CN107002091A - 过敏反应激发子肽及其用途 - Google Patents

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Abstract

公开了表现出提高的溶解性、稳定性、对化学降解的抗性或这些性质的组合的过敏反应激发肽。还公开了这些肽或融合多肽或编码其的DNA构建体用于调节植物生物化学信号传导，赋予植物抗病性，增强植物生长，赋予对生物胁迫的耐受性，赋予对非生物胁迫的耐受性和抗性，赋予取自观赏植物的插条抗干燥性，赋予水果或蔬菜采后抗病性或采后抗干燥性，或增强水果或蔬菜成熟寿命的用途。

Description

过敏反应激发子肽及其用途
本申请要求2014年10月1日提交的美国临时专利申请序列号62/058,535和2015年3月31日提交的美国临时专利申请序列号62/140,789的优先权权益，每个美国临时专利申请据此通过引用整体并入。
发明领域
本发明涉及新型过敏反应激发子肽及其用于诱导植物主动应答的用途，所述植物主动应答尤其包括生长增强、抗病性、害虫或昆虫抗性和胁迫抗性。
发明背景
对harpin蛋白的鉴定和分离源于在康奈尔大学试图了解植物病原菌与植物如何相互作用的基础研究。第一道防线是过敏反应(HR)，即感染部位的局部植物细胞死亡。细胞死亡对病原体的移动造成物理障碍并且在一些植物中，死细胞可以释放对入侵病原体有毒的化合物。研究表明，病原菌可能具有负责触发HR的单一因子。康奈尔研究的基本目标是鉴定负责激发HR的特定细菌蛋白质。已知靶蛋白由一类称为过敏反应和致病性(hrp)基因簇的细菌基因之一编码。剖析了在梨树和苹果树中引起火疫病的细菌梨火疫病菌(Erwiniaamylovora，Ea)中的hrp簇，并且鉴定出在某些植物中激发HR的单一蛋白质。该蛋白质被命名为harpin(及后来称为harpinEa)并将相应的基因命名为hrpN。这是从所有细菌种类鉴定的此类蛋白质和基因的第一个实例。
已经从欧文氏菌属(Erwinia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、罗尔斯顿菌属(Ralstonia)、黄杆菌属(Xanthomonas)和泛菌属(Pantoea)的种等鉴定了许多不同的harpin蛋白。在一级氨基酸序列水平上不同的harpin蛋白共有常见的生物化学和生物物理学特征以及生物功能。基于其独特的性质，文献中将harpin蛋白视为属于单独的一类蛋白质。
在其鉴定和分离之后，之后发现harpin可以在植物中激发抗病性并增加植物生长。一个重要的早期发现是，施用纯化的harpin蛋白使得植物对后续病原体攻击有抗性，并且在植物上的位置远离注射部位。这意味着harpin蛋白可以触发系统获得性抗性(SAR)，这是一种提供对多种病毒、细菌和真菌病原体的抗性的植物防御机制。
在作物保护中，始终需要改善植物健康的组合物。期望更健康的植物，因为它们产生更好的产量和/或更好的植物或作物品质。更健康的植物也更好地抵御生物和非生物胁迫。对生物胁迫的高抗性又使种植者减少施用的农药量，并从而减缓对各种农药的抗性的发展。
harpinαβ是源自几种不同harpin的融合蛋白。已经证实harpinαβ会阻遏线虫卵产生，增强植物的生长、质量和产量，并增加植物的活力。在美国申请公布第2010/0043095号中详细描述了其氨基酸和核苷酸序列。
迄今为止，harpin和harpinαβ生产及其在农业和园艺应用中的使用一直是涂在淀粉上的粉末状固体。这限制了harpin蛋白的使用和通用性，因为粉末状harpin蛋白在水中的液体悬浮液在发生显著降解和活性丧失之前有效使用寿命只有48-72小时。harpin溶液的另一个问题是蛋白质溶解性和稳定性。
将期望鉴定易溶于水溶液、稳定、抗化学降解且在植物中有效地引发过敏反应的合成和衍生的harpin肽。
本发明旨在克服本领域中的这些和其它限制。
发明概述
本发明的第一个方面涉及一种分离的肽，其具有氨基酸序列(L/I/V/F)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I/V/A)-X-X-(L/I)-(L/I/V/F)(SEQ ID NO:93)
其中所述肽不含半胱氨酸和甲硫氨酸；位置2和6处的每个X是任选的，并且当存在时，为任何氨基酸；并且位置3、7、10和11处的每个X为任何氨基酸。在一个实施方案中，位置2和6中仅一处的X是任选的。在某些实施方案中，SEQ ID NO:93还可包括疏水性双联体(如所示，L/I/V/F/A中的两个)之间的附加氨基酸残基。在某些实施方案中，分离的肽还包括位于SEQ ID NO:93的N末端或C末端的亲水性氨基酸序列。
本发明的第二个方面涉及一种分离的肽，其具有氨基酸序列(L/I/V/F)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I/V/A)-X-X-(L/I)-(L/I/V/F)(SEQ ID NO:93)
其中所述肽不含半胱氨酸和甲硫氨酸；位置2、6和10处的每个X是任选的，并且当存在时，为任何氨基酸；并且位置3、7和11处的每个X为任何氨基酸。在一个实施方案中，位置2、6和10中仅一处的X是任选的。在某些实施方案中，SEQ ID NO:93还可包括疏水性双联体(如所示，L/I/V/F/A中的两个)之间的附加氨基酸残基。在某些实施方案中，分离的肽还包括位于SEQ ID NO:93的N末端或C末端的亲水性氨基酸序列。
本发明的第三个方面涉及一种分离的肽，其具有氨基酸序列XXGISEKXXXXXXXXXXXXXXXX(SEQ ID NO:1，P1/P4共有)，
其中
位置1处的X是任选的并且可为S、N、D、isoD、G、A或S；
位置2处的X是任选的并且可为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置9处的X为L、I、F或V；
位置10处的X是任选的并且可为D或isoD；
位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置12处的X为M、L、I或F；
位置13处的X为M、L或I；
位置14处的X是任选的并且可为任何亲水性氨基酸，优选C、S、T、A、D、isoD、K或Q；
位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、K或I；
位置16处的X为M、L、I、V或F；
位置17处的X为M、L、I、A或V；
位置18处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、M、T或K；
位置19处的X为A、D、isoD、S、V、T、K、R、E、H或G；
位置20处的X为M、L或I；
位置21处的X为M、L、I、V、S或F；
位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S；
位置23处的X为P、Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；并且
其中分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变。在某些实施方案中，相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了分离的肽的水溶解性、稳定性或对化学降解的抗性。
根据本发明第三个方面的肽的一个示例性家族具有氨基酸序列SXGISEKXXDXXXXXXXXAXXXP(SEQ ID NO:2，P4共有)，其中
位置2处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置9处的X为L、A、D、isoD、I、V或F；
位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置12处的X为L、D、isoD、I或F；
位置13处的X为L、I、V或F；
位置14处的X为任何亲水性氨基酸，优选C、S或T、S或T或仅为S；
位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、K或I；
位置16处的X为L、A、I、V、M或F；
位置17处的X为I、S或F；
位置18处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置20处的X为L、I、V或F；
位置21处的X为L或F；并且
位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S。
在某些实施方案中，根据本发明第三个方面的这些肽也满足定义根据本发明第一或第二个方面的肽的结构特征。
根据本发明第三个方面的肽的另一个示例性家族具有氨基酸序列XXGISEKXLDXLLTXLIXALLXX(SEQ ID NO:3，P1共有)，其中
位置1处的X为N、D、isoD、G、A或S；
位置2处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置18处的X为M、T、K、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；并且
位置23处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S。
在某些实施方案中，根据本发明第三个方面的这些肽也满足定义根据本发明第一或第二个方面的肽的结构特征。
本发明的第四个方面涉及一种分离的肽，其具有以下的氨基酸序列：
(i)KPXDSXSXIAKLISXLIXSLLX(SEQ ID NO:47，P15b/P20共有)，其中
位置3处的X为N、D或isoD；
位置6处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为N、D或isoD；
位置15处的X是任选的并且可为任何氨基酸；
位置18处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；并且
位置22处的X是任选的并且可为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；或
(ii)IAKLISXLIXSLLX(SEQ ID NO:12，P15/20min共有)，其中
位置7处的X是任选的并且可为任何氨基酸；
位置10处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；并且
位置14处的X是任选的并且可为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S。
在某些实施方案中，所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，并且相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的水溶解性、稳定性或对化学降解的抗性。在某些实施方案中，根据本发明第四个方面的肽也满足定义根据本发明第一或第二个方面的肽的结构特征。
本发明的第五个方面涉及一种分离的肽，其具有以下的氨基酸序列：
(i)PSPXTXXLXXIVGXILXAXN(SEQ ID NO:66，P6/6a共有)，其中
位置4处的X为F或Y；
位置6处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置7处的X是任选的并且可为L、M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；
位置9处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；
位置10处的X为H或N；
位置14处的X为E、g-谷氨酸、D或isoD；
位置17处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；并且
位置19处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；或
(ii)XTXXLXXIVGXIL(SEQ ID NO:135，P6/6a min共有)，其中
位置1处的X为F或Y；
位置3处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置4处的X是任选的并且根据一个实施方案，可为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；或根据另一个实施方案可为L；
位置6处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；
位置7处的X为H或N；并且
位置11处的X为E、g-谷氨酸、D或isoD；
其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，并且相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的水溶解性、稳定性或对化学降解的抗性。在某些实施方案中，根据本发明第五个方面的肽也满足定义根据本发明第一或第二个方面的肽的结构特征。
本发明的第六个方面涉及一种分离的肽，其具有以下的氨基酸序列：
(i)XXXXXXLXXLLXXLVXLLK(SEQ ID NO:13，P14d共有)，其中
位置1处的X可为：Q、N、D、E、g-谷氨酸、isoD或S；
位置2处的X可为：D、E、g-谷氨酸、isoD；
位置3处的X可为：P、D、E、isoD或g-谷氨酸；
位置4处的X可为M、A、S、D、E、isoD或g-谷氨酸
位置5处的X可为Q、E或g-谷氨酸；
位置6处的X可为A、E或g-谷氨酸；
位置8处的X可为M、L、E、Q、D、N、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置9处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置12处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置13处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；并且
位置16处的X可为K、Q、N、E、D、R、G、A或S；或
(ii)LXXLLXXLVXLLK(SEQ ID NO:14，P14d min共有)，其中
位置2处的X可为M、L、E、Q、D、N、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置3处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置6处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置7处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；并且
位置10处的X可为K、Q、N、E、D、R、G、A或S。
在某些实施方案中，所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，并且相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的水溶解性、稳定性或对化学降解的抗性。在某些实施方案中，根据本发明第六个方面的肽也满足定义根据本发明第一或第二个方面的肽的结构特征。
本发明的第七个方面涉及一种分离的肽，其具有以下的氨基酸序列：
(i)LXXL(L/M)XILXXLV(SEQ ID NO:16，P25共有)，其中
位置2处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置3处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置6处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置9处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G；并且
位置10处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N；或
(ii)LXXVLXXL(L/M)XILXXLV(SEQ ID NO:17，P25共有)，其中
位置2处的X可为T、S、A、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q或N；
位置3处的X可为G、T、S、A、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q或N；
位置6处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置7处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置10处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置13处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G；
位置14处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N；并且
位置16处的V是任选的。
在某些实施方案中，所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，并且相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的水溶解性、稳定性或对化学降解的抗性。在某些实施方案中，根据本发明第七个方面的肽也满足定义根据本发明第一或第二个方面的肽的结构特征。
本发明的第八个方面涉及一种分离的肽，其具有以下的氨基酸序列：
(i)XXXXXXXXXXX(L/M)XXLLXXLLXXLLXXX(SEQ ID NO:21，P17/18)，其中
位置1处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置2处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置3处的X可为任何氨基酸，但优选P、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置4处的X可为任何氨基酸，但优选I、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、N、isoD、K或R；
位置5处的X可为任何氨基酸，但优选D、isoD、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、N、Q、K或R；
位置6处的X可为任何氨基酸，但优选R、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N或K；
位置7处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置8处的X可为任何氨基酸，但优选T、Q、S、E、g-谷氨酸、A、G、D、isoD、N、K或R；
位置9处的X可为任何氨基酸，但优选I、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置10处的X可为任何氨基酸，但优选E、g-谷氨酸、Q、S、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置11处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置13处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置14处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置17处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置18处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置21处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；
位置22处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置25处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置26处的X可为任何氨基酸，但优选P、S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；并且
位置27处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；或
(ii)(L/M)XXLLXXLLXXLL(SEQ ID NO:25，P17/18min共有)，其中
位置2处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置3处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置6处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置7处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置10处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；并且
位置11处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，并且相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的水溶解性、稳定性或对化学降解的抗性。在某些实施方案中，根据本发明第八个方面的肽也满足定义根据本发明第一或第二个方面的肽的结构特征。
本发明的第九个方面涉及一种分离的肽，其具有以下的氨基酸序列：
XLXX(L/M)LXLIXX(L/I/V/F/M)(L/I/V/F/M)(SEQ ID NO:26，P19共有)，其中
位置1处的X是任选的并且可为L、I、V、F或M；
位置3处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；
位置4处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置7处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；
位置10处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；并且
位置11处的X可为任何氨基酸，但优选R、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或K。
在某些实施方案中，所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，并且相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的水溶解性、稳定性或对化学降解的抗性。在某些实施方案中，根据本发明第九个方面的肽也满足定义根据本发明第一或第二个方面的肽的结构特征。
本发明的第十个方面涉及一种分离的肽，其包括以下的氨基酸序列：
(L/M)XXLLX(L/M)FXXI(L/M)XX(SEQ ID NO:15，P3min共有)其中
位置2处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置3处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置6处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置9处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G；
位置10处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N；
位置13处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；并且
位置14处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G。
在某些实施方案中，所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，并且相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的水溶解性、稳定性或对化学降解的抗性。在某些实施方案中，根据本发明第十个方面的肽也满足定义根据本发明第一或第二个方面的肽的结构特征。
本发明的第十一个方面涉及一种融合蛋白，其包括本发明第一至第十一个方面的肽中的一种，连同纯化标签、溶解性标签或根据本发明第一至第十个方面中的一个的第二肽中的一种或多种。
本发明的第十二个方面涉及一种组合物，其包括根据本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十个方面的一种或多种肽，或根据本发明第十一个方面的融合蛋白，及载体。
本发明的第十三个方面涉及一种赋予植物抗病性的方法。这种方法包括：向植物或植物种子或该植物生长或预期生长的场所施用有效量的根据本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十个方面的分离的肽，根据本发明第十一个方面的融合蛋白，或根据本发明第十二个方面的组合物，其中所述施用有效赋予抗病性。
本发明的第十四个方面涉及一种增强植物生长的方法。这种方法包括：向植物或植物种子或该植物生长或预期生长的场所施用有效量的根据本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十个方面的分离的肽，根据本发明第十一个方面的融合蛋白，或根据本发明第十二个方面的组合物，其中所述施用有效增强植物生长。
本发明的第十五个方面涉及一种增加植物对生物胁迫因素的耐受性和抗性的方法。这种方法包括：向植物或植物种子或该植物生长或预期生长的场所施用有效量的根据本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十个方面的分离的肽，根据本发明第十一个方面的融合蛋白，或根据本发明第十二个方面的组合物，其中所述施用有效增加植物对选自昆虫、蜘蛛类、线虫类、杂草及其组合的生物胁迫因素的耐受性和抗性。
本发明的第十六个方面涉及一种增加植物对非生物胁迫的耐受性的方法。这种方法包括：向植物或植物种子或该植物生长或预期生长的场所施用有效量的根据本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十个方面的分离的肽，根据本发明第十一个方面的融合蛋白，或根据本发明第十二个方面的组合物，其中所述施用有效增加植物对选自盐胁迫、水分胁迫(包括干旱和洪水)、臭氧胁迫、重金属胁迫、低温胁迫、高温胁迫、营养胁迫(磷酸盐、钾、氮缺乏)、漂白和光诱导的胁迫及其组合的非生物胁迫因素的耐受性。
本发明的第十七个方面涉及一种赋予取自观赏植物的插条抗干燥性的方法。这种方法包括：向植物或该植物生长的场所施用根据本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十个方面的分离的肽，根据本发明第十一个方面的融合蛋白，或根据本发明第十二个方面的组合物，其中所述施用有效赋予取自观赏植物的插条抗干燥性。
本发明的第十八个方面涉及一种赋予水果或蔬菜采后抗病性或采后抗干燥性的方法。这种方法包括：向含有水果或蔬菜的植物或该植物生长的场所施用有效量的根据本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十个方面的分离的肽，根据本发明第十一个方面的融合蛋白，或根据本发明第十二个方面的组合物；或向采收的水果或蔬菜施用有效量的分离的肽或组合物，其中所述施用有效赋予水果或蔬菜采后抗病性或抗干燥性。
本发明的第十九个方面涉及一种增强水果或蔬菜成熟寿命的方法。这种方法包括：向含有水果或蔬菜的植物或该植物生长的场所施用有效量的根据本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十个方面的分离的肽，根据本发明第十一个方面的融合蛋白，或根据本发明第十二个方面的组合物；或向采收的水果或蔬菜施用有效量的分离的肽或组合物，其中所述施用有效增强水果或蔬菜成熟寿命。
本发明的第二十个方面涉及一种调节植物的一个或多个生物信号传导过程的方法。这种方法包括：向植物或该植物生长的场所施用有效量的根据本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十个方面的分离的肽，根据本发明第十一个方面的融合蛋白，或根据本发明第十二个方面的组合物，其中所述施用有效调节一个或多个生物化学信号传导过程。
本发明的第二十一个方面涉及一种DNA构建体，其包括编码根据本发明第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十个方面的多肽或根据本发明第十一个方面的融合蛋白的第一核酸分子；及与第一核酸分子可操作地偶合的启动子有效性核酸分子。本发明的这个方面还涵盖含有DNA构建体的重组表达载体、含DNA构建体的重组宿主细胞，以及包括本发明的重组植物细胞(其含有DNA构建体)的转基因植物或植物种子。
本发明的第二十二个方面涉及一种赋予植物抗病性，增强植物生长，赋予对生物胁迫因素的耐受性和抗性，赋予对非生物胁迫的耐受性，或调节植物生物化学信号传导的方法。这种方法包括提供用根据本发明第二十一个方面的DNA构建体转化的转基因植物；并且使该植物在有效地容许DNA构建体表达所述肽或融合多肽的条件下生长以对转基因植物赋予抗病性，增强植物生长，赋予对生物胁迫的耐受性，赋予对非生物胁迫的耐受性，或调节生物化学信号传导。
本发明的第二十三个方面涉及一种赋予取自观赏植物的插条抗干燥性，赋予水果或蔬菜采后抗病性或采后抗干燥性，或增强水果或蔬菜成熟寿命的方法。该方法包括提供用DNA构建体转化的转基因植物，所述DNA构建体包括编码根据本发明的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十个方面的多肽或根据本发明第十一个方面的融合蛋白的第一核酸分子；并且使该植物在有效地容许DNA构建体表达所述肽或融合多肽的条件下生长以赋予取自转基因观赏植物的插条抗干燥性，赋予取自转基因植物的水果或蔬菜采后抗病性或抗干燥性，或增强取自转基因植物的水果或蔬菜的成熟寿命。
本发明的第二十四个方面涉及一种赋予植物抗病性，增强植物生长，赋予对生物胁迫因素的耐受性和抗性，赋予对非生物胁迫的耐受性，或调节生物化学信号传导的方法。这种方法包括提供用根据本发明第二十一个方面的DNA构建体转化的转基因植物种子；在土壤中种植所述转基因植物种子；并且由所述转基因植物种子繁殖转基因植物以容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽以赋予抗病性，增强植物生长，赋予对生物胁迫的耐受性，或赋予对非生物胁迫的耐受性。
本发明的第二十五个方面涉及一种赋予取自观赏植物的插条抗干燥性，赋予水果或蔬菜采后抗病性或采后抗干燥性，或增强水果或蔬菜成熟寿命的方法。该方法包括提供用根据本发明第二十一个方面的DNA构建体转化的转基因植物种子；在土壤中种植所述转基因植物种子；并且由所述转基因植物种子繁殖转基因植物以容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽以赋予取自转基因观赏植物的插条抗干燥性，赋予取自转基因植物的水果或蔬菜采后抗病性或抗干燥性，或增强取自转基因植物的水果或蔬菜的成熟寿命。
通过提供表现出提高的溶解性、稳定性、对化学降解的抗性或这些性质的组合的HR激发肽，将为种植者在制备、处理和向其田间或温室的植物输送有效量的含有这些HR激发肽的组合物方面提供更高的灵活性。为种植者简化施用过程将产生更高的依从性，并且因此关于抗病性、生长增强、对生物胁迫因素的耐受性和抗性、对非生物胁迫的耐受性、取自观赏植物的插条的抗干燥性、从植物采收的水果或蔬菜的采后抗病性或抗干燥性中的一种或多种的结果改善，和/或从植物采收的水果或蔬菜的水果或蔬菜成熟寿命提高。这些和其它益处在本文中有描述。
附图简述
图1显示溶于去离子水中的肽P1和P1突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P1(SEQ ID NO:4)；P1-18A(SEQ ID NO:44)；P1-18K(SEQ ID NO:45)；和P1-18T(SEQ IDNO:42)。1*的曲线标准化为第1天时间点时P1的100％；1**是原始P1数据。
图2显示溶于50mM柠檬酸盐(pH 5.6)中的肽P1和P1突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P1、P1-18A、P1-18K和P1-18T。1*的曲线标准化为第1天时间点时P1的100％；1**是原始P1数据。
图3显示溶于50mM MES(pH 6)中的肽P1和P1突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P1、P1-18A、P1-18K和P1-18T。1*的曲线标准化为第1天时间点时P1的100％；1**是原始P1数据。
图4显示溶于50mM MOPS(pH 6.5)中的肽P1和P1突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P1、P1-18A、P1-18K和P1-18T。
图5显示溶于50mM柠檬酸盐(pH 7.2)中的肽P1和P1突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P1、P1-18A、P1-18K和P1-18T。
图6显示溶于50mM EDDS(pH 7.3)中的肽P1和P1突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P1、P1-18A、P1-18K和P1-18T。
图7显示溶于50mM咪唑(pH 7.5)中的肽P1和P1突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P1、P1-18A、P1-18K和P1-18T。
图8显示溶于50mM EDTA(pH 8)中的肽P1和P1突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P1、P1-18A、P1-18K和P1-18T。
图9显示溶于磷酸盐(pH 8.0)中的肽P1和P1突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P1、P1-18A、P1-18K和P1-18T。
图10显示溶于50mM TES(pH 8.0)中的肽P1和P1突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P1、P1-18A、P1-18K和P1-18T。
图11显示溶于去离子水中的肽P4和P4突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P1、P1-18A、P1-18K和P1-18T。
图12显示溶于50mM柠檬酸盐(pH 5.6)中的肽P4和P4突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P4(SEQ ID NO:5)；P4-14A(SEQ ID NO:136)；P4-14D(SEQ ID NO:137)；P4-14K(SEQ ID NO:138)；P4-14Q(SEQ ID NO:139)；和P4-14S(SEQ ID NO:6)。
图13显示溶于50mM MES(pH 6)中的肽P4和P4突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P4、P4-14A、P4-14D、P4-14K、P4-14Q和P4-14S。
图14显示溶于50mM MOPS(pH 6.5)中的肽P4和P4突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P4、P4-14A、P4-14D、P4-14K、P4-14Q和P4-14S。
图15显示溶于50mM柠檬酸盐(pH 7.2)中的肽P4和P4突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P4、P4-14A、P4-14D、P4-14K、P4-14Q和P4-14S。
图16显示溶于50mM EDDS(pH 7.3)中的肽P4和P4突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P4、P4-14A、P4-14D、P4-14K、P4-14Q和P4-14S。
图17显示溶于50mM咪唑(pH 7.5)中的肽P4和P4突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P4、P4-14A、P4-14D、P4-14K、P4-14Q和P4-14S。
图18显示溶于50mM EDTA(pH 8)中的肽P4和P4突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P4、P4-14A、P4-14D、P4-14K、P4-14Q和P4-14S。
图19显示溶于磷酸盐(pH 8)中的肽P4和P4突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P4、P4-14A、P4-14D、P4-14K、P4-14Q和P4-14S。
图20显示溶于50mM TES(pH 8)中的肽P4和P4突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P4、P4-14A、P4-14D、P4-14K、P4-14Q和P4-14S。
图21显示溶于30％异丙醇、5mM DTPA、0.5％硫代硫酸钠和50mM TES(pH 8)中的肽P4和P4突变体的稳定性比较。示出了下列肽：P4、P4-14A、P4-14D、P4-14K、P4-14Q和P4-14S
图22显示溶于50mM TES(pH 8)中的各种肽的稳定性比较。示出了下列肽：P1(SEQID NO:4)；P4-14S(SEQ ID NO:6)；P1-1S(SEQ ID NO:109)；P1-14S(SEQ ID NO:110)；P1-18Q(SEQ ID NO:115)；和P1-23P(SEQ ID NO:118)。
图23显示溶于MES(pH 6)、MOPS(pH 6.5)、EDDS(pH 7.3)、咪唑(pH 7.5)或EDTA(pH8)中的肽P18(SEQ ID NO:83)的溶解性和稳定性测试。
图24显示溶于50mM EDTA(pH 8)中的肽P18和P18突变体的溶解性和稳定性测试。示出了下列肽：P18(SEQ ID NO:83)、P18-1(SEQ ID NO:163)和P18-4(SEQ ID NO:164)。
图25显示溶于50mM柠檬酸盐(pH 7.2)中的肽P19(SEQ ID NO:89)和P19-20L(SEQID NO:90)突变体的稳定性测试。
图26显示溶于50mM TES(pH 8.0)中的肽P19(SEQ ID NO:89)和P19-20L(SEQ IDNO:90)突变体的稳定性测试。
发明详述
本发明的一个方面涉及新型肽，其具有在植物中诱导过敏反应并促进提供以下一种或多种属性的植物主动应答的能力：抗病性、生长增强、对生物胁迫因素的耐受性和抗性、对非生物胁迫的耐受性、取自观赏植物的插条的抗干燥性、从植物采收的水果或蔬菜的采后抗病性或抗干燥性、和/或从植物采收的水果或蔬菜提高的水果或蔬菜成熟寿命。
如本文中所用，天然存在的氨基酸通篇根据以下列表用对应于氨基酸的俗名的常规三字母和/或单字母缩写来标识：丙氨酸(Ala，A)、精氨酸(Arg，R)、天冬酰胺(Asn，N)、天冬氨酸(Asp，D)、半胱氨酸(Cys，C)、谷氨酸(Glu，E)、谷氨酰胺(Gln，Q)、甘氨酸(Gly，G)、组氨酸(His，H)、异亮氨酸(Ile，I)、亮氨酸(Leu，L)、赖氨酸(Lys，K)、甲硫氨酸(Met，M)、苯丙氨酸(Phe，F)、脯氨酸(Pro，P)、丝氨酸(Ser，S)、苏氨酸(Thr，T)、色氨酸(Trp，W)、酪氨酸(Tyr，Y)和缬氨酸(Val，V)。缩写是肽领域中公认的并且由IUPAC-IUB生化命名委员会推荐。氨基酸的天然存在的变型包括但不限于γ-谷氨酸(g-Glu)和异天冬氨酸(iso-Asp或isoD)。
术语“氨基酸”还包括本文提到的任何具体氨基酸的类似物、衍生物和同源物，以及C末端或N末端受保护的氨基酸衍生物(例如，经N末端、C末端或侧链保护基团修饰，包括但不限于乙酰化、甲酰化、甲基化、酰胺化、酯化、PEG化和脂质增加。非天然存在的氨基酸是公知的并且可以使用如下所述的固相合成引入到本发明的肽中。此外，术语“氨基酸”包括D-和L-氨基酸。因此，本文用其名称、三字母或单字母符号标识而未特别标识为具有D或L构型的氨基酸，应被理解为假定D或L构型中的任一种。在一个实施方案中，肽包含所有L-氨基酸。
在某些实施方案中，经鉴定肽“由”所列举的序列组成，在这种情况下该肽仅包括所列举的氨基酸序列，在其N末端或C末端无任何额外的氨基酸。就所列举的序列呈共有序列的形式来说，其中一个或多个所指示的X或Xaa残基可以是一种或多种氨基酸中的任一种，则由此类所列举的序列组成的肽包括多个肽序列。
在某些其它实施方案中，经鉴定肽“基本上由”所列举的序列组成，在这种情况下该肽包括所列举的一个或多个氨基酸序列，任选地在其N末端和/或C末端有一个或多个额外的氨基酸，所述额外的氨基酸不实质性改变一种或多种以下性质：(i)肽在植物中诱导过敏反应的能力，(ii)肽在水或水溶液中的溶解性，(iii)溶于50℃的水或水溶液中的肽在一段时间(例如，3周)内的稳定性，及(iv)50℃下在包括杀生剂(例如，GXL)的水性缓冲溶液的存在下在一段时间(例如，3周)内肽对化学降解的抗性。
简言之，可以如下使用初始纯度为至少约80％、至少约82％、至少约84％、至少约86％、至少约88％、至少约90％、至少约92％、至少约94％、至少约96％或至少约98％的肽样品，评估肽的稳定性和对化学降解的抗性。对于水稳定性，将肽直接溶于去离子水中。对于化学降解测试，将肽溶于含50mM pH缓冲液和0.25％Proxel GXL的水溶液中。示例性pH缓冲液包括但不限于(i)柠檬酸盐pH 5.6；(ii)MES pH 6.2；(iii)MOPS pH 6.5；(iv)咪唑pH7.0；(v)柠檬酸盐pH 7.2；(vi)EDDS，pH 7.3；(vii)EDTA pH 8.0；(viii)磷酸钠pH 8.0；或(ix)TES pH 8.0。首先将肽溶于浓度为0.5mg/ml的水溶液中。在50℃下温育样品以允许加速降解。取出肽的初始样品，用水稀释10x，并通过反相HPLC分析。简言之，将20μl样品注入HPLC仪器的溶剂流中并在C18HPLC柱(YMC ProPack C18,YMC,Japan或C18Stablebond,Agilent Technologies,USA)上使用于水/乙腈中的三乙胺磷酸盐梯度或于水中的0.1％TFA/于乙腈中的0.1％TFA梯度进行分析以分离不同的肽种类。通过218nm下的紫外吸光度监测洗脱肽并基于峰下面积定量。将初始肽样品的峰下面积处理成用于后续运行中的相对定量的标准。每隔一定时间(例如，1、3、7、10、14、17和21天)，测量每份肽样品并如上所述通过HPLC分析。如有必要观察降解(即，肽表现出高度化学稳定性时)，该方案可延长几周以观察降解。后续肽运行的定量表示为原始(第0天)HPLC结果的百分比。
