KR20170065583A - 과민성 반응 유발제 펩타이드 및 이의 용도 - Google Patents

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그레고리 에이. 조네처
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플랜트 헬스 케어, 인코포레이티드
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Abstract

개선된 용해도, 안정성, 화학 분해에 대한 내성, 또는 이들 특성의 조합을 나타내는 과민성-반응 유발 펩타이드가 개시되어 있다. 식물 생화학적 신호전달을 부여하거나, 식물에게 질환 내성을 부여하거나, 생물학적 스트레스에 내한 내성을 부여하거나, 비생물학적 스트레스에 대한 내성 및 내성을 부여하거나, 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성을 부여하거나, 과일 또는 야채에 수거후 질환 또는 수거후 건조 내성을 부여하거나, 또는 과일 또는 야채 성숙 수명을 향상시키기 위한 이들 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드, 또는 이를 인코딩하는 DNA 작제물의 용도가 또한 개시되어 있다.

Description

과민성 반응 유발제 펩타이드 및 이의 용도{HYPERSENSITIVE RESPONSE ELICITOR PEPTIDES AND USE THEREOF}
본원은 하기 특허원의 우선권 이익을 청구한다: U.S. 가특허 출원 시리즈 번호 62/058,535(2014년 10월 1일 출원), 및 U.S. 가특허 출원 시리즈 번호 62/140,789(2015년 3월 31일 출원), 이들 각각은 이의 전문이 참고로 본원에 편입되어 있다.
발명의 분야
본 발명은 신규한 과민성 반응 유발제 펩타이드 및 다른 것 중에서, 성장 향상, 질환 내성, 해충 또는 곤충 내성, 및 스트레스 내성을 포함하는, 활성 식물 반응을 유도하기 위한 이의 용도에 관한 것이다.
하핀 단백질(harpin protein)의 확인 및 단리는 식물 병원성 박테리아가 식물과 상호작용하는 방법을 이해하는 것을 시도한 코넬 대학(Cornell University)에서의 기본 연구로부터 왔다. 제1의 방어 선은 감염 부위에서 국재화된 식물 세포사인, 과민성 반응(HR)이다. 세포사는 병원체의 운동에 대한 물리적 방벽을 생성하며 일부 식물에서 죽은 세포는 침입하는 병원체에 대해 독성인 화합물을 방출할 수 있다. 연구는 병원성 박테리아가 HR을 개시하는데 관여하는 단일 인자를 가질 수 있음을 나타내었다. 코넬 연구의 근본적인 목표는 HR을 유발하는데 관여하는 특이적인 박테리아 단백질을 확인하는 것이었다. 표적 단백질은 과민성 반응 및 병원성(hrp) 유전자 클러스터라고 불리는 박테리아 유전자의 그룹 중 하나에 의해 인코딩된 것으로 알려져 왔다. 배 및 사과에서 부란병(fire blight)를 유발하는, 박테리움 어위니아 아밀로보라 ( Erwinia amylovora ) (Ea)에서 hrp 클러스터가 해부되어 특정 식물에서 HR을 유발한 단일 단백질이 확인되었다. 당해 단백질은 하핀(및, 후에, 하핀Ea ) 이름이 부여되었으며 상응하는 유전자는 hrpN로 지정되었다. 이는 그와 같은 단백질 및 임의의 박테리아 종으로부터 확인된 유전자의 첫번째 예였다.
이후로 수많은 상이한 하핀 단백질이 다른 것들 중에서 어위니아, 슈도모나스, 랄스토니아, 크산토모나스, 및 판토에아 종으로부터 확인되어 왔다. 하핀 단백질은, 1차 아미노산 서열 수준에서 다양하지만, 공통의 생화학적 및 생체물리학적 특징 뿐만 아니라 생물학적 기능도 공유한다. 그것의 독특한 특성을 기반으로, 하핀 단백질은 문헌에서 단백질의 단일 부류에 속하는 것으로 고려되고 있다.
그것의 확인 및 단리에 이어서, 그 후에 하핀이 식물에서 질환 내성을 유발하고 식물 성장을 증가시킴이 발견되었다. 중요한 조기 발견은 정제된 하핀 단백질의 적용이 식물을 후속의 병원체 공격, 및 식물이 주사 부위로부터 매우 떨어진 위치에서 내성이 되도록 할 수 있다는 것이다. 이는 하핀 단백질이 전신 획득된 내성 (SAR), 다양한 바이러스, 박테리아, 및 진균 병원체에 대한 내성을 제공하는 식물 방어 메커니즘을 개시할 수 있음을 의미한다.
작물 보호에 있어서, 식물의 건강을 개선시키는 조성물에 대한 요구가 지속되고있다. 보다 건강한 식물은 이들이 더 나은 수율을 초래하고/하거나 더 나은 품질의 식물 또는 농작물을 생성하기 때문에 바람직하다. 보다 건강한 식물은 또한 항생제 및 비생물학적 스트레스를 더 잘 견딜 수 있다. 생물학적 스트레스에 대한 높은 내성은 결국 재배자가 적용된 살충제의 양을 감소시키고 결과적으로 각 살충제에 대한 내성의 발달을 지연시킬 수 있도록 한다.
하핀αβ 은 몇 개의 상이한 하핀으로부터 유도된 융합 단백질이다. 하핀αβ은 선충 알 생산을 억제하고, 식물의 성장, 품질 및 수율을 향상시키며, 심물의 활력을 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 그것의 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열은 다음에 상세히 기재되어 있다: U.S.공개 출원번호 제2010/0043095호.
현재까지, 하핀 및 하핀ab 생산 및 농업적 및 원예 적용에서 그것의 용도는 전분 상에 피복된 분말 고체로서 이루어져 왔다. 물 속에서 분말화된 하핀 단백질의 액체 현탁액은 유의미한 분해 및 활성의 손실 전에 단지 48 내지 72시간의 유효한 유효 기간을 가지므로, 이는 하핀 단백질의 용도 및 다능성을 제한한다. 하핀 용액을 사용한 또 다른 문제는 단백질 용해도 및 안정성이다.
수용액 속에서 쉽게 가용성이고, 화학 분해에 대해 안정하고 내성이 있으며 식물내에서 과민성 반응을 개시하는데 유용한 합성 및 유도체 하핀 펩타이드를 확인하는 것이 바람직할 수 있다.
본 발명은 당해 기술에서 이들 및 다른 제한을 극복하는 것을 지향한다.
발명의 요약
본 발명의 제1 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(L/I/V/F)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I) -X-X-(L/I/V/F)-(L/I/V/A)-X-X-(L/I) -(L/I/V/F) (서열식별번호: 93)
상기 펩타이드는 시스테인 및 메티오닌을 포함하지 않고; 2번 및 6번 위치에서 각 X는 선택적이고, 존재하는 경우, 임의의 아미노산이며; 3번, 7번, 10번, 및 11번 위치에서 각 X는 임의의 아미노산이다. 일 구현예에서, 2번 및 6번 위치 중 단 하나에서 X는 선택적이다. 특정 구현예에서, 서열식별번호: 93은 소수성 이중항(나타낸 바와 같이 L/I/V/F/A중 2개) 사이에 추가의 아미노산 잔기를 추가로 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 단리된 펩타이드는 하기에 대해 N-말단 또는 C-말단에 위치한 친수성 아미노산 서열을 추가로 포함한다: 서열식별번호: 93.
본 발명의 제2 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(L/I/V/F)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I) -X-X-(L/I/V/F)-(L/I/V/A)-X-X-(L/I) -(L/I/V/F) (서열식별번호: 93)
여기서, 상기 펩타이드는 시스테인 및 메티오닌을 포함하지 않고; 2번, 6번, 및 10번 위치에서 각 X는 선택적이고, 존재하는 경우, 임의의 아미노산이며; 3번, 7번, 및 11번 위치에서 각 X는 임의의 아미노산이다. 일 구현예에서, 2번, 6번, 및 10번 위치 중 단 하나에서 X는 선택적이다. 특정 구현예에서, 서열식별번호: 93은 소수성 이중항(나타낸 바와 같이 L/I/V/F/A중 2개) 사이에 추가의 아미노산 잔기를 추가로 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 단리된 펩타이드는 하기에 대해 N-말단 또는 C-말단에 위치한 친수성 아미노산 서열을 추가로 포함한다: 서열식별번호: 93.
본 발명의 제3 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
XXGISEKXXXXXXXXXXXXXXXX (서열식별번호: 1, P1/P4 공통),
여기서
1번 위치에서 X는 선택적이고 S, N, D, 이소D, G, A, 또는 S이며;
2번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
9번 위치에서 X는 L, I, F, 또는 V이고;
10번 위치에서 X는 선택적이고 D 또는 이소D이며;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
12번 위치에서 X는 M, L, I, 또는 F이며;
13번 위치에서 X는 M, L, 또는 I이고;
14번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 C, S, T, A, D, 이소D, K, 또는 Q이고;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
16번 위치에서 X는 M, L, I, V, 또는 F이며;
17번 위치에서 X는 M, L, I, A, 또는 V이고;
18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, M, T, 또는 K이며;
19번 위치에서 X는 A, D, 이소D, S, V, T, K, R, E, H, 또는 G이고;
20번 위치에서 X는 M, L, 또는 I이며;
21번 위치에서 X는 M, L, I, V, S, 또는 F이고;
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S이며;
23번 위치에서 X는 P, Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 1종 이상의 돌연변이 단리된 펩타이드의 수성 용해도, 안정성, 또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다.
본 발명의 제3 측면에 따른 펩타이드의 하나의 예시적인 패밀리는 하기의 아미노산 서열을 갖는다:
SXGISEKXXDXXXXXXXXAXXXP (서열식별번호: 2, P4 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
9번 위치에서 X는 L, A, D, 이소D, I, V, 또는 F이며;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
12번 위치에서 X는 L, D, 이소D, I, 또는 F이고;
13번 위치에서 X는 L, I, V, 또는 F이며;
14번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 C, S, 또는 T, S 또는 T, 또는 S만이고;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
16번 위치에서 X는 L, A, I, V, M, 또는 F이고;
17번 위치에서 X는 I, S, 또는 F이며;
18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
20번 위치에서 X는 L, I, V, 또는 F이며;
21번 위치에서 X는 L 또는 F이고;
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다.
특정 구현예에서, 본 발명의 제3 측면에 따른 이들 펩타이드는 본 발명의 제1 또는 제2 측면에 따른 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족한다.
본 발명의 제3 측면에 따른 펩타이드의 또 다른 예시적인 패밀리는 다음 아미노산 서열을 갖는다:
XXGISEKXLDXLLTXLIXALLXX (서열식별번호: 3, P1 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 N, D, 이소D, G, A, 또는 S이고;
2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
18번 위치에서 X는 M, T, K, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
23번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다.
특정 구현예에서, 본 발명의 제3 측면에 따른 이들 펩타이드는 본 발명의 제1 또는 제2 측면에 따른 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족한다.
본 발명의 제4 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) KPXDSXSXIAKLISXLIXSLLX (서열식별번호: 47, P15b/P20 공통), 여기서
3번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
15번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이며;
18번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
22번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다); 또는
(ii) IAKLISXLIXSLLX (서열식별번호: 12, P15/20 min 공통), 여기서
7번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이고;
10번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
14번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다,
특정 구현예에서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열과 관련하여 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상기 1종 이상의 돌연변이는 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 단리된 펩타이드의 수성 용해도, 안정성, 또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 제4 측면에 따른 펩타이드는 또한 본 발명의 제1 및 제2 측면에 따른 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족한다.
본 발명의 제5 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) PSPXTXXLXXIVGXILXAXN (서열식별번호: 66, P6/6a 공통), 여기서
4번 위치에서 X는 F 또는 Y이고;
6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
7번 위치에서 X는 선택적이고 L, M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K일 수 있고;
9번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이며;
10번 위치에서 X는 H 또는 N이고;
14번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 또는 이소D이며;
17번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
19번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다; 또는
(ii) XTXXLXXIVGXIL (서열식별번호: 135, P6/6a min 공통) (여기서
1번 위치에서 X는 F 또는 Y이고;
3번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
4번 위치에서 X는 선택적이고, 일 구현예에 따르면, M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K일 수 있거나; 또 다른 구현예에 따르면 L일 수 있고;
6번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이며;
7번 위치에서 X는 H 또는 N이고;
11번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 또는 이소D이다);
상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상기 1종 이상의 돌연변이는 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 단리된 펩타이드의 수성 용해도, 안정성, 또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 제5 측면에 따른 펩타이드는 본 발명의 제1 및 제2 측면에 따른 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족한다.
본 발명의 제6 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) XXXXXXLXXLLXXLVXLLK (서열식별번호: 13, P14d 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 Q, N, D, E, g-글루타메이트, 이소D, 또는 S일 수 있고;
2번 위치에서 X는 D, E, g-글루타메이트, 이소D일 수 있으며;
3번 위치에서 X는 P, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
4번 위치에서 X는 M, A, S, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
5번 위치에서 X는 Q, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
6번 위치에서 X는 A, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
8번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
9번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
12번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
13번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
16번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있다); 또는
(ii) LXXLLXXLVXLLK (서열식별번호: 14, P14d min 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
3번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
6번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
7번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있다.
특정 구현예에서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열과 관련하여 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상기 1종 이상의 돌연변이는 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 단리된 펩타이드의 수성 용해도, 안정성, 또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 제6 측면에 따른 펩타이드는 본 발명의 제1 및 제2 측면에 따른 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족한다.
본 발명의 제7 국면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) LXXL(L/M)XILXXLV (서열식별번호: 16, P25 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
3번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
6번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
9번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G이고;
10번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N이다; 또는
(ii) LXXVLXXL(L/M)XILXXLV (서열식별번호: 17, P25 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 T, S, A, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이고;
3번 위치에서 X는 G, T, S, A, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이며;
6번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
7번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
13번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G이고;
14번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고;
16번 위치에서 V는 선택적이다.
특정 구현예에서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열과 관련하여 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상기 1종 이상의 돌연변이는 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 단리된 펩타이드의 수성 용해도, 안정성, 또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 제7 측면에 따른 펩타이드는 본 발명의 제1 및 제2 측면에 따른 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족한다.
본 발명의 제8 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) XXXXXXXXXXX(L/M)XXLLXXLLXXLLXXX (서열식별번호: 21, P17/18), 여기서
1번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, N, 이소D, K, 또는 R이며;
5번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 D, 이소D, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, N, Q, K, 또는 R이고;
6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, 또는 K이며;
7번 위치의 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
8번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 T, Q, S, E, g-글루타메이트, A, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
9번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 E, g-글루타메이트, Q, S, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
13번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
14번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
17번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
18번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
21번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
22번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
25번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이며;
26번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
27번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이다; 또는
(ii) (L/M)XXLLXXLLXXLL (서열식별번호: 25, P17/18 min 공통) 여기서
2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이다;
상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상기 1종 이상의 돌연변이는 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 단리된 펩타이드의 수성 용해도, 안정성, 또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 제8 측면에 따른 펩타이드는 본 발명의 제1 및 제2 측면에 따른 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족한다.
본 발명의 제9 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
XLXX(L/M)LXLIXX(L/I/V/F/M) (L/I/V/F/M) (서열식별번호: 26, P19 공통) 여기서
1번 위치에서 X는 선택적이고 L, I, V, F, 또는 M이고;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 K이다.
특정 구현예에서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열과 관련하여 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상기 1종 이상의 돌연변이는 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 단리된 펩타이드의 수성 용해도, 안정성, 또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 제9 측면에 따른 펩타이드는 또한 본 발명의 제1 및 제2 측면에 따른 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족한다.
본 발명의 제10 측면은 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드이다:
(L/M)XXLLX(L/M)FXXI(L/M)XX (서열식별번호: 15, P3min 공통) 여기서
2번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
3번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
6번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
9번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
10번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고;
13번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
14번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있다.
특정 구현예에서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열과 관련하여 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상기 1종 이상의 돌연변이는 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 단리된 펩타이드의 수성 용해도, 안정성, 또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 제10 측면에 따른 펩타이드는 또한 본 발명의 제1 또는 제2 측면에 따른 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족한다.
본 발명의 제11 측면은 정제 태그, 용해도 태그, 또는 본 발명의 제1 내지 제10 측면중 하나에 따른 제2 펩타이드와 함께 본 발명의 제1 내지 제11 측면의 펩타이드 중 하나를 포함하는 융합 단백질에 관한 것이다.
본 발명의 제12 측면은 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 또는 제10 측면에 따른 1종 이상의 펩타이드, 또는 본 발명의 제11 측면에 따른 융합 단백질을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제13 측면은 식물에게 질환 내성을 부여하는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 다음을 포함한다: 본 발명의 유효량의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 또는 제10 측면에 따른 단리된 펩타이드, 본 발명의 제11 측면에 따른 융합 단백질, 또는 본 발명의 제12 측면에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 유전자좌에 적용시키는 단계, 상기 식물은 성장 중이거나 성장하는 것으로 예상되며, 상기 적용은 질환 내성을 부여하는데 효과적이다.
본 발명의 제14 측면은 식물 성장을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 다음을 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 또는 제10 측면에 따른 단리된 펩타이드, 본 발명의 제11 측면에 따른 융합 단백질, 또는 본 발명의 제12 측면에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 유전자좌에 적용시키는 단계, 상기 식물은 성장 중이거나 성장하는 것으로 예상되며, 상기 적용은 식물 성장을 향상시키는데 효과적이다.
본 발명의 제15 측면은 생물학적 스트레스 요인에 대한 식물의 내성 및 내성을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 다음을 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 또는 제10 측면에 따른 단리된 펩타이드, 본 발명의 제11 측면에 따른 융합 단백질, 또는 본 발명의 제12 측면에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 유전자좌에 적용시키는 단계, 여기서 식물은 성장 중이거나 성장하는 것으로 예상되며, 상기 적용은 해충 예컨대 곤충, 거미류, 선충, 잡초, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 생물학적 스트레스 인자에 대해 식물의 내성 및 내성을 증가시키는데 효과적이다.
본 발명의 제16 측면은 비생물학적 스트레스에 대한 식물의 내성을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 다음을 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 또는 제10 측면에 따른 단리된 펩타이드, 본 발명의 제11 측면에 따른 융합 단백질, 또는 본 발명의 제12 측면에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 유전자좌에 적용시키는 단계, 상기 식물은 성장 중이거나 성장하는 것으로 예상되며, 상기 적용은 염 스트레스, 물 스트레스(가뭄 및 홍수 포함), 오존 스트레스, 중금속 스트레스, 차가운 스트레스, 열 스트레스, 영양 스트레스(포스페이트, 칼륨, 질소 결핍), 표백 및 광-유도된 스트레스, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 비생물학적 스트레스 인자에 대한 식물의 내성을 증가시키는데 효과적이다.
본 발명의 제17 측면은 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 다음을 포함한다: 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 또는 제10 측면에 따른 단리된 펩타이드, 본 발명의 제11 측면에 따른 융합 단백질, 또는 본 발명의 제12 측면에 따른 조성물을 식물 또는 유전자좌에 적용시키는 단계, 상기 식물은 성장중이며, 상기 적용은 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는데 효과적이다.
본 발명의 제18 측면은 과일 또는 야채에 수확후 질환 또는 수확 후 건조 내성을 부여하는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 다음을 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 또는 제10 측면에 따른 단리된 펩타이드, 본 발명의 제11 측면에 따른 융합 단백질, 또는 본 발명의 제12 측면에 따른 조성물을 과일 또는 야채 또는 유전자좌를 포함하는 식물에 적용시키는 단계(상기 식물은 성장 중이다); 또는 유효량의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 수확된 과일 또는 야채에 적용하는 단계(상기 적용은 과일 또는 야채에 수확 후 질환 내성 또는 수확 후 건조 내성을 부여하는데 효과적이다).
본 발명의 제19 측면은 과일 또는 야채 성숙 수명을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 다음을 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 또는 제10 측면에 따른 단리된 펩타이드, 본 발명의 제11 측면에 따른 융합 단백질, 또는 본 발명의 제12 측면에 따른 조성물을 과일 또는 야채 또는 유전자좌를 함유하는 식물에 적용시키는 단계(상기 식물은 성장 중이다); 또는 유효량의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 수확된 과일 또는 야채에 적용시키는 단계, 상기 적용은 과일 또는 야채 성숙 수명을 향상시키는데 효과적이다.
본 발명의 제20 측면은 식물의 1종 이상의 생물학적 신호전달 공정을 조절하는방법에 관한 것이다. 당해 방법은 다음을 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 또는 제10 측면에 따른 단리된 펩타이드, 본 발명의 제11 측면에 따른 융합 단백질, 또는 본 발명의 제12 측면에 따른 조성물을 식물 또는 유전자좌에 적용시키는 단계, 상기 식물은 성장 중이고, 상기 적용은 1종 이상의 생화학적 신호전달 공정을 조절하는데 효과적이다.
본 발명의 제21 측면은 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 또는 제10 측면에 따른 폴리펩타이드 또는 본 발명의 제11 측면에 따른 융합 단백질을 인코딩하는 제1 핵산 분자; 및 제1 핵산 분자에 작동가능하게 커플링된 촉진제-유효한 핵산 분자를 포함하는 DNA 작제물에 관한 것이다. 본 발명의 당해 측면은 또한 DNA 작제물을 함유하는 재조합 발현 벡터, DNA 작제물을 함유하는 재조합 숙주세포 뿐만 아니라 본 발명의 재조합 식물 세포를 포함하는 형질전환 식물 또는 식물 종자(이는 DNA 작제물을 함유한다)를 포함한다.
본 발명의 제22 측면은 식물에 대해 질환 내성을 부여하거나, 식물 성장을 향상시키거나, 생물학적 스트레스 인자에 대해 내성 및 내성을 부여하거나, 비생물학적 스트레스에 대해 내성을 부여하거나, 식물 생화학적 신호전달을 조절함을 포함한다. 당해 방법은 본 발명의 제21 측면에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및 상기 식물을 DNA 작제물이 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 발현하여 질환 내성을 부여하거나, 식물 성장을 향상시키거나, 생물학적 스트레스에 대한 내성을 부여하거나, 비생물학적 스트레스에 대한 내성을 부여하거나, 또는 형질전환 식물에 대한 생화학적 신호전달을 조절하도록 하는데 효과적인 조건 하에서 성장시키는 단계를 포함한다.
본 발명의 제23 측면은 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하거나, 과일 또는 야채에 수거 후 질환 또는 수거 후 건조 내성을 부여하거나 과일의 수명 또는 야채 성숙을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 또는 제10 측면에 따른 폴리펩타이드를 코딩하는 제1 핵산 분자 또는 본 발명의 제11 측면에 따른 융합 단백질을 포함하는 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하고; 상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 발현시켜 트랜스제닉 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조내성을 부여하거나, 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 수거 후 질환 내성 또는 수거 후 건조 내성을 부여하거나, 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 대해 성숙 수명을 향상시킴을 포함한다.
본 발명의 제24 측면은 식물에게 질환 내성을 부여하거나, 식물 성장을 향상시키거나, 생물학적 스트레스인자에 대한 내성 및 내성을 부여하거나, 비생물학적 스트레스에 대한 내성을 부여하거나, 생화학적 신호전달을 조절하는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 본 발명의 제21 측면에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하고; 형질전환 식물 종자를 토양에 식재하며; 형질전환 식물 존자로부터 형질전환 식물을 증식시켜 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 발현하도록 함으로써 질환 내성을 부여하거나, 식물 성장을 향상시키거나, 생물학적 스트레스에 대한 내성을 부여하거나, 비생물학적 스트레스에 대한 내성을 부여함을 포함한다.
본 발명의 제25 측면은 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하거나, 과일 또는 야채에 수거후 질환 또는 수거후 건조 내성을 부여하거나 과일 또는 야채 성숙 수명을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 본 발명의 제21 측면에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하고; 형질전환 식물 종자를 토양에 식재하며; 형질전환 식물 종자로부터 형질전환 식물을 증식시켜 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하도록 함으로써 형질전환 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조내성을 부여하거나, 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 수거후 질환 내성 또는 건조 내성을 부여하거나, 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 대한 성숙 수명을 향상시킴을 포함한다.
개선된 용해도, 안정성, 화학 분해에 대한 내성, 또는 이들 특성의 조합을 나타내는 HR-유발 펩타이드를 제공함으로써, 재배자가 HR-유발 펩타이드를 함유하는 조성물의 유효량을 제조하고, 취급하며, 경작지 또는 온실내 식물에게 전달하는데 있어서 보다 큰 가동성을 제공할 것이다. 재배자를 위한 적용 공정의 간소화는 보다 더 큰 순응도로 이어지며, 따라서, 질환 내성, 성장 향상, 생물학적 스트레스인자에 대한 내성 및 내성, 비생물학적 스트레스에 대한 내성, 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대한 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대한 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대한 과일 또는 야채의 개선된 성숙 수명 중의 1종 이상과 관련하여 개선된 결과를 가져올 것이다. 이들 및 다른 이점은 본 명세서에 기재되어 있다.
도면의 간단한 설명
도 1은 탈이온수에 용해된 펩타이드 P1 및 P1 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1 (서열식별번호: 4); P1-18A (서열식별번호: 44); P1-18K (서열식별번호: 45); 및 P1-18T (서열식별번호: 42). 1*에 대한 곡선은 1일 시점에서 P1의 100%에 대해 정규화되며; 1**는 최초 P1 데이터이다.
도 2는 50 mM 시트레이트, pH 5.6에 용해된 펩타이드 P1 및 P1 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1, P1-18A, P1-18K, 및 P1-18T. 1*에 대한 곡선은 1일 시점에서 P1의 100%에 대해 정규화되며; 1**는 최초 P1 데이터이다.
도 3은 50 mM MES, pH 6에 용해된 펩타이드 P1 및 P1 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1, P1-18A, P1-18K, 및 P1-18T. 1*에 대한 곡선은 1일 시점에서 P1의 100%에 대해 정규화되며; 1**는 최초 P1 데이터이다.
도 4는 50 mM MOPS, pH 6.5에 용해된 펩타이드 P1 및 P1 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1, P1-18A, P1-18K, 및 P1-18T.
도 5는 50 mM 시트레이트, pH 7.2에 용해된 펩타이드 P1 및 P1 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1, P1-18A, P1-18K, 및 P1-18T.
도 6은 50 mM EDDS, pH 7.3에 용해된 펩타이드 P1 및 P1 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1, P1-18A, P1-18K, 및 P1-18T.
도 7은 50 mM 이미다졸, pH 7.5에 용해된 펩타이드 P1 및 P1 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1, P1-18A, P1-18K, 및 P1-18T.
도 8은 50 mM EDTA, pH 8에 용해된 펩타이드 P1 및 P1 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1, P1-18A, P1-18K, 및 P1-18T.
도 9는 포스페이트, pH 8.0에 용해된 펩타이드 P1 및 P1 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1, P1-18A, P1-18K, 및 P1-18T.
도 10은 50 mM TES, pH 8.0에 용해된 펩타이드 P1 및 P1 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1, P1-18A, P1-18K, 및 P1-18T.
도 11은 탈이온수에 용해된 펩타이드 P4 및 P4 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1, P1-18A, P1-18K, 및 P1-18T.
도 12는 50 mM 시트레이트, pH 5.6에 용해된 펩타이드 P4 및 P4 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P4 (서열식별번호: 5); P4-14A (서열식별번호: 136); P4-14D (서열식별번호: 137); P4-14K (서열식별번호: 138); P4-14Q (서열식별번호: 139); 및 P4-14S (서열식별번호: 6).
도 13은 50 mM MES, pH 6에 용해된 펩타이드 P4 및 P4 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P4, P4-14A, P4-14D, P4-14K, P4-14Q, 및 P4-14S.
도 14는 50 mM MOPS, pH 6.5에 용해된 펩타이드 P4 및 P4 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P4, P4-14A, P4-14D, P4-14K, P4-14Q, 및 P4-14S.
도 15는 50 mM 시트레이트, pH 7.2에 용해된 펩타이드 P4 및 P4 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P4, P4-14A, P4-14D, P4-14K, P4-14Q, 및 P4-14S.
도 16은 50 mM EDDS, pH 7.3에 용해된 펩타이드 P4 및 P4 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P4, P4-14A, P4-14D, P4-14K, P4-14Q, 및 P4-14S.
도 17은 50 mM 이미다졸, pH 7.5에 용해된 펩타이드 P4 및 P4 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P4, P4-14A, P4-14D, P4-14K, P4-14Q, 및 P4-14S.
도 18은 50 mM EDTA, pH 8에 용해된 펩타이드 P4 및 P4 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P4, P4-14A, P4-14D, P4-14K, P4-14Q, 및 P4-14S.
도 19는 포스페이트, pH 8에 용해된 펩타이드 P4 및 P4 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P4, P4-14A, P4-14D, P4-14K, P4-14Q, 및 P4-14S.
도 20은 50 mM TES, pH 8에 용해된 펩타이드 P4 및 P4 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P4, P4-14A, P4-14D, P4-14K, P4-14Q, 및 P4-14S.
도 21은 30% 이소프로판올, 5 mM DTPA, 0.5% 나트륨 티오설페이트, 및 50 mM TES pH 8에 용해된 펩타이드 P4 및 P4 돌연변이체의 안정성의 비교를 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P4, P4-14A, P4-14D, P4-14K, P4-14Q, 및 P4-14S
도 22는 50 mM TES pH 8에 용해된 다양한 펩타이드의 안전성의 비교를 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P1 (서열식별번호: 4); P4-14S (서열식별번호: 6); P1-1S (서열식별번호: 109); P1-14S (서열식별번호: 110); P1-18Q (서열식별번호: 115); 및 P1-23P (서열식별번호: 118).
도 23은 다음의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다: 펩타이드 P18 (서열식별번호: 83) (MES pH 6, MOPS pH 6.5, EDDS pH 7.3, 이미다졸 pH 7.5, 또는 EDTA pH 8에 용해됨).
도 24는 50 mM EDTA, pH 8에 용해된 펩타이드 P18 및 P18 돌연변이체의 용해도 및 안정성 시험을 나타낸다. 하기 펩타이드가 나타나 있다: P18 (서열식별번호: 83), P18-1 (서열식별번호: 163), 및 P18-4 (서열식별번호: 164).
도 25는 다음의 안정성 시험을 나타낸다: 펩타이드 P19 (서열식별번호: 89) 및 P19-20L (서열식별번호: 90) 돌연변이체(50 mM 시트레이트, pH 7.2에 용해됨).
도 26은 다음의 안정성 시험을 나타낸다: 펩타이드 P19 (서열식별번호: 89) 및 P19-20L (서열식별번호: 90) 돌연변이체(50 mM TES, pH 8.0에 용해됨).
상세한 발명의 설명
본 발명의 일 국면은 식물에서 과민성 반응을 유도하고 하기 속성 중 1종 이상을 부여하는 베공하는 활성 식물 반응을 촉진하는 능력을 지닌 신규 펩타이드에 관한 것이다: 질환 내성, 성장 향상, 생물학적 스트레스인자에 대한 내성 및 내성, 비생물학적 스트레스에 대한 내성, 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대한 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 체소류에 대한 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대한 과일 또는 야채 성숙의 개선된 수명.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 천연 발생 아미노산은 하기 목록에 따른, 아미노산의 통속명에 상응하는 종래의 3-문자 및/또는 1-문자 약어를 통해 확인된다: 알라닌 (Ala, A), 아르기닌 (Arg, R), 아스파라긴 (Asn, N), 아스파르트산 (Asp, D), 시스테인 (Cys, C), 글루탐산 (Glu, E), 글루타민 (Gln, Q), 글리신 (Gly, G), 히스티딘 (His, H), 이소류신 (Ile, I), 류신 (Leu, L), 라이신 (Lys, K), 메티오닌 (Met, M), 페닐알라닌 (Phe, F), 프롤린 (Pro, P), 세린 (Ser, S), 트레오닌 (Thr, T), 트립토판 (Trp, W), 티로신 (Tyr, Y), 및 발린 (Val, V). 다음 약어는 펩타이드에서 허용되며 생화학적 명명법에서 IUPAC-IUB 위원회에 의해 권고되어 있다. 아미노산의 천연 발생 변화는, 비제한적으로, 감마-글루타메이트 (g-Glu) 및 이소아스파르테이트 (이소-Asp 또는 isoD)를 포함한다.
용어 “아미노산”은 추가로, 본원에 언급된 임의의 특수 아미노산의 유사체, 유도체, 및 동류뿐만 아니라, C-말단 또는 N-말단 보호된 아미노 산 유도체 (예를 들면, N-말단, C-말단, 또는 측쇄 보호 그룹, 예를 들면, 비제한적으로 아세틸화, 포르밀화, 메틸화, 아미드화, 에스테르화, 페길화로 변형되고, 지질이 부가된)를 포함한다. 비-천연 발생 아미노산은 잘 알려져 있으며 아래에서 기재된 바와 같은 고상 합성을 사용하여 본 발명의 펩타이드내로 도입될 수 있다. 더욱이, 용어 “아미노산”은 D- 및 L-아미노산 둘 다를 포함한다. 그러므로, 그것의 이름, 3 문자 또는 1문자 기호에 의해 본원에 확인되고 D 또는 L 입체배치를 가진 것으로 구체적으로 확인되지 않은 아미노산은 D 또는 L 입체배치중 임의의 하나를 추정하는 것으로 이해된다. 일 구현예에서, 펩타이드는 모든 L-아미노산을 포함한다.
특정 구현예에서, 펩타이드는 인용된 서열”로 구성된” 것으로 확인되며, 이 경우에 펩타이드는 이의 N- 또는 C-말단에서 임의의 이질적인 아미노산을 제외한 인용된 아미노산 서열(들) 만을 포함한다. 인용된 서열이 공통 서열의 형태인 정도로(여기서 주목된 X 또는 Xaa 잔기의 1종 이상은 1종 이상의 아미노산중 어느 것일 수 있다), 다중 펩타이드 서열은 그와 같은 인용된 서열로 구성된 펩타이드에 포함된다.
특정 다른 구현예에서, 펩타이드는 인용된 서열로 “본질적으로 구성된” 것으로 확인되며, 이 경우에 상기 펩타이드는 이의 N- 및/또는 C-말단에서 임의로 1종 이상의 이질적인 아미노산을 지닌 인용된 아미노산 서열(들)을 포함하며, 이러한 이질적인 아미노산은 하기 특성의 1종 이상을 물질적으로 변경시키지 않는다: (i) 식물에서 과민성 반응을 유도하는 펩타이드의 능력, (ii) 물 또는 수용액에서 펩타이드의 용해도, (iii) 다음에서 물 또는 수용액에 용해된 펩타이드의 안정성: 50 ℃ 에서 일정 시간(예를 들면,3 주), 및 (iv) 다음을 포함하는 수성 완충된 용액의 존재하에서 화학 분해에 대한 펩타이드의 내성: 살생 제제 (예를 들면,Proxel®GXL) (50 ℃ 에서 일정 기간(예를 들면,3 주).
