JP2002538090A

JP2002538090A - ワクチンおよび遺伝子治療組成物およびその作製および使用法

Info

Publication number: JP2002538090A
Application number: JP2000601912A
Authority: JP
Inventors: ウェイナー，デイヴィッド・ビー; キム，ヨン・ジェイ; アガドジャニアン，マイケル・ジー
Original assignee: ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア
Priority date: 1999-03-03
Filing date: 2000-03-03
Publication date: 2002-11-12
Also published as: KR20010103788A; IL144845A; CA2362873A1; US20030176378A1; BR0008645A; AU774265B2; KR20070053815A; AU2004214575A1; US7943587B2; AU2004214575B2; AU3725800A; MXPA01008883A; EP1168918A4; EP1168918A1; IL144845A0; CN1348332A; WO2000051432A1

Abstract

(57)【要約】個体において免疫原に対する免疫応答を誘導する方法が開示されている。本方法は免疫原をコードしているヌクレオチド配列および主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含む一つまたはそれ以上の核酸分子を個体に投与することから成っている。免疫原および主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列は個体の細胞により取り込まれた時に発現され、個体において免疫原に対する免疫応答が誘導される。細胞、組織および器官移植を受けている個体においての一致していない供与者細胞、組織および器官の拒絶を軽減する方法が開示されている。本方法は死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列および供与者細胞、組織および器官に一致している主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含む一つまたはそれ以上の核酸分子を個体に投与することから成っている。主要組織適合複合体抗原および死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列は個体の細胞により取り込まれた時に発現される。死信号または毒素との相互作用によるＴ細胞死滅は一致していない供与者細胞、組織および器官の拒絶を軽減する。個体における優性免疫応答を減少させる方法および特異的免疫応答に関連するＴ細胞の亜集団を拡大する方法も開示されている。本方法を実施するために有用なプラスミドおよびプラスミドを含んでいる組成物が開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は個体における予防的および／または治療的免疫応答を誘導するワクチ
ンおよび方法に関している。本発明は細胞、組織および／または臓器移植法を受
けている患者を処置するための組成物および方法に関している。本発明は免疫応
答を調節する組成物および方法に関している。背景技術ワクチンは、病原性抗原またはヒト疾患に関与する細胞に付随する抗原のよう
な標的抗原に対して個体を免疫化するために有用である。ヒト疾患に関与する細
胞に関係する抗原には、癌関連腫瘍抗原および自己免疫疾患に関与する細胞に付
随する抗原が含まれる。

【０００２】そのようなワクチンの設計において、ワクチン接種された個体の細胞中に標的
抗原を産生するワクチンは免疫系の細胞系部分の誘導に有効であることが認めら
れている。特に、生弱毒化ワクチン、無毒性ベクターを使用する組換え体ワクチ
ン、およびＤＮＡワクチンはすべてワクチン接種された個体の細胞中での抗原の
生成を導き、それは免疫系の細胞系部分の誘導を生じる。一方、タンパク質およ
び殺されたまたは不活性化されたワクチンを含むサブユニットワクチンは、体液
性応答を誘導せず、良好な細胞性免疫応答を誘導しない。

【０００３】細胞性免疫応答はしばしば病原体感染に対する保護を提供するのに、および病
原体感染、癌または自己免疫疾患の処置のための有効な免疫仲介治療を提供する
ために必要である。従って、生弱毒化ワクチン、無毒性ベクターを使用する組換
え体ワクチン、およびＤＮＡワクチンのようなワクチン接種された個体の細胞中
で標的抗原を生成するワクチンが良好である。

【０００４】いくつかのワクチンは病原体感染またはヒト疾患に対して予防的にまたは治療
的に個体を免疫化するのに有効であると報告されているが、改良されたワクチン
に対する要求がある。促進された免疫応答を生み出す組成物および方法が要求さ
れている。

【０００５】免疫応答はまた臓器移植患者で経験される移植片対宿主における細胞、組織お
よび器官の拒否にも関係している。しばしば、供与者の細胞、組織および器官は
受容者の細胞と異なった主要組織適合複合体クラスＩ（ＭＨＣＩ）のサブタイプ
を持っている。受容者免疫系はＭＨＣＩサブタイプの相違を検出し、供与者の細
胞、組織および器官に対して免疫応答を指示する。

【０００６】同様に、骨髄移植を受けた患者において、ＭＨＣＩＩ抗原のサブタイプの相違
はＭＨＣＩＩ抗原を発現する供与者細胞の拒絶を生じる。移植臓器拒絶反応が重度となることを防止できる、または軽減できる組成物お
よび方法が要求されている。発明の要約本発明は個体において免疫原に対する免疫応答を誘導する方法に関している。
本方法は個体における発現に必要な制御要素へ作動可能なように連結された免疫
原をコードしているヌクレオチド配列および個体における発現に必要な制御要素
へ作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレ
オチド配列を含む核酸分子を、個体の身体上の部位から個体に投与する工程を含
んでいる。核酸分子は個体の細胞により取り込まれる。そこで免疫原および主要
組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列が発現され、免疫原に対
する免疫応答が個体に誘導される。もしくは、または同時に、本方法は第一の核
酸分子および第二の核酸分子を個体の身体上の部位から個体に投与する工程を含
んでいる。第一の核酸分子は個体における発現に必要な制御要素へ作動可能なよ
うに連結された免疫原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。第二の
核酸分子は個体における発現に必要な制御要素へ作動可能なように連結された主
要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。第一お
よび第二の核酸分子は個体の細胞により取り込まれ、免疫原および主要組織適合
複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列が発現され、免疫原に対する免疫
応答が個体に誘導される。いくつかの態様において、核酸分子はＢ７．２蛋白質
をコードしているヌクレオチド配列をさらに含んでいる。

【０００７】本発明はさらに制御要素へ作動可能なように連結された免疫原をコードしてい
るヌクレオチド配列、制御要素へ作動可能なように連結された主要組織適合複合
体抗原をコードしているヌクレオチド配列、および随意に制御要素へ作動可能な
ように連結されたＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでい
るプラスミド、およびそれを含んでいる医薬組成物にも関している。

【０００８】本発明はさらに、第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを含んでいる組成
物にも関しており、ここで第一のプラスミドは制御要素へ作動可能なように連結
された免疫原をコードしているヌクレオチド配列および制御要素へ作動可能なよ
うに連結された主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含
んでおり、第二のプラスミドはＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配
列を含んでいる。

【０００９】本発明はさらに制御要素へ作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質をコー
ドしているヌクレオチド配列および制御要素へ作動可能なように連結された主要
組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいるプラスミド
にも関している。

【００１０】本発明はさらに、第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを含んでいる組成
物にも関している。第一のプラスミドは免疫原をコードしているヌクレオチド配
列を含み、第二のプラスミドは主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレ
オチド配列を含んでいる。両方のプラスミドは随意にさらにＢ７．２をコードし
ているヌクレオチド配列を含んでいてもよい。随意に、組成物は、Ｂ７．２をコ
ードしているヌクレオチド配列を含む第三のプラスミドを含んでいてもよい。

【００１１】本発明はさらに、細胞、組織および器官移植を受けている個体においての一致
していない供与者細胞、組織および器官の拒絶を減少させる方法にも関している
。本方法は、個体における発現に必要な制御要素へ作動可能なように連結された
死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列、および個体における発現
に必要な制御要素へ作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原をコー
ドしているヌクレオチド配列を含んでいる核酸分子を個体の身体上の部位から個
体に投与する工程を含んでいる。主要組織適合複合体抗原は供与者細胞、組織お
よび器官に一致している。核酸分子は個体の細胞により取り込まれ、そこで主要
組織適合複合体抗原および死信号または毒素が発現される。Ｔ細胞のＴ細胞レセ
プターは、細胞により発現された主要組織適合複合体抗原を含んでいる複合体を
形成する。Ｔ細胞は複合体形成後、死信号または毒素と相互作用することにより
死滅する。個体における一致していない供与者細胞、組織および器官の拒絶反応
はこれにより減少する。もしくは、または同時に、本方法は第一の核酸分子およ
び第二の核酸分子を個体の身体上の部位から個体に投与する工程を含んでいる。
第一の核酸分子は個体における発現に必要な制御要素へ作動可能なように連結さ
れた死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。第二の
核酸分子は個体における発現に必要な制御要素へ作動可能なように連結された主
要組織適合複合体クラスＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる
。主要組織適合複合体抗原は供与者細胞、組織および器官に一致している。第一
および第二の核酸分子は個体の細胞により取り込まれ、そこで主要組織適合複合
体抗原および死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列が発現される
。Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは、細胞により発現された主要組織適合複合体抗原
を含んでいる複合体を形成する。Ｔ細胞は複合体形成後、死信号または毒素と相
互作用することにより死滅し、個体における一致していない供与者細胞、組織お
よび器官の拒絶反応が減少する。いくつかの態様において、核酸分子はＢ７．２
蛋白質をコードしているヌクレオチド配列をさらに含んでいる。

【００１２】本発明はさらに制御要素へ作動可能なように連結された死信号または毒素をコ
ードしているヌクレオチド配列、制御要素へ作動可能なように連結された主要組
織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列、および随意に制御要素へ
作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列
を含んでいるプラスミド、およびそれを含んでいる医薬組成物にも関している。

【００１３】本発明はさらに、第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを含んでいる組成
物にも関している。第一のプラスミドは制御要素へ作動可能なように連結された
死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列および制御要素へ作動可能
なように連結された主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列
を含んでいる。第二のプラスミドはＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチ
ド配列を含んでいる。

【００１４】本発明はさらに制御要素へ作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質をコー
ドしているヌクレオチド配列および死信号または毒素をコードしているヌクレオ
チド配列を含んでいるプラスミドにも関している。

【００１５】本発明はさらに、第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを含んでいる組成
物にも関している。第一のプラスミドは死信号または毒素をコードしているヌク
レオチド配列を含み、第二のプラスミドは主要組織適合複合体抗原をコードして
いるヌクレオチド配列を含んでいる。

【００１６】本発明はさらに個体における優性免疫応答を減少させる方法にも関している。
本方法は優性免疫応答に付随するＴ細胞の亜集団と複合体を形成する主要組織適
合複合体抗原サブタイプを同定することを含んでいる。個体の身体上の部位で、
個体における発現に必要な制御要素へ作動可能なように連結された死信号または
毒素をコードしているヌクレオチド配列、および個体における発現に必要な制御
要素へ作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原サブタイプをコード
しているヌクレオチド配列を含んでいる核酸分子を投与する。核酸分子は個体の
細胞により取り込まれ、そこで主要組織適合複合体抗原サブタイプをコードして
いるヌクレオチド配列、および死信号または毒素をコードしているヌクレオチド
配列が発現される。Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは、細胞により発現された主要組
織適合複合体抗原サブタイプを含んでいる複合体を形成する。Ｔ細胞は複合体形
成後、死信号または毒素と相互作用することにより死滅し、個体における優性免
疫応答が減少する。もしくは、または同時に、第一の核酸分子および第二の核酸
分子が個体の身体上の部位から個体に投与される。第一の核酸分子は個体におけ
る発現に必要な制御要素へ作動可能なように連結された死信号または毒素をコー
ドしているヌクレオチド配列を含んでいる。第二の核酸分子は個体における発現
に必要な制御要素へ作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原サブタ
イプをコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。第一および第二の核酸分
子は個体の細胞により取り込まれ、そこで主要組織適合複合体抗原サブタイプを
コードしているヌクレオチド配列、および死信号または毒素をコードしているヌ
クレオチド配列が発現される。Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは、細胞により発現さ
れた主要組織適合複合体抗原サブタイプを含んでいる複合体を形成し、Ｔ細胞は
複合体形成後、死信号または毒素と相互作用することにより死滅し、個体におけ
る優性免疫応答が減少する。

【００１７】本発明はさらに特異的免疫応答に付随するＴ細胞の亜集団を拡大する方法に関
している。本方法は特異的免疫応答に付随するＴ細胞の亜集団と複合体を形成す
る主要組織適合複合体抗原サブタイプを同定することを含んでいる。個体におけ
る発現に必要な制御要素へ作動可能なように連結されたＢ７．２をコードしてい
るヌクレオチド配列、および個体における発現に必要な制御要素へ作動可能なよ
うに連結された主要組織適合複合体抗原サブタイプをコードしているヌクレオチ
ド配列を含む核酸分子を個体の身体上の部位から個体に投与する。核酸分子は個
体の細胞により取り込まれ、そこで主要組織適合複合体抗原サブタイプをコード
しているヌクレオチド配列、およびＢ７．２をコードしているヌクレオチド配列
が発現される。Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは、細胞により発現された主要組織適
合複合体抗原サブタイプを含んでいる複合体を形成し、Ｔ細胞は複合体形成後、
Ｂ７．２と相互作用することにより増殖する。特異的免疫応答に付随するＴ細胞
の亜集団が拡大される。もしくは、または同時に、第一の核酸分子および第二の
核酸分子が個体の身体上の部位から個体に投与される。第一の核酸分子は個体に
おける発現に必要な制御要素へ作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質をコ
ードしているヌクレオチド配列を含んでおり、第二の核酸分子は個体における発
現に必要な制御要素へ作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原サブ
タイプをコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。核酸分子は個体の細胞
により取り込まれ、そこで主要組織適合複合体抗原サブタイプをコードしている
ヌクレオチド配列、およびＢ７．２をコードしているヌクレオチド配列が発現さ
れる。Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは、細胞により発現された主要組織適合複合体
抗原サブタイプを含んでいる複合体を形成し、Ｔ細胞は複合体形成後、Ｂ７．２
と相互作用することにより増殖し、特異的免疫応答に付随するＴ細胞の亜集団が
拡大される。好適な態様の説明本明細書で使用される場合、用語”遺伝子構築物”とは、蛋白質をコードし、
および個体の細胞中での発現を方向付けることができる、プロモーターおよびポ
リアデニル化シグナルを含む制御要素に作動可能なように連結された開始および
終結シグナルを含んだヌクレオチド配列から成るＤＮＡ分子を意味している。

【００１８】本明細書で使用される場合、用語”発現可能な形”とは、個体の細胞中に存在
した場合、コード配列が発現されるように、蛋白質をコードしているコード配列
へ作動可能なように連結された必要な制御要素を含む遺伝子構築物を意味してい
る。

【００１９】本明細書で使用される場合、用語”保護的免疫応答”および”予防的免疫応答
”とは相互交換的に使用され、非感染個体における病原体抗原のような個体がま
だ暴露されていない免疫原、または腫瘍を持たない患者における腫瘍関連蛋白質
のような疾患を持っていない個体中の疾患細胞関連蛋白質を標的とする免疫応答
を示すことを意味している。

【００２０】本明細書で使用される場合、用語”治療的免疫応答”とは、感染個体における
病原体抗原のような個体がまだ暴露された免疫原、または腫瘍を持っている患者
における腫瘍関連蛋白質のような疾患を持つ個体中の疾患細胞関連蛋白質を標的
とする免疫応答を示すことを意味している。

【００２１】本明細書で使用される場合、用語”予防的有効量”とは、感染性因子の場合、
感染の発生から個体を守るために、細胞特異的疾患の場合は細胞特異的疾患の発
生から個体を守るために必要な量を示すことを意味している。

【００２２】本明細書で使用される場合、用語”治療的有効量”とは、感染性因子の場合、
徴候を軽減させるまたは感染を消失させるために感染個体における感染のレベル
を減少させるために、および細胞特異的疾患の場合は徴候を軽減させるまたは個
体を治癒させるために細胞特異的疾患を持つ個体中の細胞特異的疾患細胞の数を
減少させるために必要な量を示すことを意味している。

【００２３】本明細書で使用される場合、用語”細胞特異的疾患”とは、自己免疫疾患およ
び癌のような過増殖性細胞により特徴付けられる疾患を示すことを意味している
。

【００２４】本明細書で使用される場合、用語”免疫原”、”抗原”、”標的抗原”および
”標的蛋白質”は相互交換的に使用され、免疫応答が誘導される標的として働く
、本発明の遺伝子構築物によりコードされているペプチド、ポリペプチドおよび
蛋白質が含まれることを意味している。

【００２５】本明細書で使用される場合、用語”免疫原に対して免疫応答を誘導する”とは
未経験個体における免疫応答の誘導、および免疫原に前に暴露されている個体に
おける免疫応答の誘導（ここでは免疫原に対する免疫応答が促進される）を示す
ことを意味している。従って、例えば、病原体感染を患っている個体は、、病原
体抗原に対する免疫応答を誘導するために本発明の方法により処置することがで
きる。病原体に対して向けられるであろう治療的免疫応答が感染個体で誘導され
るであろう。

【００２６】本明細書で使用される場合、用語”発現に必要な制御要素”とは遺伝子構築物
のコード配列が発現可能な形になることに必要とされる制御配列を示している。本明細書で使用される場合、用語”主要組織適合複合体抗原サブタイプ”とは
、ＭＨＣクラスＩ抗原対立遺伝子かまたはＭＨＣクラスＩＩ抗原対立遺伝子の蛋
白質産物を示すことを意味している。

【００２７】本明細書で使用される用語”一致”、”一致する”および”一致した”とは、
主要組織適合複合体抗原サブタイプを参照する場合、一致は同一の群およびサブ
タイプの主要組織適合複合体抗原を示すことを意味している。

【００２８】本明細書で使用される用語”一致していない”とは供与者細胞、組織または器
官の主要組織適合複合体抗原サブタイプを参照する場合、異なった群およびサブ
タイプの主要組織適合複合体抗原を示すことを意味している。一致していない供
与者細胞、組織または器官は受容者個体と異なった主要組織適合複合体抗原サブ
タイプを発現する。一致しない供与者はまた異質遺伝子的供与者とも呼ばれる。

【００２９】本明細書で使用される場合、用語”死信号または毒素とのＴ細胞相互作用”と
は、個体の細胞により発現された死信号または毒素とのＴ細胞の相互作用を示す
ことを意味しており、それはＴ細胞の死滅を生じる。例えば、ｆａｓ／ｆａｓレ
セプターが使用された系の死信号である場合、ｆａｓ死信号とＴ細胞上のｆａｓ
レセプターの相互作用（ｆａｓリガンド−ｆａｓ−１）はＴ細胞の死を生じる。

【００３０】本明細書で使用される場合、用語”優性免疫応答”とは、任意の他の抗原に対
する免疫応答を超えた一つの抗原に対する免疫応答（細胞性および体液性応答を
含んで）を示すことを意味している。

【００３１】本明細書で使用される場合、用語”Ｔ細胞の亜集団の拡大”とは特異的Ｔ細胞
クローンの増殖を示すことを意味している。本明細書で使用される場合、用語”特異的免疫応答”とは、特異的エピトープ
に方向付けされた細胞性または体液性免疫応答を示すことを意味している。特異
的免疫応答は、Ｔ細胞へのＭＨＣによるエピトープの提示に続いて、Ｔ細胞のＭ
ＨＣ、抗原およびＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）間の複合体の形成を通して抗原の
特異的エピトープに対して誘導される。複合体形成に関与する特異的Ｔ細胞がＭ
ＨＣ／抗原複合体と特異的に相互作用するＴＣＲを発現する。

【００３２】主要組織適合複合体（ＭＨＣ）抗原は実はイムノグロブリンスーパーファミリ
ーのメンバーである蛋白質ヘテロダイマーのファミリーである。これらの抗原は
、主として抗原提示物として免疫系で用いられる細胞性蛋白質である。ＭＨＣは
抗原と複合体を形成し、ＭＨＣ／抗原複合体は、ＭＨＣ／抗原複合体（この中で
抗原は特異的エピトープを持っている）に特異的であるＴ細胞レセプターに提示
される。従って、Ｔ細胞レセプターは特異的エピトープだけでなく、特異的ＭＨ
Ｃで提示される特異的エピトープもを認識する。ＭＨＣ／抗原複合体とＴ細胞レ
セプター間の相互作用は、抗原に対する免疫応答の誘導、維持および記憶に必須
である。ＭＨＣ抗原は、その構造および機能を含んで、Ｓｔｉｔｅｓ，Ｄ．Ｐ．
ｅｔａｌ．，ＢａｓｉｃａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
，第６版，１９８７，ＡｐｐｌｅｔｏｎａｎｄＬａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ
，ＣＴ，およびＲｏｉｔｔ，Ｉ．Ｍ．ｅｔａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９
８５，Ｃ．Ｖ．ＭｏｓｅｂｙＣｏ．Ｓｔ．ＬｏｕｉｓＭＯ，Ｔｏｒｏｎｔｏ
，ＧｏｗｅｒＭｅｄｉｃａｌＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，ＬｏｎｄｏｎＵＫ，
ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ（両方とも本明細書において援用される）に説明されて
いる。

