JP2002541200A - 癌の処置のための方法および組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明者らは、驚くべきことに、タキサン誘導体（例えば、パクリタキセル）のようなＧ２／Ｍ薬物と組み合わせて、β−ラパコンのようなＧ１期および／またはＳ期薬物の投与が、これらの薬剤単独の投与と比較した場合、腫瘍の数（および腫瘍の容積）において、予期されなかった、より大きい、相加的な（すなわち、相乗的な）減少を生じることを発見した。さらに、毒性または体重減少の兆候は、観察されなかった。本発明は、タキサン誘導体、好ましくはパクリタキセル、およびβ−ラパコン、またはその誘導体もしくはアナログのような組み合わせを用いて、哺乳動物腫瘍を処置するための方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の背景） これまで、癌の処置は問題があることが判明してきた。「癌」は、多くの共通
の特性を共有する一方、各々の特定の癌は、それ自体の特定の性質を有する。遺
伝的因子および環境的因子は、重篤度および処置の予後において複雑な相互作用
を有する。従って、処置は注意深く適応させなければならない。

【０００２】 特定の薬学的処置は、癌の１つの型に有用であるが、しかし他の癌には有用で
ないことが判明した（ＨｏｌｌａｄおよびＦｒｅｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉ
ｃｉｎｅ，第４版、Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｅｎ
ｓ）。他の処置（例えば、放射線治療）は、一定の範囲の癌については部分的に
有用であるが、代表的には完全な治癒を生じない。確かに、多くの癌の重篤度お
よび死亡率が与えられると、薬物は、例えば、腫瘍の増殖を遅延させること、ま
たは寿命を延長すること（実際に症状を治癒することなく）によって、それが生
活の質を改善する場合には、成功したと見なされ得る。従って、多くの状況にお
いて、９０〜９５％の悪性細胞を除去し得る化合物または処置の組み合わせを用
いて、個体は処置されるが、残存している細胞は再増殖および転移し得、究極的
には死をもたらす。癌の中で特に乏しい最終的な予後を有するものは、卵巣癌で
ある。

【０００３】 組み合わせ治療は、所望されているが、運任せの計画である。処置は、代表的
には、依存性ではない。多くの場合において、交差効果および処置の負荷は、処
置のいずれか単独の場合よりも、組み合わせについてより低い有効性を生じ得る
。直面する問題には、多剤耐性（ＭＤＲ）が含まれ、ここでは悪性細胞は、本質
的に、細胞毒性化合物および他の化合物を細胞外にくみ出し、それによって有用
な癌の処置の継続を妨害する。

【０００４】 現在、癌の処置のために使用されているか、またはそのために研究されている
多数の細胞毒性因子が存在する。これらのうちの１つであるパクリタキセル（Ｔ
ＡＸＯＬ（登録商標）ともまた呼ばれる）は、米国癌学会の植物抽出物のスクリ
ーニングプログラムの後で、Ｗａｎｉおよび共同研究者によって１９７１年に最
初に同定された（Ｗａｎｉ ＭＣら、１９７１ Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．
，９８：２３２５−２３２７）。この複合体ジテルペンは、いくつかの型の腫瘍
に対して細胞毒性活性を示し、そしていくつかの癌（例えば、卵巣癌および乳癌
）において現在使用されている。臨床的研究は、ＴＡＸＯＬ（登録商標）が、最
終的に、ヒトの癌の７０％を超える処置において使用され得ることを示唆する。

【０００５】 パクリタキセルは、その独特の作用の機構によって他の細胞毒性薬物とは異な
っている。これは、細胞周期の分子的調節を操作することによって細胞分裂を妨
害する。パクリタキセルは、すべての真核細胞に存在する微小管の主要な構造成
分であるチューブリンに結合する。他の抗有糸分裂薬剤（例えば、ビンカアルカ
ロイドおよびコルヒチン（ｃｏｌｃｉｃｈｉｎｅ）（これらは、チューブリンの
重合を阻害する））と異なって、パクリタキセルは、チューブリンのこのアセン
ブリを促進し、そして得られる微小管を安定化する。この事象は、細胞分裂の中
断をもたらし、そして究極的には細胞死をもたらす。

【０００６】 タキソイド化合物の抗腫瘍特性もまた、タキサン由来の新規な抗癌剤の生成を
もたらした。タキソテール^TM（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｅ Ｒｏｒｅｒにより
市販されている）は、１０−ｄｅａｃｅｔｙｌｂａｃｃａｔｉｎ ＩＩＩから産
生され、これは、卵巣癌および乳癌の処置において現在使用されている。

【０００７】 例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）およびタキソテールのような薬剤が転移性卵
巣細胞および転移性乳癌の進行の処置がなされる一方、これらの大部分は、なお
これらの疾患に究極的には屈服する。

【０００８】 β−ラパコン（β−ｌａｐａｃｈｏｎｅ）はキノンであり、ラパコール（ナフ
トキノン）に由来し、これは、キササゲ科（Ｂｉｇｎｏｎｉａｃｅａｅ）のメン
バーである、ラパコの木（Ｔａｂｅｂｕｉａ ａｖｅｌｌａｎｅｄａｅ）から単
離され得る。カンプトテシンおよびトポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）と同様に
、β−ラパコンは、ＤＮＡトポイソメラーゼＩを阻害する（Ｌｉ，Ｃ．Ｊ．ら、
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９３）。この化合物は、いくつかの型の癌細胞（
肺癌、乳癌、結腸癌、および前立腺癌ならびに悪性メラノーマを含む）に対して
、インビトロで有効であることが見出されてきた（Ｌｉ，Ｃ．Ｊ．ら、Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５５：３７１２−３７１５（１９９５）および未公開
データ）。

【０００９】 β−ラパコンは、ＤＮＡ複製を破壊することによって機能する。トポイソメラ
ーゼＩは、染色体を構成するＤＮＡをほどく酵素である。この染色体は、細胞が
遺伝的情報を使用して、タンパク質を合成するためにほどかれていなければなら
ないが；β−ラパコンは、染色体を堅く巻いた状態に保ち、それゆえに、細胞は
タンパク質を作ることができない。結果として、細胞は増殖を停止する。癌細胞
は定常的に複製を行っており、そして複製を制限する多くの機構を回避するので
、正常細胞と同様に、癌細胞はトポイソメラーゼ阻害に対して、正常細胞よりも
より脆弱である。しかし、これらの化合物を用いる処置はまた、悪性細胞の増殖
を阻害および遅延して、部分的にのみ成功する。

【００１０】 単一の薬物または薬物の組み合わせは、進行した転移性の癌のために治療効果
がなく、患者は、代表的には、数年間で癌に対して屈服する。従って、腫瘍負荷
をさらに減少することによって、生命を脅かす腫瘍の発症を延長し得、そして／
または生活の質を改善する新規な薬物および組み合わせが非常に重要である。

【００１１】 （発明の要旨） 本発明者らは、驚くべきことに、Ｇ１および／またはＳ期の細胞を標的化する
化合物（例えば、トポイソメラーゼＩインヒビター（例えば、β−ラパコン））
を、Ｇ２／Ｍ期でこのような細胞を標的化する化合物（例えば、タキサン誘導体
（例えば、パクリタキセル））と組み合わせる投与が、これらの薬剤単独の投与
と比較して、腫瘍の数（および転移性の腫瘍を有する哺乳動物における腫瘍の体
積）の相加的な（すなわち、相乗作用的な）減少よりも予想外に大きな減少を生
じることを発見した。さらに、腫瘍は、数ヶ月間の観察において、再び増殖する
ことはなかった。さらに、そのように処置された哺乳動物中では、毒性の徴候ま
たは体重の減少は観察されなかった。

【００１２】 従って、本発明は、Ｇ２／Ｍ期薬物（以下を含むがこれらに限定されない：タ
キサン、その誘導体およびアナログ、より好ましくはパクリタキセル）と、Ｇ１
および／またはＳ期薬物（好ましくは、β−ラパコンまたはその誘導体またはア
ナログ）との組み合わせを使用する、哺乳動物腫瘍を処置するための方法に関す
る。