간단히, 펩타이드의 안정성 및 화학 분해에 대한 내성은 초기 순도가 적어도 약 80%, 적어도 약 82%, 적어도 약 84%, 적어도 약 86%, 적어도 약 88%, 적어도 약 90%, 적어도 약 92%, 적어도 약 94%, 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 98%인 펩타이드 샘플을 사용하여 아래와 같이 평가된다. 물 안정성의 경우, 펩타이드는 탈이온수에 직접 용해된다. 화학 분해 시험의 경우, 펩타이드는 50 mM pH 버퍼 및 0.25% 프록셀 GXL을 함유하는 수용액에 용해된다. 예시적인 pH 버퍼는 비제한적으로 다음을 포함한다: (i) 시트레이트 pH 5.6; (ii) MES pH 6.2; (iii) MOPS pH 6.5; (iv) 이미다졸 pH 7.0; (v) 시트레이트 pH 7.2; (vi) EDDS, pH 7.3; (vii) EDTA pH 8.0; (viii) 인산나트륨 pH 8.0; 또는 (ix) TES pH 8.0.펩타이드는 우선 0.5 mg/ml의 농도에서 수용액에 용해된다. 샘플은 50 ℃ 에서 인큐베니션되어 가속화된 분해를 허용한다. 펩타이드의 초기 샘플은 제거되고, 물로 10x 희석되며, 역상 HPLC로 분해된다. 간단히, 20 μl의 샘플을 HPLC 기기의 용매 유동에 주입하고 물/아세토니트릴중 트리에틸아민 포스페이트 구배 또는 물중 0.1% TFA / 아세토니트릴중 0.1% TFA 구배를 사용하여 상이한 펩타이드 종을 분리함으로써 C18 HPLC 칼럼(YMC ProPack C18, YMC, Japan, 또는 C18 Stablebond, Agilent Technologies, USA)에서 분석한다. 펩타이드의 용출을 218 nm에서 UV 흡광도로 로 모니터링하고 피크하 영역을 기반으로 정량화한다. 초기 펩타이드 샘플에 대한 피크하 영역을 후속의 작업에서 상대적인 정량화를 위한 표준으로서 처리한다. 규칙적 간격(예를 들면,1, 3, 7, 10, 14, 17, 및 21일)에서, 각 펩타이드 샘플을 조사하고 상기에서 기재된 바와 같이 HPLC로 분석한다. 분해를 관찰하는데 필요한 경우(즉, 펩타이드가 고도의 화학 안정성을 나타내는 경우), 당해 프로토콜을 몇 주까지 연장시켜 분해를 관찰한다. 후속의 펩타이드 작업의 정량화는 최초 (0 일째) HPLC 결과의 퍼센트로 나타낸다.
물 또는 수용액 속에서 적어도 부분적으로 가용성인 펩타이드는 0.1 mg/ml, 바람직하게는 적어도 약 1.0 mg/ml보다 높은, 적어도 약 2.0 mg/ml, 적어도 약 3.0 mg/ml, 또는 적어도 약 4.0 mg/ml의 용해도를 나타낸다. 특정 구현예에서, 펩타이드는 물 또는 수용액 속에서 높은 용해도, 적어도 약 5.0 mg/ml, 적어도 약 10.0 mg/ml, 적어도 약 15.0 mg/ml, 또는 적어도 약 20 mg/ml의 용해도를 나타낸다.
물 또는 수용액에서 안정한 펩타이드는 50 ℃에서 인큐베이션된 지정된 기간에 걸쳐 최초 펩타이드 농도의 적어도 약 66%, 적어도 약 68%, 적어도 약 70%, 적어도 약 72 %, 적어도 약 74 %, 적어도 약 76%, 적어도 약 78%, 적어도 약 80%, 적어도 약 82%, 적어도 약 84%, 적어도 약 86%, 적어도 약 88%, 또는 적어도 약 90%를 나타낸다. 특정 구현예에서, 상기 지정된 기간은 3일, 7일, 14일, 21일, 28일, 1개월, 2개월, 또는 3개월이다.
화학 분해에 대해 내성이 있는 펩타이드는 50 ℃에서 인큐베이션된 지정된 기간에 걸쳐 최초 펩타이드 농도의 적어도 약 66%, 적어도 약 68%, 적어도 약 70%, 적어도 약 72 %, 적어도 약 74 %, 적어도 약 76%, 적어도 약 78%, 적어도 약 80%, 적어도 약 82%, 적어도 약 84%, 적어도 약 86%, 적어도 약 88%, 또는 적어도 약 90%를 나타낸다. 특정 구현예에서, 상기 지정된 기간은 3일, 7일, 14일, 21일, 28일, 1개월, 2개월, 또는 3개월이다.
식물 조직에 대해 펩타이드의 침윤 또는 적용 시 과민성 반응을 유도하거나 유도하지 않는 펩타이드의 특성은 건조 분말 형태 또는 용액 형태의 상기 펩타이드를 특히 배타적으로 식물 잎에서 만이 아닌 식물에 적용하여 측정할 수 있다. 적용율은 액체 용액의 경우 1-500 ug/ml 및 분말 적용의 경우 0.0001 - 0.5% (w/w)를 포함한다. 용액 형태의 펩타이드의 예시적인 적용은 첨부된 실시예에 기재되어 있다. 식물이 48시간내 영향받은 조직의 시들음 및 갈변을 동반하면서, 나안으로 가시성인 광범위한 거시적인 세포 사멸을 나타내는 경우, 이들은 HR-양성(“HR+”)으로 고려된다. 식물이 나안으로 관찰가능한 인식할 수 있는 시들음 또는 조직 사멸을 나타내지않는 경우, 이들은 HR-음성 (“HR-”)으로 고려된다.
특정 구현예에서, 1종 이상의 특성의 물질 변경은 1종 이상의 이질적인 아미노산을 지닌 펩타이드를 1종 이상의 이질적인 아미노산을 결여하는 다른 동일한 펩타이드와 비교하는 경우 인용된 특성에 있어서 20% 미만의 변화, 15% 미만의 변화, 10% 미만의 변화, 또는 5% 미만의 변화가 있는 경우를 의미하는 것으로 의도된다. 특정 구현예에서, N- 또는 C-말단에서 다수의 이질적인 아미노산은 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 20개 아미노산, 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 15 아미노산, 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 10개의 아미노산, 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 7개 아미노산, 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 5개의 아미노산, 또는 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 3개의 아미노산이다. 또한, 인용된 서열이 공통 서열의형태로 존재하는 정도까지(여기서 나타낸 X 또는 Xaa 잔기의 1종 이상은 1종 이상의 아미노산중 어느것일 수 있다), 다중 펩타이드 서열은 이의 N- 및/또는 C-말단에서 이질적인 아미노산의 존재에 의해 영향받은 이러한 서열의 추가의 변화없이, 본질적으로 그와 같은 인용된 서열로 구성된 펩타이드에 의해 포함된다.
본 발명의 다양한 구현예에서, 개시된 펩타이드는 예를 들면, 지정된 펩타이드 서열의 N-말단 또는 C-말단에서 친수성 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 친수성 아미노산 서열은 길이가 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 또는 적어도 10개의 아미노산이고, 지정된 펩타이드(즉, 활성 식물 반응을 유도하는 펩타이드)의 아미노산 서열에 인접한 아미노산 서열의 친수성 특성이 기여하는 아미노산 잔기를 포함한다. 상이한 방법이 당해 기술에 사용되어 아미노산 잔기 및 단백질의 상대적 소수성/친수성을 계산하여 왔다(Kyte 등, “A Simple Method for Displaying the Hydropathic Character of a Protein,” J.Mol. Biol. 157:105-32 (1982); Eisenberg D, “Three-dimensional Structure of Membrane and Surface Proteins,” Ann. Rev. Biochem .53:595-623 (1984); Rose 등, “Hydrogen Bonding, Hydrophobicity, Packing, and Protein Folding,” Annu.Rev.BioMol. Struct. 22:381-415 (1993); Kauzmann, “Some Factors in the Interpretation of Protein Denaturation,” Adv .Protein Chem . 14:1-63 (1959) (이들은 그 전체가 참고로 편입되어 있다). 이들 소수성 규모중 임의의 하나가 본 발명을 위해 사용될 수 있으나; Kyte-Doolittle 소수성 규모가 아마도 가장 흔히 참고된 규모이다. 이들 소수성 규모는 아미노산 잔기의 상대적인 소수성에 대한 순위 목록을 제공한다. 예를 들면, 친수성에 기여하는 아미노 산은 Arg (R), Lys (K), Asp (D), Glu (E), Gln (Q), Asn (N), 및 His (H) 뿐만 아니라, 더 적은 정도이지만, Ser (S), Thr (T), Gly (G), Pro (P), Tyr (Y), 및 Trp (W)도 포함한다. 예를 들면, 폴리글루타메이트 서열은 단백질 및 다른 약물 분자의 용해도를 향상시키는데 사용될 수 있다(Lilie 등, Biological Chemistry 394(8):995-1004(2013); Li 등, Cancer Research 58:2404-2409(1998)) (이들 각각은 그 전체가 참고로 편입된다).
단백질 또는 아미노산 서열의 “소수성 지수”는 이의 평균 친수성 또는 소수성 특성을 나타내는 숫자이다. 음성 소수성 지수는 목적한 아미노산 서열의 친수성을 정의한다. 소수성 지수는 목적한 아미노산 서열의 친수성에 직접적으로 비례하므로; 지수가보다 음성일수록, 이의 친수성은 더 크다. 특정 구현예에서, 위에서 기술된 부가된 친수성 아미노산 서열은 0, -0.4, -0.9, -1.3, -1.6, -3.5, -3.9, 또는 -4.5 미만의 소수성 지수를 갖는다. 특정 구현예에서, 수득한 전체 펩타이드는 소수성 지수가 0.3, 0.2, 0.1, 또는 0.0 미만, 바람직하게는 -0.1, -0.2, -0.3, -0.4 미만, 더 바람직하게는 -0.5, -0.6, -0.7, -0.8, -0.9, 또는 -1.0 미만일 것이다.
본 발명의 펩타이드에서, 펩타이드 전체적으로 또는 부가된 친수성 아미노산 서열에 대해 친수성 소수성 지수에 기여하는 아미노산은 Arg (R), Lys (K), Asp (D), Glu (E), Gln (Q), Asn (N), His (H), Ser (S), Thr (T), Gly (G), Pro (P), Tyr (Y), 및 Trp (W)를 포함한다. 이들 중, Asp (D), Glu (E), Gln (Q), Asn (N) 또는 그것의 변이체가 바람직하다. 예시적인 변이체는 Glu의 경우 g-글루타메이트 및 Asp의 경우 이소아스파르트산 (또는 isoD)를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 본 발명의 이들 및 다른 측면에서, 용어 “소수성 아미노산” 은 지정된 아미노산 서열의 소수성 지수에 대해 소수성을 부여하는 아미노산을 말하는 것으로 의도된다. 전체적으로 펩타이드 또는 이의 특정한 아미노산 서열에 대해 소수성 소수성 지수에 기여하는 아미노산은 Ile (I), Val (V), Leu (L), Phe (F), Cys (C), Met (M), 및 Ala (A)을 포함한다. 특정 구현예에서, 용어 “소수성 아미노산”은 Ile (I), Val (V), Leu (L), Phe (F), Cys (C), Met (M), 및 Ala (A)중의 임의의 하나; 또는 대안적으로, Ile (I), Val (V), Leu (L), Phe (F), 및 Ala (A) 중의 임의의 하나를 언급할 수 있다. 특정 다른 구현예에서, 용어 “소수성 아미노산”은 Ile (I), Val (V), Leu (L), 및 Phe (F) 중 하나를 말할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 “비-소수성 아미노산”은 상기-확인된 소수성 규모들 중 하나에서 친수성(또는 소수성이 아닌)인 아미노산을 의미하는 것으로 의도된다. 당해 용어는 일반적으로 펩타이드 전체 또는 부가된 친수성 아미노산 서열에 대해 친수성 소수성 지수에 기여하는 아미노산을 말한다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 펩타이드는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
(L/I/V/F)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I) -X-X-(L/I/V/F)-(L/I/V/A)-X-X-(L/I) -(L/I/V/F) (서열식별번호: 93)
상기 펩타이드는 시스테인 및 메티오닌을 포함하지 않으며; 2 및 6번 위치에서 각각의 X는 선택적이고 및, 존재하는 경우, 임의의 아미노산, 예를 들면 임의의 천연 발생 아미노산이며; 3, 7, 10, 및 11번 위치에서 각각의 X는 임의의 아미노산, 예를 들면, 임의의 천연 발생 아미노산이다.
본 발명의 관련된 측면에서, 상기 펩타이드는 하기의 아미노산 서열을 포함한다: 서열식별번호 93 (상기 나타냄), 상기 펩타이드는 시스테인 및 메티오닌을 포함하지 않고; 2, 6, 및 10번 위치에서 각각의 X는 선택적이고, 존재하는 경우, 임의의 아미노산, 예를 들면, 임의의 천연 발생 아미노산이며; 3, 7, 및 11번 위치에서 각각의 X는 임의의 아미노산, 예를 들면, 임의의 천연 발생 아미노산이다.
일 구현예에 따르면, 2, 6, 및 10번 위치에서 1종 이상의 X는 존재하지 않고 (즉, 제1 소수성 아미노산과 제1 소수성 아미노산 이중항 사이의 갭은2개에서 1개의 아미노산 잔기로 감소되고/되거나 제1과 제2의 소수성 아미노산 이중항 사이의 갭은 2개에서 1개의 아미노산 잔기로 감소하고/하거나 제2와 제3의 소수성 아미노산 이중항 사이의 갭은 2에서 1개의 아미노산 잔기로 감소한다). 이 구현예에서, 이들 펩타이드는 2, 6, 및 10번 위치중 단지 하나에서 아미노산을 포함하지 않음이 고려된다.
대안적인 구현예에서, 2 및 6번 위치 둘 다에서 X는 존재한다 (즉, 소수성 아미노산 사이의 갭은 위치 두 다에서 아미노산 잔기에서 유지된다).
또 다른 구현예에서, 2, 6, 및 10번 위치 각각에서 X는존재한다(즉, 소수성 아미노산 사이의 갭은 각 위치에서 2개의 아미노산 잔기에서 유지된다).
특정 구현예에서, 서열식별번호: 93은 소수성 이중항(나타낸 바와 같이, L/I/V/F/A 중 2개) 사이에 추가의 아미노산 잔기를 포함할 수 있고 추가의 아미노산은 임의의 아미노산일 수 있다. 이들 구현예에서, 제1 소수성 이중항 사이의 갭은 3개의 아미노산이고, 제1 및 제2 소수성 이중항 사이의 갭은 3개의 아미노산이며, 제2 및 제3의 소수성 이중항 사이의 갭은 3개의 아미노산, 또는 이들의 조합이다.
이 구현예에서 펩타이드 길이는 100개 미만의 아미노산, 또는 대안적으로 90 개 미만의 아미노산, 80 개 미만의 아미노산, 70 개 미만의 아미노산, 60 개 미만의 아미노산, 또는 약 50 개 미만의 아미노산이다. 특정 구현예에서, 펩타이드 길이는 13 내지 약 50개 아미노산 사이의 길이이다.
상기 기재된 구현예에서, 여기서, 다음의 2, 3, 6, 7, 10, 및 11번 위치에서 X(존재하는 경우): 서열식별번호: 93은 임의의 아미노산일 수 있고, 특정 구현예에서 이들 잔기는 천연적으로 친수성이다. 상기에서 기재된 바와 같이, 이들 친수성 아미노산은 Arg (R), Lys (K), Asp (D), Glu (E), Gln (Q), Asn (N), His (H), Ser (S), Thr (T), Gly (G), Pro (P), Tyr (Y), 및 Trp (W)를 포함한다. 이들 중, Asp (D), Glu (E), Gln (Q), Asn (N) 또는 그것의 변이체가 바람직하다. 예시적인 변이체는 Glu의 경우 g-글루타메이트 및 Asp의 경우 이소아스파르트산 (또는 isoD)를 포함한다.
이 구현예에서, 상기 단리된 펩타이드는 물 속에 용해되는 경우 안정하고/하거나; 상기에서 기재된 바와 같이, pH 버퍼 및 살생물제의 존재하에서 수성 조건에서 화학 분해에 대해 내성이고/이거나; 수용액 속에서 적어도 약 1.0 mg/ml의 용해도를 갖는다.
본 발명의 또 다른 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
XXGISEKXXXXXXXXXXXXXXXX (서열식별번호: 1, P1/P4 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 선택적이고 S, N, D, 이소D, G, A, 또는 S이며;
2번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
9번 위치에서 X는 L, I, F, 또는 V이고;
10번 위치에서 X는 선택적이고 D 또는 이소D이며;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
12번 위치에서 X는 M, L, I, 또는 F이며;
13번 위치에서 X는 M, L, 또는 I이고;
14번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 C, S, T, A, D, 이소D, K, 또는 Q이고;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
16번 위치에서 X는 M, L, I, V, 또는 F이며;
17번 위치에서 X는 M, L, I, A, 또는 V이고;
18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, M, T, 또는 K이며;
19번 위치에서 X는 A, D, 이소D, S, V, T, K, R, E, g-글루타메이트, H, 또는 G이며;
20번 위치에서 X는 M, L, 또는 I이며;
21번 위치에서 X는 M, L, I, V, S, 또는 F이고;
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S이며;
23번 위치에서 X는 P, Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 1종 이상의 돌연변이 단리된 펩타이드의 수성 용해도, 안정성, 또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다.
특정 구현예에서, 본 발명의 제2 측면에 따른 이들 펩타이드는 또한 다음의 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족한다: 서열식별번호: 93, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기는 존재하지 않는다.
이 구현예에서, 본 발명의 펩타이드의 특성을 비교하기 위한 목적의, 상응하는 야생형 아미노산 서열은 다음을 포함하는 폴리펩타이드 또는 다음의 아미노산 서열로 구성된 펩타이드이다: NQGISEKQLDQLLTQLIMALLQQ (P1, 서열식별번호: 4) 또는 SQGISEKQLDQLLCQLIQALL (서열식별번호: 5의 아미노산 1-21, P4). P1 (서열식별번호: 4)는 다음의 전장 단백질로부터 유도된다: 크산토모나스 하핀 HpaG (Kim 등, “Mutational Analysis of Xanthomonas Harpin HpaG Identifies a Key Functional Region That Elicits the Hypersensitive Response in Nonhost Plants,” J. Bacteriol .186(18):6239-6247 (2004) (이는 그 전체가 참고로 편입된다). P4 (서열식별번호: 5)는 다음의 전장 하핀으로부터 유도된다: 크산토모나스 오리자에 pv. 오리자에 (Ji 등, “Two Coiled-Coil Regions of Xanthomonas oryzae pv.Oryzae Harpin Differ in Oligomerization and Hypersensitive Response Induction,” Amino Acids 40:381-392 (2011) (이는 그 전체가 참고로 편입된다).
이 구현예에서, 상기 단리된 펩타이드는 물 속에 용해되는 경우 안정하고/하거나; 상기에서 기재된 바와 같이, pH 버퍼 및 살생물제의 존재하에서 수성 조건에서 화학 분해에 대해 내성이고/이거나; 수용액 속에서 적어도 약 1.0 mg/ml의 용해도를 갖는다.
당해 제2 측면에 따른 펩타이드의 길이는 바람직하게는 약 100개 미만의 아미노산, 또는 대안적으로 90개 미만의 아미노산, 80개 미만의 아미노산, 70개 미만의 아미노산, 60개 미만의 아미노산, 또는 약 50개 미만의 아미노산이다. 특정 구현예에서, 펩타이드 길이는 23 내지 약 50개 아미노산 길이이다.
본 발명의 제2 측면에 따른 펩타이드의 하나의 예시적인 패밀리는 다음의 아미노산 서열을 갖는다:
SXGISEKXXDXXXXXXXXAXXXP (서열식별번호: 2, P4 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
9번 위치에서 X는 L, A, D, 이소D, I, V, 또는 F이며;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
12번 위치에서 X는 L, D, 이소D, I, 또는 F이고;
13번 위치에서 X는 L, I, V, 또는 F이며;
14번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 C, S, 또는 T, S 또는 T, 또는 S만이고;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
16번 위치에서 X는 L, A, I, V, M, 또는 F이고;
17번 위치에서 X는 I, S, 또는 F이며;
18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
20번 위치에서 X는 L, I, V, 또는 F이며;
21번 위치에서 X는 L 또는 F이고;
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다.
특정 구현예에서, 서열식별번호: 2에 따른 이들 펩타이드는 또한 서열식별번호: 93의 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족하며, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기는 존재하지 않는다. 따라서, 이들 구현예에서, 14번 위치에서 X는 S 또는 T, 바람직하게는 S이다.
서열식별번호: 2과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드, 또는 서열식별번호: 2으로부터 유도된 펩타이드 및 서열식별번호: 93의 공통 구조를 충족하는 펩타이드이 하기 표 1에서 확인된다:
표 1: 펩타이드 P4의 펩타이드 변이체 (서열식별번호: 5)
Figure pct00001
Figure pct00002
표 1에서 선택된 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸, 가용성 태그, 예를 들면, SEEEEE, SEE, EEEEE, EE, RRRRRGG, KKKKKGG, GGKKKKK, 및 GGRRRRR를 포함한다. 표 1에 나타나 있으며 이들의 특이적인 용해도 태그를 결여한(또는 상이한 용해도 태그를 가진) 서열을 포함하는 펩타이드가 또한 본원에서 고려된다.
전술한 바와 같이, 펩타이드 P4 (서열식별번호: 5)는 크산토모나스 오리자에 pv. 오리자에의 하핀으로부터 유도된다 (Ji 외, “Two Coiled-Coil Regions of Xanthomonas oryzae pv.Oryzae Harpin Differ in Oligomerization and Hypersensitive Response Induction,” Amino Acids 40:381-392 (2011) (이는 그 전체가 참고로 편입된다). Ji 등은 아미노산 서열 SQGISEKQLDQLLCQLIQALL (즉, 서열식별번호: 5의 아미노산 1-21)을 갖는 당해 하핀의 단편을 기재한다. 특정 구현예에서, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드는 전체 길이가 약 100개 미만인 아미노산(즉, 길이가 23개 아미노산으로부터 최대 약 100개의 아미노산)인 펩타이드이다. 특정 다른 구현예에서, 단리된 펩타이드는 서열식별번호: 5로 본질적으로 구성되고, 반면에 또 다른 구현예에서 단리된 펩타이드는 서열식별번호: 5로 구성된다.
본 발명의 제2 측면에 따른 펩타이드의 또 다른 예시적인 패밀리는 하기의 아미노산 서열을 갖는다:
XXGISEKXLDXLLTXLIXALLXX (서열식별번호: 3, P1 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 N, D, 이소D, G, A, 또는 S이고;
2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
18번 위치에서 X는 M, T, K, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
23번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다.
특정 구현예에서, 서열식별번호: 3에 따른 이들 펩타이드는 또한 서열식별번호: 93의 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족하며, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기는 존재하지 않는다. 따라서, 이들 구현예에서, 18 번 위치에서 X는 T, K, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다.
특정 구현예에서, 서열식별번호: 3의 구조를 공유하는 펩타이드는 서열식별번호: 3의 2, 8, 11, 15, 22, 및 23번 위치에서 적어도 1종의 잔기를 가지고 Gln (Q) 이외의 것, 즉, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다. 특정 구현예에서, 서열식별번호 3의 2, 8, 11, 15, 22, 및 23번 위치에서 2종 이상의 잔기는 Gln (Q) 이외의 것이며, 여기에는 Gln (Q) 이외의 이들 잔기들 중 3, 4, 5 또는 모두 6개가 포함된다.
서열식별번호: 3과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드, 또는 서열식별번호: 3에서 유도된 펩타이드 및 서열식별번호: 93의 공통 구조를 충족하는 펩타이드는 하기 표 2에서 확인된다:
표 2: 펩타이드 P1의 펩타이드 변이체 (서열식별번호: 4)
Figure pct00003
표 2에서 선택된 선택된 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸, 용해도 태그, 예를 들면, SEEEEE를 포함한다. 표 2에 나타낸 서열을 포함하지만 이러한 특이적인 용해도 태그를 결여한(또는 상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드 또한 본원에서 고려된다.
전술한 바와 같이, 다음의 펩타이드: 서열식별번호: 4는 크산토모나스 오리자에 pv. 오리자에의 하핀으로부터 기원한다(Ji 등, “Two Coiled-Coil Regions of Xanthomonas oryzae pv.Oryzae Harpin Differ in Oligomerization and Hypersensitive Response Induction,” Amino Acids 40:381-392 (2011) (이는 그 전체가 참고로 편입된다).
본 발명의 여전히 또 다른 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) KPXDSXSXIAKLISXLIXSLLX (서열식별번호: 47, P15b/P20 공통), 여기서
3번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
15번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이며;
18번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
22번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다); 또는
(ii) IAKLISXLIXSLLX (서열식별번호: 12, P15/20 min 공통), 여기서
7번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이고;
10번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
14번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다,
특정 구현예에서, 드: 서열식별번호: 47 또는 12에 따른 이들 펩타이는 또한 서열식별번호: 93의 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족하고, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기는 존재하지 않는다. 따라서, 이들 구현예에서, 서열식별번호: 47의 15 번 위치에서 X는 M 이외의 다른 것이고, 서열식별번호: 47의 18 번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이다. 유사하게, 서열식별번호: 12의 7 번 위치에서 X는 M 이외의 것이고, 서열식별번호: 47의 10 번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이다.
당해 제3 측면에 따른 펩타이드의 길이는 바람직하게는 약 100개 미만의 아미노산, 또는 대안적으로 90 개 미만의 아미노산, 80 개 미만의 아미노산, 70 개 미만의 아미노산, 60 개 미만의 아미노산, 또는 약 50 개 미만의 아미노산이다. 특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 길이가 20 내지 44개 아미노산이다.
특정 구현예에서, 서열식별번호: 47의 구조를 공유하는 펩타이드는 서열식별번호: 47의 6 및 22번 위치에서 잔기들 중 적어도 1종을 가지고, 상기 위치는 Gln (Q) 이외의 잔기, 즉, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다. 특정 구현예에서, 서열식별번호: 47의 6 및 22번 위치에서 잔기 둘 다는 Gln (Q)이외의 것이거나, 6번 위치에서 잔기는 Gln (Q) 이외의 것인 반면 22번 위치에서 잔기는 존재하지 않는다.
서열식별번호: 47 또는 12과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드, 또는 서열식별번호: 47 및 12 중 하나로 부터 유도된 펩타이드, 및 서열식별번호: 93의 공통 구조를 충족하는 펩타이드는 하기 표 3에서 확인된다:
표 3: 펩타이드 P15/P20 공통의 펩타이드 변이체 서열식별번호: 47 또는 12)
Figure pct00004
표 3에서 선택된 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그, 예를 들면, SEEEEE를 포함한다. 서열 3에 나타낸 서열을 포함하지만 특이적인 용해도 태그를 결여한(또는 상이한 용해도 태그를 지닌) 펩타이드 또한 본원에서 고려된다.
이 구현예에서, 상응하는 야생형 아미노산 서열은 그 전체가 참고로 편입된 Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501에서 확인된 슈도모나스 시린가에 HrpW 서열의 52 내지 96번 아미노산에 상응하며, 이는 그 전체가 참고로 편입된다. 본 발명의 펩타이드의 특성을 비교하기 위한 목적을 위해, 서열식별번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 또는 그 아미노산 서열로 구성된 폴리펩타이드는 참조로 사용된다.
특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 48의 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함한다. 이들 1종 이상의 돌연변이는 서열식별번호: 48에 대해 결실 또는 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 1종 이상의 돌연변이는 서열식별번호: 48의 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 폴리펩타이드에 대해 단리된 펩타이드의 수용액 중 용해도, 안정성, 및/또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다. 이 구현예에서, 상기 단리된 펩타이드는 물 속에 용해되는 경우 안정하고/하거나; 상기에서 기재된 바와 같이, pH 버퍼 및 살생물제의 존재하에서 수성 조건에서 화학 분해에 대해 내성이고/이거나; 수용액 속에서 적어도 약 1.0 mg/ml의 용해도를 갖는다.
특정 구현예에서, 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드는 전체 길이가 20 및 36개 아미노산이고, 본질적으로 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 63, 또는 서열식별번호: 64로 구성된 펩타이드이고, 반면에 또 다른 구현예에서 단리된 펩타이드는 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 63, 또는 서열식별번호: 64로 구성된다.
특정 구현예에서, 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드는 전체 길이가 100개 미만의 아미노산인 펩타이드이고 상기 아미노산 서열은 서열식별번호: 65를 포함한다. 특정 구현예에서 상기 펩타이드의 아미노산 서열은 본질적으로 서열식별번호: 65로 구성되고, 반면 또 다른 구현예에서, 상기 단리된 펩타이드는 서열식별번호: 65로 구성된다.
본 발명의 추가의 측면은 하기의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) PSPXTXXLXXIVGXILXAXN (서열식별번호: 66, P6/6a 공통), 여기서
4번 위치에서 X는 F 또는 Y이고;
6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
7번 위치에서 X는 선택적이고, 일 구현예에 따르면, M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K일 수 있거나; 또 다른 구현예에 따르면 L일 수 있고;
9번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이며;
10번 위치에서 X는 H 또는 N이고;
14번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 또는 이소D이며;
17번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
19번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다; 또는
XTXXLXXIVGXIL (서열식별번호: 135, P6/6a min 공통) (여기서
1번 위치에서 X는 F 또는 Y이고;
3번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
4번 위치에서 X는 선택적이고, 일 구현예에 따르면, M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K일 수 있거나; 또 다른 구현예에 따르면 L일 수 있고;
6번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이며;
7번 위치에서 X는 H 또는 N이고;
11번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 또는 이소D이다);
상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 1종 이상의 돌연변이 단리된 펩타이드의 수성 용해도, 안정성, 또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다.
비교 야생형 서열은 크산토모나스 오리자에 pv. 오리자에의 전장 하핀의 85-105번 아미노산에 상응한다 (Ji 등, “Two Coiled-Coil Regions of Xanthomonas oryzae pv.Oryzae Harpin Differ in Oligomerization and Hypersensitive Response Induction,” Amino Acids 40:381-392 (2011) (이는 그 전체가 참고로 편입된다). 당해 비교 야생형 서열은 하기의 아미노산 서열로 구성된 펩타이드이다: PSPFTQMLMHIVGEILQAQNG (서열식별번호: 153).
특정 구현예에서, 당해 측면에 따른 펩타이드는 다음의 아미노산 서열로 이루어지지 않으며: PSPFTQMLMHIVGEILQAQN (P6a, 서열식별번호: 67), 이는 크산토모나스 오리자에 pv. 오리자에의 전장 하핀의 85-104번 아미노산에 상응한다 (Ji 등, “Two Coiled-Coil Regions of Xanthomonas oryzae pv.Oryzae Harpin Differ in Oligomerization and Hypersensitive Response Induction,” Amino Acids 40:381-392 (2011) (이는 그 전체가 참고로 편입된다).
특정 구현예에서, 당해 측면의 펩타이드는 다음에 기재된 바와 같이 모티프 2의 펩타이드 서열을 포함하지 않는다: U.S. 특허 번호 8,440,881, 이는 다음과 같이 정의된다: (P/A/V)S(P/Q/A) (F/L/Y)TQ(M/A)LM(H/N/Q)IV(G/M) (E/D/Q), 서열식별번호: 154. 예로써, 서열식별번호: 66에 따른 펩타이드는 모든 다른 정렬 잔기가 모티프 2의 서열 2와 일치하는 경우 7번 위치에서 M/A/T를 갖는 펩타이드를 포함하지 않거나; 서열식별번호: 66에 따른 펩타이드는 모든 다른 정렬 서열이 모티프 2의 서열과 일치하지 않는 경우 10번 위치에서 H/N을 갖는 펩타이드를 포함하지 않거나; 서열식별번호: 66에 따른 펩타이드는 모든 다른 정렬 잔기가 모티프 2의 서열과 일치하는 경우 14번 위치에서 E/D를 갖는 펩타이드를 포함하지 않는다. 유사하게, 서열식별번호: 135에 따른 펩타이드는, 다른 모든 정렬 잔기가 모티프 2의 서열에 매치되는 경우 위치 4에서 M/A/T를 갖는 펩타이드 또는 서열식별번호: 135에 따르는 펩타이드를 포함하지 않고, 다른 모든 정렬 잔기가 모티프 2의 서열에 매치되는 경우 위치 4에서 M/A/T를 갖는 펩타이드 또는 하기에 따르는 펩타이드를 포함하지 않는다; 서열식별번호: 135는 모든 다른 정렬 잔기가 모티프 2의 서열과 일치하는 경우 11번 위치에서 E/D를 갖는 펩타이드를 포함하지 않는다.
특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 153의 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함한다. 이들 1종 이상의 돌연변이는 서열식별번호: 153에 대해 결실 또는 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 1종 이상의 돌연변이는 서열식별번호: 153의 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 폴리펩타이드에 대해 단리된 펩타이드의 수용액 중 용해도, 안정성, 및/또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다.
당해 측면에 따른 펩타이드의 길이는 바람직하게는 약 100개 아미노산 미만, 또는 대안적으로 90개 아미노산 미만, 80개 아미노산 미만, 70개 아미노산 미만, 60개 아미노산 미만, 또는 50개 아미노산 미만이다. 특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 길이가 19 내지 50이다.
특정 구현예에서, 다음에 상응하는 펩타이드: 서열식별번호: 66 및 135는 또한 하기의 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족하며: 서열식별번호: 93, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기는 존재하지 않는다. 예를 들면, 서열식별번호: 66에 따른 펩타이드(이는 메티오닌 아미노산 잔기를 포함하지 않는다)에서, 7 번 위치에서 X는, 존재한다면, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, K, 또는 L이고; 9 번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이다. 유사하게, 서열식별번호: 135에 따른 펩타이드(이는 메티오닌 아미노산 잔기를 포함하지 않는다)에서, 4 번 위치에서 X는, 존재한다면, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, K, 또는 L이고; 6 번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이다.
특정 구현예에서, 다음의 구조를 공유하는 펩타이드: 서열식별번호: 66는 다음의 6, 17, 및 19번 위치에서 잔기들의 적어도 1종을 가진다: 서열식별번호: 66(이는 Gln (Q)이외의 것, 즉, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다). 특정 구현예에서, 다음의 6, 17, 및 19번 위치에서 2 또는 3개의 잔기: 서열식별번호: 66는 Gln (Q) 이외의 것이다. 유사하게, 다음의 구조를 공유하는 펩타이드: 서열식별번호: 135의 경우, 일 구현예에 따르면, 이들 펩타이드는 6번 위치에서 Gln (Q) 이외의 것, 즉, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다.