至少部分溶于水或水溶液的肽表现出高于0.1mg/ml，优选至少约1.0mg/ml、至少约2.0mg/ml、至少约3.0mg/ml或至少约4.0mg/ml的溶解性。在某些实施方案中，肽在水中或水溶液中表现出高溶解性，溶解性为至少约5.0mg/ml、至少约10.0mg/ml、至少约15.0mg/ml或至少约20mg/ml。
在水或水溶液中稳定的肽在50℃下温育指定时间段，表现出原始肽浓度的至少约66％、至少约68％、至少约70％、至少约72％、至少约74％、至少约76％、至少约78％、至少约80％、至少约82％、至少约84％、至少约86％、至少约88％或至少约90％。在某些实施方案中，指定时间段为3天、7天、14天、21天、28天、一个月、两个月或三个月。
抗化学降解的肽在50℃下温育指定时间段，表现出原始肽浓度的至少约66％、至少约68％、至少约70％、至少约72％、至少约74％、至少约76％、至少约78％、至少约80％、至少约82％、至少约84％、至少约86％、至少约88％或至少约90％。在某些实施方案中，指定时间段为3天、7天、14天、21天、28天、一个月、两个月或三个月。
肽浸润或施用到植物组织后，肽引发或不引发过敏反应的性质，可以通过向植物，特别是但也不完全是植物叶片施用呈干粉形式或呈溶液形式的肽来测量。施用量包括1-500ug/ml(对于液体溶液而言)和0.0001-0.5％(w/w，对于粉末施用而言)。呈溶液形式的肽的示例性施用在所附实施例中有描述。植物如果表现出广泛的肉眼可见的大范围细胞死亡，48小时内伴有受影响组织的萎蔫和褐变，则将其视为HR阳性(“HR+”)。植物如果未表现出明显萎蔫或肉眼可观察到的组织死亡，则将其视为HR阴性(“HR-”)。
在某些实施方案中，所述一种或多种性质的实质性改变旨在意指在将具有所述一个或多个额外氨基酸的肽与另外没有所述一个或多个额外氨基酸的相同肽比较时，在所列举的性质上存在小于20％的变化、小于15％的变化、小于10％的变化或小于5％的变化。在某些实施方案中，N末端或C末端额外氨基酸的数量在一端或两端多达20个氨基酸，在一端或两端多达15个氨基酸，在一端或两端多达10个氨基酸，在一端或两端多达7个氨基酸，在一端或两端多达5个氨基酸，或在一端或两端多达3个氨基酸。进一步地，就所列举的序列呈共有序列的形式来说，其中一个或多个所指示的X或Xaa残基可以是一种或多种氨基酸中的任一种，则基本上由此类所列举的序列组成的肽包括多个肽序列，不考虑因其N末端和/或C末端处额外氨基酸的存在而给予的此类序列另外的变化。
在本发明的各个实施方案中，公开的肽可包括亲水性氨基酸序列，例如在指定肽序列的N末端或C末端。亲水性氨基酸序列长度为至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个氨基酸，并且包括有助于与指定肽(即，诱导植物主动应答的肽)的氨基酸序列相邻的氨基酸序列的亲水性的氨基酸残基。在本领域中已经使用不同方法计算氨基酸残基和蛋白质的相对疏水性/亲水性(Kyte等，“A Simple Method forDisplaying the Hydropathic Character of a Protein,”J.Mol.Biol.157:105-32(1982)；Eisenberg D,“Three-dimensional Structure of Membrane and SurfaceProteins,”Ann.Rev.Biochem.53:595-623(1984)；Rose等，“Hydrogen Bonding,Hydrophobicity,Packing,and Protein Folding,”Annu.Rev.Biomol.Struct.22:381-415(1993)；Kauzmann,“Some Factors in the Interpretation of Protein Denaturation,”Adv.Protein Chem.14:1-63(1959)，其据此通过引用整体并入)。这些疏水性量表中的任一种均可用于本发明的目的；然而Kyte-Doolittle疏水性量表可能是最常参考的量表。这些亲水量表为氨基酸残基的相对疏水性提供了等级列表。例如，有助于亲水性的氨基酸包括Arg(R)、Lys(K)、Asp(D)、Glu(E)、Gln(Q)、Asn(N)和His(H)以及(尽管是在较小程度上)Ser(S)、Thr(T)、Gly(G)、Pro(P)、Tyr(Y)和Trp(W)。例如，聚谷氨酸序列可用于增强蛋白质和其它药物分子的溶解性(Lilie等，Biological Chemistry 394(8):995-1004(2013)；Li等，Cancer Research 58:2404-2409(1998))，其每一个据此通过引用整体并入)。
蛋白质或氨基酸序列的“亲水指数”是表示其平均亲水性或疏水性的数值。负的亲水指数定义目标氨基酸序列的亲水性。亲水指数与目标氨基酸序列的亲水性成正比；因此，指数越为负，其亲水性越高。在某些实施方案中，上述添加的亲水性氨基酸序列的亲水指数小于0、-0.4、-0.9、-1.3、-1.6、-3.5、-3.9或-4.5。在某些实施方案中，所得整个肽的亲水指数将小于0.3、0.2、0.1或0.0，优选小于-0.1、-0.2、-0.3、-0.4，更优选小于-0.5、-0.6、-0.7、-0.8、-0.9或-1.0。
在本发明的肽中，对于作为一个整体的肽或添加的亲水性氨基酸序列，有助于亲水性亲水指数的氨基酸包括Arg(R)、Lys(K)、Asp(D)、Glu(E)、Gln(Q)、Asn(N)、His(H)、Ser(S)、Thr(T)、Gly(G)、Pro(P)、Tyr(Y)和Trp(W)。其中，优选Asp(D)、Glu(E)、Gln(Q)、Asn(N)或其变体。示例性变体包括g-谷氨酸(对于Glu而言)和异天冬氨酸(或isoD)(对于Asp而言)。
如本文中所用，在本发明的这个和其它方面，术语“疏水性氨基酸”旨在指对指定氨基酸序列的亲水指数促成疏水性的氨基酸。对于作为一个整体的肽或其特定氨基酸序列，有助于疏水性亲水指数的氨基酸包括Ile(I)、Val(V)、Leu(L)、Phe(F)、Cys(C)、Met(M)和Ala(A)。在某些实施方案中，术语“疏水性氨基酸”可以指Ile(I)、Val(V)、Leu(L)、Phe(F)、Cys(C)、Met(M)和Ala(A)中的任一种；或可选地，指Ile(I)、Val(V)、Leu(L)、Phe(F)和Ala(A)中的任一种。在某些其它实施方案中，术语“疏水性氨基酸”可以指Ile(I)、Val(V)、Leu(L)和Phe(F)的任一种。
如本文中所用，“非疏水性氨基酸”旨在意指在以上鉴定的一个疏水性量表上为亲水性(或不为疏水性)的氨基酸。该术语通常是指对于作为一个整体的肽或添加的亲水性氨基酸序列，有助于亲水性亲水指数的那些氨基酸。
在本发明的一个方面，所述肽包括以下氨基酸序列：(L/I/V/F)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I/V/A)-X-X-(L/I)-(L/I/V/F)(SEQ ID NO:93)
其中所述肽不含半胱氨酸和甲硫氨酸；位置2和6处的每个X是任选的，并且当存在时，为任何氨基酸，包括任何天然存在的氨基酸；并且位置3、7、10和11处的每个X为任何氨基酸，包括任何天然存在的氨基酸。
在本发明的相关方面，所述肽包括SEQ ID NO:93的氨基酸序列(如上所示)，其中所述肽不含半胱氨酸和甲硫氨酸；位置2、6和10处的每个X是任选的，并且当存在时，为任何氨基酸，包括任何天然存在的氨基酸；并且位置3、7和11处的每个X为任何氨基酸，包括任何天然存在的氨基酸。
根据一个实施方案，位置2、6和10处的一个或多个X不存在(即，第一疏水性氨基酸和第一疏水性氨基酸双联体之间的空位从两个减少到一个氨基酸残基和/或第一和第二疏水性氨基酸双联体之间的空位从两个减少到一个氨基酸残基和/或第二和第三疏水性氨基酸双联体之间的空位从两个减少到一个氨基酸残基)。在这个实施方案中，预期这些肽不包括位置2、6和10中仅一处的氨基酸。
在一个替代实施方案中，位置2和6两处的X均存在(即，疏水性氨基酸之间的空位在两个位置保持在两个氨基酸残基处)。
在另一个实施方案中，位置2、6和10中每一处的X均存在(即，疏水性氨基酸之间的空位在每个位置保持在两个氨基酸残基处)。
在某些实施方案中，SEQ ID NO:93还可包括疏水性双联体(如所示，L/I/V/F/A中的两个)之间的附加氨基酸残基并且附加氨基酸可为任何氨基酸。在这些实施方案中，第一疏水性双联体之前的空位是三个氨基酸，第一和第二疏水性双联体之间的空位是三个氨基酸，第二和第三疏水性双联体之间的空位是三个氨基酸，或其组合。
在这个实施方案中的肽长度小于100个氨基酸，或可选地小于90个氨基酸、小于80个氨基酸、小于70个氨基酸、小于60个氨基酸或小于约50个氨基酸。在某些实施方案中，肽长度介于13和约50个氨基酸之间。
在上述实施方案中，其中SEQ ID NO:93的位置2、3、6、7、10和11每一处的X(存在时)可为任何氨基酸，在某些实施方案中这些残基实际上为亲水性。如上所述，这些亲水性氨基酸包括Arg(R)、Lys(K)、Asp(D)、Glu(E)、Gln(Q)、Asn(N)、His(H)、Ser(S)、Thr(T)、Gly(G)、Pro(P)、Tyr(Y)和Trp(W)。其中，优选Asp(D)、Glu(E)、Gln(Q)、Asn(N)或其变体。示例性变体包括g-谷氨酸(对于Glu而言)和异天冬氨酸(或isoD)(对于Asp而言)。
在这个实施方案中，分离的肽溶于水中时稳定；如上所述，在pH缓冲液和杀生物剂的存在下在水性条件下抗化学降解；和/或在水溶液中的溶解性为至少约1.0mg/ml。
本发明的另一方面涉及一种分离的肽，其具有以下的氨基酸序列：
XXGISEKXXXXXXXXXXXXXXXX(SEQ ID NO:1，P1/P4共有)，其中
位置1处的X是任选的并且可为S、N、D、isoD、G、A或S；
位置2处的X是任选的并且可为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置9处的X为L、I、F或V；
位置10处的X是任选的并且可为D或isoD；
位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置12处的X为M、L、I或F；
位置13处的X为M、L或I；
位置14处的X是任选的并且可为任何亲水性氨基酸，优选C、S、T、A、D、isoD、K或Q；
位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、K或I；
位置16处的X为M、L、I、V或F；
位置17处的X为M、L、I、A或V；
位置18处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、M、T或K；
位置19处的X为A、D、isoD、S、V、T、K、R、E、g-谷氨酸、H或G；
位置20处的X为M、L或I；
位置21处的X为M、L、I、V、S或F；
位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S；
位置23处的X为P、Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；并且
其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变。在某些实施方案中，相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的水溶解性、稳定性或对化学降解的抗性。
在某些实施方案中，根据本发明第二个方面的这些肽也满足定义SEQ ID NO:93的肽的结构特征，在这种情况下不存在甲硫氨酸和半胱氨酸残基。
在这个实施方案中，为了比较本发明肽的性质，相应的野生型氨基酸序列是包含以下氨基酸序列的多肽或由以下氨基酸序列组成的肽：NQGISEKQLDQLLTQLIMALLQQ(P1，SEQID NO:4)或SQGISEKQLDQLLCQLIQALL(SEQ ID NO:5的氨基酸1-21，P4)。P1(SEQ ID NO:4)源自黄杆菌属harpin HpaG的全长蛋白(Kim等，“Mutational Analysis of XanthomonasHarpin HpaG Identifies a Key Functional Region That Elicits theHypersensitive Response in Nonhost Plants,”J.Bacteriol.186(18):6239-6247(2004)，其据此通过引用整体并入)。P4(SEQ ID NO:5)源自水稻白叶枯病菌(Xanthomonasoryzae pv.oryzae)的全长harpin(Ji等，“Two Coiled-Coil Regions of Xanthomonasoryzae pv.Oryzae Harpin Differ in Oligomerization and Hypersensitive ResponseInduction,”Amino Acids 40:381-392(2011)，其据此通过引用整体并入)。
在这个实施方案中，分离的肽溶于水中时稳定；如上所述，在pH缓冲液和杀生物剂的存在下在水性条件下抗化学降解；和/或在水溶液中的溶解性为至少约1.0mg/ml。
根据这第二个方面的肽长度优选小于约100个氨基酸，或可选地小于90个氨基酸、小于80个氨基酸、小于70个氨基酸、小于60个氨基酸或小于约50个氨基酸。在某些实施方案中，肽长度的长度介于23和约50个氨基酸之间。
根据本发明第二个方面的肽的一个示例性家族具有以下的氨基酸序列：
SXGISEKXXDXXXXXXXXAXXXP(SEQ ID NO:2，P4共有)，其中
位置2处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置9处的X为L、A、D、isoD、I、V或F；
位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置12处的X为L、D、isoD、I或F；
位置13处的X为L、I、V或F；
位置14处的X为任何亲水性氨基酸，优选C、S或T、S或T或仅为S；
位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、K或I
位置16处的X为L、A、I、V、M或F
位置17处的X为I、S或F
位置18处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置20处的X为L、I、V或F；
位置21处的X为L或F；并且
位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S。
在某些实施方案中，根据SEQ ID NO:2的这些肽也满足定义SEQ ID NO:93的肽的结构特征，在这种情况下不存在甲硫氨酸和半胱氨酸残基。因此，在这些实施方案中，位置14处的X为S或T，优选S。
下面表1中鉴定了与SEQ ID NO:2共享共有结构或源自SEQ ID NO:2并满足SEQ IDNO:93的共有结构的示例性肽：
表1：肽P4(SEQ ID NO:5)的肽变体
表1续
选择表1的肽包括斜体印刷指示的溶解性标签，包括SEEEEE、SEE、EEEEE、EE、RRRRRGG、KKKKKGG、GGKKKKK和GGRRRRR。本文还预期包含表1所示的序列，但缺乏这些特定溶解性标签(或具有不同的溶解性标签)的肽。
正如上面所提到的，肽P4(SEQ ID NO:5)源自水稻白叶枯病菌的harpin(Ji等，“Two Coiled-Coil Regions of Xanthomonas oryzae pv.oryzae Harpin Differ inOligomerization and Hypersensitive Response Induction,”Amino Acids 40:381-392(2011)，其据此通过引用整体并入)。Ji等公开了这种harpin具有氨基酸序列SQGISEKQLDQLLCQLIQALL(即，SEQ ID NO:5的氨基酸1-21)的片段。在某些实施方案中，包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的分离的肽是总长度小于约100个氨基酸(即，长度为23个氨基酸至约100个氨基酸)的肽。在某些其它实施方案中，分离的肽基本上由SEQ ID NO:5组成，其中在另一个实施方案中分离的肽由SEQ ID NO:5组成。
根据本发明第二个方面的肽的另一个示例性家族具有以下的氨基酸序列：
XXGISEKXLDXLLTXLIXALLXX(SEQ ID NO:3，P1共有)，其中
位置1处的X为N、D、isoD、G、A或S；
位置2处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置18处的X为M、T、K、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；并且
位置23处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S。
在某些实施方案中，根据SEQ ID NO:3的这些肽也满足定义SEQ ID NO:93的肽的结构特征，在这种情况下不存在甲硫氨酸和半胱氨酸残基。因此，在那些实施方案中，位置18处的X为T、K、E、g-谷氨酸、G、A或S。
在某些实施方案中，共享SEQ ID NO:3的结构的肽在SEQ ID NO:3的位置2、8、11、15、22和23处具有至少一个不同于Gln(Q)的残基，即为E、g-谷氨酸、G、A或S。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:3的位置2、8、11、15、22和23处的两个或更多个残基不同于Gln(Q)，包括这些残基中的三个、四个、五个或所有六个不同于Gln(Q)。
下面表2中鉴定了与SEQ ID NO:3共享共有结构或源自SEQ ID NO:3并满足SEQ IDNO:93的共有结构的示例性肽：
表2：肽P1(SEQ ID NO:4)的肽变体
选择表2的肽包括斜体印刷指示的溶解性标签，包括SEEEEE。本文还预期包含表2所示的序列，但缺乏这个特定溶解性标签(或具有不同的溶解性标签)的肽。
正如上面所提到的，SEQ ID NO:4的肽源自水稻白叶枯病菌的harpin(Ji等，“TwoCoiled-Coil Regions of Xanthomonas oryzae pv.oryzae Harpin Differ inOligomerization and Hypersensitive Response Induction,”Amino Acids 40:381-392(2011)，其据此通过引用整体并入)。
本发明的再一个方面涉及一种分离的肽，其具有以下的氨基酸序列：
(i)KPXDSXSXIAKLISXLIXSLLX(SEQ ID NO:47，P15b/P20共有)，其中
位置3处的X为N、D或isoD；
位置6处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为N、D或isoD；
位置15处的X是任选的并且可为任何氨基酸；
位置18处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；并且
位置22处的X是任选的并且可为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；或
(ii)IAKLISXLIXSLLX(SEQ ID NO:12，P15/20min共有)，其中
位置7处的X是任选的并且可为任何氨基酸；
位置10处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；并且
位置14处的X是任选的并且可为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S。
在某些实施方案中，根据SEQ ID NO:47或12的这些肽也满足定义SEQ ID NO:93的肽的结构特征，在这种情况下不存在甲硫氨酸和半胱氨酸残基。因此，在那些实施方案中，SEQ ID NO:47的位置15处的X不同于M，并且SEQ ID NO:47的位置18处的X为E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K。类似地，SEQ ID NO:12的位置7处的X不同于M，并且SEQ ID NO:47的位置10处的X为E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K。
根据这第三个方面的肽的长度优选小于约100个氨基酸，或可选地小于90个氨基酸、小于80个氨基酸、小于70个氨基酸、小于60个氨基酸或小于约50个氨基酸。某些实施方案中，肽的长度介于20和44个氨基酸之间。
在某些实施方案中，共享SEQ ID NO:47的结构的肽在SEQ ID NO:47的位置6和22处具有至少一个不同于Gln(Q)的残基，即为E、g-谷氨酸、G、A或S。在某些实施方案中，SEQID NO:47的位置6和22处的两个残基均不同于Gln(Q)，或位置6处的残基不同于Gln(Q)，而位置22处的残基不存在。
下面表3中鉴定了与SEQ ID NO:47或12共享共有结构或源自SEQ ID NO:47和12并满足SEQ ID NO:93的共有结构的示例性肽：
表3：肽P15/P20共有(SEQ ID NO:47或12)的肽变体
选择表3的肽包括斜体印刷指示的溶解性标签，包括SEEEEE。本文还预期包含表3所示的序列，但缺乏这个特定溶解性标签(或具有不同的溶解性标签)的肽。
在这个实施方案中，相应的野生型氨基酸序列对应据此通过引用整体并入的Fan等的PCT申请WO 01/98501中鉴定的丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)HrpW序列的氨基酸52至96。为了比较本发明肽的性质，旨在将包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的多肽或由SEQ ID NO:48的氨基酸序列组成的肽用作参考。
在某些实施方案中，所述肽相对于SEQ ID NO:48的相应野生型氨基酸序列包括一个或多个突变。这一个或多个突变包括相对于SEQ ID NO:48的缺失或取代。在某些实施方案中，相对于包含SEQ ID NO:48的相应野生型氨基酸序列或由其组成的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽在水溶液中的溶解性、稳定性和/或对化学降解的抗性。在这个实施方案中，所述分离的肽溶于水中时稳定；如上所述，在水性条件下在pH缓冲液和杀生物剂的存在下抗化学降解；和/或在水溶液中的溶解性为至少约1.0mg/ml。
在某些实施方案中，包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的分离的肽是总长度介于20和36个氨基酸之间，并且基本上由SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64组成的肽，而在另一个实施方案中，分离的肽由SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64组成。
在某些实施方案中，包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的分离的肽是总长度小于100个氨基酸的肽并且氨基酸序列包括SEQ ID NO:65。在某些实施方案中所述肽的氨基酸序列基本上由SEQ ID NO:65组成，而在另一个实施方案中分离的肽由SEQ ID NO:65组成。
本发明的再一个方面涉及一种分离的肽，其具有以下的氨基酸序列：
(i)PSPXTXXLXXIVGXILXAXN(SEQ ID NO:66，P6/6a共有)，其中
位置4处的X为F或Y；
位置6处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置7处的X是任选的并且根据一个实施方案，可为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；或根据另一个实施方案可为L；
位置9处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；
位置10处的X为H或N；
位置14处的X为E、g-谷氨酸、D或isoD；
位置17处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；并且
位置19处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；或
(ii)XTXXLXXIVGXIL(SEQ ID NO:135，P6/6a min共有)，其中
位置1处的X为F或Y；
位置3处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置4处的X是任选的并且根据一个实施方案，可为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；或根据另一个实施方案可为L；
位置6处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；
位置7处的X为H或N；并且
位置11处的X为E、g-谷氨酸、D或isoD；
其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变。在某些实施方案中，相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了分离的肽的水溶解性、稳定性或对化学降解的抗性。
对比野生型序列对应于水稻白叶枯病菌的全长harpin的氨基酸85-105(Ji等，“Two Coiled-Coil Regions of Xanthomonas oryzae pv.Oryzae Harpin Differ inOligomerization and Hypersensitive Response Induction,”Amino Acids 40:381-392(2011)，其据此通过引用整体并入)。这种对比野生型序列是由氨基酸序列PSPFTQMLMHIVGEILQAQNG(SEQ ID NO:153)组成的肽。
在某些实施方案中，根据本发明这个方面的肽不是由对应于水稻白叶枯病菌的全长harpin的氨基酸85-104的PSPFTQMLMHIVGEILQAQN(P6a，SEQ ID NO:67)的氨基酸序列组成(Ji等，“Two Coiled-Coil Regions of Xanthomonas oryzae pv.Oryzae HarpinDiffer in Oligomerization and Hypersensitive Response Induction,”Amino Acids40:381-392(2011)，其据此通过引用整体并入)。
在某些实施方案中，这个方面的肽不包含如美国专利第8,440,881号描述的基序2的肽序列，其定义为(P/A/V)S(P/Q/A)(F/L/Y)TQ(M/A)LM(H/N/Q)IV(G/M)(E/D/Q)，SEQ IDNO:154。举例而言，当所有其它比对残基匹配基序2的序列时，根据SEQ ID NO:66的肽不包括在位置7处具有M/A/T的肽；或当所有其它比对残基匹配基序2的序列时，根据SEQ ID NO:66的肽不包括在位置10处具有H/N的肽；或当所有其它比对残基匹配基序2的序列时，根据SEQ ID NO:66的肽不包括在位置14处具有E/D的肽。类似地，当所有其它比对残基匹配基序2的序列时，根据SEQ ID NO:135的肽不包括在位置4处具有M/A/T的肽；或当所有其它比对残基匹配基序2的序列时，根据SEQ ID NO:135的肽不包括在位置7处具有H/N的肽；或当所有其它比对残基匹配基序2的序列时，根据SEQ ID NO:135的肽不包括在位置11处具有E/D的肽。
在某些实施方案中，所述肽相对于SEQ ID NO:153的相应野生型氨基酸序列包括一个或多个突变。这一个或多个突变包括相对于SEQ ID NO:153的缺失或取代。在某些实施方案中，相对于包含SEQ ID NO:153的相应野生型氨基酸序列或由其组成的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽在水溶液中的溶解性、稳定性和/或对化学降解的抗性。
根据这个方面的肽的长度优选小于约100个氨基酸，或可选地小于90个氨基酸、小于80个氨基酸、小于70个氨基酸、小于60个氨基酸或小于约50个氨基酸。在某些实施方案中，肽的长度介于19和50个氨基酸之间。
在某些实施方案中，根据SEQ ID NO:66和135的肽也满足定义SEQ ID NO:93的肽的结构特征，在这种情况下不存在甲硫氨酸和半胱氨酸残基。例如，在根据SEQ ID NO:66的不含甲硫氨酸氨基酸残基的肽中，位置7处的X，若存在，则为E、g-谷氨酸、G、A、S、T、K或L；并且位置9处的X为E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K。类似地，对于根据SEQ ID NO:135的不含甲硫氨酸氨基酸残基的肽，位置4处的X，若存在，则为E、g-谷氨酸、G、A、S、T、K或L；并且位置6处的X为E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K。
在某些实施方案中，共享SEQ ID NO:66的结构的肽在SEQ ID NO:66的位置6、17和19处具有至少一个不同于Gln(Q)的残基，即为E、g-谷氨酸、G、A或S。在某些实施方案中，在SEQ ID NO:66的位置6、17和19处的两个或三个残基不同于Gln(Q)。类似地，对于共享SEQID NO:135的结构的肽，根据一个实施方案这些肽在位置6处具有不同于Gln(Q)的残基，即为E、g-谷氨酸、G、A或S。
下面表4中鉴定了与SEQ ID NO:66或135共享共有结构或源自SEQ ID NO:66和135中的一个并满足SEQ ID NO:93的共有结构的示例性肽：
表4：肽P6/P6b共有(SEQ ID NO:66或135)的肽变体
选择表4的肽包括斜体印刷指示的溶解性标签，包括SEE、SEEE和SEEEEE。本文还预期包含表4所示的序列，但缺乏这些特定溶解性标签(或具有不同的溶解性标签)的肽。
本发明的另一方面涉及一种具有以下的氨基酸序列的肽：
(i)XXXXXXXXXXX(L/M)XXLLXXLLXXLLXXX(SEQ ID NO:18，P17/18)，其中
位置1处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置2处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置3处的X可为任何氨基酸，但优选P、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置4处的X可为任何氨基酸，但优选I、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、N、isoD、K或R；
位置5处的X可为任何氨基酸，但优选D、isoD、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、N、Q、K或R；
位置6处的X可为任何氨基酸，但优选R、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N或K；
位置7的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置8处的X可为任何氨基酸，但优选T、Q、S、E、g-谷氨酸、A、G、D、isoD、N、K或R；
位置9处的X可为任何氨基酸，但优选I、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置10处的X可为任何氨基酸，但优选E、g-谷氨酸、Q、S、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置11处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置13处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置14处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置17处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置18处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置21处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；
位置22处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置25处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置26处的X可为任何氨基酸，但优选P、S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；并且
位置27处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；或
(ii)(L/M)XXLLXXLLXXLL(SEQ ID NO:25，P17/18min共有)，其中
位置2处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置3处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置6处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置7处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置10处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；并且
位置11处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R。
在某些实施方案中，所述肽相对于梨火疫病菌HrpW的相应野生型氨基酸序列包括一个或多个突变。这一个或多个突变包括相对于野生型HrpW序列的缺失或取代。在某些实施方案中，相对于包含梨火疫病菌HrpW的相应野生型氨基酸序列或由其组成的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽在水溶液中的溶解性、稳定性和/或对化学降解的抗性。
据此通过引用整体并入的Fan等的PCT申请WO 01/98501，鉴定了HrpWEa的两个过敏反应激发结构域。第一个结构域从氨基酸5延伸到氨基酸64，特别是从HrpWEa的氨基酸31延伸到氨基酸57。第二个结构域从氨基酸103延伸到氨基酸146，特别是从HrpWEa的氨基酸116延伸到氨基酸140。尽管Fan等人这样描述，但该参考文献仅鉴定出HrpWEa的单个肽片段，这是由氨基酸10至59组成的肽。
对比野生型序列对应于据此通过引用整体并入的Fan等的PCT申请WO 01/98501中鉴定的全长梨火疫病菌HrpW序列的氨基酸10至59。为了比较本发明肽的性质，旨在使用由梨火疫病菌HrpW的氨基酸10至59组成的肽作为参照。
在某些实施方案中，这个方面的肽不是由对应于全长梨火疫病菌HrpW的氨基酸10至59的氨基酸序列TSSSPGLFQSGGDNGLGGHNANSALGQQPIDRQTIEQMAQLLAELLKSLL(SEQ ID NO:162)组成(Fan等的PCT申请WO 01/98501，其据此通过引用整体并入)。
在某些实施方案中，所述肽相对于SEQ ID NO:162的相应野生型氨基酸序列包括一个或多个突变。这一个或多个突变包括相对于SEQ ID NO:162的缺失或取代。在某些实施方案中，相对于包含SEQ ID NO:162的相应野生型氨基酸序列或由其组成的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽在水溶液中的溶解性、稳定性和/或对化学降解的抗性。
根据这第四个方面的肽的长度优选小于约100个氨基酸，或可选地小于90个氨基酸、小于80个氨基酸、小于70个氨基酸、小于60个氨基酸或小于约50个氨基酸。在某些实施方案中，肽的长度介于13和50个氨基酸之间，或甚至介于13和40个氨基酸之间。
在某些实施方案中，根据SEQ ID NO:18和25的肽也满足定义SEQ ID NO:93的肽的结构特征，在这种情况下不存在甲硫氨酸和半胱氨酸残基。例如，当包含SEQ ID NO:18的肽不含甲硫氨酸氨基酸残基时，位置12处的氨基酸为L。类似地，当包含SEQ ID NO:25的肽不含甲硫氨酸氨基酸残基时，位置1处的氨基酸为L。
在某些其它实施方案中，氨基酸1至11和/或25至27中的一个或多个在SEQ ID NO:18的分离的肽中不存在。例如，缺乏氨基酸25至27的肽相对于野生型序列表现出提高的稳定性。
下面表5中鉴定了与SEQ ID NO:18或25共享共有结构或源自SEQ ID NO:18和25中的一个，或满足SEQ ID NO:93的共有结构的示例性肽：
表5：肽P17/P18共有(SEQ ID NO:18或25)的肽变体
在P17、P17a和野生型序列中，[*]＝TSSSPGLFQSGGDNGLGGHNANSALG
选择表5的肽包括斜体印刷指示的溶解性标签，包括SEEEEE。本文还预期包含表5所示的序列，但缺乏这些特定溶解性标签(或具有不同的溶解性标签)的肽。
在这个实施方案中，野生型氨基酸序列对应于据此通过引用整体并入的Fan等的PCT申请WO 01/98501中鉴定的梨火疫病菌HrpW序列的氨基酸10至59。为了比较本发明肽的性质，旨在使用由梨火疫病菌HrpW的氨基酸10至59组成的肽作为参照。
本发明的再一个方面涉及具有以下的氨基酸序列的肽：
XLXX(L/M)LXLIXX(L/I/V/F/M)(L/I/V/F/M)(SEQ ID NO:26，P19共有)，其中
位置1处的X是任选的并且可为L、I、V、F或M；
位置3处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；
位置4处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置7处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；
位置10处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；并且
位置11处的X可为任何氨基酸，但优选R、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或K。
正如上面所提到的，据此通过引用整体并入的Fan等的PCT申请WO 01/98501，鉴定了HrpWEa的两个过敏反应激发结构域，其中一个从氨基酸103延伸到氨基酸146，特别是从HrpWEa的氨基酸116延伸到氨基酸140。尽管Fan等人这样描述，但该参考文献并未鉴定出含有这个结构域的HrpWEa的肽片段。
对比野生型序列对应于据此通过引用整体并入的Fan等的PCT申请WO 01/98501中鉴定的全长梨火疫病菌HrpW序列的氨基酸116至140。为了比较本发明肽的性质，旨在使用由梨火疫病菌HrpW的氨基酸116至140组成的肽作为参照。
在某些实施方案中，这个方面的肽不是由对应于全长梨火疫病菌HrpW的氨基酸116至140的氨基酸序列ITPDGQGGGQIGDNPLLKAMLKLIA(SEQ ID NO:89)组成(Fan等的PCT申请WO 01/98501，其据此通过引用整体并入)。
在某些实施方案中，所述肽相对于SEQ ID NO:89的相应野生型氨基酸序列包括一个或多个突变。这一个或多个突变包括相对于SEQ ID NO:89的缺失或取代。在某些实施方案中，相对于包含SEQ ID NO:89的相应野生型氨基酸序列或由其组成的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽在水溶液中的溶解性、稳定性和/或对化学降解的抗性。
根据这个方面的肽的长度优选小于约100个氨基酸，或可选地小于90个氨基酸、小于80个氨基酸、小于70个氨基酸、小于60个氨基酸或小于约50个氨基酸。在某些实施方案中，肽的长度介于18和50个氨基酸之间。
下面表6中鉴定了与SEQ ID NO:26共享共有结构或源自SEQ ID NO:26，并且满足SEQ ID NO:93的共有结构的示例性肽：
表6：肽P19共有(SEQ ID NO:26)的肽变体
选择表6的肽包括斜体印刷指示的溶解性标签，包括SEEEEE。本文还预期包含表6所示的序列，但缺乏该特定溶解性标签(或具有不同的溶解性标签)的肽。
表6中的某些肽也满足定义SEQ ID NO:93的肽的结构特征，在这种情况下不存在甲硫氨酸和半胱氨酸残基。当这些肽也满足SEQ ID NO:93的限制时，SEQ ID NO:26的氨基酸残基1，存在时，为L、I、V或F；SEQ ID NO:26的氨基酸5为L；并且SEQ ID NO:26的氨基酸12和13独立地为L、I、V或F。
本发明的再一个方面涉及一种具有以下的氨基酸序列的肽：
(i)XXXXXXLXXLLXXLVXLLK(SEQ ID NO:13，P14d共有)，其中
位置1处的X可为：Q、N、D、E、g-谷氨酸、isoD或S；
位置2处的X可为：D、E、g-谷氨酸、isoD；
位置3处的X可为：P、D、E、isoD或g-谷氨酸；
位置4处的X可为M、A、S、D、E、isoD或g-谷氨酸
位置5处的X可为Q、E或g-谷氨酸；
位置6处的X可为A、E或g-谷氨酸；
位置8处的X可为M、L、E、Q、D、N、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置9处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置12处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置13处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；并且
位置16处的X可为K、Q、N、E、D、R、G、A或S；或
(ii)LXXLLXXLVXLLK(SEQ ID NO:14，P14d min共有)，其中
位置2处的X可为M、L、E、Q、D、N、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置3处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置6处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置7处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；并且
位置10处的X可为K、Q、N、E、D、R、G、A或S。
在某些实施方案中，所述肽相对于青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)(以前称青枯假单胞杆菌(Pseudomonas solanacearum))PopA的相应野生型氨基酸序列包括一个或多个突变。这一个或多个突变包括相对于野生型PopA序列的缺失或取代。在某些实施方案中，相对于包含青枯雷尔氏菌PopA的相应野生型氨基酸序列或由其组成的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽在水溶液中的溶解性、稳定性和/或对化学降解的抗性。
对比野生型序列对应于据此通过引用整体并入的Fan等的PCT申请WO 01/98501中鉴定的青枯雷尔氏菌(以前称青枯假单胞杆菌)PopA序列的氨基酸92至125。为了比较本发明肽的性质，旨在使用Fan等人的由青枯雷尔氏菌PopA的氨基酸92至125组成的野生型肽作为参照。