【００１３】 ２つの代表的な化合物のリストは、以下の表１に記載される。本発明の組み合
わせは、化学療法的に屈折した転移性の癌を有する患者の処置において、特に有
利である。本発明の方法は、哺乳動物に、Ｇ１期およびＳ期の薬物、Ｇ１期の薬
物、Ｓ期の薬物の有効量を、Ｇ２／Ｍの薬物と組み合わせて投与する工程を包含
する。好ましくは、その組み合わせは、（１）トポイソメラーゼインヒビター（
例えば、β−ラパコールまたはその誘導体、その誘導体もしくはアナログ；およ
び（２）タキサン、その誘導体またはアナログおよびその薬学的に受容可能な塩
。

【００１４】 本明細書中で使用される場合、句「タキサン誘導体」は、その抗新生物特性に
起因して、癌の化学療法において使用されるか、または使用され得る任意のタキ
サンを意味する。ＴＡＸＯＬ（登録商標）は、好ましいタキサン誘導体である。

【００１５】 本明細書中でさらに使用される場合、句「β−ラパコン」は、ラパコン（３，
４−ジヒドロ−ｓ，３−ジメチル−２Ｈ−ナフトール［１，３−ｂ］ピラン−５
，６−クローン）ならびにその誘導体およびアナログを意味する。好ましい誘導
体およびアナログは以下に議論される。

【００１６】 （詳細な説明） 本発明は、Ｇ１および／またはＳ期の化合物を、Ｇ２／Ｍ期の化合物と組み合
わせる投与を利用する方法を使用する、癌（乳癌、卵巣癌、および前立腺癌を含
むがこれらに限定されない）の治療のための有利な組み合わせを提供する。

【００１７】 １つの実施形態において、本発明は、Ｇ１および／またはＳ期のチェックポイ
ントで悪性細胞を標的化する化合物を、Ｇ２／Ｍのチェックポイントで作用する
薬物を使用することと同時に、またはそれに先だって使用することによって、こ
のような悪性細胞を有する被験体を処置するため、またはこのような悪性細胞の
さらなる増殖を阻害するための方法に関する。この判断基準を満たす個々の化合
物は、当該分野で公知である。例えば、β−ラパコンおよびその誘導体は、Ｇ１
およびＳ期薬物である。ところが、タキソール（ｔａｘｏｌ）およびその誘導体
は、Ｇ２／Ｍ薬物である。代表的な化合物のリストを、以下の表１に示す：

【００１８】

【表１】 本発明の組み合わせは、β−ラパコンおよびタキソールの例によって示される
場合に特に有用であり、ここで相乗作用効果が得られた。複数のチェックポイン
ト（例えばＧＩおよび／またはＳ期およびＧ２／Ｍ期）での細胞周期の遅れ基づ
く分子変化は、例えば、悪性細胞のアポトーシスの相乗作用誘導の結果であり得
る。理論に束縛されることを望まないが、相乗作用効果は、ｃｄｃ２キナーゼの
阻害およびｐ２ｌの上方制御によって媒介されると考えられる。ｐ２ｌは、ＧＩ
およびＳ期のチェックポイントを制御し（Ｅｌｌｅｄｇｅ，Ｓ．Ｊ．（１９９６
）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４，１６６４−１６７２）、そしてＧ２／Ｍチェックポ
イントの制御に関連する（Ｈａｒｔｗｅｌｌ Ｌ．Ｈ．ら、Ｍ．Ｂ．（１９９４
）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６６，１８２１−１８２８）。細胞周期のチェックポイン
トはまた、ｃｄｃ２キナーゼおよびそのインヒビターによって制御される（Ｅｌ
ｌｅｄｇｅ，Ｓ．Ｊ．（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４，１６６４−１６７
２およびＮｕｒｓｅ，Ｐ．（１９９７）Ｃｅｌｌ ９１，８６５−８６７）． 好ましくは、ＧＩおよび／またはＳ期の化合物は、Ｇ２／Ｍ期のチェックポイ
ントにおいて、細胞を標的化する化合物より前、またはそれと同時に投与される
。より好ましくは、この化合物は、Ｇ２／Ｍ期のチェックポイントにおいて、細
胞を標的化する化合物より前に、投与される。

【００１９】 好ましいＧＩおよび／またはＳ期のチェックポイント標的化（ｔａｒｇｅｔｉ
ｎｇ）化合物としては、ＧＩおよび／またはＳ期の薬物（例えばβ−ラパコン）
、ＧＩ期の薬物（例えば、ロバスタチン、ミモシン、タモキシフェンなど）なら
びにＳ期の薬物（例えば、ゲムシタビン、５−ＦＵ、ＭＴＸなど）が挙げられる
。β−ラパコン、その誘導体およびアナログが、より好ましい。

【００２０】 さらに、ＧＩおよび／またはＳ期のチェックポイント標的化薬物としては、還
元型β−ラパコンの誘導体が挙げられる。β−ラパコンの還元は、β−ラパコン
活性の必須の成分であることが示された（Ｊ．Ｊ．Ｐｉｎｋら（２０００）Ｊ
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：５４１６−５４２４を参照のこと）。好ましくは
、ＧＩおよび／またはＳ期のチェックポイントの標的化薬物としては、さらに、
還元型β−ラパコン（すなわち還元型β−ラパコン誘導体もしくはアナログ）お
よび／またはβ−ラパコン誘導体もしくはアナログ（キニーネ形態）と還元型β
−ラパコン誘導体またはアナログ（ヒドロキニーネ形態）との組み合わせが挙げ
られ得る。最も好ましくは、還元型β−ラパコン、その誘導体またはアナログと
しては、以下の式Ｉａに示される還元型β−ラパコンの修飾ヒドロキニーネ基が
挙げられ、ここでＲ’および／またはＲ”基は、例えば、スクシネート、アミノ
酸などに変換される。

【００２１】

【化１】 好ましいＧ２／Ｍ期のチェックポイントの標的化化合物としては、微小管標的
化薬物（例えば、タキソール、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ビンクリ
スチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ
）、ナベルビン（ｎａｖｅｌｖｉｎｅ）など）ならびにトポイソメラーゼ毒素（
例えば、テニポシド、エトポシド、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）
、カンプトセシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、ダウノルビシン、ダクチノマ
イシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エピルビシン、イダルビシンなど）
が挙げられる。

【００２２】 エポチロン（エポチロンポリケチド）は、タキソールと同じ機構によて微小管
を安定化する、微小管標的化薬物である（Ｌｉｔａｎｇら（２０００） Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２８７， ６４０−６４２を参照のこと）。エポチロンは、タキソー
ル−耐性腫瘍に対して有効である場合および十分に水溶性である場合に利点があ
る。エポチロンＡおよびＢは、天然において最も豊富であり、そして１２，１３
−デオキシ−エポチロンＢ（エポチロンＤ）は、最も高い治療インデックスを有
する。エポチロン（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄまたはその混合物）は、β−ラパコンと組み
合わせて使用され、これは、前記のようなβ−ラパコンとタキソールとの組み合
わせに類似した、悪性細胞のアポトーシスの相乗作用誘導において使用され得る
。本発明の目的ために、エポチロンは、エポチロンＡ、Ｂ、ＣまたはＤ（デオキ
シ−エポチロン）を参照する。

【００２３】 好ましい組み合わせとしては、以下が挙げられる： β−ラパコンとタキソール；β−ラパコンとドセタキセル；β−ラパコンとビ
ンクリスチン；β−ラパコンとビンブラスチン；β−ラパコンとノコダゾール；
β−ラパコンとテニポシド；β−ラパコンとエトポシド；β−ラパコンとアドリ
アマイシン；β−ラパコンとエポチロン；β−ラパコンとナベルビン；β−ラパ
コンとカンプトセシン；β−ラパコンとダウノルビシン；β−ラパコンとダクチ
ノマイシン；β−ラパコンとミトキサントロン；β−ラパコンとアムサクリン；
β−ラパコンとエピルビシン；またはβ−ラパコンとイダルビシン。