【００３３】ＭＨＣ蛋白質は一般的に二つの大きな群に分割される、主要組織適合複合体ク
ラスＩ（ＭＨＣＩ）および主要組織適合複合体クラスＩＩ（ＭＨＣＩＩ）。
二つの群は免疫系において異なった抗原提示機能を持っている。しかしながら、
両方とも高度に多形性の遺伝子によりコードされており、免疫系で検出される種
々のエピトープへ結合できる種々の異なったＭＨＣサブタイプを可能にする種々
の対立遺伝子を提供している。ＭＨＣＩ抗原およびＭＨＣＩＩ抗原は異なっ
たＴ細胞に抗原を提示する：ＭＨＣＩ抗原は細胞障害性Ｔ細胞に抗原を提示し
、ＭＨＣＩＩ抗原はヘルパーＴ細胞およびサプレッサーＴ細胞へ抗原を提示す
る。ＭＨＣ抗原はまたヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも称されている。クラスＩお
よびＩＩの各々には、いくつかの副群が存在し、その各々は種々の対立遺伝子に
よりコードされているいくつかのサブタイプが含まれている。

【００３４】ＭＨＣＩ抗原とはＨＬＡ副群ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｃを指
している。これらの三つの副群は実質的にすべてのヒト細胞上で観察される。ク
ラスＩ抗原の構造は、４４，０００の分子量を持つ多形性糖蛋白質を含んでいる
二鎖蛋白質複合体から成っている。ＨＬＡ−Ａ座位には少なくとも２３の異なっ
た対立遺伝子（それ故少なくとも２３のＨＬＡ−Ａのサブタイプ）、ＨＬＡ−Ｂ
座位には少なくとも４７の異なった対立遺伝子（少なくともＨＬＡ−Ｂの４７サ
ブタイプをコード）、およびＨＬＡ−Ｃ座位には少なくとも８の異なった対立遺
伝子（少なくともＨＬＡ−Ｃの８サブタイプをコード）が存在する。個々のヒト
は種々の対立遺伝子の異なった分類を発現する。即ち、個々はサブタイプの異な
った組を発現する。従って、個々のヒトは細胞上にどの組み合わせのＨＬＡ−Ａ
、−Ｂおよび−Ｃが存在しているかを決定するためにタイプ分けできる。クラス
Ｉ抗原のタイプ分けはリンパ球微細胞毒性アッセイと称されている方法である。
簡単には、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｃに対する多抗血清をタイプ
分けトレーのマイクロウェルに入れる。１０００から２０００の末梢血リンパ球
を各々のマイクロウェルへ加える。インキュベーション後、補体を加え、インキ
ュベーションを再開する。次にエオシンのような生体色素を加える。位相差顕微
鏡を使用し、溶解した細胞は色素を取り込むであろうが、一方、生きている細胞
は排除して染色されずに残っていることに基づいて死んだ細胞と生きている細胞
を区別する。個体のＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｃ表現型が反応パタ
ーンに基づいて帰属される。

【００３５】ＭＨＣクラスＩＩ抗原とはＨＬＡ副群ＨＬＡ−Ｄ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ｄ
ＱおよびＨＬＡ−ＤＰを指している。クラスＩＩ抗原は主としてマクロファージ
細胞、単球、Ｔリンパ球およびＢリンパ球のような免疫適格細胞上に観察される
。ＤＰ抗原は強い二次増殖応答を惹起し、ＣＴＬの標的抗原として働くことで他
のクラスＩＩ抗原とは異なっている。少なくとも１９のＨＬＡ−Ｄ対立遺伝子（
少なくとも１９のＨＬＡ−Ｄのサブタイプをコードしている）、少なくとも１６
のＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子（少なくとも１６のＨＬＡ−ＤＲのサブタイプをコー
ドしている）、少なくとも３のＨＬＡ−ＤＱ対立遺伝子（少なくとも３のＨＬＡ
−ＤＱのサブタイプをコードしている）、および少なくとも６のＨＬＡ−ＤＰ対
立遺伝子（少なくとも６のＨＬＡ−ＤＰのサブタイプをコードしている）が存在
している。ＨＬＡ−ＤＲおよび−ＤＱはＨＬＡクラスＩ抗原がタイプ分けされた
方法と類似の方法でタイプ分けされるが、末梢血リンパ球の代わりにＢリンパ球
の精製された集団が使用される。ＨＬＡ−ＤＰ抗原は一次リンパ球タイプ分け法
を使用してタイプ分けされる。

【００３６】Ｂ７．２は最初にＡｚｕｍａ，Ｍ．ｅｔａｌ．１９９３Ｎａｔｕｒｅ３
６６：７６−７９（本明細書において援用される）に記載されている。この文献
の図２ＢはＢ７．２蛋白質のヌクレオチドおよび演繹されるアミノ酸配列を記載
している。配列情報はまたＧｅｎｂａｎｋデータベースＵ０４３４３（本明細書
において援用される）から入手可能である。

【００３７】死ドメインレセプターには以下のものが含まれるが、これらに限定されるわけ
ではない（それらに対する文献およびＧｅｎｅｂａｎｋ配列は本明細書において
援用される）；Ａｐｏ−１（Ｏｅｈｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．，１９９２，２６７（１５），１０７０９−１５；登録番号Ｘ６３７１７）；
Ｆａｓ（Ｉｔｏｈｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９１，６６（２），２３３−
４３；登録番号Ｍ６７４５４）；ＴＮＦＲ−１（Ｎｏｐｈａｒｅｔａｌ．，
ＥＭＢＯＪ．，１９９０，９（１０），３２６９−７８；登録番号Ｍ６７４５
４）；ｐ５５（Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９０，６１
，３５１−３５９；登録番号Ｍ５８２８６，Ｍ３３４８０）；ＷＳＬ−１（Ｋｉ
ｔｓｏｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９６，３８４（６６０７），３７
２−５；登録番号Ｙ０９３９２）；ＤＲ３（Ｃｈｉｎｎａｉｙａｎｅｔａｌ
．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９６，２７４（５８２９），９９０−２；登録番号Ｕ
７２７６３）；ＴＲＡＭＰ（Ｂｏｄｍｅｒｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，
１９９７，６（１），７９−８８；登録番号Ｕ７５３８１）；Ａｐｏ−３（Ｍａ
ｒｓｔｃｒｓｅｔａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．，１９９６，６（１２），
１６６９−７６；登録番号Ｕ７４６１１）；ＡＩＲ（Ｄｅｇｌｉ−Ｅｓｐｏｓｔ
ｉｅｔａｌ．，直接提案，登録番号Ｕ７８０２９）；ＬＡＲＤ（Ｓｃｒｅａ
ｔｏｎｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９
９７，９４（９），４６１５−１９；登録番号Ｕ９４５１２）；ＮＧＲＦ（Ｊｏ
ｈｎｓｏｎｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９８６，４７（４），５４５−５５４
；登録番号Ｍ１４７６４）；ＤＲ４（Ｐａｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，
１９９７，２７６（５３０９），１１１−１１３；登録番号Ｕ９０８７５）；Ｄ
Ｒ５（Ｓｈｅｒｉｄａｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７７（
５３２７），８１８−８２１；登録番号ＡＦ０１２５３５）；ＫＩＬＬＥＲ（Ｗ
ｕｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ，印刷中；ＴＲＡＩＬ−Ｒ
２（ＭａｃＦａｒｌａｎｅｅｔａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７
，印刷中；登録番号ＡＦ０２０５０１）；ＴＲＩＣＫ２（Ｓｃｒｅａｔｏｎｅ
ｔａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．，１９９７，印刷中；登録番号ＡＦ０１８６
５７）；ＤＲ６（Ｐａｎｅｔａｌ．，未発表；登録番号ＡＦ０６８８６８）
。

【００３８】死信号、即ち、死ドメインレセプターと相互作用する蛋白質には以下のものが
含まれるが、これらに限定されるわけではない（それらに対する文献およびＧｅ
ｎｅｂａｎｋ配列は本明細書において援用される）；ＦＡＤＤ（Ｃｈｉｎｎａｉ
ｙａｎｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９５，８１（４），５０５−１２；登録
番号Ｕ２４２３１）；ＦＡＰ−１（Ｓａｔｏｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，
１９９５，２６８（５２０９），４１１−１５；登録番号Ｌ３４５８３）；ＴＲ
ＡＤＤ（Ｈｓｕｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９５，８１（４），４９５−５
０４；登録番号Ｌ４１６９０）；ＲＩＰ（Ｓｔａｎｇｅｒｅｔａｌ．，Ｃｅ
ｌｌ，１９９５，８１（４），５１３−２３；登録番号Ｕ２５９９４）；および
ＦＬＩＣＥ（Ｍｕｚｉｏｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９６，８５（６）；８
１７−２７；登録番号Ｕ５８１４３）；ＲＡＩＤＤ（Ｌｅｎｎｏｎｅｔａｌ
．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，１９９６，３３（１），１５１−２；登録番号Ｕ７９１
１５）。死信号にはまた、死ドメインレセプターに結合してアポトーシスを開始
させるリガンド、以下のものが含まれるがこれらに限定されるわけではない（そ
れらに対する文献およびＧｅｎｅｂａｎｋ配列は本明細書において援用される）
；ＦＡＳ−Ｌ（Ａｌｄｅｒｓｏｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９
９５，１８１（１），７１−７；登録番号Ｕ０８１３７）およびＴＮＦ、および
死ドメインレセプターと相互作用するメディエイタ、以下のものが含まれるがこ
れらに限定されるわけではない（それらに対する文献およびＧｅｎｅｂａｎｋ配
列は本明細書において援用される）；ＦＡＤＤ（Ｃｈｉｎｎａｉｙａｎｅｔ
ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９９５，８１（４），５０５−１２；登録番号Ｕ２４２３
１）；ＭＯＲＴ１（Ｂｏｌｄｉｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，
１９９５，２７０（１４），７７９５−８；登録番号Ｘ８４７０９）；ＣＲＡＤ
Ｄ（Ａｂｍａｄｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，１９９７，５７（４
），６１５−９；登録番号Ｕ８４３８８）；およびＭｙＤ８８（Ｂｏｎｎｅｒｔ
ｅｔａｌ，ＦＥＢＳＬｅｔｔ．，１９９７，４０２（１），８１−４；登
録番号Ｕ８４４０８）も含まれる。

【００３９】毒素には細胞を殺す蛋白質が含まれる。毒素には昆虫および蛇毒、シュードモ
ナス内毒素のような細菌内毒素、一本鎖毒素およびゲロニンを含んでいるリシン
のような二重鎖リボソーム不活性化蛋白質が含まれるが、これらに限定されるわ
けではない。

【００４０】免疫原に加えて、ＭＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列が発現可能な
形のワクチンがさらに提供された場合、ワクチンによりコードされた免疫原に対
する免疫応答が促進されることが発見された。そのように発現されたＭＨＣ抗原
は免疫原をＴ細胞に提示するであろうので、高められた免疫応答が生じるであろ
う。本発明は個体において免疫原に対する免疫応答を誘導するまたはさもなくば
促進する方法を提供する。いくつかの態様において、方法は個体における発現に
必要な制御要素へ作動可能なように連結された免疫原をコードしているヌクレオ
チド配列および個体における発現に必要な制御要素へ作動可能なように連結され
たＭＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列の両方を含む核酸分子を、個体
の身体上の部位から個体に投与する工程を含んでいる。核酸分子は個体の細胞に
取り込まれ、そこで免疫原およびＭＨＣをコードしているヌクレオチド配列が各
々発現される。産生されたＭＨＣは免疫原のエピトープを個体の免疫系のＴ細胞
へ提示し、個体において免疫原に対する促進された免疫応答が誘導される。いく
つかの態様において、方法は少なくとも二つの異なった核酸分子を個体の身体上
の部位から個体に投与する工程を含んでいる。第一の核酸分子は個体における発
現に必要な制御要素へ作動可能なように連結された免疫原をコードしているヌク
レオチド配列を含んでいる。第二の核酸分子は個体における発現に必要な制御要
素へ作動可能なように連結されたＭＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列
を含んでいる。第一および第二の核酸分子は両方とも個体の細胞に取り込まれ、
そこで免疫原およびＭＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列が各々発現さ
れる。産生されたＭＨＣは免疫原のエピトープを個体の免疫系のＴ細胞へ提示し
、個体において免疫原に対する促進された免疫応答が誘導される。

【００４１】いくつかの態様において、ＭＨＣＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列が
個体に投与される核酸分子中に含まれている。いくつかの態様において、ＭＨＣ
Ｉ抗原は個体により発現されるＭＨＣＩ抗原対立遺伝子と一致している。前に議
論したように、ＭＨＣ表現型についての個体のタイプ分けは日常的に実施できる
。個体により発現されるＭＨＣＩ対立遺伝子の同一性が確認されたら、個体によ
り発現されるサブタイプをコードしているヌクレオチド配列が製造または製造さ
れた遺伝子構築物から選択でき、個体へ一致したＭＨＣＩが投与されることが保
証される。

【００４２】いくつかの態様において、ＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列
が個体に投与される核酸分子中に含まれている。いくつかの態様において、ＭＨ
ＣＩＩ抗原は個体により発現されるＭＨＣＩＩ抗原対立遺伝子と一致している。
前に議論したように、ＭＨＣ表現型についての個体のタイプ分けは日常的に実施
できる。個体により発現されるＭＨＣＩＩ対立遺伝子の同一性が確認されたら、
個体により発現されるサブタイプをコードしているヌクレオチド配列が製造また
は製造された遺伝子構築物から選択でき、個体へ一致したＭＨＣＩＩが投与され
ることが保証される。

【００４３】本発明の一つの態様はＭＨＣＩ蛋白質および免疫原をコードしている遺伝子物
質を使用する組成物および方法に関している。本発明の別の態様はＭＨＣＩＩ蛋
白質および免疫原をコードしている遺伝子物質を使用する組成物および方法に関
している。本方法は免疫原性標的に対する予防的および治療的免疫応答を誘導す
る改良された方法に関している。従って、本発明のいくつかの態様は、発現のた
めに必要な制御配列に作動可能なように連結されたＭＨＣＩ抗原および／または
ＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列、およびワクチン中に発現の
ために必要な制御配列に作動可能なように連結された免疫原をコードしているヌ
クレオチド配列を提供することにより改良されたワクチンを提供する。組成物は
ＤＮＡワクチン、無毒性組換え体ベクターワクチンおよび生、弱毒化ワクチンの
ようなワクチンであろう。

【００４４】免疫原に加えて、Ｂ７．２蛋白質およびＭＨＣ抗原の両方をコードしているヌ
クレオチド配列が発現可能な形のワクチンがさらに提供された場合、ワクチンに
よりコードされた免疫原に対する免疫応答が促進されることが発見された。Ｂ７
．２蛋白質およびＭＨＣ抗原はそれにより、標的抗原を発現しているワクチン接
種された個体の細胞で同時に産生される。本発明のこの態様に従うと、免疫原、
Ｂ７．２蛋白質およびＭＨＣＩ抗原および／またはＭＨＣＩＩ抗原をコードして
いる遺伝子物質を使用した組成物および方法が提供される。本方法は免疫原性標
的に対する予防的および治療的免疫応答を誘導する改良された方法に関している
。従って、本発明のいくつかの態様は、ワクチン中に発現のために必要な制御配
列に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド
配列、発現のために必要な制御配列に作動可能なように連結されたＭＨＣＩ抗原
および／またはＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列、およびワク
チン中に発現のために必要な制御配列に作動可能なように連結された免疫原をコ
ードしているヌクレオチド配列を提供することにより改良されたワクチンを提供
する。組成物はＤＮＡワクチン、無毒性組換え体ベクターワクチンおよび生、弱
毒化ワクチンのようなワクチンであろう。

【００４５】本発明のいくつかの態様に従うと、個体へ投与される遺伝子物質は、免疫原を
コードしているヌクレオチド配列、ＭＨＣＩ抗原をコードしているヌクレオチド
配列およびＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。そ
のようなヌクレオチド配列の各々は個体での発現のために必要とされる制御要素
へ作動可能なように連結されている。

【００４６】本発明のいくつかの態様に従うと、個体へ投与される遺伝子物質は第一の核酸
分子および第二の核酸分子を含んでいる。第一の核酸分子は免疫原をコードして
いるヌクレオチド配列およびＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列
を含んでいる。両方のヌクレオチド配列は個体での発現のために必要とされる制
御要素へ作動可能なように連結されている。第二の核酸分子は個体での発現のた
めに必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されているＭＨＣＩ抗原をコ
ードしているヌクレオチド配列を含んでいる。

【００４７】本発明のいくつかの態様に従うと、個体へ投与される遺伝子物質は第一の核酸
分子および第二の核酸分子を含んでいる。第一の核酸分子は個体での発現のため
に必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されている免疫原をコードして
いるヌクレオチド配列を含んでいる。第二の核酸分子はＭＨＣＩ抗原をコードし
ているヌクレオチド配列およびＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配
列を含んでいる。両方のヌクレオチド配列は個体での発現のために必要とされる
制御要素へ作動可能なように連結されている。

【００４８】本発明のいくつかの態様に従うと、個体へ投与される遺伝子物質は第一の核酸
分子および第二の核酸分子を含んでいる。第一の核酸分子は免疫原をコードして
いるヌクレオチド配列およびＭＨＣＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列を
含んでいる。両方のヌクレオチド配列は個体での発現のために必要とされる制御
要素へ作動可能なように連結されている。第二の核酸分子は該個体での発現のた
めに必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されているＢ７．２蛋白質を
コードしているヌクレオチド配列を含んでいる。

【００４９】本発明のいくつかの態様に従うと、個体へ投与される遺伝子物質は第一の核酸
分子、第二の核酸分子および第三の核酸分子を含んでいる。第一の核酸分子は個
体での発現のために必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されている免
疫原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。第二の核酸分子は個体で
の発現のために必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されているＭＨＣ
Ｉ抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。第三の核酸分子は個体
での発現のために必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されているＢ７
．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。

【００５０】本発明のいくつかの態様に従うと、個体へ投与される遺伝子物質は、免疫原を
コードしているヌクレオチド配列、ＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌクレオチ
ド配列およびＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。
そのようなヌクレオチド配列の各々は個体での発現のために必要とされる制御要
素へ作動可能なように連結されている。

【００５１】本発明のいくつかの態様に従うと、個体へ投与される遺伝子物質は第一の核酸
分子および第二の核酸分子を含んでいる。第一の核酸分子は免疫原をコードして
いるヌクレオチド配列およびＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列
を含んでいる。両方のヌクレオチド配列は個体での発現のために必要とされる制
御要素へ作動可能なように連結されている。第二の核酸分子は個体での発現のた
めに必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されているＭＨＣＩＩ抗原を
コードしているヌクレオチド配列を含んでいる。

【００５２】本発明のいくつかの態様に従うと、個体へ投与される遺伝子物質は第一の核酸
分子および第二の核酸分子を含んでいる。第一の核酸分子は個体での発現のため
に必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されている免疫原をコードして
いるヌクレオチド配列を含んでいる。第二の核酸分子はＭＨＣＩＩ抗原をコード
しているヌクレオチド配列およびＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド
配列を含んでいる。両方のヌクレオチド配列は個体での発現のために必要とされ
る制御要素へ作動可能なように連結されている。

【００５３】本発明のいくつかの態様に従うと、個体へ投与される遺伝子物質は第一の核酸
分子および第二の核酸分子を含んでいる。第一の核酸分子は免疫原をコードして
いるヌクレオチド配列およびＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列
を含んでいる。両方のヌクレオチド配列は個体での発現のために必要とされる制
御要素へ作動可能なように連結されている。第二の核酸分子は該個体での発現の
ために必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されているＢ７．２蛋白質
をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。

