JP2002525337A

JP2002525337A - 細胞再生をもたらすオキシトシン活性物質の使用

Info

Publication number: JP2002525337A
Application number: JP2000571941A
Authority: JP
Inventors: ケルスティンユヴネス−モベルグ，; トマスルンデベルグ，
Original assignee: エントルテクメディカルアーベー
Priority date: 1998-09-25
Filing date: 1999-09-27
Publication date: 2002-08-13
Also published as: EP1115416B1; WO2000018424A1; ATE383166T1; CN1330550A; AU6493199A; DE69937959D1; EP1115416A1; SE9803272D0

Abstract

(57)【要約】本発明は細胞再生を改善させるためのオキシトシン活性物質の使用に関する。また、本発明は細胞再生を改善させるための少なくとも１つのオキシトシン活性物質を含む薬学的組成物に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、細胞再生をもたらすオキシトシン活性物質の使用に関する。本発明
はまた、細胞再生をもたらす少なくとも１つのオキシトシン活性物質を含む薬学
的組成物に関する。

【０００２】発明の背景オキシトシンは、単離および配列決定が行われた最初のペプチドホルモンの１
つであった。オキシトシンは、ジスルフィド結合が１位と６位との間で形成され
る２個のシステイン残基を有するノナペプチドであり、下記の式に対応する：

【化３】

【０００３】長い間、オキシトシンに起因する他にない作用は、乳汁噴出および子宮収縮に
対するその刺激作用であったが、この数十年において、オキシトシンは中枢神経
系（ＣＮＳ）において広範囲の作用スペクトルを示すことが見出された。オキシ
トシンは、母性行動および性行動だけでなく、記憶過程および学習過程の調節、
ならびに摂食および運動などの様々なタイプの行動の調節に関わっていることが
示唆されている。オキシトシンは、心血管機能、体温調節、痛み閾値および体液
平衡の調節に関わっていることもまた示唆されている。オキシトシンが様々な免
疫学的プロセスの調節に関与していることもまた明らかにされている。最近、オ
キシトシンの注射は、反復投与後、血圧の低下をもたらし、増大した体重増加の
長期間の持続作用が明らかにされている。中枢的な刺激物質として、オキシトシ
ンは、哺乳動物の母子間の相互作用に重要な役割を果たしている。その製品は、
幼少者において予防的に使用することもでき、例えば、胎児期中のストレス状態
に依存する疾患のその後の発症を防止するために新生児または幼児において既に
使用されている。そのような状態は、発作、心筋梗塞、高血圧および糖尿病など
の心臓／血管の疾患であり得る。

【０００４】種々の方法がオキシトシンの合成的製造について記載されている。例えば、商
業的な方法が米国特許第２，９３８，８９１号および同第３，０７６，７９７号
に記載されている。

【０００５】ヒト身体において、オキシトシンは、視床下部の室傍核（ＰＶＮ）および視索
上核（ＳＯＮ）で産生される。オキシトシンは、これらの核において同様に産生
されるバソプレシンと２個のアミノ酸が異なるだけである。ＳＯＮおよびＰＶＮ
の大細胞のオキシトシン作動性ニューロンは、ＰＶＮ突起に起源を有する小細胞
性ニューロンをＣＮＳ内の多数の領域に送り出している。オキシトシン産生細胞
は、ペプチド作動性ニューロンだけでなく、コリン作動性ニューロン、カテコー
ルアミン作動性ニューロンによって刺激される。子宮、卵巣、精巣、胸腺、副腎
髄質および膵臓などの脳以外の種々の組織にオキシトシンが存在することが明ら
かにされ、オキシトシンがこれらの組織において局所的に作用していることが示
唆されている。

【０００６】脳領域および循環系へのオキシトシンの平行した分泌が授乳などのいくつかの
刺激に応答して生じるが、他の刺激により、脳または下垂体に末端があるオキシ
トシン作動性ニューロンの異なる活性化が引き起こされ得る。

【０００７】本発明においては、オキシトシンは、適用される場合には常に、オキシトシン
に加えて、さらに同じ性質を示す前駆体、代謝誘導体、オキシトシンアゴニスト
またはオキシトシンアナログをいう。

【０００８】オキシトシンの構造と類似した構造を有するオキシトシン誘導体（すなわち、
化合物）がいくつか存在する。オキシトシン以外のオキシトシン誘導体が、オキ
シトシン分子の部分と同様にオキシトシンの細胞再生作用をもたらし得ることが
予備的に示されている。オキシトシン以外のオキシトシン誘導体またはオキシト
シン分子の部分を使用して細胞再生を改善させることはどの刊行物にも記載され
ていない。

【０００９】実験において、オキシトシンは、中枢的な作用として、ラットにおいて中枢性
α_２−レセプターの活性を増大させることが明らかにされている。このレセプタ
ーは阻害作用を有し、そして環状ＡＭＰを活性化するα_１−レセプターを介して
主に媒介される脳におけるノルアドレナリンの活性化局面を中和する。α_２−レ
セプターの刺激がα_１−レセプターの刺激よりも大きい場合、活性は緩和に変わ
り、成長および治癒に向かうエネルギーは遮断される。すなわち、エネルギーは
ストレスまたは筋肉の収縮および活動のために使用されなくなる。結果として、
副交感神経の緊張が交感神経の緊張を上回り、筋組織は弛緩する。オキシトシン
はヒトにおいても類似した作用を示すと考えられ得る。動物に給餌しているとき
に（すなわち、反復的なオキシトシン分泌を特徴とする状況において）、オキシ
トシンを反復投与した後の実験動物に認められるすべての作用が見られる。オキ
シトシンによるα_２−レセプターに対する作用がどのように媒介されているかは
不明であるが、従来のオキシトシンレセプター媒介作用によるものではないと考
えられる。

【００１０】オキシトシンの作用は、オキシトシンの放出を増大させ、かつ／またはエスト
ロゲンなどのレセプターの数または親和性を増大させる薬物、あるいはα_２アゴ
ニスト作用を有する薬物（クロニジンなど）と組み合わせて投与することによっ
て拡大または強化され得る。

【００１１】今回、オキシトシンの胎児成長刺激（実施例１）、卵巣の成熟化および機能の
強化（実施例２）（すなわち、インビトロおよびインビボでの受精に役立つ不妊
に対する作用、ならびに精子および卵の産生を増大させる作用）、末梢神経障害
および中枢神経障害の回復刺激（実施例３）、ヒト皮膚樹状細胞の刺激（実施例
４）、皮膚ケラチノサイトの刺激（実施例５）、皮質骨厚さの刺激（実施例６）
、アポトーシスの低下（実施例７）、ホルボールエステルおよびオキサゾロンに
より誘導される炎症からの保護（実施例８）、老化皮膚およびバリア形成に対す
る作用（実施例９）、および細胞のエネルギー消費の減少（実施例１０）が明ら
かにされた。これらの実施例は、オキシトシンまたはオキシトシン活性物質が細
胞再生のために使用され得ることを示している。

【００１２】発明の要旨本発明は、細胞再生を改善させるオキシトシン活性物質の使用に関する。本発
明はまた、有効濃度の少なくとも１つのオキシトシン活性物質を混合物で、ある
いは少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と一緒に含む薬
学的組成物に関する。そのような薬学的組成物は、細胞再生を改善させるために
使用することができる。

【００１３】発明の詳細な説明本発明の目的は、細胞再生をもたらすオキシトシン様活性物質の使用である。
オキシトシン活性物質の例には、下記の化合物が含まれる：

【化４】オキシトシン

【化５】メソトシンすなわち、請求項２および４において、ＶがＴｙｒであり、ＷがＩｌｅであり
、ＸがＧｌｎであり、ＹがＩｌｅであり、ＺがＧｌｙである。

【化６】イソトシンすなわち、請求項２および４において、ＶがＴｙｒであり、ＷがＩｌｅであり
、ＸがＳｅｒであり、ＹがＩｌｅであり、ＺがＧｌｙである。

【化７】アネトシンすなわち、請求項２および４において、ＶがＰｈｅであり、ＷがＶａｌであり
、ＸがＡｒｇであり、ＹがＴｈｒであり、ＺがＧｌｙである。

【００１４】アネトシンはミミズから単離された。これは、ＯｕｍｉＴ、ＵｋｅｎａＫ
、ＭａｔｓｕｓｈｉｍａＯ、ＩｋｅｄａＴ、ＦｕｊｉｔａＴ、Ｍｉｎａｋ
ａｔａＨ、ＮｏｍｏｔｏＫ、「アネトシン：ミミズ（Ｅｉｓｅｎｉａｆｏ
ｅｔｉｄａ）から単離されたオキシトシン関連ペプチド」、ＢｉｏｃｈｅｍＢ
ｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ、１９９４年１月１４日；１９８（１）：
３９３〜３９９に記載されている。他のオキシトシン活性物質もまた使用するこ
とができる。そのような物質は、オキシトシン、メソトシン、イソトシンおよび
アネトシンの天然に存在する変化体、アナログおよび誘導体であり、あるいはそ
れらの人為的に改変された変化体、アナログおよび誘導体などである。このよう
な物質は、これらのホルモンにおいて、少なくとも１つのアミノ酸の付加、挿入
、除去または置換を行うことによって得ることができる。オキシトシン様活性物
質とは、前駆体、代謝誘導体（例えば、代謝分解産物）などの代謝物、アゴニス
ト、または同じ性質を示す本明細書中に記載された物質のアナログであることも
また理解される。代謝誘導体または代謝分解産物は、例えば、オキシトシン、メ
ソトシン、イソトシンおよびアネトシンなどから、１つまたは複数のアミノ酸が
分子の一端または両端から除かれた９アミノ酸を有するオキシトシン様ペプチド
であり得る。好ましくは、１個、２個または３個のアミノ酸をカルボキシ末端か
ら除くことができる（すなわち、Ｇｌｙだけ、ＧｌｙおよびＬｅｕ、またはＧｌ
ｙおよびＬｅｕおよびＰｒｏ）。好ましくは、１個、２個または３個のアミノ酸
をアミノ末端から除くことができる（すなわち、Ｃｙｓだけ、ＣｙｓおよびＴｙ
ｒ、またはＣｙｓおよびＴｙｒおよびＩｌｅ）。好ましくは、１個、２個または
３個のアミノ酸をカルボキシ末端から除くことができ（すなわち、Ｇｌｙだけ、
ＧｌｙおよびＬｅｕ、またはＧｌｙおよびＬｅｕおよびＰｒｏ）、かつ１個、２
個または３個のアミノ酸をアミノ末端から除くことができる（すなわち、Ｃｙｓ
だけ、ＣｙｓおよびＴｙｒ、またはＣｙｓおよびＴｙｒおよびＩｌｅ）。これら
の変化体は、免疫学的方法によって、例えば、ＲＩＡ（放射免疫アッセイ）、Ｉ
ＲＭＡ（放射測定法）、ＲＩＳＴ（放射免疫吸着試験）、ＲＡＳＴ（放射アレル
ゲン吸着試験）によって、オキシトシン、メソトシン、イソトシンまたはアネト
シンのアナログであることを確かめることができる。

