JP2002524402A

JP2002524402A - 神経保護

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Publication number: JP2002524402A
Application number: JP2000568459A
Authority: JP
Inventors: アルヤン・シェーペンス; クリス・エドワード・ウィリアムズ; ピーター・デイビッド・グルックマン; ロス・グラハム・クラーク
Original assignee: Neuronz Ltd
Current assignee: Neuronz Ltd
Priority date: 1998-09-03
Filing date: 1999-09-03
Publication date: 2002-08-06
Also published as: AU5885999A; EP1109572A2; WO2000013650A3; WO2000013650A2; BR9913457A; US7304029B1; EP1109572A4; CA2343214A1; CN1316908A; AU757907B2; CN1261158C

Abstract

(57)【要約】本発明は、神経保護およびそれに使用する薬物に関する。神経保護は、第一に成長ホルモン、成長ホルモン類似物または機能的に均等なリガンドを含む薬物を使用して、神経成長ホルモンレセプター類を活性化することにより誘起させる。この薬物は、１種またはそれ以上の第２の神経保護因子を含むことができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は神経保護に関する。本発明は、とりわけ、神経保護における、成長ホ
ルモン、その類似物、および機能的に均等なリガンドの新たな治療的使用に関す
る。

【０００２】背景成長ホルモンレセプター/結合タンパク質(ＧＨＲ/ＢＰ)の存在が、幼若体(Lob
ie et al (1993))および成体(Burton et al (1992))両方のラットの脳で報告さ
れており、そしてその分布のパターンは特に幼若ＣＮＳで広範囲であるとみられ
ている。成体への発育過程でのＧＨＲ/ＢＰの発現も、発達中のＣＮＳにおける
ＩＧＦ-１およびＩＧＦ-１レセプター発現と同様であるとみられており、主に胎
児および生後の初期状態において産生され、その後減退する(Bartlett et al (1
991), Bondy and Lee (1993), Garofalo et al (1989))。トランスジェニックマ
ウスの研究でＩＧＦ-１ノックアウトマウスおよび成長ホルモン欠乏性マウスの
両方が、低髄鞘能、小頭症脳(hypomyelinated, microcephalic brains)であるこ
とが示され(Beck et al (1995), Noguchi (1991))、これは、成長ホルモンおよ
びＩＧＦ-１は両方共、脳の成長、発達および髄鞘形成で役割があることを示し
ている。成長ホルモン欠乏性小児についての最近の研究で、成長ホルモン分泌に
影響する視床下部障害と視覚モーター心理検査でのそれらの相対的スコアとはで
著しい相互関係があることが分かり、これはソマトトロピン軸(axis)異常と認知
動作減少との関連を示している(Andronikof-Sanglade et al (1997))。

【０００３】しかし、成長ホルモンの神経保護機能はこれまで全く示されたことがない。("
神経保護(性)(neuroprotective)"とは、ＣＮＳ中で神経防護的能力および/また
はニューロン救済能力を示すことを意味する。)米国特許第4,791,099号は、中枢
神経系疾患の症状を成長ホルモンとアンドロゲンの組合せで処置できるとして記
載しているが、成長ホルモン単独の投与は教示していない。疑いなく、米国特許
第4,791,099号は、成長ホルモンには、同化作用以外に、アンドロゲン類の回復
作用に対して処置患者をより受容性にすることについては何も教示していない。
神経防護的能力およびニューロン救済能力についても全く示唆していない。

【０００４】出願人は、成長ホルモンはそれ自身が神経保護性であることを見出した。この
見出は、成長ホルモンとＩＧＦ-１間のソマトトロピン軸の関係、およびＩＧＦ-
１がインビトロおよびインビボで神経救済能力を有することが示されているにし
ても、驚くべきことなのである(see Knusel et al (1990), Guan et al (1993))
。これは、ＩＧＦ-１はＩＧＦ-１レセプターを経由して作用するのに対し、成長
ホルモンはそうではないためである。このように、ＩＧＦ-１は線条体中では神
経保護性であり、そこにはＩＧＦ-１レセプターが存在することが報告されてい
るが視床中には存在しないのに対して(Hill et al (1986) Neuroscience 17:112
7; Lesinak et Cl (1988) Endocnnology 123:2089))、成長ホルモンは視床では
神経保護性であり、そこに、成長ホルモンレセプターの免疫反応の分布が報告さ
れているが(Lobie et al (l993) Developmental Brain Research 74: 225)、線
条体中での分布は報告されていない。さらに、そして出願人が見出したように、
成長ホルモンを脳に中枢的に投与すると、ＩＧＦ-１レベルの同時的増加効果を
伴わないで神経保護性である。本発明がベースとするところはこれらの驚くべき見出である。

【０００５】発明の概要第一の態様として、本発明は、成長ホルモン、その類似物または機能的に均等
なリガンドを患者の脳に投与する段階を含む、該患者の脳中で神経保護効果を誘
起させる方法を提供する。本明細書で使用するとき、"類似物"とは、少なくとも実質的に有効成分と均等
な生物学的活性を有する、有効成分のフラグメントまたは異型を意味する。 "機能的に均等なリガンド"の用語は、成長ホルモンが結合し活性化する脳中の
神経レセプターに結合し活性化する因子を意味する。さらなる態様として、本発明は、患者の脳中で成長ホルモンまたは機能的に均
等な内因性リガンドの有効濃度を増加させる段階を含む、該患者の脳中で神経保
護効果を誘起させる方法を提供する。好ましくは、該成長ホルモン/類似物/リガンドの有効濃度を直接投与により増
加させる。あるいは、成長ホルモンまたはリガンドの有効濃度を、成長ホルモンまたはリ
ガンドの産生を刺激する因子、あるいは成長ホルモン/リガンド活性の阻害を少
なくするかまたは防ぐ因子のいずれかの投与により増加させる。好ましくは、該神経保護効果は神経救済(neural rescue)効果である。あるいは、該神経保護効果は神経防護的効果である。さらなる態様では、本発明は、患者の脳中の、成長ホルモン、その類似物また
は機能的に均等なリガンドの有効量を増加させる段階を含む、患者を処置して、
さもなければ先のニューロンの障害の結果として死ぬであろうニューロンを救済
する方法を提供する。本明細書で使用するとき、"ニューロンの障害"とは、その最も広い可能性のあ
る意味で用い、そして、トラウマ(損傷)、変成疾患および変成異常、運動疾患お
よび運動異常、脱髄性疾患および脱髄性異常、神経学的症候群、眼疾患、および
睡眠異常によるニューロンの障害を包含する。

【０００６】出願人は、成長ホルモンの神経保護の役割が、神経成長ホルモンレセプターを
介するものであることを見出した。"神経成長ホルモンレセプター"とは、成長ホ
ルモンがそれに結合するおよび/または活性化する、または成長ホルモンが結合
し活性化する能力のある、脳中に存在する何れのレセプターをも意味する。この
ようなレセプターには、成長ホルモンレセプター(ＧＨＲ)およびプロラクチンレ
セプター(ＰＲＬ-Ｒ)が含まれる。従って、本発明のさらなる態様では、患者の脳中の神経成長ホルモンレセプタ
ーの活性の増加を引き起こす段階を含む、該患者の脳中で神経保護効果を誘起す
る方法を提供する。好ましくは、活性の増加が、該神経成長ホルモンレセプターの活性を強める因
子の、該患者の脳への直接投与によるものである。好ましくは、該因子は成長ホルモンレセプターと直接結合する因子である。そ
のような因子は、プロラクチン、プロラクチンの類似物、胎盤ラクトゲンまたは
胎盤ラクトゲンの類似物などの、成長ホルモン、その類似物または機能的に均等
なリガンドであり得る。

