JP2003210197A - 試料溶液中のａｔｐを除去する方法 - Google Patents
試料溶液中のａｔｐを除去する方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 試料溶液中ＡＴＰ以外の他の成分に影響を与
えず、特殊な調製なく簡便な操作で短時間にＡＴＰを除
去する方法を提供する。 【解決手段】 ＡＴＰ測定用試薬などのようなＡＴＰを
含む試料溶液と、ＡＴＰ分解酵素を含む溶液とを半透膜
により仕切り、より具体的にはＡＴＰ分解酵素を封入し
た半透膜からなるチューブを試料溶液中に浸すなどし
て、半透膜を通して移動したＡＴＰを酵素作用により分
解することを特徴とする試料溶液中のＡＴＰを除去する
方法。
えず、特殊な調製なく簡便な操作で短時間にＡＴＰを除
去する方法を提供する。 【解決手段】 ＡＴＰ測定用試薬などのようなＡＴＰを
含む試料溶液と、ＡＴＰ分解酵素を含む溶液とを半透膜
により仕切り、より具体的にはＡＴＰ分解酵素を封入し
た半透膜からなるチューブを試料溶液中に浸すなどし
て、半透膜を通して移動したＡＴＰを酵素作用により分
解することを特徴とする試料溶液中のＡＴＰを除去する
方法。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、試料溶液中のＡＴ
Ｐを除去する方法に関するものである。 【０００２】 【従来の技術】生体由来成分であるＡＴＰは高エネルギ
ー化合物であり、多くの生物体のエネルギー代謝に関与
していることから、その測定は、生細胞数、細胞の代謝
変化、食品の成熟度や腐敗度などを含む食品の品質の管
理、水質浄化での水質チェックなど様々な指標として用
いられている。 【０００３】このような試料中に存在するＡＴＰを測定
する方法として、例えば酵素反応を利用する方法が知ら
れている。ホタル由来のルシフェラーゼと発光基質であ
るルシフェリンがＡＴＰ存在下で反応して発する光をル
ミノメーターなどで測定する生物発光法（ＵＳＰ５９０
５０２９、特開平６−１２９９８８号など）や、ＡＴＰ
に、アセチルリン酸、グルコキナーゼ、およびアセテー
トキナーゼを併用して、グルコースからグルコース−６
−リン酸を生成する反応を増幅し、さらにグルコース−
６−リン酸デヒドロゲナーゼ、およびジアホラーゼを組
み合わせて目視可能な呈色反応へと導き、目視判定を可
能とした方法（本発明者らが提案した特願２００１−３
５６１４１号）などがそれである。この目的において、
ＡＴＰは数ナノ・モルの濃度で正確に測定される必要が
ある。 【０００４】しかしながら、ＡＴＰを測定するための試
薬に酵素などのような生体由来材料を原料として用いた
場合、その原料に由来するＡＴＰが試薬中に微量持ち込
まれることが確認されている。このＡＴＰの試薬中での
濃度は、場合によっては数百ナノ・モルにも達し、数ナ
ノ・モルの濃度でＡＴＰを正確に測定することが要求さ
れる試薬においては大きな足かせとなっていた。 【０００５】そこで、ＡＴＰ測定用試薬のような試料溶
液中に微量存在するＡＴＰを除去することが従来行われ
ている。具体的には、ＡＴＰ分解酵素を試料中に添加し
てＡＴＰを消去する方法、ＡＴＰ分解酵素であるアピラ
ーゼをセルロース重合体などの支持体に固定化して作用
させその後固定化酵素を取り除く方法（特開昭５６−７
２８６８号）、ＡＴＰ分解酵素であるアピラーゼをＡＴ
Ｐを除去したい試料中に添加し作用させた後、熱を加え
るなどしてＡＴＰ分解酵素を選択的に失活させる方法
（ＵＳＰ３７４５０９０号）などが知られている。 【０００６】 【発明が解決しようとする課題】しかし、ＡＴＰ分解酵
素を、例えばＡＴＰ測定用試薬にそのまま適用した場
合、元来存在するＡＴＰを消去したあともＡＴＰ分解酵
素活性が残存してしまい、本来の目的であるＡＴＰを測
