JP2002537363A - 生理学的機能の測定法 - Google Patents

生理学的機能の測定法

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JP2002537363A JP2000600703A JP2000600703A JP2002537363A JP 2002537363 A JP2002537363 A JP 2002537363A JP 2000600703 A JP2000600703 A JP 2000600703A JP 2000600703 A JP2000600703 A JP 2000600703A JP 2002537363 A JP2002537363 A JP 2002537363A
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リチャード・ブラッドリー・ドーショー
サミュエル・アチレフ
ラガバン・ラジャゴパラン
ジョゼフ・エドワード・ブガジュ
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Mallinckrodt Inc
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Abstract

(57)【要約】 一群の体細胞の生理学的機能を測定する方法であって、測定可能な電磁波放射を放射することのできる検出可能な物質を選択する段階を含む。この物質を一群の体細胞に接触する体液中に導入する。この放射を測定し、生理学的機能を放射の測定値に基づいて測定する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明の背景 本発明の技術分野 本発明は一群の体細胞が示す生理学的機能の測定法の分野に属する。
【０００２】本発明の技術背景 肝機能を測定する現行の臨床的診断は臨床検査データの蓄積および腹水および
脳障害の臨床的評価であるＣＴＣ値を誘導することを含む。D.A. Noe and R.C.
Rock (編), Laboratory Medicine, The Selection and Interpretation of clin
ical Laboratory Studies, Williams and Wilkins, 1994, Baltimore, MD, 第5
章器官機能の評価D.A. Noe著、55-60頁；第19章、肝臓および胆管、A.T. Blei著
、363- 379頁；第21章、腎臓、D.A. Oken and A.C. Schoolwerth著、401-410頁
。
【０００３】 他の試験にはインドシアニングリーン（ＩＣＧ）の使用を含むものがある。Ｉ
ＣＧは肝臓によって独占的に血流から排除されることが知られている。従って、
血液ＩＣＧクリアランス時間のプロファイルは肝機能に直接的に関連する。J. C
aesar, S. Shaldon, L. Chiandussi, L. Guevara and Sheila Sherlock, "The u
se of indocyanine green in the measurement of hepatic blood flow and as
a test of hepatic function", Clin. Sci., 21: 43-57 (1961)。
【０００４】 ＩＣＧ試験は技術の進展を経た。最初の具体化では全量一時ＩＶ注射に続いて
、対象から数回採血した。次に血液試料を分光学的に処理してＩＣＧ濃度を測定
した。R. Jalan and P.C. Hayes, "Review article: quantitative tests of li
ver function", Aliment Pharmacol., Ther., 9: 263-270 (1995); A.W. Hemmin
g, C.H. Scudamore, C.R. Shackleton, M. Pudek, and S.R. Erb, "Indocyanine
green clearance as a predictor of successful hepatic resection in cirrh
otic patients", Am. J. Surg., 163: 515-518 (1992); P. Ott, S. Keiding an
d L bass, "Plasma elimination of indocyanine green in the intact pig aft
er bolus injection and during constant infusion: comparison of spectroph
tometry and high-pressure liquid chromatography for concentration analys
is", Hepatology, 18: 1504-1515 (1993)。続いて、耳でのデンシトメトリーを
採用する非侵襲的な技術が開発された。C.M. Leevy, F. Smith, J. Longueville
, G. Paumgartner, and M.M. Howard, "Indocyanine green clearance as a tes
t for hepatic function: Evaluation by dichromatic ear densitometry", Jou
rnal of Medicine, 24: 10-27 (1993)。この装置の臨床的開発に関する問題点は
、最近日本の技術者が主導して耳デンシトメトリー技術に改良した。この新方法
はフィンガーピース法と名付けられ、ＩＣＧ濃度を推定するために、指を通る波
長２種の透過光を採用する。M. Kanda, K. Taniguchi, K. Awazu, Y.Ishigami,
M. Masuzawa, and H. Abe, "Continuous monitoring of Cardiogreen removal b
y a diseased liver using an optical sensor", Proc. SPIE, 904: 39-46 (198
8); M. Nakayama, N. Kanaya, S. Fujita, and A. Namiki, "Effects of ephedr
ine on indocyanine green clearance during spinal anesthesia: Evaluation
by the finger piece method", Anesth. Analg., 77: 947-949 (1993); N. Kana
ya, H. Iwasaki, and A. Namiki, "Noninvasive ICG clearance test for esti
mating hepatic blood flow during halothane and isoflurane anaesthesia",
Can. J. Anaesth., 42: 209-212 (1995); N. Kanaya, M. Nakayama, S. Fujita
, and A. Namiki, "Comparison of the effects of sevoflurane, isoflurane a
nd halothane on indocyanine green clearance", Br. J. Anaesth., 74: 164-1
67 (1995); S. Shimizu, W. Kamiike, N. Hatanaka, Y. Yoshida, K. Tagawa, M
. Miyata, and H. Matsuda, "New method for measuring ICG Rmax with a clea
rance meter", World J. Surg., 19: 113-118 (1995)。
【０００５】 耳デンシトメトリーもフィンガーピース法もＩＣＧによる光の吸収（または放
