JP2002518370A - チオールエステルおよびその使用 - Google Patents

チオールエステルおよびその使用

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、新規ファミリーのチオールエステルの発見およびその使用に関する。本発明はまた、殺ウイルス化合物およびこれらの新規チオールエステルを含有する薬学的処方物も提供する。本発明はまた、チオールエステルによって不活化したウイルスおよびチオールエステル複合ウイルスタンパク質を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、ウイルス学および抗ウイルス治療剤の分野に関する。詳細には、本
発明は、新規ファミリーのチオールエステルおよびその使用の開示に関する。
【０００２】 （発明の背景） ウイルス、特に、ＨＩＶのようなレトロウイルスは、その感染を処置するため
に使用される薬物に対して、急速に耐性となり得る。レトロウイルスの極端な順
応性は、そのＲＮＡゲノムの転写を担う逆トランスクリプターゼの高い誤差率に
起因する。ＨＩＶは、このような高変異性ウイルス（ｈｙｐｅｒ−ｍｕｔａｂｌ
ｅ ｖｉｒｕｓ）の例である。ＨＩＶは、２つの主な種、ＨＩＶ−１およびＨＩ
Ｖ−２、に分岐し、その各々は、多くのクレード、サブタイプ、および薬物耐性
変異体を有する。
【０００３】 ウイルスの薬物耐性株の出現に対処するための戦略には、薬物併用療法が挙げ
られる（Ｌａｎｇｅ（１９９６）ＡＩＤＳ １０ Ｓｐｐｌ １：Ｓ２７−Ｓ３
０）。異なるウイルスタンパク質に対する薬物および同一タンパク質の複数の部
位に対する薬物は、一般に、ウイルスの順応性を克服するための戦略として使用
される。レトロウイルスに対して、例えば、プロテアーゼインヒビターおよびヌ
クレオシドアナログ（例えば、ＡＤＴ、ｄｄＩ，ｄｄＣ、およびｄ４Ｔ）を使用
する併用療法は、無効となり得る；ウイルスは、比較的短い期間に完全な抵抗性
を発現する（Ｂｉｒｃｈ（１９９８）ＡＩＤＳ １２：６８０−６８１；Ｒｏｂ
ｅｒｔｓ（１９９８）ＡＩＤＳ １２：４５３−４６０；Ｙａｎｇ（１９９７）
Ｌｅｕｋｅｍｉａ １１ Ｓｕｐｐｌ ３：８９−９２；Ｄｅｍｅｔｅｒ（１９
９７）Ｊ．Ａｃｑｕｉｒ．Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｅｆｉｃ．Ｓｙｎｄｒ．Ｈｕｍ．Ｒ
ｅｔｒｏｖｉｒｏｌ．１４（２）：１３６−１４４；Ｋｕｒｉｔｚｋｅｓ（１９
９６）ＡＩＤＳ １０ Ｓｕｐｐｌ ５：Ｓ２７−Ｓ３１）。さらに、有効な抗
レトロウイルスワクチンは現在、入手不可能である（Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ（１９
９８）Ｎａｔｕｒｅ ３９９−６３９；Ｂａｎｇｈａｍ（１９９７）Ｌａｎｃｅ
ｔ ３５０：１６１７−１６２１）。
【０００４】 ＨＩＶ−１は、約１８年前に始まったＡＩＤＳの流行の原因である。その後、
新たな症例数は、時間が経つにつれて増加している。１９９４年の終わりまでに
、１，０２５，０７３件のＡＩＤＳの症例がＷＨＯに報告されている。１９９３
年の１２月から、症例数の２０％増加である（Ｇａｌｌｉ（１９９５）Ｑ．Ｊ．
Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３９：１４７−１５５）。２０００年までに、ＷＨＯは、世
界で、３０００万人〜４０００件の累積ＨＩＶ−１感染が存在すると予想してい
る（Ｓｔｏｎｅｂｕｒｎｅｒ（１９９４）Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｐ
ｐｌ． ４００：１−４）。従って、ＨＩＶ−１のようなレトロウイルスに対し
て有効な化合物が非常に必要とされている。本発明は、これらおよび他の必要性
を満たす。
【０００５】 （発明の要旨） 本発明は、以下からなる群から選択される化学構造を有するチオールエステル
を含有する、新規分類の組成物に関する： テンプレートＩおよびテンプレートＩＩからなる群から選択される式を有す
るチオールエステルであって、ここで、テンプレートＩおよびテンプレートＩＩ
が以下の構造を有する：
【０００６】
【化８】 ここで、Ｘは、アルキル、置換アルキル、アリール、および置換アリール基か
らなる群から選択される、メンバーであり；Ｒ1は、−Ｙ−Ｚ−であり、 ここで、Ｙは、−（ＣＨ2）m−（ここで、ｍは、１〜６の整数である）、
【０００７】
【化９】 からなる群から選択され、 ここで、Ｚは、ジアルキルまたはアリールまたはアルキルアリールスルホニウ
ム（Ｚ１）、トリアルキルまたはアリールまたはアルキルアリールアンモニウム
（Ｚ２）、トリアルキルまたはアリールまたはアルキルアリールホスホニウム（
Ｚ３）、あるいは以下の構造：
【０００８】
【化１０】 （ここで、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、およびＲ16は、Ｈ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2
、および置換カルボキサミド基からなる群から独立して選択されるメンバーであ
る） を有するピリジニオ（Ｚ４）からなる群から選択され、あるいは、 Ｒ1は、アルキル、置換アルキル、−アリール、置換アリール、−アリールア
ルキル、−Ｐｈ−ＣＨ3、アリールアルコキシ、−ＰｈＯＣＨ3、ニトロアリール
、−Ｐｈ−ＮＯ2、および−（ＣＨ2）n−Ｘ基（ここで、Ｘは、ハロゲンであり
、そしてｎは１〜６の整数である）であり、 Ｒ2は、−Ｈ、−ＣＨ3、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3基から
なる群から選択され、 Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5は、Ｈ、ハロゲン、−ＮＯ2、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＮＨ2、お
よび−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3基からなる群から独立して選択されるメンバーであり
； Ｒ6は、−Ｈ、アルキル、−ＣＨ3、置換アルキル、アリール、置換アリール、
およびアリールアルキル基からなる群から選択され； Ｒ7、Ｒ8、またはＲ9のいずれかが（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）−Ｇ’（ここで、Ｇ’は、
−ＮＨ2、−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−アリール、−ＮＨ−アシル、アリールＮ
Ｈ2、ニトロアリール、アリール−ＮＨ−アシル、およびアリール−ＮＨ−アル
キル基からなる群から選択される）であり得ることを除いて、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、
Ｒ10およびＲ11はＨである； テンプレートＩＩＩおよびテンプレートＩＶからなる群から選択される式を有
するチオールエステルであって、ここで、テンプレートＩＩＩおよびテンプレー
トＩＶが以下の構造を有する：
【０００９】
【化１１】 ここで、Ｇは、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、およびア
ルキルアリール基からなる群から選択され、 Ｒ6は、−Ｈ、アルキル、−ＣＨ3、置換アルキル、アリール、置換アリール、
およびアリールアルキル基からなる群から選択され； Ｒ7、Ｒ8、またはＲ9のいずれかが、（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）−Ｇ’（ここで、Ｇ’は
、−ＮＨ2、−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−アリール、−ＮＨ−アシル、アリール
−ＮＨ2、ニトロアリール、アリール−ＮＨ−アシル、およびアリール−ＮＨ−
アルキル基からなる群から選択される）であり得ることを除いて、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ 9 、Ｒ10およびＲ11はＨである； テンプレートＶおよびテンプレートＶＩからなる群から選択される式を有する
チオールエステルであって、ここで、テンプレートＶおよびテンプレートＶＩが
以下の構造を有する：
【００１０】
【化１２】 ここで、ｎは任意の整数であり、Ｒ2〜Ｒ5、Ｒ6およびＲ12〜Ｒ16は上記であ
り、Ｙは、上記で定義され、Ｒ17は、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、Ｒ18は、−Ｈ
、−ＣＨ3、アルキル、アリール、アリールアルキル、またはアミノ酸側鎖であ
り、ここで、Ｒ18が結合される炭素原子についての立体化学配置は、ＲまたはＳ
であり得、Ｒ19は、−ＯＨ、−ＮＨ2、Ｎ−置換アミド窒素、またはエステル基
（−ＯＲ）である； 以下の構造を有する、テンプレートＶＩＩの式を有するチオールエステル：
【００１１】
【化１３】 ここで、Ｒ0は、硫黄原子に直接結合した、任意の置換または非置換アリール
もしくはヘテロアリール環系であり、 ＹおよびＲ12〜Ｒ16は、上記のように定義さる；ならびに 以下の式を有するピリジニオアルカノイルチオールエステル：
【００１２】
【化１４】 ここで、ｍは１〜６の整数であり、ｎは０または１から６の整数であり、そし
てＲは、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アルキルアリール
、カルボキサミド（ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ）、カルボキサミド（ｃａｒｂｏｘ
ａｍｉｄｏ）、置換カルボキサミド（ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ）、置換カルボキ
サミド（ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ）、−ＮＨ2基、および置換−ＮＨ2基からなる
群から選択される。
【００１３】 代替の実施態様では、チオールエステルにおいて、Ｘは、−（ＣＨ2）m−（こ
こで、ｍは１〜６の整数である）、および−ＣＨ2（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−からなる群
から選択されるメンバーであり；Ｒ1は、−ＣＨ3、−（ＣＨ2）n−ＣＨ3、−Ｃ
Ｈ（ＣＨ3）2、−Ｃ（ＣＨ3）3、−（ＣＨ2）n−Ｃｌ、−（ＣＨ2）n−Ｂｒ、お
よび−（ＣＨ2）n−Ｉ基からなる群から選択され；Ｇは、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−
Ｃ（ＣＨ3）3、および２，６−ジメチルフェニル基からなる群から選択され；そ
して、ピリジニオアルカノイルチオールエステルのＲ基が、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｃ
Ｈ3、−Ｃ6Ｈ4ＮＯ2、−Ｃ6Ｈ4ＮＨＳＯ2ＣＨ2Ｃ6Ｈ4ＮＯ2および、−Ｃ6Ｈ4Ｎ
ＨＣＯＣＨ3基からなる群から選択される。ピリジンニオアルカノイルチオール
エステルは、ｍが整数４であり、そしてｎが０であるか、あるいは１または２の
整数である構造を有し得る。
【００１４】 １実施態様において、本発明のチオールエステルにより、インビトロにおいて
ジンクフィンガーから金属イオンを解離させることが可能である。別の実施態様
において、本発明のチオールエステルは、抗ウイルス活性を有する。
【００１５】 本発明は、ジンクフィンガー含有タンパク質から金属イオンを解離させるため
の方法を提供し、この方法は、ジンクフィンガーを本発明のチオールエステルと
接触させる工程を含む。代替の実施態様において、金属イオンは、亜鉛イオンで
あり；このジンクフィンガーは、ウイルスタンパク質を含み；このウイルスタン
パク質は、ヌクレオカプシドタンパク質、Ｇａｇタンパク質、またはＧａｇ−Ｐ
ｏｌタンパク質であり；そしてジンクフィンガー含有タンパク質は、インタクト
なウイルスに取り込まれる。
【００１６】 １実施態様において、ジンクフィンガー含有タンパク質から金属イオンを解離
させるための方法において、上記ウイルスと上記化合物との接触工程は、インビ
トロで実施される。上記ウイルスと上記化合物との接触工程はまた、インビボで
も実施され得る。このジンクフィンガーは、鳥類肉腫ウイルスおよび白血症レト
ロウイルス群、哺乳動物Ｂ型レトロウイルス群、ヒトＴ細胞白血病およびウシ白
血病レトロウイルス群、Ｄ型レトロウイルス群、マウスの白血病関連群、または
レンチウイルス群に由来するレトロウイルスタンパク質を含み得る。このレトロ
ウイルスタンパク質は、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＥＩＡＶ、
Ｖｉｓｎａ、ＣａＥＶ、ＨＴＬＶ−１、ＢＬＶ、ＭＰＭＶ、ＭＭＴＶ、ＲＳＶ、
ＭｕＬＶ、ＦｅＬＶ、ＢａＥＶ、またはＳＳＶレトロウイルス由来であり得る。
この方法は、さらに、上記ウイルスタンパク質のジンクフィンガーから上記金属
イオンの解離を検出する工程を含み得る。このジンクフィンガーからの上記金属
イオンの解離の検出は、キャピラリー電気泳動法、免疫ブロット法、核磁気共鳴
（ＮＭＲ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、放射性亜鉛−６５の放
出を検出する工程、蛍光を検出する工程、ゲル移動度シフトを検出する工程から
なる群から選択される方法を使用して実施され得る。
【００１７】 本発明はまた、ウイルスを不活化するための方法を提供し、上記方法は、上記
ウイルスと本発明の化合物とを接触させる工程を含み、ここで、上記ウイルスと
この化合物との接触によりウイルスを不活化する。この方法において、この化合
物は、ジンクフィンガーから亜鉛イオンを解離し得る。このウイルスは、鳥類肉
腫ウイルスおよび白血症レトロウイルス群、哺乳動物Ｂ型レトロウイルス群、ヒ
トＴ細胞白血病およびウシ白血病レトロウイルス群、Ｄ型レトロウイルス群、マ
ウスの白血病関連群、またはレンチウイルス群に由来するレトロウイルスであり
得る。このレトロウイルスは、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＥＩ
ＡＶ、Ｖｉｓｎａ、ＣａＥＶ、ＨＴＬＶ−１、ＢＬＶ、ＭＰＭＶ、ＭＭＴＶ、Ｒ
ＳＶ、ＭｕＬＶ、ＦｅＬＶ、ＢａＥＶ、またはＳＳＶレトロウイルス由来であり
得る。
【００１８】 ウイルスを不活化する方法において、ウイルスと化合物との接触は、インビボ
で実施され得る。この実施態様において、化合物は、ウイルスの伝播を阻害する
ために投与され得る。この化合物は、ウイルスの伝播を阻害するために膣内また
は直腸内に投与され得る。この化合物は、製薬処方物としてヒトに投与され得る
。この化合物は、獣医学的製薬処方物として動物に投与され得る。この方法は、
さらに、ウイルスと非チオールエステル抗レトロウイルス剤とを接触させる工程
を含み得る。この抗レトロウイルス剤は、ヌクレオチドアナログまたはプロテア
ーゼインヒビターであり得る。このヌクレオチドアナログは、ＡＺＴ、ｄｄＣＴ
ＰまたはＤＤＩであり得る。
【００１９】 ウイルスを不活化するための方法において、このウイルスとこの化合物との接
触工程は、インビトロで実施され得る。この方法の実施態様において、このレト
ロウイルスとこの化合物との接触は、血液製剤、血漿、栄養培地、タンパク質、
医薬品、化粧品、精液または卵母細胞の調製物、細胞、細胞培養物、細菌、ウイ
ルス、食品、あるいは飲料において実施され得る。
【００２０】 本発明はまた、単離しそして不活化したウイルスを提供し、ここで、ウイルス
は、ウイルスと本発明のチオールエステルとを接触させる工程を含む方法により
不活化され、ここで、ウイルスとチオールエステルとの接触工程により、ウイル
スを不活化する。この単離し、そして不活化したウイルスは、さらに、ワクチン
処方物を構成する。この単離し、そして不活化したウイルスは、鳥類肉腫ウイル
スおよび白血症レトロウイルス群、哺乳動物Ｂ型レトロウイルス群、ヒトＴ細胞
白血病およびウシ白血病レトロウイルス群、Ｄ型レトロウイルス群、マウスの白
血病関連群、またはレンチウイルス群に由来するレトロウイルスであり得る。こ
のウイルスは、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＥＩＡＶ、Ｖｉｓｎ
ａ、ＣａＥＶ、ＨＴＬＶ−１、ＢＬＶ、ＭＰＭＶ、ＭＭＴＶ、ＲＳＶ、ＭｕＬＶ
、ＦｅＬＶ、ＢａＥＶ、またはＳＳＶレトロウイルス由来であり得る。
【００２１】 本発明はまた、ウイルスタンパク質のジンクフィンガーでキレート化された金
属イオンを解離することが可能な化合物を選択する方法を提供し、この方法は、
以下の工程を含む：ジンクフィンガーをチオールと接触させる工程；および上記
ウイルスタンパク質のジンクフィンガーからの上記金属イオンの解離を検出する
工程。この方法において、金属イオンは、亜鉛イオンである。この方法において
、ジンクフィンガーから上記金属イオンの解離の検出は、キャピラリー電気泳動
法、免疫ブロット法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、高圧液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）、放射性亜鉛−６５の放出を検出する工程、蛍光を検出する工程、また
はゲル移動度シフトを検出する工程を使用して実施され得る。
【００２２】 本発明はまた、ウイルスタンパク質のジンクフィンガーから金属イオンを解離
することを可能にする化合物を選択するためのキットを提供し、このキットは、
レトロウイルスタンパク質、およびウイルスタンパク質からの上記金属イオンの
解離を検出するための使用説明書、本発明のチオールエステルの選択のための指
示を含む使用説明書を含む。このキットにおいて、ウイルスタンパク質はまた、
上記ウイルスタンパク質のジンクフィンガーでキレート化された亜鉛イオンと共
に供給される。ウイルスタンパク質は、インタクトなレトロウイルスに取り込ま
れ得る。このジンクフィンガーは、鳥類肉腫ウイルスおよび白血症レトロウイル
ス群、哺乳動物Ｂ型レトロウイルス群、ヒトＴ細胞白血病およびウシ白血病レト
ロウイルス群、Ｄ型レトロウイルス群、マウスの白血病関連群、またはレンチウ
イルス群に由来し得る。このジンクフィンガーは、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、Ｓ
ＩＶ、ＢＩＶ、ＥＩＡＶ、Ｖｉｓｎａ、ＣａＥＶ、ＨＴＬＶ−１、ＢＬＶ、ＭＰ
ＭＶ、ＭＭＴＶ、ＲＳＶ、ＭｕＬＶ、ＦｅＬＶ、ＢａＥＶ、またはＳＳＶレトロ
ウイルスに由来し得る。このキットにおいて、使用説明書は、キャピラリー電気
泳動法、免疫ブロット法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、高圧液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）、放射性亜鉛−６５の放出を検出する工程、蛍光を検出する工程、
またはゲル移動度シフトを検出する工程を使用して、上記タンパク質から上記金
属イオンの解離を検出する工程に関しても良い。
【００２３】 本発明はまた、本発明のチオールエステルを含む殺ウイルス組成物を提供する
。１実施態様において、この殺ウイルス組成物は、さらに、血漿、栄養培地、タ
ンパク質、医薬品、化粧品、精液または卵母細胞の調製物、細胞、細胞培養物、
細菌、ウイルス、食品または飲料を含み得る。
【００２４】 本発明はまた、本発明のチオールエステルを含む薬学的処方物を提供する。こ
の薬学的処方物は、さらに、薬学的賦形剤を含み得る。
【００２５】 本発明の性質および利益のさらなる理解は、本明細書の残りの部分および特許
請求の範囲を参照することによって実現化され得る。
【００２６】 本明細書に記載される全ての刊行物、電子データベース、特許、および特許明
細書は、本明細書よって、全ての目的のために参考として明確に援用される。
【００２７】 （詳細な説明） 選択圧力下、ウイルスは、薬物−耐性株に突然変異することが一般的であるの
で、ほとんどの抗ウイルス剤の有効性が限定される。薬物耐性の発生は、特にレ
トロウイルスの迅速に突然変異する能力のために、レトロウイルスにおける特に
著しい生存戦略である。生存および成長に必要なウイルスの構造が、良好な薬物
の標的である。それは、ウイルスの不活化は、突然変異によって容易に克服でき
ないからである。複製および生存のために必要不可欠なウイルスの構造は、薬物