在某些实施方案中，这个方面的肽不是由对应于青枯雷尔氏菌PopA的氨基酸92至125的QAPQSANKTGNVDDANNQDPMQALMQLLEDLVKL(SEQ ID NO:174)的氨基酸序列组成(参见Fan等的PCT申请WO 01/98501，其据此通过引用整体并入)。
根据这个方面的肽的长度优选小于约100个氨基酸，或可选地小于90个氨基酸、小于80个氨基酸、小于70个氨基酸、小于60个氨基酸或小于约50个氨基酸。在某些实施方案中，肽的长度介于12和50个氨基酸之间。
下面表7中鉴定了与SEQ ID NO:13或14共享共有结构或源自SEQ ID NO:13并满足SEQ ID NO:93的共有结构的示例性肽：
表7：肽P14d(SEQ ID NO:13)的肽变体
选择表7的肽包括斜体印刷指示的溶解性标签，包括SEEEEE。本文还预期包含表7所示的序列，但缺乏这些特定溶解性标签(或具有不同的溶解性标签)的肽。
值得注意的是对于p14d变体诱发HR而言，C末端赖氨酸残基似乎是必需的。这是与SEQ ID NO:93的标准序列的轻微偏离。不受信仰的束缚，据信由于p14d变体(LVKLL)内2个疏水性双联体序列之间的单个亲水性氨基酸，C末端赖氨酸可能是必需的。
根据这个方面的某些肽也满足定义SEQ ID NO:93的肽的结构特征，在这种情况下不存在甲硫氨酸和半胱氨酸残基。例如，对于包含SEQ ID NO:13的肽而言，SEQ ID NO:13的氨基酸残基4为A、S、D、isoD、E或g-谷氨酸，并且SEQ ID NO:13的氨基酸残基8为L、E、g-谷氨酸、Q、D、isoD、N、G、A或S。类似地，对于包含SEQ IDNO:14的肽而言，位置2处的氨基酸残基为L、E、g-谷氨酸、Q、D、isoD、N、G、A或S。
本发明的又一个方面涉及一种具有以下的氨基酸序列的肽：
(i)LXXL(L/M)XILXXLV(SEQ ID NO:16，P25共有)其中
位置2处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置3处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置6处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置9处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G；并且
位置10处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N；或
(ii)LXXVLXXL(L/M)XILXXLV(SEQ ID NO:17，P25共有)其中
位置2处的X可为T、S、A、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q或N；
位置3处的X可为G、T、S、A、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q或N；
位置6处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置7处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置10处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置13处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G；
位置14处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N；并且
位置16处的V是任选的。
在某些实施方案中，所述肽相对于青枯雷尔氏菌(以前称青枯假单胞杆菌)PopA的相应野生型氨基酸序列包括一个或多个突变。这一个或多个突变包括相对于野生型PopA序列的缺失或取代。在某些实施方案中，相对于包含青枯雷尔氏菌PopA的相应野生型氨基酸序列或由其组成的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽在水溶液中的溶解性、稳定性和/或对化学降解的抗性。
对比野生型序列对应于据此通过引用整体并入的Fan等的PCT申请WO 01/98501中鉴定为过敏反应结构域的青枯雷尔氏菌(以前称青枯假单胞杆菌)PopA序列的氨基酸206至260。为了比较本发明肽的性质，旨在使用Fan等人的由青枯雷尔氏菌PopA的氨基酸206至260组成的野生型肽作为参照。
在某些实施方案中，这个方面的肽不是由对应于青枯雷尔氏菌PopA的氨基酸206至260的NGADGGNGVNGNQANGPQNAGDVNGANGADDGSEDQGGLTGVLQKLMKILNALVQ(SEQ ID NO:179)的氨基酸序列组成(参见Fan等的PCT申请WO 01/98501，其据此通过引用整体并入)。
根据这个方面的肽的长度优选小于约100个氨基酸，或可选地小于90个氨基酸、小于80个氨基酸、小于70个氨基酸、小于60个氨基酸或小于约50个氨基酸。在某些实施方案中，肽的长度介于12和50个氨基酸之间。
下面表8中鉴定了与SEQ ID NO:16或17中的一个共享共有结构或源自SEQ ID NO:16或17并满足SEQ ID NO:93的共有结构的示例性肽：
表8：肽P2(SEQ ID NO:180)和P25(SEQ ID NO:182)的肽变体
[*]＝N末端序列NGADGGNGVNGNQANGPQNAGDVNG
选择表8的肽包括斜体印刷指示的溶解性标签，包括SEEEEE。本文还预期包含表8所示的序列，但缺乏这些特定溶解性标签(或具有不同的溶解性标签)的肽。
值得注意地，表8中这些衍生肽中的许多包括在野生型序列中未观察到的重复LT序列。然而，应注意这些序列需要与SEQ ID NO:93相比更大的疏水性序列以引起过敏反应。不受信仰的束缚，据信这可能是由于序列中存在氨基酸缬氨酸而不是亮氨酸以及在疏水性双联体之间仅存在单个亲水性氨基酸(LLKIL)。虽然这些变化对HR有害，但其影响可通过在肽的C末端添加附加疏水性残基(…KIL相对于…KILEALV或…KILNALV)而逆转。
根据这个方面的某些肽也满足定义SEQ ID NO:93的肽的结构特征，在这种情况下不存在甲硫氨酸和半胱氨酸残基。例如，对于包含SEQ ID NO:16的肽而言，氨基酸残基5为L；并且对于包含SEQ ID NO:17的肽而言，氨基酸残基9为L。
本发明的再一个方面涉及一种具有以下的氨基酸序列的肽：
(i)(L/M)XXLLX(L/M)FXXI(L/M)XX(SEQ ID NO:15，P3min共有)其中
位置2处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置3处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置6处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置9处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G；
位置10处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N；
位置13处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；并且
位置14处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G。
在某些实施方案中，所述肽相对于梨火疫病菌HrpN的相应野生型氨基酸序列包括一个或多个突变。这一个或多个突变包括相对于野生型HrpN序列的缺失或取代。在某些实施方案中，相对于包含梨火疫病菌HrpN的相应野生型氨基酸序列或由其组成的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽在水溶液中的溶解性、稳定性和/或对化学降解的抗性。
对比野生型序列对应于据此通过引用整体并入的Wei等的美国专利第7,132,525号中鉴定的梨火疫病菌HrpN序列的氨基酸137至180或150至180。将含有氨基酸137至180的HrpN肽鉴定为过敏反应激发片段，而含有氨基酸150至180的HrpN肽无法表达和试验。为了比较本发明肽的性质，旨在使用Wei等的由梨火疫病菌HrpN的氨基酸137至180或150至180组成的野生型肽作为参照。
在某些实施方案中，这个方面的肽不是由对应于梨火疫病菌HrpN的氨基酸137至180的S137TSQNDDSTSGTDS150TSDSSDPMQQLLKMFSEIMQSLFGDGQDGT180(SEQ ID NO:230)的氨基酸序列(参见Wei等的美国专利第7,132,525号，其据此通过引用整体并入)或对应于其氨基酸150至180的31个氨基酸的肽组成。
根据这个方面的肽的长度优选小于约100个氨基酸，或可选地小于90个氨基酸、小于80个氨基酸、小于70个氨基酸、小于60个氨基酸、小于约50个氨基酸、小于约40个氨基酸或小于30个氨基酸。在某些实施方案中，肽的长度介于12和30个氨基酸之间。
下面表9中鉴定了与SEQ ID NO:15共享共有结构或源自SEQ IDNO:15并满足SEQID NO:93的共有结构的示例性肽：
表9：肽P3共有(SEQ ID NO:15)的肽变体
选择表9的肽包括斜体印刷指示的溶解性标签，包括SEEE、SEEEEE和EEEE。本文还预期包含表9所示的序列，但缺乏这些特定溶解性标签(或具有不同的溶解性标签)的肽。
值得注意的是，最小的P3序列需要比SEQ ID NO:93的最小HR盒序列更长的序列。不受信仰的束缚，据信这可能是由于疏水性序列中存在两个苯丙氨酸残基。
根据这个方面的某些肽也满足定义SEQ ID NO:93的肽的结构特征，在这种情况下不存在甲硫氨酸和半胱氨酸残基。例如，对于包含SEQ ID NO:15的肽而言，氨基酸残基1、7和12为L。
基于公开的共有序列(SEQ ID NO:93)，可能产生明显偏离细菌蛋白质序列的具有预测HR活性的新型肽序列。这些肽可含对最大溶解性和化学稳定性而优化的亲水性残基。在一个优选实施方案中，这些亲水性残基为谷氨酸。赖氨酸和精氨酸也是可能的选择，然而大量的这些残基将在植物中引起中毒反应。
除基于较大HR激发蛋白中天然存在的序列建模(并修饰)的前述肽以外，本发明还预期满足SEQ ID NO:93的共有序列的完全合成肽。理想地，这些合成肽包括许多跨越由SEQID NO:93指定的疏水性残基之间的强亲水性氨基酸。下面表10中列出了示例性合成肽。这些肽含有与HR激发相关的必需的疏水性肽。为了最大溶解性而选择插入的亲水性残基，优选具有带电荷的氨基酸。可能使用不带电荷的氨基酸，但是较大比例的不带电荷的氨基酸可引起所得的肽在溶液中聚集并形成沉淀或凝胶。出于优于天冬氨酸的化学稳定性而优选谷氨酸。虽然赖氨酸和精氨酸具有甚至更优的溶解性特征，但聚阳离子在受试植物中产生中毒反应。因此，应避免富含精氨酸的序列如P30-1(SEQ ID NO:211)。
表10：其它HR盒肽
选择表10的肽包括斜体印刷指示的溶解性标签，包括SEE、EE、DD或EEE。本文还预期包含表10所示的序列，但缺乏这些特定溶解性标签(或具有不同的溶解性标签)的肽。
本发明的分离的肽也可以融合肽的形式呈现，融合肽另外包括经由肽键与本发明肽偶合的第二氨基酸序列。第二氨基酸序列可为纯化标签，如聚组氨酸(His6-)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST-)或麦芽糖结合蛋白(MBP-)，其有助于纯化但随后可去除，即在回收之后从肽上裂解。可在纯化标签和所需肽之间引入蛋白酶特异性裂解位点或化学特异性裂解位点(即，在可裂解接头序列中)。蛋白酶特异性裂解位点是文献中公知的并且包括但不限于在赖氨酸之后裂解的肠激酶特异性裂解位点(Asp)4-Lys；在精氨酸之后裂解的因子Xa特异性裂解位点Ile-(Glu或Asp)-Gly-Arg；在Lys和Arg之后裂解的胰蛋白酶特异性裂解位点；及GenenaseTM I特异性裂解位点Pro-Gly-Ala-Ala-His-Tyr。化学药品及其特异性裂解位点包括但不限于溴化氰(CNBr)，其在甲硫氨酸(Met)残基处裂解；BNPS-粪臭素，其在色氨酸(Trp)残基处裂解；甲酸，其在天冬氨酸-脯氨酸(Asp-Pro)肽键处裂解；羟胺，其在天冬酰胺-甘氨酸(Asn-Gly)肽键处裂解；及2-硝基-5-氰硫基苯甲酸(NTCB)，其在半胱氨酸(Cys)残基处裂解(参见Crimmins等，“Chemical Cleavage of Proteins in Solution,”Curr.Protocol.Protein Sci.，第11章:第11.4单元(2005)，其据此通过引用整体并入)。为了使用这些裂解方法的中的一种，可能必须通过突变从所需肽序列内去除不需要的裂解位点。例如，为了与胰蛋白酶相容已经使p4-7E-cR(SEQ ID NO:40)突变：位置7处的赖氨酸残基突变为谷氨酸并且添加C末端精氨酸以呈现理论上胰蛋白酶裂解的产物。同样，p19-5(SEQ ID NO:168)含有可以在酸性条件下裂解的序列‘NP’。p19-5a(SEQ ID NO:169)中的这些残基突变为‘DE’阻止了这种特定裂解机制。可进一步纯化所需肽产物以去除裂解的纯化标签。
本发明的分离的肽也可以融合肽的形式呈现，该融合肽包括通过接头序列连接在一起的多个本发明的肽序列，其可能或可能不呈上述类型的可裂解氨基酸序列的形式。此类多聚体融合蛋白可能或可能不包括纯化标签。在一个实施方案中，每个单体序列可包括通过第一可裂解肽序列与本发明的肽连接的纯化标签；并且几个单体序列可通过第二可裂解肽序列与相邻单体序列连接。因此，在多聚体融合蛋白表达后，即在宿主细胞中，可用蛋白酶或有效裂解第二可裂解肽序列的化学药品处理回收的融合蛋白，从而释放含有纯化标签的单个单体肽序列。亲和纯化后，可用蛋白酶或有效裂解第一可裂解肽序列的化学药品处理回收的单体肽序列并从而使纯化标签从目标肽上释放。后者可使用如下文所述的凝胶过滤和/或HPLC进一步纯化。
根据一种方法，可以通过标准肽合成操作来合成本发明的肽。这些包括FMOC(9-芴基甲氧基-羰基)和tBoc(叔丁氧基-羰基)合成方案，其可以在自动化固相肽合成仪器上进行，包括但不限于Applied Biosystems 431A、433A合成仪和Peptide TechnologiesSymphony或大规模Sonata或CEM Liberty自动化固相肽合成仪。也预期替代性肽合成仪器的使用。使用固相合成制备的肽呈大体上纯的形式回收。
也可通过使用重组表达系统，接着分离并纯化重组制备的肽来制备本发明的肽。通常，这涉及将编码核酸分子插入到该分子异源(即，一般不存在)的表达系统中。可将编码本发明肽的一个或多个所需核酸分子插入载体中。将异源核酸分子以相对于启动子和任何其它5'和3'调控分子的适当有义(5'—3')取向和正确阅读框插入至所述表达系统或载体中。
下面表11中包括了用于在细菌和植物宿主中表达的代表性核苷酸序列：
表11
就对本文列出的编码的氨基酸序列及所需转基因生物的认识，仅用常规技术可以产生另外的密码子优化的DNA序列和RNA序列。
DNA构建体对本发明的肽或融合多肽的表达(包括转录和翻译)可以就表达水平、进行表达的组织类型和/或表达的发育阶段进行调控。许多异源调控序列(例如，启动子和增强子)可用于控制DNA构建体的表达。这些包括组成型、诱导型和可调型启动子，以及以组织或时空特异性方式控制表达的启动子和增强子。示例性组成型启动子包括覆盆子E4启动子(美国专利第5,783,393和5,783,394号，其各自据此通过引用整体并入)、胭脂碱合酶(NOS)启动子(Ebert等,Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)84:5745-5749(1987)，其据此通过引用整体并入)、章鱼碱合酶(OCS)启动子(其携带在根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefacien)的致瘤质粒上)、花椰菜病毒(caulimovirus)启动子如花椰菜花叶病毒(CaMV)19S启动子(Lawton等，Plant Mol.Biol.9:315-324(1987)，其据此通过引用整体并入)和CaMV 35S启动子(Odell等，Nature 313:810-812(1985)，其据此通过引用整体并入)、玄参花叶病毒35S启动子(美国专利第5,378,619号，其据此通过引用整体并入)、来自于核酮糖-1,5-双磷酸羧化酶(ssRUBISCO)的小亚基的光诱导型启动子、Adh启动子(Walker等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)84:6624-6628(1987)，其据此通过引用整体并入)、蔗糖合酶启动子(Yang等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)87:4144-4148(1990)，其据此通过引用整体并入)、R基因复合物启动子(Chandler等，Plant Cell 1:1175-1183(1989)，其据此通过引用整体并入)、叶绿素a/b结合蛋白基因启动子、CsVMV启动子(Verdaguer等，Plant MolBiol.,37:1055-1067(1998)，其据此通过引用整体并入)和甜瓜肌动蛋白启动子(PCT公布第WO00/56863号，其据此通过引用整体并入)。示例性组织特异性启动子包括西红柿E4和E8启动子(美国专利第5,859,330号，其据此通过引用整体并入)和西红柿2AII基因启动子(Van Haaren等，Plant Mol Bio.,21:625-640(1993)，其据此通过引用整体并入)。
在一个优选的实施方案中，DNA构建体的表达受来自其表达与早期种子和/或胚发育相关的基因的调控序列控制。实际上，在一个优选的实施方案中，所用启动子为种子增强型启动子。此类启动子的实例包括来自诸如以下的基因的5'调控区：napin(Kridl等，SeedSci.Res.1:209:219(1991)，其据此通过引用整体并入)、球蛋白(Belanger和Kriz，Genet.129:863-872(1991),GenBank登记号L22295，其各自据此通过引用整体并入)、γ玉米蛋白Z 27(Lopes等，Mol Gen Genet.247:603-613(1995)，其据此通过引用整体并入)、L3油质蛋白(oleosin)启动子(美国专利第6,433,252号，其据此通过引用整体并入)、菜豆蛋白(phaseolin)(Bustos等，Plant Cell 1(9):839-853(1989)，其据此通过引用整体并入)、arcelin5(美国申请公布第2003/0046727号，其据此通过引用整体并入)、大豆7S启动子、7Sa启动子(美国申请公布第2003/0093828号，其据此通过引用整体并入)、大豆7Sαβ伴大豆球蛋白·conglycinin·启动子、7Sα启动子(Beachy等，EMBO J.4:3047(1985)；Schuler等，Nucleic Acid Res.10(24):8225-8244(1982)，其各自据此通过引用整体并入)、大豆胰蛋白酶抑制剂(Riggs等，Plant Cell 1(6):609-621(1989)，其据此通过引用整体并入)、ACP(Baerson等，Plant Mol.Biol.,22(2):255-267(1993)，其据此通过引用整体并入)、硬脂酰-ACP脱饱和酶(Slocombe等，Plant Physiol.104(4):167-176(1994)，其据此通过引用整体并入)、大豆β·伴大豆球蛋白的a'亚基(Chen等，Proc.Natl.Acad.Sci.83:8560-8564(1986)，其据此通过引用整体并入)、蚕豆(vicia faba)USP(美国申请公布第2003/229918号，其据此通过引用整体并入)和玉米L3油质蛋白启动子(Hong等，PlantMol.Biol.,34(3):549-555(1997)，其据此通过引用整体并入)。
可经由固相合成，使用例如亚磷酰胺法和源自受保护的2′-脱氧核苷的亚磷酰胺构建模块(building block)来制备编码本发明的肽的核酸分子。为获得所需寡核苷酸，按产物序列所需的顺序使构建模块依序与增长的寡核苷酸链偶合。链组装完成之后，产物从固相释放到溶液中，去保护、收集并且通常使用HPLC纯化。固相合成的界限适于制备长度长达约200nt的寡核苷酸，其编码约65个氨基酸或更少数量级的肽。可以将合成的寡核苷酸的末端设计为包括特异性限制酶裂解位点以促进合成的寡核苷酸连接到表达载体中。
对于较长的肽，可经由固相合成制备寡核苷酸，然后使用各种技术将合成的寡核苷酸序列连接在一起。综述了构造完整合成基因的重组技术，例如，在Hughes等，“ChapterTwelve–Gene Synthesis:Methods and Applications,”Methods in Enzymology 498:277-309(2011)中，其据此通过引用整体并入。
一旦选择了合适的表达载体，就使用本领域中的标准克隆程序将所需的核酸序列克隆到载体中，如Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold SpringsLaboratory,Cold Springs Harbor,N.Y.(1989)，或Cohen和Boyer的美国专利第4,237,224号所述，其据此通过引用整体并入。然后将载体引入合适的宿主中。
可利用各种宿主-载体系统重组表达本发明的肽。主要地，载体系统必须与所用宿主相容。宿主-载体系统包括但不限于以下：经噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA转化的细菌；微生物诸如含有酵母载体的酵母；经病毒(例如，牛痘病毒、腺病毒等)感染的哺乳动物细胞系统；经病毒(例如，杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；和受农杆菌(Agrobacterium)感染的植物细胞。这些载体的表达元件在其强度和特异性方面不同。根据所用的宿主-载体系统，可以使用许多合适的转录和翻译元件中的任一种来实现本发明的这个和其它方面。
可通过几种方法获得纯化肽。优选通过传统技术产生呈纯化形式(优选纯度为至少约80％或85％，更优选纯度为至少约90％或95％)的肽。根据是否使重组宿主细胞将肽分泌到生长培养基中(参见Bauer等的美国专利第6,596,509号，其据此通过引用整体并入)，可通过离心(以将细胞组分与含有分泌的肽的上清液分开)，接着通过上清液的连续硫酸铵沉淀来分离和纯化所述肽。含所述肽的成分在适当尺寸的葡聚糖或聚丙烯酰胺柱中经受凝胶过滤以将所述肽与其它蛋白质分开。如有必要，可通过HPLC进一步纯化肽成分。
可选地，如果未分泌目标肽，则可以使用标准的分离和纯化方案将其从重组细胞分离。这包括破坏细胞(例如，通过超声处理、冷冻、弗氏压碎器(French press)等)，然后从细胞碎片中回收所述肽。纯化可以使用上述的离心、沉淀和纯化程序实现。使用上述纯化标签可以简化这个过程。
在某些实施方案中，不需要纯化。不进行纯化时，可以在离心去除细胞碎片之后回收无细胞裂解物。所得的无细胞裂解物可经足够时间的热处理以灭活回收成分中的任何天然蛋白酶，例如在100℃下10分钟。若需要，可向此类无细胞制剂中引入杀生剂、蛋白酶抑制剂和非离子型表面活性剂中的一种或多种(参见Wei的美国申请公布第20100043095号，其据此通过引用整体并入)。
一旦回收本发明的肽，就可将其用于制备包括载体和选自由以下组成的组的一种或多种添加剂的组合物：杀菌剂或杀生剂、蛋白酶抑制剂、非离子型表面活性剂、肥料、除草剂、杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、生物接种剂、植物调节剂及其混合物。
在某些实施方案中，所述组合物包括大于约1nM的肽、大于约10nM的肽、大于约20nM的肽、大于约30nM的肽、大于约40nM的肽、大于约50nM的肽、大于约60nM的肽、大于约70nM的肽、大于约80nM的肽、大于约90nM的肽、大于约100nM的肽、大于约150nM的肽、大于约200nM的肽或大于约250nM的肽。在某些实施方案中，所述组合物包括小于约1nM的肽。例如，某些肽可以低于约2ng/ml、低于约1.75ng/ml、低于约1.5ng/ml、低于约1.25ng/ml、低于约1.0ng/ml、低于约0.75ng/ml、低于约0.5ng/ml、低于约0.25ng/ml或甚至低于约0.1ng/ml的浓度存在。
合适的载体包括水、任选含有一种或多种共溶剂的水溶液、浆料和固体载体颗粒。示例性固体载体包括矿物土如硅酸盐、硅胶、滑石、高岭土、石灰石、石灰、白垩、红玄武土、黄土、粘土、白云石、硅藻土、硫酸钙、硫酸镁、氧化镁、研磨合成材料，和植物来源的产物，如谷物粉、树皮粉、木粉和坚果壳粉、纤维素粉、淀粉和淀粉衍生物，以及其它单糖、二糖和多糖。
合适的肥料包括但不限于硫酸铵、磷酸铵、硝酸铵、尿素及其组合。
合适的杀虫剂包括但不限于新烟碱类成员，如吡虫啉(imidicloprid)、噻虫胺(clothianidin)和噻虫嗪(thiamethoxam)；有机磷酸酯类成员，如毒死蜱(chlorpyrifos)和马拉硫磷(malathion)；拟除虫菊酯类成员，如氯菊酯(permethrin)；其它天然杀虫剂，如烟碱(nicotine)、降烟碱(nornicotine)和除虫菊酯(pyrethrin)；氨基甲酸酯类成员，如涕灭威(aldicarb)、呋喃丹(carbofuran)和西维因(carbaryl)；大环内酯类成员，如各种阿维菌素(abamectin)、除虫菌素(avermectin)和伊维菌素(ivermectin)产品；二酰胺类成员，如氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)、氰虫酰胺(cyantraniliprole)和氟苯虫酰胺(flubendiamide)；几丁质合成抑制剂，特别是苯甲酰脲类的那些，如氯芬奴隆(lufenuron)和除虫脲(diflubenzuron)；及其任何组合，包括两种或更多种、三种或更多种或四种或更多种杀虫剂的组合。农药通用名纲要(Compendiumof Pesticide Common Names)中列出了另外的杀虫剂，其是由AlanWood操作的数据库并且在alanwood.net互联网网站上以电子形式可用。
合适的杀真菌剂包括但不限于甲氧丙烯酸酯类成员，如嘧菌酯(azoxystrobin)、唑菌胺酯(pyraclostrobin)、肟菌酯(trifloxystrobin)、啶氧菌酯(picoxystrobin)和氟嘧菌酯(fluoxastrobin)；三唑类成员，如种菌唑(ipconazole)、叶菌唑(metconazole)、戊唑醇(tebuconazole)、灭菌唑(triticonazole)、四氟醚唑(tetraconazole)、苯醚甲环唑(difenoconazole)、粉唑醇(flutriafol)、丙环唑(propiconazole)和丙硫菌唑(prothioconazole)；琥珀酸脱氢酶类成员，如萎锈灵(carboxin)、氟唑菌酰胺(fluxapyroxad)、啶酰菌胺(boscalid)和氟唑环菌胺(sedaxane)；苯基酰胺类成员，如甲霜灵(metalaxyl)、精甲霜灵(mefenoxam)、苯霜灵(benalaxyl)和恶霜灵(oxadiyxl)；苯基吡咯类成员，如咯菌腈(fludioxonil)；邻苯二甲酰亚胺类成员，如克菌丹(captan)；二硫代氨基甲酸酯类成员，如代森锰(mancozeb)和福美双(thiram)；苯并咪唑类成员，如噻苯咪唑(thiabendazole)；及其任何组合，包括两种或更多种、三种或更多种或四种或更多种杀真菌剂的组合。农药通用名纲要中列出了另外的杀真菌剂，其是由Alan Wood操作的数据库并且在alanwood.net互联网网站上以电子形式可用。
合适的杀线虫剂包括但不限于氨基甲酸酯类化学药品，如涕灭威、涕灭砜威(aldoxycarb)、杀线威(oxamyl)、呋喃丹和cleothocarb；及有机磷酸酯类化学药品，如硫磷嗪(thionazin)、灭线磷(ethoprophos)、苯线磷(fenamiphos)、丰索磷(fensulfothion)、特丁磷(terbufos)、氯唑磷(isazofos)和硫线磷(ebufos)。农药通用名纲要中列出了另外的杀线虫剂，其是由Alan Wood操作的数据库并且在alanwood.net互联网网站上以电子形式可用。
合适的杀菌剂包括但不限于基于双氯酚和苯甲醇半缩甲醛的那些(来自ICI的或来自Thor Chemie的RS和来自Rohm&Haas的MK)和异噻唑啉酮衍生物如烷基异噻唑啉酮和苯并异噻唑啉酮(来自Thor Chemie的MBS；来自ICI的GXL)。农药通用名纲要中列出了另外的杀菌剂，其是由Alan Wood操作的数据库并且在alanwood.net互联网网站上以电子形式可用。
合适的接种剂包括但不限于慢生根瘤菌属种(Bradyrhizobium spp.)，特别是慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)(BASF产品)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilis)、利迪链霉菌(Streptomyces lydicus)、木霉属种(Trichoderma spp.)、巴斯德氏菌属种(Pasteuria spp.)和根瘤细胞的其它培养物(BASF和)及其任何组合，包括两种或更多种、三种或更多种或四种或更多种接种剂的组合。
植物调节剂是刺激或抑制植物生物化学信号传导的天然或合成的化学物质。这些通常但不完全受细胞表面上的受体识别，在细胞中引起级联反应。合适的植物调节剂包括但不限于乙烯利(ethephon)；乙烯；水杨酸；乙酰水杨酸；茉莉酸；茉莉酮酸甲酯；二氢茉莉酮酸甲酯；几丁质；壳聚糖；脱落酸；任何生长素(auxin)化合物或抑制剂，包括但不限于(4-氯苯氧基)乙酸、(2,4-二氯苯氧基)乙酸和2,3,5-三碘苯甲酸；任何细胞分裂素(cytokinin)，包括但不限于激动素(kinetin)和玉米素(zeatin)；赤霉素(gibberellin)；芸苔素内酯(brassinolide)；及其任何组合，包括两种或更多种、三种或更多种或四种或更多种调节剂的组合。
其它合适的添加剂包括缓冲剂、润湿剂、涂层剂和研磨剂。这些物质可用于促进根据本发明的组合物的应用。另外，所述组合物可以和其它常规种子制剂和处理物质，包括粘土和多糖一起施用于植物种子。
用于植物种子处理的组合物或系统包括：本发明的一种或多种肽，优选但不完全是P1、P4-14S、P6a、P14d、P15a、P18、P19或P25中的一种，联合一种或多种杀虫剂、杀线虫剂、杀真菌剂、其它接种剂或其它植物调节剂，包括多种杀虫剂或多种杀线虫剂、多种杀真菌剂、多种其它接种剂或多种植物调节剂的组合。对于这些组合处理的合适的杀虫剂、杀线虫剂、杀真菌剂、接种剂和植物调节剂包括以上鉴定的那些。这些组合物在种子处理时以单一组合物的形式呈现。相反，用于种子处理的系统可涉及多种处理，例如在一种处理中使用含所述肽的组合物而在不同的处理中使用含所述一种或多种杀虫剂、杀线虫剂、杀真菌剂、植物调节剂和/或杀菌剂的组合物。在后一种实施方案中，这两种处理在大约相同的时间，即种植之前或大约种植时进行。
一个此类实例包括本发明的一种或多种肽，包括(但不限于)P1、P4-14S、P6a、P14d、P15a、P18、P19或P25中的一个，联合可从Bayer Crop Science获得的PonchoTM(噻虫胺)，可从Bayer Crop Science获得的PonchoTM VOTiVO(噻虫胺和坚强芽孢杆菌生物杀线虫剂)及可从Bayer Crop Science获得的GauchoTM(吡虫啉)。
另一个实例包括本发明的一种或多种肽，包括(但不限于)P1、P4-14S、P6a、P14d、P15a、P18、P19或P25中的一个，联合可从Syngenta获得的CruiserTM(噻虫嗪)，可从Syngenta获得的CruiserMaxxTM(噻虫嗪、精甲霜灵和咯菌腈)，可从Syngenta获得的CruiserExtremeTM(噻虫嗪、精甲霜灵、咯菌腈和嘧菌酯)，可从Syngenta获得的AvictaTM(噻虫嗪和阿维菌素)，和可从Syngenta获得的AvictaTMComplete(噻虫嗪、阿维菌素和含有先正达巴斯德杆菌(Pasteurianishizawae)–Pn1的Clariva CompleteTM生物接种剂)，及可从Syngenta获得的Avicta CompleteTM Corn(噻虫嗪、精甲霜灵、咯菌腈、嘧菌酯、噻苯咪唑和阿维菌素)。
另一个实例包括本发明的一种或多种肽，包括(但不限于)P1、P4-14S、P6a、P14d、P15a、P18、P19或P25中的一个，联合可从BASF获得的Vault Liquid plus Integral(慢生根瘤菌物种和枯草芽孢杆菌菌株MBI 600接种剂)，可从BASF获得的Vault NP(慢生型大豆根瘤菌接种剂)和可从BASF获得的Subtilex NG(枯草芽孢杆菌生物接种剂)。
本发明还涉及赋予植物抗病性，增强植物生长，实现害虫防治，赋予植物生物或非生物胁迫耐受性，和/或调节植物生物化学信号传导的方法。这些方法涉及向植物或植物种子或所述植物生长或预期生长的场所施用有效量的本发明的分离的肽或本发明的组合物。由于这样施用，肽接触植物或植物种子的细胞，并且在植物或由植物种子长成的植物中诱导抗病性、生长增强、对生物胁迫的耐受性、对非生物胁迫的耐受性或改变的生物化学信号传导。可选地，可将本发明的肽或组合物施用给植物，使得从此类植物本身回收的种子能够在植物中赋予抗病性，增强植物生长，影响昆虫防治，赋予对生物或非生物胁迫的耐受性，和/或调节生物化学信号传导，调节成熟期。
在这些实施方案中，也可能选择向其施用了本发明的分离的肽或组合物的植物或植物种子或场所。例如，对于已知含有高线虫含量的田地，可通过施用如本文所述的本发明的分离的肽或组合物选择性地处理要在此类田地生长的植物或植物种子或该田地(场所)；而对于在含有低线虫含量的田地中生长的植物或植物种子，没有此类处理可能是必要的。类似地，对于灌溉减少的田地，可通过施用如本文所述的本发明的分离的肽或组合物选择性地处理要在此类田地生长的植物或植物种子或该田地(场所)；而对于在灌溉充足的田地中生长的植物或植物种子，没有此类处理可能是必要的。同样，对于易发洪水的田地，可通过施用如本文所述的本发明的分离的肽或组合物选择性地处理要在此类田地生长的植物或植物种子或该田地(场所)；而对于在不易发洪水的田地中生长的植物或植物种子，没有此类处理可能是必要的。作为此类选择的再一个实例，对于在生长季节的某些时间易受昆虫攻击的田地，可通过施用如本文所述的本发明的分离的肽或组合物选择性地处理要在此类田地生长的植物或植物种子或该田地(场所)；而相同田地在生长季节的无效时间可以不处理或不易受此类攻击的其它田地可不经处理。此类选择步骤可以在实践本文所述的每种使用方法，即赋予植物抗病性，增强植物生长，实现害虫防治(包括昆虫和线虫)，赋予植物生物或非生物胁迫耐受性，和/或调节植物生物化学信号传导时执行。
作为向植物或植物种子施用分离的肽或含有分离的肽的组合物以便赋予植物抗病性，实现植物生长，防治昆虫，赋予植物或由种子长成的植物胁迫抗性和/或调节的生物化学信号传导的替代方案，可以利用转基因植物或植物种子。当利用转基因植物时，这涉及提供经编码本发明的肽的DNA分子转化的转基因植物并且使植物在有效地容许该DNA分子赋予植物抗病性，增强植物生长，防治昆虫，赋予对生物或非生物胁迫的耐受性和/或调节生物化学信号传导的条件下生长。可选地，可以提供经编码本发明的肽的DNA分子转化的转基因植物种子并种植在土壤中。然后在有效地容许该DNA分子表达所述肽并从而赋予转基因植物抗病性，增强植物生长，防治昆虫，赋予对生物或非生物胁迫的耐受性和/或调节生物化学信号传导的条件下由种植的种子繁殖植物。
本发明还涉及提高取自观赏植物的插条的抗干燥性，从植物采收的水果或蔬菜的采后抗病性或抗干燥性，和/或对于从植物采收的水果或蔬菜提高水果或蔬菜成熟寿命的方法。这些方法涉及向植物或植物生长的场所施用有效量的本发明的分离的肽或根据本发明的组合物。由于这样施用，肽接触植物或植物种子的细胞，并且对取自观赏植物的插条诱导抗干燥性，对从植物采收的水果或蔬菜诱导采后抗病性或抗干燥性，和/或对从植物采收的水果或蔬菜诱导提高的水果或蔬菜成熟寿命。可选地，可向采收的水果或蔬菜施用有效量的本发明的分离的肽或根据本发明的组合物。由于这样施用，肽接触采收的水果或蔬菜的细胞，并且对经处理的水果或蔬菜诱导采后抗病性或抗干燥性，和/或对经处理的水果或蔬菜诱导提高的水果或蔬菜成熟寿命。
作为向植物或植物种子施用分离的肽或含有分离的肽的组合物以便对取自观赏植物的插条诱导抗干燥性，对从植物采收的水果或蔬菜诱导采后抗病性或抗干燥性，和/或对从植物采收的水果或蔬菜诱导提高的水果或蔬菜成熟寿命的替代方案，可利用转基因植物或植物种子。当利用转基因植物时，这涉及提供经编码本发明的肽的DNA分子转化的转基因植物并且使植物在有效地容许该DNA分子对取自观赏植物的插条诱导抗干燥性，对从转基因植物采收的水果或蔬菜诱导采后抗病性或抗干燥性，和/或对从转基因植物采收的水果或蔬菜诱导提高的水果或蔬菜成熟寿命的条件下生长。可选地，可以提供经编码本发明的肽的DNA分子转化的转基因植物种子并种植在土壤中。然后在有效地容许该DNA分子表达所述肽并从而对取自观赏植物的插条诱导抗干燥性，对从转基因植物采收的水果或蔬菜诱导采后抗病性或抗干燥性，和/或对从转基因植物采收的水果或蔬菜诱导提高的水果或蔬菜成熟寿命的条件下由种植的种子繁殖植物。
在这些实施方案中，也可能选择转基因植物或植物种子用于实现本发明。例如，对于已知含有高线虫含量的田地，可选择性地使转基因植物或植物种子在此类田地中生长；而非转基因植物或植物种子可在含有低线虫含量的田地中生长。类似地，对于灌溉减少的田地，可选择性地使转基因植物或植物种子在此类田地中生长；而非转基因植物或植物种子可在灌溉充足的田地中生长。同样，对于易发洪水的田地，可使转基因植物或植物种子在此类田地中生长；而非转基因植物或植物种子可在不易发洪水的田地中生长。作为此类选择的再一个实例，对于在生长季节的某些时间易受昆虫攻击的田地，可选择性地使转基因植物或植物种子在此类田地中生长；而非转基因植物或植物种子可在不易受此类昆虫攻击的田地中生长。此类选择步骤可以在实践本文所述的每种使用方法，即赋予植物抗病性，增强植物生长，实现害虫防治(包括昆虫和线虫)，赋予植物生物或非生物胁迫耐受性，和/或调节植物生物化学信号传导时执行。
本发明还涉及提高取自观赏植物的插条的抗干燥性，从植物采收的水果或蔬菜的采后抗病性或抗干燥性，和/或对于从植物采收的水果或蔬菜提高水果或蔬菜成熟寿命的方法。这些方法涉及向植物或植物生长的场所施用有效量的本发明的分离的肽或根据本发明的组合物。由于这样施用，肽接触植物或植物种子的细胞，并且对取自观赏植物的插条诱导抗干燥性，对从植物采收的水果或蔬菜诱导采后抗病性或抗干燥性，和/或对从植物采收的水果或蔬菜诱导提高的水果或蔬菜成熟寿命。可选地，可向采收的水果或蔬菜施用有效量的本发明的分离的肽或根据本发明的组合物。由于这样施用，肽接触采收的水果或蔬菜的细胞，并且对经处理的水果或蔬菜诱导采后抗病性或抗干燥性，和/或对经处理的水果或蔬菜诱导提高的水果或蔬菜成熟寿命。
在这些实施方案中，也可能选择向其施用了本发明的分离的肽或组合物的植物、插条、水果、蔬菜或场所。例如，对于远距离运输或长期贮存的采收的插条或水果或蔬菜，那么这些可通过施用如本文所述的本发明的分离的肽或组合物选择性地处理；而本地运输且有意用于消费而大体上无贮存期的采收的插条或水果或蔬菜可从此类处理中排除。
作为向植物或植物种子施用分离的肽或含有分离的肽的组合物以便对取自观赏植物的插条诱导抗干燥性，对从植物采收的水果或蔬菜诱导采后抗病性或抗干燥性，和/或对从植物采收的水果或蔬菜诱导提高的水果或蔬菜成熟寿命的替代方案，可利用转基因植物或植物种子。当利用转基因植物时，这涉及提供经编码本发明的肽的DNA分子转化的转基因植物并且使植物在有效地容许该DNA分子对取自观赏植物的插条诱导抗干燥性，对从转基因植物采收的水果或蔬菜诱导采后抗病性或抗干燥性，和/或对从转基因植物采收的水果或蔬菜诱导提高的水果或蔬菜成熟寿命的条件下生长。可选地，可以提供经编码本发明的肽的DNA分子转化的转基因植物种子并种植在土壤中。然后在有效地容许该DNA分子表达所述肽并从而对取自观赏植物的插条诱导抗干燥性，对从转基因植物采收的水果或蔬菜诱导采后抗病性或抗干燥性，和/或对从转基因植物采收的水果或蔬菜诱导提高的水果或蔬菜成熟寿命的条件下由种植的种子繁殖植物。
在这些实施方案中，也可能选择转基因植物或植物种子用于实现本发明。例如，当已知有意在采收后远距离运输或长期贮存采收的插条或水果或蔬菜时，可以选择转基因植物或植物种子用于生长；而当已知有意本地运输和/或消费采收的插条或水果或蔬菜，大体上无贮存期时，可以选择非转基因植物或植物种子用于生长。
合适的植物包括双子叶植物和单子叶植物，包括农业、造林、观赏和园艺植物，无论是天然的还是经遗传修饰形式。示例性植物包括但不限于苜蓿、苹果树、杏树、芦笋、鳄梨树、香蕉树、大麦、豆类、山毛榉(山毛榉属种(Fagus spec.))、秋海棠、桦树、黑莓、蓝莓、甘蓝、樟脑、芥花、胡萝卜、蓖麻、樱桃树、肉桂树、柑橘树、可可豆、咖啡、玉米、棉花、黄瓜、葫芦、桉树、冷杉、亚麻、饲料甜菜、倒挂金钟、大蒜、老鹳草(geranium)、葡萄、落花生、大麻、啤酒花(hop)、唐棣(juneberry)、芥菜(芥菜型油菜(Brassica juncea))、黄麻、扁豆、莴苣、亚麻籽、甜瓜、芥末、油桃、橡树、燕麦、油棕、油籽油菜、橄榄、洋葱、辣椒、豌豆、桃树、梨树、天竺葵(pelargonium)、胡椒、矮牵牛、松树(松属种(Pinus spec.))、李树、杨树(杨属种(Populus spec.))、仁果、马铃薯、油菜、覆盆子、水稻、橡胶树、黑麦、高粱、大豆、菠菜、云杉、南瓜、草莓、糖用甜菜、甘蔗、向日葵、茶树、柚木、烟草、西红柿、黑小麦、草皮、西瓜、小麦和柳树(柳属(Salix spec.))、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、非洲堇(Saintpaulia)、一品红(poinsettia)、菊花(chrysanthemum)、康乃馨(carnation)和百日菊(zinnia)。
对于改变的生物化学信号传导，这包括某些植物生物化学途径的增强和某些其它植物生物化学途径的减弱。可根据本发明改变的生物化学信号传导途径包括基因表达和蛋白质生成、代谢产物的生成及信号分子/次生代谢产物的生成。示例性的生物化学信号传导途径及其改变包括但不限于诱导一氧化氮生成、过氧化物生成和其它次生代谢产物；乙烯信号传导途径的激动和诱导乙烯应答基因表达(参见Dong等，Plant Phys.136:3628-3638(2004)；Li等，Planta 239:831-46(2014)；Chang等，PLoS One 10,e0125498(2015)，其各自据此通过引用整体并入)；水杨酸信号传导途径的激动和诱导水杨酸应答基因表达(参见Dong等，Plant J.20:207-215(1999)，其据此通过引用整体并入)；脱落酸途径的激动和诱导脱落酸应答基因表达(参见Dong等，Planta 221:313-327(2005)，其据此通过引用整体并入)；赤霉素信号传导途径的激动和诱导赤霉素应答基因表达(参见Li等，Planta 239:831-46(2014)，其据此通过引用整体并入)；茉莉酸信号传导的拮抗和抑制茉莉酸应答基因表达(参见Dong等，Plant Phys.136:3628-3638(2004)，其据此通过引用整体并入)；诱导蛋白酶抑制剂表达(参见Laluk和Mengiste，Plant J.68:480-494(2011)；Xia等，Chin.Sci.Bull56:2351-2358(2011)，其各自据此通过引用整体并入)；诱导植物组织中的活性氧生成；诱导免疫相关和抗微生物肽生成，例如但不限于过氧化物酶、超氧化物歧化酶、几丁质酶和·-1,3-葡聚糖酶(Wang等，J.Agric.Food Chem.59:12527-12533(2011)，其据此通过引用整体并入)；及诱导扩展蛋白基因表达和生成(参见Li等，Planta 239:831-46(2014)，其据此通过引用整体并入)。