【００５４】本発明のいくつかの態様に従うと、個体へ投与される遺伝子物質は第一の核酸
分子、第二の核酸分子および第三の核酸分子を含んでいる。第一の核酸分子は個
体での発現のために必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されている免
疫原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。第二の核酸分子は個体で
の発現のために必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されているＭＨＣ
ＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。第三の核酸分子は個
体での発現のために必要とされる制御要素へ作動可能なように連結されているＢ
７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。

【００５５】遺伝子物質は個体の細胞で発現され、免疫応答が惹起される免疫原性標的と
して働く。生じる免疫応答は広範囲のものである：体液性免疫応答に加え、細胞
性免疫応答の両方の系が惹起される。本発明の方法は予防的および治療的免疫性
を与えるのに有用である。従って、免疫化の方法には、免疫原に対して免疫化し
、従って例えば、病原体攻撃または特定の細胞の存在または増殖から個体を保護
する方法、ならびに病原体感染、過増殖性疾患または自己免疫疾患を患っている
個体を処置する方法の両方が含まれている。

【００５６】標的蛋白質は好適には、免疫化が必要とされる病原体または癌細胞または自己
免疫疾患に関係している細胞のような望まれない細胞型の蛋白質と少なくともエ
ピトープを共有している免疫原性蛋白質である。標的蛋白質に対する免疫応答は
、標的蛋白質が関係する特定の感染または疾患から個体を保護し、および／また
はそれらを患っている個体を処置できるであろう。

【００５７】本発明は標的蛋白質に対する広い免疫応答を惹起するのに有用である、即ち、
特に病原体、アレルゲンまたは個体自身の”異常な”細胞に関係する蛋白質。本
発明は病原体蛋白質に対する免疫応答が病原体に対する保護的免疫性を与えるよ
うに、病原性因子および生物体に対して個体を免疫化するのに有用である。本発
明は、特に過増殖性細胞に関連する標的蛋白質に対する免疫応答を惹起すること
により、癌のような過増殖性疾患および障害と戦うのに有用である。本発明は特
に自己免疫状態に関与する細胞関連の標的蛋白質に対する免疫応答を惹起するこ
とにより、自己免疫疾患および障害と戦うのに有用である。

【００５８】本発明により細胞へ送達される核酸分子は、予防的および／または治療的免疫
化剤として機能する免疫原のための遺伝子鋳型として働くであろう。本発明はウ
イルス、原核生物および真核生物体（単細胞病原性生物体および多細胞寄生虫の
ような）のようなすべての病原体に対して個体を免疫化するために使用されるで
あろう。本発明は細胞に感染し、およびウイルスおよび原核生物（淋菌、リステ
リアおよび赤痢菌のような）のような被包性でない病原体に対して個体を免疫化
するのに特に有用である。加えて、本発明はまた、それらが細胞内病原体である
生活周期の段階を含む原虫に対して個体を免疫化するのにも有用である。本明細
書で使用される場合、用語”細胞内病原体”とはその生殖または生活周期の少な
くとも一部で、宿主細胞内に存在しおよびそこで病原蛋白質を産生するまたは産
生する原因となるウイルスまたは病原性生物体を示すことを意味している。表２
は本発明によるワクチンが作製できるいくつかのウイルスファミリーおよび属の
リストである。表に掲げた抗原のような病原体抗原上に示されるエピトープと同
一かまたは実質的に同じである少なくとも一つのエピトープを含むペプチドをコ
ードしているＤＮＡ配列含有ＤＮＡ構築物はワクチンに有用である。さらに、本
発明はまた、原核生物および真核生物を含む他の病原体ならびに表３に掲げてあ
るような多細胞寄生虫に対して個体を免疫化するのにも有用である。

【００５９】病原体感染に対して保護する遺伝子ワクチンを製造するため、保護的免疫応答
が準備できる免疫原性蛋白質をコードしている遺伝子構成要素は、標的のための
コード配列として遺伝子構築物中に含まれていなければならない。病原体感染が
細胞内（それに対して本発明は特に有用である）であるにせよまたは細胞外であ
るにせよ、すべての病原体抗原が保護的応答を惹起することはありそうもない。
ＤＮＡおよびＲＮＡは両方とも比較的小さくおよび比較的容易に製造できるので
、本発明は多病原体抗原を含むワクチン接種を可能にするさらなる利点を提供す
る。遺伝子ワクチンに使用される遺伝子構築物は多くの病原体抗原をコードして
いる遺伝子物質を含むことができる。例えば、数個のウイルス遺伝子を単一の構
築物に含ませてもよく、それにより複数の標的を持つものが提供される。

【００６０】表２および３は、感染から個体を保護するために遺伝子ワクチンが製造される
いくつかの病原性因子および生物体のリストである。いくつかの好適な態様にお
いて、病原体に対して個体を免疫化する方法はＨＩＶ、ＨＴＬＶまたはＨＢＶに
向けられたものである。

【００６１】本発明の別の態様は、過増殖性疾患に特徴的である過増殖している細胞に対す
る広範囲な保護的免疫応答を与える方法、および過増殖性疾患を患っている個体
を処置する方法を提供する。本明細書で使用される場合、用語”過増殖性疾患”
とは細胞の過増殖により特徴付けられるような疾患および障害を示していること
を意味している。過増殖性疾患の例にはすべての形の癌および乾癬が含まれる。

【００６２】免疫原性の”過増殖している細胞”関連蛋白質をコードしているヌクレオチド
配列を含む遺伝子構築物を個体の細胞内への導入は、ワクチン接種された個体の
細胞にこれらの蛋白質の産生を生じる。本明細書で使用される場合、用語”過増
殖性関連蛋白質”とは過増殖性疾患に関連する蛋白質を指していることを意味し
ている。過増殖性疾患に対して免疫するため、過増殖性疾患に関連した蛋白質を
コードしているヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が個体に投与される。

【００６３】過増殖性関連蛋白質が有効な免疫原性標的であるようにするため、それは正常
な細胞と比較して、過増殖性細胞中で独占的にまたは高レベルで産生されるよう
な蛋白質でなければならない。標的抗原にはそのような蛋白質に観察される少な
くとも一つのエピトープを含む蛋白質、それらの断片およびペプチドが含まれる
。いくつかの場合、過増殖性関連蛋白質は蛋白質をコードしている遺伝子の突然
変異による生成物である。突然変異した遺伝子は正常の蛋白質とほとんど同じで
あるが、正常蛋白質では観察されない異なったエピトープを生じるわずかに異な
ったアミノ酸配列を持つ蛋白質をコードしている。そのような標的蛋白質にはｍ
ｙｂ、ｍｙｃ、ｆｙｎのような癌遺伝子、および転座遺伝子ｂｃｒ／ａｂｌ、ｒ
ａｓ、ｓｒｃ、Ｐ５３、ｎｅｕ、ｔｒｋおよびＥＧＲＦによりコードされている
ような蛋白質が含まれる。標的抗原としての癌遺伝子産物に加え、抗癌処置およ
び保護的計画のための標的蛋白質には、Ｂ細胞リンパ球により作られる抗体の可
変領域およびＴ細胞リンパ球のＴ細胞レセプター可変領域が含まれ、それらはい
くつかの態様において自己免疫疾患のための標的抗原としても使用される。腫瘍
細胞において高レベルで観察される蛋白質（モノクローナル抗体１７−１Ａによ
り認識される蛋白質および葉酸結合蛋白質を含む）のような他の腫瘍関連蛋白質
が標的蛋白質として使用できる。

【００６４】本発明は一つまたはそれ以上の癌のいくつかの形に対して個体を免疫化するた
めに使用されるであろうが、本発明は特定の癌が発現しやすい人または以前に癌
を発病し、従って再発しやすい人のような個体を予防的に免疫化するのに特に有
用である。遺伝学および技術ならびに疫学の発展は、個体における癌発生の可能
性および危険事前評価の決定を可能にしている。遺伝子スクリーニングおよび／
または家族健康履歴を用いて、特定の個人がいくつかの型の癌のどれか一つを発
生する可能性を予測することが可能である。

【００６５】同様に、すでに癌が発生している、および癌を取り除く処置を受けたまたは寛
解期にある個体は特に再発しやすい。処置計画の一部として、そのような個体は
再発と戦うために、持っていると診断された癌に対して免疫できる。従って、個
体が癌の一つの型を持っていたことがあり、再発の危険性があることが解ったら
、癌の将来の出現と戦う免疫系を準備するために免疫化できる。

【００６６】本発明は過増殖性疾患を患っている個体を処置する方法を提供する。そのよう
な方法において、遺伝子構築物の導入は、標的蛋白質を産生する過増殖性細胞と
戦うために個体の免疫系を向けさせるおよび促進する免疫療法剤として働く。

【００６７】本発明は、自己免疫性に関係し、細胞レセプターおよび”自己”指向性抗体を
産生する細胞を含んだ標的に対して広範囲な保護的免疫応答を与えることにより
、自己免疫疾患および障害を患っている個体を処置するための方法を提供する。

【００６８】Ｔ細胞仲介自己免疫疾患にはリウマチ様関節炎（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ
）、シェーグレン症候群、サルコイドーシス、インシュリン依存性糖尿病（ＩＤ
ＤＭ）、自己免疫性甲状腺炎、反応性関節炎、強直性脊椎炎、強皮症、多発性筋
炎、皮膚筋炎、乾癬、脈管炎、ヴェグナー肉芽腫症、クローン病および潰瘍性大
腸炎が含まれる。これらの疾患の各々は、内因性抗原に結合し、自己免疫疾患に
関連した炎症性カスケードを開始させるＴ細胞レセプターにより特徴付けられる
。Ｔ細胞の可変領域に対するワクチン接種はＣＴＬが関与する免疫応答を惹起し
、これらのＴ細胞を除去する。

【００６９】ＲＡにおいて、この疾患に関与するＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のいくつかの
特異的可変領域が同定されている。これらのＴＣＲにはＶβ−３、Ｖβ−１４、
Ｖβ−１７、およびＶα−１７が含まれる。従って、これらの蛋白質の少なくと
も一つをコードしているＤＮＡ構築物でのワクチン接種はＲＡに関与するＴ細胞
を標的とするであろう免疫応答を惹起するであろう。Ｈｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｄ．ｅ
ｔａｌ．，１９９１Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８
：１０９２１−１０９２５；Ｐａｌｉａｒｄ，Ｘ．，ｅｔａｌ．，１９９１Ｓｃｉｅｎｃｅ２５３：３２５−３２９；Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｗ．Ｖ．，ｅｔ
ａｌ．，１９９２Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：３２６−３３３（こ
れらの各々は本明細書において援用される）を参照されたい。

【００７０】ＭＳにおいて、この疾患に関与する抗体のいくつかの特異的可変領域が同定さ
れている。これらのＴＣＲにはＶβ−７、およびＶα−１０が含まれる。従って
、これらの蛋白質の少なくとも一つをコードしているＤＮＡ構築物でのワクチン
接種はＭＳに関与するＴ細胞を標的とするであろう免疫応答を惹起するであろう
。Ｗｕｃｈｅｒｐｆｅｎｎｉｇ，Ｋ．Ｗ．，ｅｔａｌ．，１９９０Ｓｃｉｅｎｃｅ２４８：１０１６−１０１９；Ｏｋｓｅｎｂｅｒｇ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔ
ａｌ．，１９９０Ｎａｔｕｒｅ３４５：３４４−３４６（これらの各々は本
明細書において援用される）を参照されたい。

【００７１】強皮症において、この疾患に関与するＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）のいくつか
の特異的可変領域が同定されている。これらのＴＣＲにはＶβ−６、Ｖβ−８、
Ｖβ−１４、およびＶα−１６、Ｖα−３Ｃ、Ｖα−７、Ｖα−１４、Ｖα−１
５、Ｖα−１６、Ｖα−２８、およびＶα−１２が含まれる。従って、これらの
蛋白質の少なくとも一つをコードしているＤＮＡ構築物でのワクチン接種は強皮
症に関与するＴ細胞を標的とするであろう免疫応答を惹起するであろう。

【００７２】Ｔ細胞仲介自己免疫疾患を患っている患者を処置するためには（特にＴＣＲの
可変領域がまだ同定されていない場合）、滑液生検が実施できる。存在するＴ細
胞の試料を取り出すことができ、それらのＴＣＲの可変領域が標準法を使用して
同定される。遺伝子ワクチンはこの情報を用いて製造できる。

【００７３】Ｂ細胞仲介自己免疫疾患には狼蒼（ＳＬＥ）、グレーブス病、重症筋無力症、
自己免疫性血小板減少症、喘息、クリオグロブリン血症、原発性胆汁性硬化症、
および悪性貧血が含まれる。これらの疾患の各々は、内因性抗原に結合し、自己
免疫疾患に関連した炎症性カスケードを開始させる抗体により特徴付けられる。
抗体の可変領域に対するワクチン接種はＣＴＬが関与する免疫応答を惹起し、こ
の抗体を産生するＢ細胞を除去する。

【００７４】Ｂ細胞仲介自己免疫疾患を患っている患者を処置するためには、自己免疫活性
に関与する抗体の可変領域を同定しなければならない。生検が実施でき、炎症部
位に存在する抗体の試料を取り出すことができる。抗体の可変領域が標準法を使
用して同定できる。遺伝子ワクチンはこの情報を用いて製造できる。

【００７５】ＳＬＥの場合、一つの抗原がＤＮＡであると信じられている。従ってＳＬＥに
対して免疫化されるべき患者においては、血清を抗ＤＮＡ抗体でスクリーニング
し、血清中に観察されたそのような抗ＤＮＡ抗体の可変領域をコードしているＤ
ＮＡ構築物を含むワクチンが製造できる。

【００７６】ＴＣＲおよび抗体両方の可変領域間に共通の構造的特色はよく知られている。
特定のＴＣＲまたは抗体をコードしているＤＮＡ配列は一般的にＫａｂａｔ，ｅ
ｔａｌ．，１９８７ＳｅｑｕｅｎｃｅｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，Ｂｅｔｈｅｓ
ｄａＭＤ（本明細書において援用される）に説明されているようなよく知られ
た方法に従って見出すことができる。加えて、抗体からの機能的可変領域クロー
ニングの一般法はＣｈａｕｄｈａｒｙ，Ｖ．Ｋ．，ｅｔａｌ．，１９９０Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８７：１０６６（本明細書にお
いて援用される）に見ることができる。

【００７７】本発明は免疫抑制または免疫無防備状態である個体の免疫応答を促進させるの
に特に有用である。そのような患者は特に感染に敏感であり、有効な免疫応答を
準備することがよりできにくい。本発明はまた、癌を持っている患者を処置する
ために特に有効である。一部のそのような患者では、癌細胞は癌関連抗原を有効
に提示しないので、個体は最適な有効免疫応答を準備できない。

【００７８】いくつかの好適な態様において、制御要素に作動可能なように連結されている
免疫原をコードしているヌクレオチド配列および制御要素に作動可能なように連
結されているＭＨＣＩ抗原および／またはＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌク
レオチド配列を含むプラスミドが提供される。いくつかの好適な態様において、
第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを含む組成物が提供される。第一のプ
ラスミドは免疫原をコードしているヌクレオチド配列を含み、第二のプラスミド
はＭＨＣＩ抗原および／またはＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド配
列を含んでいる。いくつかの好適な態様において、免疫原は病原体抗原、過増殖
性疾患に関連した蛋白質、自己免疫疾患に関連した蛋白質である。いくつかの好
適な態様において、プラスミドは随意にさらに制御要素に作動可能なように連結
されているＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。好
適な態様は、制御要素に作動可能なように連結されている免疫原をコードしてい
るヌクレオチド配列および制御要素に作動可能なように連結されているＭＨＣＩ
抗原および／またはＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列を含むプ
ラスミドから成る医薬組成物（注射可能な組成物を含んで）を含んでいる。いく
つかの態様において、第一のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結され
ている免疫原をコードしているヌクレオチド配列および制御要素に作動可能なよ
うに連結されているＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んで
いる。第二のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されているＭＨＣＩ
抗原および／またはＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んで
いる。いくつかの態様において、第一のプラスミドは制御要素に作動可能なよう
に連結されている免疫原をコードしているヌクレオチド配列を含み、第二のプラ
スミドは制御要素に作動可能なように連結されているＭＨＣＩ抗原および／また
はＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列および制御要素に作動可能
なように連結されているＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含
んでいる。いくつかの態様において、第一および第二のプラスミドが提供される
。第一のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されている免疫原をコー
ドしているヌクレオチド配列および制御要素に作動可能なように連結されている
ＭＨＣＩ抗原および／またはＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列
を含み、第二のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されているＢ７．
２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。いくつかの態様にお
いて、第一、第二および第三のプラスミドが提供される。第一のプラスミドは制
御要素に作動可能なように連結されている免疫原をコードしているヌクレオチド
配列を含んでいる。第二のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されて
いるＭＨＣＩ抗原および／またはＭＨＣＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド
配列を含んでいる。第三のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されて
いるＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。

【００７９】本発明の別の態様に従うと、非−ＭＨＣＩサブタイプ一致供与者細胞、組織お
よび器官に対する免疫応答が、供与者サブタイプＭＨＣＩ蛋白質および死信号ま
たは毒素をコードしているヌクレオチド配列の発現可能形を含む組成物を投与す
ることにより除去または軽減できる。本方法は移植患者に移植された細胞、組織
および器官のような同系の細胞、組織および器官の拒絶に関連する免疫細胞を除
去する改良された方法に関している。本発明に従うと、受容者に関して異質遺伝
子型である供与者ＭＨＣＩ抗原に相当するＭＨＣＩ抗原、および死信号または毒
素の両方の細胞内での発現は異質遺伝子型供与者ＭＨＣＩ抗原を示す細胞、組織
および器官に対する免疫応答の軽減を生じる。移植患者細胞中での毒素または死
信号および同系細胞、組織および器官のＭＨＣＩと一致しているＭＨＣＩ抗原の
サブタイプの同時産生は、同系細胞、組織および器官を標的とするＴ細胞の除去
を生じ、それにより同系細胞、組織および器官に対する免疫応答を除去すること
が発見されている。異質遺伝子型ＭＨＣＩ抗原に対する免疫応答に関与している
Ｔ細胞は死信号または毒素との相互作用により殺される。本質的に、異質遺伝子
型ＭＨＣＩ抗原に対して方向付けられた免疫応答に関与する細胞の除去により異
質遺伝子型ＭＨＣＩ抗原はみえなくなる。移植された細胞、組織および器官に対
する免疫応答に関与するＴ細胞数の減少により移植拒絶が軽減される。

【００８０】本発明に従うと、受容者である個体および供与者が両方とも型分類される。Ｍ
ＨＣＩ対立遺伝子の発現パターンの比較は、どのＭＨＣＩ抗原が供与者材料の拒
絶を生じる免疫応答の標的とされるであろうかどうかを示している。異質遺伝子
型供与者ＭＨＣＩ抗原に相当するＴ細胞の除去は拒絶を軽減する。好適な態様に
おいて、Ｔ細胞の除去は拒絶を最小化するために移植プロトコールに先だって行
われる。多遺伝子構築物が多異質遺伝子型供与者ＭＨＣＩ抗原を標的にするため
に製造できる。

【００８１】骨髄移植のようなＭＨＣＩＩを発現する細胞を含む細胞移植の場合、異質遺伝
子型供与者ＭＨＣＩＩ抗原が供与者および受容者の型分類により同定できる。異
質遺伝子型供与者ＭＨＣＩＩ抗原に対応するＴ細胞を除去するため、異質遺伝子
型供与者ＭＨＣＩＩ抗原をコードしている遺伝子構築物が死信号または毒素とと
もに投与できる。