【００２４】 還元型β−ラパコンとタキソール；還元型β−ラパコンとドセタキセル；還元
型β−ラパコンとビンクリスチン；還元型β−ラパコンとビンブラスチン；還元
型β−ラパコンとノコダゾール；還元型β−ラパコンとテニポジド；還元型β−
ラパコンとエトポシド；還元型β−ラパコンとアドリアマイシン；還元型β−ラ
パコンとエポチロン；還元型β−ラパコンとナベルビン；還元型β−ラパコンと
カンプトセシン；還元型β−ラパコンとダウノルビシン；還元型β−ラパコンと
ダクチノマイシン；還元型β−ラパコンとミトザントロン；還元型β−ラパコン
とアムサクリン；還元型β−ラパコンとエピルビシン；または還元型β−ラパコ
ンとイダルビシン。

【００２５】 ロバスタチンとタキソール；ロバスタチンとドセタキセル；ロバスタチンとビ
ンクリスチン；ロバスタチンとビンブラスチン；ロバスタチンとノコダゾール；
ロバスタチンとテニポシド；ロバスタチンとエトポシド；ロバスタチンとアドリ
アマイシン；ロバスタチンとエポチロン；ロバスタチンとナベルビン；ロバスタ
チンとカンプトセシン；ロバスタチンとダウノルビシン；ロバスタチンとダクチ
ノマイシン；ロバスタチンとミトキサントロン；ロバスタチンとアムサクリン；
ロバスタチンとエピルビシン；またはロバスタチンとイダルビシン。

【００２６】 ミモシンとタキソール；ミモシンとドセタキセル；ミモシンとビンクリスチン
；ミモシンとビンブラスチン；ミモシンとノコダゾール；ミモシンとテニポシド
；ミモシンとエトポシド；ミモシンとアドリアマイシン；ミモシンとエポチロン
；ミモシンとナベルビン；ミモシンとカンプトセシン；ミモシンとダウノルビシ
ン；ミモシンとダクチノマイシン；ミモシンとミトキサントロン；ミモシンとア
ムサクリン；ミモシンとエピルビシン；またはミモシンとイダルビシン。

【００２７】 タモキシフェンとタキソール；タモキシフェンとドセタキセル；タモキシフェ
ンとビンクリスチン；タモキシフェンとビンブラスチン；タモキシフェンとノコ
ダゾール；タモキシフェンとテニポシド；タモキシフェンとエトポシド；タモキ
シフェンとアドリアマイシン；タモキシフェンとエポチロン；タモキシフェンと
ナベルビン；タモキシフェンとカンプトセシン；タモキシフェンとダウノルビシ
ン；タモキシフェンとダクチノマイシン；タモキシフェンとミトキサントロン；
タモキシフェンとアムサクリン；タモキシフェンとエピルビシン；またはタモキ
シフェンとイダルビシン。

【００２８】 ゲムシタビンとタキソール；ゲムシタビンとドセタキセル；ゲムシタビンとビ
ンクリスチン；ゲムシタビンとビンブラスチン；ゲムシタビンとノコダゾール；
ゲムシタビンとテニポシド；ゲムシタビンとエトポシド；ゲムシタビンとアドリ
アマイシン；ゲムシタビンとエポチロン；ゲムシタビンとナベルビン；ゲムシタ
ビンとカンプトセシン；ゲムシタビンとダウノルビシン；ゲムシタビンとダクチ
ノマイシン；ゲムシタビンとミトキサントロン；ゲムシタビンとアムサクリン；
ゲムシタビンとエピルビシン；またはゲムシタビンとイダルビシン。

【００２９】 ５−ＦＵとタキソール；５−ＦＵとドセタキセル；５−ＦＵとビンクリスチン
；５−ＦＵとビンブラスチン；５−ＦＵとノコダゾール；５−ＦＵとテニポシド
；５−ＦＵとエトポシド；５−ＦＵとアドリアマイシン；５−ＦＵとエポチロン
；５−ＦＵとナベルビン；５−ＦＵとカンプトセシン；５−ＦＵとダウノルビシ
ン；５−ＦＵとダクチノマイシン；５−ＦＵとミトキサントロン；５−ＦＵとア
ムサクリン；５−ＦＵとエピルビシン；または５−ＦＵとイダルビシン。

【００３０】 ＭＴＸとタキソール；ＭＴＸとドセタキセル；ＭＴＸとビンクリスチン；ＭＴ
Ｘとビンブラスチン；ＭＴＸとノコダゾール；ＭＴＸとテニポシド；ＭＴＸとエ
トポシド；ＭＴＸとアドリアマイシン；ＭＴＸとエポチロン；ＭＴＸとナベルビ
ン；ＭＴＸとカンプトセシン；ＭＴＸとダウノルビシン；ＭＴＸとダクチノマイ
シン；ＭＴＸとミトキサントロン；ＭＴＸとアムサクリン；ＭＴＸとエピルビシ
ン；またはＭＴＸとイダルビシン。

【００３１】 本発明の組み合わせにより、驚くべき相乗効果が得られ、これは、腫瘍の苦し
い負荷を減少させそして／または腫瘍の増殖（特に、患者の転移性疾患）を退行
させる利点がある。

【００３２】 好ましくは、処置される癌は、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌、およ
び黒色腫である。より好ましくは、この癌は、卵巣癌である。

【００３３】 上記化合物は、当該分野で公知の任意の手段によって投与され得る。このよう
な型としては、経口、直腸、経鼻、局所（頬および舌下を含む）または非経口（
皮下、筋肉内、動脈内、および皮内を含む）投与が挙げられる。

【００３４】 容易さのために、患者に対して経口投与が好ましい。しかし、代表的な経口投
与は、静脈内投与よりも高い用量を必要とする。従って、状況に応じて（当業者
は、どの投与形態が特定の場合において最適かを決定しなければならない）、１
ヶ月当たりの投与回数に対して必要とされる、バランスのとれた用量が必要であ
る。

【００３５】 化合物の投与の際、各化合物の通常の用量が、個々に使用され得る。しかし、
好ましくは、低レベル（代表的に、７５％以下の個々の量、より好ましくは５０
％以下、さらにより好ましくは４０％以下）を使用する。

【００３６】 個々の成分は、以下により詳細に記載される。

【００３７】 記載される組み合わせ治療の１つの好ましい成分は、タキサン誘導体である。
このタキサンは、テルペンのファミリーであり、パクリタキセルおよびドセタキ
セル（Ｔａｘａｔｅｒｅ）を含むが、これらに限定されない。これは、Ｐａｃｉ
ｆｉｃ常緑針葉樹（Ｔａｘｕｓ ｂｒｅｖｉｆｏｌｌｉａ（これは、特定の癌（
特に乳癌および卵巣癌）に対して活性を有する））から主に誘導された。パクリ
タキセルが、好ましいタキサンである。これは、チューブリンダイマーからの微
小管の構築を促進し、そして脱重合化を防ぐことによって微小管を安定にする、
抗微小管（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ）剤と考えられる。この安定性は、
重要な静止期および有糸分裂細胞機能に必要不可欠な微小管のネットワークの通
常の動的再構築の阻害を生じる。用語”パクリタキセル”は、天然から誘導され
る形態および関連した形態、ならびに抗腫瘍性特性を有する化学的に合成された
化合物またはその誘導体の両方を含み、これには、脱酸素化したパクリタキセル
化合物（例えば、米国特許第５，４４０，０５６号（本明細書中で参考として援
用さる）に記載される化合物）が挙げられ、ＴＡＸＯＬ（登録商標）としてＢｒ
ｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙにより市販されている。パクリタキ
セル用の化学処方物は、公知であり、米国特許第５，４４０，０５６号に開示さ
れる。ＴＡＸＯＬ（登録商標）に加えて、他の誘導体が周知であり、例えば、こ
れらは、”Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｃｔｉｖｉ
ｔｙ ｏｆ ＴＡＸＯＬ（登録商標） ｏｔｈｅｒ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，
”Ｄ．Ｇ．Ｉ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎら、Ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６巻、表題”Ｎｅｗ Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｎａｔｕｒ
ａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（１９８６），Ａｔｔａ−ｕｒ
−Ｒａｈｍａｎ，Ｐ．Ｗ．ｌｅ Ｑｕｅｅｎｅ編（Ｅｌｖｅｓｉｅｒ，Ａｍｓｔ
ｅｒｄａｍ １９８６），２１９頁に記載される。さらに別のタキサン誘導体が
、当該分野で公知であり、例えば、米国特許第５，７７３，４６１号；同５，７
６０，０７２号；同５，８０７，８８８号；および同第５，８５４，２７８号に
開示されるタキサンが挙げられる。

