JP2002527489A - 腎疾患および関連疾患に対する予想および治療的遺伝子およびタンパク質 - Google Patents

腎疾患および関連疾患に対する予想および治療的遺伝子およびタンパク質

Info

Publication number
JP2002527489A
JP2002527489A JP2000576873A JP2000576873A JP2002527489A JP 2002527489 A JP2002527489 A JP 2002527489A JP 2000576873 A JP2000576873 A JP 2000576873A JP 2000576873 A JP2000576873 A JP 2000576873A JP 2002527489 A JP2002527489 A JP 2002527489A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
protein
nucleic acid
gene
disease
proteins
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
JP2000576873A
Other languages
English (en)
Inventor
リチャード エイ． シムケッツ，
Original Assignee
キュラゲン コーポレイション
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by キュラゲン コーポレイション filed Critical キュラゲン コーポレイション
Publication of JP2002527489A publication Critical patent/JP2002527489A/ja
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A61K38/1748—Keratin; Cytokeratin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1777—Integrin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/215—IFN-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/44—Oxidoreductases (1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/45—Transferases (2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4813—Exopeptidases (3.4.11. to 3.4.19)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4853—Kallikrein (3.4.21.34 or 3.4.21.35)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/11—Aminopeptidases (3.4.11)
    • C12Y304/11002—Membrane alanyl aminopeptidase (3.4.11.2), i.e. aminopeptidase N
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
    • G01N33/5023—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects on expression patterns
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A01K2217/052—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic) inducing gain of function
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physiology (AREA)