【０００７】あるいは、該因子は、神経成長ホルモンレセプターと結合する因子の活性濃度
を増大させる(すなわち、投与因子が間接的に作用する)因子である。好ましくは
、そのような因子は、成長ホルモン放出タンパク質(ＧＲＰ)、成長ホルモン放出
ホルモン(ＧＨＲＨ)、それらの機能的に均等な分泌促進物質、およびソマトスタ
チン放出阻害因子(ＳＲＩＦ)から選択される。該方法は神経防護的なものが都合がよい。あるいは、該方法は神経救済効果を誘起する。さらなる態様として、本発明は、患者の脳中で神経成長ホルモンレセプターの
活性の増加をもたらす段階を含む、患者を処置してさもなければ先のニューロン
の障害の結果として死ぬであろうニューロンを修復する方法を含む。

【０００８】出願人は、成長ホルモンまたはその類似物/リガンドをニューロン細胞の一次
個体集団を救済し、第二の神経保護因子を投与してニューロン細胞の二次個体集
団を保護する、組合せ療法も企図している。従って、本発明は、さらに、成長ホ
ルモン、その類似物、または機能的に均等なリガンドを、別の神経保護因子と組
合せて投与することを含む、患者を処置してニューロンを保護する方法をも提供
する。

【０００９】好ましくは、この別の神経保護因子を、ＩＧＦ-１、ＧＰＥ、アクチビン、Ｎ
ＧＦ、ＴＧＦ-β成長ホルモン結合タンパク質、ＩＧＦ-結合タンパク質、および
ｂＦＧＦから選択する。都合よいことに、この方法はニューロンの救済効果を誘起し、さもなければニ
ューロンの障害の結果として死ぬであろうニューロンを救済する。ある態様では、障害はハンチントン舞踏病またはアルツハイマー病であり、そ
して該成長ホルモン/類似物/リガンドを、ＧＰＥ、ＩＧＦ-１およびアクチビン
の１つまたはそれ以上と組合せて投与する。さらなる態様では、障害は大脳皮質基底核変性病(corticobasal degeneration
)またはスティール・リチャードソン・オルゼウスキー症候群であり、そして該
成長ホルモン/類似物/リガンドをＩＧＦ-１と組合せて投与する。別の態様では、障害はデビック病またはピック病であり、そして該成長ホルモ
ン/類似物/リガンドをＧＰＥおよびＩＧＦ-１の１つまたはそれ以上と組合せて
投与する。別の態様では、障害は糖尿病性神経障害であり、該成長ホルモン/類似物/リガ
ンドをアクチビンおよびＩＧＦ-１の１つまたは両方と組合せて投与する。さらなる態様として、本発明は、成長ホルモン、その類似物または機能的に均
等なリガンドと、ＩＧＦ-１以外の１つまたはそれ以上の選択した第２の神経保
護因子、好ましくはＧＰＥ、アクチビン、ＮＧＦ、ＴＧＦ-β、成長ホルモン結
合タンパク質、ＩＧＦ結合タンパク質およびｂＦＧＦの１つまたはそれ以上との
組合せを含む、さもなければ先のニューロンの障害の結果として死ぬであろうニ
ューロンを救済するための、患者の処置用薬物を提供する。好ましくは、該薬物はさらにＩＧＦ-１を含む。さらなる態様として、本発明は、神経保護性薬物の調製における、成長ホルモ
ンまたはその類似物または機能的に均等なリガンドの使用を提供する。好ましくは、該薬物は、さもなければニューロンの障害の結果として死ぬであ
ろうニューロンの救済用のものである。

【００１０】図面の簡単な説明上記で本発明を大まかに定義しているが、当業者には、それらに限定される意
図のものではなく、さらに下記で実施例として提供する実施態様も含んでいるこ
とは自明であるだろう。加えて、本発明は添付の図面の参照によって、よりよく
理解されるであろう：図１は、緩和なＨＩに続く、血清およびＣＳＦＩＧＦ-１レベルにおける、Ｉ
ＣＶラット成長ホルモン処置の効果を示す；図２は、緩和なＨＩに続くニューロンのスコアにおける、ＩＣＶラット成長ホ
ルモン処置の効果を示す；そして図３は、緩和なＨＩに続くニューロンの生存への、ＩＣＶラット成長ホルモン
処置の効果を示す。

【００１１】発明の記載本発明は上記概説のように、神経保護に関するものである。これは、救済を中
核とする、神経防護およびニューロン救済の両方の意味におけるものである。出願人は、神経保護およびとりわけニューロン救済を、２種のアプローチで成
し得ることを見出した。第一のアプローチは、成長ホルモン、その類似物、およ
び機能的に均等なリガンドを中核として経由するものである。出願人は患者の脳
内での成長ホルモン、その類似物または機能的に均等なリガンドの有効濃度を増
加させることが、神経保護効果およびとりわけニューロン救済効果を誘起させる
ことを見出した。このアプローチで用いる成長ホルモンは、例えば、ヒト成長ホルモン、ラット
成長ホルモンおよびブタ成長ホルモンなど、いかなる哺乳類の成長ホルモンでも
よい。しかしながら、患者がヒトである場合は採用する成長ホルモンはヒト成長
ホルモンであることが好ましい。本発明で使用する成長ホルモンは、実質的に精製した、天然の、組換え体とし
て生成させた、または化学的に合成した形態であることができる。例えば、成長
ホルモンは、血液から、例えば血清または血漿などから、既知方法で直接単離す
ることができる。例えば、Phillips (1980) New Eng J. Med 302:371-380; Svob
oda et al (1980) Biochemistry 19:790-797; Cornell and Boughdady (1982) P
rep. Biochem. 12:57; Cornell and Boughdady (1984) Prep. Biochem. 14: 123
; 欧州特許番号 EP 123,228; および米国特許第4,769,361号参照。あるいは、成
長ホルモンは、ペプチド技術の当業者に知られている幾つかの技術のいずれかで
、化学的に合成することができる。例えば、Li et al (1983) Proc. Natl. Acad
. Sci. USA 80:2216-2220, Stewart and Young (1984) Solid Phase Peptide Sy
nthesis (Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois, USA) および Barany
and Merrifield (1980) The peptides: Analysis, Synthesis, Biology, ed. G
ross and Meienhofer, Vol 2 (Academic Press, New York, 1980), pp 3-254 (
固相ペプチド合成技術); および Bodansky (1984) Principles of Peptide Synt
hesis (Springer-Verlag, Berlin); および Gross and Meienhofer, eds (1980)
The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, Vo1 1 (Academic Press, New
York, USA) (古典的液相合成)参照。成長ホルモンも、同時的マルチプルペプチ
ド合成法によって化学的に調製することができる。例えば、Houghten (1985) Pr
oc. Natl. Acad. Sci, USA 82:5131-5135および米国特許第 4,631,211号参照。

【００１２】組換えＤＮＡ技術による遺伝子工学は、成長ホルモンを調製するのに最も有効
な方法でり得る。これらのタンパク質をコードするヒトＤＮＡ配列は既知のもの
であり、そして、発現目的で宿主細胞中へ導入することができる。このタンパク
質は、大腸菌、酵母、昆虫および哺乳動物の細胞中で、組換えＤＮＡ技術によっ
て調製することができる。シグナル配列を、向神経治療薬をコードしているＤＮ
Ａ配列に加えることにより、分泌したポリペプチドを調製することができる。さ
らに、ＤＮＡ配列を変調して、フラグメント、類似物、または誘導物とすること
ができる。このような組換えＤＮＡ技術は当分野で一般的に利用されている。

