JP2002527050A - Ｈｌａ−ｂ３５分子に結合する単離ペプチド - Google Patents
Ｈｌａ−ｂ３５分子に結合する単離ペプチドInfo
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、ＨＬＡ−Ｂ３５分子に結合し、その結果形成される複合体の細胞溶解性Ｔ細胞による認識及び溶解を導くペプチドに関する。これらのペプチドをコードする核酸分子とそのそれぞれの利用法も本発明の一部を構成する。前記分子は、いくつかの場合に於いて、チロシナーゼから誘導され、このチロシナーゼ分子の一部と、チロシナーゼをコードする核酸分子の一部も本発明の一部を構成する。
Description
【０００１】発明の分野 本発明は、ＭＨＣ分子によって提示され、細胞溶解性Ｔ細胞による認識を導く
ペプチドに関する。詳しくは、本発明は、ＨＬＡ−Ｂ３５分子に結合し、ノナマ
ーであるペプチドに関する。
ペプチドに関する。詳しくは、本発明は、ＨＬＡ−Ｂ３５分子に結合し、ノナマ
ーであるペプチドに関する。
【０００２】背景及び従来技術 哺乳類の免疫系が、外来又は異質の物質を認識し、それらと反応するプロセス
は複雑なものである。この系の重要は側面はＴ細胞応答である。この応答は、Ｔ
細胞が、ヒト白血球抗原（“ＨＬＡ”）又は主要組織適合遺伝子複合体（“ＭＨ
Ｃ”）と称される細胞表面分子とペプチドとの複合体を認識し、それと相互作用
することを必要とする。前記ペプチドは、ＨＬＡ／ＭＨＣ分子も提示する細胞に
よってプロセッシングされるより大きな分子に由来する。この点に関しては、メ
ール（Ｍａｌｅ）等、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．P．Ｌｉ
ｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９８７）、特にその６−１０章を参照。Ｔ
細胞とＨＬＡ／ペプチド複合体との相互作用は制限されたものであって、ＨＬＡ
分子とペプチドとの特定の組み合わせに対して特異的なＴ細胞を必要とする。も
しも特異的なＴ細胞が存在しなければ、たとえそのパートナー複合体が存在して
いてもＴ細胞応答は起こらない。同様に、Ｔ細胞が存在していても、特異的な複
合体が存在しなければ応答は起こらない。このメカニズムは、異物に対する免疫
系の応答、自己免疫疾患、及び細胞異常に対する応答に関与している。タンパク
質がＨＬＡ結合ペプチドへとプロセッシングされるメカニズムに関して多くの研
究が行われてきた。この点に関しては、バリナガ（Ｂａｒｉｎａｇａ），Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２５７：８８０（１９９２），フリーモント（Ｆｒｅｍｏｎｔ）等， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９１９（１９９２）；マツムラ（Ｍａｔｓｕｍｕｒａ）
等、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９２７（１９９２）、ラトロン（Ｌａｔｒｏｎ）
等、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９６４（１９９２）を参照。
は複雑なものである。この系の重要は側面はＴ細胞応答である。この応答は、Ｔ
細胞が、ヒト白血球抗原（“ＨＬＡ”）又は主要組織適合遺伝子複合体（“ＭＨ
Ｃ”）と称される細胞表面分子とペプチドとの複合体を認識し、それと相互作用
することを必要とする。前記ペプチドは、ＨＬＡ／ＭＨＣ分子も提示する細胞に
よってプロセッシングされるより大きな分子に由来する。この点に関しては、メ
ール（Ｍａｌｅ）等、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．P．Ｌｉ
ｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９８７）、特にその６−１０章を参照。Ｔ
細胞とＨＬＡ／ペプチド複合体との相互作用は制限されたものであって、ＨＬＡ
分子とペプチドとの特定の組み合わせに対して特異的なＴ細胞を必要とする。も
しも特異的なＴ細胞が存在しなければ、たとえそのパートナー複合体が存在して
いてもＴ細胞応答は起こらない。同様に、Ｔ細胞が存在していても、特異的な複
合体が存在しなければ応答は起こらない。このメカニズムは、異物に対する免疫
系の応答、自己免疫疾患、及び細胞異常に対する応答に関与している。タンパク
質がＨＬＡ結合ペプチドへとプロセッシングされるメカニズムに関して多くの研
究が行われてきた。この点に関しては、バリナガ（Ｂａｒｉｎａｇａ），Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２５７：８８０（１９９２），フリーモント（Ｆｒｅｍｏｎｔ）等， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９１９（１９９２）；マツムラ（Ｍａｔｓｕｍｕｒａ）
等、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９２７（１９９２）、ラトロン（Ｌａｔｒｏｎ）
等、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：９６４（１９９２）を参照。
【０００３】 Ｔ細胞が細胞異常を認識するメカニズムは癌にも関連付けられてきた。たとえ
ば、参考文献として本出願にその内容を合体させる、１９９２年５月２２日出願
、１９９２年１１月２６日公表のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３５４には
、１つの遺伝子ファミリーが開示されており、これらはプロセッシングされてペ
プチドとなり、次に、細胞表面に発現され、特異的なＣＴＬによる腫瘍細胞の溶
解を引き起こすことができる。前記遺伝子は、“腫瘍拒絶抗原前駆体”、別名、
“ＴＲＡＰ”分子をコードするものであるといわれ、これら分子に由来するペプ
チドは、“腫瘍拒絶抗原”または“ＴＲＡ”と称される。このファミリーの遺伝
子の詳細に関しては、ともにここに参考文献として合体させるトラヴァーサリ（
Ｔｒａｖｅｒｓａｒｉ）等、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ３５：１４５（１
９９２）；ファン・デア・ブルッゲン（ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ）等、 Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１６４３（１９９１）を参照。
ば、参考文献として本出願にその内容を合体させる、１９９２年５月２２日出願
、１９９２年１１月２６日公表のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３５４には
、１つの遺伝子ファミリーが開示されており、これらはプロセッシングされてペ
プチドとなり、次に、細胞表面に発現され、特異的なＣＴＬによる腫瘍細胞の溶
解を引き起こすことができる。前記遺伝子は、“腫瘍拒絶抗原前駆体”、別名、
“ＴＲＡＰ”分子をコードするものであるといわれ、これら分子に由来するペプ
チドは、“腫瘍拒絶抗原”または“ＴＲＡ”と称される。このファミリーの遺伝
子の詳細に関しては、ともにここに参考文献として合体させるトラヴァーサリ（
Ｔｒａｖｅｒｓａｒｉ）等、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ３５：１４５（１
９９２）；ファン・デア・ブルッゲン（ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ）等、 Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１６４３（１９９１）を参照。
【０００４】 ここに参考文献として合体させる米国特許第５，４０５，９４０号は、ＨＬＡ
−Ａ１分子に結合するノナペプチドが教示されている。この特許は、特定のＨＬ
Ａ分子に対する特定のペプチドの特異性が判明すれば、特定のペプチドが一つの
特定のＨＬＡ分子に対しては優先的に結合するが他には結合しないと予測すべき
であると教示している。これは重要である。というのは、個体によってその所有
するＨＬＡ表現型が異なるからである。その結果、特定のペプチドが特定のＨＬ
Ａ分子又はＨＬＡ分子のクラスに対するパートナーであるとして同定されること
が診断及び治療上の効果をもたらすとしても、それらはその特定のＨＬＡ表現型
を有する個体に対してしか適切でないのである。多くの細胞異常は、一つの特定
のＨＬＡ表現型に限定されるものではなく、標的治療法には、その対象となる異
常細胞の表現型に関するいくらかの知識が必要とされるため、この分野に於いて
更なる研究が必要である。
−Ａ１分子に結合するノナペプチドが教示されている。この特許は、特定のＨＬ
Ａ分子に対する特定のペプチドの特異性が判明すれば、特定のペプチドが一つの
特定のＨＬＡ分子に対しては優先的に結合するが他には結合しないと予測すべき
であると教示している。これは重要である。というのは、個体によってその所有
するＨＬＡ表現型が異なるからである。その結果、特定のペプチドが特定のＨＬ
Ａ分子又はＨＬＡ分子のクラスに対するパートナーであるとして同定されること
が診断及び治療上の効果をもたらすとしても、それらはその特定のＨＬＡ表現型
を有する個体に対してしか適切でないのである。多くの細胞異常は、一つの特定
のＨＬＡ表現型に限定されるものではなく、標的治療法には、その対象となる異
常細胞の表現型に関するいくらかの知識が必要とされるため、この分野に於いて
更なる研究が必要である。
