JP2003070464A - 細胞培養方法、人工臓器製造方法、及び人工臓器 - Google Patents
細胞培養方法、人工臓器製造方法、及び人工臓器Info
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 細胞の培養によって３次元的な構造を有する
組織を構築するための実用的な技術を提供する。 【解決手段】 本発明による細胞培養方法は、培養液と
培養細胞とを培養容器（２、１２）に封入して、培養液
の中に培養細胞を浮遊した状態で保持するステップと、
培養容器（２、１２）をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）
するステップとを備えている。培養容器（２、１２）が
ｎ軸回転（ｎは２以上の整数）されることにより、培養
細胞に働く重力方向が分散され、各細胞があらゆる方向
に向けて増殖・進展することができるようになり、培養
細胞の３次元的な培養が可能になる。
組織を構築するための実用的な技術を提供する。 【解決手段】 本発明による細胞培養方法は、培養液と
培養細胞とを培養容器（２、１２）に封入して、培養液
の中に培養細胞を浮遊した状態で保持するステップと、
培養容器（２、１２）をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）
するステップとを備えている。培養容器（２、１２）が
ｎ軸回転（ｎは２以上の整数）されることにより、培養
細胞に働く重力方向が分散され、各細胞があらゆる方向
に向けて増殖・進展することができるようになり、培養
細胞の３次元的な培養が可能になる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、細胞培養方法及び
人工臓器製造方法に関する。本発明は、特に、３次元的
に組織を培養して構築する細胞培養装置、及び人工臓器
製造方法に関する。
人工臓器製造方法に関する。本発明は、特に、３次元的
に組織を培養して構築する細胞培養装置、及び人工臓器
製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】人工的に構築された組織及び器官、即
ち、人工臓器を使用して、損傷した組織及び器官の機能
を修復して再生する医療手法は、将来の再生医学を担う
重要な技術である。この医療手法を実現する上では、細
胞から３次元的な立体構造を有する組織及び器官を構築
する細胞培養技術が必要不可欠である。
ち、人工臓器を使用して、損傷した組織及び器官の機能
を修復して再生する医療手法は、将来の再生医学を担う
重要な技術である。この医療手法を実現する上では、細
胞から３次元的な立体構造を有する組織及び器官を構築
する細胞培養技術が必要不可欠である。
【０００３】このような細胞培養技術として、培養液を
満たした培養容器に培養される細胞塊を封入し、その培
養容器に１軸回転を加える、振動を加える、気泡を導入
する、又は羽根車によって水流を発生することによって
細胞塊を浮遊させ、細胞塊を浮遊状態で成長する技術が
知られている。しかし、これらの公知の技術では、細胞
塊が分散し、更に、培養容器の内壁への接触により細胞
が損傷を受けるため、３次元的な組織の構築が阻害され
ると推察されている。
満たした培養容器に培養される細胞塊を封入し、その培
養容器に１軸回転を加える、振動を加える、気泡を導入
する、又は羽根車によって水流を発生することによって
細胞塊を浮遊させ、細胞塊を浮遊状態で成長する技術が
知られている。しかし、これらの公知の技術では、細胞
塊が分散し、更に、培養容器の内壁への接触により細胞
が損傷を受けるため、３次元的な組織の構築が阻害され
ると推察されている。
【０００４】また、他の細胞培養技術として、宇宙のよ
うな微小重力環境で細胞塊を培養する技術が検討されて
いる。微小重力環境では、細胞塊の沈降がないため、３
次元的な組織の構築が可能と考えられている。更に、微
小重力環境では、高密度の細胞集合体の形成の可能性が
示されている。しかし、宇宙で細胞塊を培養すること
は、実用性に欠ける。
うな微小重力環境で細胞塊を培養する技術が検討されて
いる。微小重力環境では、細胞塊の沈降がないため、３
次元的な組織の構築が可能と考えられている。更に、微
小重力環境では、高密度の細胞集合体の形成の可能性が
示されている。しかし、宇宙で細胞塊を培養すること
は、実用性に欠ける。
【０００５】更に、動植物育成装置が、特許公報（特公
平７−８９７９８）に知られている。公知のその動植物
育成装置は、育成される動植物を定置して収納する容器
を２軸以上で回転し、動植物に多方向から重力を印加す
る。これにより、擬似的に無重力状態で動植物が育成さ
れる。特許公報（特公平７−８９７９８）には、動植物
を育成することと共に、細胞を培養することが開示され
ている。しかし、細胞を培養するための具体的な方法は
開示されていない。
平７−８９７９８）に知られている。公知のその動植物
育成装置は、育成される動植物を定置して収納する容器
を２軸以上で回転し、動植物に多方向から重力を印加す
る。これにより、擬似的に無重力状態で動植物が育成さ
れる。特許公報（特公平７−８９７９８）には、動植物
を育成することと共に、細胞を培養することが開示され
ている。しかし、細胞を培養するための具体的な方法は
開示されていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、細胞
の培養によって３次元的な構造を有する組織を構築する
ための実用的な技術を提供することにある。
の培養によって３次元的な構造を有する組織を構築する
ための実用的な技術を提供することにある。
【０００７】本発明の他の目的は、細胞の培養を行って
３次元的な構造を有する組織を構築するときに、細胞の
分散が防がれる技術を提供することにある。
３次元的な構造を有する組織を構築するときに、細胞の
分散が防がれる技術を提供することにある。
【０００８】本発明の更に他の目的は、細胞の培養を行
って３次元的な構造を有する組織を構築するときに、長
期の細胞の培養を可能にする技術を提供することにあ
る。
って３次元的な構造を有する組織を構築するときに、長
期の細胞の培養を可能にする技術を提供することにあ
る。
【０００９】本発明の更に他の目的は、細胞の培養を行
って３次元的な構造を有する組織を構築するときに、細