【００３８】 タキサン（ｔａｘａｎｅ）誘導体のようなＧ２／Ｍ化合物は、医師により適切
と認められた任意の様式で、一般的に受け入れられた有効な用量範囲（例えば、
パクリタキセルについてＰｈｙｓｉｃｉａｎ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，
第５３版（１９９９），Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ Ｅｄｗａｒｄ Ｒ．Ｂａｒｎｈａ
ｒｔ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（「ＰＤＲ」）に記載される）で投与され得る。

【００３９】 一般的に、タキサン誘導体のようなＧ２／Ｍ化合物は、静脈内に、約１３５〜
約３００ｍｇ／ｍ²、好ましくは約１３５〜約１７５ｍｇ／ｍ²、そして最も好ま
しくは約１７５ｍｇ／ｍ²の用量で投与される。用量が、約１〜約２４時間、代
表的には約３時間にわたる期間にわたって投与されることが好ましい。用量は、
１〜約４週間以上、好ましくは約２〜約３週間繰り返され得る。

【００４０】 この薬物は、注射または経口形態のような任意の形態で投与され得る。例えば
、リポソーム処方物が記載される。例えば、本明細書中に参考として援用される
米国特許第５，４２４，０７３号を参照のこと。

【００４１】 前述のように、Ｇ２／Ｍ薬物（例えば、タキサン誘導体、好ましくはパクリタ
キセル）は、Ｇ１および／またはＳフェーズの薬物（例えば、β−ラパコンまた
はその誘導体）と同様のレジメンで投与されるが、量は、好ましくは通常与えら
れる量より減らされる。例えばタキサンが、例えばβ−ラパコンと同時に投与さ
れるか、またはβ−ラパコンが患者に投与された後、代表的にはβ−ラパコンが
患者に投与された約２４時間後に投与されることは、好ましい。

【００４２】 記載される組み合わせ治療の他の構成要素は、β−ラパコンまたはその誘導体
もしくはアナログである。

【００４３】 β−ラパコン（３，４−ジヒドロ−ｓ，３−ジメチル−２Ｈ−ナフトール［１
，３−ｂ］ピラン−５，６−クローン）は、現在使用される抗癌剤と異なる化学
構造を有する単純な植物産物である。これは、天然に存在するラパコールの硫酸
処理により得られ、このラパコールは、主にブラジルで生長するＴａｂｅｂｕｉ
ａ ａｖｅｌｌａｎｅｄａｅから容易に単離されるか、またはオーストラリアで
生長したロマチア（ｌｏｍａｔｉａ）の種子から単離されるロマチオール（ｌｏ
ｍａｔｉｏｌ）から容易に合成される。（Ｈｏｏｋｅｒ，Ｓ．ら， Ｊ． Ａｍ
．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，５８：１１８１−１１９０（１９３６）；Ｇｏｎｃａｌ
ｖｅｓ ｄｅ Ｌｉｍａ， Ｏ．ら，Ｒｅｖ．Ｉｎｓｔ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．Ｕ
ｎｉｖ．Ｒｅｃｉｆｅ．，４：３−１７（１９６２））。

【００４４】 β−ラパコンは、種々の薬学的効果を有することが示されてきた。β−ラパコ
ンは、トポイソメラーゼＩインヒビターであるが、カンプトセシンと異なる機構
で作用する（Ｌｉ，Ｃ．Ｊ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８： ２２４６３−２２４６８（１９９３））。多くのβ−ラパコン誘導体は、抗ウイ
ルス剤および抗寄生生物剤として合成および試験されてきた。（Ｇｏｎｃａｌｖ
ｅｓ，Ａ．Ｍ．ら，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，１：
１６７−１７６（１９８０）；Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ−Ｓａｂｂａ，Ｋ．ら，Ｊ．
Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２７：９９０−９９４（１９８４）；Ｌｉ，Ｃ．，ら，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：１８４２（１９９３））
。β−ラパコンおよびその誘導体（例えば、３−アリル−β−ラパコン）は、抗
トリパノソーマ効果を示し（Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ，Ａ．Ｍ．ら，前述）、その機
構は明白でない。β−ラパコンはまた、細胞をＤＮＡ損傷因子に対して敏感にす
るＤＮＡ修復インヒビターであることが示された（Ｂｏｏｒｓｔｅｉｎ，Ｒ．Ｊ
．ら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１１８：８
２８−８３４，（１９８４）；Ｂｏｏｔｈｍａｎ，Ｄ．Ａ．，ら，Ｊ．Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅｓ．，４９：６０５−６１２（１９８９））。β−ラパコンは、イヌ
、ラット、マウス、およびニワトリにおいて充分耐性である。１ヶ月間手術後（
ｐ．ｏ．）毎日与えられる場合、最大の耐性用量は、ラットにおいて２００ｍｇ
／ｋｇ、およびイヌにおいて１００ｍｇ／ｋｇである。より高い用量は、胃潰瘍
および赤血球の損失を引き起こすが、骨髄抑制（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｕ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ）の徴候は引き起こさない（Ｃｈｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ、個人的
な情報）。

【００４５】 β−ラパコン誘導体およびアナログは、当該分野で公知であり、そして例えば
、米国特許第５，８２８，７００号；ＷＯ９７／０８１６２；および米国特許第
５，７０３，６２５号に開示される。好ましい誘導体およびアナログとしては、
以下の式ＩおよびＩＩ

【００４６】

【化２】 の化合物およびその塩が挙げられ、 ここでＲおよびＲ₁は、水素、ヒドロキシ、チオ（ＳＨ）、ハロゲン（例えば、
フルオロ、クロロおよびブロモ）、置換アリールおよび無置換のアリール、置換
および無置換のアルケニル、置換および無置換のアルキル、ならびに置換および
無置換のアルコキシからなる群から各々独立して選択され、ここでＲおよびＲ₁
が結合される環炭素の間の点線の二重結合は、任意の環二重結合を表す。アルキ
ル基は、好ましくは１〜１５個の炭素原子を有し、より好ましくは１〜１０個の
炭素原子を有し、なおより好ましくは１〜６個の炭素原子を有する。本明細書中
で使用される場合、用語アルキルは、他で変更されない限り、環式基および非環
式基の両方をいうが、当然のことながら環式基は少なくとも３つの炭素環員を含
む。直鎖または分岐鎖の非環式アルキル基は、一般的には環式基より好ましい。
直鎖アルキル基は、一般的には分岐鎖より好ましい。アルケニル基は、好ましく
は２〜１５個の炭素原子を有し、より好ましくは２〜約１０個の炭素原子を有し
、なおより好ましくは２〜約６個の炭素原子を有する。特に好ましいアルケニル
基は、３個の炭素原子を有し（すなわち、１−プロペニルまたは２−プロペニル
）、アリル部分は特に好ましい。フェニルおよびナフチルは、一般的に好ましい
アリール基である。アルコキシ基は、１つ以上の酸素連結を有するアルコキシ基
を含み、そして好ましくは１〜１５個の炭素原子を有し、より好ましくは１〜約
６個の炭素原子を有する。前述の置換されたＲおよびＲ₁基は、１つ以上の適切
な基（例えば、アルキル基（例えば、１〜１０個の炭素原子または１〜６個の炭
素原子を有するアルキル基）、アルケニル基（例えば、２〜１０個の炭素原子ま
たは２〜６個の炭素原子を有するアルケニル基）、６〜１０個の炭素原子を有す
るアリール基、ハロゲン（例えば、フルオロ、クロロおよびブロモ））、ならび
にＮ、ＯおよびＳによって１つ以上の利用可能な位置で置換され得、ヘテロアル
キル（例えば、１つ以上の前述のヘテロ原子連結（従ってアルコキシ、アミノア
ルキルおよびチオアルキルを含む）ならびに１〜１０個の炭素原子または１〜６
個の炭素原子を有するヘテロアルキル）を含む。