【００１５】上記に言及されているように、オキシトシン分子の部分フラグメントが細胞再
生をもたらし得ることが示されている。好ましくは、オキシトシン分子のこのよ
うな部分フラグメントは、ジスルフィド架橋の外側のアミノ酸を除くことによっ
て得られる。オキシトシン分子の部分フラグメントの例には、下記の化合物が含
まれる：

【化８】配列番号１すなわち、請求項２および４において、ＶがＴｙｒであり、ＷがＩｌｅであり
、ＸがＧｌｎであり、Ｙは存在せず、Ｚは存在しない。

【化９】配列番号２すなわち、請求項２および４において、ＶがＴｙｒであり、ＷがＩｌｅであり
、ＸがＧｌｎであり、ＹがＬｅｕであり、Ｚは存在しない。

【００１６】また、コンピュターシミュレーションによって新しいオキシトシン活性化合物
を作製することも可能である。コンピュターシミュレーションに関する方法は当
業者により知られており、例えば、欧州特許公報ＥＰ０６６０２１０Ａ２
に記載されている。７個の新しい化合物（すなわち、下記のペプチド）がコンピ
ュターシミュレーションにより作製された：

【化１０】配列番号３すなわち、請求項２および４において、ＶがＴｙｒであり、ＷがＶａｌであり
、ＸがＴｈｒであり、ＹがＬｅｕであり、ＺがＧｌｙである。

【化１１】配列番号４すなわち、請求項２および４において、ＶがＴｙｒであり、ＷがＨｏｐｈであ
り、ＸがＴｈｒであり、ＹがＶａｌであり、ＺがＧｌｙである。

【化１２】配列番号５すなわち、請求項２および４において、ＶがＴｙｒであり、ＷがＰｈｅであり
、ＸがＣｉｔであり、ＹがＬｅｕであり、ＺがＧｌｙである。

【化１３】配列番号６すなわち、請求項２および４において、ＶがＴｙｒであり、ＷがＣｈａであり
、ＸがＡｒｇであり、ＹがＨｏｓであり、ＺがＡｌａである。

【化１４】配列番号７すなわち、請求項２および４において、ＶがＴｙｒであり、ＷがＶａｌであり
、ＸがＤａｂａであり、ＹがＤａｂａであり、ＺがＡｌａである。

【化１５】配列番号８すなわち、請求項２および４において、ＶがＴｙｒであり、ＷがＨｏｐｈであ
り、ＸがＤａｂａであり、ＹがＣｉｔであり、ＺがＡｌａである。

【化１６】配列番号９すなわち、請求項２および４において、ＶがＴｙｒであり、ＷがＰｈｅであり
、ＸがＡｒｇであり、ＹがＶａｌであり、ＺがＡｌａである。上式において、Ｃｈａは、シクロヘキシルアラニン：

【化１７】を表し、Ｈｏｐｈは、ホモフェニルアラニン：

【化１８】を表し、Ｃｉｔは、シトルリン：

【化１９】を表し、Ｄａｂａは、ジアミノ酪酸：

【化２０】を表し、Ｈｏｓは、ホモセリン：

【化２１】を表す。

【００１７】本発明はまた、Ｄ型およびＬ型の両方の上記ペプチドに関する。特に、本発明
はＬ型に関する。そのペプチド配列を反転させることによって、Ｄ型をＬ型に変
換することができる。Ｄ型およびＬ型の作用は同じである。このようなペプチド
および上記のペプチドは、当業者に知られている方法によって、例えば、Ｍｅｒ
ｒｉｆｉｅｌｄ，Ｐ．Ｂ．（「固相合成」、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍｉｅ、１９８
５、第９７巻、８０１頁）に従って作製することができる。

【００１８】化合物がオキシトシン作用を有することを、下記のＣａｓｓｏｎｉ，Ｐ．によ
る刊行物に記載されている試験、および下記の実施例による試験などの試験によ
って確かめることができる。

【００１９】表現「細胞再生」により、損傷を受けた細胞を置換するための、存在する細胞
および新しい細胞の制御された有益な生成ならびに細胞の成熟化によるヒトまた
は動物の身体修復が理解される。存在する細胞の生成は、細胞全体の活力化およ
びその成長刺激（例えば、神経細胞における樹状突起および軸索などの成長）を
意味し得る。従って、神経および筋肉のジストロフィー状態、例えば、多発性硬
化症（ＭＳ）および筋肉リウマチを治療することができる（Ｃａｓｓｏｎｉ，Ｐ
．、Ｓａｐｉｎｏ，Ａ．、Ｆｏｒｔｕｎａｔｉ，Ｎ．、Ｍｕｎａｒｏｎ，Ｌ．、
Ｃｈｉｎｉ，Ｂ．およびＢｕｓｓｏｌａｔｉ，Ｇ．）。これに対して、オキシト
シンは、ＭＤＡ−ＭＢ２３１ヒト乳ガン細胞の増殖を、環状アデノシン一リン酸
タンパク質キナーゼＡを介して阻害する。Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７２、３
４０〜３４４（１９９７）には、乳ガン細胞の阻害が記載されているが、身体内
の損傷細胞がどのように置換されるかについては記載されていない。

【００２０】新しい細胞の生成および細胞の成熟化はまた、心筋麻痺または心臓発作、萎縮
、パーキンソン病およびアルツハイマー病などの変性疾患、乾癬、骨粗鬆症、移
植後、平衡障害、子宮破裂、肝臓破裂、腎臓破裂の後での治癒過程において、女
性不妊症を改善するために、例えばガン治療後での血液細胞（例えば、赤血球、
白血球およびリンパ球）の増殖を回復させるために、家畜の体重を増大させるた
めに、ヒトの感覚を増大させるために（例えば、老化の結果として損なわれた視
力、聴力、嗅覚および味覚を改善するために）、失禁問題を軽減するために、皮
膚を若返らせて、老化の結果としてのしわを妨げるための化粧品適用において、
治癒能を増大させるために手術前に、そして毛および爪の成長を助けるために重
要であり得る。

【００２１】本発明の別の目的は、有効濃度の少なくとも１つのオキシトシン活性物質を混
合物で、あるいは少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と
一緒に含む薬学的組成物に関する。

【００２２】オキシトシン活性物質の例には、メソトシン、イソトシン、アネトシン、配列
番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列
番号７、配列番号８および配列番号９が含まれる。

【００２３】本発明による薬学的組成物は、オキシトシンの作用を拡大または強化する物質
を含有することができる。そのような物質は、オキシトシンの放出を増大させ、
かつ／またはエストロゲンなどのレセプターの数または親和性を増大させること
ができ、あるいはα_２アゴニスト作用を有する薬剤（クロニジンなど）である。

【００２４】薬学的組成物は、製薬分野の当業者に知られている方法で調製される。キャリ
アまたは賦形剤は、有効成分のビヒクルまたは媒体として作用し得る固体、半固
体または液体の物質であり得る。好適なキャリアまたは賦形剤がこの分野では知
られている。薬学的組成物は、経口使用、非経口使用または局所的使用に合わせ
ることができ、錠剤、カプセル剤、坐剤、溶液剤、懸濁剤などとして患者に投与
することができる。

【００２５】薬学的組成物は、例えば、不活性な希釈剤とともに、あるいは食用キャリアと
ともに経口投与することができる。薬学的組成物はゼラチンカプセルに包むこと
ができ、あるいは錠剤に圧縮することができる。経口的な治療投与の場合、本発
明による化合物は賦形剤と配合することができ、錠剤、トローチ剤、カプセル剤
、エリキシル剤、坐剤、シロップ剤、オブラート剤、チューインガム剤などとし
て使用することができる。このような調製物は、有効成分である本発明による化
合物を少なくとも４重量％含み得るが、特定の形態に従って変化させることがで
き、好適には、ユニット物の４〜７０重量％とすることができる。組成物に含有
される有効成分の量は非常に高いために、投与に適した単位投薬形態にされる。

【００２６】錠剤、ピル剤、カプセル剤、トローチ剤などもまた、少なくとも１つの下記の
補助剤を含むことができる：結合剤（微結晶セルロース、トラガカントゴムまた
はゼラチンなど）、賦形剤（デンプンまたはラクトースなど）、崩壊剤（アルギ
ン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、トウモロコシデンプンなど）、滑沢剤
（ステアリン酸マグネシウムまたはステロテクス（Ｓｔｅｒｏｔｅｘ）など）、
滑剤（コロイド状二酸化シリカなど）、および甘味剤（サッカロースまたはサッ
カリンなど）を加えることができ、あるいは風味剤（ペパーミント、サリチル酸
メチルまたはオレンジ風味剤など）を加えることができる。単位投薬形態がカプ
セル剤である場合、上記タイプに加えて、ポリエチレングリコールまたは油脂な
どの液体キャリアを含むことができる。他の単位投薬形態は、単位投薬形態の物
理的形態を改変する他の種々の物質（例えば、コーティング剤）を含むことがで
きる。従って、錠剤またはピル剤は、糖、セラックまたは他の腸溶コーティング
剤でコーティングすることができる。シロップ剤は、有効成分に加えて、甘味剤
としてのサッカロース、ならびにいくつかの保存剤、色素および風味剤を含むこ
とができる。このような種々の組成物を調製するために使用される材料は、使用
量で、薬学的に純粋で非毒性でなければならない。