【００８２】従って、本発明は細胞、組織および器官移植を受けている個体における一致し
ていない供与者細胞、一致していない供与者組織または一致していない器官の拒
絶を軽減させる方法を提供する。いくつかの態様において、方法は、該個体にお
いての発現に必要とされる制御要素に作動可能なように連結されている死信号ま
たは毒素をコードしているヌクレオチド配列、および該個体においての発現に必
要とされる制御要素に作動可能なように連結されているＭＨＣをコードしている
ヌクレオチド配列を含む核酸分子を、該個体の身体の部位から個体へ投与する工
程を含んでいる。ＭＨＣは供与者細胞、供与者組織または供与者器官と一致して
おり、受容者にとっては異質遺伝子型である。核酸分子は個体の細胞により取り
込まれ、そこでＭＨＣ抗原および死信号または毒素をコードしているヌクレオチ
ド配列が発現される。Ｔ細胞は異質遺伝子型ＭＨＣ抗原を発現している細胞と複
合体を形成する。その細胞はまた死信号または毒素を発現している。Ｔ細胞は異
質遺伝子型ＭＨＣ抗原を発現している細胞と複合体形成後に死滅し、細胞、組織
および器官移植を受けている個体において、一致していない供与者細胞、一致し
ていない供与者組織または一致していない器官の拒絶が軽減される。いくつかの
態様において、第一の核酸分子および第二の核酸分子が該個体の身体の部位から
個体へ投与される。第一の核酸分子は該個体においての発現に必要とされる制御
要素に作動可能なように連結されている死信号または毒素をコードしているヌク
レオチド配列を含んでおり、第二の核酸分子は該個体においての発現に必要とさ
れる制御要素に作動可能なように連結されている異質遺伝子型ＭＨＣ抗原をコー
ドしているヌクレオチド配列を含んでいる。

【００８３】いくつかの態様において、個体においての発現に必要とされる制御要素に作動
可能なように連結されているＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列
はまた、死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列および異質遺伝子
型ＭＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列と個体へ投与される。いくつか
の態様において、該方法は死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列
、異質遺伝子型ＭＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列およびＢ７．２蛋
白質をコードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子が個体の身体の部位から
個体へ投与される工程を含んでいる。各々のヌクレオチド配列は個体においての
発現に必要とされる制御要素に作動可能なように連結されている。いくつかの態
様において、該方法は第一の核酸分子および第二の核酸分子が該個体の身体の部
位から個体へ投与される工程を含んでいる。第一の核酸分子は死信号または毒素
をコードしているヌクレオチド配列およびＢ７．２蛋白質をコードしているヌク
レオチド配列を含んでおり（それらは該個体においての発現に必要とされる制御
要素に作動可能なように連結されている）、第二の核酸分子は該個体においての
発現に必要とされる制御要素に作動可能なように連結されている異質遺伝子型Ｍ
ＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。いくつかの態様にお
いて、該方法は第一の核酸分子および第二の核酸分子が該個体の身体の部位から
個体へ投与される工程を含んでいる。第一の核酸分子は該個体においての発現に
必要とされる制御要素に作動可能なように連結されている死信号または毒素をコ
ードしているヌクレオチド配列を含んでおり、第二の核酸分子は異質遺伝子型Ｍ
ＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列およびＢ７．２蛋白質をコードして
いるヌクレオチド配列を含んでいる（それらは該個体においての発現に必要とさ
れる制御要素に作動可能なように連結されている）。いくつかの態様において、
該方法は第一の核酸分子および第二の核酸分子が該個体の身体の部位から個体へ
投与される工程を含んでいる。第一の核酸分子は死信号または毒素をコードして
いるヌクレオチド配列および異質遺伝子型ＭＨＣ抗原をコードしているヌクレオ
チド配列を含んでおり（それらは該個体においての発現に必要とされる制御要素
に作動可能なように連結されている）、第二の核酸分子は該個体においての発現
に必要とされる制御要素に作動可能なように連結されているＢ７．２蛋白質をコ
ードしているヌクレオチド配列を含んでいる。いくつかの態様において、該方法
は第一の核酸分子、第二の核酸分子および第三の核酸分子が該個体の身体の部位
から個体へ投与される工程を含んでいる。第一の核酸分子は該個体においての発
現に必要とされる制御要素に作動可能なように連結されている死信号または毒素
をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。第二の核酸分子は該個体にお
いての発現に必要とされる制御要素に作動可能なように連結されているＭＨＣ抗
原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。第三の核酸分子は該個体に
おいての発現に必要とされる制御要素に作動可能なように連結されているＢ７．
２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。

【００８４】本発明は制御要素に作動可能なように連結されている死信号または毒素をコー
ドしているヌクレオチド配列および制御要素に作動可能なように連結されている
ＭＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいるプラスミドを提供す
る。ＭＨＣ抗原とはＭＨＣＩ抗原および／またはＭＨＣＩＩ抗原である。いくつ
かの態様において、プラスミドはさらに制御要素に作動可能なように連結されて
いるＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。本発明は
、制御要素に作動可能なように連結されている死信号または毒素をコードしてい
るヌクレオチド配列および制御要素に作動可能なように連結されているＭＨＣ抗
原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいるプラスミドから成る医薬組成
物（注射可能組成物を含んで）を提供する。本発明は制御要素に作動可能なよう
に連結されているＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列および死信
号または毒素をコードしているヌクレオチド配列を含むプラスミドを提供する。

【００８５】いくつかの態様において、第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを含む組
成物が提供される。第一のプラスミドは死信号または毒素をコードしているヌク
レオチド配列を含んでおり、第二のプラスミドはＭＨＣ抗原をコードしているヌ
クレオチド配列を含んでいる。ＭＨＣ抗原とはＭＨＣＩ抗原および／またはＭＨ
ＣＩＩ抗原である。いくつかの態様において、第一のプラスミドは制御要素に作
動可能なように連結されている死信号または毒素をコードしているヌクレオチド
配列および制御要素に作動可能なように連結されているＢ７．２蛋白質をコード
しているヌクレオチド配列を含んでいる。第二のプラスミドは制御要素に作動可
能なように連結されているＭＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列を含ん
でいる。いくつかの態様において、第一のプラスミドは制御要素に作動可能なよ
うに連結されている死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列含んで
おり、第二のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されているＭＨＣ抗
原をコードしているヌクレオチド配列および制御要素に作動可能なように連結さ
れているＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。いく
つかの態様において、第一のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結され
ている死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列および制御要素に作
動可能なように連結されているＭＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列含
んでおり、第二のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されているＢ７
．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。いくつかの態様に
おいて、第一のプラスミド、第二のプラスミドおよび第三のプラスミドを含む組
成物が提供される。第一のプラスミドは死信号または毒素をコードしているヌク
レオチド配列を含んでいる。第二のプラスミドはＭＨＣ抗原をコードしているヌ
クレオチド配列を含んでいる。ＭＨＣ抗原とはＭＨＣＩ抗原および／またはＭＨ
ＣＩＩ抗原である。第三のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されて
いるＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。

【００８６】本発明の別の態様は個体における優性免疫応答を減少させるための組成物およ
び方法に関している。優性免疫応答は、特定の抗原へ方向付けられた抗体および
／またはＣＴＬの大きな比率により特徴付けられる。優性免疫応答において、”
優性標的抗原”を用いて形成するＭＨＣ／Ａｇ／ＴＣＲ複合体が優性免疫応答を
仲介する。従って、ＭＨＣ／優性抗原複合体に特異的なＴ細胞の除去が優性抗原
に方向付けられた免疫応答を減少させるであろうし、および非優性抗原に対する
免疫応答が増加するであろう。本発明のいくつかの態様に従うと、優性抗原と複
合体形成してＭＨＣ／優性抗原／ＴＣＲ複合体を形成するＭＨＣのサブタイプが
同定される。個体はその身体上の部位へ、死信号または毒素をコードしているヌ
クレオチド配列、および優性抗原と複合体形成してＭＨＣ／優性抗原／ＴＣＲ複
合体を形成するＭＨＣのサブタイプをコードしているヌクレオチド配列を含んで
いる核酸分子が投与される。両方のヌクレオチド配列は個体においての発現に必
要とされる制御要素に作動可能なように連結されている。核酸分子は個体の細胞
により取り込まれ、そこでＭＨＣをコードしているヌクレオチド配列および死信
号または毒素をコードしているヌクレオチド配列が発現される。ＭＨＣ／優性抗
原複合体と複合体を形成するＴ細胞亜集団のＴ細胞が細胞と複合体を形成する。
死信号または毒素を発現している細胞との複合体形成後、Ｔ細胞は死滅する。個
体で起こっている優性免疫応答が減少する。本発明の別の態様に従うと、優性抗
原と複合体形成してＭＨＣ／優性抗原／ＴＣＲ複合体を形成するＭＨＣのサブタ
イプが同定され、個体はその身体上の部位へ、第一の核酸分子および第二の核酸
分子が投与される。第一の核酸分子は個体においての発現に必要とされる制御要
素に作動可能なように連結されている死信号または毒素をコードしているヌクレ
オチド配列を含んでいる。第二の核酸分子は個体においての発現に必要とされる
制御要素に作動可能なように連結されているＭＨＣをコードしているヌクレオチ
ド配列を含んでいる。第二の核酸分子のヌクレオチド配列によりコードされてい
るＭＨＣは、優性抗原と複合体形成してＭＨＣ／優性抗原／ＴＣＲ複合体を形成
するサブタイプとして同定されたＭＨＣのサブタイプと一致している。第一およ
び第二の核酸分子は個体の細胞により取り込まれ、死信号または毒素およびＭＨ
Ｃをコードしているヌクレオチド配列が発現され、ＭＨＣ／優性抗原複合体と複
合体を形成するＴ細胞亜集団のＴ細胞が細胞と複合体を形成する。死信号または
毒素を発現している細胞との複合体形成後、Ｔ細胞は死滅する。個体で起こって
いる優性免疫応答が減少する。いくつかの態様において、個体においての発現に
必要とされる制御要素に作動可能なように連結されているＭＨＣをコードしてい
るヌクレオチド配列が個体へ同時に投与される。

【００８７】いくつかの態様において、該方法は死信号または毒素をコードしているヌクレ
オチド配列、抗原をコードしているヌクレオチド配列およびＢ７．２蛋白質をコ
ードしているヌクレオチド配列を含んでいる核酸分子を個体の身体上の部位から
個体へ投与する工程を含んでいる。これらの三つのヌクレオチド配列の各々は個
体においての発現に必要とされる制御要素に作動可能なように連結されている。
ヌクレオチド配列によりコードされているＭＨＣは、優性抗原と複合体形成して
ＭＨＣ／優性抗原／ＴＣＲ複合体を形成するサブタイプとして同定されたＭＨＣ
のサブタイプと一致している。核酸分子は個体の細胞により取り込まれ、そこで
死信号または毒素、ＭＨＣおよびＢ７．２をコードしているヌクレオチド配列が
発現される。ＭＨＣ／優性抗原複合体と複合体を形成するＴ細胞亜集団のＴ細胞
が細胞と複合体を形成する。死信号または毒素を発現している細胞との複合体形
成後、Ｔ細胞は死滅する。個体で起こっている優性免疫応答が減少する。

【００８８】いくつかの態様に従うと、該方法は第一の核酸分子および第二の核酸分子を個
体の身体上の部位から個体へ投与する工程を含んでいる。いくつかの態様におい
て、第一の核酸分子は死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列およ
びＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでおり、各々のヌク
レオチド配列は個体においての発現に必要とされる制御要素に作動可能なように
連結されている。第二の核酸分子は個体においての発現に必要とされる制御要素
に作動可能なように連結されているＭＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配
列を含んでいる。いくつかの態様において、第一の核酸分子は個体においての発
現に必要とされる制御要素に作動可能なように連結されている死信号または毒素
をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる。第二の核酸分子はＭＨＣをコ
ードしているヌクレオチド配列およびＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオ
チド配列を含んでおり、各々のヌクレオチド配列は個体においての発現に必要と
される制御要素に作動可能なように連結されている。いくつかの態様において、
第一の核酸分子は死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列およびＭ
ＨＣ抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでおり、各々のヌクレオチド
配列は個体においての発現に必要とされる制御要素に作動可能なように連結され
ている。第二の核酸分子は個体においての発現に必要とされる制御要素に作動可
能なように連結されているＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を
含んでいる。各々のそのような態様において、ヌクレオチド配列によりコードさ
れているＭＨＣはＭＨＣＩまたはＭＨＣＩＩであろう。ＭＨＣは、優性抗原と複
合体形成してＭＨＣ／優性抗原／ＴＣＲ複合体を形成するサブタイプとして同定
されたＭＨＣのサブタイプと一致している。第一および第二の核酸分子は個体の
細胞により取り込まれ、そこで死信号または毒素、ＭＨＣおよびＢ７．２をコー
ドしているヌクレオチド配列が発現される。ＭＨＣ／優性抗原複合体と複合体を
形成するＴ細胞亜集団のＴ細胞が細胞と複合体を形成する。死信号または毒素を
発現している細胞との複合体形成後、Ｔ細胞は死滅する。個体で起こっている優
性免疫応答が減少する。

【００８９】いくつかの態様に従うと、該方法は第一の核酸分子、第二の核酸分子および第
三の核酸分子を個体の身体上の部位から個体へ投与する工程を含んでいる。いく
つかの態様において、第一の核酸分子は死信号または毒素をコードしているヌク
レオチド配列を含んでいる。第二の核酸分子はＢ７．２蛋白質をコードしている
ヌクレオチド配列を含んでいる。第三の核酸分子はＭＨＣ抗原をコードしている
ヌクレオチド配列を含んでいる。そのようなヌクレオチドの各々は個体において
の発現に必要とされる制御要素に作動可能なように連結されている。ヌクレオチ
ド配列によりコードされているＭＨＣはＭＨＣＩまたはＭＨＣＩＩであろう。Ｍ
ＨＣは、優性抗原と複合体形成してＭＨＣ／優性抗原／ＴＣＲ複合体を形成する
サブタイプとして同定されたＭＨＣのサブタイプと一致している。第一、第二お
よび第三の核酸分子は個体の細胞により取り込まれ、そこで死信号または毒素、
ＭＨＣおよびＢ７．２をコードしているヌクレオチド配列が発現される。ＭＨＣ
／優性抗原複合体と複合体を形成するＴ細胞亜集団のＴ細胞が細胞と複合体を形
成する。死信号または毒素を発現している細胞との複合体形成後、Ｔ細胞は死滅
する。個体で起こっている優性免疫応答はそれにより減少する。

【００９０】いくつかの態様に従うと、本発明は所望のＴ細胞亜集団を拡大するための組成
物および方法に関している。所望のＴ細胞亜集団は好適にはＭＨＣ／抗原複合体
と複合体を形成し、それは促進された免疫応答が望まれる抗原を含んでいる。拡
大されるべきＴ細胞により発現されるＴＣＲを含んでいるＭＨＣ／Ａｇ／ＴＣＲ
複合体を形成するＭＨＣサブタイプが同定される。拡大されるべきＴ細胞により
発現されるＴＣＲを含んでいるＭＨＣ／Ａｇ／ＴＣＲ複合体を形成するＭＨＣサ
ブタイプをコードしているヌクレオチド配列およびＢ７．２をコードしているヌ
クレオチド配列を含む核酸分子が個体の身体上の部位から個体へ投与される。両
方のヌクレオチド配列は個体においての発現に必要とされる制御要素に作動可能
なように連結されている。核酸分子は個体の細胞により取り込まれ、そこでＭＨ
Ｃをコードしているヌクレオチド配列およびＢ７．２をコードしているヌクレオ
チド配列が発現される。ＭＨＣ／優性抗原複合体と複合体を形成するＴ細胞亜集
団のＴ細胞が細胞と複合体を形成する。Ｂ７．２を発現している細胞と複合体形
成後にＢ７．２に応答してＴ細胞が増殖する。本発明の別の態様に従うと、第一
の核酸分子および第二の核酸分子が個体の身体上の部位から個体へ投与される。
第一の核酸分子は拡大されるべきＴ細胞により発現されるＴＣＲを含んでいるＭ
ＨＣ／Ａｇ／ＴＣＲ複合体を形成するＭＨＣサブタイプをコードしているヌクレ
オチド配列を含んでいる。第二の核酸分子はＢ７．２をコードしているヌクレオ
チド配列を含んでいる。両方のヌクレオチド配列は個体においての発現に必要と
される制御要素に作動可能なように連結されている。第一および第二の核酸分子
は個体の細胞により取り込まれ、そこでＭＨＣをコードしているヌクレオチド配
列およびＢ７．２をコードしているヌクレオチド配列が発現される。ＭＨＣ／優
性抗原複合体と複合体を形成するＴ細胞亜集団のＴ細胞が細胞と複合体を形成す
る。Ｂ７．２を発現している細胞と複合体形成後にＢ７．２に応答してＴ細胞が
増殖する。いくつかの態様において、ＭＨＣはＭＨＣＩ抗原である。いくつかの
態様において、ＭＨＣはＭＨＣＩＩ抗原である。

【００９１】直接ＤＮＡ投与による（ワクチンおよび治療薬としての使用を含んで）細胞へ
の蛋白質送達のための組成物および方法は種々のプロトコールを使用して報告さ
れている。そのような方法の例は、米国特許第５，５９３，９７２号、米国特許
第５，７３９，１１８号、米国特許第５，５８０，８５９号、米国特許第５，５
８９，４６６号、米国特許第５，７０３，０５５号、米国特許第５，６２２，７
１２号、米国特許第５，４５９，１２７号、米国特許第５，６７６，９５４号、
米国特許第５，６１４，５０３号およびＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９５／１２５０
２（これらは各々本明細書において援用される）に記載されている。直接ＤＮＡ
投与による細胞への蛋白質送達のための組成物および方法はまたＰＣＴ／ＵＳ９
０／０１５１５、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０２３３８、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０４８１
３１およびＰＣＴ／ＵＳ９４／００８９９（これらは各々本明細書において援用
される）にも記載されている。これらの出願に記載されている送達プロトコール
に加え、ＤＮＡを送達する別の方法が米国特許第４，９４５，０５０号および５
，０３６，００６号（これらは両方とも本明細書において援用される）に記載さ
れている。核酸配列を送達するために有用な組換え体アデノウイルスベクターの
例は、米国特許第５，７５６，２８３号および米国特許第５，７０７，６１８号
（これらは各々本明細書において援用される）に記載されている。核酸分子はま
た米国特許第４，２３５，８７１号、米国特許第４，２４１，０４６号および米
国特許第４，３９４，４４８号（これらは各々本明細書において援用される）に
記載されているようなリポソーム仲介ＤＮＡ輸送を用いても送達できる。

【００９２】本発明のいくつかの方法に従うと、核酸分子は該個体の身体上の部位から：筋
肉内、鼻孔内、腹腔内、皮下、皮内または局所的にまたは膣、直腸、尿管、口腔
および舌下から成る群より選択される粘膜組織への潅注、から成る群より選択さ
れる投与経路により個体へ投与される。いくつかの好適な投与経路には皮内、皮
下、腹腔内、筋肉内および経口が含まれる。

【００９３】本発明のいくつかの方法に従うと、ＤＮＡはプラスミドＤＮＡである。本発明のいくつかの態様に従うと、プロモーターはシミアンウイルス４０（Ｓ
Ｖ４０）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウ
イルス（ＨＩＶ）（ＨＩＶのロングターミナル反復配列（ＬＴＲ）プロモーター
のような）、モロニーウイルス、ＡＬＶ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（Ｃ
ＭＶ前初期プロモーター）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫
ウイルス（ＲＳＶ）、ならびにヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン
、ヒト筋肉クレアチンおよびヒトメタロチオネインのようなヒト遺伝子からのプ
ロモーターから成る群より選択される。

【００９４】本発明のいくつかの態様に従うと、ポリアデニル化シグナルはＳＶ４０ポリア
デニル化シグナルおよびウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナルから成る群よ
り選択される。

