胞で当該コード配列を発現可
能なものを使用すればよいが、必要に応じて各種プロモ
ーター配列を使用しうる。さらに、エンハンサーも含め
ることもできる。さらに、当該ＤＮＡ配列を保有する細
胞を選択するためのマーカー遺伝子も同時に導入される
ことが好ましい。選択マーカー遺伝子配列はベクターに
備えられていてもよいし、同時トランスフェクションに
よって導入してもよい。
【００３９】ベクターは、ホスト細胞や遺伝子導入法の
種類に応じて適切なものが選択される。一般的には、各
種プラスミドベクター、ウイルス性ベクター、ＹＡＣ、
ＢＡＣ、ＰＡＣ、ＭＡＣ等を使用できる。好ましい原核
細胞性ベクター、真核細胞性ベクター、動物細胞性ベク
ター、植物細胞性ベクターは当該分野において周知であ
る。
種類に応じて適切なものが選択される。一般的には、各
種プラスミドベクター、ウイルス性ベクター、ＹＡＣ、
ＢＡＣ、ＰＡＣ、ＭＡＣ等を使用できる。好ましい原核
細胞性ベクター、真核細胞性ベクター、動物細胞性ベク
ター、植物細胞性ベクターは当該分野において周知であ
る。
【００４０】一旦、ポリヌクレオチドあるいはそれを含
むベクターが構築されたら、適当なホスト細胞に、トラ
ンスフォーメーションや、トランスフェクション、接
合、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、パ
ーティクルガン、リン酸カルシウム沈殿法、アグロバク
テリウム法、直接マイクロインジェクション法等の各種
の適切な手段のいずれかにより、これを導入することが
できる。ポリヌクレオチドあるいはベクター等の導入
後、その受容細胞は、選択培地で培養される。なお、本
明細書における形質転換細胞を得るためのホスト細胞と
しては、特に限定しないで全ての種類、形態の細胞を包
含し、細菌等の各種原核細胞、及び真菌、酵母、動植物
細胞等の真核細胞の他、動植物個体、その動植物個体を
構成しうる真核細胞、およびその一部である組織や器官
を含む。また、ウイルス粒子も包含する。また植物個体
の一部であるその繁殖媒体（種子、根茎、果実、切穂
等）も包含する。
むベクターが構築されたら、適当なホスト細胞に、トラ
ンスフォーメーションや、トランスフェクション、接
合、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、パ
ーティクルガン、リン酸カルシウム沈殿法、アグロバク
テリウム法、直接マイクロインジェクション法等の各種
の適切な手段のいずれかにより、これを導入することが
できる。ポリヌクレオチドあるいはベクター等の導入
後、その受容細胞は、選択培地で培養される。なお、本
明細書における形質転換細胞を得るためのホスト細胞と
しては、特に限定しないで全ての種類、形態の細胞を包
含し、細菌等の各種原核細胞、及び真菌、酵母、動植物
細胞等の真核細胞の他、動植物個体、その動植物個体を
構成しうる真核細胞、およびその一部である組織や器官
を含む。また、ウイルス粒子も包含する。また植物個体
の一部であるその繁殖媒体（種子、根茎、果実、切穂
等）も包含する。
【００４１】ポリペプチドをコードするＤＮＡなどのポ
リヌクレオチドが導入された細胞を適当な方法で選択す
ることにより、ポリペプチドを産生する形質転換細胞を
得ることができる。形質転換細胞における導入遺伝子
は、染色体内あるいは染色体外で保持されていてもよ
く、また、形質の発現は、一時的であっても安定的であ
ってもよい。形質転換細胞を、適切な培養条件下で培養
し、増殖させることにより、形質転換細胞は、細胞内、
細胞表面、あるいは細胞外にポリペプチドを産出する。
適当な方法でこのポリペプチドを回収、精製することが
できる。
リヌクレオチドが導入された細胞を適当な方法で選択す
ることにより、ポリペプチドを産生する形質転換細胞を
得ることができる。形質転換細胞における導入遺伝子
は、染色体内あるいは染色体外で保持されていてもよ
く、また、形質の発現は、一時的であっても安定的であ
ってもよい。形質転換細胞を、適切な培養条件下で培養
し、増殖させることにより、形質転換細胞は、細胞内、
細胞表面、あるいは細胞外にポリペプチドを産出する。
適当な方法でこのポリペプチドを回収、精製することが
できる。
【００４２】なお，取得したポリペプチドは、２次的な
加工を施して、より有効性を高めることもできる。例え
ば、形質転換細胞から取得後に、活性のある２次構造や
３次構造をとれるように、改変を施すこともできる。ま
た、電荷の制御も可能である。また、他のペプチドを結
合することもできる。
加工を施して、より有効性を高めることもできる。例え
ば、形質転換細胞から取得後に、活性のある２次構造や
３次構造をとれるように、改変を施すこともできる。ま
た、電荷の制御も可能である。また、他のペプチドを結
合することもできる。
【００４３】本発明のポリペプチドあるいはそのホモロ
グは、抗真菌活性および／または抗細菌活性および／ま
たは抗植物病害菌性を備えている。したがって、各種態
様、すなわち、抗真菌剤、抗細菌剤、および抗植物病害
菌剤のうち１種としてあるいは同時に２種類以上の薬剤
の有効成分として使用することができる。抗真菌剤およ
び／または抗細菌剤としては、ヒトを含む脊椎動物を対
象とすることができる。また、植物病害性真菌や細菌を
対象とする植物防除剤として使用することができる。さ
らに、本発明のポリペプチドあるいはそのホモログは、
脊椎動物の抗菌ペプチドとしての活性部位の一部である
ことから、他の昆虫に由来してあるいは微生物に由来し
て生体内に侵入する化合物に対して抵抗性を発現するこ
とが期待されるため、幅広い適用対象を有するというメ
リットがある。さらに、脊椎動物由来の抗菌ペプチドの
一部あるいはそのホモログであることから、脊椎動物に
対する安全性が高い。なお、ヒトを含むほ乳動物などに
対する真菌あるいは細菌に対する予防あるいは治療用の
薬剤の有効成分として本ポリペプチドあるいはそのホモ
ログを薬学上有効量含有する製剤においては、各種公知
の経口あるいは非経口の製剤形態を採用することができ
る。その場合には、採用した製剤形態に応じた、薬学的
に許容される担体を含めることができる。また、本ポリ
ペプチドそのホモログを植物病害生物防除剤の有効成分
として使用する場合、従来公知の各種の製剤形態を採用
することができる。製剤形態に応じて、当業者は、適当
な担体とともに本ポリペプチドあるいはそのホモログを
含有する製剤組成物を調製することができる。
グは、抗真菌活性および／または抗細菌活性および／ま
たは抗植物病害菌性を備えている。したがって、各種態
様、すなわち、抗真菌剤、抗細菌剤、および抗植物病害
菌剤のうち１種としてあるいは同時に２種類以上の薬剤
の有効成分として使用することができる。抗真菌剤およ
び／または抗細菌剤としては、ヒトを含む脊椎動物を対
象とすることができる。また、植物病害性真菌や細菌を
対象とする植物防除剤として使用することができる。さ
らに、本発明のポリペプチドあるいはそのホモログは、
脊椎動物の抗菌ペプチドとしての活性部位の一部である
ことから、他の昆虫に由来してあるいは微生物に由来し
て生体内に侵入する化合物に対して抵抗性を発現するこ
とが期待されるため、幅広い適用対象を有するというメ
リットがある。さらに、脊椎動物由来の抗菌ペプチドの
一部あるいはそのホモログであることから、脊椎動物に
対する安全性が高い。なお、ヒトを含むほ乳動物などに
対する真菌あるいは細菌に対する予防あるいは治療用の
薬剤の有効成分として本ポリペプチドあるいはそのホモ
ログを薬学上有効量含有する製剤においては、各種公知
の経口あるいは非経口の製剤形態を採用することができ
る。その場合には、採用した製剤形態に応じた、薬学的
に許容される担体を含めることができる。また、本ポリ
ペプチドそのホモログを植物病害生物防除剤の有効成分
として使用する場合、従来公知の各種の製剤形態を採用
することができる。製剤形態に応じて、当業者は、適当
な担体とともに本ポリペプチドあるいはそのホモログを
含有する製剤組成物を調製することができる。
【００４４】なお、本発明のポリペプチドあるいはその
ホモログの有効成分として含有形態は、特に限定しない
が、本ポリペプチドあるいはそのホモログを発現可能に
操作された形質転換細胞（好ましくは、植物細胞、組
織、期間、個体あるいは繁殖媒体）そのものとすること
もできる。なお、ヒトを含むほ乳動物に対する抗真菌剤
として使用する場合、その製剤形態、投与形態、投与量
などに応じて、適切な薬剤組成物中における有効な含有
量を設定することができる。
ホモログの有効成分として含有形態は、特に限定しない
が、本ポリペプチドあるいはそのホモログを発現可能に
操作された形質転換細胞（好ましくは、植物細胞、組
織、期間、個体あるいは繁殖媒体）そのものとすること
もできる。なお、ヒトを含むほ乳動物に対する抗真菌剤
として使用する場合、その製剤形態、投与形態、投与量
などに応じて、適切な薬剤組成物中における有効な含有
量を設定することができる。
【００４５】さらに本発明のポリペプチドあるいはその
ホモログを発現するように形質転換された植物細胞、組
織、器官、個体、繁殖媒体も有用である。本発明のポリ
ペプチドは、植物組織内で病原生物あるいは当該生物由
来の成分に抗して作用を発現させることが期待される。
特に、植物細胞内、細胞間液、あるいは病原体由来のプ
ロテアーゼで分解されやすいことが重大な問題となって
いるが、前記付加アミノ酸配列を備えるポリペプチドで
あれば、プロテアーゼに対して抵抗性を有するため、病
原体感染初期において十分に抗菌性を発揮して、その後
の連鎖的障害を効果的に防止できる。
ホモログを発現するように形質転換された植物細胞、組
織、器官、個体、繁殖媒体も有用である。本発明のポリ
ペプチドは、植物組織内で病原生物あるいは当該生物由
来の成分に抗して作用を発現させることが期待される。
特に、植物細胞内、細胞間液、あるいは病原体由来のプ
ロテアーゼで分解されやすいことが重大な問題となって
いるが、前記付加アミノ酸配列を備えるポリペプチドで
あれば、プロテアーゼに対して抵抗性を有するため、病
原体感染初期において十分に抗菌性を発揮して、その後
の連鎖的障害を効果的に防止できる。
【００４６】植物の形質転換細胞を得るために、本ポリ