【０００５】 酵素チロシナーゼは、チロシンをデヒドロキシフェニールアラニン、別名“Ｄ
ＯＰＡ”、に変換する反応を触媒し、これは、メラノサイトに選択的に発現され
るものと考えられている（ミューラー（Ｍｕｌｌｅｒ）等、ＥＭＢＯ Ｊ ７：
２７１５（１９８８））。前記ヒト酵素のｃＤＮＡに関する初期の報告は、クウ
ォン（Ｋｗｏｎ）米国特許第４，８９８，８１４号に見られる。ブチャード（Ｂ
ｏｕｃｈａｒｄ）等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６９：２０２９（１９８９）によ
る、それより後の報告は、僅かに異なる配列を提供している。それは色素異常症
に関連している為、この酵素に対する阻害剤を同定するための多大な努力がなさ
れてきた。この文献のいくつかの具体例として、ジンボウ（Ｊｉｎｂｏｗ）、Ｗ
Ｏ９１１６３０２；ミシマ（Ｍｉｓｈｉｍａ）等、米国特許第５，０７７，０５
９号、及びナツァローパー（Ｎａｚｚａｒｏｐｏｒ）米国特許第４，８１８，７
６８号がある。類似の物質を教示しているその他の参考文献は当業者に周知であ
ろう。
ＯＰＡ”、に変換する反応を触媒し、これは、メラノサイトに選択的に発現され
るものと考えられている（ミューラー（Ｍｕｌｌｅｒ）等、ＥＭＢＯ Ｊ ７：
２７１５（１９８８））。前記ヒト酵素のｃＤＮＡに関する初期の報告は、クウ
ォン（Ｋｗｏｎ）米国特許第４，８９８，８１４号に見られる。ブチャード（Ｂ
ｏｕｃｈａｒｄ）等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６９：２０２９（１９８９）によ
る、それより後の報告は、僅かに異なる配列を提供している。それは色素異常症
に関連している為、この酵素に対する阻害剤を同定するための多大な努力がなさ
れてきた。この文献のいくつかの具体例として、ジンボウ（Ｊｉｎｂｏｗ）、Ｗ
Ｏ９１１６３０２；ミシマ（Ｍｉｓｈｉｍａ）等、米国特許第５，０７７，０５
９号、及びナツァローパー（Ｎａｚｚａｒｏｐｏｒ）米国特許第４，８１８，７
６８号がある。類似の物質を教示しているその他の参考文献は当業者に周知であ
ろう。
【０００６】 ここに参考文献として合体させる種々の米国特許は、チロシナーゼが、外来性
の抗原又はＴＲＡＰ分子と同様に処理可能である、ことを教示している。即ち、
メラノーマ等の或る種の細胞異常に於いて、チロシナーゼがプロセッシングされ
、それに由来するペプチドが、或る種の異常細胞上に於いてＨＬＡ分子と複合体
を形成することが判った。これらの複合体は、細胞溶解性Ｔ細胞（“ＣＴＬ”）
によって認識され、次に、提示細胞を溶解することが判った。
の抗原又はＴＲＡＰ分子と同様に処理可能である、ことを教示している。即ち、
メラノーマ等の或る種の細胞異常に於いて、チロシナーゼがプロセッシングされ
、それに由来するペプチドが、或る種の異常細胞上に於いてＨＬＡ分子と複合体
を形成することが判った。これらの複合体は、細胞溶解性Ｔ細胞（“ＣＴＬ”）
によって認識され、次に、提示細胞を溶解することが判った。
【０００７】 たとえば、１９９６年１月５日に出願され許可済みの特許出願第０８／５８３
，２３８号は、チロシナーゼに由来し、ＨＬＡ−Ａ２及びＨＬＡ−Ｂ４４分子と
複合体を形成するペプチドを教示している。ＨＬＡ分子によって提示されるチロ
シナーゼに由来するペプチドに関するその他の情報は、米国特許第５，４８７，
９７４号、及び、１９９４年２月２８日出願の特許出願第０８／２０３，０５４
号、１９９３年６月２３日出願の特許出願第０８／０８１，６７３号、及び１９
９２年１２月２２日出願で現在では放棄されている出願第０７／９４４，９２８
号に見られる。これらの参考文献のすべてをここに合体させる。
，２３８号は、チロシナーゼに由来し、ＨＬＡ−Ａ２及びＨＬＡ−Ｂ４４分子と
複合体を形成するペプチドを教示している。ＨＬＡ分子によって提示されるチロ
シナーゼに由来するペプチドに関するその他の情報は、米国特許第５，４８７，
９７４号、及び、１９９４年２月２８日出願の特許出願第０８／２０３，０５４
号、１９９３年６月２３日出願の特許出願第０８／０８１，６７３号、及び１９
９２年１２月２２日出願で現在では放棄されている出願第０７／９４４，９２８
号に見られる。これらの参考文献のすべてをここに合体させる。
【０００８】 ＨＬＡ−Ｂ３５分子がペプチドを提示し、その結果形成される複合体がＣＴＬ
によって認識されることが知られている。この点に関しては、たとえば、１９９
６年９月２６日出願で、ここに参考文献として合体させる米国特許出願第０８／
７１８，９６４号を参照。ＨＬＡ−Ｂ３５分子による提示に関するその他の情報
は、たとえば、ここに参考文献として合体させるラメンシー（Ｒａｍｍｅｎｓｅ
ｅ）等、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４１：１７１（１９９５），ｐ．２０
７に見られる。更に、ここに参考文献として合体させるＭａｓｏｎ等、Ｔｉｓｓ
ｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ５１：４１７−４６５（１９９８）も参照。その第４
５８頁には、前記公知のＨＬＡ−Ｂ３５対立遺伝子のアミノ酸配列がリストされ
ており、これらの間に多大な同一性が存在することが示されている。
によって認識されることが知られている。この点に関しては、たとえば、１９９
６年９月２６日出願で、ここに参考文献として合体させる米国特許出願第０８／
７１８，９６４号を参照。ＨＬＡ−Ｂ３５分子による提示に関するその他の情報
は、たとえば、ここに参考文献として合体させるラメンシー（Ｒａｍｍｅｎｓｅ
ｅ）等、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４１：１７１（１９９５），ｐ．２０
７に見られる。更に、ここに参考文献として合体させるＭａｓｏｎ等、Ｔｉｓｓ
ｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ５１：４１７−４６５（１９９８）も参照。その第４
５８頁には、前記公知のＨＬＡ−Ｂ３５対立遺伝子のアミノ酸配列がリストされ
ており、これらの間に多大な同一性が存在することが示されている。
【０００９】 ＨＬＡ−Ｂ３５分子に結合し、その後、ＣＴＬによって認識される新規なペプ
チドが今回同定された。これらのペプチドとその利用法が本発明を構成する。
チドが今回同定された。これらのペプチドとその利用法が本発明を構成する。
【００１０】 当業者に於いては自明であり、かつ以下の開示から理解されるであろうが、チ
ロシナーゼに由来するものであっても、本発明のペプチドは、必ずしもそれらに
由来するものである必要はない。
ロシナーゼに由来するものであっても、本発明のペプチドは、必ずしもそれらに
由来するものである必要はない。
【００１１】好適実施例の詳細な説明 例１ ドジョヴァンニ（Ｄｅｇｉｏｖａｎｎｉ）等、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１８：６７１−６７６（１９８８）によって記載されているメラノーマ細胞ライ
ンＬＧ２−ＭＥＬは、自己由来細胞溶解性Ｔリンパ球によって認識される。少な
くとも三つの抗原がその表面上に提示され、これらＣＴＬによって認識されるが
、これらの抗原のいずれもまだ単離されたり、記載されたことはない。これらの
実験は、いかに“ＣＴＬ３５−２４”によって認識されるそのペプチドが同定さ
れたかを記載するものである。
１８：６７１−６７６（１９８８）によって記載されているメラノーマ細胞ライ
ンＬＧ２−ＭＥＬは、自己由来細胞溶解性Ｔリンパ球によって認識される。少な
くとも三つの抗原がその表面上に提示され、これらＣＴＬによって認識されるが
、これらの抗原のいずれもまだ単離されたり、記載されたことはない。これらの
実験は、いかに“ＣＴＬ３５−２４”によって認識されるそのペプチドが同定さ
れたかを記載するものである。
【００１２】 先ず、ここには記載されていない実験に於いて、ＨＬＡ−Ｂ及びＨＬＡ−Ｃ分
子に対する二つのモノクローナル抗体を、ＣＴＬ３５−２４と細胞ラインＬＧ２
−ＭＥＬと組み合わせた。これらの抗体は、共にここに参考文献として合体させ
るレバイ（Ｒｅｂａｉ）等、Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ２２：１０７−
１１７（１９８３）とヤン（Ｙａｎｇ）等、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ １
９：２１７−２３１（１９８４）とによって記載されている。前記抗体はＣＴＬ
３５−２４によるＬＧ２−ＭＥＬの溶解を阻害することがわかった。本質的に、
これは、抗体の希釈物（１／３−１／８０）を細胞傷害性アッセイに添加するこ
とによってなされた。従来のＨＬＡタイピングによって、既に、メラノーマ細胞
ラインが提示するＨＬＡ分子として、ＨＬＡ−Ａ２４，Ａ３２，Ｂ３５，Ｂ４４
及びＣｗ*０４は同定されていたので、その提示分子が、Ｂ３５，Ｂ４４又はＣ
ｗ*０４のいずれかであることは明白であった。
子に対する二つのモノクローナル抗体を、ＣＴＬ３５−２４と細胞ラインＬＧ２
−ＭＥＬと組み合わせた。これらの抗体は、共にここに参考文献として合体させ
るレバイ（Ｒｅｂａｉ）等、Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ２２：１０７−
１１７（１９８３）とヤン（Ｙａｎｇ）等、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ １
９：２１７−２３１（１９８４）とによって記載されている。前記抗体はＣＴＬ
３５−２４によるＬＧ２−ＭＥＬの溶解を阻害することがわかった。本質的に、
これは、抗体の希釈物（１／３−１／８０）を細胞傷害性アッセイに添加するこ