【００１３】最も都合よいことは、成長ホルモンの有効濃度を、成長ホルモン自体または成
長ホルモンプロドラッグ(体内で開裂して成長ホルモンを放出する形態)の何れか
を使用して直接投与により増加させることであろう。しかしながら、本願発明は
、成長ホルモンアゴニストまたは分泌促進物質のいずれか（脳内での成長ホルモ
ン産生を直接増加させる物質(成長ホルモン放出ペプチド類(ＧＨＲＰ)、例えば
、ＧＨＲＰ-1、ＧＨＲＰ-2、ＧＨＲＰ-6、ヘキサレリン(Hexarelin)、G-7039、G
-7502、L-692,429、L-692,585、L-163,191など [Deghenghi et al. (1994) Life
Sci. 54:1321; Bowers (1993) J. Paed Endocrinol. 6:21; Smith et al. (199
3) Science 260:1640; McDowell et al. (1995) Proc Natl. Acad. Sci. USA 92
:11165; Patchett et al. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:7001; Clark
and Robinson(1996) Cytokine and Growth Factor Reviews 7(1):65]、または
成長ホルモン放出ホルモン(ＧＨＲＨ)[Frohman et al. (1992) Front Neuroendo
crinol. 13:344; Clark and Robinson (1996) Cytokine and Growth Factor Rev
iews 7(1):65]、または成長ホルモンアンタゴニストのインヒビター(体内で成長
ホルモンを結合するか、またはさもなければ体内での成長ホルモンの作用または
産生を妨げるかまたは減少させる物質)）、の投与により、成長ホルモン濃度を
増加させることを排除することを意図していない。これらの後者の化合物は、阻
害機構の除去を介して有効な成長ホルモン濃度に間接的効果を発揮するものであ
り、ソマトスタチン(ソマトトロピン放出阻害因子(ＳＲＩＦ))のような物質を含
んでいる[Gillies (1997) Trends in Pharmacol. Sci. 18(3):87]。

【００１４】別の投与できる形態は、成長ホルモンをコードしている複製可能な媒体である
。このような媒体(患者の内部で成長ホルモンを発現する、修飾セルラインまた
はウイルスであり得る)は、より長い時間、患者体内で成長ホルモンの濃度を増
加させる能力を有している[Maxwell et al (1998) Neurosurgery 43(5):1157]。
このような媒体が脳移植片の１部を形成することができる。

【００１５】成長ホルモン自体に加えて、成長ホルモンの類似物または成長ホルモンと機能
的に均等なリガンドの使用も企図されている。本明細書で使用するとき、"類似物"とは、１つまたはそれ以上のアミノ酸の挿
入、欠失または置換、グリコシル化、リン酸化、または１つまたはそれ以上の外
来部分の加入などで修飾した、しかし少なくとも実質的に機能上の均等性は保持
している、成長ホルモンの異型(variant)であるタンパク質またはペプチドを意
味する。あるタンパク質は、もしその均等タンパク質がもとのタンパク質と免疫学的に
交差反応し、そして少なくとも、もとのタンパク質と実質的に同様の機能を有し
ている場合、その特定機能目的についてその別のタンパク質と機能的均等物であ
る。この均等物は、タンパク質のフラグメント、例えば、Ｃ-端またはＮ-端欠失
体、他のタンパク質または担体とのタンパク質の融合体、または付加アミノ酸群
とのフラグメントの融合体であり得る。例えば、常用技術を用いて、配列中のア
ミノ酸群を均等なアミノ酸群と置換することが可能である。通常、均等とされる
アミノ酸群は： (a) Ala, Ser. Thr, Pro, Gly; (b) Asn, Asp, Glu, Gln; (c) His, Arg, Lys; (d) Met, Leu, Ile, Val;および (e) Phe, Tyr, Trp である。

【００１６】機能的に均等なタンパク質は、参照分子のアミノ酸配列と、一般的に、少なく
とも７０％、好ましくは少なくとも８０％、さらに好ましくは約９０％ないし９
５％またはそれ以上、最も好ましくは約９８％またはそれ以上のアミノ酸配列の
同一性を有するものである。"参照分子(reference molecule)"とは、比較に使用
する配列を意味し、完全配列または特定配列のサブセットの何れかであり得る。
"配列同一性"とは、その異型のアミノ酸配列の特定の近接セグメントを整列化し
、参照分子のアミノ酸配列と比較するとき、該異型内と参照分子内とに同じアミ
ノ酸残基がみられることを意味する。

【００１７】２つの配列の最適アライメントを目的として、異型のアミノ酸配列の近接セグ
メントに、参照分子のアミノ酸配列に関するアミノ酸残基の付加またはアミノ酸
残基の欠失を行ってもよい。参照アミノ酸配列との比較に使用する近接セグメン
トは、少なくとも２０の近接ヌクレオチドを含んでいてもよく、３０、４０、５
０、１００またはそれ以上のヌクレオチドを含んでいてもよい。異型のアミノ酸
配列中で、ギャップの挿入に伴い増加した配列同一性の補正は、ギャップペナル
ティーを課すことにによってすることができる。配列アライメント方法は当業者
によく知られているものである。

【００１８】２つの配列の間の同一性割合の決定を、数学的計算法を用いて行うことができ
る。配列比較に応用した、限定的でない数学的計算法の施として、Myers and Mi
ller (1988) CABIOS 4:11-17の計算法がある。このような計算法をＡＬＩＧＮプ
ログラムバージョン 2.0)中に組み込み、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェア
・パッケージの１部とする。ＡＬＩＧＮプログラムをアミノ酸配列比較目的で利
用する場合、ＰＡＭ１２０質量残基表、１２のギャップ長さペナルティー、およ
び４のギャップペナルティーを使用することができる。別の好ましいプログラム
として、欠如パラメーター類を使用するＰａｉｒｗｉｓｅアライメントプログラ
ム(Sequence Explorer)がある。２つの配列の比較に利用される、限定的でない
別の数学的計算法の施として、Karlin and Altschul (l990) Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 87:2264の計算法(Karlin and Altschul (1993) Proc Natl. Acad Sci
. USA 90:5873-5877で修正されている)がある。このような計算法は、Altschul
et alのＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれており、本発
明のホルモン核酸分子を、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコアー＝100、ワード長(
wordlength)＝12で行うＢＬＡＳＴヌクレオチド配列を使用して得ることができ
る。ＢＬＡＳＴタンパク質探索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコアー＝50、ワ
ード長＝3で行うことができ、本発明の成長ホルモンタンパク質分子と相同する
アミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップアライメントを得るため
に、ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴをAltschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 2
5:3389に記載のように利用することができる。あるいは、ＰＳ１-Ｂｌａｓｔを
使用して、分子間の遠隔関係を検出する繰返し探索を行うことができる。Altsch
ul et al. (1997)(上記)参照。ＢＬＡＳＴ、ＧａｐｐｅｄＢＬＡＳＴ、および
ＰＳ１-Ｂｌａｓｔプログラムを使用する場合、それぞれのプログラムの欠如パ
ラメーター(例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ)を利用することができる
。http: /www.ncbi.nlm.nih.gov.参照。

【００１９】成長ホルモン類似物の機能的均等性は、この類似物の、適切なレセプターに結
合および活性化する両方の能力についての参照により、容易にスクリーンするこ
とができる。この場合、レセプターは神経成長ホルモンレセプターである。

【００２０】上記のように、"神経成長ホルモンレセプター"の用語は、成長ホルモンが結合
および/または活性化する能力のあるニューロン細胞集団上の全レセプターまで
及ぶように、可能性のある最も広い意味で使用している。２つのこのようなレセ
プターは、成長ホルモンレセプター(ＧＨＲ)とプロラクチンレセプター(ＰＲＬ-
Ｒ)である。特に、"神経成長ホルモンレセプター"の用語は、ヒトＧＨＲとヒト
ＰＲＬ-Ｒまで及ぶ。