胞の培養の環境を最適化する技術を提供することにあ
る。
って３次元的な構造を有する組織を構築するときに、細
胞の培養の環境を最適化する技術を提供することにあ
る。
【００１０】本発明の更に他の目的は、細胞の培養を行
うことにより、大型且つ３次元的な構造を有する組織を
構築する技術を提供することにある。
うことにより、大型且つ３次元的な構造を有する組織を
構築する技術を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】以下に、[発明の実施の
形態]で使用される番号・符号を用いて、課題を解決す
るための手段が説明される。これらの番号・符号は、
[特許請求の範囲]の記載と[発明の実施の形態]の記載と
の対応関係を明らかにするために付加されている。但
し、付加された番号・符号は、[特許請求の範囲]に記載
されている発明の技術的範囲の解釈に用いてはならな
い。
形態]で使用される番号・符号を用いて、課題を解決す
るための手段が説明される。これらの番号・符号は、
[特許請求の範囲]の記載と[発明の実施の形態]の記載と
の対応関係を明らかにするために付加されている。但
し、付加された番号・符号は、[特許請求の範囲]に記載
されている発明の技術的範囲の解釈に用いてはならな
い。
【００１２】本発明による細胞培養方法は、培養液と培
養細胞とを培養容器（２、１２）に封入して、培養液の
中に培養細胞を浮遊した状態で保持するステップと、培
養容器（２、１２）をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）す
るステップとを備えている。培養容器（２、１２）がｎ
軸回転（ｎは２以上の整数）されることにより、培養細
胞に働く重力方向が分散され、各細胞があらゆる方向に
向けて増殖・進展することができるようになり、培養細
胞の３次元的な培養が可能になる。また、ｎ軸回転によ
り発生する流体攪拌による剪断力は小さく、培養容器
（２、１２）の内部に発生する液流による剪弾力が小さ
くなり、培養細胞の剥離と個々の細胞の遊離を防ぐ。
養細胞とを培養容器（２、１２）に封入して、培養液の
中に培養細胞を浮遊した状態で保持するステップと、培
養容器（２、１２）をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）す
るステップとを備えている。培養容器（２、１２）がｎ
軸回転（ｎは２以上の整数）されることにより、培養細
胞に働く重力方向が分散され、各細胞があらゆる方向に
向けて増殖・進展することができるようになり、培養細
胞の３次元的な培養が可能になる。また、ｎ軸回転によ
り発生する流体攪拌による剪断力は小さく、培養容器
（２、１２）の内部に発生する液流による剪弾力が小さ
くなり、培養細胞の剥離と個々の細胞の遊離を防ぐ。
【００１３】このとき、培養容器（２、１２）に封入さ
れる培養液の粘度は、前記培養容器がｎ軸回転されてい
る間に培養細胞が培養容器（２、１２）に接触しないよ
うに調整されていることが好ましい。培養液の粘度の調
整は、培養液にメチルセルロースやコラーゲンゲルのよ
うな増粘材を添加することにより可能である。
れる培養液の粘度は、前記培養容器がｎ軸回転されてい
る間に培養細胞が培養容器（２、１２）に接触しないよ
うに調整されていることが好ましい。培養液の粘度の調
整は、培養液にメチルセルロースやコラーゲンゲルのよ
うな増粘材を添加することにより可能である。
【００１４】本発明による細胞培養方法は、培養液と、
培養細胞が付着された人工基質（４５）と、人工基質
（４５）を固定して保持する保持部（４６、４７、４
８）とを培養容器（４１）に封入するステップと、培養
容器（４１）をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）するステ
ップとを備えている。培養容器（４１）がｎ軸回転され
ることにより３次元的に重力が印加され、３次元的構造
を持つ人工基質（４５）に均一に培養細胞を付着する３
次元的な培養が可能になる。また、ｎ軸回転により発生
する流体攪拌による剪断力は小さく、付着、凝集した培
養細胞がバラバラになったり、損傷することが防がれ
る。
培養細胞が付着された人工基質（４５）と、人工基質
（４５）を固定して保持する保持部（４６、４７、４
８）とを培養容器（４１）に封入するステップと、培養
容器（４１）をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）するステ
ップとを備えている。培養容器（４１）がｎ軸回転され
ることにより３次元的に重力が印加され、３次元的構造
を持つ人工基質（４５）に均一に培養細胞を付着する３
次元的な培養が可能になる。また、ｎ軸回転により発生
する流体攪拌による剪断力は小さく、付着、凝集した培
養細胞がバラバラになったり、損傷することが防がれ
る。
【００１５】本発明による人工臓器製造方法は、培養液
と培養細胞とを培養容器（２、１２）に封入して、培養
液の中に培養細胞を浮遊した状態で保持するステップ
と、培養容器（２、１２）をｎ軸回転（ｎは２以上の整
数）した状態で培養細胞を培養し、人工臓器を形成する
ステップとを備えている。培養容器（２、１２）がｎ軸
回転（ｎは２以上の整数）されることにより、培養細胞
が３次元的に培養され、３次元的な構造を有する人工臓
器の形成が可能である。
と培養細胞とを培養容器（２、１２）に封入して、培養
液の中に培養細胞を浮遊した状態で保持するステップ
と、培養容器（２、１２）をｎ軸回転（ｎは２以上の整
数）した状態で培養細胞を培養し、人工臓器を形成する
ステップとを備えている。培養容器（２、１２）がｎ軸
回転（ｎは２以上の整数）されることにより、培養細胞
が３次元的に培養され、３次元的な構造を有する人工臓
器の形成が可能である。
【００１６】本発明による人工臓器製造方法は、培養液
と、培養細胞が付着された人工基質（４５）と、前記人
工基質（４５）を固定して保持する保持部（４６、４
７、４８）とを培養容器（４１）に封入するステップ
と、培養容器（４１）をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）
した状態で培養細胞を培養するステップと、培養細胞が
培養された後、培養された培養細胞と人工基質（４５）