서열식별번호: 66 또는 135과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드는 서열식별번호: 66 및 135 중 하나로부터 유도된 펩타이드이고, 서열식별번호: 93의 공통 구조를 충족하는 펩타이드는 하기 표 4에서 확인된다:
표 4: 펩타이드 P6/ P6b 공통의 펩타이드 변이체 (서열식별번호: 66 또는 135)
Figure pct00005
표 4에서 선택된 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그를 포함하며, 여기에는, SEE, SEEE, 및 SEEEEE가 포함된다. 표 4에 나타낸 서열을 포함하지만 이들 특이적인 용해도 태그를 포함하는 (또는 상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드도 또한 본원에서 고려된다.
본 발명의 또 다른 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드에 관한 것이다:
(i) XXXXXXXXXXX(L/M)XXLLXXLLXXLLXXX (서열식별번호: 18, P17/18), 여기서
1번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, N, 이소D, K, 또는 R이며;
5번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 D, 이소D, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, N, Q, K, 또는 R이고;
6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, 또는 K이며;
7번 위치의 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
8번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 T, Q, S, E, g-글루타메이트, A, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
9번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 E, g-글루타메이트, Q, S, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
13번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
14번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
17번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
18번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
21번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
22번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
25번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이며;
26번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
27번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이다; 또는
(ii) (L/M)XXLLXXLLXXLL (서열식별번호: 25, P17/18 min 공통) 여기서
2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
11 번 위치에서 X는 임의의 아미노산이지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R일 수 있다.
특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 어위니아 아밀로보라 HrpW의 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함한다. 이들 1종 이상의 돌연변이는 야생형 HrpW 서열에 대해 결실 또는 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 1종 이상의 돌연변이는 어위니아 아밀로보라 HrpW의 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 폴리펩타이드에 대해 단리된 펩타이드의 수용액 중 용해도, 안정성, 및/또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다.
이로써 그 전체가 참고로 편입된 Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501는 HrpWEa의 2개의 과민성 반응 유발 도메인을 확인한다. 제1은 HrpWEa의 5번 아미노산으로부터 64번 아미노산, 특히 31번 아미노산으로부터 57번 아미노산까지 연장된다. 제2 도메인은 HrpWEa의 103번 아미노산으로부터 146번 아미노산, 특히 116번 아미노산으로부터 140번 아미노산까지 연장된다. Fan 등에서 이러한 설명에도 불구하고, 상기 참조는 HrpWEa의 단일 펩타이드 단편 만을 확인하며, 이는 10 내지 59번 아미노산으로 구성된 펩타이드이다.
비교 야생형 서열은 이로써 그 전체가 참고로 편입된 Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501에 확인된 전장 어위니아 아밀로보라 HrpW 서열의 10 내지 59번 아미노산에 상응한다. 본 발명의 펩타이드의 특성을 비교하기 위한 목적을 위해, 어위니아 아밀로보라 HrpW 의 10 내지 59번 아미노산으로 구성된 펩타이드가 참조로서 사용된다.
특정 구현예에서, 당해 측면의 펩타이드는 하기 아미노산으로 이루어지지 않으며: TSSSPGLFQSGGDNGLGGHNANSALGQQPIDRQTIEQMAQLLAELLKSLL (서열식별번호: 162), 이는 어위니아 아밀로보라 HrpW (Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501, 이는 이로써 그 전체가 참고로 편입된다)의 10 내지 59번 아미노산에 상응한다.
특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 하기의 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함한다: 서열식별번호: 162. 이들 1종 이상의 돌연변이는 다음에 대해 결실 또는 치환을 포함한다: 서열식별번호: 162. 특정 구현예에서, 상기 1종 이상의 돌연변이는 서열식별번호: 162의 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 폴리펩타이드에 대해 단리된 펩타이드의 수용액 중 용해도, 안정성, 및/또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다.
제4 측면에 따른 펩타이드의 길이는 바람직하게는 약 100개 미만의 아미노산, 또는 대안적으로 90 개 미만의 아미노산, 80 개 미만의 아미노산, 70 개 미만의 아미노산, 60 개 미만의 아미노산, 또는 약 50 개 미만의 아미노산이다. 특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 길이가 13 내지 50개 아미노산이거나, 또는 길이가 13 내지 40개 아미노산이기도 하다.
특정 구현예에서, 다음에 상응하는 펩타이드: 서열식별번호: 18 및 25는 또한 하기의 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족하며: 서열식별번호: 93, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기는 존재하지 않는다. 예를 들면, 다음을 포함하는 펩타이드: 서열식별번호: 18가 메티오닌 아미노산 잔기를 포함하지 않는 경우, 12번 위치에서 아미노산은 L이다. 유사하게, 다음을 포함하는 펩타이드: 서열식별번호: 25가 메티오닌 아미노산 잔기를 포함하지 않는 경우, 1번 위치에서 아미노산은 L이다.
특정 다른 구현예에서, 1 내지 11번 아미노산 및/또는 25 내지 27번 아미노산 중 중 1종 이상은 다음의 단리된 펩타이드내에 존재하지 않는다: 서열식별번호: 18. 예를 들면, 25 내지 27번 아미노산을 결여한 펩타이드는 야생형 서열에 대해 개선된 안정성을 나타낸다.
서열식별번호: 18 또는 25과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드, 또는 서열식별번호: 18 및 25 중 하나로부터 유도된 펩타이드, 또는 서열식별번호: 93의 공통 구조를 충족하는 펩타이드는 하기 표 5에 확인된다:
표 5: 펩타이드 P17/P18 공통의 펩타이드 변이체 (서열식별번호: 18 또는 25)
Figure pct00006
표 5에서 선택된 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그, 예를 들면, SEEEEE를 포함한다. 표 5에 나타낸 서열을 포함하지만 이들의 특이적인 용해도 태그를 포함하는(또는 상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드가 본원에서 또한 고려된다.
이 구현예에서, 상기 야생형 아미노산 서열은 Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501에서 확인된 어위니아 아밀로보라 HrpW의 10 내지 59번 아미노산에 상응하며, 이는 이로써 그 전체가 참고로 편입된다. 본 발명의 펩타이드의 특성을 비교하기 위한 목적을 위해, 어위니아 아밀로보라 HrpW 의 10 내지 59번 아미노산으로 구성된 펩타이드가 참조로서 사용된다.
본 발명의 추가의 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드에 관한 것이다:
XLXX(L/M)LXLIXX(L/I/V/F/M) (L/I/V/F/M) (서열식별번호: 26, P19 공통) 여기서
1번 위치에서 X는 선택적이고 L, I, V, F, 또는 M이고;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 K이다.
전술한 바와 같이, Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501(이는 이로써 그 전체가 참고로 편입된다)는, HrpWEa의 2개의 과민성 반응 유발 도메인을 확인하며, 이들 중 하나는 HrpWEa 103번 아미노산으로부터 146번 아미노산, 특히 116번 아미노산으로부터 140번 아미노산에 연장된다 .Fan 등에서 당해 설명에도 불구하고, 당해 참조는 당해 도메인을 함유하는 HrpWEa의 펩타이드 단편을 확인하지 않는다.
비교 야생형 서열은 Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501(이는 이로써 그 전체가 참고로 편입된다)에 확인된 전장 어위니아 아밀로보라 HrpW 서열의 116번 아미노산 내지 140번 아미노산에 상응한다. 본 발명의 펩타이드의 특성을 비교할 목적으로, 어위니아 아밀로보라 HrpW 의 116 내지 140번 아미노산으로 구성된 펩타이드가 참조로 사용된 것으로 의도된다.
특정 구현예에서, 당해 측면의 펩타이드는 다음의 아미노산 서열로 이루어지며: ITPDGQGGGQIGDNPLLKAMLKLIA (서열식별번호: 89), 이는 전장 어위니아 아밀로보라 HrpW (Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501, 이는 이로써 그 전체가 참고로 편입된다)의 116 내지 140번 아미노산에 상응한다.
특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 89의 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함한다. 이들 1종 이상의 돌연변이는 서열식별번호: 89에 대해 결실 또는 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 1종 이상의 돌연변이는 서열식별번호: 89의 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 폴리펩타이드에 대해 단리된 펩타이드의 수용액 중 용해도, 안정성, 및/또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다.
당해 측면에 따른 펩타이드의 길이는 바람직하게는 약 100개 아미노산 미만, 또는 대안적으로 90개 아미노산 미만, 80개 아미노산 미만, 70개 아미노산 미만, 60개 아미노산 미만, 또는 50개 아미노산 미만이다. 특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 길이가 18 및 50개 아미노산이다.
서열식별번호: 26과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드, 또는 서열식별번호: 26으로부터 유도된 펩타이드 및 서열식별번호: 93의 공통 구조를 충족하는 펩타이드가 하기 표 6에서 확인된다:
표 6: 펩타이드 P19 공통의 펩타이드 변이체 (서열식별번호: 26)
Figure pct00007
표 6에서 선택된 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그, 예를 들면, SEEEEE를 포함한다. 표 6에 나타낸 서열을 포함하지만 당해 특이적인 용해도 태그를 포함하는(또는 상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드가 본원에 또한 고려된다.
표 6에서 특정 펩타이드는 또한 서열식별번호: 93의 펩타이드의 구조적 특징을 충족하며, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기는 존재하지 않는다. 이들 펩타이드가 또한 서열식별번호: 93의 제한을 충족하는 경우, 서열식별번호: 26의 1번 아미노산 잔기는, 존재하는 경우, L, I, V, 또는 F이고; 서열식별번호: 26의 5번 아미노산은 L이며; 서열식별번호: 26의 12 및 13번 아미노산는 독립적으로 L, I, V, 또는 F이다.
본 발명의 여전히 또 다른 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는펩타이드에 관한 것이다:
(i) XXXXXXLXXLLXXLVXLLK (서열식별번호: 13, P14d 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 Q, N, D, E, g-글루타메이트, 이소D, 또는 S일 수 있고;
2번 위치에서 X는 D, E, g-글루타메이트, 이소D일 수 있으며;
3번 위치에서 X는 P, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
4번 위치에서 X는 M, A, S, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
5번 위치에서 X는 Q, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
6번 위치에서 X는 A, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
8번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
9번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
12번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
13번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
16번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있다); 또는
(ii) LXXLLXXLVXLLK (서열식별번호: 14, P14d min 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
3번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
6번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
7번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있다.
특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 랄스토니아 솔라나세아룸 (이전에 슈도모나스 솔라나세아룸) PopA의 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함한다. 이들 1종 이상의 돌연변이는 야생형 PopA 서열에 대해 결실 또는 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 1종 이상의 돌연변이는 랄스토니아 솔라나세아룸 PopA 의 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 폴리펩타이드에 대해 수용액 중 용해도, 안정성, 및/또는 단리된 펩타이드의 화학 분해에 대한 내성을 개선한다.
비교 야생형 서열은 Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501(이는 이로써 그 전체가 참고로 편입된다)에서 확인된 랄스토니아 솔라나세아룸 (이전에 슈도모나스 솔라나세아룸) PopA 서열의 92 내지 125번 아미노산에 상응한다. 본 발명의 펩타이드의 특성을 비교할 목적을 위해, 랄스토니아 솔라나세아룸 PopA의 92 내지 125번 아미노산으로 구성된 Fan 등의 야생형 펩타이드, 가 참조로 사용된다.
특정 구현예에서, 당해 측면의 펩타이드는 다음의 아미노산 서열로 이루어지지 않으며: QAPQSANKTGNVDDANNQDPMQALMQLLEDLVKL (서열식별번호: 174), 이는 랄스토니아 솔라나세아룸 PopA (참고 Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501, 이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다)의 92 내지 125번 아미노산에 상응한다.
당해 측면에 따른 펩타이드의 길이는 바람직하게는 약 100개 아미노산 미만, 또는 대안적으로 90개 아미노산 미만, 80개 아미노산 미만, 70개 아미노산 미만, 60개 아미노산 미만, 또는 50개 아미노산 미만이다. 특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 길이가 12 및 50개 아미노산이다.
서열식별번호: 13 또는 14과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드, 또는 서열식별번호: 13으로부터 유도된 펩타이드 및 서열식별번호: 93의 공통 구조를 충족하는 펩타이드가 하기 표 7에서 확인된다:
표 7: 펩타이드 P14d의 펩타이드 변이체 (서열식별번호: 13)
Figure pct00008
표 7에서 선택된 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그, 예를 들면 SEEEEE를 포함한다. 표 7에 나타낸 서열을 포함하지만 당해 특이적인 용해도 태그를 포함하는(또는 상이한 용해도 태그를 갖는) 는 펩타이드가 본원에 또한 고려된다.
C-말단 라이신 잔기가 p14d 변이체에 의해 HR 유발에 필요한 것으로 여겨짐에 주목할 수 있다. 이것은 다음의 표준적 서열로부터 약간의 편차이다: 서열식별번호: 93. 신뢰하지 않더라도, C-말단 라이신은 p14d 변이체 (LVKLL)내 2개의 소수성 이중항 서열 사이에 단일 친수성 아미노산으로 인하여 필수적일 수 있다.
당해 측면에 따른 특정 펩타이드는 또한 서열식별번호: 93의 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족하고, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기는 존재하지 않는다. 예를 들면, 서열식별번호: 13을 포함하는 펩타이드의 경우, 서열식별번호: 13의 4번 아미노산 잔기는 A, S, D, 이소D, E, 또는 g-글루타메이트이고, 서열식별번호: 13의 8번 아미노산 잔기는 L, E, g-글루타메이트, Q, D, 이소D, N, G, A, 또는 S이다. 유사하게, 서열식별번호: 14을 포함하는 펩타이드의 경우, 2번 위치에서 아미노산 잔기는 L, E, g-글루타메이트, Q, D, 이소D, N, G, A, 또는 S이다.
본 발명의 또 다른 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드에 관한 것이다:
(i) LXXL(L/M)XILXXLV (서열식별번호: 16, P25 공통) 여기서
2번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
3번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
6번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
9번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G이고;
10번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N이다; 또는
(ii) LXXVLXXL(L/M)XILXXLV (서열식별번호: 17, P25 공통) 여기서
2번 위치에서 X는 T, S, A, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이고;
3번 위치에서 X는 G, T, S, A, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이며;
6번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
7번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
13번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G이고;
14번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고;
16번 위치에서 V는 선택적이다.
특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 랄스토니아 솔라나세아룸 (이전에 슈도모나스 솔라나세아룸) PopA의 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 이들 1종 이상의 돌연변이는 야생형 PopA 서열에 대해 결실 또는 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 1종 이상의 돌연변이는 랄스토니아 솔라나세아룸 PopA 의 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 폴리펩타이드에 대해 수용액 중 용해도, 안정성, 및/또는 단리된 펩타이드의 화학 분해에 대한 내성을 개선한다.
비교 야생형 서열은 과민성 반응 도메인으로서 랄스토니아 솔라나세아룸 (이전에 슈도모나스 솔라나세아룸) PopA 서열(이는 Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501에서 확인되며, 이는 이로써 그 전문이 참조로 편입된다)의 206 내지 260번 아미노산에 상응한다. 본 발명의 펩타이드의 특성을 비교할 목적을 위해, 랄스토니아 솔라나세아룸 PopA의 206 내지 260번 아미노산으로 구성된 Fan 등의 야생형 펩타이드, 는 참조로서 사용된다.
특정 구현예에서, 당해 측면의 펩타이드는 다음의 아미노산 서열로 이루어지지 않으며: NGADGGNGVNGNQANGPQNAGDVNGANGADDGSEDQGGLTGV LQKLMKILNALVQ (서열식별번호: 179), 이는 랄스토니아 솔라나세아룸 PopA (참고 Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501, 이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다)의 206 내지 260번 아미노산에 상응한다.
당해 측면에 따른 펩타이드의 길이는 바람직하게는 약 100개 아미노산 미만, 또는 대안적으로 90개 아미노산 미만, 80개 아미노산 미만, 70개 아미노산 미만, 60개 아미노산 미만, 또는 50개 아미노산 미만이다. 특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 길이가 12 및 50개 아미노산이다.
서열식별번호: 16 또는 17 중 하나와 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드, 또는 서열식별번호: 16 또는 17 중 하나로부터 기원한 펩타이드 및 서열식별번호: 93의 공통 구조를 충족하는 펩타이드는 하기 표 8에서 확인된다:
표 8: 펩타이드 P2의 펩타이드 변이체 (서열식별번호: 180) 및 P25 (서열식별번호: 182)
Figure pct00009
표 8에서 선택된 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그, 예를 들면 SEEEEE를 포함한다. 표 8에 나타낸 서열을 포함하나 이들의 특이적인 용해도 태그를 포함한(또는 상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드가 본원에 또한 고려된다.
표 8에서 현저히, 수많은 이들 유도체 펩타이드는 야생형 서열에서 관측되지 않은 반복된 LT 서열을 포함한다. 그러나, 이들 서열이 서열식별번호: 93과 비교된 것으로서 과민성 반응을 유발하기 위해 더 큰 소수성 서열을 필요로함에 주목하여야 한다. 신뢰하지 않고도, 이는 류신 이외의 서열내 아미노산 발린의 존재 및 소수성 이중항 (LLKIL) 사이의 단일 친수성 아미노산 만의 존재에 기인할 수 있음이 여겨진다. 비록 이들 변화가 HR에 유해하다고 해도, 그것의 효과는 다음의 C-말단에서 추가의 소수성 잔기의 부가에 의해 역전될 수 있다: 펩타이드 (…KIL versus …KILEAL V 또는 …KILNALV).
당해 측면에 따른 특정 펩타이드는 또한 서열식별번호: 93의 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족하고, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기는 존재하지 않는다. 예를 들면, 서열식별번호: 16을 포함하는 펩타이드의 경우, 5번 아미노산 잔기는 L이고; 서열식별번호: 17을 포함하는 펩타이드의 경우, 9번 아미노산 잔기는 L이다.
본 발명의 또 다른 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드에 관한 것이다:
(i) (L/M)XXLLX(L/M)FXXI(L/M)XX (서열식별번호: 15, P3min 공통) 여기서
2번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
3번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
6번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
9번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
10번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고;
13번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
14번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있다.
특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 어위니아 아밀로보라 HrpN 의 상응하는 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함한다. 이들 1종 이상의 돌연변이는 야생형 HrpN 서열에 대해 결실 또는 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 1종 이상의 돌연변이는 어위니아 아밀로보라 HrpN의 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 폴리펩타이드에 대해 수용액 중 용해도, 안정성, 및/또는 단리된 펩타이드의 화학 분해에 대한 내성을 개선한다.
비교 야생형 서열은 어위니아 아밀로보라 HrpN 서열의 137 내지 180번 또는 150 내지 180번 아미노산에 상응하며, 이는 다음에서 확인된다: U.S. 특허 번호 7,132,525(Wei 등에 허여됨, 이는 이로써 그 전문이 참고로 편입된다). aa 137 내지 180를 함유하는 HrpN 펩타이드는 과민성 반응-유발 단편으로 확인된 반면, aa 150 내지 180를 함유하는 HrpN 펩타이드는 발현 및 시험되지 않았다. 본 발명의 펩타이드의 특성을 비교할 목적을 위해, 어위니아 아밀로보라 HrpN의 137 내지 180번 또는 150 내지 180번 Wei 등의 야생형 펩타이드로 구성된 Wei 등의 야생형 펩타이드가 참조로서 사용된다.
특정 구현예에서, 당해 측면의 펩타이드는 다음의 아미노산 서열로 이루어지지 않으며: S137TSQNDDSTSGTDS150TSDSSDPMQQLLKMFSEIMQSLFGDGQDGT180 (서열식별번호: 230), 이는 다음의 137 내지 180번 아미노산: 어위니아 아밀로보라HrpN (참고 U.S. 특허 번호 7,132,525, Wei 등에 허여됨, 이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 또는 이의 aa 150 내지 180에 상응하는 31개-아미노산 펩타이드에 상응한다.
당해 측면에 따른 펩타이드의 길이는 바람직하게는 약 100개 아미노산 미만, 또는 대안적으로 90개 아미노산 미만, 80개 아미노산 미만, 70개 아미노산 미만, 60개 아미노산 미만, 50개 아미노산 미만, 약 40개 아미노산 미만, 또는 약 30개 아미노산 미만이다. 특정 구현예에서, 상기 펩타이드는 길이가 12 및 30개 아미노산이다.
서열식별번호: 15과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드, 또는 서열식별번호: 15으로부터 유도된 펩타이드 및 서열식별번호: 93의 공통 구조를 충족하는 펩타이드가 하기 표 9에 확인된다:
표 9: 펩타이드 P3 공통의 펩타이드 변이체 (서열식별번호: 15)
Figure pct00010
표 9에서 선택된 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그, 예를 들면, SEEE, SEEEEE, 및 EEEE를 포함한다. 표 9에 나타내나 이들의 특이적인 용해도 태그를 결여한 (또는 상이한 용해도 태그를 지닌) 펩타이드가 본원에 또한 고려된다.
상기 최소 P3 서열이 서열식별번호: 93의 서열의 최소 HR-박스 서열보다 더 긴 서열을 필요로 하는 것은 주목할만 하다. 신뢰하지 않고도, 이는 소수성 서열내 2개의 페닐알라닌 잔기의 존재에 기인할수있는 것으로 여겨진다.
당해 측면에 따른 특정 펩타이드는 또한 서열식별번호: 93의 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족하고, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기는 존재하지 않는다. 예를 들면, 서열식별번호: 15을 포함하는 펩타이드의 경우, 아미노산 잔기 1, 7, 및 12는 L이다.
다음을 기준으로: 개시된 공통 서열 (서열식별번호: 93), 박테리아 단백질 서열로부터 유의미하게 유도된 예상된 HR 활성을 갖는 신규 펩타이드 서열을 생성하는 것이 가능하다. 이들 펩타이드는 최대 용해도 및 화학 안정성에 대해 최적화된 친수성 잔기를 함유할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 이들 친수성 잔기는 글루타메이트이다. 라이신 및 아르기닌 또한 가능한 선택이나, 다수의 이들 잔기는 식물에서 독성 반응을 유발할 것이다.
더 큰 HR-유발 단백질내 천연 발생 서열을 기반으로 모델화된(및 변형된) 전술한 펩타이드 외에, 본 발명은 또한 서열식별번호: 93의 공통을 충족하는 합성 펩타이드를 전적으로 고려한다. 이상적으로, 이들 합성 펩타이드는 서열식별번호: 93에 명시된 소수성 잔기 사이에 스패닝된 수많은 강력한 친수성 아미노산을 포함한다. 예시적인 합성 펩타이드는 하기 표 10에 열거된다. 이들 펩타이드는 HR 유발과 관련된 필요한 소수성 펩타이드를 함유한다. 개입 친수성 잔기는 최대 용해도, 바람직하게는 하전된 아미노산을 사용하여 선택된다. 하전되지 않은 아미노산을 사용하는 것이 가능하지만, 더 큰 비율의 하전되지 않은 아미노산은 수득한 펩타이드가 용액 속에서 응집하여 침전물 또는 겔을 형성하도록 할 수 있다. 글루타메이트는 아스파르테이트보다 화학 안전성을 위해 바람직하다. 라이신 및 아르기닌이 보다 우수한 용해도 특징을 가지고 있다고 해도, 폴리-양이온은 시험된 작물에서 독성 반응을 생산하였다. 그 결과, 아르기닌-풍부 서열, 예컨대 P30-1 (서열식별번호: 211)은 피해야 한다.
표 10: 다른 HR-박스 펩타이드
Figure pct00011
표 10에서 선택된 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그, 예를 들면, SEE, EE, DD, 또는 EEE를 포함한다. 표 10에 나타낸 서열을 포함하지만 이들의 특이적인 용해도 태그를 결여한(또는 상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드가 본원에 또한 고려된다.
본 발명의 단리된 펩타이드는 또한 펩타이드 결합을 통해 본 발명의 펩타이드에커플링된 제2의 아미노산 서열을 또한 포함하는 융합 펩타이드의 형태로 나타낼 수 있다. 제2 아미노산 서열은 정제 태그, 예컨대 폴리-히스티딘 (His6-), 글루타티온-S-전달효소 (GST-), 또는 말토오스-결합 단백질 (MBP-)일 수 있으며, 이는 정제시 보조되나 후에 제거될 수 있는데, 즉, 회복 후 펩타이드로부터 절단될 수 있다. 프로테아제-특이적인 절단 부위 또는 화학-특이적인 절단 부위 (즉, 절단가능 링커 서열내에서)는 정제 태그 와 원하는 펩타이드 사이에 도입될 수 있다. 프로테아제-특이적인 절단 부위는 문헌에 잘 알려져 있으며, 비제한적으로, 엔테로키나제 특이적인 절단 부위 (Asp)4-Lys(이는 라이신 후 절단된다); 인자 Xa 특이적인 절단 부위 Ile-(Glu 또는 Asp)-Gly-Arg(이는 아르기닌 이후 절단된다); 트립신 특이적인 절단 부위(이는 Lys 및 Arg 이후 절단된다); 및 Genenase™ I 특이적인 절단 부위 Pro-Gly-Ala-Ala-His-Tyr를 포함한다. 화학물질 및 그것의 특이적인 절단 부위는, 비제한적으로, 시아노겐 브로마이드 (CNBr) (이는 메티오닌 (Met) 잔기에서 절단한다); BNPS-스카톨(skatole) (이는 트립토판 (Trp) 잔기에서 절단한다); 포름산(이는 아스파르트산-프롤린 (Asp-Pro) 펩타이드 결합에서 절단한다); 하이드록실아민(이는 아스파라긴-글리신 (Asn-Gly) 펩타이드 결합 잔기에서 절단한다); 및 2-니트로-5-티오시아노벤조산 (NTCB) (이는 시스테인 (Cys) 잔기 잔기에서 절단한다(참고 Crimmins 등, “Chemical Cleavage of Proteins in Solution,” Curr.Protocol.Protein Sci., Chapter 11:Unit 11.4 (2005) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다). 이들 절단 방법중 하나를 사용하기 위하여, 원하는 펩타이드 서열내에서 돌연변이에 의해 원치않는 절단 부위를 제거하는 것이 필요할 수 있다. 예를 들면, p4-7E-cR (서열식별번호: 40)은 트립신으로 혼용성을 위해 돌연변이시켰다: 위치 7에서의 라이신 잔기는 글루타메이트에 돌연변이되고 C-말단 아르기닌은 이론적 트립신 절단의 생성물을 나타내기 위해 부가된다. 마찬가지로, p19-5 (서열식별번호: 168)는 산성 조건하에서 절단될 수 있는 서열 ‘NP’를 함유한다. 다음에서 ‘DE’에 대한 이들 잔기의 돌연변이: p19-5a (서열식별번호: 169)는 당해 특정한 절단 기전을 방지한다. 원하는 펩타이드 생성물은 추가로 정제하여 절단된 정제 태그를 제거할 수 있다.
본 발명의 단리된 펩타이드는 또한 링커 서열과 함께 연결된 본 발명의 다중 펩타이드 서열을 포함하는 융합 펩타이드의 형태로 나타낼 수 있으며, 이는 상기 기재된 유형의 절단가능한 아미노산 서열의 형태를 취하거나 취하지 않을 수 있다. 이러한 다량체 융합 단백질은 정제 태그를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 일 구현예에서, 각 모노머성 서열은 제1 절단가능 펩타이드 서열에 의해 본 발명의 펩타이드에 연결된 정제 태그를 포함할 수 있으며; 몇 개의 모노머성 서열은 제2 절단가능 펩타이드 서열에 의해 인접한 모노머성 서열에 연결될 수 있다. 결과적으로, 즉, 숙주 세포내에서 다량체 융합 단백질의 발현시, 회수된 융합 단백질은 제2 절단가능 펩타이드 서열를 절단하는데 효과적인 프로테아제 또는 화학물질로 처리함으로써 정제 태그를 함유하는 개별적인 모노머성 펩타이드 서열을 방출할 수 있다. 친화도 정제시, 회수된 모노머성 펩타이드 서열은 제1 절단가능 펩타이드 서열 을 절단하는데 유효한 프로테아제 또는 화학물질로 처리함으로써 목적한 펩타이드로부터 정제 태그를 방출할 수 있다. 후자는 상기 에 기재된 바와 같이 겔 여과 및/또는 HPLC를 사용하여 추가로 정제될 수 있다.
하나의 접근법에 따라서, 본 발명의 펩타이드는 표준 펩타이드 합성 작업으로합성될 수 있다. 이들은 자동화 고상 펩타이드 합성 기기, 예를 들면 비제한적으로, Applied Biosystems 431 A, 433 A 합성기 및 Peptide Technologies Symphony Symphony 또는 대규모 Sonata 또는 CEM Liberty 자동화 고상 펩타이드 합성기에서 수행될 수 있는 FMOC (9-플루오레닐메틸옥시-카보닐) 및 tBoc (tert-부틸옥시-카보닐) 합성 프로토콜 둘 다를 포함한다. 대안적인 펩타이드 합성 기기의 사용 또한 고려된다. 고상 합성을 사용하여 제조된 펩타이드는 실질적으로 순수한 형태로 회수된다.
본 발명의 펩타이드는 또한 재조합 발현 시스템에 이어 재조합으로 제조된 펩타이드의 분리 및 정제에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이는 인코딩 핵산 분자를 상기 분자가 이종성(즉, 정상적으로 존재하지 않는) 발현 시스템내로 삽입함을 포함한다. 본 발명의 펩타이드를 코딩하는 1종 이상의 원하는 핵산 분자는 벡터내로 삽입될 수 있다. 이종성 핵산 분자는 발현 시스템 또는 벡터내에 적절한 센스(5'―3') 방향 및 촉진제 및 임의의 다른 5' 및 3' 조절 분자에 대해 정확한 해독 틀내로 삽입된다.
박테리아 및 식물 호스트내에서 발현을 위한 대표적인 뉴클레오타이드 서열은 하기 표 11에 포함된다:
표 11
Figure pct00012
본원에 열거된 인코딩된 아미노산 서열 및 원하는 트랜스제닉 유기체의 지식내에서, 추가의 코돈-최적화된 DNA 서열 및 RNA 서열은 일상적인 기술 이하에서 생성될 수 있다.
DNA 작제물에 의한 본 발명의 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드의 발현(전사 및 번역 포함)은 발현 수준, 발현이 일어나는 조직 유형(들) 및/또는 발현의 발달 단계와 관련하여 조절될 수 있다. 수많은 이종성 조절 서열 (예를 들면, 촉진제 및 인핸서)이 DNA 작제물의 발현을 조절하기 위해 이용가능하다. 이들은 구성적, 유도성 및 조절가능 촉진제뿐만 아니라 조직- 또는 일시적-특이적 방식으로 발현을 조절하는 촉진제 및 인핸서를 포함한다. 예시적인 항시성 촉진제는 다음을 포함한다: 랩스베리 E4 촉진제(U.S. 특허 번호 5,783,393 및 5,783,394, 이들 각각은 이로써 그 전체가 참고로 편입된다), 노팔라인 합성효소 (NOS) 촉진제 (Ebert 등, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.)84:5745-5749 (1987) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 옥토핀 합성효소 (OCS) 촉진제(이는 아그로박테리움 투메파시엔스의 종양-유도 플라스미드 상에서 운반된다), 카울리모 바이러스 촉진제 예컨대, 꽃양배추 모자이크 바이러스 (CaMV) 19S 촉진제 (Lawton 등, Plant Mol. Biol.9:315-324 (1987) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다) 및 CaMV 35S 촉진제 (Odell 등, Nature 313:810-812 (1985) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 피크워트(figwort) 모자이크 바이러스 35S-촉진제 (U.S. 특허 번호 5,378,619 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 리불로스-1,5-비스-포스페이트 카복실라제(ssRUBISCO)의 작은 서브유닛으로부터의 광 -유도성 촉진제, Adh 촉진제(Walker 등, Proc. Natl. Acad. Sci. ( U.S.A .)84:6624-6628 (1987) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 수크로오스 합성효소 촉진제(Yang 등, Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.)87:4144-4148 (1990) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), R 유전자 복합체 촉진제 (Chandler 등, 식물 세포 1:1175-1183 (1989) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 클로로필 a/b 결합 단백질 유전자 촉진제, CsVMV 촉진제 (Verdaguer 등, Plant Mol Biol., 37:1055-1067 (1998) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 및 멜론 액틴 촉진제 (PCT 공개번호 WO00/56863 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다). 예시적인 조직-특이적인 촉진제는 다음을 포함한다: 토마토 E4 및 E8 촉진제 (U.S. 특허 번호 5,859,330 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다) 및 토마토 2AII 유전자 촉진제(Van Haaren 등, Plant Mol Bio., 21:625-640 (1993) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
하나의 바람직한 구현예에서, DNA 작제물의 발현은 이의 발현이 조기 종자 및/또는 배아 발달에 관련된 유전자로부터의 조절 서열의 조절하에 있다. 사실상, 바람직한 구현예에서, 사용된 촉진제는 종자-향상된 촉진제이다. 이러한 촉진제의 예는 다음과 같은 이러한 유전자로부터의 5' 조절 영역을 포함한다: 나핀 (Kridl 등, Seed Sci .Res.1:209:219 (1991) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 글로불린 (Belanger 및 Kriz, Genet.129:863-872 (1991), 유전자은행 수탁 번호 L22295(이들 각각은 이로써 그 전체가 참고로 편입된다), 감마 제인 Z 27 (Lopes 등, Mol Gen Genet.247:603-613 (1995) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), L3 올레오신 촉진제 (U.S. 특허 번호 6,433,252 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 파세올린 (Bustos 등, 식물 세포 1(9):839-853 (1989) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 아르셀린 5 (U.S.공개 출원번호 2003/0046727 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 대두 7S 촉진제, 7Sa 촉진제(U.S.공개 출원번호 2003/0093828 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 대두 7Sab 콘글리시닌 촉진제, 7Sa 촉진제 (Beachy 등, EMBO J.4:3047 (1985); Schuler 등, Nucleic Acid Res.10(24):8225-8244 (1982) (이들 각각은 이로써 그 전체가 참고로 편입된다), 대두 트립신 저해제 (Riggs 등, 식물 세포 1(6):609-621 (1989) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), ACP (Baerson 등, Plant Mol . Biol ., 22(2):255-267 (1993) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 스테아로일-ACP 데사투라제(Slocombe 등, Plant Physiol .104(4):167-176 (1994) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 대두 a' 서브유닛 b-콘글리시닌 (Chen 등, Proc. Natl. Acad. Sci. 83:8560-8564 (1986) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), Vicia faba USP (U.S.공개 출원번호 2003/229918 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다) 및 옥수수 L3 올레오신 촉진제(Hong 등, Plant Mol. Biol., 34(3):549-555 (1997) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
본 발명의 펩타이드를 인코딩하는 핵산 분자는 고체상 합성을 통해, 예를 들면, 포스포르아미다이트 방법 및 보호된 2′-데옥시뉴클레오사이드로부터 유도된 포스포르아미다이트 빌딩 블록을 사용하여 제조할 수 있다. 원하는 올리고뉴클레오타이드를 수득하기 위하여, 빌딩 블록은 생성물의 서열에 의해 요구된 순서로 성장하는 올리고뉴클레오타이드 사슬에 순차적으로 커플링된다. 사슬 어셈블리의 완료시, 상기 생성물은 고상으로부터 용액으로 방출되고, 탈보호되며, 수집되고, 및 전형적으로 HPLC를 사용하여 정제된다. 고상 합성은 길이가 최대 약 200nt인 올리고뉴클레오타이드를 제조하는데 적합하며, 이는 약 65개 아미노산 또는 그 미만의 순서로 펩타이드를 인코딩한다. 합성된 올리고뉴클레오타이드의 말단은 합성된 올리고뉴클레오타이드의 발현 벡터내로의 결찰을 용이하게 하는 특이적인 제한 효소 절단 부위를 포함하도록 설계될 수 있다.