【００２１】ヒト成長ホルモンレセプター(ＧＨＲ)は、グリコシル化した２４６アミノ酸の
細胞外リガンド結合ドメイン、単一の２４アミノ酸膜貫通ドメイン、および３５
０アミノ酸細胞質ドメインを含む、６２０アミノ酸の単鎖タンパク質である(Pos
tel-Vinay and Kelly (1996) Baillieres Clinical Endocrinology and Metabol
ism 10:323)。このＧＨＲモノマーは、結合部位１で単一の成長ホルモン(ＧＨ)
と結合し、それから、第２のＧＨＲが、レセプターが二量体化し、シグナル伝達
が生じた後に、同一のＧＨ上の結合部位２へ結合することが必要とされる。シグ
ナル伝達は、多くの細胞質ペプチドのリン酸化を生じる細胞質キナーゼの活性化
に関する。

【００２２】ヒトプロラクチンレセプター(ＰＲＬ-Ｒ)は、グリコシル化した２１０アミノ
酸細胞外リガンド結合ドメイン、単一の２４アミノ酸膜貫通ドメイン、および３
５８アミノ酸の細胞内ドメインを有する、５９０アミノ酸単鎖ポリペプチドであ
る。このＰＲＬ-Ｒモノマーは、単一のプロラクチン(ＰＲＬ)に結合する。それ
から、第２のＰＲＬ-Ｒｈが、レセプターが二量体化し、シグナル伝達が生じた
後に同一のＰＲＬへ結合することが必要とされる。シグナル伝達は、ＧＨＲと非
常によく似た機構での多くの細胞質ペプチドのリン酸化を生じる細胞質キナーゼ
の活性化に関与する。

【００２３】このＰＲＬ-Ｒの第２の短い形態も特性を調べられている(Kelly et al (1991) Endocrine Reviews 12:235)。このレセプターは、細胞外および膜貫通領域内の
このレセプターの長いバージョンと同じであるが、その細胞質ドメインは５７ア
ミノ酸しかなくかなり小さいものである。

【００２４】これは、神経保護および特にニューロン救済のための、出願人による第２アプ
ローチを導くものである。このアプローチは、上述のように神経成長ホルモンレ
セプターに焦点を合わせ、かつこれらのレセプターへの結合と活性化との両方を
行う因子を使用して、神経保護効果を生ぜしめることに焦点を合わせている。

【００２５】成長ホルモンおよびその類似物がこの目的を達成する因子であることが理解さ
れるはずである。事実、成長ホルモンおよび成長ホルモン類似物の使用は、本発
明の好ましい態様を与える。しかしながら、このアプローチは、成長ホルモンお
よびその類似物の使用に限定するものではなく、神経成長ホルモンレセプターへ
の結合と活性化(刺激化)の両方の機能的要件を備えた全リガンドにまで及ぶと理
解すべきである。これには、細胞内シグナル化の開始を生じるリガンドの能力も
潜在的に含まれる。

【００２６】このようなリガンドの例として、プロラクチンとプロラクチンの類似物および
胎盤ラクトゲンと胎盤ラクトゲン類似物がある。これらもまた、神経成長ホルモ
ンレセプターへの結合および活性化の能力がある(Lowman et al (1991), J. Bio
l Chem. 266: 10982)。

【００２７】他の刺激性リガンドは、少なくとも１つの神経成長ホルモンレセプターのリガ
ンド結合ドメインを用いるスクリーニングプロトコルで同定することができる。
このスクリーニング方法には、例えば、一般的な組換えＤＮＡ方法を使用するア
フリカツメガエル卵母細胞(Xenopus oocytes)中での神経成長ホルモンレセプタ
ーの発現、および刺激性リガンドによって喚起されるレセプター介在シグナル伝
達の測定を利用することができる。さらに、古典的な"磨砕し結合する(grind an
d bind)" リガンド結合実験も利用することができる。ここで、全脳領域または
特定脳領域を均質化し、化合物の神経成長ホルモンレセプターを特徴化する。さ
らに、この技術は、レセプター複合体に対する化合物の特異性および親和性(有
効性)を特徴とする(Frielle et al (1989) Clin. Chem. 35(5):721-725)。

【００２８】本発明の方法は、治療的効果を有する。"治療的効果"とは、障害後の、治療的
因子を投与しないでもおこる範囲を超える、ニューロンの、生存、増殖、および
/または神経突起伸長を増強すること全てを意味する。"ニューロンの生存を増強
すること"とは、治療的因子の投与が、該因子を投与しないでもおこる範囲を超
えて、ニューロンの損失を、少なくとも約１−１０％、好ましくは約１０％−５
０％、さらに好ましくは約１０％−５０％、より好ましくは約１０％−９０％、
そして最も好ましくは９０％以上まで減少させることを意味する。

【００２９】神経損傷の範囲の定量化の方法、および治療的因子の投与後にニューロンの生
存が増強されたかどうか測定する方法は、当業者によく知られている。そのよう
な方法には、限定する意図ではないが、組織学的方法、分子マーカーアッセイ、
および機能性/行動性分析が含まれる。例えば、虚血性創傷後、オメガ３(末梢型
ベンゾジアゼピン)結合部位の密度で顕著な増加がある(Benazodes, J. et al. (
1990) Brain Res. 522:275-289)。オメガ３部位の検出方法は既知であり、そし
てこれを使用して大脳の虚血損傷の範囲を測定することができる。例えば、 Got
ti, B. et al (1990) Brain Res. 522:290-307およびこれらの中に引用されてい
る文献を参照。あるいは、成長関連タンパク質-４３(Growth Associated Protei
n-43)(GAP-43)を、ＣＮＳ障害後の新たな軸索成長用のマーカーとして使用する
ことができる。例えば、Stroemer et al (1995) Stroke 26:2135-2144, Vaudano
et al (1995) J. Neurosci 15:3594-3611参照。治療的効果は、患者の運動技能
、認知機能、感覚による認識、言語の改善、および/または発作の性向の減少に
よっても測定することができる。このような、感覚運動および反射的機能の評価
に使用する機能性/行動性試験は、例えば、Bederson et al (1986) Stroke 17:4
72-476、DeRyck et al (1992) Brain Res 573:44-60、Markgraf et al (1992) B
rain Res. 575:238-246、Alexis et al (1995) Stroke 26:2338-2346に記載され
ている。ニューロン生存の増強は、スカンジナビアンストロークスケール(Scand
inavian Stroke Scale)(SSS)またはバーセルインデックス(Barthel Index)を用
いても測定することができる。

【００３０】意図する治療的適用のために、活性化合物(成長ホルモン、類似物またはリガ
ンド)を医薬に製剤化することができる。製剤化の詳細は、最終的に、誘起しよ
うとする神経保護効果によって異なる。神経保護効果がニューロン救済効果であ
る場合、製剤は主に治療する障害および投与経路に依存するであろうが、しかし
通常は適切な担体、媒体または賦形剤を有する活性化合物の組合せを含み得る。
当業者は一般に用いられる投与方法それぞれに適切な担体類、媒体類または類賦
形剤について熟知している。

【００３１】神経保護因子として有効とするためには、種々の投与経路を使用することがで
きる。例として、腰椎穿刺、側脳室内(ＩＣＶ)、腹部ポンプと貯蔵器と実質内(i
ntraparenchymal)とともに脳室カニューレの神経外科的挿入を含む脳室内投与が
含まれる。さらに、活性化合物のＣＮＳへの直接投与は嗅覚器の神経経路を介し
て行い得る。例えば、米国特許第5,624,898号参照。

