JP2002541110A - 神経変性疾患の処置を目的とする医薬を得るためのチアネプチンの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、神経変性疾患の処置に使用される医薬の製造におけるチアネプチン又はそのエナンチオマーの使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、神経変性疾患の処置を目的とした医薬を得ることにおける、チアネ
プチン、その異性体、及びその塩の使用に関する。

【０００２】 チアネプチン、式（Ｉ）：

【０００３】

【化１】

【０００４】 の化合物は、精神神経障害、疼痛及び咳の処置における使用のための新規医薬と
してフランス国特許明細書ＦＲ２１０４７２８に記載されている。

【０００５】 更にフランス国特許明細書ＦＲ２６３５４６１には、ストレスの処置における
チアネプチンの使用及びその化合物が記載されている。

【０００６】 最近の研究では、チアネプチンは、記憶に顕著な効果を有することが示されて
いる。これらは、以下に記載されている。 S.E. FILE et al.: Drug Development Research, 1991, 23, 47-56; R. Jaffard et al.: Journal de Psychiatrie Biologique et Therapeutique, 1
989, ３月号特別版, 37-39; R. Jaffard et al.: Abstracts of the XVIth CINP Congress, Munich (Germany
), 15-19, August 1988; Psychopharmacology, 1988, 96(suppl), 31.02.32, p.
275; R. Jaffard et al.: Behavioural Pharmacology, 1991, 2, 37-46; C. Lebrun et al.: European Psychiatry, 1993, 8 (suppl.2), 81s-88s;及び R. Jaffard et al.: Presse Medicale, 1991, 20, 37, 1812-1816.

【０００７】 最後に、フランス国特許明細書ＦＲ２７１６６２３には、記憶認識障害を目的
とする医薬を得ることにおけるチアネプチンの（＋）異性体の使用が記載されて
いる。

【０００８】 本出願人は、驚くべきことに、チアネプチンが、ＡＭＰＡ／カイニン酸型のグ
ルタミン酸受容体の調節物質であり、そのため神経変性疾患の処置に使用するこ
とができることを今や発見した。

【０００９】 Ｌ−グルタミン酸及びＬ−アスパラギン酸は、中枢神経系のニューロンを活性
化することができ、多くの研究により、これらの興奮性アミノ酸（ＥＡＡ）が、
神経伝達物質を定義する基準を満たしていることを証明している。この理由によ
り、これらのＥＡＡと関連するニューロン事象の調節は、神経疾患の処置の有力
な標的であると考えられる。

【００１０】 事実、ＥＡＡの過剰放出及びこれらの受容体の過剰刺激は、癲癇、老人性痴呆
又は脳血管障害において観察されるニューロン変性の原因の一つとなり得る。現
時点では、ＥＡＡが強力に関与している神経変性疾患の数は、徐々に増えつつあ
る（ハンチントン舞踏病、精神分裂病、筋萎縮性側索硬化症）（Mc GEER E.G. e
t al., Nature, 263, 517-519, 1976; SIMON R. et al., Science, 226, 850-85
2, 1984）

【００１１】 更に、ＥＡＡ神経伝達の過剰活性化が、確かに神経毒性作用を示すとしても、
その正常な活性化は、記憶及び認識能を増強する（LYNCH G. & BAUDRY M., Scie
nce, 224, 1057-1063, 1984; ROTHMAN S.M. & OLNEY J.W., Trends in Neuro Sc
i., 10, 299-302, 1987）。したがって、薬理学的及び治療の観点から生理学的
活性化のレベルを保持しながら、病理学的な刺激のみに対抗するのが適当である
。

【００１２】 シナプス後又はシナプス前の位置を有するＥＡＡ受容体は、特定のリガンドに
対する親和性の機能、及び電気生理学的及び／又は神経化学的作用から、以下の
４群に分類される：