射）の測定に関する。
【０００６】 また、興味深いのは血漿中のＩＣＧの試験管内螢光測定が示されていることで
ある。B. Hollins, B. Noe, and J.M. Henderson, "Fluorometric determinatio
n of indocyanine green in plasma", Clin. Chem., 33: 765-768 (1987)。
【０００７】 一般的な興味の深い他の文献には次のものがある。R.L. Sheridan, et al., "
Burn depth estimation by indocyanine green fluorescence; Initial human t
rial", Journal of Burn Care & Rehabilitation, 16: 602-604 (1995); M.A. O
'Leary, D.A. Boas, B. Chance, and A.G. Yodh, "Reradiation and imaging of
diffuse photon density waves using fluorescent inhomogeneities", Journa
l of Luminescence, 60 and 61: 281-286 (1994); X. Li, B. Beauvoit, R. Whi
te, S. Nioka, B. Chance, and A. Yodh, "Tumor localization using fluoresc
ence of indocyanine green (ICG) in rat models", Proc. SPIE, 2389: 789-79
7 (1995)。
【０００８】 （発明が解決しようとする技術的課題） 当技術分野ではなお生理学的機能を測定する方法の改善が求められている。
【０００９】発明の要約 本発明によれば、一群の体細胞の生理学的機能を測定する方法は、電磁波放射
を含む測定可能なメンバーを放射することのできる検出可能な物質を選択する段
階を含む。この物質を一群の体細胞に接触する体液中に導入する。この放射を測
定し、生理学的機能を放射の測定値に基づいて測定する。この放射は非侵襲的ま
たは侵襲的な技術を使用して測定できる。侵襲的技術には、体内の各部分に挿入
される内視鏡およびカテーテルを使用することを含む。非侵襲的技術にはたとえ
ば耳クリップおよびフィンガープローブのような表面プローブを含む。
【００１０】図面の簡単な説明 図１は一態様による生体内螢光検出装置の模式的表示である。 図２は腎結紮前（正常）および腎結紮後（結紮）のラットにおける、ＦＩＴＣ
標識サクシニル化ポリ−Ｄ−リジン全量単回注射後の生体内螢光の時間依存性グ
ラフである。実線は測定データに対する単一指数適合曲線（single exponential
fit）である（励起光４８８ｎｍ、放射光を５１８ｎｍで観察）。 図３はＩＣＧ全量単回注射後のラット３匹に対する、生体内螢光の時間依存
性を示すグラフである。実線は測定データに対する単一指数適合曲線である。 図４はラット１匹における一連に設定された注射反復後の生体内螢光の時間依
存性を示すグラフである。時間的な経過は次の通りである：ＩＣＧ（ＩＣＧ−１
）、ＦＩＴＣのみ、食塩水のみ、再びＩＣＧ（ＩＣＧ−２）。 図５は肝部分切除前（正常）および肝部分切除後（切除）のラット１匹におけ
るＩＣＧ全量単回注射後の生体内螢光の時間依存性を示すグラフである。実線は
測定データに対する単一指数適合曲線である。 図６はフルオレッセイン−ポリアスパラギン酸（６０００）コンジュゲートの
血液クリアランスプロファイルを示す。 図７はフルオレッセイン−ポリアスパラギン酸（１００００）コンジュゲート
の血液クリアランスプロファイルを示す。 図８はフルオレッセイン−ポリグルタミン酸（１３０００）コンジュゲートの
血液クリアランスプロファイルを示す。 図９はフルオレッセイン−ポリアルギニン（１００００）コンジュゲートの血
液クリアランスプロファイルを示す。 図１０はインドシアニン−モノ（ポリアスパラギン酸２０００）およびインド
シアニン−ビス（ポリアスパラギン酸２０００）の血液クリアランスプロファイ
ルを示す。 図１１はインドシアニン（ポリアスパラギン酸６０００）の血液クリアランス
プロファイルを示す。
【００１１】本発明の詳細な記載 本発明の一態様に従って、標的物質の血液プールからのクリアランスを測定す
ることによる細胞および/または器官の機能を決定する方法を開示する。この標
的物質を本明細書ではトレーサーと記載することもある。細胞および／または器
官の機能は、これらの細胞が血流からトレーサーを除去する速度によって決定で
きる。機能はまた目的細胞がトレーサーを蓄積する速度またはそれを活性型また
はその他の型に変換する速度を測定することによっても評価できる。
【００１２】 この物質は、高性能なクリアランスシステムである一群の細胞または器官を標
的とすることができる。この物質は発色団および／または螢光団を含有していて
もよい。
【００１３】 発色団および／または螢光団を含有する物質については、血液プールクリアラ
ンスをたとえば耳垂、指、脳または網膜のような非標的部位における組織の吸光
または螢光を測定する光源／光電管装置を使用して測定することができる。目的
とする細胞内におけるトレーサーの蓄積は同様な様式で評価できる。このような
蓄積の検出は近赤外線の波長において放射する蛍光団を使用することによって促
進できる。けだし、身体の組織はこの波長では比較的透明だからである。
【００１４】 この物質は、脈管内、腹腔内または皮下の注射または点滴、経口投与、皮膚を
通じての経皮吸収または吸入を含む、任意の適切な方法によって患者に導入する
ことができる
【００１５】 本発明を生物学的機能の迅速なベッドサイド評価のために使用することができ
る。例えば、心拍出量、過コレステロール血症の原因、ならびに腎機能および肝
機能などのデータを、ベッドサイドでの単回静脈注射後６０分以内に得ることが
できる。一態様に従えば、患者に各々異なる物質（たとえば螢光団）を含む、異
なる化合物を複数（たとえば３種）全量単回注射することができる。
【００１６】 心拍出量は、本発明をフィックの原理のような知られている方法と共に利用し
て測定することができる。
【００１７】 糸球体濾過は、たとえばフルオレッセイン−サクシニル化−ポリ−Ｄ−リジン
またはフルオレッセイン−イヌリンのような低分子量螢光物質のクリアランスに
よって決定することができる。
【００１８】 過コレステロール血症がＬＤＬクリアランスの低下に起因するかどうかは、螢
光標識ＬＤＬのクリアランスを分析することによって測定することができる。肝
機能は螢光標識アシアログリコプロテインまたは、たとえばインドシアニングリ
ーンのような色素のクリアランス速度を測定することによって評価することがで
きる。
【００１９】 本発明は、腎臓または肝臓によって、血流からクリアランスされる物質の螢光
検出を含む。従って、生体内螢光検出による腎機能または肝機能の評価も本発明
に含まれる。本発明を血液透析の効果を監視するためにも使用できる。
【００２０】 癌細胞または脳細胞も本発明による標的とすることができる。
【００２１】 励起波長および放射される光子のためのフィルターを選択することによって、
別々の複数トレーサーのクリアランスを同時に測定することができる。マイクロ
プロセッサーによって濃度／時間曲線をリアルタイムに分析することができる。
得られるクリアランス速度を算出し、臨床的効果を即時表示することができる。
非標識競合化合物（たとえば、ＬＤＬ、アシアログリコプロテインなど）が存在
する場合には、単一の血液試料をこれらの競合化合物の濃度について分析し、そ
の結果を利用してクリアランス経路を経ての流出（マイクロモル／分）を算出す
ることができる。
【００２２】 本発明の有用性を示すために、本発明による非侵襲的螢光検出系を採用して、
脈管系からの色素除去を連続的に監視した。ラットモデルにおける正常な器官の
機能と異常な器官の機能との間の識別は、肝臓と腎臓との両方について示された