開発の良好な標的である。これらの標的の有用性は、ウイルスの構造が突然変異
に不耐性である場合、さらに増強され得る。さらに、これらの構造は、ウイルス
のファミリー、群、または属の間で保存され、そして／または維持され得る。
【００２８】 本発明は、チオールエステルの新規な分類の組成物を提供する。これらのチオ
ールエステルは、種々の機構によって、特に、銀イオン複合体ジンクフィンガー
を用いて複合体することによってウイルスを不活化することを可能にする。好ま
しい実施態様において、本発明のチオールエステル組成物は、レトロウイルスを
不活化する。典型的に、この不活化は、チオールエステルがウイルスのヌクレオ
カプシドまたは他のジンクフィンガー含有タンパク質と接触するときに、実施さ
れる。これらの新規な組成物の重要な局面は、生物学的流体が減少した環境によ
って、これらの組成物が実施されないことである（すなわち、これらの活性が、
インビボで大きく減少することはない）。従って、これらは、ウイルス（特に、
レトロウイルス）薬物の処理において、重要な治療剤である。本発明の組成物の
殺ウイルス活性がまた、インビトロの適用、例えば、薬剤またはワクチンとして
および滅菌剤として使用するための殺傷ウイルスを作製することにおいても有用
である。
【００２９】 「ジンクフィンガー」モチーフは、高く保存され、そして多くのウイルス（特
に、レトロウイルス）に見出された重要な構造である。Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａ
ｅ（Ｓｐｕｍａｖｉｒｕｓｅｓを除いて）中のＧａｇおよびＧａｇ−Ｐｏｌタン
パク質は、ポリタンパク質のヌクレオカプシドｐ７（ＮＣｐ７）タンパク質部分
内で、高く保存されたジンクフィンガーモチーフ（ＣＣＨＣ）を含む（以下の定
義を参照のこと）。金属キレート化システイン残基およびヒスチジン残基、なら
びにタンパク質の他の残基、そして初期および後期のウイルスの複製間の重要な
機能に関与するタンパク質の残基の絶対的な保存により、抗ウイルス標的として
の特徴を同定する。ジンクフィンガー中でのキレート化残基の突然変異により、
非感染性のウイルスが得られる。ジンクフィンガーは、ほとんどのレトロウイル
ス中で確認されるので、その機能を阻害し得る薬剤は、幅広いスペクトルの抗ウ
イルス治療薬である可能性を有する。
【００３０】 ＨＩＶ−１ヌクレオカプシド（ＮＣ）タンパク質、ＮＣｐ７は、たった７個の
アミノ酸によって区分される２個のジンクフィンガーを含む（Ｈｅｎｄｅｒｓｏ
ｎ（１９９２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：１８５６）。両方のフィンガーが、感染
性のために重要である（Ａｌｄｏｖｉｎｉ（１９９０）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：
１９２０；Ｇｏｒｅｌｉｃｋ（１９９０）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：３２０７）。
従って、ＨＩＶ−１ヌクレオカプチドは、特に、ジンクフィンガー不活化剤に対
して無防備の標的である。全ての証拠は、フィンガー内キレート化された残基お
よびいくつかの他のキーとなる残基の完全な保存を示す。任意のこれらの残基の
突然変異によって、ウイルス感染力を失うか、または過酷な妥協が生じる。フィ
ンガー（ＣＣＨＣ〜ＣＣＨＨまたはＣＣＣＣ）の金属イオンキレート化特性を維
持するさらなる突然変異により、感染力の減少を生じる。従って、タンパク質活
性の復活を導く単一または複数の突然変異の、突然変異経路に関する証拠は、知
られていない。
【００３１】 種々のＣ−ニトロソ化合物およびジスルフィド含有化合物（例えば、シスタミ
ン、チアミンジスルフィド、およびジスルフィラム（ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ））
は、ジンクフィンガーシステインチオレートを酸化し得、分子内および分子間の
ジスルフィド架橋を誘導し得る。例えば、ＭｃＤｏｎｎｅｌ（１９９７）Ｊ．Ｍ
ｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：１９６９−１９７６；Ｒｉｃｅ（１９９７）Ｎａｔｕｒ
ｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ３：３４１−３４５；Ｒｉｃｅ（１９９７）Ａｎｔｉｍｉ
ｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ４１：４１９−４
２６；Ｒｉｃｅ（１９９６）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：３６０６−３６１６
；Ｒｉｃｅ（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ２７０：１１９４−１１９７；Ｒｉｃｅ
（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：９７２１−
９７２４；Ｒｉｃｅ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ３６１：４７３−４７５を参照の
こと。また、Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎら、ＷＯ９６／０９４０６を参照のこと。２個
のジンクフィンガーの各々中のシステインチオールは、Ｃｕ+2、Ｆｅ+3、Ｃ−ニ
トロソ化合物、ジスルフィド、マレイミド、α−ハロゲン化ケトン、およびに一
酸化窒素誘導体のような試薬によって、ネイティブなタンパク質構造の同時性の
損失を伴って、迅速に攻撃される。例えば、インタクトなＨＩＶ−１の、酸化剤
での処理（例えば、３−ニトロソベンズアミド、Ｃ−ニトロソ化合物）によって
、ヌクレオカプシドタンパク質のジスルフィド結合を導き、そしてジンクフィン
ガーの酸化によるウイルスの感染力を不活化する（Ｒｉｃｅ（１９９３）Ｎａｔ
ｕｒｅ３６１：４７３；Ｒｉｃｅ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：９７２１−９７２４）。Ｃ−ニトロソ化合物はまた、真核
生物のＣＣＨＣジンクフィンガー含有ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼを
不活化し得る（Ｂｕｋｉ（１９９１）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ２９０：１８１
）。しかし、これらの化合物は、有毒である傾向があり、乏しい溶解性およびバ
イオアベイラビリティを有し、そして生物学的溶液中で還元され、そして不活化
される。
【００３２】 本発明の新規なチオールエステルは、ジンクフィンガーと、求電子性のＳ−Ｓ
部分というよりむしろチオールエステル部分を介して相互作用する。得られるチ
オールエステルは、Ｓ−Ｓ求電子部分を欠く。より低い求核性の基は、ジンクフ
ィンガー部分を標的にするために使用される。結果として、これらは、多くのジ
スルフィド剤と比較して大きく向上した特性を有する。これらは、細胞毒性を減
少させた。これらは、ジンクフィンガー部分（特に、ＨＩＶ−１のＮＣｐ７ヌク
レオカプシドタンパク質のジンクフィンガー）との、向上した抗ウイルス性活性
およびよりよい反応性を有する。本発明のチオールエステルは、向上した水溶性
を有する。これらは、還元剤存在下で、ジンクフィンガーの反応性を維持する。
本発明のチオールエステルでの改良した特性（特に生物学的溶液中での還元に対
する耐性）の組合せは、、明らかにインビトロ、インビボ、および治療学的適用
における使用を向上させる。
【００３３】 （定義） 本発明の理解を容易にするために、多数の用語が、以下に定義される。
【００３４】 本明細書中で使用される場合、用語「アルキル」は、１〜３０個の炭素、好ま
しくは４〜２０個の炭素、より好ましくは６〜１８個の炭素を有する、分枝、も
しくは非分枝、飽和もしくは不飽和の一価の炭化水素基のことを示すために使用
される。アルキル基が、１〜６個の炭素原子を有する場合、それは、「低級アル
キル」と呼ばれる。適切なアルキル基には、例えば、１個以上のメチレン、メチ
ン（ｍｅｔｈｉｎｅおよび／またはｍｅｔｈｙｎｅ）基を含む構造が挙げられる
。分枝した構造は、ｉ−プロピル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、２−エチルプロピ
ルなどに類似の分枝したモチーフを有する。本明細書中で使用される場合、この
用語は、「置換されたアルキル」を強調する。「置換されたアルキル」は、低級
アルキル、アリール、アシル、ハロゲン（すなわち、アルキルハロ（例えば、Ｃ
Ｆ3）、ヒドロキシ、アミノ、アルコキシ、アルキルアミノ、アシルアミノ、チ
オアミド、アシルオキシ、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、メルカプ
ト、チア、アザ、オキソ、飽和および不飽和環式炭化水素、複素環など）のよう
な１個以上の官能基を含むことを示すアルキルのことを呼ぶ。これらの基は、ア
ルキル部分の任意の炭素に結合され得る。さらに、これらの基は、このアルキル
鎖から張り出し得るか、またはアルキル鎖と一体化し得る。
【００３５】 用語「アルコキシ」は、本明細書中、ＣＯＲ基を示すために使用され、ここで
、Ｒは、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール、置換アリール、アリール
アルキルまたは置換アリールアルキルであり、ここで、アルキル、アリール、置
換アリール、アリールアルキル、および置換アリールアルキル基は、本明細書中
、記載される通りである。適切なアルコキシラジカルには、例えば、メトキシ、
エトキシ、フェノキシ、置換フェノキシ、ベンジルオキシ、フェネチルオキシ、
ｔ−ブトキシなどが挙げられる。
【００３６】 用語「アルキルアミノ」は、第２級アミンおよび第３級アミンを示し、ここで
、このアルキル基は、同じであっても、異なっていても良く、本明細書中、「ア
ルキル基」に記載される。
【００３７】 用語「アリール」は、本明細書中、芳香族置換基を示すために使用され、これ
は、単一の芳香族環であっても良いし、多重芳香族環（これは、一緒に融合され
るか、共有結合的に結合されるか、またはメチレンもしくはエチレン部分のよう
な共通の基に結合される）であっても良い。共通の結合基はまた、ベンゾフェノ
ンにおけるようなカルボニルであり得る。芳香族環（単数または複数）には、と
りわけ、フェニル、ナフチル、ビフェニル、ジフェニルメチルおよびベンゾフェ
ノンが挙げられる。用語「アリール」は、「アリールアルキル」を包含する。「
置換アリール」は、記載したようなアリールを示し、これは、低級アルキル、ア
シル、ハロゲン、アルキルハロ（例えば、ＣＦ3）、ヒドロキシ、アミノ、アル
コキシ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アシルオキシ、フェノキシ、メルカプ
ト、ならびに飽和環状炭化水素および不飽和環状炭化水素の両方（これらは、芳
香族環（単数または複数）に融合されるか、あるいは共有結合的に結合されるか
、メチレンまたはエチレン部分のような共通の基に結合される）のような１つ以
上の官能基を含む。結合基はまた、シクロへキシルフェニルケトンにおけるよう
なカルボニルであり得る。用語「置換アリール」は、「置換アリールアルキル」
を包含する。
【００３８】 用語「アリールアルキル」は、本明細書中、本明細書に規定されるように、ア
リール基がさらにアルキル基に接続される「アリール」のサブセットを示すため
に使用される。
【００３９】 「接触」は、反応が起こり得るように、反応の成分を適切な近位に持ってくる
動作を示す。より詳細には、本明細書中に使用されるように、用語「接触」は、
以下の用語と交換可能で使用され得る：合わせる、加える、混ぜる、通す、流す
など。
【００４０】 本明細書中で使用されるように、用語「Ｇａｇ−Ｐｏｌタンパク質」は、例え
ば、Ｆｅｈｒｍａｎｎ（１９７７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３５：３５２３５９；
Ｊａｃｋｓ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３１：２８０−２８３によって記載さ
れるように、ＨＩＶ−１または他のレトロウイルスのポリタンパク質翻訳産物を
示す。「Ｇａｇタンパク質」は、ウイルスプロテアーゼによって処理され、成熟
したウイルスタンパク質を生成する。例えば、Ｈｕｍｐｈｒｅｙ（１９９７）Ａ
ｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４１：１０１７−１
０２３；Ｋａｒａｃｏｓｔａｓ（１９９３）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １９３：６６１
−６７１を参照のこと。
【００４１】 用語「ハロゲン」は、本明細書中、フッ素、臭素、塩素およびヨウ素原子を示
すために使用される。
【００４２】 本明細書中に使用されるように、例えば、本発明のチオールエステル、チオー
ルエステル複合ポリペプチドまたはウイルス、あるいはチオールエステル不活化
ウイルスのような、分子または組成物を示す場合、「単離」は、分子または組成
物が、タンパク質、他の核酸（例えば、ＲＮＡ）、あるいはインビボまたはその
天然状態で付随している他の混入物のような、少なくとも１つの他の化合物から
分離されることを意味する。従って、化合物、ポリペプチド、またはビリオンは
、例えば、細胞抽出物、血清などにおけるような細胞膜のような天然に付随する
任意の他の成分から単離された場合、単離されたと考えられる。しかし、単離さ
れた組成物はまた、実質的に純粋であり得る。単離された組成物は、均質な状態
であり得、乾燥または水溶液であり得る。純度および均質性は、例えば、ポリア
クリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）または高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）のような分析化学技術を使用して決定され得る。
【００４３】 本明細書で使用されるように、用語「ヌクレオカプシドタンパク質」または「
ＮＣタンパク質」は、例えば、Ｈｕａｎｇ（１９９７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：
４３７８−４３８４；Ｌａｐａｄａｔ−Ｔａｐｏｌｓｋｙ（１９９７）Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．２６８：２５０−２６０に記載されるように、レトロウイルスの
ヌクレオカプシドタンパク質を示し、これは、ビリオンヌクレオカプシドの必須
部分であり、ここで、このヌクレオカプシドは、二量体ＲＮＡゲノムを被膜する
。ＨＩＶ−１のヌクレオカプシドタンパク質は、「ＮＣｐ７」と呼ばれる。Ｄｅ
ｍｅｎｅ（１９９４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３：１１７０７−１１７１
６もまた参照のこと。
【００４４】 本明細書中で使用されるように、用語「レトロウイルス」は、Ｒｅｔｒｏｖｉ
ｒｉｄａｅファミリーのウイルスを示し、これは、典型的には、逆トランスクリ
プターゼによって転写されるｓｓＲＮＡを有し、これは、例えば、Ｐ．Ｋ．Ｖｏ
ｇｔ、「Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｇ
ｅｎｅｒａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ」、ｉ
ｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ、Ｊ．Ｍ．Ｃｏｆｆｉｎ、Ｓ．Ｈ．Ｈｕｇｈｅｓ
およびＨ．Ｅ．Ｖａｒｍｕｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂａｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９７、１−２６頁；Ｍｕｒｐｈｙら編、Ａｒ
ｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ／Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １０、５８６
頁（１９９５）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、Ｗｉｅｎ、ＮＹ；およびＣｏ
ｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ
Ｖｉｒｕｓｅｓ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎ
ｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｓｏ
ｃｉｅｔｙのウェブサイトのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ
．ｇｏｖ／ＩＣＴＶ／ｆｏｒ ｖｉｒａｌ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａ
ｎｄ ｔａｘｏｎｏｍｙのように規定される。ジンクフィンガーモチーフ含有ポ
リペプチドを含み、本発明のチオールエステルによって複製が阻害され得るＲｅ
ｔｒｏｖｉｒｉｄａｅファミリーのメンバーには、鳥類肉腫レトロウイルスおよ
び白血症レトロウイルス（アルファレトロウイルス）、哺乳動物Ｂ型レトロウイ
ルス（ベータレトロウイルス）（例えば、マウス乳腺癌ウイルス）、ヒトＴ細胞
白血病およびウシ白血病レトロウイルス（デルタレトロウイルス）（例えば、ヒ
トＴ−リンパ指向性（ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ）ウイルス １）、マウス白血
病関連群（ガンマレトロウイル）、Ｄ型レトロウイルス（イプシロンレトロウイ
ルス）（例えば、マソン−ファイザーサルウイルス）、ならびにＬｅｎｔｉｖｉ
ｒｕｓ（レンチウイルス）が挙げられる。Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓには、ウシ、ウ
マ、ネコ、ヒツジ／ヤギ、および霊長類レンチウイルス群（例えば、ヒト免疫不
全ウイルス １（ＨＩＶ−１）が挙げられる。本発明のチオールエステルによっ
て複製能力が影響される特定の種類のウイルスの例には、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−
２、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＥＩＡＶ、Ｖｉｓｎａ、ＣａＥＶ、ＨＴＬＶ−１、ＢＬＶ
、ＭＰＭＶ、ＭＭＴＶ、ＲＳＶ、ＭｕＬＶ、ＦｅＬＶ、ＢａＥＶ、およびＳＳＶ
レトロウイルスが挙げられる。
【００４５】 本明細書中で使用されるように、用語「チオールエステル」および「チオエス
テル」は、交換可能で使用され得、これらは、化学構造、Ｇ−Ｓ−（Ｃ＝Ｏ）−
Ｇ’を示し、ここでＧおよびＧ’は、任意の２つの原子の群を示す；−２の酸化
状態の硫黄原子に直接結合される酸素ベースのカルボニル基から構成される任意
の化学構造。次に、炭素および硫黄原子は、任意の２つの原子の群に結合される
；従って、Ｇ−Ｓ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｇ’。
【００４６】 本明細書中で使用されるように、「ジンクフィンガー」は、金属イオンに配位
するシステインおよび／またはヒスチジンからなるポリペプチドモチーフを示し
、これらはタンパク質／核酸および／またはタンパク質／タンパク質相互作用に
関与する構造を生じる。本発明のチオエステルは、インビトロでジンクフィンガ
ーから金属イオンを解離し得る。典型的には、金属イオンは、亜鉛またはカドミ
ウムのような２価カチオンである。ジンクフィンガーモチーフ含有タンパク質は
、一般に、ウイルスにおいて高度に保存性（ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ）で必須の構造
である。ジンクフィンガーモチーフは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、特