ペプチド等をコードする配列を含むポリヌクレオチドあ
るいはベクターが導入される細胞としては、植物体に再
生可能なあるいはそうでない、あらゆる種類の形態の植
物細胞が含まれる。植物体に再生可能な細胞としては、
例えば、培養細胞、プロトプラスト、苗条原基、多芽
体、毛状根、カルス等であるが、これらに限定されな
い。また、形質転換される植物種としては、特に、限定
しないが、栽培作物であることが好ましく、農作物であ
ることがより好ましい。例えば、イネ、オオムギ、コム
ギ、ライムギ、トウモロコシ、サトウキビなどの穀類、
ジャガイモ、サツマイモなどの根茎又は塊根を形成する
作物、ダイズ、インゲンマメ、ソラマメ、エンドウなど
のマメ科植物、ピーナッツ、ごま、ナタネ、綿実、ヒマ
ワリ、サフラワーなどの種子作物、リンゴ、メロン、ブ
ドウなどの果実を有する作物、トマト、ナスなどの作物
であることが好ましい。花卉などの園芸植物にも適用す
ることができる。
ペプチド等をコードする配列を含むポリヌクレオチドあ
るいはベクターが導入される細胞としては、植物体に再
生可能なあるいはそうでない、あらゆる種類の形態の植
物細胞が含まれる。植物体に再生可能な細胞としては、
例えば、培養細胞、プロトプラスト、苗条原基、多芽
体、毛状根、カルス等であるが、これらに限定されな
い。また、形質転換される植物種としては、特に、限定
しないが、栽培作物であることが好ましく、農作物であ
ることがより好ましい。例えば、イネ、オオムギ、コム
ギ、ライムギ、トウモロコシ、サトウキビなどの穀類、
ジャガイモ、サツマイモなどの根茎又は塊根を形成する
作物、ダイズ、インゲンマメ、ソラマメ、エンドウなど
のマメ科植物、ピーナッツ、ごま、ナタネ、綿実、ヒマ
ワリ、サフラワーなどの種子作物、リンゴ、メロン、ブ
ドウなどの果実を有する作物、トマト、ナスなどの作物
であることが好ましい。花卉などの園芸植物にも適用す
ることができる。
【００４７】そして、かかる植物形質転換細胞に対して
再生過程を実施することにより、植物体に変換すること
ができる。再生の方法は、植物の種類によって異なる
が、各種公知の方法を使用できる。
再生過程を実施することにより、植物体に変換すること
ができる。再生の方法は、植物の種類によって異なる
が、各種公知の方法を使用できる。
【００４８】さらに、このような形質転換植物が、食用
される農作物である場合には、それ自体、ヒトを含む脊
椎動物に投与可能な食品あるいは栄養食品を構成する。
また、本発明の形質転換植物を栽培する方法によれば、
当該植物体や収穫物を目的として栽培する他、形質転換
植物の栽培により本ポリペプチド等を生産することがで
きる。本発明の形質転換植物の栽培過程においては、そ
の形質転換植物の栽培と同時に抗真菌性、抗植物病害性
などを植物体に付与することができる。また、栽培工程
後に、植物体の全体あるいはその一部を収穫した後にお
いても、当該収穫物において、細胞あるいは組織に本ポ
リペプチドが存在する限りは、抗菌性等を付与すること
ができる。すなわち、本発明の形質転換植物の栽培方法
は、植物体自体及び本ポリペプチド等の生産に伴なっ
て、栽培過程及び収穫物において、有効に抗菌性を発揮
させることができる。したがって、植物体及び本ポリペ
プチド等について高い収率が期待できる。また、収穫物
を貯蔵・運搬するにあたっても、病害を抑制して、安定
した貯蔵や流通を確保することができる。また、栽培工
程においても収穫後においても、農薬などの薬剤の使用
量を回避あるいは抑制することができる。
される農作物である場合には、それ自体、ヒトを含む脊
椎動物に投与可能な食品あるいは栄養食品を構成する。
また、本発明の形質転換植物を栽培する方法によれば、
当該植物体や収穫物を目的として栽培する他、形質転換
植物の栽培により本ポリペプチド等を生産することがで
きる。本発明の形質転換植物の栽培過程においては、そ
の形質転換植物の栽培と同時に抗真菌性、抗植物病害性
などを植物体に付与することができる。また、栽培工程
後に、植物体の全体あるいはその一部を収穫した後にお
いても、当該収穫物において、細胞あるいは組織に本ポ
リペプチドが存在する限りは、抗菌性等を付与すること
ができる。すなわち、本発明の形質転換植物の栽培方法
は、植物体自体及び本ポリペプチド等の生産に伴なっ
て、栽培過程及び収穫物において、有効に抗菌性を発揮
させることができる。したがって、植物体及び本ポリペ
プチド等について高い収率が期待できる。また、収穫物
を貯蔵・運搬するにあたっても、病害を抑制して、安定
した貯蔵や流通を確保することができる。また、栽培工
程においても収穫後においても、農薬などの薬剤の使用
量を回避あるいは抑制することができる。
【００４９】本発明によれば、本発明のポリペプチドお
よびそのホモログを、植物病害生物の存在する環境中へ
導入する、植物病害生物の防除方法も提供される。植物
病害生物の存在する環境とは、植物病害生物によって植
物に病害が生じる可能性あるあるいは病害が生じている
環境を意味している。したがって、本発明の防除方法
は、予防的にもあるいは駆除的にも実施される。具体的
には、当該環境は、イネやサツマイモなどの上記した栽
培作物の栽培区域、園芸植物の栽培区域、家庭菜園、山
林等に導入することができる。
よびそのホモログを、植物病害生物の存在する環境中へ
導入する、植物病害生物の防除方法も提供される。植物
病害生物の存在する環境とは、植物病害生物によって植
物に病害が生じる可能性あるあるいは病害が生じている
環境を意味している。したがって、本発明の防除方法
は、予防的にもあるいは駆除的にも実施される。具体的
には、当該環境は、イネやサツマイモなどの上記した栽
培作物の栽培区域、園芸植物の栽培区域、家庭菜園、山
林等に導入することができる。
【００５０】本発明のポリペプチドおよびそのホモログ
を環境中へ導入するとは、本ポリペプチドあるいはその
ホモログを、そのまま栽培区域の土壌や植物等に散布、
噴霧、塗布等により投与する方法の他、形質転換細胞を
散布しあるいは増殖させることにより投与する方法、さ
らには、栽培対象である植物を本ポリペプチドあるいは
そのホモログを発現するように形質転換し、栽培するこ
とにより投与する方法などを挙げることができる。ま
た、収穫した作物に対してポストハーベスト的に投与す
ることもできる。したがって、本発明によれば、本発明
のポリペプチドを栽培植物の栽培環境にこれらの各種形
態により導入して、栽培植物を生産する方法も提供され
る。
を環境中へ導入するとは、本ポリペプチドあるいはその
ホモログを、そのまま栽培区域の土壌や植物等に散布、
噴霧、塗布等により投与する方法の他、形質転換細胞を
散布しあるいは増殖させることにより投与する方法、さ
らには、栽培対象である植物を本ポリペプチドあるいは
そのホモログを発現するように形質転換し、栽培するこ
とにより投与する方法などを挙げることができる。ま
た、収穫した作物に対してポストハーベスト的に投与す
ることもできる。したがって、本発明によれば、本発明
のポリペプチドを栽培植物の栽培環境にこれらの各種形
態により導入して、栽培植物を生産する方法も提供され
る。
【００５１】このように、形質転換植物を栽培すること
は、植物病害生物の防除方法の一形態であると同時に、
病害抵抗性のある植物の栽培方法の一形態でもあり、本
ポリペプチド及びそのホモログの製造方法の一形態とし
ても有用である。
は、植物病害生物の防除方法の一形態であると同時に、
病害抵抗性のある植物の栽培方法の一形態でもあり、本
ポリペプチド及びそのホモログの製造方法の一形態とし
ても有用である。
【００５２】
【実施例】以下、本発明の実施例について説明するが、
本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。 （実施例１：ポリペプチドの合成およびポリペプチド溶
液の調製）表１に示す各ポリペプチドにつき、島津総合
化学研究所に合成を依頼した。得られたペプチドは、９
０％以上の純度を有していた。これらの各ポリペプチド
を水に溶解してそれぞれについて各種濃度のポリペプチ
ド溶液を調製した。以下、この溶液を単にＰＰ溶液と略
す。これらのポリペプチドは、いずれもウサギ由来のＣ
ＡＰ１８のＣ末端側フラグメントからなるポリペプチド
（試料１〜５、それぞれ配列番号：２〜６に示すアミノ
酸配列からなる）か、あるいは当該フラグメントを含む
ポリペプチド（試料６〜９、それぞれ配列番号：７〜１
０に示すアミノ酸配列からなる）であった。
本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。 （実施例１：ポリペプチドの合成およびポリペプチド溶
液の調製）表１に示す各ポリペプチドにつき、島津総合
化学研究所に合成を依頼した。得られたペプチドは、９
０％以上の純度を有していた。これらの各ポリペプチド
を水に溶解してそれぞれについて各種濃度のポリペプチ
ド溶液を調製した。以下、この溶液を単にＰＰ溶液と略
す。これらのポリペプチドは、いずれもウサギ由来のＣ
ＡＰ１８のＣ末端側フラグメントからなるポリペプチド
（試料１〜５、それぞれ配列番号：２〜６に示すアミノ
酸配列からなる）か、あるいは当該フラグメントを含む
ポリペプチド（試料６〜９、それぞれ配列番号：７〜１
０に示すアミノ酸配列からなる）であった。
【表１】
【００５３】（実施例２：サツマイモ黒斑病菌に対する
最少殺菌濃度）９６穴マイクロプレートの各ウエルに、
実施例１で調製した各種ＰＰ溶液３０μｌ、ｐＨ６．０
の２００ｍＭ ＭＥＳ緩衝液（２−（Ｎ−ｍｏｒｐｈｏ
ｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）
１０μｌ、サツマイモ黒斑病菌（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔ
ｉｓ ｆｉｍｂｒｉａｔａ ＩＦＯ ３０５０１）の分生
胞子懸濁液（１×１０5ｓｐｏｒｅｓ／ｍｌ ｉｎ８０％
ＰｏｔａｔｏＤｅｘｔｒｏｓｅ Ｂｒｏｔｈ）６０μｌ
を加え、２６℃で培養した。マイクロプレートリーダー
（Ｂｉｏ−Ｒａｄ製）を用いて、３０分後および４８時
間後のＯＤ415を測定し、以下の式（１）より、発育阻