。図１に示しているように、光ファイバー１０は光源１２から耳１４まで光を伝
達する。耳１４の近くに配置した第二の光ファイバー１６は、螢光を検出系２０
まで伝達する。この初期の研究では色素２種を採用した。インドシアニングリー
ンは肝臓によって血流から排他的にクリアランスされ、生体内では７８０ｎｍの
レーザー光で励起された。この螢光シグナルは８３０ｎｍで検出した。正常肝機
能での特徴的クリアランス曲線が得られた。肝臓を一部切除すると、予想通りク
リアランス曲線が大きく延長された。ＦＩＴＣ標識サクシニル化ポリ−Ｄ−リジ
ンを生体内で４８８ｎｍのレーザー光で励起した。螢光シグナルを５１８ｎｍで
検出した。正常腎機能での特徴的クリアランス曲線が得られた。両腎臓を結紮す
ると、クリアランス曲線は高く上がって定常化し、クリアランスはあってもごく
僅かであることを示した。図２参照。
【００２３】 図１に模式的に示した非侵襲的生体内螢光検出装置は、ＩＣＧの螢光検出には
公称７８５ｎｍの平行固体レーザー光源（LaserMax Inc. model # LAS-300-780-
5）を採用した。ＦＩＴＣの螢光検出にはアルゴンイオンレーザー（Coherent In
nova model 90）を４８８ｎｍ線に同調して使用した。いずれのレーザー光源も
内径３．２ｍｍのガラス製光ファイバー束１０（Oriel # 77526）の末端に向け
た。このレーザー伝達束の他端は、ラットの耳１４から約２ｃｍの距離に約４５
°の角度で配置した。螢光検出光路として使用するための、同様な第二の光ファ
イバー束１６は約３０°の角度で耳１４から約１ｃｍの距離に配置した。
【００２４】 検出ファイバー束１６の出口末端を、焦点距離２０ｍｍのレンズ１８の焦点距
離に配置した。出力光はこうして束を出てからレンズを通過した後に平行にされ
た。狭バンド干渉フィルター２０（ＩＦ）が光学トレイン（CVI Laser Corporat
ion）の次の要素であって、大体その波長の光が検出器２０へと通過することを
可能にする。ＩＣＧの螢光実験には８３０ｎｍフィルター（10 nm FWHM）を使用
した。ＦＩＴＣの螢光実験には５１８ｎｍフィルター（3 nm FWHM）を使用した
。
【００２５】 検出器２０は小さなシリコン製光ダイオード（UDT model PIN-10D）であって
、トランスインピーダンス増幅器（UDT model 101C）に接続された。デジタル電
圧計２２（DVM）は出力シグナルを監視する。後続する電圧増幅器２４（Tektron
ix AM-502）は必要ならばシグナルを昇圧する。増幅器の出力はNational Instru
ments BNC-2080ブリークアウトボードに接続する。これはNational Instruments
DAQ-700データ獲得ボード２６（A/D）に接続する。コンピュータ２９にあるＬ
ａｂＶＩＥＷ（商標）データ獲得ソフトウェアが粗実験データを収集する。
【００２６】 本方法は放射能標識トレーサーを使用した先行技術の方法とは対照的である。
本方法は放射能に関する心配がなく、励起波長および放射波長を迅速に変化させ
るだけで種々のパラメータの測定が同時にできる。
【００２７】 種々の色素およびキャリヤーが本明細書に開示する方法には使用できる。使用
できる色素にはフェニルキサンテン類（たとえばフルオレッセイン）、フェノチ
アジン類、フェノセレナジン類、シアニン類、インドシアニン類およびスクアラ
イン（squaraine）類が包含される。好適なキャリヤーは生理学的に許容される
ポリアニオン性化合物であって、前記色素とコンジュゲートすることができるも
のである。使用できるキャリヤーにはポリアクリル酸、ポリアスパラギン酸、ポ
リグルタミン酸、ポリヌクレオチド、ポリアルギニン、ポリセリン、ポリオルニ
チンおよびポリリジンを包含する。以下の色素−キャリヤーコンジュゲートは本
発明の部材として使用できるが、「*」を付したものは好適なコンジュゲートで
ある。左側にＲＦと付記してあるものは腎機能の試験に使用される；左側にＬＦ
と付記してあるものは肝機能の試験に使用される；および左側にＲＦ／ＬＦと付
記してあるものは腎機能と肝機能との試験に使用される。
【００２８】 ＲＦ フルオレッセイン−ポリアスパラギン酸＊ ＲＦ フルオレッセイン−ポリグルタミン酸＊ ＲＦ フルオレッセイン−ポリアクリル酸＊ ＲＦ フルオレッセイン−ポリヌクレオチド ＲＦ フルオレッセイン−ポリニトロフェニルアラニン ＲＦ フルオレッセイン−ポリジニトロフェニルアラニン ＲＦ フルオレッセイン−ポリトリニトロフェニルアラニン ＲＦ フルオレッセイン−ポリスルホニルフェニルアラニン ＲＦ フルオレッセイン−ポリジスルホニルフェニルアラニン ＲＦ フルオレッセイン−ポリトリスルホニルフェニルアラニン ＲＦ フルオレッセイン−ポリサクシネート ＲＦ フルオレッセイン−ポリマロネート ＲＦ フルオレッセイン−ポリグルタレート ＲＦ フルオレッセイン−ポリグリコレート
【００２９】 ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリアスパラギン酸＊ ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリグルタミン酸＊ ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリアクリル酸＊ ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリヌクレオチド ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリニトロフェニルアラ ニン ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリジニトロフェニルア ラニン ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリトリニトロフェニル アラニン ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリスルホニルフェニル アラニン ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリジスルホニルフェニ ルアラニン ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリトリスルホニルフェ ニルアラニン ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリサクシネート ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリマロネート ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリグルタレート ＬＦ ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリグリコレート
【００３０】 ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン-ポリアスパラギン酸