Abstract

(57)【要約】 本発明は、高血圧の動物モデルにおいて非高血圧コントロールに比べて差示的に発現される１６の遺伝子を開示する。特に、コントロールＡＣＩ系統のラットに比べて、淡横褐色状（ｆａｗｎ−ｈｏｏｄｅｄ）ラット（ＦＨＲ）系統および近縁種ＩＲＬラット系統において差示的に発現される１６の遺伝子が、同定された。腎不全、血小板貯蔵プール疾患（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｓｔｏｒａｇｅ−ｐｏｏｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、高血圧、インスリン依存的真性糖尿病（ＩＤＤＭ）および／または他の関連疾患または関連障害を、これらの遺伝子およびこれらの遺伝子をコードする核酸を用いて処置するまたは予防するための治療法および／または予防法もまた、開示される。差示的に発現するタンパク質および核酸、ならびにその誘導体、フラグメントおよびアナログの検出による治療、予防、およびスクリーニングもまた、本明細書中に開示される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （関連出願） 本願は、それらの全体が本明細書中で参考として援用される、１９９８年１０
月２２日に出願されたＵＳＳＮ０９／１７７，２６４に対する優先権を主張する
。
【０００２】 （発明の分野） 本発明は、核酸および、さらに特に、腎疾患において発現される遺伝子に関す
る。
【０００３】 （背景） 高血圧、高脂血症および真性糖尿病は、世界中の何億もの個体を冒し、そして
、特に老年の個体の間での羅患率および死亡率の重要な部分の原因となる。これ
らの状況は、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）、冠状動脈の心臓疾患（ｃｏｒｏｎａｒｙ
ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ（ＣＨＤ））および発作（ｓｔｒｏｋｅ）のよう
な状態の発症に関する危険を増加し得る。例えば、ＥＳＲＤの７０％以上は、高
血圧と関連することが示されている。
【０００４】 高血圧、高脂血症および真性糖尿病に羅患する個体のすべてが、ＥＳＲＤ、Ｃ
ＨＤまたは発作を発症するわけではない。この可変性の根本的な機構は、現在ま
だ知られていない。
【０００５】 ＥＳＲＤ、ＣＨＤまたは発作の発達が、１つ以上の遺伝的な要素によって少な
くとも部分的に決定されることが、これまでに示されている。
【０００６】 （本発明の要旨） 本発明は、高血圧の動物モデルにおいて差示的に発現する遺伝子の発見に部分
的に基づく。さらに、本明細書中に開示されるのは、１６の差示的に発現する遺
伝子セット（本明細書中、以下で「ＧＥＮＥ ＳＥＴ」）、ならびにその誘導体
、フラグメント、アナログおよびホモログであり、これらは、コントロールラッ
ト系統と比べて、腎疾患の齧歯類モデルである淡横褐色状（ｆａｗｎ−ｈｏｏｄ
ｅｄ）ラット（ＦＨＲ）およびＩＲＬにおいて差示的に発現することが示されて
いる。これら差示的に発現する遺伝子は、表１に図示され、そして以下を含む：
亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼ（Ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ） Ｎ
）；内在性膜タンパク質のＲＴ１．Ｂ−１（α）鎖；Ｆ１Ｆ０ ＡＴＰａｓｅの
δサブユニット；ケラチン１９；脳カルビンディン−ｄ２８ｋ（ＣａＢＰ２８Ｋ
）；メタロプロテイナーゼ３の阻害タンパク質（ＴＩＭＰ−３）；内在性膜タン
パク質１（Ｉｔｍ１）；イソバレリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＩＶＤ）；ｒａ
ｂ ＧＤＩ−β；ＩＲＰＲ（ＩＦＮ−β）；有機カチオン輸送体（ＯＣＴ２）；
胆汁マヤリカルス（ｍａｙａｌｉｃｕｌｕｓ）ドメイン特異的糖タンパク質；Ｌ
−アルギニン：グリシンアミジノトランスフェラーゼ；タンパク質脱リン酸化酵
素１−β（ＰＰＩ−β）；腎臓カリクレインおよびｐ８タンパク質。
【０００７】 本発明はまた、腎不全、血小板貯蔵プール疾患（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｓｔｏｒ
ａｇｅ−ｐｏｏｌ ｄｉｓｅａｓｅ）、高血圧および／または他の関連疾患また
は関連障害を処置または予防するための治療法および／または予防法を開示する
。
【０００８】 差示的に発現されるＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質および核酸、ならびにその誘
導体、フラグメントおよびアナログの検出による治療法、予防法、およびスクリ
ーニング方法はまた、本発明によって開示される。治療キット、予防キットおよ
びスクリーニングキットもまた、本明細書中に開示される。
【０００９】 本発明のさらなる実施形態において、ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質、核酸なら
びに誘導体（そのフラグメントおよびアナログ）、そして抗ＧＥＮＥ ＳＥＴ抗
体の治療値をスクリーニングするアッセイもまた、提供される。さらに、本発明
はまた、腎疾患、血小板貯蔵プール疾患、高血圧および／または関連疾患もしく
は関連障害を発症するＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質活性または核酸活性のモジュ
レーター（すなわち、アクチベーターまたはインヒビター）のスクリーニングの
ための方法を開示する。
【００１０】 （発明の詳細な説明） 本発明は、腎不全のための実験動物モデル（すなわちラットのＦＨＲおよびＩ
ＲＬ系統）内で差次的に発現されることが示されている一群の遺伝子（以後「遺
伝子セット（ＧＥＮＥ ＳＥＴ）」遺伝子と称される）の新規な知見を開示する
。合計１６の差次的に発現される遺伝子セット遺伝子が特徴付けられる。本発明
の特定の実施形態では、遺伝子セットタンパク質または核酸（およびその誘導体
、フラグメントまたはアナログ）、ならびに抗遺伝子セット抗体は、ヒト血小板
貯蔵プール疾患、高血圧および好ましくは、腎疾患の治療または予防のための治
療薬として利用される。これらの差次的に発現される遺伝子は表１に例示され、
そして以下を含む：亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ）；内在性膜タン
パク質のＲＴ１．Ｂ−１（α）鎖；Ｆ１Ｆ０ ＡＴＰアーゼのδサブユニット；
脳カルビンディン−ｄ２８ｋ（ＣａＢＰ２８Ｋ）；メタロプロテイナーゼ３のイ
ンヒビタータンパク質（ＴＩＭＰ−３）；内在性膜タンパク質１（Ｉｔｍ１）；
イソバレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＩＶＤ）；ｒａｂＧＤＩ−β；ＩＲＰ
Ｒ（ＩＦＮ−β）；有機カチオン輸送体（ＯＣＴ２）；胆汁マヤリカラス（ｍａ
ｙａｌｉｃｕｌｕｓ）ドメイン特異的糖タンパク質；Ｌ−アルギニン：グリシン
アミジノトランスフェラーゼ；プロテインホスファターゼ１−β（ＰＰ１−β）
；腎カリクレインおよびｐ８タンパク質。さらに、薬学的組成物もまた開示され
る。
【００１１】 本発明のその他の実施形態は、診断目的のための、遺伝子セットに相同である
ヒト核酸配列またはアミノ酸配列の差次的発現による、腎機能の存在、または腎
機能の将来の機能障害についての診断、予後およびスクリーニングの方法に関す
る。１つの特定の実施形態では、被験体は、遺伝子セット遺伝子の調節不全につ
いてスクリーニングされる。
【００１２】 本発明はまた、腎機能障害の素質、または発症に影響する能力について遺伝子
セットをアッセイする方法、および遺伝子セットモジュレータ（すなわち、遺伝
子セットのアゴニスト、アンタゴニストおよびインヒビター）のスクリーニング
の方法を開示する。
【００１３】 （１）遺伝子セットの核酸およびコードされるタンパク質 この遺伝子セットのタンパク質（およびその誘導体、フラグメント、アナログ
およびホモログ）、ならびにこの遺伝子セットタンパク質（およびその誘導体、
フラグメント、アナログおよびホモログ）をコードする核酸が、本発明により提
供される。遺伝子セットタンパク質および核酸は、当該分野で公知の任意の方法
で得られ得る。特に、ヒト、ラット、ハムスター、イヌ、マウス、ウシ、ブタ、
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ、Ｘｅｎｏｐｕｓ、ウマ、お
よびサメの遺伝子セットアミノ酸配列およびヌクレオチド配列は、種々のパブリ
ックアクセスデータベース（例えばＧｅｎＢａｎｋ、ＥＭＢＬなど）において利
用可能である。
【００１４】 本発明の実施において、任意の真核生物細胞が、遺伝子セット核酸の単離のた
めの核酸供給源として潜在的に供され得る。これらの遺伝子セット核酸は、当該
分野で公知の標準的な手順により得られ得、これらには、制限されないで：（ｉ
）化学的合成；（ｉｉ）ｃＤＮＡクローニングによるか、または（ｉｉｉ）所望
の細胞から生成された、ゲノムＤＮＡ、またはそのフラグメントのクローニング
によることを含む。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；Ｇｌｏｖｅｒ、１９
８５、ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（
ＭＲＬ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｔｄ．、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｕ．Ｋ．）を参照のこと。しか
し、ゲノムＤＮＡに由来するクローンは、コード（エキソン）領域に加えて調節
および非コード（イントロン）ＤＮＡ領域を含み得ること；その一方、相補的Ｄ
ＮＡ（ｃＤＮＡ）に由来するクローンは、コードの、エキソン配列のみを含むこ
とに注意すべきである。
【００１５】 ｃＤＮＡからの遺伝子の分子クローニングでは、ｃＤＮＡは、総細胞ＲＮＡ、
またはｍＲＮＡから、当該分野で周知である方法により生成される。遺伝子はま
た、ゲノムＤＮＡから得られ得、ここではＤＮＡフラグメントが生成され（例え
ば、制限酵素を用いるか、または機械的剪断による）、これらのいくつかは、所
望のゲノム配列を所有する。次いで、直線状ＤＮＡフラグメントが、アガロース
およびポリアクリルアミドゲル電気泳動およびサイズ排除クロマトグラフィーを
含むがこれらに限定されない標準的な技法によって、サイズに従って分離され得
る。
【００１６】 一旦ＤＮＡフラグメントが生成されると、この遺伝子セット遺伝子のすべてま
たは一部分を含む特定のＤＮＡフラグメントの同定は、多くの方法で達成され得
る。遺伝子セット遺伝子を単離するための好適な方法は、ポリメラーゼ連鎖反応
（ＰＣＲ）による増幅により、これは、ゲノムまたはｃＤＮＡライブラリー中ま
たは、あるいはライブラリー中に取り込まれていないゲノムＤＮＡまたはｃＤＮ
Ａから、所望の遺伝子セット配列を増幅するために用いられ得る。遺伝子セット
配列にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマーを、ＰＣＲ仲介増幅反
応におけるプライマーとして利用し得る。利用されるこのオリゴヌクレオチドプ
ライマーの核酸配列は、増幅される特定のフラグメントの配列に依存し、そして
当業者によっと容易に確認され得る。
【００１７】 このような合成オリゴヌクレオチドは、好ましくは、ｃＤＮＡライブラリー由
来である目的の配列（ＲＮＡまたはＤＮＡ）のＰＣＲ仲介増幅でプライマーとし
て利用され得る。ＰＣＲは、例えば、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓサ
ーマルサイクラーおよびＴａｑポリメラーゼ（Ｇｅｎｅ Ａｍｐ（登録商標））
の使用により実施され得る。本発明の実施において、ＰＣＲ反応における使用の
ためにいくつかの異なる縮重プライマーを合成することを選択し得る。ＰＣＲ反
応をプライミングすることで利用されるハイブリダイゼーション条件のストリン
ジェンシーを変えることが可能であり、それ故、既知の遺伝子セットヌクレオチ
ド配列と、単離される遺伝子セットホモログの核酸配列との間のより大きい程度
またはより少ない程度の核酸配列ホモロジーを可能にする。特定の実施形態では
、低ストリンジェンシー条件が、交叉種ハイブリダイゼーションのために好まし
く；その一方、同種ハイブリダイゼーションには、適度にストリンジェントな条
件が好ましい。
【００１８】 遺伝子セットホモログのセグメントの成功した増幅の後、目的のそのセグメン
トは、分子クローニングされ、かつ配列決定され、そして次いで完全ｃＤＮＡま
たはゲノムクローンの単離におけるプローブとして利用され得る。これは、次に
、この遺伝子の完全ヌクレオチド配列の決定および単離を可能にする。あるいは
、ＰＣＲ増幅はまた、（例えば、以下のセクション４に記載される、診断、予後
およびスクリーニング方法のために）遺伝子セットｍＲＮＡレベルを検出および
定量するために利用され得る。
【００１９】 本発明の１つの実施形態では、（任意の種に由来する）この遺伝子セット遺伝
子の部分、またはその特異的ｍＲＮＡ、またはそのフラグメントは、単離および
標識され得る。次いで、この生成されたＤＮＡフラグメントは、標識されたプロ
ーブに対する核酸ハイブリダイゼーションによりスクリーニングされ得（Ｂｅｎ
ｔｏｎ ＆ Ｄａｖｉｓ、１９７７．Ｓｃｉｅｎｃｅ １９６：１８０；Ｇｒｕ
ｎｓｔｅｉｎ ＆Ｈｏｇｎｅｓｓ、１９７５．Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７２：３９６１）、そしてこのプローブに対して実質的なホ
モロジーを所有するようなＤＮＡフラグメントがハイブリダイズする。あるいは
、別の実施形態では、オリゴヌクレオチドプローブが合成および標識され得、こ
の標識されたオリゴヌクレオチドプローブに対する核酸ハイブリダイゼーション
によりスクリーニングされ得る。なお別の実施形態では、遺伝子セット核酸はま
た、例えば、初期選択のための抗遺伝子セット抗体を用いて、発現クローニング
により同定および単離され得る。
【００２０】 本発明の代替の実施形態では、当該分野で公知の方法を利用して、クローニン
グまたは増幅により遺伝子セットＤＮＡが得られ得る。これらの方法は、制限さ
れずに：（ｉ）既知の遺伝子セット配列からこの遺伝子配列自身を化学的に合成
すること；（ｉｉ）この遺伝子セットタンパク質をコードするｍＲＮＡ種に対す
るｃＤＮＡを生成すること、および本発明の範囲内のその他の方法を含む。一旦
クローンが得られると、その同一性は、当該分野で周知の任意の方法による核酸
配列決定によって確認され得、そして既知の遺伝子セット配列と比較される。Ｄ
ＮＡ配列分析方法は、制限されずに：（ｉ）化学的方法（例えば、Ｍａｘａｍ
＆ Ｇｉｌｂｅｒｔ．１９８０．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６５：４９９−５
６０）；（ｉｉ）ジデオキシヌクレオチド鎖停止方法（例えば、Ｓａｎｇｅｒら
、１９７７．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７４：５４
６３を参照のこと）；（ｉｉｉ）Ｔ7ＤＮＡポリメラーゼの使用（例えば、Ｔａ
ｂｏｒ ＆ Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ、米国特許第４，７９５，６９９号を参照の
こと）；（ｉｖ）自動化ＤＮＡ配列決定機（例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓ
ｙｓｔｅｍｓ；Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）の使用または（ｖ）Ｎａｎｄａ
ｂａｌａｎらによる１９９７年５月１日付けのＰＣＴ公開ＷＯ９７／１５６９０
に記載の方法、を含む。
【００２１】 遺伝子セット核酸または遺伝子セット誘導体をコードする核酸にハイブリダイ
ズし得る核酸は、低、高、または適度のストリンジェンシーの条件下、核酸ハイ
ブリダイゼーションにより単離され得る。限定されずに、例として、このような
低ストリンジェンシーの条件を用いるハイブリダイゼーション手順は次のようで
ある（例えば、Ｓｈｉｌｏ ＆ Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、１９８１．Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：６７８９−６７９２もまた参照のこと
）：固定化ＤＮＡを含むフィルターを：３５％ホルムアミド、５×ＳＳＣ，５０
ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ＰＶＰ、
０．１％Ｆｉｃｏｌ、１％ＢＳＡおよび５００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ
を含む溶液中４０℃で６時間プレハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション
を、以下の改変を持つ同じ溶液中で実施する：０．０２％ＰＶＰ、０．０２％Ｆ
ｉｃｏｌ、０．２％ＢＳＡ、１００μｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡ、１０％（ｗｔ／
ｖｏｌ）硫酸デキストランおよび５〜２０×１０6ｃｐｍ32Ｐ標識プローブ。次
いでこのフィルターを、ハイブリダイゼーション混合物中、１８−２０時間４０
℃でインキュベートし、そして２×ＳＳＣ、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ
７．４）、５ｍＭ ＥＤＴＡおよび０．１％ＳＤＳを含む溶液中５５℃で１．５
時間洗浄する。次いでこの洗浄溶液を、新鮮溶液で置換し、そしてこのフィルタ
ーを、６０℃でさらに１．５時間インキュベートする。このフィルターをブロッ
トして乾燥し、そしてオートラジオグラフィーにかける。必要であれば、このフ
ィルターを６５−６８℃で第３回目の洗浄を行い、そしてＸ線フィルムに再感光
する。当該分野で周知である（例えば、交叉種ハイブリダイゼーションに採用さ
れるような）低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションのその他の条件もま
た、本発明の実施で採用され得る。
【００２２】 例として、制限されずに、適度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション
のような条件を用いる手順は以下のようである：固定化ＤＮＡを含むフィルター
を：６×ＳＳＣ、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液、０．５％ＳＤＳおよび１００μｇ
／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含む溶液中５５℃で６時間プレハイブリダイズする
。ハイブリダイゼーションを同じ溶液中で実施し、そして５−２０×１０6ｃｐ
ｍ32Ｐ−標識プローブを用いる。このフィルターを、５５℃で１８−２０時間ハ
イブリダイゼーション混合物中でインキュベートし、次いで２×ＳＳＣ、０．１
％ＳＤＳを含む溶液中で１時間３７℃で２回洗浄する。このフィルターをブロッ
トして乾燥し、そしてオートラジオグラフィーにかける。当該分野で周知である
適度のストリンジェンシーのその他の条件もまた、本発明の実施で採用され得る
。
【００２３】 ここで再び、例として、制限されずに、高ストリンジェンシーハイブリダイゼ
ーションのような条件を用いる手順は以下のようである：固定化ＤＮＡを含むフ
ィルターのプレハイブリダイゼーションは、６×ＳＳＣ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−
ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＥＤＴＡ，０．０２％ＰＶＰ、０．０２％Ｆｉ
ｃｏｌｌ、０．０２％ＢＳＡ、および５００μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含
む緩衝液中６５℃で８時間〜一晩実施する。フィルターを：１００μｇ／ｍｌ変
性サケ精子ＤＮＡおよび５−２０×１０6ｃｐｍの32Ｐ標識プローブを含むプレ
ハイブリダイゼーション混合物中６５℃で４８時間ハイブリダイズする。フィル
ターの洗浄は、２×ＳＳＣ，０．０１％ＰＶＰ、０．０１％Ｆｉｃｏｌｌ、およ
び０．１％ＢＳＡを含む溶液中で１時間３７℃で実施する。次いで、オートラジ
オグラフィーの前に４５分間５０℃で０．１×ＳＳＣ中の第３回目の洗浄を行う
。当該分野で周知である高ストリンジェンシーのその他の条件もまた、本発明の
実施で採用され得る。
【００２４】 遺伝子セットタンパク質の誘導体およびアナログをコードする核酸、遺伝子セ
ット対立遺伝子および遺伝子セット遺伝子発現を検出するために利用され得る遺
伝子セットアンチセンス核酸およびプライマーが、本発明によりさらに開示され
る。
【００２５】 遺伝子セットタンパク質（および遺伝子セットタンパク質の誘導体、アナログ
およびフラグメント）は、制限されずに、組換え発現方法，天然供給源からの生
成、および化学的合成を含む、当該分野で公知の任意の方法によって得られ得る
。本発明の１つの実施形態では、遺伝子セットタンパク質は、組換えタンパク質
発現技法により得られ得；ここでこの目的の遺伝子セット遺伝子（またはその部
分）は、特定の宿主細胞内の次の発現のために適切なクローニングベクター中に
連結される。多数のベクター−宿主系が当該分野で公知であり、制限されないで
、バクテリオファージ（例えば、λファージおよび誘導体）または細菌プラスミ
ド（例えばｐＢＲ３２２またはｐＵＣプラスミド誘導体またはＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（登録商標）ベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ：Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）
）を含む。クローニングベクター中への挿入は、例えば、このＤＮＡフラグメン
トを、相補的な粘着末端を所有するクローニングベクター中に連結することによ
り達成され得る。しかし、この挿入ＤＮＡを消化するために利用される制限エン
ドヌクレアーゼ（ＲＥ）のための相補的制限部位が、クローニングベクター内に
存在しない場合、このＤＮＡ分子の末端は酵素的に改変され得る（例えば、ＤＮ
ＡポリメラーゼＩのＫｌｅｎｏｗフラグメント）。あるいは、所望される任意の
部位は、オリゴヌクレオチド配列（すなわちリンカー）をこのＤＮＡ末端上に連
結することにより生成され得る。さらに、これらの連結されたリンカーはまた、
ＲＥ認識配列、ＤＮＡ配列−特異的ＤＮＡ−結合タンパク質結合部位などをコー
ドする、特異的な、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドを含み得る。本発明
の代替の実施形態では、ＲＥ消化ベクターおよび目的の遺伝子セット遺伝子は、
末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）を用いるホモポリマ
ー性テイリングにより改変され得る。この組換え分子は、次いで、形質転換、ト
ランスフェクション、感染、エレクトロポレーションなどにより宿主細胞中に導
入され得、その結果、遺伝子配列の複数のコピーが生成される。
【００２６】 代替の実施形態では、所望の遺伝子は、「ショットガン」アプローチで、適切
なクローニングベクター中への挿入後に同定かつ単離され得る。所望の遺伝子の
濃縮（例えば，サイズ分画による）は、目的の配列のクローニングベクター中へ
の挿入前に実施され得る。
【００２７】 ｃＤＮＡおよびゲノム配列の両方の分子クローニングおよび発現が、本発明の
範囲内であることに注意すべきである。その特定の実施形態では、単離された遺
伝子セット遺伝子、ｃＤＮＡまたは合成されたＤＮＡ配列を取り込んだ組換えＤ
ＮＡ分子を用いる宿主細胞の形質転換は、この遺伝子の複数コピーの生成を可能
にする。従って、この遺伝子セット遺伝子配列は、この形質転換体のインビトロ
培養、この形質転換体から組換えＤＮＡ分子を単離すること、単離された組換え
ＤＮＡから挿入された遺伝子を回収することにより大量に得られ得る。
【００２８】 次いで、遺伝子セットタンパク質（またはその機能的に活性なアナログ、フラ
グメントまたは誘導体）をコードするヌクレオチド配列を、適切な発現ベクター
（すなわち、挿入されたタンパク質コード配列の転写および翻訳のために必要な
（外因性）調節エレメントを含むベクター）中に挿入し得る。代替の特定の実施
形態では、必要とされる転写および翻訳調節シグナルは、天然の（内因性）遺伝
子セット遺伝子および／またはその隣接領域により提供され得る。種々の宿主−
ベクター系を利用して、タンパク質コード配列を発現し得、制限されずに：（ｉ
）ウイルス（例えば、ワクチニアウイルス、アデノウイルスなど）で感染された
哺乳動物細胞系；（ｉｉ）ウイルス（例えば、バキュロウイルス）で感染した昆
虫細胞系；（ｉｉｉ）酵母ベクターを含む酵母のような微生物、または（ｉｖ）
バクテリオファージ、ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡで形質
転換された細菌を含む。ベクターの発現エレメントは、それらの強度および特異
性で変わり得、そして利用される宿主−ベクター系に依存し、多くの適切な転写
および翻訳エレメントの任意の１つを利用し得る。
【００２９】 同様に、ベクター中へのＤＮＡフラグメントの挿入のために利用される任意の
方法は、適切な転写／翻訳制御シグナルおよびタンパク質コード配列からなるキ
メラ遺伝子を含む発現ベクターを構築するために用いられ得る。これらの方法は
、制限されずに、インビトロ組換えＤＮＡおよび合成技法およびインビボ組換え
体（遺伝的組換え）を含む。遺伝子セットタンパク質またはペプチドフラグメン
トをコードする核酸配列の発現は、第二の核酸配列によって、この遺伝子セット
タンパク質（または誘導体、フラグメントまたはアナログ）が、組換えＤＮＡ分
子で形質転換された宿主中で発現されるように調節され得る。例えば、遺伝子セ
ットタンパク質の発現は、当該分野で公知の任意のプロモーター／エンハンサー
エレメントにより制御され得る。本発明の特定の実施態様では、このプロモータ
ーは、遺伝子セットタンパク質の遺伝子にネイティブではない。利用され得るプ
ロモーターは、制限されずに：（ｉ）ＳＶ４０初期プロモーター（Ｂｅｒｎｏｉ
ｓｔ ＆ Ｃｈａｍｂｏｎ、１９８１．Ｎａｔｕｒｅ ２９０：３０４−３１０
を参照のこと）；（ｉｉ）ラウス肉腫ウイルスの３’末端長末端反復中に含まれ
るプロモーター（例えば、Ｙａｍａｍｏｔｏら、１９８０．Ｃｅｌｌ ２２：７
８７−７９７を参照のこと）；（ｉｉｉ）ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプ
ロモーター（例えば、Ｗａｇｎｅｒら、１９８１．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１４４１−１４４５を参照のこと）；（ｉｖ）メタ
ロチオネイン遺伝子の調節配列（例えば、Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、１９８２．Ｎａ
ｔｕｒｅ ２９６：３９−４２を参照のこと）；（ｖ）βラクタマーゼプロモー
ターのような原核生物発現ベクター（例えば、Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆら
、１９７８．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７５：３７２７
−３７３１）または（ｖｉ）ｔａｃプロモーター（例えば、ＤｅＢｏｅｒら、１
９８３．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２１−２５を
参照のこと）。さらに、組織特異性を示し、そしてトランスジェニック動物で利
用されている動物転写制御領域もまた利用され得る。これらの転写制御領域は、
制限されずに：（ｉ）膵臓腺房細胞中で活性なエラスターゼＩ遺伝子制御領域（
例えば、Ｓｗｉｆｔら、１９８４．Ｃｅｌｌ ３８：６３９−６４６を参照のこ
と）；（ｉｉ）膵臓β細胞で活性なインスリン遺伝子制御領域（例えば、Ｈａｎ
ａｈａｎら、１９８５．Ｎａｔｕｒｅ ３１５：１１５−１２２を参照のこと）
；（ｉｉｉ）リンパ細胞で活性な免疫グロブリン遺伝子制御領域（例えば、Ａｌ
ｅｘａｎｄｅｒら、１９８７．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．７：１４３６−１
４４４を参照のこと）；（ｉｖ）精巣細胞、乳細胞、リンパ細胞およびマスト細
胞で活性なマウス乳癌ウイルス制御領域（例えば、Ｌｅｄｅｒら、１９８６．Ｃ
ｅｌｌ ４５：４８５−４９５を参照のこと）；（ｖ）肝臓で活性なαフェトプ
ロテイン遺伝子制御領域（例えば、Ｋｒｕｍｌａｕｆら、１９８５．Ｍｏｌ．Ｃ
ｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５：１６３９−１６４８を参照のこと）；（ｖｉ）骨髄細胞
で活性なβグロビン遺伝子制御領域（例えば、Ｋｏｌｌｉａｓら、１９８６．Ｃ
ｅｌｌ ４６：８９−９４を参照のこと）および（ｖｉｉ）骨格筋で活性なミオ
シン軽鎖２遺伝子制御領域（例えば、Ｓａｎｉ、１９８５．Ｎａｔｕｒｅ ３１
４：２８３−２８６を参照のこと）。
【００３０】 本発明の特定の実施形態では：（ｉ）遺伝子セットタンパク質、またはそのフ
ラグメント、誘導体またはホモログをコードする核酸配列に作動可能に連結され
たプロモーター；（ｉｉ）１つ以上の複製起点、および必要に応じて（ｉｉｉ）
１つ以上の選択マーカー（例えば、抗生物質耐性遺伝子）を含むベクターが利用
される。
【００３１】 本発明の好適な実施形態では、遺伝子セットタンパク質をコードする核酸配列
に作動可能に連結されたプロモーター、１つ以上の複製起点、および１つ以上の
選択マーカーを含むベクターか利用される。例えば、特定の実施形態では、発現
構築物は、遺伝子セットコード配列を、３つのｐＧＥＸベクター（グルタチオン
Ｓ−トランスフェラーゼ発現ベクター：Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ．１９
８８．Ｇｅｎｅ ７：３１−４０）の各々のＥｃｏＲＩ制限部位中にサブクロー
ニングすることにより作製され、それ故、正確な読み取り枠でのサブクローンか
ら、遺伝子セットタンパク質産物の発現を可能にする。
【００３２】 本発明の特定の実施形態では、遺伝子セット挿入片を含む発現ベクターは、３
つの一般的アプローチにより同定され得る：（ｉ）核酸ハイブリダイゼーション
、（ｉｉ）「マーカー」遺伝子機能の存在または不在、および（ｉｉｉ）挿入さ
れた配列の発現。第１のアプローチでは、発現ベクター中に挿入された遺伝子セ
ットの存在は、挿入された遺伝子セットに相同である配列を含むプローブを用い
る核酸ハイブリダイゼーションにより検出され得る。第２のアプローチでは、組
換えベクター／宿主系は、ベクター中の遺伝子セット遺伝子の挿入によって引き
起こされる、特定の「マーカー」遺伝子機能（例えば、チミジンキナーゼ活性、
抗生物質に対する耐性、形質転換表現型、バキュロウイルス中の封入体形成など
）の存在または不在に基いて同定かつ選択され得る。例えば、この遺伝子セット
遺伝子が、ベクターのマーカー遺伝子配列内に挿入される場合、この遺伝子セッ
ト挿入片を含む組換体は、このマーカー遺伝子機能の不在により同定され得る。
第３のアプローチでは、組換え発現ベクターは、この組換体により発現されるこ
の遺伝子セット産物をアッセイすることにより同定され得る。このようなアッセ
イは、例えば、インビトロアッセイ系におけるこの遺伝子セットタンパク質の物
理的または機能的性質（例えば、抗遺伝子セット抗体または遺伝子セットレセプ
ターとの結合）に基き得る。
【００３３】 一旦特定の組換えＤＮＡ分子が同定かつ単離されると、当該分野で公知のいく
つかの方法が増殖のために利用され得る。一旦適切な宿主系および増殖条件が確
率されると、組換え発現ベクターを増殖し、そして大量に調製し得る。先に説明
したように、用いられ得る発現ベクターは、制限されずに以下のベタクーまたは
それらの誘導体を含む：（ｉ）ヒトまたは動物ウイルス（例えば、ワクチニアウ
イルスまたはアデノウイルス）；（ｉｉ）昆虫ウイルス（例えば、バキュロウイ
ルス）；（ｉｉｉ）酵母ベクター；（ｉｖ）バクテリオファージベクター（例え
ば、λ）；（ｖ）プラスミドおよびコスミドＤＮＡベクターなど。
【００３４】 さらなる実施形態では、挿入された配列の発現を調整するか、または所望の特
異的な様式で遺伝子産物を改変およびプロセッシングする宿主細胞が選択され得
る。特定のプロモーターからの発現は、特定のインデューサの存在下で上昇し得
；従って、遺伝子操作された遺伝子セットタンパク質の発現が制御され得る。さ
らに、異なる型の宿主細胞は、翻訳および翻訳後プロセッシングおよび改変（例
えば、タンパク質のグリコシル化、リン酸化など）のための特徴的および特異的
機構を所有する。適切な細胞株および宿主系を選択し、発現される外来タンパク
質の所望の改変およびプロセッシングを確実にする。例えば、細菌系における発
現は、非グリコシル化コアタンパク質産物を産生するために用いられ得；その一
方酵母における発現は、グリコシル化産物を産生する。哺乳動物細胞における発
現は、異質タンパク質の「ネイティブ」のグリコシル化を確実にするために用い
られ得る。さらに、異なるベクター／宿主発現系は、変動する程度まで これらのプロセッシング機構を行い得る。
【００３５】 本発明の他の特定の実施形態では、この遺伝子セットタンパク質（または誘導
体、フラグメントまたはアナログ）は、融合またはキメラタンパク質産物として
発現され得る（すなわち、ペプチド結合を経由して異なるタンパク質の異種タン
パク質配列に結合したタンパク質、フラグメント、アナログ、または誘導体を含
む）。このようなキメラ産物は、所望のアミノ酸配列をコードする適切な核酸配
列を、（適正なコーディングフレームにある）方法によって互いに連結すること
、および当該分野で周知の方法によりこのキメラ産物を発現することにより産生
され得る。代替の実施形態では、キメラ産物は、タンパク質合成技法により（例
えば、ペプチド合成機の使用により）生成される。
【００３６】 この遺伝子セットタンパク質はまた、クロマトグラフィー（例えば、イオン交
換、アフィニティー、および分画クロマトグラフィー）、遠心分離、差次的溶解
度を含む標準的な方法によって、または当該分野で公知の任意のその他の標準的
なタンパク質の精製技法によって単離および精製され得る。次いで、単離された
タンパク質の機能的性質は、任意の適切なアッセイの使用により確認および評価
され得る。あるいは、目的のタンパク質は、当該分野で公知の多くの化学的方法
により合成され得る（例えば、Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら、１９８４．Ｎａｔｕ
ｒｅ ３１０：１０５−１１１）。
【００３７】 本発明の別の代替の実施形態では、ネイティブな遺伝子セットタンパク質は、
前述に記載のような標準的な方法（例えば、免疫アフィニティー精製）を利用し
て天然の供給源から精製され得る。
【００３８】 （２）腎疾患の処置の方法 本発明は、１つ以上の本発明の治療化合物（以後「治療薬」と称する）の投与
による、腎疾患（主に腎不全、および好ましくは急性腎不全）および血小板貯蔵
疾患を処置および予防する方法を開示する。特定の実施形態では、本発明のこの
「治療薬」は：亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ）；内在性膜タンパク
質のＲＴ１．Ｂ−１（α）鎖；Ｆ１Ｆ０ ＡＴＰアーゼのδサブユニット；脳カ
ルビンディン−ｄ２８ｋ（ＣａＢＰ２８Ｋ）；メタロプロテイナーゼ３のインヒ
ビタータンパク質（ＴＩＭＰ−３）；内在性膜タンパク質１（Ｉｔｍ１）；イソ
バレリル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＩＶＤ）；ｒａｂＧＤＩ−β；ＩＲＰＲ（
ＩＦＮ−β）；有機カチオン輸送体（ＯＣＴ２）；胆汁マヤリカラス（ｍａｙａ
ｌｉｃｕｌｕｓ）ドメイン特異的糖タンパク質；Ｌ−アルギニン：グリシンアミ
ジノトランスフェラーゼ；プロテインホスファターゼ１−β（ＰＰ１−β）；腎
カリクレインおよびｐ８タンパク質（およびそれらの誘導体、フラグメント、ア
ナログおよびホモログ）、ならびにこれらタンパク質（およびそれらの誘導体、
フラグメントおよびアナログ）をコードする核酸配列（すなわち、この遺伝子セ
ット遺伝子）のいずれかを含み得る。
【００３９】 本発明の実施において、この治療薬が投与される被験体は、好ましくは動物で
あり、制限されないで、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどを含むよ
うな、好ましくは動物であり、そしてより好ましくは哺乳動物である。本発明の
最も好適な実施形態では、被験体はヒトである。一般に、被験体の種起源または
種反応性（抗体の場合）の産物と同じ種由来である産物の投与が好適な実施形態
である。従って、好適な実施形態では、ヒト遺伝子セットタンパク質（またはそ
の誘導体、フラグメントまたはアナログ）または核酸（そのアンチセンス核酸配
列を含む、その誘導体、フラグメントまたはアナログ）が、治療的に、または予
防的にヒト患者に投与される。
【００４０】 好適な実施形態では、本発明の治療薬は、腎不全または腎疾患、好ましくは、
急性腎不全を患っているか、患う危険性にある患者に治療的に、および好ましく
は予防的に投与される。
【００４１】 本発明の治療薬は、単独または他の治療剤（例えば、腎障害の処置または予防
に有効である薬学的組成物）との組み合わせのいずれかで投与され得る。治療薬
はまた、コレステロールレベルを低減する、肥満を処置する、インスリン依存性
えよびインスリン非依存性糖尿病（ＩＤＤＭ、ＮＩＤＤＭ）を処置するなどの治
療薬を含むがこれらに限定されない，特定のリスクファクターの影響を処置また
は改善する薬物と同時に投与され得る。本発明の好適な実施形態では、治療薬は
、１つ以上の抗高血圧薬物と投与され、これには、制限されないで：（ｉ）交感
神経遮断剤（例えば、プロプラノロル、アテノロル、ナドロル、ラベタロル、プ
ラゾシン、テラゾシン、ドクサゾシン、クロニジン、グゲネアシン、メチルドパ
、レセルピンなど）；（ｉｉ）アンギオテンシンインヒビター（例えば、ベナゼ
プリル、カプトプリル、エナラプリル、ロサルタン）；（ｉｉｉ）カルシウムチ
ャネルブロッカー（例えば、ジルチアゼム、フェロジピン、イスラジピン、ニフ
ェジピン、ベラパミル）；（ｉｖ）利尿剤（例えば、ベンジオフルメチアジド、
ベンズチアジドおよびハイドロクロロチアジドのようなチアジド；ブメタニド、
エタクリン酸、フロセミド、およびトルセミドのようなループ利尿剤；アミロリ
ド、スピロノラクトンおよびトリアメトレンのようなカリウム節約利尿剤、なら
びに種々の他の型の利尿剤およびヒドララジンおよびミノキシジルのような血管
拡張薬）が含まれる。
【００４２】 腎疾患の処置または予防のための処置または予防養生法を、同時に他の潜在的
に関連する疾患または傷害（例えば高血圧）を同時に処置または予防しながら、
モニターおよび調節することは、当業者の技術の範囲内であることに注意すべき
である。
【００４３】 （Ａ）遺伝子治療 本発明の特定の実施形態では、遺伝子セット（またはその誘導体、フラグメン
トまたはアナログ）をコードする配列、または遺伝子セットアンチセンス核酸は
、遺伝子治療方法を利用して投与される。遺伝子治療は、特定の核酸（または誘
導体、フラグメントまたはアナログ）またはアンチセンス核酸の、そのような処
置の必要な被験体への投与により実施される治療をいう。本発明の実施形態では
、この核酸は、治療的効果を仲介する、そのコードされたタンパク質またはアン
チセンス核酸を産生する。
【００４４】 当該分野で公知の遺伝子治療の任意の方法が、本発明の実施に利用され得る。
遺伝子治療の方法の一般的な総説は、例えば、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら、１９９３
．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５；Ｗｕ ＆ Ｗｕ、１９
９１．Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５；Ｍｕｌｌｉｇａｎ、１９９３．
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３２；Ｗｕ ＆ Ｗｕ、１９９１．Ｂｉｏ
ｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ、１９９３．Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｏｒ
ｇａｎ ＆ Ａｎｄｅｒｓｏｎ、１９９３．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
６２：１９１−２１７およびＭｏｒｇａｎ ＆ Ａｎｄｅｒｓｏｎ、１９９３．
ＴＩＢＴＥＣＨ １１：１５５−２１５を参照のこと。
【００４５】 好ましい局面では、本発明の治療薬は、遺伝子セットタンパク質（またはその
誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログ）、好ましくは遺伝子セットタ
ンパク質（またはその誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログ）を含む
、キメラタンパク質またはその遺伝子セットアンチセンス核酸を、適切な宿主内
で発現する発現ベクターの一部分である、遺伝子セット核酸を含む。特定の実施
形態では、このような核酸は、遺伝子セットコード領域に、または遺伝子セット
アンチセンス核酸に作動可能に連結されるプロモーターを所有し；ここでこのプ
ロモーターは、誘導性または構成的であり、そして必要に応じて組織特異的であ
る。別の特定の実施形態では、核酸分子が利用され、ここでは、遺伝子セットコ
ード配列（および任意の他の所望の配列）は、ゲノム内の所望の部位で相同的組
換えを促進し、それ故、この遺伝子セット核酸の染色体内発現を提供する領域に
よって隣接されている。例えば、Ｋｏｌｌｅｒ ＆ Ｓｍｉｔｈｉｅｓ、１９８
９．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３
５；Ｚｉｊｌｓｔａら、１９８９．Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８を参
照のこと。
【００４６】 本発明の好適な実施形態では、本発明の治療薬は、適切な宿主内で、この遺伝
子セットタンパク質（またはその誘導体、フラグメント、アナログまたはキメラ
タンパク質）を発現する発現ベクターの一部分である遺伝子セット核酸を含む。
特にこのような核酸は、この遺伝子セットコード領域（単数または複数）に作動
可能に連結されたプロモーターを、より少ない好適度ではあるが、この遺伝子セ
ットコード領域に作動可能に連結された分離プロモーターを所有し、ここでこの
プロモーターは、誘導性であるかまたは構成的であり、そして必要に応じて組織
特異的である。
【００４７】 この核酸の患者中への送達は、患者がこの核酸または核酸保持ベクターに直接
曝される直接的であるか、または最初にこの核酸で細胞がインビトロで形質転換
され、次いで患者に移植される間接的であるかのいずれかであり得る。これら２
つさのアプローチは、それぞれ、インビボまたはエクソビボ遺伝子治療として知
られる。特定の実施形態では、この核酸は、インビボで直接投与され、そこでそ
れは発現されてコードされたタンパク質を産生する。これは、当該分野で公知の
多くの方法のいずれかで達成され得、制限されないで、それを適切な核酸発現ベ
クターの一部分として構築すること、およびそれをそれが：（ｉ）欠陥または弱
毒化レトロウイルスまたはその他のウイルスベクターを用いる感染（例えば、米
国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）；（ｉｉ）裸のＤＮＡの直接注入
；（ｉｉｉ）マイクロパーティクルボンバードメントの使用（例えば、遺伝子銃
−Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、ＤｕＰｏｎｔ）；（ｉｖ）脂質または細胞表面レセプタ
ーまたはトランスフェクト剤を用いたコーティング、リポソーム、マイクロパー
ティクル、またはマイクロカプセル中のカプセル化；（ｖ）核に侵入することが
知られるペプチドへの連結でそれを投与することによる；（ｖｉ）レセプターな
どを特異的に発現する細胞型を標的にするために用いられ得る、レセプター仲介
エンドサイトーシスを受けるリガンドへの連結（例えば、Ｗｕ ＆ Ｗｕ、１９
８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２．４４２９−４４３２）でそれを投与す
ることによって細胞内になるように投与することを含む。
【００４８】 別の実施形態では、核酸−リガンド複合体が形成され得、ここでは、このリガ
ンドは、ｆｕｓｏｇｅｎｉｃウイルスペプチドを含んでエンドソームを破壊し、
この核酸がリソソーム分解を避けることを可能にする。なお別の実施形態では、
この核酸は、特定のレセプターを標的にすることによって、細胞特異的摂取およ
び発現についてインビボで標的され得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９３／１４１
８８；ＷＯ９３／２０２２１を参照のこと。あるいは、この核酸は、細胞内に導