【００３２】用量割合は製剤および症状にも依存するであろう。しかし、例として、注射用
に製剤化される成長ホルモンの推奨される用量割合は、０.０１μg/１００g(上
限)の範囲であろう。以下の実験的なセクションにおいて、本発明を、様々な態様で例示説明する。
しかし、これらの実験は限定的なものではないと理解されるべきである。

【００３３】実験例材料および方法動物調製以下の実施手順は、University of Auck1and Animal Ethics Committeeの承認
のガイドラインに従った。４０から５０gの体重の離乳した２１日齢のウィスタ
ーラットを、実験中自由に食餌と水を得ることができる１２時間光照射と１２時
間暗所のサイクルにおいた。このラットを性別と体重で組合せて、そして処置ま
たは対照グループの何れかに任意に指定した。上記と同様に、Levineラット調製
の改良バーションを使用して、ＨＩ創傷を誘導した(Sirimanne et al., J Neuro
science Methods, 55: 7-14, 1994)。略記すると、ラットに麻酔をし、２％ハロ
タン/酸素混合物を保ち、そして中央(midventral)首切開によりさらした後、右
頚動脈を結紮した。手術後、ラットを、３４℃、相対湿度８５±５％に注意深く
制御された環境中で、２時間回復させた。それから、１５分間低酸素状態(８％
酸素/窒素中)にさらした。

【００３４】処置低酸素状態終了から２時間後に開始した：処置グループのラット(ｎ=１２)に
組換え体ラット成長ホルモン２０μg(１０μl輸液中)を投与し、対照グループ
には媒体のみを投与した。動物が冷えるのを防ぐために加熱灯のもとで輸液操作
を行った。全ての液剤と注射針は無菌状態で調製した。このラットを、Saffan(登録商標)(Pitman-Moore Ltd. NZ) ０.１５mlを使用し
て軽く麻酔した。右側面大脳脳室中への注入を、Jirikowski (J Neuroscience M
ethods, 42: 115-118, 1992)により当初記載された改良技術を使用して、ラット
の頭にあわせたメタルキャップで誘導して行い、注入注射針の正確な場所を確実
にした。組換え体ラット成長ホルモン(２mg/ml：８.７７mg/ml ＮａＣｌ、２.５
mg/ml フェノール、２.０mg/mlポリソルベート２０および１０mMクエン酸ナトリ
ウムｐＨ６.０中)または媒体のみを、ミクロ注入ポンプで測定して、１.０μl/
分の制御された速度で単回投与した。注入注射針をさらに３分間そのままにして
おいて逆流を防いだ。

【００３５】ＣＳＦサンプリング低酸素脳脊髄液(ＣＳＦ)から３日後にサンプルを取り出した。ラットをSaffan
麻酔で麻酔し、それから２％ハロタン中に保持した。ラットを頭が前に曲がる定
位フレーム中におき、大槽の筋肉を直入解剖(blunt dissection)し、硬膜をさら
した。それから、細かい３０ゲージの注射針を使用し、両眼拡大鏡を用いてＣＳ
Ｆを取り出した。過量のペントバルビタールナトリウム投与ipでラットを安楽死
させ、そして血液サンプルを心臓から直接取り出した。

【００３６】組織学その場で行なう固着のあとに、脳を、食塩水、次いで新たに調製した改良Boui
n's溶液(０.１ＭＰＢＳ、４％パラホルムアルデヒド[w/v]、０.０８％グルタ
ルアルデヒド[v/v]、１５％ピクリン酸[v/v飽和溶液])による、心臓内(transca
rdial)潅流による組織学的方法で集めた。脳を取り除き、検量し、室温で一晩、
改良Bouin's溶液中に入れておいた。次の日、脳を７０％エタノール中に移し、
３−４日間おいた。このエタノールは毎日新たな溶液に取り替えた。それから、
脳をパラフィン包埋処理した(エタノール、クロロホルム脱脂、パラフィンワッ
クス浸透、パラフィンワックス中ブロッキングの段階系による脱水)。組織から
８μgセクションに切断し、ポリ-L-リジンプレコートスライド上においた。酸フ
スチン(acid-fuschin)/チオニンを使用してセクションを染色した。

【００３７】ニューロンのスコア手順神経系の結果を、各脳について２つのレベル（線条体の中間レベル(Bregma ＋
０.８mm)と海馬の後角の中間レベル(Bregma −３.３)）を使用して評価した。ニ
ューロンについての結果を２つの技法で評価した： l)皮質と海馬のスコア化：前頭頂骨皮質と海馬を、標準的な５ポイントのニューロンの損失スコア(Willi
ams et al., Pediatric Research, 27: 561-565, 1990):４=損傷なし、３=０-１
０％細胞損失、２=１１−５０％細胞損失、１=５１−９０％細胞損失、０=＞９
０％細胞損失、を使用する、ニューロンのスコア用の盲検評価で評価した。皮質を、線条体のレベル(Bregma ＋０.８mm)および海馬の後角のレベル(Bregm
a −３.３)でスコア化し、５領域に分割した。この海馬をCA1/2、CA3、および歯
状回のそれぞれでスコア化した。ニューロンのスコアを各構造で併せて、処置グ
ループと比較した。 2)線条体と視床のスコア化：線条体および視床それぞれの４領域を、２００×倍率の光学顕微鏡の接眼ミク
ロメーターを使用してスコア化した。各領域を、２００μm²/グリッドでミクロ
メーターの４グリッドを用いてカウントした。健常なニューロンを創傷部と各脳
の対側性半球内の同一領域でカウントし、そして残存％を下記：RHS数/LHS数×
１００(各領域で)に従って計算した。各構造に関連する残存スコアを併せて、処
置グループと対象グループとを比較した。

【００３８】血漿およびＣＳＦ中のＩＧＦ-１のラジオイムノアッセイ血漿およびＣＳＦ中のＩＧＦ-１を測定した、ＩＧＦ結合タンパク質(ＩＧＦＢ
Ｐ)ブロックラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)は、最初にBlum and Breier (Growth
Regulation. 4: 11-19.[1994])に記載されている。ＩＧＦ-１に対してアフィニ
ティーと特異性が非常に高く、そしてＩＧＦ-IIに対する交差反応が低い(０.０
１％)ポリクローナル抗体(#878/4)ニュージーランドホワイトラビットを使用し
た。このアッセイは、サンプルを酸性緩衝液で希釈し、そして過剰量のＩＧＦ-I
Iで共同インキュベートする非摘出プロセスを利用している。ｐＨ２.８で希釈し
、その後にＩＧＦ-IIを加えると、結合タンパク質干渉を機能的にブロックする
。