【００９５】本発明のいくつかの方法に従うと、ＤＮＡ分子は細胞によるＤＮＡ分子の取り
込みを容易にする組成物で投与される。いくつかの態様において、核酸分子は共
作用剤の投与と共に細胞へ送達される。共作用剤の例は米国特許第５，５９３，
９７２号、米国特許第５，７３９，１１８号および１９９４年１月２６日に出願
された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９４／００８９９（これらは各々本明細書
において援用される）に記載されている。核酸分子と共に投与される共作用剤は
核酸分子との混合物として、または核酸分子の投与と同時に、前にまたは後で別
々に投与されてもよい。いくつかの態様において、共作用剤にはカチオン脂質、
米国特許第５，７０３，０５５号に記載されているようなものが含まれるが、そ
れらに限定されるわけではない。共作用剤の例には、α−インターフェロン、ガ
ンマ−インターフェロン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦ、上皮増殖
因子（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−
１０およびＩＬ−１２ならびに線維芽細胞成長因子のような成長因子、サイトカ
インおよびリンホカイン、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）のような表面活性剤
、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）を含むＬＰ
Ｓ類似体、コレラ毒素、コブラ毒素、サポニン、ムラミールペプチド、キノン類
似体およびスクアレンおよびスクアレンのようなベシクル、およびヒアルロン酸
が含まれる。いくつかの態様において、免疫調節蛋白質が共作用剤として使用さ
れるであろう。細胞によるＤＮＡ分子の取り込みを容易にする好適な組成物はカ
チオン脂質、リポソームおよび局所麻酔剤から成る群より選択される。いくつか
の態様において、多共作用剤が使用される。核酸分子と共に投与される共作用剤
は核酸分子との混合物として投与されるか、または核酸分子の投与と同時に、前
にまたは後で別々に投与されるであろう。

【００９６】プラスミドに基づいた遺伝子導入プロトコールにおけるＭＨＣコード配列およ
び免疫原のコード配列および／または死信号または毒度のコード信号および／ま
たはＢ７．２コード配列の発現可能形を使用することに加え、本発明は、抗原を
コードしている外来遺伝子を送達するために弱毒化生ワクチンおよび組換え体ベ
クターを使用するワクチンに使用された別の遺伝子導入方法論を提供する。外来
抗原を送達するために弱毒化生ワクチンおよび組換え体ベクターを使用するワク
チンの例は米国特許第４，７７２，８４８；５，０１７，４８７；５，０７７，
０４４；５，１１０，５８７；５，１１２，７４９；５，１７４，９９３；５，
２２３，４２４；５，２２５，３３６；５，２４０，７０３；５，２４２，８２
９；５，２９４，４４１；５，２９４，５４８；５，３１０，６６８；５，３８
７，７４４；５，３８９，３６８；５，４２４，０６５；５，４５１，４９９；
５，４５３，３６４；５，４６２，７３４；５，４７０，７３４および５，４８
２，７１３号（これらの各々は本明細書において援用される）に記載されている
。本発明に従った遺伝子構築物は、本発明に従った改良されたワクチンを製造す
るために弱毒化生ワクチンおよび組換え体ワクチン内へ取り込まれるであろう。

【００９７】本発明の一つの態様は本発明の方法に有用な医薬組成物に関している。医薬組
成物はミトコンドリアプロモーターを含んで、個体の細胞においての発現に必要
とされる制御要素に作動可能なように連結されている蛋白質をコードしているヌ
クレオチド配列を含むＤＮＡ分子を含んでいる。医薬組成物はさらに医薬として
受容可能な担体または賦形剤を含んでいる。用語”医薬として”とは当業者には
よく知られおよび広く理解されている。本明細書において使用する場合、用語”
医薬組成物”および”注射可能医薬組成物”とは当業者に理解されているような
通常の意味を持っている。医薬組成物は無菌性、発熱物質、特定の問題ならびに
等張性およびｐＨに関して特別の標準に適合していることが必要とされる。例え
ば、注射可能医薬は無菌で発熱物質を含んでいない。

【００９８】本発明に従った医薬組成物は約１ｎｇから約１０，０００μｇのＤＮＡを含ん
でいる。いくつかの好適な態様において、医薬組成物は約２０００μｇ、３００
０μｇ、４０００μｇまたは５０００μｇのＤＮＡを含んでいる。いくつかの好
適な態様において、医薬組成物は約１０００μｇのＤＮＡを含んでいる。いくつ
かの好適な態様において、医薬組成物は約１０ｎｇから約８００μｇのＤＮＡを
含んでいる。いくつかの好適な態様において、医薬組成物は約０．１から約５０
０μｇのＤＮＡを含んでいる。いくつかの好適な態様において、医薬組成物は約
１から約３５０μｇのＤＮＡを含んでいる。いくつかの好適な態様において、医
薬組成物は約２５から約２５０μｇのＤＮＡを含んでいる。いくつかの好適な態
様において、医薬組成物は約１００μｇのＤＮＡを含んでいる。

【００９９】本発明の医薬組成物は使用されるべき投与様式に従って処方される。当業者は
遺伝子構築物を含むワクチンを容易に処方できる。投与様式として筋肉内注射が
選択された場合、等張性処方が好適には選択される。一般に、等張性のための添
加物には塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトールおよび
ラクトースが使用できる。いくつかの場合、リン酸緩衝液のような等張溶液が好
適である。安定化剤にはゼラチンおよびアルブミンが含まれる。いくつかの態様
において、処方に血管収縮剤が添加される。本発明に従った医薬製品は無菌で発
熱物質を含んでいないように提供される。

【０１００】好適な態様において、ＤＮＡは筋肉内注射で投与される。よく知られおよび商
業的に入手可能な医薬化合物であるブピバカインが遺伝子構築物に先立って、同
時に、または続いて投与される。ブピバカインおよび遺伝子構築物は同一の組成
物に処方されてもよい。ブピバカインは組織に投与された場合、その多くの特性
および活性のゆえに特に有用である。ブピバカインは化学的におよび薬理学的に
アミノアシル局所麻酔薬に関連している。それはメピバカインの同族体であり、
リドカインに似ている。ブピバカインは筋肉組織電位をナトリウム攻撃感受性に
し、細胞内イオン濃度に影響を与える。ブピバカインの薬理学的活性の完全な説
明はＲｉｔｃｈｉｅ，Ｊ．Ｍ．ａｎｄＮ．Ｍ．Ｇｒｅｅｎｅ，ＴｈｅＰｈａ
ｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｉｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，編
：Ｇｉｌｍａｎ，Ａ．Ｇ．ら，第８版，１５章：３１１１（本明細書において援
用される）に見ることができる。ブピバカインおよびブピバカインと類似の機能
性を示す化合物は本発明の方法で好適である。

【０１０１】ブピバカイン−ＨＣｌは化学的には２−ピペリジンカルボキサミド、１−ブチ
ル−Ｎ−（２，６−ジメチルフェニル）一塩酸塩、一水和物と称され、Ａｓｔｒ
ａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｏｄｕｃｔｓＩｎｃ．（Ｗｅｓｔｂ
ｏｒｏ，Ｍａｓｓ．）およびＳａｎｏｆｉＷｉｎｔｈｒｏｐＰｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌｓ（ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）を含む多くの発売元から医薬
使用のために広く商業的に入手可能である。ブピバカインの市販品はメチルパラ
ビンとおよび無しで、およびエピネフリンとおよび無しで処方されている。任意
のそのような処方が使用されるであろう。本発明で使用されるであろう０．２５
％、０．５％および０．７５％の濃度で医薬での使用のために商業的に入手可能
である。必要ならば所望の効果を惹起する別の濃度が調製される。本発明に従う
と、約２５０μｇから約１０ｍｇのブピバカインが投与される。いくつかの態様
において、約２５０μｌから約７．５ｍｇが投与される。いくつかの態様におい
て、約０．０５ｍｇから約５．０ｍｇが投与される。いくつかの態様において、
約１．０ｍｇから約３．０ｍｇが投与される。いくつかの態様において、約５．
０ｍｇが投与される。例えば、いくつかの態様において、約５０μｌから約２ｍ
ｌ、好適には等張医薬担体中、５０μｌから約１５００μｌおよびより好適には
約１ｍｌの０．５％ブピバカイン−ＨＣｌおよび０．１％メチルパラビンがワク
チンが投与される前に、同時にまたは後に投与される。同様に。いくつかの態様
において、等張医薬担体中、５０μｌから約２ｍｌ、好適には５０μｌから約１
５００μｌおよびより好適には約１ｍｌの０．５％ブピバカイン−ＨＣｌがワク
チンが投与される前に、同時にまたは後に投与される。ブピバカインおよび任意
の他の同様に作用する化合物（特に、局所麻酔薬のファミリーに関連する化合物
）は、細胞による遺伝子構築物の取り込みの望まれる容易さを提供する濃度で投
与されるであろう。

【０１０２】本発明のいくつかの態様において、個体には筋肉内注射による遺伝子ワクチン
接種に先立って最初にブピバカイン注射が行われる。即ち、例えば、ワクチン接
種約１週間から１０日前までに、個体に最初にブピバカインが注射される。いく
つかの態様において、ワクチン接種に先立ち、遺伝子構築物の投与約１から５日
前に個体に最初はブピバカインが注射される。いくつかの態様において、ワクチ
ン接種に先立ち、遺伝子構築物の投与約２４時間前に個体に最初はブピバカイン
が注射される。もしくは、ブピバカインはワクチン接種と同時に、または数分前
に注射できる。

【０１０３】従って、ブピバカインおよび遺伝子構築物は混合され、混合物として同時に注
射される。例えば、いくつかの態様において、遺伝子構築物の投与後、約１週間
から１０日までにブピバカインが注射される。いくつかの態様において、ワクチ
ン接種約２４時間後にブピバカインが個体に注射される。いくつかの態様におい
て、ワクチン接種約１から５日後にブピバカインが個体に注射される。いくつか
の態様において、ワクチン接種約１週間から１０日後にブピバカインが個体に注
射される。

【０１０４】本発明は促進剤として局所麻酔剤を使用して実施されるであろう。ブピバカイ
ンに加え、メピバカイン、リドカイン、プロカイン、カルボカインおよびメチル
ブピバカイン、その他の同様に作用する化合物が使用されるであろう。実施例 β₂ｍノックアウトキメラマウスの作製４週齢メスＣ５７Ｂ１／６Ｊ（β₂ｍ^+/+）およびＣ５７Ｂ１／６Ｊ−β₂ｍ^tm1 ^/Unc （β₂ｍ^-/-）マウスはＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＢａｒＨａ
ｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入された。β₂ｍ^+/+およびβ₂ｍ^-/-の両方が相互骨髄移
植に使用された。骨髄キメラの製造はＳｏｂｅｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．，１９９１，１７３：１４４１（全体が本明細書において援用される）
に詳細に説明されている。簡単には、受容体マウス（β₂ｍ^+/+およびβ₂ｍ^-/-の
両）は日（−２）および（−１）に２００μｇ／ｍｌのモノクローナル抗体ＰＫ
１３６（抗ＮＫ１．１）をＩＰ注射してＮＫ細胞を枯渇させた。この前処理はＣ
５７Ｂ１／６Ｊマウス中の放射線耐性ＮＫ細胞によるＣ５７Ｂ１／６Ｊ−β₂ｍ^t ^m1/Unc マウスに由来する骨髄細胞の拒絶を防止する。相互骨髄移植の日、受容体
マウスに、全量で１０５０ラドの線量を二つに等しく分割し、３時間離して致死
的な照射を行った。供与体マウスを殺し、頸骨および大腿骨を洗い流すことによ
り別々に骨髄を採取した。骨髄は、モノクローナル抗体抗ＣＤ４（１７２．４）
、抗ＣＤ８（３１Ｍ）および抗Ｔｈｙ１．２（ｍｍｔ１）の混合物の飽和濃度で
インキュベーション（４℃、４５分）した後、Ｌｏｗ−Ｔｏｘ−Ｍウサギ補体（
ＣｅｄｅｒｌａｎｅＬａｂｓ）での細胞のインキュベーション（３７℃、１時
間）により成熟Ｔ細胞を枯渇させた。受容体マウスは相互骨髄細胞の１０７細胞
（０．３ｍｌ）のＩＶ注射で再構成された。すべての動物は、温度制御され、明
暗循環させたを施設で飼われた。マウスの免疫化ＨＩＶ−１_MNエンベロープ膜蛋白質（ｐＣＥｎｖ）をコードしているＤＮＡワ
クチン構築物はＢｏｙｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｐｒｉｍａｔｏｌ．，
１９９６，２５：３４２；Ｗａｎｇｅｔａｌ．，ＡＩＤＳ，１９９５，９：
Ｓ１５９（これらは全体が本明細書において援用される）に記載されているよう
に調製された。ＣＤ８０およびＣＤ８６発現カセットはＫｉｍｅｔａｌ．，
Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１９９７，１５：６４１（全体が本明細書において
援用される）に記載されているように調製された。各々のマウスはＫｉｍｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１９９７，１５：６４１およびＫｉｍ
ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｔｍｍｕｎｏｌ．，１９９７，１５８：８１６（これらは全
体が本明細書において援用される）に記載されているように、リン酸緩衝液（Ｐ
ＢＳ）および０．２５％ブピバカイン−ＨＣｌ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ
，ＭＯ）に処方された５０μｇの問題とする各々のＤＮＡ構築物の３回の筋肉内
注射（２週間離して）を受けた。前記の投与計画で投与された５０μｇのｐＣＥ
ｎｖは、中程度のしかし陽性の免疫応答をマウスに誘導した。この投与量が共刺
激遺伝子の共送達での免疫応答の促進を示すために選択された。動物にはまた、
ＨＩＶ−１エンベロープ蛋白質（ｖＭＮ４６２）を発現する組換え体ワクシニア
ウイルス（ＮＩＨＡＩＤＳＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＲｅｆｅｒｅｎｃｅ
ＲｅａｇｅｎｔＰｒｏｇｒａｍ）も注射された。マウスはにｖＭＮ４６２（
マウス当たり５ｘ１０⁶プラーク形成単位（ＰＦＵ））がｉ．ｖ．注射された。
７日後、脾臓を除去し、直接ＣＴＬアッセイの検出に使用された。マウスはまた
同量のｖＭＮ４６２で免疫して４週間後に間接ＣＴＬが分析された。フローサイトメトリーキメラマウスの発生はＨ−２Ｄ^b分子のα３ドメインに対するモノクローナル
抗体を使用するＦＡＣＳ分析により確認された。Ｈ−２Ｄ^b分子のα３ドメイン
を認識する１μｇ／ｍｌのマウスモノクローナル抗体２８−１４−８ｓ（ＩｇＧ
２ａアイソタイプ）（Ｄｒ．Ｊ．Ｆｒｅｌｉｎｇｅｒ，ＣｈａｐｅｌＨｉｌｌ
，ＮＣの好意による）を個々のマウスより単離されたＰＢＭＣ（１０ｘ１０⁵）
に加えた。データはＣＥＬＬＱｕｅｓｔ^TMデータ収集およびソフトウェアを備え
たＦＡＣＳｃａｎ（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎＩｍｍｕｎｏｃｙｔｏ
ｍｅｔｒｙＳｙｓｔｅｍｓ，ＳａｎＪｏｓｅ，ＣＡ）により分析された。マウス細胞に対する免疫組織化学的アッセイ免疫化した脚筋肉は、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびエンベロープ蛋白質のインビ
ボ発現について免疫組織化学的に試験された。マウス大腿4頭筋に５０ｍｇのｐ
ＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８０、ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８６、または対照ベクターを接種し
た。接種７日後、マウスを殺し、大腿4頭筋を除去した。新鮮な筋肉組織はＯ．
Ｃ．Ｔ．化合物（ＳａｋｕｒａＦｉｎｅｔｅｋＵＳＡ，Ｉｎｃ．，Ｔｏｒｒ
ａｎｃｅ，ＣＡ）中で凍結した。４つのミクロン凍結切片をＬｅｉｃａ１８０
０クライオスタット（ＬｅｉｃａＩｎｃ．，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）を使
用して作製した。切片はＰｒｏｂｅＯｎＰｌｕｓスライド（ＦｉｓｈｅｒＳ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）上に置いた。スライドはア
セトンで固定し、１．５％ヤギ血清（ＶｅｃｔｏｒＬａｂｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇ
ａｍｅ，ＣＡ）でブロックした。共発現を検出するため、スライドを１：２０に
希釈したビオチニル化−α−ｇｐ１２０抗体（ＩｍｍｕｎｏＤｉａｇｎｏｓｔ
ｉｃｓ，ＢｅｄｆｏｒｄＭＡ．）と共に１：５に希釈したＦＩＴＣ−抱合抗Ｃ
Ｄ８０または抗ＣＤ８６抗体（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃ
Ａ．）と２８℃で１２時間インキュベートした。スライドは次にＰＢＳに１：４
００で希釈したストレプトアビジンＴｅｘａｓＲｅｄ（ＮＥＮＬｉｆｅＳ
ｃｉｅｎｃｅｓ，ＢｏｓｔｏｎＭＡ）と室温で３０分インキュベートした。筋
肉中のリンパ球の存在を検出するため、スライドをヘマトキシリンおよびエオシ
ン（Ｈ＆Ｅ）染色により染色した。スライドは４０Ｘ対物レンズ（Ｎｉｋｏｎ
Ｆｌｕｏ４０ＸＰｈ３Ｄ２）を使用してＮｉｋｏｎＯＰＴＩＰＨＯＴ蛍光
顕微鏡（ＮｉｃｏｎＩｎｃ．，Ｔｏｋｙｏ，ＪＡＰＡＮ）で観察した。スライ
ド写真はＮｉｋｏｎＵＦＸ−ＩＩ暴露調整機を備えたＮｉｋｏｎカメラＦＸ３
５ＤＸおよびＫｏｄａｋＥｋｔａｃｈｒｏｍｅ１６０Ｔスライドフィルムを
使用して得られた。

【０１０５】筋肉中へのリンパ球の浸潤はＤＮＡ注射動物からの凍結筋肉切片を調製するこ
とにより分析され、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色（Ｖｅｃｔｏ
ｒＬａｂｓ）により染色した。スライドはまた抗ＣＤ４または抗ＣＤ８抗体（
ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）で染色した。ＥＬＩＳＡ０．１Ｍ炭酸塩−重炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．５）で２μｇ／ｍｌ濃度に希釈し
た５０μｇの組換え体ｇｐ１２０（ＩｍｍｕｎｏＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎ
ｃ．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を４℃で一夜、マイクロタイターウェルに吸着さ
せた。プレートはＰＢＳ−０．０５％トウィーン−２０で洗浄し、３７℃で１時
間３％ＢＳＡの０．０５％トウィーン−２０含有ＰＢＳ溶液でブロックした。マ
ウス抗血清は０．０５％トウィーン−２０で希釈し、３７℃で１時間インキュベ
ートし、次にＨＲＰ−抱合ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ
，ＭＯ）とインキュベートした。プレートを洗浄し、３’３’５’５’ＴＭＢ（
Ｓｉｇｍａ）緩衝溶液で発色させた。プレートはＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ５００
０プレートリーダー上、４５０ｎｍの光学密度が読みとられた。抗体力価は、実
験ウェルの吸収能が平均前免疫値を少なくとも２標準偏差を超える、血清の最も
高い希釈として定義された。細胞障害性Ｔリンパ球アッセイ５時間⁵¹Ｃｒ放出ＣＴＬアッセイがＫｉｍｅｔａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔ
ｅｃｈ．，１９９７，１５：６４１およびＫｉｍｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．，１９９７，１５８：８１６に記載されているように実施された。正常
およびワクシニア感染ＥＬ−４細胞（Ｈ−２^bＴ細胞リンパ腫）は、ＭＨＣクラ
スＩＩ分子を発現する能力についてＦＡＣＳにより分析された。エフェクターは
ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ，ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ，ＮＹ）、
１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）およびＣｏｎＡを含まない１０％
ＲＡＴ−Ｔ−ＳＴＩＭ（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎＬａｂｗａｒｅ，
Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）から成るＣＴＬ培養培地で２日間、５ｘ１０⁶細胞／ｍ
ｌで非特異的に刺激された。エフェクターはまた、０．１％グルタルアルデヒド
で固定され、さらに４日間ｖＭＮ４６２感染ＥＬ−４細胞で特異的に刺激された
。すべてのＣＴＬ実験のための特異的標的の調製は、ｖＭＮ４６２でＥＬ−４細
胞を感染させることにより行われた。ワクシニアウイルスおよびＤＮＡ免疫化実
験のための非特異的対照として、非感染ＥＬ−４細胞およびＷＲワクシニアウイ
ルス（ＮＨＩＡＩＤＳＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＲｅｆｅｒｅｎｃｅＲ
ｅａｇｅｎｔＰｒｏｇｒａｍ）感染ＥＬ−４細胞が各々使用された。標的細胞
が１００μＣｉ／ｍｌＮａ₂ ⁵¹ＣｒＯ₂で２時間標識され、刺激エフェクター細
胞と３７℃で５時間インキュベートするために使用される、標準クロム放出アッ
セイが実施された。ＣＴＬ溶解は５０：１から１２．５：１の範囲のエフェクタ
ー：標的（Ｅ：Ｔ）比で決定された。上清を採取し、ＬＫＢＣｌｉｎｉＧａｍ
ｍａガンマ−カウンターで計数された。パーセント特異的溶解は式：１００ｘ実験的放出−自発的放出最大放出−自発的放出から決定された。