더 긴 펩타이드의 경우, 올리고뉴클레오타이드는 고상 합성 및 그 다음 다양한기술을 사용하여 함께 결찰된 합성 올리고뉴클레오타이드 서열을 통해 제조될 수 있다. 전체의 합성 유전자의 제작을 위한 재조합 기술은, 예를 들면, 다음에서 고려된다: Hughes 등, “Chapter Twelve - Gene Synthesis:Methods and Applications,” Methods in Enzymology 498:277-309 (2011) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다.
적합한 발현 벡터가 선택되면, 원하는 핵산 서열을 다음에 기재도니 당해 기술에서 표준 클로닝 절차를 상요하여 벡터내로 클로닝한다: Sambrook 등, Molecular Cloning:A Laboratory Manual, Cold Springs Laboratory, Cold Springs Harbor, N.Y.(1989), 또는 U.S. 특허 번호 4,237,224 (Cohen 및 Boyer에게 허여됨) (이는 이로써 그 전체가 참고로 편입된다). 이후에 상기 벡터는 적합한 숙주내로 도입된다.
다양한 숙주-벡터 시스템을 이용하여 본 발명의 펩타이드를 재조합적으로 발현시킬 수 있다. 주로, 벡터 시스템은 사용된 숙주와 양립가능하여야 한다. 숙주-벡터 시스템은 비제한적으로, 다음을 포함한다: 박테리오파아지 DNA, 플라스미드 DNA, 또는 코스미드 DNA로 형질전환된 박테리아; 미생물, 예컨대 효모 벡터를 함유하는 효모; 바이러스(예를 들면, 백시니아 바이러스, 아데노바이러스, 등)로 감염된 포유동물 세포 시스템; 바이러스 (예를 들면, 배큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 및 아그로박테리움으로 감염된 식물 세포. 이들 벡터의 발현 요소는 그것의 강도 및 특이성이 각기 다르다. 이용된 숙주-벡터 시스템에 따라서, 수많은 적합한 전사 및 번역 요소중 임의의 하나를 사용하여 본 발명의 이들 및 다른 측면을 수행할 수 있다.
정제된 펩타이드는 몇 개의 방법으로 수득될 수 있다. 펩타이드는 종래의 기술에 의해 정제된 형태 (바람직하게는 적어도 약 80% 또는 85% 순수한, 더 바람직하게는 적어도 약 90% 또는 95% 순수한)로 바람직하게 생산된다. 재조합 숙주세포가 펩타이드를 성장 배지내로 분리하도록 제조된 여부에 따라서(참고 U.S. 특허 번호 6,596,509(Bauer 등에 허여됨 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다)), 펩타이드는 원심분리 (분비된 펩타이드를 함유하는 상청액으로부터의 세포성 구성요소를 분리하기 위해)이후 상청액의 순차적인 암모늄 설페이트 침전에 의해 단리 및 정제될 수 있다. 상기 펩타이드를 함유하는 분획을 적절하게 크기의 덱스트란 또는 폴리아크릴아미드 칼럼내 겔 여과에 적용시켜 다른 단백질로부터 펩타이드를 분리한다. 필요하면, 펩타이드 분획은 HPLC에 의해 추가로 정제될 수 있다.
대안적으로, 목적한 펩타이드가 분비되지 않는 경우, 이는 재조합 세포로부터 표준 단리 및 정제 반응을 사용하여 분리할 수 있다. 이는 세포를 파괴(예를 들면, 초음파처리, 동결, 프렌치 프레스(French press), 등)한 후 세포성 장해로부터 펩타이드를 회수함을 포함한다. 정제는 상기 기재된 원심분리, 침전, 및 정제를 사용하여 달성할 수 있다. 상기 기재된 정제 태그의 사용은 당해 공정을 간소화할 수 있다.
특정 구현예에서, 정제는 요구되지 않는다. 정제가 수행되지 않는 경우, 무세포 분해물은 세포성 잔해의 제거를 위한 원심분리 후 회수될 수 있다. 수득한 무세포 용해물은 열로 충분한 양의 시간 동안 처리하여 회수된 분획 속에서 임의의 원상태 프로테아제를 불활성화할 수 있다: 예를 들면, 100 ℃에서 10분. 원한다면, 살생 제제, 프로테아제 저해제, 및 비-이온성 계면활성제 중 1종 이상 을 그와 같은 무세포 제제에 도입할 수 있다(참고 U.S.공개 출원번호 20100043095(Wei에 허여됨) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
본 발명의 펩타이드가 회수되면, 이들을 사용하여 담체, 및 살박테리아 또는 살생 제제, 프로테아제 저해제, 비-이온성 계면활성제, 비료, 제초제, 살충제, 살진균제, 살선충제, 생물학적 접종물, 식물 조절물질, 및 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 포함하는 조성물을 제조할 수 있다.
특정 구현예에서, 상기 조성물은 약 1 nM 초과의 펩타이드, 약 10 nM 초과의 펩타이드, 약 20 nM 초과의 펩타이드, 약 30 nM 초과의 펩타이드, 약 40 nM 초과의 펩타이드, 약 50 nM 초과의 펩타이드, 약 60 nM 초과의 펩타이드, 약 70 nM 초과의 펩타이드, 약 80 nM 초과의 펩타이드, 약 90 nM 초과의 펩타이드, 약 100 nM 초과의 펩타이드, 약 150 nM 초과의 펩타이드, 약 200 nM 초과의 펩타이드, 또는 약 250 nM 초과의 펩타이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 약 1 nM 미만의 펩타이드를 포함한다. 예를 들면, 특정 펩타이드는 약 2 ng/ml 미만, 약 1.75 ng/ml 미만, 약 1.5 ng/ml 미만, 약 1.25 ng/ml 미만, 약 1.0 ng/ml 미만, 약 0.75 ng/ml 미만, 약 0.5 ng/ml 미만, 약 0.25 ng/ml 미만, 또는 심지어 약 0.1 ng/ml 미만을 포함한다.
적합한 담체는 물, 1종 이상의 보조용매, 슬러리, 및 고형 담체 입자를 선택적으로 함유하는 수용액을 포함한다. 예시적인 고형 담체는 광물 석지 예컨대 실리케이트, 실리카겔, 탈크, 카올린, 석회석, 라임, 백악, 교회 점토, 황토, 점토, 백운석, 규조토, 황산칼슘, 황산마그네슘, 산화마그네슘, 토양 합성 물질, 및 야채 기원의 생성물, 예컨대 곡물 식사, 나무껍질분, 목재 식사 및 견과껍질 식사, 셀룰로오스 분말, 전분 및 전분 유도체, 뿐만 아니라 다른 모노-, 디-, 및 폴리-사카라이드를 포함한다.
적합한 비료는, 비제한적으로, 암모늄 설페이트, 암모늄 포스페이트, 암모늄 니트레이트, 우레아, 및 이들의 조합을 포함한다.
적합한 살충제는, 비제한적으로, 네오니코티노이드 부류의 구성원, 예컨대 이미디클로프리드, 클로티아니딘, 및 티아메톡삼; 오르가노포스페이트 부류의 구성원, 예컨대 클로르피리포스 및 말라티온; 피레트로이드 부류의 구성원, 예컨대 페르메트린; 다른 천연 살충제, 예컨대 니코틴, 노르니코틴, 및 파이레트린; 카바메이트 부류 의 구성원, 예컨대 알디카브, 카보푸란, 및 카바릴; 거대환식 락톤 부류 의 구성원, 예컨대 다양한 아바멕틴, 아베르멕틴, 및 이베르멕틴 생성물; 디아미드 부류 의 구성원, 예컨대 클로르안트라닐리프롤, 시안트라닐리프롤, 및 플루벤디아미드; 키틴 합성 저해제, 특히 벤조일우레아 부류의 것들, 예컨대 루페누론 및 디플루베주론; 및 이들의 임의의 조합, 예를 들면, 2종 이상, 3종 이상, 또는 4종 이상의 살충제의 조합을 포함한다. 추가의 살충제는 Alan Wood에 의해 작업되고 alanwood.net 인터넷 사이트에서 전자 형태로 이용가능한 데이타베이스인, 살충제 통상 명칭의 개요서에 나열되어 있다.
적합한 살진균제는, 비제한적으로, 다음을 포함한다: 스트로빌루린 부류의 구성원, 예컨대 아족시스트로빈, 파이라클로스트로빈, 트리플록시스트로빈, 피콕시스트로빈, 및 플루옥사스트로빈; 트리아졸 부류 의 구성원, 예컨대 이프코나졸, 메트코나졸, 테부코나졸, 트리티코나졸, 테트라코나졸, 디페노코나졸, 플루트리아폴, 프로피코나졸 및 프로티오코나졸; 석시네이트 탈수소효소 부류의 구성원, 예컨대 카복신, 플룩사파이록사드, 보스칼리드 및 세닥산:페닐아미드 부류의 구성원, 예컨대 메탈락실, 메페녹삼, 베나락실, 및 옥사딕실; 페닐피롤 부류 의 구성원, 예컨대 플루디옥소닐; 프탈이미드 부류 의 구성원, 예컨대 캅탄; 디티오카바메이트 부류 의 구성원, 예컨대 만코젭 및 티람; 벤즈이미다졸 부류 의 구성원, 예컨대 티아벤다졸; 및 이들의 임의의 조합, 예를 들면, 2종 이상, 3종 이상, 또는 4종 이상의 살진균제의 조합을 포함한다. 추가의 살진균제는 Alan Wood에 의해 작업되고 alanwood.net 인터넷 사이트에서 전자 형태로 이용가능한 데이타베이스인, 살충제 통상 명칭의 개요서에 나열되어 있다.
적합한 살선충제는, 비제한적으로, 카바메이트 부류의 화학물질 예컨대 알디카브, 알독시카브, 옥사밀, 카보푸란, 및 클레오토카브; 및 오르가노포스페이트 부류의 화학물질, 예컨대 티오나진, 에토프로포스, 페나미포스, 펜설포티온, 터부포스, 아사조포스, 및 에부포스를 포함한다. 추가의 살선충제는 Alan Wood에 의해 작업되고 alanwood.net 인터넷 사이트에서 전자 형태로 이용가능한 데이타베이스인, 살충제 통상 명칭의 개요서에 열거되어 있다.
적합한 살균제는, 비제한적으로, 디클로로펜 및 벤질알코올 헤미 포르말 (ICI로부터의 Proxel® 또는 Thor Chemie로부터의 Acticide® RS 및 Rohm & Haas로부터의 Kathon® MK) 및 이소티아졸리논 유도체, 예컨대 알킬이소티아졸리논 및 벤즈이소티아졸리논(Thor Chemie로부터의 Acticide® MBS; ICI로부터의 Proxel® GXL)을 포함한다. 추가의 살균제는 Alan Wood에 의해 작업되고 alanwood.net 인터넷 사이트에서 전자 형태로 이용가능한 데이타베이스인, 살충제 통상 명칭의 개요서에 나열되어 있다.
적합한 접종물은, 비제한적으로 다음을 포함한다: 브래디히조비움 아종(Bradyrhizobium spp .), 특히 브래디히조비움 야포니쿰 ( Bradyrhizobium japonicum) (BASF Vault® 생성물), 바실러스 서브틸리스 (Bacillus subtilis ), 바실러스 피르무스 (Bacillus firmus ), 바실러스 푸밀리스 (Bacillus pumilis ), 스트렙토마이세스 라이디쿠스 ( Streptomyces lydicus ), 트리코데르마 아종(Trichoderma spp.),파스퇴리아 아종( Pasteuria spp .), 리조비알 세포의 다른 배양물(BASF Nodulator® 및 Rhizo-Flo®), 및 이들의 임의의 조합, 예를 들면, 2종 이상, 3종 이상, 또는 4종 이상의 접종물.
식물 조절물질은 식물 생화학적 신호전달을 자극하거나 억제하는, 천연 또는 합성인 화학 물질이다. 이들은 보통, 그러나 배타적으로, 세포의 표면에서 수용체에 의해 인지되어 세포내에서 반응의 캐스케이드를 유발한다. 적합한 식물 조절물질은 비제한적으로, 에테폰; 에틸렌; 살리실산; 아세틸살리실 산; 자스몬산; 메틸 자스모네이트; 메틸 디하이드로자스모네이트; 키틴; 키토산; 압시스 산; 임의의 옥신 화합물 또는 저해제, 예를 들면, 비제한적으로 (4-클로로페녹시)아세트산, (2,4-디클로로페녹시)아세트산, 및 2,3,5-트리아이오도벤조산; 임의의 사이토키닌, 예를 들면, 비제한적으로 키네틴 및 지아틴; 지베렐린; 브라시놀라이드; 및 이들의 임의의 조합, 예를 들면, 2종 이상, 3종 이상, 또는 4종 이상의 조절물질의 조합을 포함한다.
다른 적합한 첨가제는 완충제, 습윤제, 코팅제, 및 연마제를 포함한다. 이들 물질은 본 발명에 따른 조성물의 적용을 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 조성물은 다른 종래의 종자 제형 및 처리 물질, 예를 들면, 점토 및 다당류와 함께 식물 씨드에 적용될 수 있다.
식물 종자 처리를 위한 조성물 또는 시스템 용도는 하기를 포함한다: 1종 이상의 본 발명의 펩타이드, 바람직하게는 P1, P4-14S, P6a, P14d, P15a, P18, P19, 또는 P25중 배타적으로 하나가 아닌, 1종 이상의 살충제, 살선충제, 살진균제, 다른 접종물, 또는 다른 식물 조절물질과의 조합, 예를 들면, 다중 살충제, 또는 다중 살선충제, 다중 살진균제, 다중 다른 접종물, 또는 다중 식물 조절물질의 조합. 이들 병용 치료를 위한 적합한 살충제, 살선충제, 살진균제, 접종물, 및 식물 조절물질은 상기 확인된 것들을 포함한다. 이들 조성물은 종자 처리 시기에 단일 조성물의 형태로 존재한다. 그에 반해서, 종자 처리에 사용된 시스템은 다중 처리를 포함할 수 있는데, 예를 들면, 펩타이드를 함유하는 조성물은 하나의 치료에 사용되고 1종 이상의 살충제, 살선충제, 살진균제, 식물 조절물질 및/또는 살균제를 포함하는 조성물은 별도의 처리시 사용된다. 후자의 구현예에서, 이들 처리 둘 다는 동시에, 즉, 식재 전 또는 대략 식재 시기에 수행된다.
하나의 이러한 예는 본 발명의 펩타이드 1종 이상, 예를 들면(비제한적으로), P1, P4-14S, P6a, P14d, P15a, P18, P19, 또는 P25 중 1종과, Bayer Crop Science로부터 이용가능한 Poncho™ (클로티아니딘), Bayer Crop Science로부터 이용가능한 Poncho™ VOTiVO (클로티아니딘 및 바실러스 피르무스 생물학적 살선충제), 및 Bayer Crop Science로부터 이용가능한 Gaucho™ (이미디클로프리드)의 조합을 포함한다.
또 다른 예는 본 발명의 펩타이드 중 1종 이상, 예를 들면(비제한적으로), P1, P4-14S, P6a, P14d, P15a, P18, P19, 또는 P25 중 1종과, Syngenta로부터 이용가능한 CruiserMaxx™ (티아메톡삼), Syngenta로부터 이용가능한 Cruiser Extreme™ (티아메톡삼, 메페녹삼, 플루디옥시닐, 및 아족시스트로빈), Syngenta로부터 이용가능한 Avicta™ (티아메톡삼 및 아바멕틴), 및 Syngenta 로부터 이용가능한 Avicta™ Complete (티아메톡삼, 아바멕틴, 및 Clariva Complete™(이는 파스퇴리아 니쉬자와에- Pn1 생물학적 접종물을 포함한다)), 및 Syngenta로부터 이용가능한 Avicta Complete™ 옥수수 (티아메톡삼, 메페녹삼, 플루디옥시닐, 아족시스트로빈, 티아벤다졸 및 아바멕틴). 의 조합을 포함한다.
또 다른 예는 본 발명의 펩타이드 중 1종 이상, 예를 들면(비제한적으로), P1, P4-14S, P6a, P14d, P15a, P18, P19, 또는 P25중 1종과, Vault Liquid plus Integral (브래디히조비움 ( Bradyrhizobium ) 종 및 BASF 로부터 이용가능한 바실러스 서브틸리스 균주 MBI 600 접종물), BASF 로부터 이용가능한 Vault NP (브래디히조비움 야포니쿰 ( Bradyrhizobium japonicum ) 접종물), 및 BASF 로부터 이용가능한 Subtilex NG (바실러스 서브틸리스 생물학적 접종물)의 조합을 포함한다.
본 발명은 또한 식물에 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 해충을 방제하고/하거나, 식물에게 항생제 또는 비생물학적 스트레스 내성을 부여하고/하거나, 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 방법에 관한 것이다. 이들 방법은 유효량의 본 발명의 단리된 펩타이드, 또는 본 발명의 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장하거나 성장할 것으로 예상되는 유전자좌에 적용함을 포함한다. 이러한 적용의 결과로서, 펩타이드는 식물의 세포 또는 식물 종자와 접촉하여, 식물 또는 식물 종자로부터 성장된 식물에서 식물 종자 질환 내성, 성장 향상, 생물학적 스트레스에 대한 내성, 비생물학적 스트레스에 대한 내성, 또는 변경된 생화학적 신호전달을 유도한다. 대안적으로, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물을 식물에 적용하여 이러한 식물 자체로부터 회수된 씨드가 식물에서 질환 내성을 부여하고/하거나, 곤충을 방제하고/하거나, 항생제 또는 비생물학적 스트레스에 대한 내성을 부여하고/하거나, 생화학적 신호전달을 조절하고/하거나, 성숙을 조절할 수 있다.
이들 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물이 적용된 식물 또는 식물 씨드 또는 유전자좌를 선택하는 것이 가능하다. 예를 들면, 높은 선충 함량을 함유하는 것으로 공지된 경작지의 경우, 이러한 경작지, 또는 경작지(위치)에서 성장될 식물 또는 식물 씨드는 본발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 본원에서 기재된 바와 같이 적용함으로써 선택적으로 처리할 수 있는 반면; 이러한 처리는 낮은 선출 함량을 함유하는 경작지에서 성장된 식물 또는 식물 씨드의 경우에 필수적이지 않을 수 있다. 유사하게, 관개가 감소된 경작지의 경우, 이러한 경작지, 또는 경작지(위치)에서 성장될 식물 또는 식물 씨드는, 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 본원에서 기재된 바와 같이 적용하여 선택적으로 처리할 수 있는 반면; 이러한 처리는 관개가 적절한 경장지에서 성장된 식물 또는 식물 씨드의 경우에 필수적이지 않을 수 있다. 마찬가지로, 홍수가 나는 경향이 있는 경작지의 경우, 이러한 경작지, 또는 경작지(위치)에서 성장될 식물 또는 식물 씨드는 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 본원에서 기재된 바와 같이 적용할 수 있는 반면에; 이러한 처리는 홍수가 나지 않는 경장지에서 상장된 식물 또는 식물 씨드의 경우에 필수적이지 않을 수 있다. 이러한 선택의 여전히 다른 예로서, 성장하는 계절의 특정 시기에 곤충이 공격하는 경향이 있는 경작지의 경우, 이러한 경작지, 또는 경작지(위치)에서 성장될 식물 또는 식물 씨드는 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 본원에서 기재된 바와 같이 적용함으로써 선택적으로 처리할 수 있는 반면; 성장하는 계절의 부적절한 시기 또는 이러한 공격이 없는 동일한 경작지는 처리되지 않을 수 있다. 이러한 선택 단계는 본원에 기재된 각각의 사용 방법을 실시하는 경우, 즉, 식물에 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 해충을 방제 (곤충 및 선충 포함)하고/하거나, 식물에 항생제 또는 비생물학적 스트레스 내성을 부여하고/하거나 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 경우 수행될 수 있다.
식물에 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 해충을 방제하고/하거나, 식물에게 스트레스 내성을 부여하고/하거나 식물 또는 씨드로부터 성장된 식물, 형질전환 식물 또는 식물 씨드에 생화학적 신호전달을 조절하기 위해 식물 또는 식물 씨드에 분리된 펩타이드 또는 이를 함유하는 조성물을 적용하기 위한 대안으로서, 형질전환 식물 또는 식물 씨드를 이용할 수 있다. 형질전환 식물을 이용하는 경우, 이는 본 발명의 펩타이드를 인코딩하는 DNA 분자로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하고 당해 식물을 DNA 분자가 식물에게 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 곤충을 방제하고/하거나, 항생제 또는 또는 비생물학적 스트레스에 대한 내성을 부여하고/하거나, 생화학적 신호전달을 조절하도록 하는데 효과적인 조건 하에서 성장시킴을 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 펩타이드를 암호화하는 DNA 분자로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하여 토양에 식재할 수 있다. 이후에, 식물을 DNA 분자가 펩타이드를 발현하도록 하는데 유효한 조건 하에서 식재된 종자로부터 번식시킴으로써 형질전환 식물에 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 곤충을 방제하고/하거나, 항생제 또는 또는 비생물학적 스트레스에 대한 내성을 부여하고/하거나, 생화학적 신호전달을 조절한다.
본 발명은 또한 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 부여하는 방법에 관한 것이다. 이들 방법은 유효량의 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 본 발명에 따른 조성물을 식물 또는 식물이 성장하는 위치에 적용함을 포함한다. 이러한 적용의 결과로서, 상기 펩타이드는 식물의 세포 또는 식물 종자와 접촉하여 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도한다. 대안적으로, 유효량의 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 본 발명에 따른 조성물은 수확된 과일 또는 야채에 적용시킬 수 있다. 이러한 적용의 결과로서, 상기 펩타이드는 수확된 과일 또는 야채의 세포와 접촉하여, 처리된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 처리된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도한다.
원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도하기 위해 단리된 펩타이드 또는 이를 함유하는 조성물을 식물 또는 식물 씨드에 적용하기 위한 대안으로서, 형질전환 식물 또는 식물 씨드를 이용할 수 있다. 형질전환 식물을 이용하는 경우, 이는 본 발명의 펩타이드를 인코딩하는 DNA 분자로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하고 당해 식물을 DNA 분자가 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도하기에 효과적인 조건 하에서 성장시킴을 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 펩타이드를 암호화하는 DNA 분자로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하여 토양에 식재할 수 있다. 이후에, 식물을 식재된 종자로부터 DNA 분자가 펩타이드를 발현함으로써 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도하도록 하는 조건하에서 증식시킨다.
이들 구현예에서, 본 발명을 수행하기 위한 형질전환 식물 또는 식물 씨드를 선택하는 것 또한 가능하다. 예를 들면, 높은 선충 함량을 함유하는 것으로 알려진 경작지의 경우, 형질전환 식물 또는 식물 씨드를 이러한 경작지에서 선택적으로 성장시킬 수 있는 반면; 비 -형질전환 식물 또는 식물 씨드는 낮은 선충 함량을 함유하는 경작지에서 성장시킬 수 있다. 유사하게, 관개가 감소된 경작지의 경우, 형질전환 식물 또는 식물 씨드를 이러한 경작지에서 선택적으로 성장시킬 수 있는 반면; 비 -형질전환 식물 또는 식물 씨드는 관개가 적절한 경작지에서 상장시킬 수 있다. 마찬가지로, 홍수가 나는 경향이 있는 경작지의 경우, 형질전환 식물 또는 식물 씨드를 이러한 경작지에서 성장시킬 수 있는 반면; 비-형질전환 식물 또는 식물 씨드는 홍수가 나지 않는 경작지에서 성장시킬 수 있다. 이러한 선택의 여전히 또 다른 예로서, 성장하는 계절의 특정 시기에 곤충이 공격하는 경향이 있는 경작지의 경우, 형질전환 식물 또는 식물 씨드를 이러한 경작지에서 선택적으로 성장시킬 수 있는 반면; 비-형질전환 식물 또는 식물 씨드는 이러한 곤충 공격이 없는 경장지에서 성장시킬 수 있다. 이러한 선택 단계는 본원에 기재된 각각의 사용 방법을 실시하는 경우, 즉, 식물에 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 해충을 방제 (곤충 및 선충 포함)하고/하거나, 식물에 항생제 또는 비생물학적 스트레스 내성을 부여하고/하거나 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 경우 수행될 수 있다.
본 발명은 또한 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 부여하는 방법에 관한 것이다. 이들 방법은 유효량의 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 본 발명에 따른 조성물을 식물 또는 식물이 성장하는 위치에 적용함을 포함한다. 이러한 적용의 결과로서, 상기 펩타이드는 식물의 세포 또는 식물 종자와 접촉하여 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도한다. 대안적으로, 유효량의 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 본 발명에 따른 조성물은 수확된 과일 또는 야채에 적용시킬 수 있다. 이러한 적용의 결과로서, 상기 펩타이드는 수확된 과일 또는 야채의 세포와 접촉하여, 처리된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 처리된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도한다.
이들 구현예에서, 식물, 절단부, 과일, 채소류, 또는 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물이 적용되는 위치를 선택하는 것이 또한 가능하다. 예를 들면, 먼 거리로 출하되거나 장기간 동안 저장되는 수확된 절단부 또는 과일 또는 채소류의 경우, 이들은 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 본원에서 기재된 바와 같이 선택적으로 처리될 수 있는 반면; 근거리로 출하되어 실질적인 보관 기간 없이 소비되는 것으로 의도되는 수확된 절단부 또는 과일 또는 채소류는 이러한 처리로부터 제외될 수 있다.
원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도하기 위해 단리된 펩타이드 또는 이를 함유하는 조성물을 식물 또는 식물 씨드에 적용하기 위한 대안으로서, 형질전환 식물 또는 식물 씨드를 이용할 수 있다. 형질전환 식물을 이용하는 경우, 이는 본 발명의 펩타이드를 인코딩하는 DNA 분자로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하고 당해 식물을 DNA 분자가 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도하기에 효과적인 조건 하에서 성장시킴을 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 펩타이드를 암호화하는 DNA 분자로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하여 토양에 식재할 수 있다. 이후에, 식물을 식재된 종자로부터 DNA 분자가 펩타이드를 발현함으로써 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도하도록 하는 조건하에서 증식시킨다.
이들 구현예에서, 본 발명을 수행하기 위한 형질전환 식물 또는 식물 씨드를 선택하는 것 또한 가능하다. 예를 들면, 형질전환 식물 또는 식물 씨드를 수확된 절단부 또는 과일 또는 채소류가 먼 거리로 출하되거나 수확 후 장기간 동안 저장되는 경우 성장을 위해 선택할 수 있는 반면; 비-형질전환 식물 또는 식물 씨드는 수확된 절단부 또는 과일 또는 채소류가 근거리로 출하되어 실질적인 보관 기간 없이 소비되는 것으로 의도되는 경우 이러한 처리로부터 제외될 수 있다.
적합한 식물은 천연 또는 유전적으로 변형된 형태에 상관없이, 쌍떡잎 및 외떡잎 식물, 예를 들면 농업, 산림, 장식 및 원예 식물을 포함한다. 예시적인 식물은, 비제한적으로 다음을 포함한다: 알팔파, 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 보리, 콩, 너도밤나무 (파거스 종), 베고니아, 자작나무, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 캄포르, 카놀라, 당근, 피마자유 식물, 체리, 신나몬, 사이트루스, 코코아 빈, 커피, 옥수수, 면, 오이, 조롱박, 유칼립투스, 전나무, 아마, 사료용 비트, 후크시아, 마늘, 제라늄, 포도, 땅콩, 삼, 홉 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 황마, 렌즈콩, 상추, 아마인, 멜론, 머스타드, 승도복숭아, 오크, 귀리, 오일 야자나무, 오일-종자 평지, 올리브, 양파, 파프리카, 완두콩, 복숭아, 배, 펠라고늄, 후추, 피튜니아, 소나무 (피누스 종), 자두, 포플러 (파퓰러스 종), 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 쌀, 고무 나무, 호밀, 수수, 대두, 시금치, 가문비나무, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 차, 티크, 담배, 토마토, 라이밀, 잔디, 수박, 밀 및 버드나무 (살릭스 종),아라비돕시스 탈리아나, 세인트폴리아, 포인세티아, 크라이산테멈, 카네이션, 및 지니아.
변형된 생화학적 신호전달과 관련하여, 이는 특정 식물 생화학적 경로의 향상 및 특정 다른 식물 생화학적 경로의 약화 둘 다를 포함한다. 본 발명에 따라 변경될 수 있는 생화학적 신호전달 경로는 유전자 발현 및 단백질 생산, 대사물의 생산, 및 신호전달 분자/2차 대사물의 생산을 포함한다. 예시적인 생화학적 신호전달 경로 및 그것의 변형은, 비제한적으로 다음을 포함한다: 산화질소 생산, 과산화물 생산, 및 다른 2차 대사물의 유도; 에틸렌 신호전달 경로 효능제 및 에틸렌-반응성 유전자 발현의 유도(참고 Dong 외, Plant Phys.136:3628-3638 (2004); Li 등, Planta 239:831-46 (2014); Chang 등, PLoS One 10, e0125498 (2015) (이들 각각은 이로써 그 전체가 참고로편입된다); 살리실산 신호전달 경로의 효능제 및 살리실산-반응성 유전자 발현의 유도(참고 Dong 등, Plant J. 20:207-215 (1999) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다); 압시스 산 경로의 유도 및 압시스 산-반응성 유전자 발현의 유도(참고 Dong 등, Planta 221:313-327 (2005) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다); 지베렐린 신호전달 경로의 효능제 및 지베렐린-반응성 유전자 발현의 유도(참고 Li 등, Planta 239:831-46 (2014) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다); 자스몬산 신호전달의 길항제 및 자스몬산-반응성 유전자의 발현의 억제(참고 Dong 등, Plant Phys. 136:3628-3638 (2004) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다); 프로테아제 저해제 발현의 유도(참고 Laluk 및 Mengiste, Plant J. 68:480-494 (2011); Xia 등, Chin. Sci . Bull 56:2351-2358 (2011) (이들 각각은 이로써 그 전체가 참고로 편입된다); 식물 조직에서 반응성 산소 종 생산의 유도; 면역-관련된 및 항미생물 펩타이드 생산의 유도, 예컨대, 비제한적으로, 페록시다아제, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 키티나제, 및 -1,3-글루카나제 (Wang 등, J. Agric. Food Chem . 59:12527-12533 (2011) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다)의 유도; 및 엑스판신 유전자 발현 및 생산의 유도(참고 Li 등, Planta 239:831-46 (2014) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
질환 내성과 관련하여, 감염에 대한 절대적인 면역력이 부여되지 않을 수 있지만, 질환의 중증도는 감소되고 증상 발달은 지연된다. 병변 수, 병변 크기, 및 진균 병원체의 포자형성 모두는 감소된다. 질환 내성을 부여하는 이러한 방법은 이전에 치료할 수 없는 질환을 치료하고, 비용으로 인하여 별도로 처리될 수 없는 질환을 전신적으로 치료하고, 감염원 또는 환경적으로 유해한 물질을 피하기 위한 포텐셜을 갖는다.
본 발명에 따라 식물에 병원체 내성을 부여하는 방법은 다양한 병원체, 예를 들면, 바이러스, 박테리아, 및 진균에 대해 내성을 부여하는데 유용하다. 내성, 특히, 하기 바이러스에 대한 내성은 본 발명의 방법에 의해 달성될 수 있다: 담배 모자이크 바이러스 및 토마토 모자이크 바이러스.내성, 특히, 하기 박테리아에 대한 내성 또한 본 발명에 따라 식물에 부여될 수있다: 병원성 슈도모나스( Pseudomonas ) 아종, 병원성 어위니아 아종( Erwinia spp .), 병원성 크산토모나스 ( Xanthomonas ) 아종, 및 병원성 랄스토니아 ( Ralstonia ) 아종.식물은 본 발명의 방법의 사용에 의해 특히, 하기 진균에 대해 내성이 될 수 있다: 푸사리움 ( Fusarium ) 아종 및 파이토프토라(Phytophthora) 아종.
식물 성장을 향상시키기 위한 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 사용과 관련하여, 다양한 형태의 식물 성장 향상 또는 촉진이 달성될 수 있다. 이는 식물 성장이 씨드로부터 개시되는 경우와 같이 조기에 또는 식물의 생애 중 후에 발생할 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 식물 성장은 더 큰 수율, 증가된 식물 활력, 씨딩의 증가된 활력(즉, 발아후), 증가된 식물 중량, 증가된 바이오매스, 식물당 증가된 꽃의 수, 더 큰 그레인 및/또는 과일 수확량, 생상된 씨드의 증가된 양, 발아된 씨드의 증가된 백분율, 증가된 발아 속도, 증가된 식물 크기, 감소된 식물 높이 (밀의 경우), 더 큰 바이오매스, 보다 더 및 큰 과일, 조기 과일 천연색, 조기 싹, 과일 및 식물 성숙, 더 큰 어린나무 또는 곁가지, 더 큰 잎, 지연된 잎 노화, 증가된 싹 성장, 증가된 뿌리 성장, 변경된 뿌리/싹 분배, 증가된 단백질 함량, 증가된 오일 함량 증가된 탄수화물 함량 증가된 안료 함량 증가된 클로로필 함량 증가된 총 광합성, 증가된 광합성 효율, 감소된 호흡 (lower O2 용법), 수율-감소 처리에 대한 보충, 줄기의 증가된 내구성 (및 줄기 쓰러짐에 대한 내성), 뿌리의 증가된 내구성 (및 뿌리 쓰러짐에 대한 내성), 낮은 광 조건하에서 더 나은 식물 성장, 및 이들의 조합을 포함한다. 그 결과, 본 발명은 재배자에게 유의미한 경제적 이점을 제공한다. 예를 들면, 조기 발아 및 조기 성숙은 짧은 성장 계절이 그 지역에서 그것의 성장을 달리 불가능하게 할 수 있는 지역에서 농작물이 성장하도록 한다. 씨드 발아의 증가된 백분율은 개선된 작물 스탠드(crop stand) 및 더 효율적인 종자 사용을 생성한다. 더 큰 수율, 증가된 크기, 및 향상된 바이오매스 생산은 지역의 주어진 플롯으로부터 더 큰 매출 생성을 허용한다.