に、ＨＰＶＥ６およびＥ７タンパク質（例えば、Ｕｌｌｍａｎ（１９９６）Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ Ｊ．３１９：２２９−２３９を参照のこと）、インフルエンザウイ
ルス（例えば、Ｎａｓｓｅｒ（１９９６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：８６３９−８
６４４を参照のこと）に見出される。鳥類肉腫レトロウイルスおよび白血病レト
ロウイルス、哺乳動物Ｂ型レトロウイルス、ヒトＴ細胞白血病およびウシ白血病
レトロウイルス、Ｄ型レトロウイルスならびにＬｅｎｔｉｖｉｒｕｓを含む、Ｒ
ｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅの大部分のサブファミリーにおいて、不変のジンクフィ
ンガーモチーフが最も高度に保存性の構造である。レトロウイルスのヌクレオカ
プシド、ＧａｇおよびＧａｇ−Ｐｏｌタンパク質は、ジンクフィンガーモチーフ
を有する。レトロウイルスにおいて、ジンクフィンガーモチーフは、典型的に、
１４個のアミノ酸からなり、４個の残基が不変である：Ｃｙｓ（Ｘ）２Ｃｙｓ（
Ｘ）4Ｈｉｓ（Ｘ）4Ｃｙｓ。従って、「ＣＣＨＣジンクフィンガー」として呼ば
れる（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ（１９８１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５６：８４
００）。これは、そのヒスチジンイミダゾールおよびシステインチオレートを通
して亜鉛にキレートする（Ｂｅｒｇ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３２：４８５
；Ｂｅｓｓ（１９９２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：８４０；Ｃｈａｎｃｅ（１９９
２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：１００４１；
Ｓｏｕｔｈ（１９９０）Ａｄｖ．Ｉｎｏｒｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８：１９９；Ｓ
ｏｕｔｈ（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４０：１２３−１
２９）。ＣＣＨＣジンクフィンガーは、パッケージング（ｐａｃｋａｇｉｎｇ）
ゲノムＲＮＡのようなレトロウイルス感染における必須の機能を行う。これらは
また、ウイルス感染の初期の事象に必須である。
【００４７】 本明細書中で使用されるように、用語「インビトロでジンクフィンガーから金
属イオンを解離し得る、または抗ウイルス活性を有する」は、チオールエステル
が、インビトロアッセイ（そのうちのいくらかは本明細書中に記載される）を使
用して、任意の程度までジンクフィンガーから金属イオンを解離し得る場合、本
発明の範囲内であることを意味する。ジンクフィンガーからの金属イオンの解離
を検出することは、例えば、キャピラリー電気泳動法、免疫ブロット法、核磁気
共鳴（ＮＭＲ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、放射性亜鉛−６５
の放出の検出、蛍光検出、およびゲル移動度シフトの検出を使用して実行され得
る。この用語はまた、チオールエステルが、任意のアッセイ（例えば、本明細書
中に記載されるＸＴＴ細胞保護作用アッセイ）において任意の抗ウイルス活性を
示す場合、本発明の範囲内であることを意味する。例えば、任意の程度の測定可
能な抗ウイルス活性を有するチオールエステルは、たとえ金属イオンの解離が検
出可能でない場合でさえ、本発明の範囲内である。
【００４８】 本明細書で使用されるように、用語「ウイルスの伝播を阻害する」および「抗
ウイルス活性」は、ウイルス複製能力を任意の方法でネガティブに影響するチオ
ールエステルの能力を意味する。このような伝播の阻害（例えば、複製能力の損
失）は、当該分野で公知の任意の手段を使用して測定され得る。例えば、本発明
のチオールエステルは、ウイルスの、子孫を産生する能力、（ビリオンの形態の
場合）細胞に融合する能力、細胞に入る能力、細胞から出芽する能力、細胞内ま
たは細胞外で生存する能力、そのＲＮＡゲノムを逆転写する能力、ウイルス蛋白
質を翻訳する能力、プロテアーゼでポリタンパク質を処理する能力、ウイルス成
分の細胞内アセンブリをカプシドにする能力などを減少させる場合、ウイルスの
伝播を阻害している（抗ウイルス活性を有している）。ウイルスの伝播を阻害す
る本発明のチオールエステルの能力は、任意の化学的または生物学的機構または
経路によって制限されない。チオールエステルは、例えば、ＮＣｐ７のようなヌ
クレオカプシドタンパク質に結合すること；ＮＣｐ７の、ウイルスＲＮＡまたは
別の核酸への結合を妨げること；安定な付加物形成をもたらす特異的な化学的攻
撃に関係すること；不安定なＮＣｐ７化合物付加物の崩壊の結果として、細胞内
ジスルフィド結合を形成すること；ＮＣｐ７タンパク質内の他の保存性または非
保存性残基と相互作用して、機能の損失に至ることなどによって、ウイルスの伝
播を阻害し得る（複製能力を減少し得る）。
【００４９】 （一般的方法） 本発明は、インビトロでジンクフィンガーから金属イオンを解離し得るチオエ
ステル化合物の新規の種類を提供する。当業者は、本発明のチオールエステルを
種々の手順および方法論を使用して合成し得る。これらは、例えば、Ｏｒｇａｎ
ｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅ Ｖｏｌｕｍｅｓ、Ｇｉｌｍ
ａｎら編 Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ＮＹ；Ｖｅｎｕｔ
ｉ（１９８９）Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．６：８６７−８７３のような科学文献およ
び特許文献に十分に記載されている。本発明は、当該分野で公知の任意の方法ま
たはプロトコルと組み合わせて実施され得、これらは科学文献および特許文献に
十分に記載される。従って、本発明の新規なチオールエステルおよび方法に対し
て、特定の方法論および実施例を議論する前に、ほんのわずかな一般的な技術を
記載する。
【００５０】 全ての有機試薬および中間体は、Ｓｉｇｍａ／Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ Ｌｏｕ
ｉｓ，ＭＯ）およびＬａｎｃａｓｔｅｒ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｉ
ｎｄｈａｍ，ＮＨ）から得られた。溶媒および他の化合物は、試薬品等級であっ
た。すべての化合物の構造および組成は、1Ｈ ＮＭＲおよびＥＩ ＭＳによっ
て確認され、シリカ層ＴＬＣによって分析され、ピリジニオアルカノイルチオエ
ステル（ｐｙｒｉｄｉｎｉｏａｌｋａｎｏｙｌ ｔｈｉｏｅｓｔｅｒ）（ＰＡＴ
Ｅ）化学種を含むチオールエステルに対してメタノール／酢酸（６：４）で、他
の化学種に対してクロロホルム／メタノール（９：１）で溶出した。
【００５１】 本発明のチオールエステルは、ジンクフィンガーを攻撃し、そこから亜鉛を排
出することによって、ＨＩＶ−１のようなレトロウイルスを含むジンクフィンガ
ーを、不活化するために使用される。一旦不活化されると、レトロウイルスは、
例えば、ワクチンとして、予防薬として、またはレトロウイルス感染の診断のた
めの標準的なＥｌＩＳＡアッセイにおける成分として、使用され得ることは当業
者に容易に明らかとなる。これらの新規組成物を作製し、そしてこれらの方法を
作製しそして使用する工程は、種々の標準的な手順および試薬を組み込む工程を
含み得る。ＨＩＶ−１ＣＣＨＣジンクフィンガーと反応し得る化合物を同定する
ためのキットがまた、提供される。本発明の新規組成物に加えて、これらのキッ
トは、種々の標準的な手順および試薬を組み込む。
【００５２】 本発明と結び付けて使用され得る一般的な方法の以下の議論は、例示の目的の
ためのみに意図される。他の代替的な方法および実施態様は、本発明の開示を精
査して、当業者に明らかとなる。
【００５３】 （ジスルフィドベンズアミド化学種、化合物２Ｄの合成） 表１に記載されるように化合物２Ｄ（「Ｄ」は、ダイマー形態、すなわち表１
に示されるように「Ｄ形態」を示した）または、Ｎ，Ｎ’−（２，２’−ジチオ
ジベンゾイル）−ビス−スルファセトアミド（ｓｕｌｆａｃｅｔａｍｉｄｅ）を
合成するための例示的な手段は、以下である。出発物質、２，２’−ジチオジベ
ンゾイルクロライドを、Ｋａｔｚ（１９５３）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１８：１
３８０−１４０２；Ｂａｇｇａｌｅｙ（１９８５）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２８
：１６６１−１６６７によって記載されるように合成した。スルファセトアミド
（１３ｇ、６０ｍｍｏｌ）のピリジン（３００ｍｌ）溶液に、２，２’−ジチオ
ジベンゾイルクロライド（８５％、８．１ｇ、２０ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキ
サン（１００ｍｌ）の溶液を室温（ＲＴ）で滴下した。透明な赤褐色の溶液を、
ＲＴで一晩攪拌し、次いで、激しく攪拌したエチルエーテル（１Ｌ）に注いだ。
粘稠な液体性の沈澱物を、エーテル相から分離し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ、約５０ｍｌ）に溶解し、８００ｍｌの激しく攪拌した水性３Ｍ Ｈ
Ｃｌに滴下した。白色沈澱物を濾過し、水で洗浄し、真空で乾燥した。収量１１
ｇ（７８％）。粗生成物（１ｇ）を熱エタノール（２０ｍｌ）に溶解した。熱濾
液を、攪拌した水（２００ｍｌ）に添加した。白色沈澱物を濾過し、乾燥した。
収量は、０．８５ｇ（８５％）（純粋な２Ｄ）であった。
【００５４】
【数１】 （ベンゾイソチアゾロン化学種、化合物２Ｂ、２２、３１、３４の合成） 表１に記載されるような化合物２Ｂ（「Ｂ」は、ＢＩＴＡ、すなわちベンゾイ
ソチアゾロン形態を示す）またはＮ−［４−（３−オキソ−３Ｈ−ベンズ［ｄ］
イソチアゾール−２−イル）フェニルスルホニル］アセトアミドを含むベンゾイ
ソチアゾロン化学種を合成するための例示的な手段は、以下である。２つの方法
を使用した。１つの方法では、化合物２Ｄ（０．２ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）のピ
リジン（２ｍｌ）溶液に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（０．１８ｇ、１ｍｍｏｌ
）の１，４−ジオキサン（１ｍｌ）溶液を加えた。この溶液をＲＴで３時間攪拌
し、水（３０ｍｌ）に加えた。白色沈澱物を、収集し、熱エタノールおよび水か
ら沈澱物によって精製した。収量０．１７ｇ（８７％）。
【００５５】
【数２】 第２の方法は、化合物２Ｂ、化合物２２ ＢＩＴＡ、化合物３１ ＢＩＴＡお
よび化合物３４ ＢＩＴＡ（表１を参照のこと）を合成するために使用された。
ＣＣｌ4（１０ｍｌ）中の２，２’−ジチオジベンゾイルクロライド（０．３２
ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）の混合物に、２．５％ ｗ／ｖＣｌ2のＣＣｌ4（１０ｍ
ｌ）溶液を加えた。この混合物を透明になるまで攪拌した（１時間）。濾過後、
濾液に１時間Ｎ2をバブリングし、スルファセトアミド（０．２ｇ、０．９３ｍ
ｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ、４ｍｌ）溶液を加えた。こ
の混合物を、２時間攪拌し、エチルエーテル（２０ｍｌ）を加え、沈澱物を収集
し、熱エタノールおよび水で精製した。化合物２Ｂについての収量、０．３ｇ（
９２％）；方法Ａと同じ1Ｈ ＮＭＲおよびＥＩ ＭＳ。分析、計算値（Ｃ15Ｈ1 2 Ｎ2Ｏ4Ｓ2）：Ｃ，５１．７１；Ｈ，３．４７；Ｎ，８．０４。実測値：Ｃ，５
１．３４；Ｈ，３．６４；Ｎ，７．９６。
【００５６】 （間隔をあけた（Ｓｐａｃｅｄ）ジスルフィドベンズアミド／ベンゾイソチア
ゾロン化学種（Ｃｈｅｍｏｔｙｐｅ）、例示的化合物２３Ｄ、２４Ｄおよび２５
Ｄの合成） 化合物２３Ｄ（表１を参照）（すなわちＮ，Ｎ’−（２，２’−ジチオジベン
ゾイル）−ビス−４−（アミノメチル）ベンゼン−スルホンアミド）、２４Ｄ（
すなわちＮ，Ｎ’−（２，２’−ジチオジベンゾイル）−ビス−４−（２−アミ
ノエチル）ベンゼン−スルホンアミド）、および２５Ｄ（すなわちＮ，Ｎ’−（
２，２’−ジチオジベンゾイル）−ビス−４−（グリシンアミド）ベンゼン−ス
ルホンアミド）（表１を参照）を合成する例示的な手段は、以下である。これら
の化合物を、それぞれ、４−（アミノメチル）ベンゼンスルホンアミド（Ａｌｄ
ｒｉｃｈ）、４−（２−アミノエチル）ベンゼンスルホアミド（Ａｌｄｒｉｃｈ
）、およびＮ−グリシルスルファニルアミドから調製した。後者の化合物を、ま
ずスルファニルアミドをＤＭＡ中の当モル量のブロモアセチルブロミドおよびピ
リジンで処理し、そしてこの反応混合物を過剰の０．５Ｍ ＨＢｒに添加後、こ
のブロモアセチル化した誘導体を回収することによって、調製した。乾燥した粗
生成物をエタノールから再結晶し、そして標準のＧａｂｒｉｅｌ反応（フタルイ
ミド誘導体を調製し、そしてヒドラジン水和物で開裂する）によってＮ−グリシ
ルスルファニルアミドへ転化した。次いで、化合物２Ｄについての手順（上記の
概略）を続けた。
【００５７】
【数３】 （Ｎ−末端修飾アミノフェニルスルホン化学種、例示的化合物３４Ｄの合成） 化合物３４Ｄ（表１を参照）（すなわち、Ｎ，Ｎ’−（２，２’−ジチオジベ
ンゾイル）−ビス−４−スルファニリル−Ｎ−［（２−ニトロベンジル）スルホ
ニル］アニリン）を合成する例示的な手段は、以下である。化合物２６を、３−
アミノフェニルスルホンおよび２，２’−ジチオジベンゾイルクロリドで出発し
て、化合物２Ｄと同様な様式で、作製した。ＤＭＡ（３０ｍｌ）中の化合物２６
（１．５ｇ、１．９ｍｍｏｌ）の溶液へ、１，４−ジオキサン（１０ｍｌ）中の
２−ニトロ−トルエンスルホニルクロリド（１．４ｇ、５．９ｍｍｏｌ）の溶液
を添加した。この溶液を室温で一晩攪拌し、次いで激しく攪拌したエチルエーテ
ル（３００ｍｌ）へ移した。エーテル相を除去した後、この粘性液体をＤＭＦ（
１５ｍｌ）で希釈した。この希釈溶液を、攪拌しながら、水（２００ｍｌ）へ添
加した。この白色析出物を回収し、そして熱エタノールおよびエチルエーテルか
ら２回析出により精製した。化合物３４Ｄの収量：１．９２ｇ（８４％）。
【００５８】
【数４】 （２，３−ハロアルカノアミドベンズアミド化学種、例示的化合物３７の合成
） 化合物３７（表１を参照）（すなわち、Ｎ−［２−（３−クロロ−プロピオン
アミド）ベンゾイル］スルフアセトアミド）を合成する例示的な手順は、以下で
ある。Ｎ−（２−ニトロベンゾイル）スルフアセトアミドを、２−ニトロベンゾ
イルクロリドで出発して、２Ｄと同様の様式で、作製した。１グラム（２．７ｍ
ｍｏｌ）のこの生成物を４５℃のメタノール（１００ｍｌ）中に溶解した。この
溶液を室温まで冷却し、次いで、空気を除去するためにＮ2でバブリングした。
この溶液へ、窒素下でパラジウム（活性炭上に１０重量％）（０．２２ｇ）を添
加した。この混合物をＨ2で１．５時間、次いでＮ2で０．５時間バブリングした
。濾過後、濾液をエバポレートして乾燥させた。収量０．８４ｇ（９３％）の白
黄色生成物。この２−アミノベンズアミド誘導体を、化合物３４Ｄについて記載
した条件と同様な条件下で、３−クロロプロピオニルクロリドと反応させ、化合
物３７を得た。
【００５９】
【数５】 （ハロアルカノイルチオエステル化学種、例示的化合物４４の合成） 化合物４４（表１を参照）（すなわち、Ｎ−［２−（５−ブロモバレロイルチ
オ）ベンゾイル］スルフアセトアミド）を合成する例示的な手段は、以下である
。Ｎ−（２−メルカプトベンゾイル）スルフアセトアミドをまず、９０％ＤＭＦ
（２０ｍｌ）、トリス（２−カルボキシエチルホスフィンヒドロクロリド（１ｇ
、３．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．５ｍｌ）中の２Ｄ（２．２ｇ
、３．１ｍｍｏｌ）の溶液へ添加することによって、調製した。この溶液を１時
間攪拌し、次いで０．５Ｍ ＨＣｌ（２００ｍｌ）へ添加した。析出物を回収し
、そして乾燥し、２．３ｇ（９５％）を得た。ＤＭＡ（５ｍｌ）中のこの生成物
（０．５ｇ、１．４ｍｍｏｌ）の溶液へ、Ｎ2下で、５−ブロモバレリルクロリ
ド（０．６ｍｌ、約４．５ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液をＮ2下で１時間攪
拌し、そしてエチルエーテル（５０ｍｌ）へ添加した。エーテル相をデカンテー
ションした後、この残余の粘性液体をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解した。この溶液
を、激しく攪拌した水（１００ｍｌ）に添加した。この白色析出物を濾過し、そ
して熱エタノールおよび水から精製した。化合物４４の収量：０．４７ｇ（６５
％）。
【００６０】
【数６】 （ピリジニオアルカノイルチオエステル化学種、例示的化合物４５の合成） 化合物４５（表１を参照）（すなわち、Ｎ−［２−（５−ピリジニオ−バレロ
イルチオ）ベンゾイル］スルフアセトアミドブロミド）を合成するための例示的
手段は、以下である。ピリジン（７ｍｌ）中の化合物４４（０．２５ｇ、０．４
９ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ2下で一晩攪拌した。エチルエーテル（８０ｍｌ）を
添加し、そいてこの白色析出物を回収し、そして熱エタノールおよびエーテルか
ら精製し、この析出物を減圧下で直ちに乾燥させた。化合物４５の収量、０．２
１ｇ（７２％）。
【００６１】
【数７】 （テンプレートＩ、ＩＩおよびＩＩＩによって表されるチオールエステルの合
成） テンプレートＩ、ＩＩおよびＩＩＩによって表されるチオールエステル化合物
を合成するための例示的手段は、以下である。上述したように、当業者は、本発
明のチオールエステルを生成するために、任意の合成スキームまたは任意の例示
的プロトコルの改変を使用し得る。
【００６２】 テンプレートＩＩおよびＩＩＩｂにおいて（ここで、Ｘは、−ＣＨ2−、−Ｃ
Ｈ2ＣＨ2−および−ＣＨ2Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−である）、チオールエステルは、
上述の、化合物２３Ｄ、２４Ｄおよび２５Ｄ（表１を参照）を合成するための方
法をそれぞれ使用して生成され得る。
【００６３】 チオールエステルがＮ−［２−（α−ピリジニオ−４−トルオイルチオ）ベン
ゾイル］スルフアセトアミドクロリドである場合、ジメチルアセトアミド（２ｍ
ｌ）中のＮ−（２−メルカプトベンゾイル）スルフアセトアミド（化合物４４の
合成を参照）（０．４ｇ）および４−（クロロメチル）ベンゾイルクロリド（０
．６ｍｌ）の溶液を窒素下で１時間攪拌し、次いで、攪拌しながらエチルエーテ
ル（４０ｍｌ）へ添加した。この粘性液体析出物をジメチルホルムアミド（１ｍ
ｌ）で希釈し、次いでエーテル（４０ｍｌ）およびヘプタン（４０ｍｌ）の溶液
へ添加した。この粘性液体析出物を回収し、そしてピリジン（３ｍｌ）へ添加し
た。この溶液をＡｒ下で３日間室温で攪拌し、次いで、エーテル（５０ｍｌ）へ
添加した。この析出物を回収し、そして乾燥させた。この粗生成物を、ＭｅＯＨ
中１０％ＡｃＯＨでのアイソクラチック溶出（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ ｅｌｕｔｉ
ｏｎ）を使用して、シリカゲルカラムで精製した。
【００６４】 チオールエステルがＮ−［２−（２−（ピリジニオアセトアミド）ベンゾイル
チオ）ベンゾイル］スルフアセトアミドクロリドである場合、化合物３７のアナ
ログを、３−クロロプロピオニルクロリドの代わりにクロロアセチルクロリドを
用いること以外は同一の様式で調製した。この生成物をピリジンに溶解し、そし
て室温で静置し、そしてこの生成物をＮ−［２−（α−ピリジニオ−４−トルオ
イルチオ）ベンゾイル］スルフアセトアミドクロリドについて上で記載したよう
に、ワークアップした。
【００６５】 チオールエステルがＮ−［２−（ピリジニオアセトアミドアセチルチオ）ベン
ゾイル］スルフアセトアミドクロリドである場合、Ｎ−（２−メルカプトベンゾ
イル）スルフアセトアミドを、化合物４４について記載したように調製した。ク