入され、そして相同的組換えにより、発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に取り込ま
れ得る。例えば、Ｋｏｌｌｅｒ ＆ Ｓｍｉｔｈｉｅｓ、１９８９．Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２−８９３５；Ｚｉｊｌｓ
ｔｒａら、１９８９．Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５−４３８を参照のこと。
【００４９】 本発明の１つの実施形態では、この遺伝子セット核酸、または交替に遺伝子セ
ットアンチセンス核酸をコードするウイルスベクターが利用され得る。例えば、
レトロウイルスベクターが用いられ得（例えば、Ｍｉｌｌｅｒら、１９９３．Ｍ
ｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１−５９９（１９９３）を参照のこと）
、これは、ウイルスゲノムのパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡ中への組込み
に必要でないレトロウイルス配列を欠失するように改変されている。それ故、遺
伝子治療で利用されるべきこの遺伝子セット核酸は、ベクター中にクローン化さ
れ得、これは、患者中へのこの遺伝子の送達を促進する。この技術の特定の適用
は、Ｂｏｅｓｅｎら、１９９４、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６：２９１−３０２に
見出され得、これは、ｍｄｒ１遺伝子を造血幹細胞に化学療法に対するそれらの
抵抗性を増大するために送達するレトロウイルスベクターの使用を記載する。遺
伝子治療におけるレトロウイルスベクターの使用を例示するその他の参考文献は
：Ｃｌｏｗｅｓら、１９９４．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４−６
５１；Ｋｉｅｍら、１９９４．Ｂｌｏｏｄ ８３け１４６７−１４７３およびＳ
ａｌｍｏｎｓ ＆ Ｇｕｎｚｂｅｒｇ、１９９３．Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈ
ｅｒａｐｙ ４：１２９−１４１を含む。
【００５０】 アデノウイルスは、遺伝子治療に用いられ得るその他のウイルスベクターであ
る。アデノウイルスは、このウイルスが自然に感染し温和な疾患を引き起こす呼
吸上皮に遺伝子を送達するために特に魅力的なビヒクルである。アデノウイルス
を基礎にする送達系のその他の標的は、肝臓、中枢神経系、内皮細胞および筋肉
である。さらに、アデノウイルスは、非分裂細胞を感染し得る利点を有する。例
えば、Ｋｏｚａｒｓｋｙ ＆ Ｗｉｌｓｏｎ、１９９３．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．
Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３：４９９−５０３を参照のこと。アデノ随伴ウ
イルス（ＡＶＶ）もまた、遺伝子治療における使用に提案されている。例えば、
Ｗａｌｓｈら、１９９３．Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ． ２
０４：２８９−３００を参照のこと。
【００５１】 遺伝子治療に対する別のアプローチは、エレクトロポーレーション、リポフェ
クション、リン酸カルシウム仲介トランスフェクション、またはウイルス感染の
ような方法による、組織培養中の細胞に遺伝子を移入することを含む。一般に、
移入の方法は、細胞への選択マーカーの移入を含み、次いでこの細胞は、移入さ
れた遺伝子を取り込み、そしてこれを発現するような細胞を単離するための選択
下に置かれ、次いで、これら選択された細胞のみが患者に送達される。この実施
形態では、核酸は、得られる組換え細胞のインビボ投与の前に細胞中に導入され
る。このような導入は、当該分野で公知の方法により実施され得、制限されない
で、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクショ
ン、この核酸配列を含むウイルスベクターまたはバクテリオファージを用いて感
染，細胞融合、染色体仲介遺伝子移入、マイクロセル仲介遺伝子移入、スフェロ
プラスト融合などを含み（例えば、Ｌｏｅｆｆｌｅｒ ＆ Ｂｅｈｒ、１９９３
．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５９９−６１８；Ｃｏｈｅｎら、１９９
３．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：６１８−６４４を参照のこと）、そし
て受容体細胞の必要な発生的および生理学的機能が破壊されないことを前提に、
本発明に従って用いられえる。選択された技法は、核酸の細胞への安定な移入を
提供し、その結果、この核酸は、この細胞によって発現可能であり、そして好ま
しくは、その細胞の子孫により伝播可能かつ発現可能である。得られる組換え細
胞は、当該分野で周知の方法のいずれかにより患者に送達され得る。
【００５２】 特定の遺伝子治療剤の投与に関して、本発明の好適な実施形態では、上皮細胞
が注射される（例えば、皮下により）。別の実施態様では、組換え皮膚細胞が、
患者への皮膚移植片として適用可能であり得る。好ましくは、組換え血液細胞（
例えば、造血幹細胞または前駆体細胞）が静脈内に投与される。使用のために想
定される細胞の量は、所望の効果、患者の状態などに依存し、そして当業者によ
って決定され得る。遺伝子治療の目的に核酸が導入される細胞は、任意の所望さ
れる利用可能な細胞型を制限されないで：上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト
、線維芽細胞、筋細胞、肝細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファー
ジ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球、種々の幹細胞または前駆体細胞のような
血液細胞、特に幹細胞または前駆体細胞（例えば、骨髄、臍帯血、末梢血、胎児
肝臓など）を含む。本発明の好適な実施形態では、遺伝子治療に利用される細胞
は、患者に対して自系である。
【００５３】 組換え細胞が遺伝子治療に用いられる実施形態では、遺伝子セット核酸または
遺伝子セットアンチセンス核酸をコードする核酸が、細胞中導入され、その結果
、それは、これら細胞またはそれらの子孫により発現可能であり、次いでこの組
換え細胞は、治療効果のためにインビボで投与される。特定の実施形態では、幹
または前駆体細胞が用いられる。インビトロで単離および維持され得る任意の幹
および／または前駆体細胞が、本発明のこの実施形態に従って潜在的に用いられ
る得る。このような幹細胞は、制限されないで、造血幹細胞（ＨＳＣ）、皮膚お
よび消化管の内層、胚心筋細胞のような上皮組織の幹細胞、肝臓幹細胞（例えば
、ＰＣＴ公開ＷＯ９４／０８５９８を参照のこと）およびニューロン幹細胞（例
えば、Ｓｔｅｍｐｌｅ ＆ Ａｎｄｅｒｓｏｎ、１９９２．Ｃｅｌｌ ７１：９
７３−９８５を参照のこと）を含む。
【００５４】 胚幹細胞（ＥＳＣ）またはケラチノサイトは、皮膚および消化管の内層のよう
な組織から公知の手順により得られ得る。例えば、Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ、１９８
０．Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２１：２２９−２３７を参照のこと。皮膚の
ような層化上皮組織では、再生は、基底膜に最も近い層である、胚層内の幹細胞
の分裂によって起こる。消化管の内層内の幹細胞は、この組織の急速な再生を提
供する。患者またはドナーの皮膚または消化管の内層から得たＥＳＣまたはケラ
チノサイトは、組織培養で増殖させ得る。例えば、Ｐｉｔｔｅｌｋｏｗ ＆ Ｓｃｏｔｔ、１９８６．Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．６１：７７１−７
８２を参照のこと。ＥＳＣがドナーにより提供される場合、宿主の対移植片反応
性の抑制のための方法（例えば、放射線照射、適度な免疫抑制を促進するための
薬物または抗体の投与）もまた用いられ得る。造血幹細胞（ＨＳＣ）に関して、
ＨＳＣのインビトロにおける単離、増殖、および維持を提供する任意の技法を、
本発明のこの実施形態で用い得る。これが達成され得る技法は、制限されないで
：（ｉ）将来の宿主、またはドナーから単離された骨髄からのＨＳＣ培養の単離
および確立、または（ｉｉ）アレルゲン性または組織移植片に関して異種であり
得る、従前に確立された長期間ＨＳＣ培養の使用を含む。非自系ＨＳＣは、好ま
しくは、将来の宿主／患者の移植免疫反応を抑制する方法とともに用いられる。
本発明の特定の実施形態では、ヒト骨髄細胞は、針吸入により後腸骨稜から得ら
れ得る。例えば、Ｋｏｄｏら、１９８４．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７３：
１３７７−１３８４を参照のこと。
【００５５】 本発明の好適な実施形態では、このＨＳＣは、高度に濃縮されるか、または実
質的に純粋な形態で作製され得る。この濃縮は、長期間培養の前、間または後に
達成され得、そして当該分野で公知の任意の技法により実施され得る。骨髄細胞
の長期間培養は、例えば、改変Ｄｅｘｔｅｒ細胞培養技法（Ｄｅｘｔｅｒら、１
９７７．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．９１：３３５を参照のこと）またはＷ
ｉｔｌｏｃｋ−Ｗｉｔｔｅ培養技法（Ｗｉｔｌｏｃｋ ＆ Ｗｉｔｔｅ、１９８
２．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７９：３６０８−３６１
２を参照のこと）を用いることにより確立および維持される。特定の実施形態で
は、遺伝子治療の目的に導入される核酸は、コード領域に作動可能に連結された
誘導性プロモーターを含み、その結果、この核酸の発現は、適切な転写のインデ
ューサの存在または不在を制御することにより制御可能である。
【００５６】 遺伝子セットタンパク質（またはその機能的誘導体、フラグメントまたはアナ
ログ）をコードする核酸の送達のために利用されるか、または利用のために適合
され得るさらなる方法は、以下のセクション４に記載される。
【００５７】 （Ｂ）抗体 本発明の１つの実施形態では、本明細書で上記で論議したように、遺伝子セッ
トタンパク質（およびその誘導体、フラグメントまたはアナログ）を結合する能
力を所有する抗体を、腎不全または急性疾患または、好ましくは、急性腎不全を
処置または予防するために利用し得る。抗遺伝子セット抗体はまた、本発明によ
る開示される診断、予後およびスクリーニング方法で利用され得る（例えば、以
下のセクション３で記載のように）。このような抗遺伝子セット抗体は、制限さ
れずに、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、短鎖、Ｆabフラグメントお
よびＦab発現ライブラリーを含む。特定の実施形態では、ヒト遺伝子セットタン
パク質に特異的な抗体が開示される。別の実施態様では、インビトロおよび／ま
たはインビボで遺伝子セット活性を低減または阻害する能力を所有する抗体もま
た、開示される。
【００５８】 当該分野で周知の種々の方法が、遺伝子セットタンパク質または誘導体または
アナログに対するポリクローナル抗体の産生に利用され得る。特定の実施態様で
は、遺伝子セットタンパク質のエピトープまたは遺伝子セットタンパク質（およ
びその誘導体、フラグメントまたはアナログ）をコードする核酸のエピトープに
特異的なウサギポリクローナル抗体が得られ得る。抗体の産生のために、種々の
宿主動物が、ネイティブな遺伝子セットタンパク質（またはその合成バージョン
、誘導体、フラグメントまたはアナログ）での注射により免疫化され得、制限さ
れないで、ウサギ、マウス、ラット、霊長類などを含む。さらに、種々のアジュ
パントが、宿主の種に依存して、免疫応答を増大するために利用され得、制限さ
れないで：Ｆｒｅｕｎｄ（完全および不完全）；鉱物ゲル（例えば、水酸化アル
ミニウム）；界面活性物質（例えば、リソレシチン）；プルロニックポリオール
；ポリアニオン；ペプチド；オイルエマルジョン；キーホールリムペットヘモシ
アニン；ジニトロフェノールおよび潜在的に有用なヒトアジュバント（例えば、
桿菌Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）およびｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）を含む。
【００５９】 遺伝子セットタンパク質配列（またはその誘導体、フラグメントまたはアナロ
グ）に特異的なモノクローナル抗体の調製には、連続インビトロ細胞株による抗
体分子の産生を提供する任意の方法を用い得る。これらの方法は、制限されずに
：（ｉ）ハイブリドーマ技法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｓｔｅｉｎ、１
９７５．Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７）；（ｉｉ）トリオーマ技法（
Ｃｏｌｅら、１９８５．Ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．）
）；（ｉｉｉ）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（例えば、Ｋｏｚｂｏｒら、１９
８３．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２を参照のこと）およびヒト
モノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドーマ技法（例えば、Ｃｏ
ｌｅら、１９８５．Ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｇｉｂｏｄｉｅｓ ａｎ
ｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．）を参
照のこと）。本発明のさらなる実施形態では、モノクローナル抗体は、最近開発
された技術（例えばＰＣＴ特許公開Ｕ５９０／１２５４５を参照のこと）を利用
して無菌動物中で産生され得る。本発明の範囲内にはまた、ヒトハイブリドーマ
の使用（例えば、Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２０２６−２０３０を参照のこと）によるか、または、
先に論議したように、インピトロでＥＢＶウイルスを用いヒトＢ細胞を形質転換
することにより（例えば、Ｃｏｌｅら、１９８５．Ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ａｌａｎ
Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．））得られ得るヒト抗体の利用がある。
【００６０】 なお別の実施形態では、「キメラ抗体」の産生のために開発された技法（例え
ば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６８５１−６８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、１９８４．Ｎ
ａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａら、１９８５．Ｎａｔｕｒ
ｅ ３１４：４５２−４５４を参照のこと）を、遺伝子セットに特異的なマウス
抗体分子からの遺伝子を、適切な生物学的活性のヒト抗体分子からの遺伝子とと
もにスプライシングすることにより利用し得、そして本発明の範囲内である。あ
るいは、非ヒト抗体は、公知の方法により（例えば、米国特許第５，２２５，５
３９号）「ヒト化」され得る。
【００６１】 本発明によってまた、単鎖抗体を生成する技術（例えば、米国特許第４，９４
６，７７８号を参照のこと）がＧＥＮＥ ＳＥＴ特異的単鎖抗体の産生に適用さ
れ得ることが、開示される。本発明のさらなる実施形態は、ＧＥＮＥ ＳＥＴタ
ンパク質（またはその誘導体もしくはアナログ）についての所望の特異性を有す
るモノクローナルＦabフラグメントの迅速かつ効果的な同定を可能にするＦab発
現ライブラリー（例えば、Ｈｕｓｅら、１９８９、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１
２７５〜１２８１）の構築を記載する技術を使用する。代替的な実施形態におい
て、分子のイデオタイプを含有する抗体フラグメントは、公知の技術によって生
成され得る。例えば、そのようなフラグメントとしては、以下が挙げられるがこ
れらに限定されない：（ｉ）抗体分子のペプシン消化によって生成され得るＦ（ ab' ）2フラグメント：（ｉｉ）Ｆ（ab'）2フラグメントのジスルフィド架橋の還
元によって生成され得るＦab'フラグメント；（ｉｉｉ）パパインおよび還元剤
を用いる抗体分子の処理によって生成され得るＦabフラグメント、および（ｉｖ
）Ｆvフラグメント。
【００６２】 所望の抗体についてのスクリーニングは、以下を含むがこれらに限定されない
当該分野において周知の任意の技術によって達成され得る：酵素結合イムノソル
ベント検定法（ＥＬＩＳＡ）。例えば、ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質の特定の領
域（例えば、活性部位、膜貫通領域など）を認識する抗体を選択するために、生
成されたハイブリドーマを、そのような特定の領域を含むＧＥＮＥ ＳＥＴフラ
グメントに結合する産物について試験し得る。同様に、ＧＥＮＥ ＳＥＴ活性を
減少または阻害し得る抗体の選択のために、当業者は、下記の第６節に記載され
る任意のＧＥＮＥ ＳＥＴ活性についてのアッセイを使用して、抗体をアッセイ
し得る。
【００６３】 （（Ｃ）アンチセンス核酸） 本発明の１つの実施形態において、ＧＥＮＥ ＳＥＴ機能は、ＧＥＮＥ ＳＥ
Ｔアンチセンス核酸の使用を介して減少または阻害され、腎不全または急性疾患
（好ましくは、急性腎疾患）を処置または予防し得る。特定の実施形態において
、ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質をコードする遺伝子またはｃＤＮＡ（またはその
部分）に対するアンチセンスである、少なくとも６ヌクレオチドの核酸を、治療
的様式または予防的様式において使用する。本明細書において使用する場合、Ｇ
ＥＮＥ ＳＥＴ「アンチセンス」核酸とは、いくらかの配列相補性のために、Ｇ
ＥＮＥ ＳＥＴ ＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）の部分にハイブリダイズし得
る核酸をいう。アンチセンス核酸は、ＧＥＮＥ ＳＥＴ ｍＲＮＡのコード領域
および／または非コード領域に対して相補的であり得る。
【００６４】 本発明のＧＥＮＥ ＳＥＴアンチセンス核酸は、少なくとも６ヌクレオチドを
含み、好ましくはオリゴヌクレオチド（６〜１５０ヌクレオチドの範囲、または
、より好ましくは、６〜５０ヌクレオチドの範囲）である。特定の実施形態にお
いて、本発明の実施において利用されるオリゴヌクレオチドは、少なくとも１０
ヌクレオチド、少なくとも１５ヌクレオチド、少なくとも１００ヌクレオチド、
または少なくとも１２５ヌクレオチドである。オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ，
ＲＮＡまたはキメラ混合物（あるいはその誘導体または改変バージョン）であり
得、そして一本鎖または二本鎖であり得る。さらに、オリゴヌクレオチドは、塩
基部分、糖部分、またはリン酸骨格において改変され得る。オリゴヌクレオチド
はまた、他の付加基、例えば、（ｉ）細胞膜を横切る輸送を促進するペプチド（
例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ８８／０９８１０を参照のこと）、または血液脳関門を
横切る輸送を促進するペプチド（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ８９／１０１３４を参
照のこと）；（ｉｉ）ハイブリダイゼーションによって誘発される切断剤（例え
ば、Ｋｒｏｌら、１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：９５８〜９７６
を参照のこと）、（ｉｉ）あるいはインターカレーティング剤（例えば、Ｚｏｎ
、１９８８、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９〜５４９を参照のこと）を含み得
る。
【００６５】 ＧＥＮＥ ＳＥＴアンチセンス核酸は、好ましくは、オリゴヌクレオチド、よ
り好ましくは一本鎖ＤＮＡである。別の好ましい実施形態において、オリゴヌク
レオチドは、ヒトＧＥＮＥ ＳＥＴの部分に対してアンチセンスである配列を含
む。オリゴヌクレオチドは、その構造上の任意の位置において、当該分野におい
て一般に公知の置換基によって改変され得る。さらに別の実施形態において、オ
リゴヌクレオチドは、（通常のβ単位と異なり）鎖がお互いに並行して走る、相
補的ＲＮＡと特定の２本鎖ハイブリッドを形成するβ−アノマーオリゴヌクレオ
チドである。例えば、Ｇａｕｔｉｅｒら、１９８７、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓ．１５：６６２５〜６６４１を参照のこと。オリゴヌクレオチドはまた、別
の分子（例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーション誘発性の架橋剤、輸送剤、
ハイブリダイゼーション誘発性の切断剤など）と結合され得る。
【００６６】 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、当該分野において公知の標準的
方法によって合成し得る（例えば、自動化ＤＮＡ合成機（例えば、Ｂｉｏｓｅａ
ｒｃｈ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓなどから市販されている）の使
用による）。限定ではないが、例として、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチ
ドを、Ｓｔｅｉｎらの方法（１９８８、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：
３２０９）によって合成し得、そしてメチルホスホネートオリゴヌクレオチドを
、制御された孔のガラスのポリマー支持体の使用によって調製し得る（例えば、
Ｓａｒｉｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
５：７４４８〜７４５１を参照のこと）。
【００６７】 本発明の特定の実施形態において、ＧＥＮＥ ＳＥＴアンチセンスオリゴヌク
レオチドは、触媒性ＲＮＡまたはリボザイム（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９０／１
１３６４；Ｓａｒｖｅｒら、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１２２２〜１
２２５）を含む。別の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、２’−Ｏ−メ
チルリボヌクレオチド（例えば、Ｉｎｏｕｅら、１９８７、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ．１５：６１３１〜６１４８を参照のこと）またはキメラＲＮＡ−Ｄ
ＮＡアナログ（例えば、Ｉｎｏｕｅら、１９８７、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１５
：３２７〜３３０を参照のこと）である。
【００６８】 本発明の代替的な実施形態において、本発明のＧＥＮＥ ＳＥＴアンチセンス
核酸を、外来性配列からの転写によって細胞内において産生する。例えば、ベク
ターを、細胞によって取り込まれるようにインビボにおいて導入して、その細胞
において、ベクター（またはその部分）が転写され、本発明のアンチセンス核酸
（ＲＮＡ）の産生を生じ得る。そのようなベクターは、ＧＥＮＥ ＳＥＴアンチ
センス核酸をコードする配列を含み、転写されて所望のアンチセンスＲＮＡを産
生し得る限り、エピソームであり続けても、染色体に組み込まれるようになって
も、いずれであってもよい。そのようなベクターは、当該分野において標準的な
組換えＤＮＡ技法によって構築され得、そして哺乳動物細胞における複製および
発現のために使用される、プラスミドベクター、ウイルスベクターなどを含み得
るが、これらに限定されない。ＧＥＮＥ ＳＥＴアンチセンスＲＮＡをコードす
る配列の発現は、哺乳動物細胞（または、好ましくはヒト細胞）内において機能
する、当該分野において公知の任意のプロモーターによるものであり得る。その
ようなプロモーターは、誘導性であっても、構成性であってもよく、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：（ｉ）ＳＶ４０初期プロモーター領域（例え
ば、Ｂｅｒｎｏｉｓｔ＆Ｃｈａｍｂｏｎ、１９８１、Ｎａｔｕｒｅ ２９０：３
０４〜３４０を参照のこと）；（ｉｉ）ラウス肉腫ウイルスの３’末端の長い末
端反復中に含まれるプロモーター（例えば、Ｙａｍａｍｏｔｏら、１９８０、Ｃ
ｅｌｌ、２２：７８７〜７９７を参照のこと）；（ｉｉｉ）ヘルペスウイルスの
チミジンキナーゼプロモーター（例えば、Ｗａｇｎｅｒら、１９８１、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１４４１〜１４４５を参照のこ
と）および（ｉｖ）メタロチオネイン遺伝子の調節配列（例えば、Ｂｒｉｎｓｔ
ｅｒら、１９８２、Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９〜４２を参照のこと）。
【００６９】 本発明のアンチセンス核酸は、ＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子（好ましくは、ヒトＧ
ＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子）のＲＮＡ転写物の少なくとも一部に相補的な配列を含む
。しかし、好ましくはあるが、絶対的な相補性は、必要ではない。本明細書にお
いて使用する場合、用語「少なくともＲＮＡの一部に対する配列相補性」とは、
そのＲＮＡとのハイブリダイズを可能とし、安定な二重鎖を生じるのに十分な相
補性を有する配列として定義される；二本鎖ＧＥＮＥ ＳＥＴアンチセンス核酸
の場合、二重鎖ＤＮＡの一本鎖がそのように試験され得るか、または三重鎖形成
がアッセイされ得る。アンチセンス核酸がハイブリダイズする能力は、アンチセ
ンス核酸の相補性の程度および長さの両方に依存する。一般に、ハイブリダイズ
する核酸がより長いと、ＧＥＮＥ ＳＥＴ ＲＮＡに対してより多くのミスマッ
チを含んでもよく、そしてなお安定な二重鎖（場合によっては、三重鎖であり得
る）を形成し得る。当業者は、ハイブリダイズした複合体の融点を測定する標準
的な手順の使用によって、ミスマッチの耐えられ得る程度を確認し得る。
【００７０】 本発明はさらに、下記に記載されるように、薬学的に受容可能なキャリア中に
おける、本発明のＧＥＮＥ ＳＥＴアンチセンス核酸の有効量を含有する薬学的
組成物を提供する。特定の実施形態において、ＧＥＮＥ ＳＥＴアンチセンス核
酸を含む薬学的組成物は、リポソーム、マイクロパーティクル、またはマイクロ
カプセルを介して投与され得る。代替的な実施形態において、ＧＥＮＥ ＳＥＴ
アンチセンス核酸の持続放出を達成するために、そのような組成物を使用するこ
とは、有用であり得る。本発明のＧＥＮＥ ＳＥＴアンチセンス核酸の送達にお
ける使用のために適用され得るさらなる方法が、下記の第５節において開示され
る。
【００７１】 急性疾患の処置または予防において有効なＧＥＮＥ ＳＥＴアンチセンス核酸
の量は、疾患の性質に依存し、そして標準的な臨床技術によって決定され得る。
可能な場合、アンチセンスの細胞傷害性を、インビトロの細胞において決定し、
次に、ヒトにおける試験および生体内での使用の前に、有用な動物モデルシステ
ムにおいて決定することが所望される。
【００７２】 （（３）診断、予後、およびスクリーニングの方法） 本発明はまた、個体（腎疾患または腎不全を有する被験体、以前に脳血管事象
に罹患した被験体、あるいは腎不全の１つ以上の「危険因子」または腎不全に関
連する１つ以上の状態を示す被験体が挙げられるが、これらに限定されない）に
おける腎不全または急性疾患（もしくは好ましくは、急性腎不全）の診断、予後
、およびスクリーニングの方法が開示される。
【００７３】 本発明の１つの実施形態において、抗ＧＥＮＥ ＳＥＴ抗体は、イムノアッセ
イにおいて、被験体の１つ以上の組織（例えば、血液）中のＧＥＮＥ ＳＥＴレ
ベルを検出および定量するために有用である。特に、そのようなイムノアッセイ
は、免疫特異的結合が生じ得る条件下で、患者由来のサンプルを抗ＧＥＮＥ Ｓ
ＥＴ抗体と接触させる工程、次に、抗体による任意の免疫特異的結合の量を検出
または測定する工程を包含する方法の使用によって実行される。ＧＥＮＥ ＳＥ
Ｔにおける特定のアミノ酸欠失、挿入、または置換は、特異的な抗（野生型）Ｇ
ＥＮＥ ＳＥＴ抗体により認識されるエピトープを変化し得、その結果、抗体は
、より少ない程度でＧＥＮＥ ＳＥＴに結合するか、または全く結合しない。さ
らに、（下記に記載するインビトロでのイムノアッセイ法によって決定されるよ
うに）特定のＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質に免疫特異的に結合する能力を有する
が、野生型ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質に結合する能力を有さない、ＧＥＮＥ
ＳＥＴタンパク質（またはその部分）に対する抗体を産生し得る（例えば、上記
の第２（Ｂ）節に記載されるように）。これらの特異的抗ＧＥＮＥ ＳＥＴ抗体
を使用して、例えば、抗ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質抗体による免疫特異的結合
を測定し、そして必要に応じて、抗（野生型）ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質抗体
による免疫特異的結合の欠如を測定することによって、ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパ
ク質の存在を検出し得る。さらに、欠失または挿入変異を有するＧＥＮＥ ＳＥ
Ｔタンパク質は、タンパク質のサイズの増加または減少のいずれかによって検出
され得る（例えば、ＧＥＮＥ ＳＥＴの構成タンパク質を認識する抗ＧＥＮＥ
ＳＥＴタンパク質抗体を使用するウェスタンブロット分析によることが挙げられ
るが、これに限定されない）。
【００７４】 使用され得る本発明のイムノアッセイ方法としては、ウェスタンブロット、ラ
ジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ
）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散
沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、イムノラジオ
メトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイムノアッセイなどの
技術を使用する競合的アッセイシステムおよび非競合的アッセイシステムが挙げ
られるが、これらに限定されない。
【００７５】 診断またはスクリーニングの用途のためのキットもまた、本発明によって提供
される。このキットは、１つ以上の容器中で、抗ＧＥＮＥ ＳＥＴ抗体および（
必要に応じて）抗体に対する標識された結合パートナーを含む。あるいは、抗Ｇ
ＥＮＥ ＳＥＴ抗体を、検出可能なマーカー（例えば、化学発光部分、酵素的部
分、蛍光部分、または放射性部分）を用いて標識し得る。キットもまた提供され
、このキットは、１つ以上の容器中で、ＧＥＮＥ ＳＥＴ ＲＮＡに対してハイ
ブリダイズし得る核酸プローブ、または好ましくは、ＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子に
特異的にハイブリダイズし得るプローブを含む。特定の実施形態において、キッ
トは、１つ以上の容器中で、以下によって、ＧＥＮＥ ＳＥＴ核酸の少なくとも
一部の増幅をプライムし得る、一対のオリゴヌクレオチドプライマー（例えば、
各々６〜３０ヌクレオチドのサイズ）を含み得る：（ｉ）ポリメラーゼ連鎖反応
（ＰＣＲ；例えば、Ｉｎｎｉｓら、１９９０、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を参照の
こと）；（ｉｉ）リガーゼ連鎖反応；（ｉｉｉ）ＱＢレプリカーゼの使用；（ｉ
ｖ）サイクリックプローブ反応、または適切な条件下での、当該分野において公
知の他の方法。必要に応じて、キットは、１つ以上の容器において、所定の量の
精製されたＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質または核酸（例えば、標準またはコント
ロールとしての使用のため）をさらに含む。
【００７６】 （４）ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質についてのアッセイまたはＧＥＮＥ ＳＥ
Ｔタンパク質および核酸のモジュレーター ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質（ならびにその誘導体、アナログ、フラグメン
トおよびホモログ）、ならびにＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質をコードする核酸（
ならびにその誘導体、アナログ、フラグメントおよびホモログ）の活性をアッセ
イする際に使用するために、当該分野で種々の方法論が利用可能である。推定Ｇ
ＥＮＥ ＳＥＴモジュレーター（例えば、ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質アゴニス
ト、アンタゴニストおよびインヒビター）のスクリーニングのための方法もまた
、利用可能である。ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質活性のこのようなモジュレータ
ーとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＧＥＮＥ ＳＥＴア
ンチセンス核酸、抗ＧＥＮＥ ＳＥＴ抗体、およびＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質
レセプターに結合するための、ＧＥＮＥ ＳＥＴの競合的インヒビター。
【００７７】 ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質（ならびにその誘導体、フラグメント、アナログ
およびホモログ）、これらのＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質をコードする核酸、な
らびにＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質活性の推定モジュレーター（例えば、ＧＥＮ
Ｅ ＳＥＴタンパク質活性のアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビター）
をアッセイするためのインビトロ方法としては、以下が挙げられるが、これらに
限定されない：（ｉ）ＧＥＮＥ ＳＥＴレセプター結合アッセイ（例えば、Ｖｅ
ｓｅｌｙら、１９９２、Ｒｅｎａｌ Ｐｈｙｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５：２３−
３２；Ｉｗａｓｈｉｎａら、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１５：５６３−
５６７；Ｃｈａｎｇら、１９９６、Ｃｕｒｒ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１５：１３７−
１４３を参照のこと）；（ｉｉ）ＧＥＮＥ ＳＥＴレセプターを保有する細胞に
おけるｃＧＭＰ濃度における変化の測定（例えば、Ｓｃｈｕｌｚら、１９８９．
Ｃｅｌｌ ５８：１１５５−１１６２；Ｗｅｄｅｌら、１９９７．Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ２１：４５９−４６２）を参照のこと；お
よび（ｉｉｉ）ＧＥＮＥ ＳＥＴ結合に応答してシグナル伝達するＧＥＮＥ Ｓ
ＥＴレセプターから生じた細胞内Ｃａ2+の変化（例えば、Ｎａｓｃｉｍｅｎｔｏ
−Ｇｏｍｅｓら、１９９５．Ｂｒａｚｉｌ．Ｊ．ｏｆ Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅ
ｓ．２８：６０９−６１３を参照のこと）。しかし、ＧＥＮＥ ＳＥＴ結合によ
り誘発されるＧＥＮＥ ＳＥＴレセプター活性の任意の測定を用いて、インビト
ロでＧＥＮＥ ＳＥＴ活性をアッセイし得ることが注意されるべきである。
【００７８】 ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質（ならびにその誘導体、フラグメント、アナログ
およびホモログ）、これらのＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質をコードする核酸（な
らびにその誘導体、フラグメント、アナログおよびホモログ）およびＧＥＮＥ
ＳＥＴ活性の推定モジュレーターの活性はまた、インビボで確認され得る。限定
ではなく、例示により、ヒトにおけるＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質の注入は、血
漿および尿中両方のｃＧＭＰレベルの有意な増加を引き起こす（例えば、Ｖｅｓ
ｅｌｙら、１９９５、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．３１０：１４３−１４９；Ｖ
ｅｓｅｌｙら、１９９６，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：Ｃｌｉｎ．＆Ｅｘｐ．４５：
３１５−３１９を参照のこと）。さらに、ヒトへのＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質
の投与はまた、有意な利尿および血圧の低下を誘発し（例えば、Ｖｅｓｅｌｙら
、１９９６，Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ５９：２４３−２５４）；類似の効
果もまた、以前に齧歯類において観察された（例えば、Ｇａｒｃｉａら、１９８
９、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ １３：５６７−５７４を参照のこと）。従って
、ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質および核酸（ならびにそれらの誘導体、アナログ
、フラグメントおよびホモログ）ならびに推定ＧＥＮＥ ＳＥＴモジュレーター
は、試験動物（好ましくは、ラットまたはマウスのような非ヒト試験動物）に試
験化合物を投与し、次いで、上記の生理学的パラメーター（例えば、尿および／
または血漿中のｃＧＭＰレベル、利尿効果、血圧の低下など）の１つ以上を引き
続いて測定することによりアッセイされ得る。
【００７９】 本発明の好ましい実施形態において、黄淡色頭部（ｆａｗｎ−ｈｏｏｄｅｄ）
ラットとの交配に由来するラットを用いて、ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質、核酸
またはモジュレーターの活性についてアッセイし得る。例えば、第５染色体上に
腎不全防御遺伝子座（これは、ＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子にマッピングされる）の
付随する欠如とともに、第１染色体上に腎不全素因遺伝子座、および必要に応じ
て第４染色体上に他の腎不全防御遺伝子座を有するラットを使用して、推定ＧＥ
ＮＥ ＳＥＴモジュレーターおよびアンタゴニストについてスクリーニングし得
る。本発明の特定の実施形態において、ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質をコードす
るヌクレオチド配列を含む核酸は、第１染色体の腎不全素因遺伝子座を有するが
、腎不全防御遺伝子座を有さないラットに導入され得る。一致して、腎不全の処
置および予防のために有用なＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質は、防御遺伝子座を欠
如し、かつ高塩分食餌を与えて高血圧を誘導された腎不全易発性ラットに投与さ
れるか、または遺伝子組換え的に発現されるかのいずれかの場合に、腎不全潜伏
期を増大させる。
【００８０】 本発明の別の特定の実施形態において、ＧＥＮＥ ＳＥＴ活性の推定モジュレ
ーター、または腎不全に対する潜伏期もしくは素因の推定モジュレーターは、以
下によりスクリーニングされ得る：（ｉ）腎不全易発性動物にＧＥＮＥ ＳＥＴ
活性の推定モジュレーターを投与すること、および（ｉｉ）ＧＥＮＥ ＳＥＴ活
性と関連する１つ以上の生理学的パラメーターを測定すること；ここで、推定モ
ジュレーターを投与していない動物と比較した、このパラメーターの１つ以上の
変化は、この推定モジュレーターが、ＧＥＮＥ ＳＥＴ活性または腎不全に対す
る潜伏期または素因を調節する能力を有することを示す。なお別の特定の実施形
態において、腎不全易発性動物は、高塩分食餌を与えられる。本発明の好ましい
実施形態において、測定され得る生理学的パラメーターは、腎不全潜伏期である
。さらに、ＧＥＮＥ ＳＥＴモジュレーターは、組換え試験動物（ＧＥＮＥ Ｓ
ＥＴ導入遺伝子を発現するか、または野生型試験動物と比較して増加したレベル
でネイティブな（内因性）ＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子プロモーターではないプロモ
ーターの制御下でＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質を発現する）を用いてスクリーニ
ングされ得る。
【００８１】 本発明の別の実施形態は、以下を含むＧＥＮＥ ＳＥＴ活性を変化させる能力
についてＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質、核酸またはモジュレーターをスクリーニ
ングするための方法論を開示する：（ｉ）ＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質、核酸ま
たはモジュレーターを、腎不全易発性試験動物に投与すること、および（ｉｉ）
この試験動物における腎不全潜伏期を測定すること（ここで、腎不全潜伏期は、
ＧＥＮＥ ＳＥＴ活性の指標である）。特定の実施形態において、組換え試験動
物（ＧＥＮＥ ＳＥＴ導入遺伝子を発現するか、または野生型試験動物と比較し
て増加したレベルでネイティブなＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子プロモーターではない
プロモーターの制御下でＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質を発現する）を用いて、Ｇ
ＥＮＥ ＳＥＴ活性の変化について、ＧＥＮＥ ＳＥＴをスクリーニングする。
【００８２】 なお別の特定の実施形態において、ＧＥＮＥ ＳＥＴ活性のモジュレーター、
または腎不全に対する潜伏期もしくは素因のモジュレーターをスクリーニングす
るための方法が提供され、この方法は、ＧＥＮＥ ＳＥＴ活性の推定モジュレー
ターを組換え発現する腎不全易発性動物における腎不全潜伏期を測定する工程を
包含し、ここで、この推定モジュレーターを組換え発現しない、類似の腎不全易
発性動物と比較した腎不全潜伏期の変化は、この推定モジュレーターがＧＥＮＥ
ＳＥＴ活性、または腎不全に対する潜伏期もしくは素因を調節する能力を有す
ることを示す。
【００８３】 （（５）薬学的組成物） 本発明は、有効な量の本発明の治療薬（治療薬）を処置が必要な被験体に投与
することによる、処置および予防の方法を開示する。好ましい実施形態において
、この治療薬は、実質的に精製されている。この被験体は、好ましくは動物（ウ
シ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどのような動物が挙げられるが、これ
らに限定されない）であり、そして好ましくは、哺乳動物であり、最も好ましく
はヒトである。
【００８４】 治療薬が核酸を含む場合に、本発明の実施において用いられ得る処方物および
投与の方法は、前出の２（Ａ）節および２（Ｃ）節に記載される。さらなる適切
な処方物および投与経路が、本明細書中以下に記載されるものの中から選択され
得る。
【００８５】 種々の型の送達系が公知であり、そして本発明の治療薬を投与するために使用
され得る。これらの前述の送達系としては、以下が挙げられるが、それらに限定
されない：リポソーム、微粒子、マイクロカプセルにおけるカプセル化、治療薬
を発現し得る組換え細胞、レセプター媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕお
よびＷｕ、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を