【００２７】非経口投与の場合、本発明による化合物は溶液または懸濁物に配合することが
できる。非経口投与は、消化管を経由するのではなく、むしろ、皮下、筋肉内、
眼窩内、嚢内、髄腔内、胸骨内、静脈内、鼻腔内、肺内のような特定の他の経路
を介した注入、尿管を介した注入、点眼薬による注入、直腸的または膣的な注入
（例えば、坐剤、膣坐剤、クリームまたは軟膏として）、家畜の乳管を介した注
入、骨髄などの組織への注入などをいう。骨髄はまた、インビトロで治療するこ
とができる。このような調製物は、少なくとも０．１重量％の本発明による活性
化合物を含み得るが、本発明による活性化合物を約０．１〜５０重量％に変化さ
せることができる。そのような組成物に含有される有効成分の量は非常に大きい
ので、好適な投薬物にされる。

【００２８】溶液剤または懸濁剤または、少なくとも１つの下記の補助剤を含むことができ
る：無菌希釈剤（注射用水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グ
リセロール、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒など）、抗菌剤（ベンジ
ルアルコールまたはメチルパラベンなど）、抗酸化剤（アスコルビン酸または重
亜硫酸ナトリウムなど）、キレート化剤（エチレンジアミン四酢酸など）、緩衝
剤（酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩）、および張性調節剤（塩化ナトリウム
またはデキストロースなど）。非経口調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、
あるいはガラスまたはプラスチックから作製された多回投薬容器に入れることが
できる。

【００２９】局所投与の場合、本発明による化合物は、溶液剤、懸濁剤または軟膏に配合す
ることができる。このような調製物は、本発明による活性化合物を少なくとも０
．１重量％で含み得るが、本発明による活性化合物を約０．１〜５０重量％に変
化させることができる。そのような組成物に含有される有効成分の量は非常に大
きいので、好適な投薬物にされる。投与は、皮膚の透過性を高める接触、圧力、
マッサージ、熱、加温または赤外光を皮膚に当てることによって促進させること
ができる（Ｈｉｒｖｏｎｅｎ，Ｊ．、Ｋａｌｉａ，ＹＮ．およびＧｕｙ，ＲＨ．
）。イオン導入によるペプチドの経皮送達（ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、１
９９６年１２月；１４（１３）：１７１０〜１７１３）には、加えられた電場の
駆動力を使用する、皮膚を介した薬物輸送を高める方法が記載されている。好ま
しくは、イオン導入は微塩基性ｐＨで行われる。

【００３０】他の投与形態には、肺を介した吸入、口を介した口内投与、および小腸を介し
た腸内投与がある。これらは、当業者に知られている手段で行うことができる。

【００３１】本明細書中に記載されたすべての刊行物は、それらによって参考として援用さ
れる。「含む」という表現により、「に限定する」ことではなく、「包含する」
ことが理解される。従って、言及されていない他の物質、添加剤またはキャリア
が存在してもよい。

【００３２】本発明は下記の実施例により例示される。下記の実施例は、本発明を例示する
ことを目的とするだけであり、いかなる点においても本発明を限定しない。

【００３３】実施例実施例１−胎児成長の刺激材料および方法動物未経産の雌性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重±１２ｇ）をＢ＆Ｋ
ＵｎｉｖｅｒｓａｌＡＢ（Ｓｏｌｌｅｎｔｕｎａ、スウェーデン）から入手
した。動物を、温度（２０±１℃）および湿度（４５〜５５％）が調節され、０
６００ｈから１８００ｈまで照明される部屋内のケージに１匹ずつ入れた。餌は
ペレット規定食（Ｌａｃｔａｍｉｎ、Ｖａｄｓｔｅｎａ、スウェーデン）であっ
た。動物には、飲み水を自由に摂取させた。母体の体重を、最初の４週間は毎週
測定し、その後、妊娠１日目、１４日目および２０日目に測定し、また授乳１日
目および２０日目に測定した。子供の体重を、授乳１日目、５日目、１０日目、
１５日目および２０日目に記録した。この研究は、動物実験に関するストックホ
ルム倫理委員会により承認された。

【００３４】動物実験購入時に動物を２群に分けた。１群は自由摂食させ、もう１群は餌を制限した
。餌制限の動物には、実験期間中を通じて、自由摂食させた動物により消費され
た餌の７０％を平均して与えた。４週間後、ラットを交配させ、妊娠したと見な
した（妊娠１日目）。翌朝、精子が膣塗抹に見出された。自由摂食妊娠ラットお
よび餌制限妊娠ラットを、オキシトシン治療およびコントロールの２つのグルー
プに分けた。妊娠１日目〜５日目の期間中、オキシトシン治療動物にはオキシト
シン（１ｍｇ／ｋｇ体重）を１日に１回注射し、コントロール動物には生理食塩
水（０．９％ＮａＣｌ）を皮下に注射した。自由摂食動物および餌制限動物を妊
娠１４日目および２０日目に屠殺し、そして自由摂食母体および子供のグループ
を授乳２０日目に屠殺した。妊娠ラットは、妊娠２３日目の午後に子供を出産し
た。翌日を授乳１日目と見なした。１日目に同腹子を選び、８匹の子供／母体と
した。自由摂食および餌制限を行った未交配ラットを、交配ラットの妊娠１日目
に対応する時に屠殺した。従って、下記の１２群がこの実験に含まれた：ＮａＣ
ｌ治療された未交配の自由摂食（ｎ＝８）、ＮａＣｌ治療された未交配の餌制限
（ｎ＝８）、ＮａＣｌ治療された妊娠１４日目の自由摂食（ｎ＝４）、ＮａＣｌ
治療された妊娠１４日目の餌制限（ｎ＝８）、ＮａＣｌ治療された妊娠２０日目
の自由摂食（ｎ＝１０）、ＮａＣｌ治療された妊娠２０日目の餌制限（ｎ＝１０
）、ＮａＣｌ治療された授乳２０日目の自由摂食（ｎ＝４）、オキシトシン治療
された妊娠１４日目の自由摂食（ｎ＝４）、オキシトシン治療された妊娠１４日
目の餌制限（ｎ＝９）、オキシトシン治療された妊娠２０日目の自由摂食（ｎ＝
１２）、オキシトシン治療された妊娠２０日目の餌制限（ｎ＝１３）、オキシト
シン治療された授乳２０日目の自由摂食（ｎ＝３）。

【００３５】母体の体幹血液を断頭によって採取した。子宮近傍領域および腹膜後腔領域の
母体の脂肪組織、肝臓、個々の胎児および胎盤（妊娠２０日目のみ）を取り出し
て重量測定した。断頭直後に、体幹血液を、１０ＩＵ／ｍＬヘパリン（Ｌｏｅｖ
ｅｎｓＬａｅｋｅｍｅｄｅｌ、Ｍａｌｍｏｅ、スウェーデン）および５００Ｉ
Ｕ／ｍＬアプロチニン（ＢａｙｅｒＡＢ、Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ、スウェーデン
）を含む冷却プラスチックチューブに採取した。サンプルを直ちに遠心分離して
、血漿を集めて冷凍した（−２０℃）。

【００３６】血液サンプルの分析オキシトシンは、ＭａｒｃｈｉｎｉＧ、ＬａｇｅｒｃｒａｎｔｚＨ、Ｕｖ
ｎａｅｓ−ＭｏｂｅｒｇＫ（「新生児における血漿ガストリンおよびカテコー
ルアミン類とのその関係」、ＪＤｅｖＰｈｙｓｉｏｌ、１９９０、１４：１
４７〜１５５）によって記載されているようにして、５００μｌのアッセイ緩衝
液（０．１％のＢＳＡを含む０．０５Ｍリン酸塩緩衝液、ｐＨ７．５）に溶解し
た血漿（５００μｌ）をＳｅｐ−ＰａｋＣ１８カートリッジ（ＷａｔｅｒＣｏ
ｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ、アメリカ）で精製した後に放射免
疫アッセイ（ＲＩＡ）で測定した。オキシトシンの濃度を、５０μｌの抗体Ａ１
９（Ｅｕｒｏ−ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃａＡＢ、Ｍａｌｍｏｅ、スウェーデン）
とともに＋４℃で２４時間インキュベーションした精製血漿（１００μｌ）で測
定した。比活性が２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌのトレーサー（^１２５Ｉ）−Ｔｙｒ^２ −オキシトシン（ＤｕＰｏｎｔＮＥＮＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｄｕｃｔｓ
、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ、アメリカ）の５０μｌを加えて、＋４℃で４８時間イン
キュベーションを続けた。抗体および（^１２５Ｉ）−Ｔｙｒ^２−オキシトシンを
、０．１％のＢＳＡを含む０．０５Ｍリン酸塩緩衝液に希釈した。アルギニン−
バソトシンとの交差反応性は０．０１％であり、リジン−バソプレシンとの交差
反応性は＜０．０１％であり、アルギニン−バソトシンとの交差反応性は０．１
％であった。結合画分を、第２のウサギ抗体であるＤｅｃａｎｔｉｎｇＳｕｓ
ｐｅｎｓｉｏｎ３（Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆ＵｐｊｏｈｎＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ
ｓＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）とともにサンプルをインキュベーシ
ョンすることによって非結合画分から分離した。サンプルを１０分間遠心分離（
１７００ｘｇ）して、上清を捨て、沈殿物における放射能を測定した。検出限界
は３．２ｐｍｏｌ／ｌであった。アッセイ内およびアッセイ間の変動係数は、そ
れぞれ、１８％および２６％であった。

【００３７】統計分析結果は、平均±ＳＤとして表される。自由摂食および餌制限のコントロール動
物における妊娠効果を、変動の補正として、栄養効果（自由摂食対餌制限）およ
び妊娠日数（未交配、１４日目および２０日目）についてツーウェイＡＮＯＶＡ
により評価した。オキシトシン治療の効果を、変動の補正として、栄養効果（自
由摂食および餌制限）、治療（オキシトシン対生理食塩水）および妊娠日数（１
４日目対２０日目）についてスリーウェイＡＮＯＶＡにより評価した。有意な相
互作用が認められる場合、計画された比較を行い、オキシトシン治療群と対応す
るＮａＣｌ治療群との差を評価した。タンパク質分解活性の差および出産後の子
供体重の差を、オキシトシン治療群とＮａＣｌ治療群との間で、独立手段のスチ
ューデントｔ−検定によって評価した。結果は、ｐ＜０．０５のときに有意と見
なした。