定する際にも、このＡＴＰ分解酵素が作用してＡＴＰを
分解してしまい、測定が十分になされないなどの不都合
が生じていた。 【０００７】また、ＡＴＰ分解酵素を固定化する方法で
は、一般的に、固定化の際、酵素活性の大半が失われる
ことが多く、また固定化の操作も煩雑であることが問題
であった。さらに、ＡＴＰ分解酵素を選択的に失活させ
る方法では、試料中に含まれる成分の変性などによる減
少や、熱などを加えた場合、試料中に含まれる成分間で
の反応により、試料中の成分が変化するなど問題点が多
いものであった。 【０００８】本発明は、試料中の他の成分に変化を与え
ず、またＡＴＰを除去した後においてもその試料本来の
目的のために悪影響を及ぼさず、かつ簡便な操作にて短
時間で極微量のＡＴＰを除去することができる方法を提
供することを目的とする。 【０００９】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、これらの
課題解決に鋭意努力した結果、上記の目的に半透膜が利
用できることを見出し本発明に至った。 【００１０】すなわち本発明は、ＡＴＰを含む試料溶液
と、ＡＴＰ分解酵素を含む溶液とを半透膜により仕切
り、半透膜を通して移動したＡＴＰを酵素作用により分
解することを特徴とする試料溶液中のＡＴＰを除去する
方法を要旨とするものである。 【００１１】 【発明の実施の態様】本発明において用いられる半透膜
は、一般に透析膜や限外ろ過膜などと呼ばれている分子
分画や分子ふるいに用いられる膜のことである。分画サ
イズやふるいサイズは、ＡＴＰ分解酵素や、例えばＡＴ
Ｐ測定試薬の原料に用いられる酵素など、試料中に含ま
れる高分子量たんぱく質を透過させず、ＡＴＰなどの低
分子量化合物を透過させるものであれば特に限定される
ことはない。さらに、その形態も、一般に透析チューブ
として市販されているようなチューブ状のものでも良
く、また、一般に限外ろ過膜として市販されているよう
なディスク状のものでも良く、その目的において、形態
に限定されるものではない。 【００１２】本発明において用いられるＡＴＰ分解酵素
は、その使用に特に限定はなく、一般的にＡＴＰを分解
することが知られているアピラーゼ（ＥＣ．３．６．
１．５）、アデノシントリホスファターゼ（ＥＣ．３．
６．１．３）、ヘキソキナーゼ（ＥＣ．２．７．１．
１）、またはアデノシンリン酸デアミナーゼ（ＥＣ．
３．５．４．１７）などを用いることが出来る。 【００１３】本発明の方法においては、ＡＴＰを含みそ
のＡＴＰを除去しようと欲する試料溶液と、ＡＴＰ分解
酵素とを半透膜により仕切り、半透膜を通してＡＴＰ分
解酵素側へ移動したＡＴＰを酵素作用により分解除去す
ることができればよい。その実施形態としては、たとえ
ば、少量の試料溶液を処理する場合、もっとも単純に
は、透析チューブにＡＴＰ分解酵素を封入しその上下を
糸などで縛ってチューブ内の酵素液が外に漏れないよう
にしたソーセージ型のものなどがあげられる。この透析
チューブを図1に示したように、処理したい試料溶液中
に浸せばよい。半透膜である透析チューブの膜を通して
ＡＴＰがチューブ内に入り、ＡＴＰ分解酵素の作用によ
って完全に分解される。 【００１４】次に、ＡＴＰ分解酵素を含む溶液を容易に
交換することが出来るよう改良した、透析チューブをＵ
字型にしたものなどがあげられる。この例を図2に示し
た。図２のような場合、ＡＴＰ分解酵素を含む溶液をＵ
字型のチューブの内側に注入する。このユニットを処理
したい試料溶液中に浸すことにより、先の例と同様に、
半透膜である透析チューブの膜を通してＡＴＰがチュー
ブ内へ入り、ＡＴＰ分解酵素の作用によって完全に分解
される。この場合、必要に応じてＡＴＰ分解酵素を含む
溶液を交換したり、ＡＴＰ分解酵素を追加することが出