해충(예를 들면, 생물학적 스트레스유발인자인 비제한적으로 곤충 및 선충)을 방제하기 위한 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 사용과 관련하여, 이러한 해충 방제는 해충을 본 발명의 펩타이드 또는 조성물이 적용될 식물과 접촉시키는 것을 방지하고, 부상을 치유함으로써 식물에 대한 직접적인 손상을 방지하며, 해충이 이러한 식물로부터 떨어지도록 하고, 이러한 식물에 대해 근접한 해충을 사멸하고, 이러한 식물에서 곤충 유충의 먹이 공급을 방해하며, 숙주 식물의 콜로니화로부터 해충을 방지하며, 식물 독소로부터 곤출을 콜로니화하는 것을 방지하며, 숙주 식물위에 알 침착을 방지하는 것을 포함한다. 본 발명은 또한 해충 감염으로부터 생성된 식물에 대한 후속의 질환 손상을 방지한다.
본 발명은 다양한 곤충 (생물학적 스트레스유발인자)에 대해 효과적이다. 유럽 옥수수 천곤충(European corn borer)은 옥수수(덴트(dent) 및 단맛 옥수수)의 주요 해충일 뿐만 아니라 200개 이상의 식물 종, 예를 들면, 녹색, 왁스, 및 리마콩(lima bean) 및 식용 대두, 후추, 감자, 및 토마토 플러스 많은 잡초 종을 먹는다. 다양한 야채 농작물을 손상시키는 추가의 곤충 유충 섭식 해충은 하기를 포함한다: 비트무(beet) 거염벌레, 양배추 총채벌레, 큰담배밤나방의 유충(corn ear worm), 가을 거염벌레(fall armyworm), 배추좀나방 애벌레(diamondback moth), 양배추 뿌리 구더기(cabbage root maggot), 양파 구더기, 종자 옥수수 구더기, 명나방과의 나방(pickleworm) (메론웜(melonworm)), 후추 구더기, 및 토마토 요충.집합적으로, 이러한 해충의 그룹은 전세계적으로 야채 생산을 위한 경제적으로가장 중요한 그룹을 나타낸다. 본 발명은 또한 선충, 또 다른 부류의 경제적으로 중요한 생물학적 스트레스유발인자에 대해 효과적이다. 대두 시스트 선충(헤테로데라 글리신스 (Heterodera glycines ))는 대두의 주요 해충이다. 콩팥모양 선충(로틸렌쿨루스 레니포르미스 (Rotylenchulus reniformis ))는 추가의 작물 종, 특히 대두 및 옥수수에 기생할 수 있으므로 면화의 주요 해충이다. 추가의 선충 해충은 멜로이도기네(Meloidogyne) 속의 뿌리 혹 선충(특히, 면, 밀, 및 보리에서), 헤테로데라 (Heterodera) 속의 곡물 포자 선충 (특히, 대두, 밀, 및 보리에서), 프라틸렌쿠스 (Pratylenchus) 속의 뿌리 병변 선충, 안구이나(Anguina)속의 씨드 혹 선충(seed gall nematode) (특히, 밀, 보리, 및 호밀에서), 및 디틸렌쿠스(Ditylenchus) 속의 줄기 선충을 포함한다. 다른 생물학적 스트레스유발인자는 거미류, 잡초, 및 이들의 조합을 포함한다.
식물에 비생물학적 스트레스 내성을 부여하기 위한 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 사용과 관련하여, 이러한 비생물학적 스트레스는 식물 생리학 및 발달에 역효과를 갖는 임의의 환경적인 인자를 포함한다. 이러한 환경적인 스트레스의 예는 기후-관련된 스트레스(예를 들면, 가뭄, 홍수, 서리, 차가운 온도, 고온, 과도한 빛, 및 불충분한 빛), 대기 오염 스트레스 (예를 들면, 이산화탄소, 일산화탄소, 이산화황, NOx, 탄화수소, 오존, 자외선 방사선, 산성비), 화학 (예를 들면, 살충제, 살진균제, 제초제, 중금속), 영양 스트레스 (예를 들면, 비료, 미량영양소, 다량영양소, 특히 칼륨, 질소 유도체, 및 아인산 유도체의 과다 및 부족), 및 상처에 대한 개선된 치유 반응을 포함한다. 본 발명의 펩타이드의 사용은 식물에게 이러한 형태의 환경적인 스트레스에 대한내성을 부여한다.
본 발명의 추가의 측면은 안정제(safener)로서 본 발명의 펩타이드를 다음에 기재된 바와 같이 물 속에 수생 잡초의 방제를 위한 1종 이상의 활성제와 함께 사용하는 것을 포함한다: U.S.공개번호 20150218099(Mann에게 허여됨) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
본 발명의 또 다른 측면은 감소된 물 관개의 조건 하에서 성장된 식물에 적용하기 위한 조성물에서 식물 강화제로서 본 발명의 펩타이드의 용도에 관한 것이며, 여기서 조성물은 또한 다음에 기재된 바와 같은 적어도 1종의 항산화제 및 적어도 1종의 방사선 매니저, 및 선택적으로 적어도 1종의 식물 성장 조절제를 포함한다: U.S.공개번호 20130116119(Rees 등에게 허여됨) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다.
상기 펩타이드 또는 조성물의 적용을 포함하는 본 발명의 방법은 식물의 모두 또는 일부, 예를 들면, 잎, 줄기, 뿌리, 무성아 (예를 들면, 절단부), 과일, 등을 처리하는 경우 다양한 절차를 통해 수행할 수 있다. 이는 식물내로 상기 펩타이드의 침윤(필수적인 것은 아니다)을 포함할 수 있다. 적합한 적용 방법은 높은 또는 낮은 압력 분무, 주사, 및 펩타이드가 적용되는 시기에 근접하여 잎 마모를 포함한다. 본 발명의 적용 구현예에 따라 식물 씨드를 처리하는 경우, 과민성 반응 유발제 단백질 또는 폴리펩타이드를 낮은 또는 고압 분무, 코팅, 액침 (예를 들면, 침지), 또는 주사에 의해 적용할 수 있다. 다른 적합한 적용 절차는 식물 또는 식물 종자의 세포와 과민성 반응 유발제 폴리펩타이드 또는 단백질을 접촉시킬 수 있는 당해 분야의 숙련가에 의해 구체화될 수 있다. 본 발명의 펩타이드 또는 조성물이 처리되면, 씨드는 종재의 절차를 사용하여 천연 또는 인공 토양에 식재되고 재배되어 식물을 생산한다. 식물이 본 발명에 따라 처리된 씨드로부터 증식된 경우, 상기 식물을 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 1회 이상의 적용으로 처리하여 식물에 대해 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 식물에서 곤충을 방제하고/하거나, 항생제 또는 비생물학적 스트레스 내성을 부여하고/하거나, 제거된 절단부의 건조 내성을 개선하고/하거나, 수확된 과일 또는 채소류에 수거후 질환 내성 또는 건조 내성을 부여하고/하거나, 수확된 과일 또는 채소루에 대해 과일 또는 야채 성숙 수명을 개선시킬 수 있다.
본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 본 발명에 따라서 식물 또는 식물 씨드에 단독으로 또는 다른 물질과의 혼합물로 적용될 수 있다. 대안적으로, 펩타이드 또는 조성물을 상이한 시간에 적용된 다른 물질과 함께 식물에 별도로 적용할 수 있다.
형질전환 식물 및 형질전환 종자의 사용을 포함하는 본 발명의 대안적인 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 식물 또는 씨드에 국소 적용될 필요가 없다. 대신에, 본 발명의 펩타이드를 암호화하는 DNA 분자로 형질전환된 형질전환 식물을 당해 기술에서 잘 알려진 절차에 따라서 생산한다. 식물에서 발현시키기에 적합한 벡터(즉, 식물에서 작동가능한 번역 및 전사 조절 서열을 함유하는)를 마이크로피펫을 사용함으로써 식물 세포내로 직접 미세주사하여 재조합 DNA를 기계적으로 전달한다. Crossway, Mol. Gen. Genetics, 202:179-85 (1985) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다). 유전 물질은 또한, 식물 세포내로 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 전달할 수 있다. Krens, 등, Nature, 296:72-74 (1982) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
본 발명에 따른 펩타이드를 인코딩하는 유전자를 사용하여 형질전환 식물 세포내로 형질전환하는 또 다른 접근법은 숙주 세포의 입자 폭격(바이오리스틱 형질전환으로도 공지된다) 이다. 이것은 몇개이 방식들 중 하나로 달성될 수 있다. 하나는 세포에서 불활성 또는 생물학적 활성 입자를 추진함을 포함한다. 당해 기술은 다음에 개시된다: U.S. 특허 번호 4,945,050, 5,036,006, 및 5,100,792(모든 Sanford 등에 허여됨) (이는 이로써 참고로 편입된다). 일반적으로, 당해 절차는 세포의 외표면을 침투하여 이의 내부에 편입되도록 하기에 유효한 조건 하에서 세포에서 불활성 또는 생물학적 활성 입자을 추진함을 포함한다. 불활성 입자가 이용된 경우, 벡터는 이종성 DNA를 함유하는 벡터를 사용하여 입자를 코팅함으로써 세포내로 도입시킬 수 있다. 대안적으로, 표적 세포는 벡터에 의해 둘러싸이므로 벡터는 입자를 따라 세포내로 운반된다. 생물학적 활성 입자(예를 들면, 벡터 및 이종성 DNA를 함유하는 건조된 박테리아 세포)를 또한 식물 세포내로 추진할 수 있다.
도입의 여전히 또 다른 방법은 다른 독립체, 미니셀(minicell), 세포, 리소좀 또는 다른 가용성 지질-표면화된 바디를 사용한 원형질의 융합이다. Fraley, 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 79:1859-63 (1982) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다). 상기 DNA 분자는 또한, 전기천공에 의해 식물 세포내로 도입될 수 있다. Fromm 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 82:5824 (1985) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다). 당해 기술에서, 식물 원형질은 발현 카세트를 함유하는 플라스미드의 존재하에서 전기천공된다. 높은 자기장의 전기 자극은 생체막을 가역적으로 침투하여 플라스미드의 도입을 허용한다. 전기천공된 식물 원형질은 세포벽을 재구성하고, 분열하여, 재생된다.
DNA 분자를 식물 세포내로 도입하는 또 다른 방법은 식물 세포를 유전자로 미리 형질전환된 아그로박테리움 투메파시엔스 또는 에이. 리조게네스(A. rhizogenes)로 감염시키는 것이다. 당해 기술에 공지된 적절한 조건 하에서, 형질전환된 식물 세포는 성장하여 순 또는 뿌리를 형성시키고 식물로 발달한다. 일반적으로, 당해 절차는 식물 조직을 박테리아의 현탁액과 함께 접종하고 당해 조직을 48 내지 72 시간 동안 항생제가 들어있지 않은 재생 배지 속에서 25-28°C에서 인큐베이팅함을 포함한다. 아그로박테리움은 그램-음성 패밀리 리조비아세아에(Rhizobiaceae)의 대표적인 속이다. 그것의 종은 근두 암종(에이. 투메파시엔스) 및 뿌리털 질환(에이. 리조게네스)에 관여한다. 근두 암종 종양 및 뿌리털 질환에 걸린 식물 세포는 박테리아에 의해서만 대사되는, 오핀으로 공지된 아미노산 유도체를 생산한다. 오핀의 발현에 관여하는 박테리아 유전자는 키메라성 발현 카세트를 위한 편리한 공급원이다. 또한, 오핀의 존재를 검정하는 것은 형질전환된 조직을 확인하는데 사용될 수 있다. 이종성 유전적 서열은 적절한 식물 세포내에 에이. 투메파시엔스의 Ti 플라스미드 또는 에이. 리조게네스 의 Ri 플라스미드 수단에 의해 도입시킬 수 있다. 상기 Ti 또는 Ri 플라스미드는 아그로박테리움에 의한 감염시 식물 세포내로 전달되어 식물 게놈내로 안정되게 통합된다. J.Schell, Science, 237:1176-83 (1987) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
형질전환후, 형질전환된 식물 세포는 재생되어야 한다. 배양된 원형질로부터 식물 재생은 다음에 기재되어 있다: Evans 등, Handbook of Plant Plant Cell Cultures, Vol. 1:(MacMillan Publishing Co., New York, 1983); 및 Nasil I.R.(ed.), Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Acad.Press, Orlando, Vol. 1, 1984, 및 Vol. Ill (1986) (이는 이로써 그 전체가 참고로 편입된다).
실제로 모든 식물이 배양 세포 또는 조직으로부터 재생될 수 있음을 공지되어 있다. 재생 수단은 식물의 종에 따라 상이하지만, 일반적으로 형질전환된 원형질의 현탁액 또는 형질전환된 외식편을 함유하는 페트리 디쉬가 먼저 제공된다. 가골 조직(callus tissue)이 형성되고 순이 가골로부터 유도된 후 뿌리가 내린다. 대안적으로, 배아 형성은 가골 조직내에서 유도될 수 있다. 이들 배아는 천연 배아로서 발아하여 식물을 형성한다. 배양 배지는 일반적으로 다양한 아미노산 및 호르몬, 예컨대, 옥신 및 사이토키닌을 함유할 것이다. 특히 옥수수 및 알팔파와 같은 이러한 종의 경우 글루탐산 및 프롤린을 배지에 가하는 것이 또한 유리할 수 있다. 효율적인 재생은 배지, 유전자형, 및 배양 이력에 의존할 것이다. 이들 3가지 변수가 제어된 후, 재생은 보통 재생산가능하고 및 반복가능하다.
발현 카세트가 형질전환 식물내에 안정되게 편입된 후, 이는 성 교배에 의해 다른 식물로 전달될 수 있다. 임의의 수의 표준 품종개략 기술을 교차시킬 종에 따라 사용할 수 있다.
이러한 유형의 형질전환 식물이 생산되면, 식물 자체를 종래의 절차에 따라 과민성 반응 유발제를 인코딩하는 유전자의 존재하에 배양하여 질환 내성, 향상된 식물 성장, 식물에서 곤충의 방제, 무생물적 또는 생물학적 스트레스 내성, 제거된 절단부의 개선된 건조 내성, 수거후 질환 내성 또는 수확된 과일 또는 채소류에서 건조 내성, 및/또는 수확된 과일 또는 체소류에 대한 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 생성한다.
대안적으로, 형질전환 종자는 형질전환 식물로부터 회수된다. 이들 씨드는 이후에 토양에 식재되어 종래의 절차를 사용하여 재배됨으로써 형질전환 식물을 생산한다. 형질전환 식물은 식물에 대해 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 곤충을 방제하고/하거나, 무생물적 또는 생물학적 스트레스 내성을 부여하고/하거나, 제거된 절단부의 건조 내성을 부여하고/하거나, 수확된 과일 또는 채소류에서 수거후 질환 내성 또는 건조 내성을 부여하거나, 수확된 과일 또는 채소류에 대해 과일 또는 야채 성숙의 개선된 수명을 부여하기에 유효한 조건하에서 시재된 형질전환씨드로부터 번식된다.
형질전환 식물 및 식물 씨드가 본 발명에 따라 사용된 경우, 이들은 본 발명의펩타이드 또는 본 발명의 조성물이 적용된 식물 및 씨드를 치료하기 위해 사용된 바와 동일한 물질로 처리할 수 있다. 이들 다른 물질, 예를 들면, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 상기-주목된 절차, 예를 들면 높은 또는 낮은 압력 분무, 주사, 코팅, 및 액침에 의해 형질전환 식물 및 식물 씨드에 적용될 수 있다. 유사하게, 식물이 형질전환 식물 씨드로부터 번식되면, 당해 식물을 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 1종 이상의 적용으로 처리하여 질환 내성을 부여하고, 성장을 향상시키고, 곤충을 방제하고, 무생물적 또는 생물학적 스트레스 내성, 제거된 절단부의 건조 내성, 수확된 과일 또는 채소류에서 수거후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 부여한다.
이러한 형질전환 식물은 또한, 종래의 식물 처리 제제, 예를 들면, 살박테리아 또는 살생 제제, 프로테아제 저해제, 비-이온성 계면활성제, 비료, 제초제, 살충제, 살진균제, 살선충제, 생물학적 접종물, 식물 조절물질, 및 이들의 혼합물로, 상기에서 기재된 바와 같이 처리할 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 구현예를 나열하기 위해 제공되나 그것의 범위를한정하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예 1 - 다음의 “HR 박스” 펩타이드의 개발: 서열식별번호: 93
HR 박스는 수많은 과민성 반응-유도 서열의 실험을 기반으로 원래 개발되었다(P1, 서열식별번호: 4; P4, 서열식별번호: 5; 및 P15, 서열식별번호: 64, 다른 것 중에서). 류신 및 이소류신 잔기의 반복 서열이 확인되었다. P4는 HR 유발의 서열 결정 인자를 나타낼 수 있는 돌연변이 연구에 대한 기본인 대표적인 서열로서 선택되었다. 담배에서 HR은 Wei, Science 257:85-88 (1992) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다)에 기재된 바와 같이 시험하였다. 간단히, 펩타이드를 수용액 속에서 500 mg/ml의 농도로 용해하였다. 4개의 시리즈 희석물을 동등 용적의 물을 사용하여 수행하여, 펩타이드 샘플을 500, 250, 125, 62.5, 31.25 μg/ml 펩타이드 용액에서 수득하였다. 니코티아나 타바큠 컬티바 크산티(cultivar xanthi) 식물을 5-7 주령(개화전)에서 사용하였다. 잎을 중간 잎 패널에서 이쑤시개로 약하게 펀칭하였다. 이후에, 펩타이드 용액을 무-바늘 주사기를 통해 상처내로 주입하고, 패널을 필링하였다. 각 펩타이드 샘플을 2개의 상이한 식물의 잎내로 주입하였다. 잎을 관측하고 전형적인 프로그래밍된 세포사인, 고사 및 갈변에 대해 다음 48시간에 걸쳐 스코어하였다. 이들 돌연변이 연구는 3개의 주요 목표를 가졌다: (1) 용액 펩타이드의 안정성의 증가; (2) 분열성 돌연변이를 제조하여 HR에 가장 중요한 잔기의 입증; 및 (3) 보존적 돌연변이를 제조하여 특정한 아미노산에 대한 특이성 정도의 확인.
펩타이드를 용해도, 화학 분해에 대한 안전성, 용액 안전성에 있어서 팽화제의 효과 용액 안정성, 산화 보호, 및 용액 안정성 연구중 1종 이상에 대해 평가하였다.
용해도는 탈이온수 속에서 순수한, 화학적으로 합성된 펩타이드의 0.2% AI (활성 성분) 용액을 생성하고, 실온에서 48시간에 걸쳐 침전의 증거에 대해 용액을 관찰함으로써 평가하였다. P1 (서열식별번호: 4)는 물 속에서 크게 불용성이다. 그러나, 다음을 지닌 돌연변이체: 글루타메이트 잔기를 대체하는 몇 개의 글루타민 잔기 (P1-2E,8E,11E,15E,18E, 서열식별번호: 46)는 가용성이다. P4 (서열식별번호: 5) 및 P4-14S (서열식별번호: 6)는 또한 완전히 가용성이다.
후속의 실험을 수행하여 펩타이드 용해도를 우수하게 정량하였다. 20-50mg의 순수한 펩타이드를 0.25ml의 물과 혼합하고 증가하는 양의 물을 펩타이드가 용해될 때까지 가하였다. 이들 실험은 다음을 평가한다: P1의 용해도(서열식별번호: 4) (< 1mg/ml에서), P4의 용해도(서열식별번호: 5) (100mg/ml에서), 및 P1-18K의 용해도(서열식별번호: 45) (20mg/ml에서).
화학 분해에 대한 안정성은 탈이온수 속에서 순수한, 화학적으로 합성된 펩타이드, 용적에 대해 0.25 중량%의 Proxel® GXL (살생물제), 및 50 밀리몰 (mM)의 8개의 버퍼(분리하여)의 0.2% AI 용액을 아래와 같이 생성함으로써 다양한 pH 버퍼 속에서 평가하였다: MES pH 5.6, MOPS pH 6.5, 시트레이트 pH 7.2, EDDS pH 7.3, EDTA pH 8, 포스페이트 pH 8, 이미다졸 pH 8, 및 TES pH 8.상기 용액을 HPLC에서 분해의 증거(0시 샘플에 대해 상대적으로, 시간에 걸친 펩타이드 신호의 손실 %)에 대해 수주의 기간에 걸쳐 승온(50 ℃)에서 관찰하였다. P1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E (서열식별번호: 46)는 다음보다 더 안정하였고: P1 (서열식별번호: 4) (80% 이상에서 40일 대 20일), 및 P4-14S (서열식별번호: 6)은 다음보다 유의미하게 더 안정하였다: P4 (서열식별번호: 5) (80% 이상에서 35일 대 3일). P1 및 P4-14S에 대한 가장 우수한 버퍼는 TES pH 8 및 시트레이트 pH 7.2의 순서이다. P1의 침전은 며칠 후 관측되었다. 다른 펩타이드 (P1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E; P4, 및 P4-14s)는 용액 속에 남았다.
P1 및 P1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E의 화학 분해시 팽화제의 효과는 순수한, 화학적으로 합성된 펩타이드의 0.2% AI 용액을 물 중 50 mM TES pH 8.0의 용액 및 용적(용액의)에 대해 20% 중량의 팽화제 트레할로오스, 말트린, 수크로오스 또는 탈크(별도의 제형)의 용액으로 생성하여 평가하였다. 이들 용액을 HPLC에서 분해의 증거(0시 샘플에 대해 경시적인 펩타이드 신호의 손실 %)에 대해 경시적으로 고온(50 ℃)에서 관찰하였다. 모든 혼합물 속에서 P1의 농도는 6일의 인큐베이션 후 원래의 펩타이드 농도의 60% 미만으로 강하시켰다. 그에 반해서, 모든 샘플에서 p1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E의 농도는 적어도 14일 동안 최초 농도의 80% 초과로 남았다. P1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E에 대한 가장 우수한 팽화제는 탈크 분말(80% 초과로 44일)이었다.
용액 안정성 연구는 탈이온수 속에서 순수한, 화학적으로 합성된 펩타이드, 50 mM의 TES 버퍼, 0.25% Proxel GXL, 및 30% 이소프로판올의 0.2% AI 용액을 생성시켜 수행하였다. 펩타이드 용액을 HPLC에 의해 0시 샘플에 대해 펩타이드의 신호의 손실 %데 대해 경시적으로 분석하였다. P1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E의 최대 수명은 80% 이상으로 45일이다. P4-14S의 최대 수명은 80% 이상으로 140일이다.
용액 안정성 돌연변이:용액 안정성을 펩타이드 서열을 선택하여 증가시켰으며(P4, 서열식별번호: 5), 이는 메티오닌 잔기를 함유하지 않는다. 그러나, 상기 펩타이드는 시스테인 잔기를 함유하여, 매우 불량 안정성을 초래하였다. 이러한 시스테인의 보존적 대체 세린으로의 돌연변이(화학 구조에 있어서 황의 산소로의 변화)는 다음을 생성하였고: P4-14s (서열식별번호: 6), 이는 그것의 능력을 유지하여 HR을 유도하였다. 이는 그 뒤에(전술한 바와 같이) P4-14s가 크게 안정한 펩타이드임을 나타내었다. 추가의 연구는 1종 이상의 글루타민 잔기를 글루타메이트 잔기로 대체하여용액속에서 탈아미드화의 변화를 감소시켰다. 특히, P1의 변이체, 일명 P1-2E, 8E, 11E, 15E, 18E (서열식별번호: 46)는 2, 8, 11, 15, 및 18번 위치에서 이들 돌연변이를 함유하였다. 당해 펩타이드는 P1과 비교하여 개선된 용해도 및 안정성을 나타내었다.
P4-14 안정한 골격을 기본으로 하여(서열식별번호: 6), 분열성 단일 돌연변이를 서열내 특이적 잔기에 도입하였다. 류신 잔기의 경우, 이들은 알라닌(더 작은 및 소수성이 거의 없는 측쇄, 중간 정도로 분열성 돌연변이) 및/또는 아스파르트산 (음으로 하전된 측쇄, 크게 분열성 돌연변이)으로 돌연변이되었다. 문제의 아미노산의 동일성에 따라, 개입 서열을 돌연변이시켜 음전하(아스파르트산 또는 글루탐산)를 가지도록 하거나, 소수성 측쇄 (발린), 최소의 측쇄 (알라닌), 또는 작은 극성 측쇄(세린)를 가지도록 하였다. 이들 돌연변이체 펩타이드를 과민성 반응의 유발에 대해 시험하였다. 추가의 돌연변이를 초기 HR 결과를 기반으로 선택하였다. 또한, 류신/이소류신 잔기 사이의 간격을 류신 반복체 사이의 단일 잔기를 결실(‘del’로 나타냄) 시키거나 류신 반복체 사이에 알라닌 잔기를 삽입(iA로 나타냄)하여 평가하였다.
HR 유발에 중요한 이들 아미노산이 경우, 보다 보존적인 돌연변이를 선택하여 상호작용의 특이성을 측정하였다. 류신 잔사는 이소류신, 발린, 페닐알라닌 또는 티로신으로 돌연변이시켰으며, 후자의 2개 잔기는 거의 보존적이 아니었다. 상기에서와 같이, 이들 돌연변이체를 HR 유발에 대해 시험하였다.
이들 돌연변이 연구의 결가는 하기 표 12에 요약한다:
표 12: 돌연변이 및 HR 유발 결과의 요약
Figure pct00013
표 12에서, P4-14의 서열은 각 위치에서 시험된 모든 돌연변이와 함께 나타낸다. 과민성 반응을 방해하지 않았던 이들 돌연변이는 표지된 “HR 양성 돌연변이”로 열거된다. 과민성 반응의 중증도에 있어서 감소를 야기한 이들 돌연변이는 열 표지된 “약한 HR 돌연변이”로 나타낸다. 과민성 반응이 제거된 돌연변이는 적색 열 표지된 “HR 음성 돌연변이”로 나타낸다. 표기법 dN2 및 dN4는 각각, 펩타이드의 개시부로부터 2 또는 4개 잔기이 결실을 각각 나타내고; dC2는 펩타이드의 말단으로부터 2개 잔기의 결실을 나타내며; del은 당해 위치에서 잔기이 결실을 나타내고; iA는 당해 위치 앞의 알라닌 잔기의 삽입을 나타낸다.
실시예 2 - P1 및 돌연변이체 펩타이드의 용해도 및 안정성
상기에서 기재된 바와 같이, 18번 위치에서 돌연변이된 P1 및 P1-유도된 서열 (알라닌, 트레오닌, 또는 라이신으로 대체된 메티오닌)을 14일 동안 용액 안정성 및 화학 혼용성에 대해 평가하였다. 현저하게는, P1은 더 낮은 pH (탈이온수 용액, 50 mM 시트레이트 pH 5.6, 및 50 mM MES pH 6.0 속에서)를 나타내었다. 이들 경우에, 펩타이드 농도는 50 ℃에서 24-시간 인큐베이션 후 증가하였다. 현저하게, 돌연변이체 펩타이드는 당해 문제를 나타내지 않았다. 도 1-3에 나타낸 바와 같이, 데이터를 1일 시점에서 100% 펩타이드로 정규화하였다(범례에서 펩타이드 1* 로 나타내며 최초 펩타이드 1 데이터는 이중 별표 **로 표시한다). 물 속에 용해된 안정성 시험에서 (도 1), 펩타이드 1은 보통으로 안정하였지만, 용해도 문제를 나타내었다. 18K 및 18A 돌연변이체는 약간 더 높은 안정성(14일 후 10-25%)을 나타내었다. 약산성시트레이트 버퍼속에서 용해됨(도 2), P1은 용해도 및 안정성 문제 둘 다를 나타내었다. 이는 HPLC에 의해 용액 속에서 14일 후 검출되지 않았다. 최초 농도의 80%를 유지한 18T 및 18K 돌연변이체와는 대조적으로, 18A 돌연변이체는 최초 농도의 ~60%를 유지하였다. 도 3에 나타낸 바와 같이, 50 mM MES pH 6.0에서, P1은 보다 강력한 용해도 문제와, 50 ℃에서 24 시간 인큐베이션 후 가용성 농도에 있어서 50% 증가율을 나타내었다. 그러나, 이는 돌연변이체보다 더 나은 안정성을 나타내었다(14일 후 10-30%). 시트레이트 pH 7.2 (도 6) 속에서, P1은 용해도 문제를 나타내지 않았지만, 좋지 못한 안정성(7 일 후에 50 ℃에서 최초 농도의 20%)을 나타내었다. 반대로, 18K 및 18T 돌연변이체는 14일 후 > 60%의 안정성을 나타내었다. 50 mM EDDS, pH 7.3 (도 7) 속에서, 펩타이드 1은 좋지 못한 안정성과 함께, 7일후 물질의 10%가 남았다. 그에 비해, 돌연변이체는 14일 후 개시물질의 적어도 50%를 유지하였다. 50 mM 이미다졸, pH 8.0 속에서 (도 8), 펩타이드 1은 특히 좋지 못한 안정성을 나타내었고, 단지 3일 후 최초 농도의 10% 미만으로 감소하였다. 그에 비해, 모든 돌연변이체는 더 큰 안정성을 나타내었고, 18K 및 18T 돌연변이체는 14일 후 최초 물질의 60-75%를 보유하였다. 펩타이드 1은 50 mM EDTA, pH 8.0의 용액 속에서 더 나은 안정성을 나타내었고 (도 9), 18A 돌연변이체의 성능과 일치하였다. 그러나, 18K 및 18T 돌연변이체는 50 ℃에서 인큐베이션 14 일 후 더 나은 안정성을 나타내었다(15-20% 개선). 포스페이트, pH 8.0에 용해된 경우(도 10), 펩타이드 1은 비록 용해도 문제(용액 속에서 일부 혼탁도)를 나타내지만, 돌연변이체의 안정성을 과수행하는 것으로 여겨진다. 50 mM TES, pH 8.0의 용액 속에서(도 11), 펩타이드 1은 80 ℃에서 1주 인큐베이션 후 90% 이상 분해된다. 그에 비해, 18T, 18K, 및 18A 돌연변이체는 더 나은 성능을 나타낸다(71%, 58%, 및 47%가 50 ℃에서 14 일 인큐베이션 후 남는다).
일반적으로, 펩타이드 1은 다양한 완충된 용액 속에서 용해도 문제 또는 좋지 못한 안정성을 나타낸다. 이것은 메티오닌의 다른 잔기로의 돌연변이에 의해 처리된다. 거대 잔기(Bulkier residue) (트레오닌 및 라이신)는 안정성의 경우 알라닌에 대해 바람직한 것으로 일반적으로 고려된다.
실시예 3 - P4 및 돌연변이체 펩타이드의 용해도 및 안정성
상기에서 기재된 바와 같이, 14번 위치에서 돌연변이된 P4 및 P4-유도된 서열(시스테인이 알라닌/A, 아스파르트산/D, 라이신/K, 글루타민/Q, 및 세린/S으로 대체됨)을 14일 동안 용액 안정성 및 화학 혼용성에 대해 평가하였다. 일반적으로, 펩타이드 4는 시스테인의 존재로 인하여 매우 불량 안정성을 나타내었다 (도 12-21). 1 일 미만 후, 최초 P4 HPLC 피크가 샘플 속에서 미검출되었다. 그에 비해, 모든 돌연변이체는 더 나은 안정성을 나타내었다. 대부분의 이들은 최초 물질의 적어도 50%를 14일 동안 50 ℃에서 유지하였다. 일반적으로, 펩타이드 4 돌연변이체는 보다 높은 pH 값 (> 7.0)에서 더 나은 안정성을 나타낸다. 현저하게, p4-14s는 14일 조건에 따라 14일 후 90%의 안정성을 규칙적으로 나타낸다. 모든 돌연변이체 펩타이드는 담배 잎에 침투된 경우 과민성 반응을 나타내었다(실시예 1에서와 같이).
실시예 4 - 펩타이드 1 및 펩타이드 4 안정성의 비교
펩타이드 1 및 펩타이드 4가 고도의 서열 유사성을 나타내지만, 펩타이드 4의 안정화된 돌연변이체는 p1 돌연변이체보다 더 안정하다. p1의 일련의 돌연변이를 제조하여 p4-14s와 유사하게 안정성을 부여하였다. 이들은 다음과 같다: p1-1S (서열식별번호: 109, 표 1), p1-14S (서열식별번호: 110, 표 1), p1-18Q (서열식별번호: 115, 표 1), p1-23P (서열식별번호: 118, 표 1). 이들 펩타이드를, p1 및 p4-14s와 함께, 30% 이소프로판올, 5 mM DTPA, 및 50 mM TES pH 8.0에 용해시키고 안정성에 대해 50C에서 시험하였다. 유사한 안정성이 p4-14S 및 p1-1S에서 관찰되었으며, 이는 N-말단 아미노산ㅇ 펩타이드 안정성에 있어서 강한 효과를 나타냄을 나타낸다.
실시예 5 - P15b 및 돌연변이체에 대한 용해도
초기 결과는 p15b가 용해도 문제를 가짐을 시사한다. 이는 상대적으로 높은 소수성 (0.19)을 갖는다. 0.2% w/v에서, 이는 물 속에서 부분적으로 가용성이고, 50 mM의 각각의 시트레이트 pH ~5.2, 시트레이트 pH 7.0, 포스페이트 pH 7.0(점검), TES pH 8.0, EDTA pH 8.0, 및 EDDS pH 7.0에서 불용성이었다. 이는 50 mM MES pH 6.0, 및 MOPS pH 6.5에서 적어도 부분적으로 가용성이었다. 그러나, P15a는 수용액 속에서 보다 쉽게 용해되었다. 그것의 용해도는 50 mM TES pH 8.0 속에서 >10mg/ml이다. 추가의 p15 변이체를 합성하였으며 이는 다음을 포함하였다: 폴리-글루타메이트 용해도 태그 (p15-59G 및 p15-59, 서열식별번호: 149 및 150, 각각). p15-59를 50 mM TES, pH 8.0에 용해시킨 경우, 이는 용해도 >10mg/ml (1% w/v)를 나타내었다.
실시예 6 - P17/P18 & 변이체의 안정성
상기에서 기재된 바와 같이, P18 (서열식별번호: 83)을 안정성 및 화학 혼용성에 대해 상이한 pH 버퍼를 사용하여 시험하였다. P18는 수성 완충 용액 속에서 50 ℃에서 상대적으로 좋지 못한 안정성을 나타내었다. 대부분의 샘플은 3일내에 최초 농도의 20%까지 분해되었다. 한가지 예외는 50 mM EDTA 용액이며, 이는 7일 후 35%까지 분해되었다 (도24). 12번 위치에서 메티오닌의 류신으로의 돌연변이(P18-4에서, 서열식별번호: 164)는 다음을 유발하였다: 중간 정도의 안정화:14일 후 60% 안정성.현저히, C-말단으로부터 마지막 3 아미노산의 절단(P18-1, 서열식별번호: 163)은 또한 극적으로 증가된 안정성(14일 시도에 걸쳐 >90% 안정성)으로 이어진다.