とによってなされた。従来のＨＬＡタイピングによって、既に、メラノーマ細胞
ラインが提示するＨＬＡ分子として、ＨＬＡ−Ａ２４，Ａ３２，Ｂ３５，Ｂ４４
及びＣｗ*０４は同定されていたので、その提示分子が、Ｂ３５，Ｂ４４又はＣ
ｗ*０４のいずれかであることは明白であった。
【００１３】 親ラインのＨＬＡ分子の全部ではなくその一部を提示する癌細胞のサブライン
が得られることが可能であることは周知である。ＬＧ２−ＭＥＬのそのようなサ
ブライン、即ち、ＨＬＡ−Ｂ３５の発現を失ったＬＧ２−ＭＥＬ２２０、は知ら
れていた。ＣＴＬ３５−２４は、このサブラインを溶解することが出来ず、これ
は、前記提示分子がＨＬＡ−Ｂ３５であることを示唆した。
が得られることが可能であることは周知である。ＬＧ２−ＭＥＬのそのようなサ
ブライン、即ち、ＨＬＡ−Ｂ３５の発現を失ったＬＧ２−ＭＥＬ２２０、は知ら
れていた。ＣＴＬ３５−２４は、このサブラインを溶解することが出来ず、これ
は、前記提示分子がＨＬＡ−Ｂ３５であることを示唆した。
【００１４】 その後、ＨＬＡ−Ｂ３５分子のｃＤＮＡを単離、配列決定したところ、それは
、対立遺伝子サブタイプＨＬＡ−Ｂ*３５０３であることが判明した。このサブ
タイプは、メイソン（Ｍａｓｏｎ）等，前出、から理解されるように、その他の
公知のＨＬＡサブタイプと僅かに異なっている。ここから、前記対立遺伝子サブ
タイプは、ペプチド提示の目的に於いて均等物である、と考えられる。
、対立遺伝子サブタイプＨＬＡ−Ｂ*３５０３であることが判明した。このサブ
タイプは、メイソン（Ｍａｓｏｎ）等，前出、から理解されるように、その他の
公知のＨＬＡサブタイプと僅かに異なっている。ここから、前記対立遺伝子サブ
タイプは、ペプチド提示の目的に於いて均等物である、と考えられる。
【００１５】 例２ 前出の「背景」の部に記載したように、メラノーマ細胞は、制限された数の正
常細胞に於いては発現されないか、もしくは、それらに於いてのみ発現される多
くの遺伝子を発現することが知られている。これらの遺伝子としては、ＭＡＧＥ
遺伝子、ＢＡＧＥ，ＧＡＧＥ（１−６），ＲＡＧＥ（１−４），ＬＡＧＥ，ＰＲ
ＡＭＥ，チロシナーゼ、Ｍｅｌａｎ−Ａ，ＮＹ−ＥＳＯ−１，ｐｍｅ／１７，Ｃ
ＡＳＰ−８，ＭＵＭ−１及びｇｐ１００がある。ＨＬＡ−Ｂ３５分子によって提
示される前記抗原がこれらの遺伝子のいずれからプロセッシングされるか否かを
調べるために実験を行った。これを行うために、標準法により、上記のもののそ
れぞれのｃＤＮＡを得て、ベクターを調製した。これらのベクターを使用してＣ
ＯＳ細胞をトランスフェクトし、それらは、又、ＬＧ２−ＭＥＬによって発現さ
れるＨＬＡ−Ｂ*３５０３のｃＤＮＡにもトランスフェクトした。使用されたｃ
ＤＮＡ（即ち、ＨＬＡ−Ｂ*３５０３のｃＤＮＡ）は、ＢＢ４９−ＳＣＣＨＮ細
胞から調整されたｃＤＮＡライブラリーから得た。この細胞ラインは、ここに参
考文献として合体させるマンドルツァット（Ｍａｎｄｒｕｚｚａｔｏ）等、Ｊ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６（５）；７８５−７９３（１９９７）によって記載され
ている。前記両トランスフェクションは、周知のＤＥＡＥ／デキストラン法を用
いて、前述した、各コンストラクトを５０ｎｇを使用して行われた。トランスフ
ェクションの２４時間後、ＣＴＬ３５−２４（１５００個の細胞）を添加し、そ
の更に２４時間後、標準法を使用して、ＴＮＦ産生を測定した。トラヴァーサリ
（Ｔｒａｖｅｒｓａｒｉ）等，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ３５：１４５−
１５２（１９９２）を参照。細胞ラインＬＧ２−ＭＥＬ５−３５（陽性コントロ
ール）と、ＨＬＡ−Ｂ*３５０３単独又はメラノーマ関連遺伝子単独でトランス
フェクトしたＣＯＳ細胞と含むコントロールを使用した。チロシナーゼとＨＬＡ
−Ｂ*３５０３との両方を発現した細胞だけがＴＮＦ産生を刺激した。
常細胞に於いては発現されないか、もしくは、それらに於いてのみ発現される多
くの遺伝子を発現することが知られている。これらの遺伝子としては、ＭＡＧＥ
遺伝子、ＢＡＧＥ，ＧＡＧＥ（１−６），ＲＡＧＥ（１−４），ＬＡＧＥ，ＰＲ
ＡＭＥ，チロシナーゼ、Ｍｅｌａｎ−Ａ，ＮＹ−ＥＳＯ−１，ｐｍｅ／１７，Ｃ
ＡＳＰ−８，ＭＵＭ−１及びｇｐ１００がある。ＨＬＡ−Ｂ３５分子によって提
示される前記抗原がこれらの遺伝子のいずれからプロセッシングされるか否かを
調べるために実験を行った。これを行うために、標準法により、上記のもののそ
れぞれのｃＤＮＡを得て、ベクターを調製した。これらのベクターを使用してＣ
ＯＳ細胞をトランスフェクトし、それらは、又、ＬＧ２−ＭＥＬによって発現さ
れるＨＬＡ−Ｂ*３５０３のｃＤＮＡにもトランスフェクトした。使用されたｃ
ＤＮＡ（即ち、ＨＬＡ−Ｂ*３５０３のｃＤＮＡ）は、ＢＢ４９−ＳＣＣＨＮ細
胞から調整されたｃＤＮＡライブラリーから得た。この細胞ラインは、ここに参
考文献として合体させるマンドルツァット（Ｍａｎｄｒｕｚｚａｔｏ）等、Ｊ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６（５）；７８５−７９３（１９９７）によって記載され
ている。前記両トランスフェクションは、周知のＤＥＡＥ／デキストラン法を用
いて、前述した、各コンストラクトを５０ｎｇを使用して行われた。トランスフ
ェクションの２４時間後、ＣＴＬ３５−２４（１５００個の細胞）を添加し、そ
の更に２４時間後、標準法を使用して、ＴＮＦ産生を測定した。トラヴァーサリ
（Ｔｒａｖｅｒｓａｒｉ）等，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ３５：１４５−
１５２（１９９２）を参照。細胞ラインＬＧ２−ＭＥＬ５−３５（陽性コントロ
ール）と、ＨＬＡ−Ｂ*３５０３単独又はメラノーマ関連遺伝子単独でトランス
フェクトしたＣＯＳ細胞と含むコントロールを使用した。チロシナーゼとＨＬＡ
−Ｂ*３５０３との両方を発現した細胞だけがＴＮＦ産生を刺激した。
【００１６】 例３ チロシナーゼがプロセッシング分子として同定された後、ＨＬＡ−Ｂ*３５０
３によって提示されるペプチドの正体を判定するための研究を行った。これを行
うために、共にここに参考文献として合体させるウーフェル（Ｗｏｅｆｅｌ）等
、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：７５９−７６４（１９９４）及びブリチ
ャード（Ｂｒｉｃｈａｒｄ）等、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：２２４−
２３０（１９９６）、更に、同様にここに参考文献として合体させる米国特許第
５，４８７，９７４号とに従って、チロシナーゼｃＤＮＡのフラグメントを調製
した。この特許の配列識別番号１が本出願の配列識別番号４０である。
３によって提示されるペプチドの正体を判定するための研究を行った。これを行
うために、共にここに参考文献として合体させるウーフェル（Ｗｏｅｆｅｌ）等
、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：７５９−７６４（１９９４）及びブリチ
ャード（Ｂｒｉｃｈａｒｄ）等、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：２２４−
２３０（１９９６）、更に、同様にここに参考文献として合体させる米国特許第
５，４８７，９７４号とに従って、チロシナーゼｃＤＮＡのフラグメントを調製
した。この特許の配列識別番号１が本出願の配列識別番号４０である。
【００１７】 完全なｃＤＮＡ分子の代りにチロシナーゼｃＤＮＡのフラグメントを使用した
ことを除いて、上述の例２に記載したものと同じＴＮＦアッセイを使用した。三
つのフラグメントが陽性であり、これらはチロシナーゼｃＤＮＡのそのコード領
域のヌクレオチド１−１０８６，４２７−１１３４及び７０３−１１３４に対応
している。位置５７４−８３１に対応するフラグメントは陰性であった為、これ
により、ヌクレオチド８３１−１０８６が前記提示抗原をコードするものである
、という結論が導かれた。これらは、チロシナーゼのアミノ酸２７０−３６２に
対応するものであり、そのアミノ酸配列は公知である。このアミノ酸配列を、Ｈ
ＬＡ−Ｂ*３５０１に結合し、その結合モチーフが、ここに参考文献として合体
させる前出のラメンシー（Ｒａｍｅｎｓｅｅ）等、によって記載されている公知
のペプチドと比較した。この参考文献は、位置２にＰｒｏ、位置９にＴｙｒがそ
れぞれ見られる、ノナペプチドであるＨＬＡ−Ｂ３５の結合モチーフを記載して
いる。デカペプチドに関しては、ラメンシー（Ｒａｍｅｎｓｅｅ）等は、Ｐ２と
Ｙ１０とをアンカーとしている。ＨＬＡ−Ｂ*３５０１を使用した理由は、ＨＬ
Ａ−Ｂ*３５０３に関しては当該技術に於いてその情報が存在していないからで
ある。ラメンシー（Ｒａｍｅｎｓｅｅ）等は、又、Ｐ９の副アンカーとして、Ｐ
ｈｅ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ及びＩｌｅを記載している。アミノ酸配列ＬＰＳＳＡＤＶ
ＥＦ（配列識別番号１）によって定義されるペプチドがこれらの要件を満たすも
のであり、これは、チロシナーゼのアミノ酸３１２−３２０に見られる。その溶
解を刺激する能力を、該ペプチドを合成し、これを、ＨＬＡ−Ｂ*３５０３を発
現する自己由来リンパ芽細胞ラインＬＧ２−ＥＢＶに添加し、その後、ＣＴＬ３
５−２４を添加することによってテストした。細胞ラインＨＡ７−ＥＢＶも、テ
ストした。このラインは、ＨＬＡ−Ｂ*３５０１を発現する。細胞を、様々な濃
度の配列識別番号１のペプチドとインキュベートする51Ｃｒ放出アッセイを使用