害率を求め、最少殺菌濃度を算出した。結果を表２に示
す。 発育阻害率（％）＝（ΔＣ−ΔＴ）／ΔＣ×１００……（１） ただし、 △Ｃ：試料無添加時の吸光度（４８時間後）−試料無添
加時の吸光度（３０分後） △Ｔ：試料添加時の吸光度（４８時間後）−試料添加時
の吸光度（３０分後）
最少殺菌濃度）９６穴マイクロプレートの各ウエルに、
実施例１で調製した各種ＰＰ溶液３０μｌ、ｐＨ６．０
の２００ｍＭ ＭＥＳ緩衝液（２−（Ｎ−ｍｏｒｐｈｏ
ｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）
１０μｌ、サツマイモ黒斑病菌（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔ
ｉｓ ｆｉｍｂｒｉａｔａ ＩＦＯ ３０５０１）の分生
胞子懸濁液（１×１０5ｓｐｏｒｅｓ／ｍｌ ｉｎ８０％
ＰｏｔａｔｏＤｅｘｔｒｏｓｅ Ｂｒｏｔｈ）６０μｌ
を加え、２６℃で培養した。マイクロプレートリーダー
（Ｂｉｏ−Ｒａｄ製）を用いて、３０分後および４８時
間後のＯＤ415を測定し、以下の式（１）より、発育阻
害率を求め、最少殺菌濃度を算出した。結果を表２に示
す。 発育阻害率（％）＝（ΔＣ−ΔＴ）／ΔＣ×１００……（１） ただし、 △Ｃ：試料無添加時の吸光度（４８時間後）−試料無添
加時の吸光度（３０分後） △Ｔ：試料添加時の吸光度（４８時間後）−試料添加時
の吸光度（３０分後）
【００５４】（実施例３：イネいもち病菌に対する最少
殺菌濃度）９６穴マイクロブレートの各ウエルに、ＰＰ
溶液，３０μｌ、ｐＨ６．０の２００ｍＭ りん酸 Ｎａ
緩衝液（ｐＨ７．０）１０μｌ、イネいもち病菌（Ｐ
ｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｏｒｙｚａｅ ｒａｃｅ ００
７．０）の分生胞子懸濁液（１×１０4ｓｐｏｒｅｓ／
ｍｌ ｉｎ ８０％ Ｐａｔａｔｏ Ｄｅｘｔｒｏｓｅ Ｂ
ｒｏｔｈ）６０μｌを加え、２８℃で培養した。マイク
ロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ製）を用いて、３
０分後および４８時間後のＯＤ415を測定し、上記の式
（１）より、発育阻害率を求め、最少殺菌濃度を算出し
た。表２に結果を示す。
殺菌濃度）９６穴マイクロブレートの各ウエルに、ＰＰ
溶液，３０μｌ、ｐＨ６．０の２００ｍＭ りん酸 Ｎａ
緩衝液（ｐＨ７．０）１０μｌ、イネいもち病菌（Ｐ
ｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｏｒｙｚａｅ ｒａｃｅ ００
７．０）の分生胞子懸濁液（１×１０4ｓｐｏｒｅｓ／
ｍｌ ｉｎ ８０％ Ｐａｔａｔｏ Ｄｅｘｔｒｏｓｅ Ｂ
ｒｏｔｈ）６０μｌを加え、２８℃で培養した。マイク
ロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ製）を用いて、３
０分後および４８時間後のＯＤ415を測定し、上記の式
（１）より、発育阻害率を求め、最少殺菌濃度を算出し
た。表２に結果を示す。
【００５５】（実施例４：大腸菌に対する最少殺菌濃
度）ＯＤ660の値が０．３になるまで培養した大腸菌
（ＩＦ０３３０）を、ＯＤ660の値が０．０１（１０6ｃ
ｆｕ／ｍｌ）になるようにブイヨン培地（ニッスイ製）
で希釈した。試験管に希釈培養液５μｌ、ブイヨン培地
５００μｌ、ＰＰ溶液１０μｌを加え、３７℃で１６時
間培養した。培養後、ＯＤ660を測定し、最少殺菌濃度
を求めた。結果を表２に示す。
度）ＯＤ660の値が０．３になるまで培養した大腸菌
（ＩＦ０３３０）を、ＯＤ660の値が０．０１（１０6ｃ
ｆｕ／ｍｌ）になるようにブイヨン培地（ニッスイ製）
で希釈した。試験管に希釈培養液５μｌ、ブイヨン培地
５００μｌ、ＰＰ溶液１０μｌを加え、３７℃で１６時
間培養した。培養後、ＯＤ660を測定し、最少殺菌濃度
を求めた。結果を表２に示す。
【００５６】（実施例５：ダイズ斑点細菌病に対する最
少殺菌濃度）１晩培養したダイズ斑点細菌病菌（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． Ｇｌｙｃ
ｉｎｅａ）を、１０5ｃｆｕ／ｍｌ）になるようにブイ
ヨン培地（ニッスイ製）で希釈した。９６穴プレートに
希釈培養液８０μｌ、ｐＨ５．０の２００ｍＭ ＭＥＳ
緩衝液（２−（Ｎ−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎ
ｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）１０μｌ、ＰＰ溶液１
０μｌを加え、２６℃で培養した。マイクロプレートリ
ーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ製）を用いて、３０分後および
４８時間のＯＤ415を測定し、上記の式（１）より、発
育阻害率を求め、最少殺菌濃度を算出した。結果を表２
に示す。
少殺菌濃度）１晩培養したダイズ斑点細菌病菌（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ． Ｇｌｙｃ
ｉｎｅａ）を、１０5ｃｆｕ／ｍｌ）になるようにブイ
ヨン培地（ニッスイ製）で希釈した。９６穴プレートに
希釈培養液８０μｌ、ｐＨ５．０の２００ｍＭ ＭＥＳ
緩衝液（２−（Ｎ−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎ
ｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）１０μｌ、ＰＰ溶液１
０μｌを加え、２６℃で培養した。マイクロプレートリ
ーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ製）を用いて、３０分後および
４８時間のＯＤ415を測定し、上記の式（１）より、発
育阻害率を求め、最少殺菌濃度を算出した。結果を表２
に示す。
【００５７】（実施例６：サツマイモ細胞間液における
安定性）サツマイモ（高系１４号）の成葉を約５ｍｍ角
にメスで切断し、洗浄液（１０ｍＭ ＫＨ2Ｐ０4，ｐＨ
６．０）で洗浄した。洗浄した葉切片を抽出液（５０ｍ
Ｍ ＭｇＣ１2）に浸し、真空ポンプを用いて１０分間
減圧処理した。減圧処理後の葉を遠心管に装着した５ｍ
ｌシリンジに入れ、４５００ｇで１０分間遠心した。シ
リンジ外に溶出した液をサツマイモ細胞間液（ＩＣＦ：
Ｉｎｔｅｒ Ｃｅｌｌａｒ Ｆｌｕｉｄ）とした。１００
μｌの１２．５％サツマイモＩＣＦ中にＰＰ溶液を加
え、２８℃で５時間反応させた。反応前のポリペプチド
を逆相クロマトグラフィーで分画した時のピークの面積
値を１００％とし、サツマイモＩＣＦ反応後のポリペプ
チドのピーク面積値から、ポリペプチドの５時間後の残
存率を算出した。なお、逆相クロマトグラフィーのカラ
ムにはＳｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ ＳＴ ４．６／１００
（Ａｍａｓｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃ
ｈ社製）を用いた。開始バッファーには溶液Ａ（５％ア
セトニトリル、０．１％ＴＦＡ）を用いて、溶液Ａ１０
０％から溶液Ｂ（７０％アセトニトリル、０．１％ＴＦ
Ａ）１００％へのグラジエントをかけることにより溶出
した。結果を表２に示す。なお、チオニンについてのサ
ツマイモＩＣＦ中での５時間後の残存率は７０．０％で
あった。
安定性）サツマイモ（高系１４号）の成葉を約５ｍｍ角
にメスで切断し、洗浄液（１０ｍＭ ＫＨ2Ｐ０4，ｐＨ
６．０）で洗浄した。洗浄した葉切片を抽出液（５０ｍ
Ｍ ＭｇＣ１2）に浸し、真空ポンプを用いて１０分間
減圧処理した。減圧処理後の葉を遠心管に装着した５ｍ
ｌシリンジに入れ、４５００ｇで１０分間遠心した。シ
リンジ外に溶出した液をサツマイモ細胞間液（ＩＣＦ：
Ｉｎｔｅｒ Ｃｅｌｌａｒ Ｆｌｕｉｄ）とした。１００
μｌの１２．５％サツマイモＩＣＦ中にＰＰ溶液を加
え、２８℃で５時間反応させた。反応前のポリペプチド
を逆相クロマトグラフィーで分画した時のピークの面積
値を１００％とし、サツマイモＩＣＦ反応後のポリペプ
チドのピーク面積値から、ポリペプチドの５時間後の残
存率を算出した。なお、逆相クロマトグラフィーのカラ
ムにはＳｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ ＳＴ ４．６／１００
（Ａｍａｓｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃ
ｈ社製）を用いた。開始バッファーには溶液Ａ（５％ア
セトニトリル、０．１％ＴＦＡ）を用いて、溶液Ａ１０
０％から溶液Ｂ（７０％アセトニトリル、０．１％ＴＦ
Ａ）１００％へのグラジエントをかけることにより溶出
した。結果を表２に示す。なお、チオニンについてのサ
ツマイモＩＣＦ中での５時間後の残存率は７０．０％で
あった。
【００５８】（実施例７：シロイヌナズナの細胞間液に
おける安定性）シロイヌナズナの成葉を約５ｍｍ角にメ
スで切断し、洗浄液（１０ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4 ｐＨ ６．
０）で洗浄した。洗浄した葉切片を抽出液（５０ｍＭ
ＭｇＣ１ 2）に浸し、真空ポンプを用いて１０分間減圧
処理した。減圧処理後の葉を遠心管に装着した５ｍｌシ
リンジに入れ、４５００ｇで１０分間遠心した。シリン
ジ外に溶出した液をシロイヌナズナ細胞間液（ＩＣＦ：
Ｉｎｔｅｒ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｆｌｕｉｄ） とした。
１００μｌの２５％シロイヌナズナＩＣＦ中にＰＰ溶液
を加え、２８℃で５時間反応させた。反応前のポリペプ
チドを逆相クロマトグラフィーで分画した時のピークの
面積値を１００％とし、シロイヌナズナＩＣＦ反応後の
ポリペプチドのピーク面積値から、ポリペプチドの５時
間後の残存率を算出した。なお、逆相クロマトグラフィ
ーのカラムにはＳｏｕｒｃｅ １５ＲＰＣ ＳＴ ４．６