参照のこと）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部分としての治療薬核酸
の構築など。導入の方法としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない
：皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬
膜上経路および経口経路。この化合物は、任意の都合のよい経路により（例えば
、注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜内層（例えば、口内粘膜、直
腸粘膜および腸粘膜など）を介する吸収により）投与され得、そして他の生物学
的活性薬剤とともに投与され得る。投与は、全身的または局所的のいずれかであ
り得る。さらに、任意の適切な経路（例えば、脳室内およびクモ膜下腔または硬
膜下腔内（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ）注入を含む）により中枢神経系へ、本発明
の薬学的組成物を導入することは、望ましくあり得る。脳室内注入は、例えば、
リザーバ（例えば、Ｏｍｍａｙａリザーバ）を取り付けた脳室内カテーテルによ
り容易にされ得る。肺投与もまた（例えば、吸入器またはネブライザーおよびエ
アロゾル化薬剤を有する処方物の使用により）利用され得る。
【００８６】 本発明の別の特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物を、処置が必要
な領域に局所的に投与することは望ましくあり得る。これは、例えば、限定では
ないが、手術の間の局所的注入、局所的適用（例えば、手術後の包帯とともに）
、注射により、カテーテルにより、坐剤により、またはインプラント（このイン
プラントは、多孔性、非多孔性、またはゼラチン様物質（シラスティック（ｓｉ
ａｌａｓｔｉｃ）膜のような膜または線維を含む）により達成され得る。１つの
実施形態において、投与は、悪性腫瘍または新生物または前新生物性組織の部位
（またはもとの部位；ｆｏｒｍａｅｒ ｓｉｔｅ）における直接注射によってで
あり得る。別の実施形態において、治療薬は、小胞（特にリポソーム）において
送達され得る（例えば、Ｔｒｅａｔら、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔ
ｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎ
ｃｅｒ（Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ））。
【００８７】 なお別の実施形態において、この治療薬は、徐放システムにおいて送達され得
る。１つの特定の実施形態において、ポンプが利用され得る。例えば、Ｓｅｆｔ
ｏｎ，１９８７、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２
０１を参照のこと。別の実施形態において、ポリマー材料が用いられ得る（例え
ば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ
Ｒｅｌｅａｓｅ １９８４（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，
ＦＬ）を参照のこと）。なお別の実施形態において、徐放システムは、治療標的
（例えば、脳）の近位に配置され得、従って、全身的用量全体のわずか何分の１
かが必要であるにすぎない。治療薬がタンパク質治療薬をコードする核酸である
、特定の実施形態では、この核酸は、インビボで投与されて、適切な核酸発現ベ
クターの一部として前述のタンパク質を構築し、そして例えば、レトロウイルス
ベクターの使用により（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）、直接
的な注入により；微粒子ボンバードメントの使用（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌ
ｉｓｔｉｃ、ＤｕＰｏｎｔ）により、細胞内になるようにこの構築物を投与する
ことによって；脂質または細胞表面レセプターもしくはトランスフェクト剤での
コーティング；または核に進入することが公知であるホメオボックス様ペプチド
と結び付けた投与（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８６４〜１８６８を参照のこと）などによ
って、そのコードされたタンパク質の発現を促進し得る。あるいは、核酸治療薬
は、細胞内に導入され得、そして発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に相同組換えに
よって取り込まれ得る。
【００８８】 本発明はまた、薬学的組成物を提供する。このような組成物は、治療的に有効
量の治療薬および薬学的に受容可能なキャリアを含む。特定の実施形態では、用
語「薬学的に受容可能」は、本明細書中で利用される場合、動物、およびより具
体的にはヒトにおける使用のために、連邦政府または州政府機関の取締機関によ
り認可されているか、あるいは米国薬局方または他の一般に認識される薬局方に
収載されていると規定される。用語「キャリア」は、本明細書中で利用される場
合、治療剤がともに投与される、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒク
ルをいう。このような薬学的キャリアは、無菌の液体（例えば、水および油（石
油、動物、植物または合成起源の油（例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、
ゴマ油など）を含む）であり得る。水は、薬学的組成物が静脈内に投与される場
合に好ましいキャリアである。生理食塩水溶液ならびに水性デキストロース溶液
およびグリセロール溶液もまた、液体キャリアとして、特に注射用溶液のために
用いられ得る。適切な薬学的賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトー
ス、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ、穀粉、チョーク、シリカゲル、ステア
リン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、
乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールな
どが挙げられる。所望される場合、組成物はまた、わずかな量の湿潤剤または乳
化剤、あるいはｐＨ緩衝剤を含み得る。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳濁
液、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性処方物などの形態を採り得る。この
組成物は、坐剤として、伝統的な結合剤およびキャリア（例えば、トリグリセリ
ド）とともに処方され得る。経口処方物は、標準的なキャリア（例えば、薬学的
グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、
サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなど）を含み得る。適切
な薬学的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ
’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。
【００８９】 このような組成物は、治療的に有効量の治療薬を、（好ましくは、実質的に精
製された形態において）患者に対して適切な投与のための形態を提供するために
適切な量のキャリアと共に含む。この処方物は、投与の様式に適合されるべきで
ある。好ましい実施形態では、この組成物は、ヒトへの静脈内投与のために採用
される薬学的組成物として、慣用的な手順に従って処方される。代表的には、静
脈内投与のための組成物は、無菌性の等張水性緩衝液における溶液である。必要
な場合、この組成物はまた、可溶化剤および注射の部位での痛みを軽減するため
の局所麻酔剤（例えば、リグノカイン（ｌｉｇｎｏｃａｉｎｅ））を含み得る。
一般に、成分は、別々にか、または一緒に混合されてかのいずれかで、単位投薬
形態において、例えば、ハーメチックシールされた容器（例えば、活性薬剤の量
を示すアンプルまたはサチェット（ｓａｃｈｅｔｔｅ））中に乾燥凍結乾燥粉末
または水を含まない濃縮物として供給される。この組成物が注入により投与され
なければならない場合、これは、無菌性の薬学的グレードの水または生理食塩水
を含む注入ビンで投薬され得る。この組成物が注射により投与される場合、注射
のための無菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得、その結果、これらの
成分が投与前に混合され得る。本発明の治療薬は、中性形態または塩形態として
処方され得る。
【００９０】 特定の障害または状態の処置に効果的である、本発明の治療薬の量は、障害ま
たは状態のその性質に依存し、そして標準的な臨床技術によって定量的様式で決
定され得る。さらに、インビトロアッセイは、必要に応じて最適な投薬範囲の同
定を補助するために用いられ得る。この処方物中に用いられるべき正確な用量は
また、投与の経路、およびこの疾患もしくは障害の重篤度に依存し、そして開業
医の判定および各患者の状況に従って決定されるべきである。しかし、静脈内投
与のための適切な用量範囲は、一般に、患者の体重１ｋｇあたり約２０〜５００
μｇの活性化合物である。鼻腔内投与のために適切な投薬範囲は、一般に、体重
１ｋｇあたり約０．０１ｐｇから体重１ｋｇあたり１ｍｇである。有効用量は、
インビトロまたは動物モデルの試験系から誘導される用量応答曲線から推定され
得る。坐剤は、一般に、０．５重量％〜１０重量％の範囲で活性成分を含み；そ
れに対して経口処方物は、好ましくは、１０％〜９５％の活性成分を含む。
【００９１】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１以上の成分で充填された１以上の容
器を備える、薬学的包装物またはキットを提供する。必要に応じて、薬学的製品
または生物学的製品の製造、使用または販売を取り締まる政府機関により指示さ
れる形態における通知（この通知は、ヒトでの投与のための製造、使用、販売の
機関による認可を示す）が、このような容器に付随し得る。
【００９２】 （（６）動物モデル） 本発明はまた、動物モデルを提供する。特定の実施形態では、腎不全または虚
血性疾患、特に急性腎不全についての動物モデルが、提供される。１つの実施形
態において、ＦＨＲは、ＧＥＮＥ ＳＥＴ対立遺伝子を保有しない正常または非
腎不全易発性ラットと交配され得る。次いで、腎不全素因についての第１染色体
の遺伝子座を保有するが、第５染色体遺伝子座（すなわち、野生型ＧＥＮＥ Ｓ
ＥＴ遺伝子座を保有する）または必要に応じて第４染色体遺伝子座を有さないラ
ット（ＦＨＲ系統において腎不全について保護されることが実証される）が選択
され得る。このような動物は、前出の６節において記載されるように、減少した
活性を有するＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質について、またはＧＥＮＥ ＳＥＴア
ンタゴニストについて試験するために使用され得る。
【００９３】 本発明の別の実施形態において、トランスジェニック動物は、分子生物学的手
段を通じて、育種または生産され得、この動物は（例えば、異種プロモーターま
たは通常はＧＥＮＥ ＳＥＴ成分を発現しない組織において、ＧＥＮＥ ＳＥＴ
タンパク質および／または核酸の発現を容易にするプロモーターの制御下で、Ｇ
ＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子のメンバーを導入することによって）、１以上のＧＥＮＥ
ＳＥＴ遺伝子を過剰発現させるか、または過小発現させる。さらに、「ノック
アウト」マウスは、初めに、その染色体中のＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子と、好まし
くは、異種配列（例えば、抗生物質耐性遺伝子）の挿入によってかまたは非相同
組換えによって生物学的に不活性化された、外因性ＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子との
間での相同組換えを促進することによって生産され得る。
【００９４】 本発明の好ましい実施形態において、異種ＤＮＡの導入は、胚由来幹（ＥＳ）
細胞を、挿入により不活性化されたＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子または異種プロモー
ターの制御下であるＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子を含むベクターで形質転換すること
、続いてこのＥＳ細胞を胚盤胞中に注入すること、ならびにこの胚盤胞を「養母
」動物中に移植することによって行われる。従って、得られたマウスは、ＧＥＮ
Ｅ ＳＥＴ遺伝子が不活性化されているか、または過剰発現もしくは誤って発現
（ｍｉｓｅｘｐｒｅｓｓ）されているキメラ動物（「ノックアウト動物」または
「トランスジェニック動物」）である（例えば、Ｃａｐｅｃｃｈｉ、１９８９、
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２８８〜１２９２を参照のこと）。次いで、このキ
メラ動物は、さらなるノックアウト動物またはトランスジェニック動物を生じる
ように育種され得る。このようなキメラ／トランスジェニック動物としては、マ
ウス、ハムスター、ヒツジ、ブタ、ウシなどが挙げられるがこれらに限定されず
、そして好ましくは、非ヒト動物である。トランスジェニック動物およびノック
アウト動物はまた、当該分野において周知である方法によって、Ｄ．Ｍｅｌａｎ
ｏｇａｓｔｅｒ、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓなどにおいて作製され得る。
【００９５】 （（７）特定の例） ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）として登録された定量発現分析（ＱＥＡ
（登録商標））方法論（Ｎａｎｄａｂａｌａｎらの、ＰＣＴ公開ＷＯ９７／１５
６９０（１９９７年５月１日付）を参照のこと）を、ＡＣＩ（コントロール）齧
歯類系統と比較して、ＦＨＲおよびＩＲＬ齧歯類系統（すなわち、腎疾患動物モ
デル）内で、推定的に、示差的に発現されている遺伝子を同定および特徴付けす
るために用いた。しかし、ＲＮＡ逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣ
Ｒ）もまた、好ましくは利用されて、本発明の実施における、示差的に発現され
たＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子／遺伝子産物を同定し得る。ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ
（登録商標）法およびＲＴ−ＰＣＲ法の両方は、以下の節で詳細に議論される。
【００９６】 本明細書中に開示されるアッセイを利用する前に、ＦＨＲおよびＩＲＬ両方の
齧歯類系統により示された蛋白尿の程度を、コントロールＡＣＩ系統と比較して
、定量的に決定する。ＦＨＲおよびＩＲＬ両方の齧歯類系統は、顕著な蛋白尿を
示した。
【００９７】 （（Ａ）本発明の実験方法および材料） （（Ｉ）ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）によるＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子
の同定） （（ｉ）組織切開） ＦＨＲ、ＩＲＬ、およびＡＣＩ（コントロール）げっ歯類系統由来の腎臓組織
を、特許のＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）方法論によって分析した。
【００９８】 簡潔には、ＦＨＲ、ＩＲＬ、およびＡＣＩラットを、通常のラット固形飼料お
よび水を自由に与えて飼育した。ＦＨＲおよびコントロールのＡＣＩラットを１
．５ヶ月齢および７．５ヶ月齢で屠殺し、一方、ＩＲＬは１．５ヶ月例でのみ屠
殺する。１．５ヶ月齢のラットは、実施した実験血液検査の結果として「正常」
であるようであったが、７．５ヶ月齢までのＦＨＲは、著しい蛋白尿を発現した
ことが示される。この所見は、ＦＨＲにおける蛋白尿（および他の腎臓関連障害
）の発症の年齢の中央値がおよそ４ヶ月齢であったという以前の実験結果と一致
する。蛋白尿の発症を示す実験結果異常の後に、動物を屠殺し、そしてその腎臓
を摘出し、切開直後に液体窒素中で急速凍結した。腎臓を、続いてＧｅｎｅＣａ
ｌｌｉｎｇ（登録商標）プロトコルに利用するまで、−７０℃で貯蔵した。
【００９９】 （（ｉｉ）総細胞ＲＮＡおよびポリ（Ａ）+ｍＲＮＡの単離） 総細胞ＲＮＡを、５ｍｇの心臓、肝臓、脂肪、腎臓、または脳の組織から、ま
ず組織を液体窒素中で微細な粉末に粉砕することによって抽出した。次いで、こ
の粉末化された組織を、５００μｌのＴｒｉａｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ（登録商
標）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ
）を含むチューブに移し、そしてＰｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザー（Ｂｒｉｎｋ
ｍａｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ；Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ）を使用して分与し
た。例えば、Ｃｈｏｍｓｚｙｎｓｋｉら、１９８７．Ａｎｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．１６２、１５６〜１５９；Ｃｈｏｍｓｚｙｎｓｋｉら、１９９３．ＢｉｏＴ
ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １５：５３２〜５３３，５３６〜５３７を参照のこと。次
いで、総細胞ＲＮＡ画分を、相分離を容易にするために、５０μｌのＢＣＰ（１
−ブロモ−３−クロロプロパン；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｃｉ
ｎｃｉｎｎａｔｔｉ，ＯＨ）で抽出した。抽出混合物を、１２，０００×Ｇにて
４℃で１５分間遠心分離し、そして水相を取り出し、そして新鮮なチューブに移
した。次いで、ＲＮＡを、使用された最初の容量のＴｒｉａｚｏｌ Ｒｅａｇｅ
ｎｔ（登録商標）あたり０．５容量のイソプロパノールで沈澱させた。そしてこ
のサンプルを、１２，０００×Ｇで１０分間室温で再び遠心分離した。次いで、
上清を廃棄し、ペレットを７０％エタノールで洗浄し、そして１２，０００×Ｇ
で室温にて５分間再度遠心分離した。最後に、７０％エタノールを取り除き、そ
して遠心チューブを逆さまにして、その位置で立てて乾燥させた。得られたＲＮ
Ａペレットを、１００μｌの水（すなわち、１μｌ／最初の組織重量ｍｇ）中に
再懸濁させ、そして完全に溶解するまで５５℃まで加熱した。総細胞ＲＮＡの最
終濃度を、ＯｌｉＧｒｅｅｎ（登録商標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ
；Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を備える蛍光測定法によって定量した。さらに、総細胞
ＲＮＡの質を、分光測定法およびホルムアルデヒドアガロースゲル電気泳動の両
方によって決定した。
【０１００】 ポリ（Ａ）+ｍＲＮＡを、製造業者によって指示されるように、オリゴ（ｄＴ
）磁気ビーズ（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）を備えるか
またはＤｙｎａｂｅａｄｓ ｍＲＮＡ Ｄｉｒｅｃｔ Ｋｉｔ（登録商標）（Ｄ
ｙｎａｌ；Ｏｓｌｏ、Ｎｏｒｗａｙ）を備えた、アフィニティークロマトグラフ
ィーを使用して、１００μｇの総細胞ＲＮＡから調製した。ポリ（Ａ）+ｍＲＮ
Ａを、低容量の滅菌水中に回収し、そして最終的な収量を、ＯＤ260測定および
ＯｌｉＧｒｅｅｎ（登録商標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ；Ｅｕｇｅ
ｎｅ、ＯＲ）を用いた蛍光測定法によって定量した。ポリ（Ａ）+ｍＲＮＡを、
ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）プロトコルにおける引き続く利用のために
−２０℃で貯蔵した。
【０１０１】 （（ｉｉ）ｃＤＮＡ合成）） ＲＮＡサンプルを次いでＤＮａｓｅで処理し、ＤＮａｓｅで処置し、内因性の
夾雑ＤＮＡを除去した。１００ｍｇの組織あたり２８μｌの５×逆転写酵素緩衝
液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）
、１０μｌの０．１Ｍ ＤＴＴ、５ユニットのＲＮＡｇｕａｒｄ（登録商標）（
Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）および１
００ｍｇの組織あたり１ユニットのＲＮａｓｅ非含有ＤＮａｓｅＩ（登録商標）
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を、再懸濁したＲＮＡサンプルに添加
した。次いで、この反応混合物を、３７℃で２０分間インキュベートした。総Ｒ
ＮＡ濃度を、１００倍希釈物のＯＤ260を測定することによって定量し、そして
これらのサンプルを−２０℃で貯蔵した。
【０１０２】 ｃＤＮＡを、ポリ（Ａ）+ＲＮＡから以下の通りに合成した：ポリ（Ａ）+ＲＮ
Ａを、１０μｌの水中で、５０ｎｇのランダムヘキサヌクレオチド（５０ｎｇ／
μｌ）と混合した。これらの混合物を、７０℃まで１０分間加熱し、氷水スラリ
ー中で素早く冷やし、そして氷上で１〜２分間維持した。次いで、凝縮物を、微
量遠心機におけるおよそ１０秒間の遠心分離によって収集した。本発明の別の実
施態様では、２００ｐｍｏｌのオリゴ（ｄＴ）25Ｖ（ここでＶ＝Ａ、ＣまたはＧ
）を、ランダムヘキサヌクレオチドプライマーの代わりに利用した。
【０１０３】 第１鎖合成を、以下の試薬からなる反応混合物を加えることによって実行した
：プライマーがアニールしたポリ（Ａ）+ＲＮＡの各々に対して、４μｌの５×
第１鎖緩衝液（ＢＲＬ；Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）、２μｌの１００ｍ
Ｍ ＤＴＴ、１μｌの１０ｍＭ ｄＮＴＰミックス、および２μｌの水。次いで
、この反応混合物を、３７℃で２分間インキュベートし、１μｌのＳｕｐｅｒｓ
ｃｒｉｐｔ ＩＩ（登録商標）逆転写酵素（ＢＲＬ）を製造業者の推奨に従って
添加し、次いでこの反応物を３７℃で１時間インキュベートした。
【０１０４】 第２のｃＤＮＡ鎖を合成するために、サンプルを氷上に配置し、そして３０μ
ｌの５×第２鎖緩衝液、９０μｌの冷水、３μｌの１０ｍＭ ｄＮＴＰ、１μＬ
（１０ユニット）のＥ．ｃｏｌｉ ＤＮＡリガーゼ（ＢＲＬ）、４μｌ（４０ユ
ニット）のＥ．ｃｏｌｉ ＤＮＡポリメラーゼ（ＢＲＬ）、および１μｌ（３．
５ユニット）のＥ．ｃｏｌｉ ＲＮａｓｅＨ（ＢＲＬ）をチューブに添加し、そ
してこの反応物を、１６℃で２時間インキュベートした。次いで、得られたｃＤ
ＮＡを２μｌのＴ４ ＤＮＡポリメラーゼ（５ユニット）とともに、１６℃で５
分間インキュベートした。
【０１０５】 得られたｃＤＮＡを、反応混合物に以下のものを加えて、Ａｒｃｔｉｃ Ｓｈ
ｒｉｍｐ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（「ＳＡＰ」；ＵＳＢ；
Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ ＯＨ）で脱リン酸化した：２０μｌ １０×ＳＡＰ緩衝液
、２５μｌの水、および５μｌ（５ユニット）のＳＡＰ。この反応物を、３７℃
で３０分間インキュベートした。
【０１０６】 このｃＤＮＡを、フェノール−クロロホルム（５０：５０ｖ／ｖ）、クロロホ
ルム−イソアミルアルコール（９９：１ｖ／ｖ）で抽出し、そして最終濃度０．
３Ｍの２０μｇグリコーゲンおよび２容量のエタノールへのＮａＯＡｃ（ｐＨ５
．０）の添加によって水相から沈澱させた。この反応物を−２０℃で１０分間イ
ンキュベートし、そしてこのｃＤＮＡを、１４，０００×ｇで１０分間遠心分離
することによって収集した。次いで、この上清を吸引し、そしてｃＤＮＡペレッ
トを７５％エタノールで洗浄し、ＴＥ中に再懸濁し、そしてｃＤＮＡの収率を、
Ｐｉｃｏｇｒｅｅｎ（登録商標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ；Ｅｕｇ
ｅｎｅ、ＯＲ）を用いて蛍光測定法を使用して評価した。
【０１０７】 （（ｉｉｉ）ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）発現分析） 続くＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）発現分析のために、７５ｎｇのｃＤ
ＮＡを、別のチューブに移し、ＴＥ中に濃度６００ｎｇ／ｍｌまで再懸濁し、そ
して−２０℃で貯蔵した。
【０１０８】 ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）方法論は、ＰＣＴ公開公報ＷＯ９７／１
５６９０（１９９７年５月１日付、Ｎａｎｄａｂａｌａｎら）に開示されるよう
に実施した。例示のため（限定のためではない）に、ＩＲＰＲ（ＩＮＦ−β）を
コードするＰＣ４遺伝子に対して実施した典型的なＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登
録商標）分析を、本明細書中に開示する。ＩＮＦ−βをコードする核酸の制限エ
ンドヌクレアーゼ（ＲＥ）消化を、ＢｓｒＦＩ制限エンドヌクレアーゼおよびＢ
ｇｌＩＩ制限エンドヌクレアーゼを用いて実施した。続くＧｅｎｅＣａｌｌｉｎ
ｇ（登録商標）分析のためのアダプター分子を、リンカーおよびプライマーオリ
ゴヌクレオチドから調製した。ＢｓｒＦＩ制限エンドヌクレアーゼにより生成さ
れた「粘着性」末端のために、リンカーオリゴヌクレオチド：５’−ＧＧＣＣＣ
ＧＡＡＧＴＡＣＡ−３’［配列番号１］およびプライマーオリゴヌクレオチド：
５’−ＧＧＣＣＣＧＡＡＧＴＡＣ−３’［配列番号２］を使用した。ＢｇｌＩＩ
制限エンドヌクレアーゼにより生成された「粘着性」末端のために、リンカーオ
リゴヌクレオチド：５’−ＧＧＣＣＣＡＧＣＣＡＣＴ−３’［配列番号３］およ
びプライマーオリゴヌクレオチド：５’−ＧＧＣＣＣＡＧＣＣＡＣ−３’［配列
番号４］を使用した。一方のセットのプライマーを、ＦＡＭ蛍光標識で標識化し
、そして他方のセットを、ビオチン部分で標識化した。アダプターを、リンカー
オリゴヌクレオチドおよびプライマーオリゴヌクレオチドを水中で濃度比１：２
０（リンカー対プライマー）で共に混合することにより調製し、プライマーは、
総濃度５０ｐｍ／μｌで維持した。この反応混合物を５０℃で１０分間インキュ
ベートし、次いで室温までゆっくりと冷却させ、リンカーとプライマーとをアニ
ールさせた。このアダプターを−２０℃で貯蔵した。他のオリゴヌクレオチドリ
ンカーおよびプライマーが、他のＧＥＮＥ ＳＥＴタンパク質の１つをコードす
る核酸配列と共に使用するために必要とされることに留意されたい。必然的に、
これらのオリゴヌクレオチド分子の配列は、特定のＧＥＮＥ ＳＥＴ配列の核酸
配列に依存し、そして当業者によって容易に確認され得る。
【０１０９】 ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）反応を、自動化ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ
（登録商標）手順を用いて実施した。反応を、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏｍｅｋ
２０００（登録商標）ロボット（Ｂｅｃｋｍａｎ；Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）
を用いる標準的な９６ウェル熱サイクラーフォーマットにおいて実施した。ｃＤ
ＮＡサンプルを、ＢｓｒＦＩ制限酵素およびＢｇｌＩＩ制限酵素を用いて三連で
分析した。全ての工程は、溶液混合（ユーザー提供によるストック試薬から）お
よび温度プロフィール制御を包含するロボットによって実施した。
【０１１０】 ＲＥ／リガーゼ反応は、１反応あたり以下の成分を含有した：１Ｕの各Ｂｓｒ
ＦＩおよびＢｇｌＩＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ；Ｂｅｖｅｒ
ｌｙ、ＭＡ）、１μｌの各アニールアダプター（上述のように調製した、１０ｐ
ｍ）、０．１μｌのＴ4ＤＮＡリガーゼ［１ユニット／μｌ］（Ｌｉｆｅ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）、１μｌの１０ｍＭ
ＡＴＰ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、５ｎｇの調製ｃＤＮＡ、１
．５μｌの１０×ＮＥＢ２緩衝液（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）
、０．５μｌの５０ｍＭ ＭｇＣｌ2および水（総容量１０μｌになるまで）。
次いで、この反応物を熱サイクラーに移した。
【０１１１】 このロボットは、機械操作の蓋を備えたＰＴＣ−１００（登録商標）熱サイク
ラー（ＭＪ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｗａｔｅｒｔｏｗｎ、ＭＡ）において、以下の
温度プロフィールを用いてＲＥ／連結反応を実施した：３７℃で１５分間、５分
間で２１℃に下げる、１６℃で３０分間、３７℃で１０分間、および６５℃で１
０分間。
【０１１２】 ＰＣＲ反応混合物は、１反応あたり以下の成分を含有した：１０μｌの５×
Ｅ−Ｍｇ（３００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ９．０、７５ｍＭ（ＮＨ4）2Ｓ
Ｏ4）、１００ｐｍのＢｓｒＦＩプライマーおよびＢｇｌＩＩプライマー［それ
ぞれ配列番号１６および１８］、１μｌの１０ｍＭ ｄＮＴＰ混合物（Ｌｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２．５ユニットの５０：１希釈のＫｌｅｎＴａ
ｑポリメラーゼ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）：ＰＦＵポリメラーゼ
（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）、および水（１ＰＣＲ反応
当たり総反応容量が３５μｌになるまで）。
【０１１３】 次いで、ＰＣＲ反応を７２℃に加熱し、３５μｌを各別個の消化／連結反応に
移した。ＰＴＣ−１００（登録商標）熱サイクラーは、次いで、７２℃で１０分
間、９５℃で３０秒間および６８℃で１分間の１５サイクル、次いで７２℃で１
０分間の熱プロフィールを有するＰＣＲ反応を実施し、最後にはこの反応を４℃
で維持した。
【０１１４】 さらなる分析の前に、ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）産物を、以下のよ
うにＰＣＲ後クリーンアッププロトコルに供した：ＭＰＧ（登録商標）ストレプ
トアビジン磁気ビーズ（ＣＰＧ；Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｐａｒｋ、ＮＪ）を、５μｌ
の原容量のＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）反応産物当たり１０μｌの結合
緩衝液（５Ｍ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＴＲＩＳ、ｐＨ８．０．１ｍＭ ＥＤＴＡ
）中でビーズを予め洗浄することにより調製した（各５μｌのＧｅｎｅＣａｌｌ
ｉｎｇ（登録商標）反応産物について３μｌのビーズ）。処理した各ＧｅｎｅＣ
ａｌｌｉｎｇ（登録商標）サンプルにつき、１０μｌの洗浄ビーズを、９６ウェ
ルＦＡＬＣＯＮ（登録商標）ＴＣプレート中に分与した。ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎ
ｇ（登録商標）産物を、ビーズに添加し、十分に混合し、そして５０℃で３０分
間インキュベートした。このサンプル容量を１００μｌの結合緩衝液によって作
製し、プレートを９６ウェル磁気粒子コンセントレーター上に配置し、そしてビ
ーズを５分間移動させた。次いで、液体を除去し、そして２００μｌの洗浄緩衝
液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＥＤＴＡ）を１ウェル当たり
に添加した。次いで、この洗浄工程を繰り返した。
【０１１５】 分析のために、ビーズを、５μｌのビーズ当たり５μｌのローディング緩衝液
（８０％脱イオンホルムアルデヒド、２０％ ２５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０
、５０ｍｇ／ｍｌ Ｂｌｕｅ Ｄｅｘｔｒａｎ中に再懸濁し、次いでこの上清を
、分析のためのＧｅｎｅＳｍａｙ（登録商標）コンピューターソフトウェア（Ａ
ＢＩ）を用いる変性条件下のＡＢＩ３７７（登録商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）自動化配列決定機上での電気泳動によって分析し
た。ＧｅｎｅＳｍａｙ５００（登録商標）ＲＯＸラダー（ゲルサンプルローディ
ング緩衝液中１：１０希釈）を、続くＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）分析
の間のサイズ制御に利用した。ＩＲＰＲ（ＩＮＦ−β）をコードするＰＣ４遺伝
子のディファレンシャル発現についてＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）方法
論によって得られた結果を、図１に示す。
【０１１６】 次いで、「オリゴヌクレオチド毒作用（ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐ
ｏｉｓｏｎｉｎｇ）」を実施し、推定のディファレンシャル発現フラグメントが
本来推定された遺伝子であったことを確認した。
【０１１７】 （（ｉｖ）Ｏｌｉｇｏ−ＰｏｉｓｏｎｉｎｇTM方法論によるＧｅｎｅＣａｌｌ
ｉｎｇ（登録商標）結果の確証） 本発明は、Ｏｌｉｇｏ−ＰｏｉｓｏｎｉｎｇTMとして知られる推定確証方法論
を使用する。この方法論は、サンプル中に実際に存在する、観察されたＧｅｎｅ
Ｃａｌｌｉｎｇ（登録商標）シグナルを生じると推定された推定で同定された配
列を含む核酸を同定する。この方法は、核酸含有サンプル内でプローブ手段によ
り認識される「標的」サブ配列に隣接する、特定の、規定のフランキング核酸サ
ブ配列の存在を確認する。重要なことには、Ｏｌｉｇｏ−ＰｏｉｓｏｎｉｎｇTM はまた、特定の一般配列（ｇｅｎｅｒｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）の構造またはモ
チーフを有する核酸フラグメントの任意のサンプルにおける推定の配列同定を確
認するのに等しく適用可能である。この一般構造は、ＰＣＲプライマーとして作
用し得る公知の末端サブ配列を有するフラグメントのみに制限する。
【０１１８】 Ｏｌｉｇｏ−ＰｏｉｓｏｎｉｎｇTMは、推定で同定されたサブ配列を有さない
、ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）反応内に含まれる全ての核酸フラグメン
トについて検出可能な結果を生じるように、例えば、ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（
登録商標）反応産物のＰＣＲ増幅をまず行うことにより進行する。本発明の好ま
しい実施態様では、これは、推定で同定されたサブ配列を有する核酸フラグメン
トのみを増幅するように設計された「毒作用」プライマーをモル過剰で添加する
ことにより達成される。毒作用プライマーは、好ましくは、未標識であり得るか
、またはこれは、ＰＣＲ増幅反応において利用される任意の他のタイプの標識と
区別されるように標識化され得る。ＰＣＲ増幅後、得られた反応産物を、次いで
、電気泳動によって分離し、そして種々のフラグメントの電気泳動移動度を調べ
る。増幅を受けた推定で同定されたサブ配列を含む核酸フラグメントは、好まし
くは、未標識であるので、それらは、検出可能なシグナルを生じない。
【０１１９】 一般に、Ｏｌｉｇｏ−ＰｏｉｓｏｎｉｎｇTM確証方法論において利用されるＰ
ＣＲ増幅反応のパラメーターは、好ましくは、開始時ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（
登録商標）シグナルの生成において使用されるパラメーターと類似または同一で
ある。これは、Ｏｌｉｇｏ−ＰｏｉｓｏｎｉｎｇTMをＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（
登録商標）に適用する場合、「毒作用」シグナルを開始時ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎ
ｇ（登録商標）シグナルに容易に比較し得ることに起因して、特に有利である。
例示の好ましいＰＣＲプロトコルの詳細を、以下の節に記載する。特に、例えば
、ホットスタートＰＣＲ方法を使用することが好ましく、ワックス重層技術を利
用する好ましいホットスタート方法を、続いて、以下にさらに詳細に記載する。
【０１２０】 本発明のワックス重層技術の実施において、ＰＣＲ反応容器を、反応容器のよ
り低い部分にｄＮＴＰおよび水を入れ；このｄＮＴＰ溶液の上部にワックスを重
層し；そしてＰＣＲ反応混合物の残りをワックス層の上部に配置することにより
設定する。以前に記載のように、使用したワックスは、好ましくは、７２℃近傍
であるがそれより低い温度で迅速に融解する。この温度は、ＰＣＲ増幅の伸長相
のために好ましい。ＰＣＲ増幅の間、第一の熱サイクルは、およそ９６℃の変性
温度で開始する。この温度は、ワックスを融解し、試薬区画の混合を生じさせ、
増幅を開始させるのに十分である。ＰＣＲ熱プロフィールは、以下の節に記載の
ように実施する。好ましいストリンジェントなアニーリング温度は少なくともお
よそ５７℃である。また、ＰＣＲ増幅において使用される通常のプライマー対の
一方のプライマーはビオチン化され得、これによって、投入サンプルからの除去
フラグメントの除去を容易にするように磁気ビーズ分離技術の利用を可能にする
。
【０１２１】 最後のＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）手段は、フラグメント長および（
もしあるならば）末端標識の検出に引き続く、増幅されたフラグメントの長さに
よる分離である。ｃＤＮＡサンプルより切除されたフラグメントの長さは、一般
に、ほんの何塩基対からおそらく１０００ｂｐまでの範囲にわたる。適当な長さ
の分解能（好ましくは１０００塩基対配列中少なくとも３ｂｐに）を伴う任意の
分離法が、用いられ得る。当該分野において公知の任意の適切な配列においては
、ゲル電気泳動を用いるのが、好ましい。ゲル電気泳動は、平均フラグメント成
分の認識および移動度の差を引き起こす成分の補正と共に、３以上の塩基対だけ
異なる分離フラグメントを分解可能であり、長さ精度を１ｂｐに下げることが達
成可能である。好ましい電気泳動装置は、分析のためにＧｅｎｅＳｃａｎTMソフ
トウェア（ＡＢＩ）を用いるＡＢＩ３７７TM（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔ
ｅｍｓ，Ｉｎｃ）自動配列決定器である。この電気泳動は、ｄｓＤＮＡをハイブ
リダイズされたままにし続け、そして（もしあるのならば）両プライマーの標識
を保有する、非変性であり得る添加液中の反応産物を撹拌することによって行わ
れ得る。（鎖成分または有意な鎖二次構造において大きな平均差異の非存在下で
）ｄｓＤＮＡが一般に共に移動することが期待される一本鎖に分離する添加液も
また、変性であり得る。
【０１２２】 長さの分布は、種々の検出手段を用いて検出される。標識を用いない場合、染
色するおよび色素を挿入する抗原（Ａｇ）ならびに抗体（Ａｂ）のような手段が
、用いられ得る。本明細書中で、以前に記載された手順によって、各々のバンド
がその標的末端の続きとして明瞭に同定され得るように、反応産物をクラスに分
類するのに有利であり得る。蛍光色素標識の場合において、複数の蛍光色素標識
が一般にゲル中で単一のバンドから分離され得るので、いくつかのＲＥもしくは
他の認識手段を伴う１つの認識反応の産物、またはいくつかの分離認識反応の産
物が、単一のレーンにおいて分析され得る。しかし、１つのバンドが複数の蛍光
色素標識からのシグナルを示す場合、挿入は、不明瞭である：このようなバンド
は、複数のＲＥと共に切られる１つのフラグメントによるか、または１つのＲＥ
によって各々が切られる複数のフラグメントによる。この場合において、反応産
物をクラスに分離するのにも、有利であり得る。
【０１２３】 Ｏｌｉｇｏ−ＰｏｉｓｏｎｉｎｇTM確証方法論は、基質としてＧｅｎｅＣａｌ
ｌｉｎｇ（登録商標）反応産物を用いるＰＣＲ反応物中に含まれる所望のＧＥＮ
Ｅ ＳＥＴ配列にハイブリダイズ可能で、従って、標識されたプライマーを用い
て増幅を阻止可能な、ヌクレオチド配列を有する非標識オリゴヌクレオチドを含
む。特に、各々のオリゴヌクレオチド毒作用（ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ）反応混合物
は、以下を含む：１μｌのＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）反応産物の１：
１００希釈、５μｌのＴＢ２．０（５００ｍＭ ＴＲＩＳ−ＨＣｌ（ｐＨ９．１
５）、１６０ｍＭ （ＮＨ4）2ＳＯ4、２０ｍＭ ＭｇＣｌ2、２μｌのｄＮＴＰ
の１０ｍＭ 等モル混合物、各々０．２μｌのＢｓｒＦＩプライマーおよびＢｇ
ｌＩＩプライマー（１００ｐｍ／ｌ）、２μｌのＧＥＮＥ ＳＥＴ「オリゴヌク
レオチド毒作用」プライマー（１０００ｐｍ／ｍｌ）、１μｌの５Ｍ ベタイン
、１μｌのＮＥＢ ２緩衝液（１０ｍＭ ＴＲＩＳ−ＨＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣ
ｌ2、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ（２５℃でｐＨ７．９）、０．２５
μｌ（２５Ｕ／μｌ）の１６：１希釈のＫｌｅｎＴａｑ：ＰＦＵおよび３８μｌ
の水。
【０１２４】 以下のＰＣＲ増幅手順が、サーマルサイクラー中で合計１３サイクル実施され
た：９６℃で３０秒間；５７℃で１分間；７２℃で２分間。次いで増幅された産
物は、前出の、以前に記載されたような自動配列決定装置を利用する、引き続く
分析のために４℃で保持された。
【０１２５】 ＩＲＰＲ（ＩＮＦ−β）をコードするＰＣ４遺伝子に関する確証的な、Ｏｌｉ
ｇｏ−ＰｏｉｓｏｎｉｎｇTMの結果は、図２に図示される。次いで類似の反応が
、残りの差示的に発現されたＧＥＮＥ ＳＥＴ遺伝子／遺伝子産物に関して実施
された。
【０１２６】 （（ＩＩ）ＲＮＡ逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）によるＧＥＮ
Ｅ ＳＥＴ遺伝子の同定） （（ｉ）組織の切開） ＦＨＲ、ＩＲＬおよびＡＣＩ（コントロール）げっ歯類系統に由来する腎臓組
織を、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）増幅方法論によってもまた
分析し得る。
【０１２７】 ＦＨＲ、ＩＲＬおよびＡＣＩラットを、随意の通常のラットの食餌および水に
おいて維持した。ＦＨＲおよびコントロールＡＣＩラットを、１．５月齢および
７．５月齢にて屠殺し、一方ＩＲＬを１．５月齢のみにおいて屠殺した。１．５
月のラットは、実行した実験室での血液実験の結果として「正常」のようであっ
たが、７．５月齢でのＦＨＲは、発症した顕著な蛋白尿を有したことを示した。
この知見は、ＦＨＲにおける蛋白尿（および他の腎関連障害）の開始の中央値の
月齢が、約４月齢であったということを見出した以前の実験結果と一致する。蛋
白尿の開始を示す異常な実験室の結果の後に、動物を屠殺し、その腎臓を取り出
し、切開の直後に液体窒素中で迅速に凍結した。その腎臓を−７０℃で、その後
にＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）プロトコールにおいて使用するまで、保
存した。
【０１２８】 （（ｉｉ）総細胞ＲＮＡの単離） 総細胞ＲＮＡを、５ｍｇの心臓、肝臓、脂肪、腎臓、または脳組織から、最初
にその組織を液体窒素中で微粉末に粉砕することによって抽出した。次に、粉末
化した組織を、５００μｌのＴｒｉａｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ（登録商標）（Ｌ
ｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を含有
するチューブ中に移し、Ｐｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザー（Ｂｒｉｎｋｍａｎ
Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ；Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ＮＹ）を使用して分散した。例え
ば、Ｃｈｏｍｓｚｙｎｓｋｉら、１９８７、Ａｎｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６
２ １５６〜１５９；Ｃｈｏｍｓｚｙｎｓｋｉら、１９９３、Ｂｉｏｔｅｃｈｎ
ｉｑｕｅｓ １５：５３２〜５３３、５３６〜５３７を参照のこと。次に、総細
胞ＲＮＡ分画を５０μｌのＢＣＰ（１−ブロモ−３−クロロプロパン；Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨ）を用いて抽出し
、層分離を促進する。抽出混合物を、１５分間４℃で１２，０００×Ｇで遠心分
離し、そして水相を取り出して、新しいチューブに移した。次に、ＲＮＡを、使
用したＴｒｉａｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ（登録商標）の最初の容量あたり０．５
容量のイソプロパノールを用いて沈殿させ、そしてサンプルを、室温で１０分間
、１２，０００×Ｇで遠心分離した。次に上清を棄て、ペレットを７０％エタノ
ールで洗浄し、室温で５分間１２，０００×Ｇで再度遠心分離した。最後に、７
０％エタノールを除去し、遠心分離チューブを逆さにして、その位置で乾燥まで
静置させた。生じるＲＮＡペレットを、１００μｌの水に再懸濁し（すなわち、
最初の組織重量１ｍｇあたり１μｌ）、そして完全に溶解するまで５５℃に加熱
した。総細胞ＲＮＡの最終濃度を、ＯｌｉＧｒｅｅｎ（登録商標）（Ｍｅｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ；Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を用いる蛍光比色法によって定
量した。さらに、総細胞ＲＮＡの質を、分光光度法およびホルムアミドアガロー
スゲル電気泳動の両方によって決定した。総細胞ＲＮＡを、次のＲＴ−ＰＣＲプ
ロトコールにおける利用のために、−２０℃で保存した。
【０１２９】 （（ｉｉｉ）ＲＮＡ逆転写（ＲＴ）反応） 最初の逆転写反応を、以下のように行った：１μｇの総細胞ＲＮＡを、１１μ
ｌのＲＮａｓｅを含まない水（Ａｍｂｉｏｎ）中で、１μｌ（２０：１希釈；１
００ｐｍｏｌ／μｌ）のオリゴ（ｄＴ）25Ｖプライマー（ここで、Ｖ＝Ａ、Ｃま
たはＧ；Ａｍｉｔｏｆｆ）と混合した。任意のＲＮＡ二次構造を、７０℃で１０
分間加熱することによって変性し、その後氷上で迅速に冷却した。次に、変性Ｒ
ＮＡを１５秒間の遠心分離によって微量遠心管中で収集し、各チューブに以下を
添加した：４μｌの５×第一鎖反応緩衝液（ＢＲＬ）；２μｌの０．１ｍＭ Ｄ
ＴＴおよび１μｌの１０ｍＭ ｄＮＴＰ混合液（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。反応混
合物を、３７℃に２分間加熱し、そして１μｌのＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩ逆
転写酵素（ＢＲＬ）を添加し、その後３７℃で１時間インキュベーションを続け
た。
【０１３０】 （（ｉｖ）ＰＣＲ媒介性ＲＴ産物増幅） 逆転写の後、次に、各サンプルをＰＣＲ媒介性増幅に供した。全部で１０のサ
ンプルについて、以下のＰＣＲ反応混合液を調製した：５０μｌの１０×ＰＣＲ
緩衝液；１０μｌのｄＮＴＰ混合液；１０μｌの「センス」プライマー（１００
ｐｍｏｌ／μｌ；Ｐｈａｒｍａｃｉａ）；１０μｌの「アンチセンス」プライマ
ー（１００ｐｍｏｌ／μｌ；Ｐｈａｒｍａｃｉａ）；２μｌのＫｌｅｎＴａｑ（
Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および４１８μｌのＲＮａｓｅを含まな
い水。当該分野における個々の当業者が、目的の配列について相同性を有する「
センス」プライマーおよび「アンチセンス」プライマーの両方を容易に設計し得
ることに留意すべきである。ＲＴ−ＰＣＲ反応について、４９μｌのＰＣＲ反応
混合液を、１μｌの最初のＲＴ反応液に添加し、そしてＰＣＲ増幅を全部で３０
サイクル、以下の条件において、サーマルサイクラー中で行った：９６℃、３０
秒間；５７℃、１分間；７２℃、２分間。次に、増幅された産物を、次の分析の
ために４℃に保ち、そしてアガロースゲル電気泳動を行い、ＲＴ−ＰＣＲ産物の
質を確認した。
【０１３１】 さらなる分析の前に、ＲＴ−ＰＣＲ産物を、以下のようなＰＣＲ後の浄化プロ
トコールに供した：ＭＰＧ（登録商標）ストレプトアビジンマグネチックビーズ
（ＣＰＧ；Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｐａｒｋ、ＮＪ）を、そのビーズをＲＴ−ＰＣＲ反
応産物の最初の容量５μｌあたり、１０μｌの結合緩衝液（５Ｍ ＮａＣｌ、１
０ｍＭ ＴＲＩＳ、ｐＨ ８．０、１ｍＭ ＥＤＴＡ）中で前洗浄することによ
って調製した（全ての５μｌのＲＴ−ＰＣＲ反応産物について３μｌのビーズ）
。１０μｌの洗浄したビーズを、処理した全てのＲＴ−ＰＣＲサンプルについて
、９６ウェルのＦＡＬＣＯＮ（登録商標）ＴＣプレート中に分配した。ＲＴ−Ｐ
ＣＲ産物を、そのビーズに添加して、十分に混合し、そして３０分間５０℃でイ
ンキュベートした。そのサンプル容量を、結合緩衝液を用いて１００μｌとし、
そのプレートを、９６ウェルのマグネチック粒子コンセントレーター上に配置し
、そしてそのビーズを５分間移動させた。次に液体を取り除き、そして、１ウェ
ルあたり２００μｌの洗浄緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ
ＥＤＴＡ）を添加した。次に、洗浄工程を繰り返した。
【０１３２】 分析のために、ビーズを、５μｌのビーズあたり５μｌのローディング緩衝液
（８０％ 脱イオンホルムアミド、２０％ ２５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０、
５０ｍｇ／ｍｌ ブルーデキストラン）中に再懸濁し、そして次に上清をＡＢＩ
３７７（登録商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）自動
化シーケンサーにおいて、変性条件下で、分析のためのＧｅｎｅＳｍａｙ（登録
商標）コンピュータソフトウェア（ＡＢＩ）を使用して、電気泳動によって分析
した。その後のＲＴ−ＰＣＲ分析の間に、ＧｅｎｅＳｍａｙ ５００（登録商標
）ＲＯＸラダー（ゲルサンプルローディング緩衝液中に、１：１０に希釈）をサ
イズコントロールに利用した。
【０１３３】 （（Ｂ）実験結果の生理学的および生化学的意義） 約１０，０００の遺伝子から生成された全体で２０，０００の遺伝子フラグメ
ントを、三連において、３つのラット系統の各々に由来する腎臓組織サンプルの
間で比較した。
【０１３４】 次に、疾患動物（すなわち、ＦＨＲおよびＩＲＬ系統）とコントロール（すな
わち、ＡＣＩ系統）動物との間における、以前に特徴付けられた「共通の」差示
的に発現する遺伝子の経時的比較を行った。全体で３６の遺伝子フラグメントを
、この技術を使用して同定した。
【０１３５】 次に、ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）方法論の利用を介するさらなる分
析を提供した。ＧｅｎｅＣａｌｌｉｎｇ（登録商標）方法論の使用によって、本
発明は、これらのラット系統において差示的に発現されることが見出された全部
で１６の遺伝子（ＧＥＮＥ ＳＥＴ）を開示する。ＧＥＮＥ ＳＥＴを含む差示
的に発現する遺伝子を、表１に記載する。
【０１３６】 （（ｉ）亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ）） 表１において記載されるように、ＡＣＩコントロールげっ歯類のｍＲＮＡレベ
ルとの比較において、亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ；ＧｅｎＢａｎ
ｋ Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｚ２５０７３）のｍＲＮＡ発現における４５分の１の減少が
、ＦＨＲおよびＡＣＩ動物において見られた。
【０１３７】 亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ）は、細胞外酵素の典型的な特徴を
有する単一のタイプのサブユニットから構成される細胞表面ペプチダーゼである
。細胞外酵素は、触媒部位を含むその分子の大部分が外部（細胞質ではない表面
）に曝露される、内在性の形質膜タンパク質である。例えば、Ｋｅｎｎｙおよび
Ｔｕｒｎｅｒ、１９８７、Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｅｃｔｏｅｚｙｍｅｓ、１〜１
３頁（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ
．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）を参照のこと。細胞外基質に対して作用するこれらの
酵素は、分泌された調節分子および腸の食事性の基質の代謝、ならびに細胞間相
互作用の調節に関与する。例えば、Ｌｕｚｉｏら、１９８７、Ｍａｍｍａｌｉａ
ｎ Ｅｃｔｏｅｚｙｍｅｓ、１１１〜１３７頁（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）を参照のこ
と。
【０１３８】 亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ）は、そのタンパク質のアミノ末端
の小さな細胞質性領域に隣接する疎水性ドメインを介して膜に固着する（例えば
、Ｆｅｒａｃｃｉら、１９８２、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ
６８４：１３３〜１３６を参照のこと）。短い「ストーク（ｓｔａｌｋ）様」の
突出は、膜貫通ドメインと、その分子の大部分を含む親水性の細胞外領域とを結
合する（例えば、Ｈｕｓｓａｉｎら、１９８１、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９９：
１７９〜１８６を参照のこと）。オリゴペプチドの中性のアミノ末端アミノ酸残
基を優先的に除去する亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ）の触媒活性は
、細胞外領域に存在する。例えば、Ｌｏｕｖａｒｄら、１９７５、Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ３８９：３８９〜４００を参照のこと。亜鉛ペ
プチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ）は、多数の組織（中枢神経系を含む）に広
範に分布することが実証され、そして腎臓および腸微絨毛において特に豊富であ
る。ラットにおける多数の組織の比較において、亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプ
チダーゼＮ）の転写物は、腎臓においては、その次に最も豊富な組織である肺の
約５倍多いことが見出された。例えば、ＷａｔｔおよびＹｉｐ、１９８９、Ｊ，
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：５４８０〜５４８７を参照のこと。これらの知見
は、アミノペプチダーゼＮが、腸への吸収前に食事性基質を切断し、そして細胞
表面そのようなペプチドを不活性化することによってホルモンおよび神経伝達物
質の作用を調節するように機能するという提唱をもたらした（例えば、Ｔｕｒｎ
ｅｒら、１９８７、Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｅｃｔｏｅｚｙｍｅｓ、２１１〜２４
８頁（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ
．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）を参照のこと）。
【０１３９】 ヒト亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ）は、１５番染色体に位置する
単一の遺伝子（ＫＺＰと称する）によってコードされることが示されている。例
えば、ＷａｔｔおよびＹｉｐ、１９８９、Ｊ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：５
４８０〜５４８７を参照のこと。いくつかの哺乳動物種（ヒトを含む）において
、相対的濃度が、異なる組織間で変化する約３．４ｋｂおよび３．９ｋｂの２つ
のｍＲＮＡが実証されている。これら複数の転写物は、偽遺伝子の存在に起因し
ないようである。ｍＲＮＡサイズの差は、（ｉ）３’イントロン領域または５’
イントロン領域の異なる長さ、あるいは（ｉｉ）同一の遺伝子からの初期の転写
物の選択的スプライシング、のいずれかに起因し得る。
【０１４０】 ＦＨＲおよびＩＲＬ動物における亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ）
ｍＲＮＡの４５分の１の減少は、この転写物が腎臓において通常高レベルである
ことに起因して、興味深い。本発明において開示されるように、ＦＨＲおよびＩ
ＲＬラット系統は、亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ）転写物発現の劇
的な減少を有する。従って、この酵素の外来的投与は、腎疾患および／または関
連する障害の有害な生理学的効果のいくつかを寛解するように機能し得る。さら
に、亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼＮ）ｍＲＮＡのレベルの定量は、腎
疾患に対する素因についての予後試験、あるいは初期臨床／無症状での腎疾患ま
たは関連する障害の診断において有用であり得る。
【０１４１】 （（ｉｉ）Ｆ1Ｆ0ＡＴＰａｓｅのδサブユニット） 表１に示すように、Ｆ1Ｆ0ＡＴＰａｓｅのδサブユニット（ＧｅｎＢａｎｋ
Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｕ００９２６）ｍＲＮＡ発現の１０分の１の減少が、ＡＣＩコン
トロール動物におけるこの転写物のレベルと比較して、ＦＨＲおよびＩＲＬ動物
系統において実証された。
【０１４２】 Ｆ1Ｆ0ＡＴＰａｓｅ酵素は、形質膜の内部表面に局在し、ここで、この酵素は
、細胞性ＡＴＰと膜内外のプロトンの電気化学的勾配におけるエネルギーとの相
互交換を触媒する。内在性の膜結合プロトンチャンネル（ＦO）は、３つのサブ
ユニット（ａ、ｂおよびｃ）を含み、一方、外在性触媒部位（Ｆ1）は、５つの
サブユニット（α、β、δ、εおよびγ）を含む。例えば、Ｓｅｎｉｏｒ、１９
９０、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．１９：７
〜４１を参照のこと。このγサブユニットは、酵素の触媒機能において非常に重
要な役割を担い、そしてＦ1部分のアセンブリ（例えば、Ｋｌｉｏｎｓｋｙおよ
びＳｉｍｏｎｉ、１９８５、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：１１２００〜１
１２０６を参照のこと）およびＦOおよびＦ1部分の間のプロトンのゲーティング
の両方に関係している（例えば、Ｙｏｓｈｉｄａら、１９７７、Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：９３６〜９４０を参照のこと）。 （ｉｉｉ）ケラチン１９ 表１に示されるように、ケラチン１９遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ｘ８１
４４９）の発現において、ＡＣＩコントロール動物におけるこの転写物のレベル
と比較して、ＦＨＲ系統およびＩＲＬ系統において７倍の増加が示された。
【０１４３】 ケラチン１９は、上皮細胞（特に、単層上皮）の異なる型において見出される
、中間体フィラメントポリペプチドである。例えば、Ｍｏｌｌら、１９８２、Ｃ
ｅｌｌ ３１：１１〜２４を参照のこと。ケラチン１９は、分子量４９ｋＤａｌ
を保有し、そして等電点５．２を保有し（酸性ポリペプチドとして分類される）
、従って、このケラチン１９は、既知の主要なサイトケラチンのうち最小のもの
となる。
【０１４４】 ヒト尿生殖器管上皮（例えば、前立腺および腎臓）は、免疫組織化学的染色法
によって、非常に高いレベルのケラチン１９を含むことが示されている。例えば
、Ｎａｇｌｅら、１９９１、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１３８：１１９〜１２８を参
照のこと。前立腺において、ケラチン１９は、異質性様式で発現されることが示
され、そして正常な組織、形成異常な組織および良性の過形成組織に、基底細胞
および管腔細胞の両方において生じた。例えば、Ｐｅｅｈｌら、１９９６、Ｃｅ
ｌｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅｓ．２８５：１７１〜１７６を参照のこと。興味深い
ことに、前立腺癌から直接由来する細胞、および腫瘍性上皮（例えば、ＰＣ−３
前立腺癌細胞株）に由来するいくつかの細胞株由来の細胞もまた、ケラチン１９
を含むことが示されたが、少数の細胞においてであった。例えば、Ｓｈｅｒｗｏ
ｏｄら、１９９０、Ｊ．Ｕｒｏｌ．１４３：１６７〜１７１を参照のこと。
【０１４５】 （ｉｖ）脳カルビンディン（ｃａｌｂｉｎｄｉｎ）−ｄ２８ｋ（ＣａＢＰ２８
Ｋ） 表１に示されるように、脳カルビンディン−ｄ２８ｋ（ＣａＢＰ２８Ｋ）遺伝
子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ｍ２７８３９）の発現は、コントロールのＡＣＩ株
におけるこの転写物のレベルと比較して、ＦＨＲ動物およびＩＲＬ動物において
１／６に減少したことが示された。
【０１４６】 脳カルビンディン−ｄ２８ｋ（ＣａＢＰ２８Ｋ）は、Ｃａ2+結合タンパク質（
ＣａＢＰ）のＥＦハンドファミリーのメンバーであり、このＣａ2+結合タンパク
質は、遊離の細胞内Ｃａ2+の封鎖および調節に関与する多くの生理学的プロセス
に関与する。例えば、Ｌｅａｔｈｅｒら、１９９０、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２６５：９８３８〜９８４１；ＲｅｎおよびＲｕｄａ、１９９４、Ｂｒａｉｎ
Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．１９：１６３〜１７９を参照のこと。大多数の位置研究が、中
枢神経系に限定されているが、最近の実験の知見により、いくつかの組織（腎臓
を含む）において脳カルビンディン様タンパク質が示された。例えば、Ｆｒａｎ
ｔｚら、１９９４、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．３７：２８７〜３０２を参
照のこと。脳カルビンディンは、頻繁に、他のＣａＢＰ（カルレチニン（ｃａｌ
ｒｅｔｉｎｉｎ）およびパルブアルブミンを含む）と同時局在化する。例えば、
Ａｒａｉら、１９９４、Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １０１：９〜１２を参
照のこと。
【０１４７】 中枢神経系そして特に他の組織型におけるＣａＢＰ（例えば、カルビンディン
）の機能は、現在ほとんど公知ではないが、ＣａＢＰは、主に、Ｃａ２＋緩衝お
よび封鎖タンパク質として機能すると考えられる。高濃度のカルビンディンおよ
び／またはパルボアルブミンのマイクロインジェクションは、脊髄神経節ニュー
ロンにおける短い脱分極により生成される遊離Ｃａ２＋濃度の一過的増加を減少
することが示された。例えば、Ｃｈａｒｄら、１９９３、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．
４７２：３４１〜３５７を参照のこと。さらに、視床下部におけるオキシトシン
大型細胞ニューロンにおけるカルビンディンは、非常に高いレベルで発現され、
そのようにして高い程度のＣａ２＋緩衝作用が可能になることが示された。例え
ば、Ｃｏｂｂｅｔｔら、１９８６、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．３６２：７〜１６を参
照のこと。これらの高いレベルの発現は、Ｃａ2+の細胞内レベルが顕著に上昇し
たっ場合に、長期の強いニューロン活性の間に、過剰のＣａ2+の神経毒性効果に
対してニューロンを保護すると考えられる。同様に、種々のイオンおよび電解質
）例えば、Ｃａ2+）のレベルは、高血圧、腎疾患およびタンパク尿（ｐｒｏｔｅ
ｎｕｒｉａ）において変化する。
【０１４８】 従って、ＦＨＲ腎疾患動物モデルおよびＩＲＬ腎疾患動物モデルにおける本発
明に開示されたカルビンディン転写物（および、おそらくはカルビンディンタン
パク質）のレベルの減少は、腎疾患および関連障害の病因において、役割を果た
し得る。カルビンディンが細胞内Ｃａ2+濃度を調節する能力に起因して、腎疾患
および関連障害に罹患した個体への外因性カルビンディンの投与は、腎疾患およ
び／または関連障害の有害な生理学的効果のいくらかを緩和するのを補助し得る
。さらに、カルビンディンｍＲＮＡのレベルの定量は、腎疾患に対する素因につ
いての予後試験において、または早期／無症状の腎疾患もしくは関連障害の診断
において、有用であり得る。
【０１４９】 （Ｖ）メタロプロテイナーゼ３の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−３） 表１に示されるように、メタロプロテイナーゼ３の組織インヒビター（ＴＩＭ
Ｐ−３）遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ｕ２７８３９）の発現は、コントロー
ルのＡＣＩ系統におけるこの転写物のレベルと比較して、ＦＨＲ動物およびＩＲ
Ｌ動物において、１／５に減少することが示された。
【０１５０】 マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の組織インヒビターは、ＴＩＭＰ
−１、ＴＩＭＰ−２およびＴＩＭＰ−３を含む。Ａｎａｎｄら、１９９６、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．７４：８５４〜８８６１を参照のこと。ＴＩＭ
Ｐはすべて３５〜４０％のアミノ酸同一性の程度だけ、お互いに類似しているが
、いくつかの重要な類似性は、表面および内部の局所解剖学においてほんの微小
な差異しかない、有意な３次構造の保存を示唆する。例えば、ＴＩＭＰはすべて
、保存された位置に１２個のシステインアミノ酸残基を保有し、ＴＩＭＰ−３の
場合、これらの残基が、６つの鎖内ジスルフィド結合の形成に関与することが示
された（例えば、Ａｐｔｅら、１９９４、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９：８６〜９０
を参照のこと）。この複合体のフォールディングが、部分的に、ＴＩＭＰ−３の
熱力学的安定性を担うこともまた、仮定される。
【０１５１】 さらに、ＴＩＭＰはすべて、ＭＭＰ阻害の特性（例えば、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ
−２、ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−９の阻害）を共有するが、チモーゲン形態のＭ
ＭＰ酵素との相互作用において、微小な差異が存在するようである。例えば、Ｔ
ＩＰ−３は、水溶性が乏しく、そして細胞外マトリクス（ＥＣＭ）に位置するが
、培養された細胞において、ＴＩＭＰ−３は、下層においてのみ見出され、そし
て馴化培地においては見出されない。例えば、ＢｌｅｎｉｓおよびＨａｗｋｅｓ
、１９８４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５９：１１５６３〜１１５７０を参照
のこと。ＴＩＭＰ−３のＥＣＭリガンドは同定されていないが、１つの潜在的リ
ガンドは、ヒアルロン酸であり得る。例えば、Ａｌｅｘａｎｄｅｒら、Ｄｅｖｅ
ｌｏｐｍｅｎｔ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）１２２：１７２３〜１７３６を参照のこ
と従って、ＥＣＭについてのＴＩＭＰ−３の親和性、および多数の上皮における
ＴＩＭＰ−３の発現は、ＴＩＭＰ−３は、基底膜の構成成分であり得るという提
案をもたらした。例えば、Ａｐｔｅら、１９９４、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９：８
６〜９０を参照のこと。従って、ＴＩＭＰのより多くの改変体カルボキシ末端領
域が、各ＴＩＭＰ種の異なる特性に寄与し得ること、ならびにＴＩＭＰ−３のカ
ルボキシ末端領域がＥＣＭ結合ドメインを保有することが、仮定された。
【０１５２】 メタロプロテイナーゼ３の組織インヒビター（ＴＩＭＰ−３）は、一過的に発
現され、分泌される、２４〜２５ｋＤａｌタンパク質であり、１８８アミノ酸長
である。例えば、Ａｐｔｅら、１９９４、Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．２００：１７７〜１
９７を参照のこと。ＴＩＭＰ−３は、非常に塩基性のタンパク質であり、ｐＩは
約９．０である。試験した種すべてにおいて高度に保存されていた、Ｎ結合グリ
コシル化部位は、ＴＩＭＰ−３が、グリコシル化したネイティブ形態で存在する
ことを示唆する（例えば、Ａｐｔｅら、１９９４、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９：８
６〜９０を参照のこと）が、このグリコシル化の生物学的重要性は、この時点で
は不明である。
【０１５３】 ヒトＴＩＭＰ−３は、染色体位置２２ｑ１３．１に位置しており、そしてヒト
ＴＩＭＰ−３の完全構造は決定されている。この構造は、５つのエキソン領域か
ら構成され、そして少なくとも、３０ｋｂのサイズである。例えば、Ａｐｔｅら
、１９９４、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９：８６〜９０を参照のこと。複数のＭＩＴ
Ｐ−３転写物（すなわち、ヒト胎盤における、２．４ｋｂ、２．８ｋｂおよび５
．０ｋｂ）が同定されており（例えば、Ａｐｔｅら、１９９５、Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．２７０：１４３１３〜１４３１８を参照のこと）、そしてこの転写物
は、ＴＩＭＰ−３遺伝子内のポリアデニル化シグナルの示差的利用から生じると
考えられる（例えば、Ｂｒｙｎｅら、１９９５、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１：４１８〜
４２７を参照のこと）。興味深いことに、このヒトＴＩＭＰ−３は、ＴＡＴＡが
ない（ＴＡＴＡ−ｌｅｓｓ）遺伝子であるが、それにもかかわらず、単一の部位
で転写を開始することが見出されている（例えば、Ａｐｔｅら、１９９５、Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１４３１３〜１４３１８を参照のこと）が、複数
の転写開始部位が、複数のＴＩＭＰ−３遺伝子において見出されている。
【０１５４】 発生分析によって、ヒトＴＩＭＰ−３遺伝子はインビボで厳密に調節されてお
り、そして遺伝子発現において重複を最小にするような様式で発現されることが
、示された。例えば、Ａｎａｎｄ−Ａｐｔｅら、１９９６、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃ
ｅｌｌ Ｂｉｏ．７４：８５４〜８６１を参照のこと。他のＴＩＭＰとは異なり
、ＴＩＭＰ−３は、多くの上皮組織において高レベルで優先的に発現され、そし
て成体組織において、最高レベルのＴＩＭＰ−３発現が、腎臓において見出され
る。例えば、Ａｐｔｅら、１９９４、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １９：８６〜９０を参
照のこと。
【０１５５】 従って、ＦＨＲ腎疾患動物モデルおよびＩＲＬ腎疾患動物モデルにおける、本
発明に開示されたＴＩＭＰ−３転写物（および、おそらくはＴＩＭＰ−３タンパ
ク質）のレベルの減少は、腎疾患および関連障害の病因において、役割を果たし
得る。ヒト腎臓において、ＴＩＭＰ−３のレベルは高いので、外因性ＴＩＭＰ−
３の投与は、腎疾患および／または関連障害の有害な生理学的効果を緩和するの
を補助し得る。さらに、ＴＩＭＰ−３ ｍＲＮＡのレベルの定量は、腎疾患に対
する素因についての予後試験において、または早期／無症状の腎疾患もしくは関
連障害の診断において、有用であり得る。
【０１５６】 （ｖｉ）内在性膜タンパク質１（Ｉｔｍ１）およびＩｔｍ１のＲＴ１．Ｂ−１
α鎖） 表１に示されるように、内在性膜タンパク質１（Ｉｔｍ１）遺伝子（ＧｅｎＢ
ａｎｋ登録番号Ｌ３４２６０）の組織インヒビターの発現は、ＦＨＲ動物および
ＩＲＬ動物において、コントロールＡＣＩ株におけるこの転写物のレベルと比較
して、５分の１に減少されることが実証された。対照的に、表１において示され
るように、ＲＴ１．Ｂ−１α ｍＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ１４８７９
）の発現は、ＦＨＲ動物およびＩＲＬ動物において２０倍に増加された。
【０１５７】 内在性膜ファミリーのタンパク質は主に、多くの生物活性ポリペプチドの合成
に関与する。例えば、ＣｈｅｎおよびＳｈｉｅｌｄｓ，１９９６．Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２７１：５２９７〜５３００；Ｍｉｌｌｅｒら、１９９２、Ｊ．Ｃ
ｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１１８：２６７〜２８３を参照のこと。ヒトＩｔｍ１遺伝子
は、１１ｑ２３−ｑ２４（例えば、Ｈｏｎｇら、１９９６、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ
３１：２９５〜３００を参照のこと）、転座、いくつかの癌遺伝子、およびヒト
先天性前新生物症候群（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｐｒｅ−ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ
ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、毛細管拡張性運動失調と関連する染色体領域に局在化さ
れた（例えば、Ｇａｔｔｉら、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ ３３６：５７７〜５８
０を参照のこと）。例えば、悪性非ホジキンリンパ腫と関連するまれな転座（１
１，１４）（ｑ２３，ｑ３２）転座は、この染色体領域と関連することが示され
ている。例えば、Ｂｌｏｏｍｆｉｅｌｄら、１９８３、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．
４３：２９７５〜２８８４を参照のこと。さらに、非ホジキンリンパ腫からの新
規な１１ｑ２３切断点のクローニング、および第１１染色体上のこの領域へのこ
の切断点のマッピングが最近報告された。例えば、Ｍｅｅｒａｂｕｘら、１９９
４、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ９：８９３〜８９８を参照のこと。
【０１５８】 ヒト内在性膜タンパク質１（Ｉｔｍ１）遺伝子およびマウス内在性膜タンパク
質１（Ｉｔｍ１）遺伝子の両方は、分子内での種々の位置にてポリ（Ａ）テイル
を有するｃＤＮＡクローンの単離によって示されるように、示差的にポリアデニ
ル化されるようである２．７ｋｂのｍＲＮＡ転写物をコードすることが示された
（例えば、Ｈｏｎｇら、１９９６、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ３１：２９５〜３００を
参照のこと）。しかし、ヒトＩｔｍ１転写物およびマウスＩｔｍ１転写物の両方
におけるポリアデニル化の１つの主要な部位が存在するようである。この示差的
なポリアデニル化の生物学的な重要性は、この時点では明らかではない。さらに
、Ｉｔｍ１プロモーターは、部分的に特徴付けられており、そして変性したＴＡ
ＴＡボックスならびに転写因子ＳＰ１、ＧＣＦ、Ｅ２Ａ、ＭｙｂおよびＰＰＡＲ
についてのいくつかの可能性のある結合部位から構成される。例えば、Ｎｅｓｓ
ら、１９８９、Ｃｅｌｌ ５９：１１１５〜１１２５を参照のこと。
【０１５９】 ヒトＩｔｍ１タンパク質およびマウスＩｔｍ１タンパク質の両方は、それぞれ
８０，５９７ダルトンおよび８０，５７２ダルトンの平均分子量を有する７０５
アミノ酸残基のタンパク質から構成される。例えば、Ｈｏｎｇら、１９９６、Ｇ
ｅｎｏｍｉｃｓ ３１：２９５〜３００を参照のこと。Ｉｔｍ１タンパク質の最
も顕著な構造的特徴の１つは、Ｉｔｍ１が膜貫通タンパク質であることを高度に
示唆する全部で１０〜１４のコンピューター推定膜貫通ドメインの存在である。
９８．５％を超える相同性での、ヒトタンパク質とマウスタンパク質との間の顕
著な程度のアミノ酸保存が存在する。この知見によって、Ｉｔｍ１がいくつかの
構造的束縛下にあり、その生物学的機能を発揮することが示唆される。公けのＤ
ＮＡデータベースおよびタンパク質データベース内で行われる相同性検索は、Ｃ
．ｅｌｅｇａｎｓ由来のＴ１２Ａ２．２およびＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ由来の
ＳＴＴ３遺伝子とのＩｔｍ１相同性を同定した。例えば、Ｈｏｎｇら、１９９６
、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ３１：２９５〜３００を参照のこと。さらに、ＥＳＴ配列
（Ｚ１３８５８）として示される短いヒトｃＤＮＡ配列は、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅ由来のＳＴＴ３遺伝子のヒト対応物であると考えられる。例えば、Ｈｏｎ
ｇら、１９９６、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ３１：２９５〜３００を参照のこと。
【０１６０】 Ｉｔｍ１遺伝子産物の推定の生物学的機能は、現時点では不確かである。最近
の研究によって、ヒトＩｔｍ１遺伝子産物と、７までの膜貫通ドメインを有する
細胞表面レセプターの大きなファミリーの種々のメンバーとの間に相同性は存在
しないことが示された。例えば、Ｆｅｉら、１９９４、Ｎａｔｕｒｅ ３６８：
５６３〜５６６を参照のこと。さらに、Ｉｔｍ１は、酵素活性を有するドメイン
を含まないようである。従って、Ｉｔｍ１は、最も大きな可能性としては、膜貫
通シグナル伝達に直接的に関与しないが、その複数の膜貫通ドメインは、能動輸
送体のＡＢＣ（ＡＴＰ結合カセット）スーパーファミリーのような輸送体タンパ
ク質の特徴的な構造である（例えば、Ｈｏｗａｒｄ、１９９３、Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎ
ｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ、２７〜３２頁（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ，ＮＹ）を参照のこと）。７より多い膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）を有する
非ＡＢＣ輸送体タンパク質の特定の例としては、以下が挙げられる：（ｉ）１１
ＴＭＤ Ｎａ+／グルコース共役輸送体タンパク質（例えば、Ｈｅｄｉｇｅｒ
ら、１９８７、Ｎａｔｕｒｅ ３３０：３７９〜３８１を参照のこと）；（ｉｉ
）１２ ＴＭＤプロトン共役オリゴペプチド輸送体タンパク質（例えば、Ｆｅｉ
ら、１９９４、Ｎａｔｕｒｅ ３６８：５６３〜５６６を参照のこと）、ならび
に（ｉｉｉ）１０ ＴＭＤバソプレッシン調節尿素輸送体タンパク質（例えば、
Ｙｏｕら、１９９３、Ｎａｔｕｒｅ ３６５：８４４〜８４７を参照のこと）。
従って、Ｉｔｍ１タンパク質は、新規な型の透過酵素／輸送体膜貫通タンパク質
として機能する可能性が非常に高いと考えられる。
【０１６１】 従って、ＦＨＲ腎疾患動物モデルおよびＩＲＬ腎疾患動物モデルにおける、本
発明によって開示される減少したレベルのＩｔｍ１転写物（およびおそらく、Ｉ
ｔｍ１遺伝子産物）および／または増加したレベルのＩｔｍ１のＲｔ１．Ｂ−１
α鎖は、腎疾患および関連する障害の病因において役割を果たし得る。例えば、
Ｉｔｍ１のＲｔ１．Ｂ−１α鎖のレベルにおける付随する増加および減少したレ
ベルのＩｔｍ１の全長転写物は、転写促進、ｍＲＮＡスプライシングなどにおけ
る欠陥を示し得る。外因性Ｉｔｍ１の投与、または逆にＩｔｍ１のＲｔ１．Ｂ−
１α鎖のアンタゴニストの投与（そのような顕著に上昇したレベルが、生理学的
に有害であると判明する場合）が、腎疾患および／または関連する障害の有害な
生理学的効果のいくつかを改善するのを補助し得ることが可能である。さらに、
Ｉｔｍ１ ｍＲＮＡのレベルの定量は、腎疾患の素因についての予後試験におい
て、または早期／無症状の腎疾患もしくは関連する障害の診断において有用であ
り得る。
【０１６２】 （ｖｉｉ）ｒａｂ ＧＤＩ−β） 表１に例証するように、ｒａｂ ＧＤＩ−β遺伝子（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号
ｘ７４４０１）遺伝子のＦＨＲ動物およびＩＲＬ動物中での発現は、コントロー
ルＡＣＩ株におけるこの転写物のレベルと比較して、４倍減少した。
【０１６３】 スモールＧＴＰ結合タンパク質（Ｇタンパク質）のｒａｂファミリーは、種々
の形態の細胞内ベシクル輸送（例えば、エキソサイトーシス、エンドサイトーシ
ス、およびトランスサイトーシス）を調節する。例えば、ＮｏｖｉｃｋおよびＢ
ｒｅｎｎｗａｌｄ、１９９３、Ｃｅｌｌ ７５：５９７−６０１を参照のこと。
ｒａｂスモールＧタンパク質の提案された１つの作用の様式の概要（例えば、Ｚ
ｅｒｉａｌおよびＳｔｅｎｍａｒｋ、１９９３、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ
．Ｂｉｏｌ．５：６１３−６２０を参照のこと）は、以下の通りである：細胞質
ゾル中でｒａｂスモールＧタンパク質のＧＤＰ結合型がＧＴＰ結合型に転換する
ときに、それはその特異的ベシクルと相互作用し、そしてそのベシクルをその特
異的なアダプター膜に輸送する。ベシクルのアダプター膜との融合後、ｒａｂス
モールＧタンパク質のＧＴＰ結合型は、ＧＤＰ結合型に転換し、次いでこれは、
膜から細胞質ゾルに移行する。このモデルにおいて、ｒａｂスモールＧタンパク
質の、ＧＴＰ結合型とＧＤＰ結合型との間の転換、およびベシクル／膜間と細胞
質ゾル画分との周期的な移行は、生物学的機能に必須である。
【０１６４】 ｒａｂ ＧＤＰ解離インヒビター（ｒａｂ ＧＤＩ）は、ＧＤＰ型の解離を阻
害し、そして引き続くＧＴＰのｒａｂ３Ａタンパク質への結合が示された、細胞
質タンパク質である。例えば、Ｓａｓａｋｉら、１９９０、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．２６５：２３３３−２３３７を参照のこと。ｒａｂ ＧＤＩは、脂質修飾
されたｒａｂ３Ａタンパク質のＧＤＰ結合型と安定な三成分複合体を形成するが
、脂質修飾されたｒａｂ３ＡのＧＴＰ結合型、または脂質修飾されていないｒａ
ｂ３Ａタンパク質のＧＤＰ結合型もしくはＧＴＰ結合型のどちらとも複合体を形
成しないことがさらに示された。例えば、Ａｒａｋｉら、１９９１、Ｍｏｌ．Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１：１４３８−１４４７を参照のこと。さらに、ｒａｂ
ＧＤＩは、以下の活性を有する：（ｉ）脂質修飾されたｒａｂ３ＡのＧＤＰ結合
型の、膜への結合を阻害するが、ＧＴＰ結合型の膜への結合を阻害しない活性、
および（ｉｉ）脂質修飾されたｒａｂ３ＡのＧＤＰ結合型の、膜からの解離を誘
導する活性。例えば、Ａｒａｋｉら、１９９０、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６
５：１３００７−１３０１５を参照のこと。さらに、ｒａｂ ＧＤＩは、ｒａｂ
３Ａ上でのみ活性であるわけではなく、また、これまで、同様に特徴付けられて
はいないｒａｂタンパク質ファミリーのすべてのメンバー上で活性である。例え
ば、Ｂｅｒａｎｇｅｒら、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１３６
３７−１３６４３；Ｓｏｌｄａｔｉら、１９９３、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ
．４：４２５−４３４を参照のこと。従って、これらの生化学的な知見に基づい
て、ｒａｂスモールＧタンパク質の周期的な移行のための調節タンパク質として
のｒａｂ ＧＤＩの機能は、十分に確立された見解となった。
【０１６５】 ｒａｂ ＧＤＩタンパク質の２つの型は、現在ラットから特徴付けられている
（ｒａｂ ＧＤＩ−αおよびＧＤＩ−β）。例えば、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、１
９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１４１９１−１４１９８を参照のこ
と。ラットｒａｂ ＧＤＩ−αタンパク質は、ウシｒａｂ ＧＤＩの対応物であ
るようである（例えば、Ｍａｔｓｕｉら、１９９０、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏ
ｌ．１０：４１１６−４１２２を参照のこと）が、ラットｒａｂ ＧＤＩ−βタ
ンパク質は、異なるアイソフォームに属するようである。最近の研究（例えば、
Ａｒａｋｉら、１９９５、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ
．２１１：２９６−３０５を参照のこと）は、ラットｒａｂ ＧＤＩ−βの生化
学的特徴および機能を試験した。一般的に、ｒａｂ ＧＤＩ−βの生化学的特徴
は、ｒａｂ ＧＤＩ−αの生化学的特徴と区別ができず、それらの特徴には、例
えば：（ｉ）ｒａｂ３ＡからのＧＤＰの解離に対する阻害効果；（ｉｉ）基質特
異性；（ｉｉｉ）ｒａｂ３Ａの翻訳後脂質修飾の要求性；（ｉｖ）ｒａｂ３Ａの
ＧＤＰ結合型の化学量論的相互作用；（ｖ）膜へのｒａｂ３Ａの結合に対する阻
害効果、および（ｖｉ）膜からのｒａｂ３Ａの解離に対する刺激効果、が含まれ
る。さらに、ＧＴＰ／ＧＤＰ交換反応の阻害に必要であるｒａｂ ＧＤＩ−βの
濃度は、ｒａｂ ＧＤＩ−αの濃度と同様である。
【０１６６】 ｒａｂ ＧＤＩの２つの異なるアイソフォーム（すなわち、αおよびβ）が主
として、器官／組織分布及び細胞内局在の違いの関数として存在すると考えられ
る。例えば、Ａｒａｋｉら、１９９５、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅ
ｓ．Ｃｏｍｍ．２１１：２９６−３０５を参照のこと。例えば、ｒａｂ ＧＤＩ
−αは、脳において高レベルで発現され、そして他の組織でより低いレベルで発
現される；しかるにｒａｂ ＧＤＩ−βは、遍在して発現される。例えば、Ｓｈ
ｉｓｈｅｖａら、１９９４、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４：３４５９−３
４６８を参照のこと。同様に、ｒａｂ ＧＤＩ−αは、全体として細胞質タンパ
ク質である；しかるに高濃度のｒａｂ ＧＤＩ−βは、膜に結合して見出される
。例えば、Ｓｈｉｓｈｅｖａら、１９９４、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：
２３８６５−２３８６８を参照のこと。これらの違いに基づくと、ｒａｂ ＧＤ
Ｉ−αアイソフォームおよびｒａｂ ＧＤＩ−βアイソフォームは、異なる生物
学的機能を有し得ることが考えられる。例えば、Ｓｈｉｓｈｅｖａら、１９９４
、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２３８６５−２３８６８を参照のこと。具
体的には、ｒａｂ ＧＤＩ−βは、それらのＧＴＰ／ＧＤＰ交換反応に伴って、
それらの特異的なアクセプター膜にｒａｂスモールＧタンパク質を送達すること
が最近実証された。例えば、ＳｏｌｄａｔｉおよびＳｈａｐｉｒｏ、１９９４、
Ｎａｔｕｒｅ ３６９：７６−７８を参照のこと。従って、各々のアイソフォー
ムの他のタンパク質（例えば、ＧＤＩ置換因子）（例えば、Ｓｏｌｄａｔｉおよ
びＳｈａｐｉｒｏ、１９９４、Ｎａｔｕｒｅ ３６９：７６−７８を参照のこと
）、またはＧＤＰ／ＧＴＰ交換反応を刺激するように機能する、刺激性ＧＥＰと
の相互作用は、異なり得る可能性がある。
【０１６７】 それゆえに、本発明において開示された、ＦＨＲおよびＩＲＬ腎疾患動物モデ
ル中でのｒａｂ ＧＤＩ−β転写物（およびおそらくｒａｂ ＧＤＩ−βタンパ
ク質）のレベルの減少は、腎疾患および関連する障害の病因学における役割を果
たし得る。ｒａｂ ＧＤＩ−βは多数の組織中で遍在して発現されるので、外因
性ｒａｂ ＧＤＩ−βの投与は、腎疾患および／または関連する障害の有害な生
理学的効果のいくつかを改善するために働き得る。さらに、ｒａｂ ＧＤＩ−β
ｍＲＮＡのレベルの定量は、腎疾患に対する素因についての予後試験において
、または初期の／亜臨床的な、腎疾患もしくは関連する障害の診断において有用
であり得る。