とで構成される構造体を、人工臓器として取り出すステ
ップとを備えている。
と、培養細胞が付着された人工基質（４５）と、前記人
工基質（４５）を固定して保持する保持部（４６、４
７、４８）とを培養容器（４１）に封入するステップ
と、培養容器（４１）をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）
した状態で培養細胞を培養するステップと、培養細胞が
培養された後、培養された培養細胞と人工基質（４５）
とで構成される構造体を、人工臓器として取り出すステ
ップとを備えている。
【００１７】
【発明の実施の形態】以下、添付図面を参照しながら、
本発明による細胞培養方法の実施の形態を説明する。
本発明による細胞培養方法の実施の形態を説明する。
【００１８】実施の第１形態：本発明による細胞培養方
法の実施の第１形態では、図１に示された細胞培養装置
１０が使用される。細胞培養装置１０は、３次元クリノ
スタット１と培養容器２とを含む。３次元クリノスタッ
ト１は、培養容器２を２軸回転する。培養容器２の内部
には、培養液と、培養される培養細胞とが封入される。
培養細胞は、培養容器２には固定されず、培養液の中に
浮遊される。培養液には、所望の組織への分化を促進す
るために、アクチビンのような分化因子が添加される。
法の実施の第１形態では、図１に示された細胞培養装置
１０が使用される。細胞培養装置１０は、３次元クリノ
スタット１と培養容器２とを含む。３次元クリノスタッ
ト１は、培養容器２を２軸回転する。培養容器２の内部
には、培養液と、培養される培養細胞とが封入される。
培養細胞は、培養容器２には固定されず、培養液の中に
浮遊される。培養液には、所望の組織への分化を促進す
るために、アクチビンのような分化因子が添加される。
【００１９】３次元クリノスタット１は、本体３、モー
タ４、外側フレーム５、モーター６、及び内側フレーム
７を含む。本体３は、静止系に設置される。本体３は、
基部３ａと脚３ｂ、３ｃを含む。基部３ａには、脚３
ｂ、３ｃが接続されている。脚３ｂには、モータ４が設
けられている。モータ４は、外側フレーム５に接続さ
れ、回転軸４ａの回りに外側フレーム５を回転する。外
側フレーム５には、モータ６が設けられている。モータ
６は、内側フレーム７に接続され、回転軸６ａの回りに
内側フレーム７を回転する。回転軸６ａは、回転軸４ａ
と概ね直交する。内側フレーム７には、既述の培養容器
２が接続される。培養容器２は、回転軸４ａと回転軸６
ａとの交点の近傍にある。培養容器２は、内側フレーム
７と同体に回転する。外側フレーム５と内側フレーム７
とがそれぞれ回転されると、培養容器２は、２軸回転す
る。
タ４、外側フレーム５、モーター６、及び内側フレーム
７を含む。本体３は、静止系に設置される。本体３は、
基部３ａと脚３ｂ、３ｃを含む。基部３ａには、脚３
ｂ、３ｃが接続されている。脚３ｂには、モータ４が設
けられている。モータ４は、外側フレーム５に接続さ
れ、回転軸４ａの回りに外側フレーム５を回転する。外
側フレーム５には、モータ６が設けられている。モータ
６は、内側フレーム７に接続され、回転軸６ａの回りに
内側フレーム７を回転する。回転軸６ａは、回転軸４ａ
と概ね直交する。内側フレーム７には、既述の培養容器
２が接続される。培養容器２は、回転軸４ａと回転軸６
ａとの交点の近傍にある。培養容器２は、内側フレーム
７と同体に回転する。外側フレーム５と内側フレーム７
とがそれぞれ回転されると、培養容器２は、２軸回転す
る。
【００２０】培養容器２が２軸回転されると、培養容器
２に封入された培養細胞に働く重力の方向が分散され、
各細胞があらゆる方向に向けて増殖・進展することがで
きるようになり、培養細胞塊の３次元的な培養が可能に
なる。また、ｎ軸回転により培養容器２の内部に発生す
る液流による剪断力は小さく、培養細胞塊の剥離と個々
の細胞の遊離を防ぐ。従って、培養容器２が２軸回転さ
れた状態で細胞塊を培養することにより、３次元的な構
造を有する組織の構築が実現される。
２に封入された培養細胞に働く重力の方向が分散され、
各細胞があらゆる方向に向けて増殖・進展することがで
きるようになり、培養細胞塊の３次元的な培養が可能に
なる。また、ｎ軸回転により培養容器２の内部に発生す
る液流による剪断力は小さく、培養細胞塊の剥離と個々
の細胞の遊離を防ぐ。従って、培養容器２が２軸回転さ
れた状態で細胞塊を培養することにより、３次元的な構
造を有する組織の構築が実現される。
【００２１】このとき、アクチビンのような分化因子が
培養液に添加されることは、所望の組織の構築を適切に
行う上で好ましい。分化因子を培養液に添加すること
は、培養細胞の分化を促進し、組織の構築を適切に行う
ことを可能にする。
培養液に添加されることは、所望の組織の構築を適切に
行う上で好ましい。分化因子を培養液に添加すること
は、培養細胞の分化を促進し、組織の構築を適切に行う
ことを可能にする。
【００２２】更に、培養液にメチルセルロースやコラー
ゲンゲルのような増粘材が添加され、培養容器２が２軸
回転されたときに培養容器２の内壁に培養細胞が接触し
ないように培養液の粘度が調整されることが好ましい。
これにより、培養細胞塊の沈降が防がれる。
ゲンゲルのような増粘材が添加され、培養容器２が２軸
回転されたときに培養容器２の内壁に培養細胞が接触し
ないように培養液の粘度が調整されることが好ましい。
これにより、培養細胞塊の沈降が防がれる。
【００２３】図２及び図３は、実施の第１形態の細胞培
養方法により培養された細胞塊の外観写真及び断面写真
である。その細胞塊は、下記方法により培養された。ま
ず、アフリカツメカエルの雄生体の正常腎由来のＡ６細
胞が、培養フラスコにより２３℃環境下で２週間、付着
培養された。続いて、付着フラスコの培養面に１層状態
で増殖した培養細胞の一部が剥離され、上記の培養容器
２に移された。培養容器２は、培養液で満たされた。続
いて、培養容器２が３次元クリノスタット１により回転
され、培養細胞が培養容器２の中で浮遊状態で培養され
た。培養は、２３℃環境下で２週間行われた。培養細胞
が培養されて形成された細胞塊には、図２に示されてい
るように、細胞球状化が認められた。更に、形成された
細胞塊を切片化して内部状態を観察したところ、図３に
示されているように、腎管様の構造が認められた。この
実験事実は、実施の第１形態の細胞培養方法によって細