来る。図1、図2の例において、ＡＴＰ分解酵素を含む溶
液と処理したい試料溶液の位置が入れ替わった場合で
も、操作性の違いのみでその作用は全く同じであること
は言うまでも無いことである。 【００１５】さらに、ＡＴＰ分解酵素を含む溶液を容易
に交換することが出来、また大量処理にも向くように改
良した、それぞれの溶液を含む容器を半透膜で仕切るよ
うにしたディスク型などがあげられる。この例を図３に
示した。図３には縦置き型を例示したが、横置き型でも
その作用に大きな違いはない。この場合、ＡＴＰ分解酵
素を含む溶液をディスクで仕切られた容器の一方に注入
する。他方に処理したい試料溶液を注入することによ
り、これまでの例と同様に、半透膜膜を通してＡＴＰが
移動し、ＡＴＰ分解酵素の作用によって完全に分解され
る。このような場合、必要に応じてＡＴＰ分解酵素を含
む溶液を新しいものに取り替えたり、ＡＴＰ分解酵素を
追加することが容易であることに加え、それぞれの溶液
の半透膜に接触する面積も大きく、また補助をいれるな
ど半透膜の物理的な強度を上げることも容易であること
から、大量処理に向くものと考えられる。 【００１６】本発明の方法が適用されるＡＴＰを含む試
料溶液としては、上述したＡＴＰ測定用試薬が特に好適
であるが、その他に、例えば、食品の衛生検査などにお
いて混在または付着する一般細菌数をＡＴＰを指標に測
定する場合の試料の前処理などに用いることもできる。
この場合、試料には細菌以外の食品成分などに由来する
ＡＴＰが存在していることが多い。細菌を含む試料のホ
モジナイズ液や、試料の表面洗浄液等に対して、本発明
の操作を行い、その後、細菌を破壊する操作を行うこと
で、細菌由来のＡＴＰのみ試料中に残すことが可能であ
る。このように様々な分野で本発明が使用できる。 【００１７】 【実施例】以下に、実施例により本発明をより具体的に
説明する。実施例において、ＡＴＰ分解酵素のユニット
は入手時のラベルに記載してある表示のユニット数をそ
のまま用いた。 【００１８】実施例１ アピラーゼ（シグマ製Ａ６５３５）をミリ・リットルあ
たり５０ユニットの濃度で含む１００ミリ・モルの濃度
のｐＨ７．０のリン酸緩衝液２００マイクロ・リットル
を透析チューブ（三光純薬製ＵＣ８−３２−２５）に注
入し、空気を可能な限り追い出した状態で上下を糸で縛
って、ソーセージ型のアピラーゼ・ユニットを作成し
た。 【００１９】試験管に、ＡＴＰ測定試薬の原料であるア
セテートキナーゼ（ユニチカ製）、グルコキナーゼ（ユ
ニチカ製）、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ
（ユニチカ製）、ジアホラーゼ（ユニチカ製）を、ミリ
・リットルあたり、それぞれ５０ユニット、５０ユニッ
ト、１ユニット、１ユニットの濃度で、塩化マグネシウ
ム（和光純薬製）を５ミリ・モルの濃度で、ＮＡＤＰ
（シグマ製）を５ミリ・モルの濃度で含む１００ミリ・
モルの濃度のｐＨ７．０のリン酸緩衝液１０ミリ・リッ
トルを加えた。ここに、先のアピラーゼ・ユニットおよ
び撹拌子を沈めて、３７℃のドライオーブン内でマグネ
ティック・スターラーにより、ゆっくりと回転させなが
らアピラーゼ・ユニットと試験管内の溶液とを反応させ
た。 【００２０】一定時間ごとに、試験管内の溶液０．６ミ
リ・リットルを取り出し、これに１モルの濃度のグルコ
ース（和光純薬製）を０．１ミリ・リットル、および１
００ミリ・モルの濃度のアセチルリン酸（ベーリンガー
・マンハイム製）を０．１ミリ・リットル加え、分光光
度計（日立製Ｕ−３２１０）により３７℃での３４０ｎ
ｍの吸光度の増加速度を測定した。 【００２１】測定した吸光度の増加速度は、８時間の反
応終了後に取り出した０．６ミリ・リットルの試験管内