【００３８】結果オキシトシン治療ラットは、妊娠期間中の正味の体重増加がそのＮａＣｌ治療
対応体よりも小さい傾向があった（ｐ＝０．０６）（図１）。妊娠２０日目にお
いて、自由摂食させたオキシトシン治療ラットは、生理食塩水治療ラットと比較
して、相対的（正味体重の％）に少ない子宮近傍の脂肪組織（図２）および腹腔
後膜の脂肪組織（図３）を含有したが、妊娠初期においては、オキシトシン治療
ラットと生理食塩水治療ラットとの間で子宮近傍および腹腔後膜の脂肪組織の量
には差がなかった。

【００３９】自由摂食させたオキシトシン治療母体から得られた胎児および胎盤は、ＮａＣ
ｌ治療ラットから得られた受胎産物および子供と比較して、妊娠２０日目におい
てより大きく、出産体重はより大きかった（表１）。自由摂食させたオキシトシ
ン治療母体およびＮａＣｌ治療母体から得られた子供間の出産後の体重における
差はその後認められなかった。自由摂食群とは対照的に、餌制限群では、胎児体
重に対するオキシトシンの効果はなかった（表１）。

【表１】

【００４０】考察オキシトシンは、自由摂食動物の胎児体重に対して、小さいが、有意な有益な
作用を有していたが、授乳期間中の出生後の成長に対してはさらなる作用を有し
ていなかった。他の用量のオキシトシンを投与することによって、胎児成長をさ
らに高めることができると考えられる。オキシトシンの作用は、妊娠期間中の投
与時期に依存して変化し得ると考えられる。本発明により、オキシトシンが、受
精卵がまだ着床していない妊娠の最初の５日間にわたって注射された。従って、
胎児の成長に対するオキシトシンの刺激作用は、例えば、胎盤の栄養移動能また
は妊娠後期における母体の体貯蔵物を移動させる母体の能力に対する正の作用を
有する変化した母体の妊娠適応によって説明することができる。

【００４１】実施例２−卵巣の成熟化および機能の強化ニューロトロフィン（ＮＴ）は、中枢神経系および末梢神経系の両方で神経集
団の分化および生存において重要な役割を果たしている。少なくとも４つの異な
るＮＴが卵巣において見出されている。

【００４２】材料および方法動物この動物モデルは、ＰｅｔｅｒｓｓｏｎＭ．、ＡｌｓｔｅｒＰ．、Ｌｕｎ
ｄｅｂｅｒｇＴ．およびＵｖｎａｅｓ−ＭｏｂｅｒｇＫ．、「オキシトシン
は雌性ラットおよび雄性ラットにおいて長期間の血圧低下を生じさせる」、Ｐｈ
ｙｓｉｏｌｏｇｙ＆Ｂｅｈａｖｉｏｒ、第６０巻、第５号、１３１１頁〜１３１
５頁（１９９６）に記載されているが、雌性ラットのみを使用した。実験を２系
統で行った。雌性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２３０〜２５０ｇ）を
使用してｓｃ注射した。動物を実験の少なくとも３週間前に購入し、ケージあた
り５匹すつ入れ、餌および水を自由に摂取させた。照明は１２／１２ｈの明／暗
サイクルで行った。室温は２０±２℃であった。発情期の段階を膣塗抹の顕微鏡
検査によって調べた。

【００４３】実験計画ＮａＣｌ、オキシトシン（０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇおよび１ｍ
ｇ／ｋｇ）（Ｆｅｒｒｉｎｇ、Ｍａｌｍｏｅ、スウェーデン）および再度のＮａ
Ｃｌを雌性ラットに５日間連続してｓｃ投与した。５日間の治療期間は、ラット
の発情期の継続期間が含まれるように選ばれた。薬物は、生理学的生理食塩水に
溶解され、１ｍＬ／ｋｇの容量で注射された。コントロール動物には、全治療期
間中にわたりＮａＣｌをｓｃ投与した（１ｍＬ／ｋｇ）。

【００４４】結果結果から、コントロールと比較して、オキシトシン治療ラットでは、ＰＣＲ、
ノーザンブロットおよびオートラジオグラフィーにより明らかにされるように、
ＮＧＦｔｒｋＡレセプター（２２％≧コントロール）およびＮＧＦ（２６％≧コ
ントロール）の（ＮＧＦ遺伝子の刺激による）発現および合成が卵巣で増大して
いたことが示される。これにより、卵胞生成およびその後の卵胞発達の増大がも
たらされる（ＯｊｅｄａおよびＤｉｓｓｅｎ、Ｏｖａｒｉａｎｄｅｖｅｌｏｐ
ｍｅｎｔ、３２頁（１９９４））。

【００４５】実施例３−末梢神経障害および中枢神経障害の回復材料および方法動物この動物モデルは、ＰｅｔｅｒｓｓｏｎＭ．、ＡｌｓｔｅｒＰ．、Ｌｕｎ
ｄｅｂｅｒｇＴ．およびＵｖｎａｅｓ−ＭｏｂｅｒｇＫ．、「オキシトシン
は雌性ラットおよび雄性ラットにおいて長期間の血圧低下を生じさせる」、Ｐｈ
ｙｓｉｏｌｏｇｙ＆Ｂｅｈａｖｉｏｒ、第６０巻、第５号、１３１１頁〜１３１
５頁（１９９６）に記載されている。実験を２系統で行った。Ｓｐｒａｇｕｅ−
Ｄａｗｌｅｙの雌雄ラット（２３０〜２５０ｇ）を使用してｓｃ注射し、雄性Ｓ
ｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（３３５〜３７５ｇ）には脳室内（ｉｃｖ）
注入した（Ｂ＆ＫＵｎｉｖｅｒｓａｌＡＢ、Ｓｏｌｌｅｎｔｕｎａ、スウェ
ーデン）。動物を実験の少なくとも３週間前に購入し、ケージあたり５匹ずつ入
れ、一方、ｉｃｖカニューレ装着動物は１匹ずつ入れ、餌および水を自由に摂取
させた。照明は１２／１２ｈの明／暗サイクルで行った。室温は２０±２℃であ
った。雌性ラットの場合、発情期の段階を膣塗抹の顕微鏡検査によって調べた。

【００４６】ｉｃｖ注入するための手術５０ｍｇ／ｋｇのペントバルビターツナトリウム（Ａｐｏｔｅｋｓｂｏｌａｇ
ｅｔ、スウェーデン）を腹腔内注射（ｉｐ）して麻酔した後、頭骨を外し、導入
カニューレ（２１ｇ）を歯科用アクリルセメントで頭骨に定位固定した。その座
標は、ブレグマの後方１．００ｍｍであり、ブレグマの外側１．３０ｍｍであっ
た。導入カニューレは硬膜に達したが、硬膜内には侵入せず、ニードルの先端は
側脳室内にあった。動物を手術後１週間回復させた。実験終了時に、導入カニュ
ーレの位置を、２μｌのトルイジンブルーを注射することによって調べた。

【００４７】実験計画ＮａＣｌ、オキシトシン（０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇおよび１ｍ
ｇ／ｋｇ）（Ｆｅｒｒｉｎｇ、Ｍａｌｍｏｅ、スウェーデン）および再度のＮａ
Ｃｌを雌雄ラットに５日間連続してｓｃ投与した。５日間の治療期間は、雌性ラ
ットの発情期の継続期間が含まれるように選ばれた。薬物は、生理学的生理食塩
水に溶解され、１ｍＬ／ｋｇの容量で注射された。コントロール動物には、全治
療期間中にわたりＮａＣｌをｓｃ投与した（１ｍＬ／ｋｇ）。

【００４８】別の実験では、オキシトシンを、長期間ｉｃｖカニューレを装着した雄性ラッ
トに５日間にわたって５μｌの容量でｉｃｖ投与した（１μｇ／ｋｇ）。コント
ロール動物には５μｌの生理食塩水をｉｃｖ投与した。

【００４９】ＮＧＦの役割中枢神経系および末梢神経系の成長、分化および損傷細胞の再生に関する強力
な因子である神経成長因子（ＮＧＦ）は、近年、ヒトの神経変性事象における細
胞損傷プロセスを逆転させ得る潜在的な治療剤として示されている。ＮＧＦは血
液脳関門を通過せず、ＮＧＦの中枢投与には侵襲的な手術手法が必要であるため
に、脳においてインビボのＮＧＦ合成を調節する物質の発見は、ＮＧＦの考えら
れる臨床的使用にとって極めて有用である。また、ＮＧＦは、末梢の感覚ニュー
ロンおよび交感系ニューロンの成長および分化において非常に重要な役割を果た
している標的由来の成長因子である。ＮＧＦは、外科的または化学的に傷つけら
れた末梢神経の細胞損傷の回復だけでなく、糖尿病性神経障害、ハンセン病、虚
血後の冠動脈神経支配、および勃起機能の回復をも促進することが明らかにされ
ている。これらの報告の結果として、ＮＧＦは、末梢神経障害を治療する際に役
割を有することが考えられる。多数の神経細胞が局所的および循環性のＮＧＦを
産生することができるために、考えられる取り組みは、ＮＧＦのインビボでのア
ップレギュレーションを誘導する化合物を同定することである。

【００５０】中枢作用この研究の目的は、成体ラットの脳におけるＮＧＦ含有量がオキシトシンの末
梢（皮下、ｓｃ）投与によって影響され得るかどうかを分析することであった。
視床下部および海馬におけるＮＧＦ濃度を、ＮＧＦの高感度な免疫酵素的アッセ
イを使用して分析した。

【００５１】表２には、オキシトシンをｓｃ注射したラットの海馬および視床下部における
脳ＮＧＦレベル（ｐｇ／ｇ組織）に関して得られた結果が、生理食塩巣のコント
ロール動物と比較して示されている。