胞の培養を行うことにより、３次元的な構造を有する組
織を構築することができることを示している。
養方法により培養された細胞塊の外観写真及び断面写真
である。その細胞塊は、下記方法により培養された。ま
ず、アフリカツメカエルの雄生体の正常腎由来のＡ６細
胞が、培養フラスコにより２３℃環境下で２週間、付着
培養された。続いて、付着フラスコの培養面に１層状態
で増殖した培養細胞の一部が剥離され、上記の培養容器
２に移された。培養容器２は、培養液で満たされた。続
いて、培養容器２が３次元クリノスタット１により回転
され、培養細胞が培養容器２の中で浮遊状態で培養され
た。培養は、２３℃環境下で２週間行われた。培養細胞
が培養されて形成された細胞塊には、図２に示されてい
るように、細胞球状化が認められた。更に、形成された
細胞塊を切片化して内部状態を観察したところ、図３に
示されているように、腎管様の構造が認められた。この
実験事実は、実施の第１形態の細胞培養方法によって細
胞の培養を行うことにより、３次元的な構造を有する組
織を構築することができることを示している。
【００２４】実施の第１形態の細胞培養方法は、人工臓
器の製造に適用可能である。この場合、培養容器２に封
入される培養細胞として、目的とする臓器に分化可能な
細胞が封入される。封入された細胞が２軸回転されなが
ら培養され、３次元的な構造を有する人工臓器が形成さ
れる。
器の製造に適用可能である。この場合、培養容器２に封
入される培養細胞として、目的とする臓器に分化可能な
細胞が封入される。封入された細胞が２軸回転されなが
ら培養され、３次元的な構造を有する人工臓器が形成さ
れる。
【００２５】なお、実施の第１形態では、培養容器２が
２軸回転されているが、培養容器２は、更に多くの回転
軸の回りに回転されることも可能である。この場合で
も、２軸回転の場合と同様に、培養容器２の回転により
培養細胞塊に働く重力の方向が分散され、各細胞があら
ゆる方向に向けて増殖・進展することができるようにな
り、培養細胞塊の３次元的な培養が可能になる。また、
ｎ軸回転により、培養容器２の内部に発生する液流の剪
断力が小さくなり、培養細胞塊の剥離と個々の細胞の遊
離を防ぐ。培養容器２が２軸よりも多くの回転軸の回り
に回転された状態で細胞塊を培養することにより、３次
元的な構造を有する組織の構築が実現される。
２軸回転されているが、培養容器２は、更に多くの回転
軸の回りに回転されることも可能である。この場合で
も、２軸回転の場合と同様に、培養容器２の回転により
培養細胞塊に働く重力の方向が分散され、各細胞があら
ゆる方向に向けて増殖・進展することができるようにな
り、培養細胞塊の３次元的な培養が可能になる。また、
ｎ軸回転により、培養容器２の内部に発生する液流の剪
断力が小さくなり、培養細胞塊の剥離と個々の細胞の遊
離を防ぐ。培養容器２が２軸よりも多くの回転軸の回り
に回転された状態で細胞塊を培養することにより、３次
元的な構造を有する組織の構築が実現される。
【００２６】実施の第２形態：本発明による細胞培養方
法の実施の第２形態では、実施の第１形態と同様に、培
養液で満たされた培養容器が２軸回転され、その培養容
器の内部で細胞塊が培養される。実施の第２形態では、
新鮮な培養液が２軸回転される培養容器に逐次に供給さ
れた状態で培養が行われ、長期間の培養が可能である。
法の実施の第２形態では、実施の第１形態と同様に、培
養液で満たされた培養容器が２軸回転され、その培養容
器の内部で細胞塊が培養される。実施の第２形態では、
新鮮な培養液が２軸回転される培養容器に逐次に供給さ
れた状態で培養が行われ、長期間の培養が可能である。
【００２７】図４は、本発明による細胞培養方法の実施
の第２形態で使用される細胞培養装置５０を示す。細胞
培養装置５０は、３次元クリノスタット１１、培養容器
１２、培養液タンク１３、及びポンプ１４を備えてい
る。３次元クリノスタット１１は、培養容器１２を２軸
回転する。培養容器１２の内部には、培養液と、培養さ
れる細胞塊とが封入される。培養される細胞塊は、培養
容器１２には固定されず、培養液の中に浮遊される。培
養液には、所望の組織への分化を促進するために、アク
チビンのような分化因子が添加される。
の第２形態で使用される細胞培養装置５０を示す。細胞
培養装置５０は、３次元クリノスタット１１、培養容器
１２、培養液タンク１３、及びポンプ１４を備えてい
る。３次元クリノスタット１１は、培養容器１２を２軸
回転する。培養容器１２の内部には、培養液と、培養さ
れる細胞塊とが封入される。培養される細胞塊は、培養
容器１２には固定されず、培養液の中に浮遊される。培
養液には、所望の組織への分化を促進するために、アク
チビンのような分化因子が添加される。
【００２８】培養液タンク１３は、培養容器１２に供給
されるべき培養液を蓄積する。ポンプ１４は、培養液タ
ンク１３に蓄積された培養液を、培養容器１２に圧出し
て供給する。培養容器１２に供給された培養液は、培養
液タンク１３に戻される。細胞塊を培養する培養液は、
循環的に使用されることになる。
されるべき培養液を蓄積する。ポンプ１４は、培養液タ
ンク１３に蓄積された培養液を、培養容器１２に圧出し
て供給する。培養容器１２に供給された培養液は、培養
液タンク１３に戻される。細胞塊を培養する培養液は、
循環的に使用されることになる。
【００２９】培養液タンク１３は、培養液に含まれる気
体の濃度を調節する気体濃度調整機能を有することが好
ましい。培養液に含まれる酸素及び二酸化炭素の濃度の
最適化は、細胞塊の培養の上で重要である。培養液に含
まれる気体、特に、酸素及び二酸化炭素の濃度を調整す
ることにより、細胞塊をより好ましい環境で培養するこ
とが可能である。より具体的には、培養液タンク１３が
ガス交換可能な材質で形成され、且つ、培養液タンク１
３の周囲の雰囲気が調整される。これにより、培養液に
含まれる気体を所望の濃度に調節することが可能であ
る。
体の濃度を調節する気体濃度調整機能を有することが好
ましい。培養液に含まれる酸素及び二酸化炭素の濃度の
最適化は、細胞塊の培養の上で重要である。培養液に含
まれる気体、特に、酸素及び二酸化炭素の濃度を調整す
ることにより、細胞塊をより好ましい環境で培養するこ
とが可能である。より具体的には、培養液タンク１３が
ガス交換可能な材質で形成され、且つ、培養液タンク１