の溶液に、既知濃度のＡＴＰを加えた後、所定の操作を
行って求めた吸光度の増加速度を基に、ＡＴＰ濃度に換
算した。アピラーゼ・ユニットとの反応における、試験
管内の溶液中のＡＴＰ濃度の時間的な変化を図４に示し
た。 【００２２】実施例２ アピラーゼ・ユニットに含まれるアピラーゼのユニット
を５倍にし、ＡＴＰ測定試薬の原料であるアセテートキ
ナーゼ、グルコキナーゼ、グルコース−６−リン酸デヒ
ドロゲナーゼ、ジアホラーゼのユニットを、ミリ・リッ
トルあたりそれぞれ２倍にして実施例１と同様の実験を
行った。この結果を図５に示した。これらの結果より、
アピラーゼを増量した結果、実施例１より短時間で試薬
中に元来含まれるＡＴＰを除去することができた。 【００２３】 【発明の効果】本発明によれば、試料溶液のＡＴＰ以外
の成分に影響を与えることなく、簡便な操作でＡＴＰを
除去することができる。とりわけ、数ナノ・モルの濃度
でＡＴＰを正確に測定することが要求されるＡＴＰ測定
試薬において、試薬に用いられる酵素などの生体由来の
原料中に元来含まれるＡＴＰの除去に有効である。
Ｐを除去する方法に関するものである。 【０００２】 【従来の技術】生体由来成分であるＡＴＰは高エネルギ
ー化合物であり、多くの生物体のエネルギー代謝に関与
していることから、その測定は、生細胞数、細胞の代謝
変化、食品の成熟度や腐敗度などを含む食品の品質の管
理、水質浄化での水質チェックなど様々な指標として用
いられている。 【０００３】このような試料中に存在するＡＴＰを測定
する方法として、例えば酵素反応を利用する方法が知ら
れている。ホタル由来のルシフェラーゼと発光基質であ
るルシフェリンがＡＴＰ存在下で反応して発する光をル
ミノメーターなどで測定する生物発光法（ＵＳＰ５９０
５０２９、特開平６−１２９９８８号など）や、ＡＴＰ
に、アセチルリン酸、グルコキナーゼ、およびアセテー
トキナーゼを併用して、グルコースからグルコース−６
−リン酸を生成する反応を増幅し、さらにグルコース−
６−リン酸デヒドロゲナーゼ、およびジアホラーゼを組
み合わせて目視可能な呈色反応へと導き、目視判定を可
能とした方法（本発明者らが提案した特願２００１−３
５６１４１号）などがそれである。この目的において、
ＡＴＰは数ナノ・モルの濃度で正確に測定される必要が
ある。 【０００４】しかしながら、ＡＴＰを測定するための試
薬に酵素などのような生体由来材料を原料として用いた
場合、その原料に由来するＡＴＰが試薬中に微量持ち込
まれることが確認されている。このＡＴＰの試薬中での
濃度は、場合によっては数百ナノ・モルにも達し、数ナ
ノ・モルの濃度でＡＴＰを正確に測定することが要求さ
れる試薬においては大きな足かせとなっていた。 【０００５】そこで、ＡＴＰ測定用試薬のような試料溶
液中に微量存在するＡＴＰを除去することが従来行われ
ている。具体的には、ＡＴＰ分解酵素を試料中に添加し
てＡＴＰを消去する方法、ＡＴＰ分解酵素であるアピラ
ーゼをセルロース重合体などの支持体に固定化して作用
させその後固定化酵素を取り除く方法（特開昭５６−７
２８６８号）、ＡＴＰ分解酵素であるアピラーゼをＡＴ
Ｐを除去したい試料中に添加し作用させた後、熱を加え
るなどしてＡＴＰ分解酵素を選択的に失活させる方法
（ＵＳＰ３７４５０９０号）などが知られている。 【０００６】 【発明が解決しようとする課題】しかし、ＡＴＰ分解酵
素を、例えばＡＴＰ測定用試薬にそのまま適用した場
合、元来存在するＡＴＰを消去したあともＡＴＰ分解酵
素活性が残存してしまい、本来の目的であるＡＴＰを測
定する際にも、このＡＴＰ分解酵素が作用してＡＴＰを
分解してしまい、測定が十分になされないなどの不都合
が生じていた。 【０００７】また、ＡＴＰ分解酵素を固定化する方法で
は、一般的に、固定化の際、酵素活性の大半が失われる