【表２】

【００５２】表２の結果は、オキシトシンのｓｃ注射により脳内のＮＧＦレベルが調節され
得るを示唆している。

【００５３】末梢作用ｓｃオキシトシンの末梢作用を評価するために、ラットにおける２つのモデル
の末梢神経障害を使用した。１つは、（カプサイシンの使用による）末梢の感覚
神経系が関与するものであり、もう１つは、（６−ヒドロキシドーパミン、６−
ＯＨＤＡの使用による）末梢の交感神経系が関与するものである。この研究にお
いて、本発明者らはこれらの動物モデルを使用して、オキシトシンの外部投与が
、虹彩／後肢に対して６−ＯＨＤＡにより誘導される変化、および後肢に対する
カプサイシンによる変化に影響するかどうかを調べた。下記の表には、生理食塩
水コントロール動物と比較して、オキシトシンをｓｃ注射したラットに関して得
られた結果が示されている：虹彩における末梢ＮＧＦレベル（ｐｇ／ｇ組織）（
表３）および後肢における末梢ＮＧＦレベル（ｐｇ／ｇ組織）（表４：６−ＯＨ
ＤＡおよび表５：カプサイシン）。

【表３】

【表４】

【表５】

【００５４】この治療が何らかの生理学的重要性を有しているかどうかを明らかにするため
に、ホットプレート応答を使用した。表６には、カプサイシン＋生理食塩水およ
びカプサイシン＋オキシトシンでそれぞれ治療された動物に関する舌なめまでの
時間（飛びはね応答）が示されている。

【表６】

【００５５】表３〜表６の結果は、オキシトシンの反復投与は損傷組織でのＮＧＦ含有量を
増大させること、およびこれは機能的意味を有し得ることを示している。

【００５６】実施例４−ヒト皮膚樹状細胞の刺激材料および方法Ｄｅｍｏｔｚ他（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１４３：３８８１〜３８８６）によっ
て記載された破傷風トキソイド（ＴＴ）モデルを使用した。この研究において、
本発明者らは、破傷風トキソイド誘導Ｔ細胞増殖モデル（増殖アッセイ）に対す
るオキシトシンの作用を調べることを試みた。本発明者らは、大部分のスウェー
デン人患者がＴＴのワクチン接種の経歴を有し、循環性のＴＴ特異的メモリーＴ
細胞を有しているためにＴＴをモデル抗原として使用した。オキシトシンの作用
を試験するために、１群の樹状細胞をオキシトシンとともに予備インキュベーシ
ョンし、１群の樹状細胞を生理食塩水とともに予備インキュベーションした。休
止ＣＤ４陽性Ｔ細胞を応答細胞として使用した。樹状細胞を、ＴＴを用いて３７
℃で２時間パルス処理して、５ｘ１００，０００個の応答細胞とインキュベーシ
ョンした。刺激因子：応答細胞の比は１：１，０００、１：１００および１：１
０であった。これらの培養物における増殖応答を３日後に測定した。

【００５７】樹状細胞樹状細胞は、リンパ様組織のＴ細胞依存領域に存在する抗原提示細胞のファミ
リーに属する。樹状細胞はまた、抗原のヒト身体内への侵入が生じ得るバリア域
（皮膚、肺および消化管など）にも見出されている。最近の証拠により、皮膚樹
状細胞の役割が、接触過敏反応（ＴｓｅおよびＣｏｏｐｅｒ、１９９０、ＪＩ
ｎｖｅｓｔＤｅｒｍ、９４：２６７）において、乾癬（Ｎｅｓｔｌｅ他、１９
９４、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ、９４：２０２〜２０９）において、リンパ
増殖疾患（Ｎｅｓｔｌｅ他、１９９５、Ｄｅｒｍａｔｏｌ、１９０：２６５〜２
８０）において示されている。樹状細胞は、細菌由来スーパー抗原および可溶性
タンパク質抗原のＴ細胞への提示能について研究されている（Ｎｅｓｔｌｅおよ
びＮｉｃｋｏｌｏｆｆ、１９９５、ＡｄｖＥｘｐＭｅｄＢｉｏｌ、３７８
：１１１〜１１６）。

【００５８】結果表７には、生理食塩水で予備インキュベーションされた樹状細胞と比較したと
きの、オキシトシンで予備インキュベーションされた樹状細胞に対する刺激細胞
の数を関数とする３Ｈ−チミジン取り込みがカウント／分（ｃｐｍ）の単位で示
されている。

【表７】表７の結果は、オキシトシンにより、樹状細胞のＴＴ特異的Ｔ細胞増殖の誘導
が増大させることを示している。

【００５９】実施例５−皮膚ケラチノサイトの刺激材料および方法ＲｈｅｉｎｗａｌｄＪＧおよびＧｒｅｅｎＨ（「ヒト表皮ケラチノサイト
細胞株の連続培養：単一細胞からの角質化コロニーの形成」、Ｃｅｌｌ、６：３
３１〜３３４（１９７５））の手法をヒトケラチノサイトの培養に使用した。こ
の手法では、ウシ下垂体抽出物および上皮成長因子が補充された無血清ケラチノ
サイト培地が使用された。３代〜５代の継代を行った初代培養のケラチノサイト
を使用した。その後、ケラチノサイトをオキシトシンまたは生理食塩水で刺激し
た。その後、細胞培地を、酵素結合免疫吸着アッセイ（サンドイッチＥＬＩＳＡ
）を使用してＴＧＦ−ｂ１について分析した。

【００６０】ケラチノサイト療法ＴＧＦ−ｂ１は、分化、形態形成および傷害治癒において重要な様々なマトリ
ックスタンパク質の合成および沈着を刺激する最も効果的な成長因子の１つであ
ることがよく知られている（ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＲＨ、ＦｏｌｉｋｓＣＦ、
ＰｉｌｃｈＰＦ、ＳｍｉｔｈＢＤおよびＦｉｎｅＡ、「ヒト肺繊維芽細胞
の培養物におけるインスリンおよびインスリン様成長因子Ｉによるコラーゲン生
成の刺激」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、１２４：９６４〜９７０（１９８９）；Ｒ
ｏｂｅｒｔｓＡＢおよびＳｐｏｒｎＭＢ、ＴｈｅＨａｎｄｂｏｏｋｏｆ
ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、ＰｅｐｔｉｄｅＧ
ｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒｓａｎｄｔｈｅｉｒＲｅｃｅｐｔｏｒｓ（Ｓｐ
ｏｒｎＭＤおよびＲｏｂｅｒｔｓＡＢ（編）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌ
ａｇ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、１９８９年）、４１９頁〜４７２頁；Ｈｉｌｌ
ＤＪ、ＬｏｇａｎＡ、ＭｃＧａｒｒｙＭ、ＤｅＳｏｕｓａＤ：「塩基性
繊維芽細胞成長因子、インスリン様成長因子−ＩおよびＩＩ、インスリンならび
に形質転換成長因子−β１の相互作用による単離ウシ成長板軟骨細胞におけるタ
ンパク質およびマトリックス分子の合成調節」、ＪＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、１
３３：３６３〜３７３（１９９２））。重傷な皮膚傷害（多くの場合には熱傷）
の患者に移植するために、ケラチノサイトをインビボでコンフルエンスになるま
で培養する方法もた確立されている（ＧｒｅｅｎＨ、ＫｅｈｉｎｄｅＯおよ
びＴｈｏｍａｓＪ：「移植に好適な多様な上皮への培養ヒト表皮細胞の成長」
、ＰｒｏｃＮａｔＡｃａｄＳｃｉ（ＵＳＡ）、７６：５６６５〜５６６８
（１９７９））。従って、ケラチノサイト療法は、熱傷後だけでなく、皮膚の他
の先天的異常および後天的異常に関する新規治療法の無数の可能性を提供する。

【００６１】結果表８には、細胞培地におけるＴＧＦ−ｂ１濃度がｐｇ／ｍＬの単位で示されて
いる。

【表８】表８の結果は、オキシトシンにより、ケラチノサイトからのＴＧＦ−ｂ１の産
生が増大することを示している。

【００６２】実施例６−皮質骨厚さの刺激材料および方法Ｏｅｓｔｅｎｓｏｎ他（ＪＤｉａｂｅｔｅｓＣｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ
、１９９７年１１月；１１（６）：３１９〜３２２）の手法を使用した。Ｏｅｓ
ｔｅｎｓｏｎ他は、長期間の遺伝性のインスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）
の非肥満動物モデル、すなわち、８月齢のＧｏｔｏ−Ｋａｋｉｚａｋｉ（ＧＫ）
ラットにおける皮質骨厚さの減少によって示される骨減少症の発生を研究した。
さらに、運動神経の伝達速度をＧＫラットで測定した。月齢および体重を合わせ
たＷｉｓｔａｒラットをコントロールとして使用した。ＧＫラットは、コントロ
ールのラットと比較して、腹腔内グルコース耐性試験において著しいグルコース
不耐性を示した。約１５％減少した皮質骨の厚さが、ＧＫラットの中足骨（ｐ＜
＜０．００１）および上腕骨（ｐ＜＜０．０５）のＸ線分析で明らかになった。
座骨神経で測定された運動神経の伝達速度もまた、末梢神経障害の兆候として、
月齢を合わせたコントロールラットと比較してＧＫラットでは（１０％）減少し
た（ｐ＜＜０．０５）。従って、ＧＫラットは、肥満のない糖尿病性骨疾患の研
究に適したＮＩＤＤＭモデルであると考えられる。

【００６３】自発性糖尿病ラットにおけるオキシトシンの作用を研究するために、ｓｃオキ
シトシンおよび生理食塩水の作用を調べた：３匹のラット（コントロール）には
生理食塩水を与え、３匹のラットを、屠殺前の６ヶ月間にわたって月に５日間、
オキシトシンで１日に１回（１ｍｇ／ｋｇ体重）で治療した。その後、右上腕骨
を取り出し、Ｘ線撮影法に供した（Ｓｅｌｂｙ、ＤｉａｂｅｔｉｃＭｅｄ、５
：４２３〜４２８、１９８８；ＢｏｕｉｌｌｏｎＣａｌｃｉｆＴｉｓｓｕｅ
ｉｎｔ、４９：１５５〜１６０、１９９１）。ラットの上腕骨の平面Ｘ線写真
を撮影し、精密カリパスによるそれぞれの骨の骨幹の幅および内側の非皮質幅を
測定することによって分析した。皮質厚指数を、外側幅を内側の（海綿状）骨幹
幅で除することによって算出した。