３の周囲の雰囲気が調整される。これにより、培養液に
含まれる気体を所望の濃度に調節することが可能であ
る。
【００３０】３次元クリノスタット１１は、培養液を培
養容器１２に供給するために、実施の第１形態の３次元
クリノスタット１とは異なる構成を有する。３次元クリ
ノスタット１１は、本体１５を備えている。本体１５に
は、支柱１６ａと支柱１６ｂとが接合されている。支柱
１６ａは、外側フレーム１７を回転可能に支持する。支
柱１６ｂには、ロータリージョイント１８とモータ１９
とが接合されている。ロータリージョイント１８は、外
側フレーム１７を回転可能に支持する。モータ１９は、
ギア、ベルトのような動力伝達機構（図示されない）を
介して外側フレーム１７を駆動し、外側フレーム１７を
回転軸１８ａの回りに回転する。
養容器１２に供給するために、実施の第１形態の３次元
クリノスタット１とは異なる構成を有する。３次元クリ
ノスタット１１は、本体１５を備えている。本体１５に
は、支柱１６ａと支柱１６ｂとが接合されている。支柱
１６ａは、外側フレーム１７を回転可能に支持する。支
柱１６ｂには、ロータリージョイント１８とモータ１９
とが接合されている。ロータリージョイント１８は、外
側フレーム１７を回転可能に支持する。モータ１９は、
ギア、ベルトのような動力伝達機構（図示されない）を
介して外側フレーム１７を駆動し、外側フレーム１７を
回転軸１８ａの回りに回転する。
【００３１】外側フレーム１７には、ロータリージョイ
ント２０とモータ２１とが接合されている。ロータリー
ジョイント２０は、内側フレーム２２を回転可能に支持
する。モータ２１は、ギア、ベルトのような動力伝達機
構（図示されない）を介して内側フレーム２２を駆動
し、内側フレーム２２を回転軸２０ａの回りに回転す
る。
ント２０とモータ２１とが接合されている。ロータリー
ジョイント２０は、内側フレーム２２を回転可能に支持
する。モータ２１は、ギア、ベルトのような動力伝達機
構（図示されない）を介して内側フレーム２２を駆動
し、内側フレーム２２を回転軸２０ａの回りに回転す
る。
【００３２】内側フレーム２２には、既述の培養容器１
２が接続される。培養容器１２は、回転軸１８ａと回転
軸２０ａとの交点の近傍にある。培養容器１２は、内側
フレーム２２と同体に回転する。外側フレーム１７と内
側フレーム２２とがそれぞれ回転されると、培養容器１
２は、２軸回転する。
２が接続される。培養容器１２は、回転軸１８ａと回転
軸２０ａとの交点の近傍にある。培養容器１２は、内側
フレーム２２と同体に回転する。外側フレーム１７と内
側フレーム２２とがそれぞれ回転されると、培養容器１
２は、２軸回転する。
【００３３】ポンプ１４から培養容器１２への培養液の
供給は、ロータリージョイント１８とロータリージョイ
ント２０とを介して行われる。ポンプ１４が送り出す新
鮮な培養液は、供給管２３を介してロータリージョイン
ト１８に到達する。ロータリージョイント１８は、供給
管２３から送られる培養液を、外側フレーム１７と同体
に回転する供給管２４に導入する。更に、ロータリージ
ョイント２０は、供給管２４に送られた培養液を、内側
フレーム２２と同体に回転する供給管２５に導入する。
供給管２５は培養容器１２に接続され、供給管２５から
培養液が培養容器１２に供給される。
供給は、ロータリージョイント１８とロータリージョイ
ント２０とを介して行われる。ポンプ１４が送り出す新
鮮な培養液は、供給管２３を介してロータリージョイン
ト１８に到達する。ロータリージョイント１８は、供給
管２３から送られる培養液を、外側フレーム１７と同体
に回転する供給管２４に導入する。更に、ロータリージ
ョイント２０は、供給管２４に送られた培養液を、内側
フレーム２２と同体に回転する供給管２５に導入する。
供給管２５は培養容器１２に接続され、供給管２５から
培養液が培養容器１２に供給される。
【００３４】同様に、培養容器１２から培養液タンク１
３への培養液の排出は、ロータリージョイント１８とロ
ータリージョイント２０とを介して行われる。培養容器
１２は、排出管２６に培養液を排出する。排出管２６に
排出された培養液は、ロータリージョイント２０を介し
て、外側フレーム１７と同体に回転する排出管２７に導
入される。排出管２７に導入された培養液は、ロータリ
ージョイント１８を介して、静止系に置かれている排出
管２８に導入される。排出管２８を介して培養液が培養
液タンク１３に戻される。
３への培養液の排出は、ロータリージョイント１８とロ
ータリージョイント２０とを介して行われる。培養容器
１２は、排出管２６に培養液を排出する。排出管２６に
排出された培養液は、ロータリージョイント２０を介し
て、外側フレーム１７と同体に回転する排出管２７に導
入される。排出管２７に導入された培養液は、ロータリ
ージョイント１８を介して、静止系に置かれている排出
管２８に導入される。排出管２８を介して培養液が培養
液タンク１３に戻される。
【００３５】図５は、ロータリージョイント１８を詳細
に示す。ロータリージョイント１８は、固定部２９と回
転部３０とを含む。固定部２９と回転部３０とは、径の
異なる円柱体であり、回転部３０は、固定部２９に回転
自在に挿入されている。固定部２９は支柱１６ｂに固着
され、回転部３０は外側フレーム１７に固着されてい
る。
に示す。ロータリージョイント１８は、固定部２９と回
転部３０とを含む。固定部２９と回転部３０とは、径の
異なる円柱体であり、回転部３０は、固定部２９に回転
自在に挿入されている。固定部２９は支柱１６ｂに固着
され、回転部３０は外側フレーム１７に固着されてい
る。
【００３６】固定部２９と回転部３０との間の空間に
は、シール３１、３２により、第１液導入室３３と第２
液導入室３４とが形成されている。第１液導入室３３と
第２液導入室３４とは、シール３１により分離されてい
る。第２液導入室３４は、シール３２により外部からの
気密が保たれている。第１液導入室３３には、ポンプ１
４に接続されている供給管２４が接続され、第２液導入
室３４には、培養液タンク１３に接続されている排出管
排出管２７が接続されている。
は、シール３１、３２により、第１液導入室３３と第２
液導入室３４とが形成されている。第１液導入室３３と
第２液導入室３４とは、シール３１により分離されてい
る。第２液導入室３４は、シール３２により外部からの