【０１６８】 （（ｖｉｉｉ）ＩＲＰＲ（ＩＦＮ−β）をコードするＰＣ４遺伝子） 表１に例証するように、ＩＲＰＲ（ＩＦＮ−β；Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｊ０
４５１１）をコードするＰＣ４遺伝子のＦＨＲ動物およびＩＲＬ動物中での発現
は、コントロールＡＣＩ株におけるこの転写物のレベルと比較して、３．４倍減
少した。
【０１６９】 インターフェロン（ＩＦＮ）は、複数の生物学的機能を有する分泌ポリペプチ
ドの異種ファミリーである。ＩＮＦが、ウイルス感染に対する宿主の防御機構の
必須成分である一方、これらはまた、細胞増殖および分化における決定的な役割
、ならびに他の免疫調節的機能を果たす。例えば、ＳｅｅｎおよびＬｅｎｇｙｅ
ｌ、１９９２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：５０１７−５０２０を参照の
こと。
【０１７０】 ＩＦＮファミリーは、それらの構造、機能、および／または合成の様式の違い
に基づいて、２つの大きなグループに分けられてきた。第１のグループは、ＩＦ
Ｎ−α／βファミリー（Ｉ型ＩＦＮとしても知られる）を含み、これは、ヒトの
第９染色体上に位置するＩＦＮ−αをコードする２０の高度に類似の遺伝子、な
らびにヒトの第２、第５、および第９染色体に位置するＩＦＮ−βをコードする
総計３つの遺伝子からなる。例えば、Ｔｈａｎｏｓ、１９９６、Ｈｙｐｅｒｔｅ
ｎｓｉｏｎ ２７：１０２５−１０２９を参照のこと。第２のグループ（ＩＩ型
ＩＦＮとしても知られる）は、ＩＦＮ−γをコードする単一の遺伝子からなる。
このグループＩ ＩＦＮ（ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β）は、ウイルス感染後に
ほとんどすべての細胞型において迅速に導入される；しかるにグループＩＩ Ｉ
ＦＮ（ＩＦＮ−γ）は、活性化Ｔ細胞および天然のキラー細胞によって産生され
る。例えば、ＳｅｅｎおよびＬｅｎｇｙｅｌ、１９９２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２６７：５０１７−５０２０を参照のこと。
【０１７１】 インターフェロン−β（ＩＦＮ−β）は、（主として）線維芽細胞および上皮
細胞によって合成され、そしてＩＮＦ−αに対して３０％の相同性を有する。以
前に議論したように、ヒトＩＦＮ−βをコードする遺伝子は、第２、第５、およ
び第９染色体に位置するが；しかるにＩＦＮ−βについての糖タンパク質レセプ
ターをコードする遺伝子は、第２１染色体上に位置する。合成後、ＩＦＮ−βは
、ベシクル中に隔離され、そして分泌される。例えば、Ｍｉｙａｍｏｔｏら、１
９８８、Ｃｅｌｌ ５４；９０３−９１３を参照のこと。ＩＦＮ−βの生物学的
効果の研究の大部分は、抗ウイルス性薬剤（例えば、ＭｉｍｓおよびＷｈｉｔｅ
、１９８４、Ｖｉｒａｌ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉ
ｔａｉｎ）を参照のこと）および抗新生物薬剤（例えば、Ｖｉｌｃｅｋ、１９９
０、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ
ｏｇｙ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ；Ｂｅｒｌｉｎ，ＦＲＧ）を参照のこ
と）としてであった。
【０１７２】 ＩＦＮ−β遺伝子の誘導性エンハンサーは、別個のセットの転写因子によって
認識される重複する調節エレメントから構成され、この転写因子は、ウイルス感
染によってのみ活性化され得るのではなく、種々の他の細胞外シグナルによって
も活性化され得る。例えば、ＧｏｏｄｂｏｕｒｎおよびＭａｎｉａｔｉｓ、１９
８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：１４４７−
１４５１を参照のこと。さらなる研究はまた、直接的なタンパク質−タンパク質
相互作用が、ＩＦＮ−βプロモーターの種々の別個のエレメント間の転写的な相
乗作用に関与することを実証した。例えば、Ｄｕら、１９９３、Ｃｅｌｌ ７４
：８８７−８９８を参照のこと。
【０１７３】 興味深いことに、関連するＩＦＮ、ＩＦＮ−γは、インスリン依存性糖尿病（
ＩＤＤＭ）において膵臓のランゲルハンス島のβ−細胞上でクラスＩ主要組織適
合遺伝子複合体（ＭＨＣ）発現のアップレギュレーションを引き起こした。例え
ば、Ｔｈｏｍａｓら、１９９８、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．１０２：１
２４９−１２５７を参照のこと。種々のサイトカイン（ＩＦＮ−βを含む）のイ
ンビトロ効果は、ＩＤＤＭの病原性に関連すると推定される（例えば、Ｒａｂｉ
ｎｏｖｉｔｃｈ、１９９８、Ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｃｅｌｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ
Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐａｔｈｏｇ
ｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｉｎｓｕｌｉｎ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｄｉａｂｅｔｅｓ
Ｍｅｌｌｉｔｕｓ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｌｌｉｔｕｓ：Ａ Ｆｕｎｄａｍ
ｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｅｘｔ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒ
ａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）を参照の
こと）が、多くの場合、それらの正確なインビボの生物学的機能は、現在のとこ
ろ不明である。
【０１７４】 本発明中で開示された、ＦＨＲおよびＩＲＬ腎疾患動物モデル中でのＩＦＮ−
β転写物（およびおそらくＩＦＮ−βタンパク質）のレベルの減少は、腎疾患お
よび関連する障害の病因学における役割を果たし得る。ＩＦＮ−βの発現は、主
としてウイルス感染に応答してアップレギュレートされるが、このタンパク質は
、多数の組織中で遍在して発現され、そして細胞増殖／分化分子として働く。そ
れゆえに、外因性ＩＦＮ−βの投与は、腎疾患および／または関連する障害の有
害な生理学的効果のいくつかを改善するために働き得る。さらに、ＩＦＮ−βの
ｍＲＮＡレベルの定量は、腎疾患に対する素因についての予後試験において、ま
たは初期の／亜臨床的な、腎疾患もしくは関連する障害の診断において有用であ
り得る。
【０１７５】 （ｉｘ）有機カチオン輸送体タンパク質−２（ＯＣＴ２） 表１に示されるように、コントロールＡＣＩ株におけるこの転写物のレベルと
の比較において、ＦＨＲおよびＩＲＬ動物の有機カチオン輸送体タンパク質−２
（ＯＣＴ２）遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ｄ８３０４４）の発現において２
．５倍の減少が存在した。
【０１７６】 機能的発現クローニングを使用する最近の研究（例えば、Ｇｒｕｎｄｅｒｍａ
ｎｎら、１９９４．Ｎａｔｕｒｅ３７２：５４９−５５２を参照のこと）におい
て、有機カチオン輸送体タンパク質−１（ＯＴＣ１）をコードするｃＤＮＡがラ
ット腎臓から単離され、そして特徴付けされた。ＯＴＣ１は、腎臓の近位尿細管
細胞の原形質膜を介する、陽イオン性薬物（例えば、テトラエチルアンモニウム
、プロカインアミドおよびシメチジン）および種々の内因性代謝産物（例えば、
Ｎ’−メチルニコチンアミド））の活性な一方向性経細胞輸送を媒介する５５６
アミノ酸残基タンパク質であることが実証された。関連する研究（例えば、Ｏｋ
ｕｄａら、１９９６．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２
２４：５００−５０７）において、ラット腎臓の関連有機カチオン輸送体タンパ
ク質（ＯＴＣ２）を単離して、機能的発現および組織分布について試験した。ラ
ット腎臓ＯＴＣ２は、およそ６６ｋＤａｌの分子量を有する５９３アミノ酸残基
のタンパク質（ポリ（Ａ）を含む）であることが実証された。ＯＴＣ１とのアミ
ノ酸全体の同一性は、６７％であることが見出されたが、高度に保存されたαヘ
リカル領域内の相同性は、およそ８５％程度であった。疎水性分析は、ＯＣＴ２
は、合計１２の推定膜貫通α−ヘリックスおよび２つの推定Ｎ結合グリコシル化
部位を所有することを示した。さらに４つの推定プロテインキナーゼＡリン酸化
部位および２つの推定プロテインキナーゼＣリン酸化部位をＯＴＣ２タンパク質
の予期される細胞内ドメインとともに同定した。
【０１７７】 ＯＣＴ２タンパク質の組織分布研究は、腎臓内（特に、髄質において）での高
いレベルの発現を実証した。対照的に、ＯＣＴ１ｍＲＮＡレベルは、腎臓の髄質
においてよりはむしろ、皮質領域において顕著に高いことが見出された（例えば
、Ｇｒｕｎｄｅｒｍａｎら、１９９４．Ｎａｔｕｒｅ ３７２：５４９−５５２
を参照のこと）。興味深いことに、ＯＣＴ２ｍＲＮＡは、脳、心臓、肺、肝臓、
小腸または脾臓においては検出されなかったが、ＯＣＴ１は腎臓、肝臓、小腸お
よび肝臓において検出された（例えば、Ｇｒｕｎｄｅｒｍａｎｎら、１９９４．
Ｎａｔｕｒｅ ３７２：５４９−５５２を参照のこと）。従って、ＯＣＴ２は、
ＯＣＴ１に対して見出される組織分布パターンと比較して、顕著に異なる組織分
布パターンを実証した。
【０１７８】 ＯＣＴ２タンパク質の生物学的機能を試験する研究は、シメチジン、プロカイ
ンアミドおよびキニジンの存在下において、テトラエチルアンモニウムの取り込
みの劇的な阻害を達成した。この阻害は、ｐＨの５．４から８．０への増加によ
り、いくらか減弱された。従って、このデータは、ＯＣＴ２はプロトン勾配、培
地ｐＨまたはＨ+／有機イオン濃度に非依存的であり、Ｈ+／有機イオンアンチポ
ータータンパク質とは異なるものであるらしいということ示す（例えば、Ｏｋｕ
ｄａら、１９９６．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２２
４：５００−５０７を参照のこと）。
【０１７９】 ＦＨＲおよびＩＲＬ腎疾患動物モデル内の本発明において開示されるＯＣＴ２
転写物（およびおそらくＯＣＴ２タンパク質）の減少したレベルは、腎疾患およ
び関連障害の病因学において役割を果たし得る。輸送体タンパク質（例えばＯＣ
Ｔ２）の生理的役割の役割を確かめるための標準的な方法論は、輸送体タンパク
質の活性輸送機構のブロックに関する。例えば、低分子の「ライブラリー」を、
輸送体タンパク質の機能を阻害または増強する能力についてスクリーニングし得
る。陽イオン性薬物の活性輸送および種々の内因性代謝産物が、腎疾患のＯＣＴ
２発現の低レベルの結果として減少され得、従って、随伴的に、薬理学的処置の
有効性を減少させ、そして／または潜在的に有害な代謝物の細胞内増加を引き起
こす。従って、ＯＣＴ２が、非病的な腎臓内で高レベルにて発現される場合と同
様に、外来性のＯＣＴ２の投与は、腎疾患および／または関連障害のいくつかの
病態生理学的効果を改善するのに貢献し得る。さらに、ＯＣＴ２ｍＲＮＡのレベ
ルの定量化は、腎疾患に対する傾向についての予後試験において、または初期／
準臨床的腎疾患もしくは関連障害の診断において有用であり得る。
【０１８０】 （ｘ）Ｌ−アルギニン：グリシンアミジノトランスフェラーゼ 表１に図示されるように、ＦＨＲおよびＩＲＬ動物におけるＬ−アルギニン：
グリシンアミジノトランスフェラーゼ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ０７９
７１）の発現は、コントロールＡＣＩ系統におけるこの転写産物のレベルに比べ
て、１６倍増加である。
【０１８１】 Ｌ−アルギニン：グリシンアミジノトランスフェラーゼ遺伝子（ヒトＡＴ；Ｇ
ｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ８６４０１）は、アミジノ基のＬ−アルギニンからグリ
シンへの移行を触媒する。この産物グアニジド酢酸は、クレアチンの中間前駆体
である。例えば、Ｗａｌｋｅｒ、１９７３．Ｅｎｚｙｍｅｓ ９：４９７−５０
９を参照のこと。クレアチンおよびそのリン酸化型は、高い細胞活性の期間中の
ＡＴＰ／ＡＤＰ比の迅速な変動を緩衝するのに役立つ高エネルギーリン酸の動的
な貯蔵庫として働く、多数の組織のエネルギー代謝に重要な役割を担う（例えば
、神経細胞の活動電位）。例えば、Ｗａｌｋｅｒ、１９７９．Ａｄｖ．Ｅｎｚｙ
ｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒｅａｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５０：１７７−２４２を
参照のこと。
【０１８２】 クレアチンおよびクレアチンリン酸の最も高い組織発現が筋肉組織、心臓、精
子および網膜の視細胞に見出されるのだが、ほとんどのクレアチンは、これらの
組織において合成されないが、血液から寄せ集められる。それにひきかえ、クレ
アチン合成の主要部位は、ＡＴが細胞質内およびミトコンドリアの膜間腔内に位
置する腎臓、肝臓および膵臓である。例えば、Ｍａｒｇｉら、１９７５．ＦＥＢ
Ｓ Ｌｅｔｔ．５５：９１−９３を参照のこと。
【０１８３】 ヒトＡＴ遺伝子は、染色体バンド１５ｑ１５．３の遠位部上の座位Ｄ１５Ｓ１
０９Ｅにマップされている（例えば、Ｆｏｕｇｅｒｏｕｓｓｅら、１９９４．Ｈ
ｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．３：２８５−２９３を参照のこと）。ＡＴ酵素の２
つのアイソフォームが、単離され、そして選択的スプライシングによる同一遺伝
子由来であるこの酵素の、細胞質バージョンおよびミトコンドリアバージョンを
表すと考えられている。例えば、Ｈｕｍｍら、１９９７．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．
３２２：７７１−７７６を参照のこと。さらに、ＡＴ遺伝子は、肢帯筋ジストロ
フィー２Ａ型に対する有意な連鎖不均衡を示す染色体領域内に存在する。ＡＴは
、Ｌ−オルニチン−２−オキソ酸アミノトランスフェラーゼの欠損による高オル
ニチン血症を伴う脳回転状網膜脈絡膜萎縮において阻害され、血漿中および尿中
オルニチン濃度において１０〜２０倍の増加を生じる。例えば、Ｓｉｐｉｌａ、
１９８０．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ６１３：７９−８４を
参照のこと。それにひきかえ、ＡＴ発現は、腎臓のＷｉｌｍｓ腫瘍において顕著
に下方制御される。例えば、Ａｕｓｔｒｕｙら、１９９３．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．５３：２８８８−２８９４を参照のこと。
【０１８４】 ＦＨＲおよびＩＲＬ腎疾患動物モデルにおける本発明に正常に開示される、Ｌ
−アルギニン：グリシンアミジノトランスフェラーゼ（ＡＴ）転写産物（および
おそらくＡＴタンパク質）のレベルの顕著な増加は、腎疾患および関連障害の病
因学において役割を担う。腎臓が正常で非病的状態におけるクレアチンおよびク
レアチンリン酸合成の高比率に関与される場合、高レベルのＡＴは、腎疾患の腎
臓におけるクレアチンおよびクレアチンリン酸のインサイチュ生合成を劇的に上
方制御するのに役立ち得る。血漿クレアチンおよびクレアチンリン酸の両方のレ
ベルが一般に腎疾患および高血圧の両方において高められることは、注意される
べきである。従って、ＡＴアンタゴニストまたは阻害剤の投与は、腎疾患および
／または関連障害の病態生理学的効果のいくつかを回復させるのに役立ち得る。
さらに、ＡＴ ｍＲＮＡのレベルの定量は、腎臓の疾患の素因に関する予防的試
験において、または初期の／準臨床的な腎疾患または関連障害の治療において有
用であり得る。
【０１８５】 （ｘｉ）タンパク質脱リン酸化酵素１−β（ＰＰＩ−β） 表１に図示されるように、ＦＨＲおよびＩＲＬ動物におけるタンパク質脱リン
酸化酵素１−β（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ｓ７８２１８）の発現は、コントロー
ルＡＣＩ系統におけるこの転写産物のレベルに比べて、４倍増加である。
【０１８６】 タンパク質脱リン酸化酵素１（ＰＰ１）は、真核生物細胞において多面的な作
用を有する。これはグリコーゲン代謝のホルモンの調節における重要な酵素とし
て最初に同定されたにもかかわらず、筋収縮およびタンパク質合成の制御に重要
な役割を担うこと、ならびに細胞分裂の完了に必須であることが公知である（例
えば、Ｃｏｈｅｎ、１９８９．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５４：４５３
−５０８；ＣｏｈｅｎおよびＣｏｈｅｎ、１９８９．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２６４：２１４３５−２１４３８を参照のこと）。ＰＰ１は、セリン残基および
スレオニン残基の脱リン酸化において機能し、そして熱安定タンパク質、阻害剤
１（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ１）および阻害剤２（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ２）、腫瘍プ
ロモーターであるオカダ酸および肝臓毒素ミクロシスチン（ｍｉｃｒｏｃｙｓｔ
ｉｎ）によって阻害される。ＰＰ１触媒領域は、インビボで種々のタンパク質と
複合体化されることが示されている。これは、活性部位アミノ酸のホールディン
グ（阻害剤１；例えば、Ａｌｅｓｓｉら、１９９３．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．２１３：１０５５−１０６６を参照のこと）ならびにグリコーゲン小胞（Ｇ
サブユニット）および筋収縮装置（Ｍサブユニット）のような特定の細胞内の位
置への酵素の標的化に関与する。例えば、ＨｕｂｂａｒｄおよびＣｏｈｅｎ、１
９９３．Ｔｒｅｎｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ。Ｓｃｉ．１８：１７２−１７７を参照の
こと。
【０１８７】 触媒領域の総アイソフォームは、齧歯類において同定されている（ＰＰ１α、
ＰＰ１βおよびＰＰ１γ；例えば、Ｏｈｋｕｒａら、１９８９．Ｃｅｌｌ ５７
：９９７−１００７を参照のこと）；これに対して、ヒトでは、現在ＰＰ１αお
よびＰＰ１γのみが同定され、そして配列決定されている（例えば、Ｂａｒｋｅ
ｒら、１９９３．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１７８：２２
８−２３３を参照のこと）。
【０１８８】 最近の研究（例えば、Ｂａｒｋｅｒら、１９９４．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ．Ａｃｔａ １２２０：２１２−２１８を参照のこと）は、ヒトＰＰ１β
遺伝子を染色体位２ｐ２３に位置決めし、そしてこのＰＰ１β遺伝子は、３７ｋ
Ｄａｌのおよその分子量を伴うタンパク質をコードする９８１ヌクレオチドのオ
ープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する。これらの発見は、ウサギＰＰ
１β（例えば、Ｄｏｍｂｒａｄｉら、１９９０．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
１９４：７３９−７４５を参照のこと）およびラットＰＰ１γ（例えば、Ｓａｓ
ａｋｉら、１９９０．Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．８１：１２７２−１
２８０を参照のこと）に関して報告されるものと同一である。ヒトＰＰ１βが、
ヒトＰＰ１αおよびＰＰ１γに９０％相同性を有することは、注意されるべきで
あり；これに対して、ヒトＰＰ１αおよびＰＰ１γは、お互いに９３−９４％相
同性を有して、さらに密接に関係する。例えば、Ｂａｒｋｅｒら、１９９４．Ｂ
ｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １２２０：２１２−２１８を参照の
こと。
【０１８９】 いくつかのｍＲＮＡ種（すなわち、５．４ｋｂ、３．０ｋおよび２．０ｋｂ）
が、ヒトＰＰ１ベータに関して示されており、そしてヒトＰＰ１βｍＲＮＡの選
択的スプライシングを示し得る。さらに、これらのｍＲＮＡ種は、組織中に差示
的に発現される。例えば、腎臓における５．４ｋｂ ｍＲＮＡ種と３．０ｋ ｍ
ＲＮＡ種の比は、０．４：１である。例えば、Ｂａｒｋｅｒら、１９９４．Ｂｉ
ｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １２２０：２１２−２１８を参照のこ
と。
【０１９０】 ＰＰ１β転写産物（およびおそらくＰＰ１βタンパク質）の増加されたのレベ
ルは、ＦＨＲおよびＩＲＬ腎疾患動物モデルにおける本発明に開示される、腎疾
患および関連障害の病因学において役割を担う。従って、ＰＰ１βアンタゴニス
トまたは阻害剤の投与は、腎疾患および／または関連障害の病態生理学的効果の
いくつかを回復させるのに役立ち得る。さらに、ＰＰ１β ｍＲＮＡのレベルの
定量は、腎臓の疾患の素因に関する予防的試験において、または初期の／準臨床
的な腎疾患または関連障害の治療において有用であり得る。
【０１９１】 （（ｘｉｉ）カリクレイン） 表１に例示されるように、コントロールＡＣＩ株におけるこの転写物のレベル
と比較して、ＦＨＲおよびＩＲＬ動物におけるカリクレインタンパク質（Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ登録番号ｍ１９６４７）遺伝子の発現において３．５倍の減少が存在し
た。
【０１９２】 カリクレインは、アルギニンアミノ酸残基を切断するために好ましい基質を伴
うタンパク質分解性酵素（すなわち、セリンプロテアーゼ）のファミリーである
。例えば、Ｓｃｈａｃｈｔｅｒ，１９７９．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．３１
：１−１７を参照のこと。２つの主な群のカリクレイン（腺／組織カリクレイン
および血漿カリクレイン）が存在する。血漿カリクレインは、不活性前駆体とし
て循環し、これは、肝臓において合成され、そしてＨａｅｇｅｍａｎ因子によっ
て活性化される。例えば、ＳｃｉｃｌｉおよびＣａｒｒｅｔｅｒｏ，１９８６．
Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．２９：１２０−１３０を参照のこと。
【０１９３】 組織カリクレインは、サイズおよび特異性の両方において、血漿ベースの酵素
とは異なり、そして膵臓、顎下腺、脳、生殖器官、心臓、血管および腎臓におい
て検出され得る。例えば、Ｎｏｌｌｙら、１９９０．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ
１６：４３６−４４０を参照のこと。組織カリクレインは、２４〜４５ｋＤａ
ｌの分子量を有し、ここで、分子量における変動の大部分は、翻訳後グリコシル
化における差異に起因する（例えば、ヒト腎臓カリクレインは、約２０％が炭水
化物である）。これらの酵素は、非常に相同であるが、それにもかかわらず、基
質認識において、別個の差異を示し、これは、この酵素のアミノ酸配列における
同定可能な差異において反映される。例えば、ＭａｃＤｏｎａｌｄら、１９８８
．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２５３：３１３−３２１を参照のこと。カリクレイン酵
素活性に必須であると考えられる活性部位のアミノ酸残基の三つ組は、Ｈｉｓ−
４１、Ａｓｐ−９６およびＳｅｒ−１８９から構成され、そして酵素の切断特異
性の主要な決定因子である。例えば、Ｂｏｔｈｗｅｌｌら、１９７９．Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５４：７２８７−７２９４を参照のこと。精製された腎臓カ
リクレインは７アミノ酸残基の活性化配列に先行して接続された１７アミノ酸残
基のシグナルペプチドを有する、チモーゲン（プロカリクレインと称される）と
して最初に合成され、これは、酵素の活性化の前に、酵素的に切断されなければ
ならない。それにもかかわらず、今までに実験された全ての種において、単一の
遺伝子が、「真の組織カリクレイン（ｔｒｕｅ ｔｉｓｓｕｅ ｋａｌｌｉｋｒ
ｅｉｎ）」（ＥＣ３／４／２１／３５）と称されている酵素をコードし、この酵
素は、腎臓を含むほとんどの組織において主なキノゲン（ｋｉｎｎｏｇｅｎ）切
断酵素である。例えば、ＳｃｉｃｌｉおよびＣａｒｒｅｔｅｒｏ，１９８６．Ｋ
ｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．２９：１２０−１３０を参照のこと。このカリクレインは
、尿中に見出される酵素種と同一であることが示されている。例えば、Ｂａｋｅ
ｒおよびＳｈｉｎｅ，１９８５．ＤＮＡ ４：４４５−４５０を参照のこと。
【０１９４】 組織カリクレインは、異なる哺乳動物種間で数において変動する遺伝子の、高
度に保存されたクラスターによってコードされる。例えば、カリクレインマルチ
遺伝子ファミリーは、ラットおよびマウスにおいて、それぞれ、全２０および全
２４の遺伝子から構成される。例えば、Ｗｉｎｅｓら、１９８９．Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２６４：７６５３−７６６２；Ｇｅｒａｌｄら、１９８６．Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ８６６：１−１４、Ｃｌｅｍｅｎｔｓら
、１９９０．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１０７７−１０８１を参照のこ
と。全ての組織カリクレイン遺伝子は、種にかかわらず、５つのエキソン領域お
よび４つのイントロン領域からなる。例えば、Ｗｉｎｅｓら、１９８９．Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：７６５３−７６６２を参照のこと。ヒトにおいて、
カリクレイン遺伝子は、α−ＨＳ糖タンパク質およびヒスチジンリッチ糖タンパ
ク質をコードする２つの関連遺伝子に密接に近位して、染色体位置３ｑ２６→ｑ
ｔｅｒに局在している。例えば、Ｍｕｌｌｅｒ−ＥｓｔｅｒｌおよびＮａｋａｎ
ｉｓｋｉ，１９８６．Ｔｒｅｎｄｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１１：３３６−
３３９を参照のこと。
【０１９５】 現在、限定された数のカリクレインファミリー遺伝子産物のみが、同定および
特徴付けらている。齧歯類カリクレイン酵素ファミリーの他の特徴付けられた酵
素としては、以下が挙げられる：（ｉ）ラットトニン（これは、インビトロで、
アンジオテンシンおよび他のポリペプチドホルモン前駆体を切断し得る）（例え
ば、Ｌａｚｕｒｅら、１９８７．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．６５：
３２１−３３７を参照のこと）；（ｉｉ）マウス神経増殖因子（ＮＧＦ）のγサ
ブユニット（これは、ＮＧＦ前駆体およびマウス上皮増殖因子（ＥＧＦ）結合タ
ンパク質の両方をプロセシングし、続いて、ＥＧＦの前駆体をプロセシングする
）（例えば、Ｄｒｉｎｋｗａｔｅｒら、１９８７．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
２６：６７５０−６７５を参照のこと）。
【０１９６】 ヒトにおいて、本発明に先行して、全部で３つの組織カリクレイン様遺伝子ま
たは遺伝子産物のみが同定されており、これは、第７染色体上のマウスカリクレ
イン遺伝子座に類似の位置（例えば、Ｍｕｒｒａｙら、１９９０．Ｊ．Ｃａｒｄ
ｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１５（補遺６）：Ｓ７−Ｓ１５を
参照のこと）において、ｑ１３．２−１３．４での第１９染色体の長腕（ｌｏｎ
ｇ−ａｒｍ）上に直列に配列される（ｔａｎｄｅｍｌｙ−ａｒｒａｎｇｅｄ）、
ｈＲＫＡＬＬ、ｈＧＫ−１およびＰＳＡ遺伝子を含む（例えば、Ｅｖａｎｓら、
１９８８．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７：３１２４−３１２９を参照のこと
）。カリクレイン遺伝子は、本発明の前に、クローニングされそして配列決定さ
れており、その発現は、いくつかの他の腺組織および器官において検出されてい
るが（例えば、ＢａｋｅｒおよびＳｈｉｎｅ，１９８５．ＤＮＡ ４：４４５−
４５０を参照のこと）、「真の」カリクレイン遺伝子の腎臓内発現は、ヒトにお
いて以前には実証されていない。顎下腺のような器官によって産生される組織カ
リクレインは、全身循環を達成することが示されており、ここで、腎臓細胞によ
って、血漿から濾過され得、そして管腔から再吸収され得る。例えば、Ｒａｂｉ
ｔｏら、１９８３．Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．５２：６３５−６４１を参照のこと。こ
の発見は、腎臓内遺伝子発現の非存在の説明を補助し得る。腎臓内発現の欠如に
ついての代替の仮定は、基底条件下で、腎臓カリクレイン遺伝子は連続的には発
現されないが、カリクレインの腎臓放出が（生理学的または病理学的刺激によっ
て）刺激される場合、デノボ発現が、修復組織保存を生じることである。例えば
、Ｃｕｍｍｕｉｎｇら、１９９４．Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．８７：５−１１を参照の
こと。
【０１９７】 カリクレインファミリーの異なるメンバーは、ペプチドプロホルモンおよび増
殖因子を生物学的に活性な分子へと選択的に変換することによって、多様な酵素
的役割を果たすと考えられている。例えば、カリクレインは、潜在的な血管拡張
性ペプチドであるキニン（例えば、ブラジキニンおよびリシル−ブラジキニン）
を血漿グロブリンキノーゲン（ｋｉｎｎｏｇｅｎ）から放出するように機能する
（例えば、ＦｕｌｌｅｒおよびＦｕｎｄｅｒ，１９８６．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ
．２９：９５３−９６４を参照のこと）。カリクレイン−キニン系は、心臓血管
および腎臓機能に対するその顕著な効果を通じて、高血圧および腎疾患／不全の
病因に直接関与し得る。例えば、ＲｅｇｏｌｉおよびＢａｒａｂｅ，１９８０．
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．３２：１−４６；Ｍａｒｇｏｌｉｕｓ，１９８０
．Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７：１１６−１２２を参
照のこと。
【０１９８】 組織カリクレインの生物学的機能は、完全には理解されていないが、それらは
、局所的な器官血流を増加し、腺分泌の流れを促進し、そして／または様々なプ
ロ酵素（例えば、プロレニン）をプロセシングするように機能し得ると考えられ
る。例えば、Ｓｅａｌｅｙら、１９７８．Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）２７５
：１４４−１４５を参照のこと。例えば、腎臓において、（組織）カリクレイン
は、様々な哺乳動物（ヒトを含む）の遠位のネフロンの管状細胞に局在化されて
いる（例えば、Ｆｉｇｕｅｒｏａら、１９８８．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．８９：４
３７−４４２を参照のこと）。この発見は、内因性の腎臓カリクレイン−キニン
系を示唆し、これは、水およびナトリウムの再吸収を阻害し得（例えば、Ｍｉｌ
ｌｓ，１９８２．Ｑ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．６７：３８３−３９９３を
参照のこと）、そして腎臓血管拡張を促進し得る（例えば、Ｐｒｏｕｄら、１９
８５．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．２５：８８０−８８５を参照のこと）。より最近
の研究はまた、ラット腎臓カリクレインｍＲＮＡが腺の血管極に局在されること
実証し、このように腎臓カリクレインは、近位のネフロンの機能において役割を
有することを示唆した。例えば、Ｘｉｏｎｇら、１９８９．Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎ
ｔ．３５：１３２４−１３２９を参照のこと。腎臓カリクレインは、ヒトおよび
実験動物の両方において、高血圧の多くの形態において減少されることが見出さ
れており（例えば、Ｇｉｌｂｏａら、１９８４．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．５０：
７２−７８を参照のこと）、そして腎臓血液流、ナトリウムおよび水の排泄、お
よび血圧の調節、ならびに実験的高血圧および臨床的高血圧の病因に関与すると
考えられているが（例えば、Ｍａｒｇｏｌｉｕｓ，１９９６．Ｄｉａｂｅｔｅｓ
４５（補遺１）：Ｓ１４−Ｓ１９を参照のこと）、本発明の前の、外因性カリ
クレインの投与は、腎疾患、血小板保存プール疾患、高血圧、または他の腎疾患
関連疾患もしくは障害の予防または処置のための潜在的な治療様式として示唆さ
れていない。高血圧性出血は、腎臓カリクレイン放出に対する強力な刺激薬であ
ることが示されており、１００ｍｍＨｇから８０ｍｍＨｇへの血圧の低下は、腎
臓カリクレイン放出を４倍増加する（例えば、Ｍａｒｉｅｒら、１９８１．Ｃｉ
ｒｃ．Ｒｅｓ．４８：３８６−３９２を参照のこと）。さらに、レニン−アンジ
オテンシン系に関連する可能な機能もまた提唱されており、これにより、腎臓カ
リクレインは、プロレニンを活性化するが、キニン（これは、アンジオテンシン
ＩＩの作用を同時に拮抗する）を生成する。例えば、Ｍｉｌｌｓ，１９８２．Ｑ
．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．６７：３９３−３９９；Ｐｒｏｕｄら、１９８
５、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．２５：８８０−８８５を参照のこと。
【０１９９】 ＦＨＲおよびＩＲＬ腎疾患動物モデルにおいて本発明に掲示されたカリクレイ
ン転写物（およびおそらく、カリクレインタンパク質）の減少したレベルは、腎
疾患および関連障害の病因論において役割を果たし得る。それゆえ、外因性カリ
クレインの投与は、腎疾患および／または関連障害の病態生理学的効果のいくつ
かを寛解するように作用し得る。さらに、カリクレインｍＲＮＡのレベルの定量
は、腎疾患への素因についての予後試験または初期／サブ−臨床的腎疾患もしく
は関連障害の診断において有用であり得る。
【０２００】 （（ｘｉｉ）ｐ８タンパク質） 表１に示されるように、ＦＨＲおよびＩＲＬ動物におけるｐ８タンパク質（Ｇ
ｅｎＢａｎｋ登録番号ａｆ０１４５０３）遺伝子の発現において、コントロール
ＡＣＩ株におけるこの転写のレベルと比較して、３倍の増加があった。
【０２０１】 ｐ８タンパク質およびｐ８遺伝子は、最近、膵炎の急性期および膵臓の発達／
再生の両方の間のラット膵臓腺房細胞において、単離および特徴付けされている
。例えば、Ｍａｌｌｏら、１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：３２３
６０−３２３６９。さらなるインビトロ研究は、ｐ８タンパク質が、細胞ストレ
スまたは病的攻撃性の期間に、いくつかのアポトーシス刺激に応答して、膵臓細
胞および非膵臓細胞（例えば、腎臓）の両方において誘導され、そしてそれは細
胞増殖を促進するために機能する、この過剰発現であることを実証した。例えば
、ＭａｃＩｎｔｏｓｈら、１９９５，Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｎｅ
ｕｒｏｂｉｏｌ．２１：４７７−４７９；Ｂｒｏｗｎ，１９９５，Ｎｅｕｒｏｐ
ａｔｈｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２１：４７３−４７５；Ｄａｓら
、１９９５．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．２７：１８１−１９３を
参照のこと。このｐ８タンパク質は、それがアポトーシス刺激に応答して最終的
な迅速な誘導を受けることが特に興味深い。例えば、ＭｃＩｎｔｏｓｈら、１９
９５．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２１：４７７
−４７９；Ｍａｌｌｏら、１９９７．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：３２３
６０−３２３６９を参照のこと。この知見は、哺乳動物細胞が、タンパク質合成
および遺伝子発現のそれらの正常なパターンを変化させることにより、このよう
なストレス因子に一般に応答する場合に、予期されないことに注意すべきである
。例えば、ＫｏｇｕｒｅおよびＫａｔｏ，１９９３、Ｓｔｒｏｋｅ ２４：２１
２１−２１２７を参照のこと。遺伝子発現におけるこのような転換は、細胞タン
パク質の通常のアレイの作製に付随する減少を有する、ストレスタンパク質の産
生における劇的な増加により特徴付けられる。ストレスタンパク質は、これらの
タンパク質の大部分が、通常の条件下で細胞内で発現されるように、生理学的ス
トレスのある細胞の新規の成分ではない。例えば、Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ、１
９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１２１１１−１２１１４を参照のこ
と。しかし、対照的に、ｐ８ｍＲＮＡおよびタンパク質の両方のレベルは、正常
な成体の組織および器官内で著しく低下した。例えば、Ｍａｌｌｏら、１９９７
，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：３２３６０−３２３６９を参照のこと。
【０２０２】 ｐ８タンパク質の一次構造分析（例えば、ＢｒｅｎｎａｎおよびＭａｔｔｈｗ
ｓ，１９８９．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１４：２８６−２９０
を参照のこと）は、このタンパク質が、シグナルペプチドも、膜貫通領域も保有
しないことを実証した。しかし、以下の存在：（ｉ）そのカルボキシ末端領域に
おける核ターゲティングの高度に保存された二分割のモチーフ；（ｉｉ）基本的
なヘリックス−ターン−ヘリックスモチーフ、および（ｉｉｉ）種々のホメオド
メインとの中程度の相同性は、ｐ８タンパク質が、ＤＮＡ結合タンパク質として
、最も好ましくは、転写因子として、核内で機能し得ることを示唆した。例えば
、ＢｒｅｎｎａｎおよびＭａｔｔｈｗｓ、１９８９，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｓｃｉ．１４：２８６−２９０を参照のこと。さらに、ｐ８タンパク質は
、種々のキナーゼによりリン酸化される能力を有する（すなわち、タンパク質キ
ナーゼＣに対する３つの潜在的リン酸化部位およびカゼインキナーゼＩＩに対す
る１つの部位）。例えば、Ｗｏｏｄｇｅｔら、１９８６，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．１６１：１７７−１８４；Ｐｉｎｎａ，１９９０．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０４５：２６７−２８４を参照のこと。これらの観
察は、ｐ８タンパク質が、核へのｐ８の最初の移行、次いでＤＮＡに対する配列
特異的結合に関する、リン酸化シグナル伝達／脱リン酸化シグナル伝達経路に関
与し得るという仮説を導いた。例えば、Ｍａｌｌｏら、１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２７２：３２３６０−３２３６９を参照のこと。
【０２０３】 このｐ８タンパク質はまた、そのｃＤＮＡが、ＣＯＳ−７細胞およびＡＲ４−
２Ｊ細胞にトランスフェクトされる場合に、インビトロでの細胞増殖因子のプロ
モーターとして機能することを示した。この知見は、ｐ８タンパク質が、器官（
例えば、膵臓、肝臓、腎臓、小腸、肺、および心臓）の増殖を調節し得る転写因
子として、推定上機能するという仮説に対するさらなる信用を与える。例えば、
Ｍａｌｌｏら、１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：３２３６０−３２
６９を参照のこと。
【０２０４】 ＦＨＲおよびＩＲＬ腎疾患動物モデルにおいて、本発明に開示される増加した
レベルのｐ８転写物（およびおそらくｐ８タンパク質）は、腎疾患および腎臓関
連疾患の病因において役割を果たし得る。以前の研究が、ｐ８発現が種々の生理
学的ストレス因子によって（すなわち、膵炎の急性期の間に膵臓において）アッ
プレギュレートされることを実証したように、腎疾患動物におけるこのタンパク
質の増加したレベルは、類似の病理学的／ストレス誘導機構によるものであり得
る。さらに、ｐ８は、これらの同じ膵臓細胞における増殖因子として機能するこ
とを示した。それ故、外因性ｐ８タンパク質（ｐ８発現などをアップレギュレー
トするためのインデューサー）、または、対照的に、増加したレベルのｐ８タン
パク質が生理学的に有害であることが引き続き見出される場合のアゴニストもし
くはインヒビターの投与は、腎疾患および／または腎臓関連疾患のいくつかの病
態生理学効果を寛解させるのを助けるために投与され得る。さらに、種々の細胞
／組織におけるｐ８ｍＲＮＡのレベルの定量は、腎疾患に対する素因についての
予後試験、または早期／無症状性の腎疾患もしくは腎臓関連疾患の診断において
有用であり得る。
【０２０５】 本発明は、本明細書中に開示される特定の実施形態により範囲を限定されない
ことに注意すべきである。実際に、本発明の種々の改変、および明細書中に開示
されるものは、上記の開示および添付の図面から当業者に容易に理解される。こ
のような改変は、添付の特許請求の範囲内に完全に含まれることが意図される。
【図面の簡単な説明】
本明細書中に開示された本発明がより理解されかつ評価されるために、以下の
詳細な記述が、示される。
【図１Ａ】 図１Ａは、８週齢および３２週齢のＦＨＲ、ＩＲＬおよびＡＣＩ（コントロー
ル）齧歯類系統におけるＩＲＰＲ（ＩＦＮ−β）ｍＲＮＡの差示的な発現を示す
。
【図１Ｂ】 図１Ｂは、８週齢および３２週齢のＦＨＲ、ＩＲＬおよびＡＣＩ（コントロー
ル）齧歯類系統におけるＩＲＰＲ（ＩＦＮ−β）ｍＲＮＡの差示的な発現を示す
。
【図１Ｃ】 図１Ｃは、８週齢および３２週齢のＦＨＲ、ＩＲＬおよびＡＣＩ（コントロー
ル）齧歯類系統におけるＩＲＰＲ（ＩＦＮ−β）ｍＲＮＡの差示的な発現を示す
。
【図２Ａ】 図２Ａは、３２週齢のＦＨＲおよびＡＣＩ（コントロール）齧歯類系統におけ
るＩＲＰＲ（ＩＦＮ−β）ｍＲＮＡの差示的な発現の、Ｏｌｉｇｏ Ｐｏｉｓｏ
ｎｉｎｇTM方法論による確認を示す。
【図２Ｂ】 図２Ｂは、３２週齢のＦＨＲおよびＡＣＩ（コントロール）齧歯類系統におけ
るＩＲＰＲ（ＩＦＮ−β）ｍＲＮＡの差示的な発現の、Ｏｌｉｇｏ Ｐｏｉｓｏ
ｎｉｎｇTM方法論による確認を示す。
【図３】 図３は、コントロールＡＣＩ系統に比べて、ＦＨＲおよびＩＲＬ系統ラットに
差示的に発現されたことを示した遺伝子の一覧表（表１）を示す。ＧｅｎＢａｎ
ｋ 登録番号、共通名、およびコントロールに比べた調節倍率を、提供する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 38/45 Ａ６１Ｐ 7/00 ４Ｃ０８６ 38/46 9/12 ４Ｃ０８７ 38/48 13/12 38/55 Ｃ１２Ｑ 1/02 45/00 1/68 Ａ 48/00 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ａ６１Ｐ 7/00 33/50 Ｐ 9/12 Ｚ 13/12 33/53 Ｄ Ｃ１２Ｎ 5/10 Ａ６１Ｋ 37/02 15/09 37/54 Ｃ１２Ｑ 1/02 37/64 1/68 37/50 Ｇ０１Ｎ 33/15 37/52 33/50 37/553 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ 33/53 5/00 Ｂ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 2G045 BB07 BB10 BB14 BB46 CB01 FB02 FB03 FB05 FB06 FB12 4B024 AA01 AA11 BA08 BA10 BA14 BA19 BA21 CA04 CA12 DA02 HA14 4B063 QA01 QA08 QA19 QQ08 QQ24 QQ26 QQ30 QQ36 QQ43 QQ53 QQ60 QQ79 QR04 QR06 QR10 QR16 QR32 QR36 QR48 QR56 QR62 QR77 QS03 QS25 QS33 QS34 QX02 4B065 AA91Y AB01 CA24 CA29 CA31 CA33 CA46 4C084 AA02 AA13 AA19 BA33 BA34 BA44 DA23 DC09 DC23 DC25 MA02 NA14 ZA422 ZA512 ZA812 4C086 AA01 AA02 EA16 MA01 MA02 MA04 NA14 ZA42 ZA51 ZA81 4C087 AA01 AA02 BC83 NA14 ZA42 ZA51 ZA81