【００１３】 一価又は二価カチオン（カルシウムを包含する）に対して透過性であるが、マ
グネシウムによって遮断されるイオンチャンネルと関連のあるＮＭＤＡ（Ｎ−メ
チル−Ｄ−アスパラギン酸）受容体。細胞内にカルシウム及び亜鉛が蓄積するこ
とは、ニューロン死の原因の一つである。ＮＭＤＡチャンネルが開くことは、受
容体と関連あるいくつかのサイトによって調節され、特にその作用がストリキニ
ーネ非感受性であるグリシンによって促進される。このグリシンサイトは、ＮＭ
ＤＡ受容体の活性化を調節するための重要な標的である。

【００１４】 ナトリウムを含む一価のカチオンには透過性であるイオンチャンネルと関連の
あるＡＭＰＡ（α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−イソオキサゾー
ル−プロピオン酸）受容体。このチャンネルの活性化は、膜の脱分極をもたらす
。

【００１５】 そのイオン特性は、ＡＭＰＡ受容体のそれと似ているが、コンダクタンス及び
脱感受性のレベルが異なるカイニン酸受容体。しかし多くの研究が、ＡＭＰＡ受
容体及びカイニン酸受容体は、緊密な構造的及び機能的類似性を有し、一つの受
容体ファミリーを構成することを証明する傾向にある（KEINANEN K. et al., Sc
ience, 249, 556-560, 1990）。

【００１６】 イオンチャンネルに結合しないため代謝型受容体と呼ばれているＡＣＰＤ（tr
ans−１−アミノシクロペンタン−１，３−ジカルボン酸）受容体。

【００１７】 ＥＡＡによるイオンチャンネル型受容体の活性化により、イオンチャンネルが
開き、特にナトリウムの流入が可能となり、これによって細胞が脱分極される。
ＡＭＰＡ受容体を包含するこの第一の相が、ＮＭＤＡ受容体の脱抑制をもたらし
、その後、ＮＭＤＡ受容体の過剰活性化とカルシウムの大量蓄積をもたらす（BL
AKE J.F. et al., Neurosci. Letters, 89, 182-186, 1988; BASHIR Z.I. et al
., Nature, 349, 156-158, 1991）

【００１８】 チアネプチンが、新規な方法で、ＡＭＰＡ／カイニン酸型のグルタミン作動性
受容体を調節し、そのため神経変性疾患の処置において使用し得ることが特に示
された。

【００１９】 より詳細には、本発明は、脳虚血、脳外傷、脳老化、アルツハイマー病、多発
性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、脱髄疾患、脳症、慢性疲労症候群、筋性脳脊髄
炎、ウイルス感染後疲労症候群、細菌又はウイルス感染後の疲労及びうつの状態
、並びにＡＩＤＳ痴呆症候群などの神経変性疾患の処置を目的とする医薬組成物
を得ることにおける、チアネプチン、そのエナンチオマー、及び薬学的に許容し
うるその塩の使用に関する。

【００２０】 チアネプチン及びそのエナンチオマーは、場合により薬学的に許容し得る塩の
形で、経口、非経口、経皮、鼻腔、直腸、経舌、眼内、又は呼吸器経路による投
与に適した医薬剤型、特に注射用製剤、エーロゾル剤、点眼又は点鼻剤、舌下錠
、グロセット剤、軟ゼラチンカプセル剤、硬ゼラチンカプセル剤、口内錠、坐剤
、クリーム剤、軟膏剤、皮膚用ゲル剤などであって、活性成分の即時放出、又は
遅延及び制御放出を可能とする剤型として提供される。

【００２１】 投与量は、患者の年齢及び体重、投与経路、治療適応症の特性及び関連する処
置に応じて変化させることができ、投与当たり１２．５mg〜３００mgの範囲であ
る。