／１００（Ａｍａｓｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ社製）を用いた。開始バッファーには溶液Ａ
（５％アセトニトリル、０．１％ＴＦＡ）を用いて、溶
液Ａ１００％から溶液Ｂ（７０％アセトニトリル、０．
１ＴＦＡ）１００％へのグラジエントをかけることによ
り溶出した。結果を表２に示す。なお、チオニンについ
てのシロイヌナズナＩＣＦ中での５時間後の残存率は９
０．１％であった。
おける安定性）シロイヌナズナの成葉を約５ｍｍ角にメ
スで切断し、洗浄液（１０ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4 ｐＨ ６．
０）で洗浄した。洗浄した葉切片を抽出液（５０ｍＭ
ＭｇＣ１ 2）に浸し、真空ポンプを用いて１０分間減圧
処理した。減圧処理後の葉を遠心管に装着した５ｍｌシ
リンジに入れ、４５００ｇで１０分間遠心した。シリン
ジ外に溶出した液をシロイヌナズナ細胞間液（ＩＣＦ：
Ｉｎｔｅｒ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｆｌｕｉｄ） とした。
１００μｌの２５％シロイヌナズナＩＣＦ中にＰＰ溶液
を加え、２８℃で５時間反応させた。反応前のポリペプ
チドを逆相クロマトグラフィーで分画した時のピークの
面積値を１００％とし、シロイヌナズナＩＣＦ反応後の
ポリペプチドのピーク面積値から、ポリペプチドの５時
間後の残存率を算出した。なお、逆相クロマトグラフィ
ーのカラムにはＳｏｕｒｃｅ １５ＲＰＣ ＳＴ ４．６
／１００（Ａｍａｓｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ社製）を用いた。開始バッファーには溶液Ａ
（５％アセトニトリル、０．１％ＴＦＡ）を用いて、溶
液Ａ１００％から溶液Ｂ（７０％アセトニトリル、０．
１ＴＦＡ）１００％へのグラジエントをかけることによ
り溶出した。結果を表２に示す。なお、チオニンについ
てのシロイヌナズナＩＣＦ中での５時間後の残存率は９
０．１％であった。
【００５９】（実施例８：ＣＨＬ細胞に対する５０％死
滅濃度）１０％ＣＳ（子ウシ血清）を含むＭＥＭ培地で
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｍｓｔｅｒ Ｌｕｎｇ細胞（ＣＨＬ
細胞、大日本製薬製ＣＨＬ／ＩＵ細胞、２．０×１０5
ｃｅｌｌＳ／ｍｌ×５ｍｌ）を、５％Ｃ０2存在下３７
℃で４日間培養した。常法により細胞を剥がし、同培地
にて４．４×１０4ｃｅｌｌｓ／ｍｌの動物細胞懸濁液
を調製した。９６穴マイクロプレートにＰＰ溶波１０μ
ｌと細胞懸濁液９０μｌを加え、５％Ｃ０2存在下３７
℃で３日間培養した。３日間後の培養液に、ＸＴＴ混合
標準液（Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ
ＩＩ（Ｒｏｃｈｅ社製））５０μｌを加え、５％Ｃ０2
存在下３７℃で４時間培養し、吸光度（Ｏ．Ｄ．４９０
−６５５）を測定した。以下の式（２）により生存率
（％）を求め、５０％死滅濃度を算出した。なお、式
（２）のブランクの吸光度はＰＰ溶液と細胞濁液のかわ
りに上記培地１００μｌを用いた場合の吸光度である。
結果を表２に示す。なお、チオニンについての当該死滅
濃度は６０μｇ／ｍｌであった。 生存率（％）＝（試料添加時の吸光度−ブランクの吸光度） ／（試料無添加時の吸光度−ブランクの吸光度））×１００……（２）
滅濃度）１０％ＣＳ（子ウシ血清）を含むＭＥＭ培地で
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｍｓｔｅｒ Ｌｕｎｇ細胞（ＣＨＬ
細胞、大日本製薬製ＣＨＬ／ＩＵ細胞、２．０×１０5
ｃｅｌｌＳ／ｍｌ×５ｍｌ）を、５％Ｃ０2存在下３７
℃で４日間培養した。常法により細胞を剥がし、同培地
にて４．４×１０4ｃｅｌｌｓ／ｍｌの動物細胞懸濁液
を調製した。９６穴マイクロプレートにＰＰ溶波１０μ
ｌと細胞懸濁液９０μｌを加え、５％Ｃ０2存在下３７
℃で３日間培養した。３日間後の培養液に、ＸＴＴ混合
標準液（Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ
ＩＩ（Ｒｏｃｈｅ社製））５０μｌを加え、５％Ｃ０2
存在下３７℃で４時間培養し、吸光度（Ｏ．Ｄ．４９０
−６５５）を測定した。以下の式（２）により生存率
（％）を求め、５０％死滅濃度を算出した。なお、式
（２）のブランクの吸光度はＰＰ溶液と細胞濁液のかわ
りに上記培地１００μｌを用いた場合の吸光度である。
結果を表２に示す。なお、チオニンについての当該死滅
濃度は６０μｇ／ｍｌであった。 生存率（％）＝（試料添加時の吸光度−ブランクの吸光度） ／（試料無添加時の吸光度−ブランクの吸光度））×１００……（２）
【００６０】表２に、試料１〜９の各ＰＰ溶液の糸状菌
および細菌に対する最少殺菌濃度、サツマイモＩＣＦお
よびシロイヌナズナＩＣＦ中での５時間後の残存率、Ｃ
ＨＬ細胞に対する５０％死滅濃度を示す。
および細菌に対する最少殺菌濃度、サツマイモＩＣＦお
よびシロイヌナズナＩＣＦ中での５時間後の残存率、Ｃ
ＨＬ細胞に対する５０％死滅濃度を示す。
【表２】
【００６１】まず、試料１〜５について記載する。試料
１、２のポリペプチドは、糸状菌であるサツマイモ黒斑
病菌およびイネいもち病菌に対する最少殺菌濃度が１０
μｇ／ｍｌ以下であり、細菌である大腸菌およびダイズ
斑点細菌病菌に対する最少殺菌濃度も１０μｇ／ｍｌ以
下であった。また、ＣＨＬ細胞に対する５０％死滅濃度
も１００μｇ／ｍｌ以上であった。
１、２のポリペプチドは、糸状菌であるサツマイモ黒斑
病菌およびイネいもち病菌に対する最少殺菌濃度が１０
μｇ／ｍｌ以下であり、細菌である大腸菌およびダイズ
斑点細菌病菌に対する最少殺菌濃度も１０μｇ／ｍｌ以
下であった。また、ＣＨＬ細胞に対する５０％死滅濃度
も１００μｇ／ｍｌ以上であった。
【００６２】試料３及び４のポリペプチドでは、細菌に
対しては、１０μｇ／ｍｌ以下の最少殺菌濃度であった
が、真菌に対しては、３０μｇ／ｍｌ以下の最少殺菌濃
度であった。また、試料５のポリペプチドでは、サツマ
イモ黒斑病菌、イネいもち病菌に対して、それぞれ１０
μｇ／ｍｌ以下、３０μｇ／ｍｌ以下の最少殺菌濃度で
あったが、細菌に対しては１００μｇ／ｍｌを超えてい
た。
対しては、１０μｇ／ｍｌ以下の最少殺菌濃度であった
が、真菌に対しては、３０μｇ／ｍｌ以下の最少殺菌濃
度であった。また、試料５のポリペプチドでは、サツマ
イモ黒斑病菌、イネいもち病菌に対して、それぞれ１０
μｇ／ｍｌ以下、３０μｇ／ｍｌ以下の最少殺菌濃度で
あったが、細菌に対しては１００μｇ／ｍｌを超えてい
た。
【００６３】以上のことから、本実施例で用いたウサギ
由来のＣＡＰ１８のＣ末端側のアミノ酸配列に基づくポ
リペプチドである試料１〜５のポリペプチドは、いずれ
も抗真菌剤に使用できることがわかった。すなわち、Ｃ
ＡＰ１８の第１０６位に始まり、１２２位〜１３７位ま
での範囲の各種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペ
プチド、あるいは、第１０６位からアミノ酸残基数で１
７〜３２のポリペプチドが抗真菌剤として使用できるこ
とがわかった。好ましくは、試料１〜３のポリペプチド
であり、第１０６位に始まり１２２位から１２９位まで
の範囲各種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチ
ド（第１０６位からアミノ酸残基数で１７〜２４個の各
種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチド）であ
った。より好ましくは、試料１、２のポリペプチドであ
り、第１０６位に始まり１２５位から１２９位までの範
囲各種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチド
（第１０６位からアミノ酸残基数で２０〜２４個の各種
アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチド）であっ
た。
由来のＣＡＰ１８のＣ末端側のアミノ酸配列に基づくポ
リペプチドである試料１〜５のポリペプチドは、いずれ
も抗真菌剤に使用できることがわかった。すなわち、Ｃ
ＡＰ１８の第１０６位に始まり、１２２位〜１３７位ま
での範囲の各種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペ
プチド、あるいは、第１０６位からアミノ酸残基数で１
７〜３２のポリペプチドが抗真菌剤として使用できるこ
とがわかった。好ましくは、試料１〜３のポリペプチド
であり、第１０６位に始まり１２２位から１２９位まで
の範囲各種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチ
ド（第１０６位からアミノ酸残基数で１７〜２４個の各
種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチド）であ
った。より好ましくは、試料１、２のポリペプチドであ
り、第１０６位に始まり１２５位から１２９位までの範
囲各種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチド
（第１０６位からアミノ酸残基数で２０〜２４個の各種
アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチド）であっ
た。
【００６４】一方、抗細菌剤としては、試料１〜４のポ
リペプチドを使用できることがわかった。すなわち、Ｃ
ＡＰ１８の第１０６位に始まり、１２５位〜１３７位ま
での範囲の各種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペ
プチド、あるいは、第１０６位からアミノ酸残基数で２
０〜３２のポリペプチドが抗真菌剤として使用できるこ
とがわかった。好ましくは、試料２〜４のポリペプチド
であり、第１０６位に始まり１２９位から１３７位まで