【００４７】 式ＩおよびＩＩの化合物は、容易に作製され得るかまたは得られ得る。（Ｐａ
ｒｄｅｅ，Ａ．ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４９，１−８（１９８９
）；Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ−Ｓａｂｂａ，Ｋ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄ
ｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７，第８号９９０−９９４（１９８４）
；Ｓ．Ｈｏｏｋｅｒ，５８，１１８１−１１９７（１９３６）。

【００４８】 式Ｉの好ましい化合物としては、β−ラパコン、３−アリル−β−ラパコン、
３−ブロモ−β−ラパコンおよび３−ＯＨ−β−ラパコンが挙げられる。３−ア
リル−β−ラパコンおよび３−ブロモ−β−ラパコンがより好ましい。

【００４９】 式ＩＩの好ましい化合物としては、３−ブロモ−α−ラパコンが挙げられる。

【００５０】 式ＩＩＩのβ−ラパコンアナログ（以下に示す）はまた、本発明の組成物およ
び方法において使用され得る。

【００５１】

【化３】 式ＩＩＩにおいて、Ｒは、（ＣＨ₂）_n−Ｒ₁であり、 ここでｎは、０〜１０の整数であり、そしてＲ₁は、水素、アルキル、アリール
、複素芳香族、複素環式、脂肪族、アルコキシ、ヒドロキシ、アミン、チオール
、アミド、またはハロゲンの側基である。

【００５２】 式ＩＩＩの好ましいアナログとしては、３−エトキシカルボニルメチル−β−
ラパコン、３−（２’−ヒドロキシエチル）−β−ラパコン、３−メチル−β−
ラパコン、３−（２’−アミノエチル）−β−ラパコン、３−メトキシ−β−ラ
パコン、３−ベンジルオキシ−β−ラパコン、３−エトキシカルボニルメトキシ
−β−ラパコンおよび３−アリルオキシ−β−ラパコンが挙げられる。

【００５３】 式ＩＩＩのアナログは、米国特許第５，７６３，６２５号に開示される方法に
より生成され得る。

【００５４】 式ＩＶおよびＶのβ−ラパコン誘導体（以下に示される）は、本発明の組成物
および方法においてさらに使用され得る。

【００５５】

【化４】 ここでＲ₁〜Ｒ₆は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキル、Ｃ₁〜Ｃ₆アルキル、Ｃ₁〜Ｃ₆アルケ
ニル、Ｃ₁〜Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₁〜Ｃ₆アルコキシカルボニル、−−（ＣＨ₂）_n−
アリール、−−（ＣＨ₂）_n−ヘテロアリール、−−（ＣＨ₂）_n−複素環式、およ
び−−（ＣＨ₂）_n−フェニルからなる群から各々独立して選択されるか；または
組み合わされたＲ₁およびＲ₂が上記の基から選択される単一の置換基であり、か
つまたは組み合わされたＲ₃およびＲ₄が上記の基から選択される単一の置換基で
あり、この場合−−が二重結合であり；そしてＲ⁷は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₆アル
ケニル、Ｃ₁〜Ｃ₆アルコキシ、Ｃ₁〜Ｃ₆アルコキシカルボニル、−−（ＣＨ₂）_n −アミノ、−−（ＣＨ₂）_n−アリール、（ＣＨ₂）_n−ヘテロアリール、−−（Ｃ
Ｈ₂）_n−複素環式、または−−（ＣＨ₂）_n−フェニルであり、ここでｎは、０〜
１０の整数である。

【００５６】 好ましい式ＩＶおよびＶのアナログとしては、３−（β−アラニル）−β−ラ
パコンおよび３−マロニル−β−ラパコンが挙げられる。

【００５７】 式ＩＶおよびＶのアナログは、米国特許第５，８２４，７００号に開示される
方法により生成され得る。

【００５８】 本明細書に記載される組合せ治療下で、β−ラパコンまたはその誘導体もしく
はアナログは、患者に少なくとも１回の用量で、１日あたりレシピエントの体重
１キログラムあたり１０〜５００，０００μｇの範囲、より好ましくは１日あた
り体重１キログラムあたり１０００〜５０，０００μｇの範囲、最も好ましくは
１日あたり体重１キログラムあたり５０００〜２５，０００μｇの範囲で投与さ
れる。所望の用量は、適切に１度に投与されるか、もしくは１日を通して適切な
間隔で数回より多くの副用量（ｓｕｂ−ｄｏｓｅ）で投与されるか、または他の
適切なスケジュールで投与される。これらの副用量は、例えば、単位用量形態あ
たり１〜２０，０００μｇ、好ましくは１０〜１０，０００μｇを含む単位用量
形態として投与され得る。

【００５９】 他の化学療法薬物の使用を伴う場合、個々の患者は、処置医師により適切であ
ると考えられる様式でモニターされる。代表的には、例えば、患者の好中球数が
少なくとも１５００細胞／ｍｍ²になるまで、さらなる薬物処置は行わない。投
薬量はまた、国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕ
ｔｅ）の共通毒性基準（Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ）
を使用して、重篤な好中球減少または重篤な末梢神経障害が生じる場合、あるい
はムコシティス（ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ）のグレードＩＩまたはそれより高いレベ
ルが観察される場合に減少されうる。

【００６０】 ここで記載される組合わせ治療薬剤は、１回で投与され得るか、あるいは両薬
剤または他の治療薬剤とともに薬剤のうちの１つを含有するカクテル（ｃｏｃｋ
ｔａｉｌ）において投与されうる。これらの治療薬剤としては、以下が挙げられ
るが、これらに限定されない：免疫抑制剤、増強剤および副作用軽減剤（ｓｉｄ
ｅ ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌｉｅｖｉｎｇ ａｇｅｎｔ）。上述のように、逐次的
に投与されれば、この治療組合わせは、β−ラパコン成分がタキサン誘導体の前
に投与される場合により効率的である。治療薬剤は、好ましくは。静脈内または
他の方法では筋肉内、皮下、髄腔内（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｌｙ）、または腹
腔内の注射により全身的に投与される。

【００６１】 組合わせで見出された本発明の薬学的組成物は、固体、半固体、または液体（
例えば、懸濁液、エアロゾルなど）の投薬形態であり得る。好ましくは、この組
成物は、正確な投与量の１回の投与に適切な単位投薬形態で投与される。この組
成物はまた、所望の処方に依存して、薬学的に受容可能な非毒性キャリアもしく
は希釈剤を含みうる。これは、動物またはヒトの投与のための薬学的組成物を処
方するために一般に使用されるビヒクルとして規定される。この希釈剤は、生物
学的活性の組み合わせに影響を及ぼさないように選択される。このような希釈剤
の例は、蒸留水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、およびハン
クス溶液である。さらに、薬学的組成物または処方物はまた、以下を含み得る：
他のキャリア、アジュバント、または非毒性の、非治療的、非免疫原性安定化剤
など。このような希釈剤またはキャリアの有効量は、成分の溶解性または生物学
的活性などの点において、薬学的に受容可能な処方物を得るために有効な量であ
る。

【００６２】 本発明の目的のために、本明細書中に記載のＧ１および／またはＳ期化合物、
誘導体もしくはアナログ、ならびにＧ２／Ｍ化合物、誘導体もしくはアナログは
、以下を含みうる：その薬学的に受容可能な塩（好ましくはナトリウム）；ハロ
ゲン置換を含むアナログ（好ましくは、塩素またはフッ素）；アンモニウムまた
は置換されたアンモニウム塩を含むアナログ（好ましくは二級アンモニウム塩も
しくは三級アンモニウム塩）；アルキル、アルケニル、アリールもしくはそれら
のアルキル、アルケニル、アリール、ハロ、アルコキシ、アルケニルオキシで置
換された誘導体を含むアナログ（好ましくは、メチル、メトキシ、エトキシ、ま
たはフェニルアセテート）；ならびに天然のアナログ（例えば、ナフチルアセテ
ート）。さらに、本明細書中に記載のＧおよび／またはＳ期化合物、誘導体もし
くはアナログならびにＧ２／Ｍ化合物、誘導体もしくはアナログは、水溶性ポリ
マーに結合体化され得るか、あるいは水溶性キレート化剤もしくは放射性核種で
誘導体化されうる。水溶性ポリマーの例は、以下であるが、これらに限定されな
い：ポリグルタミン酸ポリマー、ポリカプロラクトンとのコポリマー、ポリグリ
コール酸、ポリ酢酸（ｐｏｌｙａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）、ポリアクリル酸、ポリ
（２−ヒドロキシエチル１−グルタミン）、カルボキシメチルデキストラン、ヒ
アルロン酸、ヒト血清アルブミン、ポリアルギン酸またはそれらの組合わせ。水
溶性キレート化剤の例は、以下であるが、これらに限定されない：ＤＴＰＡ（ジ
エチレントリアミン五酢酸）、ＥＤＴＡ、ＤＴＴＰ、ＤＯＴＡまたはそれらの水
溶性塩など。放射性核種の例は、以下であるが、これらに限定されない。¹¹¹Ｉ
ｎ、⁹⁰Ｙ、¹⁶⁶Ｈｏ、⁶⁸Ｇａ、^99mＴｃなど。