＊ ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリグルタミン酸＊ ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリアクリル酸＊ ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリヌクレオチド ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリニトロフェニル アラニン ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリジニトロフェニ ルアラニン ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリトリニトロフェ ニルアラニン ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリスルホニルフェ ニルアラニン ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリジスルホニルフ ェニルアラニン ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリトリスルホニル フェニルアラニン ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリサクシネート ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリマロネート ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリグルタレート ＲＦ／ＬＦ ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリグリコレート
【００３１】 ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリアスパラギン酸＊ ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリグルタミン酸＊ ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリアクリル酸＊ ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリヌクレオチド ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリニトロフェニルアラニン ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリジニトロフェニルアラニ ン ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリトリニトロフェニルアラ ニン ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリスルホニルフェニルアラ ニン ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリジスルホニルフェニルア ラニン ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリトリスルホニルフェニル アラニン ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリサクシネート ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリマロネート ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリグルタレート ＲＦ ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリグリコレート
【００３２】 ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリアスパラギン酸＊ ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリグルタミン酸＊ ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリアクリル酸＊ ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリヌクレオチド ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリニトロフェニルア ラニン ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリジニトロフェニル アラニン ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリトリニトロフェニ ルアラニン ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリスルホニルフェニ ルアラニン ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリジスルホニルフェ ニルアラニン ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリトリスルホニルフ ェニルアラニン ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリサクシネート ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリマロネート ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリグルタレート ＲＦ ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリグリコレート
【００３３】 （発明を実施するための最良の形態） 本発明を以下の実施例によってさらに例証するが、これらは限定を意図された
ものではない。
【００３４】 実施例１ 生体内での研究では、最初に体重〜２５０ｇの正常なＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗ
ｌｅｙラットにウレタン（１．３５ｇ／ｋｇ）を腹腔内注射により投与して麻酔
した。
【００３５】 各動物が所望の麻酔レベルに達した後、胸腔上部に小さな切開（０．５ｃｍ）
を行って左頚静脈を露出した。左耳の耳垂を顕微鏡スライドグラスに固定し、光
ファイバーから放出される入射レーザー光を耳に照射した。次にデータの獲得を
開始し、被験物を投与する前に螢光のバックグラウンド値を得た。次に色素（肝
クリアランスの評価にはＩＣＧ；腎クリアランスの評価にはＦＩＴＣ標識ポリ−
Ｄ−リジン）を頚静脈から投与した。螢光シグナルは直ちに増大してピーク値に
達した。シグナルはたぶん血流から色素がクリアランスするとともに時間の関数
として減衰した。
【００３６】 麻酔したラットを背面で固定し、腹部正中線の皮膚を剣状軟骨から尾部までの
およそ中間まで切開した。次に腹部筋肉にも同様な切開を行って肝臓を露出させ
た。ラットを動かして胸腔の下にボルスタを入れ、肝臓を僅かに前側、横隔膜か
ら遠くなるように動かした。肝中葉および肝左葉を静かに腹腔の外に取り出し、
食塩水で湿らせたガーゼパッド上に置いた。両側葉を垂直に起し、３−０結紮を
取り出した各葉の周りに付けたが、この処置の時には結紮はしなかった。両葉を
腹腔に入れ直してボルスタを除いた。切開部を創傷クリップで閉じた。
【００３７】 以前の研究と同様にして露出した頚静脈からＩＣＧを動物に投与した。以前の
記載と同様にして被験物のクリアランスを監視してＩＣＧ肝クリアランスの正常
値を決定した。正常クリアランス曲線を得た後に、分離した肝臓葉２個の周りの
結紮を堅く結んで部分肝切除を行った。この状態に動物を２０分間置いて平衡さ
せた。次に露出した頚静脈からＩＣＧを投与し、被験物のクリアランスを監視し
た。試料ｎ＝３について、正常動物のクリアランス曲線と部分肝切除動物のクリ
アランス曲線を得た。
【００３８】 ＩＣＧの全量単回注射の前および後においてラット３匹の耳で測定した螢光の
時間依存性を図３に示す。データを３段階として記載できる。段階１は全量単回
注射前に得られた最初の３０秒のデータからなる。このデータは一定であって、
次回の実験に対するベースライン値を表す。この段階では螢光がないので、この
ベースライン値はゼロになる筈である。段階２は注射後数秒間に起き、色素が耳
に到達するにつれてシグナルは急速に最大値まで上昇し、血液プールに平衡する
。段階３では肝臓が血流からＩＣＧを濾去するにつれて螢光シグナルは時間と共
に減衰した。可視的には減衰速度は３匹とも同様であった。１５分後にはシグナ