【００３９】血漿を酸性緩衝液(２０mM リン酸ナトリウム(ｐＨ２.８)、０.１mＭＮａＣ
ｌ、０.１％ＢＳＡ、０.０２％ＮａＮ₃、０.１％トリトンＸ-１００)で希釈
し(１:２００-１:４００)、そしてＣＳＦサンプルを０.５Ｍリン酸ナトリウム
、１％ＢＳＡ、１％トリトンＸ-１００、０.１％ＮａＮ₃、１mＭＰＭＳＦ、
ｐＨ１.２５で希釈し(１：１１)、ＩＧＦＢＰからＩＧＦを分離した。２５ng/
チューブで過剰量のＩＧＦ-IIを有する第１の抗体を、緩衝液で希釈し、ｐＨを
再中和化した(１００mM リン酸ナトリウム[ｐＨ７.８]、４０mＭＮａＣｌ、０.
０２％ＮａＮ₃、０.２％ＢＳＡ、０.１％トリトンＸ-100)、１：５００００
の初期実施希釈にした。希釈サンプル、対照、または標準(rh-ＩＧＦ-1, Genent
ech, San Fransisco) ０.１mlを、抗体-ＩＧＦ-II液剤０.１mlまたは¹²⁵Ｉ-Ｉ
ＧＦ-１０.１mlと共に、１５-２００００カウント(チューブ毎)でインキュベー
トした。４℃で４８時間インキュベートした後、二次抗体複合体１mlを加えて
チューブを室温でさらに１時間インキュベートした。次いで３８００rpm/３０分
間遠心分離したあと、チューブをデカントし、ペレットをガンマカウンターでカ
ウントした。 rh-ＩＧＦ-Iのヨウ素化を、Hunter and Greenwood (Biochemical Journal, 91
: 43-56, 1964)のクロラミン-Ｔ方法の修飾を使用して行った。このアッセイ系
の確認を、Insulin-Like Growth FactorsのThird International Symposium(Ban
g et al., Endocrino1ogy, 136: 816-81, [19953)推奨に従って行った(ＣＳＦ標
準曲線への平行移動と冷却ＩＧＦ-Iの回復が含まれる)。ＣＳＦ中の回復非標識
化ＩＧＦ-Iの回復は８９.６％(n=2)であった。ＥＤ-５０は０.１ng/チューブで
あり、そして変異のイントラ-およびインター-アッセイ係数は、それぞれ５％と
９％であった。

【００４０】統計値このデータを、一対のｔ-試験、またはパラメーターが同等でないWilcoxon符
号ランク試験(Wilcoxon signed rank test)を使用して分析した。Sigmastat^(登
^録商標) v2.0 (Jandel Scientific, San Rafael, California)を使用して計算を
行った。全結果を平均値±標準誤差として示す。

【００４１】結果結果を図１−図３に示す。成長ホルモン処置は、媒体のみで処置した動物と比較して、死後ににおける脳
質量に影響はなかった(1.432±0.032g 対 1.455±0.028g)。成長ホルモン処置は、ＨＩ創傷によって生じる血清中でのＩＧＦ-１下降にお
いて、縮小傾向をもたらした(159±7.3 対 l35.8±11.7ng/ml, p=0.068)。ＣＳ
ＦＩＧＦ-１レベルは血漿中のものよりかなり低かった。ＣＳＦＩＧＦ-１レ
ベルは、成長ホルモン処置では変化しなかった(3.82±0.35 対 3.86±0.27ng/ml
)。これは図１から分かるであろう。

【００４２】皮質のニューロンのスコアは、成長ホルモン処置によって顕著に改善された。
線条体および海馬のレベルにおける、５つの皮質領域全部を併せたスコアは(3.5
4±0.074 対 2.98±0.124、p<O.OO l)であった。図２に示す。海馬ニューロンのスコアは成長ホルモン処置によって顕著に改善された。CA1/
2、CA3、および歯状回を併せたスコアは(3.03±0.176 対 1.818±0.259、p=0.00
5)であった。図２に示す。背外側視床に対するニューロンの生存スコアは成長ホルモン処置によって顕著
に改善された。４つの領域の併せたスコアをカウントし、対側性半球と比較する
と(104±2.18 対 87.4±4.67％、p=0.006)であった。これは図３に示してある。側背の線条体に対するニューロンの残存スコアは、成長ホルモン処置によって
は顕著には改善されなかった。４つの領域の併せたスコアをカウントし、対側性
半球と比較すると(83.8±4.7 対 75.3±6.1％、 p=0.178)であった。これは図３
に示してある。

【００４３】結論中枢的に投与した成長ホルモンは、ニューロン救済因子として有効である。ニ
ューロン救済効果は、ＣＳＦ-ＩＧＦ-１の並行的増加を伴わずに生じ、神経保護
効果がＩＧＦ-１と独立していることを具体的に示している。成長ホルモンは、内因性成長ホルモンレセプターが発現する脳の領域(皮質、
海馬、および視床)ではニューロン救済因子として有効であり、そしてそうでな
い領域(線条体)では有効はでない。これは、ＧＨの神経保護効果が成長ホルモン
レセプターまたはプロラクチンレセプターの何れかを経由して機能することを示
している。

【００４４】産業上の利用本発明は、従って、神経保護に対する新たなアプローチを提供するものである
。本発明は、特に、ニューロン救済に対する新たなアプローチを提供する。本発明のアプローチは、治療と予防との両方に適用する。特に、創傷、変成疾
患および異常を含むニューロンの障害、行動性疾患および異常、脱髄性疾患およ
び異常、神経学的症候群、眼性疾患、および睡眠異常を患っている患者の処置に
適用する。特に企図するものは以下のものである：

【００４５】創傷脳卒中発作、トラウマ脳髄脳創傷、仮死、脊髄性損傷およびＣＯ中毒。変成疾患および異常家族性および非家族性アルツハイマー病、多梗塞痴呆、アルツハイマー型前頭
葉痴呆、ピック病、ハンチントン舞踏病、ウェルドニッヒ・ホフマン症、ウェル
ニッケ脳疾患、血管拡張性失調症、大脳皮質規定核変性症、ダウン症候、レット
症候群、ＩＵＧＲ、アルパース病、スティール・リチャードソン・オルゼウスキ
ー症候群、側頭葉癲癇、てんかん重積、および定義されていない精神遅滞(menta
l retardation)。行動性疾患および異常脊髄小脳失調、進行性ミオクロヌス性失調症候、リー疾患、多発性系萎縮症、
大脳麻痺、フリードライヒ運動失調症、純性遺伝性痙性対麻痺、脊髄筋層萎縮症
(spinal muscular)、糖尿病性神経障害、遺伝性感覚神経障害１型、ＡＬＳ、慢
性特発性失調性神経障害、タンジール病。脱髄性疾患および異常炎症併発：急性播種性脳脊髄炎、視覚神経炎、横行脊髄炎、デビック病、ロイ
コジストロフィー、多発性硬化症；非炎症性併発：進行性多巣性ロイコ脳疾患(P
rogressive multifocal leucoencehalopathy)、中枢性脳橋融解症(central pont
ine myelinolysis)。神経学的症候群胎児アルコール症候、自閉症および筋クローヌス性運動失調。眼性疾患緑内障睡眠異常ナルコレプシー

【００４６】さらに、本発明の成長ホルモン/成長ホルモンレセプターアプローチは単独で
上記治療に使用することができるが、組合わせ治療アプローチをとることもでき
る。この後者のアプローチは、特に、成長ホルモンまたはその類似物/リガンド
を第２の神経保護因子と組合わせて投与することを含んでいる。この第２の神経保護因子は、成長ホルモンおよびその類似物/リガンドによっ
て保護されているニューロン細胞集団とは別のニューロン細胞集団に対しては、
少なくともその１部においては、一般的に保護薬であるであろう。