した。このアッセイの詳細についてはここに参考文献として合体させる米国特許
第５，５１９，１１７号を参照。51Ｃｒ標識細胞を、前記ペプチドと３０分間イ
ンキュベートし、その後、ＣＴＬ３５−２４を、５：１のエフェクタ（ＣＴＬ）
標的（ＬＧ２−ＥＢＶ）比で添加した。51Ｃｒ放出を３．５時間後に測定した。
ことを除いて、上述の例２に記載したものと同じＴＮＦアッセイを使用した。三
つのフラグメントが陽性であり、これらはチロシナーゼｃＤＮＡのそのコード領
域のヌクレオチド１−１０８６，４２７−１１３４及び７０３−１１３４に対応
している。位置５７４−８３１に対応するフラグメントは陰性であった為、これ
により、ヌクレオチド８３１−１０８６が前記提示抗原をコードするものである
、という結論が導かれた。これらは、チロシナーゼのアミノ酸２７０−３６２に
対応するものであり、そのアミノ酸配列は公知である。このアミノ酸配列を、Ｈ
ＬＡ−Ｂ*３５０１に結合し、その結合モチーフが、ここに参考文献として合体
させる前出のラメンシー（Ｒａｍｅｎｓｅｅ）等、によって記載されている公知
のペプチドと比較した。この参考文献は、位置２にＰｒｏ、位置９にＴｙｒがそ
れぞれ見られる、ノナペプチドであるＨＬＡ−Ｂ３５の結合モチーフを記載して
いる。デカペプチドに関しては、ラメンシー（Ｒａｍｅｎｓｅｅ）等は、Ｐ２と
Ｙ１０とをアンカーとしている。ＨＬＡ−Ｂ*３５０１を使用した理由は、ＨＬ
Ａ−Ｂ*３５０３に関しては当該技術に於いてその情報が存在していないからで
ある。ラメンシー（Ｒａｍｅｎｓｅｅ）等は、又、Ｐ９の副アンカーとして、Ｐ
ｈｅ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ及びＩｌｅを記載している。アミノ酸配列ＬＰＳＳＡＤＶ
ＥＦ（配列識別番号１）によって定義されるペプチドがこれらの要件を満たすも
のであり、これは、チロシナーゼのアミノ酸３１２−３２０に見られる。その溶
解を刺激する能力を、該ペプチドを合成し、これを、ＨＬＡ−Ｂ*３５０３を発
現する自己由来リンパ芽細胞ラインＬＧ２−ＥＢＶに添加し、その後、ＣＴＬ３
５−２４を添加することによってテストした。細胞ラインＨＡ７−ＥＢＶも、テ
ストした。このラインは、ＨＬＡ−Ｂ*３５０１を発現する。細胞を、様々な濃
度の配列識別番号１のペプチドとインキュベートする51Ｃｒ放出アッセイを使用
した。このアッセイの詳細についてはここに参考文献として合体させる米国特許
第５，５１９，１１７号を参照。51Ｃｒ標識細胞を、前記ペプチドと３０分間イ
ンキュベートし、その後、ＣＴＬ３５−２４を、５：１のエフェクタ（ＣＴＬ）
標的（ＬＧ２−ＥＢＶ）比で添加した。51Ｃｒ放出を３．５時間後に測定した。
【００１８】 その結果を図１に示す。前記ペプチドは、両タイプの細胞の溶解を誘発し、前
記ペプチドがＨＬＡ−Ｂ*３５０１とＢ*３５０３との両方に結合したことが銘記
される。１ｎＭの投与量のペプチドではＬＧ２−ＥＢＶ細胞の最大値の半分の溶
解をもたらし、約１０ｎＭの投与量のペプチドでＨＡ７−ＥＢＶ細胞の最大値の
半分の溶解をもたらした。
記ペプチドがＨＬＡ−Ｂ*３５０１とＢ*３５０３との両方に結合したことが銘記
される。１ｎＭの投与量のペプチドではＬＧ２−ＥＢＶ細胞の最大値の半分の溶
解をもたらし、約１０ｎＭの投与量のペプチドでＨＡ７−ＥＢＶ細胞の最大値の
半分の溶解をもたらした。
【００１９】 上記例は、ＨＬＡ−Ｂ３５分子に結合するペプチドである本発明を記載するも
のである。これらのペプチドは次の式のものである。 Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｐｈｅ（
配列識別番号２）。 その類の範囲内に於いて、位置３がＳｅｒ、位置４がＳｅｒ、位置５がＡｌａ
又は位置６がＡｓｐのものが好ましい（配列識別番号３−６）。本発明のペプチ
ドは、上記に定義したような位置３−６を1以上有するものであってよい。位置
７及び８はいずれのアミノ酸であってもよい。上記ペプチドに対応するものでは
あるが、Ｎ及びＣ末端に於いてチロシナーゼのアミノ酸２７０−３１２及び３２
１−３６２のみに隣接する（ｆｌａｎｋｅｄ）ペプチドも本発明の一部を構成す
るものである。換言すると、そのアミノ酸が配列識別番号２に連結されたアミノ
酸２７０−３１１以下のアミノ酸から成り、それが、それぞれアミノ酸３２１−
３６２に連結されたペプチドである。従って、たとえば、チロシナーゼのアミノ
酸２９０−３１１、その後に配列識別番号２、その後にチロシナーゼのアミノ酸
３２１−３４０、から成るペプチドが本発明の一部を構成する。好ましくは、約
１６以下のアミノ酸から成り、配列識別番号２又は配列識別番号１、或いは配列
識別番号４−６のいずれかを有するペプチドが本発明の一部を構成する。
のである。これらのペプチドは次の式のものである。 Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｐｈｅ（
配列識別番号２）。 その類の範囲内に於いて、位置３がＳｅｒ、位置４がＳｅｒ、位置５がＡｌａ
又は位置６がＡｓｐのものが好ましい（配列識別番号３−６）。本発明のペプチ
ドは、上記に定義したような位置３−６を1以上有するものであってよい。位置
７及び８はいずれのアミノ酸であってもよい。上記ペプチドに対応するものでは
あるが、Ｎ及びＣ末端に於いてチロシナーゼのアミノ酸２７０−３１２及び３２
１−３６２のみに隣接する（ｆｌａｎｋｅｄ）ペプチドも本発明の一部を構成す
るものである。換言すると、そのアミノ酸が配列識別番号２に連結されたアミノ
酸２７０−３１１以下のアミノ酸から成り、それが、それぞれアミノ酸３２１−
３６２に連結されたペプチドである。従って、たとえば、チロシナーゼのアミノ
酸２９０−３１１、その後に配列識別番号２、その後にチロシナーゼのアミノ酸
３２１−３４０、から成るペプチドが本発明の一部を構成する。好ましくは、約
１６以下のアミノ酸から成り、配列識別番号２又は配列識別番号１、或いは配列
識別番号４−６のいずれかを有するペプチドが本発明の一部を構成する。
【００２０】 又、少なくとも配列識別番号２のペプチド、好ましくは、配列識別番号１及び
３−６のペプチドのいずれか一つと、一以上の追加のＭＨＣ又はＨＬＡ結合ペプ
チドとを有するペプチドの組み合わせも本発明の一態様である。各個体によって
、一般に、その細胞表面上にそれぞれ別の６つのＨＬＡ分子が発現することが知
られている。前記「背景」の部分の従来技術を参照すると、他のＨＬＡ分子に結
合するペプチドは公知であり、ＨＬＡ−Ｂ３５分子に結合するその他のペプチド
も同様である。従って、二つ以上のＭＨＣ結合ペプチドを有し、これら結合ペプ
チドの少なくとも一つが、配列識別番号１−６によって定義されるペプチドであ
る組成物を「カスタマイズ」することが可能である。
３−６のペプチドのいずれか一つと、一以上の追加のＭＨＣ又はＨＬＡ結合ペプ
チドとを有するペプチドの組み合わせも本発明の一態様である。各個体によって
、一般に、その細胞表面上にそれぞれ別の６つのＨＬＡ分子が発現することが知
られている。前記「背景」の部分の従来技術を参照すると、他のＨＬＡ分子に結
合するペプチドは公知であり、ＨＬＡ−Ｂ３５分子に結合するその他のペプチド
も同様である。従って、二つ以上のＭＨＣ結合ペプチドを有し、これら結合ペプ
チドの少なくとも一つが、配列識別番号１−６によって定義されるペプチドであ
る組成物を「カスタマイズ」することが可能である。
【００２１】 チロシナーゼのアミノ酸２７０−３６２以下のアミノ酸と、配列識別番号２に
よって定義される、又は、より好ましくは、配列識別番号１及び３−６のいずれ
か1つのペプチド以上であるペプチドをコードするヌクレオチドから成る核酸分
子等の、本発明の前記ペプチドをコードする核酸分子も本発明の一部を構成する
。これらの核酸分子は、発現ベクターに組み込むことが可能であり、これら核酸
分子又はベクターは、真核又は原核のいずれであっても、細胞、細胞ライン、及
び細胞株、をトランスフォーム又はトランスフェクトするのに使用することがで
きる。それらは、又、ＨＬＡ−Ｂ*３５０１やＨＬＡ−Ｂ*３５０３等のＨＬＡ−
Ｂ３５分子のようなＭＨＣ分子をコードする核酸分子との組み合わせで使用する
ことも可能である。
よって定義される、又は、より好ましくは、配列識別番号１及び３−６のいずれ
か1つのペプチド以上であるペプチドをコードするヌクレオチドから成る核酸分
子等の、本発明の前記ペプチドをコードする核酸分子も本発明の一部を構成する
。これらの核酸分子は、発現ベクターに組み込むことが可能であり、これら核酸
分子又はベクターは、真核又は原核のいずれであっても、細胞、細胞ライン、及
び細胞株、をトランスフォーム又はトランスフェクトするのに使用することがで
きる。それらは、又、ＨＬＡ−Ｂ*３５０１やＨＬＡ−Ｂ*３５０３等のＨＬＡ−
Ｂ３５分子のようなＭＨＣ分子をコードする核酸分子との組み合わせで使用する
ことも可能である。
【００２２】 本発明の前記ペプチド及び核酸分子は、様々な使用法を有するものであり、こ
れらも本発明の一部を構成するものである。たとえば、イン・ヴィトロ又はイン
・ヴィヴォでの、特異的に病原性細胞を溶解する、細胞溶解性Ｔ細胞の産生、等
の治療用途に加えて、前記ペプチドは、ＨＬＡ−Ｂ３５陽性細胞の同定、又は、
そのような細胞を含む混合物からのＨＬＡ−Ｂ３５陽性細胞の除去に使用するこ
とができる。前記核酸分子は、特に、チロシナーゼを発現している細胞を同定す
るためのプローブとして使用することができる。
れらも本発明の一部を構成するものである。たとえば、イン・ヴィトロ又はイン
・ヴィヴォでの、特異的に病原性細胞を溶解する、細胞溶解性Ｔ細胞の産生、等
の治療用途に加えて、前記ペプチドは、ＨＬＡ−Ｂ３５陽性細胞の同定、又は、
そのような細胞を含む混合物からのＨＬＡ−Ｂ３５陽性細胞の除去に使用するこ
とができる。前記核酸分子は、特に、チロシナーゼを発現している細胞を同定す