【００２２】 チアネプチン又はそのエナンチオマーを塩に変換する塩基としては、水酸化ナ
トリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム若しくは水酸化アルミニウム、ア
ルカリ金属若しくはアルカリ土類金属炭酸塩、又はトリエチルアミン、ベンジル
アミン、ジエタノールアミン、tert−ブチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、
アルギニンなどのような有機塩基を用いることができるが、いかなる限定をも意
味するわけではない。

【００２３】 チアネプチン又はその異性体を塩に変換する酸としては、塩酸、硫酸、リン酸
、酒石酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、シュウ酸、メタンスルホン酸、エ
タンスルホン酸、ショウノウ酸、クエン酸などを用いることができるが、いかな
る限定をも意味するわけではない。

【００２４】 チアネプチンの好ましい塩は、ナトリウム塩である。

【００２５】 Ａ−ＡＭＰＡ／カイニン酸受容体に対するチアネプチンの効果 この実験は、一次培養の終脳細胞においてカイニン酸（２５０μM）によって
誘導される電流に対するチアネプチン、４、１０及び２５μMの濃度の効果を示
す。 実験プロトコール １６．５日齢のウイスター系ラット胎児の終脳細胞を１２日間培養した。次に
５mMＫＣｌ、１４０mMＮａＣｌ、１０mMＨｅｐｅｓ、２mMＭｇＣｌ₂、２mMＣａ
Ｃｌ₂、及び１０mMＤ−グルコースの培地中（pH＝７．３）、周辺温度でパッチ
クランプ実験を行ない、マイクロピペットを１４０mMＫＣｌ、４mMＮａＣｌ、１
０mMＨｅｐｅｓ、５mMＥＧＴＡ、及び０．５mMＣａＣｌ₂（pH＝７．２）で充填
した。チアネプチン（ナトリウム塩の形）は、４、１０及び２５μMの濃度で試
験した。

【００２６】

【表１】

【００２７】 結果 この実験では、終脳細胞における培養中のカイニン酸（ＡＭＰＡ／カイニン酸
型のグルタミン酸作動性受容体のアゴニスト）は、細胞に入る電流を増大させた
。この作用は、パッチクランプ技術により測定した。チアネプチンはそれ自身（
１０μM）では、この条件下では作用を示さなかった。したがって、これは直接
のアゴニストではない。しかし、チアネプチン（４、１０及び２５μM）は、上
記の図に示すように、カイニン酸（２５０μM）によって誘導される電流を増大
させた。 したがって、チアネプチンは、ＡＭＰＡ／カイニン酸受容体の調節物質である
。

【００２８】 Ｂ−神経毒性を予想する２つのモデルにおけるin vitro神経毒性に対するチアネ プチンの効果 これらの実験は、虚血、脳外傷及び神経変性における活性成分について神経保
護作用を予想する神経毒性のモデルにおけるチアネプチンの効果を示す。グルタ
ミン酸の神経毒性は、多くの病理学的状態で遭遇するニューロン喪失の病因にお
いて重要な役割を果たしている（Choi, D.W. Trends Neurosci, 11, 465, 1988
）。

【００２９】 Ｂ−１ 低酸素状態によって惹起される神経毒性に対するチアネプチンの効果
実験プロトコール スプラーグ−ドーレイ系ラットの胎児から、皮質細胞を取り出し、５％ウマ血
清及び５％ウシ胎児血清を含有するＭＥＭ（最少必須培地）中で培養した。培養
は、９３％空気及び７％ＣＯ₂中３７℃で維持した。低酸素状態の直前に培養培
地をＨＥＰＥＳで緩衝した食塩溶液（ＨＣＳＳ）３００μlで置き換えた。細胞
を周辺温度でこの条件下で１０分間インキュベートした。チアネプチン（ナトリ
ウム塩の形）及びＭＫ−８０１を異なる濃度で加え、細胞を１０分間インキュベ
ートした。次に培養培地を、pH７．４で、脱酸素化ＰＩＰＥＳ緩衝液３００μl
により置き換えた。 次に細胞を９５％Ｎ₂及び５％Ｏ₂を含む低酸素雰囲気下、３７℃で３時間イン
キュベートした。次に培養培地を血清を含まないＭＥＭ２００μlで置き換え、
細胞を標準条件下、３７℃で２４時間、再びインキュベートした。細胞の形態学
的検査の後、培養上清を集め、その中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）活性を
測定した。