실시예 7 - P19 & 변이체의 안정성
일반적으로, P19 (서열식별번호: 89)는 상대적으로 높은 안정성, 14일에 걸쳐 50 ℃ 에서 다양한 조건 하에 >80% 안정성을 나타내었다. 예외는 물 단독 (52%) 또는 50 mM TES pH 8.0 (62%)에 용해된 펩타이드였다. 12번 위치에서 이의 하나의 메티오닌의 류신으로의 돌연변이 (P19-20L, 서열식별번호: 90)는 50 mM 시트레이트 pH 7.2 또는 50 mM TES, pH 8.0에 용해시킨 경우 안정성에 있어서 보통의 증가로 이어진다(도25 및 26). 버퍼를 보다 낮은 pH (5.5-7.0)에서 사용하는 경우, P19 및 P19-20L의 성능은 유사한 것으로 관측되었으며; 80% 이상의 펩타이드가 14일 동안 유지되었다.
실시예 8 -P14d, P14e, P14f 안정성
P14d 서열 (서열식별번호: 175)을 랄스토니아 솔라나세아룸의 popA 서열로부터 유도시켰다. 이는 HR-박스 모티프을 확인하여 담배 잎에서 HR을 유발한다. 메티오닌 잔기의 돌연변이는 다음을 생성한다: 안정화된 펩타이드 P14e (서열식별번호: 176) 및 P14f (서열식별번호: 177). 돌연변이된 펩타이드는 >50일 동안 50 ℃ (50 mM TES, pH 8.0 및 30% 이소프로판올 속)에서 >85% 안정성을 나타낸다. 동일한 기간 동안, P14d는 대략 50%의 화학 안정성을 나타내었다.
실시예 9 -성장 시험
성장 시험을 위해, 옥수수 및 콩 종자를 온실 시설에서 플랫내에 세포당 2개의 씨드를 플랫 속에 식재하였다. 씨드가 발아하도록 하고 더 작은 식물을 도태시켜 세포당 1개 식물을 남긴다. 제1의 실제 잎이 완전히 팽창되고 제2의 잎이 확장되기 시작하면, 식물을 초기에 높이에 대해 측정하였다. 이것은 최고 잎을 상향으로 스트레칭하고 토양까지의 거리를 측정하여 수행하였다. 펩타이드를 나타낸 농도(하기)에서 물에 용해시켰다. 이후에, 식물을 액체가 잎으로부터 흐를 때까지 널리 이용가능한 분무 병을 사용하여 엽면 분무로 처리하였다. 14개 식물의 4 플랫을 조건 (펩타이드 또는 대조군) 당 처리하였다. 옥수수 및 대두를 표 13에 나타낸 바와 같이 처리하여 매칭된 물-처리된 대조군 식물과 비교하였다. 식물을 14일 동안 성장하도록 하였다. 식물의 높이를 다시 측정하여 최초 높이와 비교함으로써 성장을 정량화하였다. 일부 경우에서, 식물을 시들음 및 가뭄 스트래스를 개시할 때까지 2 내지 4일 동안 물을 주지 않고 성장하도록 하였다. 이때, 식물의 대지 위 부분을 수확하고 칭량하여 신선한 질량을 측정하였다. 마지막으로, 대지 위 물질을 70 ℃ 에서 48시간 동안 건조시키고 칭량하여 건성 바이오매스를 측정하였다. 이들 성장 시도의 결과는 표 13에 나타낸다. 성장, 건성 바이오매스, 및 신선한 질량은 물-처리된 대조군에 대해 증가율%로 계산한다.
표 13: 성장 시도 결과
Figure pct00014
몇 개의 시험된 펩타이드는 옥수수 및 대두에서 성장 및/또는 바이오매스를 나타낸다. 현저히, P15b가 명시적인 성장 또는 건성 바이오매스 표현형을 유발하지 않았다고 해도, 이는 신선한 바이오매스에 있어서 증가를 유발하였으며, 이는 증가된 물 흡수 또는 체류를 시사한다. 이것은 이들로 처리된 식물에 있어서 가뭄 내성의 적응증을 나타낸다. 또 다른 펩타이드, P30-3를 관측하여 성장, 신선한 질량, 및 건성 바이오매스에 있어서의 증가를 유발시켰다.
실시예 10 - HR 반응에 요구된 최소 서열
과민성 반응 유발에 가장 중요한 잔기를 측정한 후, 본 발명자들은 추가의 돌연변이체를 설계하여 이러한 행위에 관여하는 가장 작은 펩타이드 서열을 입증하였다. 코어 HR 서열(총 13개의 잔기 중 7개 류신 또는 이소류신 잔기를 함유)의 소수성 특성으로 인하여, 용해도가 최소 펩타이드에 대해 문제가 될 수 있음을 기술적으로 인식되었다. 그 결과, 친수성 서열을 많은 펩타이드에 부가하여 Kyte-Doolittle 규모로 펩타이드에 대해 약 -0.2까지 소수성을 유발하였다.
초기에, 다음의 폴리-라이신 또는 폴리-아르기닌 서열을 사용하였다: 즉,N-연결된 폴리R 또는 폴리K 서열, 또는 C-연결된 폴리R 또는 폴리K 서열을 갖는 P4 (서열식별번호: 35, 36, 38, 39). 그러나, 담배 잎내로 침투된 경우, 이들 펩타이드는 HR의 전형적이지 않은 괴저성 병변을 유발하였다. 이는 폴리-양이온성 서열이 담배 잎으로 침투되는 경우 독성 반응을 유발한다는 가설을 이끌었다. 폴리-라이신 및 폴리-아르기닌 단독을 잎으로 침투시키는 경우, 유사한 괴저성 병변이 관측되었다. 그 결과, 양이온성 용해도 향상시키는 서열을 함유하는 펩타이드의 시험을 중단하였다. 현저히, HR+ 펩타이드는 적어도 1종의 또는 2종의 양이온성 아미노산을 함유하지만, 더 큰 수의 양전하는 해로운 것으로 여겨진다. 양이온성 펩타이드에 대한 기질로서, 다중음이온, 특이적으로 폴리-글루타메이트가 고려되었다. 폴리-글루타메이트는 아스파르테이트가 이소-아스파르테이트로 이성체화하는 보다 큰 변화를 가지므로 선택하였고, 세린을 N-말단에 부가하여 펩타이드의 N-말단에서 파이로글루탐산의 형성을 제거하였다. 이는 또한 펩타이드의 C-말단에서 글루타메이트 잔기를 가하는 것이 합리적이다.
과민성 반응 시험을 실시예 번호 1에 기재된 바와 같이 수행하였다. P4의 경우, HR을 유발하는 가장 작은 변이체 펩타이드는 다음과 같다: P4-폴리E-min3 (서열식별번호: 33). P1의 경우, HR을 유발하는 가장 작은 변이체 펩타이드는 다음과 같다: P1-폴리E-min3 (서열식별번호: 141). P18의 경우, HR을 유발하는 가장 작은 변이체 펩타이드는 다음과 같다: P18-7 (서열식별번호: 167). P19의 경우, HR을 유발하는 가장 작은 변이체 펩타이드는 다음과 같다: P19-8 (서열식별번호: 173). P15의 경우, HR을 유발하는 가장 작은 변이체 펩타이드는 다음과 같다: P15-59 (서열식별번호: 150). P14d의 경우, HR을 유발하는 가장 작은 변이체 펩타이드는 다음과 같다: P14-30 (서열식별번호: 178). P25의 경우, HR을 유발하는 가장 작은 변이체 펩타이드는 다음과 같다: P25-11 (서열식별번호: 188). 또한, 최소 펩타이드 서열은 HR-박스 및 글루탐산 잔기의 류신 반복 서열 특징을 가변 위치내 도입하여 생성함으로써 용해도를 증가시켰다. 이들 서열은 다음과 같다: P30-2 (SEELEELLEELIEELL, 서열식별번호: 189), P30-3 (LEELLEELIEELLEE, 서열식별번호: 190), 및 P30-4 (LEELLEELIEELL, 서열식별번호: 210). 이들 최소 HR-박스 서열은 50 mM TES 속에서 >5mg/ml의 가용성이었고 담배 잎으로 침투되는 경우 HR 반응을 생산하였다.
마찬가지로, 추가의 펩타이드를 향상된 용해도를 위해 P3, P25, P14, P15, 및 P19의 소수성 골격 서열을 기반으로 개발하였다. 이들은 표 10에서 열거된다, 상기 참고.
하핀 및 HR+ 펩타이드의 이전에 기재된 행동을 기반으로 하여, 이들 신규 펩타이드가 Fan 등에 허여된 PCT 출원 WO 01/98501 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다)에 기재된 바와 같은, 광범위한 생물활성, 예를 들면 TMV에 대한 내성, 선충, 증가된 스트레스에 대한 내성 및 가뭄 내성, 증가된 성장, 및 증가된 수율을 가질 것임이 예측된다.
실시예 11 - 담배에서 HR 반응을 유발하는 펩타이드 P1의 유도체
HR 시험(실시예 1에 기재됨)을 P1의 변이체에서 수행하여 HR에 대해 요구된 최소 서열을 측정하고 중요한 잔기를 확인하였다. 표 14의 하기 펩타이드는 HR에 대해 양성인 것으로 결정되었다:
표 14
Figure pct00015
실시예 12 -담배에서 HR 반응을 유발하는 펩타이드 P3의 유도체
HR 시험(실시예 1에 기재됨)을 P3 변이체에서 수행하여 HR에 대해 요구된 최소 서열을 측정하고 중요한 잔기를 확인하였다. 표 15의 하기 펩타이드는 HR에 대해 양성인 것으로 결정되었다.
표 15
Figure pct00016
P3은 효율적인 HR 유발을 위해 최소 HR-박스 반복체보다 더 긴 서열을 필요로하는 것으로 여겨진다. 이는 당해 서열에 존재하는 소수성 잔기 (P3에서 LLKLF 및 그것의 변이체)의 하위-최적의 페닐알라닌 잔기 및 단일 K 잔기 만의 존재에 기인할 수있다. 그러나, 추가의 소수성 잔기가 엄격히 P3-6 및 P3-7이 HR을 유발한다는 것을 고려하여, 엄격히 필요하지 않음에 주목하는 것이 중요하다.
실시예 13 -담배에서 HR 반응을 유발하는 펩타이드 P25의 유도체
HR 시험(실시예 1에 기재됨)을 P25의 변이체에서 수행하여 HR에 대해 요구된 최소 서열을 측정하고 중요한 잔기를 확인하였다. 표 16의 하기 펩타이드는 HR에 대해 양성인 것으로 측정되었다.
표 16
Figure pct00017
P25 변이체는 HR 유발에 대해 최소 HR 공통(서열식별번호: 93) 보다 더 긴 서열을 필요로 하는 것으로 여겨진다. 이는 류신이 바람직한 발린 잔기의 존재 또는 소수성 반복체 (LLKIL) 사이에 단일 친수성 잔기의 존재에 기인할 수 있다. 본 발명자들이 P25-15, P25-16, 및 P25-17를 HR+로서 포함하지만, 이들은 최고적용 율로 일부 담배 식물에서만 발생한 매우 약한 과민성 반응을 나타내었다. 현저히, 추가의 서열 함량은 P25-15에 대한 생물학적 반응에 의해 시사된 바와 같이, 류신/이소류신/발린 잔기를 필요로하는 것으로 여겨지지 않는다.
실시예 14 -담배에서 HR 반응을 유발하는 펩타이드 P14d의 유도체
HR 시험(실시예 1에 기재됨)을 P14의 변이체에서 수행하여 HR에 대해 요구된 최소 서열을 측정하고 중요한 서열을 확인하였다. 표 17의 하기 펩타이드는 HR에 대해 양성인 것으로 결정되었다.
표 17
Figure pct00018
P14d 변이체가 다음보다 더 많은 서열을 필요로 하는 것으로 여겨짐을 주목하는것이 중요하다: 최소 HR 공통(서열식별번호: 93) (HR 유발에 대해). 특히, 추가의 C-말단 라이신 잔기는 활성을 위해 요구되는 것으로 여겨진다. 이는 소수성 반복체(LVKLL)들 사이의 단일의 친수성 잔기의 존재에 기인할 수 있다.
실시예 15 -담배에서 HR 반응을 유발하는 펩타이드 P15/P20의 유도체
HR 시험(실시예 1에 기재됨)을 P15/P20의 변이체에서 수행하여 HR에 대해 요구된 최소 서열을 측정하고 중요한 잔기를 확인하였다. 표 18의 하기 펩타이드는 HR에 대해 양성인 것으로 결정되었다.
표 18
Figure pct00019
실시예 16 - 담배에서 HR 반응을 유발하는 펩타이드 P17/P18의 유도체
HR 시험(실시예 1에 기재됨)을 P17 및 P18의 변이체에서 수행하여 HR에 대해 요구된 최소 서열을 측정하고 중요한 잔기를 확인하였다. 표 19의 하기 펩타이드는 HR에 대해 양성인 것으로 결정되었다.
표 19
Figure pct00020
실시예 17 - 담배에서 HR 반응을 유발하는 펩타이드 P19의 유도체
HR 시험(실시예 1에 기재됨)을 P19의 변이체에 대해 수행하여 HR에 대해 요구된 최소 서열을 측정하고 중요한 잔기를 확인하였다. 표 20의 하기 펩타이드는 HR에 대해 양성인 것으로 결정되었다.
표 20
Figure pct00021
P19 및 P19-1이 HR을 나타내나, 이들은 다음을 완전히 형성하지 않음을 주목하는 것이 중요하다: 공통 HR-박스 서열 (서열식별번호: 93). 그러나, P19-2 및 P19-3에서 맥락 서열의 부가는 공통으로 형성하는 서열을 초래한다. P19에서 추가의 이소류신 잔기, 및 P19-1 (N-말단 이소류신 및 the IGDN 서열)은 HR 유발에 대한 경향을 증가시키는 경향이 있다.
실시예 18 - 담배 모자이크 바이러스에 의한 감염에 대한 담배의 유도된 내성
펩타이드를 담배에서 담배 모자이크 바이러스 (TMV)에 대한 내성의 유도를 위해 시험하였다. 간단히, 6-8 주령의 3개의 담배 식물을 그룹 (샘플 및 대조군)당 선택하였다. 식물의 대부분의 잎 최하부를 덮고 식물에 물 용액 (음성 대조군), 펩타이드, 또는 Proact (양성 대조군)를 분무하였다. 분무는 잎으로부터 액체가 흐르는 것에 의해 나타나는, 잎이 완전히 젖을 때까지 적용하였다. 이후에, 식물이 건조되도록 하고 잎 커버를 제거하였다.
3일 처리후, 이전에-커버된 잎 및 식물의 반대 측 잎을 이후에 규조토로 약간 분진시키고 20 ul의 정제된 담배 모자이크 바이러스의 1.7 ug/ml 용액을 적용하였다. 이후에 TMV 용액을 용액 및 규조토를 잎의 표면에 걸쳐 약간 문질러서 잎 표면에 걸쳐 분무하였다. 2분 후, 규조토는 물로 잎을 세정하여 제거하였다. TMV 접종 3일 후, 잎을 관측된 TMV 병변의 수를 기반으로 점수매겼다. 잎을 또한 과민성 반응, 예를 들면, 황변 및 영향받은 잎의 시들음의 신호에 대해점수매겼다.
표 21에 기재된 유효성은 처리된 및 UTC 식물에서 TMV 병변에 이ㅆ어서 감소%를 말한다. 커버된 잎에서 TMV의 감소는 식물에서 전신 면역 반응을 나타내나 덮여 있지 않은 잎에서의 감소는 국부 반응을 나타낸다. 별표는 T-시험으로부터 유도된 P-값이 < 0.05이었음을 나타낸다.
표 21: TMV 내성의 요약
Figure pct00022
일반적으로, 담배에서 과민성 반응을 유도하는 펩타이드는 또한 TMV에 대해 강한 내성을 부여한다. 상기 펩타이드는 처리를 제공받은 잎에서 내성을 제공한다. 그러나, 상기 펩타이드는 또한 “시스템 획득된 내성”을 유발함으로써 식물의 하나의 부분에서 면역 반응은 식물의 다른 부분에서 면역력을 증가시키는 신호전달을 개시한다. 이것은 펩타이드를 직접적으로 받지 않은 커버된 잎에서 감소된 TMV 감염에 의해 입증된다. 특히 강력한 면역 반응을 유발한 펩타이드는 다음의 최소 HR 박스 펩타이드 서열중 일부를 포함하였다: P14d, P25-11, 및 P30-3.
실시예 19 -뿌리 및 순 성장에 있어서 펩타이드 씨드 처리의 효과
펩타이드를 순(대지 위) 및 뿌리(대지 아래)에 대한 성장원의 배치에 있어서의 생물학적 효과에 대해 시험하였다. 펩타이드를 총 100 ml 용적의 탈이온수 속에 0.2, 2, 또는 5 μg/ml로 용해하였다. 옥수수 또는 대두 씨드를 이후에 펩타이드 용액 속에 1시간 동안 침지시켰다. 미처리된 대조군 (UTC) 식물은 탈이온수에 침지하였다. 맑은 플라스틱 300 ml 음료 컵 (Solo®, Dart Container Corporation)을 최하부를 십자로 표지하고, 최하부를 4개의 동등한 사분면으로 나누어 식재용으로 제조하였다. 이후에, 컵을 ¼”로 체질된 Sunshine Mix #1 토양 (SunGro 원예)으로 채워다. 100 mL의 물을 토양에 부가하였다. 처리된 씨드를 이후에 씨드를 토양의 최상부에 약하게 가압하여 식재하였다. 이후에, 씨드를 추가의 50ml의 느슨한 토양으로 커버하였다. 씨드가 발아하여 12 내지 14일 동안 성장하도록 하였다.
순의 길이는 토양으로부터 각 식물에 대해 최고 잎의 약간 신장된 팁까지의 거리로 측정하였다. 발아하지 않거나 저해된 성장을 나타낸 식물은 당해 시도로부터 제거하였다. 저해는 데이터 수집시기에 완전히 팽창된 실제 잎의 결여 또는 나안에 의해 치료 그룹의 평균 잎 부위의 < ½인 것으로 판단되는 팽창된 실제 잎을 가진 것으로 정의하였다. 일반적으로, 30개의 씨드를 치료 그룹 당 식재하고 15 - 25개 식물을 데이터 수집을 위해 사용하였다.
뿌리 성장은 1차 뿌리가 컵의 최하부에서 사분면 표지를 지나가는 횟수를 곱하여 추정하였다. 일부가 컨테이너의 측면을 따라 가시적이지만 이들은 종종 컵의 최하부 둘레를 따라 관측되었으며 사분면 라인의 수직 확대를 교차하는 것으로 카운트되었다. 당해 수를 4로 나누어 뿌리 성장 지수를 생산하였다. 당해 지수는 측정된 총 1차 뿌리 길이(뿌리로부터 토양의 세정 및 직접적인 측정 후 모든 1차 뿌리의 길이의 합)와 ~90% 관련된 것으로 밝혀졌다.
표 22: 뿌리 및 순 성장의 요약
Figure pct00023
본 발명의 기본 개념이 기재되어 있지만, 전술한 상세한 개시내용은 단지 예로써 나타낸 것으로 의도되며, 제한하는 것이 아님은 당해 분야의 숙련가에게 오히려 명백할 것이다. 다양한 변경, 개선, 및 변형이 일어날 것이며, 본원에 명확히 언급되지 않았지만, 당해 분야의 숙련가에게 의도될 것이다. 이들 변경, 개선, 및 변형은 본원에 시사된 것으로 의도되며, 본 발명의 사상 및 범위내에 있다. 추가로, 인용된 공정 요소의 순서 또는 서열, 또는 순자, 문자, 또는 다른 지정의 사용은 청구범위에 명시될 수 있는 바와 같은 것을 제외하고는 청구된 공정을 임의의 순서로 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 따라서, 본 발명은 하기 청구범위 및 이에 대한 등가물에 의해서만 제한된다.
SEQUENCE LISTING <110> Plant Health Care, Inc. <120> HYPERSENSITIVE RESPONSE ELICITOR PEPTIDES AND USE THEREOF <130> 29517.0343 <150> 62/058,535 <151> 2014-10-01 <150> 62/140,789 <151> 2015-03-31 <160> 232 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1/P4 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X at position 1 is optional, S, N, D, isoD, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 is optional, Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X at position 8 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X at position 9 is L, I, F, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 is optional, D or isoD <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X at position 11 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X at position 12 is M, L, I, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X at position 13 is M, L, I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X at position 14 is optional, any hydrophilic amino acid, preferably C, S, T, A, D, isoD, K, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X at position 15 is Q, E, g-glutamate, G, A, S, K, or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X at position 16 is M, L, I, V, F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X at position 17 is M, L, I, A, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X at position 18 is Q, E, g-glutamate, G, A, S, M, T, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X at position 19 is A, D, isoD, S, V, T, K, R, E, H, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X at position 20 is M, L, or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X at position 21 is M, L, I, V, S, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X at position 22 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X at position 23 is P, Q, E, g-glutamate, G, A, or S <400> 1 Xaa Xaa Gly Ile Ser Glu Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 <210> 2 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X at position 8 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X at position 9 is L, A, D, isoD, I, F, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X at position 11 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X at position 12 is L, D, isoD, I, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X at position 13 is L, I, V, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X at position 14 is any hydrophilic amino acid, preferably C, S, or T <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X at position 15 is Q, E, g-glutamate, G, A, S, K, or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X at position 16 is L, A, I, V, M, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X at position 17 is I, S, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X at position 18 is Q, E, g-glutamate, G, A, S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> X at position 20 is L, I, V, F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X at position 21 is L or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X at position 22 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <400> 2 Ser Xaa Gly Ile Ser Glu Lys Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Pro 20 <210> 3 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X at position 1 is N, D, isoD, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X at position 8 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X at position 11 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X at position 15 is Q, E, g-glutamate, G, A, S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X at position 18 is M, T, K, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X at position 22 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> X at position 23 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <400> 3 Xaa Xaa Gly Ile Ser Glu Lys Xaa Leu Asp Xaa Leu Leu Thr Xaa Leu 1 5 10 15 Ile Xaa Ala Leu Leu Xaa Xaa 20 <210> 4 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1 <400> 4 Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu 1 5 10 15 Ile Met Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 5 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4 <400> 5 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Cys Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 6 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S <400> 6 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 7 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-18S <400> 7 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Ser Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 8 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-2,18E <400> 8 Ser Glu Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 9 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-2E-8E <400> 9 Ser Glu Gly Ile Ser Glu Lys Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 10 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-2E-8E-15E <400> 10 Ser Glu Gly Ile Ser Glu Lys Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Glu Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 11 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-allE <400> 11 Ser Glu Gly Ile Ser Glu Lys Glu Leu Asp Glu Leu Leu Ser Glu Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 12 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15/20 min consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X of position 7 is optional, any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 is M, E, g-glutamate, G, A, S, T, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X at position 14 is optional, Q, E, g-glutamate, G, A, S <400> 12 Ile Ala Lys Leu Ile Ser Xaa Leu Ile Xaa Ser Leu Leu Xaa 1 5 10 <210> 13 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P14d consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X at position 1 is Q,N, D, E, g-glutamate, isoD, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 can be D, E, g-glutamate, isoD <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 can be P, D, E, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X at position 4 can be M, A, S, D, E, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X at position 5 can be Q, E, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 can be A, E, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X at position 8 can be M, L, E, Q, D, N, G, A, S, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X at position 9 can be Q, N, E, D, G, A, S, isoD or, g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X at position 12 can be Q, N, E, D, G, A, S, isoD or, g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X at position 13 can be Q, N, E, D, G, A, S, isoD or, g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> X at position 16 can be K, Q, N, E, D, R, G, A, or S <400> 13 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Val Xaa 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P14d min consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 can be M, L, E, Q, D, N, G, A, S, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 can be Q, N, E, D, G, A, S, isoD or, g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 is Q, N, E, D, G, A, S, isoD or, g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X at position 7 can be Q, N, E, D, G, A, S, isoD or, g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 can be K, Q, N, E, D, R, G, A, or S <400> 14 Leu Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Val Xaa Leu Leu Lys 1 5 10 <210> 15 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P3min consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X at position 1 is L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 can be Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 can be Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 can be K, Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X at position 7 is L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X at position 9 can be E, g-glutamate, D, isoD, Q, N, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 can be A, G, S, T, E, g-glutamate, D, isoD, Q, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X at position 12 is L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X at position 13 can be Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X at position 14 can be Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <400> 15 Xaa Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 16 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 can be Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 can be K, Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X at position 5 can be L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 can be K, Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X at position 9 can be E, g-glutamate, D, isoD, Q, N, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 can be A, G, S, T, E, g-glutamate, D, isoD, Q, or N <400> 16 Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Ile Leu Xaa Xaa Leu Val 1 5 10 <210> 17 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 can be T, S, A, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 can be G, T, S, A, D, isoD, E, g-glutamate, Q, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 can be Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X at position 7 can be K, Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X at position 9 can be L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 can be K, Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X at position 13 can be E, g-glutamate, D, isoD, Q, N, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X at position 14 can be A, G, S, T, E, g-glutamate, D, isoD, Q, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> V at position 16 is optional <400> 17 Leu Xaa Xaa Val Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Ile Leu Xaa Xaa Leu Val 1 5 10 15 <210> 18 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P17/18 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X at position 1 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 can be any amino acid, but preferably P, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X at position 4 can be any amino acid, but preferably I, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, N, isoD, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X at position 5 can be any amino acid, but preferably D, isoD, S, E, g-glutamate, A, T, G, N, Q, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 can be any amino acid, but preferably R, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X of position 7 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X at position 8 can be any amino acid, but preferably T, Q, S, E, g-glutamate, A, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X at position 9 can be any amino acid, but preferably I, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 can be any amino acid, but preferably E, g-glutamate, Q, S, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X at position 11 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X at position 12 can be L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X at position 13 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X at position 14 can be any amino acid, but preferably Q, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X at position 17 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X at position 18 can be any amino acid, but preferably Q, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X at position 21 can be any amino acid, but preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X at position 22 can be any amino acid, but preferably S, A,T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X at position 25 can be any amino acid, but preferably S, A, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X at position 26 can be any amino acid, but preferably P, S, A, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X at position 27 can be any amino acid, but preferably Q, S, A, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <400> 18 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Leu 1 5 10 15 Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 19 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-9v <400> 19 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Val Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 20 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-9F <400> 20 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Phe Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 21 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P17/18 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X at position 1 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 can be any amino acid, but preferably P, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X at position 4 can be any amino acid, but preferably I, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, N, isoD, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X at position 5 can be any amino acid, but preferably D, isoD, S, E, g-glutamate, A, T, G, N, Q, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 can be any amino acid, but preferably R, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X of position 7 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X at position 8 can be any amino acid, but preferably T, Q, S, E, g-glutamate, A, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X at position 9 can be any amino acid, but preferably I, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 can be any amino acid, but preferably E, g-glutamate, Q, S, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X at position 11 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X at position 12 can be L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X at position 13 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X at position 14 can be any amino acid, but preferably Q, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X at position 17 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X at position 18 can be any amino acid, but preferably Q, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> X at position 21 can be any amino acid, but preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X at position 22 can be any amino acid, but preferably S, A,T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> X at position 25 can be any amino acid, but preferably S, A, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> X at position 26 can be any amino acid, but preferably P, S, A, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> X at position 27 can be any amino acid, but preferably Q, S, A, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <400> 21 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Leu 1 5 10 15 Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 22 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-12i <400> 22 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Ile Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 23 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-12f <400> 23 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Phe Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 24 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-13i <400> 24 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Ile Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 25 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P17/18 min consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X at position 1 can be L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 can be any amino acid, but preferably Q, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X at position 7 can be any amino acid, but preferably Q, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 can be any amino acid, but preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X at position 11 can be any amino acid, but preferably S, A,T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <400> 25 Xaa Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Leu 1 5 10 <210> 26 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X at position 1 is optional and can be L, I, V, F, or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 can be any amino acid, but preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X at position 4 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X at position 5 can be L or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X at position 7 can be any amino acid, but preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X at position 11 can be any amino acid, but preferably R, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X at position 12 can be L, I, V, F, or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X at position 13 can be L, I, V, F, or M <400> 26 Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Leu Ile Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 27 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-15a <400> 27 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 28 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-15k <400> 28 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Lys Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 29 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-15s <400> 29 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Ser Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 30 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-15i <400> 30 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Ile Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 31 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> polyE-min2p4 <400> 31 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln 1 5 10 15 Ala Leu Leu Gln 20 <210> 32 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-16i <400> 32 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Ile 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 33 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> polyE-min3P4 <400> 33 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln 1 5 10 15 Ala Leu Leu <210> 34 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-16f <400> 34 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Phe 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 35 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-NpolyR <400> 35 Arg Arg Arg Arg Arg Gly Gly Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile 1 5 10 15 Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 36 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-CpolyR <400> 36 Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Arg Arg Arg Arg Arg 20 <210> 37 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-20i <400> 37 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Ile Leu Gln Pro 20 <210> 38 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-NpolyK <400> 38 Lys Lys Lys Lys Lys Gly Gly Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile 1 5 10 15 Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 39 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-CpolyK <400> 39 Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Lys Lys Lys Lys Lys 20 <210> 40 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-21f <400> 40 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Phe Gln Pro 20 <210> 41 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1-2E <400> 41 Asn Glu Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu 1 5 10 15 Ile Met Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 42 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1-18T <400> 42 Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu 1 5 10 15 Ile Thr Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 43 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1-18E <400> 43 Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 44 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1-18A <400> 44 Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu 1 5 10 15 Ile Ala Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 45 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1-18K <400> 45 Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu 1 5 10 15 Ile Lys Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 46 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1-2E,8E,11E,15E,18E <400> 46 Asn Glu Gly Ile Ser Glu Lys Glu Leu Asp Glu Leu Leu Thr Glu Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 47 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b/P20 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 is N, D, or isoD <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X at position 8 is N, D, or isoD <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X at position 15 is optional and can be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> X at position 18 is M, E, g-glutamate, G, A, S, T, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> X at position 22 is optional and can be Q, E, g-glutamate, G, A, or S <400> 47 Lys Pro Xaa Asp Ser Xaa Ser Xaa Ile Ala Lys Leu Ile Ser Xaa Leu 1 5 10 15 Ile Xaa Ser Leu Leu Xaa 20 <210> 48 <211> 45 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Wildtype P15 <400> 48 Gln Lys Asp Val Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro 1 5 10 15 Gln Asp Ala Ser Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu 20 25 30 Ile Ser Ala Leu Ile Met Ser Leu Leu Gln Met Leu Thr 35 40 45 <210> 49 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b <400> 49 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Met Ser Leu Leu Gln 20 <210> 50 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-8D-18E <400> 50 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ser Leu Leu Gln 20 <210> 51 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-8D-18A <400> 51 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Ala Ser Leu Leu Gln 20 <210> 52 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-8D-18S <400> 52 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Ser Ser Leu Leu Gln 20 <210> 53 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-8D-18T <400> 53 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Thr Ser Leu Leu Gln 20 <210> 54 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-8D-18K <400> 54 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Lys Ser Leu Leu Gln 20 <210> 55 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-8D-6,18E <400> 55 Lys Pro Asn Asp Ser Glu Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ser Leu Leu Gln 20 <210> 56 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-3,8D <400> 56 Lys Pro Asp Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Met Ser Leu Leu Gln 20 <210> 57 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-3,8D-6E <400> 57 Lys Pro Asp Asp Ser Glu Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Met Ser Leu Leu Gln 20 <210> 58 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-3,8D-18E <400> 58 Lys Pro Asp Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ser Leu Leu Gln 20 <210> 59 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-3,8D-6,18E <400> 59 Lys Pro Asp Asp Ser Glu Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ser Leu Leu Gln 20 <210> 60 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-3,8D-allE <400> 60 Lys Pro Asp Asp Ser Glu Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ser Leu Leu Glu 20 <210> 61 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-8D-allE <400> 61 Lys Pro Asn Asp Ser Glu Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ser Leu Leu Glu 20 <210> 62 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15b-3D-allE <400> 62 Lys Pro Asp Asp Ser Glu Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ser Leu Leu Glu 20 <210> 63 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15a <400> 63 Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser 1 5 10 15 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 20 25 30 Ile Met Ser Leu Leu Gln Met 35 <210> 64 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15 <400> 64 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Met Ser Leu Leu Gln Met 20 <210> 65 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P20 <400> 65 Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser Lys Pro 1 5 10 15 Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Leu Ile Met Ser 20 25 30 Leu Leu <210> 66 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6/6a consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X at position 4 is F or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X at position 7 is optional and can be M, E, g-glutamate, G, A, S, T, or K or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X at position 9 is M, E, g-glutamate, G, A, S, T, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 is H or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X at position 14 is E, g-glutamate, D, or isoD <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> X at position 17 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X at position 19 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <400> 66 Pro Ser Pro Xaa Thr Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Ile Val Gly Xaa Ile Leu 1 5 10 15 Xaa Ala Xaa Asn 20 <210> 67 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a <400> 67 Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn 20 <210> 68 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6 <400> 68 Pro Ser Pro Phe Thr Gln Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu Gln 1 5 10 15 Ala Gln Asn <210> 69 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-7A <400> 69 Pro Ser Pro Phe Thr Gln Ala Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn 20 <210> 70 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-10N <400> 70 Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met Asn Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn 20 <210> 71 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-4Y <400> 71 Pro Ser Pro Tyr Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn 20 <210> 72 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-14D <400> 72 Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Asp Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn 20 <210> 73 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-7,9A <400> 73 Pro Ser Pro Phe Thr Gln Ala Leu Ala His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn 20 <210> 74 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-6E-7A <400> 74 Pro Ser Pro Phe Thr Glu Ala Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn 20 <210> 75 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-6,17E-7A <400> 75 Pro Ser Pro Phe Thr Glu Ala Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Glu Ala Gln Asn 20 <210> 76 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-allE-7A <400> 76 Pro Ser Pro Phe Thr Glu Ala Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Glu Ala Glu Asn 20 <210> 77 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-allE-4Y-7A <400> 77 Pro Ser Pro Tyr Thr Glu Ala Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Glu Ala Glu Asn 20 <210> 78 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-allE-7A-10N <400> 78 Pro Ser Pro Phe Thr Glu Ala Leu Met Asn Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Glu Ala Glu Asn 20 <210> 79 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-allE-7A-14D <400> 79 Pro Ser Pro Phe Thr Glu Ala Leu Met His Ile Val Gly Asp Ile Leu 1 5 10 15 Glu Ala Glu Asn 20 <210> 80 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-allE-4Y-7A-10N-14D <400> 80 Pro Ser Pro Tyr Thr Glu Ala Leu Met Asn Ile Val Gly Asp Ile Leu 1 5 10 15 Glu Ala Glu Asn 20 <210> 81 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P17 <400> 81 Thr Ser Ser Ser Pro Gly Leu Phe Gln Ser Gly Gly Asp Asn Gly Leu 1 5 10 15 Gly Gly His Asn Ala Asn Ser Ala Leu Gly Gln Gln Pro Ile Asp Arg 20 25 30 Gln Thr Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys Ser 35 40 45 Leu Leu 50 <210> 82 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P17a <400> 82 Thr Ser Ser Ser Pro Gly Leu Phe Gln Ser Gly Gly Asp Asn Gly Leu 1 5 10 15 Gly Gly His Asn Ala Asn Ser Ala Leu Gly Gln Gln Pro Ile Asp Arg 20 25 30 Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys Ser 35 40 45 Leu Leu 50 <210> 83 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18 <400> 83 Gln Gln Pro Ile Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu 1 5 10 15 Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu Ser Pro Gln 20 25 <210> 84 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18a <400> 84 Gln Gln Pro Ile Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu 1 5 10 15 Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu Ser Pro Gln 20 25 <210> 85 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18b <400> 85 Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu 1 5 10 15 <210> 86 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18c <400> 86 Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu 1 5 10 15 <210> 87 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18d <400> 87 Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu 1 5 10 15 Lys Ser Leu Leu 20 <210> 88 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18e <400> 88 Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu 1 5 10 15 Lys Ser Leu Leu 20 <210> 89 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acids 116 to 140 of the full length Erwinia amylovora HrpW (P19) <400> 89 Ile Thr Pro Asp Gly Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp Asn Pro Leu 1 5 10 15 Leu Lys Ala Met Leu Lys Leu Ile Ala 20 25 <210> 90 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-20L <400> 90 Ile Thr Pro Asp Gly Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp Asn Pro Leu 1 5 10 15 Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala 20 25 <210> 91 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19a <400> 91 Ile Thr Pro Asp Gly Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp Asn Pro Leu 1 5 10 15 Leu Lys Ala Met Leu Lys Leu Ile Ala Arg Met Met Asp Gly 20 25 30 <210> 92 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19a-allL <400> 92 Ile Thr Pro Asp Gly Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp Asn Pro Leu 1 5 10 15 Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala Arg Leu Leu Asp Gly 20 25 30 <210> 93 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> HR Box Peptide Consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X at position 1 is L, I, V, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> X at position 2 is optional and, when present, is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X at position 4 is L, I, V, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> X at position 5 is L or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 is optional and, when present, is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X at position 7 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X at position 8 is L, I, V, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> X at position 9 is L, I, V, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 is optional and, when present, is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X at position 11 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X at position 12 is L