るためのプローブとして使用することができる。
【００２３】 たとえば、サンプルから特定の標的に対して特異的な細胞溶解性Ｔ細胞を単離
するのに有用な多成分複合体も本発明の一部を構成する。前記複合体は、第１バ
インディングパートナーと第２結合バインディングパートナーとを有し、これら
第１及び第２バインディングパートナーは互いに対して特異的である。これらは
、たとえば、アビジン又はストレプトアビジン、及び、ビオチン、ビオチンに対
して特異的な抗体又はその抗体の一部、等とすることができる。重要な特徴は、
前記第２バインディングパートナーは、ＭＨＣ分子と、β２ミクログロブリンと
、前記ＭＨＣ分子に特異的に結合するペプチドとの複数の複合体に結合するもの
でなければならず、この多重成分複合体は、標識化されたものでなければならな
いということである。前記ＭＨＣ分子は、好ましくは、ＨＬＡ−Ｂ３５等のＨＬ
Ａ分子であるが、当業者に於いては、いずれのＨＬＡ分子も使用可能であること
が理解されるであろう。対象となるペプチドに関して、論評記事、米国及び米国
以外の特許、を含む多くの参考文献が、配列識別番号２−６以外のペプチド、及
びその結合パートナＨＬＡ分子を記載している。これらすべてが本発明に含まれ
る。ペプチド及びそのＨＬＡ分子パートナーの具体例はこの出願中に後述される
。
するのに有用な多成分複合体も本発明の一部を構成する。前記複合体は、第１バ
インディングパートナーと第２結合バインディングパートナーとを有し、これら
第１及び第２バインディングパートナーは互いに対して特異的である。これらは
、たとえば、アビジン又はストレプトアビジン、及び、ビオチン、ビオチンに対
して特異的な抗体又はその抗体の一部、等とすることができる。重要な特徴は、
前記第２バインディングパートナーは、ＭＨＣ分子と、β２ミクログロブリンと
、前記ＭＨＣ分子に特異的に結合するペプチドとの複数の複合体に結合するもの
でなければならず、この多重成分複合体は、標識化されたものでなければならな
いということである。前記ＭＨＣ分子は、好ましくは、ＨＬＡ−Ｂ３５等のＨＬ
Ａ分子であるが、当業者に於いては、いずれのＨＬＡ分子も使用可能であること
が理解されるであろう。対象となるペプチドに関して、論評記事、米国及び米国
以外の特許、を含む多くの参考文献が、配列識別番号２−６以外のペプチド、及
びその結合パートナＨＬＡ分子を記載している。これらすべてが本発明に含まれ
る。ペプチド及びそのＨＬＡ分子パートナーの具体例はこの出願中に後述される
。
【００２４】 好ましくは、前記第２バインディングパートナーはビオチンであるが、それは
、たとえば、ＨＬＡ特異性抗体、又はβ２ミクログロブリン抗体等の、ＨＬＡ／
β２ミクログロブリン／ペプチド複合体の構成成分に対して特異的な抗体であっ
てもよい。同様に、前記第１バインディングパートナーは、たとえば、組換え又
は天然プロテインＬ、組換え又は天然プロテインＡであってもよく、更には、第
２の抗体であってもよい。前記複合体は、可溶性形態に、或いは、磁気ビーズ等
の除去可能な固相に結合させることも可能である。
、たとえば、ＨＬＡ特異性抗体、又はβ２ミクログロブリン抗体等の、ＨＬＡ／
β２ミクログロブリン／ペプチド複合体の構成成分に対して特異的な抗体であっ
てもよい。同様に、前記第１バインディングパートナーは、たとえば、組換え又
は天然プロテインＬ、組換え又は天然プロテインＡであってもよく、更には、第
２の抗体であってもよい。前記複合体は、可溶性形態に、或いは、磁気ビーズ等
の除去可能な固相に結合させることも可能である。
【００２５】 本発明の前記巨大分子中のＨＬＡ／β２ミクログロブリン／ペプチド複合体の
数は、様々なものであってよい。それは、少なくとも２つの複合体、好ましくは
少なくとも４つ、の複合体を有するが、それ以上のものが含まれていてもよい。
数は、様々なものであってよい。それは、少なくとも２つの複合体、好ましくは
少なくとも４つ、の複合体を有するが、それ以上のものが含まれていてもよい。
【００２６】 バインディングパートナーとＨＬＡ／β２ミクログロブリン／ペプチドとの複
合体は、当該技術に於いて公知のいずれの標識を使用しても標識化することがで
きる。蛍光標識の具体例は既に上述した。アルカリフォスファターゼ等の酵素標
識、金属粒子、合成材から成る着色プラスチック、放射性標識、等のすべてが使
用可能である。
合体は、当該技術に於いて公知のいずれの標識を使用しても標識化することがで
きる。蛍光標識の具体例は既に上述した。アルカリフォスファターゼ等の酵素標
識、金属粒子、合成材から成る着色プラスチック、放射性標識、等のすべてが使
用可能である。
【００２７】 前記第１バインディングパートナーに特異的に結合する第３のバインディング
パートナーを使用することも可能である。たとえば、前記第１バインディングパ
ートナーがストレプトアビジンで、前記第２バインディングパートナーがビオチ
ンである場合、前記第３バインディングパートナーは、ストレプトアビジン特異
性抗体であってよい。三つ以上のバインディングパートナーが使用される場合、
上述した標識は、前記ＨＬＡ／β２ミクログロブリン／ペプチド複合体との係合
が損なわれない限り、いずれのバインディングパートナーに取り付けてもよい。
パートナーを使用することも可能である。たとえば、前記第１バインディングパ
ートナーがストレプトアビジンで、前記第２バインディングパートナーがビオチ
ンである場合、前記第３バインディングパートナーは、ストレプトアビジン特異
性抗体であってよい。三つ以上のバインディングパートナーが使用される場合、
上述した標識は、前記ＨＬＡ／β２ミクログロブリン／ペプチド複合体との係合
が損なわれない限り、いずれのバインディングパートナーに取り付けてもよい。
【００２８】 前記複合体は、たとえば、ＨＬＡ／β２ミクログロブリン／ペプチド複合体に
対して特異的である、サンプル中の細胞溶解性Ｔ細胞の同定又は単離に使用する
ことができる。前記例が示したように、そのような細胞溶解性Ｔ細胞は、本発明
の免疫複合体に結合する。一好適実施例に於いて、テストされるサンプルは、細
胞溶解性Ｔ細胞に特異的に結合する反応物で処理され、前記標識は検出可能な信
号を提供する。次に、標識ＣＴＬを含む前記サンプルを、前記複合体に接触させ
ると、それが結合し、標準的な周知の細胞分離の方法のいずれかを使用して分離
することができる。好ましくは、ＦＡＣＳが使用されるが、その他の分離法も当
業者にとって知られているであろう。使用されるペプチドは、その当業者の必要
に応じたものであり、それは、たとえば、考慮対象の特定のＭＨＣ系の性質に応
じたものであり、それに対するＣＴＬが知られているペプチドの、非限定的な具
体例の表を次に示す。これらは配列識別番号７−３８にも記載されている。
対して特異的である、サンプル中の細胞溶解性Ｔ細胞の同定又は単離に使用する
ことができる。前記例が示したように、そのような細胞溶解性Ｔ細胞は、本発明
の免疫複合体に結合する。一好適実施例に於いて、テストされるサンプルは、細
胞溶解性Ｔ細胞に特異的に結合する反応物で処理され、前記標識は検出可能な信
号を提供する。次に、標識ＣＴＬを含む前記サンプルを、前記複合体に接触させ
ると、それが結合し、標準的な周知の細胞分離の方法のいずれかを使用して分離
することができる。好ましくは、ＦＡＣＳが使用されるが、その他の分離法も当
業者にとって知られているであろう。使用されるペプチドは、その当業者の必要
に応じたものであり、それは、たとえば、考慮対象の特定のＭＨＣ系の性質に応
じたものであり、それに対するＣＴＬが知られているペプチドの、非限定的な具
体例の表を次に示す。これらは配列識別番号７−３８にも記載されている。
【００２９】
【表１】
【００３０】 その他のペプチドは、米国特許出願第０８／６７２，３５１号、０８／６６９
，５９０号、現在では米国特許第０８／５３０，５６９号である出願第０８／４
８７，１３５号、出願第０８／８８０，６９３号、現在では米国特許第
号である出願第０８／７１８，９６４号に見られ、これのすべてをここに参考
文献として合体させる。
，５９０号、現在では米国特許第０８／５３０，５６９号である出願第０８／４
８７，１３５号、出願第０８／８８０，６９３号、現在では米国特許第
号である出願第０８／７１８，９６４号に見られ、これのすべてをここに参考
文献として合体させる。
【００３１】 本発明の更に別の態様は、ミニ遺伝子がトランスフェクトされる細胞を介して
ペプチドの合成を指令するのに必要な情報を担持する、いわゆる「ミニ遺伝子」
に関する。１以上の抗原性ペプチドをコードするミニ遺伝子をデザインすること
ができ、次に、それらを、プラスミドによるトランスフェクション、又は、ワク
シニア又はアデノウイルスへのクローニングを介して、宿主細胞ゲノムにトラン
スファーされる。たとえば、ここに参考文献として合体させるザジャック（Ｚａ
ｊａｃ）等，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７１：４９６（１９９７）を参照。
ペプチドの合成を指令するのに必要な情報を担持する、いわゆる「ミニ遺伝子」
に関する。１以上の抗原性ペプチドをコードするミニ遺伝子をデザインすること
ができ、次に、それらを、プラスミドによるトランスフェクション、又は、ワク
シニア又はアデノウイルスへのクローニングを介して、宿主細胞ゲノムにトラン
スファーされる。たとえば、ここに参考文献として合体させるザジャック（Ｚａ
ｊａｃ）等，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７１：４９６（１９９７）を参照。
【００３２】 本発明の前記ペプチドは、「ポリトープ」を形成するために、他の腫瘍拒絶抗
原からのペプチドと組み合わせることができる。ペプチドの具体例としては、上
述した種々の特許出願にリストされているものがある。