【００３０】 結果 チアネプチンは、下の図に示したように、１、１０及び１００μMの濃度で、
低酸素状態によって惹起される神経毒性を有意に減少させた。活性の低下は、そ
れぞれ９８．８、９１．７及び９１．４％であった。これらの条件下で、参考の
神経保護剤として使用したＭＫ−８０１（２０μM）は、低酸素状態の作用に対
してほぼ全体的な保護（８６．３％）を示した。

【００３１】

【表２】

【００３２】 結論 マイクロモル濃度のチアネプチンは、低酸素状態によって惹起された細胞傷害
から、培養中の皮質ニューロンを完全に保護した。これらの条件下で、チアネプ
チンは、参考のＮＭＤＡ受容体アンタゴニストであるＭＫ−８０１と同様に有効
であった。

【００３３】 Ｂ−２ グルタミン酸によって惹起される神経毒性に対するチアネプチンの効果 実験プロトコール スプラーグ−ドーレイ系ラットの胎児から皮質細胞を取り出し、５％ウマ血清
及び５％ウシ胎児血清を含むＭＥＭ（最少必須培地）中で培養した。培養は、９
３％空気及び７％ＣＯ₂の大気中、３７℃で維持した。 グルタミン酸で処理する直前、培養培地をＨＥＰＥＳで緩衝した食塩溶液３０
０μlで置き換えた。細胞は、１mMグルタミン酸と一緒に１５分間インキュベー
トした。次に培養培地を血清を含まないＭＥＭ２００μlで置き換え、細胞を３
７℃で２４時間インキュベートした。細胞の形態学的検査の後、培養上清を集め
、その中の乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）活性を測定した。

【００３４】 結果 チアネプチンは、下の図に示したように、１、１０、１００nM及び１、１０、
１００μMの濃度でグルタミン酸によって惹起される毒性を有意に低下させた。
活性の低下は、５９〜９４％の間であった。これらの条件下で、参考の保護剤と
して使用したＭＫ−８０１（２０μM）は、低酸素状態の作用に対してほぼ全体
的な保護をもたらした。

【００３５】

【表３】

【００３６】 結論 ナノモル濃度のチアネプチンは、グルタミン酸によって惹起される変性作用か
ら培養中の皮質ニューロンを保護することができた。 これらの結果から、チアネプチンは、ニューロンに直接作用して、変性疾患に
よって惹起される障害に対する弱さを低下させ得ることが示された。

【００３７】 Ｃ−培地中に保持された星状細胞における低酸素状態と関連するアデノシン三リ ン酸（ＡＴＰ）の濃度に対するチアネプチンの効果 実験プロトコール Booher J. and Sensenbrenner M.により記載された技術により、新生ラットを
用いて星状細胞の培養物を得た（Neurobiology 2, 97-105, 1992）。これらは、
培地に配置した３週間後に使用した。Ｏ₂について脱ガスし、各種濃度のチアネ
プチンを含む培養培地（ＤＭＥＭ）を加えた後、２４時間の間、嫌気性チャンバ
ー内において低酸素状態を惹起した。ＡＴＰ濃度を、蛍光により測定し、細胞タ
ンパク質１mg当たりのＡＴＰをピコモルで表した。実験は三重に行なった。

【００３８】 結果 チアネプチン（０．１−１−１０μM）は、用量に依存した様式で培地中の星
状細胞を保護した。保護パーセントは、１０μM量で最大であり、６８％に達し
た。