気密が保たれている。第１液導入室３３には、ポンプ１
４に接続されている供給管２４が接続され、第２液導入
室３４には、培養液タンク１３に接続されている排出管
排出管２７が接続されている。
【００３７】回転部３０には、第１液導入室３３に開口
する第１穴３５と、第２液導入室３４に開口する第２穴
３６とが設けられている。第１穴３５は、供給管２４に
接続され、第２穴３６は、排出管２７に接続される。
する第１穴３５と、第２液導入室３４に開口する第２穴
３６とが設けられている。第１穴３５は、供給管２４に
接続され、第２穴３６は、排出管２７に接続される。
【００３８】このような構造を有するロータリージョイ
ント１８は、支柱１６ｂと外側フレーム１７とがなす角
度に関わらず、供給管２３と供給管２４とを接続し、且
つ、排出管２７と排出管２８とを接続する。
ント１８は、支柱１６ｂと外側フレーム１７とがなす角
度に関わらず、供給管２３と供給管２４とを接続し、且
つ、排出管２７と排出管２８とを接続する。
【００３９】ロータリージョイント２０は、ロータリー
ジョイント１８と同様の構成を有しており、外側フレー
ム１７と内側フレーム２２とがなす角度に関わらず、供
給管２４と供給管２５とを接続し、排出管２６と排出管
２７とを接続する。
ジョイント１８と同様の構成を有しており、外側フレー
ム１７と内側フレーム２２とがなす角度に関わらず、供
給管２４と供給管２５とを接続し、排出管２６と排出管
２７とを接続する。
【００４０】このように、ロータリージョイント１８と
ロータリージョイント２０とを介して、３次元クリノス
タット１１の外部から培養容器１２に培養液が供給さ
れ、更に、培養容器１２から３次元クリノスタット１１
の外部に培養液が排出される。
ロータリージョイント２０とを介して、３次元クリノス
タット１１の外部から培養容器１２に培養液が供給さ
れ、更に、培養容器１２から３次元クリノスタット１１
の外部に培養液が排出される。
【００４１】培養容器１２に外部から培養液が供給され
る場合、培養液が流れ込むことにより、培養容器１２の
内部で液流の乱れが発生し得る。液流の乱れは、細胞塊
の分散を招き、３次元的な組織の構築の障害になり得
る。これに対応するために、培養容器１２は、この液流
の乱れによる影響を抑制するような構造を有している。
る場合、培養液が流れ込むことにより、培養容器１２の
内部で液流の乱れが発生し得る。液流の乱れは、細胞塊
の分散を招き、３次元的な組織の構築の障害になり得
る。これに対応するために、培養容器１２は、この液流
の乱れによる影響を抑制するような構造を有している。
【００４２】図６は、培養容器１２を示す。培養容器１
２の内部は、隔壁３７により、流路室３８と培養室３９
とに分離されている。流路室３８には、培養液を供給す
る供給管２５と、培養液を排出する排出管２６とが接続
されている。隔壁３７には、多数の穴（図示されない）
が設けられ、その穴を通じて、流路室３８と培養室３９
とで培養液の交換が行われる。培養室３９には、細胞塊
４０が浮遊状態で収められ、細胞塊４０の培養は、培養
室３９の内部で行われる。
２の内部は、隔壁３７により、流路室３８と培養室３９
とに分離されている。流路室３８には、培養液を供給す
る供給管２５と、培養液を排出する排出管２６とが接続
されている。隔壁３７には、多数の穴（図示されない）
が設けられ、その穴を通じて、流路室３８と培養室３９
とで培養液の交換が行われる。培養室３９には、細胞塊
４０が浮遊状態で収められ、細胞塊４０の培養は、培養
室３９の内部で行われる。
【００４３】このような構造を有する培養容器１２で
は、細胞塊４０の培養が行われる培養室３９には、直接
には培養液が流入しない。これにより、培養容器１２に
培養液が流入することによる液流の乱れが、細胞塊４０
の培養に及ぼす影響が抑制される。
は、細胞塊４０の培養が行われる培養室３９には、直接
には培養液が流入しない。これにより、培養容器１２に
培養液が流入することによる液流の乱れが、細胞塊４０
の培養に及ぼす影響が抑制される。
【００４４】本発明による細胞培養装置の実施の第２形
態は、実施の第１形態と同様に、３次元的な構造を有す
る組織を構築することができる。実施の第２形態では、
更に、長期間にわたる細胞の培養が可能である。
態は、実施の第１形態と同様に、３次元的な構造を有す
る組織を構築することができる。実施の第２形態では、
更に、長期間にわたる細胞の培養が可能である。
【００４５】なお、実施の第２形態では、培養に使用さ
れる培養液は循環されているが、培養容器１２から排出
された培養液が、そのまま捨てられることも可能であ
る。この場合、培養容器１２から培養液が排出される排
出管２８は、培養液タンク１３に接続されない。
れる培養液は循環されているが、培養容器１２から排出
された培養液が、そのまま捨てられることも可能であ
る。この場合、培養容器１２から培養液が排出される排
出管２８は、培養液タンク１３に接続されない。
【００４６】実施の第３形態：本発明による細胞培養方
法の実施の第３形態は、人工臓器の製造に特に好適に適
用される。
法の実施の第３形態は、人工臓器の製造に特に好適に適
用される。
【００４７】本発明による細胞培養方法の実施の第３形
態は、培養液で満たされた培養容器が２軸回転され、そ
の培養容器の内部で細胞が培養される点では、実施の第
１形態及び第２形態と同じである。
態は、培養液で満たされた培養容器が２軸回転され、そ
の培養容器の内部で細胞が培養される点では、実施の第
１形態及び第２形態と同じである。
【００４８】実施の第３形態では、実施の第１形態及び
第２形態と異なり、細胞塊は、培養容器に固定された人
工基質に付着されて培養される。実施の第３形態では、
３次元的に重力が印加され、３次元的構造をもつ人工基
質に均一に細胞付着する等の３次元的な培養が可能にな
る。また、培養容器が２軸回転されて発生する流体攪拌
による剪断力は小さく、付着・凝集した細胞がバラバラ
になることや、損傷することが防がれる。
第２形態と異なり、細胞塊は、培養容器に固定された人
工基質に付着されて培養される。実施の第３形態では、
３次元的に重力が印加され、３次元的構造をもつ人工基
質に均一に細胞付着する等の３次元的な培養が可能にな
る。また、培養容器が２軸回転されて発生する流体攪拌
による剪断力は小さく、付着・凝集した細胞がバラバラ
になることや、損傷することが防がれる。