の範囲各種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチ
ド（第１０６位からアミノ酸残基数で２４〜３２個の各
種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチド）であ
った。
リペプチドを使用できることがわかった。すなわち、Ｃ
ＡＰ１８の第１０６位に始まり、１２５位〜１３７位ま
での範囲の各種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペ
プチド、あるいは、第１０６位からアミノ酸残基数で２
０〜３２のポリペプチドが抗真菌剤として使用できるこ
とがわかった。好ましくは、試料２〜４のポリペプチド
であり、第１０６位に始まり１２９位から１３７位まで
の範囲各種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチ
ド（第１０６位からアミノ酸残基数で２４〜３２個の各
種アミノ酸配列のいずれかからなるポリペプチド）であ
った。
【００６５】なお、試料１〜５のポリペプチドは、いず
れもＣＨＬ細胞に対する５０％死滅濃度が十分に高い数
値であった。したがって、人体に対する安全性は確保さ
れていることがわかった。したがって、試料１〜５のポ
リペプチドは抗真菌剤として好ましく、また、試料１〜
４のポリペプチドは、抗細菌剤として好ましいことがわ
かった。同時に、試料１〜５のポリペプチドは、植物病
害菌（真菌及び／又は細菌）剤としても好ましいことが
わかった。
れもＣＨＬ細胞に対する５０％死滅濃度が十分に高い数
値であった。したがって、人体に対する安全性は確保さ
れていることがわかった。したがって、試料１〜５のポ
リペプチドは抗真菌剤として好ましく、また、試料１〜
４のポリペプチドは、抗細菌剤として好ましいことがわ
かった。同時に、試料１〜５のポリペプチドは、植物病
害菌（真菌及び／又は細菌）剤としても好ましいことが
わかった。
【００６６】次に、試料６〜９について記載する。試料
６のポリペプチドは、いずれの真菌および細菌に対して
高い抗菌活性を有していた（最少殺菌濃度、糸状菌に対
して１０μｇ／ｍｌ以下、細菌に対して１０μｇ／ｍｌ
以下（なお、細菌に対しては３μｇ／ｍｌ以下といって
もよい。））。また、細胞間液中での安定性は、試料２
のポリペプチド（ＣＡＰ１８106-129）に対して飛躍的
に向上されていた。したがって、試料６のポリペプチド
のＣ末端に付加されたK-D配列は、生体内での安定性の
向上に寄与し、抗菌活性を維持させていることが明らか
であった。試料７〜９のポリペプチドは、サツマイモ黒
斑病菌と大腸菌について試料６のポリペプチドと同等の
抗菌活性を有していた。また、細胞間液中の安定性にお
いても、試料６と同等であった。以上のことから、K-
E、R-D、R-Eのいずれのアミノ酸配列も、ポリペプチド
の抗菌活性を維持し、かつ生体内での安定性を向上させ
うることがわかった。なお、ＣＨＬ細胞に対する５０％
死滅濃度も１００μｇ／ｍｌ以上であり、人体に対する
安全性も確認できた。したがって、試料６〜９のポリペ
プチドは抗真菌剤としても、また、抗細菌剤としても、
好ましいことがわかった。同時に、抗植物病害菌（真菌
及び／又は細菌）剤及び植物病害防除のため植物へ導入
する遺伝子源としても好ましいことがわかった。
６のポリペプチドは、いずれの真菌および細菌に対して
高い抗菌活性を有していた（最少殺菌濃度、糸状菌に対
して１０μｇ／ｍｌ以下、細菌に対して１０μｇ／ｍｌ
以下（なお、細菌に対しては３μｇ／ｍｌ以下といって
もよい。））。また、細胞間液中での安定性は、試料２
のポリペプチド（ＣＡＰ１８106-129）に対して飛躍的
に向上されていた。したがって、試料６のポリペプチド
のＣ末端に付加されたK-D配列は、生体内での安定性の
向上に寄与し、抗菌活性を維持させていることが明らか
であった。試料７〜９のポリペプチドは、サツマイモ黒
斑病菌と大腸菌について試料６のポリペプチドと同等の
抗菌活性を有していた。また、細胞間液中の安定性にお
いても、試料６と同等であった。以上のことから、K-
E、R-D、R-Eのいずれのアミノ酸配列も、ポリペプチド
の抗菌活性を維持し、かつ生体内での安定性を向上させ
うることがわかった。なお、ＣＨＬ細胞に対する５０％
死滅濃度も１００μｇ／ｍｌ以上であり、人体に対する
安全性も確認できた。したがって、試料６〜９のポリペ
プチドは抗真菌剤としても、また、抗細菌剤としても、
好ましいことがわかった。同時に、抗植物病害菌（真菌
及び／又は細菌）剤及び植物病害防除のため植物へ導入
する遺伝子源としても好ましいことがわかった。
【００６７】（比較例）比較例として、American Pepti
de Companyより、表３に示す代表的な８種類の抗菌性ポ
リペプチド（比較試料１〜８）を入手した。これらのポ
リペプチドは、９０％以上の純度を有していた。これら
の各ポリペプチドを水に溶解して、それぞれについて各
種濃度のポリペプチド溶液を調製した。
de Companyより、表３に示す代表的な８種類の抗菌性ポ
リペプチド（比較試料１〜８）を入手した。これらのポ
リペプチドは、９０％以上の純度を有していた。これら
の各ポリペプチドを水に溶解して、それぞれについて各
種濃度のポリペプチド溶液を調製した。
【表３】
【００６８】これらの各種溶液について、サツマイモの
黒斑病菌に対する抗菌性、大腸菌に対する抗菌性、及び
ＣＨＬ細胞に対する５０％死滅濃度を評価した。なお、
これらの各試験は、実施例、２、４、及び８にそれぞれ
記載の方法で実施した。結果を表４に示す。
黒斑病菌に対する抗菌性、大腸菌に対する抗菌性、及び
ＣＨＬ細胞に対する５０％死滅濃度を評価した。なお、
これらの各試験は、実施例、２、４、及び８にそれぞれ
記載の方法で実施した。結果を表４に示す。
【表４】
【００６９】表４に示すように、これらの各種ポリペプ
チドは、糸状菌（サツマイモ黒斑病菌）に対して最少殺
菌濃度が１０μｇ／ｍｌ以下（比較試料１、３、５〜
８）、あるいは３μｇ／ｍｌ以下（比較試料４）であっ
たが、細菌（大腸菌）に対する最少殺菌濃度が３０μｇ
／ｍｌ超（比較試料１〜５、７）であるものが多かっ
た。また、比較試料８は、糸状菌及び細菌に対して高い
抗菌活性を有していたが（最少殺菌濃度、対糸状菌：１
０μｇ／ｍｌ以下、対細菌：３μｇ／ｍｌ以下）、ＣＨ
Ｌ細胞に対する５０％死滅濃度が４０μｇ／ｍｌであ
り、人体に対する安全性が十分に高いとはいえなかっ
た。以上のことから、これらの各種比較試料のポリペプ
チドには、糸状菌及び細菌に対する最少殺菌濃度が３０
μｇ／ｍｌ以下（当該最少殺菌濃度はそれぞれ１０μｇ
／ｍｌ以下ということもできる。）であり、かつＣＨＬ
細胞に対する５０％死滅濃度が１００μｇ／ｍｌ以上で
あるポリペプチドを見出すことはできなかった。
チドは、糸状菌（サツマイモ黒斑病菌）に対して最少殺
菌濃度が１０μｇ／ｍｌ以下（比較試料１、３、５〜
８）、あるいは３μｇ／ｍｌ以下（比較試料４）であっ
たが、細菌（大腸菌）に対する最少殺菌濃度が３０μｇ
／ｍｌ超（比較試料１〜５、７）であるものが多かっ
た。また、比較試料８は、糸状菌及び細菌に対して高い
抗菌活性を有していたが（最少殺菌濃度、対糸状菌：１
０μｇ／ｍｌ以下、対細菌：３μｇ／ｍｌ以下）、ＣＨ
Ｌ細胞に対する５０％死滅濃度が４０μｇ／ｍｌであ
り、人体に対する安全性が十分に高いとはいえなかっ
た。以上のことから、これらの各種比較試料のポリペプ
チドには、糸状菌及び細菌に対する最少殺菌濃度が３０
μｇ／ｍｌ以下（当該最少殺菌濃度はそれぞれ１０μｇ
／ｍｌ以下ということもできる。）であり、かつＣＨＬ
細胞に対する５０％死滅濃度が１００μｇ／ｍｌ以上で
あるポリペプチドを見出すことはできなかった。
【００７０】実施例９：ポリペプチドの合成と性能評価
配列番号：２１及び以下の表５に示すアミノ酸配列から
なるポリペプチド（試料１０）の化学合成を島津総合科
学研究所に依頼した。得られたポリペプチドは、９０％
以上の純度を有していた。このポリペプチドは、ウサギ
由来のＣＡＰ１８のＣ末端側フラグメント（第１０６位
〜１２０位）のＣ末端側にアミノ酸２残基の配列である
ＤＫ（Asp-Lys）配列を付加したアミノ酸配列を有して
いる。
なるポリペプチド（試料１０）の化学合成を島津総合科
学研究所に依頼した。得られたポリペプチドは、９０％
以上の純度を有していた。このポリペプチドは、ウサギ
由来のＣＡＰ１８のＣ末端側フラグメント（第１０６位
〜１２０位）のＣ末端側にアミノ酸２残基の配列である
ＤＫ（Asp-Lys）配列を付加したアミノ酸配列を有して
いる。
【表５】
【００７１】このポリペプチドを水に溶解して、各種濃
度のポリペプチド溶液（ＰＰ溶液）を調製し、サツマイ
モ黒斑病菌と大腸菌に対する最少殺菌濃度を測定した。
それぞれの試験方法は、実施例２及び実施例４に記載し
たのと同一の方法と条件にしたがった。結果を表６に示
す。また、このポリペプチドについて、サツマイモ細胞
間液中での安定性を評価した。結果を併せて表６に示
す。なお、試験方法は、実施例６に記載したのと同一の
方法と条件にしたがった。
度のポリペプチド溶液（ＰＰ溶液）を調製し、サツマイ
モ黒斑病菌と大腸菌に対する最少殺菌濃度を測定した。
それぞれの試験方法は、実施例２及び実施例４に記載し
たのと同一の方法と条件にしたがった。結果を表６に示
す。また、このポリペプチドについて、サツマイモ細胞
間液中での安定性を評価した。結果を併せて表６に示
す。なお、試験方法は、実施例６に記載したのと同一の
方法と条件にしたがった。
【表６】
【００７２】表６に示すように、試料１０のポリペプチ
ドは、既述した試料２、試料６〜９と同等の高い抗真菌
性と抗細菌性とを有していることがわかった。また、そ
のサツマイモ細胞間液中における安定試験結果からは、
試料２（Ｃ末端にＤＫ配列を有していない以外は、試料
１０と同じアミノ酸配列からなるポリペプチド）よりは
るかに高い安定性を示し、また、試料６〜９と同等かあ
るいはそれ以上の高い安定性を示した。これらの結果か
ら、試料２、試料６〜１０との抗菌性及び安定性の評価
結果からすると、任意の正電荷アミノ酸と負電荷アミノ
酸とを組み合わせてＣ末端に付加することにより、もと