or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X at position 13 is L, I, V, or F <400> 93 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 94 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-dN6 <400> 94 Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu Gln 1 5 10 15 Pro <210> 95 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-dN5 <400> 95 Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu 1 5 10 15 Gln Pro <210> 96 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-dN4 <400> 96 Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu 1 5 10 15 Leu Gln Pro <210> 97 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-dN2 <400> 97 Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln 1 5 10 15 Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 98 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-3E <400> 98 Ser Gln Glu Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 99 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-4L <400> 99 Ser Gln Gly Leu Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 100 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-4A <400> 100 Ser Gln Gly Ala Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 101 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-4D <400> 101 Ser Gln Gly Asp Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 102 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-5V <400> 102 Ser Gln Gly Ile Val Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 103 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-6R <400> 103 Ser Gln Gly Ile Ser Arg Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 104 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-6V <400> 104 Ser Gln Gly Ile Ser Val Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 105 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-7D <400> 105 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Asp Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 106 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-7V <400> 106 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Val Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 107 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-8V <400> 107 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Val Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 108 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-8S <400> 108 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Ser Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 109 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1-1S <400> 109 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu 1 5 10 15 Ile Met Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 110 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1-14S <400> 110 Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Met Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 111 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-10V <400> 111 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Val Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 112 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-11V <400> 112 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Val Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 113 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-12V <400> 113 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Val Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 114 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-12S <400> 114 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Ser Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 115 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1-18Q <400> 115 Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 116 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-14V <400> 116 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Val Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 117 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-15V <400> 117 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Val Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 118 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P1-23P <400> 118 Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu 1 5 10 15 Ile Met Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 119 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-17L <400> 119 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Leu Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 120 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-17A <400> 120 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ala Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 121 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-17V <400> 121 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Val Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 122 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-18V <400> 122 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Val Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 123 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-19V <400> 123 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Val Leu Leu Gln Pro 20 <210> 124 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-19D <400> 124 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Asp Leu Leu Gln Pro 20 <210> 125 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-19S <400> 125 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ser Leu Leu Gln Pro 20 <210> 126 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> polyE-minP1 <400> 126 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu Ile Glu 1 5 10 15 Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 127 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-21S <400> 127 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Ser Gln Pro 20 <210> 128 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-21I <400> 128 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Ile Gln Pro 20 <210> 129 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-21V <400> 129 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Val Gln Pro 20 <210> 130 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-22V <400> 130 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Val Pro 20 <210> 131 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14S-dC2 <400> 131 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu 20 <210> 132 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> p4-d10 <400> 132 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile 1 5 10 15 Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 133 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> p4-d14 <400> 133 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Gln Leu Ile 1 5 10 15 Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 134 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> polyE-min2P1 <400> 134 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu Ile Glu 1 5 10 15 Ala Leu Leu Gln 20 <210> 135 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6/6a min consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X at position 1 is F or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X at position 4 is optional and can be M, E, g-glutamate, G, A, S, T, or K, or L <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> X at position 6 is M, E, g-glutamate, G, A, S, T, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X at position 7 is H or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X at position 11 is E, g-glutamate, D, or isoD <400> 135 Xaa Thr Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Ile Val Gly Xaa Ile Leu 1 5 10 <210> 136 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14A <400> 136 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ala Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 137 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> p4-14D <400> 137 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Asp Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 138 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14K <400> 138 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Lys Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 139 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14Q <400> 139 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Gln Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 140 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> p4-i9A <400> 140 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Ala Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln 1 5 10 15 Leu Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 141 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> polyE-min3P1 <400> 141 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu Ile Glu 1 5 10 15 Ala Leu Leu <210> 142 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15a-34Q-39P <400> 142 Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser 1 5 10 15 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 20 25 30 Ile Gln Ser Leu Leu Gln Pro 35 <210> 143 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15a-39P <400> 143 Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser 1 5 10 15 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 20 25 30 Ile Met Ser Leu Leu Gln Pro 35 <210> 144 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15a-34Q <400> 144 Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser 1 5 10 15 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 20 25 30 Ile Gln Ser Leu Leu Gln Met 35 <210> 145 <211> 69 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> P4-14s A. thaliana <400> 145 tctcaaggaa tttctgaaaa gcaacttgat caacttcttt ctcaacttat tcaagctctt 60 cttcaacct 69 <210> 146 <211> 69 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> P4-14s E. coli <400> 146 agccagggta ttagcgaaaa acagctggat cagctgctga gccagctgat tcaggcactg 60 ctgcagccg 69 <210> 147 <211> 69 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> P1-2E,8E,11E,15E,18E A. thaliana <400> 147 aatgaaggaa tttctgaaaa ggaacttgat gaacttctta ctgaacttat tgaagctctt 60 cttcaacaa 69 <210> 148 <211> 69 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> P1-2E,8E,11E,15E,18 E. coli <400> 148 aatgaaggta ttagcgaaaa agaactggat gaactgctga ccgaactgat tgaagcactg 60 ctgcagcag 69 <210> 149 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15-59G <400> 149 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Gly Gly Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ser Leu Leu Glu 20 <210> 150 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15-59 <400> 150 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu Ile Glu 1 5 10 15 Ser Leu Leu Glu 20 <210> 151 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P20-5 <400> 151 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Leu Ile 1 5 10 15 Met Ser Leu Leu 20 <210> 152 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P20-6 <400> 152 Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Leu Ile 1 5 10 15 Glu Ser Leu Leu 20 <210> 153 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acids 85-103 of full-length harpin of Xanthomonas oryzae pv. Oryzae <400> 153 Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn Gly 20 <210> 154 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> motif 2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X at position 1 can be P, A, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> X at position 3 can be P, Q, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X at position 4 can be F, L, or Y <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X at position 7 can be M or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X at position 10 can be H, N, or Q <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> X at position 13 can be G or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X at position 14 can be E, D, or Q <400> 154 Xaa Ser Xaa Xaa Thr Gln Xaa Leu Met Xaa Ile Val Xaa Xaa 1 5 10 <210> 155 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6b <400> 155 Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu Gln Ala Gln 1 5 10 15 Asn <210> 156 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6c <400> 156 Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 <210> 157 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6-7L <400> 157 Pro Ser Pro Phe Thr Gln Leu Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn 20 <210> 158 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6-9E <400> 158 Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Glu His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn 20 <210> 159 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6a-7L,9E <400> 159 Pro Ser Pro Phe Thr Gln Leu Leu Glu His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn 20 <210> 160 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6d <400> 160 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly 1 5 10 15 Glu Ile Leu <210> 161 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P6d-7L-9E <400> 161 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Phe Thr Gln Leu Leu Glu His Ile Val Gly 1 5 10 15 Glu Ile Leu <210> 162 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acids 10 to 59 of the full length Erwinia amylovora HrpW <400> 162 Thr Ser Ser Ser Pro Gly Leu Phe Gln Ser Gly Gly Asp Asn Gly Leu 1 5 10 15 Gly Gly His Asn Ala Asn Ser Ala Leu Gly Gln Gln Pro Ile Asp Arg 20 25 30 Gln Thr Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu Ala Glu Leu Leu Lys Ser 35 40 45 Leu Leu 50 <210> 163 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 18-1 <400> 163 Gln Gln Pro Ile Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu 1 5 10 15 Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu 20 <210> 164 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18-4 <400> 164 Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu 1 5 10 15 Lys Ser Leu Leu Ser Pro 20 <210> 165 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18-5 <400> 165 Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys Ser 1 5 10 15 Leu Leu Ser Pro 20 <210> 166 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18-6 <400> 166 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln 1 5 10 15 Leu Leu Lys Ser Leu Leu 20 <210> 167 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18-7 <400> 167 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 168 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-5 <400> 168 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ile Gly Asp Asn Pro Leu Leu Lys Ala Leu 1 5 10 15 Leu Lys Leu Ile Ala Arg Leu Leu Asp Gly 20 25 <210> 169 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-5a <400> 169 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ile Gly Asp Asp Glu Leu Leu Lys Ala Leu 1 5 10 15 Leu Lys Leu Ile Ala Arg Leu Leu Asp Gly 20 25 <210> 170 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-6 <400> 170 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala 1 5 10 15 Arg Leu Leu Asp Gly 20 <210> 171 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-11 <400> 171 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ile Gly Asp Asn Pro Leu Leu Lys Ala Leu 1 5 10 15 Leu Lys Leu Ile Ala Arg Leu Leu 20 <210> 172 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-7 <400> 172 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala 1 5 10 15 Arg Leu Leu <210> 173 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-8 <400> 173 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala Arg 1 5 10 15 Leu Leu <210> 174 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acids 92 to 125 of the Ralstonia solanacearum PopA <400> 174 Gln Ala Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala Asn 1 5 10 15 Asn Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val 20 25 30 Lys Leu <210> 175 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P14d <400> 175 Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 176 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P14e <400> 176 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Leu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 177 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P14f <400> 177 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 178 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P14-30 <400> 178 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val 1 5 10 15 Lys Leu Leu Lys 20 <210> 179 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acids 206 to 260 of the Ralstonia solanacearum PopA <400> 179 Asn Gly Ala Asp Gly Gly Asn Gly Val Asn Gly Asn Gln Ala Asn Gly 1 5 10 15 Pro Gln Asn Ala Gly Asp Val Asn Gly Ala Asn Gly Ala Asp Asp Gly 20 25 30 Ser Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys 35 40 45 Ile Leu Asn Ala Leu Val Gln 50 55 <210> 180 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P2 <400> 180 Ala Asn Gly Ala Asp Asp Gly Ser Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu 1 5 10 15 Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu Asn Ala Leu Val Gln 20 25 30 <210> 181 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25-4 <400> 181 Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met 1 5 10 15 Lys Ile Leu Asn Ala Leu Val Gln 20 <210> 182 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25 <400> 182 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu 1 5 10 15 Asn Ala Leu <210> 183 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25s <400> 183 Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met 1 5 10 15 Lys Ile Leu Asn Ala Leu 20 <210> 184 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25-7 <400> 184 Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Leu 1 5 10 15 Lys Ile Leu Asn Ala Leu 20 <210> 185 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25-8 <400> 185 Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Glu Leu Met 1 5 10 15 Glu Ile Leu Asn Ala Leu 20 <210> 186 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25-20E <400> 186 Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Leu 1 5 10 15 Lys Ile Leu Glu Ala Leu Val Gln 20 <210> 187 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25-10 <400> 187 Ser Glu Glu Glu Glu Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Leu 1 5 10 15 Lys Ile Leu Glu Ala Leu 20 <210> 188 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25-11 <400> 188 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ile Leu Glu Ala Leu 20 <210> 189 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P30-2 <400> 189 Ser Glu Glu Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu 1 5 10 15 <210> 190 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P30-3 <400> 190 Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu Glu Glu 1 5 10 15 <210> 191 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-18e <400> 191 Ser Glu Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Glu Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 192 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> minp4-PolyE <400> 192 Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu Glu Glu Glu 1 5 10 15 Glu Glu <210> 193 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> SEE-minp4-EE <400> 193 Ser Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu 1 5 10 15 Glu Glu <210> 194 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-7E-CR <400> 194 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Glu Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro Arg 20 <210> 195 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> p1-allE-17A <400> 195 Asn Glu Gly Ile Ser Glu Lys Glu Leu Asp Glu Leu Leu Thr Glu Leu 1 5 10 15 Ala Glu Ala Leu Leu Gln Gln 20 <210> 196 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P4-14s-9i <400> 196 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Ile Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 197 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> p6a-dN3-sol <400> 197 Ser Glu Glu Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ala Gln Asn 20 <210> 198 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> p6a-dC4-sol <400> 198 Ser Glu Glu Glu Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val 1 5 10 15 Gly Glu Ile Leu 20 <210> 199 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P14c <400> 199 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val Lys Leu Leu Lys 35 <210> 200 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25-15 <400> 200 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu 1 5 10 15 Leu Lys Ile Leu Glu Ala 20 <210> 201 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25-16 <400> 201 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Val Leu Gln Lys Leu Leu Lys Ile Leu Glu 1 5 10 15 Ala Leu Val <210> 202 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P25-17 <400> 202 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gln Lys Leu Leu Lys Ile Leu Glu Ala 1 5 10 15 Leu Val Gln <210> 203 <211> 44 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acids 137 to 180 of Erwinia amylovora HrpN <400> 203 Ser Thr Ser Gln Asn Asp Asp Ser Thr Ser Gly Thr Asp Ser Thr Ser 1 5 10 15 Asp Ser Ser Asp Pro Met Gln Gln Leu Leu Lys Met Phe Ser Glu Ile 20 25 30 Met Gln Ser Leu Phe Gly Asp Gly Gln Asp Gly Thr 35 40 <210> 204 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P3 <400> 204 Gln Asn Asp Asp Ser Thr Ser Gly Thr Asp Ser Thr Ser Asp Ser Ser 1 5 10 15 Asp Pro Met Gln Gln Leu Leu Lys Met Phe Ser Glu Ile Met Gln Ser 20 25 30 Leu Phe Gly Asp Gly Gln Asp Gly Thr 35 40 <210> 205 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P3-3 <400> 205 Ser Asp Pro Met Gln Gln Leu Leu Lys Met Phe Ser Glu Ile Met Gln 1 5 10 15 Ser Leu Phe <210> 206 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P3-4 <400> 206 Ser Glu Glu Glu Leu Gln Gln Leu Leu Lys Leu Phe Ser Glu Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ser Leu Phe 20 <210> 207 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P3-6 <400> 207 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gln Gln Leu Leu Lys Leu Phe Ser Glu 1 5 10 15 Ile Leu Gln Ser Leu 20 <210> 208 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P3-7 <400> 208 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gln Gln Leu Leu Lys Leu Phe Ser Glu 1 5 10 15 Ile Leu Gln Ser 20 <210> 209 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P3-11 <400> 209 Leu Gln Gln Leu Leu Lys Leu Phe Ser Glu Ile Leu Gln Ser Leu Phe 1 5 10 15 Glu Glu Glu Glu 20 <210> 210 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P30-4 <400> 210 Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu 1 5 10 <210> 211 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P30-1 <400> 211 Arg Leu Arg Arg Leu Leu Arg Arg Leu Ile Arg Arg Leu Leu Arg Pro 1 5 10 15 <210> 212 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P30-5 <400> 212 Leu Asp Asp Leu Leu Asp Asp Leu Ile Asp Asp Leu Leu Asp Asp 1 5 10 15 <210> 213 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18-13 <400> 213 Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu 1 5 10 15 <210> 214 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P14-54 <400> 214 Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys Leu Leu Lys Glu Glu 1 5 10 15 <210> 215 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P14-55 <400> 215 Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Glu Leu Leu Glu Glu Glu 1 5 10 15 <210> 216 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P14-56 <400> 216 Leu Glu Glu Leu Leu Glu Asp Leu Val Glu Leu Leu Glu Glu Glu 1 5 10 15 <210> 217 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P14-57 <400> 217 Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Val Glu Leu Leu Glu Glu Glu 1 5 10 15 <210> 218 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P3-12 <400> 218 Leu Glu Glu Leu Leu Glu Leu Phe Glu Glu Ile Leu Glu Glu Leu Phe 1 5 10 15 Glu Glu <210> 219 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P3-13 <400> 219 Leu Glu Glu Leu Leu Lys Leu Phe Glu Glu Ile Leu Glu Glu Leu Phe 1 5 10 15 Glu Glu <210> 220 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P20-50a <400> 220 Ile Glu Glu Leu Ile Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu Glu Glu 1 5 10 <210> 221 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15-67 <400> 221 Ile Glu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu Glu Glu 1 5 10 15 <210> 222 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-54c <400> 222 Leu Glu Glu Leu Leu Lys Leu Ile Glu Arg Leu Leu Glu Glu 1 5 10 <210> 223 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-54b <400> 223 Leu Glu Glu Leu Leu Glu Leu Ile Glu Arg Leu Leu Glu Glu 1 5 10 <210> 224 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-54a <400> 224 Leu Glu Glu Leu Leu Lys Leu Ile Glu Glu Leu Leu Glu Glu 1 5 10 <210> 225 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-54 <400> 225 Leu Glu Glu Leu Leu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu Glu Glu 1 5 10 <210> 226 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P19-4 <400> 226 Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp Asn Pro Leu Leu Lys Ala Met Leu 1 5 10 15 Lys Leu Ile Ala Arg Met Met Asp Gly 20 25 <210> 227 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P15-dN4 <400> 227 Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu Ile Met Ser Leu 1 5 10 15 Leu Gln <210> 228 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18-3 <400> 228 Gln Gln Pro Ile Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu 1 5 10 15 Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu Ser Pro 20 25 <210> 229 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18-2 <400> 229 Gln Gln Pro Ile Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu 1 5 10 15 Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu 20 <210> 230 <211> 44 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acids 137 to 180 of Erwinia amylovora HrpN <400> 230 Ser Thr Ser Gln Asn Asp Asp Ser Thr Ser Gly Thr Asp Ser Thr Ser 1 5 10 15 Asp Ser Ser Asp Pro Met Gln Gln Leu Leu Lys Met Phe Ser Glu Ile 20 25 30 Met Gln Ser Leu Phe Gly Asp Gly Gln Asp Gly Thr 35 40 <210> 231 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> P18-10 <400> 231 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Glu Leu Leu Ala Glu Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 232 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> polyE-minP4 <400> 232 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln 1 5 10 15 Ala Leu Leu Gln Pro 20

Claims (207)

  1. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    (L/I/V/F) -X-X-(L/I/V/F) -(L/I) -X-X-(L/I/V/F) -(L/I/V/A) -X-X-(L/I) -(L/I/V/F) (서열식별번호: 93)
    여기서
    펩타이드는 시스테인 및 메티오닌을 포함하지 않고;
    각 2, 6, 및 10번 위치에서 X는 선택적이고, 존재하는 경우, 임의의 아미노산이며;
    각 3, 7, 및 11번 위치에서 X는 임의의 아미노산이다.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 100개 미만의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  3. 청구항 2에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 13 내지 50개 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 물 또는 수용액에 용해된 경우 안정한, 단리된 펩타이드.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 살생물제를 함유하는 수성 완충 용액에 용해시키는 경우 화학 분해에 대해 내성이 있는, 단리된 펩타이드.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 물 또는 수용액 속에서 약 0.1%보다 더 큰 용해도를 갖는 단리된 펩타이드.
  7. 청구항 1에 있어서, 2 및 6번 위치 중 하나 또는 둘 모두에서 X가 존재하지 않는, 단리된 펩타이드.
  8. 청구항 1에 있어서, 2 및 6번 위치에서 X가 둘 모두 존재하는, 단리된 펩타이드.
  9. 청구항 1 또는 청구항 7에 있어서, 10번 위치에서 X가 존재하지 않는, 단리된 펩타이드.
  10. 청구항 1 또는 청구항 8에 있어서, 10번 위치에서 X가 존재하는, 단리된 펩타이드.
  11. 청구항 1에 있어서,
    각 2 및 6번 위치에서 X가, 존재하는 경우, 극성 또는 하전된 아미노산이고;
    각 3, 7, 10, 및 11번 위치에서 X가 극성 또는 하전된 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  12. 청구항 1에 있어서,
    각 2 및 6번 위치에서 X가, 존재하는 경우, R, K, D, 이소D, E, N, Q, H, S, T, Y, W, G, A, 및 g-글루타메이트 로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각 3, 7, 10, 및 11번 위치에서 X가 R, K, D, 이소D, E, N, Q, H, S, T, Y, W, G, A, 및 g-글루타메이트로 구성된 군으로부터 선택되는, 단리된 펩타이드.
  13. 청구항 1에 있어서,
    각 2 및 6번 위치에서 X가, 존재하는 경우, D, 이소D, E, 및 g-글루타메이트 로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각 3, 7, 10, 및 11번 위치에서 X가 D, 이소D, E, 및 g-글루타메이트 로 구성된 군으로부터 선택되는, 단리된 펩타이드.
  14. 청구항 13에 있어서, 상기 펩타이드는 다음의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드:
    SEELEELLEELIEELL, 서열식별번호: 189,
    LEELLEELIEELLEE, 서열식별번호: 190,
    LEELLEELIEELL, 서열식별번호: 210,
    LEELLEELLEELLEE, 서열식별번호: 213,
    LEQLLEDLVELLEEE, 서열식별번호: 215,
    LEELLEDLVELLEEE, 서열식별번호: 216,
    LEELLEELVELLEEE, 서열식별번호: 217,
    LEELLELFEEILEELFEE, 서열식별번호: 218,
    LEELLKLFEEILEELFEE, 서열식별번호: 219,
    IEELIELIEELLEE, 서열식별번호: 220,
    IEELIEELIEELLEE, 서열식별번호: 221,
    LEELLELIERLLEE, 서열식별번호: 223, 또는
    LEELLELIEELLEE, 서열식별번호: 225.
  15. 청구항 1에 있어서, 서열식별번호: 93의 N-말단 또는 C-말단에서 친수성 아미노산 서열을 추가로 포함하는, 단리된 펩타이드.
  16. 청구항 15에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 31, 33, 126, 134, 141, 149, 150, 161, 166, 167, 168-173, 178, 187-189, 200-202, 206-209, 231 또는 232 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  17. 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드는 하기 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드:
    SEEEEELDQLLSQLIQALL (서열식별번호: 33) 또는 이의 7-19번 잔기;
    KQLDQLLSQLIQALLQP (서열식별번호: 94);
    EKQLDQLLSQLIQALLQP (서열식별번호: 95);
    SEKQLDQLLSQLIQALLQP (서열식별번호: 96);
    GISEKQLDQLLSQLIQALLQP (서열식별번호: 97);
    SQGISEKQLQLLSQLIQALLQP (서열식별번호: 132);
    SQGISEKQLDQLLQLIQALLQP (서열식별번호: 133);
    SQGISEKQALDQLLSQLIQALLQP (서열식별번호: 140);
    SEEEEELDQLLTQLIEALL (서열식별번호: 141) 또는 이의 7-19번 잔기;
    SEEEEEIAKLISALIESLLE (서열식별번호: 150) 또는 또는 이의 7-20번 잔기;
    SEEEEELAQLLAQLLKSLL (서열식별번호: 167) 또는 또는 이의 7-19번 잔기;
    SEEEEELKALLKLIARLL (서열식별번호: 173) 또는 또는 이의 7-18번 잔기;
    SEEEEEALEQLLEDLVKLLK (서열식별번호: 178) 또는 이의 7-20번 잔기;
    SEEEEELTGVLQKLLK회장 (서열식별번호: 188) 또는 이의 7-21번 잔기;
    SEELEELLEELIEELL (서열식별번호: 189);
    LEELLEELIEELLEE (서열식별번호: 190);
    SEEEEELTLTGVLQKLLKILEA (서열식별번호: 200) 또는 이의 7-22번 잔기;
    SEEEEEVLQKLLKILEALV (서열식별번호: 201) 또는 이의 7-19번 잔기;
    SEEEEELQKLLKILEALVQ (서열식별번호: 202) 또는 이의 7-19번 잔기;
    LEELLEELIEELL (서열식별번호: 210);
    LEELLEELLEELLEE (서열식별번호: 213);
    LEQLLEDLVELLEEE (서열식별번호: 215);
    LEELLEDLVELLEEE (서열식별번호: 216);
    LEELLEELVELLEEE (서열식별번호: 217);
    LEELLELFEEILEELFEE (서열식별번호: 218);
    LEELLKLFEEILEELFEE (서열식별번호: 219);
    IEELIELIEELLEE (서열식별번호: 220);
    IEELIEELIEELLEE (서열식별번호: 221);
    LEELLELIERLLEE (서열식별번호: 223);
    LEELLELIEELLEE (서열식별번호: 225);
    LEQLLEDLVKLLKEE (서열식별번호: 214);
    LEELLKLIERLLEE (서열식별번호: 222); 또는
    LEELLKLIEELLEE (서열식별번호: 224).
  18. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    XXGISEKXXXXXXXXXXXXXXXX (서열식별번호: 1, P1/P4 공통), 여기서
    1번 위치에서 X는 선택적이고 S, N, D, 이소D, G, A, 또는 S이며;
    2번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    9번 위치에서 X는 L, I, F, 또는 V이고;
    10번 위치에서 X는 선택적이고 D 또는 이소D이며;
    11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    12번 위치에서 X는 M, L, I, 또는 F이며;
    13번 위치에서 X는 M, L, 또는 I이고;
    14번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 친수성 아미노산이며;
    15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
    16번 위치에서 X는 M, L, I, V, 또는 F이며;
    17번 위치에서 X는 M, L, I, A, 또는 V이고;
    18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, M, T, 또는 K이며;
    19번 위치에서 X는 A, D, 이소D, S, V, T, K, R, E, H, 또는 G이고;
    20번 위치에서 X는 M, L, 또는 I이며;
    21번 위치에서 X는 M, L, I, V, S, 또는 F이고;
    22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S이며;
    23번 위치에서 X는 P, Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 당해 1종 이상의 돌연변이는 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 안정성 또는 단리된 펩타이드의 화학 분해에 대한 내성을 개선시킨다.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 펩타이드는 NQGISEKQLDQLLTQLIMALLQQ(P1, 서열식별번호: 4)로 구성되지 않은, 단리된 펩타이드.
  20. 청구항 18에 있어서, 상기 펩타이드는 SQGISEKQLDQLLCQLIQALLQP (P4, 서열식별번호: 5)로 구성되지 않은, 단리된 펩타이드.
  21. 청구항 18에 있어서, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 4 또는 5로 구성되고 그리고 상기 단리된 펩타이드는 물 또는 수용액 속에 용해시키는 경우에 서열식별번호: 4 또는 5의 폴리펩타이드보다 더 안정적인, 단리된 펩타이드.
  22. 청구항 18에 있어서, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 4 또는 5이고 상기 단리된 펩타이드는 살생물제를 함유하는 수성 완충 용액에 용해되는 경우에 서열식별번호: 4 또는 5의 폴리펩타이드보다 화학 내성에 대해 더 내성이 있는, 단리된 펩타이드.
  23. 청구항 18에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드:
    SXGISEKXXDXXXXXXXXAXXXP (서열식별번호: 2, P4 공통), 여기서
    2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    9번 위치에서 X는 L, A, D, 이소D, I, V, 또는 F이며;
    11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    12번 위치에서 X는 L, D, 이소D, I, 또는 F이고;
    13번 위치에서 X는 L, I, V, 또는 F이며;
    14번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산이고;
    15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
    16번 위치에서 X는 L, A, I, V, M, 또는 F이고;
    17번 위치에서 X는 I, S, 또는 F이며;
    18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    20번 위치에서 X는 L, I, V, 또는 F이며;
    21번 위치에서 X는 L 또는 F이고;
    22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다.
  24. 청구항 23에 있어서, 14번 위치에서 X가 S인, 단리된 펩타이드.
  25. 청구항 23에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 6-11, 19, 20, 22-24, 27-30, 32, 34, 37, 40, 98-108, 111-114, 116, 117, 119-125, 127-131, 136-139, 191, 및 196 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  26. 청구항 18에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드:
    XXGISEKXLDXLLTXLIXALLXX (서열식별번호: 3, P1 공통), 여기서
    1번 위치에서 X는 N, D, 이소D, G, A, 또는 S이고;
    2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    18번 위치에서 X는 M, T, K, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    23번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다.
  27. 청구항 26에 있어서, 서열식별번호: 3의 2, 8, 11, 15, 22, 및 23번 위치 중 적어도 하나에 대해 X가 E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S인, 단리된 펩타이드.
  28. 청구항 26에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 41-46, 109, 110, 115, 및 118 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  29. 청구항 18에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 100개 미만의 펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  30. 청구항 29에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 23 내지 50개 펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  31. 청구항 18에 있어서, 상기 펩타이드는 열거된 아미노산 서열로 본질적으로 구성된, 단리된 펩타이드.
  32. 청구항 18에 있어서, 상기 펩타이드는 열거된 아미노산 서열로 구성된, 단리된 펩타이드.
  33. 길이가 100개 미만의 아미노산이고, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  34. 청구항 33에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 서열식별번호: 5로 본질적으로 구성된, 단리된 펩타이드.
  35. 청구항 33에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 서열식별번호: 5로 구성된, 단리된 펩타이드.
  36. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    (i) KPXDSXSXIAKLISXLIXSLLX (서열식별번호: 47, P15b/P20 공통), 여기서
    3번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
    6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    8번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
    15번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이며;
    18번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
    22번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다); 또는
    (ii) IAKLISXLIXSLLX (서열식별번호: 12, P15/20 min 공통), 여기서
    7번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이고;
    10번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
    14번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다,
    상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 당해 1종 이상의 돌연변이는 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 안정성 또는 단리된 펩타이드의 화학 분해에 대한 내성을 개선시킨다.
  37. 청구항 36에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 길이가 100개 미만의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  38. 청구항 36에 있어서, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 48이고, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 물 또는 수용액에 용해된 경우에 서열식별번호: 48의 폴리펩타이드보다 더 안정적인, 단리된 펩타이드.
  39. 청구항 36에 있어서, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 48이고, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 살생물제를 함유하는 수성 완충 용액 속에 용해되는 경우에 서열식별번호: 48의 폴리펩타이드보다 화학 분해에 대해 더 내성이 있는, 단리된 펩타이드.
  40. 청구항 36에 있어서, 상기 펩타이드는 다음 중의 1종의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드: 서열식별번호: 49-65, 142-144, 151, 또는 152.
  41. 청구항 36에 있어서, 상기 펩타이드는 인용된 아미노산 서열로 본질적으로 구성된, 단리된 펩타이드.
  42. 청구항 36에 있어서, 상기 펩타이드는 인용된 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩타이드.
  43. 22 내지 36개의 아미노산을 포함하고, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 63, 또는 서열식별번호: 64의 아미노산으로 본질적으로 구성된, 단리된 펩타이드.
  44. 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  45. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    (i) PSPXTXXLXXIVGXILXAXN (서열식별번호: 66, 펩타이드 6/6a 공통) 여기서
    4번 위치에서 X는 F 또는 Y이고;
    6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    7번 위치에서 X는 선택적이고 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
    9번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이며;
    10번 위치에서 X는 H 또는 N이고;
    14번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 또는 이소D이며;
    17번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    19번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다; 또는
    (ii) XTXXLXXIVGXIL (서열식별번호: 135, P6/6a min 공통) (여기서
    1번 위치에서 X는 F 또는 Y이고;
    3번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    4번 위치에서 X는 선택적이고, 일 구현예에 따르면, M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K일 수 있거나; 또 다른 구현예에 따르면 L일 수 있고;
    6번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이며;
    7번 위치에서 X는 H 또는 N이고;
    11번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 또는 이소D이다);
    상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 당해 1종 이상의 돌연변이는 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 안정성 또는 단리된 펩타이드의 화학 분해에 대한 내성을 개선시킨다.
  46. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 PSPFTQMLMHIVGEILQAQN (P6a, 서열식별번호: 67로 구성되지 않은, 단리된 펩타이드.
  47. 청구항 45에 있어서, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 67이고 그리고 상기 단리된 펩타이드는 물 또는 수용액 속에 용해된 경우에 서열식별번호; 67의 폴리펩타이드보다 더 안정적인, 단리된 펩타이드.
  48. 청구항 45에 있어서, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 67이고, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 살생물제를 함유하는 수성 완충 용액속에 용해된 경우에 서열식별번호: 67의 폴리펩타이드보다 화학 분해에 대해 더 내성이 있는, 단리된 펩타이드.
  49. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 68-80, 155-161, 197, 및 198 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  50. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 100 개 미만의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  51. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 20 내지 50개 펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  52. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 열거된 아미노산 서열로 본질적으로 구성된, 단리된 펩타이드.
  53. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 열거된 아미노산 서열로 구성된, 단리된 펩타이드.
  54. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 154를 포함하지 않는, 단리된 펩타이드.
  55. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 PSPXTXXLXXIVGXILXAXN(서열식별번호: 66, 펩타이드 6/6a 공통)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  56. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 XTXXLXXIVGXIL (서열식별번호: 135, P6/6a min 공통)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  57. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    (i) LXXL(L/M) XILXXLV (서열식별번호: 16, P25 공통) 여기서
    2번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
    3번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
    6번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
    9번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G이고;
    10번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N이다; 또는
    (ii) LXXVLXXL(L/M) XILXXLV (서열식별번호: 17, P25 공통) 여기서
    2번 위치에서 X는 T, S, A, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이고;
    3번 위치에서 X는 G, T, S, A, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이며;
    6번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
    7번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
    10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
    13번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G이며;
    14번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고;
    16번 위치에서 V는 선택적이다.