原からのペプチドと組み合わせることができる。ペプチドの具体例としては、上
述した種々の特許出願にリストされているものがある。
【００３３】 使用可能なその他のペプチドは、それらのすべてをここに参考文献として合体
させる下記の参考文献に記載されている。米国特許第５，４０５，９４０号、第
５，４８７，９７４号、第５，５１９，１１７号、第５，５３０，０９６号、第
５，５５４，５０６号、第５，５５４，７２４号、第５，５５８，９９５号、第
５，５８５，４６１号、第５，５８９，３３４号、第５，６４８，２２６号、及
び第５，６８３，８８６号、ＰＣＴ国際公表第９２／２０３５６号、第９４／１
４４５９号、第９６／１０５７７号、第９６／２１６７３号、第９７／１０８３
７号、第９７／２６５３５号、及び第９７／３１０１７号、更に、現在係属中の
米国特許出願第０８／７１３，３５４号。これらのペプチドも、出願番号第０８
／９２７，０１５号及び、出願番号第０９／０６２，４２２号の一部継続出願と
して１９９８年１０月２日出願のＫｎｕｔｈ等、の一部継続出願に記載されてい
るもののような腫瘍拒絶抗原前駆体に由来するペプチド等の、ＭＨＣ−クラスＩ
Ｉ分子と複合体を形成するペプチドと組み合わせることが可能である。この新規
に出願された一部継続出願をここに参考文献として合体させる。
させる下記の参考文献に記載されている。米国特許第５，４０５，９４０号、第
５，４８７，９７４号、第５，５１９，１１７号、第５，５３０，０９６号、第
５，５５４，５０６号、第５，５５４，７２４号、第５，５５８，９９５号、第
５，５８５，４６１号、第５，５８９，３３４号、第５，６４８，２２６号、及
び第５，６８３，８８６号、ＰＣＴ国際公表第９２／２０３５６号、第９４／１
４４５９号、第９６／１０５７７号、第９６／２１６７３号、第９７／１０８３
７号、第９７／２６５３５号、及び第９７／３１０１７号、更に、現在係属中の
米国特許出願第０８／７１３，３５４号。これらのペプチドも、出願番号第０８
／９２７，０１５号及び、出願番号第０９／０６２，４２２号の一部継続出願と
して１９９８年１０月２日出願のＫｎｕｔｈ等、の一部継続出願に記載されてい
るもののような腫瘍拒絶抗原前駆体に由来するペプチド等の、ＭＨＣ−クラスＩ
Ｉ分子と複合体を形成するペプチドと組み合わせることが可能である。この新規
に出願された一部継続出願をここに参考文献として合体させる。
【００３４】 ポリトープは、二つ以上の潜在的に免疫原性又は免疫刺激性ペプチドのグルー
プであって、それらを様々な方法で結合させることができ、このタイプの分子が
免疫応答を刺激および／又は誘発させるか否かが判定される。
プであって、それらを様々な方法で結合させることができ、このタイプの分子が
免疫応答を刺激および／又は誘発させるか否かが判定される。
【００３５】 これらのペプチドは、直接的に、或いは、隣接配列の使用を介して、互いに結
合させることができる。関連するエピトープ配列の直接的な結合を教示している
トンプソン（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ９２（１３）：５８４５−５８４９（１９９５）を参照。ポリトープの
ワクチンとしての使用は周知である。たとえば、ギルバート（Ｇｉｌｂｅｒｔ）
等、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５（１２）：１２８０−１２８４（１９
９７）；トンプソン（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）等、前出；トンプソン（Ｔｈｏｍｐｓ
ｏｎ）等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５７（２）：８２２−８２６（１９９６）
；タム（Ｔａｍ）等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，１７１（１）：２９９−３０６（１
９９０）を参照。これらすべてをここに参考文献として合体させる。特にタム（
Ｔａｍ）の参考文献には、ポリトープを、マウスモデルにおいて使用した時、抗
体の産生と保護免疫の発生の両方において有用であることが示されている。更に
、この文献には、前記ポリトープが、消化された時に、ＭＨＣによって提示され
ることができ、かつ、提示されるペプチドを産生することが示されている。タム
（Ｔａｍ）は、これを、ポリトープ「列（ｓｔｒｉｎｇｓ）」からプロセッシン
グされる個々のエピトープのＣＴＬによる認識を示すことによって示している。
このアプローチは、たとえば、ポリトープにおいて、いくつのエピトープが結合
することが可能であるのか、及び、認識を誘発することが可能であるのかの判定
、更に、それらエピト−プの様々な組み合わせの有効性の判定するのに使用する
ことが可能である。様々な組み合わせを、特定の腫瘍拒絶抗原のサブセットを発
現する患者用に「テイラーメイド」することができる。これらのポリトープは、
ポリペプチド構造として、又は、核酸搬送システムの使用を介して、導入するこ
とができる。詳述すると、当該技術分野では、個々のエピトープ、又は、前述し
たようなポリトープをコードするＤＮＡを導入するのに利用可能な方法として様
々なものがある。たとえば、ここに参考文献として合体させるオールソップ（Ａ
ｌｌｓｏｐｐ）等、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ２６（８）：１９５１−１９
５９（１９９６）を参照。アデノウイルス、ポックスウイルス、Ｔｙウイルス様
粒子、プラスミド、細菌、等、を使用することができる。マウスモデルにおいて
、これらのシステムをテストして、どのシステムが、所与のヒトにおける匹敵す
る状況にとって最も適当かを判断することができる。それらは、又、ヒトの臨床
試験でテストすることも可能である。
合させることができる。関連するエピトープ配列の直接的な結合を教示している
トンプソン（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ９２（１３）：５８４５−５８４９（１９９５）を参照。ポリトープの
ワクチンとしての使用は周知である。たとえば、ギルバート（Ｇｉｌｂｅｒｔ）
等、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５（１２）：１２８０−１２８４（１９
９７）；トンプソン（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）等、前出；トンプソン（Ｔｈｏｍｐｓ
ｏｎ）等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５７（２）：８２２−８２６（１９９６）
；タム（Ｔａｍ）等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，１７１（１）：２９９−３０６（１
９９０）を参照。これらすべてをここに参考文献として合体させる。特にタム（
Ｔａｍ）の参考文献には、ポリトープを、マウスモデルにおいて使用した時、抗
体の産生と保護免疫の発生の両方において有用であることが示されている。更に
、この文献には、前記ポリトープが、消化された時に、ＭＨＣによって提示され
ることができ、かつ、提示されるペプチドを産生することが示されている。タム
（Ｔａｍ）は、これを、ポリトープ「列（ｓｔｒｉｎｇｓ）」からプロセッシン
グされる個々のエピトープのＣＴＬによる認識を示すことによって示している。
このアプローチは、たとえば、ポリトープにおいて、いくつのエピトープが結合
することが可能であるのか、及び、認識を誘発することが可能であるのかの判定
、更に、それらエピト−プの様々な組み合わせの有効性の判定するのに使用する
ことが可能である。様々な組み合わせを、特定の腫瘍拒絶抗原のサブセットを発
現する患者用に「テイラーメイド」することができる。これらのポリトープは、
ポリペプチド構造として、又は、核酸搬送システムの使用を介して、導入するこ
とができる。詳述すると、当該技術分野では、個々のエピトープ、又は、前述し
たようなポリトープをコードするＤＮＡを導入するのに利用可能な方法として様
々なものがある。たとえば、ここに参考文献として合体させるオールソップ（Ａ
ｌｌｓｏｐｐ）等、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ２６（８）：１９５１−１９
５９（１９９６）を参照。アデノウイルス、ポックスウイルス、Ｔｙウイルス様
粒子、プラスミド、細菌、等、を使用することができる。マウスモデルにおいて
、これらのシステムをテストして、どのシステムが、所与のヒトにおける匹敵す
る状況にとって最も適当かを判断することができる。それらは、又、ヒトの臨床
試験でテストすることも可能である。
【００３６】 本発明の前記ペプチドの少なくとも一つと、それに組み合わせて少なくとも一
つのアジュバントとを有する組成物も本発明の一つの特徴である。それらの組成
物は、たとえば、治療方法の一部として好ましくはヒト、又、対象となる非ヒト
動物に於いて免疫応答を発生させ、その後、ヒトの治療又は診断に使用すること
が可能な免疫組成物を産生するために使用することが可能である。当業者にとっ
て、そのようなアジュバントは周知であるので、それらについてここで詳述する
必要はない。
つのアジュバントとを有する組成物も本発明の一つの特徴である。それらの組成
物は、たとえば、治療方法の一部として好ましくはヒト、又、対象となる非ヒト
動物に於いて免疫応答を発生させ、その後、ヒトの治療又は診断に使用すること
が可能な免疫組成物を産生するために使用することが可能である。当業者にとっ
て、そのようなアジュバントは周知であるので、それらについてここで詳述する
必要はない。