のポリペプチドの抗菌活性などの生理活性を損なうこと
なく、植物内における安定性を向上させることができる
ことがわかった。
ドは、既述した試料２、試料６〜９と同等の高い抗真菌
性と抗細菌性とを有していることがわかった。また、そ
のサツマイモ細胞間液中における安定試験結果からは、
試料２（Ｃ末端にＤＫ配列を有していない以外は、試料
１０と同じアミノ酸配列からなるポリペプチド）よりは
るかに高い安定性を示し、また、試料６〜９と同等かあ
るいはそれ以上の高い安定性を示した。これらの結果か
ら、試料２、試料６〜１０との抗菌性及び安定性の評価
結果からすると、任意の正電荷アミノ酸と負電荷アミノ
酸とを組み合わせてＣ末端に付加することにより、もと
のポリペプチドの抗菌活性などの生理活性を損なうこと
なく、植物内における安定性を向上させることができる
ことがわかった。
【００７３】実施例１０：試料６のポリペプチドとその
他の抗菌性ポリペプチドの抗菌活性とサツマイモ細胞間
液中での安定性の評価 試料６と、表７に示す、商業的にあるいは合成的に入手
可能なその他の抗菌性ポリペブチドについて、以下の性
能評価を行った。試験した全てのポリペプチドとそのア
ミノ酸配列を、表７に、その起源とともに示す。チオニ
ン（Ｔａｋａｒａ製、製品名Ｃｏｒｙｓｔｅｉｎ）、Ｍ
ＹＰ３０（化学合成品）、およびｒＣＡＰ２４ＫＤ（化
学合成品）以外の抗菌ペプチドはＡＭＥＲＩＣＡＮ Ｐ
ＥＰＴＩＤＥ ＣＯＭＰＡＮＹ製の抗菌ペプチドを用い
た。抗菌性の評価にあたっては、実施例２及び４に記載
したのと同一の方法と条件にしたがった。なお、各種抗
菌ペプチドを滅菌水で所定の濃度に調整したものを試料
として用いた。細胞毒性は、実施例８に記載したのと同
一の方法と条件にしたがった。サツマイモ細胞間液にお
ける安定性の評価にあたっては、実施例６に記載の条件
で実施した。加えて、２４時間後についても評価した。
これらの評価結果を併せて表８に示す。
他の抗菌性ポリペプチドの抗菌活性とサツマイモ細胞間
液中での安定性の評価 試料６と、表７に示す、商業的にあるいは合成的に入手
可能なその他の抗菌性ポリペブチドについて、以下の性
能評価を行った。試験した全てのポリペプチドとそのア
ミノ酸配列を、表７に、その起源とともに示す。チオニ
ン（Ｔａｋａｒａ製、製品名Ｃｏｒｙｓｔｅｉｎ）、Ｍ
ＹＰ３０（化学合成品）、およびｒＣＡＰ２４ＫＤ（化
学合成品）以外の抗菌ペプチドはＡＭＥＲＩＣＡＮ Ｐ
ＥＰＴＩＤＥ ＣＯＭＰＡＮＹ製の抗菌ペプチドを用い
た。抗菌性の評価にあたっては、実施例２及び４に記載
したのと同一の方法と条件にしたがった。なお、各種抗
菌ペプチドを滅菌水で所定の濃度に調整したものを試料
として用いた。細胞毒性は、実施例８に記載したのと同
一の方法と条件にしたがった。サツマイモ細胞間液にお
ける安定性の評価にあたっては、実施例６に記載の条件
で実施した。加えて、２４時間後についても評価した。
これらの評価結果を併せて表８に示す。
【表７】
【表８】
【００７４】表８に示すように、試料６は比較した１４
種類の抗菌ペプチドの中で、抗糸状菌活性、抗細菌活
性、細胞毒性、サツマイモ細胞間液中での安定性の４項
目で、いずれももっとも優れた値を示し、このポリペプ
チドが、全ての点において好ましいことが明らかであっ
た。
種類の抗菌ペプチドの中で、抗糸状菌活性、抗細菌活
性、細胞毒性、サツマイモ細胞間液中での安定性の４項
目で、いずれももっとも優れた値を示し、このポリペプ
チドが、全ての点において好ましいことが明らかであっ
た。
【００７５】
【発明の効果】本発明によれば、真菌に対しても抗菌性
を発現する動物の生体防御因子である抗菌性ポリペプチ
ドあるいはそれを含有する抗菌剤を提供することができ
る。また、本発明によれば、植物病害生物に抵抗性のあ
る抗菌ポリペプチドおよびこの抗菌ペプチドを用いた植
物病害の防除技術を提供することができる。
を発現する動物の生体防御因子である抗菌性ポリペプチ
ドあるいはそれを含有する抗菌剤を提供することができ
る。また、本発明によれば、植物病害生物に抵抗性のあ
る抗菌ポリペプチドおよびこの抗菌ペプチドを用いた植
物病害の防除技術を提供することができる。
【００７６】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> KABUSHIKI KAISHA TOYOTA CHUO KENKYUSHO
<120> COMPOSITION FOR ANTI-FUNGAL OR ANTI-PLANT DISEASE
MICROORGANISMS AND THE USE THEREOF
<130> 020238
<140>
<141>
<160> 23
<170> PatentIn Ver. 2.1
<210> 1
<211> 142
<212> PRT
<213> Rabbit
<400> 1
Gln Asp Leu Thr Tyr Arg Glu Ala Val Leu Arg Ala Val Asp Ala Phe
1 5 10 15
Asn Gln Gln Ser Ser Glu Ala Asn Leu Tyr Arg Leu Leu Ser Met Asp
20 25 30
Pro Gln Gln Leu Glu Asp Ala Lys Pro Tyr Thr Pro Gln Pro Val Ser
35 40 45
Phe Thr Val Lys Glu Thr Glu Cys Pro Arg Thr Thr Trp Lys Leu Pro
50 55 60
Glu Gln Cys Asp Phe Lys Glu Asp Gly Leu Val Lys Arg Cys Val Gly
65 70 75 80
Thr Val Thr Arg Tyr Gln Ala Trp Asp Ser Phe Asp Ile Arg Cys Asn
85 90 95
Arg Ala Gln Glu Ser Pro Glu Pro Thr Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg
100 105 110
Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys
115 120 125
Ile Gln Gly Leu Leu Pro Lys Leu Ala Pro Arg Thr Asp Tyr
130 135 140
<210> 2
<211> 20
<212> PRT
<213> Rabbit
<400> 2
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile
20
<210> 3
<211> 24
<212> PRT
<213> Rabbit
<400> 3
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile
20
<210> 4
<211> 32
<212> PRT
<213> Rabbit
<400> 4
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Gln Gly Leu Leu Pro Lys Leu Ala
20 25 30
<210> 5
<211> 27
<212> PRT
<213> Rabbit
<400> 5
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Gln Gly Leu
20 25
<210> 6
<211> 17
<212> PRT
<213> Rabbit
<400> 6
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu
<210> 7
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Designed
polypeptide based on CAP18 derived from rabbit
<400> 7
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Lys Asp
20 25
<210> 8
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Designed
polypeptide based on CAP18 derived from rabbit
<400> 8
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Lys Glu
20 25
<210> 9
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Designed
polypeptide based on CAP18 derived from rabbit
<400> 9
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Arg Asp
20 25
<210> 10
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Designed
polypeptide based on CAP18 derived from rabbit
<400> 10
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Arg Glu
20 25
<210> 11
<211> 60
<212> DNA
<213> rabbit
<400> 11
gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60
<210> 12
<211> 72
<212> DNA
<213> rabbit
<400> 12
gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60
ggtcagaaaa tc 72
<210> 13
<211> 96
<212> DNA
<213> rabbit
<400> 13
gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60