【０１０６】最大放出は１０％トリトンＸ−１００含有培地中の標的細胞の溶解により決定
された。”自発的放出”のカウントが”最大放出”の２０％を超えたならば、ア
ッセイは正当とは考えられなかった。標的の特異的溶解を計算するため、非特異
的（ＷＲ感染）標的のパーセント溶解が特異的（ｖＭＮ４６２感染）標的のパー
セント溶解から差し引かれた。直接ＣＴＬアッセイはエフェクター細胞のインビ
トロ刺激（特異的または非特異的も）を行わないことを除いて前に説明したよう
に実施された。結果相互β₂ｍノックアウトマウスにおける機能性ＭＨＣクラスＩ分子の同定 β₂ｍの発現はＭＨＣクラスＩ分子の細胞表面発現に必要とされ、感染病原体
に対する保護的細胞障害性免疫応答の発生に重要な役割を果たしている。これら
の分子はＣＤ８⁺細胞障害性リンパ球に対して細胞質中で合成された外来抗原に
由来する短いペプチド断片を提示している。我々は同一ハプロタイプ（Ｈ−２^b
）の相互骨髄キメラ発生のためにＣ５７Ｂ１／６Ｊ−β₂ｍ^tm1/Uncマウス（β₂
ｍノックアウトマウス遺伝子について同型接合）に加えて正常Ｃ５７Ｂ１／６Ｊ
（β₂ｍ^+/+）動物を利用した。

【０１０７】 β₂ｍ^+/+およびβ₂ｍ^-/-の動物両方が相互骨髄移植に使用された。β₂ｍ^-/-→
β₂ｍ^+/+マウスはＭＨＣクラスＩ分子発現のない骨髄誘導ＡＰＣおよびＭＨＣク
ラスＩ分子発現を示す筋肉細胞を持つであろう。β₂ｍ^+/+→β₂ｍ^-/-キメラマウ
スはＭＨＣクラスＩ陽性骨髄誘導ＡＰＣおよびＭＨＣクラスＩ陰性筋肉細胞を持
つであろう。各々のマウスはリン酸緩衝液（ＰＢＳ）および０．２３％ブピバカ
イン−ＨＣｌに処方された５０μｇの各々のＤＮＡ構築物（ｐＣＥｎｖ、ｐＣＤ
８０またはｐＣＤ８６）で３回筋肉内注射された（２週間あけて）。

【０１０８】骨髄移植術後、キメラマウスの発生はＨ−２Ｄ^b分子のα３ドメインに対する
モノクローナル抗体を使用するＦＡＣＳ分析により確認された。これらの動物の
キメラ化は３ヶ月で完了した。得られたキメラマウスは筋肉細胞の表面およびＡ
ＰＣでＭＨＣクラスＩ分子の異なった発現を示した（図１）。β₂ｍ^-/-→β₂ｍ⁺ ^/+ マウスはＭＨＣクラスＩ分子発現のない骨髄誘導ＡＰＣ（供与体）およびＭＨ
ＣクラスＩ分子発現を示す筋肉細胞（受容体）を示した。対照的に、β₂ｍ^+/+→
β₂ｍ^-/-キメラマウスはＭＨＣクラスＩ陽性骨髄誘導ＡＰＣおよびＭＨＣクラス
Ｉ陰性筋肉細胞を持っていた。いくつかの報告は、低レベルのα鎖（ＦＡＣＳ感
度以下のレベル）が実際β₂ｍ^-/-細胞の表面上に発現されているようであること
、およびこれらのα鎖は遊離β₂ｍを結合し、ＣＤ８⁺Ｔ細胞に対して外来ペプチ
ドを同起源的に提示することを示唆している。一方、β₂ｍ^+/+→β₂ｍ^-/-キメラ
マウス（ＭＨＣクラスＩ⁺胸腺上皮細胞を持っていない）はＴ細胞分化の間に機
能性ＣＤ８⁺ＣＴＬを発生しない。ＭＨＣクラスＩ⁺骨髄細胞によるこれらの陽性
選択さえ示されていない。実際、β₂ｍ^-/-→β₂ｍ^+/+およびβ₂ｍ^+/+→β₂ｍ^-/- キメラの両方が有意の数のＣＤ４およびＣＤ８細胞を発生することが示された。
しかしながら、抗ウイルスＣＤ８⁺ＣＴＬ免疫応答を発生する相互キメラマウス
の能力を調べることが決定された。正常Ｃ５７Ｂ１／６（β₂ｍ^+/+）およびβ₂
ｍ^-/-ノックアウトマウスならびにβ₂ｍ^-/-→β₂ｍ^+/+およびβ₂ｍ^+/+→β₂ｍ^-/ ^- キメラマウスを組換え体ワクシニアウイルス（ｖＭＮ４６２）で免疫した。続
いて、これらの動物で発生した抗ウイルスＣＤ８⁺ＣＴＬ免疫応答を分析した。
図２に示されているように、Ｃ５７Ｂ１／６およびβ₂ｍ^+/+→β₂ｍ^-/-マウスの
両方が一次（直接）および二次（間接）ＣＤ８⁺ＣＴＬ応答を発生した。Ｃ５７
Ｂ１／６マウスにおけるＣＴＬ応答はβ₂ｍ^+/+→β₂ｍ^-/-キメラよりも強く、こ
れらの結果は従来の観察と一致する。対照的に、抗ウイルスＣＤ８⁺ＣＴＬ免疫
応答がβ₂ｍ^-/-ノックアウトおよびβ₂ｍ^-/-→β₂ｍ^+/+キメラマウスでは観察さ
れなかった。従って、これらの結果は、正常およびβ₂ｍノックアウトマウス間
のキメラは、ＤＮＡ免疫化後のＭＨＣクラスＩ制限Ｔ細胞応答における筋肉細胞
の役割を試験するきれいなモデルを提供することを示している。筋肉細胞上のウイルス蛋白質を用いる共刺激分子の共発現ＣＤ８０およびＣＤ８６共刺激分子をコードしたプラスミドをマウスに筋肉内
注射すると、同様のトランスフェクション効率で筋肉中ＣＤ８０およびＣＤ８６
分子の発現が生じた。二つの発現構築物（一つはＨＩＶエンベロープ蛋白質をコ
ードしており、および一つは共刺激分子をコードしている）の共送達により同一
の細胞中でこれらの蛋白質の共発現を生じるかどうかをさらに調べた。β₂ｍ^+/+ マウスを、ＨＩＶ−１_MNエンベロープ蛋白質（ｐＣＥｎｖ）発現しているＤＮＡ
ワクチンおよびＣＤ８０またはＣＤ８６遺伝子（ｐＣＤ８０またはｐＣＤ８６）
または対照プラスミド（ｃＣＤＮＡ３）で共免疫した。注射された脚筋肉中のＣ
Ｄ８０、ＣＤ８６およびエンベロープ蛋白質の発現は免疫組織化学的に試験され
た。ＤＮＡ注射動物から凍結筋肉切片が調製され、ＦＩＴＣ標識（緑）抗ＣＤ８
０または抗ＣＤ８６抗体およびＴｅｘａｓＲｅｄ標識（赤）抗ｇｐ１２０抗体
で染色された。ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８０で免疫した脚からのスライドは抗ＣＤ８
０または抗ＣＤ８０および抗ｇｐ１２０抗体で染色された。ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ
８６で免疫した脚からのスライドは抗ＣＤ８６または抗ＣＤ８６および抗ｇｐ１
２０抗体で染色された。ｐＣＤＮＡ３（対照ベクター）で免疫した脚からのスラ
イドは抗ＣＤ８０および抗ＣＤ８６抗体、または抗ＣＤ８０、抗ＣＤ８６抗体お
よび抗ｇｐ１２０抗体で染色された。ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８０またはｐＣＥｎｖ
＋ｐＣＤ８６による共免疫化は筋肉細胞においてこれらの蛋白質の共発現を生じ
た。ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８０およびｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８６を注射したマウスか
らの各々エンベロープおよびＣＤ８０またはエンベロープおよびＣＤ８６の共発
現レベルは同様であった。対照的に、対照脚はこれらの蛋白質の発現を示さなか
った。Ｈ−２Ｄ^b陽性非造血細胞はＭＨＣクラス制限ＣＴＬの前駆体を活性化するよう
に遺伝子操作できる体液性および細胞性免疫応答が、ウイルス抗原および共刺激分子をコードして
いるプラスミドで免疫化されたキメラおよび対照マウスで分析された。免疫化前
および後の実験動物から集められた血清における体液性免疫応答が分析された。
これらの血清試料はＥＬＩＳＡによりエンベロープ蛋白質（ｇｐ１２０）に対す
る反応性で分析された。表１に示したように、ＨＩＶ−１エンベロープ特異的体
液性応答はキメラの両方の型で発生した。β₂ｍ^-/-マウスの体液性免疫応答はキ
メラマウスの応答と同様であった。これらの結果は、抗原特異的体液性免疫応答
は、プラスミドＤＮＡ免疫化後にβ₂ｍノックアウトマウスで発生でき、蛋白質
免疫化後のこのモデル系で以前に報告されている結果と一致している（Ｒａｕｌ
ｅｔ，ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９３，５５：３８
１−４２１（その全体が本明細書において援用される）。さらに、これらの結果
はｐＣＤ８０かまたはｐＣＤ８６による相互キメラの共免疫化は、正常ＢＡＬＢ
／ｃマウスで以前に観察されているように（Ｋｉｍｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒ
ｅＢｉｏｔ．，１９９７，１５：６４１−６４５、その全体が本明細書におい
て援用される）、ｐＣＥｎｖ免疫化により誘導される特異的抗体終点力価には何
の影響も及ぼさないことを示している。

【０１０９】

【表１】

【０１１０】表１．ｐＣＤ８０またはｐＣＤ８６による共免疫化後のＨＩＶ−１エンベロープ
特異的抗体応答（群当たり４匹のマウス）。マウス血清はＨＩＶ−１ｇｐ１２０
蛋白質を使用したＥＬＩＳＡによりエンベロープ特異的抗体応答が試験された。
連続希釈は１：６４、１：１２８、１：２５６、１：５１２、１：１０２４、１
：２０４８および１：４０９６であった。ＥＬＩＳＡのバックグラウンド光学密
度は＜０．０１５であった。これらの実験は２回繰り返され、同様の結果であっ
た。

【０１１１】相互キメラおよびβ₂ｍ^-/-動物におけるＣＴＬ応答の発生もまた評価された。
以前、ＣＤ８６での共免疫化は、ＭＨＣ正常動物においてＭＨＣクラスＩ制限抗
ウイルスＣＴＬの劇的促進を生じること（ＣＤ８０遺伝子では起こらない）が示
されている（Ｋｉｍｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔ．，１９９７，１
５：６４１−６４５、その全体が本明細書において援用される）。標的としてＭ
ＨＣ−ＩＩクラス分子を発現しないＥＬ−４Ｔリンパ腫細胞を使用して、ＭＨ
Ｃクラス制限ＣＤ８⁺ＣＴＬ応答が分析された。標的の特異的溶解を計算するた
め、非特異的（ＷＲ感染）標的のパーセント溶解が特異的（ｖＭＮ４６２感染）
標的のパーセント溶解から差し引かれた。特異的死滅のバックグラウンドレベル
は対照プラスミド、ｐＣＥｎｖ、ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８０またはｐＣＥｎｖ＋ｐ
ＣＤ８６で免疫したβ₂ｍ^-/-対照およびβ₂ｍ^+/+→β₂ｍ^-/-キメラマウスから得
られた（図３）。しかしながら、ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８６で共免疫されたβ₂ｍ^- ^/- →β₂ｍ^+/+マウスでは高レベルのエンベロープ特異的ＣＴＬ（５０：１のＥ：
Ｔ比で３７％）が生じた（ｐＣＥｎｖまたはｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８０では生じな
い）。ＣＴＬ誘導の能力をさらに試験するため、β₂ｍ^-/-→β₂ｍ^+/+キメラマウ
スにおける直接、非刺激ＣＴＬ応答を誘導する能力が分析された（図４）。ｐＣ
Ｅｎｖで免疫化したマウスは特異的死滅を誘導しなかった。対照的に、ｐＣＥｎ
ｖ＋ｐＣＤ８６免疫化群では５０：１のＥ：Ｔ比で２３％の特異的溶解が観察さ
れ、１２．５：１Ｅ：Ｔ比で１１％と力価決定された。β₂ｍ^-/-→β₂ｍ^+/+マ
ウスの骨髄由来細胞は実質的に抗ウイルスＣＤ８⁺ＣＴＬを発生できなかったの
で（図２）、これらの結果は非造血細胞上でのＨＩＶエンベロープおよびＣＤ８
６分子の共発現は、それらを抗ＨＩＶ特異的ＣＴＬ応答を始めるようにできるこ
とを示唆している。加えて、免疫学的に正常なβ₂ｍ^+/+→β₂ｍ^-/-キメラからの
結果は（図２）、ＣＴＬ拡大に対するＣＤ８６分子の促進効果は、少量のＡＰＣ
の変換を通して観察されるわけではなく、むしろ非造血細胞に対して優勢である
ことを示している。

【０１１２】免疫細胞により放出された種々のサイトカインのレベルは、免疫応答の方向お
よび程度を反映する。ＩＦＮ−γおよびＩＬ−４サイトカインはＣＤ４⁺のみで
なくＣＤ８⁺Ｔ細胞によっても産生される。ＩＦＮ−γはＴ細胞仲介細胞毒性免
疫応答の制御に複雑に関与しており、ＩＬ−４はＢ細胞仲介免疫応答に支配的な
役割を果たしている。従って、我々のＣＴＬ分析に加え、ＣＴＬアッセイのため
にインビボで刺激されたエフェクター細胞から上清が集められ、ＩＦＮ−γおよ
びＩＬ−４の放出が試験された。図５に示されているように、ＣＴＬ応答のレベ
ルに対応したＩＦＮ−γ放出レベルを図３に見ることができる。実際、ｐＣＥｎ
ｖ＋ｐＣＤ８６（４５ｎｇ／ｍｌ）で免疫されたβ₂ｍ^-/-→β₂ｍ^+/+マウスから
放出されたＩＦＮ−γレベルは他の群のレベルより少なくとも３倍であった。一
方、すべての群から放出されたＩＬ−４レベルは同様であった。従って、ＩＦＮ
−γ放出データは、非造血細胞上のＣＤ８６発現は、主としてＭＨＣクラスＩ発
現に関係したサイトカイン誘導を始めることができることを支持しており、非専
門的ＡＰＣによる直接ＴＣＰ共結合を支持している。ＣＤ８６の発現は免疫化動物の筋肉内へのリンパ球浸潤を誘導したＴ細胞を直接駆動する、ＣＤ８６でトランスフェクトされた非骨髄細胞の能力
をさらに明確にするため、インビボにおけるトランスフェクト筋肉細胞へのＴ細
胞結合の直接的証拠を探した。免疫して７日後に、ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８６で免
疫したマウスでは対照またはｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８０免疫化マウスよりもより多
い筋肉内へのリンパ球の浸潤が観察された。抗原およびＣＤ８６発現の部位では
、多数の浸潤リンパ球が観察され、存在する筋肉細胞を攻撃しているように思え
た。スライドをＴ細胞に関して免疫組織化学的に染色した場合、浸潤Ｔ細胞はＣ
Ｄ４⁺およびＣＤ８⁺Ｔ細胞の両方を含んでいることが観察された（図６）。免疫
化筋肉中のリンパ球浸潤は１ヶ月以内に明瞭に観察され、ｃＤＮＡ発現後の抗原
発現の持続に相関していた。動物は、非ワクチン接種動物と比較してこの侵入の
何の明瞭な表現型影響を示さなかった。より遅い時間点での筋肉切片試験は、リ
ンパ球侵入がない正常筋肉表現型を示した。リンパ球浸潤の初期の間でさえ、マ
ウスは正常に振る舞ったことは興味が持たれる。これらの結果は、ウイルス抗原
と共にＭＨＣクラスＩおよびＣＤ８６（ＣＤ８０ではない）を発現するように遺
伝子操作された筋肉細胞は有効にリンパ球を誘引し、およびそれらと直接的に相
互作用することを示唆している。このデータは誘引それ自体はＣＤ８０の機能で
はないことを明瞭に区別している。表２ピコルナウイルスファミリー属：ライノウイルス：（医学）感冒の〜５０％の場合に原因であるエンテロウイルス：（医学）ポリオウイルス、コクサキーウイルス、エコーウイルスおよびＡ型肝炎ウイルスのようなヒトエンテロウイスルアプトウイルス：（獣医学）これらは脚および口疾患ウイルスである標的抗原：ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４、ＶＰＧカルシウイルスファミリー属：ウイルスのノーウォーク群：（医学）これらのウイルスは流行性胃腸炎の重要な原因因子であるトガウイルスファミリー属：アルファウイルス：（医学および獣医学）例にはシンドビスウイルス、ロスリバーウイルスおよび東部＆西部ウマ脳炎が含まれるレオウイルス：（医学）ルベラウイルスフラリビリデゥーファミリー（医学）例にはデング熱、黄熱病、日本脳炎、セントルイス脳炎およびダニ媒介脳炎ウイルスＣ型肝炎ウイルス（医学）これらのウイルスは未だにファミリーには加えられていないが、トガウイルスまたはフラビウイルスであると信じられている。トガウイルスに最も類似している。コロナウイルスファミリー（医学および獣医学）伝染性気管支炎ウイルス（家禽）ブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ブタ）ブタ赤血球凝集性脳脊髄炎（ブタ）ネコ感染性腹膜炎（ネコ）ネコ腸コロナウイルス（ネコ）イヌコロナウイルス（イヌ）ヒト呼吸コロナウイルスは感冒の〜４０％の場合を起こす、ＥＸ．２２４Ｅ，０Ｃ４３注−コロナウイルスは非Ａ、ＢまたはＣ型肝炎を起こすかもしれない標的抗原：Ｅ１−Ｍまたはマトリックス蛋白質とも呼ばれるＥ２−Ｓまたはスパイク蛋白質とも呼ばれるＥ３−ＨＥまたはヘマグルチン−エルテロース糖蛋白質（すべてのコロナウイルスには存在しない）Ｎ−ヌクレオカプシドラブドウイルスファミリー属：ベシリオウイルス狂犬病ウイルス：（医学および獣医学）標的抗原：Ｇ蛋白質Ｎ蛋白質フィロビリデゥーファミリー：（医学）マールブルグおよびエボラウイルスのような出血性熱ウイルスパラミクソウイルスファミリー属：パラインフルエンザウイルスタイプ１パラインフルエンザウイルスタイプ３ウシパラインフルエンザウイルスタイプ３ルブラウイルス：（医学および獣医学）流行性耳下腺炎ウイルス、パラインフルエンザウイルスタイプ２、パラインフルエンザウイルスタイプ４、ニューカッスル病ウイルス（ニワトリで重要な病原体）ニューミンウイルス：（医学および獣医学）呼吸系発病ウイルスオルトミクソウイルスファミリー（医学）インフルエンザウイルスブンヤウイルスファミリー属：ブンヤウイルス：（医学）カリフォルニア脳炎、ラクロス、静脈ウイルス：（医学）リフトバレー熱ハンタウイルス：プレマラはヘマガギン熱ウイルスナイロウイルス（獣医学）ナイロビシープ疾患多くの未帰属のブンヤウイルスもアレナウイルスファミリー（医学）ＬＣＭ、ラサ熱ウイルスレオウイルスファミリー属：レオウイルス：潜在的ヒト病原体ロタウイルス：子供における急性胃腸炎オルビウイルス：（医学および獣医学）クルチウイルス：コロラドダニ熱、レボンボ（ヒト）ウマ脳炎、ブルータングレトロウイルスファミリーサブファミリー：オンコウイルス：（獣医学）（医学）ネコ白血病ウイルス，ＨＴＬＶＩおよびＨＴＬＶＩＩレンチウイルス：（医学および獣医学）ＨＩＶ、ネコ免疫不全ウイルス、ウマ感染、貧血ウイルススプマウイルスパポバウイルスファミリーサブファミリー：ポリオーマウイルス：（医学）ＢＫＵおよびＪＣＵウイルスサブファミリー：パピローマウイルス：（医学）癌またはパピローマの悪性進行に関係する多くのウイルス型アデノウイルス（医学）ＥＸＡＤ７、ＡＲＤ、ＯＢ−呼吸系疾患を起こす−２７５のようないくつかのアデノウイルスは腸炎を起こすパルボウイルスファミリー（獣医学）ネコパルボウイルス：ネコ腸炎を起こすネコ汎白血球減少症ウイルスイヌパルボウイルスブタパルボウイルスヘルペスウイルスファミリーサブファミリー：アルファヘルペスウイルス属：単純ウイルス（医学）ＨＳＶＩ、ＨＳＶＩＩ水痘ウイルス：（医学および獣医学）仮性狂犬病ウイルス−水痘-帯状疱疹ウイルスサブファミリー：ベータヘルペスウイルス属：サイトメガロウイルス（医学）ＨＣＭＶムロメガロウイルスサブファミリー：ガンマヘルペスウイルス属：リンホクリプトウイルス（医学）ＥＢＶ−（バーキットリンパ）ラジノウイルスポックスウイルスサブファミリーサブファミリー：脊髄ポックスウイルス（医学および獣医学）オルトポックスウイルス痘瘡（痘瘡）痘瘡（牛痘）パラポックスウイルス−（獣医学）オイポックスウイルス−（獣医学）レポリポックスウイルススイポックスウイルスサブファミリー：エンテモポックスウイルスヘパドナウイルスファミリー：Ｂ型肝炎ウイルス未同定：デルタ肝炎ウイルス。表３細菌病原体病原性グラム陽性球菌には：肺炎球菌；ブドウ球菌；および連鎖球菌が含まれ
る。病原性グラム陰性球菌には：髄膜炎菌；および淋菌が含まれる。