对于抗病性，可能不会授予针对感染的绝对免疫力，但降低了疾病的严重程度并且延迟了症状发展。病变数量、病变大小和真菌病原体孢子形成的范围全部减小。这种赋予抗病性的方法具有治疗先前无法治疗的疾病，治疗由于费用而不能单独治疗的全身性疾病，并避免使用传染剂或环境有害物质的潜力。
根据本发明赋予植物病原体抗性的方法用于赋予对各种病原体包括病毒、细菌和真菌的抗性。尤其对以下病毒的抗性可以通过本发明的方法实现：烟草花叶病毒和番茄花叶病毒。根据本发明还可以赋予植物尤其是对以下细菌的抗性：致病性假单胞菌属种(Pseudomonas spp.)、致病性欧文氏菌属种(Erwinia spp.)、致病性黄杆菌属种(Xanthomonas spp.)和致病性罗尔斯顿菌属种(Ralstonia spp.)。可通过使用本发明的方法使植物尤其抗以下真菌：镰刀菌属种(Fusarium spp.)和疫病菌属种(Phytophthoraspp.)。
关于本发明的肽或组合物用于增强植物生长的用途，可以实现各种形式的植物生长增强或促进。这可以早在由种子开始植物生长时或稍后在植物寿命期间发生。例如，根据本发明的植物生长涵盖产量更高、植物活力增强、幼苗(即，萌芽后)活力增强、植物重量增加、生物量增加、每株植物的花数增加、粮食和/或水果产量更高、种子产量增加、萌芽种子百分比增加、萌芽速度增加、植物大小增加、植物高度减小(对于小麦而言)、生物量更高、果实更多且更大、果实着色更早、发芽、果实和植物成熟更早、分蘖或侧枝更多、叶片更大、叶片衰老延迟、枝条生长增加、根部生长增加、根/枝条分配改变、蛋白质含量增加、含油量增加、碳水化合物含量增加、色素含量增加、叶绿素含量增加、总光合作用增加、光合作用效率增加、呼吸减少(O2用量更低)、对降低产量的处理的补偿、茎耐久性(和对茎倒伏的抗性)增强、根耐久性(和对根倒伏的抗性)增强、低光条件下的植物生长更佳及其组合。因此，本发明为种植者提供了显著的经济效益。例如，早萌芽和早熟容许作物在短的生长季节会另外妨碍其在该地的生长的区域中生长。种子萌芽百分比增加引起作物群体(crop stands)改良和种子使用更有效。更高的产量、增加的大小和增强的生物质产量允许由给定的一块土地产生更大的收益。
关于本发明的肽或组合物用于防治害虫(包括但不限于为生物胁迫因素的昆虫和线虫)的用途，此类害虫防治涵盖防止害虫接触已经施用了本发明的肽或组合物的植物，通过喂食损伤防止对植物的直接伤害，使害虫远离此类植物，杀灭靠近此类植物的害虫，干扰以此类植物为食的昆虫幼虫，防止昆虫定殖于宿主植物，防止定殖昆虫释放植物毒素，干扰宿主植物上的产卵，等等。本发明还防止由害虫感染引起的对植物的后续病害。
本发明对各种昆虫(生物胁迫因素)有效。欧洲玉米螟(European corn borer)是玉米(马齿玉米和甜玉米)的主要害虫，但也以200多种植物种类为食，包括青豆、蜡豆和菜豆及食用大豆、胡椒、马铃薯和西红柿加上许多杂草种类。另外的损伤各种蔬菜作物的昆虫幼虫喂食害虫包括以下：甜菜夜蛾、粉纹夜蛾、棉铃虫、草地粘虫、小菜蛾、甘蓝根蛆、葱蛆、种蝇、泡菜虫(瓜虫)、胡椒蛆和番茄蠹蛾。总的来说，这类虫害代表对于全世界蔬菜生产最具经济重要性的一类害虫。本发明对线虫(另一类具经济重要性的生物胁迫因素)也有效。大豆异皮线虫(大豆孢囊线虫(Heterodera glycines))是大豆的主要害虫。肾形线虫(肾形肾状线虫(Rotylenchulus reniformis))是棉花的主要害虫，同样可以寄生于另外的作物种类，尤其是大豆和玉米。另外的线虫类害虫包括根结线虫属(Meloidogyne)的根结线虫(特别是在玉米、小麦和大麦中)、异皮线虫属(Heterodera)的禾谷孢囊线虫(特别是在大豆、小麦和大麦中)、短体线虫属(Pratylenchus)的根腐线虫、粒线虫属(Anguina)的种瘿线虫(seed gall nematodes)(特别是在小麦、大麦和黑麦中)及茎线虫属(Ditylenchus)的茎线虫。其它生物胁迫因素包括蜘蛛类、杂草及其组合。
关于本发明的肽或组合物用于赋予植物非生物胁迫抗性的用途，此类非生物胁迫涵盖对植物生理和发育有不利影响的任何环境因素。此类环境胁迫的实例包括气候相关的胁迫(例如，干燥、洪水、霜冻、低温、高温、过度光照和光照不足)、空气污染胁迫(例如，二氧化碳、一氧化碳、二氧化硫、NOx、碳氢化合物、臭氧、紫外线辐射、酸雨)、化学药品(例如，杀虫剂、杀真菌剂、除草剂、重金属)、营养胁迫(例如，肥料、微量营养素、大量营养素，特别是钾、氮衍生物和磷衍生物过多或不足)和对伤害的改善的愈合反应。使用本发明的肽赋予植物针对此类形式的环境胁迫的抗性。
本发明的另一方面涉及本发明的肽作为安全剂联合一种或多种活性剂(即，在组合物中或在分开的组合物中)用于防治水体中的水草的用途，如Mann的美国公布第20150218099号所述，其据此通过引用整体并入。
本发明的再一个方面涉及本发明的肽在用于向在水灌溉减少的条件下生长的植物施用的组合物中作为植物强化剂的用途，所述组合物还包括至少一种抗氧化剂和至少一种辐射管理剂，及任选地至少一种植物生长调节剂，如Rees等的美国公布第20130116119号所述，其据此通过引用整体并入。
当处理所有或部分植物，包括叶、茎、根、繁殖体(例如，插条)、果实等时，可通过多种程序进行本发明的涉及施用肽或组合物的方法。这可能(但不一定)涉及肽向植物中的浸润。合适的施用方法包括高压或低压喷雾、注射和临近进行肽施用时的叶片磨损。处理植物种子时，根据本发明的施用实施方案，可通过低压或高压喷雾、涂布、浸没(例如，浸渍)或注射来施用过敏反应激发子蛋白或多肽。本领域的技术人员可预想到其它合适的施用程序，只要其能够实现过敏反应激发子多肽或蛋白与植物或植物种子细胞的接触。一旦经本发明的肽或组合物处理，就可以将种子种植在天然或人造土壤中并且使用常规程序培育以产生植物。由根据本发明处理的种子繁殖出植物之后，可经一次或多次施用本发明的肽或组合物来处理植物以赋予植物抗病性，增强植物生长，防治植物上的昆虫，赋予生物或非生物胁迫耐受性，提高所取插条的抗干燥性，赋予采收的水果或蔬菜采后抗病性或抗干燥性，和/或对于采收的水果或蔬菜提高的水果或蔬菜成熟寿命。
可根据本发明单独地或与其它物质混合向植物或植物种子施用本发明的肽或组合物。可选地，可单独地向植物施用所述肽或组合物，其它物质在不同时间施用。
在本发明的涉及使用转基因植物和转基因种子的替代性实施方案中，不需要向植物或种子局部施用本发明的肽。相反，根据本领域公知的程序产生经编码本发明的肽的DNA分子转化的转基因植物。适于在植物中表达(即，含有在植物中可操作的翻译和转录控制序列)的载体可通过使用微量移液管直接显微注射到植物细胞中以机械转移重组DNA。Crossway，Mol.Gen.Genetics,202:179-85(1985)，其据此通过引用整体并入。也可以使用聚乙二醇将遗传物质转移到植物细胞中。Krens等，Nature,296:72-74(1982)，其据此通过引用整体并入。
用编码本发明的肽的基因转化植物细胞的另一种方法是对宿主细胞的粒子轰击(也称为基因枪转化)。这可按几种方式之一实现。第一种涉及在细胞处推进惰性或生物活性粒子。这种技术在Sanford等的美国专利第4,945,050、5,036,006和5,100,792中有描述，所述专利据此通过引用并入。通常，这个程序涉及在有效穿透细胞外表面并掺入其内部的条件下在细胞处推进惰性或生物活性粒子。当利用惰性粒子时，可通过为粒子涂上含有异源DNA的载体将载体引入细胞中。可选地，靶细胞可被载体围绕，使得载体通过粒子尾流被带进细胞中。也可将生物活性粒子(例如，含有载体和异源DNA的干燥细菌细胞)推进到植物细胞内。
引入的另一种方法为原生质体与其它实体，微细胞、细胞、溶酶体或其它可融脂质表面体的融合。Fraley等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,79:1859-63(1982)，其据此通过引用整体并入。
也可通过电穿孔将DNA分子引入植物细胞内。Fromm等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:5824(1985)，其据此通过引用整体并入。在这种技术中，植物原生质体在含有表达盒的质粒的存在下被电穿孔。高场强的电脉冲可逆地使生物膜通透，从而允许引入质粒。电穿孔的植物原生质体重新形成细胞壁，分裂并再生。
将DNA分子引入植物细胞的另一种方法是使植物细胞感染先前经该基因转化的根癌农杆菌或发根农杆菌(A.rhizogenes)。在本领域已知的适当条件下，使转化的植物细胞生长以形成枝条和根，并进一步发育成植物。通常，这个程序涉及为植物组织接种细菌悬液并在25-28℃下在无抗生素的再生培养基上温育组织48至72小时。农杆菌是革兰氏阴性(gram-negative)家族根瘤菌科的代表属。其种是造成冠瘿(根癌农杆菌)和发根病(发根农杆菌)的原因。冠瘿瘤和发根内的植物细胞经诱导产生称为冠瘿碱(opine)的氨基酸衍生物，其仅被细菌分解代谢。负责冠瘿碱表达的细菌基因是嵌合表达盒的控制元件的便利来源。另外，对冠瘿碱存在的测定可用于鉴定转化的组织。可借助于根癌农杆菌的Ti质粒或发根农杆菌的Ri质粒，将异源基因序列引入适当的植物细胞中。Ti或Ri质粒在受农杆菌感染时传播到植物细胞并稳定地整合到植物基因组中。J.Schell，Science,237:1176-83(1987)，其据此通过引用整体并入。
转化之后，转化的植物细胞必须再生。由培养的原生质体的植物再生在Evans等，Handbook of Plant Cell Cultures，第1卷：(MacMillan Publishing Co.,New York,1983)；和Nasil I.R.(编)，Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants,Acad.Press,Orlando，第1卷，1984和第Ill卷(1986)中有描述，其据此通过引用整体并入。
已知几乎所有植物均可由培养的细胞或组织再生。再生方式因植物种类而不同，但通常首先提供转化原生质体的悬液或装有转化外植体的皮氏培养皿(petri plate)。形成愈伤组织并且可由愈伤组织诱导芽并且随后生根。可选地，可在愈伤组织中诱导胚形成。这些胚与天然胚一样发芽以形成植物。培养基通常会含有各种氨基酸和激素，如生长素和细胞分裂素。向培养基中添加谷氨酸和脯氨酸也是有利的，尤其是对于诸如玉米和苜蓿等种类而言。有效的再生将取决于培养基、基因型和培养史。如果控制这三种变量，则再生通常是可重现且可重复的。
表达盒稳定地并入转基因植物之后，可以通过有性杂交将其转移到其它植物。根据要杂交的种类，可以使用许多标准育种技术中的任一种。
一旦产生这种类型的转基因植物，就可根据常规程序培育植物本身，编码过敏反应激发子的基因的存在产生了抗病性、增强的植物生长、植物上昆虫的防治、非生物或生物胁迫耐受性、所取插条提高的抗干燥性、采收的水果或蔬菜中的采后抗病性或抗干燥性，和/或对于采收的水果或蔬菜提高的水果或蔬菜成熟寿命。
可选地，从转基因植物回收转基因种子。然后可将这些种子种植在土壤中并使用常规程序培育以产生转基因植物。在有效赋予植物抗病性，增强植物生长，防治昆虫，赋予非生物或生物胁迫耐受性，提高所取插条的抗干燥性，在采收的水果或蔬菜中赋予采后抗病性或抗干燥性，和/或对于采收的水果或蔬菜赋予提高的水果或蔬菜成熟寿命的条件下，由种植的转基因种子繁殖转基因植物。
当根据本发明使用转基因植物和植物种子时，它们另外可用与用于处理施用了本发明的肽或本发明的组合物的植物和种子相同的物质处理。这些其它物质，包括本发明的肽或组合物，可通过以上提到的程序，包括高压或低压喷雾、注射、涂布和浸没向转基因植物和植物种子施用。类似地，在由转基因植物种子繁殖出植物之后，可经一次或多次施用本发明的肽或组合物来处理植物以赋予抗病性，增强生长，防治昆虫，赋予非生物或生物胁迫耐受性，所取插条的抗干燥性，在采收的水果或蔬菜中赋予采后抗病性或抗干燥性，和/或对于采收的水果或蔬菜赋予提高的水果或蔬菜成熟寿命。
此类转基因植物也可用常规的植物处理剂，例如如上所述的杀菌剂或杀生剂、蛋白酶抑制剂、非离子型表面活性剂、肥料、除草剂、杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、生物接种剂、植物调节剂及其混合物处理。
实施例
提供以下实施例以说明本发明的实施方案，但决非旨在限制其范围。
实施例1-SEQ ID NO:93的“HR盒”肽的开发
最初基于对许多诱导过敏反应的序列(P1，SEQ ID NO:4；P4，SEQ ID NO:5；和P15，SEQ ID NO:64等)的检查而开发HR盒。鉴定了亮氨酸和异亮氨酸残基的重复序列。选择P4作为代表性序列，作为将揭示HR激发的序列决定因素的突变研究的基础。测试烟草中的HR，如Wei,Science 257:85-88(1992)中所述，其据此通过引用整体并入。简言之，按500μg/ml的浓度将肽溶于水溶液中。用等体积的水进行四次连续稀释，产生为500、250、125、62.5、31.25μg/ml肽溶液的肽样品。使用5-7周龄(开花前)的红花烟草(Nicotiana tabacum)栽培品种xanthi植物。用牙签在叶面(leaf panel)中部轻轻刺穿叶片。然后经由无针注射器(needle-less syringe)将肽溶液输注到伤口内，填充叶面。将每种肽样品输注到2株不同植物的叶片中。在接下来的48小时观察叶片并对枯萎和褐变、程序性细胞死亡典型的病变进行评分。这些突变研究具有三个主要目标：(1)增加肽的溶液稳定性；(2)产生破坏性突变以检验对HR激发最重要的残基；和(3)产生保守性突变以鉴定对特定氨基酸的特异性程度。
针对以下一项或多项对肽进行评估：溶解性、对化学降解的稳定性、填充剂对溶液稳定性的影响、氧化保护和溶液稳定性研究。
通过产生纯的、化学合成的肽于去离子水中的0.2％AI(活性成分)溶液，并且观察溶液在48小时内在室温下沉淀的证据来评估溶解性。P1(SEQ ID NO:4)很大程度上不溶于水。然而，有几个谷氨酰胺残基置换谷氨酸残基的突变体(P1-2E,8E,11E,15E,18E，SEQ IDNO:46)可溶。P4(SEQ ID NO:5)和P4-14S(SEQ ID NO:6)也完全可溶。
进行后续实验以更好地量化肽溶解性。将20-50mg纯的肽与0.25ml水混合并且添加越来越多的水，直至肽溶解。这些实验估计P1(SEQ ID NO:4)的溶解性<1mg/ml，P4(SEQID NO:5)的溶解性为100mg/ml，且P1-18K(SEQ ID NO:45)的溶解性为20mg/ml。
通过产生纯的、化学合成的肽于去离子水中的0.2％AI溶液，0.25％重量体积比的GXL(杀生物剂)和50毫摩尔(mM)如下的八种缓冲液(单独地)：MES pH 5.6、MOPSpH 6.5、柠檬酸盐pH 7.2、EDDS pH 7.3、EDTA pH 8、磷酸盐pH 8、咪唑pH 8和TES pH 8，来评估在各种pH缓冲液中对化学降解的稳定性。在HPLC上观察溶液在数周内在高温(50℃)下降解的证据(相对于0时样品，随时间推移肽信号的损失％)。P1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E(SEQ ID NO:46)比P1(SEQ ID NO:4)更稳定(80％以上40天相对于20天)，并且P4-14S(SEQID NO:6)明显比P4(SEQ ID NO:5)更稳定(80％以上35天相对于3天)。按该顺序，对于P1和P4-14S而言最好的缓冲液是TES pH 8和柠檬酸盐pH 7.2。在几天后观察到P1沉淀。其它肽(P1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E；P4和P4-14s)留在溶液中。
在50mM TES pH 8.0于水中的溶液和20％重量体积比(溶液)的填充剂海藻糖、麦芽糊精(maltrin)、蔗糖或滑石(单独配方)中，通过产生纯的、化学合成的肽的0.2％AI溶液，评估填充剂对P1和P1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E化学降解的影响。在HPLC上观察这些溶液随时间推移在高温(50℃)下降解的证据(相对于0时样品，随时间推移肽信号的损失％)。温育6天后所有混合物中P1的浓度降到低于原始肽浓度的60％。相反，所有样品中p1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E的浓度至少14天保持高于原始浓度的80％。对于P1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E而言最好的填充剂是滑石粉(44天高于80％)。
通过产生纯的、化学合成的肽于去离子水中的0.2％AI溶液，50mM的TES缓冲液、0.25％Proxel GXL和30％异丙醇，进行溶液稳定性研究。通过HPLC分析肽溶液相对于0时样品，随时间推移肽信号的损失％。P1-2E,-8E,-11E,-15E,-18E的最大生命周期是45天高于80％。P4-14S的最大生命周期是140天高于80％。
溶液稳定性突变：通过选择不含甲硫氨酸残基的肽序列(P4，SEQID NO:5)来增加溶液稳定性。然而，这种肽含半胱氨酸残基，导致稳定性极差。这种半胱氨酸突变为保守性置换丝氨酸(在化学结构上是硫变为氧)产生保持其激发HR的能力的P4-14s(SEQ ID NO:6)。后来证实(如以上所提到的)，P4-14s是高度稳定性肽。另外的研究用谷氨酸残基置换一个或多个谷氨酰胺残基以降低溶液中脱酰胺的可能性。具体而言，P1的变体，称为P1-2E,8E,11E,15E,18E(SEQ ID NO:46)在位置2、8、11、15和18处含有这些突变。这种肽与P1相比时表现出提高的溶解性和稳定性。
基于P4-14s稳定的主链(SEQ ID NO:6)，在该序列中的特定残基处引入破坏性的单突变。在为亮氨酸残基的情况下，这些突变为丙氨酸(更小且疏水性更低的侧链，中等破坏性突变)和/或天冬氨酸(带负电荷的侧链，高度破坏性突变)。根据所讨论的氨基酸的同一性，使插入序列突变为具有负电荷(天冬氨酸或谷氨酸)、具有疏水性侧链(缬氨酸)、最小侧链(丙氨酸)或小的极性侧链(丝氨酸)。测试这些突变体肽对过敏反应的激发。基于初始HR结果选择另外的突变。另外，通过使亮氨酸重复序列之间的单个残基缺失(用‘del’表示)或在亮氨酸重复序列之间插入丙氨酸残基(用iA表示)来估计亮氨酸/异亮氨酸残基之间的间距。
对于对HR激发很重要的那些氨基酸，选择更保守的突变以确定相互作用的特异性。使亮氨酸残基突变为异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸，后2个残基保守性较低。如上所述，测试这些突变体的HR激发。
这些突变研究的结果总结于下面表12中：
表12：突变和HR激发结果的总结
表12中，连同每个位置测试的所有突变一起，示出了P4-14s的序列。在标记的“HR阳性突变”中列出了不干扰过敏反应的那些突变。在标有“弱HR突变”的一行示出了引起过敏反应严重程度降低的那些突变。在标有“HR阴性突变”的红色一行示出了消除过敏反应的突变。符号dN2和dN4分别表示2或4个残基从肽的起点缺失；dC2表示2个残基从肽的末端缺失；del表示在该位置处的残基缺失；而iA代表在该位置之前插入丙氨酸残基。
实施例2-P1和突变体肽的溶解性和稳定性
如上所述，评估P1和在位置18处突变(甲硫氨酸经丙氨酸、苏氨酸或赖氨酸置换)的P1衍生化序列14天的溶液稳定性和化学相容性。值得注意地，P1在较低pH下(在去离子水溶液中、在50mM柠檬酸盐pH 5.6中和在50mM MES pH 6.0中)表现出溶解性问题。在这些情况下，在50℃下温育24小时后肽浓度增加。值得注意地，突变体肽通常未表现出这种问题。如图1-3所示，将数据标准化为第1天时间点的100％肽(图例中显示为肽1*并且原始肽1数据用双星号**标记)。在溶于水中的稳定性测试中(图1)，肽1适度稳定，但表现出溶解性问题。18K和18A突变体表现出略高的稳定性(14天后为10-25％)。溶于略呈酸性的柠檬酸盐缓冲液中(图2)，P1表现出溶解性和稳定性两个问题。14天后通过HPLC在溶液中未检测到P1。相反18T和18K突变体保持原始浓度的80％，并且18A突变体保持原始浓度的约60％。如图3所示，在50mM MES pH 6.0中，P1表现出更强烈的溶解性问题，在50℃下温育24小时后溶解浓度增加50％。然而，P1表现出比突变体更好的稳定性(14天后10-30％)。在柠檬酸盐pH7.2中(图6)，P1未表现出溶解性问题，但表现出弱稳定性(在50℃下7天后为原始浓度的20％)。相反，18K和18T突变体在14天后表现出>60％的稳定性。在50mM EDDS pH 7.3中(图7)，肽1表现出弱稳定性，7天后仅留下10％的物质。相比较，突变体在14天后保持至少50％的起始物质。在50mM咪唑pH 8.0中(图8)，肽1表现出特别弱的稳定性，仅3天后就降低到低于原始浓度的10％。相比较，所有突变体表现出更高的稳定性，18K和18T突变体在14天后保持60-75％的原始物质。肽1在50mM EDTA pH 8.0的溶液中表现出更好的稳定性(图9)，与18A突变体的性能匹配。然而，18K和18T突变体在50℃下温育14天后表现出更好的稳定性(提高15-20％)。当溶于磷酸盐pH 8.0中时(图10)，肽1虽然的确表现出溶解性问题(在溶液中有一些混浊)，但似乎优于突变体的稳定性。在50mM TES pH 8.0的溶液中(图11)，肽1在80℃下温育1周后90％以上降解。相比之下，18T、18K和18A突变体表现出更好的性能(在50℃下温育14天后保留71％、58％和47％)。
一般而言，肽1在各种缓冲溶液中表现出溶解性问题或弱稳定性。这通过甲硫氨酸突变为其它残基得以解决。出于稳定性，更大的残基(苏氨酸和赖氨酸)通常似乎优于丙氨酸。
实施例3-P4和突变体肽的溶解性和稳定性
如上所述，评估P4和在位置14处突变(半胱氨酸经丙氨酸/A、天冬氨酸/D、赖氨酸/K、谷氨酰胺/Q和丝氨酸/S置换)的P4衍生化序列14天的溶液稳定性和化学相容性。一般而言，肽4由于半胱氨酸的存在而表现出极弱的稳定性(图12-21)。少于1天后，在样品中未检测到原始P4HPLC峰。相比之下，所有突变体表现出更好的稳定性。这些中的大多数在50℃下保持至少50％的原始物质14天。一般而言，肽4突变体在较高pH值(>7.0)下表现出更好的稳定性。值得注意地，p4-14s可以根据条件，在14天后有规律地表现出90％的稳定性。所有突变体肽在渗透入烟草叶时(如同实施例1中一样)表现出过敏反应。
实施例4-肽1和肽4稳定性的比较
虽然肽1和肽4表现出高度序列相似性，但肽4的稳定化突变体比p1突变体更稳定。产生p1的一系列突变以赋予类似于p4-14s的稳定性。这些是：p1-1S(SEQ ID NO:109，表1)、p1-14S(SEQ ID NO:110，表1)、p1-18Q(SEQ ID NO:115，表1)、p1-23P(SEQ ID NO:118，表1)。这些肽，连同p1和p4-14s一起，溶于30％异丙醇、5mM DTPA和50mM TES pH 8.0中并测试在50℃下的稳定性。对于p4-14S和p1-1S观察到相似的稳定性，表明N末端氨基酸对肽稳定性表现出强烈影响。
实施例5-P15b和突变体的溶解性
初始结果表明p15b具有溶解性问题。它具有相对高的疏水性(0.19)。在0.2％w/v下，它部分溶于水，不溶于各50mM的柠檬酸盐pH约5.2、柠檬酸盐pH 7.0、磷酸盐pH 7.0(核查)、TES pH 8.0、EDTA pH 8.0和EDDS pH 7.0。它至少部分溶于50mM MES pH 6.0和MOPSpH 6.5。然而，P15a更易溶于水溶液。在50mM TES pH 8.0中其溶解性>10mg/ml。合成另外的包括聚谷氨酸溶解性标签的p15变体(分别为p15-59G和p15-59，SEQ ID NO:149和150)。当p15-59溶于50mM TES pH 8.0中时，它表现出>10mg/ml(1％w/v)的溶解性。
实施例6-P17/P18和变体的稳定性
如上所述，用不同的pH缓冲液测试P18(SEQ ID NO:83)的稳定性和化学相容性。P18在50℃的水性缓冲液中表现出相对较弱的稳定性。大部分样品在3天内降解到原始浓度的20％。有一个例外是50mMEDTA溶液，其在7天后降解到35％(图24)。位置12处的甲硫氨酸突变为亮氨酸(在P18-4，SEQ ID NO:164中)引起适度稳定化：14天后稳定性为60％。值得注意地，从C末端(P18-1，SEQ ID NO:163)截断最后3个氨基酸也引起稳定性显著提高(14天试验后稳定性>90％)。
实施例7-P19和变体的稳定性
一般而言，P19(SEQ ID NO:89)在各种条件下表现出相对较高的稳定性，在50℃下14天后稳定性>80％。例外的是溶于单独的水(52％)或50mM TES pH 8.0(62％)中的肽。其在位置12处的一个甲硫氨酸残基突变为亮氨酸(P19-20L，SEQ ID NO:90)引起溶于50mM柠檬酸盐pH 7.2或50mM TES pH 8.0时的稳定性适度提高(图25和26)。使用较低pH(5.5-7.0)的缓冲液时，观察到P19和P19-20L的性能相似；80％以上的肽保持14天。
实施例8-P14d、P14e、P14f稳定性
P14d序列(SEQ ID NO:175)源自青枯雷尔氏菌的popA序列。其与HR-盒基序一致并且在烟草叶中引起HR。甲硫氨酸残基的突变产生稳定化的肽P14e(SEQ ID NO:176)和P14f(SEQ ID NO:177)。突变的肽在50℃下(在50mM TES pH 8.0和30％异丙醇中)>50天表现出>85％的稳定性。在相同时间段期间，P14d表现出约50％的化学稳定性。
实施例9-生长试验
对于生长试验，将玉米和大豆种子种植在平地上，温室设施内平地中每个小室2粒种子。使种子发芽并摘去较小的植物，每个小室留下一棵植物。一旦第一片真叶完全展开且第二片叶开始展开，就初始测量植物的高度。这是通过向上拉伸最高的叶片并测量到土壤的距离来进行的。将肽按指定浓度溶于水中(下文)。然后用广泛可用的喷雾瓶用叶面喷雾处理植物，直至液体从叶片滴落。每种情况(肽或对照)处理4块平地，各14株植物。如表13所示处理玉米和大豆，并与匹配的经水处理的对照植物进行比较。使植物生长14天。再次测量植物的高度并将其与原始高度进行比较以量化生长。在一些情况下，使植物生长而2-4天不浇水，直至发生萎蔫和干旱胁迫。此时，采收植物的地上部分并称重以测定鲜重。最后，将地上物质在70℃下干燥48小时并称重以测定干生物量。表13中示出了这些生长试验的结果。按照比水处理的对照的增量％计算生长、干生物量和鲜重。
表13：生长试验结果
N.D.＝未测定
几种测试的肽在玉米和大豆中表现出生长和/或生物量增加。值得注意地，虽然P15b未引起明显生长或干生物量表型，但它的确引起鲜生物量增加，这表明水分吸收或保持增强。这是那些经处理的植物中耐旱性的指示。观察到另一种肽，即P30-3，会引起生长、鲜重和干生物量增加。
实施例10-HR反应所需的最小序列
确定对过敏反应激发最为关键的残基后，我们设计另外的突变体以检验负责这种行为的最小肽序列。由于核心HR序列(含7个亮氨酸或异亮氨酸残基，总共13个残基)的疏水性质，认识到溶解性对于最小肽而言将是一个问题。因此，向许多肽添加亲水性序列为所述肽带来在Kyte-Doolittle量表上达到约-0.2的疏水性。
最初，使用聚赖氨酸或聚精氨酸序列，即，P4具有N连接的聚R或聚K序列，或C连接的聚R或聚K序列(SEQ ID NO:35、36、38、39)。然而，渗透入烟草叶中时，这些肽引起HR非典型的坏死性病变。这导致了当聚阳离子序列渗透入烟草叶时引起中毒反应的假说。当单独的聚赖氨酸和聚精氨酸渗透到叶片中时，观察到类似的坏死性病变。因此，中止对含有增强阳离子溶解性的序列的肽的试验。值得注意地，HR+肽可含至少一个或两个阳离子氨基酸，但更大数量的正电荷似乎是有害的。作为阳离子肽的替代，考虑聚阴离子，特别是聚谷氨酸。选择聚谷氨酸是因为天冬氨酸更有可能异构化为异天冬氨酸，并且在N末端添加丝氨酸以消除焦谷氨酸在肽N末端的形成。在肽的C末端添加谷氨酸残基也是合理的。
如实施例#1所述，进行过敏反应测试。对于P4，激发HR的最小的变体肽是P4-聚E-min3(SEQ ID NO:33)。对于P1，激发HR的最小的变体肽是P1-聚E-min3(SEQ ID NO:141)。对于P18，激发HR的最小的变体肽是P18-7(SEQ ID NO:167)。对于P19，激发HR的最小的变体肽是P19-8(SEQ ID NO:173)。对于P15，激发HR的最小的变体肽是P15-59(SEQ ID NO:150)。对于P14d，激发HR的最小的变体肽是P14-30(SEQ ID NO:178)。对于P25，激发HR的最小的变体肽是P25-11(SEQ ID NO:188)。另外，产生最小肽序列，在可变位置并入HR盒特有的亮氨酸重复序列和谷氨酸残基以增加溶解性。这些序列是：P30-2(SEELEELLEELIEELL，SEQ ID NO:189)、P30-3(LEELLEELIEELLEE，SEQ ID NO:190)和P30-4(LEELLEELIEELL，SEQ ID NO:210)。这些最小HR盒序列在50mM TES中的溶解性>5mg/ml并且当渗透入烟草叶时产生HR反应。
同样，基于P3、P25、P14、P15和P19的疏水性主链序列，开发另外的肽以增强溶解性。上文，表10中列出了这些。
基于先前描述的harpin和HR+肽的特性，预计这些新肽将具有广泛的生物活性，包括诱导对TMV的抗性、对线虫的抗性、增强的胁迫和干旱抗性、增强的生长及增加的产量，如Fan等的PCT申请WO01/98501中所述，其据此通过引用整体并入。
实施例11-在烟草中引起HR反应的肽P1衍生物
对P1的变体进行HR测试(如实施例1所述)以测定HR所需的最小序列并鉴定重要的残基。经测定以下表14的肽对于HR为阳性：
表14
实施例12-在烟草中引起HR反应的肽P3衍生物
对P3的变体进行HR测试(如实施例1所述)以测定HR所需的最小序列并鉴定重要的残基。经测定以下表15的肽对于HR为阳性：
表15
值得注意的是，对于有效的HR激发，P3似乎需要比最小HR盒重复序列更长的序列。这可能是由于次优的苯丙氨酸残基和仅存在单个K残基而将这个序列中存在的疏水性残基(P3及其变体中的LLKLF)分开。然而，重要的是需要注意，预期P3-6和P3-7引起HR，另外的疏水性残基不是绝对必要的。
实施例13-在烟草中引起HR反应的肽P25衍生物
对P25的变体进行HR测试(如实施例1所述)以测定HR所需的最小序列并鉴定重要的残基。经测定以下表16的肽对于HR为阳性。
表16
重要的是需要注意，P25变体似乎需要比最小HR共有序列(SEQ IDNO:93)更大的序列才能激发HR。这可能是由于在优选亮氨酸之处存在缬氨酸残基或由于在疏水性重复序列之间存在单个亲水性残基(LLKIL)。虽然包括为HR+的P25-15、P25-16和P25-17，但它们在最高施用率下表现出仅出现在一些烟草类植物中的极弱过敏反应。值得注意地，正如对P25-15的生物反应所表明的，附加序列内容物似乎不需要亮氨酸/异亮氨酸/缬氨酸残基。
实施例14-在烟草中引起HR反应的肽P14d衍生物
对P14的变体进行HR测试(如实施例1所述)以测定HR所需的最小序列并鉴定重要的残基。经测定以下表17的肽对于HR为阳性。
表17
重要的是需要注意，P14d变体似乎需要比最小HR共有序列(SEQID NO:93)更大的序列才能激发HR。具体而言，附加C末端赖氨酸残基对于活性而言似乎是需要的。这可能是由于在疏水性重复序列之间存在单个亲水性残基(LVKLL)。
实施例15-在烟草中引起HR反应的肽P15/P20衍生物
对P15/P20的变体进行HR测试(如实施例1所述)以测定HR所需的最小序列并鉴定重要的残基。经测定以下表18的肽对于HR为阳性。
表18
实施例16-在烟草中引起HR反应的肽P17/P18衍生物
对P17和P18的变体进行HR测试(如实施例1所述)以测定HR所需的最小序列并鉴定重要的残基。经测定以下表19的肽对于HR为阳性。
表19
[*]＝TSSSPGLFQSGGDNGLGGHNANSALG的N末端序列
实施例17-在烟草中引起HR反应的肽P19衍生物
对P19的变体进行HR测试(如实施例1所述)以测定HR所需的最小序列并鉴定重要的残基。经测定以下表20的肽对于HR为阳性。
表20
重要的是需要注意，虽然P19和P19-1表现出HR，但它们与共有HR盒序列(SEQ IDNO:93)并不完全一致。然而，在P19-2和P19-3中添加邻近序列产生与共有序列一致的序列。很可能P19和P19-1中的附加异亮氨酸残基(N末端异亮氨酸和IGDN序列)提高了HR激发的倾向。
实施例18-诱导的烟草对感染烟草花叶病毒的抗性
测试肽在烟草中对烟草花叶病毒(TMV)抗性的诱导。简言之，每组(样品和对照)选择三株6-8周龄的烟草植物。遮盖植物最底层的叶片并为植物喷洒水(阴性对照)、肽、或Proact(阳性对照)的溶液。施用喷雾剂，直至叶片完全润湿，以液体从叶片滴落为指示。然后使植物变干并且去除叶片遮盖物。
处理三天后，然后为植物先前被遮盖的叶片和对侧的叶片轻轻撒上硅藻土并施用20ul的1.7ug/ml纯化的烟草花叶病毒溶液。然后通过轻轻摩擦溶液和硅藻土穿过叶片表面，使TMV溶液遍布叶片表面。接种两分钟后，用水将硅藻土从叶片上冲洗掉。TMV接种3天后，基于观察到的TMV病变数为叶片评分。还对过敏反应的迹象，包括受影响叶片的变黄和萎蔫，为叶片评分。
表21中描述的效力是指在经处理的相对于UTC植物上，TMV病变的减退％。被遮盖叶片上的TMV的减少指示植物中的系统免疫反应，而未遮盖叶片上的减少指示局部反应。星号指示源自T检验的P值<0.05。
表21：TMV抗性总结
一般而言，在烟草中激发过敏反应的肽也赋予对TMV的强烈抗性。所述肽在接受处理的叶片中提供抗性。然而，所述肽也引起“系统获得性抗性”，从而植物一个部分中的免疫反应触发增强在植物其它部分中的免疫力的信号传导。这通过并未直接接受肽处理的被遮盖叶片中的TMV感染减少得以证实。引起特别强烈的免疫反应的肽包括最小HR盒肽序列中的一些：P14d、P25-11和P30-3。
实施例19-肽种子处理对根和枝条生长的影响
测试肽对生长资源向枝条(地上)和根(地下)的分配的生物学影响。按0.2、2或5μg/ml将肽溶于总体积100ml的去离子水中。然后将玉米或大豆种子浸泡在肽溶液中一小时。未处理的对照(UTC)植物浸泡在去离子水中。准备300ml透明塑料饮料杯(DartContainer Corporation)用于种植，在底部画一个十字，将底部分成四等分。然后为杯子填充已筛为1/4”的Sunshine Mix#1土壤(SunGro Horticulture)。向土壤中添加100ml水。然后通过将种子轻轻压入土壤顶部来种植经处理的种子。然后再用50ml松散土壤遮盖种子。使种子发芽并生长12-14天。
按照从土壤到每株植物最高的叶片稍微展开的尖端的距离来测量枝条的长度。将未能发芽或表现出生长萎缩的植物从试验中去除。萎缩定义为在数据收集时缺乏完全展开的真叶或通过眼睛判断展开的真叶<处理组平均叶片面积的1/2。通常每个处理组种植30颗种子并将15-25株植物用于数据收集。
通过对初生根跨过杯底的四分之一标记的次数计数来估计根生长。常常沿着杯子底部周长观察到这些，尽管一些沿着容器侧面可见并且被计数好像穿过四分之一线的垂直延伸。这个数字除以4得到根生长指数。发现该指数与测量的总初生根长度(从根部冲洗土壤后并直接测量的所有初生根的长度之和)约90％相关。
表22：根和枝条生长的总结
肽(宿主) SEQ ID NO: 比率(μg/ml) 根(％) 枝条(％)
P4-14s(大豆) 6 0.2 13.5* -0.1
P14c(大豆) 199 5.0 14.4* 9.0*
P15a(玉米) 63 0.2 14.2* -4.5
P15b(大豆) 49 5.0 34* 15.6*
P18(玉米) 83 2.0 7.7 -2.0
P30-3(玉米) 190 0.2 15.4* -0.7
P30-3(大豆) 190 2.0 -17.9* 11.4*
P30-3(大豆) 190 0.2 4.2 8.8*
P15-59(玉米) 150 0.2 7.6 -8.6*
P19-8(玉米) 89 5.0 4.1 -2.7
在这样描述了本发明的基本概念后，对于本领域的技术人员而言相当显而易见的是，上述详细公开内容旨在仅以举例的方式呈现，而不是限制性的。将出现各种改变、改进和修改并且是本领域技术人员的意图，尽管本文没有明确说明。这些改变、改进和修改旨在由此提出，并且在本发明的精神和范围内。另外，所列举的处理要素或序列的顺序，或数字、字母或其它名称的使用因此并非旨在将所要求保护的方法限制为除可在权利要求中指定的任何顺序。因此，本发明仅受以下权利要求及其等同项限制。
序列表
<110> 植物保健公司
<120> 过敏反应激发子肽及其用途
<130> 29517.0343
<150> 62/058,535
<151> 2014-10-01
<150> 62/140,789
<151> 2015-03-31
<160> 232
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1/P4共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 位置1处的X是任选的，为S、N、D、isoD、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X是任选的，为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> 位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> 位置9处的X为L、I、F或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X是任选的，为D或isoD
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> 位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> 位置12处的X为M、L、I或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> 位置13处的X为M、L、I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> 位置14处的X是任选的，为任何亲水性氨基酸，
优选C、S、T、A、D、isoD、K或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> 位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、K或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> 位置16处的X为M、L、I、V、F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> 位置17处的X为M、L、I、A或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> 位置18处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、M、T或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> 位置19处的X为A、D、isoD、S、V、T、K、R、E、H或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> 位置20处的X为M、L或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(21)
<223> 位置21处的X为M、L、I、V、S或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (22)..(22)
<223> 位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)..(23)
<223> 位置23处的X为P、Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<400> 1
Xaa Xaa Gly Ile Ser Glu Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
20
<210> 2
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> 位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> 位置9处的X为L、A、D、isoD、I、F或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> 位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> 位置12处的X为L、D、isoD、I或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> 位置13处的X为L、I、V或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> 位置14处的X为任何亲水性氨基酸，优选C、S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> 位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、K或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> 位置16处的X为L、A、I、V、M或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> 位置17处的X为I、S或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> 位置18处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> 位置20处的X为L、I、V、F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(21)
<223> 位置21处的X为L或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (22)..(22)
<223> 位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<400> 2
Ser Xaa Gly Ile Ser Glu Lys Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Pro
20
<210> 3
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 位置1处的X为N、D、isoD、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> 位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> 位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> 位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> 位置18处的X为M、T、K、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (22)..(22)
<223> 位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)..(23)
<223> 位置23处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<400> 3