【００３９】

【表４】

【００４０】 結論 マイクロモル濃度のチアネプチンは、低酸素状態により惹起された変性作用に
対し、培地中の星状細胞を保護することができた。

【００４１】 Ｄ−成長因子のない運動ニューロンの死に関するチアネプチンの神経保護作用
実験プロトコール 妊娠中のスプラーグ−ドーレイ系ラットを、胎児の妊娠１４日目に屠殺した。
胎児の運動ニューロンを、C.E. Henderson（「Nerve cell culture : a practic
al approach（神経細胞培養：実用的なアプローチ）」中の「Purified embryoni
c motoneurons（精製した胎児運動ニューロン）」、J. Cohen and G. Wilkin, E
ds, 1995, p.69-81）及びV. Aree et al. (J. Neurosci. Res., 1999, 55, p.11
9-126) が発表した方法に従って精製した。

【００４２】 １６mmのウエル当たり約１０００個の細胞密度で、運動ニューロンを蒔き、Ｂ
２７及びウマ血清を補給したニューロバーサル（Neurobasal）中で培養した。運
動ニューロンの添加後、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、１ng/ml、又はチア
ネプチンとともに、３７．２℃で２．５日、細胞をそれのみでインキュベートし
た。生存している運動ニューロンを直接計数した。

【００４３】 結果 ＢＤＮＦが存在しないと、細胞は死亡するため、成長因子は、運動ニューロン
にとって必須である。ＢＤＮＦは、運動ニューロンを細胞死から保護する。チア
ネプチンは、（下記の図に示すように）濃度に依存した様式で、運動ニューロン
を死から予防した。

【００４４】 結論 同様のモデルを用いて、Duong et al. (Br. J. Pharmacol., 128, 1385-1392)
は、その神経保護作用が特に知られている化合物、ＳＲ５７７４６Ａが活性であ
ることを示している。筆者は、「ＳＲ５７７４６Ａが、in vitroにおいて運動ニ
ューロンの生存に活性であることが知られている唯一の合成化合物であり、した
がって筋萎縮性側索硬化症に対する良好な候補化合物である」と結論している。

【００４５】 この実験では、我々は、チアネプチンが、完全に予想外の神経保護作用を有す
ることを示し、このことは、チアネプチンが、同様に、筋萎縮性側索硬化症の処
置において有用である可能性の高い化合物であることを示している。

【００４６】 Ｅ−酸化性ストレスに関連する遺伝子の発現に対するチアネプチンのin vivoに
おける作用 逆転写及び連鎖複製増幅反応（ＲＴ−ＰＣＲ）による最近の特徴的な分析の分
子生物学的技術により、ラットの扁桃における中枢レベルでの遺伝による調節に
ついてのチアネプチンによる慢性的処置のin vivoにおける作用を検討すること
が可能となった。

【００４７】 材料及び方法 ２群のラット（ｎ＝６）をチアネプチンナトリウム塩（１５mg/kg；i.p.）又
は生理学的血清で２１日間処理した。動物を屠殺し、脳を取り出した後、扁桃領
域の全ＲＮＡを抽出し、ＲＴ−ＰＣＲ試験に付した。要約すると、逆転写を抽出
したＲＮＡについて行ない、転写生成物を連鎖複製（ＰＣＲ）で増幅し、次に高
分解能ポリアクリルアミドゲル電気泳動に付した。目的のバンドをゲルから取り
出し、再増幅し、配列決定し、分析した。

【００４８】 結果 結果により、チアネプチンの最初の標的は、ミトコンドリアのゲノムであるこ
とが示されたが、これは、呼吸鎖の酵素複合体の１３のサブユニット、並びにリ
ボゾームＲＮＡ及びトランスファーＲＮＡの全体のシリーズをコードする１６キ
ロベースの環状ＤＮＡ分子からなる。実際、チアネプチンの慢性投与により、Ｎ
ＡＤＨユビキノンレダクターゼ（サブユニット２及び５）のミトコンドリア遺伝
子、並びに１６Ｓ ｒＲＮＡ、ｌｅｕ−ｔＲＮＡ及びｖａｌ−ｔＲＮＡをコード
する遺伝子の過剰発現が惹起された。