【００６３】 治療的適用において、本発明に従って使用される薬剤の投薬量は、選択された
投薬量に影響を及ぼす他の因子のうち、薬剤、レシピエント患者の年齢、体重、
および臨床状態、ならびに治療を施す臨床医もしくは開業医の経験および判断に
依存して変化する。一般に、投薬は、腫瘍増殖の遅延、および好ましくは退行、
そしてまた、好ましくは、癌の完全な退行を生じるに充分であるべきである。薬
剤の有効量は、臨床医または他の資格がある観察者により注目される客観的に識
別可能な改善を提供する量である。患者における腫瘍の退行は、代表的には、腫
瘍の直径を参照して測定される。腫瘍の直径の減少は、退行を示す。退行はまた
、腫瘍が処置をやめた後に再発しないことにより示される。

【００６４】 本発明はさらに、上記で提供されるように、タキサン誘導体および一定用量の
β−ラパコンまたはその誘導体もしくはアナログを含む薬学的組成物、ならびに
タキサン誘導体のバイアルおよびβ−ラパコンまたはその誘導体もしくはアナロ
グのバイアルを、上記に提供された用量で含む癌患者を処置するためのキットを
含む。好ましくは、このキットは、組合わせでのそれらの使用を記載する説明書
を含む。

【００６５】 本明細書中に言及される文献は、本明細書中に参考として援用される。

【００６６】 前述の詳細な説明および以下の実施例は、単なる例示であり、そして本発明の
範囲に対する限定として見なされるべきでないことが理解される。開示された実
施形態に対する種々の変更および改変は、当業者に明らかであり、本発明の趣旨
および範囲を逸脱することなく行われうる。さらに、本明細書中に引用される全
ての特許、特許出願および刊行物は、本明細書中に参考として援用される。

【００６７】 （実施例） （インビボ試験） （実験１） 腫瘍モデルの簡単な説明（Ｃａｎｎｉｓｔｒａモデル，Ｃａｎｎｉｓｔｒａら
，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５７：１２２８−１２３２（１９９７））−卵巣癌
は、非常に致死的な疾患である。腹腔全体の広範な着床（ｉｍｐｌａｎｔａｔｉ
ｏｎ）により、顕著に転移が生じる。β−ラパコン単独およびタキソール（登録
商標）との組合わせでの効果を試験するために、本発明者らは、そもそも悪性腹
水を有する患者に由来するヒト卵巣癌細胞（３６Ｍ２）を使用した。これらの細
胞の雌性ヌードマウスへの接種は、患者において観察されたように転移プロセス
を再現する。これは、高度に転移性かつ悪性の癌細胞モデルである。一般に、腹
膜上の腫瘍小節および悪性腹水は、１０×１０⁶細胞を接種して４〜５週間後に
発生する。転移性病巣は、接種して１週間後から認められ得る。

【００６８】 （動物）−無胸腺雌性ヌードマウス（ｎｕ／ｎｕ）を実験全体を通して用いた
。 （薬物）−β−ラパコンを臨床で使用した媒体薬剤であるリピドール（ｌｉ
ｐｉｄｏｌ）を用いて溶液に処方した。この処方薬剤（リピドール）での本発明
者らの成功は、β−ラパコンが不溶性であるという長年の問題を解決した。

【００６９】 あるいは、本発明者らはまた、β−ラパコンがクレムフォア（ｃｒｅｍｐｈｏ
ｒ）＋エタノール［２（クレムフォア）：１（エタノール）］中に処方されうる
ことを見出す。２０ｍｇ／ｍｌの溶液は、室温で調製されうる。

【００７０】 溶液に処方したタキソール（登録商標）（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ）（患者用途
標準）を、薬局から購入し、そしてリピドール（Ｓｕｍｉｔｏｍｅ Ｐｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｏｓａｋａ）を用いてマウス実験のために希釈した。

【００７１】 β−ラパコンおよびタキソール（登録商標）溶液の両方を、腹腔内または静脈
内のいずれかで投与し得る。両方の薬物について腹腔内経路を使用した。β−ラ
パコンのリピドール処方物を使用した。

【００７２】 （動物治験の設計：） 一群あたり６匹のマウスである。

【００７３】 群１，コントロールビヒクルで処置（群４と同様） 群２，５０ｍｇ／ｋｇのβ−ラパコンで処置 群３，０．１ｍｇ／ｋｇのタキソール（登録商標）で処置 群４，最初に５０ｍｇ／ｋｇのβ−ラパコン、続いて０．１ｍｇ／ｋｇの
タキソールで次の日に処置。２日後にこのサイクルを繰り返す。

【００７４】 全ての処置を腫瘍接種して１週間後に開始した。マウスを合計１０サイクルに
渡り処置した。そして薬物処置を停止して２週間後（５０日目）に腫瘍小節を係
数するために屠殺した。

【００７５】 屠殺時、腹腔における腫瘍小節の数を係数し、腫瘍の直径を測定し、腹水の容
量を測定し、そして腫瘍が誘導した血管新生の程度の指標として腹腔壁の色を定
性的に観察することにより、各群における抗腫瘍活性を評価した。

【００７６】 屠殺する前にマウスの様相および行動の定性的観察、ならびに処置の過程の間
に種々の期間でそれらの体重を測定することにより毒性を評価した。

【００７７】 この実験の結果は図１Ａおよび１Ｂに示す。認められ得るように、β−ラパコ
ンとタキソール（登録商標）の組合わせは、未処置コントロール群および各薬剤
単独で処置した群と比較すると、腫瘍着床の数を劇的に減少させた。毒性は観察
されなかった。

【００７８】 （実験２） 腫瘍モデルおよび薬物処方は、実験１と同一であった。再び、６匹のマウスを
各群に使用した。実験設計は、以下を改変した：１）タキソール（登録商標）用
量を１０倍まで増加した；２）マウスを薬物処置を中止した後４週間観察した。

【００７９】 群１，コントロールビヒクルで処置（群４と同様） 群２，５０ｍｇ／ｋｇのβ−ラパコンで処置 群３，１ｍｇ／ｋｇのタキソール（登録商標）で処置 群４，最初に５０ｍｇ／ｋｇのβ−ラパコン、続いて１ｍｇ／ｋｇのタキ
ソールで次の日に処置。２日後にこのサイクルを繰り返す。

【００８０】 全ての処置を腫瘍接種して１週間後に開始した。マウスを合計１０サイクルに
渡り処置した。そして６２日目に腫瘍を係数するために屠殺した。この実験の結
果を図２Ａおよび２Ｂに示す。実験１のように、β−ラパコンおよびタキソール
の組合わせは、未処置コントロール群および各薬剤単独で処置した群と比較する
と、腫瘍着床の数を劇的に減少した。毒性は観察されなかった。

【００８１】 図３〜６は、各群において見られる結果を、視覚的に表す。図３〜５において
、腹膜内層は、腫瘍で刺激された血管増殖または血管新生を示す赤色（色は示さ
れていない）である。