ロロアセチルグリシンは、この生成物のチオール基へ結合され得、続いて、（ａ
）ｐ−ニトロフェニルエステル誘導体か、または（ｂ）オキサリルクロリドを使
用して調製された酸クロリド、によってグリシンカルボニル基が活性化される。
ワークアップおよび引き続くピリジンとの反応を、上記のＮ−［２−（α−ピリ
ジニオ−４−トルオイルチオ）ベンゾイル］スルフアセトアミドクロリドについ
て記載したように実施した。
【００６６】 チオールエステルがＮ−［２−（２−（ピリジニオアセトアミド）イソブチリ
ルチオ）ベンゾリル］スルフアセトアミドクロリドである場合、この化合物を、
クロロ−アセチルグリシンの代わりにＮ−クロロアセチル−２−アミノイソブチ
ル酸（Ｂｉｒｎｂａｕｍ（１９５２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９４：４５５
およびＲｏｎｗｉｎ（１９５３）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１８：１２７に従って
調製した）を用いること以外は、上述のＮ−［２−（ピリジニオアセトアミドア
セチルチオ）ベンゾイル］スルフアセトアミドクロリドと同様の様式で調製し得
た。
【００６７】 チオールエステルがＮ−［２−（５−ジメチルスルホニオバレロイルチオ）ベ
ンゾイル］スルフアセトアミドヨージドである場合（ここで、Ｚ＝−Ｓ+（ＣＨ3 ）2そしてＹ＝−（ＣＨ2）4−）：アセトン（９９％、２５ｍｌ）中の化合物４
４（１．１０ｇ）およびＮａＩ（５ｇ）の混合物を窒素下、室温で一晩攪拌し、
次いで攪拌しながら水（２５０ｍｌ）へ添加した。白色析出物を回収し、そして
乾燥した。収量、１．２ｇ。アセトニトリル（３ｍｌ）およびメチルフルフィド
（４ｍｌ）中のこの生成物（０．３ｇ）の透明な溶液を、室温で一晩攪拌した。
この透明な溶液を、激しく攪拌しながら、エチルエーテル（２５０ｍｌ）へ添加
した。この白色析出物を回収し、エーテルで洗浄し、そして乾燥した。収量、０
．１５ｇ。
【００６８】 チオールエステルがＮ−［２−（５−トリエチルアンモニオバレロイルチオ）
ベンゾイル］スルフアセトアミドヨージドである場合（ここで、Ｚ＝−Ｎ+（Ｃ2 Ｈ5）3そしてＹ＝−（ＣＨ2）4−）：Ｎ−［２−（５−ジメチルスルホニオバレ
ロイルチオ）ベンゾイル］スルフアセトアミドヨージドのパラレル合成を実施し
得、ここで、メチルスルフィドの代わりにトリエチルアミンを用いる。還流が、
トリエチルアミンとの反応を終了するために要求され得る。
【００６９】 チオールエステルをＮ−［２−（５−トリ−ｎ−ブチルホスホニオバレロイル
チオ）ベンゾイル］スルフアセトアミドヨージドである場合（ここで、Ｚ＝−Ｐ + （Ｃ4Ｈ9）3そしてＹ＝−（ＣＨ2）4−）：Ｎ−［２−（５−ジメチルスルホニ
オバレロイルチオ）ベンゾイル］スルフアセトアミドヨージドのパラレル合成を
実施し得、ここで、メチルスルフィドの代わりにトリ−ｎ−ブチルホスフィンを
用いる。
【００７０】 テンプレートＩＩＩのチオールエステル種（ここで、Ｇはｔ−ブチルであり、
Ｙは−ＣＨ2−であり、Ｘは−ＣＨ2−である）を合成するために、ピリジン環は
、Ｒ8およびＲ10で置換カルボキサミド基を有し、Ｒ6はＨであり、Ｒ9は＝−Ｓ
Ｏ2−ＮＨ2であり、そしてＲ7、Ｒ8、Ｒ10、Ｒ11はＨである：４−［１−（ｔ−
ブチルチオカルボニルメチル）ニコチンアミドメチル］−ベンゼンスルホンアミ
ドクロリドトリエチルアミン（３６ｍｍｏｌ）およびニコチノイルクロリドヒド
ロクロリド（３０ｍｍｏｌ）を、１５０ｍｌのアセトニトリル中の４−（アミノ
メチル）ベンゼンスルホンアミドヒドロクロリド水和物（３０ｍｍｏｌ）の懸濁
液へ添加した。さらなる６０ｍｍｏｌのトリエチルアミンを徐々に添加した。４
−（ニコチンアミドメチル）ベンゼンスルホンアミドの析出物を、１８０ｍｌの
水中の１２ｍｌエタノールの溶液から再結晶した。減圧下／ＣａＣｌ2で生成物
を乾燥した。次に、Ｓ−クロロアセチル−ｔ−ブチルメルカプタンを、Ｄａｗｓ
ｏｎ（１９４７）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．６９：１２１１に従って、
クロロアセチルクロリドおよびｔ−ブチルメルカプタンを反応させることによっ
て調製した。このチオールエステルを、１０ｍｍｏｌのこのニコチンアミド誘導
体を１２５ｍｌのアセトニトリル中の２０ｍｍｏｌのクロロアセチルチオエステ
ルとともに一晩還流して攪拌することによって、調製する。室温で静置すると、
生成物が結晶化する。それは、エタノール−水混合物から再結晶され得る。
【００７１】 テンプレートＩＩおよびＩＩＩｂにおいて（ここで、Ｒ1は、アルキル、−Ｃ
Ｈ3、−（ＣＨ2）ｎ−ＣＨ3、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−Ｃ（ＣＨ3）3、−アリール
、−アリールアルキル、−Ｐｈ−ＣＨ3、アリールアルコキシ、−Ｐｈ−ＯＣＨ3 、ニトロアリール、−Ｐｈ−ＮＯ2、−（ＣＨ2）n−Ｘ（ここで、Ｘは、ハロゲ
ン、−（ＣＨ2）n−Ｃｌ、−（ＣＨ2）n−Ｂｒ、または−（ＣＨ2）n−Ｉである
）である）；式Ｒ1−Ｃ（＝Ｏ）−を含むアシル基を有する（Ｒ1はこれらの代替
Ｒ1構造から選択される）、Ｎ−（２−アシルチオベンゾイル）スルフアセトア
ミドを、５−ブロモバレリルクロリドの代わりにＲ1−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃｌを用い
て、化合物４４について記載されたように調製し得る。
【００７２】 Ｈでなく−ＣＨ3であるＲ２を有する、テンプレートＩおよびＩＩに基づくチ
オールエステルを、前駆体化合物２Ｄの調製において２，２’−ジチオジ−ベン
ゾイルクロリドの代わりに２，２’−ジチオビス（３−メチルベンゾイルクロリ
ド）を用いることによって、化合物４４および４５と同様な様式で調製し得る。
３−メチル誘導体を、ＣｏｌｌｍａｎおよびＧｒｏｈ（１９８２）Ｊ．Ａｍｅｒ
．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０４：１３９１−１４００の方法に従って調製し得る。
【００７３】 −ＣＨ3であるＲ６を有する、テンプレートＩに基づくチオールエステルを、
スルフアセトアミドの代わりにＮ−メチル−４−（４−ニトロベンゼンスルホニ
ル）アニリン（Ｓａｘｅｎａ（１９８９）Ａｒｚｎｅｉｍ．Ｆｏｒｓｃｈ．３９
：１０８１−１０８４により記載されるように調製される）を使用すること以外
に、化合物４４および４５について記載したように調製し得る。
【００７４】 −ＣＨ3であるＲ6を有する、テンプレートＩＩに基づくチオールエステルを、
２−メチルアミノ−Ｎ−（４−スルファモイルフェニル）アセトアミド（このチ
オールエステルはＨｏｒｓｔｍａｎ（１９７７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ
．Ｃｈｉｍ．Ｔｈｅｒ．１２：３８７−３９１に従って調製される）を使用する
こと以外は、化合物４４および４５について記載したように調製し得る。
【００７５】 アリールまたはフェニルであるＲ６を有するテンプレートＩＩに基づくチオー
ルエステルを、スルフアセトアミドの代わりにＮ−フェニルグリシル−スルファ
ニル酸アミド（Ｇａｉｎｄ，ＳｅｈｇａｌおよびＲａｙ；Ｊ．（１９４１）Ｉｎ
ｄｉａｎ Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１８：２０９によって記載されるように調製され
る）を使用すること以外は、化合物４４および４５について記載したように調製
し得る。
【００７６】 （ジンクフィンガーから金属イオンを解離し得るチオールエステルの設計お
よび合成） ウイルスジンクフィンガー、特に、ＨＩＶ−１のＮＣｐ７のヌクレオキャプシ
ドタンパク質のジンクフィンガーは、本発明の新規のチオールエステルを設計す
るためにモデルとして使用される。ＮＣｐ７は、それらの溶媒受容可能な表面上
に領域を有し、ここで、候補リガンドと好ましい相互作用が生じ得る。各ジンク
フィンガーは、２個の高い親和性結合部位を有する。一方は、フィンガー１上の
Ｐｈｅ１７およびフィンガー２上のＴｒｐ３７の近くに推定ｍＲＮＡ結合部位を
構成する。他方の部位は、推定ｍＲＮＡ部位と反対の、各フィンガーの金属配位
ヒスチジン付近に存在する。ジンクフィンガーから金属イオンを解離し得る新規
のチオールエステルを設計する目的について、推定ｍＲＮＡ結合領域と反対のリ
ガンド結合部位は、２個の結合部位候補のうちより強力な方であると考えられる
。これらの結合領域は、可能な疎水性および親水性の原子タイプの範囲で調べた
。最も強力な可能な結合相互作用を有する種を選択した。
【００７７】 リガンド（薬剤）の、ＮＣｐ７との相互作用の研究をさらにモデル化すること
は、ジスルフィドベンズアミド（ＤＩＢＡ）およびベンゾイソチアゾロン誘導体
（ＢＩＴＡ）の両方が、これらの薬剤の反応性基を各フィンガーの求核性システ
イン硫黄原子の近位付近へ配向させるような方法で、両方のレトロウイルスＺｎ
フィンガーの表面上の疎水性パッチと相互作用し得ることを示した。対照的に、
ＤＩＢＡは、立体排除に起因して、転写因子ＧＡＴＡ−１のＺｎフィンガーのシ
ステイン硫黄原子と相互作用しなかった［（Ｈｕａｎｇ（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ
．Ｃｈｅｍ．４１：１３７１−１３８１）］。ジスルフィドおよびそれらの代表
的ＢＩＴＡ誘導体を設計し、合成し、そして精製し、そして抗ウイルスおよびイ
ンビトロＮＣｐ７亜鉛駆出活性を評価した。
【００７８】 表１：ＤＩＢＡ−１およびＤＩＢＡ−２化学種から誘導される新規なジスルフ
ィドおよびベンゾイソチアゾロン型の合成
【００７９】
【表１】 ａ 抗ウイルス活性を、ＸＴＴ細胞保護アッセイで測定した。 ｂ 初めはＤＩＢＡ−１として報告された。 ｃ 初めはＤＩＢＡ−２として報告された。 ｄ ＮＴは、分析するのに十分な量および／または純度で作製され得なかった化
合物を表す。
【００８０】
【表２】
【００８１】
【表３】 表４：３，３’−ビス（アミノフェニル）スルホン異性体
【００８２】
【表４】 ａ 抗ウイルス活性をＸＴＴ細胞保護アッセイによって測定した。 ｂ ジンクフィンガー反応性をＴｒｐ３７蛍光アッセイによって測定した。結果
を、３０分にわたる相対蛍光単位の平均減少量として示す。
【００８３】
【表５】
【００８４】
【表６】 表７：作用の抗ウイルス機構
【００８５】
【表７】 ａ 示される活性の５０％を阻害する化合物のＩ５０濃度。 ｂ 個々のアッセイの全ての正の制御は、実験項に記載される通りである。 ｃ １００μＭの高用量試験において阻害なし（ＮＩ）。 ｄ ３０分毎の相対蛍光単位の減少量（ＲＦＵ／３０分）として示し、括弧内は
蛍光の全減少量パーセントである。
【００８６】 表８：選択されたＰＡＴＥおよび５−ブロモバレロイルチオエステルの抗ウイ
ルス活性に対するグルタチオンの効果
【００８７】
【表８】 ａ ジンクフィンガー反応性を、Ｔｒｐ３７蛍光アッセイによって測定した。
【００８８】 反応性は、３０分毎の蛍光単位の平均変化（ＲＦＵ／分）、または３０分間
のインキュベーションの間の全減少量パーセント（減少％）のいずれかとして表
す。 ｂ 化合物（２ｍＭ）を、４ｍＭの還元型グルタチオンで３７℃で２時間処理し
た。続いてインキュベーション反応物を、最終濃度のμＭまで希釈し、そしてＴ
ｒｐ３７ Ｚｎ駆出活性を上記のようにして決定した。
【００８９】
【表９】
【００９０】
【表１０】 化合物１〜３６のジスルフィド型、および合成的に可能な場合にＢＩＴＡ型が
合成され（表１〜４）、これらの抗ウイルス活性がＸＴＴ細胞保護アッセイで評
価された（以下に記載）。
【００９１】 これらの研究のために生成した本質的にすべての化合物は、ある程度の抗ウイ
ルス活性（ＸＴＴ細胞保護アッセイ）およびジンクフィンガー反応性を有した。
ジンクフィンガー反応性は、Ｚｎ特異的蛍光色素（ＴＳＱ、Ｎ−（６−メトキシ
−８−キノリル）−ｐ−トルエンスルホンアミド）アッセイ、またはＴｒｐ３７
ジンクフィンガー蛍光アッセイを使用して測定された。組み換えＨＩＶ−１ Ｎ
Ｃｐ７タンパク質のＣ−末端フィンガー中のＴｒｐ３７残基の蛍光測定は、Ｒｉ
ｃｅ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：１１９４〜１１９７；Ｒｉｃｅ（１
９９７）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４１：４
１９〜４２６に記載されるように行われた。両方のフィンガーからのＺｎ駆出の
測定は、Ｒｉｃｅ（１９９６）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ ３９：３６０６〜３６１
６に記載されるように、Ｚｎ選択的蛍光色素プローブＴＳＱ（Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ ＯＲ）を使用して測定された。ＮＣｐ７が、
ＨＩＶ−１ ＲＮＡパッケージング部位に類似したＤＮＡオリゴマーである、４
４量体：ＧＧＣ ＧＡＣ ＴＧＧ ＴＧＡ ＧＴＡ ＣＧＣ ＣＡＡ ＡＡＡ
ＴＴＴ ＴＧＡ ＣＴＡ ＧＣＧ ＧＡＧ ＧＣＴ ＡＧ（配列番号１）に結合
する能力の測定は、Ｈｕａｎｇ（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１：１３
７１〜１３８１に記載されるように行われた。Ｒｏｓｓｉｏ（１９９８）ＨＩＶ
Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ：Ｋｅｙｓｔｏｎｅ
Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｂｓｔｒａｃｔ＃４０８２もまた参照のこと。手短に言う
と、１０％グリセロールおよび５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）を含
有する１０ｍｌの緩衝液中で、５０ｎＭのＮＣｐ７を試験化合物で、室温で１時
間処理した。標識オリゴマー（０．１ピコモル、末端標識［32Ｐ］）を、１０％
グリセロール、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、４００ｍＭ ＫＣ
ｌおよび４０ｍＭ ＭｇＣｌ2を含有する等容量の緩衝液に添加した。この反応
を室温で１５分間続け、そして０．５×Ｔｒｉｓ−ホウ酸電気泳動緩衝液中の４
．５％ポリアクリルアミドゲルを非変性すると、５ｍｌ全て（または全反応容量
の１／４）が、分離された。ＮＣｐ７−オリゴマー複合体をオートラジオグラフ
ィーによって可視化した。
【００９２】 新規のジスルフィドベースのアナログの中でも、化合物２６、３１および３４
は、３１６μＭ（マイクロモル）の高い試験用量において非毒性を示し、そして
それぞれ４．３、１２．２および１２．３μＭのＥＣ50（ウイルス複製を５０％
阻害する濃度）を示した。化合物２６を生成するのに使用するアミノフェニル置
換により、ＤＩＢＡのリガンド部分をビス（４−アミノフェニル）スルホンに変
換した。化合物２６のＮ−アセチル化により、より低いＥＣ50（１．５μＭ）を
有するがより強い毒性（１６０μＭ）を有する化合物２７が得られた。化合物２
６のビス（アミノフェニル）スルホン架橋からスルホンアミド基への変換、およ
び末端アミンから１級スルホンアミドへの変化（化合物２２、表１）によって、
より強い細胞毒性（４３μＭ）が生じた。一般に、ジスルフィド／ＢＩＴＡ対が
合成され得る場合、主に抗ウイルス効力の損失（すなわち、増加したＥＣ50値）
のため、インビトロ治療指数（ＩＣ50／ＥＣ50）の平均４倍（ｎ＝１５、１．５
〜８倍の範囲）の低下があった。細胞毒性の増加はなかった。新規のジスルフィ
ドまたはＢＩＴＡはいずれも化合物１より優れていなかった。
【００９３】 分子モデリングは、薬剤のＮＣｐ７ Ｚｎフィンガーの原子表面結合ドメイン
へのより良い適合は、メチレン（化合物２３）またはエチレン（化合物２４）ス
ペーサーを、化合物１のベンズアミドヘッド基とベンゼンスルホンアミドリガン
ド基との間の骨格に加えることによって達成され得るということを示した（表２
）。抗ウイルス活性およびＺｎフィンガー反応性は保持されたが、これらの修飾
は、親化合物１と比較した場合４〜１０倍増加したＩＣ50（より強い細胞毒性）
と関係があった。表２示されるように、対応するＢＩＴＡは、精製ＮＣｐ７に対
する活性が保持されているにもかかわらず、抗ウイルス活性の顕著な損失を示し
た（化合物２３：４２倍減少、化合物２４：５倍減少）。化合物２３にカルバミ
ル基を加えることによる、ヘッド基スペーサーのさらなる修飾（化合物２５を参
照のこと）により、ジンクフィンガー反応性が増した（ＲＦＵ／分 ７．９対３
．３）が、抗ウイルス効力は減少した。
【００９４】 （ビス（アミノフェニル）スルホンベースのジスルフィドベンズアミドの最適
化） ４，４’−ビス（アミノフェニル）スルホンをジスルフィドのヘッド基に組み
込むことにより、さらなる修飾のための合成位置として末端アミンを有する化合
物２６が得られる。いくつかのアシル修飾により化合物２７、２８および２９が
生成し、これらは増加したジンクフィンガー反応性および改善されたＥＣ50を生
じた。これらの利点はＩＣ50の減少によって部分的に（化合物２７および２９）
、そして完全に（化合物２８）相殺された。今までは、２６のリガンド部分の末
端伸長は、顕著に改善された抗ウイルス剤を生じなかった。
【００９５】 化合物２６のＢＩＴＡ誘導体は、これらの特性を研究するのに十分な純度また
は量で生成し得なかった。しかし、ＮＯ2基を２６の末端ＮＨ2に置き換え、化合
物３１を生成することは、この制約を克服し、そしてジスルフィドおよびその対
応するＢＩＴＡの両方の生成を可能にした（表３）。化合物３１のジスルフィド
型は、２６のように非毒性であり、そしてＥＣ50が２．６倍増加（効果が小さい
）したにもかかわらず、同じＮＣｐ７ジンクフィンガー反応性を有した。化合物
３１のＢＩＴＡ型は抗ウイルス活性を有さなかった。ニトロ芳香族基を用いるリ
ガンド伸長の探究により、化合物３１中のようなより単純なニトロ基より少ない
ジンクフィンガー反応性を一般に示す化合物３２〜３４が生じた。化合物３４の
ジスルフィド型およびＢＩＴＡ型のみが顕著な抗ウイルス活性を示した。
【００９６】 ３，３’−ビス（アミノフェニル）スルホンにおいて、スルホニル基の位置を
変えることによって、異性体である化合物３５および３６を作製した（表４）。
これらの化合物は、改善された抗ウイルス活性を有する（化合物２６対化合物３
５：ＥＣ50 ４．３対１ｍＭ；２７対３６：ＥＣ50 １．５対０．６２ｍＭ）。
しかし、ジンクフィンガー反応性は顕著に減少した（２６対３５：３．３対０．
９２ＲＦＵ／分；２７対３６：５．９対２ＲＦＵ／分）。さらに、この変化は、
ＩＣ50を少なくとも３倍減少させた（より強い毒性）。従って、３，３’−ジフ
ェニルスルホン異性体は、主要な利点を提供しなかった。
【００９７】 （ジスルフィドから新規なチオールエステルへの変換） ＮＣｐ７ジンクフィンガー上のジスルフィドの作用は、薬剤とＣＣＨＣシステ
インの硫黄原子との間のチオール−ジスルフィド交換に関与する。ＮＣｐ７と２
分の１の薬物（「モノマー」部分）との間での、得られるジスルフィド共有結合
は、ＮＣｐ７構造体からのＺｎ2+イオンの受動的な損失を伴って亜鉛キレートの
崩壊を生じる（例えば、Ｒｉｃｅ（１９９５）前出；Ｈｕａｎｇ（１９９８）前
出を参照のこと）。
【００９８】 上記の任意の化合物を使用して可能となる結合より安定な結合を介して、ジン
クフィンガーシステインを共有結合的に修飾するために、新規のチオエーテルが
設計されそして合成された。チオエーテル結合を作製するために、ベンズアミド
ヘッド基のオルト位またはメタ位に、適度に活性なＳＨ−選択的アルキル化官能
基が設計された。単配位（モノマー）のベンズアミドは、アミド結合またはチオ
エステル結合を介して潜在的に反応性のハロアルカノイル基に結合される（表５
）。化合物３７〜３９は、ベンズアミドのオルト位またはメタ位のいずれかへの
アミド結合を表す。化合物２のリガンド型のオルト位（化合物３７）またはメタ
位（化合物３８）のいずれかにおけるＣｌ−（ＣＨ2）2−ＣＯ−ＮＨ−の置換に
より、適度なジンクフィンガー反応性を有する化合物が生成する。しかし、適切
な抗ウイルス活性は有していない。オルトＣｌ−ＣＨ2−ＣＯ−ＮＨ−を有する
化合物３９は、完全に不活性である。オルトアミド置換プローブは、リガンド構
造体としていくつかの他の骨格を使用して合成され、そして同等の結果を与えた
。
【００９９】 オルト位の、アルカノイル、アロイル、およびハロアルカノイルチオエステル