Claims (17)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 腎疾患の処置または予防の方法であって、該方法は、該処置
    または予防が以下：亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼ Ｎ）；内在性膜タ
    ンパク質のＲＴ１．Ｂ−１（α）鎖；Ｆ１Ｆ０ ＡＴＰａｓｅのδサブユニット
    ；ケラチン１９；脳カルビンディン−ｄ２８ｋ（ＣａＢＰ２８Ｋ）；メタロプロ
    テイナーゼ３の阻害タンパク質（ＴＩＭＰ−３）；内在性膜タンパク質１（Ｉｔ
    ｍ１）；イソバレリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＩＶＤ）；ｒａｂ ＧＤＩ−β
    ；ＩＲＰＲ（ＩＦＮ−β）；有機カチオン輸送体（ＯＣＴ２）；胆汁マヤリカル
    スドメイン特異的糖タンパク質；Ｌ−アルギニン：グリシンアミジノトランスフ
    ェラーゼ；タンパク質脱リン酸化酵素１−β（ＰＰＩ−β）；腎臓カリクレイン
    およびｐ８タンパク質、からなる群より選択される１つ以上のタンパク質を、腎
    疾患の処置または予防に十分な量で所望される被験体ヘ投与する工程を包含する
    、方法。
  2. 【請求項２】 前記１つ以上のタンパク質が、ヒトタンパク質である、請求
    項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 腎疾患の処置または予防の方法であって、該方法は、該処置
    または予防が以下： （ａ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上に特異的な抗体； （ｂ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上をコードする核酸
    ； （ｃ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上をコードする核酸
    のアンチセンス核酸誘導体； （ｄ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上に特異的な抗体；
    および （ｅ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上をコードする核酸
    のアンチセンス核酸誘導体に特異的な抗体、 の１つ以上を、腎疾患の処置または予防に十分な量で所望される被験体ヘ投与す
    る工程を包含する、方法。
  4. 【請求項４】 血小板貯蔵プール疾患の処置または予防の方法であって、該
    方法は、該処置または予防が以下： （ａ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上に特異的な抗体； （ｂ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上をコードする核酸
    ； （ｃ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上をコードする核酸
    のアンチセンス核酸誘導体； （ｄ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上に特異的な抗体；
    および （ｅ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上をコードする核酸
    のアンチセンス核酸誘導体に特異的な抗体、 の１つ以上を、血小板貯蔵プール疾患の処置または予防に十分な量で所望される
    被験体ヘ投与する工程を包含する、方法。
  5. 【請求項５】 高血圧の処置または予防の方法であって、該方法は、該処置
    または予防が以下： （ａ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上に特異的な抗体； （ｂ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上をコードする核酸
    ； （ｃ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上をコードする核酸
    のアンチセンス核酸誘導体； （ｄ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上に特異的な抗体；
    および （ｅ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上をコードする核酸
    のアンチセンス核酸誘導体に特異的な抗体、 の１つ以上を、高血圧の処置または予防に十分な量で所望される被験体ヘ投与す
    る工程を包含する、方法。
  6. 【請求項６】 薬学的組成物であって、以下： （ａ）請求項１に記載の方法に記載のような、単離されたタンパク質； （ｂ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上に特異的な抗体； （ｃ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上をコードする核酸
    ； （ｄ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質の１つ以上をコードする核酸
    のアンチセンス核酸誘導体； （ｅ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質をコードする１つ以上の核酸
    に特異的な抗体；ならびに （ｆ）請求項１に記載の方法に記載のタンパク質をコードする１つ以上の核酸
    の該アンチセンス核酸誘導体に特異的な抗体、 の１つ以上の薬学的有効量または予防学的有効量、および薬学的に受容可能なキ
    ャリアを含む、組成物。
  7. 【請求項７】 １つ以上の容器中に、請求項６に記載の薬学的な組成物の治
    療学的有効量または予防学的有効量を含む、キット。
  8. 【請求項８】 前記核酸が、核酸ベクターである、請求項６に記載の薬学的
    組成物。
  9. 【請求項９】 前記アンチセンス核酸誘導体が、核酸ベクターである、請求
    項６に記載の薬学的組成物。
  10. 【請求項１０】 請求項１に記載の方法に記載の１つ以上のタンパク質の腎
    疾患、血小板貯蔵プール疾患、高血圧または関連疾患もしくは関連障害のモジュ
    レーターについてスクリーニングする方法であって、該方法は、以下の工程： （ａ）細胞を試験組成物と接触させる、工程； （ｂ）該細胞における請求項１に記載の方法に記載のタンパク質のレベルを測
    定する、工程； （ｃ）該試験組成物と接触されないコントロール細胞における該タンパク質の
    レベルを測定する、工程；ならびに （ｄ）工程（ｂ）および（ｃ）の細胞において、該タンパク質のレベルを比較
    する工程であって、該細胞におけるタンパク質のレベルの変化が、該試験化合物
    が腎疾患、血小板貯蔵プール疾患、高血圧および／または関連疾患もしくは関連
    障害のモジュレーターであることを示す、工程、 を包含する、方法。
  11. 【請求項１１】 腎疾患、血小板貯蔵プール疾患、高血圧または関連疾患も
    しくは関連障害のモジュレーターについてスクリーニングする方法であって、該
    方法は、以下の工程： （ａ）腎疾患、血小板貯蔵プール疾患、高血圧または関連疾患もしくは関連障
    害を発症しやすいかまたはこれらをすでに発症する試験動物に、試験組成物を投
    与する、工程； （ｂ）腎疾患、血小板貯蔵プール疾患、高血圧または関連疾患もしくは関連障
    害を発症しやすいかまたはこれらをすでに発症する適合したコントロール動物に
    、該試験組成物を投与する、工程； （ｃ）工程（ａ）および工程（ｂ）の動物において、請求項１に記載のタンパ
    ク質もしくは核酸または請求項１に記載の核酸をコードする核酸のレベルを測定
    する、工程；および （ｄ）該試験動物および適合したコントロール動物において、該タンパク質ま
    たは核酸のレベルを比較する、工程、 を含み、該相対的レベルの変化が、試験組成物が腎疾患、血小板貯蔵プール疾患
    、高血圧および／または関連疾患もしくは関連障害のモジュレーターであること
    を示す、方法。
  12. 【請求項１２】 請求項１１に記載の方法であって、前記試験動物が、以下
    ： （ａ）亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼ Ｎ）導入遺伝子、または該ネ
    イティブ亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼ Ｎ）遺伝子プロモーターでは
    ないプロモーターの制御下で亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼ Ｎ）を発
    現するものもの； （ｂ）内在性膜タンパク質のＲＴ１．Ｂ−１（α）鎖導入遺伝子、またはネイ
    ティブの該内在性膜タンパク質のＲＴ１．Ｂ−１（α）鎖遺伝子プロモーターで
    はないプロモーターの制御下で該内在性膜タンパク質のＲＴ１．Ｂ−１（α）鎖
    を発現するもの； （ｃ）Ｆ１Ｆ０ ＡＴＰａｓｅのδサブユニット導入遺伝子、または該ネイテ
    ィブのＦ１Ｆ０ ＡＴＰａｓｅのδサブユニット遺伝子プロモーターではないプ
    ロモーターの制御下で該Ｆ１Ｆ０ ＡＴＰａｓｅのδサブユニットを発現するも
    の； （ｄ）ケラチン１９導入遺伝子、または該ネイティブのケラチン１９遺伝子プ
    ロモーターではないプロモーターの制御下でケラチン１９を発現するもの； （ｅ）メタロプロテイナーゼ３の阻害タンパク質（ＴＩＭＰ−３）導入遺伝子
    、または該ネイティブのメタロプロテイナーゼ３の阻害タンパク質（ＴＩＭＰ−
    ３）遺伝子プロモーターではないプロモーターの制御下でメタロプロテイナーゼ
    ３の阻害タンパク質（ＴＩＭＰ−３）を発現するもの； （ｆ）内在性膜タンパク質１（Ｉｔｍ１）導入遺伝子、またはネイティブの該
    内在性膜タンパク質１（Ｉｔｍ１）遺伝子プロモーターではないプロモーターの
    制御下で内在性膜タンパク質１（Ｉｔｍ１）を発現するもの； （ｇ）イソバレリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＩＶＤ）導入遺伝子、またはネ
    イティブの該イソバレリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＩＶＤ）遺伝子プロモータ
    ーではないプロモーターの制御下でイソバレリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＩＶ
    Ｄ）を発現するもの； （ｈ）ｒａｂ ＧＤＩ−β導入遺伝子、またはネイティブの該ｒａｂ ＧＤＩ
    −β遺伝子プロモーターではないプロモーターの制御下でｒａｂ ＧＤＩ−βを
    発現するもの； （ｉ）ＩＲＰＲ（ＩＦＮ−β）導入遺伝子、またはネイティブの該ＩＲＰＲ（
    ＩＦＮ−β）遺伝子プロモーターではないプロモーターの制御下でＩＲＰＲ（Ｉ
    ＦＮ−β）を発現するもの； （ｊ）有機カチオン輸送体（ＯＣＴ２）導入遺伝子、またはネイティブの該有
    機カチオン輸送体（ＯＣＴ２）遺伝子プロモーターではないプロモーターの制御
    下で有機カチオン輸送体（ＯＣＴ２）を発現するもの； （ｋ）胆汁マヤリカルスドメイン特異的糖タンパク質導入遺伝子、またはネイ
    ティブの該胆汁マヤリカルスドメイン特異的糖タンパク質遺伝子プロモーターで
    はないプロモーターの制御下で胆汁マヤリカルスドメイン特異的糖タンパク質を
    発現するもの； （ｌ）Ｌ−アルギニン：グリシンアミジノトランスフェラーゼ導入遺伝子、ま
    たはネイティブの該Ｌ−アルギニン：グリシンアミジノトランスフェラーゼ遺伝
    子プロモーターではないプロモーターの制御下でＬ−アルギニン：グリシンアミ
    ジノトランスフェラーゼを発現するもの； （ｍ）タンパク質脱リン酸化酵素１−β（ＰＰＩ−β）導入遺伝子、またはネ
    イティブの該タンパク質脱リン酸化酵素１−β（ＰＰＩ−β）遺伝子プロモータ
    ーではないプロモーターの制御下でタンパク質脱リン酸化酵素１−β（ＰＰＩ−
    β）を発現するもの； （ｎ）腎臓カリクレイン導入遺伝子、またはネイティブの該腎臓カリクレイン
    遺伝子プロモーターではないプロモーターの制御下で腎臓カリクレインを発現す
    るもの；および （ｏ）ｐ８タンパク質導入遺伝子、またはネイティブの該ｐ８タンパク質遺伝
    子プロモーターではないプロモーターの制御下でｐ８タンパク質を発現するもの
    ； からなる群より選択される導入遺伝子を、野生型試験動物と比べて増加されたレ
    ベルで発現する組換え試験動物である、方法。
  13. 【請求項１３】 組換え、非ヒト動物であって、以下： （ａ）亜鉛ペプチダーゼ（アミノペプチダーゼ Ｎ）遺伝子配列； （ｂ）内在性膜タンパク質のＲＴ１．Ｂ−１（α）鎖遺伝子配列； （ｃ）Ｆ１Ｆ０ ＡＴＰａｓｅのδサブユニット遺伝子配列； （ｄ）ケラチン１９遺伝子配列； （ｅ）脳カルビンディン−ｄ２８ｋ（ＣａＢＰ２８Ｋ）遺伝子配列； （ｆ）メタロプロテイナーゼ３の阻害タンパク質（ＴＩＭＰ−３）遺伝子配列
    ； （ｇ）内在性膜タンパク質１（Ｉｔｍ１）遺伝子配列； （ｈ）イソバレリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＩＶＤ）遺伝子配列； （ｉ）ｒａｂ ＧＤＩ−β遺伝子配列； （ｊ）ＩＲＰＲ（ＩＦＮ−β）遺伝子配列； （ｋ）有機カチオン輸送体（ＯＣＴ２）遺伝子配列； （ｌ）胆汁マヤリカルスドメイン特異的糖タンパク質遺伝子配列； （ｍ）Ｌ−アルギニン：グリシンアミジノトランスフェラーゼ遺伝子配列； （ｎ）タンパク質脱リン酸化酵素１−β（ＰＰＩ−β）遺伝子配列； （ｏ）腎臓カリクレイン遺伝子配列；および （ｐ）ｐ８タンパク質遺伝子配列、 からなる群より選択される非ネイティブ遺伝子配列を含む、動物。
  14. 【請求項１４】 請求項１〜５、１０および１１に記載のいずれか１つに記
    載の方法であって、以下： （ａ）交感神経遮断薬； （ｂ）アンギオテンシン阻害薬； （ｃ）カルシウムチャネル遮断薬； （ｄ）利尿薬；および （ｅ）血管拡張薬、 からなる群より選択される薬物を投与する工程をさらに包含する、方法。
  15. 【請求項１５】 １つ以上の容器中に、請求項６に記載の薬学的組成物の治
    療学的有効量または予防学的有効量を含む、キット。
  16. 【請求項１６】 腎疾患、血小板貯蔵プール疾患、高血圧または関連疾患も
    しくは関連障害の感受性あるいは存在を診断するための方法であって、以下： （ａ）被験体からの組織サンプルを用意する、工程； （ｂ）該被験体における請求項１に記載のタンパク質の１つ以上または請求項
    ３に記載の核酸の１つ以上のレベルを測定する工程、または該被験体における請
    求項１に記載のタンパク質をコードする核酸のレベルを測定する、工程； （ｃ）該試験サンプルにおけるタンパク質量または核酸量を、コントロールサ
    ンプルにおけるタンパク質または核酸のレベルと比較する工程であって、該コン
    トロールサンプルが、血小板貯蔵プール疾患、高血圧または関連疾患もしくは関
    連障害に羅患しないまたは非感受性な個体から得られる、工程、 を包含する方法であり、該コントロールに比べて該被験体における該タンパク質
    または核酸のレベルにおける変化が、該被験体は腎疾患、血小板貯蔵プール疾患
    、高血圧または関連疾患もしくは関連障害に感受性であるかまたはこれらに羅患
    するかを示す、方法。
  17. 【請求項１７】 前記タンパク質が、該タンパク質に対する抗体を用いて測
    定される、請求項１５に記載の方法。
JP2000576873A 1998-10-22 1999-10-22 腎疾患および関連疾患に対する予想および治療的遺伝子およびタンパク質 Withdrawn JP2002527489A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17726498A 1998-10-22 1998-10-22
US09/177,264 1998-10-22
PCT/US1999/024723 WO2000023100A2 (en) 1998-10-22 1999-10-22 Genes and proteins predictive and therapeutic for renal disease and associated disorders