【００４９】人工基質の上に細胞が培養されることは、
大型の人工臓器の構築を可能にする。大型の人工臓器を
構築するためには、大型の細胞塊を培養することが必要
である。しかし、大型の細胞塊を完全な浮遊状態に保つ
ことは困難であり、細胞塊が大型化すると細胞塊に損傷
が加わりやすい。細胞塊が、培養容器に固定された人工
基質の上に培養されることにより、細胞塊の損傷が防が
れ、大型の細胞塊の培養が可能になる。このとき人工基
質は、細胞塊を固定的に支持すると共に、細胞塊の培養
の骨格となり、人工臓器の一部を構成する。
大型の人工臓器の構築を可能にする。大型の人工臓器を
構築するためには、大型の細胞塊を培養することが必要
である。しかし、大型の細胞塊を完全な浮遊状態に保つ
ことは困難であり、細胞塊が大型化すると細胞塊に損傷
が加わりやすい。細胞塊が、培養容器に固定された人工
基質の上に培養されることにより、細胞塊の損傷が防が
れ、大型の細胞塊の培養が可能になる。このとき人工基
質は、細胞塊を固定的に支持すると共に、細胞塊の培養
の骨格となり、人工臓器の一部を構成する。
【００５０】実施の第３形態では、実施の第２形態で使
用される培養容器１２の代わりに、図７に示された培養
容器４１が使用される。培養容器４１は、隔壁４２によ
り、流路室４３と培養室４４とに分離される。流路室４
３には、培養液を供給する供給管２５と、培養液を排出
する排出管２６とが接続される。隔壁４２には、多数の
穴（図示されない）が設けられ、その穴を通じて、流路
室４３と培養室４４とで培養液の交換が行われる。
用される培養容器１２の代わりに、図７に示された培養
容器４１が使用される。培養容器４１は、隔壁４２によ
り、流路室４３と培養室４４とに分離される。流路室４
３には、培養液を供給する供給管２５と、培養液を排出
する排出管２６とが接続される。隔壁４２には、多数の
穴（図示されない）が設けられ、その穴を通じて、流路
室４３と培養室４４とで培養液の交換が行われる。
【００５１】培養室４４の内部には、人工基質４５と人
工基質支持部４６、４７とが収納される。人工基質４５
は、例えばスポンジコラーゲンにより形成される。人工
基質４５は細胞塊（図示されない）を培養する骨格とな
り、細胞塊は、人工基質４５に付着した状態で培養され
る。人工基質支持部４６、４７は、人工基質４５を培養
容器４１の内壁に固定的に保持する。人工基質４５と人
工基質支持部４６、４７とにより、培養される細胞塊
は、培養液中に固定的に保持される。
工基質支持部４６、４７とが収納される。人工基質４５
は、例えばスポンジコラーゲンにより形成される。人工
基質４５は細胞塊（図示されない）を培養する骨格とな
り、細胞塊は、人工基質４５に付着した状態で培養され
る。人工基質支持部４６、４７は、人工基質４５を培養
容器４１の内壁に固定的に保持する。人工基質４５と人
工基質支持部４６、４７とにより、培養される細胞塊
は、培養液中に固定的に保持される。
【００５２】本発明による細胞培養装置の実施の第３形
態の他の構成は、実施の第２形態と同一でありその詳細
な説明は行われない。
態の他の構成は、実施の第２形態と同一でありその詳細
な説明は行われない。
【００５３】実施の第３形態では、以下のようにして組
織の構築が行われる。培養される細胞が、人工基質４５
に付着される。人工基質４５が人工基質支持部４６、４
７により培養室４４の内壁に固定され、更に、培養容器
４１の内部は培養液で満たされる。培養容器４１が、３
次元クリノスタット１１により２軸回転され、培養が開
始される。培養の間、ポンプ１４は、培養液タンク１３
から培養液を培養容器４１に供給し、培養容器４１から
排出される培養液は、培養液タンク１３に戻される。培
養室４４の内部では、培養液が三次元的に流れ、更に、
重力が人工基質４５に対して全ての方向から印加され
る。これにより、細胞が人工基質４５の表面に３次元的
に増殖する。
織の構築が行われる。培養される細胞が、人工基質４５
に付着される。人工基質４５が人工基質支持部４６、４
７により培養室４４の内壁に固定され、更に、培養容器
４１の内部は培養液で満たされる。培養容器４１が、３
次元クリノスタット１１により２軸回転され、培養が開
始される。培養の間、ポンプ１４は、培養液タンク１３
から培養液を培養容器４１に供給し、培養容器４１から
排出される培養液は、培養液タンク１３に戻される。培
養室４４の内部では、培養液が三次元的に流れ、更に、
重力が人工基質４５に対して全ての方向から印加され
る。これにより、細胞が人工基質４５の表面に３次元的
に増殖する。
【００５４】培養細胞と人工基質４５で構成された構造
体は、人工臓器として培養容器４１から取り出される。
構築された人工臓器を、体内に移植し、或いは、体外に
設置することにより、臓器の機能の再生及び修復が可能
である。
体は、人工臓器として培養容器４１から取り出される。
構築された人工臓器を、体内に移植し、或いは、体外に
設置することにより、臓器の機能の再生及び修復が可能
である。
【００５５】大型の人工臓器を構築するためには、図８
に示されているように、人工基質管４８が人工基質４５
に設けられることが好ましい。この人工基質管４８の一
端は、図４に示された供給管２５に接続され、他端は、
排出管２６に接続され、人工基質管４８の内部には、培
養液が通される。人工基質４５に構築される組織が大型
化すると、増殖に必要な物質を、組織の内部に供給する
ことが困難になる。その内部に培養液が通された人工基
質管４８は、人工血管として作用し、組織の内部に増殖
に必要な物質が供給される。人工基質管４８が設けられ
る場合、人工基質管４８が人工基質４５を支持すること
が可能であり、図８に示されているように、人工基質支
持部４６、４７は、必ずしも設けられる必要がない。
に示されているように、人工基質管４８が人工基質４５
に設けられることが好ましい。この人工基質管４８の一
端は、図４に示された供給管２５に接続され、他端は、
排出管２６に接続され、人工基質管４８の内部には、培
養液が通される。人工基質４５に構築される組織が大型
化すると、増殖に必要な物質を、組織の内部に供給する
ことが困難になる。その内部に培養液が通された人工基
質管４８は、人工血管として作用し、組織の内部に増殖
に必要な物質が供給される。人工基質管４８が設けられ
る場合、人工基質管４８が人工基質４５を支持すること