Xaa Xaa Gly Ile Ser Glu Lys Xaa Leu Asp Xaa Leu Leu Thr Xaa Leu
1 5 10 15
Ile Xaa Ala Leu Leu Xaa Xaa
20
<210> 4
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1
<400> 4
Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu
1 5 10 15
Ile Met Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 5
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4
<400> 5
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Cys Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 6
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S
<400> 6
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 7
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-18S
<400> 7
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Ser Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 8
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-2,18E
<400> 8
Ser Glu Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 9
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-2E-8E
<400> 9
Ser Glu Gly Ile Ser Glu Lys Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 10
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-2E-8E-15E
<400> 10
Ser Glu Gly Ile Ser Glu Lys Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Glu Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 11
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-allE
<400> 11
Ser Glu Gly Ile Ser Glu Lys Glu Leu Asp Glu Leu Leu Ser Glu Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 12
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15/20 min共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7的X是任选的，为任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> 位置14处的X是任选的，为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S
<400> 12
Ile Ala Lys Leu Ile Ser Xaa Leu Ile Xaa Ser Leu Leu Xaa
1 5 10
<210> 13
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P14d共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 位置1处的X为Q、N、D、E、g-谷氨酸、isoD或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X可为D、E、g-谷氨酸、isoD
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X可为P、D、E、isoD或g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> 位置4处的X可为M、A、S、D、E、isoD或g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> 位置5处的X可为Q、E或g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X可为A、E或g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> 位置8处的X可为M、L、E、Q、D、N、G、A、S、isoD或
g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> 位置9处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> 位置12处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> 位置13处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> 位置16处的X可为K、Q、N、E、D、R、G、A或S
<400> 13
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Val Xaa
1 5 10 15
Leu Leu Lys
<210> 14
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P14d min共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X可为M、L、E、Q、D、N、G、A、S、isoD或
g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X可为K、Q、N、E、D、R、G、A或S
<400> 14
Leu Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Val Xaa Leu Leu Lys
1 5 10
<210> 15
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3min共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 位置1处的X为L或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或
G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或
G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7处的X为L或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> 位置9处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> 位置12处的X为L或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> 位置13处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> 位置14处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G
<400> 15
Xaa Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 16
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> 位置5处的X可为L或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> 位置9处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N
<400> 16
Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Ile Leu Xaa Xaa Leu Val
1 5 10
<210> 17
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X可为T、S、A、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X可为G、T、S、A、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> 位置9处的X可为L或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> 位置13处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> 位置14处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> 位置16处的V是任选的
<400> 17
Leu Xaa Xaa Val Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Ile Leu Xaa Xaa Leu Val
1 5 10 15
<210> 18
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P17/18
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 位置1处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X可为任何氨基酸，但优选P、Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> 位置4处的X可为任何氨基酸，但优选I、Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、N、isoD、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> 位置5处的X可为任何氨基酸，但优选D、isoD、S、
E、g-谷氨酸、A、T、G、N、Q、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X可为任何氨基酸，但优选R、Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> 位置8处的X可为任何氨基酸，但优选T、Q、S、E、
g-谷氨酸、A、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> 位置9处的X可为任何氨基酸，但优选I、Q、S、E、
g-谷氨酸、 A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X可为任何氨基酸，但优选E、
g-谷氨酸、Q、S、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> 位置11处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> 位置12处的X可为L或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> 位置13处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、
G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> 位置14处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> 位置17处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、
G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> 位置18处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(21)
<223> 位置21处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (22)..(22)
<223> 位置22处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、
D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (25)..(25)
<223> 位置25处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、
G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (26)..(26)
<223> 位置26处的X可为任何氨基酸，但优选P、S、A、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27)..(27)
<223> 位置27处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、A、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R
<400> 18
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Leu
1 5 10 15
Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Xaa
20 25
<210> 19
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-9v
<400> 19
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Val Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 20
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-9F
<400> 20
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Phe Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 21
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P17/18
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 位置1处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X可为任何氨基酸，但优选P、Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> 位置4处的X可为任何氨基酸，但优选I、Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、N、isoD、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> 位置5处的X可为任何氨基酸，但优选D、isoD、S、
E、g-谷氨酸、A、T、G、N、Q、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X可为任何氨基酸，但优选R、Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> 位置8处的X可为任何氨基酸，但优选T、Q、S、E、
g-谷氨酸、A、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> 位置9处的X可为任何氨基酸，但优选I、Q、S、E、
g-谷氨酸、 A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X可为任何氨基酸，但优选E、
g-谷氨酸、Q、S、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> 位置11处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、
g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> 位置12处的X可为L或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> 位置13处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、
G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> 位置14处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> 位置17处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、
G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> 位置18处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(21)
<223> 位置21处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (22)..(22)
<223> 位置22处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、
D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (25)..(25)
<223> 位置25处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、
G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (26)..(26)
<223> 位置26处的X可为任何氨基酸，但优选P、S、A、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27)..(27)
<223> 位置27处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、A、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R
<400> 21
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Leu
1 5 10 15
Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Xaa
20 25
<210> 22
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-12i
<400> 22
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Ile Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 23
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-12f
<400> 23
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Phe Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 24
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-13i
<400> 24
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Ile Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 25
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P17/18 min共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 位置1处的X可为L或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、
D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、
G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、
D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、
G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> 位置11处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、
D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<400> 25
Xaa Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Leu Xaa Xaa Leu Leu
1 5 10
<210> 26
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 位置1处的X是任选的并且可为L、I、V、F或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、
G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> 位置4处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、
D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> 位置5处的X可为L或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、
G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、
G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> 位置11处的X可为任何氨基酸，但优选R、A、S、
T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> 位置12处的X可为L、I、V、F或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> 位置13处的X可为L、I、V、F或M
<400> 26
Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Leu Ile Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 27
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-15a
<400> 27
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 28
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-15k
<400> 28
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Lys Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 29
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-15s
<400> 29
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Ser Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 30
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-15i
<400> 30
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Ile Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 31
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 聚E-min2p4
<400> 31
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln
1 5 10 15
Ala Leu Leu Gln
20
<210> 32
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-16i
<400> 32
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Ile
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 33
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 聚E-min3P4
<400> 33
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln
1 5 10 15
Ala Leu Leu
<210> 34
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-16f
<400> 34
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Phe
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 35
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-N聚R
<400> 35
Arg Arg Arg Arg Arg Gly Gly Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 36
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-C聚R
<400> 36
Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro Gly
1 5 10 15
Gly Arg Arg Arg Arg Arg
20
<210> 37
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-20i
<400> 37
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Ile Leu Gln Pro
20
<210> 38
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-N聚K
<400> 38
Lys Lys Lys Lys Lys Gly Gly Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 39
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-C聚K
<400> 39
Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro Gly
1 5 10 15
Gly Lys Lys Lys Lys Lys
20
<210> 40
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-21f
<400> 40
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Phe Gln Pro
20
<210> 41
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1-2E
<400> 41
Asn Glu Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu
1 5 10 15
Ile Met Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 42
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1-18T
<400> 42
Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu
1 5 10 15
Ile Thr Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 43
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1-18E
<400> 43
Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 44
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1-18A
<400> 44
Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu
1 5 10 15
Ile Ala Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 45
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1-18K
<400> 45
Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu
1 5 10 15
Ile Lys Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 46
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1-2E,8E,11E,15E,18E
<400> 46
Asn Glu Gly Ile Ser Glu Lys Glu Leu Asp Glu Leu Leu Thr Glu Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 47
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b/P20共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X为N、D或isoD
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> 位置8处的X为N、D或isoD
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> 位置15处的X是任选的并且可为任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (18)..(18)
<223> 位置18处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (22)..(22)
<223> 位置22处的X是任选的并且可为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<400> 47
Lys Pro Xaa Asp Ser Xaa Ser Xaa Ile Ala Lys Leu Ile Ser Xaa Leu
1 5 10 15
Ile Xaa Ser Leu Leu Xaa
20
<210> 48
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 野生型P15
<400> 48
Gln Lys Asp Val Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro
1 5 10 15
Gln Asp Ala Ser Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu
20 25 30
Ile Ser Ala Leu Ile Met Ser Leu Leu Gln Met Leu Thr
35 40 45
<210> 49
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b
<400> 49
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Met Ser Leu Leu Gln
20
<210> 50
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-8D-18E
<400> 50
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ser Leu Leu Gln
20
<210> 51
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-8D-18A
<400> 51
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Ala Ser Leu Leu Gln
20
<210> 52
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-8D-18S
<400> 52
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Ser Ser Leu Leu Gln
20
<210> 53
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-8D-18T
<400> 53
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Thr Ser Leu Leu Gln
20
<210> 54
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-8D-18K
<400> 54
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Lys Ser Leu Leu Gln
20
<210> 55
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-8D-6,18E
<400> 55
Lys Pro Asn Asp Ser Glu Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ser Leu Leu Gln
20
<210> 56
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-3,8D
<400> 56
Lys Pro Asp Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Met Ser Leu Leu Gln
20
<210> 57
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-3,8D-6E
<400> 57
Lys Pro Asp Asp Ser Glu Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Met Ser Leu Leu Gln
20
<210> 58
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-3,8D-18E
<400> 58
Lys Pro Asp Asp Ser Gln Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ser Leu Leu Gln
20
<210> 59
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-3,8D-6,18E
<400> 59
Lys Pro Asp Asp Ser Glu Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ser Leu Leu Gln
20
<210> 60
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-3,8D-allE
<400> 60
Lys Pro Asp Asp Ser Glu Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ser Leu Leu Glu
20
<210> 61
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-8D-allE
<400> 61
Lys Pro Asn Asp Ser Glu Ser Asp Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ser Leu Leu Glu
20
<210> 62
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15b-3D-allE
<400> 62
Lys Pro Asp Asp Ser Glu Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ser Leu Leu Glu
20
<210> 63
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15a
<400> 63
Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser
1 5 10 15
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
20 25 30
Ile Met Ser Leu Leu Gln Met
35
<210> 64
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15
<400> 64
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Met Ser Leu Leu Gln Met
20
<210> 65
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P20
<400> 65
Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser Lys Pro
1 5 10 15
Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Leu Ile Met Ser
20 25 30
Leu Leu
<210> 66
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6/6a共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> 位置4处的X为F或Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7处的X是任选的并且可为M、E、g-谷氨酸、G、A、
S、T或K或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> 位置9处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X为H或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> 位置14处的X为E、g-谷氨酸、D或isoD
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> 位置17处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> 位置19处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<400> 66
Pro Ser Pro Xaa Thr Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Ile Val Gly Xaa Ile Leu
1 5 10 15
Xaa Ala Xaa Asn
20
<210> 67
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a
<400> 67
Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn
20
<210> 68
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6
<400> 68
Pro Ser Pro Phe Thr Gln Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu Gln
1 5 10 15
Ala Gln Asn
<210> 69
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-7A
<400> 69
Pro Ser Pro Phe Thr Gln Ala Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn
20
<210> 70
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-10N
<400> 70
Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met Asn Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn
20
<210> 71
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-4Y
<400> 71
Pro Ser Pro Tyr Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn
20
<210> 72
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-14D
<400> 72
Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Asp Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn
20
<210> 73
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-7,9A
<400> 73
Pro Ser Pro Phe Thr Gln Ala Leu Ala His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn
20
<210> 74
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-6E-7A
<400> 74
Pro Ser Pro Phe Thr Glu Ala Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn
20
<210> 75
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-6,17E-7A
<400> 75
Pro Ser Pro Phe Thr Glu Ala Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Glu Ala Gln Asn
20
<210> 76
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-allE-7A
<400> 76
Pro Ser Pro Phe Thr Glu Ala Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Glu Ala Glu Asn
20
<210> 77
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-allE-4Y-7A
<400> 77
Pro Ser Pro Tyr Thr Glu Ala Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Glu Ala Glu Asn
20
<210> 78
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-allE-7A-10N
<400> 78
Pro Ser Pro Phe Thr Glu Ala Leu Met Asn Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Glu Ala Glu Asn
20
<210> 79
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-allE-7A-14D
<400> 79
Pro Ser Pro Phe Thr Glu Ala Leu Met His Ile Val Gly Asp Ile Leu
1 5 10 15
Glu Ala Glu Asn
20
<210> 80
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-allE-4Y-7A-10N-14D
<400> 80
Pro Ser Pro Tyr Thr Glu Ala Leu Met Asn Ile Val Gly Asp Ile Leu
1 5 10 15
Glu Ala Glu Asn
20
<210> 81
<211> 50
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P17
<400> 81
Thr Ser Ser Ser Pro Gly Leu Phe Gln Ser Gly Gly Asp Asn Gly Leu
1 5 10 15
Gly Gly His Asn Ala Asn Ser Ala Leu Gly Gln Gln Pro Ile Asp Arg
20 25 30
Gln Thr Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys Ser
35 40 45
Leu Leu
50
<210> 82
<211> 50
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P17a
<400> 82
Thr Ser Ser Ser Pro Gly Leu Phe Gln Ser Gly Gly Asp Asn Gly Leu
1 5 10 15
Gly Gly His Asn Ala Asn Ser Ala Leu Gly Gln Gln Pro Ile Asp Arg
20 25 30
Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys Ser
35 40 45
Leu Leu
50
<210> 83
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18
<400> 83
Gln Gln Pro Ile Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu
1 5 10 15
Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu Ser Pro Gln
20 25
<210> 84
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18a
<400> 84
Gln Gln Pro Ile Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu
1 5 10 15
Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu Ser Pro Gln
20 25
<210> 85
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18b
<400> 85
Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu
1 5 10 15
<210> 86
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18c
<400> 86
Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu
1 5 10 15
<210> 87
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18d
<400> 87
Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu
1 5 10 15
Lys Ser Leu Leu
20
<210> 88
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18e
<400> 88
Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu
1 5 10 15
Lys Ser Leu Leu
20
<210> 89
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 全长梨火疫病菌HrpW的氨基酸116至140 (P19)
<400> 89
Ile Thr Pro Asp Gly Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp Asn Pro Leu
1 5 10 15
Leu Lys Ala Met Leu Lys Leu Ile Ala
20 25
<210> 90
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-20L
<400> 90
Ile Thr Pro Asp Gly Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp Asn Pro Leu
1 5 10 15
Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala
20 25
<210> 91
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19a
<400> 91
Ile Thr Pro Asp Gly Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp Asn Pro Leu
1 5 10 15
Leu Lys Ala Met Leu Lys Leu Ile Ala Arg Met Met Asp Gly
20 25 30
<210> 92
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19a-allL
<400> 92
Ile Thr Pro Asp Gly Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp Asn Pro Leu
1 5 10 15
Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala Arg Leu Leu Asp Gly
20 25 30
<210> 93
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> HR盒肽共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 位置1处的X为L、I、V或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> 位置2处的X是任选的并且当存在时，为任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X为任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> 位置4处的X为L、I、V或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> 位置5处的X为L或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X是任选的并且当存在时，为任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7处的X为任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> 位置8处的X为L、I、V或F
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> 位置9处的X为L、I、V或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X是任选的并且当存在时，为任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> 位置11处的X为任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> 位置12处的X为L或I
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> 位置13处的X为L、I、V或F
<400> 93
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 94
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-dN6
<400> 94
Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu Gln
1 5 10 15
Pro
<210> 95
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-dN5
<400> 95
Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu
1 5 10 15
Gln Pro
<210> 96
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-dN4
<400> 96
Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu
1 5 10 15
Leu Gln Pro
<210> 97
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-dN2
<400> 97
Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln
1 5 10 15
Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 98
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-3E
<400> 98
Ser Gln Glu Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 99
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-4L
<400> 99
Ser Gln Gly Leu Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 100
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-4A
<400> 100
Ser Gln Gly Ala Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 101
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-4D
<400> 101
Ser Gln Gly Asp Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 102
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-5V
<400> 102
Ser Gln Gly Ile Val Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 103
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-6R
<400> 103
Ser Gln Gly Ile Ser Arg Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 104
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-6V
<400> 104
Ser Gln Gly Ile Ser Val Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 105
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-7D
<400> 105
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Asp Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 106
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-7V
<400> 106
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Val Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 107
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-8V
<400> 107
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Val Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 108
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-8S
<400> 108
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Ser Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 109
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1-1S
<400> 109
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu
1 5 10 15
Ile Met Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 110
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1-14S
<400> 110
Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Met Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 111
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-10V
<400> 111
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Val Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 112
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-11V
<400> 112
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Val Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 113
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-12V
<400> 113
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Val Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 114
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-12S
<400> 114
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Ser Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 115
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1-18Q
<400> 115
Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 116
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-14V
<400> 116
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Val Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 117
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-15V
<400> 117
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Val Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 118
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P1-23P
<400> 118
Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu
1 5 10 15
Ile Met Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 119
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-17L
<400> 119
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Leu Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 120
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-17A
<400> 120
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ala Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 121
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-17V
<400> 121
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Val Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 122
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-18V
<400> 122
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Val Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 123
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-19V
<400> 123
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Val Leu Leu Gln Pro
20
<210> 124
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-19D
<400> 124
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Asp Leu Leu Gln Pro
20
<210> 125
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-19S
<400> 125
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ser Leu Leu Gln Pro
20
<210> 126
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 聚E-minP1
<400> 126
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu Ile Glu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 127
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-21S
<400> 127
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Ser Gln Pro
20
<210> 128
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-21I
<400> 128
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Ile Gln Pro
20
<210> 129
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-21V
<400> 129
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Val Gln Pro
20
<210> 130
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-22V
<400> 130
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Val Pro
20
<210> 131
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14S-dC2
<400> 131
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu
20
<210> 132
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> p4-d10
<400> 132
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 133
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> p4-d14
<400> 133
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Gln Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 134
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 聚E-min2P1
<400> 134
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu Ile Glu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Gln
20
<210> 135
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6/6a min共有
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 位置1处的X为F或Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> 位置4处的X是任选的并且可为M、E、g-谷氨酸、G、A、
S、T或K或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> 位置6处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7处的X为H或N
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> 位置11处的X为E、g-谷氨酸、D或isoD
<400> 135
Xaa Thr Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Ile Val Gly Xaa Ile Leu
1 5 10
<210> 136
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14A
<400> 136
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ala Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 137
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> p4-14D
<400> 137
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Asp Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 138
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14K
<400> 138
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Lys Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 139
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14Q
<400> 139
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Gln Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 140
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> p4-i9A
<400> 140
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Ala Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln
1 5 10 15
Leu Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 141
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 聚E-min3P1
<400> 141
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu Ile Glu
1 5 10 15
Ala Leu Leu
<210> 142
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15a-34Q-39P
<400> 142
Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser
1 5 10 15
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
20 25 30
Ile Gln Ser Leu Leu Gln Pro
35
<210> 143
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15a-39P
<400> 143
Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser
1 5 10 15
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
20 25 30
Ile Met Ser Leu Leu Gln Pro
35
<210> 144
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15a-34Q
<400> 144
Asn Phe Gly Thr Pro Asp Ser Thr Val Gln Asn Pro Gln Asp Ala Ser
1 5 10 15
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
20 25 30
Ile Gln Ser Leu Leu Gln Met
35
<210> 145
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s拟南芥
<400> 145
tctcaaggaa tttctgaaaa gcaacttgat caacttcttt ctcaacttat tcaagctctt 60
cttcaacct 69
<210> 146
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s大肠杆菌
<400> 146
agccagggta ttagcgaaaa acagctggat cagctgctga gccagctgat tcaggcactg 60
ctgcagccg 69
<210> 147
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> P1-2E,8E,11E,15E,18E拟南芥
<400> 147
aatgaaggaa tttctgaaaa ggaacttgat gaacttctta ctgaacttat tgaagctctt 60
cttcaacaa 69
<210> 148
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> P1-2E,8E,11E,15E,18大肠杆菌
<400> 148
aatgaaggta ttagcgaaaa agaactggat gaactgctga ccgaactgat tgaagcactg 60
ctgcagcag 69
<210> 149
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15-59G
<400> 149
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Gly Gly Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ser Leu Leu Glu
20
<210> 150
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15-59
<400> 150
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu Ile Glu
1 5 10 15
Ser Leu Leu Glu
20
<210> 151
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P20-5
<400> 151
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Leu Ile
1 5 10 15
Met Ser Leu Leu
20
<210> 152
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P20-6
<400> 152
Lys Pro Asn Asp Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Leu Ile
1 5 10 15
Glu Ser Leu Leu
20
<210> 153
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 水稻白叶枯病菌的全长harpin的氨基酸85-103
<400> 153
Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn Gly
20
<210> 154
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基序2
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> 位置1处的X可为P、A或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> 位置3处的X可为P、Q或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> 位置4处的X可为F、L或Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> 位置7处的X可为M或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> 位置10处的X可为H、N或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> 位置13处的X可为G或M
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> 位置14处的X可为E、D或Q
<400> 154
Xaa Ser Xaa Xaa Thr Gln Xaa Leu Met Xaa Ile Val Xaa Xaa
1 5 10
<210> 155
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6b
<400> 155
Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu Gln Ala Gln
1 5 10 15
Asn
<210> 156
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6c
<400> 156
Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
<210> 157
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6-7L
<400> 157
Pro Ser Pro Phe Thr Gln Leu Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn
20
<210> 158
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6-9E
<400> 158
Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Glu His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn
20
<210> 159
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6a-7L,9E
<400> 159
Pro Ser Pro Phe Thr Gln Leu Leu Glu His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn
20
<210> 160
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6d
<400> 160
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly
1 5 10 15
Glu Ile Leu
<210> 161
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P6d-7L-9E
<400> 161
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Phe Thr Gln Leu Leu Glu His Ile Val Gly
1 5 10 15
Glu Ile Leu
<210> 162
<211> 50
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 全长梨火疫病菌HrpW的氨基酸10至59
<400> 162
Thr Ser Ser Ser Pro Gly Leu Phe Gln Ser Gly Gly Asp Asn Gly Leu
1 5 10 15
Gly Gly His Asn Ala Asn Ser Ala Leu Gly Gln Gln Pro Ile Asp Arg
20 25 30
Gln Thr Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu Ala Glu Leu Leu Lys Ser
35 40 45
Leu Leu
50
<210> 163
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 18-1
<400> 163
Gln Gln Pro Ile Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Met Ala Gln Leu Leu
1 5 10 15
Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu
20
<210> 164
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18-4
<400> 164
Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu
1 5 10 15
Lys Ser Leu Leu Ser Pro
20
<210> 165
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18-5
<400> 165
Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys Ser
1 5 10 15
Leu Leu Ser Pro
20
<210> 166
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18-6
<400> 166
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln
1 5 10 15
Leu Leu Lys Ser Leu Leu
20
<210> 167
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18-7
<400> 167
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys
1 5 10 15
Ser Leu Leu
<210> 168
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-5