ggtcagaaaa tccagggttt gctgccgaaa cttgca 96
<210> 14
<211> 81
<212> DNA
<213> rabbit
<400> 14
gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60
ggtcagaaaa tccagggttt c 81
<210> 15
<211> 51
<212> DNA
<213> rabbit
<400> 15
gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct t 51
<210> 16
<211> 78
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 16
gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60
ggtcagaaaa tcaargay 78
<210> 17
<211> 78
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 17
gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60
ggtcagaaaa tcaargar 78
<210> 18
<211> 78
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 18
gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60
ggtcagaaaa tcmgngay 78
<210> 19
<211> 78
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 19
gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60
ggtcagaaaa tcmgngar 78
<210> 20
<211> 96
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence:Designed
polynucleotide sequence based on the C-terminal
fragment of rabbit Cap18
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(96)
<400> 20
ggn ytn mgn aar mgn ytn mgn aar tty mgn aay aar ath aar gar aar 48
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
ytn aar aar ath ggn car aar ath car ggn ytn ytn ccn aar ytn gcn 96
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Gln Gly Leu Leu Pro Lys Leu Ala
20 25 30
<210> 21
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<223> Description of Artificial Sequence:Designed
polynucleotide sequence based on the C-terminal
fragment of rabbit Cap18
<400> 21
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Gln Gly Leu Leu Pro Lys Leu Ala
20 25 30
<210> 22
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Modified
Polypeptide based on CAP18 derived from rabbit
<400> 22
Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys
1 5 10 15
Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Asp Lys
20 25
<210> 23
<211> 78
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 23
gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60
ggtcagaaaa tcgayaar 78
【００７７】配列表フリーテキスト
配列番号：７
ウサギ由来のＣＡＰ１８に基づいて設計されたポリペプ
チド 配列番号：８ ウサギ由来のＣＡＰ１８に基づいて設計されたポリペプ
チド 配列番号：９ ウサギ由来のＣＡＰ１８に基づいて設計されたポリペプ
チド 配列番号：１０ ウサギ由来のＣＡＰ１８に基づいて設計されたポリペプ
チド 配列番号：２０ ウサギ由来のＣＡＰ１８のＣ末端フラグメントに基づい
て設計されたポリヌクレオチド配列 配列番号：２１ ウサギ由来のＣＡＰ１８のＣ末端フラグメントに基づい
て設計されたポリヌクレオチド配列 配列番号：２２ ウサギ由来のＣＡＰ１８に基づいて設計されたポリペプ
チド
チド 配列番号：８ ウサギ由来のＣＡＰ１８に基づいて設計されたポリペプ
チド 配列番号：９ ウサギ由来のＣＡＰ１８に基づいて設計されたポリペプ
チド 配列番号：１０ ウサギ由来のＣＡＰ１８に基づいて設計されたポリペプ
チド 配列番号：２０ ウサギ由来のＣＡＰ１８のＣ末端フラグメントに基づい
て設計されたポリヌクレオチド配列 配列番号：２１ ウサギ由来のＣＡＰ１８のＣ末端フラグメントに基づい
て設計されたポリヌクレオチド配列 配列番号：２２ ウサギ由来のＣＡＰ１８に基づいて設計されたポリペプ
チド
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｐ 31/10 Ｃ０７Ｋ 14/47 ４Ｈ０４５
Ｃ０７Ｋ 7/08 19/00
14/47 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
19/00 5/00 Ｃ
Ｃ１２Ｎ 5/10 Ａ６１Ｋ 37/02
(72)発明者 村本 伸彦
愛知県愛知郡長久手町大字長湫字横道41番
地の１ 株式会社豊田中央研究所内
(72)発明者 平井 正名
愛知県愛知郡長久手町大字長湫字横道41番
地の１ 株式会社豊田中央研究所内
Ｆターム(参考） 2B030 AD05 CA14
4B024 AA01 AA08 BA67 CA04 CA07
DA01 EA04 GA11 GA17 GA21
HA03
4B065 AA88X AA90Y AB01 AC14
BA01 CA24 CA34 CA47 CA53
4C084 AA01 AA02 AA07 BA01 BA02
BA08 BA18 BA19 CA17 CA53
DA42 MA02 NA14 ZB322
ZB352
4H011 AA01 BB19 DA13 DD03 DH06
4H045 AA10 AA20 AA30 BA17 BA18
BA41 CA40 EA29 FA33 FA74
Claims (29)
- 【請求項１】ウサギ由来でα−へリックス構造を有する
カチオン性ポリペプチドの１種あるいは２種以上を有効
成分として含有する、抗真菌剤。 - 【請求項２】前記ポリペプチドのアミノ酸残基数は１７
〜３２である、請求項１記載の抗真菌剤。 - 【請求項３】ウサギ由来でα−ヘリックス構造を有する
カチオン性ポリペプチドフラグメントと、 このフラグメントのＣ末端側にペプチド結合により結合
される、Lys-Asp（K-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R
-D）、Arg-Glu（R-E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-
R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg (E-R)からなる群から
選択される１種あるいは２種以上のアミノ酸残基、とを
有するポリペプチドを有効成分として含有する、抗真菌
剤。 - 【請求項４】ウサギ由来でα−ヘリックス構造を有する
カチオン性ポリペプチドの１種あるいは２種以上を有効
成分として含有する、植物病害生物防除剤。 - 【請求項５】前記ポリペプチドのアミノ酸残基数は１７
〜３２である、請求項４記載の植物病害生物防除剤。 - 【請求項６】ウサギ由来でα−ヘリックス構造を有する
カチオン性ポリペプチドフラグメントと、 このフラグメントのＣ末端側にペプチド結合により結合
される、Lys-Asp（K-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R
-D）、Arg-Glu（R-E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-
R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg (E-R)からなる群から
選択される１種あるいは２種以上のアミノ酸残基、とを
有するポリペプチドを有効成分として含有する、植物病
害生物防除剤。 - 【請求項７】抗真菌性を有する、以下のいずれかに記載
されるポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 - 【請求項８】抗真菌性を有する、以下のいずれかに記載
されるポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 - 【請求項９】抗真菌性を有する、以下のいずれかに記載
されるポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 - 【請求項１０】抗真菌性を有する、以下のいずれかに記
載されるポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 - 【請求項１１】ポリペプチドが抗真菌性を発現する真菌
が植物病害性真菌である、請求項７〜１０のいずれかに
記載のポリペプチド。 - 【請求項１２】請求項７〜１０のいずれかに記載のポリ
ペプチドの１種あるいは２種以上を含有する、抗菌剤。 - 【請求項１３】抗植物病害菌性を有する、以下のいずれ
かに記載のポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 - 【請求項１４】抗植物病害菌性を有する、以下のいずれ
かに記載のポリペプチド。 （ａ）配列番号：２に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｂ）配列番号：３に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｃ）配列番号：４に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｄ）配列番号：５に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｅ）配列番号：６に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 - 【請求項１５】抗植物病害菌性を有する、以下のいずれ
かに記載されるポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチド。 - 【請求項１６】抗植物病害菌性を有する、以下のいずれ
かに記載されるポリペプチド。 （ｆ）配列番号：７に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｇ）配列番号：８に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｈ）配列番号：９に記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチド。 （ｉ）配列番号：１０に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 （ｊ）配列番号：２２に記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加したアミノ酸配列からなる、ポリペプチ
ド。 - 【請求項１７】請求項１３〜１６のいずれかに記載のポ
リペプチドの１種あるいは２種以上を含有する、植物病
害生物防除剤。 - 【請求項１８】抗真菌性を有するポリペプチドをコード
する、以下のいずれかに記載のポリヌクレオチド。 （ａ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド。 （ｂ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列を含むポリヌクレオチド。 - 【請求項１９】抗真菌性を有するポリペプチドをコード
する、以下のいずれかに記載のポリヌクレオチド。 （ａ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列において１もしくは数個のアミノ酸が置
換、欠失、挿入、および／または付加したアミノ酸配列
からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。 （ｂ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェン
トな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド。 - 【請求項２０】α−へリックス構造を有するカチオン性
ポリペプチドであって抗菌活性を有するフラグメント
と、 このフラグメントのＣ末端側にペプチド結合により結合
される、Lys-Asp（K-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R
-D）、Arg-Glu（R-E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-
R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg (E-R)からなる群から
選択される１種あるいは２種以上のアミノ酸残基、から
選択される１種あるいは２種以上のアミノ酸残基、とを
有する、ポリペプチド。 - 【請求項２１】請求項２０記載のポリペプチドの１種あ
るいは２種以上を含有する、抗菌剤。 - 【請求項２２】α−へリックス構造を有するカチオン性
ポリペプチドであって抗菌活性を有するフラグメント
と、 このフラグメントのＣ末端側にペプチド結合により結合
される、Lys-Asp（K-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R
-D）、Arg-Glu（R-E）、Asp-Lys (D-K)、Asp-Arg (D-
R)、Glu-Lys (E-K) 及びGlu-Arg (E-R)からなる群から
選択される１種あるいは２種以上のアミノ酸残基、とか
らなるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド。 - 【請求項２３】前記抗菌活性フラグメントをコードする
ポリヌクレオチド部分は、下記（ａ）〜（ｄ）のいずれ
かであるポリヌクレオチド。 （ａ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド。 （ｂ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列を含むポリヌクレオチド。 （ｃ）配列番号：２〜１０及び２２のいずれかに記載の
アミノ酸配列において１個もしくは数個のアミノ酸が置
換、欠失、挿入、および／または付加したアミノ酸配列
からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。 （ｄ）配列番号：１１〜１９及び２３のいずれかに記載
の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェン
トな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド。 - 【請求項２４】請求項１８、１９、２２及び２３のいず
れかに記載のポリヌクレオチドを備えるベクター。 - 【請求項２５】請求項１８、１９、２２及び２３のいず
れかに記載のポリヌクレオチドまたはこれらのいずれか
のポリヌクレオチドを備えるベクターを発現可能に保持
する形質転換体。 - 【請求項２６】前記形質転換体は植物体である、請求項
２５記載の形質転換体。 - 【請求項２７】前記ポリペプチドを植物病害生物の存在
する環境中へ導入する、植物病害生物の防除方法。 - 【請求項２８】前記ポリペプチドを発現するように操作
された形質転換植物を前記環境下で栽培する、請求項２
７記載の防除方法。 - 【請求項２９】前記植物病害生物が、細菌および真菌で
ある、請求項２７又は２８に記載の防除方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002143652A JP2003250578A (ja) | 2001-12-26 | 2002-05-17 | 抗菌性ポリペプチドおよびこのポリペプチドを含有する抗菌剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001-394821 | 2001-12-26 | ||
| JP2001394821 | 2001-12-26 | ||
| JP2002143652A JP2003250578A (ja) | 2001-12-26 | 2002-05-17 | 抗菌性ポリペプチドおよびこのポリペプチドを含有する抗菌剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003250578A true JP2003250578A (ja) | 2003-09-09 |
Family
ID=28677187
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002143652A Pending JP2003250578A (ja) | 2001-12-26 | 2002-05-17 | 抗菌性ポリペプチドおよびこのポリペプチドを含有する抗菌剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003250578A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006045214A (ja) * | 2004-07-06 | 2006-02-16 | Juntendo | 抗菌性ペプチド |
| CN114989254A (zh) * | 2022-06-17 | 2022-09-02 | 中山大学 | 一种多肽及其设计方法和在制备抑制具核梭杆菌产品或预防结直肠癌药物中的应用 |
-
2002
- 2002-05-17 JP JP2002143652A patent/JP2003250578A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006045214A (ja) * | 2004-07-06 | 2006-02-16 | Juntendo | 抗菌性ペプチド |
| CN114989254A (zh) * | 2022-06-17 | 2022-09-02 | 中山大学 | 一种多肽及其设计方法和在制备抑制具核梭杆菌产品或预防结直肠癌药物中的应用 |
| CN114989254B (zh) * | 2022-06-17 | 2023-11-03 | 中山大学 | 一种多肽及其设计方法和在制备抑制具核梭杆菌产品或预防结直肠癌药物中的应用 |
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