ルは初期値の約９０％が失われた。
【００３９】 測定値が実際にＩＣＧ螢光によることを検証するため次の対照実験を行った。
ラットに前記のように１．４１ｍＭ−ＩＣＧ５００μＬを注射した。正常時螢光
の時間経過が得られ、図４にＩＣＧ−１として記載する。次に同じラットに１．
４１ｍＭ−フルオレッセイン（Sigma, St. Louis, MO）５００μＬを注射した。
図４に示すように、螢光シグナルは検出されなかった。さらなる確認のため、次
に同じラットに食塩水溶液（Baxter, Deerfield, IL）５００μＬを注射した。
再び、検出可能なシグナルは得られなかった。最後に、ラットに再び１．４１ｍ
Ｍ−ＩＣＧを５００μＬ注射して、第二の「正常」曲線を得た。
【００４０】 これらの螢光減衰曲線が肝機能に関連することを検証するために、部分肝切除
を含む実験を行った。この部分肝切除の手技は前記に略述した。手術が完了し、
肝臓の部分切除において使用するための結紮準備が完了した後、１ｍＭ−ＩＣＧ
溶液５００μＬをラットに注射した。正常螢光の時間経過曲線が得られ、これを
図５に示す。
【００４１】 次に結紮を強めて肝臓を部分的に切除した。ラットを１０分間平衡させた。次
に別の１ｍＭ−ＩＣＧ５００μＬを投与した。螢光の時間曲線を測定し、これも
図５に示す。ＩＣＧを血流プールから除去する肝臓の能力は劇的に変化し、部分
切除肝臓での螢光減衰速度は正常速度よりもはるかに遅かった。屠殺の後、肝臓
を秤量すると肝臓の４４％が切除されていたことが確認された。
【００４２】実施例２ ポリ−Ｄ−リジン４０００（Sigma P-0296）５００ｍｇ（〜１２５モル当量リ
ジン）を暗色ガラスバイアル内で０．１Ｍ−Ｎａ2ＣＯ3１０ｍＬにマグネティッ
クスターラー棒を用いて溶解した。ＦＩＴＣ（イソチオシアン酸フルオレッセイ
ン、Sigma F-7250）２４．３ｍｇ（６２．５マイクロモル）をＤＭＳＯ（ジメチ
ルスルホキシド）１．５ｍＬに溶解した。ＦＩＴＣ溶液を徐々にポリ−Ｄ−リジ
ン溶液に２５℃で撹拌しつつ添加した。反応を２５℃で３０分間進行させ、次に
４℃に移行させ、１２時間撹拌した。Ｓｅｐｈａｄｅｘ・Ｇ−２５によりゲル濾
過し、０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌで溶離してフルオレッセインコンジュゲート
を非結合ＦＩＴＣから分離した。
【００４３】 前記コンジュゲート〜３０マイクロモルを含む０．９％ＮａＣｌ２０ｍＬをｐ
Ｈ電極とマグネティックスターラー棒とを入れた２５℃の暗色ガラス製バイアル
中に入れ；０．５Ｍ−ＮａＯＨを加えてｐＨを９．５に調整した。撹拌下、この
溶液に０．５Ｍ−ＮａＯＨを加えてｐＨ９．５〜１０．０に維持しながら、３０
分間にわたって無水コハク酸５００ｍｇを徐々に加えた。次にｐＨを安定値７．
５まで落とし、最終容積２７ｍＬとした。反応混合物を３．５ｋｄカットオフの
透析膜を使用して０．９％（ｗ／ｗ）ＮａＣｌに対して透析し、残存する〜４．
０μＭ−螢光濃度相当のポリマーコンジュゲートを直接点滴に使用した。
【００４４】 麻酔したラットを腹部表面に固定し、胸腔の肋骨境界に近い腹腔に両側背腹性
切開を行った。腎臓から結合組織を除き、腎周辺の脂肪組織を把持して穏やかに
腹腔から取り出した。腎臓血管および尿管周囲の側副血管は遮断しないようにし
て単一の３−０結紮を設置した。結紮はこの手技時点では固定しなかった。
【００４５】 サクシニル化したフルオレッセイン標識ポリ−Ｄ−リジンを露出した頚静脈か
ら投与した。被験物のクリアランスを前記の通りに監視して、ポリ−Ｄ−リジン
の正常腎クリアランスを決定した。正常クリアランス曲線が得られた後に全（両
側性）腎摘出のために結紮した。この状態で動物を２０分間安定化させた。被験
物を次に露出した頚静脈から投与し、この化合物のクリアランスを監視した。ｎ
＝３試料について正常動物対全腎切除動物のクリアランス曲線が得られた。
【００４６】実施例３ フルオレッセイン−ポリアスパラギン酸（６０００）コンジュゲートの製造 イソチオシアン酸フルオレッセイン（２０ｍｇ）のＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）溶
液をポリアスパラギン酸（分子量：６０００、１８０ｍｇ）の水（１ｍＬ）溶液
に添加した。赤橙色の均質な溶液を２４時間常温に保持した。反応混合物をアセ
トン（２０ｍＬ）で処理した。微細な沈殿を遠心分離によって分離した。上清液
を廃棄し、沈殿をアセトン（１０ｍＬ）中に再懸濁した。この洗浄工程をさらに
３回反復して未反応イソチオシアン酸フルオレッセインを除去した。ペレットを
水（０．５ｍＬ）に溶解し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ・Ｇ−２５カラム（Pharmacia PD
-10、充填済）上でクロマトグラフィーを行った。１ｍＬ画分を集めた。所望の
画分（１〜４）を集め、凍結乾燥して、所望のコンジュゲート８７ｍｇが橙色固
体として得られた。０．２１ｍｇ／ｍＬ溶液の吸光度は０．２６であって、これ
は１０．２％のコンジュゲートに相当する。励起波長４８８ナノメーターおよび
放射波長５２０ナノメーターを使用して実施例１の操作を行った。図６はフルオ
レッセイン−ポリアスパラギン酸（６０００）コンジュゲートの血液クリアラン
スプロファイルを示す。
【００４７】 実施例４ フルオレッセイン−ポリアスパラギン酸（１００００）コンジュゲートの
製造 イソチオシアン酸フルオレッセイン（２０ｍｇ）のＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）溶
液をポリアスパラギン酸（分子量：１００００、１８０ｍｇ）の水（１ｍＬ）溶
液に添加した。赤橙色の均質な溶液を２４時間常温に保持した。反応混合物をア
セトン（２０ｍＬ）で処理した。微細な沈殿を遠心分離によって分離した。上清
液を廃棄し、沈殿をアセトン（１０ｍＬ）中に再懸濁した。この洗浄工程をさら
に３回反復して未反応イソチオシアン酸フルオレッセインを除去した。ペレット
を水（０．５ｍＬ）に溶解し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ・Ｇ−２５カラム（Pharmacia
PD-10、充填済）上でクロマトグラフィーを行った。所望の画分（１〜４）を集
め、凍結乾燥して、所望のコンジュゲート１００ｍｇを橙色固体として得た。０
．１９ｍｇ／ｍＬ溶液の吸光度は０．０５であって、これは３．３％のコンジュ
ゲートに相当する。励起波長４８８ナノメーターおよび放射波長５２０ナノメー
ターを使用して実施例１の操作を行った。図７はフルオレッセイン−ポリアスパ
ラギン酸（１００００）コンジュゲートの血液クリアランスプロファイルを示す
。
【００４８】実施例５ フルオレッセイン−ポリグルタミン酸（１３０００）コンジュゲートの製造 イソチオシアン酸フルオレッセイン（２０ｍｇ）のＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）溶
液をポリグルタミン酸（分子量：１３０００、１５０ｍｇ）の水（１ｍＬ）溶液
に添加した。赤橙色の均質な溶液を２４時間常温に保持した。反応混合物をアセ
トン（２０ｍＬ）で処理した。微細な沈殿を遠心分離によって分離した。上清液
を廃棄し、沈殿をアセトン（１０ｍＬ）中に再懸濁した。この洗浄工程をさらに
３回反復して未反応イソチオシアン酸フルオレッセインを除去した。ペレットを
水（０．５ｍＬ）に溶解し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ・Ｇ−２５カラム（Pharmacia PD
-10、充填済）上でクロマトグラフィーを行った。所望の画分（１〜４）を集め
て凍結乾燥して、所望のコンジュゲート８０ｍｇを橙色固体として得た。０．２
１ｍｇ／ｍＬ溶液の吸光度は０．７９であって、これは６０．８％コンジュゲー
トに相当する。励起波長４８８ナノメーターおよび放射波長５２０ナノメーター
を使用して実施例１の操作を行った。図８はフルオレッセイン−ポリグルタミン