<400> 168
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ile Gly Asp Asn Pro Leu Leu Lys Ala Leu
1 5 10 15
Leu Lys Leu Ile Ala Arg Leu Leu Asp Gly
20 25
<210> 169
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-5a
<400> 169
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ile Gly Asp Asp Glu Leu Leu Lys Ala Leu
1 5 10 15
Leu Lys Leu Ile Ala Arg Leu Leu Asp Gly
20 25
<210> 170
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-6
<400> 170
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala
1 5 10 15
Arg Leu Leu Asp Gly
20
<210> 171
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-11
<400> 171
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ile Gly Asp Asn Pro Leu Leu Lys Ala Leu
1 5 10 15
Leu Lys Leu Ile Ala Arg Leu Leu
20
<210> 172
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-7
<400> 172
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala
1 5 10 15
Arg Leu Leu
<210> 173
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-8
<400> 173
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala Arg
1 5 10 15
Leu Leu
<210> 174
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 青枯雷尔氏菌PopA的氨基酸92至125
<400> 174
Gln Ala Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala Asn
1 5 10 15
Asn Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val
20 25 30
Lys Leu
<210> 175
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P14d
<400> 175
Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys
1 5 10 15
Leu Leu Lys
<210> 176
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P14e
<400> 176
Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Leu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys
1 5 10 15
Leu Leu Lys
<210> 177
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P14f
<400> 177
Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys
1 5 10 15
Leu Leu Lys
<210> 178
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P14-30
<400> 178
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val
1 5 10 15
Lys Leu Leu Lys
20
<210> 179
<211> 55
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 青枯雷尔氏菌PopA的氨基酸206至260
<400> 179
Asn Gly Ala Asp Gly Gly Asn Gly Val Asn Gly Asn Gln Ala Asn Gly
1 5 10 15
Pro Gln Asn Ala Gly Asp Val Asn Gly Ala Asn Gly Ala Asp Asp Gly
20 25 30
Ser Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys
35 40 45
Ile Leu Asn Ala Leu Val Gln
50 55
<210> 180
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P2
<400> 180
Ala Asn Gly Ala Asp Asp Gly Ser Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu
1 5 10 15
Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu Asn Ala Leu Val Gln
20 25 30
<210> 181
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25-4
<400> 181
Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met
1 5 10 15
Lys Ile Leu Asn Ala Leu Val Gln
20
<210> 182
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25
<400> 182
Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu
1 5 10 15
Asn Ala Leu
<210> 183
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25s
<400> 183
Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met
1 5 10 15
Lys Ile Leu Asn Ala Leu
20
<210> 184
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25-7
<400> 184
Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Leu
1 5 10 15
Lys Ile Leu Asn Ala Leu
20
<210> 185
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25-8
<400> 185
Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Glu Leu Met
1 5 10 15
Glu Ile Leu Asn Ala Leu
20
<210> 186
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25-20E
<400> 186
Glu Asp Gln Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Leu
1 5 10 15
Lys Ile Leu Glu Ala Leu Val Gln
20
<210> 187
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25-10
<400> 187
Ser Glu Glu Glu Glu Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Leu
1 5 10 15
Lys Ile Leu Glu Ala Leu
20
<210> 188
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25-11
<400> 188
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Leu Lys
1 5 10 15
Ile Leu Glu Ala Leu
20
<210> 189
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P30-2
<400> 189
Ser Glu Glu Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu
1 5 10 15
<210> 190
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P30-3
<400> 190
Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu Glu Glu
1 5 10 15
<210> 191
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-18e
<400> 191
Ser Glu Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Glu Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 192
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> minp4-聚E
<400> 192
Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu Glu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Glu
<210> 193
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> SEE-minp4-EE
<400> 193
Ser Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln Ala Leu Leu
1 5 10 15
Glu Glu
<210> 194
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-7E-CR
<400> 194
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Glu Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro Arg
20
<210> 195
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> p1-allE-17A
<400> 195
Asn Glu Gly Ile Ser Glu Lys Glu Leu Asp Glu Leu Leu Thr Glu Leu
1 5 10 15
Ala Glu Ala Leu Leu Gln Gln
20
<210> 196
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P4-14s-9i
<400> 196
Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Ile Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu
1 5 10 15
Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro
20
<210> 197
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> p6a-dN3-sol
<400> 197
Ser Glu Glu Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val Gly Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ala Gln Asn
20
<210> 198
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> p6a-dC4-sol
<400> 198
Ser Glu Glu Glu Pro Ser Pro Phe Thr Gln Met Leu Met His Ile Val
1 5 10 15
Gly Glu Ile Leu
20
<210> 199
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P14c
<400> 199
Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala
1 5 10 15
Asn Asn Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu
20 25 30
Val Lys Leu Leu Lys
35
<210> 200
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25-15
<400> 200
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu
1 5 10 15
Leu Lys Ile Leu Glu Ala
20
<210> 201
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25-16
<400> 201
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Val Leu Gln Lys Leu Leu Lys Ile Leu Glu
1 5 10 15
Ala Leu Val
<210> 202
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P25-17
<400> 202
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gln Lys Leu Leu Lys Ile Leu Glu Ala
1 5 10 15
Leu Val Gln
<210> 203
<211> 44
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 梨火疫病菌HrpN的氨基酸137至180
<400> 203
Ser Thr Ser Gln Asn Asp Asp Ser Thr Ser Gly Thr Asp Ser Thr Ser
1 5 10 15
Asp Ser Ser Asp Pro Met Gln Gln Leu Leu Lys Met Phe Ser Glu Ile
20 25 30
Met Gln Ser Leu Phe Gly Asp Gly Gln Asp Gly Thr
35 40
<210> 204
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3
<400> 204
Gln Asn Asp Asp Ser Thr Ser Gly Thr Asp Ser Thr Ser Asp Ser Ser
1 5 10 15
Asp Pro Met Gln Gln Leu Leu Lys Met Phe Ser Glu Ile Met Gln Ser
20 25 30
Leu Phe Gly Asp Gly Gln Asp Gly Thr
35 40
<210> 205
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3-3
<400> 205
Ser Asp Pro Met Gln Gln Leu Leu Lys Met Phe Ser Glu Ile Met Gln
1 5 10 15
Ser Leu Phe
<210> 206
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3-4
<400> 206
Ser Glu Glu Glu Leu Gln Gln Leu Leu Lys Leu Phe Ser Glu Ile Leu
1 5 10 15
Gln Ser Leu Phe
20
<210> 207
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3-6
<400> 207
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gln Gln Leu Leu Lys Leu Phe Ser Glu
1 5 10 15
Ile Leu Gln Ser Leu
20
<210> 208
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3-7
<400> 208
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Gln Gln Leu Leu Lys Leu Phe Ser Glu
1 5 10 15
Ile Leu Gln Ser
20
<210> 209
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3-11
<400> 209
Leu Gln Gln Leu Leu Lys Leu Phe Ser Glu Ile Leu Gln Ser Leu Phe
1 5 10 15
Glu Glu Glu Glu
20
<210> 210
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P30-4
<400> 210
Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu
1 5 10
<210> 211
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P30-1
<400> 211
Arg Leu Arg Arg Leu Leu Arg Arg Leu Ile Arg Arg Leu Leu Arg Pro
1 5 10 15
<210> 212
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P30-5
<400> 212
Leu Asp Asp Leu Leu Asp Asp Leu Ile Asp Asp Leu Leu Asp Asp
1 5 10 15
<210> 213
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18-13
<400> 213
Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu
1 5 10 15
<210> 214
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P14-54
<400> 214
Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys Leu Leu Lys Glu Glu
1 5 10 15
<210> 215
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P14-55
<400> 215
Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Glu Leu Leu Glu Glu Glu
1 5 10 15
<210> 216
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P14-56
<400> 216
Leu Glu Glu Leu Leu Glu Asp Leu Val Glu Leu Leu Glu Glu Glu
1 5 10 15
<210> 217
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P14-57
<400> 217
Leu Glu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Val Glu Leu Leu Glu Glu Glu
1 5 10 15
<210> 218
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3-12
<400> 218
Leu Glu Glu Leu Leu Glu Leu Phe Glu Glu Ile Leu Glu Glu Leu Phe
1 5 10 15
Glu Glu
<210> 219
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P3-13
<400> 219
Leu Glu Glu Leu Leu Lys Leu Phe Glu Glu Ile Leu Glu Glu Leu Phe
1 5 10 15
Glu Glu
<210> 220
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P20-50a
<400> 220
Ile Glu Glu Leu Ile Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu Glu Glu
1 5 10
<210> 221
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15-67
<400> 221
Ile Glu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu Glu Glu
1 5 10 15
<210> 222
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-54c
<400> 222
Leu Glu Glu Leu Leu Lys Leu Ile Glu Arg Leu Leu Glu Glu
1 5 10
<210> 223
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-54b
<400> 223
Leu Glu Glu Leu Leu Glu Leu Ile Glu Arg Leu Leu Glu Glu
1 5 10
<210> 224
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-54a
<400> 224
Leu Glu Glu Leu Leu Lys Leu Ile Glu Glu Leu Leu Glu Glu
1 5 10
<210> 225
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-54
<400> 225
Leu Glu Glu Leu Leu Glu Leu Ile Glu Glu Leu Leu Glu Glu
1 5 10
<210> 226
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P19-4
<400> 226
Gln Gly Gly Gly Gln Ile Gly Asp Asn Pro Leu Leu Lys Ala Met Leu
1 5 10 15
Lys Leu Ile Ala Arg Met Met Asp Gly
20 25
<210> 227
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P15-dN4
<400> 227
Ser Gln Ser Asn Ile Ala Lys Leu Ile Ser Ala Leu Ile Met Ser Leu
1 5 10 15
Leu Gln
<210> 228
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18-3
<400> 228
Gln Gln Pro Ile Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu
1 5 10 15
Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu Ser Pro
20 25
<210> 229
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18-2
<400> 229
Gln Gln Pro Ile Asp Arg Gln Thr Ile Glu Gln Leu Ala Gln Leu Leu
1 5 10 15
Ala Gln Leu Leu Lys Ser Leu Leu
20
<210> 230
<211> 44
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 梨火疫病菌HrpN的氨基酸137至180
<400> 230
Ser Thr Ser Gln Asn Asp Asp Ser Thr Ser Gly Thr Asp Ser Thr Ser
1 5 10 15
Asp Ser Ser Asp Pro Met Gln Gln Leu Leu Lys Met Phe Ser Glu Ile
20 25 30
Met Gln Ser Leu Phe Gly Asp Gly Gln Asp Gly Thr
35 40
<210> 231
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> P18-10
<400> 231
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Glu Leu Leu Ala Glu Leu Leu Lys
1 5 10 15
Ser Leu Leu
<210> 232
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 聚E-minP4
<400> 232
Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu Ile Gln
1 5 10 15
Ala Leu Leu Gln Pro
20

Claims (207)

1.一种分离的肽，其包含氨基酸序列(L/I/V/F)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I/V/A)-X-X-(L/I)-(L/I/V/F)(SEQ ID NO:93)
其中
所述肽不含半胱氨酸和甲硫氨酸；
位置2、6和10处的每个X是任选的，并且当存在时，为任何氨基酸；并且
位置3、7和11处的每个X为任何氨基酸。
2.根据权利要求1所述的分离的肽，其中所述肽的长度小于100个氨基酸。
3.根据权利要求2所述的分离的肽，其中所述肽的长度介于13和50个氨基酸之间。
4.根据权利要求1所述的分离的肽，其中所述分离的肽在溶于水或水溶液中时稳定。
5.根据权利要求1所述的分离的肽，其中所述分离的肽在溶于含杀生物剂的水性缓冲溶液中时抗化学降解。
6.根据权利要求1所述的分离的肽，其中所述分离的肽在水或水溶液中具有大于约0.1％的溶解性。
7.根据权利要求1所述的分离的肽，其中位置2和6处的一个或两个X不存在。
8.根据权利要求1所述的分离的肽，其中位置2和6处的两个X均存在。
9.根据权利要求1或7所述的分离的肽，其中位置10处的X不存在。
10.根据权利要求1或8所述的分离的肽，其中位置10处的X存在。
11.根据权利要求1所述的分离的肽，其中
位置2和6处的每个X，当存在时，为极性或带电荷的氨基酸；并且
位置3、7、10和11处的每个X为极性或带电荷的氨基酸。
12.根据权利要求1所述的分离的肽，其中
位置2和6处的每个X，当存在时，选自R、K、D、isoD、E、N、Q、H、S、T、Y、W、G、A和g-谷氨酸；并且
位置3、7、10和11处的每个X选自R、K、D、isoD、E、N、Q、H、S、T、Y、W、G、A和g-谷氨酸。
13.根据权利要求1所述的分离的肽，其中
位置2和6处的每个X，当存在时，选自D、isoD、E和g-谷氨酸；并且
位置3、7、10和11处的每个X选自D、isoD、E和g-谷氨酸。
14.根据权利要求13所述的分离的肽，其中所述肽包含以下的氨基酸序列：
SEELEELLEELIEELL，SEQ ID NO:189，
LEELLEELIEELLEE，SEQ ID NO:190，
LEELLEELIEELL，SEQ ID NO:210，
LEELLEELLEELLEE，SEQID NO:213，
LEQLLEDLVELLEEE，SEQ ID NO:215，
LEELLEDLVELLEEE，SEQ ID NO:216，
LEELLEELVELLEEE，SEQ ID NO:217，
LEELLELFEEILEELFEE，SEQ ID NO:218，
LEELLKLFEEILEELFEE，SEQ ID NO:219，
IEELIELIEELLEE，SEQ ID NO:220，
IEELIEELIEELLEE，SEQ ID NO:221，
LEELLELIERLLEE，SEQ ID NO:223，或
LEELLELIEELLEE,SEQ ID NO:225。
15.根据权利要求1所述的分离的肽，其还包含在SEQ ID NO:93的N末端或C末端的亲水性氨基酸序列。
16.根据权利要求15所述的分离的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:31、33、126、134、141、149、150、161、166、167、168-173、178、187-189、200-202、206-209、231或232中的一个的氨基酸序列。
17.根据权利要求1所述的分离的肽，其中所述肽包含以下的氨基酸序列：
SEEEEELDQLLSQLIQALL(SEQ ID NO:33)或其残基7-19；
KQLDQLLSQLIQALLQP(SEQ ID NO:94)；
EKQLDQLLSQLIQALLQP(SEQ ID NO:95)；
SEKQLDQLLSQLIQALLQP(SEQ ID NO:96)；
GISEKQLDQLLSQLIQALLQP(SEQ ID NO:97)；
SQGISEKQLQLLSQLIQALLQP(SEQ ID NO:132)；
SQGISEKQLDQLLQLIQALLQP(SEQ ID NO:133)；
SQGISEKQALDQLLSQLIQALLQP(SEQ ID NO:140)；
SEEEEELDQLLTQLIEALL(SEQ ID NO:141)或其残基7-19；
SEEEEEIAKLISALIESLLE(SEQ ID NO:150)或其残基7-20；
SEEEEELAQLLAQLLKSLL(SEQ ID NO:167)或其残基7-19；
SEEEEELKALLKLIARLL(SEQ ID NO:173)或其残基7-18；
SEEEEEALEQLLEDLVKLLK(SEQ ID NO:178)或其残基7-20；
SEEEEELTGVLQKLLKILEAL(SEQ ID NO:188)或其残基7-21；
SEELEELLEELIEELL(SEQ ID NO:189)；
LEELLEELIEELLEE(SEQ ID NO:190)；
SEEEEELTLTGVLQKLLKILEA(SEQ ID NO:200)或其残基7-22；
SEEEEEVLQKLLKILEALV(SEQ ID NO:201)或其残基7-19；
SEEEEELQKLLKILEALVQ(SEQ ID NO:202)或其残基7-19；
LEELLEELIEELL(SEQ ID NO:210)；
LEELLEELLEELLEE(SEQ ID NO:213)；
LEQLLEDLVELLEEE(SEQ ID NO:215)；
LEELLEDLVELLEEE(SEQ ID NO:216)；
LEELLEELVELLEEE(SEQ ID NO:217)；
LEELLELFEEILEELFEE(SEQ ID NO:218)；
LEELLKLFEEILEELFEE(SEQ ID NO:219)；
IEELIELIEELLEE(SEQ ID NO:220)；
IEELIEELIEELLEE(SEQ ID NO:221)；
LEELLELIERLLEE(SEQ ID NO:223)；
LEELLELIEELLEE(SEQ ID NO:225)；
LEQLLEDLVKLLKEE(SEQ ID NO:214)；
LEELLKLIERLLEE(SEQ ID NO:222)；或
LEELLKLIEELLEE(SEQ ID NO:224)。
18.一种分离的肽，其包含氨基酸序列XXGISEKXXXXXXXXXXXXXXXX(SEQ ID NO:1，P1/P4共有)，其中
位置1处的X是任选的并且可为S、N、D、isoD、G、A或S；
位置2处的X是任选的并且可为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置9处的X为L、I、F或V；
位置10处的X是任选的并且可为D或isoD；
位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置12处的X为M、L、I或F；
位置13处的X为M、L或I；
位置14处的X是任选的并且可为任何亲水性氨基酸；
位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、K或I；
位置16处的X为M、L、I、V或F；
位置17处的X为M、L、I、A或V；
位置18处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、M、T或K；
位置19处的X为A、D、isoD、S、V、T、K、R、E、H或G；
位置20处的X为M、L或I；
位置21处的X为M、L、I、V、S或F；
位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S；
位置23处的X为P、Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；并且
其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的稳定性或对化学降解的抗性。
19.根据权利要求18所述的分离的肽，其中所述肽不由NQGISEKQLDQLLTQLIMALLQQ(P1，SEQ ID NO:4)组成。
20.根据权利要求18所述的分离的肽，其中所述肽不由SQGISEKQLDQLLCQLIQALLQP(P4，SEQ ID NO:5)组成。
21.根据权利要求18所述的分离的肽，其中包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽由SEQ ID NO:4或5组成，并且所述分离的肽在溶于水或水溶液中时比SEQ ID NO:4或5的所述多肽更稳定。
22.根据权利要求18所述的分离的肽，其中包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:4或5，并且所述分离的肽在溶于含杀生物剂的水性缓冲溶液中时比SEQID NO:4或5的所述多肽更抗化学降解。
23.根据权利要求18所述的分离的肽，其中所述肽包含以下的氨基酸序列：
SXGISEKXXDXXXXXXXXAXXXP(SEQ ID NO:2，P4共有)，其中
位置2处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置9处的X为L、A、D、isoD、I、V或F；
位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置12处的X为L、D、isoD、I或F；
位置13处的X为L、I、V或F；
位置14处的X为任何亲水性氨基酸；
位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A、S、K或I；
位置16处的X为L、A、I、V、M或F；
位置17处的X为I、S或F；
位置18处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置20处的X为L、I、V或F；
位置21处的X为L或F；并且
位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S。
24.根据权利要求23所述的分离的肽，其中位置14处的X为S。
25.根据权利要求23所述的分离的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:6-11、19、20、22-24、27-30、32、34、37、40、98-108、111-114、116、117、119-125、127-131、136-139、191和196中的一个的氨基酸序列。
26.根据权利要求18所述的分离的肽，其中所述肽包含以下的氨基酸序列：
XXGISEKXLDXLLTXLIXALLXX(SEQ ID NO:3，P1共有)，其中
位置1处的X为N、D、isoD、G、A或S；
位置2处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置11处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置15处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置18处的X为M、T、K、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置22处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；并且
位置23处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S。
27.根据权利要求26所述的分离的肽，其中对于SEQ ID NO:3的位置2、8、11、15、22和23中的至少一个而言，X为E、g-谷氨酸、G、A或S。
28.根据权利要求26所述的分离的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:41-46、109、110、115和118中的一个的氨基酸序列。
29.根据权利要求18所述的分离的肽，其中所述肽的长度小于100个氨基酸。
30.根据权利要求29所述的分离的肽，其中所述肽的长度介于23和50个肽之间。
31.根据权利要求18所述的分离的肽，其中所述肽基本上由所列举的氨基酸序列组成。
32.根据权利要求18所述的分离的肽，其中所述肽由所列举的氨基酸序列组成。
33.一种长度小于100个氨基酸的分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:5的所述氨基酸序列。
34.根据权利要求33所述的分离的肽，其中所述分离的肽基本上由SEQ ID NO:5组成。
35.根据权利要求33所述的分离的肽，其中所述分离的肽由SEQ ID NO:5组成。
36.一种分离的肽，其包含以下的氨基酸序列
(i)KPXDSXSXIAKLISXLIXSLLX(SEQ ID NO:47，P15b/P20共有)，其中
位置3处的X为N、D或isoD；
位置6处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置8处的X为N、D或isoD；
位置15处的X是任选的并且可为任何氨基酸；
位置18处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；并且
位置22处的X是任选的并且可为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；或
(ii)IAKLISXLIXSLLX(SEQ ID NO:12，P15/20min共有)，其中
位置7处的X是任选的并且可为任何氨基酸；
位置10处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；并且
位置14处的X是任选的并且可为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S。
其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的稳定性或对化学降解的抗性。
37.根据权利要求36所述的分离的肽，其中所述分离的肽长度小于100个氨基酸。
38.根据权利要求36所述的分离的肽，其中包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:48，并且所述分离的肽在溶于水或水溶液中时比SEQ ID NO:48的所述多肽更稳定。
39.根据权利要求36所述的分离的肽，其中包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:48，并且所述分离的肽在溶于含杀生物剂的水性缓冲溶液中时比SEQ IDNO:48的所述多肽更抗化学降解。
40.根据权利要求36所述的分离的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:49-65、142-144、151或152中的一个的氨基酸序列。
41.根据权利要求36所述的分离的肽，其中所述肽基本上由所列举的氨基酸序列组成。
42.根据权利要求36所述的分离的肽，其中所述肽由所列举的氨基酸序列组成。
43.一种包含22至36个氨基酸的分离的肽，其中所述肽基本上由SEQ ID NO:49、SEQ IDNO:63或SEQ ID NO:64的氨基酸组成。
44.一种包含SEQ ID NO:65的所述氨基酸序列的分离的肽。
45.一种分离的肽，其包含以下的氨基酸序列
(i)PSPXTXXLXXIVGXILXAXN(SEQ ID NO:66，肽6/6a共有)，其中
位置4处的X为F或Y；
位置6处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置7处的X是任选的并且可为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；
位置9处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；
位置10处的X为H或N；
位置14处的X为E、g-谷氨酸、D或isoD；
位置17处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；并且
位置19处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；或