【００４７】第２の神経保護因子は、成長因子を含むグループから選択することができるが
、これに限定されない。"成長因子"とは、細胞を刺激して成長または増殖させる
細胞外ポリペプチドシグナル分子を意味する。好ましい成長因子は、広い範囲の
細胞型がそれに応答するものである。神経栄養性成長因子の例には、それらに限
定されないが、繊維芽細胞成長因子族メンバー、例えば、塩基性繊維芽細胞成長
因子(ｂＦＧＦ)(Abraham et al (1986) Science 233:545-48)、酸性繊維芽細胞
成長因子(ａＦＧＦ)(Jaye et al (1986) Science 233:541-45)、hst/Kfgf遺伝子
産物、ＦＧＦ-３(Dickson et al (1987) Nature 326-833)、ＦＧＦ-４(Zhan et
al (1988) Mol. Cell. Viol. 8:3487-3495)、ＦＧＦ-６(deLapeyriere et al 91
990) Oncogene 5:823-831)、ケラチノサイト成長因子(ＫＧＦ)(Finch et al (19
89) Science 245:752-755)、およびアンドロゲン誘発成長因子(ＡＩＧＦ)(Tanak
a et al (1992) Proc. Natl. Acad. Scr USA 89:8928-8923)などが含まれる。Ｆ
ＧＦ属の別のメンバーには、例えば、int-２、繊維芽細胞成長因子相同性因子-
１(ＦＨＦ-１)(米国特許第5,872,22号)、ＦＨＦ-２(米国特許第5,876,697号)、
ＦＨＦ-３およびＦＨＦ-４(Smallwood et al (1996) Proc. Natl Acad. Sci. US
A 93:9850-9857)、カラチノサイト(karatinocyte)成長因子２(Emoto et al (199
7) J. Biol Chem 272:23191-23194)、グリア活性化因子(Miyamoto et al (1993)
Mol. Cell Biol. 13:4251-4259)、ＦＧＦ-１８(Hu et al (1998) Mol Cell Bio
l 18:6063-6074)、およびＦＧＦ-１６(Miyake et al (1988) Biochem. Biophys.
Res. Commun 243:148-152が含まれる。

【００４８】別の第２の神経保護因子には、繊毛神経栄養性因子(ＣＮＴＦ)、神経成長因子
(ＮＧＦ)(Seiler, M. (1984) Brain Research 300:33-39; Hagg T. et al (1988
) Exp Neurol 101:303-312; Kromer L F (1987) Saence 235:214-216;およびHag
g T et al (1990) J. Neurosci 10(9)3087-3092)、脳由来神経栄養性因子(ＢＤ
ＮＦ)(Kiprianova, I et al (1999) J. Neurosci. Res. 56:21-27)、ニューロト
ロフィン３(ＮＴ３)、ニューロトロフィン４(ＮＴ４)、トランスフォーミング成
長因子-β１(ＴＧＦ-β１)(Henrick-Noack, P et a1 (1996) Stroke 27:1609-14
)、骨形態形成タンパク質(ＢＭＰ-２)(Hattori, A et al. (1999) J. Neurochem
72:2264-71)、グリア-セルライン由来神経栄養性因子(ＧＤＮＦ)(Miyazaki, H
et al (1999) Neuroscience 89:643-7)、活性依存性神経栄養性因子(ＡＤＮＦ)(
Zamostiano, R et al (1999) Neurosci Letter 264:9-12)、サイトカイン白血病
阻害因子(ＬＩＦ)(Blesch, A et al (1999) J. Neurosci. 19:3356-66)、オンコ
スタチンＭ、インターロイキン、およびインシュリン様成長因子１および２が含
まれる。

【００４９】第２神経保護因子の他の形態には、例えば、クロメチアゾール(clomethiazole
)(Zendra)(Marshal, J W et al (1999) Exp Neurol 156:121-9)；キヌレン酸(Ｋ
ＹＮＡ)(Salvati, P et al (1999) Prog. Neuropsychopharmacol Biol Psychiat
ry 23:741-52)、Semax(Miasoedova, N. F. et al (1999) Zh Nevrol Psikhiatr
Imss Korsakova 99:15-19)、ＦＫ５０６(タクロリムス)(Gold, B G et al (1999
) J. Pharmacol. Exp. Ther. 289: 1202-10)、L-スレオ-１-フェニル-２-デカノ
イルアミノ-３-モルホリノ-１-プロパノール(Inokuchi, J. et al (1998) Act B
iochim Pol 45:479-92)、副腎皮質刺激ホルモン-(４-９)類似物(ＯＲＧ2766)、
およびジゾルシピン(dizolcipine)(ＭＫ-８０１)(Herz, R C et al (1998) Eur.
J. Pharmacol 346:159-65)、大脳インターロイキン-６(Loddick, S A et al (1
998), J. Cereb Blood Flow Metab 18:176-9)、セレジリン(selegiline)(Semkov
a, I et al (1996) Eur. J. Pharmacol 315:19-30)、ＭＫ-８０１(Barth, A et
al (1996), Neuro Report 7:1461-4；NPS1506、GV1505260、MK801(Baumgartner,
W A et al (1999) Ann Thorac Surg 67:1871-3)、GV150526(Dyker, A G et al
(1999) Stroke 30:986-92)などのグルタミン酸アンタゴニスト；ＮＢＱＸ(Baumg
artner, W A (1999) et al. Ann Thora Surg 67:1871-3、PD152247(PNQX)(Schie
lke, G P et al (1999) Stroke 30:1472-7)、SPD 502(Nielsen, E O et al (199
9) J. Pharmacol Exp Ther 289:1492-501)、LY303070およびLY300164(May, PC e
t al(1999) NeuroscienceLett 262:219-221)などのＡＭＰＡアンタゴニストが含
まれる。

【００５０】ある実施態様では、第２の神経保護因子は、ＩＧＦ-１および/またはＩＧＦ-
１の生物学的に活性な異型である。ＩＧＦ-１は中枢神経系内に広く分布する７
０アミノ酸の神経栄養性ポリペプチドホルモンであり、そしてインスリン様およ
び分裂促進成長生物学的活性の両方を示す(Baskin, D G et al (1988) Trends i
n Neuroscience 11:107-111)。インビトロの研究は、ＩＧＦ-１の神経保護効果
が、ＣＮＳ中の様々な型のニューロンまで及ぶことを具体的に示している。(Knu
sel et al (1990) J. Neurosci. 10:558-570, Svezic and Schubert (1990) Bio
chem. Biophys. Res. Commun. 172:54-60 McMorris and Dubois (1988), J. Neu
rosci Res. 21:199-209)。さらに、様々な実験動物モデルを使用したインビボの
研究が、ＣＮＳ障害直後のＩＧＦ-１の外来性投与が神経保護効果を誘起するこ
とを示している(Guan et al (1993) J. Cereb Blood Flow Metab 13:609-616お
よびJohnston et al (1996) J. Clin. Invest. 97:300-308、米国特許第5,861,3
73号、米国特許第5,093,317号、米国特許第5,093,317号、米国特許第5,776,897
号、およびこれらの中に引用されている文献)

【００５１】好ましい第２の神経保護因子には、ＩＧＦ-１、ＧＰＥ、アクチビン、ＮＧＦ
、ＴＧＦ-β、成長ホルモン結合タンパク質、ＩＧＦ-結合タンパク質類(特にＩ
ＧＦＢＰ-３)、およびｂＦＧＦが含まれる。

【００５２】特定の組合わせには、成長ホルモンと、１つまたはそれ以上のＧＰＥ、ＩＧＦ
-１およびアクチビン(ハンチントン舞踏病またはアルツハイマー病の治療用)；
成長ホルモンとＩＧＦ-１(大脳皮質規定核変性症またはスティール・リチャード
ソン・オルゼウスキー症候群の治療用)；成長ホルモンと、ＧＰＥおよびＩＧＦ-
１の１つまたは両方(デビック病またはピック病の治療用)；および成長ホルモン
と、アクチビンおよびＩＧＦ-１の１つまたは両方(糖尿病性神経障害の治療用)
が含まれる。