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2002527489A true JP2002527489A (ja) 2002-08-27

Family

ID=22647902

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2000576873A Withdrawn JP2002527489A (ja) 1998-10-22 1999-10-22 腎疾患および関連疾患に対する予想および治療的遺伝子およびタンパク質

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP1124572B1 (ja)
JP (1) JP2002527489A (ja)
AT (1) ATE249236T1 (ja)
AU (1) AU1449500A (ja)
CA (1) CA2347625A1 (ja)
DE (1) DE69911226D1 (ja)
HK (1) HK1039279A1 (ja)
WO (1) WO2000023100A2 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013075911A (ja) * 2005-06-28 2013-04-25 Univ Federal De Minas Gerais 病気の研究、予防及び治療のためのアポトーシス活性調節剤としての、ｍａｓｇ−タンパク質結合受容体アゴニスト及びアンタゴニストの使用
JP2014520119A (ja) * 2011-06-17 2014-08-21 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー インスリン感受性を増大させる方法および糖尿病を処置するための方法

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040146516A1 (en) * 1999-06-17 2004-07-29 Utah Ventures Ii L.P. Lumen-exposed molecules and methods for targeted delivery
AU2003224062A1 (en) * 2002-04-10 2003-10-20 Develogen Aktiengesellschaft Fur Entwicklungsbiologische Forschung Proteins involved in the regulation of energy homeostasis
WO2005026736A2 (en) * 2003-09-13 2005-03-24 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with organic cation transporter slc22a2 (slc22a2)
WO2006008002A2 (en) * 2004-07-23 2006-01-26 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with kallikrein 1 (klk1)
US7329737B2 (en) 2004-08-03 2008-02-12 Dyax Corp. Antibodies that bind hK-1
FR2938335A1 (fr) * 2008-11-13 2010-05-14 Galderma Res & Dev Modulateurs de l'isovaleryl-coenzyme a dehydrogenase dans le traitement de l'acne, d'une dermatite seborrheique ou de l'hyperseborrhee
EP2505661A1 (en) * 2011-03-28 2012-10-03 Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf Methods for detecting the mortality risk
CN104583422A (zh) 2012-06-27 2015-04-29 博格有限责任公司 标志物在诊断和治疗前列腺癌中的用途
EP3230314B1 (en) 2014-12-08 2023-05-03 Berg LLC Use of markers including filamin a in the diagnosis and treatment of prostate cancer
US11244760B2 (en) 2015-06-25 2022-02-08 Karydo Therapeutix, Inc. Prediction device based on inter-organ cross talk system
CN114686584A (zh) * 2016-03-29 2022-07-01 无限生物制药公司 用以预防或治疗肾脏疾病的活性组分的候选物质的筛选装置和筛选方法
WO2017170803A1 (ja) 2016-03-29 2017-10-05 株式会社国際電気通信基礎技術研究所 医薬組成物又は食品組成物、及び有効成分の体内での効果の評価方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69418307T2 (de) * 1993-01-21 1999-11-04 Erna Moeller Verhütung und behandlung von zytomegalovirus mittels aminopeptidase

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013075911A (ja) * 2005-06-28 2013-04-25 Univ Federal De Minas Gerais 病気の研究、予防及び治療のためのアポトーシス活性調節剤としての、ｍａｓｇ−タンパク質結合受容体アゴニスト及びアンタゴニストの使用
JP2017114901A (ja) * 2005-06-28 2017-06-29 ウニベルシダーヂ フェデラル ヂ ミナス ジェライス 病気の研究、予防及び治療のためのアポトーシス活性調節剤としての、ｍａｓ ｇ−タンパク質結合受容体アゴニスト及びアンタゴニストの使用
JP2014520119A (ja) * 2011-06-17 2014-08-21 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー インスリン感受性を増大させる方法および糖尿病を処置するための方法

Also Published As

Publication number Publication date
CA2347625A1 (en) 2000-04-27
WO2000023100A2 (en) 2000-04-27
HK1039279A1 (zh) 2002-04-19
EP1124572A2 (en) 2001-08-22
AU1449500A (en) 2000-05-08
WO2000023100A8 (en) 2001-02-22
EP1124572B1 (en) 2003-09-10
WO2000023100A3 (en) 2000-11-23
ATE249236T1 (de) 2003-09-15
WO2000023100A9 (en) 2000-08-24
DE69911226D1 (de) 2003-10-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6486299B1 (en) Genes and proteins predictive and therapeutic for stroke, hypertension, diabetes and obesity
US20020015950A1 (en) Atherosclerosis-associated genes
JP2002502589A (ja) ４５個のヒト分泌タンパク質
JP2002527489A (ja) 腎疾患および関連疾患に対する予想および治療的遺伝子およびタンパク質
JP2002501738A (ja) ６７個のヒト分泌タンパク質
JP2002532083A (ja) ４７個のヒト分泌タンパク質
AU758123B2 (en) Atrial natriuretic factor mutants and ischemic stroke
JP2002540763A (ja) ３３個のヒト分泌タンパク質
US20050221359A1 (en) Cospeptin, cosmedin and their uses
US7211563B2 (en) Protein disulfide isomerase and ABC transporter homologous proteins involved in the regulation of energy homeostasis
WO2003099318A2 (en) Pancreas-specific proteins
US20030152933A1 (en) Human secreted proteins
JPH1087507A (ja) γ−グルタミルトランスペプチターゼの新規な用途
JP4744140B2 (ja) アンドロゲン調節性ｐｍｅｐａ１遺伝子および癌細胞増殖を抑制するための同遺伝子の使用方法
JP2002503466A (ja) 網膜芽細胞腫タンパク質複合体および網膜芽細胞腫相互作用タンパク質
CA2423559A1 (en) 22 human secreted proteins
JP2003189883A (ja) 新規ユビキチン特異プロテアーゼ
JP2003520031A (ja) ２８個のヒト分泌タンパク質
JP2003235574A (ja) 新規クニッツ型プロテアーゼインヒビター
CA2421249A1 (en) 21 human secreted proteins
JP2003523733A (ja) １０個のヒト分泌タンパク質
WO2003061583A2 (en) Digenic mutations associated with severe insulin resistance and type 2 diabetes and their use in the diagnosis and treatment of diabetes
CA2420902A1 (en) 18 human secreted proteins
CA2418474A1 (en) 21 human secreted proteins
AU3291799A (en) Retinoblastoma protein complexes and retinoblastoma interacting proteins

Legal Events

Date Code Title Description
A300 Application deemed to be withdrawn because no request for examination was validly filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300

Effective date: 20070109