酸（１３０００）コンジュゲートの血液クリアランスプロファイルを示す。
【００４９】実施例６ フルオレッセイン−ポリアルギニン（１００００）コンジュゲートの製造 イソチオシアン酸フルオレッセイン（２０ｍｇ）のＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）溶
液をポリアルギニン（分子量：１００００、１５０ｍｇ）の水（１ｍＬ）溶液に
添加した。赤橙色の均質な溶液を２４時間常温に保持した。反応混合物をアセト
ン（２０ｍＬ）で処理した。微細な沈殿を遠心分離によって分離した。上清液を
廃棄し、沈殿をアセトン（１０ｍＬ）中に再懸濁した。この洗浄工程をさらに３
回反復して未反応イソチオシアン酸フルオレッセインを除去した。ペレットを水
（０．５ｍＬ）に溶解し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ・Ｇ−２５カラム（Pharmacia PD-1
0、充填済）上でクロマトグラフィーを行った。所望の画分（１〜４）を集め、
凍結乾燥して所望のコンジュゲート８０ｍｇを橙色固体として得た。０．２１ｍ
ｇ／ｍＬ溶液の吸光度は０．７３であって、これは６０．５％コンジュゲートに
相当する。励起波長４８８ナノメーターおよび放射波長５２０ナノメーターを使
用して実施例１の操作を行った。図９はフルオレッセイン−ポリアルギニン（１
００００）コンジュゲートの血液クリアランスプロファイルを示す。
【００５０】 実施例７ インドシアニン−ドデカアスパラギン酸コンジュゲートの製造 （ａ）ペプチドの合成：ドデカアスパラギン酸モノおよびビスアスパルトイミ
ドは、自動化Ａｐｐｌｉｅｄ・Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社４３２Ａシナージー合成
機を使用する固相Ｆｍｏｃペプチド合成によって製造した。アミノ酸単位（各７
５マイクロモル）を順次にＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）およ
びヘキサフルオロ燐酸２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，
３，３−テトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ）の混合物で活性化した。末端アミ
ノ酸のＦｍｏｃは２０％ピペリジンのジメチルホルムアミド溶液を用いて除去し
た。
【００５１】 （ｂ）色素の合成：近赤外線吸収性ビス（カルボキシヘキシル）インドシアニ
ン色素（ＮＩＲＤ）は１，１，２−トリメチル［１Ｈ］ベンズ［ｅ］インドール
（２０ｇ、９５．６ミリモル）と６−ブロモヘキサン酸（２８．１ｇ、１４４．
１ミリモル）とを１，２−ジクロロベンゼン（ＤＣＢ）中、１１０℃で１２時間
反応させて製造した。この緑色の溶液を室温まで冷却し、形成した褐色固体沈殿
を濾取した。この固体をＤＣＢとジエチルエーテルで洗浄した後、得られた褐色
粉末（２４ｇ、６４％）を室温真空下に乾燥した。この固体の一部（４．０ｇ、
９．８ミリモル）、グルタコンアルデヒドジアニルの一塩酸塩（１．４ｇ、５ミ
リモル）および酢酸ナトリウム三水和物（１．８ｇ、１２．９ミリモル）をエタ
ノール中で１時間還流した。溶媒を蒸発後、２Ｎ−塩酸水溶液２０ｍＬを残渣に
加え、混合物を遠心分離し、上清液をデカンテーションした。この操作を上清液
が殆ど無色になるまで反復した。この固体残渣に水：アセトニトリル（３：２）
混合物を約５ｍＬ加え、凍結乾燥して暗緑色フレーク約２ｇを得た。この化合物
の純度は1Ｈ−ＮＭＲとＬＣ−質量スペクトルで確認した。
【００５２】 （ｃ）色素−ペプチドコンジュゲート：色素（６０ｍｇ、７５マイクロモル）
を０．２Ｍ−ＨＢＴＵのＤＭＳＯ溶液０．４ｍＬおよび０．４Ｍ−ジイソプロピ
ルエチルアミンのＤＭＳＯ溶液０．４ｍＬからなる活性化剤に加えた。この活性
化は約３０分間に完了し、樹脂結合ペプチド（２５マイクロモル）を色素に加え
た。反応は室温で３時間行った。混合物を濾過し、固体の残渣をＤＭＧ、アセト
ニトリルおよびＴＨＦで洗浄した。緑色残渣を乾燥した後、８５％トリフルオロ
酢酸、５％水、５％チオアニソールおよび５％フェノールの混合物を用いてアス
パラギン酸側鎖保護基および樹脂からのペプチド切断を１工程で行った。樹脂を
濾過し、冷ｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）を用いて色素−ペプチドコン
ジュゲートを沈殿させ、凍結乾燥してＨＰＬＣで精製した。２種の化合物、モノ
−およびビス−ドデカアスパルトイミドが得られた。
【００５３】 励起波長７８０ナノメーターおよび放射波長８３０ナノメーターを使用して、
実施例１の操作を行った。図１０はインドシアニン−モノ（ポリアスパラギン酸
６０００）の血液クリアランスプロファイルを示す。
【００５４】 実施例８ インドシアニン−（ＮＩＲＤ）ポリアスパラギン酸６０００コンジュゲートの製 造 ＮＩＲＤ（６０ｍｇ、７５マイクロモル）を０．２Ｍ−ＨＢＴＵのＤＭＳＯ溶
液０．４ｍＬおよび０．４Ｍ−ジイソプロピルエチルアミンのＤＭＳＯ溶液０．
２２ｍＬの混合物で１時間活性化した。この色素にポリアスパラギン酸（６ｋＤ
ａ、１００ｍｇ）を加えると、３時間後にコンジュゲート反応は終了した。冷Ｍ
ＴＢＥ（４×１０ｍＬ）を加えてペプチドコンジュゲートを沈殿させ、反応溶媒
および試薬を洗い去った。得られた緑色ペーストを水に溶解し、凍結乾燥して緑
色固体を得た。この化合物はＰｈａｒｍａｃｉａ・ＰＤ−１０カラム（Sephadex G-25）を使用してＰＢＳで溶離するゲル濾過クロマトグラフィーによって精製
した。生成物を凍結乾燥し、ＨＰＬＣ、ＵＶ−可視光分光分析、螢光分析および
質量分析によって分析した。励起波長７８０ナノメーターおよび放射波長８３０
ナノメーターを使用して、実施例１の操作を行った。図１１はインドシアニン−
（ポリアスパラギン酸６０００）の血液クリアランスプロファイルを示す。
【００５５】 （産業上の利用の可能性） 肝機能または腎機能を監視するための非侵襲的螢光検出の有用性は確立されて
いる。
【００５６】 本発明の各工程は、生理学的機能が変化しつつあるかどうかを決定するために
反復使用することができる。
【００５７】 インドシアニングリーンは波長約８３０ｎｍの螢光を発生する色素であって、
肝臓の生理学的機能を測定するために使用された。肝臓の生理学的機能を測定す
るため、身体の一部分を波長約７８０ｎｍの光で照射した。肝細胞の生理学また
は肝機能は本件特許請求項の方法を使用して測定された。
【００５８】 フルオレッセイン標識サクシニル化ポリ−Ｄ−リジンは波長約５１８ｎｍの螢
光を発生する色素であって、腎臓の生理学的機能を測定するために使用された。
腎臓の生理学的機能を測定するため、身体の一部分を波長約４８８ｎｍの光で照
射した。腎機能は本発明の前記方法を使用して測定された。図２参照。
【００５９】 これらの色素は静脈注射した。皮膚表面近くの血球を含む身体の部分はレーザ
ー光または赤外線で照射した。
【００６０】 ここに特許請求する発明はまた過コレステロール血症を評価するために使用す
ることができる。クリアランス速度の測定は、高い血清コレステロール値がＬＤ
Ｌ産生速度の上昇またはＬＤＬクリアランス速度の低下のいずれによるかを臨床
医が診断することを可能にするであろう。この診断は治療法に影響を与える。
【００６１】 ここに特許請求する発明を心拍出量の測定に使用することができる。心機能を測
定しながら同時に肝機能および腎機能も測定する性能は肝機能および腎機能に観
察された変化が腎臓病または肝臓病に一次的に由来するか、または心臓病から二
次的に由来するか、の何れかについて臨床医が予備的結論を導くことを可能にす
るであろう。
【００６２】 ここに記載された態様について多くの修正、変化および細部の変更を行っても
よいが、前記記載におけるおよび添付する図面における全ての事柄は例示的なも
のとして解釈すべきことが意図されており、限定的意図があると解釈すべきでは