ことが多く、また固定化の操作も煩雑であることが問題
であった。さらに、ＡＴＰ分解酵素を選択的に失活させ
る方法では、試料中に含まれる成分の変性などによる減
少や、熱などを加えた場合、試料中に含まれる成分間で
の反応により、試料中の成分が変化するなど問題点が多
いものであった。 【０００８】本発明は、試料中の他の成分に変化を与え
ず、またＡＴＰを除去した後においてもその試料本来の
目的のために悪影響を及ぼさず、かつ簡便な操作にて短
時間で極微量のＡＴＰを除去することができる方法を提
供することを目的とする。 【０００９】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、これらの
課題解決に鋭意努力した結果、上記の目的に半透膜が利
用できることを見出し本発明に至った。 【００１０】すなわち本発明は、ＡＴＰを含む試料溶液
と、ＡＴＰ分解酵素を含む溶液とを半透膜により仕切
り、半透膜を通して移動したＡＴＰを酵素作用により分
解することを特徴とする試料溶液中のＡＴＰを除去する
方法を要旨とするものである。 【００１１】 【発明の実施の態様】本発明において用いられる半透膜
は、一般に透析膜や限外ろ過膜などと呼ばれている分子
分画や分子ふるいに用いられる膜のことである。分画サ
イズやふるいサイズは、ＡＴＰ分解酵素や、例えばＡＴ
Ｐ測定試薬の原料に用いられる酵素など、試料中に含ま
れる高分子量たんぱく質を透過させず、ＡＴＰなどの低
分子量化合物を透過させるものであれば特に限定される
ことはない。さらに、その形態も、一般に透析チューブ
として市販されているようなチューブ状のものでも良
く、また、一般に限外ろ過膜として市販されているよう
なディスク状のものでも良く、その目的において、形態
に限定されるものではない。 【００１２】本発明において用いられるＡＴＰ分解酵素
は、その使用に特に限定はなく、一般的にＡＴＰを分解
することが知られているアピラーゼ（ＥＣ．３．６．
１．５）、アデノシントリホスファターゼ（ＥＣ．３．
６．１．３）、ヘキソキナーゼ（ＥＣ．２．７．１．
１）、またはアデノシンリン酸デアミナーゼ（ＥＣ．
３．５．４．１７）などを用いることが出来る。 【００１３】本発明の方法においては、ＡＴＰを含みそ
のＡＴＰを除去しようと欲する試料溶液と、ＡＴＰ分解
酵素とを半透膜により仕切り、半透膜を通してＡＴＰ分
解酵素側へ移動したＡＴＰを酵素作用により分解除去す
ることができればよい。その実施形態としては、たとえ
ば、少量の試料溶液を処理する場合、もっとも単純に
は、透析チューブにＡＴＰ分解酵素を封入しその上下を
糸などで縛ってチューブ内の酵素液が外に漏れないよう
にしたソーセージ型のものなどがあげられる。この透析
チューブを図1に示したように、処理したい試料溶液中
に浸せばよい。半透膜である透析チューブの膜を通して
ＡＴＰがチューブ内に入り、ＡＴＰ分解酵素の作用によ
って完全に分解される。 【００１４】次に、ＡＴＰ分解酵素を含む溶液を容易に
交換することが出来るよう改良した、透析チューブをＵ
字型にしたものなどがあげられる。この例を図2に示し
た。図２のような場合、ＡＴＰ分解酵素を含む溶液をＵ
字型のチューブの内側に注入する。このユニットを処理
したい試料溶液中に浸すことにより、先の例と同様に、
半透膜である透析チューブの膜を通してＡＴＰがチュー
ブ内へ入り、ＡＴＰ分解酵素の作用によって完全に分解
される。この場合、必要に応じてＡＴＰ分解酵素を含む
溶液を交換したり、ＡＴＰ分解酵素を追加することが出
来る。図1、図2の例において、ＡＴＰ分解酵素を含む溶
液と処理したい試料溶液の位置が入れ替わった場合で
も、操作性の違いのみでその作用は全く同じであること
は言うまでも無いことである。 【００１５】さらに、ＡＴＰ分解酵素を含む溶液を容易