【００８２】 未処置の哺乳動物は、数百の腫瘍モジュールを含む。小結節のいくつかは、一
緒に融合して、そして大きい腫瘍塊を形成した（図３）。

【００８３】 β−ラパコン（図４）またはＴＡＸＯＬ（登録商標）（図５）のいずれかを用
いた処置は、腫瘍の減少を生じた。しかし、両方の領域において、肉はまだ赤色
であり、腫瘍に関連する実質的な新管形成がまだ続くことを示した。いくつかの
腫瘍小結節は、単一の治療的セグメントを用いて処置された両方の群においてま
だ存在した。

【００８４】 組み合わせの治療を受けた群において、肉の色は、もはや明るい赤色ではない
が、健康なマウスに見られる赤色と類似している（図６）。これは、腫瘍が、単
一の処置群において見られる新管形成を誘導する腫瘍が、実質的に阻害されるか
または存在しないことを示す。１つまたは２つの小結節を、視覚的に観察したが
、写真では可視化されない。

【００８５】 （実験３） （β−ラパコンおよびタキソールによるインビボでの前立腺腫瘍増殖の強力な
阻害）雄のＳＣＩＤ（ＩＣＲ）マウスに、アンドロゲン独立ヒト前立腺癌細胞（
ＤＵ１４５；８×１０⁶ｓ．ｃ．）を接種した。薬物の投与を、腫瘍小結節が直
径〜０．５ｃｍに届く場合、開始した。１群あたり４個体のマウスを、この実験
において用いた。このコントロールの群（図７）を、ビヒクル単独で処理した。
β−ラパコン単独の群を、５０ｍｇ／ｋｇ（腹腔内に（ｉ．ｐ．））で処理し、
そしてタキソール単独の群を、１ｍｇ／ｋｇ（腹腔内に）を用いて処理し、引き
続き２４時間後にビヒクルの（腹腔内に）注射をした。この組み合わせた群にお
いて（図７Ｂ）、マウスを、β−ラパコン単独で処理し、引き続き２４時間後に
、１ｍｇ／ｋｇのタキソールで処理した。各サイクルの間には、１日の休止が存
在した。マウスを、総計６サイクルの間処理した。写真を、処理の６サイクル後
、３週間撮った。

【００８６】 １群あたり４個体のマウスを用いた予備実験において、アンドゲン独立ＤＵ１
４５前立腺癌細胞を、免疫無防備状態のマウス中に異種移植した（図７Ａ）。再
び、ストリジェンシーを増大するため、そしてほとんどの抗腫瘍実験とは異なり
、処置は、腫瘍が直径〜０．５ｃｍに届くまで遅らせた。β−ラパコンまたはタ
キソール単独いずれかが、腫瘍増殖の阻害の緩和を示した（データは、示さない
）。タキソールを加えたβ−ラパコンは、劇的な抗腫瘍活性を示した（図７Ｂ）
。さらに、処置されたマウスにおける腫瘍は、処置後６週間の追跡で、もとに戻
らなかった。

【００８７】 （実験４） （細胞培養）この研究において使用される全ての細胞株を、他に特定しない限
り、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから
得た。細胞を、完全湿度において５％ＣＯ₂中３７℃で維持した。ヒト乳癌細胞
株、ＭＣＦ−７、２１ ＭＴ、２１ ＰＴ、および２１ ＮＴ（Ｒ．Ｓａｇｅｒ
によりご好意で提供された、ＤａｎａＦａｒｂｅｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉ
ｔｕｔｅ）を、ＭＥＭ−α（Ｌｉｆｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎ
ｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）において培養し、１０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ＦＣＳ、
２ｍＭ Ｌ−グルタミン、および１ｍｇ／ｍｌインスリンを補充した。ヒト卵巣
癌腫細胞株ＡＤ２７８０およびＡＤ２７８０ＤＤＰ（Ｋ．Ｊ．Ｓｃａｎｌｏｎか
らの寛大な贈り物）（Ｃｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅ
ｒ，Ｄｕａｒｔｅ，ＣＡ）；ヒト結腸腺癌細胞株（ＳＷ１１１６、ＨＴ−２９、
およびＤＬＤ；ヒト肺癌腫細胞株Ｇ４８０；Ｇ．Ｄｒａｎｏｆｆによりご好意で
提供された、ヒトメラノーマ細胞株Ｓｋｍｅｌ−２８（Ｄａｎａ−Ｆａｒｂｅｒ
Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；およびヒト前立腺腫瘍細胞株ＰＣ−３
、ＤＵ１４５、およびＬＮＣａＰを、１０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ＦＣＳおよび２
ｍＭのＬ−グルタミンで補充されたＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉ
ｅｓ）中で培養した。ヒト膵臓癌細胞株ＡＳＰＣ−１を、２０％（ｖｏｌ／ｖｏ
ｌ）ＦＣＳを補充したＲＰＭＩ培地１６４０中で培養した。

【００８８】 （結腸形成アッセイ）指数関数的に増殖する細胞を、６ウェルプレートにおい
て１ウェルあたり１，０００細胞で播種し、そして４８時間の付着を可能にした
。薬物を、５μｌに満たない（ｌｅｓｓ ｔｈａｔ ５μｌ）濃縮した溶液で、
皿に直接添加した（０．１％に満たない、最終のＤＭＳＯ濃度に対応）。コント
ロールプレートは、ＤＭＳＯ単独の同じ容量を受けた。１〜４時間後、細胞をリ
ンスして、そしてフレッシュ培地に添加した。培養物を、１０〜２０日間毎日観
察して、次いで固定し、そして修飾されたＷｒｉｇｈｔ−Ｇｉｅｍｓａ ｓｔａ
ｉｎ（Ｓｉｇｍａ）を用いて染色した。３０細胞より大きいコロニーを、生存細
胞として記録した。

【００８９】 （細胞死アッセイ）細胞死を、示されるように、ＭＴＴ（Ｔｈｉａｚｏｌｙｌ
ｂｌｕｅ）アッセイによりまたはトリパンブルーの独占（ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ
）により決定した。簡潔には、細胞を、１ウェルあたり１０，０００細胞で９６
ウェルプレートにプレーティングし、完全増殖培地で４８時間培養し、次いで４
時間β−ラパコンを用いて処理し、そして２４時間薬物無添加培地で培養した。
ＭＴＴ溶液を、培養培地に添加し、そして２時間後に光学濃度を、ＥＬＩＳＡリ
ーダーを用いて読み取った。トリパンブルー独占アッセイのために、細胞を培養
し、そして同じ方法で処理した。それらを回収し、そしてトリパンブルー色素溶
液を細胞懸濁液に添加した。総細胞数および生存可能な細胞数を、血球計を用い
て決定した。

【００９０】 （アポトーシスアッセイ）アポトーシスを、３つの独立したアッセイにより決
定した。記載されるように、プロピジウムヨウ化物染色核のサブＧ₁画分を決定
した［Ｌｉ，Ｙ．−Ｚら、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．５：２３２−２３９（１９９９）；
Ｌｉ，Ｃ．Ｊ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６８：４２９−４３１（１９９５）；Ｌ
ｉ，ＣＪ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：３７１２−３７１５（１９９５）
］。アネキシンアッセイが、ホスファチジルエリン（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ
ｅｒｉｎｅ）の具体化（ｅｘｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）により決定される膜
の変化を測定した（Ｆａｄｏｋ，Ｖ．Ａ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２
２０７−２２１６（１９９２））。第３のアッセイ、ＤＮＡのラダリング（ｌａ
ｄｄｅｒｉｎｇ）の分析を、Ｌｉ，Ｙ．−Ｚ（前出）により記載されるように実
行した。

【００９１】 （β−ラパコンおよびタキソールによる細胞死の相乗誘導）コロニー形成を、
上記のように実行した。代表的な実験で、ウェル１においてコントロールＤＵ１
４５細胞を、１日目および２日目に、溶媒を用いて処理した。ウェル２において
細胞を、１日目４時間、４μＭのβ−ラパコンを用いて処理し、薬物無添加培地
で２０時間インキュベートし、次いで２日目にコントロール溶媒で処理した。ウ
ェル３のタキソール単独（ｔａｘｏｌ−ａｌｏｎｇ）を、１日目４時間コントロ
ール溶媒を用いて処理し、そして２日目に４時間、０．０２μＭのタキソールで
処理した。ウェル４において細胞を、１日目β−ラパコンを用いて処理し、そし
て２日目タキソールを用いて処理した。ウェル５において、細胞を１日目タキソ
ールを用いて、そして２日目β−ラパコンを用いて処理した。ウェル６において
、細胞を、２日目にβ−ラパコンおよびタキソールを用いて処理した。