ない。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は一態様による生体内螢光検出装置の模式的表示である。
【図２】 図２は腎結紮前（正常）および腎結紮後（結紮）のラットにおけ
る、ＦＩＴＣ標識サクシニル化ポリ−Ｄ−リジン全量単回注射後の生体内螢光の
時間依存性グラフである。実線は測定データに対する単一指数適合曲線（single
exponential fit）である（励起光４８８ｎｍ、放射光を５１８ｎｍで観察）。
【図３】 図３はＩＣＧ全量単回注射後のラット３匹に対する、生体内螢
光の時間依存性を示すグラフである。実線は測定データに対する単一指数適合曲
線である。
【図４】 図４はラット１匹における一連に設定された注射反復後の生体内
螢光の時間依存性を示すグラフである。時間的な経過は次の通りである：ＩＣＧ
（ＩＣＧ−１）、ＦＩＴＣのみ、食塩水のみ、再びＩＣＧ（ＩＣＧ−２）。
【図５】 図５は肝部分切除前（正常）および肝部分切除後（切除）のラッ
ト１匹におけるＩＣＧ全量単回注射後の生体内螢光の時間依存性を示すグラフで
ある。実線は測定データに対する単一指数適合曲線である。
【図６】 図６はフルオレッセイン−ポリアスパラギン酸（６０００）コン
ジュゲートの血液クリアランスプロファイルを示す。
【図７】 図７はフルオレッセイン−ポリアスパラギン酸（１００００）コ
ンジュゲートの血液クリアランスプロファイルを示す。
【図８】 図８はフルオレッセイン−ポリグルタミン酸（１３０００）コン
ジュゲートの血液クリアランスプロファイルを示す。
【図９】 図９はフルオレッセイン−ポリアルギニン（１００００）コンジ
ュゲートの血液クリアランスプロファイルを示す。
【図１０】 図１０はインドシアニン−モノ（ポリアスパラギン酸２０００
）およびインドシアニン−ビス（ポリアスパラギン酸２０００）の血液クリアラ
ンスプロファイルを示す。
【図１１】 図１１はインドシアニン（ポリアスパラギン酸６０００）の血
液クリアランスプロファイルを示す。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１３年５月４日（２００１．５．４）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ラガバン・ラジャゴパラン アメリカ合衆国63043ミズーリ州メリーラ ンド・ハイツ、ビンソン・コート13031番 (72)発明者 ジョゼフ・エドワード・ブガジュ アメリカ合衆国63303ミズーリ州セント・ チャールズ、ケッタリング・ドライブ2916 番 Ｆターム(参考） 4C085 HH11 JJ01 KA27 KB41 KB54 KB55 KB56 KB57 KB70 KB82 KB91 LL05 LL11

Claims (23)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 腎細胞または肝細胞から成る群から選択される患者体内の一
    群の細胞の生理学的機能を測定する方法であって： ａ）電磁波を放射する検出可能な物質を選択する段階、ただし該物質は該患者
    の身体内の体液から該患者体内にある該細胞群によって選択的に除去されるもの
    であり、そして、該放射は該患者体内にある該体液内で生じるものである； ｂ）患者の該体液中に該物質を導入する段階、ただし、この体液は該患者体内
    の該細胞群に接触するものであり、そして、該放射は該体液内で生じるものであ
    る； ｃ）該体液が通過する該患者の身体部分からの該放射を測定する段階、ただし
    、該放射が該測定時点で該体液からまだ除去されていない物質から生じるもので
    ある；および ｄ）該放射の測定に基づいて該生理学的機能を測定する段階； の各段階を包含する方法。 但し、該物質は、第二波長の光で照射されると第一波長で螢光を発する色素を
    含むものであり、そして該色素は、生理学的に許容されるポリアニオン性キャリ
    ヤーにコンジュゲートされているものであり； そして該測定段階に先立って、該体液が通過する該身体部分を該第二波長の光
    で照射して該色素が該第一波長で螢光を発するようにするものであり； そして測定される該放射が該色素の該第一波長での螢光であり；さらに 生理学的機能の該測定が該第一波長での螢光の測定に基づくものである。
  2. 【請求項２】 該色素が、フェニルキサンテン類、フェノチアジン類、フェ
    ノセレナジン類、シアニン類、インドシアニン類およびスクアライン類から成る
    群から選択される、請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 該生理学的に許容されるポリアニオン性キャリヤーが、ポリ
    アクリル酸、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリヌクレオチド、ポリ
    アルギニン、ポリセリン、ポリオルニチンおよびポリリジンから成る群から選択
    される、請求項１に記載の方法。
  4. 【請求項４】 該物質が、 フルオレッセイン−ポリアスパラギン酸、 フルオレッセイン−ポリグルタミン酸、 フルオレッセイン−ポリアクリル酸、 フルオレッセイン−ポリヌクレオチド、 フルオレッセイン−ポリニトロフェニルアラニン、 フルオレッセイン−ポリジニトロフェニルアラニン、 フルオレッセイン−ポリトリニトロフェニルアラニン、 フルオレッセイン−ポリスルホニルフェニルアラニン、 フルオレッセイン−ポリジスルホニルフェニルアラニン、 フルオレッセイン−ポリトリスルホニルフェニルアラニン、 フルオレッセイン−ポリサクシネート、 フルオレッセイン−ポリマロネート、 フルオレッセイン−ポリグルタレート、 フルオレッセイン−ポリグリコレート、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリアスパラギン酸、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリグルタミン酸、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリアクリル酸、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリヌクレオチド、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリニトロフェニルアラニン、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリジニトロフェニルアラニン、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリトリニトロフェニルアラニン
    、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリスルホニルフェニルアラニン
    、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリジスルホニルフェニルアラニ
    ン、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリトリスルホニルフェニルアラ
    ニン、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリサクシネート、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリマロネート、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリグルタレート、 ビス（ヘキサン酸）インドシアニングリーン−ポリグリコレート、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリアスパラギン酸、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリグルタミン酸、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリアクリル酸、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリヌクレオチド、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリニトロフェニルアラニン、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリジニトロフェニルアラニン、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリトリニトロフェニルアラニン
    、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリスルホニルフェニルアラニン
    、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリジスルホニルフェニルアラニ
    ン、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリトリスルホニルフェニルアラ
    ニン、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリサクシネート、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリマロネート、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリグルタレート、 ビス（プロパン酸）インドシアニングリーン−ポリグリコレート、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリアスパラギン酸、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリグルタミン酸、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリアクリル酸、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリヌクレオチド、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリニトロフェニルアラニン、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリジニトロフェニルアラニン、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリトリニトロフェニルアラニン、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリスルホニルフェニルアラニン、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリジスルホニルフェニルアラニン、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリトリスルホニルフェニルアラニン、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリサクシネート、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリマロネート、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリグルタレート、 ビス（ベンゾチアゾール）スクアラインポリグリコレート、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリアスパラギン酸、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリグルタミン酸、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリアクリル酸、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリヌクレオチド、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリニトロフェニルアラニン、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリジニトロフェニルアラニン、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリトリニトロフェニルアラニン
    、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリスルホニルフェニルアラニン
    、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリジスルホニルフェニルアラニ
    ン、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリトリスルホニルフェニルアラ
    ニン、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリサクシネート、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリマロネート、 ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリグルタレート、および ビス（トリヒドロキシフェニル）スクアラインポリグリコレート から成る群から選択される色素である、請求項１に記載の方法。
  5. 【請求項５】 ｂ）からｄ）までの各段階を、生理学的機能が変化するかど
    うかを測定するために反復する、請求項１に記載された方法。
  6. 【請求項６】 該物質を注射する、請求項１に記載された方法。
  7. 【請求項７】 該物質を脈管内注射する、請求項１に記載された方法。
  8. 【請求項８】 該身体部分が、該患者の皮膚表面近くの血管を含む、請求項
    １に記載された方法。
  9. 【請求項９】 該第二波長が約４００〜１２００ナノメーターである、請求
    項１に記載された方法。
  10. 【請求項１０】 該第二波長が約４８８ナノメーターである、請求項１に記
    載された方法。
  11. 【請求項１１】 該身体部分をレーザーで照射する、請求項１に記載された
    方法。
  12. 【請求項１２】 該身体部分を赤外線で照射する、請求項１に記載された方
    法。
  13. 【請求項１３】 該身体細胞が腎細胞である、請求項１に記載された方法。
  14. 【請求項１４】 該身体細胞が肝細胞である、請求項１に記載された方法。
  15. 【請求項１５】 該第一波長が約８３０ナノメーターである、請求項１に記
    載された方法。
  16. 【請求項１６】 該第一波長が約５１８ナノメーターである、請求項１に記
    載された方法。
  17. 【請求項１７】 該生理学的機能が腎機能である、請求項１に記載された方
    法。
  18. 【請求項１８】 該生理学的機能が肝機能である、請求項１に記載された方
    法。
  19. 【請求項１９】 該放射を該身体部分に関して侵襲的または非侵襲的に測定
    する、請求項１に記載された方法。
  20. 【請求項２０】 該放射を内視鏡で測定する、請求項１９に記載された方法
    。
  21. 【請求項２１】 さらに、該放射を測定するために該身体部分にカテーテル
    を挿入する段階を含む、請求項１９に記載された方法。
  22. 【請求項２２】 該身体部分が患者の耳である、請求項１９に記載された方
    法。
  23. 【請求項２３】 該身体部分が患者の指である、請求項１９に記載された方
    法。
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