が、設計および合成された（化合物４０〜５２、表５および６）。アセチルチオ
エステル（化合物４０）、ベンゾイルチオエステル（化合物４１）、４−メトキ
シベンゾイルチオエステル（化合物４２）およびブチロイルチオエステル（化合
物４３）の合成によって、低いμＭのＥＣ50値を有し、十分なジンクフィンガー
反応性に対して適度な４つの化合物が得られた。しかし、５０μＭ範囲のＩＣ50 値のため、これらの抗ウイルス活性はＢＩＴＡ誘導体の抗ウイルス活性に近かっ
た（表１）。
【０１００】 新規のチオエステルは、ω−ハロアルカノイル基を使用して合成した。化合物
２のオルト５−ブロモバレロイルチオエステル誘導体（化合物４４）は、顕著に
減少した細胞毒性および適度のジンクフィンガー活性を生じた。化合物４４をピ
リジニオアルカノイル（ｐｙｒｉｄｉｎｉｏａｌｋａｎｏｙｌ）チオエステル（
ＰＡＴＥ）誘導体（化合物４５）に変換することによって、治療指数がさらに高
められる。得られた薬剤は、有効なジンクフィンガー反応性（３．６ＲＦＵ／分
）、３１６μＭの高い試験用量での非毒性、および１０μＭ未満のＥＣ50を示す
。
【０１０１】 表６は、ＰＡＴＥが、それらの親化合物より好ましい抗ウイルスプロフィール
および毒性プロフィールを化学種として示すことを表す。ピリジニオバレロイル
チオエステルにより示される毒性の欠如は、それらが化合物２、３１、３４、２
７および３６のモノベンズアミド骨格に付加して、それぞれ新規の化合物４５、
４７、５０、５１および５２を生成することによって例示され、ここで、親モノ
ベンズアミドの細胞毒性は全ての場合において減少する。化合物２３の骨格のＰ
ＡＴＥ化学種への変換により化合物４８が得られるが、この化合物４８は、他の
ピリジニオバレロイルチオエステルに見出されるオーダーの選択性指数（ＴＩ）
を生じず、モノベンズアミド毒性を低下させず（化合物２３のＢＩＴＡ ５３．
７μＭ対化合物４８μＭ）、ピリジニオバレロイルチオエステルの変換は、ジス
ルフィド型に関連する毒性を部分的に軽減する（化合物２３ＤのＩＣ50：１９．
４μＭ対化合物４８のＩＣ50：５５μＭ）。従って、チオールエステル、および
特にＰＡＴＥは、ウイルス性ジンクフィンガーを標的にする新規の化学治療剤と
して使用され得る新規な化学種を示す。
【０１０２】 （ピリジニオアルカノイルチオエステル（ＰＡＴＥ）の抗ウイルス活性） ５−ブロモバレロイルチオエステル（化合物４４）、ならびに２つの５−ピリ
ジニオバレロイルチオエステル（化合物４５および４７）を、機械的アッセイお
よび標的ベースのアッセイで分析した。これらの化合物は、ＵＩＶ−１インテグ
ラーゼ酵素活性、逆トランスクリプターゼ酵素活性またはプロテアーゼ酵素活性
を阻害しなかった（表７）。組み換えＨＩＶ−１逆トランスクリプターゼを使用
する、ＨＩＶ−１逆トランスクリプターゼｒＡｄＴ（テンプレート／プライマー
）およびｒＣｄＧ（テンプレート／プライマー）に対する活性についてのアッセ
イ（Ｓ．Ｈｕｇｈｅｓ，ＡＢＬ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＮＣＩ−ＦＣ
ＲＤＣ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ ＭＤ）を、Ｒｉｃｅ（１９９７）前出に記載され
るように実施した。組み換えＨＩＶ−１プロテアーゼの基質開裂は、試験化合物
の存在下で、人工基質Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌ
ｅ−Ｖａｌ−アミド（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓ
ａｎ Ｄｉｅｇｏ ＣＡ）を用いて、ＨＰＬＣベースの方法を使用して、Ｒｉｃ
ｅ（１９９７）前出に記載されるように行った。試験化合物の存在下で３’プロ
セシングおよび鎖転移活性を行う、組み換えＨＩＶ−１インテグラーゼ（Ｓ．Ｈ
ｕｇｈｅｓ，ＡＢＬ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＮＣＩ−ＦＣＲＤＣ，Ｆ
ｒｅｄｅｒｉｃｋ ＭＤ）の能力は、Ｂｕｃｋｈｅｉｔ（１９９４）ＡＩＤＳ
Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ １０：１４９７〜１５０６、およ
びＴｕｒｐｉｎ（１９９８）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏ
ｔｈｅｒ．４２：４８７〜４９４に記載されるように実施された。
【０１０３】 ５−ブロモバレロイルチオエステル化合物４４ならびに２つの５−ピリジニオ
バレロイルチオエステル化合物４５および４７はまた、ウイルスの結合（細胞ベ
ースのｐ２４結合アッセイ）および宿主細胞への融合を阻害しなかった。細胞ベ
ースのｐ２４結合アッセイは、Ｒｉｃｅ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２７０：１
１９４〜１１９７に記載されるように実施した。ウイルス不活化アッセイは、わ
ずかに改変して、Ｒｉｃｅ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：１１９４〜１
１９７、およびＴｕｒｐｉｎ（１９９７）前出に記載されるように実施した。手
短に言うと、ＭＡＧＩ−ＣＣＲ−５細胞を、平底２ｃｍウェルプレート中で２４
時間平板培養した（ウェルあたり４×１０4細胞）。この後、この培地を取り除
き、化合物処理したウイルスを加えた。使用されるウイルスは、複製順応性ＮＬ
４−３ウイルスを生じるＨｅＬａ細胞に、ｐＮＬ４−３を一過性トランスフェク
ションすることによって得られた。ウイルスを含む上清を３７℃で２時間処理し
、その後残った化合物を遠心分離法（１８，０００×ｇ、１時間、４℃）によっ
て除去した。ウイルスペレットを再懸濁し、ＭＡＧＩ−ＣＣＲ−５単層にのせて
４８時間培養した。単層をＸ−ｇａｌ溶液を用いて固定および染色し、青色の細
胞を数えた。
【０１０４】 ウイルス性融合に対する試験化合物の効果の決定が、以下のように実施される
。つまり、ＨＩＶ−１ Ｔａｔおよび細胞表面ｇｐ１２０を安定して発現するＨ
Ｌ２／３細胞ならびにそれらの細胞表面でＣＤ４およびＣＣＲ５を安定して発現
するＭＡＧＩ−ＣＣＲ−５細胞（これらは、ＨＩＶ−１ ＬＴＲのコントロール
下で、β−ガラクトシダーゼレポーター遺伝子を含有する）が、試験化合物で、
３７℃で１時間前処理された。インキュベーション後、これらの細胞を４対１の
比率（２×１０5ＭＡＧＩ−ＣＣＲ−５対８×１０5ＨＬ２／３細胞）で混合し、
そして１８時間３７℃で同時培養した。培地を固定し、そしてβ−ガラクトシダ
ーゼ活性のためのＸ−ｇａｌ溶液で染色した。青色細胞は、ＣＤ４／ＣＣＲ５コ
−レセプターｇｐ１２０相互作用によるＨＬ２／３およびＭＡＧＩ−ＣＣＲ−５
細胞の融合の際のＨＩＶ−１ ＬＴＲのＴａｔトランス活性化を示した。
【０１０５】 全ての３つのチオールエステル化合物４４、４５および４７は、上記のように
、Ｔｒｐ３７アッセイにより評価されるように、ＮＣｐ７タンパク質からの金属
イオン（亜鉛）の放出を促進する。これらの化合物は、ＴＳＱ蛍光色素アッセイ
を妨害する（したがって、試験することができなかった）（表９参照）。
【０１０６】 ジンクフィンガーインヒビターのＮＣｐ７との相互作用により、タンパク質構
造、およびＨＩＶ−１Ψパッケージング部位を示すオリゴヌクレオチドを特異的
に結合するそれらの能力の欠損をもたらし得る（Ｈｕａｎｇ（１９９８）上出；
Ｔｕｍｍｉｎｏ（１９９７）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏ
ｔｈｅｒ．４１：３９４−４００；Ｓｏｕｔｈ（１９９３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓ
ｃｉ．２：３−１９；Ｄａｎｎｕｌｌ（１９９４）ＥＭＢＯ Ｊ．１３：１５２
５−１５３３）。タンパク質を本発明のチオールエステルで処理した後のＮＣｐ
７のこれらのオリゴヌクレオチドと特異的に結合する能力が試験された。例えば
、化合物４４、４５または４７は、標的オリゴヌクレオチドと結合するＮｃｐ７
の能力を阻害することにおいて、非常に有効であった（これは、非変性ポリアシ
ルアミドゲル上の電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）を使用して決定さ
れる）。１μＭにおいて、化合物４５は複合体形成を阻害した。化合物４４およ
び４７は、１００μＭで複合体形成を阻害した（表９を参照）。
【０１０７】 化合物４４、４５または４７の結合活性が、ＣＣＨＣジンクフィンガーについ
て特異的であったかどうかを決定するために、Ｋ５６２細胞核抽出物をこれらの
化合物で処理した後、スーパーゲルシフトＥＭＳＡが実施された。これは、Ｓｐ
１特異的抗体でのスーパーシフトに従う。Ｓｐ１は、それが、Ｓｐ１のＤＮＡ標
的へのＳｐ１結合に必要とされる古典的なタイプのＣＣＨＨジンクフィンガーモ
チーフの３つのコピーを含有する細胞転写因子であるゆえに選択された。この３
つの化合物４４、４５または４７は、そのＤＮＡ標的へ結合するＳｐ１のスーパ
ーシフトのパターンを変更しない。このことは、これらのチオールエステルが、
ＣＣＨＣレトロウイルスＺｎフィンガーについて特異性をを示すことを表してい
る。ジンクフィンガー反応性化合物の特異性を決定するためのスーパーゲルシフ
トは、Ｓｐ１共通（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）オリゴマー（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，
Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、Ｋ５６２細胞核抽出物、およびＳｐ１（Ｓｐ１［Ｐ
ＥＰ２］−Ｇ）（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ
．，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ製の抽出物およびＳｐ１ Ａｂｓ）についての
抗体を使用して実行された。オリゴヌクレオチドのＫ５６２核抽出物との結合反
応および電気泳動条件は、Ｇｅｌｓｈｉｆｔ Ｂｕｆｆｅｒ Ｋｉｔ，Ｓｔｒａ
ｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡに記載されるように実行された。
【０１０８】 ジンクフィンガーインヒビター（例えば、本発明のチオールエステル）と、無
細胞ウイルスとの相互作用は、ビリオン内ＮＣｐ７タンパク質の変性および感染
性の減少をもたらし得る。無細胞ＨＩＶ−１MN由来のビリオン会合ＮＣｐ７タン
パク質を、チオールエステル化合物４４および４５で処理した。それらはまた、
ＨＩＶ−１ ＮＣｐ７−特異的抗体を使用する非還元Ｗｅｓｔｅｒｎブロット法
により評価された。ＰＡＴＥ化合物４５は、広範な架橋のＮＣｐ７をもたらした
が、そのハロアルカノイルチオエステル前駆体（化合物４４）は、非常に劣った
架橋剤であった。化合物４５によるビリオン内ＮＣｐ７架橋は、ＤＩＢＡ−１（
化合物１）に匹敵した。化合物４５による架橋は、２−メルカプトエタノール（
β−ＭＥ）を用いる還元がゲル遅延を完全に逆にするので、分子内ジスルフィド
結合の形成の原因となった。化合物４７は、ＮＣｐ７架橋を有効に開始しなかっ
た。ＡＺＴ、ヌクレオシド逆トランスクリプターゼインヒビターはまた、ＮＣｐ
７を架橋しなかった（表９参照）。
【０１０９】 ＮＣｐ７架橋は、ウイルス性不活化と関連する。Ｗｅｓｔｅｒｎブロット法で
決定されたように、ヌクレオカプシドタンパク質を架橋する能力が、ウイルスを
不活化する能力に相関があるかどうかを殺ウイルス性アッセイで試験した。ＨＩ
Ｖ−１NL4-3のウイルス株を、種々のチオールエステル化合物とともにインキュ
ベートした。このウイルスは、ＨｅＬａ細胞への複製コンピテントｐＮＬ４−３
プラスミドの一過性トランスフェクションにより得られた。残余のチオールエス
テルを遠心分離で除去した。ウイルスのペレットを培養培地中に再懸濁し、そし
てＭＡＧＩ−ＣＣＲ−５細胞を感染させるために使用した。感染後４８時間で、
細胞を洗浄し、Ｘ−Ｇａｌで染色した。化合物４４および４５は、それぞれ１２
．３μＭおよび１３．２μＭのＩ50（５０％ウイルス不活性をもたらす濃度）値
を有する殺ウイルス性であった。化合物４７は、ビリオン内ＮＣｐ７の有効な架
橋剤ではなかったが、不活化ウイルスでは化合物４４および４５よりもおよそ６
倍（Ｉ50＝２．１μＭ）の有効性があった。これらのデータは、チオールエステ
ル（そして、特に化合物４７）が、ジンクフィンガー硫黄原子との安定な付加物
を形成し、この硫黄原子は、分子間または分子内ジスルフィド架橋の生成には関
与しないということを示す。
【０１１０】 モノベンズアミド骨格と結合していない５−ピリジニオ吉草酸（化合物５３）
の分析は、たとえそれが抗ウイルス性活性がなかったとしても、Ｔｒｐ３７亜鉛
放出アッセイにおいて有意な反応性（４ ＲＦＵ／分）を示した（表６を参照）
。化合物５３を、ＮＣｐ７のビリオン内架橋および殺ウイルス性活性についてさ
らに評価した。ＮＣｐ７のビリオン内架橋または殺ウイルス性活性のいずれも検
出されなかった。したがって、化合物４４、４５および４７のモノベンズアミド
骨格は、無細胞ビリオンに対する活性について必須である。
【０１１１】 チオールエステル化合物がまた、ＴＮＦα−誘起Ｕ１およびＡＣＨ−２細胞に
おけるＨＩＶ−１複製を阻害する能力について試験された。Ｕ１細胞は、種々の
濃度のチオールエステル４４、４５または４７存在下で、５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ
αで誘導された。４８時間後、培養物をウイルスｐ２４抗原産生および細胞生存
度について特徴付けた。全ての３つの化合物は、Ｕ１細胞由来のＨＩＶ−１ビリ
オン（ｐ２４）の放出を阻害した（ＥＣ５０：化合物４４、４５および４７につ
いてそれぞれ９４、４２．２および１０．７μＭ）（表９を参照）。１００μＭ
の高い試験用量では、細胞毒性がないことが明らかであった。全ての３つのチオ
ールエステルのより高い容量の試験（３００μＭ）は、化合物４５および４７に
ついて毒性を示さなかった。化合物４４は、２００μＭで６０％の細胞を殺傷し
た。電気泳動分離および免疫ブロット法（Ｗｅｓｔｅｒｎブロット法）によるＴ
ＮＦα−誘起Ｕ１細胞由来のウイルス性タンパク質の可視化により、化合物４５
および４７がウイルス性前駆体ポリタンパク質の架橋を誘導し、そしてそれらの
前駆体の処理を妨げるということが示された。β−ＭＥでのＵ１タンパク質調製
物の還元は、化合物４５（１００μＭ）および化合物４７の両方がＰｒ55gag前
駆体処理を妨げることを示した。化合物４４はまた、化合物４５と４７との間の
中間レベルで、ＨＩＶ−１前駆体タンパク質を含むジンクフィンガーの移動度の
β−ＭＥ可逆変換を誘導した。前駆体処理評価を、Ｔｕｒｐｉｎ（１９９７）Ａ
ｎｔｉｖｉｒａｌ Ｃｈｅｍ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．８：６０〜６９で記載され
るように実行した。したがって、チオールエステルＰＡＴＥは、遅延相ウイルス
アセンブリの間の前駆体ポリタンパク質の細胞間ジスルフィド架橋を開始し、無
細胞ウイルスにおける成熟ＮＣｐ７レトロウイルスジンクフィンガー上の攻撃に
よる直接的殺ウイルス性効果を媒介する。
【０１１２】 ビリオン架橋は、Ｒｉｃｅ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：１１９４〜
１１９７およびＴｕｒｐｉｎ（１９９７）Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｃｈｅｍ．Ｃｈ
ｅｍｏｔｈｅｒ．８：６０〜６７で記載されるように実施された。つまり、高純
度のＨＩＶ−1MN（１１．８μｇの全タンパク質）をいくつかの濃度の化合物と
ともに、２時間インキュベートした。ビリオンを濃縮し、残留化合物を遠心分離
で除去した（１８，０００×ｇ、１時間、４℃）。ウイルスのペレットを０．５
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、５０％グリセロール、８％ＳＤＳおよび
０．４％ブロモフェノールブルーに溶解し、そしてタンパク質をＷｅｓｔｅｒｎ
ブロット法で分解した。Ｕ１細胞またはビリオン架橋実験についてのウイルスの
ペレット中のＨＩＶ−１タンパク質の発現を検出するためのＷｅｓｔｅｒｎブロ
ット法が、Ｔｕｒｐｉｎ（１９９６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：６１８０〜６１８
９で記載されるように実行された。つまり、Ｕ１実験に関する５０μｇの細胞タ
ンパク質総量またはＮＣｐ７架橋研究に関するビリオンペレット総量（１１．８
μｇのウイルス性タンパク質総量）を、Ｔｒｉｓ−グリシン（Ｎｏｖｅｘ，Ｓａ
ｎ Ｄｉｅｇｏ ＣＡ）を含有するＳＤＳ中の４〜２０％ポリアクリルアミドゲ
ルで分解した。減少したゲルについてのサンプルを、充填の前に５％β−ＭＥの
存在下で５分間煮沸した。分解したタンパク質をポリ二フッ化ビニリデン（ＰＶ
ＤＦ）メンブレンでエレクトロブロットし、そしてＨＩＶ−１特異的タンパク質
をヤギ抗ＨＩＶ−１ ＮＣｐ７およびｐ２４または抗ＮＣｐ７の混合物を使用し
て、ビリオンタンパク質単独について検出した（Ｌ．Ｅ．Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎの
寄贈、ＡＩＤＳ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｐｒｏｇｒａｍ ＮＣＩ−ＦＣＲＤＣ，Ｆｒ
ｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）。Ｗｅｓｔｅｒｎブロットは、Ｄｕｐｏｎｔ−ＮＥＮ，
Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥで記載され、製造されるような標準化学発光方法論
を使用して開発された。
【０１１３】 チオールエステルの一つの有意な特性は、インビボの生物学的流体の還元環境
の存在下で、ジンクフィンガー反応性を維持する能力である。この特性は、例え
ば、生理学的条件下でのグルタチオンによる還元に対する化合物の耐性を試験す
ることにより評価され得る。還元に対するこの耐性は、化合物を含有する全ての
ジスルフィドにわたる有意な改善である。例えば、ＤＩＢＡのジスルフィド性は
、還元環境中でそれらを固有に不安定にする。これにより、ダイマーのモノマー
形態への解離が生じ、そして混合したジスルフィドとなる。
【０１１４】 チオールエステルＰＡＴＥ化合物４４、４５および４７は、２モル過剰のグル
タチオンの存在下で、システインチオールを攻撃する能力を維持する。したがっ
て、ジスルフィドの、低求核性５−ブロモバレロイル（ｂｒｏｍｏｖａｌｅｒｏ
ｙｌ）チオエステル（化合物４４でのような）または５−ピリジニオバレロイル
チオエステル（化合物４５および４７でのような）への転換は、還元剤に対する
有意な耐性を与え、従って、ジンクフィンガー反応性の引き続く損失を妨げる（
表８を参照）。
【０１１５】 表１０に関して、ＰＡＴＥ化学種（ｃｈｅｍｏｔｙｐｅ）の活性プロフィール
は、カルボニル部位とピリジニオ部位との間のアルキルスペーサーの長さに依存
した（化合物５４、４５および５５を比較する）。ｎ＝４の間隔は、有効性およ
び毒性に関して最適であるようである。チオールエステルの硫黄の必須の存在は
、硫黄がＮＨ−で置換される不活性化合物５６により実証される。ピリニジウム
環中の窒素に対してメタ位の水素を塩素に置換することは、抗ウイルス性能力を
有意に減少し、これはおそらく、塩素基とＮＣｐ７の残基３９および４９との間
の静電的相互作用（反発）による。
【０１１６】 （ジンクフィンガーモチーフ由来の金属イオンの解離の検出） 本発明は、ジンクフィンガーモチーフで複合体化される二価イオンを解離する
ことができる化合物を選択する方法およびキットを提供する。このモチーフは、
単離され得るか、またはウイルス性タンパク質またはビリオンのサブ構造であり
得る。この方法は、ジンクフィンガーをチオールエステルと接触させる工程、続
いてジンクフィンガータンパク質からの金属イオンの解離を検出する工程、を包
含する。カチオンは一般に亜鉛である。当該分野で公知の任意の方法論は、金属
イオンの解離を検出するために使用され得る。例示の手段として、以下が挙げら