【００９２】 （薬物の組み合わせの相乗作用）コントロール皿（ウェル１）におけるＤＵ１
４５細胞のコロニー形成は、タキソールおよびβ−ラパコンの両方を適用した場
合、消滅した。タキソール単独（ウェル２）またはβ−ラパコン単独（ウェル３
）を適用した場合、部分的にだけ減少した。薬物添加の順序が、この観察された
、細胞殺傷の強力な相乗作用に影響するか否かを決定するために、本発明者らは
、処理計画を変更した。細胞を、タキソールおよびβ−ラパコンを用いて同時に
処理した場合（ウェル６）、またβ−ラパコンに続いてタキソール（ウェル４）
を用いて処理した場合、類似の相乗作用を観察した。タキソールを、β−ラパコ
ン処理前に添加した場合（ウェル５）、相乗作用を観察しなかった。この計画の
依存性を、すべての細胞株において観察した。これらの結果は、人為的なチェッ
クポイントを課す順序が、相乗作用の機構にとって重要であることを示唆する。

【００９３】 （β−ラパコンおよびタキソールの組み合わせによる、ヒト癌腫細胞の広範囲
のインビトロコロニーの切除）異なる組織型のヒト癌腫細胞株が、コロニー形成
アッセイにおける細胞生存を決定するために使用された（表２）。β−ラパコン
およびタキソールの組み合わせは、種々のヒト癌細胞（卵巣癌細胞株、乳癌細胞
株、前立腺癌細胞株、メラノーマ癌細胞株、肺癌細胞株、および膵臓癌細胞株を
含む）における細胞生存を劇的に減少させた。用いられた濃度で、β−ラパコン
単独またはタキソール単独は、癌細胞のコロニー形成を減少させるのに、ほとん
ど有効ではなかった。この減少した細胞生存を、ＭＴＴ（Ｔｈｉａｚｏｌｙｌ
ｂｌｕｅ）およびトリパンブルーアッセイにより決定されるように、細胞死の誘
導により達成した。細胞死は、ＤＡＮラダリング形成により、およびアネキシン
染色により決定されるので、アポトーシスによるものであった（データは示され
ていない）。タキソールは、ＩＣ₅₀で測定されるように、β−ラパコンの存在に
おいて少なくとも１０倍以上強力であった（データは示されていない）。

【００９４】 （表２．β−ラパコンおよびタキソールによる癌細胞生存の阻害）

【００９５】

【表２】 細胞を、以下の濃度のβ−ラパコンおよび／またはタキソールを用いて４時間処
理した：Ａ２７８０ＤＤＰ、２μＭのβ−ラパコンおよび／または０．２μＭの
タキソール；ＭＣＦ−７および２１−ＭＴ、４μＭのβ−ラパコンおよび／また
は０．１μＭのタキソール；４μＭのＨＴ−２９、β−ラパコン；４μＭのＧ４
８０、β−ラパコンおよび／または０．２μＭのタキソール；４μＭのＤＵ１４
５、β−ラパコンおよび／または０．２μＭのタキソール。コントロールウェル
におけるコロニーの数を、１００％生存として見なした。処理されたウェルを、
コントロールの百分率として表した。データを、３つの独立した実験から平均（
＋ＳＥＭ）として与えた。

【００９６】 先行発明が、理解を明確にする目的のために、例示および実施例としていくら
か詳細に記載されているが、当業者は、特定の変更および修飾を、係属する請求
の範囲の精神および範囲から離れることなく実施し得る。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１Ａおよび１Ｂは、実施例１の結果を示す。

【図２】 図２Ａおよび２Ｂは、実施例２の結果を示す。

【図３】 図３は、数百の腫瘍小結節を示すコントロール群の写真である。腫瘍小結節の
いくつかは、共に融合して、大きな腫瘍塊を形成している（例えば、矢印２）。

【図４】 図４は、いくつかの腫瘍小結節を示すβ−ラパコン（ｌａｐａｃｈｏｎｅ）処
置群の写真である（例えば、矢印２）。

【図５】 図５は、いくつかの腫瘍小結節を示すパクリタキセル処置群の写真である（例
えば、矢印２）。

【図６】 図６は、併用処置群の写真である。腫瘍小結節は見えない。腹膜の裏層の色に
注目することもまた重要である。図３〜５で見られる裏層と異なり、併用群の裏
層の色は明るい赤ではなく、むしろ健康なマウスに見られる色に近い。このこと
は、腫瘍増殖および腫瘍誘導新脈管形成が生じないことを示す。

【図７】 図７Ａおよび７Ｂは、前立腺腫瘍における併用処置を示す写真である。図７Ａ
は、コントロールである。図７Ｂは、併用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/437 Ａ６１Ｋ 31/437 31/704 31/704 31/7042 31/7042 38/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ｃ０７Ｄ 311/92 １０１ // Ｃ０７Ｄ 311/92 １０１ Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 リー， チャン ジェイ． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02132， ウエスト ロックスバリー， ガードナー ストリート 61 (72)発明者 リー， ユー−チー アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02026， デッダム， ブリッジ ストリ ート 159 Ｆターム(参考） 4C062 HH44 4C084 AA02 BA01 BA16 BA24 DA43 MA02 NA05 ZB261 4C086 AA01 AA02 BA02 BC39 BC82 CB05 CB22 MA01 MA02 MA04 NA05 ZB26

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 固体腫瘍（または腫瘍）を有する哺乳動物を処置するための
   方法であって、該方法は、以下： ａ）活性成分として、β−ラパコンまたはその誘導体を含む、有効量の第１の
   化合物を該哺乳動物に投与する工程；および ｂ）有効量のＧ２／Ｍ期薬物を該哺乳動物に投与する工程、 を包含する、方法。
2. 【請求項２】 前記Ｇ２／Ｍ薬物が、微小管標的化薬物およびトポイソメラ
   ーゼ毒性薬物からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記微小管標的化薬物が、タキソール、ドセタキセル、ビン
   クリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビンから
   なる群より選択される、請求項２に記載の方法。
4. 【請求項４】 請求項２に記載の方法であって、前記トポイソメラーゼ毒性
   薬物が、テニポシド、エトポシド、アドリアマイシン、カンプトセシン、ダウノ
   ルビシン、ダクチノマイシン、ミトキサントロン、アムサクリン、エピルビシン
   およびイダルビシンからなる群より選択される、方法。
5. 【請求項５】 前記Ｇ２／Ｍ薬物が、タキソールおよびタキサン誘導体であ
   る、請求項１または２に記載の方法。
6. 【請求項６】 さらに、前記Ｇ２／Ｍ薬物が、前記β−ラパコンが投与され
   た後、２４時間以内に投与される、請求項１または２に記載の方法。
7. 【請求項７】 前記Ｇ２／Ｍ薬物が前記第１の化合物の後に投与される、請
   求項１または２に記載の方法。
8. 【請求項８】 前記タキサン誘導体が、パクリタキセルである、請求項５に
   記載の方法。
9. 【請求項９】 前記タキサン誘導体が、パクリタキセルであり、そして静脈
   内に投与される、請求項５に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記タキサン誘導体が、パクリタキセルであり、そして前
    記β−ラパコンの投与後に静脈内に投与される、請求項５に記載の方法。
11. 【請求項１１】 哺乳動物の腫瘍を処置するためのキットであって、該キッ
    トは、β−ラパコンの最初の投与のための使用説明書と共に、β−ラパコンまた
    はその誘導体もしくはアナログおよびタキサン誘導体を含む、別個のバイアルを
    備える、キット。
12. 【請求項１２】 前記タキサン誘導体が、パクリタキセルである、請求項１
    １に記載のキット。
13. 【請求項１３】 β−ラパコンまたはその誘導体もしくはアナログおよびタ
    キサン誘導体および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
14. 【請求項１４】 前記タキサン誘導体がパクリタキセルである、請求項１３
    に記載の薬学的組成物。