  58. 청구항 57에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 179로 구성되지 않은, 단리된 펩타이드.
  59. 청구항 57에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 179이고, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 물 또는 수용액 속에 용해된 경우에 서열식별번호: 179의 폴리펩타이드보다 더 안정적인, 단리된 펩타이드.
  60. 청구항 57에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 179이고, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 살생물제를 함유하는 수성 완충 용액속에 용해된 경우에 서열식별번호: 179의 폴리펩타이드보다 화학 분해에 대해 더 내성이 있는, 단리된 펩타이드.
  61. 청구항 57에 있어서, 상기 펩타이드는 LXXL(L/M) XILXXLV (서열식별번호: 16, P25 공통)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  62. 청구항 57에 있어서, 상기 펩타이드는 LXXVLXXL(L/M) XILXXLV (서열식별번호: 17, P25 공통)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  63. 청구항 57에 있어서, 상기 펩타이드는 LXXVLXXL(L/M) XILXXL (서열식별번호: 17, P25 공통)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  64. 청구항 57에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 180-188 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  65. 청구항 57에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 100 개 미만의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  66. 청구항 57에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 20 내지 50개 펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  67. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    (i) XXXXXXXXXXX(L/M) XXLLXXLLXXLLXXX (서열식별번호: 18, P17/18), 여기서
    1번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
    2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
    3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
    4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, N, 이소D, K, 또는 R이며;
    5번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 D, 이소D, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, N, Q, K, 또는 R이고;
    6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, 또는 K이며;
    7번 위치의 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
    8번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 T, Q, S, E, g-글루타메이트, A, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
    9번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
    10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 E, g-글루타메이트, Q, S, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
    11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
    13번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    14번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
    17번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    18번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
    21번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
    22번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    25번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이며;
    26번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    27번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이다; 또는
    (ii) (L/M) XXLLXXLLXXLL (서열식별번호: 25, P17/18 min 공통) 여기서
    2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
    6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
    10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
    11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이다;
    상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상기 1종 이상의 돌연변이는 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 관련하여 단리된 펩타이드의 수성 용해도, 안정성, 또는 화학 분해에 대한 내성을 개선한다.
  68. 청구항 67에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 162로 구성되지 않은, 단리된 펩타이드.
  69. 청구항 67에 있어서, 여기서 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 162이고, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 물 또는 수용액 속에 용해된 경우에 서열식별번호: 162의 폴리펩타이드보다 더 안정적인, 단리된 펩타이드.
  70. 청구항 67에 있어서, 여기서 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 162이고, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 살생물제를 함유하는 수성 완충 용액속에 용해된 경우에 서열식별번호: 162의 폴리펩타이드보다 화학 분해에 대해 더 내성이 있는, 단리된 펩타이드.
  71. 청구항 67에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 84-88,163-167, 228, 229, 및 231 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  72. 청구항 67에 있어서, 상기 펩타이드는 XXXXXXXXXXX(L/M) XXLLXXLLXXLLXXX (서열식별번호: 18, P17/18 공통)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  73. 청구항 67에 있어서, 상기 펩타이드는 (L/M) XXLLXXLLXXLL (서열식별번호: 25, P17/18 min 공통)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  74. 청구항 67에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 100 개 미만의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  75. 청구항 67에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 20 내지 50개 펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  76. 하기의 아미노산 서열 을 포함하는, 단리된 펩타이드:
    XLXX(L/M) LXLIXX(L/I/V/F/M) (L/I/V/F/M) (서열식별번호: 26, P19 공통) 여기서
    1번 위치에서 X는 선택적이고 L, I, V, F, 또는 M이고;
    3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
    4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
    10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 K이다.
  77. 청구항 76에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 89, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 물 또는 수용액 속에 용해된 경우에 서열식별번호: 89의 폴리펩타이드보다 더 안정적인, 단리된 펩타이드.
  78. 청구항 76에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 89이고, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 살생물제를 함유하는 수성 완충 용액속에 용해된 경우에 서열식별번호: 89의 폴리펩타이드보다 화학 분해에 대해 더 내성이 있는, 단리된 펩타이드.
  79. 청구항 76에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 90-92, 168-173, 및 226 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  80. 청구항 76에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 100 개 미만의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  81. 청구항 76에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 20 내지 50개의 펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  82. 청구항 76에 있어서, 1번 위치에서 상기 아미노산 잔기가 존재하는 단리된 펩타이드.
  83. 하기의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드:
    (i) XXXXXXLXXLLXXLVXLLK (서열식별번호: 13, P14d 공통), 여기서
    1번 위치에서 X는 Q, N, D, E, g-글루타메이트, 이소D, 또는 S일 수 있고;
    2번 위치에서 X는 D, E, g-글루타메이트, 이소D일 수 있으며;
    3번 위치에서 X는 P, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    4번 위치에서 X는 M, A, S, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
    5번 위치에서 X는 Q, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    6번 위치에서 X는 A, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
    8번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    9번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
    12번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
    13번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
    16번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있다); 또는
    (ii) LXXLLXXLVXLLK (서열식별번호: 14, P14d min 공통), 여기서
    2번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    3번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    6번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    7번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있다.
  84. 청구항 83에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 174로 구성되지 않은, 단리된 펩타이드.
  85. 청구항 83에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 174이고, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 물 또는 수용액 속에 용해된 경우에 서열식별번호: 174의 폴리펩타이드보다 더 안정적인, 단리된 펩타이드.
  86. 청구항 83에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 174이고, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 살생물제를 함유하는 수성 완충 용액속에 용해된 경우에 서열식별번호: 174의 폴리펩타이드보다 화학 분해에 대해 더 내성이 있는, 단리된 펩타이드.
  87. 청구항 83에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 175-178 및 199 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  88. 청구항 83에 있어서, 청구항 83에 있어서, 상기 펩타이드는 XXXXXXLXXLLXXLVXLLK (서열식별번호: 13, P14d 공통)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  89. 청구항 83에 있어서, 상기 펩타이드는 LXXLLXXLVXLLK(서열식별번호: 14, P14d min 공통)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  90. 청구항 83에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 100 개 미만의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  91. 청구항 83에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 12 내지 50개 펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  92. 하기의 아미노산 서열 of을 포함하는, 단리된 펩타이드:
    (i) (L/M) XXLLX(L/M) FXXI(L/M) XX (서열식별번호: 15, P3min 공통) 여기서
    2번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
    3번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
    6번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
    9번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
    10번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고;
    13번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
    14번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있다.
  93. 청구항 92에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 230 또는 이의 C-말단 31개 아미노산 부분으로 구성되지 않은, 단리된 펩타이드.
  94. 청구항 92에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 230이며, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 물 또는 수용액 속에 용해된 경우에 서열식별번호: 230의 폴리펩타이드보다 더 안정적인, 단리된 펩타이드.
  95. 청구항 92에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 230이며, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 살생물제를 함유하는 수성 완충 용액속에 용해된 경우에 서열식별번호: 230의 폴리펩타이드보다 화학 분해에 대해 더 내성이 있는, 단리된 펩타이드.
  96. 청구항 92에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 상응하는 야생형 아미노산 서열에 대해 1종 이상의 돌연변이를 포함하고, 상응하는 야생형 아미노산 서열을 포함하는 상기 폴리펩타이드는 서열식별번호: 230이며, 그리고 상기 단리된 펩타이드는 서열식별번호: 230의 폴리펩타이드보다 수용액 속에서 더 가용성이 있는, 단리된 펩타이드.
  97. 청구항 92에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 204로 구성된, 단리된 펩타이드.
  98. 청구항 92에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 205-209 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  99. 청구항 92에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 100 개 미만의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  100. 청구항 92에 있어서, 상기 펩타이드는 길이가 12 내지 30개 펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  101. 청구항 1 내지 청구항 100 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드는 적어도 90% 순수한, 단리된 펩타이드.
  102. 청구항 1 내지 청구항 30, 청구항 33, 청구항 36 내지 청구항 40, 청구항 44 내지 청구항 51, 청구항 54 내지 청구항 96, 및 청구항 98 내지 청구항 100 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드는 아미노산 서열에 대해 펩타이드 결합을 통해 커플링된 제2 아미노산을 포함하는 융합 폴리펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  103. 청구항 102에 있어서, 상기 제2 아미노산 서열이 정제 태그를 포함하는, 단리된 펩타이드.
  104. 청구항 103에 있어서, 상기 제2 아미노산 서열이 정제 태그와 아미노산 서열 사이에 절단가능 링커 서열을 추가로 포함하는, 단리된 펩타이드.
  105. 청구항 102에 있어서, 상기 펩타이드는 상기펩타이드에 대해 제2 아미노산에 대해 연결된 상기 펩타이드에 대한 제1 아미노산을 포함하는 융합 폴리펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  106. 청구항 102에 있어서, 상기 제2 아미노산 서열이 N-말단 또는 C-말단 친수성 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  107. 청구항 106에 있어서, 상기 친수성 아미노산 서열이 복수의 Glu (E) 아미노산 잔기를 포함하는, 단리된 펩타이드.
  108. 청구항 1 내지 청구항 30, 청구항 33, 청구항 36 내지 청구항 40, 청구항 44 내지 청구항 51, 청구항 54 내지 청구항 96, 및 청구항 98 내지 청구항100 중의 어느 한 항에 따른 펩타이드를 포함하는 복수의 아미노산 서열에 각각 연속적으로 함께 연결된 복수의 아미노산 서열을 포함하는 융합 폴리펩타이드.
  109. 청구항 108에 있어서, 상기 복수의 아미노산 서열이 절단가능 링커 서열에 의해 함께 연결된, 융합 폴리펩타이드.
  110. 청구항 108에 있어서, 상기 복수의 아미노산 서열 각각이 정제 태그, N-말단 또는 C-말단 친수성 아미노산 서열, 또는 둘 모두를 포함하는, 융합 폴리펩타이드.
  111. 청구항 1 내지 청구항 107 중의 어느 한 항에 따른 1종 이상의 펩타이드 또는 청구항 108 내지 청구항 110 중의 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 및 담체를 포함하는 조성물.
  112. 청구항 111에 있어서, 상기 조성물이 정화된 세포 추출물인 조성물.
  113. 청구항 111에 있어서, 비료, 제초제, 살충제, 살진균제, 살선충제, 살균 제제, 생물학적 접종물, 식물 조절물질, 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 첨가제를 추가로 포함하는 조성물.
  114. 청구항 113에 있어서, 상기 살충제가 네오니코티노이드 살충제, 오르가노포스페이트 살충제, 피레트로이드 살충제, 거대환식 락톤 살충제, 카바메이트 살충제, 디아미드 살충제, 아베르멕틴 살충제, 키틴 합성 저해제, 또는 이들의 임의의 조합인, 첨가제를 추가로 포함하는 조성물.
  115. 청구항 113에 있어서, 상기 살진균제가 스트로빌루린 살진균제, 트리아졸 살진균제, 석시네이트 탈수소효소 살진균제, 페닐아미드 살진균제, 페닐피롤 살진균제, 프탈이미드 살진균제, 디티오카바메이트 살진균제, 벤즈이미다졸 살진균제, 또는 이들의 임의의 조합인, 조성물.
  116. 청구항 113에 있어서, 상기 살선충제가 카바메이트 살선충제인, 조성물.
  117. 청구항 113에 있어서, 상기 살균 제제가 디클로로펜 및 벤질알코올 헤미 포르말 살균제, 이소티아졸리논 살균제, 또는 이들의 조합인, 조성물.
  118. 청구항 113에 있어서, 생물학적 접종물이 브래디히조비움 아종(Bradyrhizobium spp .), 바실러스 아종(Bacillus spp .), 스트렙토마이세스 아종(Streptomyces spp .), 트리코데르마 아종( Trichoderma spp .), 파스퇴리아 아종(Pasteuria spp.), 또는 이들의 임의의 조합인, 조성물.
  119. 청구항 113에 있어서, 상기 조성물이 하기를 포함하는 조성물:
    펩타이드 P1, P4-14S, P6a, P14d, P15a, P18, P19, 또는 P25 중 1종 이상; 및
    클로티아니딘, 클로티아니딘 및 바실러스 피르무스 (Bacillus firmus ) 의 조합, 이미디클로프리드, 또는 이미디클로프리드 및 바실러스 피르무스의 조합.
  120. 청구항 113에 있어서, 상기 조성물이 하기를 포함하는 조성물:
    펩타이드 P1, P4-14S, P6a, P14d, P15a, P18, P19, 또는 P25 중 1종 이상; 및
    티아메톡삼; 티아메톡삼, 메페녹삼, 및 플루디옥시닐의 조합; 티아메톡삼, 메페녹삼, 플루디옥시닐 및 아족시스트로빈의 조합; 티아메톡삼 및 아바멕틴의 조합; 티아메톡삼, 아바멕틴, 및 파스퇴리아 살선충제의 조합; 또는 티아메톡삼, 메페녹삼, 플루디옥시닐, 아족시스트로빈, 티아벤다졸, 및 아바멕틴의 조합.
  121. 청구항 113에 있어서, 상기 조성물이 하기를 포함하는 조성물:
    펩타이드 P1, P4-14S, P6a, P14d, P15a, P18, P19, 또는 P25 중 1종 이상; 및
    브래디히조비움 아종, 바실러스 아종, 및 이들의 조합을 포함하는 생물학적 접종물.
  122. 청구항 111에 있어서, 상기 담체가 수성 담체인 조성물.
  123. 청구항 122에 있어서, 상기 수성 담체가 살생 제제, 프로테아제 저해제, 비-이온성 계면활성제, 또는 이들의 조합중 1종 이상을 포함하는 조성물.
  124. 청구항 111에 있어서, 상기 담체가 미립 형태의 고형 담체인, 조성물.
  125. 청구항 124에 있어서, 상기 고형 담체가 건조 분말인, 조성물.
  126. 다음을 포함하여 식물에게 질환 내성을 부여하는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 청구항 107중의 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 108 내지 청구항 110 중의 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 111 내지 청구항 125 중의 어느 한 항에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장 중이거나 성장하는 것으로 예상되는 지역에 적용시키는 단계로서, 상기 적용은 질환 내성을 부여하는데 효과적인 단계.
  127. 청구항 126에 있어서, 상기 질환이 바이러스성 질환, 박테리아 질환, 또는 진균 질환인 방법.
  128. 청구항 126에 있어서, 상기 적용이 식물로 수행된, 방법.
  129. 청구항 128에 있어서, 상기 식물이 적어도 1종의 제초제에 대해 내성인 방법.
  130. 청구항 126에 있어서, 상기 적용이 식물 종자로 수행되고, 상기 방법이 상기 펩타이드 또는 조성물로 처리된 씨드를 천연 또는 인공 토양에 식재하는 단계, 및 토양에서 식재된 씨드로부터 식물을 증식시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  131. 청구항 126에 있어서, 상기 적용이 식물이 성장하거나 성장하는 것으로 예측되는 지역에서 수행되는 방법.
  132. 청구항 126에 있어서, 상기 식물이 그것의 천연 또는 유전적으로 변형된 형태인, 농업, 산립, 장식품 및 원예 식물로부터 선택된, 방법.
  133. 청구항 126에 있어서, 상기 식물이 유전적으로 변형된 식물인, 방법.
  134. 청구항 126에 있어서, 처리되는 상기 식물이 알팔파, 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 보리, 콩, 너도밤나무 (파거스 종), 베고니아, 자작나무, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 캄포르, 카놀라, 당근, 피마자유 식물, 체리, 신나몬, 사이트루스, 코코아 빈, 커피, 옥수수, 면, 오이, 조롱박, 유칼립투스, 전나무, 아마, 사료용 비트, 후크시아, 마늘, 제라늄, 포도, 땅콩, 삼, 홉, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 황마, 렌즈콩, 상추, 아마인, 멜론, 머스타드, 오크, 귀리, 오일 야자나무, 오일-종자 평지, 올리브, 양파, 파프리카, 완두콩, 복숭아, 배, 펠라고늄, 후추s, 피튜니아, 소나무 (피누스 종), 포플러 (파퓰러스 종), 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 쌀, 고무 나무, 호밀, 수수, 대두, 시금치, 가문비나무, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 차, 티크, 담배, 토마토, 라이밀, 잔디, 수박, 밀 및 버드나무 (살릭스 종)으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  135. 다음을 포함하여, 식물 성장을 향상시키는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 청구항 107 중의 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 108 내지 청구항 110 중의 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 111 내지 청구항 125 중의 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드를 식물 또는 식물 종자 또는 상기 식물이 성장 중이거나 성장하는 것으로 예상되는 지역에 적용시키고, 상기 적용이 식물 성장을 향상시키는데 효과적인 단계.
  136. 청구항 135에 있어서, 상기 향상된 성장이 개선된 식물 활기 증가된 식물 중량, 증가된 바이오매스, 식물 당 꽃의 증가된 수, 보다 많은 그레인 및/또는 과일 수확량, 보다 어린나무 또는 곁가지, 더 큰 잎, 증가된 순 성장, 증가된 단백질 함량, 증가된 오일 함량 증가된 전분 함량 증가된 안료 함량 증가된 클로로필 함량 및 이들의 조합인, 방법.
  137. 청구항 135에 있어서, 상기 적용이 식물로 수행된, 방법.
  138. 청구항 137에 있어서, 상기 식물이 적어도 1종의 제초제에 대해 내성인 방법.
  139. 청구항 135에 있어서, 상기 적용이 식물 종자로 수행되고, 상기 방법이 상기 펩타이드 또는 조성물로 처리된 씨드를 천연 또는 인공 토양에 식재하는 단계, 및 토양에 식재된 씨드로부터 식물을 증식시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  140. 청구항 135에 있어서, 상기 적용이 상기 식물이 성장하거나 성장하는 것으로 예상되는 지역에서 수행되는, 방법.
  141. 청구항 135에 있어서, 상기 식물이 각각 그것의 천연 또는 유전적으로 변형된 형태인, 농업, 산림, 장식품 및 원예 식물로부터 선택되는, 방법.
  142. 청구항 135에 있어서, 상기 식물이 유전적으로 변형된 식물인, 방법.
  143. 청구항 135에 있어서, 처리될 상기 식물이 알팔파, 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 보리, 콩, 너도밤나무 (파거스 종), 베고니아, 자작나무, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 캄포르, 카놀라, 당근, 피마자유 식물, 체리, 신나몬, 사이트루스, 코코아 빈, 커피, 옥수수, 면, 오이, 조롱박, 유칼립투스, 전나무, 아마, 사료용 비트, 후크시아, 마늘, 제라늄, 포도, 땅콩, 삼, 홉, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 황마, 렌즈콩, 상추, 아마인, 멜론, 머스타드, 오크, 귀리, 오일 야자나무, 오일-종자 평지, 올리브, 양파, 파프리카, 완두콩, 복숭아, 배, 펠라고늄, 후추, 피튜니아, 소나무 (피누스 종), 포플러 (파퓰러스 종), 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 쌀, 고무 나무, 호밀, 수수, 대두, 시금치, 가문비나무, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 차, 티크, 담배, 토마토, 라이밀, 잔디, 수박, 밀 및 버드나무 (살릭스 종)로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  144. 다음을 포함하여, 생물학적 스트레스에 대한 식물 내성을 증가시키는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 청구항 107 중의 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 108 내지 청구항 110 중의 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 111 내지 청구항 125 중의 어느 한 항에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 상기 식물이 성장 중이거나 성장하는 것으로 예상되는 지역에 적용시키는 단계(상기 적용은 곤충, 거미류, 선충, 잡초, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 생물학적 스트레스 인자에 대한 식물 내성을 증가시키는데 효과적이다).
  145. 청구항 144에 있어서, 상기 적용이 식물로 수행되는, 방법.
  146. 청구항 145에 있어서, 상기 식물이 적어도 1종의 제초제에 대해 내성인, 방법.
  147. 청구항 144에 있어서, 상기 적용이 식물 씨드로 수행되고, 상기 방법이 상기 펩타이드 또는 조성물로 처리된 씨드를 천연 또는 인공 토양에 식재하는 단계, 및 토양에서 식재된 씨드로부터 식물을 증식시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  148. 청구항 144에 있어서, 상기 적용이 상기 식물이 성장하거나 성장하는 것으로 예상되는 지역에서 수행되는, 방법.
  149. 청구항 144에 있어서, 상기 식물이 그것의 천연 또는 유전적으로 변형된 형태인, 농업, 산림, 장식품 및 원예 식물 각각으로부터 선택되는, 방법.
  150. 청구항 144에 있어서, 상기 식물이 유전적으로 변형된 식물인, 방법.
  151. 청구항 144에 있어서, 처리될 상기 식물이 알팔파, 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 보리, 콩, 너도밤나무 (파거스 종), 베고니아, 자작나무, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 캄포르, 카놀라, 당근, 피마자유 식물, 체리, 신나몬, 사이트루스, 코코아 빈, 커피, 옥수수, 면, 오이, 조롱박, 유칼립투스, 전나무, 아마, 사료용 비트, 후크시아, 마늘, 제라늄, 포도, 땅콩, 삼, 홉, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 황마, 렌즈콩, 상추, 아마인, 멜론, 머스타드, 오크, 귀리, 오일 야자나무, 오일-종자 평지, 올리브, 양파, 파프리카, 완두콩, 복숭아, 배, 펠라고늄, 후추s, 피튜니아, 소나무 (피누스 종), 포플러 (파퓰러스 종), 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 쌀, 고무 나무, 호밀, 수수, 대두, 시금치, 가문비나무, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 차, 티크, 담배, 토마토, 라이밀, 잔디, 수박, 밀 및 버드나무 (살릭스 종)으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  152. 다음을 포함하여, 비생물학적 스트레스에 대한 식물 내성을 증가시키는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 청구항 107 중의 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 108 내지 청구항 110 중의 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 111 내지 청구항 125 중의 어느 한 항에 따른 조성물을 식물 또는 식물 씨드 또는 상기 식물은 성장 중이거나 성장하는 것으로 예상되는 지역에 적용시키는 단계(상기 적용은 염 스트레스, 물 스트레스, 오존 스트레스, 중금속 스트레스, 차가운 스트레스, 열 스트레스, 영양 스트레스, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 비생물학적 스트레스 인자에 대한 식물 내성을 증가시키는데 효과적이다).
  153. 청구항 152에 있어서, 상기 적용이 식물로 수행되는, 방법.
  154. 청구항 153에 있어서, 상기 식물이 적어도 1종의 제초제에 대해 내성인, 방법.
  155. 청구항 152에 있어서, 상기 적용이 식물 씨드로 수행되고, 상기 방법이 상기 펩타이드 또는 조성물로 처리된 씨드를 천연 또는 인공 토양에 식재하는 단계, 및 토양에 식재된 씨드로부터 식물을 증식시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  156. 청구항 152에 있어서, 상기 적용이 상기 식물이 성장하거나 성장하는 것으로예상된 지역에서 수행되는, 방법.
  157. 청구항 152에 있어서, 상기 식물이 그것의 천연 또는 유전적으로 변형된 형태인, 농업, 산림, 장식품 및 원예 식물 각각으로 부터 선택되는, 방법.
  158. 청구항 152에 있어서, 상기 식물이 유전적으로 변형된 식물인, 방법.
  159. 청구항 152에 있어서, 처리될 상기 식물이 알팔파, 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 보리, 콩, 너도밤나무 (파거스 종), 베고니아, 자작나무, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 캄포르, 카놀라, 당근, 피마자유 식물, 체리, 신나몬, 사이트루스, 코코아 빈, 커피, 옥수수, 면, 오이, 조롱박, 유칼립투스, 전나무, 아마, 사료용 비트, 후크시아, 마늘, 제라늄, 포도, 땅콩, 삼, 홉, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 황마, 렌즈콩, 상추, 아마인, 멜론, 머스타드, 오크, 귀리, 오일 야자나무, 오일-종자 평지, 올리브, 양파, 파프리카, 완두콩, 복숭아, 배, 펠라고늄, 후추, 피튜니아, 소나무 (피누스 종), 포플러 (파퓰러스 종), 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 쌀, 고무 나무, 호밀, 수수, 대두, 시금치, 가문비나무, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 차, 티크, 담배, 토마토, 라이밀, 잔디, 수박, 밀 및 버드나무 (살릭스 종)로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  160. 다음을 포함하여 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 청구항 107 중의 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 108 내지 청구항 110 중의 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 111 내지 청구항 125 중의 어느 한 항에 따른 조성물을 식물 또는 상기 식물이 성장하는 지역에 적용시키는 단계, 상기 적용은 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는데 효과적이다.
  161. 청구항 160에 있어서, 상기 적용이 원예 식물로 수행되는, 방법.
  162. 청구항 160에 있어서, 상기 적용이 원예 식물이 성장하는 지역에서 수행되는, 방법.
  163. 청구항 160에 있어서, 상기 원예 식물이 유전적으로 변형된 원예 식물인, 방법.
  164. 청구항 160에 있어서, 처리될 상기 식물이 너도밤나무 (파거스 종), 베고니아, 자작나무, 관상용 양배추, 전나무, 후크시아, 마늘, 제라늄, 오크, 관상용 양파, 펠라고늄, 피튜니아, 소나무 (피누스 종), 포플러 (파퓰러스 종), 해바라기, 티크, 담배, 잔디, 및 버드나무 (살릭스 종)로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  165. 다음을 포함하여, 과일 또는 야채에 수거후 질환 또는 수거후 건조 내성을 부여하는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 청구항 107 중의 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 108 내지 청구항 110 중의 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 111 내지 청구항 125 중의 어느 한 항에 따른 조성물을 과일 또는 야채를 함유하는 식물 또는 상기 식물이 성장하는 지역에 적용시키는 단계, 또는
    유효량의 상기 단리된 펩타이드 또는 상기 조성물을 수확된 과일 또는 야채에 적용시키는 단계,
    상기 적용은 과일 또는 야채에 수거후 질환 내성 또는 건조 내성을 부여하는데 효과적이다.
  166. 청구항 165에 있어서, 상기 적용이 식물로 수행되는, 방법.
  167. 청구항 166에 있어서, 상기 식물이 적어도 1종의 제초제에 대해 내성인, 수거후 질환 내성 또는 건조 내성.
  168. 청구항 165에 있어서, 상기 적용이 상기 식물이 성장하는 유전자좌에서 수행되는, 방법.
  169. 청구항 165에 있어서, 상기 적용이 수확된 과일 또는 야채에서 수행되는 방법.
  170. 청구항 165에 있어서, 상기 식물이 유전적으로 변형된 식물인, 방법.
  171. 청구항 165에 있어서, 상기 식물이 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 당근, 체리, 사이트루스, 옥수수, 오이, 조롱박, 사료용 비트, 마늘, 포도, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 상추, 멜론, 머스타드, 올리브, 양파, 완두콩, 복숭아, 배, 후추, 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 시금치, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 차, 토마토, 라이밀, 및 수박으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  172. 다음을 포함하여, 과일 또는 야채 성숙 수명을 향상시키는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 청구항 107 중의 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 108 내지 청구항 110 중의 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 111 내지 청구항 125 중의 어느 한 항에 따른 조성물을 과일 또는 야채를 함유하는 식물 또는 상기 식물이 성장하는 지역에 적용시키는 단계, 또는
    유효량의 상기 단리된 펩타이드 또는 상기 조성물을 수확된 과일 또는 야채에 적용시키는 단계,
    상기 적용은 과일 또는 야채 성숙 수명을 연장시키는데 효과적이다.
  173. 청구항 172에 있어서, 상기 적용이 식물로 수행되는 방법.
  174. 청구항 172에 있어서, 상기 식물이 적어도 1종의 제초제에 대해 내성인, 방법.
  175. 청구항 172에 있어서, 상기 적용이 상기 식물이 성장하는 지역에서 수행되는, 방법.
  176. 청구항 172에 있어서, 상기 적용이 수확된 과일 또는 야채로 수행되는, 방법.
  177. 청구항 172에 있어서, 상기 식물이 유전적으로 변형된 식물인, 방법.
  178. 청구항 172에 있어서, 상기 식물이 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 당근, 체리, 사이트루스, 옥수수, 오이, 조롱박, 사료용 비트, 마늘, 포도, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 상추, 멜론, 머스타드, 올리브, 양파, 완두콩, 복숭아, 배, 후추, 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 시금치, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 차, 토마토, 라이밀, 및 수박으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  179. 다음을 포함하여 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 청구항 107 중의 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 108 내지 청구항 110 중의 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 111 내지 청구항 125 중의 어느 한 항에 따른 조성물을 식물 또는 식물 씨드 또는 상기 식물이 성장 중이거나 성장하는 것으로 예상되는 지역에 적용하는 단계로서, 상기 적용은 식물 생화학적 신호전달을 조절하는데 효과적인 단계.
  180. 청구항 179에 있어서, 식물 생화학적 신호전달이 산화질소 생산, 과산화물 생산, 또는 2차 대사물의 유도; 에틸렌 신호전달 경로의 작용적 조절 및 에틸렌-반응성 유전자 발현의 유도; 살리실산 신호전달 경로의 작용적 조절 및 살리실산-반응성 유전자 발현의 유도; 압시스 산 경로의 작용적 조절 및 압시스 산-반응성 유전자 발현의 유도; 지베렐린 신호전달 경로의 작용적 조절 및 지베렐린-반응성 유전자 발현의 유도; 자스몬산 신호전달의 길항적 조절 및 자스몬산-반응성 유전자의 발현의 억제; 프로테아제 저해제 발현의 유도; 식물 조직에서 반응성 산소 종 생산의 유도; 면역-관련된 및 항미생물 펩타이드 생산의 유도; 및 엑스판신 유전자 발현 및 생산의 발현으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  181. 청구항 1 내지 청구항 107 중의 어느 한 항에 따른 폴리펩타이드 단리된 펩타이드 또는 청구항 108 내지 청구항 110 중의 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드를 인코딩하는 제1 핵산 분자, 및 제1 핵산 분자에 작동가능하게 커플링된 촉진제-유효한 핵산 분자를 포함하는 DNA 작제물.
  182. 청구항 181에 따른 DNA 작제물을 포함하는 재조합 발현 벡터.
  183. 청구항 181에 따른 DNA 작제물을 포함하는 재조합 숙주세포.
  184. 청구항 183에 있어서, 상기 재조합 숙주세포가 식물 원형질인, 재조합 숙주세포.
  185. 청구항 183에 있어서, 상기 재조합 숙주세포가 박테리움인, 재조합 숙주세포.
  186. 청구항 183에 따른 재조합 숙주세포를 포함하는 형질전환 식물.
  187. 청구항 183에 따른 재조합 숙주 세포를 포함하는 형질전환 식물 씨드.
  188. 청구항 181에 따른 DNA 작제물을 포함하는 형질전환 식물.
  189. 청구항 181에 따른 DNA 작제물을 포함하는 형질전환 식물 종자.
  190. 다음을 포함하여 식물에게 질환 내성을 부여하는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 질환 내성을 부여하는데 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  191. 다음을 포함하여, 식물 성장을 향상시키는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 식물 성장을 향상시키는데 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  192. 다음을 포함하여 식물에게 질환 내성을 부여하는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 질환 내성을 부여하는데 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  193. 다음을 포함하여, 생물학적 스트레스에 대한 식물 내성을 증가시키는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 곤충, 거미류, 선충, 잡초, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 생물학적 스트레스 인자에 대한 식물 내성을 증가시키는데 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  194. 다음을 포함하여, 비생물학적 스트레스에 대한 식물 내성을 증가시키는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 염 스트레스, 가뭄 스트레스, 오존 스트레스, 중금속 스트레스 및 차가운 스트레스, 및 이들의 조합에 대한 식물 내성을 증가시키기에 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  195. 다음을 포함하여, 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 원예 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 형질전환 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는데 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  196. 다음을 포함하여, 과일 또는 야채에 수거후 질환 또는 수거후 건조 내성을 부여하는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 수거후 질환 내성 또는 건조 내성을 부여하기에 효과적인 효건하에서 성장시키는 단계.
  197. 다음을 포함하여, 과일 또는 야채 성숙 수명을 향상시키는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채의 성숙 수명을 향상시키기에 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  198. 다음을 포함하여 식물에게 질환 내성을 부여하는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 씨드를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 씨드를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드을 발현하도록 하여 질환 내성을 부여하는 단계.
  199. 다음을 포함하여, 식물 성장을 향상시키는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 씨드를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 씨드를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드을 발현하도록 하여 식물 성장을 향상시키는 단계.
  200. 다음을 포함하여 식물에게 질환 내성을 부여하는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 씨드를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 씨드를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드을 발현하도록 하여 질환 내성을 부여하는 단계.
  201. 다음을 포함하여, 생물학적 스트레스에 대한 식물 내성을 증가시키는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 씨드를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 씨드를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드을 발현하도록 하여 곤충, 거미류, 선충, 잡초, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 생물학적 스트레스 인자에 대한 식물 내성을 증가시키는 단계.
  202. 다음을 포함하여, 비생물학적 스트레스에 대한 식물 내성을 증가시키는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 씨드를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 씨드를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드을 발현하도록 하여 염 스트레스, 가뭄 스트레스, 오존 스트레스, 중금속 스트레스 및 차가운 스트레스, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 비생물학적 스트레스 인자에 대한 식물 내성을 증가시키는 단계.
  203. 다음을 포함하여, 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 원예 식물 씨드를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 원예 식물 씨드를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 원예 식물 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드을 발현하도록 하여 형질전환 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는 단계.
  204. 다음을 포함하여, 과일 또는 야채에 수거후 질환 또는 수거후 건조 내성을 부여하는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 씨드를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 씨드를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 식물 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드을 발현하도록 하여 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 수거후 질환 내성 또는 건조 내성을 부여하는 단계.
  205. 다음을 포함하여, 과일 또는 야채 성숙 수명을 향상시키는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 씨드를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 씨드를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 식물 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드을 발현하도록 하여 상기 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 대한 성숙 수명을 향상시키는 단계.
  206. 다음을 포함하여 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 방법:
    청구항 181에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 씨드를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 씨드를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 식물 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드을 발현하도록 하여 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 단계.
  207. 청구항 206에 있어서, 상기 식물 생화학적 신호전달이 산화질소 생산, 과산화물 생산, 또는 2차 대사물의 유도; 에틸렌 신호전달 경로의 작용적 조절 및 에틸렌-반응성 유전자 발현의 유도; 살리실산 신호전달 경로의 작용적 조절 및 살리실산-반응성 유전자 발현의 유도; 압시스 산 경로의 작용적 조절 및 압시스 산-반응성 유전자 발현의 유도; 지베렐린 신호전달 경로의 작용적 조절 및 지베렐린-반응성 유전자 발현의 유도; 자스몬산 신호전달의 길항적 조절 및 자스몬산-반응성 유전자의 발현의 억제; 프로테아제 저해제 발현의 유도; 식물 조직내 반응성 산소 종 생산의 유도; 면역-관련된 및 항미생물 펩타이드 생산의 유도; 및 엑스판신 유전자 발현 및 생산의 유도 로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
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