(ii)XTXXLXXIVGXIL(SEQ ID NO:135，P6/6a min共有)，其中
位置1处的X为F或Y；
位置3处的X为Q、E、g-谷氨酸、G、A或S；
位置4处的X是任选的并且根据一个实施方案，可为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；或根据另一个实施方案可为L；
位置6处的X为M、E、g-谷氨酸、G、A、S、T或K；
位置7处的X为H或N；并且
位置11处的X为E、g-谷氨酸、D或isoD；
其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的稳定性或对化学降解的抗性。
46.根据权利要求45所述的分离的肽，其中所述肽不由PSPFTQMLMHIVGEILQAQN(P6a，SEQ ID NO:67)组成。
47.根据权利要求45所述的分离的肽，其中包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:67，并且所述分离的肽在溶于水或水溶液中时比SEQ ID NO:67的所述多肽更稳定。
48.根据权利要求45所述的分离的肽，其中包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:67，并且所述分离的肽在溶于含杀生物剂的水性缓冲溶液中时比SEQ IDNO:67的所述多肽更抗化学降解。
49.根据权利要求45所述的分离的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:68-80、155-161、197和198中的一个的氨基酸序列。
50.根据权利要求45所述的分离的肽，其中所述肽的长度小于100个氨基酸。
51.根据权利要求45所述的分离的肽，其中所述肽的长度介于20和50个肽之间。
52.根据权利要求45所述的分离的肽，其中所述肽基本上由所列举的氨基酸序列组成。
53.根据权利要求45所述的分离的肽，其中所述肽由所列举的氨基酸序列组成。
54.根据权利要求45所述的分离的肽，其中所述肽不包含SEQ ID NO:154。
55.根据权利要求45所述的分离的肽，其中所述肽包含氨基酸序列PSPXTXXLXXIVGXILXAXN(SEQ ID NO:66，肽6/6a共有)。
56.根据权利要求45所述的分离的肽，其中所述肽包含氨基酸序列XTXXLXXIVGXIL(SEQID NO:135，P6/6a min共有)。
57.一种分离的肽，其包含以下的氨基酸序列
(i)LXXL(L/M)XILXXLV(SEQ ID NO:16，P25共有)其中
位置2处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置3处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置6处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置9处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G；并且
位置10处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N；或
(ii)LXXVLXXL(L/M)XILXXLV(SEQ ID NO:17，P25共有)其中
位置2处的X可为T、S、A、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q或N；
位置3处的X可为G、T、S、A、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q或N；
位置6处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置7处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置10处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置13处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G；
位置14处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N；并且
位置16处的V是任选的。
58.根据权利要求57所述的分离的肽，其中所述肽不由SEQ ID NO:179组成。
59.根据权利要求57所述的分离的肽，其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:179，并且所述分离的肽在溶于水或水溶液中时比SEQ ID NO:179的所述多肽更稳定。
60.根据权利要求57所述的分离的肽，其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:179，并且所述分离的肽在溶于含杀生物剂的水性缓冲溶液中时比SEQ ID NO:179的所述多肽更抗化学降解。
61.根据权利要求57所述的分离的肽，其中所述肽包含氨基酸序列LXXL(L/M)XILXXLV(SEQ ID NO:16，P25共有)。
62.根据权利要求57所述的分离的肽，其中所述肽包含氨基酸序列LXXVLXXL(L/M)XILXXLV(SEQ ID NO:17，P25共有)。
63.根据权利要求57所述的分离的肽，其中所述肽包含氨基酸序列LXXVLXXL(L/M)XILXXL(SEQ ID NO:17，P25共有)。
64.根据权利要求57所述的分离的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:180-188中的一个的氨基酸序列。
65.根据权利要求57所述的分离的肽，其中所述肽的长度小于100个氨基酸。
66.根据权利要求57所述的分离的肽，其中所述肽的长度介于20和50个肽之间。
67.一种分离的肽，其包含以下的氨基酸序列
(i)XXXXXXXXXXX(L/M)XXLLXXLLXXLLXXX(SEQ ID NO:18，P17/18)，其中
位置1处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置2处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置3处的X可为任何氨基酸，但优选P、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置4处的X可为任何氨基酸，但优选I、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、N、isoD、K或R；
位置5处的X可为任何氨基酸，但优选D、isoD、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、N、Q、K或R；
位置6处的X可为任何氨基酸，但优选R、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N或K；
位置7处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置8处的X可为任何氨基酸，但优选T、Q、S、E、g-谷氨酸、A、G、D、isoD、N、K或R；
位置9处的X可为任何氨基酸，但优选I、Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置10处的X可为任何氨基酸，但优选E、g-谷氨酸、Q、S、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置11处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、E、g-谷氨酸、A、T、G、D、isoD、N、K或R；
位置13处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置14处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置17处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置18处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置21处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；
位置22处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置25处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置26处的X可为任何氨基酸，但优选P、S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；并且
位置27处的X可为任何氨基酸，但优选Q、S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；或
(ii)(L/M)XXLLXXLLXXLL(SEQ ID NO:25，P17/18min共有)，其中
位置2处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置3处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置6处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置7处的X可为任何氨基酸，但优选Q、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、N、K或R；
位置10处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；并且
位置11处的X可为任何氨基酸，但优选S、A、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，并且相对于包含所述相应的野生型氨基酸序列的多肽，所述一个或多个突变提高了所述分离的肽的水溶解性、稳定性或对化学降解的抗性。
68.根据权利要求67所述的分离的肽，其中所述肽不由SEQ ID NO:162组成。
69.根据权利要求67所述的分离的肽，其中包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:162，并且所述分离的肽在溶于水或水溶液中时比SEQ ID NO:162的所述多肽更稳定。
70.根据权利要求67所述的分离的肽，其中包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:162，并且所述分离的肽在溶于含杀生物剂的水性缓冲溶液中时比SEQID NO:162的所述多肽更抗化学降解。
71.根据权利要求67所述的分离的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:84-88、163-167、228、229和231中的一个的氨基酸序列。
72.根据权利要求67所述的分离的肽，其中所述肽包含氨基酸序列XXXXXXXXXXX(L/M)XXLLXXLLXXLLXXX(SEQ ID NO:18，P17/18共有)。
73.根据权利要求67所述的分离的肽，其中所述肽包含氨基酸序列(L/M)XXLLXXLLXXLL(SEQ ID NO:25，P17/18min共有)。
74.根据权利要求67所述的分离的肽，其中所述肽的长度小于100个氨基酸。
75.根据权利要求67所述的分离的肽，其中所述肽的长度介于20和50个肽之间。
76.一种分离的肽，其包含氨基酸序列XLXX(L/M)LXLIXX(L/I/V/F/M)(L/I/V/F/M)(SEQID NO:26，P19共有)，其中
位置1处的X是任选的并且可为L、I、V、F或M；
位置3处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；
位置4处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；
位置7处的X可为任何氨基酸，但优选K、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或R；
位置10处的X可为任何氨基酸，但优选A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N、K或R；并且
位置11处的X可为任何氨基酸，但优选R、A、S、T、G、D、isoD、E、g-谷氨酸、Q、N或K。
77.根据权利要求76所述的分离的肽，其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，包含相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:89，并且所述分离的肽在溶于水或水溶液中时比SEQ ID NO:89的所述多肽更稳定。
78.根据权利要求76所述的分离的肽，其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:89，并且所述分离的肽在溶于含杀生物剂的水性缓冲溶液中时比SEQ ID NO:89的所述多肽更抗化学降解。
79.根据权利要求76所述的分离的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:90-92、168-173和226中的一个的氨基酸序列。
80.根据权利要求76所述的分离的肽，其中所述肽的长度小于100个氨基酸。
81.根据权利要求76所述的分离的肽，其中所述肽的长度介于20和50个肽之间。
82.根据权利要求76所述的分离的肽，其中位置1处的所述氨基酸残基存在。
83.一种分离的肽，其包含以下的氨基酸序列
(i)XXXXXXLXXLLXXLVXLLK(SEQ ID NO:13，P14d共有)，其中
位置1处的X可为：Q、N、D、E、g-谷氨酸、isoD或S；
位置2处的X可为：D、E、g-谷氨酸、isoD；
位置3处的X可为：P、D、E、isoD或g-谷氨酸；
位置4处的X可为M、A、S、D、E、isoD或g-谷氨酸
位置5处的X可为Q、E或g-谷氨酸；
位置6处的X可为A、E或g-谷氨酸；
位置8处的X可为M、L、E、Q、D、N、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置9处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置12处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置13处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；并且
位置16处的X可为K、Q、N、E、D、R、G、A或S；或
(ii)LXXLLXXLVXLLK(SEQ ID NO:14，P14d min共有)，其中
位置2处的X可为M、L、E、Q、D、N、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置3处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置6处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；
位置7处的X可为Q、N、E、D、G、A、S、isoD或g-谷氨酸；并且
位置10处的X可为K、Q、N、E、D、R、G、A或S。
84.根据权利要求83所述的分离的肽，其中所述肽不由SEQ ID NO:174组成。
85.根据权利要求83所述的分离的肽，其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:174，并且所述分离的肽在溶于水或水溶液中时比SEQ ID NO:174的所述多肽更稳定。
86.根据权利要求83所述的分离的肽，其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:174，并且所述分离的肽在溶于含杀生物剂的水性缓冲溶液中时比SEQ ID NO:174的所述多肽更抗化学降解。
87.根据权利要求83所述的分离的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:175-178和199中的一个的氨基酸序列。
88.根据权利要求83所述的分离的肽，其中所述肽包含氨基酸序列XXXXXXLXXLLXXLVXLLK(SEQ ID NO:13，P14d共有)。
89.根据权利要求83所述的分离的肽，其中所述肽包含氨基酸序列LXXLLXXLVXLLK(SEQID NO:14，P14d min共有)。
90.根据权利要求83所述的分离的肽，其中所述肽的长度小于100个氨基酸。
91.根据权利要求83所述的分离的肽，其中所述肽的长度介于12和50个肽之间。
92.一种分离的肽，其包含以下的氨基酸序列
(i)(L/M)XXLLX(L/M)FXXI(L/M)XX(SEQ ID NO:15，P3min共有)其中
位置2处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置3处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置6处的X可为K、Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；
位置9处的X可为E、g-谷氨酸、D、isoD、Q、N、T、S、A或G；
位置10处的X可为A、G、S、T、E、g-谷氨酸、D、isoD、Q或N；
位置13处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G；并且
位置14处的X可为Q、N、E、g-谷氨酸、D、isoD、T、S、A或G。
93.根据权利要求92所述的分离的肽，其中所述肽不由SEQ ID NO:230或其C末端31个氨基酸的部分组成。
94.根据权利要求92所述的分离的肽，其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:230，并且所述分离的肽在溶于水或水溶液中时比SEQ ID NO:230的所述多肽更稳定。
95.根据权利要求92所述的分离的肽，其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:230，并且所述分离的肽在溶于含杀生物剂的水性缓冲溶液中时比SEQ ID NO:230的所述多肽更抗化学降解。
96.根据权利要求92所述的分离的肽，其中所述分离的肽相对于相应的野生型氨基酸序列包含一个或多个突变，包含所述相应的野生型氨基酸序列的所述多肽为SEQ ID NO:230，并且所述分离的肽比SEQ ID NO:230的所述多肽更易溶于水溶液中。
97.根据权利要求92所述的分离的肽，其中所述肽由SEQ ID NO:204组成。
98.根据权利要求92所述的分离的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:205-209中的一个的氨基酸序列。
99.根据权利要求92所述的分离的肽，其中所述肽的长度小于100个氨基酸。
100.根据权利要求92所述的分离的肽，其中所述肽的长度介于12和30个肽之间。
101.根据权利要求1至100中的一项所述的分离的肽，其中所述肽为至少90％纯度。
102.根据权利要求1至30、33、36至40、44至51、54至96和98至100中的一项所述的分离的肽，其中所述肽是包含经由肽键偶合至所述氨基酸序列的第二氨基酸序列的融合多肽。
103.根据权利要求102所述的分离的肽，其中所述第二氨基酸序列包括纯化标签。
104.根据权利要求103所述的分离的肽，其中所述第二氨基酸序列还包括所述纯化标签和所述氨基酸序列之间的可裂解接头序列。
105.根据权利要求102所述的分离的肽，其中所述肽是包含与所述肽的第二氨基酸序列连接的所述肽的第一氨基酸序列的融合多肽。
106.根据权利要求102所述的分离的肽，其中所述第二氨基酸序列包括N末端或C末端亲水性氨基酸序列。
107.根据权利要求106所述的分离的肽，其中所述亲水性氨基酸序列包含多个Glu(E)氨基酸残基。
108.一种融合多肽，其包含多个串联连接在一起的氨基酸序列，所述多个氨基酸序列中的每一个构成根据权利要求1至30、33、36至40、44至51、54至96和98至100中的一项所述的肽。
109.根据权利要求108所述的融合多肽，其中所述多个氨基酸序列通过可裂解接头序列连接在一起。
110.根据权利要求108所述的融合多肽，其中所述多个氨基酸序列各自包含纯化标签、N末端或C末端亲水性氨基酸序列或两者。
111.一种组合物，其包含根据权利要求1至107中的一项所述的一种或多种肽或根据权利要求108至110中的一项所述的融合多肽及载体。
112.根据权利要求111所述的组合物，其中所述组合物为澄清细胞提取物。
113.根据权利要求111所述的组合物，其还包含选自肥料、除草剂、杀虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀菌剂、生物接种剂、植物调节剂及其混合物的添加剂。
114.根据权利要求113所述的组合物，其中所述杀虫剂为新烟碱杀虫剂、有机磷酸酯杀虫剂、拟除虫菊酯杀虫剂、大环内酯杀虫剂、氨基甲酸酯杀虫剂、二酰胺杀虫剂、阿维菌素杀虫剂、几丁质合成抑制剂或其任何组合。
115.根据权利要求113所述的组合物，其中所述杀真菌剂为甲氧丙烯酸酯杀真菌剂、三唑杀真菌剂、琥珀酸脱氢酶杀真菌剂、苯基酰胺杀真菌剂、苯基吡咯杀真菌剂、邻苯二甲酰亚胺杀真菌剂、二硫代氨基甲酸酯杀真菌剂、苯并咪唑杀真菌剂或其任何组合。
116.根据权利要求113所述的组合物，其中所述杀线虫剂为氨基甲酸酯杀线虫剂。
117.根据权利要求113所述的组合物，其中所述杀菌剂为双氯酚和苯甲醇半缩甲醛杀菌剂、异噻唑啉酮杀菌剂或其组合。
118.根据权利要求113所述的组合物，其中生物接种剂为慢生根瘤菌属种、芽孢杆菌属种、链霉菌属种、木霉属种、巴斯德氏菌属种或其任何组合。
119.根据权利要求113所述的组合物，其中所述组合物包含：
肽P1、P4-14S、P6a、P14d、P15a、P18、P19或P25中的一种或多种；和
噻虫胺、噻虫胺与坚强芽孢杆菌的组合、吡虫啉或吡虫啉与坚强芽孢杆菌的组合。
120.根据权利要求113所述的组合物，其中所述组合物包含：
肽P1、P4-14S、P6a、P14d、P15a、P18、P19或P25中的一种或多种；和
噻虫嗪；噻虫嗪、精甲霜灵和咯菌腈的组合；噻虫嗪、精甲霜灵、咯菌腈和嘧菌酯的组合；噻虫嗪和阿维菌素的组合；噻虫嗪、阿维菌素和巴斯德氏菌杀线虫剂的组合；或噻虫嗪、精甲霜灵、咯菌腈、嘧菌酯、噻苯咪唑和阿维菌素的组合。
121.根据权利要求113所述的组合物，其中所述组合物包含：
肽P1、P4-14S、P6a、P14d、P15a、P18、P19或P25中的一种或多种；和
包含慢生根瘤菌属种、芽孢杆菌属种及其组合的生物接种剂。
122.根据权利要求111所述的组合物，其中所述载体为水性载体。
123.根据权利要求122所述的组合物，其中所述水性载体还包含杀生剂、蛋白酶抑制剂、非离子型表面活性剂或其组合中的一种或多种。
124.根据权利要求111所述的组合物，其中所述载体是呈微粒形式的固体载体。
125.根据权利要求124所述的组合物，其中所述固体载体为干粉。
126.一种赋予植物抗病性的方法，其包括：
向植物或植物种子或所述植物生长或预期生长的场所施用有效量的根据权利要求1至107中的一项所述的分离的肽、根据权利要求108至110中的一项所述的融合多肽、或根据权利要求111至125中的一项所述的组合物，其中所述施用有效赋予抗病性。
127.根据权利要求126所述的方法，其中所述病害为病毒性病害、细菌性病害或真菌性病害。
128.根据权利要求126所述的方法，其中所述施用用植物进行。
129.根据权利要求128所述的方法，其中所述植物耐受至少一种除草剂。
130.根据权利要求126所述的方法，其中所述施用用植物种子进行，所述方法还包括在天然或人造土壤中种植经所述肽或组合物处理的所述种子，并且由种植在所述土壤中的所述种子繁殖植物。
131.根据权利要求126所述的方法，其中所述施用在所述植物生长或预期生长的场所进行。
132.根据权利要求126所述的方法，其中所述植物选自各自呈其天然或遗传修饰形式的农业、造林、观赏和园艺植物。
133.根据权利要求126所述的方法，其中所述植物为遗传修饰的植物。
134.根据权利要求126所述的方法，其中所述待处理的植物选自苜蓿、苹果树、杏树、芦笋、鳄梨树、香蕉树、大麦、豆类、山毛榉(山毛榉属种)、秋海棠、桦树、黑莓、蓝莓、甘蓝、樟脑、芥花、胡萝卜、蓖麻、樱桃树、肉桂树、柑橘树、可可豆、咖啡、玉米、棉花、黄瓜、葫芦、桉树、冷杉、亚麻、饲料甜菜、倒挂金钟、大蒜、老鹳草、葡萄、落花生、大麻、啤酒花、唐棣、芥菜(芥菜型油菜)、黄麻、扁豆、莴苣、亚麻籽、甜瓜、芥末、橡树、燕麦、油棕、油籽油菜、橄榄、洋葱、辣椒、豌豆、桃树、梨树、天竺葵、胡椒、矮牵牛、松树(松属种)、杨树(杨属种)、仁果、马铃薯、油菜、覆盆子、水稻、橡胶树、黑麦、高粱、大豆、菠菜、云杉、南瓜、草莓、糖用甜菜、甘蔗、向日葵、茶树、柚木、烟草、西红柿、黑小麦、草皮、西瓜、小麦和柳树(柳属种)。
135.一种增强植物生长的方法，其包括：
向植物或植物种子或所述植物生长或预期生长的场所施用有效量的根据权利要求1至107中的一项所述的分离的肽、根据权利要求108至110中的一项所述的融合多肽、或根据权利要求111至125中的一项所述的组合物，其中所述施用有效增强植物生长。
136.根据权利要求135所述的方法，其中所述增强的生长包括提高的植物活力、增加的植物重量、增加的生物量、每株植物增加的花数、更高的谷粒和/或果实产量、更多的分蘖或侧枝、更大的叶片、增加的枝条生长、增加的蛋白质含量、增加的含油量、增加的淀粉含量、增加的色素含量、增加的叶绿素含量及其组合。
137.根据权利要求135所述的方法，其中所述施用用植物进行。
138.根据权利要求137所述的方法，其中所述植物耐受至少一种除草剂。
139.根据权利要求135所述的方法，其中所述施用用植物种子进行，所述方法还包括在天然或人造土壤中种植经所述肽或组合物处理的所述种子，并且由种植在所述土壤中的所述种子繁殖植物。
140.根据权利要求135所述的方法，其中所述施用在所述植物生长或预期生长的场所进行。
141.根据权利要求135所述的方法，其中所述植物选自各自呈其天然或遗传修饰形式的农业、造林、观赏和园艺植物。
142.根据权利要求135所述的方法，其中所述植物为遗传修饰的植物。
143.根据权利要求135所述的方法，其中所述待处理的植物选自苜蓿、苹果树、杏树、芦笋、鳄梨树、香蕉树、大麦、豆类、山毛榉(山毛榉属种)、秋海棠、桦树、黑莓、蓝莓、甘蓝、樟脑、芥花、胡萝卜、蓖麻、樱桃树、肉桂树、柑橘树、可可豆、咖啡、玉米、棉花、黄瓜、葫芦、桉树、冷杉、亚麻、饲料甜菜、倒挂金钟、大蒜、老鹳草、葡萄、落花生、大麻、啤酒花、唐棣、芥菜(芥菜型油菜)、黄麻、扁豆、莴苣、亚麻籽、甜瓜、芥末、橡树、燕麦、油棕、油籽油菜、橄榄、洋葱、辣椒、豌豆、桃树、梨树、天竺葵、胡椒、矮牵牛、松树(松属种)、杨树(杨属种)、仁果、马铃薯、油菜、覆盆子、水稻、橡胶树、黑麦、高粱、大豆、菠菜、云杉、南瓜、草莓、糖用甜菜、甘蔗、向日葵、茶树、柚木、烟草、西红柿、黑小麦、草皮、西瓜、小麦和柳树(柳属种)。
144.一种增加植物对生物胁迫的耐受性的方法，其包括：
向植物或植物种子或所述植物生长或预期生长的场所施用有效量的根据权利要求1至107中的一项所述的分离的肽、根据权利要求108至110中的一项所述的融合多肽、或根据权利要求111至125中的一项所述的组合物，其中所述施用有效增加所述植物对选自昆虫、蜘蛛类、线虫类、杂草及其组合的生物胁迫因素的耐受性。
145.根据权利要求144所述的方法，其中所述施用用植物进行。
146.根据权利要求145所述的方法，其中所述植物耐受至少一种除草剂。
147.根据权利要求144所述的方法，其中所述施用用植物种子进行，所述方法还包括在天然或人造土壤中种植经所述肽或组合物处理的所述种子，并且由种植在所述土壤中的所述种子繁殖植物。
148.根据权利要求144所述的方法，其中所述施用在所述植物生长或预期生长的场所进行。
149.根据权利要求144所述的方法，其中所述植物选自各自呈其天然或遗传修饰形式的农业、造林、观赏和园艺植物。
150.根据权利要求144所述的方法，其中所述植物为遗传修饰的植物。
151.根据权利要求144所述的方法，其中所述待处理的植物选自苜蓿、苹果树、杏树、芦笋、鳄梨树、香蕉树、大麦、豆类、山毛榉(山毛榉属种)、秋海棠、桦树、黑莓、蓝莓、甘蓝、樟脑、芥花、胡萝卜、蓖麻、樱桃树、肉桂树、柑橘树、可可豆、咖啡、玉米、棉花、黄瓜、葫芦、桉树、冷杉、亚麻、饲料甜菜、倒挂金钟、大蒜、老鹳草、葡萄、落花生、大麻、啤酒花、唐棣、芥菜(芥菜型油菜)、黄麻、扁豆、莴苣、亚麻籽、甜瓜、芥末、橡树、燕麦、油棕、油籽油菜、橄榄、洋葱、辣椒、豌豆、桃树、梨树、天竺葵、胡椒、矮牵牛、松树(松属种)、杨树(杨属种)、仁果、马铃薯、油菜、覆盆子、水稻、橡胶树、黑麦、高粱、大豆、菠菜、云杉、南瓜、草莓、糖用甜菜、甘蔗、向日葵、茶树、柚木、烟草、西红柿、黑小麦、草皮、西瓜、小麦和柳树(柳属种)。
152.一种增加植物对非生物胁迫的耐受性的方法，其包括：
向植物或植物种子或所述植物生长或预期生长的场所施用有效量的根据权利要求1至107中的一项所述的分离的肽、根据权利要求108至110中的一项所述的融合多肽、或根据权利要求111至125中的一项所述的组合物，其中所述施用有效增加所述植物对选自盐胁迫、水分胁迫、臭氧胁迫、重金属胁迫、低温胁迫、高温胁迫、营养胁迫及其组合的非生物胁迫因素的耐受性。
153.根据权利要求152所述的方法，其中所述施用用植物进行。
154.根据权利要求153所述的方法，其中所述植物耐受至少一种除草剂。
155.根据权利要求152所述的方法，其中所述施用用植物种子进行，所述方法还包括在天然或人造土壤中种植经所述肽或组合物处理的所述种子，并且由种植在所述土壤中的所述种子繁殖植物。
156.根据权利要求152所述的方法，其中所述施用在所述植物生长或预期生长的场所进行。
157.根据权利要求152所述的方法，其中所述植物选自各自呈其天然或遗传修饰形式的农业、造林、观赏和园艺植物。
158.根据权利要求152所述的方法，其中所述植物为遗传修饰的植物。
159.根据权利要求152所述的方法，其中所述待处理的植物选自苜蓿、苹果树、杏树、芦笋、鳄梨树、香蕉树、大麦、豆类、山毛榉(山毛榉属种)、秋海棠、桦树、黑莓、蓝莓、甘蓝、樟脑、芥花、胡萝卜、蓖麻、樱桃树、肉桂树、柑橘树、可可豆、咖啡、玉米、棉花、黄瓜、葫芦、桉树、冷杉、亚麻、饲料甜菜、倒挂金钟、大蒜、老鹳草、葡萄、落花生、大麻、啤酒花、唐棣、芥菜(芥菜型油菜)、黄麻、扁豆、莴苣、亚麻籽、甜瓜、芥末、橡树、燕麦、油棕、油籽油菜、橄榄、洋葱、辣椒、豌豆、桃树、梨树、天竺葵、胡椒、矮牵牛、松树(松属种)、杨树(杨属种)、仁果、马铃薯、油菜、覆盆子、水稻、橡胶树、黑麦、高粱、大豆、菠菜、云杉、南瓜、草莓、糖用甜菜、甘蔗、向日葵、茶树、柚木、烟草、西红柿、黑小麦、草皮、西瓜、小麦和柳树(柳属种)。
160.一种赋予取自观赏植物的插条抗干燥性的方法，其包括：
向植物或所述植物生长的场所施用有效量的根据权利要求1至107中的一项所述的分离的肽、根据权利要求108至110中的一项所述的融合多肽、或根据权利要求111至125中的一项所述的组合物，其中所述施用有效赋予取自所述观赏植物的插条抗干燥性。
161.根据权利要求160所述的方法，其中所述施用用观赏植物进行。
162.根据权利要求160所述的方法，其中所述施用在所述观赏植物生长的场所进行。
163.根据权利要求160所述的方法，其中所述观赏植物为遗传修饰的观赏植物。
164.根据权利要求160所述的方法，其中所述待处理的植物选自山毛榉(山毛榉属种)、秋海棠、桦树、观赏用甘蓝、冷杉、倒挂金钟、大蒜、老鹳草、橡树、观赏用洋葱、天竺葵、矮牵牛、松树(松属种)、杨树(杨属种)、向日葵、柚木、烟草、草皮和柳树(柳属种)。
165.一种赋予水果或蔬菜采后抗病性或采后抗干燥性的方法，其包括：
向含有水果或蔬菜的植物或所述植物生长的场所施用有效量的根据权利要求1至107中的一项所述的分离的肽、根据权利要求108至110中的一项所述的融合多肽、或根据权利要求111至125中的一项所述的组合物，或
向采收的水果或蔬菜施用有效量的所述分离的肽或所述组合物，
其中所述施用有效赋予所述水果或蔬菜采后抗病性或采后抗干燥性。
166.根据权利要求165所述的方法，其中所述施用用植物进行。
167.根据权利要求166所述的方法，其中所述植物耐受至少一种除草剂。
168.根据权利要求165所述的方法，其中所述施用在所述植物生长的场所进行。
169.根据权利要求165所述的方法，其中所述施用用采收的水果或蔬菜进行。
170.根据权利要求165所述的方法，其中所述植物为遗传修饰的植物。
171.根据权利要求165所述的方法，其中所述植物选自苹果树、杏树、芦笋、鳄梨树、香蕉树、黑莓、蓝莓、甘蓝、胡萝卜、樱桃树、柑橘树、玉米、黄瓜、葫芦、饲料甜菜、大蒜、葡萄、唐棣、芥菜(芥菜型油菜)、莴苣、甜瓜、芥末、橄榄、洋葱、豌豆、桃树、梨树、胡椒、仁果、马铃薯、油菜、覆盆子、菠菜、南瓜、草莓、糖用甜菜、甘蔗、茶树、西红柿、黑小麦和西瓜。
172.一种增强水果或蔬菜成熟寿命的方法，其包括：
向含有水果或蔬菜的植物或所述植物生长的场所施用有效量的根据权利要求1至107中的一项所述的分离的肽、根据权利要求108至110中的一项所述的融合多肽、或根据权利要求111至125中的一项所述的组合物，或
向采收的水果或蔬菜施用有效量的所述分离的肽或所述组合物，
其中所述施用有效增强水果或蔬菜成熟寿命。
173.根据权利要求172所述的方法，其中所述施用用植物进行。
174.根据权利要求172所述的方法，其中所述植物耐受至少一种除草剂。
175.根据权利要求172所述的方法，其中所述施用在所述植物生长的场所进行。
176.根据权利要求172所述的方法，其中所述施用用采收的水果或蔬菜进行。
177.根据权利要求172所述的方法，其中所述植物为遗传修饰的植物。
178.根据权利要求172所述的方法，其中所述植物选自苹果树、杏树、芦笋、鳄梨树、香蕉树、黑莓、蓝莓、甘蓝、胡萝卜、樱桃树、柑橘树、玉米、黄瓜、葫芦、饲料甜菜、大蒜、葡萄、唐棣、芥菜(芥菜型油菜)、莴苣、甜瓜、芥末、橄榄、洋葱、豌豆、桃树、梨树、胡椒、仁果、马铃薯、油菜、覆盆子、菠菜、南瓜、草莓、糖用甜菜、甘蔗、茶树、西红柿、黑小麦和西瓜。
179.一种调节植物生物化学信号传导的方法，其包括
向植物或植物种子或所述植物生长或预期生长的场所施用有效量的根据权利要求1至107中的一项所述的分离的肽、根据权利要求108至110中的一项所述的融合多肽、或根据权利要求111至125中的一项所述的组合物，其中所述施用有效调节植物生物化学信号传导。
180.根据权利要求179所述的方法，其中所述植物生物化学信号传导选自一氧化氮生成、过氧化物生成或次级代谢产物的诱导；乙烯信号传导途径的激动性调节和乙烯应答基因表达的诱导；水杨酸信号传导途径的激动性调节和水杨酸应答基因表达的诱导；脱落酸途径的激动性调节和脱落酸应答基因表达的诱导；赤霉素信号传导途径的激动性调节和赤霉素应答基因表达的诱导；茉莉酸信号传导的拮抗性调节和抑制茉莉酸应答基因的表达；诱导蛋白酶抑制剂表达；诱导植物组织中的活性氧生成；诱导免疫相关和抗微生物肽生成；及诱导扩展蛋白基因表达和生成。
181.一种DNA构建体，其包含编码根据权利要求1至107中的一项所述的多肽分离的肽或根据权利要求108至110中的一项所述的融合多肽的第一核酸分子，及可操作地偶合至所述第一核酸分子的启动子有效性核酸分子。
182.一种重组表达载体，其包含根据权利要求181所述的DNA构建体。
183.一种重组宿主细胞，其包含根据权利要求181所述的DNA构建体。
184.根据权利要求183所述的重组宿主细胞，其中所述重组宿主细胞为植物原生质体。
185.根据权利要求183所述的重组宿主细胞，其中所述重组宿主细胞为细菌。
186.一种转基因植物，其包含根据权利要求183所述的重组宿主细胞。
187.一种转基因植物种子，其包含根据权利要求183所述的重组宿主细胞。
188.一种转基因植物，其包含根据权利要求181所述的DNA构建体。
189.一种转基因植物种子，其包含根据权利要求181所述的DNA构建体。
190.一种赋予植物抗病性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物；并且
使所述植物在有效容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽的条件下生长以赋予抗病性。
191.一种增强植物生长的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物；并且
使所述植物在有效容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽的条件下生长以增强植物生长。
192.一种赋予植物抗病性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物；并且
使所述植物在有效容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽的条件下生长以赋予抗病性。
193.一种增加植物对生物胁迫的耐受性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物；并且
使所述植物在有效容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽的条件下生长以增加所述植物对选自昆虫、蜘蛛类、线虫类、杂草及其组合的生物胁迫因素的耐受性。
194.一种增加植物对非生物胁迫的耐受性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物；并且
使所述植物在有效容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽的条件下生长以增加所述植物对选自盐胁迫、干旱胁迫、臭氧胁迫、重金属胁迫和低温胁迫及其组合的非生物胁迫因素的耐受性。
195.一种赋予取自观赏植物的插条抗干燥性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因观赏植物；并且
使所述植物在有效容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽的条件下生长以赋予取自所述转基因观赏植物的插条抗干燥性。
196.一种赋予水果或蔬菜采后抗病性或采后抗干燥性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物；并且
使所述植物在有效容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽的条件下生长以赋予取自所述转基因植物的水果或蔬菜采后抗病性或抗干燥性。
197.一种增强水果或蔬菜成熟寿命的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物；并且
使所述植物在有效容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽的条件下生长以增强取自所述转基因植物的水果或蔬菜的成熟寿命。
198.一种赋予植物抗病性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物种子；
在土壤中种植所述转基因植物种子；并且
由所述转基因植物种子繁殖转基因植物以容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽以赋予抗病性。
199.一种增强植物生长的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物种子；
在土壤中种植所述转基因植物种子；并且
由所述转基因植物种子繁殖转基因植物以容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽以增强植物生长。
200.一种赋予植物抗病性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物种子；
在土壤中种植所述转基因植物种子；并且
由所述转基因植物种子繁殖转基因植物以容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽以赋予抗病性。
201.一种增加植物对生物胁迫的耐受性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物种子；
在土壤中种植所述转基因植物种子；并且
由所述转基因植物种子繁殖转基因植物以容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽以增加所述植物对选自昆虫、蜘蛛类、线虫类、杂草及其组合的生物胁迫因素的耐受性。
202.一种增加植物对非生物胁迫的耐受性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物种子；
在土壤中种植所述转基因植物种子；并且
由所述转基因植物种子繁殖转基因植物以容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽以增加所述植物对选自盐胁迫、干旱胁迫、臭氧胁迫、重金属胁迫和低温胁迫及其组合的非生物胁迫因素的耐受性。
203.一种赋予取自观赏植物的插条抗干燥性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因观赏植物种子；
在土壤中种植所述转基因观赏植物种子；并且
由所述转基因观赏植物种子繁殖转基因观赏植物以容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽以赋予取自所述转基因观赏植物的插条抗干燥性。
204.一种赋予水果或蔬菜采后抗病性或采后抗干燥性的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物种子；
在土壤中种植所述转基因植物种子；并且
由所述转基因植物种子繁殖转基因植物以容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽以赋予取自所述转基因植物的水果或蔬菜采后抗病性或抗干燥性。
205.一种增强水果或蔬菜成熟寿命的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物种子；
在土壤中种植所述转基因植物种子；并且
由所述转基因植物种子繁殖转基因植物以容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽以增强取自所述转基因植物的水果或蔬菜的成熟寿命。
206.一种调节植物生物化学信号传导的方法，其包括：
提供经根据权利要求181所述的DNA构建体转化的转基因植物种子；
在土壤中种植所述转基因植物种子；并且
由所述转基因植物种子繁殖转基因植物以容许所述DNA构建体表达所述肽或所述融合多肽以调节植物生物化学信号传导。
207.根据权利要求206所述的方法，其中所述植物生物化学信号传导选自一氧化氮生成、过氧化物生成或次级代谢产物的诱导；乙烯信号传导途径的激动性调节和乙烯应答基因表达的诱导；水杨酸信号传导途径的激动性调节和水杨酸应答基因表达的诱导；脱落酸途径的激动性调节和脱落酸应答基因表达的诱导；赤霉素信号传导途径的激动性调节和赤霉素应答基因表达的诱导；茉莉酸信号传导的拮抗性调节和抑制茉莉酸应答基因的表达；诱导蛋白酶抑制剂表达；诱导植物组织中的活性氧生成；诱导免疫相关和抗微生物肽生成；及诱导扩展蛋白基因表达和生成。
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