【０１１３】病原性グラム陰性杆菌には：腸内菌科、プソイドモナス、アシネトバクターお
よびエイケネラ；類鼻疽；サルモネラ；シゲラ症；ヘモフィラス症；モラクセラ
；軟性下疳；ブルセラ症；野兎病；エルシニア（パスツレラ）；ストレプトバシ
ラスモニリホルミスおよびスピリルム；リステリア菌；豚丹毒菌；ジフテリア
；コレラ；炭疽；ドノヴァン症（鼠径部肉芽腫）およびバルトネラ症が含まれる
。

【０１１４】病原性嫌気性菌には：破傷風；ボツリヌス中毒症；他のクロストリジウム属；
結核；らい；およびその他のミコバクテリアが含まれる。病原性スピロヘータ症
には梅毒；トレポネマトーセス；苺腫；熱帯白斑性皮膚病および地方流行性梅毒
；およびレプトスピラ症が含まれる。

【０１１５】より高等な細菌および病原性真菌により起こされるその他の感染には：放線菌
症；ノルカジア症；酵母菌症；分芽菌症；ヒストプラズマ症およびコクシジオイ
デス症；カンジダ症；アスペルギルス病および毛菌症；スポロトリコーシス；パ
ラコクシジオイデス症、ペエトリエリジウム症、トルロプシス症、菌腫およびク
ロモミセス症；および皮膚糸状菌症が含まれる。

【０１１６】リケッチア感染にはリケッチアおよびリケッチア症が含まれる。マイコプラズマおよびクラミジア感染の例には：マイコプラズマ肺炎；鼠径リ
ンパ肉芽腫；オウム病および出産期クラミジア感染が含まれる。病原性真核生物病原性原虫および蠕虫およびそれらによる感染には：アメーバ赤痢；マラリア
；リーシュマニア症；トリパノソーマ症；トキソプラズマ症；ニューモシスチス
カリニ；バベシア症；ジアルジア症；旋毛虫症；フィラリア；住血吸虫症；線
虫症；吸虫症または吸虫類；および条虫（サナダムシ）感染が含まれる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１はフローサイトメトリーによるキメラ化の決定で得られたデー
タを示している。キメラマウスの発生は移植３ヶ月後に、抹消血単核細胞（ＰＢ
ＭＣ）上のＭＨＣクラスＩ発現を免疫蛍光染色により分析することにより確認さ
れた。β₂ｍ^-/-→β₂ｍ^+/+マウスのＰＢＭＣはＭＨＣクラスＩ分子の有意な発現
を示さなかったが、一方、β₂ｍ^+/+→β₂ｍ^-/-キメラマウスのＰＢＭＣはＭＨＣ
クラスＩを発現した。

【図２】図２Ａおよび２Ｂはβ₂ｍ^+/+、β₂ｍ^-/-、β₂ｍ^+/+→β₂ｍ^-/-およ
びβ₂ｍ^-/-→β₂ｍ^+/+マウスにおけるワクシニアウイルス（ｖＭＮ４６２）特異
的直接（図２Ａ）および間接（図２Ｂ）ＣＴＬ応答を示している。直接ワクシニ
ア特異的ＣＴＬ応答はワクシニア免疫化７日後に、インビトロエフェクター細胞
刺激無しで分析された。間接ワクシニア特異的ＣＴＬアッセイはワクシニア免疫
化４週間後に、インビトロエフェクター細胞刺激を行って実行された。標的の特
異的溶解を計算するため、非特異的（非感染）標的のパーセント溶解が特異的（
ｖＭＮ４６２感染）標的のパーセント溶解から差し引かれた。これらの実験は２
回繰り返され、同様の結果であった。

【図３】図３はｐＣＤＮＡ３、ｐＣＥｎｖ、ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８０または
ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８６で免疫した（群当たり４匹のマウス）β₂ｍ^-/-マウス、
β₂ｍ^+/+→β₂ｍ^-/-およびβ₂ｍ^-/-→β₂ｍ^+/+キメラにおけるＨＩＶ−１エンベ
ロープ特異的ＣＴＬ応答を示している。ＨＩＶ−１Ｅｎｖ特異的ＣＴＬ応答は
エフェクター細胞のインビトロ刺激後に、ワクシニア感染標的に対して分析され
た。標的の特異的溶解を計算するため、非特異的（ＷＲ感染）標的のパーセント
溶解が特異的（ｖＭＮ４６２感染）標的のパーセント溶解から差し引かれた。非
特異的溶解の最大レベルは６．５％であった。これらの実験は２回繰り返され、
同様の結果であった。

【図４】図４はｐＣＤＮＡ３、ｐＣＥｎｖ、ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８０または
ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８６で免疫したβ₂ｍ^-/-→β₂ｍ^+/+キメラマウスにおける直
接ＨＩＶ−１エンベロープ特異的ＣＴＬ応答を示しているデータである。ＨＩＶ
−１Ｅｎｖ特異的ＣＴＬ応答はエフェクター細胞のインビトロ刺激なしで、ワ
クシニア感染標的に対して分析された。これらの実験において非特異的溶解の最
大レベルは５％未満であった。

【図５】図５は刺激されたエフェクター細胞によるサイトカインの発現を示
しているデータである。ＣＴＬアッセイのためにエフェクター刺激された上清を
６日目に集め、ＥＬＩＳＡキットを用いてＩＦＮ−γおよびＩＬ−４のサイトカ
インプロフィールを試験した（両方のキットともＢｉｏｓｏｕｒｃｅＩｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡから）。これらの実
験は２回繰り返され、同様の結果であった。

【図６】図６は筋肉におけるＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺Ｔ細胞の存在を示してい
るデータである。ｐＣＥｎｖ＋ｐＣＤ８６での共免疫化後の筋肉における細胞の
浸潤はさらに抗ＣＤ４または抗ＣＤ８抗体で染色された。ＣＤ４⁺およびＣＤ８⁺ Ｔ細胞は染色したスライドで計数された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者キム，ヨン・ジェイアメリカ合衆国ペンシルバニア州19454，ノース・ウェイルズ，オーチャード・ドライブ 157 (72)発明者アガドジャニアン，マイケル・ジーアメリカ合衆国ペンシルバニア州19116，フィラデルフィア，ケヴィン・コート 353 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA20 BA31 CA04 DA03 EA04 HA17 4C084 AA13 NA10 ZB332 ZB352 4C085 AA03 BA01 DD62