【００６４】結果生理食塩水を与えた自発性糖尿病ラット（コントロールラット）では、皮質骨
厚指数は１．９±０．３であり、オキシトシン治療ラットでは２．１±０．２で
あった。この結果は、オキシトシンが皮質骨の厚さを刺激していることを示して
いる。

【００６５】実施例７−ケラチノサイトにおけるサルファーマスタード誘導細胞死（アポトーシス）の減少材料および方法正常なヒト上皮ケラチノサイトを初代培養物として得て、血清を含まないケラ
チノサイト成長培地で維持した。

【００６６】サルファーマスタードの作用サルファーマスタードは、カルシウム−カルモジュリン経路およびカスパーゼ
依存経路を介して皮膚に水疱を誘導する。サルファーマスタードは強力なアルキ
ル化剤であるために、非プリン部位によるＤＮＡ損傷、およびヌクレオチド内結
合分解の活性化を誘導するその能力が、発疱に至る１つの可能な経路として高め
られる。

【００６７】ＤＮＡ鎖の切断を誘導する他の薬剤と類似して、サルファーマスタードは、細
胞死（アポトーシス）を誘導すると考えられている機構である、細胞のニコチン
アミドアデニンジヌクレオチドおよびアデノシン三リン酸の濃度を著しく低下さ
せる核タンパク質ポリＡＤＰリボースポリメラーゼを刺激する。

【００６８】サルファーマスタードはケラチノサイトにおいてアポトーシスを誘導し得るこ
とが明らかにされているので、ケラチノサイトに、サルファーマスタードによる
処理と平行してオキシトシンを投与した。

【００６９】実験計画正常なヒト上皮ケラチノサイトを、組織培養フラスコで７０〜８０％のコンフ
ルエンスになるまで成長させ、その後、１００μＭまたは３００μＭの最終濃度
にケラチノサイト成長培地で希釈されたサルファーマスタードに１ｍＭのオキシ
トシンの存在下または非存在下で曝した。細胞生存率を細胞のトリパンブルー排
除能によって定した。

【００７０】結果アポトーシスは、大きさがヌクレオソーム程度のラダーの出現を特徴とする。
１００μＭのサルファーマスタードで治療された正常なヒト上皮ケラチノサイト
から単離されたＤＮＡは無傷であった。これは、３００μＭのサルファーマスタ
ードおよび１ｍＭのオキシトシンで治療された正常なヒト上皮ケラチノサイトの
場合にも認められた。一方、３００μＭのサルファーマスタードで治療された正
常なヒト上皮ケラチノサイトは、アガロースゲル電気泳動および臭化エチジウム
染色の後での目視検査で、大きさがヌクレオソーム程度のラダーが認められた。
２４時間でのトリパンブルー排除は、コントロール細胞では９７％であり、３０
０ｍＵのサルファーマスタードおよびオキシトシンによる治療の後では８８％で
あり、３００ｍＵのサルファーマスタードのみで治療された細胞では５７％であ
った。

【００７１】まとめると、オキシトシンはサルファーマスタードの毒性を低下させる。この
ことは、抗アポトーシス作用を示している。

【００７２】実施例８−ホルボールエステルおよびオキサゾロンで誘導される炎症からの保護

【００７３】材料および方法動物ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒから得られる雌性のＢＡＬＢ／ＣマウスおよびＣ
ｒｌ：ＮＭＲＩＢＲマウスを使用した。これらを、１４日間の順応期間の後、腹
腔マクロファージの採取（ＢＡＬＢ／Ｃ）のために、そしてアレルギー性接触皮
膚炎および刺激性接触皮膚炎の誘導（Ｃｒｌ：ＮＭＲＩＢＲ）のために使用した
。

【００７４】実験計画インビトロ実験において、オキシトシンを、５％または１０％の熱不活化ウシ
胎児血清が補充されたＲＰＭＩ１６４０（ＧｉｂｃｏＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏ
ｏｇｉｅｓ、英国）に溶解した。ペニシリン、ストレプトマイシン、Ｌ−グルタ
ミン、２−メルカプトエタノール、大腸菌由来のリポ多糖（ＬＰＳ）、オキサゾ
ロンおよびデキサメタゾンをＳｉｇｍａから入手し、組換えマウスインターフェ
ロン−γ、インターロイキン（ＩＬ）−１−β、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αお
よびＩＬ−１０の酵素結合免疫吸着アッセイキットをＧｅｎｚｙｍｅから得た。
ＲＰＭＩ１６４０には、ペニシリン、ストレプトマイシン、グルタミンおよび２
−メルカプトエタノールを補充した。チオグリコラート誘発マクロファージを、
Ｌａｍ他（ＣａｎＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ、３：９４〜１００、１９９２）
によって報告されているようにして得た。腹腔洗浄を、５％のウシ胎児血清を含
有する冷ＲＰＭＩの１０ｍＬを使用して行った。マクロファージを同じ培地で洗
浄して、２ｘ１０，０００，０００細胞／２ｍＬを、２４ウエルプレート（Ｎｕ
ｎｃ）において、ＬＰＳ、１０ｎｇ／ｍＬの各サイトカインタンパク質および亜
硝酸塩、ならびに１００μｇ／ｍＬのオキシトシンの存在下または非存在下、３
７℃で、加湿空気雰囲気中の５％ＣＯ_２のもとで６時間および２４時間培養した
。サイトカインを、市販のキットを使用して分析し、亜硝酸塩を、標準的なグリ
ースアッセイ（Ｇｒｅｅｎ他、ＡｎａｌＢｉｏｃｈｅｍ、１２６：１３１〜１
３８、１９８２）を使用して分析した。テトラデカノイルホルボール−１３−ア
セタート（Ｓｉｇｍａ）で誘導される刺激性接触皮膚炎を、１０μｌの０．０１
％ＴＰＡを８匹のマウスからなる群の左耳の内面に局所的に塗布することによっ
て開始させた。局所的治療は、刺激する３０分前に、試験領域を化合物またはビ
ヒクルＤＡＥ２４４（ジメチルアセトアミド：アセトン：エタノール；２：４：
４、ｖｏｌ／ｖｏｌ／ｖｏｌ）で治療した。右耳は、刺激および治療を行うこと
なく放置した。同一の治療を、陽性コントロールとして、デキサメタゾンで治療
を行った。刺激を加えた６時間後、標準的な条件のもとで動物を屠殺して、耳を
切断した。炎症を耳重量の増大として評価した（Ｓｔａｉｔｅ他、Ｂｌｏｏｄ、
８８：２９７３〜２９７９、１９９６）。オキシトシンの効き目を、ビヒクル−
コントロールの相対的な炎症阻害率として計算した。

【００７５】病理学的機構高濃度の前炎症性サイトカインおよび一酸化窒素は、様々なアレルギー疾患お
よび炎症疾患に関係する病理学的機構に関与することが考えられている。抗原刺
激または炎症攻撃の後、ヒスタミンおよびセロトニンなどのマスト細胞由来の媒
介因子が血管拡張を誘導して、血管の透過性を増大させ、その結果、水腫形成お
よび腫れが生じることが十分に確立されている。ジニトロフルオロベンゼンによ
り誘導される過敏性応答において、インターロイキンのｍＲＮＡの発現が表皮で
検出された。これらの条件で、ケラチノサイト、ランゲルハンス細胞、マクロフ
ァージおよびリンパ球は、部分的には、表皮における増大した量のサイトカイン
が局所的にそれらにより産生されることによって誘導される病理に寄与している
と考えられている。アトピー性皮膚炎では、サイトカインのインターフェロン−
γの発現が慢性の湿疹性皮膚障害を持続させていると考えられている（Ｔｈｅｒ
ｐｅｎ他、ＪＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌ、９７：８２８〜８
３７、１９９６）。ＮＯが、いくつかの皮膚病において認められている免疫学的
反応および炎症反応の強力な媒介因子であることもまた明らかにされている（Ｍ
ｏｒｉｔａ他、ＪＩｎｖｅｓｔＤｅｒｍａｔｏｌ、１０７：５４９〜５５２
、１９９６）。安全で効果的な治療法が炎症性皮膚疾患に求められている。いく
つかの確立された治療法が炎症性皮膚疾患に求められている。皮膚炎に関してい
くつかの確立された効果的な局所的治療および全身的治療が得られているが、そ
のすべてはいくらかの重篤な副作用で悩まされ、そのいくつかの処理は、その使
用を制限するさらなる不便な面を有している（Ｂｒｅｔｈｎａｃｈ、Ｔｅｘｔｂ
ｏｏｋｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ、２９６１〜３０
３６、１９９２；Ｈａｙ他、ＴｅｘｔｂｏｏｋｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ
、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ、Ｏｘｆｏｒｄ、１３９１〜１４５８、１９９２；Ｒｏｂ
ｅｒｔｓｏｎおよびＭａｉｂａｃｈ、ＴｏｐｉｃａｌＣｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒ
ｏｉｄｓ、Ｋａｒｇｅｒ、Ｂａｓｅｌ、１６３〜１６９、１９９２）。

【００７６】目的は、活性化マクロファージによる前炎症性媒介因子を産生するインビトロ
モデル、ならびに刺激性およびアレルギー性の接触皮膚炎の動物モデルを使用し
て、オキシトシンの強力な抗炎症作用を評価することであった。その理由は、炎
症プロセスが阻害された場合、細胞再生が促進されるからである。

【００７７】結果ＬＰＳ活性化マクロファージによる培養上清におけるサイトカイン放出の抑制オキシトシンの存在下で、または培地単独で２４時間インキュベーションされ
たマクロファージは、検出できるほどの量のサイトカインを培養上清に放出しな
かった。ＬＰＳによる上清の活性化は、培養上清へのＩＬ−１−β（３２±１１
ｐｇ／ｍＬ）、ＴＮＦ−α（２１２２±１８６ｐｇ／ｍＬ）、ＩＬ−１０（９８
±２２ｐｇ／ｍＬ）およびＩＦＮ−γ（２１１８±３８７ｐｇ／ｍＬ）の著しい
放出をもたらした。ＬＰＳおよびオキシトシンの両方を用いた細胞の同時培養は
それらの放出を阻害した：ＩＬ−１−β（６２％の阻害）、ＴＮＦ−α（２８％
の阻害）、ＩＬ−１０（６８％の阻害）およびＩＦＮ−γ（１２％の阻害）。