れる：例えば、キャピラリー電気泳動、免疫ブロット法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）
、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、放射性亜鉛−６５の放出の検出法
、蛍光の検出法、またはゲル移動度シフトの検出法、および本発明の開示から当
業者に明らかな他の方法。これらの手順は、当該分野で公知の任意のプロトコル
で実施され得る。これらは、科学文献および特許公報に十分に記載されている。
少数の例示的な技術が以下に示される。
【０１１７】 本発明はさらに、インビボで、ジンクフィンガーから金属イオンを解離するこ
とができる新規なチオールエステルの種類を提供するので、金属イオンの解離の
検出は、本発明の範囲内のチオールエステル種を同定する。亜鉛放出アッセイは
、本発明の範囲内のチオールエステルを同定するために、第１ラインスクリーニ
ングとして使用された。このようなスクリーニングのための一つの戦略は、抗ウ
イルス活性をモニターするためのＸＴＴ細胞保護作用アッセイ、およびＮＣｐ７
タンパク質またはそのＧａｇもしくはＧａｇ−Ｐｏｌ前駆体上の細胞レベルで作
用し得るチオールエステルを同定するためのＴｒｐ３７亜鉛放出アッセイを使用
した。
【０１１８】 チオールエステルが、ジンクフィンガーからの任意のレベルのカチオン放出が
可能である場合、それは本発明の範囲内である。実際に、低速（すなわちゆっく
りとした反応速度で）で亜鉛放出が可能なチオールエステルは、特に特定のイン
ビボ用途として、いくつかの使用のために好ましい。本発明の例示の「弱カチオ
ン放出」チオールエステルは化合物５０であり、これはＴｒｐ３７ジンクフィン
ガー蛍光アッセイで測定されたように、０．８６ＲＦＵ／分の亜鉛放出速度を有
する。しかし、より低い放出速度（＜０．８６ＲＦＵ／分）を有するチオールエ
ステルもまた、本発明の範囲内である。「高」放出速度は、およそ８ＲＦＵ／分
の範囲である。＜１５μＭの抗ウイルス活性ＥＣ50を有するチオールエステルが
、好ましい実施態様として選択された。
【０１１９】 （キャピラリーゾーン電気泳動（ＣＺＥ）） レトロウイルスジンクフィンガータンパク質は、２個の亜鉛イオンと複合体化
し、各亜鉛イオンは、２+の形式電荷を有する。タンパク質と反応し、亜鉛イオ
ンを除去する試薬は、コンホーメーションの変化およびタンパク質の電荷の変化
を引き起こす。したがって、反応したタンパク質の電気泳動移動度は、未反応の
タンパク質の移動度とは異なる。タンパク質の電気泳動移動度の変化は、標準的
な技術であるキャピラリーゾーン電気泳動（ＣＺＥ）により容易に検出され得る
。一般的なＣＺＥの詳細に関しては、以下を参照のこと：例えば、Ｃａｐｉｌｌ
ａｒｙ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔ
ｉｃｅ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．ＧｒｏｓｓｍａｎおよびＣｏ
ｌｂｕｒｎ（編）（１９９２））。
【０１２０】 一般に、タンパク質の（キャピラリー電気泳動チューブ中のバッファにより決
定されるｐＨでの）電気泳動移動度が、固定された開始位置から一方の電極の方
へレトロウイルスタンパク質を移動させるために使用される。移動速度が、ＵＶ
吸収（例えば、２１５ｎｍで）モニターされ得る。高品質のレトロウイルスＮＣ
タンパク質を含有する適切な量の溶液を含むサンプルチューブ（これは、ＣＣＨ
Ｃジンクフィンガー不活化について試験されるチオールエステル化合物を含むお
よび含んでいない）が、自動サンプルインジェクターに入れられる。プログラム
された間隔で、サンプルはキャピラリーチューブへ流され、ＵＶ吸収がモニター
される。非変性（ｕｎｍｏｄｉｆｉｅｄ）レトロウイルスＮＣタンパク質は、検
出器を通るタンパク質の移動のシャープなピークを与える。高品質な試験化合物
との反応により引き起こされるこのタンパク質の変性は、反応したタンパク質の
電気泳動移動度の変化により示される。
【０１２１】 キャピラリーゾーン電気泳動は、単純な自動化の利点を有する。なぜならば、
多数の異なるサンプルは、連続的ランでロードされ、そして分析され得るからで
ある。各ランは、約１０分を必要とし、そして各サンプルチューブは、多数回、
分析され得る。ＣＣＨＣジンクフィンガー反応性について試験されるべき選択さ
れた化合物の分析のためのＣＺＥを利用するキットの例は、例えば１．０ｍｌの
水中に、亜鉛と複合体化された精製レトロウイルスＮＣタンパク質を約１００マ
イクログラム（μｇ）含み、そして約１０００の試験化合物の試験のために使用
され得る。
【０１２２】 （亜鉛−６５標識化ＮＣｐ７からの放射性亜鉛の放出） 精製ＨＩＶ−１ ＮＣｐ７は、決定された特異的活性を有する放射性亜鉛−６
５で再構築され得る。試験化合物とレトロウイルスＮＣタンパク質との反応によ
って引き起こされる放射性亜鉛−６５の放出をモニタリングすることにより、試
験化合物の反応性を決定することが可能である。
【０１２３】 チオールエステル試験化合物は、放射性亜鉛−６５と複合体化されたＮＣタン
パク質を含有する溶液に添加され得る。この反応後、タンパク質（反応された、
および未反応の）は、例えば、公知の抗体を使用する免疫沈澱または免疫吸着方
法によって、あるいはＮＣタンパク質が核酸マトリックス上の結合部位を飽和す
るような核酸の校正量の添加により、沈殿され得る。低いイオン強度の条件下で
、飽和タンパク質−核酸の複合体は沈殿物を形成し、これは遠心分離により除去
され得る。あるいは、標識化ヌクレオカプシドタンパク質は、固体支持体に連結
され得、そして試験試薬はこの連結タンパク質に直接添加される。タンパク質か
ら亜鉛を放出する任意の反応は、放射性亜鉛−６５の可溶性上清への放出により
検出され得る。この一般的手順は、利用可能な機器に依存して自動化され得る。
【０１２４】 レトロウイルスヌクレオカプシドタンパク質および適切な沈殿剤を供給するキ
ットは、試験化合物がタンパク質から亜鉛を除去する能力を検出するために使用
され得る。
【０１２５】 （亜鉛−６５標識化全ウイルスからの放射性亜鉛の放出） 亜鉛は、ＣＣＨＣジンクフィンガーアレイのほぼ化学量論の量でウイルスに存
在する（Ｂｅｓｓ（１９９２） Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：８４０）。ほぼすべて
の亜鉛は、ＣＣＨＣアレイ中に配位される（Ｓｕｍｍｅｒｓ（１９９２） Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ １：５６３）。従って、ウイルスから放出される
亜鉛は、関係のないタンパク質またはビリオンとの他の非特異的会合からよりも
むしろ、ＣＣＨＣアレイにおいて以前に配位された亜鉛から誘導される。
【０１２６】 精製ウイルスは、添加した亜鉛−６５の存在下で培養された細胞から生成され
得る。標識化ウイルスは、単離され、そして添加したＥＤＴＡの存在下で密度勾
配遠心分離によって精製され得、任意の結合していない亜鉛を除去する。精製ウ
イルスは、目的の任意のレトロウイルスであり得、これにはＨＩＶ−１、ＨＩＶ
−２またはＳＩＶが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２７】 試験されるべき化合物（本発明のチオールエステル）は、選択の試験化合物に
関して適切な条件下で、精製放射性ウイルスに添加され得る（Ｒｉｃｅ（１９９
３）Ｎａｔｕｒｅ ３６１：４７３−４７５）。試薬の反応、除去および／また
は不活化後、ウイルスは、非イオン性界面活性剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−
１００）の添加により崩壊（ｄｉｓｒｕｐｔ）され、そして核酸に複合体化され
たＮＣタンパク質を含むウイルス核は、遠心分離によって除去される。
【０１２８】 上清へ放出される放射性亜鉛−６５は、試験化合物がインタクトなウイルスに
浸透し、そしてＮＣタンパク質−亜鉛の複合体を崩壊したことを示す。試験化合
物がレトロウイルスＮＣ−キレート化亜鉛を除去し得るか否かを決定するための
キットは、例えば、それらのＮＣタンパク質へ取り込まれる放射性亜鉛−６５を
有するインタクトなレトロウイルス粒子、適切な反応緩衝液、および非イオン性
界面活性剤を含む。
【０１２９】 （タンパク質からの亜鉛分離の蛍光ベースの検出） 芳香族タンパク質部分の内因性蛍光の変化は、タンパク質コンホメーションの
変化に関する反応をモニタリングするために通常使用される。本発明において、
蛍光は、本発明のチオールエステルと接触させた後、ジンクフィンガーからの金
属イオンの損失（例えば、ＣＣＨＣレトロウイルスジンクフィンガータンパク質
からの亜鉛の損失）をモニタリングするために使用され得る。ＨＩＶ−１ ＮＣ
タンパク質の第２ジンクフィンガーにおけるＴｒｐ３７の内因性蛍光は、ジンク
フィンガー複合体のコンホメーションおよび核酸結合をモニタリングするために
使用されてきた（Ｓｕｍｍｅｒｓ（１９９２）、前出を参照のこと）。
【０１３０】 亜鉛の駆出は、化合物が、タンパク質の露出部分から内部部分へのトリプトフ
ァン３７残基の移動のために蛍光の損失を引き起こす精製ＮＣｐ７タンパク質の
サイトカインを化学的に攻撃する能力によって測定される。亜鉛の駆出は、総蛍
光の低下％または３０分アッセイの間の１分当たりの相対的蛍光単位（ＲＦＵ／
分）の低下％のいずれかとして測定され、そして表される。チオールエステルは
、任意の量の亜鉛の駆出が検出される場合、本発明の範囲内であると考えられる
。例えば、化合物５０は、０．８６ＲＦＵ／分の亜鉛駆出速度を有する。
【０１３１】 人工蛍光プローブはまた、タンパク質に取り込まれ得、コンホメーションの変
化の検出を提供する。ポリエチノ−アデニンは、例えば、チオールエステル−ジ
ンクフィンガー相互作用の程度を測定するための蛍光核酸として使用され得る（
Ｋａｒｐｅｌ（１９８７）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６２：４９６１を参照
のこと）。
【０１３２】 最後に、遊離亜鉛を複合体化し得る種々の公知の蛍光亜鉛キレーターは、亜鉛
の損失をモニタリングするために使用され得る。ＣＣＨＣジンクフィンガーアレ
イからの亜鉛の放出をモニタリングすることによって、所定の試薬の効果が決定
され得る（Ｒｉｃｅ（１９９６）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：３６０６−３６
１６；Ｒｉｃｅ（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：１１９４−１１９７）。
【０１３３】 （ゲル−移動度シフトアッセイによるジスルフィド架橋ＮＣ−タンパク質の検
出） 精製濃縮レトロウイルスおよびこのウイルスの精製ＮＣタンパク質に対する抗
血清は、特定の化合物が、このウイルスに透過し、そしてこのウイルスの核にお
いてジスルフィド複合体を形成することによってＮＣタンパク質と反応する能力
を試験するために使用され得る。化合物は、この化合物に適切な反応条件下で、
全レトロウイルスと混合される。次いで、このウイルスは、遠心分離により試薬
から除去され、そして例えば、標準ＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプル緩衝液中、（低減
）２−メルカプトエタノールを用いて、および（非低減）２−メルカプトエタノ
ールを用いずに、崩壊される。次いで、このウイルスタンパク質は、標準ＳＤＳ
−ＰＡＧＥにより分離され、そしてこのサンプルは、非低減サンプルにおけるモ
ノマージンクフィンガータンパク質の存在または非存在について試験される。試
験に使用されるウイルスおよび電気泳動の条件に依存して、ジンクフィンガータ
ンパク質は、タンパク質染色方法によって、または免疫ブロット法によって、視
覚化され得る。ジンクフィンガー複合体を攻撃し、そしてジスルフィド架橋生成
物を形成することによってジンクフィンガータンパク質と反応する化合物は、ウ
イルスを不活化する。従って、目的の化合物（すなわち、架橋を引き起こす化合
物）（本発明のチオールエステルを含む）は、検出されるモノマージンクフィン
ガータンパク質の量を低減させる。例えば、チオールエステル化合物４５は、ビ
リオン内ＮＣｐ７の強い架橋であり、これはウェスタンブロット法によって検出
されるようなモノマーＮＣｐ７の完全損失を引き起こす。
【０１３４】 チオールエステル処理されたビリオンはまた、感染性に関して試験され得る。
このビリオンは、培地に懸濁され（可溶化ではなく）、そして標的細胞に添加さ
れる。次いで、この培養物は、このビリオンがまだ活性であるか否かを決定する
ために試験される。処理されたウイルス粒子が活性であるか否かを決定するため
に、この細胞は、細胞内で合成されたウイルスＲＮＡの存在に関して、例えば、
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、モニタリングされる（Ｒｉｃｅ（
１９９３） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：９７２１
；Ｔｕｒｐｉｎ（１９９６） Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：６１８０）。あるいは、
細胞保護作用アッセイが使用され得る（Ｗｅｉｓｌｏｗ（１９９３） Ｊ．Ｎａ
ｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８１：５７７）。
【０１３５】 ゲル移動度シフトアッセイにおける制御として使用され得る化合物の例は、ア
ゾジカルボンアミド（ＡＤＡ）（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃａｍｐ
ａｎｙ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）から市販されている化合物）である。ＡＤ
Ａはまた、上記ＰＣＲアッセイを使用して決定されるように、ＨＩＶ−１ウイル
スを不活化させる。
【０１３６】 ゲル移動度シフトの概念を組み込むアッセイは、インタクトなウイルスに浸透
し得るチオールエステルを同定し、そして研究するために、およびウイルスジン
クフィンガータンパク質中、ジスルフィド架橋を誘導するために、使用され得る
。このようなキットは、例えば、ジスルフィド架橋のためにゲルを通る移動度の
変化をモニタリングするために、精製濃縮レトロウイルスおよび適切なサイズの
標準物（ｓｔａｎｄａｒｄ）を含む。
【０１３７】 （反応生成物の構造特徴付けのための高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ
）精製ＮＣタンパク質） 高精製レトロウイルスジンクフィンガータンパク質は、組換えＤＮＡ技術によ
って生成されるベクターからの発現によって生成され得る。これらのタンパク質
は、Ｓｕｍｍｅｒ（１９９２） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ １：５６３
−５６７によって記載されるように、亜鉛とともに再構築される場合、本発明の
チオールエステル化合物によって攻撃される標的であるジンクフィンガーを含む
ＮＣタンパク質の供給源を提供する。ジンクフィンガータンパク質が同定された
化合物と反応する場合、この反応は、ジンクフィンガータンパク質の共有結合変
化を生成し、そしてこの修飾タンパク質は、例えば逆相ＨＰＬＣによって未反応
タンパク質から分離され得る。
【０１３８】 精製タンパク質およびこれらの分離方法は、化学的および構造的分析のための
、十分な修飾タンパク質（すなわち、反応生成物）を得るために使用される。精
製反応生成物は、単離され、そしてそれらの構造は標準Ｎ−末端Ｅｄｍａｎ分解
によって決定される。しかし、任意の特定の薬剤に関して、この勾配およびＨＰ
ＬＣ条件は、ＮＣタンパク質および反応生成物に依存する。
【０１３９】 この手順は、ＨＩＶ−１ジンクフィンガーと反応するチオールエステルを同定
するために使用される。示されるデータに関するこの反応条件およびＨＰＬＣ条
件は、上記の反応条件およびＨＰＬＣ条件に類似した。
【０１４０】 これらの技術を標準化するキットは、それらが例えば精製レトロウイルスジン
クフィンガータンパク質を含むように再構築され得る。
【０１４１】 （亜鉛損失の核磁気共鳴ベースの検出） ＮＭＲは、レトロウイルスジンクフィンガータンパク質からの亜鉛の損失をモ
ニタリングするために使用され得る（例えば、Ｒｉｃｅ（１９９３）Ｎａｔｕｒ
ｅ ３６：４７３−４７５；ＭｃＤｏｎｎｅｌｌ（１９９７） Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃ
ｈｅｍ．４０：１９６９；Ｒｉｃｅ（１９９７） Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉ
ｎｅ ３：３４１−３４５を参照のこと）。当業者は、タンパク質−リガンド相
互作用をモニタリングするための、ＮＭＲの一般的技術およびその多くの適用に
精通していることが期待される。簡単に述べると、亜鉛に結合されるレトロウイ
ルスジンクフィンガータンパク質中の原子は、亜鉛を欠いているジンクフィンガ
ータンパク質よりも、異なる局所的環境を共有する。局所的環境における相違は
、亜鉛と結合するタンパク質分子、対、亜鉛と結合しないタンパク質分子につい
て、異なったＮＭＲスペクトルの原因となる。例えば、金属イオンキレート化ジ
ンクフィンガータンパク質および本発明の化合物を含有するサンプルのプロトン
（1Ｈ）スペクトルを、経時的にモニタリングすることにより、この化合物が、
タンパク質にその亜鉛イオンを放たせるか否かを測定することが可能となる。
【０１４２】 ＮＭＲは、亜鉛に結合されるタンパク質分子のパーセントを提供するために経
時的に使用され得るので、この技術を使用して所定の反応の反応速度論を定義す
ることもまた可能である。同様に、ＮＭＲは、ジンクフィンガータンパク質が核
酸複合体に結合する際の、試験化合物の効果をモニタリングするために使用され
得る。例えば精製レトロウイルスジンクフィンガータンパク質およびオリゴヌク
レオチドを含有するキットは、この方法の実施を標準化するために使用され得る
。
【０１４３】 （チオールエステル抗ウイルス活性の決定） チオールエステルは、これが抗ウイルス活性（すなわち、ウイルスの伝達また
はウイルスの複製能力を低減あるいは減少させる任意の能力）を示す場合、本発
明の範囲内である。この抗ウイルス活性は、臨床観察によって経験的に決定され
得るか、または任意のインビボまたはインビトロ試験もしくはアッセイ（例えば
、ＸＴＴ細胞保護作用アッセイ（本明細書中に記載される）の使用、Ｔａｔ−誘
導活性（ＨｅＬａ−ＣＤ４−ＬＴＲ−β−ｇａｌ（ＭＡＧＩ細胞）アッセイにお
けるような）の測定、ならびにＴａｔ−誘導β−ガラクトシダーゼ活性の検出な
どによって客観的に決定され得る（例えば、Ｔｏｋｕｎａｇａ（１９９８） Ｊ
．Ｖｉｒｏｌ．７２：６２５７−６２５９を参照のこと）。任意の程度の測定可
能な抗ウイルス活性を有するチオールエステルは、たとえ金属イオン分解が検出
可能でなくても、本発明の範囲内である。
【０１４４】 抗ウイルス活性を決定するための１つの例示的手段は、ＣＥＭ−ＳＳ細胞およ
びウイルス（例えば、ＨＩＶ−１RF）（ＭＯＩ＝０．０１）を用いて、ＸＴＴ（
２，３−ビス［２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルホフェニル］−５−［（フ
ェニルアミノ）カルボニル］−２Ｈ−テトラゾリウムヒドロキシド）細胞保護作
用アッセイを使用することである（Ｒｉｃｅ（１９９３） ＰＮＡＳ ９０：９
７２１−９７２４、およびＲｉｃｅ（１９９７） Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇ
ｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４１：４１９−４２６によって記載されるよう
に）。簡単に述べると、細胞は、ＨＩＶ−１RF（または試験されるべき他のウイ
ルス）で、試験化合物（チオールエステルおよびコントロール）の種々の希釈物
の存在下で、感染される。この培養物は、７日間、インキュベートされる。この
ときの間、保護化合物（すなわち、抗ウイルス活性を有する化合物）の複製ウイ
ルスなしのコントール培養物は、シンシチウムを誘導し、そして約９０％細胞死
を引き起こす。この細胞死は、ＸＴＴ色素の低減によって測定される。ＸＴＴは
、可溶性のテトラゾリウム色素であり、これはＭＴＴと同様に、ミトコンドリア