に交換することが出来、また大量処理にも向くように改
良した、それぞれの溶液を含む容器を半透膜で仕切るよ
うにしたディスク型などがあげられる。この例を図３に
示した。図３には縦置き型を例示したが、横置き型でも
その作用に大きな違いはない。この場合、ＡＴＰ分解酵
素を含む溶液をディスクで仕切られた容器の一方に注入
する。他方に処理したい試料溶液を注入することによ
り、これまでの例と同様に、半透膜膜を通してＡＴＰが
移動し、ＡＴＰ分解酵素の作用によって完全に分解され
る。このような場合、必要に応じてＡＴＰ分解酵素を含
む溶液を新しいものに取り替えたり、ＡＴＰ分解酵素を
追加することが容易であることに加え、それぞれの溶液
の半透膜に接触する面積も大きく、また補助をいれるな
ど半透膜の物理的な強度を上げることも容易であること
から、大量処理に向くものと考えられる。 【００１６】本発明の方法が適用されるＡＴＰを含む試
料溶液としては、上述したＡＴＰ測定用試薬が特に好適
であるが、その他に、例えば、食品の衛生検査などにお
いて混在または付着する一般細菌数をＡＴＰを指標に測
定する場合の試料の前処理などに用いることもできる。
この場合、試料には細菌以外の食品成分などに由来する
ＡＴＰが存在していることが多い。細菌を含む試料のホ
モジナイズ液や、試料の表面洗浄液等に対して、本発明
の操作を行い、その後、細菌を破壊する操作を行うこと
で、細菌由来のＡＴＰのみ試料中に残すことが可能であ
る。このように様々な分野で本発明が使用できる。 【００１７】 【実施例】以下に、実施例により本発明をより具体的に
説明する。実施例において、ＡＴＰ分解酵素のユニット
は入手時のラベルに記載してある表示のユニット数をそ
のまま用いた。 【００１８】実施例１ アピラーゼ（シグマ製Ａ６５３５）をミリ・リットルあ
たり５０ユニットの濃度で含む１００ミリ・モルの濃度
のｐＨ７．０のリン酸緩衝液２００マイクロ・リットル
を透析チューブ（三光純薬製ＵＣ８−３２−２５）に注
入し、空気を可能な限り追い出した状態で上下を糸で縛
って、ソーセージ型のアピラーゼ・ユニットを作成し
た。 【００１９】試験管に、ＡＴＰ測定試薬の原料であるア
セテートキナーゼ（ユニチカ製）、グルコキナーゼ（ユ
ニチカ製）、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ
（ユニチカ製）、ジアホラーゼ（ユニチカ製）を、ミリ
・リットルあたり、それぞれ５０ユニット、５０ユニッ
ト、１ユニット、１ユニットの濃度で、塩化マグネシウ
ム（和光純薬製）を５ミリ・モルの濃度で、ＮＡＤＰ
（シグマ製）を５ミリ・モルの濃度で含む１００ミリ・
モルの濃度のｐＨ７．０のリン酸緩衝液１０ミリ・リッ
トルを加えた。ここに、先のアピラーゼ・ユニットおよ
び撹拌子を沈めて、３７℃のドライオーブン内でマグネ
ティック・スターラーにより、ゆっくりと回転させなが
らアピラーゼ・ユニットと試験管内の溶液とを反応させ
た。 【００２０】一定時間ごとに、試験管内の溶液０．６ミ
リ・リットルを取り出し、これに１モルの濃度のグルコ
ース（和光純薬製）を０．１ミリ・リットル、および１
００ミリ・モルの濃度のアセチルリン酸（ベーリンガー
・マンハイム製）を０．１ミリ・リットル加え、分光光
度計（日立製Ｕ−３２１０）により３７℃での３４０ｎ
ｍの吸光度の増加速度を測定した。 【００２１】測定した吸光度の増加速度は、８時間の反
応終了後に取り出した０．６ミリ・リットルの試験管内
の溶液に、既知濃度のＡＴＰを加えた後、所定の操作を
行って求めた吸光度の増加速度を基に、ＡＴＰ濃度に換
算した。アピラーゼ・ユニットとの反応における、試験
管内の溶液中のＡＴＰ濃度の時間的な変化を図４に示し
た。 【００２２】実施例２ アピラーゼ・ユニットに含まれるアピラーゼのユニット