【００７８】ＬＰＳ活性化マクロファージによる培養上清における亜硝酸塩（ＮＯ代謝物）の阻害オキシトシンの存在下で、または培地単独で２４時間インキュベーションされ
たマクロファージは、検出できるほどの量の亜硝酸塩を培養上清に放出しなかっ
た。ＬＰＳを用いた上清の活性化（インキュベーション）は高レベルの亜硝酸塩
を誘導した（８．２±３．６μＭの亜硝酸塩）。ＬＰＳおよびオキシトシンの両
方を用いたマクロファージの同時培養は、亜硝酸塩の生成を著しく抑制した（４
．３±１．２μＭの亜硝酸塩）。

【００７９】ホルボールエステルオキサゾロンによって引き起こされる耳の炎症の抑制オキシトシンの潜在的なインビボ作用を評価するために、耳の水腫を、正常な
マウスの耳にホルボールエステル溶液を塗ることによって誘導した。オキシトシ
ン（１ｍｇ／耳）およびビヒクルを、接触刺激を誘導する３０分前に耳に塗布し
た。ビヒクル治療群の耳介の重量（ｍｇ単位）は３４．３±６．１であり、オキ
シトシン治療群では１７．９±９．７であり、著しく減少していた。オキシトシ
ンの抗炎症作用を、オキサゾロンで誘導される耳の炎症においても調べた。この
モデルでは、マウスを、オキサゾロンで、剃毛した腹部に感作した。７日後、接
触過敏性を、ハプテンを耳に塗布することによって誘発させた。局所的に塗布さ
れたオキシトシンの抗炎症作用を、ハプテンを塗布した３０分後に調べた。治療
の効き目を２４時間後に評価した。ビヒクルで治療した後の耳介重量（ｍｇ）は
３２．６±７．５ｍｇであり、オキシトシン（１ｍｇ／耳）を局所塗布した後で
は１９．６±８．７ｍｇであった。

【００８０】まとめると、本発明者らの知見により、オキシトシンは、活性化されたマクロ
ファージを使用したインビトロ研究から示唆されるように前炎症性媒介因子の放
出を抑制することよって、ホルボールエステルおよびオキサゾロンで誘導される
耳の炎症に対する保護作用を示すことが示唆される。

【００８１】実施例９−老化皮膚およびバリア形成に対するオキシトシン治療の効果材料および方法Ｈａｎｌｅｙ他、ＪＩｎｖｅｓｔＤｅｒｍａｔｏｌ、１０６：４０４〜４
１１（１９９６）；Ｈａｎｌｅｙ他、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ、９７：２５
７６〜２５８４（１９９６）のプロトコルを使用した。

【００８２】これまでの研究保護バリアは生命にとって必須であるので、表皮および角質層の発達は出生前
に完了しなければならない（Ｋｏｍｕｖｅｓ他、ＪＩｎｖｅｓｔＤｅｒｍａ
ｔｏｌ、１９９８年９月；１１１（３）：４２９〜４３３）。表皮の透過性バリ
アは、脂質に富むマトリックスに埋もれた角質細胞から構成される。子宮発達に
おいて密接に平行しているラット胎児の皮膚発達の外植片モデルを使用した最近
の研究により、ホルモン、および核レセプターファミリーに属する他の活性化因
子が、脂質代謝、および細胞外脂質ラメラの形成を刺激することによって透過性
バリアの個体発生を調節することが明らかにされている。Ｋｏｍｕｖｅｓ他の結
果は、いくつかのホルモンおよび核ホルモンレセプター活性化因子が、ケラトヒ
アリン顆粒および角質化外皮の両方の重要な成分に影響する胎児発達時の表皮分
化を調節していることを明らかにしている。従って、様々なリガンド／核レセプ
ター活性化因子は、透過性バリアの個体発生だけでなく、角質層形成に必須な構
造タンパク質の発現をも促進する。

【００８３】これまでの研究により、表皮透過性バリアおよび肺の個体発生は胎児ラットに
おいて平行して生じていることが明らかにされている。性もまた肺の成熟化に影
響している。すなわち、オスでは遅れた発達を示す。性ステロイドホルモンは、
肺の成熟化に対して反対の作用を示す。エストロゲン類は促進し、アンドロゲン
類は阻害する。最近の研究において、Ｈａｎｌｅｙ他（１９９６）は、水の経皮
的喪失として測定される皮膚のバリア形成が雄性胎児ラットにおいて遅れること
を明らかにしている。エストロゲンを妊娠母体に投与することによって、胎児の
バリア発達が形態および機能の両方において促進される。十分なバリアはまた、
エストロゲンを補充した培地においてインビトロでインキュベーションされた皮
膚の外植片でより早く形成される。対照的に、ジヒドロテストステロンは、イン
ビボおよびインビトロの両方でバリア形成を遅らせる。最後に、妊娠ラットをア
ンドロゲンアンタゴニストのフルタミドで治療することによって、バリア形成の
性差がなくなる。

【００８４】老化した表皮は、変化した薬物透過性、刺激接触皮膚炎に対する増大した感受
性、および多くの場合には重篤な乾燥症を示す。これらは、老化した表皮バリア
の障害を示唆している。表皮老化の機能的、構造的および生化学的な基礎を明ら
かにするために、Ｇｈａｄｉａｌｌｙ他（ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ、１９９
５年５月；９５（５）：２２８１〜２２９０）は、若年者（２０〜３０才）対高
齢者（＞８０才）のヒト被験者において、そしてマウスモデルにおいてバリア機
能を比較した。高齢者ヒトおよび老齢マウスの両方における基礎的な水の経皮喪
失は正常値よりも低かった。しかし、老化したバリアは、アセトンまたはテープ
剥離のいずれかでより容易に乱された（高齢者対若年者の被験者において、それ
ぞれ、１８±２剥離対３１±５剥離）。さらに、アセトン治療またはテープ剥離
のいずれかの後で、バリアは、高齢者の場合、若年被験者の場合よりも遅く回復
した（若年ヒト被験者では２４時間および７２時間でそれぞれ５０％および８０
％であったが、これに対して高齢被験者では２４時間で１５％の回復であった）
。その後の６日間ではさらに遅れた。バリア回復における同様な差が老齢マウス
対若年マウスで認められた。総脂質含有量は老齢マウスの角質層で（約３０％）
減少していたが、（セラミド１を含む）セラミド、コレステロールおよび遊離脂
肪酸の分布は変化していなかった。さらに、正常な量のエステル化された超長鎖
脂肪酸が存在していた。最後に、角質層のラメラ二重層は、正常な基本構造およ
び大きさを示していたが、数が巣状に減少し、ラメラ体含有量の分泌が低下して
いた。従って、基礎的な条件のもとでの老化表皮におけるバリア機能の評価は、
バリアの一体性およびバリア修復がともに著しく異常であるために誤解されてい
る。これらの機能的な変化は、角質層空隙におけるラメラ二重層の低下をもたら
すすべての重要な角質層脂質の全体的な不足に起因し得る。これらの一連の知見
により、外因的および環境的な攻撃に対する本質的に老化した皮膚の増大した感
受性が説明され得る。

【００８５】結果（研究プロトコルにおいてエストロゲンと交換された）オキシトシンを投与す
ることの効果の検討において、本発明者らの結果は、オキシトシンは皮膚に対す
る直接的な作用によって皮膚のバリア形成を促進することを示している。別の１
連の研究において、本発明者らは、オキシトシンの局所的適用が老化皮膚におけ
る総脂質含有量に影響するかどうかを調べることを試みた。オキシトシンを２１
日間にわたって毎日反復的に適用することによって、総脂質含有量が老化皮膚に
おいて１．１〜１．６％増大した。このことは、オキシトシンの局所的適用は、
外因性および環境的な攻撃に対する保護作用を有し得ることを示唆している。

【００８６】実施例１０−細胞のエネルギー消費の減少この研究の目的は、細胞内Ｃａ^２＋に対するオキシトシンの作用を調べること
であった。本発明者らは、ヒト結腸腫瘍細胞株ＨＴ−２９およびパッチクランプ
技術を使用した。近年、Ｓａｎｄ他（ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌ、１９９７年１
０月；２７３（４Ｐｔ１）：Ｃ１１８６〜Ｃ１１９３）はパッチクランプ技術を
使用して、ＨＴ−２９細胞に対するカルバコール（ＣＣｈ）の作用を調べた。Ｃ
Ｃｈに曝しているとき、細胞（ｎ＝２３）は、Ｃｌ−の平衡電位（Ｅ（Ｃｌ−）
；−４８ｍＶ）の近くまで分極し、その後、膜電位が振動し始めた（１６／２３
細胞）。電圧クランプ実験において、全細胞電流における類似した振動が明らか
にされ得る。全細胞伝導率は、コントロール溶液における２２５±２５ｐＳから
６．７２８±１．１６５ｐＳにまで増大した（平均±ＳＥ、ｎ＝１７）。置換実
験（浴溶液において２２ｍＭのＣｌ−、Ｅ（Ｃｌ−）＝０ｍＶ）において、反転
電位は、−４１．６±２．２ｍＶ（平均±ＳＥ、ｎ＝９）から−３．２±２．０
ｍＶ（平均±ＳＥ、ｎ＝７）にまで変化した。細胞をカルシウム感受性蛍光色素
のｆｌｕｏ３で負荷し、同時にパッチクランプ処理した場合、ＣＣｈは、蛍光お
よび膜電位の同時的な振動パターンを引き起こした。細胞結合パッチにおいて、
ＣＣｈで活性化された電流は、ピペットでのコントロール溶液の場合には１．９
±３．７ｍＶ（平均±ＳＥ、ｎ＝１１）の相対膜電位で、そしてピペットでの１
５ｍＭのＣｌ−溶液の場合には４６．２±５．３ｍＶ（平均±ＳＥ、ｎ＝１０）
の相対膜電位で反転した。高濃度のＫ⁻（１４４ｍＭ）は反転電位を大きく変化
させなかった（ｐ＜＜または＝０．０５、ｎ＝８）。裏返しにしたパッチにおい
て、１９ｐＳ（ｎ＝７）の伝導率を有するカルシウム依存性Ｃｌ−チャンネルが
明らかにされ得る。Ｓａｎｄ他は、ＣＣｈにより、カルシウム依存性Ｃｌ−チャ
ンネルおよびＫ⁻透過性が関与する膜電位の振動が引き起こされると結論した。