のエネルギー出力を測定する。デキストランスルフェート（接続インヒビター）
または３’−アジド−２’−３’−ジデオキシチミジン、ＡＺＴ（逆トランスク
リプターゼインヒビター）を使用するポジティブコントロールが、各アッセイに
添加される。個々のアッセイは、姉妹プレート方法を使用して複製でなされる。
【０１４５】 ５０％細胞保護作用を提供する有効抗ウイルス濃度（ＥＣ50）、および５０％
細胞毒性を引き起こす細胞増殖抑制濃度（ＩＣ50）が、計算される。
【０１４６】 あるいは、任意のウイルスは、培養で、またはインビボ（動物）モデルで、チ
オールエステルまたはチオールエステル含有の薬学的処方物の存在または非存在
下で増殖され、抗ウイルス、ウイルス伝達阻害活性および効果に関して試験され
得る。本開示の総説で当業者に明らかである任意のウイルス、アッセイまたは動
物モデルが使用され得る（例えば、Ｌｕ（１９９７） Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎ
ｃｏｇ．８：２７３−２９１；Ｎｅｉｌｄｅｚ（１９９８） Ｖｉｒｏｌｏｇｙ
２４３：１２−２０；Ｇｅｒｅｔｔｉ（１９９８）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．
７９：４１５−４２１；Ｍｏｈｒｉ（１９９８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７９：１２
２３−１２２７；Ｌｅｅ（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ９５：９３９−９４４；Ｓｃｈｗｉｅｂｅｒｔ（１９９８）ＡＩＤＳ
Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ １４：２６９−２７４を参照のこ
と）。
【０１４７】 インビトロアッセイに関して、チオールエステル試験化合物の存在下で増殖さ
れる培養物のウイルス負荷の任意の測定可能な減少（ポジティブまたはネガティ
ブコントロール化合物と比較して）は、抗ウイルス、転写阻害効果を表す。典型
的に、ウイルス負荷の少なくとも３０％の減少（一般に、１０％と９９％との間
）が観察される。上記定義の節で論議したように、任意の関連判定基準は、チオ
ールエステル組成物またはチオールエステル含有組成物の抗ウイルスの有効性を
評価するために使用され得る。
【０１４８】 （レトロウイルスヌクレオカプシドタンパク質のクローニングおよび発現） 本発明の新規なチオールエステルは、インビトロにおいて、ジンクフィンガー
から金属イオンを解離させ得る。ジンクフィンガー含有タンパク質は、金属イオ
ンのジンクフィンガーモチーフからの解離を検出するため、ならびに本発明の方
法およびキットにおいて、使用される。ジンクフィンガーモチーフおよびこれら
のモチーフを含有するタンパク質のクローニングおよび発現の、一般的な実験室
手順は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）、第１〜３巻、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８９の現行の版；ＣＵＲＲＥＮＴ Ｐ
ＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、Ａｕｓｕｂｅ
ｌ編、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒ
ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）に見出され得る。ジンクフィン
ガーの配列および供給源は、核酸、タンパク質およびウイルス源を含め、例えば
、電子データベース（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉ
ｈ．ｇｏｖ／Ｅｎｔｒｅｚ／においてＴｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ
ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、またはｈｔ
ｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＰｕｂＭｅｄ／におい
てＴｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅなど）
によって、公共的に利用可能である。
【０１４９】 ジンクフィンガー含有タンパク質の発現に使用され得る核酸組成物は、ＲＮＡ
、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、または様々な組合せのハイブリッドのいずれであれ
、天然の供給源から単離され得るか、またはインビトロで合成され得る。組換え
ＤＮＡ技術が、ポリペプチドを産生するために使用され得る。一般的に、問題の
ポリペプチドまたはペプチドをコードするＤＮＡが、発現ベクターへのライゲー
ションに適した形態で、初めにクローニングまたは単離される。ライゲーション
の後に、ＤＮＡフラグメントまたは挿入物を含むベクターが、組換えポリペプチ
ドの発現に適した宿主細胞に導入される。次いで、これらのポリペプチドが、こ
の宿主細胞から単離される。核酸が、形質転換もしくはトランスフェクトした全
細胞内、または形質転換もしくはトランスフェクトした細胞溶解産物に存在し得
るか；あるいは部分的に精製された形態もしくは実質的に純粋な形態で、存在し
得る。ジンクフィンガー含有タンパク質をコードする遺伝子を核酸操作する技術
（例えば、核酸配列の発現ベクターへのサブクローニング、プローブの標識、Ｄ
ＮＡハイブリダイゼーションなど）は、例えば、ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＡｕｓ
ｕｂｅｌ（前出）に記載されている。
【０１５０】 一旦、ＤＮＡが単離され、クローニングされると、所望のポリペプチドが、組
換え操作（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒ）した細胞（例えば
、細菌、酵母、昆虫、または哺乳動物の細胞）内で、発現され得る。当業者は、
組換えにより産生したタンパク質の発現に利用可能な、多数の発現システムに精
通していることが、予測される。原核生物または真核生物におけるタンパク質の
発現に関して公知の様々な方法を詳細に記載する試みは、なされない。簡単に要
約すると、ポリペプチドをコードする天然または合成の核酸の発現は、典型的に
、ＤＮＡまたはｃＤＮＡをプロモーター（これは、構成的または誘導的のいずれ
かである）に作用的に結合し、次いで発現ベクターに取り込むことによって、達
成される。これらのベクターは、原核生物または真核生物のいずれかにおいて、
複製および組み込みに適切であり得る。典型的な発現ベクターは、組換えポリペ
プチドをコードするＤＮＡの発現の調節に有用な、転写および翻訳ターミネータ
ー、開始配列、ならびにプロモーターを含む。クローニングされた遺伝子の高レ
ベルの発現を得るために、直接転写のプロモーター、翻訳開始のためのリボソー
ム結合部位、および転写／翻訳ターミネーターを最低限含む、発現プラスミドを
構築することが、望ましい。
【０１５１】 （殺ウイルス剤としてのチオールエステル） 本発明は、生体有機物質または他の物質、および物質を汚染するか、または汚
染し得る任意のウイルス（チオールエステルによる不活化を受けやすいもの）を
不活化するに効果的な量の本発明のチオールエステルを含有する組成物を、提供
する。この物質は、生体有機物（例えば、血漿、栄養培地、タンパク質、医薬品
、化粧品、精子調製物または卵母細胞調製物、細胞、細胞培養物、細菌、ウイル
ス、食品、飲料など）であり得る。これらは、外科用あるいは他の医用物質（例
えば、インプラント物質またはインプラント可能デバイス（例えば、プラスチッ
ク、人工心臓弁もしくは関節、コラーゲン）など、医用材料（例えば、カテーテ
ル法、挿管法、ＩＶ用のチュービング）、および容器（例えば、血液バッグ、貯
蔵容器）など）であり得る。あるいは、本発明のチオールエステルは、上記物質
の任意のものに、殺ウイルス試剤として適用され、そしてその物質の使用の前に
除去される、組成物の形態であり得る。この殺ウイルス性組成物は、本発明の異
なるチオールエステルの様々な量での混合物を含有し得る。例えば、チオールエ
ステルは、ウイルス汚染の可能性を減少させ、実験室の研究者のためのさらなる
安全性を提供するために、細胞培養物に添加され得る。
【０１５２】 （薬学的処方物としてのチオールエステル） 本発明はまた、本発明のチオールエステルを含有する薬学的処方物を提供する
。これらのチオールエステルは、ウイルス感染（特に、レトロウイルス感染）の
処置のために、哺乳動物（特に、ヒト）に投与するに有用な、薬学的組成物にお
いて使用される。
【０１５３】 本発明のチオールエステルは、様々な様式で投与するための薬学的処方物とし
て処方され得る。典型的な投与経路は、腸内および腸管外の両方を含む。これら
には、例えば、限定されることなく、皮下、筋内、静脈内、腹腔内、骨髄内、心
膜内、嚢内、経口、舌下、眼内、鼻腔内、局所的、経皮的、経粘膜的、または直
腸が挙げられる。投与の様式は、例えば、嚥下、吸入、注射、または表面（例え
ば、眼球、粘膜、皮膚）への局所的適用であり得る。特定の処方物は、典型的に
は、投与の特定の様式に適切である。考慮される様々な処方物には、例えば、水
溶液、固体、エアロゾル、リポソーム、および経皮的処方物が挙げられる。処方
および投与に関する技術の詳細は、科学的および特許文献に十分に記載されてい
る。例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎ Ｐ
Ａ）の最新版を参照のこと。
【０１５４】 （腸内、腸管外、または経粘膜的投与のための、水溶液） 腸内、腸管外または経粘膜的薬物送達のための処方物において使用され得る、
水溶液の例には、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、Ｈａｎｋ溶
液、Ｒｉｎｇｅｒ溶液、デキストロース／生理食塩水、グルコース溶液などが挙
げられる。これらの処方物は、安定性、送達性または溶解度を増大させるために
、薬学的に受容可能な補助的基質（例えば、緩衝剤、張度調節剤、湿潤剤、洗浄
剤など）を含有し得る。添加剤はまた、殺菌剤、または安定剤のような、さらな
る活性成分を含み得る。例えば、この溶液は、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム
、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレート
、またはオレイン酸トリエタノールアミンを含有し得る。これらの組成物は、従
来の、周知の安定化技術によって安定化され得るか、または滅菌濾過され得る。
得られる水溶液は、そのままで使用するため、または凍結乾燥されて、パッケー
ジされ得る（凍結乾燥された調製物は、投与の前に、滅菌水溶液と合わせられる
）。
【０１５５】 水溶液は、注射に適切であり、そして特に、静脈内注射に適切である。静脈内
溶液は、洗浄剤、および脂質のような乳化剤を含有し得る。水溶液はまた、等張
剤（ｔｏｎｉｃｓ）としての腸内投与、および例えば、点鼻薬または点眼剤とし
ての、粘膜あるいは他の膜への投与のために、有用である。この組成物は、約１
ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは、約１０ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍ
ｇ／ｍｌの量の、チオールエステルを含有し得る。
【０１５６】 （腸内または経皮的送達のための処方物） 固体処方物は、腸内投与のために使用され得る。これらは、例えば、丸薬、錠
剤、散剤またはカプセル剤として、処方され得る。固体組成物については、従来
の非毒性固体キャリアが使用され得、これには、例えば、薬学的等級のマンニト
ール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウ
ム、タルク（ｔａｌｃｕｍ）、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグ
ネシウムなどが挙げられる。経口投与については、薬学的に受容可能な非毒性組
成物は、通常使用される任意の賦形剤（例えば、先に列挙したキャリア）、およ
び一般的には１０％〜９５％の活性成分を組み込むことによって、形成される。
【０１５７】 非固体処方物もまた、腸内（経口）投与のために使用され得る。キャリアは、
石油、動物性油、植物性油または合成油（例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油
、ゴマ油など）を含む、様々な油から選択され得る。Ｓａｎｃｈｅｚら、米国特
許第５，４９４，９３６号を参照のこと。適切な薬学的賦形剤には、デンプン、
セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、
コメ、コムギ、白亜、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナ
トリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリ
セロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられる。エチレン
オキシドおよびプロピレンオキシドから合成された、非イオン性ブロックコポリ
マーもまた、薬学的賦形剤であり得る；この種のコポリマーは、乳化剤、湿潤剤
、増粘剤、安定化剤、および分散剤として作用し得る。例えば、Ｎｅｗｍａｎ（
１９９８）、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓ
ｔ．１５：８９〜１４２を参照のこと。
【０１５８】 錠剤のような、単位用量形態は、約５０ｍｇ／単位〜約２グラム／単位の間、
好ましくは約１００ｍｇ／単位〜約１グラム／単位の間であり得る。
【０１５９】 （局所的投与：経皮的／経粘膜的送達） 全身性投与もまた、経粘膜的または経皮的手段により、可能である。経粘膜ま
たは経皮的投与については、浸透されるべき障壁に対する適切な浸透剤が、その
処方において使用され得る。このような浸透剤は一般に、当該分野において公知
であり、例えば、経粘膜的投与については、胆汁酸塩類およびフシジン酸誘導体
が挙げられる。さらに、洗浄剤が、浸透を容易にするために使用され得る。経粘
膜的投与は、例えば、鼻腔スプレーにより、または坐剤を使用して、なされ得る
。
【０１６０】 局所的投与については、これらの試剤は、軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ，ｓａｌ
ｖｅ）、クリーム、散剤およびゲルに処方される。１つの実施態様においては、
経皮的送達試剤は、ＤＭＳＯであり得る。経皮的送達システムにはまた、例えば
、パッチが挙げられ得る。
【０１６１】 チオールエステルはまた、持続的な送達または持続的な放出機構（これは、処
方物を内部から送達し得る）においても投与され得る。例えば、生分解性のミク
ロスフェアまたはカプセル、あるいは組成物の持続的な送達が可能な他の生分解
性ポリマー構成物が、本発明の処方物に含まれ得る（例えば、Ｐｕｔｎｅｙ（１
９９８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：１５３〜１５７を参照のこと）
。
【０１６２】 （処方物の吸入による送達） 吸入については、チオールエステル処方物は、当該分野において公知の任意の
システムを使用して送達され得、このシステムには、乾燥粉体エアロゾル、液体
送達システム、エアジェット噴霧器、プロペラントシステムなどが挙げられる。
例えば、Ｐａｔｔｏｎ（１９９８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １６：１４１
〜１４３；例えば、Ｄｕｒａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｓａｎ Ｄｉ
ｅｇｏ，ＣＡ）、Ａｒａｄｉｇｍ（Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）、Ａｅｒｏｇｅｎ（
Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）、Ｉｎｈａｌｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｓ
ｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎ Ｃａｒｌｏｓ，ＣＡ）などによる吸入送達システムを参
照のこと。
【０１６３】 例えば、薬学的処方物は、エアロゾルまたはミストの形態で、投与され得る。
エアロゾル投与については、処方物は、細かく分割された形態で、界面活性剤お
よびプロペラントと共に、供給され得る。界面活性剤は、好ましくは、プロペラ
ントに可溶である。このような試剤の代表的なものは、６〜２２個の炭素原子を
含む脂肪酸（例えば、カプロン酸、オクタン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ス
テアリン酸、リノール酸、リノレン酸、オレステリン（ｏｌｅｓｔｅｒｉｃ）酸
およびオレイン酸）と、脂肪族多価アルコールまたはその環式無水物（例えば、
エチレングリコール、グリセロール、エリスリトール、アラビトール、マンニト
ール、ソルビトール、ソルビトールから誘導したへキシトール無水物）との、エ
ステルまたは部分エステル、ならびにこれらのエステルの、ポリオキシエチレン
およびポリオキシプロピレン誘導体である。混合または天然のグリセリドのよう
な、混合エステルが、使用され得る。界面活性剤は、組成物の０．１重量％〜２
０重量％、好ましくは、０．２５重量％〜５重量％を構成し得る。この処方物の
残りは、通常は、プロペラントである。液化プロペラントは、典型的に、周囲環
境においては気体であり、加圧下で凝縮している。適切な液化プロペラントのう
ちで特に適切なものは、ブタンおよびプロパンのような、５個までの炭素を含む
低級アルカンであり；そして好ましくは、フッ素化またはフルオロクロロ化（ｆ
ｌｕｏｒｏｃｈｌｏｒｉｎａｔｅｄ）アルカンである。上記のものの混合物がま
た、使用され得る。エアロゾルの生成において、適切なバルブを備えた容器が、
細かく分割した化合物および界面活性剤を含む、適切なプロペラントで満たされ
る。これらの成分は、バルブの作動によって放出されるまで、このように加圧下
に維持される。例えば、Ｅｄｗａｒｄｓ（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：
１８６８〜１８７１を参照のこと。
【０１６４】 本発明のチオールエステルの投与のための、噴霧器またはエアロゾル化デバイ
スは、典型的に、約１ｍｇ／ｍ3〜約５０ｍｇ／ｍ3の吸入用量を、送達する。
【０１６５】 吸入による送達は、炎症性成分を含む呼吸状態の処置のために呼吸組織へ送達
するために、特に効果的である。
【０１６６】 （他の処方物） 本発明の薬学的物の調製において、様々な処方改変が使用され、操作されて、
薬物動態および生体分布を変化させ得る。薬物動態および生体分布を変化させる
ための多数の方法が、当業者に公知である。薬物動態についての一般的な議論に
ついては、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ（前出）、第３７章〜第３９章を参照のこと。
【０１６７】 （投与） 本発明のチオールエステルは、ウイルス感染、特に、レトロウイルス感染の、
処置および予防において、使用される。これを達成するために必要なチオールエ
ステルの量は、「薬学的有効用量」として定義される。この使用のための投薬計
画および効果的な量、すなわち、「投薬レジメン」は、様々な要因（投薬の頻度
、疾患または状態の段階、疾患または状態の重篤度、患者の一般的な健康状態、
患者の体質（ｐｈｙｓｉｃａｌ ｓｔａｔｕｓ）、年齢などが挙げられる）に依
存する。ある患者についての投薬レジメンの算出においては、投薬の方法もまた
考慮される。
【０１６８】 投薬レジメンはまた、薬物動態、すなわち、チオールエステルの吸収速度、バ
イオアベイラビリティ、代謝、クリアランスなどを考慮しなければならない（例
えば、最新のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ版、前出）。
【０１６９】 組成物の単回または複数回の投与は、処置する医師により選択される用量レベ