【００５３】組合わせ治療アプローチは望ましいものと思われているが、それぞれの有効成
分を並行投与用に製剤化(単一薬剤とする場合を含めて)することができる。従っ
て、本発明は、成長ホルモンまたはその類似物と、ＩＧＦ-１以外に上記第２の
神経保護因子の１つまたはそれ以上(特にＧＰＥ、アクチビン、ＮＧＦ、ＴＧＦ-
ｐおよびｂＦＧＦの１つまたはそれ以上)とを組合せて含んでいる、神経保護の
薬剤などを提供する。望ましい場合には、それらの薬剤は、さらにＩＧＦ-１を
含むことができる。

【００５４】このような薬剤は任意の常法で調製することができ、また標準的な医薬的に許
容され得る媒体、担体、あるいは賦形剤を含めることもできる。上記説明が例示説明のためだけに提供されていることは、当業者には認識され
るであろう。

【００５５】参照文献

【表１】

【表２】

【表３】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、緩和なＨＩに続く、血清およびＣＳＦＩＧＦ-１レベル
における、ＩＣＶラット成長ホルモン処置の効果を示す；

【図２】図２は、緩和なＨＩに続くニューロンのスコアにおける、ＩＣＶ
ラット成長ホルモン処置の効果を示す；そして

【図３】図３は、緩和なＨＩに続くニューロンの生存への、ＩＣＶラット
成長ホルモン処置の効果を示す。

【手続補正書】

【提出日】平成１３年５月１４日（２００１．５．１４）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 5/10 Ａ６１Ｐ 25/28 25/00 Ａ６１Ｋ 37/36 25/14 37/32 25/28 37/24 37/43 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者クリス・エドワード・ウィリアムズニュー・ジーランド、オークランド、グラフトン、カールトン・ゴア・ロード２／73 ビー番 (72)発明者ピーター・デイビッド・グルックマンニュー・ジーランド、オークランド、レムエラ、ルーサーン・ロード78番 (72)発明者ロス・グラハム・クラークニュー・ジーランド、オークランド、デボンポート、グレン・ロード25番Ｆターム(参考） 4C084 AA01 AA02 AA17 BA44 CA14 CA17 CA18 CA21 CA23 CA53 CA59 DB01 DB14 DB22 DB23 DB50 DB54 DB58 DB59 DB70 MA02 ZA01 ZA15 ZA16 ZA20 ZC03 ZC04

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】成長ホルモン、その類似物、または機能的に均等なリガンド
を、患者の脳に投与する段階を含む、該患者の脳内で神経保護効果を誘起させる
方法。
【請求項２】成長ホルモンまたは機能的に均等な内因性リガンドの患者の
脳内有効濃度を増加させる段階を含む、該患者の脳内で神経保護効果を誘起させ
る方法。
【請求項３】該成長ホルモンまたはリガンドの有効濃度を直接投与により
増加させる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】成長ホルモンまたはリガンドのいずれかの産生を刺激するか
、あるいは成長ホルモンまたはリガンド活性の阻害を少なくするかまたは妨げる
因子の投与により、成長ホルモンまたはリガンドの有効濃度を増加させる、請求
項２に記載の方法。
【請求項５】該神経保護効果が神経救済効果である、請求項１ないし請求
項４の何れかに記載の方法。
【請求項６】該神経保護効果が神経防護的効果である、請求項１ないし請
求項４の何れかに記載の方法。
【請求項７】患者の脳内で、成長ホルモン、その類似物、または機能的に
均等なリガンドの有効量を増加させる段階を含む、さもなければ先のニューロン
の障害の結果として死ぬであろうニューロンを救済するための患者の処置方法。
【請求項８】患者の脳内で神経成長ホルモンレセプターの活性の増加を引
き起こす段階を含む、患者の脳内で神経保護効果を誘起させる方法。
【請求項９】活性の増加が、該神経成長ホルモンレセプターの活性を増加
させる因子の、患者の脳への直接投与によるものである、請求項８に記載の方法
。
【請求項１０】該因子が成長ホルモンレセプター類と結合するものである
、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】該因子が、成長ホルモンまたはその類似物、プロラクチン
またはプロラクチン類似物、胎盤ラクトゲンまたは胎盤ラクトゲン類似物から選
択されるものである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】該因子が神経成長ホルモンレセプター類と結合する因子の
活性濃度の増加をもたらすものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】該因子が、成長ホルモン放出タンパク質類(ＧＲＰ)、成長
ホルモン放出ホルモン(ＧＨＲＨ)、これらの機能的に均等な分泌促進物質類、お
よびソマトトロピン放出阻害因子(ＳＲＩＦ)から選択される、請求項１２に記載
の方法。
【請求項１４】神経防護的である、請求項８ないし請求項１３の何れかに
記載の方法。
【請求項１５】神経救済効果を誘起させる、請求項８ないし請求項１３の
何れかに記載の方法。
【請求項１６】患者の脳内で神経成長ホルモンレセプター類の活性の増加
を引き起こす段階を含む、さもなければ先のニューロンの障害の結果として死ぬ
であろうニューロンを救済するための患者の処置方法。
【請求項１７】成長ホルモン、その類似物、または機能的に均等なリガン
ドを、第２の神経保護因子と組合せて投与することを含む、該患者を処置してニ
ューロンを保護するための患者の処置方法。
【請求項１８】該第２の神経保護因子が、ＩＧＦ-１、ＧＰＥ、アクチビ
ン、ＮＧＦ、ＴＧＦ成長ホルモン結合タンパク質類、ＩＧＦ-結合タンパク質類
およびｂＦＧＦから選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】さもなければニューロンの障害の結果として死ぬであろう
ニューロンを救済するためにニューロン救済効果を誘起させる、請求項１７に記
載の方法。
【請求項２０】障害がハンチントン舞踏病またはアルイツハイマー病であ
り、そして該成長ホルモン、類似物またはリガンドを、１つまたはそれ以上のＧ
ＰＥ、ＩＧＦ-１およびアクチビンと組合わせて投与する、請求項１９に記載の
方法。
【請求項２１】障害が大脳皮質基底核変性病(corticobasal degeneration
)またはスティール・リチャードソン・オルゼウスキー症候群であり、そして該
成長ホルモン、その類似物またはリガンドをＩＧＦ-１と組合わせて投与する、
請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】障害がデビック病またはピック病であり、そして該成長ホ
ルモン、その類似物またはリガンドをＧＰＥおよびＩＧＦ-１の１つまたは両方
と組合わせて投与する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】障害が糖尿病性神経障害であり、そして該成長ホルモン、
その類似物またはリガンドをアクチビンおよびＩＧＦ-１の１つまたは両方と組
合わせて投与する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】さもなければ先のニューロンの障害の結果として死ぬであ
ろうニューロンを救済するために、患者の処置に使用する薬物であって、成長ホ
ルモン、その類似物または機能的に均等なリガンドと、１種またはそれ以上の選
択された第２の神経保護因子との組合わせを含むが、但し、１種の第２の神経保
護因子が存在する場合はそれがＩＧＦ-１ではない、薬物。
【請求項２５】１種またはそれ以上のＧＰＥ、アクチビン、ＮＧＦ、ＴＧ
Ｆ-β、成長ホルモン結合タンパク質、ＩＧＦ結合タンパク質、およびｂＦＧＦ
である、請求項２４に記載の薬物。
【請求項２６】さらにＩＧＦ-１を含む、請求項２５に記載の薬物。
【請求項２７】神経保護性薬物の調製における、成長ホルモンまたはその
類似物または機能的に均等なリガンドの使用。
【請求項２８】該薬物が、さもなければニューロンの障害の結果として死
ぬであろうニューロンを救済するためのものである、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】該薬物が、さらに１種またはそれ以上の選択された第２の
神経保護因子を含むが、但し、１種の第２の神経保護因子が存在する場合は、そ
れがＩＧＦ-１ではない、請求項２７に記載の使用。