【００３７】 これらの組成物には、更に、所謂、共同刺激性分子（ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔ
ｏｒｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）を含ませることができる。これらは、タンパク質、
又はタンパク質をコードする分子であって、Ｔ細胞の表面の分子と作用し、これ
によって、ＭＨＣ分子／抗原／Ｔ細胞レセプター相互作用の形成によって既に刺
激されているＴ細胞を共同刺激するものである。そのような共同刺激性分子は、
抗腫瘍免疫、及びＣＴＬ増殖を増強する。そのような共同刺激性分子の具体例は
、“Ｂ７−１”及び“Ｂ７−１２”又はＣＤ８０及びＣＤ８６、としてそれぞれ
知られているものである。ここに参考文献として合体させるツァン（Ｚｈａｎｇ
）等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５（１１）：６２８４
−６２８９（１９９８）を参照。
ｏｒｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）を含ませることができる。これらは、タンパク質、
又はタンパク質をコードする分子であって、Ｔ細胞の表面の分子と作用し、これ
によって、ＭＨＣ分子／抗原／Ｔ細胞レセプター相互作用の形成によって既に刺
激されているＴ細胞を共同刺激するものである。そのような共同刺激性分子は、
抗腫瘍免疫、及びＣＴＬ増殖を増強する。そのような共同刺激性分子の具体例は
、“Ｂ７−１”及び“Ｂ７−１２”又はＣＤ８０及びＣＤ８６、としてそれぞれ
知られているものである。ここに参考文献として合体させるツァン（Ｚｈａｎｇ
）等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５（１１）：６２８４
−６２８９（１９９８）を参照。
【００３８】 そのような共同刺激性分子は、たとえば、ＩＬ−６及びＩＬ−１２等のインタ
ーロイキンと組み合わせることができる。ガジェウスキー（Ｇａｊｅｗｓｋｉ）
等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １５４：５６３７−５６４８（１９９５）を参照。上
述したように、前記共同刺激性分子は、核酸分子の形態で投与することができる
。そのような方法は、養子移入免疫療法（ワン（Ｗａｎｇ）等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｔｈｅｒ，Ｅｍｐｈａｓｉｓ Ｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９：１−８（
１９９６））のためのＣＴＬ増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）との関連に於いて有用
でありうる。必要な核酸分子を、「裸の」ＤＮＡの形態で投与することができる
（キム（Ｋｉｍ）等、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １５（７）：６４１−６
４６（１９９７））、同様に、アデノウイルスやポックスウイルスベクター等の
組換えベクターの形態として、投与することができる。ウェントナー（Ｗｅｎｄ
ｔｎｅｒ）等、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．４（７）：７２６−７３５（１９９７）を
参照。これらのシステムのすべてを、前記共同刺激性分子が、前記ペプチド、ア
ジュバント分子、等を含めて、他の選択された分子と共に、発現されるように構
成することができる。
ーロイキンと組み合わせることができる。ガジェウスキー（Ｇａｊｅｗｓｋｉ）
等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １５４：５６３７−５６４８（１９９５）を参照。上
述したように、前記共同刺激性分子は、核酸分子の形態で投与することができる
。そのような方法は、養子移入免疫療法（ワン（Ｗａｎｇ）等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｔｈｅｒ，Ｅｍｐｈａｓｉｓ Ｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９：１−８（
１９９６））のためのＣＴＬ増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）との関連に於いて有用
でありうる。必要な核酸分子を、「裸の」ＤＮＡの形態で投与することができる
（キム（Ｋｉｍ）等、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １５（７）：６４１−６
４６（１９９７））、同様に、アデノウイルスやポックスウイルスベクター等の
組換えベクターの形態として、投与することができる。ウェントナー（Ｗｅｎｄ
ｔｎｅｒ）等、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．４（７）：７２６−７３５（１９９７）を
参照。これらのシステムのすべてを、前記共同刺激性分子が、前記ペプチド、ア
ジュバント分子、等を含めて、他の選択された分子と共に、発現されるように構
成することができる。
【００３９】 上記に加えて、抗体は、細胞レセプターに対するリガンドとして作用し、これ
によってその細胞を共同刺激することができるので、共同刺激性分子として作用
することができる。上述したＢ７分子は、ＣＤ２８分子に対するリガンドである
。従って、抗ＣＤ２８抗体は、ポリクローナルなものと、モノクローナルなもの
も、ヒト化されたもの等のいずれも、すべてこのように作用することができる。
によってその細胞を共同刺激することができるので、共同刺激性分子として作用
することができる。上述したＢ７分子は、ＣＤ２８分子に対するリガンドである
。従って、抗ＣＤ２８抗体は、ポリクローナルなものと、モノクローナルなもの
も、ヒト化されたもの等のいずれも、すべてこのように作用することができる。
【００４０】 Ｂ７分子に加えて、リンパ球作用関連抗原１（ＬＦＡ−１），ＣＤ４０Ｌ及び
抗ＣＤ４０抗体も、又、共同刺激性分子として使用可能である。これらは、すべ
て、共同刺激性分子のファミリーの具体例であり、唯一可能な代替物であると見
做されるべきではない。
抗ＣＤ４０抗体も、又、共同刺激性分子として使用可能である。これらは、すべ
て、共同刺激性分子のファミリーの具体例であり、唯一可能な代替物であると見
做されるべきではない。
【００４１】 サンプル中の細胞溶解性Ｔ細胞の存在を調べるためのこれらペプチドの利用も
本発明の一つの特徴構成である。前述したように、サンプル中のＣＴＬは、ペプ
チド／ＭＨＣ複合体と反応することが示されている。従って、もしも、ＣＴＬが
サンプル中に存在していることが判っているならば、ＨＬＡ−Ｂ３５陽性細胞を
、本発明の前記ペプチドを、ＨＬＡ−Ｂ*３５０３陽性細胞等のこれらＨＬＡ−
Ｂ３５陽性細胞に添加することによって「溶解」させることができ、次に、たと
えば、放射性クロム放出、ＴＮＦ産生等、又は、それによってＴ細胞活性が測定
されるその他の方法、によって測定することができる。同様に、サンプルに対し
て、クレームされているペプチドのいずれかを、ＨＬＡ−Ｂ３５陽性細胞と添加
し、たとえば、51Ｃｒ放出、ＴＮＦ放出、等、によって前記ＨＬＡ−Ｂ３５陽性
細胞のリーシスを測定することによって、サンプル中に、特異的な腫瘍内浸潤リ
ンパ球（“ＴＩＬ”）が存在するか否かを測定することができる。更に、ＣＴＬ
をＥＬＩ−ＳＰＯＴ分析によって検出することができる。たとえば、シュミッテ
ル（Ｓｃｈｍｉｔｔｅｌ）等、（１９９７）．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ２１０：１６７−１７４及びラルヴァニ（Ｌａｌｖａｎｉ）等、Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．１２６：８５９（１９９７）を参照。又は、ＭＨＣクラスＩ／ペプ
チドの蛍光発生的テトラマー複合体のＦＡＣＳ分析によって検出することができ
る。ダンバー（Ｄｕｎｂａｒ）等、（１９９８），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏ
ｇｙ ８：４１３−４１６を参照。これらのすべてをここに参考文献として合体
させる。
本発明の一つの特徴構成である。前述したように、サンプル中のＣＴＬは、ペプ
チド／ＭＨＣ複合体と反応することが示されている。従って、もしも、ＣＴＬが
サンプル中に存在していることが判っているならば、ＨＬＡ−Ｂ３５陽性細胞を
、本発明の前記ペプチドを、ＨＬＡ−Ｂ*３５０３陽性細胞等のこれらＨＬＡ−
Ｂ３５陽性細胞に添加することによって「溶解」させることができ、次に、たと
えば、放射性クロム放出、ＴＮＦ産生等、又は、それによってＴ細胞活性が測定
されるその他の方法、によって測定することができる。同様に、サンプルに対し
て、クレームされているペプチドのいずれかを、ＨＬＡ−Ｂ３５陽性細胞と添加
し、たとえば、51Ｃｒ放出、ＴＮＦ放出、等、によって前記ＨＬＡ−Ｂ３５陽性
細胞のリーシスを測定することによって、サンプル中に、特異的な腫瘍内浸潤リ
ンパ球（“ＴＩＬ”）が存在するか否かを測定することができる。更に、ＣＴＬ
をＥＬＩ−ＳＰＯＴ分析によって検出することができる。たとえば、シュミッテ
ル（Ｓｃｈｍｉｔｔｅｌ）等、（１９９７）．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ２１０：１６７−１７４及びラルヴァニ（Ｌａｌｖａｎｉ）等、Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．１２６：８５９（１９９７）を参照。又は、ＭＨＣクラスＩ／ペプ