が可能であり、図８に示されているように、人工基質支
持部４６、４７は、必ずしも設けられる必要がない。
【００５６】本発明による細胞培養装置の実施の第３形
態は、実施の第１形態及び第２形態と同様に、３次元的
な構造を有する組織を構築することができる。実施の第
３形態では、更に、大型の組織の構築が可能である。
態は、実施の第１形態及び第２形態と同様に、３次元的
な構造を有する組織を構築することができる。実施の第
３形態では、更に、大型の組織の構築が可能である。
【００５７】
【発明の効果】本発明により、細胞の培養によって３次
元的な構造を有する組織を構築するための実用的な技術
が提供される。
元的な構造を有する組織を構築するための実用的な技術
が提供される。
【００５８】また、本発明により、細胞の培養を行って
３次元的な構造を有する組織を構築するときに、細胞の
分散が防がれる技術が提供される。
３次元的な構造を有する組織を構築するときに、細胞の
分散が防がれる技術が提供される。
【００５９】また、本発明により、細胞の培養を行って
３次元的な構造を有する組織を構築するときに、長期の
細胞の培養を可能にする技術が提供される。
３次元的な構造を有する組織を構築するときに、長期の
細胞の培養を可能にする技術が提供される。
【００６０】また、本発明により、細胞の培養を行って
３次元的な構造を有する組織を構築するときに、細胞の
培養の環境を最適化する技術が提供される。
３次元的な構造を有する組織を構築するときに、細胞の
培養の環境を最適化する技術が提供される。
【００６１】また、本発明により、細胞の培養を行っ
て、大型、且つ、３次元的な構造を有する組織を構築す
る技術が提供される。
て、大型、且つ、３次元的な構造を有する組織を構築す
る技術が提供される。
【図１】図１は、本発明による細胞培養装置の実施の第
１形態を示す。
１形態を示す。
【図２】図２は、実施の第１形態の細胞培養装置により
培養された細胞塊の外観写真である。
培養された細胞塊の外観写真である。
【図３】図３は、実施の第１形態の細胞培養装置により
培養された細胞塊の断面写真である。
培養された細胞塊の断面写真である。
【図４】図４は、本発明による細胞培養装置の実施の第
２形態を示す。
２形態を示す。
【図５】図５は、ロータリージョイント１８を示す。
【図６】図６は、培養容器１２を示す。
【図７】図７は、本発明による細胞培養装置の実施の第
３形態で使用される培養容器４２を示す。
３形態で使用される培養容器４２を示す。
【図８】図８は、培養容器４２の変形例を示す。
１：３次元クリノスタット
２：培養容器
３：本体
３ａ：基部
３ｂ、３ｃ：脚
４：モータ
５：外側フレーム
６：モーター
７：内側フレーム
１１：３次元クリノスタット
１２：培養容器
１３：培養液タンク
１４：ポンプ
１５：本体
１６ａ、１６ｂ：支柱
１７：外側フレーム
１８：ロータリージョイント
１９：モータ
２０：ロータリージョイント
２１：モータ
２２：内側フレーム
２３、２４、２５：供給管
２６、２７、２８：排出管
２９：固定部
３０：回転部
３１、３２：シール
３３：第１液導入室
３４：第２液導入室
３５：第１穴
３６：第２穴
３７：隔壁
３８：流路室
３９：培養室
４１：培養容器
４２：隔壁
４３：流路室
４４：培養室
４５：人工基質
４６、４７：人工基質支持部
４８：人工基質管
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 行徳 淳一郎
兵庫県神戸市兵庫区和田宮通３丁目２番24
号 ツルイ化学株式会社内
(72)発明者 浅島 誠
東京都豊島区南大塚３−40−９
Ｆターム(参考） 4B065 AA87X BC01 BC08 BC35
BD38 BD39 BD42 BD43 CA44
4C081 AB11 CD34 DA01 DA02 DA03
EA11
Claims (9)
- 【請求項１】 培養液と培養細胞とを培養容器に封入し
て、前記培養液の中に前記培養細胞を浮遊した状態で保
持することと、 前記培養容器をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）すること
とを備えた細胞培養方法。 - 【請求項２】 請求項１に記載の細胞培養方法におい
て、 前記培養液の粘度は、前記培養容器がｎ軸回転されてい
る間に前記培養細胞が前記培養容器に接触しないように
調整された細胞培養方法。 - 【請求項３】 培養液と、培養細胞が付着された人工基
質と、前記人工基質を固定して保持する保持部とを培養
容器に封入することと、 前記培養容器をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）すること
とを備えた細胞培養方法。 - 【請求項４】 請求項１から請求項３のいずれか一の請
求項に記載の細胞培養方法において、 更に、前記培養細胞の分化を促進することを備えた細胞
培養方法。 - 【請求項５】 培養液と培養細胞とを培養容器に封入し
て、前記培養液の中に前記培養細胞を浮遊した状態で保
持することと、 前記培養容器をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）した状態
で前記培養細胞を培養し、人工臓器を形成することとを
備えた人工臓器製造方法。 - 【請求項６】 請求項５に記載の人工臓器製造方法にお
いて、 前記培養液の粘度は、前記培養容器がｎ軸回転されてい
る間に前記培養細胞が前記培養容器に接触しないように
調整された人工臓器製造方法。 - 【請求項７】 培養液と、培養細胞が付着された人工基
質と、前記人工基質を固定して保持する保持部とを培養
容器に封入することと、 前記培養容器をｎ軸回転（ｎは２以上の整数）した状態
で前記培養細胞を培養することと、 前記培養細胞が培養された後、培養された前記培養細胞
と前記人工基質とで構成される構造体を、人工臓器とし
て取り出すこととを備えた人工臓器製造方法。 - 【請求項８】 請求項５から請求項７のいずれか一の請
求項に記載の人工臓器製造方法において、 更に、前記培養細胞の分化を促進することを備えた細胞
培養方法。 - 【請求項９】 請求項４から請求項８のいずれか一の請
求項に記載の人工臓器製造方法により形成された人工臓
器。
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