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】個体において免疫原に対する免疫応答を誘導する方法であっ
て、以下の工程を含んでいる：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された免疫原を
コードしているヌクレオチド配列および該個体における発現に必要な制御要素に
作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオ
チド配列を含む核酸分子を該個体の身体上の部位から該個体へ投与する、ここで
該核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、該免疫原および該主要組織適合複
合体抗原をコードしている該ヌクレオチド配列が発現されおよび該個体に該免疫
原に対する免疫応答が誘導される；および／または第一の核酸分子および第二の核酸分子を該個体の身体上の部位から該個体へ投
与する、ここで該第一の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動
可能なように連結された免疫原をコードしているヌクレオチド配列を含んでおり
、および第二の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なよ
うに連結された主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含
んでおり、ここで該第一および第二の核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ
、該免疫原および該主要組織適合複合体抗原をコードしている該ヌクレオチド配
列が発現されおよび該個体に該免疫原に対する免疫応答が誘導される。
【請求項２】該免疫原が病原体抗原、過増殖性疾患に関連する蛋白質また
は自己免疫疾患に関連する蛋白質である請求項１に記載の方法。
【請求項３】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩ抗
原である請求項１に記載の方法。
【請求項４】該主要組織適合クラス蛋白質が該個体により発現される主要
組織適合複合体クラスＩ抗原サブタイプと一致するサブタイプの主要組織適合ク
ラスＩ抗原である請求項３に記載の方法。
【請求項５】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩＩ
抗原である請求項１に記載の方法。
【請求項６】該主要組織適合クラスＩＩ蛋白質が該個体により発現される
主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原サブタイプと一致するサブタイプの主要組織
適合クラスＩ抗原である請求項５に記載の方法。
【請求項７】免疫原をコードしているヌクレオチド配列および主要組織適
合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子が該個体の身体
上の部位から該個体へ投与される請求項１に記載の方法。
【請求項８】該核酸分子がさらにＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレ
オチド配列を含む請求項７に記載の方法。
【請求項９】第一の核酸分子および第二の核酸分子、ここで該第一の核酸
分子は免疫原をコードしているヌクレオチド配列を含み、および該第二の核酸分
子は主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる、
が該個体の身体上の部位から該個体へ投与される請求項１に記載の方法。
【請求項１０】該第一の核酸分子がさらにＢ７．２蛋白質をコードしてい
るヌクレオチド配列を含んでいる；および／または該第二の核酸分子がさらにＢ
７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる請求項９に記載の
方法。
【請求項１１】第三の核酸分子を投与することをさらに含んでいる請求項
９に記載の方法、ここで該第三の核酸分子はＢ７．２蛋白質をコードしているヌ
クレオチド配列を含んでいる。
【請求項１２】以下の工程を含んでいる請求項１に記載の方法：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された免疫原を
コードしているヌクレオチド配列および該個体における発現に必要な制御要素に
作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオ
チド配列を含む核酸分子を筋肉内投与により該個体へ投与する、ここで該核酸分
子は該個体の細胞により取り込まれ、該免疫原および該主要組織適合複合体抗原
をコードしている該ヌクレオチド配列が発現されおよび該個体に該免疫原に対す
る免疫応答が誘導される；および／または第一の核酸分子および第二の核酸分子を筋肉内投与により該個体へ投与する、
ここで該第一の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なよ
うに連結された免疫原をコードしているヌクレオチド配列を含んでおり、および
第二の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結
された主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでおり
、ここで該第一および第二の核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、該免疫
原および該主要組織適合複合体抗原をコードしている該ヌクレオチド配列が発現
されおよび該個体に該免疫原に対する免疫応答が誘導される。
【請求項１３】以下の工程を含んでいる請求項１に記載の方法：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された免疫原を
コードしているヌクレオチド配列および該個体における発現に必要な制御要素に
作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオ
チド配列を含むプラスミドを該個体の身体上の部位から該個体へ投与する、ここ
で該プラスミドは該個体の細胞により取り込まれ、該免疫原および該主要組織適
合複合体抗原をコードしている該ヌクレオチド配列が発現されおよび該個体に該
免疫原に対する免疫応答が誘導される；および／または第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを該個体の身体上の部位から該個体
へ投与する、ここで該第一のプラスミドは該個体における発現に必要な制御要素
に作動可能なように連結された免疫原をコードしているヌクレオチド配列を含ん
でおり、および第二のプラスミドは該個体における発現に必要な制御要素に作動
可能なように連結された主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド
配列を含んでおり、ここで該第一および第二のプラスミドは該個体の細胞により
取り込まれ、該免疫原および該主要組織適合複合体抗原をコードしている該ヌク
レオチド配列が発現されおよび該個体に該免疫原に対する免疫応答が誘導される
。
【請求項１４】該個体が免疫無防備状態である請求項１に記載の方法。
【請求項１５】該個体が免疫抑制状態である請求項１に記載の方法。
【請求項１６】該個体が癌を持っている請求項１に記載の方法。
【請求項１７】該免疫応答が予防的である請求項１に記載の方法。
【請求項１８】該免疫応答が治療的である請求項１に記載の方法。
【請求項１９】制御要素に作動可能なように連結された免疫原をコードし
ているヌクレオチド配列および制御要素に作動可能なように連結された主要組織
適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいるプラスミド。
【請求項２０】該免疫原が病原体抗原、過増殖性疾患に関連する蛋白質ま
たは自己免疫疾患に関連する蛋白質である請求項１９に記載のプラスミド。
【請求項２１】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩ
抗原である請求項１９に記載のプラスミド。
【請求項２２】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩ
Ｉ抗原である請求項１９に記載のプラスミド。
【請求項２３】制御要素に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質を
コードしているヌクレオチド配列をさらに含んでいる請求項１９に記載のプラス
ミド。
【請求項２４】請求項１９に記載のプラスミドを含んでいる医薬組成物。
【請求項２５】第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを含んでいる組
成物、ここで該第一のプラスミドは請求項１９に記載のプラスミドであり、およ
び該第二のプラスミドはＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含
んでいる。
【請求項２６】制御要素に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質を
コードしているヌクレオチド配列および制御要素に作動可能なように連結された
主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいるプラス
ミド。
【請求項２７】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩ
抗原である請求項２６に記載のプラスミド。
【請求項２８】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩ
Ｉ抗原である請求項２６に記載のプラスミド。
【請求項２９】第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを含んでいる組
成物、ここで該第一のプラスミドは免疫原をコードしているヌクレオチド配列を
含んでおり、および該第二のプラスミドは主要組織適合複合体抗原をコードして
いるヌクレオチド配列を含んでいる。
【請求項３０】該免疫原が病原体抗原、過増殖性疾患に関連する蛋白質ま
たは自己免疫疾患に関連する蛋白質である請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩ
抗原である請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩ
Ｉ抗原である請求項２９に記載の組成物。
【請求項３３】請求項２９に記載の組成物、ここで；該第一のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質
をコードしているヌクレオチド配列をさらに含んでいる；および／または該第二のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質
をコードしているヌクレオチド配列をさらに含んでいる；および／または該組成物がさらに第三のプラスミドを含んでおり、該第三のプラスミドは制御
要素に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチ
ド配列をさらに含んでいる。
【請求項３４】細胞、組織および器官移植を受けている個体における一致
していない細胞、組織および器官の拒絶を軽減する方法であって、以下の工程を
含んでいる：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された死信号ま
たは毒素をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に必要
な制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体クラスＩ抗原をコ
ードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子を該個体の身体上の部位から該個
体へ投与する、ここで該主要組織適合複合体クラスＩ抗原は該供与者細胞、組織
および器官と一致しており、該核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、該主
要組織適合複合体クラスＩ抗原および該死信号または毒素をコードしている該ヌ
クレオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現され
た該主要組織適合複合体クラスＩ抗原を含んでいる複合体を形成し、複合体形成
後に該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用することにより死滅し、および該個
体における一致していない供与者細胞、組織および器官の拒絶が軽減される；お
よび／または第一の核酸分子および第二の核酸分子を該個体の身体上の部位から該個体へ投
与する、ここで該第一の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動
可能なように連結された死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列を
含んでおり、および第二の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作
動可能なように連結された主要組織適合複合体クラスＩ抗原をコードしているヌ
クレオチド配列を含んでいる、ここで該主要組織適合複合体クラスＩ抗原は該供
与者細胞、組織および器官と一致しており、該第一および第二の核酸分子は該個
体の細胞により取り込まれ、該主要組織適合複合体クラスＩ抗原および該死信号
または毒素をコードしている該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レ
セプターは該細胞により発現された該主要組織適合複合体クラスＩ抗原を含んで
いる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用す
ることにより死滅し、および該個体における一致していない供与者細胞、組織お
よび器官の拒絶が軽減される。
【請求項３５】該死信号または毒素がＦＡＤＤ、ＦＡＰ−１、ＴＲＡＤＤ
、ＲＩＰ、ＲＡＩＤＤ、ＦＡＳ−Ｌ、ＴＮＦ，ＭＯＲＴ１，ＣＲＡＤＤ，ＭｙＤ
８８、昆虫毒、蛇毒、細菌内毒素、二重鎖リボソーム不活性化蛋白質およびゲロ
ニンから成る群より選択される請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列およ
び主要組織適合複合体クラスＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列を含む核
酸分子が該個体の身体上の部位から該個体へ投与される請求項３４に記載の方法
。
【請求項３７】該核酸分子がさらにＢ７．２蛋白質をコードしているヌク
レオチド配列を含む請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】第一の核酸分子および第二の核酸分子、ここで該第一の核
酸分子は死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列を含み、および該
第二の核酸分子は主要組織適合複合体クラスＩ抗原をコードしているヌクレオチ
ド配列を含んでいる、が該個体の身体上の部位から該個体へ投与される請求項３
４に記載の方法。
【請求項３９】該第一の核酸分子がさらにＢ７．２蛋白質をコードしてい
るヌクレオチド配列を含んでいる；および／または該第二の核酸分子がさらにＢ
７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる請求項３８に記載
の方法。
【請求項４０】第三の核酸分子を投与することをさらに含んでいる請求項
３８に記載の方法、ここで該第三の核酸分子はＢ７．２蛋白質をコードしている
ヌクレオチド配列を含んでいる。
【請求項４１】以下の工程を含んでいる請求項３４に記載の方法：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された死信号ま
たは毒素をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に必要
な制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体クラスＩ抗原をコ
ードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子を筋肉内投与により該個体へ投与
する、ここで該主要組織適合複合体クラスＩ抗原は該供与者細胞、組織および器
官と一致しており、該核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、該主要組織適
合複合体クラスＩ抗原および該死信号または毒素をコードしている該ヌクレオチ
ド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該主要
組織適合複合体クラスＩ抗原を含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ
細胞は死信号または毒素と相互作用することにより死滅し、および該個体におけ
る一致していない供与者細胞、組織および器官の拒絶が軽減される；および／ま
たは第一の核酸分子および第二の核酸分子を筋肉内投与により該個体へ投与する、
ここで該第一の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なよ
うに連結された死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列を含んでお
り、および第二の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動可能な
ように連結された主要組織適合複合体クラスＩ抗原をコードしているヌクレオチ
ド配列を含んでいる、ここで該主要組織適合複合体クラスＩ抗原は該供与者細胞
、組織および器官と一致しており、該第一および第二の核酸分子は該個体の細胞
により取り込まれ、該主要組織適合複合体クラスＩ抗原および該死信号または毒
素をコードしている該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプター
は該細胞により発現された該主要組織適合複合体クラスＩ抗原を含んでいる複合
体を形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用することに
より死滅し、および該個体における一致していない供与者細胞、組織および器官
の拒絶が軽減される。
【請求項４２】以下の工程を含んでいる請求項３４に記載の方法：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された死信号ま
たは毒素をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に必要
な制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体クラスＩ抗原をコ
ードしているヌクレオチド配列を含むプラスミドを該個体の身体上の部位から該
個体へ投与する、ここで該主要組織適合複合体クラスＩ抗原は該供与者細胞、組
織および器官と一致しており、該プラスミドは該個体の細胞により取り込まれ、
該主要組織適合複合体クラスＩ抗原および該死信号または毒素をコードしている
該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現
された該主要組織適合複合体クラスＩ抗原を含んでいる複合体を形成し、複合体
形成後に該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用することにより死滅し、および
該個体における一致していない供与者細胞、組織および器官の拒絶が軽減される
；および／または第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを該個体の身体上の部位から該個体
へ投与する、ここで該第一のプラスミドは該個体における発現に必要な制御要素
に作動可能なように連結された死信号または毒素をコードしているヌクレオチド
配列を含んでおり、および第二のプラスミドは該個体における発現に必要な制御
要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体クラスＩ抗原をコードし
ているヌクレオチド配列を含んでいる、ここで該主要組織適合複合体クラスＩ抗
原は該供与者細胞、組織および器官と一致しており、該第一および第二のプラス
ミドは該個体の細胞により取り込まれ、該主要組織適合複合体クラスＩ抗原およ
び該死信号または毒素をコードしている該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞
のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該主要組織適合複合体クラスＩ抗
原を含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞は死信号または毒素と
相互作用することにより死滅し、および該個体における一致していない供与者細
胞、組織および器官の拒絶が軽減される。
【請求項４３】細胞移植を受けている個体における一致していない細胞の
拒絶を軽減する方法であって、以下の工程を含んでいる：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された死信号ま
たは毒素をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に必要
な制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原を
コードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子を該個体の身体上の部位から該
個体へ投与する、ここで該主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原は該供与者細胞と
一致しており、該核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、該主要組織適合複
合体クラスＩＩ抗原および該死信号または毒素をコードしている該ヌクレオチド
配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該主要組
織適合複合体クラスＩＩ抗原を含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ
細胞は死信号または毒素と相互作用することにより死滅し、および該個体におけ
る一致していない供与者細胞の拒絶が軽減される；および／または第一の核酸分子および第二の核酸分子を該個体の身体上の部位から該個体へ投
与する、ここで該第一の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動
可能なように連結された死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列を
含んでおり、および第二の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作
動可能なように連結された主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原をコードしている
ヌクレオチド配列を含んでいる、ここで該主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原は
該供与者細胞と一致しており、該第一および第二の核酸分子は該個体の細胞によ
り取り込まれ、該主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原および該死信号または毒素
をコードしている該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは
該細胞により発現された該主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原を含んでいる複合
体を形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用することに
より死滅し、および該個体における一致していない供与者細胞の拒絶が軽減され
る。
【請求項４４】該死信号または毒素がＦＡＤＤ、ＦＡＰ−１、ＴＲＡＤＤ
、ＲＩＰ、ＲＡＩＤＤ、ＦＡＳ−Ｌ、ＴＮＦ，ＭＯＲＴ１，ＣＲＡＤＤ，ＭｙＤ
８８、昆虫毒、蛇毒、細菌内毒素、二重鎖リボソーム不活性化蛋白質およびゲロ
ニンから成る群より選択される請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列およ
び主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原をコードしているヌクレオチド配列を含む
核酸分子が該個体の身体上の部位から該個体へ投与される請求項４３に記載の方
法。
【請求項４６】該核酸分子がさらにＢ７．２蛋白質をコードしているヌク
レオチド配列を含む請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】第一の核酸分子および第二の核酸分子、ここで該第一の核
酸分子は死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列を含み、および該
第二の核酸分子は主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原をコードしているヌクレオ
チド配列を含んでいる、が該個体の身体上の部位から該個体へ投与される請求項
４３に記載の方法。
【請求項４８】該第一の核酸分子がさらにＢ７．２蛋白質をコードしてい
るヌクレオチド配列を含んでいる；および／または該第二の核酸分子がさらにＢ
７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる請求項４７に記載
の方法。
【請求項４９】第三の核酸分子を投与することをさらに含んでいる請求項
４７に記載の方法、ここで該第三の核酸分子はＢ７．２蛋白質をコードしている
ヌクレオチド配列を含んでいる。
【請求項５０】以下の工程を含んでいる請求項４３に記載の方法：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された死信号ま
たは毒素をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に必要
な制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原を
コードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子を筋肉内投与により該個体へ投
与する、ここで該主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原は該供与者細胞と一致して
おり、該核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、該主要組織適合複合体クラ
スＩＩ抗原および該死信号または毒素をコードしている該ヌクレオチド配列が発
現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該主要組織適合複
合体クラスＩＩ抗原を含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞は死
信号または毒素と相互作用することにより死滅し、および該個体における一致し
ていない供与者細胞の拒絶が軽減される；および／または第一の核酸分子および第二の核酸分子を筋肉内投与により該個体へ投与する、
ここで該第一の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なよ
うに連結された死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列を含んでお
り、および第二の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動可能な
ように連結された主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原をコードしているヌクレオ
チド配列を含んでいる、ここで該主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原は該供与者
細胞と一致しており、該第一および第二の核酸分子は該個体の細胞により取り込
まれ、該主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原および該死信号または毒素をコード
している該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞に
より発現された該主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原を含んでいる複合体を形成
し、複合体形成後に該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用することにより死滅
し、および該個体における一致していない供与者細胞の拒絶が軽減される。
【請求項５１】以下の工程を含んでいる請求項４３に記載の方法：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された死信号ま
たは毒素をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に必要
な制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原を
コードしているヌクレオチド配列を含むプラスミドを該個体の身体上の部位から
該個体へ投与する、ここで該主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原は該供与者細胞
と一致しており、該プラスミドは該個体の細胞により取り込まれ、該主要組織適
合複合体クラスＩＩ抗原および該死信号または毒素をコードしている該ヌクレオ
チド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該主
要組織適合複合体クラスＩＩ抗原を含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に
該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用することにより死滅し、および該個体に
おける一致していない供与者細胞の拒絶が軽減される；および／または第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを該個体の身体上の部位から該個体
へ投与する、ここで該第一のプラスミドは該個体における発現に必要な制御要素
に作動可能なように連結された死信号または毒素をコードしているヌクレオチド
配列を含んでおり、および第二のプラスミドは該個体における発現に必要な制御
要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原をコード
しているヌクレオチド配列を含んでいる、ここで該主要組織適合複合体クラスＩ
Ｉ抗原は該供与者細胞と一致しており、該第一および第二のプラスミドは該個体
の細胞により取り込まれ、該主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原および該死信号
または毒素をコードしている該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レ
セプターは該細胞により発現された該主要組織適合複合体クラスＩＩ抗原を含ん
でいる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用
することにより死滅し、および該個体における一致していない供与者細胞の拒絶
が軽減される。
【請求項５２】制御要素に作動可能なように連結された死信号または毒素
をコードしているヌクレオチド配列および制御要素に作動可能なように連結され
た主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいるプラ
スミド。
【請求項５３】該死信号または毒素がＦＡＤＤ、ＦＡＰ−１、ＴＲＡＤＤ
、ＲＩＰ、ＲＡＩＤＤ、ＦＡＳ−Ｌ、ＴＮＦ，ＭＯＲＴ１，ＣＲＡＤＤ，ＭｙＤ
８８、昆虫毒、蛇毒、細菌内毒素、二重鎖リボソーム不活性化蛋白質およびゲロ
ニンから成る群より選択される請求項５２に記載のプラスミド。
【請求項５４】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩ
抗原である請求項５２に記載のプラスミド。
【請求項５５】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩ
Ｉ抗原である請求項５２に記載のプラスミド。
【請求項５６】制御要素に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質を
コードしているヌクレオチド配列をさらに含んでいる請求項５２に記載のプラス
ミド。
【請求項５７】請求項５２に記載のプラスミドを含んでいる医薬組成物。
【請求項５８】第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを含んでいる組
成物、ここで該第一のプラスミドは請求項５２に記載のプラスミドであり、およ
び該第二のプラスミドはＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含
んでいる。
【請求項５９】制御要素に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質を
コードしているヌクレオチド配列および制御要素に作動可能なように連結された
主要組織適合複合体抗原をコードしているヌクレオチド配列を含んでいるプラス
ミド。
【請求項６０】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩ
抗原である請求項５９に記載のプラスミド。
【請求項６１】該主要組織適合複合体抗原が主要組織適合複合体クラスＩ
Ｉ抗原である請求項５９に記載のプラスミド。
【請求項６２】第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを含んでいる組
成物、ここで該第一のプラスミドは死信号または毒素をコードしているヌクレオ
チド配列を含んでおり、および該第二のプラスミドは主要組織適合複合体抗原を
コードしているヌクレオチド配列を含んでいる。
【請求項６３】該死信号または毒素が．．．請求項６２に記載の組成物。
【請求項６４】該主要組織適合複合体抗原が該主要組織適合複合体クラス
Ｉ抗原である請求項６２に記載の組成物。
【請求項６５】該主要組織適合複合体抗原が該主要組織適合複合体クラス
ＩＩ抗原である請求項６２に記載の組成物。
【請求項６６】請求項６２に記載の組成物、ここで；該第一のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質
をコードしているヌクレオチド配列をさらに含んでいる；および／または該第二のプラスミドは制御要素に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質
をコードしているヌクレオチド配列をさらに含んでいる；および／または該組成物がさらに第三のプラスミドを含んでおり、該第三のプラスミドは制御
要素に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチ
ド配列をさらに含んでいる。
【請求項６７】個体における優性免疫応答を減少させる方法であって、以
下の工程を含んでいる：ａ）該優性免疫応答に関係するＴ細胞の亜集団と複合体を形成する主要組織適
合複合体抗原サブタイプを同定し；ｂ）該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された死信
号または毒素をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に
必要な制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原サブタイ
プをコードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子を該個体の身体上の部位か
ら該個体へ投与する、該核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、該主要組織
適合複合体抗原サブタイプおよび該死信号または毒素をコードしている該ヌクレ
オチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該
主要組織適合複合体抗原サブタイプを含んでいる複合体を形成し、複合体形成後
に該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用することにより死滅し、および該個体
における優性免疫応答が軽減される；および／または第一の核酸分子および第二の核酸分子を該個体の身体上の部位から該個体へ投
与する、ここで該第一の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動
可能なように連結された死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列を
含んでおり、および第二の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作
動可能なように連結された該主要組織適合複合体抗原サブタイプをコードしてい
るヌクレオチド配列を含んでおり、該第一および第二の核酸分子は該個体の細胞
により取り込まれ、該主要組織適合複合体抗原サブタイプおよび該死信号または
毒素をコードしている該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプタ
ーは該細胞により発現された該主要組織適合複合体抗原サブタイプを含んでいる
複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用するこ
とにより死滅し、および該個体における優性免疫応答が軽減される。
【請求項６８】該死信号または毒素がＦＡＤＤ、ＦＡＰ−１、ＴＲＡＤＤ
、ＲＩＰ、ＲＡＩＤＤ、ＦＡＳ−Ｌ、ＴＮＦ，ＭＯＲＴ１，ＣＲＡＤＤ，ＭｙＤ
８８、昆虫毒、蛇毒、細菌内毒素、二重鎖リボソーム不活性化蛋白質およびゲロ
ニンから成る群より選択される請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】該主要組織適合複合体抗原サブタイプが主要組織適合複合
体クラスＩ抗原サブタイプである請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】該主要組織適合複合体抗原サブタイプが主要組織適合複合
体クラスＩＩ抗原サブタイプである請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列およ
び主要組織適合複合体抗原サブタイプをコードしているヌクレオチド配列を含む
核酸分子が該個体の身体上の部位から該個体へ投与される請求項６７に記載の方
法。
【請求項７２】該核酸分子がさらにＢ７．２蛋白質をコードしているヌク
レオチド配列を含む請求項６７に記載の方法。
【請求項７３】第一の核酸分子および第二の核酸分子、ここで該第一の核
酸分子は死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列を含み、および該
第二の核酸分子は主要組織適合複合体抗原サブタイプをコードしているヌクレオ
チド配列を含んでいる、が該個体の身体上の部位から該個体へ投与される請求項
６７に記載の方法。
【請求項７４】該第一の核酸分子がさらにＢ７．２蛋白質をコードしてい
るヌクレオチド配列を含んでいる；および／または該第二の核酸分子がさらにＢ
７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでいる請求項７３に記載
の方法。
【請求項７５】第三の核酸分子を投与することを含んでいる請求項７３に
記載の方法であって、ここで第三の核酸分子はＢ７．２蛋白質をコードしている
ヌクレオチド配列を含んでいる。
【請求項７６】以下の工程を含んでいる請求項６７に記載の方法：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された死信号ま
たは毒素をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に必要
な制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原サブタイプを
コードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子を該個体へ投与する、該核酸分
子は該個体の細胞により取り込まれ、該主要組織適合複合体抗原サブタイプおよ
び該死信号または毒素をコードしている該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞
のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該主要組織適合複合体抗原サブタ
イプを含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞は死信号または毒素
と相互作用することにより死滅し、および該個体における優性免疫応答が軽減さ
れる；および／または第一の核酸分子および第二の核酸分子を筋肉内投与により該個体へ投与する、
ここで該第一の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なよ
うに連結された死信号または毒素をコードしているヌクレオチド配列を含んでお
り、および第二の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動可能な
ように連結された該主要組織適合複合体抗原サブタイプをコードしているヌクレ
オチド配列を含んでおり、該第一および第二の核酸分子は該個体の細胞により取
り込まれ、該主要組織適合複合体抗原サブタイプおよび該死信号または毒素をコ
ードしている該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細
胞により発現された該主要組織適合複合体抗原サブタイプを含んでいる複合体を
形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用することにより
死滅し、および該個体における優性免疫応答が軽減される。
【請求項７７】以下の工程を含んでいる請求項６７に記載の方法：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結された死信号ま
たは毒素をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に必要
な制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原サブタイプを
コードしているヌクレオチド配列を含むプラスミドを該個体の身体上の部位から
該個体へ投与する、該核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、該主要組織適
合複合体抗原サブタイプおよび該死信号または毒素をコードしている該ヌクレオ
チド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該主
要組織適合複合体抗原サブタイプを含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に
該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互作用することにより死滅し、および該個体に
おける優性免疫応答が軽減される；および／または第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを該個体の身体上の部位から該個体
へ投与する、ここで該第一のプラスミドは該個体における発現に必要な制御要素
に作動可能なように連結された死信号または毒素をコードしているヌクレオチド
配列を含んでおり、および第二のプラスミドは該個体における発現に必要な制御
要素に作動可能なように連結された該主要組織適合複合体抗原サブタイプをコー
ドしているヌクレオチド配列を含んでおり、該第一および第二のプラスミドは該
個体の細胞により取り込まれ、該主要組織適合複合体抗原サブタイプおよび該死
信号または毒素をコードしている該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細
胞レセプターは該細胞により発現された該主要組織適合複合体抗原サブタイプを
含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞は死信号または毒素と相互
作用することにより死滅し、および該個体における優性免疫応答が軽減される。
【請求項７８】特異的免疫応答に関係するＴ細胞の亜集団を拡大する方法
であって、以下の工程を含んでいる：ａ）該特異的免疫応答に関係するＴ細胞の亜集団と複合体を形成する主要組織
適合複合体抗原サブタイプを同定し；ｂ）該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結されたＢ７
．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に必
要な制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原サブタイプ
をコードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子を該個体の身体上の部位から
該個体へ投与する、該核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、該主要組織適
合複合体抗原サブタイプおよび該Ｂ７．２をコードしている該ヌクレオチド配列
が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該主要組織適
合複合体抗原サブタイプを含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞
はＢ７．２と相互作用することにより増殖し、および特異的免疫応答に関係する
Ｔ細胞の亜集団が拡大される；および／または第一の核酸分子および第二の核酸分子を該個体の身体上の部位から該個体へ投
与する、ここで該第一の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動
可能なように連結されたＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含
んでおり、および第二の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動
可能なように連結された該主要組織適合複合体抗原サブタイプをコードしている
ヌクレオチド配列を含んでおり、該核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、
該主要組織適合複合体抗原サブタイプおよび該Ｂ７．２をコードしている該ヌク
レオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された
該主要組織適合複合体抗原サブタイプを含んでいる複合体を形成し、複合体形成
後に該Ｔ細胞はＢ７．２と相互作用することにより増殖し、および特異的免疫応
答に関係するＴ細胞の亜集団が拡大される。
【請求項７９】該主要組織適合複合体抗原サブタイプが主要組織適合複合
体クラスＩ抗原サブタイプである請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】該主要組織適合複合体抗原サブタイプが主要組織適合複合
体クラスＩＩ抗原サブタイプである請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】Ｂ７．２をコードしているヌクレオチド配列および主要組
織適合複合体抗原サブタイプをコードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子
が該個体の身体上の部位から該個体へ投与される請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】第一の核酸分子および第二の核酸分子、ここで該第一の核
酸分子はＢ７．２をコードしているヌクレオチド配列を含み、および該第二の核
酸分子は主要組織適合複合体抗原サブタイプをコードしているヌクレオチド配列
を含んでいる、が該個体の身体上の部位から該個体へ投与される請求項７７に記
載の方法。
【請求項８３】以下の工程を含んでいる請求項７７に記載の方法：該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結されたＢ７．２
蛋白質をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に必要な
制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原サブタイプをコ
ードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子を筋肉内投与により該個体へ投与
する、該核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、該主要組織適合複合体抗原
サブタイプおよび該Ｂ７．２をコードしている該ヌクレオチド配列が発現され、
Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該主要組織適合複合体抗原
サブタイプを含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ細胞はＢ７．２と
相互作用することにより増殖し、および特異的免疫応答に関係するＴ細胞の亜集
団が拡大される；および／または第一の核酸分子および第二の核酸分子を筋肉内投与により該個体へ投与する、
ここで該第一の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なよ
うに連結されたＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列を含んでおり
、および第二の核酸分子は該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なよ
うに連結された該主要組織適合複合体抗原サブタイプをコードしているヌクレオ
チド配列を含んでおり、該核酸分子は該個体の細胞により取り込まれ、該主要組
織適合複合体抗原サブタイプおよび該Ｂ７．２をコードしている該ヌクレオチド
配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該主要組
織適合複合体抗原サブタイプを含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ
細胞はＢ７．２と相互作用することにより増殖し、および特異的免疫応答に関係
するＴ細胞の亜集団が拡大される。
【請求項８４】以下の工程を含んでいる請求項７７に記載の方法：ｂ）該個体における発現に必要な制御要素に作動可能なように連結されたＢ７
．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配列、および該個体における発現に必
要な制御要素に作動可能なように連結された主要組織適合複合体抗原サブタイプ
をコードしているヌクレオチド配列を含むプラスミドを該個体の身体上の部位か
ら該個体へ投与する、該プラスミドは該個体の細胞により取り込まれ、該主要組
織適合複合体抗原サブタイプおよび該Ｂ７．２をコードしている該ヌクレオチド
配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により発現された該主要組
織適合複合体抗原サブタイプを含んでいる複合体を形成し、複合体形成後に該Ｔ
細胞はＢ７．２と相互作用することにより増殖し、および特異的免疫応答に関係
するＴ細胞の亜集団が拡大される；および／または第一のプラスミドおよび第二のプラスミドを該個体の身体上の部位から該個体
へ投与する、ここで該第一のプラスミドは該個体における発現に必要な制御要素
に作動可能なように連結されたＢ７．２蛋白質をコードしているヌクレオチド配
列を含んでおり、および第二のプラスミドは該個体における発現に必要な制御要
素に作動可能なように連結された該主要組織適合複合体抗原サブタイプをコード
しているヌクレオチド配列を含んでおり、該プラスミドは該個体の細胞により取
り込まれ、該主要組織適合複合体抗原サブタイプおよび該Ｂ７．２をコードして
いる該ヌクレオチド配列が発現され、Ｔ細胞のＴ細胞レセプターは該細胞により
発現された該主要組織適合複合体抗原サブタイプを含んでいる複合体を形成し、
複合体形成後に該Ｔ細胞はＢ７．２と相互作用することにより増殖し、および特
異的免疫応答に関係するＴ細胞の亜集団が拡大される。