チドの蛍光発生的テトラマー複合体のＦＡＣＳ分析によって検出することができ
る。ダンバー（Ｄｕｎｂａｒ）等、（１９９８），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏ
ｇｙ ８：４１３−４１６を参照。これらのすべてをここに参考文献として合体
させる。
【００４２】 もちろん、前記ペプチドは、ＣＴＬの産生を誘発させるためにも使用すること
ができる。前述したように、ＣＴＬ前駆体は、適当な複合体と対峙した時にＣＴ
Ｌになる。そのようないわば「対峙」を作り出すことによって、ＣＴＬを産生す
ることができる。これは、イン・ヴィヴォ（生体内）において、更に、エクス・
ヴィヴォ（生体外）において、そのようなＣＴＬを産生するために有用である。
ができる。前述したように、ＣＴＬ前駆体は、適当な複合体と対峙した時にＣＴ
Ｌになる。そのようないわば「対峙」を作り出すことによって、ＣＴＬを産生す
ることができる。これは、イン・ヴィヴォ（生体内）において、更に、エクス・
ヴィヴォ（生体外）において、そのようなＣＴＬを産生するために有用である。
【００４３】 本発明のその他の特徴は、当業者にとって明白であろう。従ってここで繰り返
す必要はない。
す必要はない。
【００４４】 ここに使用した用語及び表現は記載的なものであって、限定的なものではなく
、それらの用語及び表現を使用するに当たって、図示し記載された特徴構成のい
かなる均等物又その一部もそれらを除外する意図はなく、本発明の範囲内に於い
て様々な改変が可能であると理解される。
、それらの用語及び表現を使用するに当たって、図示し記載された特徴構成のい
かなる均等物又その一部もそれらを除外する意図はなく、本発明の範囲内に於い
て様々な改変が可能であると理解される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/21 1/19 15/00 ＺＮＡＡ 1/21 5/00 Ａ 5/10 Ａ６１Ｋ 37/02 (71)出願人 605 ＴＨＩＲＤ ＡＶＥＮＵＥ，ＮＥＷ ＹＯＲＫ，ＮＥＷ ＹＯＲＫ 10158， ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭ ＥＲＩＣＡ (72)発明者 ド・ジョヴァンニ，ジェラール ベルギー ビー‐4000 リエージュ サー ル・チルマン ユニベルシテ・ド・リエー ジュ ツール・ド・パトロジー セー・ア ッシュ・ウー ラボラトワール・ド・シル ルジー・エクスペリメンタル（無番地) (72)発明者 モレル，サンドラ ベルギー ビー‐1200 ブリュッセル ア ベニュー・ヒポクラート 74 ユーシーエ ル 7459 (72)発明者 ファン・デン・エインデ，ベノイト ベルギー ビー‐1200 ブリュッセル ア ベニュー・ヒポクラート 74 ユーシーエ ル 7459 (72)発明者 ブーン‐ファラー，ティエリー ベルギー ビー‐1200 ブリュッセル ア ベニュー・ヒポクラート 74 ユーシーエ ル 7459 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA12 BA08 BA80 CA04 DA01 DA02 DA05 DA11 DA12 FA02 GA11 4B065 AA01X AA58X AA72X AA87X AA90X AA93Y AB01 AB10 AC14 AC20 BA02 BA30 BD50 CA44 CA46 4C084 AA02 AA07 BA17 NA14 ZB072 ZB262 4H045 AA10 AA20 AA30 BA10 CA40 DA86 DA89 EA22 EA29 EA50 FA74
Claims (27)
- 【請求項１】 下記のアミノ酸配列から成る単離ペプチド、 Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｐｈｅ（配列識別番号２）、 ここで、各Ｘａａは、いずれのアミノ酸でもよい。
- 【請求項２】 請求項１に記載の単離ペプチドであって、下記の基準の少な
くとも一つが満たされる、 前記第１のＸａａはＳｅｒである（配列識別番号３） 前記第２のＸａａはＳｅｒである（配列識別番号４） 前記第３のＸａａはＡｌａである（配列識別番号５） 前記第４のＸａａはＡｓｐである（配列識別番号６）、請求項１に記載の単離
ペプチド。 - 【請求項３】 前記ペプチドが、配列識別番号１のアミノ酸配列から成る、
請求項１に記載の単離ペプチド。 - 【請求項４】 前記第５アミノ酸がＶａｌであるか、若しくは、前記第６ア
ミノ酸がＧｌｕである、請求項２の単離ペプチド。 - 【請求項５】 少なくとも配列識別番号２のアミノ酸配列と、チロシナーゼ
のアミノ酸３２１−３６２以下のアミノ酸に連結された、配列識別番号２に連結
されたチロシナーゼのアミノ酸２７０−３１１以下のアミノ酸から成る、単離ペ
プチド。 - 【請求項６】 チロシナーゼのアミノ酸２７０−３６２から成る、請求項５
に記載の単離ペプチド。 - 【請求項７】 請求項１に記載の単離ペプチドと、アジュバントとを有する
組成物。 - 【請求項８】 請求項２に記載の単離ペプチドと、アジュバントとを有する
組成物。 - 【請求項９】 請求項３に記載の単離ペプチドと、アジュバントとを有する
組成物。 - 【請求項１０】 請求項４に記載の単離ペプチドと、アジュバントとを有す
る組成物。 - 【請求項１１】 請求項５に記載の単離ペプチドと、アジュバントとを有す
る組成物。 - 【請求項１２】 請求項６に記載の単離ペプチドと、アジュバントとを有す
る組成物。 - 【請求項１３】 請求項１に記載の単離ペプチドと、ＭＨＣクラスＩＩ分子
に結合するペプチドとを有する組成物。 - 【請求項１４】 請求項１に記載の単離ペプチドをコードする単離核酸分子
。 - 【請求項１５】 請求項３に記載の単離ペプチドをコードする単離核酸分子
。 - 【請求項１６】 請求項５に記載の単離ペプチドをコードする単離核酸分子
。 - 【請求項１７】 請求項６に記載の単離ペプチドをコードする単離核酸分子
。 - 【請求項１８】 プロモーターに作動可能にリンクされた、請求項１４に記
載の単離核酸分子を有する発現ベクター。 - 【請求項１９】 プロモーターに作動可能にリンクされた、請求項１５に記
載の単離核酸分子を有する発現ベクター。 - 【請求項２０】 プロモーターに作動可能にリンクされた、請求項１６に記
載の単離核酸分子を有する発現ベクター。 - 【請求項２１】 プロモーターに作動可能にリンクされた、請求項１７に記
載の単離核酸分子を有する発現ベクター。 - 【請求項２２】 請求項１４，１５，１６又は１７に記載の単離核酸分子を
有する、組換え細胞、細胞ライン、又は細胞株。 - 【請求項２３】 請求項１８，１９，２０又は２１に記載の発現ベクターを
有する、組換え細胞、細胞ライン、又は細胞株。 - 【請求項２４】 更に、ＨＬＡ−Ｂ３５分子をコードする核酸分子を有する
、請求項２２に記載の組換え細胞、細胞ライン、又は細胞株。 - 【請求項２５】 更に、ＨＬＡ−Ｂ３５分子をコードする核酸分子を有する
、請求項２３に記載の組換え細胞、細胞ライン、又は細胞株。 - 【請求項２６】 請求項１に記載のペプチドと、少なくとも一つのその他の
ＭＨＣ結合ペプチドとを有する組成物。 - 【請求項２７】 細胞溶解性Ｔ細胞を産生するのに有用なキットであって、
請求項１４に記載の単離核酸分子と、ＨＬＡ−Ｂ３５分子をコードする単離核酸
分子とを、それぞれ分離可能なポーションとして有する細胞溶解性Ｔ細胞を産生
するのに有用なキット。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/169,717 | 1998-10-09 | ||
| US09/169,717 US6667037B1 (en) | 1998-10-09 | 1998-10-09 | Isolated peptides which bind to HLA-B35 molecules, larger peptides which contain these, nucleic acid molecules encoding peptides, and uses thereof |
| PCT/US1999/023038 WO2000021551A1 (en) | 1998-10-09 | 1999-10-04 | Isolated peptides which bind to hla-b35 molecules |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002527050A true JP2002527050A (ja) | 2002-08-27 |
Family
ID=22616897
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000575525A Pending JP2002527050A (ja) | 1998-10-09 | 1999-10-04 | Ｈｌａ−ｂ３５分子に結合する単離ペプチド |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6667037B1 (ja) |
| EP (1) | EP1123108A4 (ja) |
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| KR (1) | KR20010043984A (ja) |
| CN (1) | CN1354668A (ja) |
| AU (1) | AU764550B2 (ja) |
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