【００８７】結果同じ条件を使用して、本発明者らは、１ｍＭオキシトシンの作用を調べた。オ
キシトシンに曝しているとき、細胞（ｎ＝２）は、Ｃｌ−の平衡電位（Ｅ（Ｃｌ
−）；−４８ｍＶ）の近くまで分極し、その後、膜電位が振動し始めた。電圧ク
ランプ実験において、全細胞電流における類似した振動が明らかにされ得る。全
細胞伝導率は、コントロール溶液における２３４±２６ｐＳから６．２６２±１
．４３４ｐＳにまで増大した（平均＋／−ＳＥ、ｎ＝２）。細胞をカルシウム感
受性蛍光色素のｆｌｕｏ３で負荷し、同時にパッチクランプ処理した場合、オキ
シトシンは、蛍光および膜電位の同時的な振動パターンを引き起こした。細胞結
合パッチにおいて、オキシトシンで活性化された電流は、２．６２の相対膜電位
で反転した。裏返しにしたパッチにおいて、１４ｐＳ（ｎ＝２）の伝導率を有す
るカルシウム依存性Ｃｌ−チャンネルが明らかにされ得る。まとめると、オキシ
トシンは、エネルギー消費を低下させる。

【００８８】オキシトシンによる刺激は細胞内Ｃａ^２＋振動を増大させることが見出された
。細胞内Ｃａ^２＋での振動は、種々の細胞タイプに共通したパターンである。Ｃ
ａ^２＋振動において、細胞は、周期および振幅の両方について外部刺激に対する
応答を調節する能力を有する。Ｗｏｒｄｓ他（Ｎａｔｕｒｅ、３１９：６００〜
６０２、１９８６）による研究において、カルシウム振動がラットの肝細胞で認
められた。Ｗｏｒｄｓ他は、カルシウム過渡電流の周期により、カルシウムシグ
ナルを開始させるホルモンに対する応答が決定されることを示唆した。エネルギ
ーの観点から、カルシウム過渡電流は細胞内のカルシウム負荷を低下させ、従っ
て、活性化されるカルシウム貯蔵器官の膜におけるＡＴＰ消費のカルシウムポン
プの必要性を低下させる。［Ｃａ^２＋］の持続した増大は細胞を損傷し得ること
もまたよく知られている（Ｓｈｕｔｔｌｅｗｏｒｔｈｅ，Ｔ．Ｊ．Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｂｉｏｌ．２００：３０３〜３１４、１９９７）。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、餌制限または自由摂食させ、ＮａＣｌおよびオキシトシンで治療され
た母体における妊娠の最初の１４日間および２０日間における母体の正味重量（
総体重−子宮重量（胎児および胎盤組織を含む））の増大を示す。栄養摂取効果
（ｐ＜０．００１）、治療効果（ｐ＝０．０６）、妊娠日数効果（ｎｓ）、有意
な相互作用は認められない。四角はＳＥＭを表し、棒はＳＤを表す。

【図２】図２は、餌制限または自由摂食させ、ＮａＣｌおよびオキシトシンで治療され
た母体における妊娠１４日目および２０日目の子宮近くの脂肪組織を示す。栄養
摂取効果（ｐ＜０．００１）、治療効果（ｎｓ）、妊娠日数効果（ｎｓ）、相互
作用（妊娠日数ｘ治療）（ｐ＜０．０５）、他の有意な相互作用は認められない
。＊自由摂食させたオキシトシン治療群とＮａＣｌ治療群との妊娠２０日目にお
ける有意（ｐ＜０．０５）差。四角はＳＥＭを表し、棒はＳＤを表す。

【図３】図３は、餌制限または自由摂食させ、ＮａＣｌおよびオキシトシンで治療され
た母体における妊娠１４日目および２０日目の腹膜後腔の脂肪組織を示す。栄養
摂取効果（ｐ＜０．００１）、治療効果（ｎｓ）、妊娠日数効果（ｎｓ）、相互
作用（妊娠日数ｘ治療）（ｐ＜０．０５）、他の有意な相互作用は認められない
。＊自由摂食させたオキシトシン治療群とＮａＣｌ治療群との妊娠２０日目にお
ける有意（ｐ＜０．０５）差。四角はＳＥＭを表し、棒はＳＤを表す。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年１１月６日（２０００．１１．６）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【化１】式中、Ｖは、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群から選択され、Ｗは、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｈｏｐｈ、ＰｈｅおよびＣｈａからなる群から選択さ
れ、Ｘは、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、ＡｒｇおよびＤａｂａからなる群か
ら選択され、Ｙは、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、無し、Ｖａｌ、Ｈｏｓ、ＤａｂａおよびＣｉ
ｔからなる群から選択され、Ｚは、Ｇｌｙ、無しおよびＡｌａからなる群から選択される。

【化２】（式中、Ｖは、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群から選択され、Ｗは、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｈｏｐｈ、ＰｈｅおよびＣｈａからなる群から選択さ
れ、Ｘは、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、ＡｒｇおよびＤａｂａからなる群か
ら選択され、Ｙは、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、無し、Ｖａｌ、Ｈｏｓ、ＤａｂａおよびＣｉ
ｔからなる群から選択され、Ｚは、Ｇｌｙ、無しおよびＡｌａからなる群から選択される）からなる群から選択されることを特徴とする、胎児成長刺激、ヒト皮膚樹状細胞
の刺激、皮膚ケラチノサイトの刺激、皮質骨厚さの刺激、アポトーシスの低下、
ホルボールエステルおよびオキサゾロンにより誘導される炎症からの保護、老化
皮膚およびバリア形成に対する作用のための薬学的組成物。

【請求項８】有効濃度の少なくとも１つのオキシトシン活性物質を含むこ
とを特徴とする、胎児成長を促進させるための組成物。

【手続補正書】

【提出日】平成１３年６月７日（２００１．６．７）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【化２２】式中、Ｘ_１はＬｅｕ又は単結合である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 13/10 Ａ６１Ｐ 17/00 15/08 25/02 17/00 25/28 25/02 27/00 25/28 43/00 １０７ 27/00 Ｃ０７Ｋ 7/16 ＺＮＡ 43/00 １０７Ａ６１Ｋ 37/34 // Ｃ０７Ｋ 7/16 ＺＮＡ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4C084 AA17 AA18 BA26 DB28 MA02 ZA02 ZA20 ZA32 ZA81 ZB22 4C086 AA01 AA02 BC38 MA02 ZC80 4H045 AA30 BA14 BA15 BA32 CA40 DA34 EA21

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】インビトロおよびインビボで不妊症を治療すること、ならび
に末梢神経障害および中枢神経障害を治療することなどの細胞再生を改善させる
ための薬学的組成物を調製するための、オキシトシン活性物質の使用。
【請求項２】前記オキシトシン活性物質は下記の化合物からなる群から選
択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用：【化１】式中、Ｖは、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群から選択され、Ｗは、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｈｏｐｈ、ＰｈｅおよびＣｈａからなる群から選択さ
れ、Ｘは、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、ＡｒｇおよびＤａｂａからなる群か
ら選択され、Ｙは、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、無し、Ｖａｌ、Ｈｏｓ、ＤａｂａおよびＣｉｔからな
る群から選択され、Ｚは、Ｇｌｙ、無しおよびＡｌａからなる群から選択される。
【請求項３】前記オキシトシン活性物質は、オキシトシン、メソトシン、
イソトシン、アネトシン、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、
配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９の化合物か
らなる群から選択されることを特徴とする、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】有効濃度の少なくとも１つのオキシトシン活性物質を混合物
で、あるいは少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤ととも
に含み、かつ前記オキシトシン活性物質が、オキシトシン以外の下記の化合物：【化２】（式中、Ｖは、ＴｙｒおよびＰｈｅからなる群から選択され、Ｗは、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｈｏｐｈ、ＰｈｅおよびＣｈａからなる群から選択さ
れ、Ｘは、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｉｔ、ＡｒｇおよびＤａｂａからなる群か
ら選択され、Ｙは、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、無し、Ｖａｌ、Ｈｏｓ、ＤａｂａおよびＣｉｔからな
る群から選択され、Ｚは、Ｇｌｙ、無しおよびＡｌａからなる群から選択される）からなる群から選択されることを特徴とする、細胞再生を改善させるための薬学
的組成物。
【請求項５】前記オキシトシン活性物質は、メソトシン、イソトシン、ア
ネトシン、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配
列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９の化合物からなる群から選
択されることを特徴とする、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項６】前記組成物は、オキシトシンの放出を増大させ、かつ／また
はエストロゲンなどのレセプターの数または親和性を増大させる物質、あるいは
α_２アゴニスト作用を有する薬物（クロニジンなど）を含むことを特徴とする、
請求項４または５に記載の薬学的組成物。
【請求項７】前記有効濃度が４〜７０重量％であり、好ましくは０．１〜
５０重量％であることを特徴とする、請求項４〜６に記載の薬学的組成物。
【請求項８】前記組成物は、心筋麻痺または心臓発作、萎縮、パーキンソ
ン病およびアルツハイマー病などの変性疾患、乾癬、骨粗鬆症、移植後、平衡障
害、子宮破裂、肝臓破裂、腎臓破裂の後での治癒過程において、例えばガン治療
後での血液細胞（例えば、赤血球、白血球およびリンパ球）の増殖を回復させる
ために、家畜の体重を増大させるために、ヒトの感覚を増大させるために（例え
ば、老化の結果として損なわれた視力、聴力、嗅覚および味覚を改善するために
）、失禁問題を軽減するために、皮膚を若返らせて、老化の結果としてのしわを
妨げるための化粧品適用において、治癒能を増大させるために手術前に、そして
毛および爪の成長を助けるために使用されることを特徴とする、請求項４〜７に
記載の薬学的組成物。
【請求項９】有効濃度の少なくとも１つのオキシトシン活性物質を含むこ
とを特徴とする、胎児成長を促進させるための組成物。