【００４９】 ＮＡＤＨユビキノンレダクターゼは、ミトコンドリア呼吸鎖における３つのエ
ネルギー転移酵素複合体の第一のものであり、鎖を通過する電子の大部分にとっ
ての入口点を表す。更にミトコンドリアＤＮＡの突然変異は、ミトコンドリア性
脳ミオパシーの全体的名称で知られている多くの神経変性疾患と関連している（
K. Chandrasekaran et al., Mol. Brain Res., 1994, 24: 336-340; S.J. Kish
et al., J. Neurochem., 1992, 59: 776-779; E.M. Mutisaya et al., J. Neuro
chem., 1994, 63: 2179-2184）。

【００５０】 繊維芽細胞の培養物を用いて、ストレスが、ＮＡＤＨのサブユニット４、チト
クロムｂ、及びｒＲＮＡのサブユニット１６５Ｓの遺伝子をコードする転写物の
レベルの下方調節を惹起することが更に示されている（D.R. Crawford et al.,
Free Radic. Biol. Med., 1997, 22(3): 551-559）。

【００５１】 結論 チアネプチンの慢性投与によって惹起された扁桃のミトコンドリア遺伝子の過
剰発現は、この化合物が、細胞呼吸及び中枢酸化的代謝のレベルを増大すること
を示している。このような中枢作用は、チアネプチンのin vivoにおける神経保
護活性を意味している。

【図面の簡単な説明】

【図１】 チアネプチンの、カイニン酸によって誘導される電流に対する増大効果を示す
。

【図２】 チアネプチンの、低酸素状態によって惹起される神経毒性に対する効果を示す
。

【図３】 チアネプチンの、グルタミン酸によって惹起される毒性に対する効果を示す。

【図４】 チアネプチンの、培地中の星状細胞に対する保護効果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 25/24 Ａ６１Ｐ 25/24 25/28 25/28 31/04 31/04 31/12 31/12 31/18 31/18 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＵ ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＭＸ，ＮＯ， ＮＺ，ＰＬ，ＵＳ，ＺＡ

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 神経変性疾患の処置におけるＡＭＰＡ／カイニン酸型のグル
   タミン酸受容体の調節剤として使用するための医薬を得ることにおける、場合に
   より薬学的に許容しうる酸又は塩基との付加塩の形の、チアネプチン又はそのエ
   ナンチオマーの使用。
2. 【請求項２】 医薬が、脳虚血、脳外傷、脳老化、アルツハイマー病、多発
   性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、脱髄疾患、脳症、慢性疲労症候群、筋性脳脊髄
   炎、ウイルス感染後疲労症候群、細菌又はウイルス感染後の疲労及びうつの状態
   、並びにＡＩＤＳ痴呆症候群の処置を目的とすることを特徴とする、請求項１記
   載の使用。
3. 【請求項３】 医薬が、筋萎縮性側索硬化症の処置を目的とすることを特徴
   とする、請求項２記載の使用。
4. 【請求項４】 チアネプチンが、ナトリウム塩の形であることを特徴とする
   、請求項１、２又は３のいずれか１項記載の使用。
5. 【請求項５】 活性成分として、場合により薬学的に許容しうる酸又は塩基
   との付加塩の形の、チアネプチン又はそのエナンチオマー、及び１種以上の薬学
   的に許容しうる賦形剤を含む、請求項１、２、３又は４のいずれか１項記載の使
   用のための医薬組成物。
6. 【請求項６】 活性成分が、ナトリウム塩の形のチアネプチンであることを
   特徴とする、請求項５記載の医薬組成物。