を５倍にし、ＡＴＰ測定試薬の原料であるアセテートキ
ナーゼ、グルコキナーゼ、グルコース−６−リン酸デヒ
ドロゲナーゼ、ジアホラーゼのユニットを、ミリ・リッ
トルあたりそれぞれ２倍にして実施例１と同様の実験を
行った。この結果を図５に示した。これらの結果より、
アピラーゼを増量した結果、実施例１より短時間で試薬
中に元来含まれるＡＴＰを除去することができた。 【００２３】 【発明の効果】本発明によれば、試料溶液のＡＴＰ以外
の成分に影響を与えることなく、簡便な操作でＡＴＰを
除去することができる。とりわけ、数ナノ・モルの濃度
でＡＴＰを正確に測定することが要求されるＡＴＰ測定
試薬において、試薬に用いられる酵素などの生体由来の
原料中に元来含まれるＡＴＰの除去に有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ソーセージ型半透膜を用いて本発明を実施した
例を示す概略図である。 【図２】Ｕ字型半透膜を用いて本発明を実施した例を示
す概略図である。 【図３】ディスク型半透膜を用いて本発明を実施した例
を示す概略図である。 【図４】アピラーゼとの反応時間と試料中のＡＴＰ濃度
の変化を示す図である。 【図５】アピラーゼを増量した場合の反応時間と試料中
のＡＴＰ濃度の変化を示す図である。 【符号の説明】 １ ＡＴＰ分解酵素を含む溶液 ２ ＡＴＰを除去したい試料溶液 ３ ソーセージ型の半透膜 ４ Ｕ字型半透膜 ５ ディスク型半透膜
例を示す概略図である。 【図２】Ｕ字型半透膜を用いて本発明を実施した例を示
す概略図である。 【図３】ディスク型半透膜を用いて本発明を実施した例
を示す概略図である。 【図４】アピラーゼとの反応時間と試料中のＡＴＰ濃度
の変化を示す図である。 【図５】アピラーゼを増量した場合の反応時間と試料中
のＡＴＰ濃度の変化を示す図である。 【符号の説明】 １ ＡＴＰ分解酵素を含む溶液 ２ ＡＴＰを除去したい試料溶液 ３ ソーセージ型の半透膜 ４ Ｕ字型半透膜 ５ ディスク型半透膜
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求項１】 ＡＴＰを含む試料溶液と、ＡＴＰ分解酵
素を含む溶液とを半透膜により仕切り、半透膜を通して
移動したＡＴＰを酵素作用により分解することを特徴と
する試料溶液中のＡＴＰを除去する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002012960A JP2003210197A (ja) | 2002-01-22 | 2002-01-22 | 試料溶液中のａｔｐを除去する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|---|
| JP5405650B1 (ja) * | 2012-12-12 | 2014-02-05 | 東洋ビーネット株式会社 | 細胞由来のアデノシン三リン酸を測定する方法 |
| CN109574255A (zh) * | 2019-01-03 | 2019-04-05 | 重庆工商大学 | 一种漆酶连续处理含酚废水的方法 |
-
2002
- 2002-01-22 JP JP2002012960A patent/JP2003210197A/ja active Pending
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| WO2014092050A1 (ja) * | 2012-12-12 | 2014-06-19 | 東洋ビーネット株式会社 | 細胞由来のアデノシン三リン酸を測定する方法 |
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