ルおよびパターンで実施され得る。いずれにせよ、薬学的処方物により、患者を
有効に処置するのに十分な量のチオールエステルが提供されなければならない。
本発明の全有効量のチオールエステルは、ボーラスまたは比較的短時間の注入の
いずれかにより、単一用量として被験体に投与され得るか、または分割した処置
プロトコール（複数の投薬が、より延長された時間に渡って投与される）を使用
して投与され得る。当業者は、被験体において有効な用量を得るために必要とさ
れる本発明のチオールエステルの濃度は、例えば、プロドラッグおよびその加水
分解生成物の薬物動態、被験体の年齢および一般的な健康状態、投与経路、施さ
れる処置数、ならびに処方する医師の判断を含む、多くの要因に依存することを
知っている。これらの要因を考慮して、当業者は、特定の使用のための有効用量
が提供されるように用量を調節する。
【０１７０】 （本発明のチオールエステルを含むワクチン処方物） 本発明はまた、ウイルスが、このウイルスと本発明のチオールエステル化合物
とを接触させる工程を含む方法によって不活化される、単離されかつ不活化され
たウイルスを提供し、ここで、上記ウイルスと上記化合物とを接触させる工程は
、上記ウイルスを不活化する。１つの実施態様において、この単離されかつ不活
化されたウイルスはさらに、ワクチン処方物を構成する。本発明のワクチン処方
物はまた、単離されたチオールエステル−複合体化ウイルスタンパク質を含み得
る。
【０１７１】 本発明のチオールエステル−複合体化不活化ウイルスは、種々のウイルス性疾
患、特にレトロウイルス感染（例えば、ＨＩＶ−１）の処置およびこれらに対す
る免疫を生成するため、哺乳動物、特にヒトに投与するのに有用であるワクチン
処方物に使用される。このワクチン処方物は、単一の投与、または一連の投与で
提供され得る。一連の投与として与えられる場合、最初の投与に続いた接種は、
免疫応答をブーストさせるために与えられ、そして典型的にはブースター接種と
呼ばれる。
【０１７２】 本発明のワクチンは、活性成分として免疫学的有効量のチオールエステル−複
合体化不活化ウイルスを含有する。有用なキャリアは当該分野において周知であ
り、例えば、サイログロブリン、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、
破傷風トキソイド、ポリアミノ酸（例えば、ポリ（Ｄ−リジン：Ｄ−グルタミン
酸）、インフルエンザ、Ｂ型肝炎ウイルス核タンパク質、Ｂ型肝炎ウイルス組換
えワクチンなどが挙げられる。これらのワクチンはまた、生理学的に耐容性（受
容可能な）希釈剤（例えば、水、リン酸緩衝化生理食塩水、または生理食塩水）
を含有し得、そしてさらに典型的にはアジュバントを含む。アジュバント（例え
ば、不完全フロイントアジュバント、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム
、またはミョウバン）がまた、免疫応答をブーストするために有利に使用される
。
【０１７３】 （チオールエステル不活化ウイルスおよびチオールエステル複合体化タンパク
質の使用） ワクチンとしての用途に加えて、チオールエステル不活化ウイルスおよびチオ
ールエステル複合体化ウイルスタンパク質は、種々の用途を有する。例えば、チ
オールエステル複合体化ウイルスタンパク質またはチオールエステル不活化ウイ
ルスが、対応する抗ウイルス抗体の検出のための試薬として使用され得る。個体
がウイルス（例えば、ＨＩＶ）で感染されているかどうかを決定するためにごく
普通に使用される試験は、抗ウイルス抗体の存在についてスクリーニングするこ
とである。チオールエステル−不活化ビリオンまたはチオールエステル−複合体
化ウイルスタンパク質が、捕獲抗原または対照抗原としてこれらの検出試験に使
用され得る。例えば、Ｈａｓｈｉｄａ（１９９７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎ
ａｌ．１１：２６７〜２８６；Ｆｌｏ（１９９５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１４：５０４〜５１１を参照のこと。
【０１７４】 チオールエステル不活化ビリオンまたはチオールエステル複合体化ウイルスタ
ンパク質は、Ｘ線結晶化分析または他の超微細構造的な研究用の結晶化試薬とし
て使用され得る（例えば、Ｙａｍａｓｈｉｔａ（１９９８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ
ｌ．２７８：６０９〜６１５；Ｗｕ（１９９８） Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
３７：４５１８〜４５２６を参照のこと）。これらはまた、種々の物理化学的実
験および方法論における分子量、ｐＩまたは他の対照として使用され得る。
【０１７５】 （キットおよび装置） さらなる局面において、本発明は、本明細書中の方法および装置を具体化する
キットを提供する。本発明のキットは必要に応じて以下の１つ以上を含む：（１
）本明細書中に記載されるようなチオールエステルまたはチオールエステル成分
；（２）本明細書中に記載される方法を実施するための、および／あるいはチオ
ールエステルまたはチオールエステル成分を使用するための説明書；（３）１つ
以上のアッセイ成分；（４）チオールエステルを操作するか本明細書中の方法を
実施するために有用なチオールエステル、アッセイ成分、または装置構成要素の
ための容器、ならびに（５）包装物質。
【０１７６】 さらなる局面では、本発明は、本明細書中の任意の化合物、装置、装置の構成
要素またはキットの使用、本明細書中の任意の方法またはアッセイの実施、およ
び／あるいは本明細書中の任意のアッセイまたは方法を実施するための任意の装
置またはキットの使用を提供する。
【０１７７】 （チオールエステルの使用） さらなる局面において、本発明は、本明細書中の任意のチオールエステル組成
物、ウイルス、不活化ウイルスまたはウイルス成分、細胞、細胞培養物、哺乳動
物、装置、装置の構成要素またはキットの使用、本明細書中の任意の方法または
アッセイの実施、および／あるいは本明細書中の任意の方法またはアッセイを実
施するための任意の装置またはキットの使用、および／あるいは医薬としての本
明細書中のウイルス、細胞、細胞培養物、組成物または他の特徴の使用を提供す
る。本明細書中で記載される処置用の医薬としての全ての成分の製造がまた提供
され、これらは、上記の精査により明らかである。
【０１７８】 本発明は、特定の実施例を例として非常に詳しく説明される。以下の実施例は
、例示的目的のため提供され、そしていかなる方法においても本発明を限定する
か、規定するかのいずれも意図しない。
【０１７９】 （実施例） （実施例１：キャピラリ電気泳動） 本発明のチオールエステルの金属イオン置換能を決定するための１つの例示的
手段は、キャピラリ電気泳動である。ＮＣｐ７タンパク質は、各々＋２の形式電
荷を有する２つの亜鉛イオンと複合体化する。タンパク質と反応し、亜鉛イオン
を除去する試薬は、そのタンパク質のコンフォメーションの変化および電荷の変
化を引き起こす。従って、反応タンパク質の電気泳動移動度は、未反応タンパク
質の移動度とは異なる。タンパク質の電気泳動移動度の変化は、キャピラリゾー
ン電気泳動により容易に検出され得る。
【０１８０】 キャピラリカラム緩衝液は、ｐＨ３．０の０．００１Ｍリン酸ナトリウムであ
り、そしてタンパク質は２１５ｎｍでのＵＶ吸収により検出される。サンプル管
は、約１０マイクロリットル以上の、１ｍｌ当り０．２５マイクログラムのＮＣ
ｐ７からなるｐＨ７．０の水溶液を、ジンクフィンガー反応性組成物（例えば、
本発明のチオールエステル）を添加してまたはしないで、含み得る。サンプル管
は、自動サンプルインジェクターに置かれる。計画された間隔で、１０μＬの試
料がキャピラリカラム中に引き抜かれ、そしてデータが１分あたりのＵＶ吸収と
して集められる。未修飾のｐ７ＮＣは、約７．９５分で検出器を通過する移動タ
ンパク質の鋭いピークを与える。選択した試験化合物との反応により引き起こさ
れるタンパク質の修飾は、このパターンの変化により明らかとされる。
【０１８１】 キャピラリ電気泳動は、多くの異なる試料が試料保持ラックに装填され、そし
て連続運転で分析され得るので、単純な自動化の利点を有する。各々の運転は約
１０分を要し、そして各々のサンプル管は多数回分析され得る。
【０１８２】 （実施例２：Ｎ−[２−（５−ピリジニオバレロイルチオ）ベンゾイル]−３−
アミノプロピオンアミドブロミド（ＹＳ１３３２Ｄ）−テンプレートＶＩおよび
ＶＩＩ、ならびにＮ−[２−（５−ピリジニオバレロイルチオ）グリシンアミド
ブロミド（ＹＳ１３３３Ｄ−テンプレートＶおよびＶＩＩ）の調製） （ＹＳ１３３２Ａ、ジスルフィドベンズアミド中間体の合成） ２，２’−ジチオベンゾイルクロリド（３．４３ｇ、１０ｍｍｏｌ）を、Ｎ，
Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ；３０ｍｌ）および水（５ｍｌ）中のβ−ア
ラニンアミド塩酸塩（ＮＯＶＡ Ｂｉｏｃｈｅｍ）（３．１ｇ、２５ｍｍｏｌ）
および４−メチルモルホリン（ＮＭＭ；５ｍｌ、４５ｍｍｏｌ）の透明な溶液に
室温（ＲＴ）で加えた。この混合物は、３０分で透明な赤褐色溶液に変化した。
この溶液を室温で３日間撹拌し、この間に沈殿物が生成した。この混合物を１Ｍ
ＨＣｌ（５００ｍｌ）に加えた。得られた黄橙色の沈殿物を集め、水で洗浄し
、そして真空下で乾燥した。収量は２．９３ｇ（６５％）であった。
【０１８３】 ＹＳ１３３３Ａを、反応時間が３日でなく１日である以外は、ＹＳ１３３２Ａ
と同様に合成した。収量は４ｇ（９５％）であった。
【０１８４】 （ＹＳ１３３２Ｂの合成、ＹＳ１３３２Ａのチオール中間体への還元） ＤＭＦ（１８ｍｌ）および水（２ｍｌ）中のＹＳ１３３２Ａ（２ｇ、４．５ｍ
ｍｏｌ）の混合物に、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（１．
５ｇ、５．２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．５ｍｌ）を室温で加えた
。この混合物は、５分で透明なオレンジ色の溶液に変化した。これを１時間撹拌
し、次いでエチルエーテルに加えた（２００ｍｌ）。沈殿を集め、水（３×２０
ｍｌ）で洗浄し、そして真空下で乾燥した。収量は１．５６ｇ（７７％）の白色
生成物であった。
【０１８５】 ＹＳ１３３３Ｂを、ＹＳ１３３２Ｂと同じ方法で作製した。収量は１．５ｇ（
７６％）であった。
【０１８６】 （ＹＳ１３３２Ｃ、ハロアルカノイルチオエステル中間体の合成） ＹＳ１３３２Ｂ（０．８ｇ、３．６ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（５ｍｌ）溶液に、５
−ブロモバレリルクロリド（１．４ｍｌ、１０．８ｍｍｏｌ）を室温で窒素下で
加えた。この混合物を１時間撹拌し、次いでエチルエーテル（８０ｍｌ）に加え
た。沈殿を集め、そしてＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した。この溶液を１０％重炭酸
ナトリウム（４０ｍｌ；ｐＨ＝８）に撹拌しながら加えた。白色の沈殿を集め、
水で洗浄し、そして乾燥した。収量は０．８３ｇ（７０％）であった。
【０１８７】 ＹＳ１３３３ＣをＹＳ１３３２Ｃと同じ方法で作製した。収量は１．２７ｇ（
７４％）であった。
【０１８８】 （ＹＳ１３３２Ｄ、ピリジニオアルカノイルチオエステル（ＰＡＴＥ）の合成
） ＹＳ１３３２Ｃ（０．２ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）のピリジン（４ｍｌ）溶液を
室温で窒素下で一晩、撹拌した。この混合物をエチルエーテル（４０ｍｌ）に加
えた。白色の沈殿を集め、エーテルで洗浄し、そして乾燥した。収量は０．２３
ｇ（９５％）であった。
【０１８９】 ＹＳ１３３３Ｄを、反応混合物を１日でなく２日間撹拌した以外は、ＹＳ１３
３２Ｄと同様な方法で作製した。収量は０．２２ｇ（９０％）であった。
【０１９０】 （実施例３：Ｎ−[２−（５−ピリジニオバレロイルチオ）ベンゾイル]−３−
アミノプロピオン酸ブロミド（ＹＳ１３３４Ｄ）−テンプレートＶＩおよびＶＩ
Ｉ、ならびにＮ−[２−（５−ピリジニオバレロイルチオ）ベンゾイル]−Ｌ−イ
ソロイシンブロミド（ＹＳ１３２４Ｄ）−テンプレートＶおよびＶＩＩの調製） （ＹＳ１３３４Ａ、ジスルフィドベンズアミド中間体の合成） ２，２’−ジチオジベンゾイルクロリド（３．４３ｇ、１０ｍｍｏｌ）を、Ｎ
，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ；１０ｍｌ）中のβ−アラニンｔ−ブチル
エステル塩酸塩（ＮＯＶＡ Ｂｉｏｃｈｅｍ）（４．８ｇ、２５ｍｍｏｌ）およ
び４−メチルモルホリン（ＮＭＭ；５ｍｌ、４５ｍｍｏｌ）の透明な溶液に室温
（ＲＴ）で加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した。これにヘプタン（２００
ｍｌ）を加えた。得られた沈殿を少量のＤＭＦに溶解し、次いでこれを１Ｍ Ｈ
Ｃｌ（５００ｍｌ）に加えた。粘綢な固体沈殿物を集め、水で洗浄し、そして真
空下で乾燥した。収量は５．１ｇ（９１％）であった。
【０１９１】 ＹＳ１３２２Ａを、５．０ｍｍｏｌの出発ジクロリドおよび過剰のＬ−イソロ
イシンｔ−ブチルエステル塩酸塩から、同じ方法で合成した。収量は３．１０ｇ
（６５％）のジスルフィドであった。
【０１９２】 （ＹＳ１３３４Ｂの合成、ＹＳ１３３４Ａのチオール中間体への還元） ＤＭＦ（９ｍｌ）および水（１ｍｌ）中のＹＳ１３３４Ａ（１．８ｇ、３．２
ｍｍｏｌ）の溶液に、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（１．
３ｇ、４．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．４５ｍｌ）を室温で加え
た。この混合物を１時間撹拌し、次いで０．５Ｍ ＨＣｌ（２００ｍｌ）に加え
た。粘綢な残渣を集め、水で洗浄し、そして真空下で乾燥した。収量は１．２４
ｇ（６９％）であった。
【０１９３】 ＹＳ１３２４Ａを、ＹＳ１３３４Ｂと同じ方法で作製した。２．０ｇのジスル
フィドは、１．５ｇのチオールを生成した（７５％）。
【０１９４】 （ＹＳ１３３４Ｃ、ハロアルカノイルチオエステル中間体の合成） ＹＳ１３３４Ｂ（１．２４ｇ、４．４ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（５ｍｌ）溶液に、
５−ブロモバレリルクロリド（１．５ｍｌ、１１ｍｍｏｌ）を室温で窒素下で加
えた。この混合物を１時間撹拌し、次いでエチルエーテル（１００ｍｌ）に加え
た。溶媒を５ｍｌまでエバポレートし、そして得られた粘綢な残渣を分離し、１
０％重炭酸ナトリウム（２０ｍｌ；ｐＨ＝８）および水（４０ｍｌ）で洗浄し、
そして乾燥した。収量は１．６ｇ（８２％）であった。
【０１９５】 ＹＳ１３２４Ｂを、１．０ｇのチオールから調製し、０．９５ｇの生成物（６
５％収率）を得た。
【０１９６】 （ＹＳ１３３４Ｄ、ピリジニオアルカノイルチオエステル（ＰＡＴＥ）の合成
） ＹＳ１３３４Ｃ（１．６ｇ、３．６ｍｍｏｌ）のピリジン（１０ｍｌ）溶液を
室温で窒素下で一晩撹拌した。これを次いで、エチルエーテル（２００ｍｌ）お
よびヘプタン（１００ｍｌ）の溶液に加えた。沈殿相をメタノール（５ｍｌ）に
溶解し、そしてエーテル（８０ｍｌ）およびヘプタン（２００ｍｌ）の溶液に加
えた。沈殿をトリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）およびギ酸（３ｇ）の溶液に溶解し
た。この溶液を室温で一晩撹拌し、そして窒素気流下で５ｍｌまで減少させた。
残渣にエチルエーテル（４０ｍｌ）を加えた。沈殿を集め、そして乾燥した。収
量は０．９ｇ（５３％）であった。
【０１９７】 ＹＳ１３２４Ｄを、対応する０．６０ｇのブロモバレロイルチオエステルから
調製し、０．５８ｇ（５８％）のイソロイシン保有ＰＡＴＥを得た。
【０１９８】 上記のものは、例示の目的のために提供される。当業者には、本明細書中に記
載された方法およびキットの物質、手順の工程、および他のパラメータが、本発
明の精神および範囲を逸脱することなく、さらに改変されるかまたは置換され得
るということが明らかである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/14 Ａ６１Ｐ 31/14 ４Ｈ００６ 31/16 31/16 31/18 31/18 Ｃ０７Ｄ 213/20 Ｃ０７Ｄ 213/20 Ｃ１２Ｎ 7/06 Ｃ１２Ｎ 7/06 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (71)出願人 Ｒｏｏｍ ２Ｂ50，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ 31，Ｎ．Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍ ａｒｙｌａｎｄ 20014，Ｕ．Ｓ．Ａ． (72)発明者 ソン， ヨンシェン アメリカ合衆国 メリーランド 20852， ロックビル， ロックビル パイク 1001， アパートメント 1715 (72)発明者 インマン， ジョン ケイ． アメリカ合衆国 メリーランド 20817− 2412， ベセスダ， ワズワース ドライ ブ 9200 (72)発明者 ファン， ミンジュン アメリカ合衆国 メリーランド 20854， ロックビル， グリーンレーン ドライ ブ 11621 (72)発明者 ウォールクビスト， アンダース アメリカ合衆国 ニュージャージー 08817， エジソン， フェアビュー ア ベニュー ５ (72)発明者 メイナード， アンドリュー アメリカ合衆国 メリーランド 21701， フレデリック， イースト サード ス トリート 1111 (72)発明者 コベル， デイビッド ジー． アメリカ合衆国 メリーランド 20815， シェビー チェイス， スタンフォード ストリート 4307 (72)発明者 ライス， ウイリアム ジー． アメリカ合衆国 メリーランド 21701， フレデリック， マグノリア アベニュ ー 625 (72)発明者 アッペーラ， エットレ アメリカ合衆国 メリーランド 20815， シェビー チェイス， アスペン スト リート 4112 Ｆターム(参考） 4B065 AA97X BD13 BD25 CA44 4C055 AA13 BA01 BA39 CA01 CA02 CA39 DA01 4C085 AA03 BA65 BA66 BA67 BA68 BA69 BA89 EE03 EE10 4C086 AA01 AA02 BC17 BC36 BC41 BC42 BC52 BC67 BC69 BC82 BC84 BC85 GA04 GA07 GA08 GA09 GA10 MA02 MA04 MA56 MA60 NA14 ZB33 ZC20 ZC61 4C206 AA01 AA02 JA15 JA20 JA66 MA01 MA04 MA76 MA80 ZB33 ZC61 4H006 AA01 AB03 AB29 TN10 TN20 TN30 TN60 TN90

Claims (54)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 以下からなる群から選択される化学構造を有するチオールエ
    ステルを含有する組成物： （ａ） テンプレートＩおよびテンプレートＩＩからなる群から選択される式
    を有するチオールエステルであって、ここで、テンプレートＩおよびテンプレー
    トＩＩが以下の構造を有する： 【化１】 ここで、Ｘは、アルキル、置換アルキル、アリール、および置換アリール基か
    らなる群から選択される、メンバーであり、 Ｒ1は、−Ｙ−Ｚ−であり、 ここで、Ｙは、−（ＣＨ2）m−（ここで、ｍは、１〜６の整数である）、 【化２】 からなる群から選択され、 ここで、Ｚは、ジアルキルまたはアリールまたはアルキルアリールスルホニウ
    ム（Ｚ１）、トリアルキルまたはアリールまたはアルキルアリールアンモニウム
    （Ｚ２）、トリアルキルまたはアリールまたはアルキルアリールホスホニウム（
    Ｚ３）、あるいは以下の構造： 【化３】 （ここで、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、およびＲ16は、Ｈ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2
    、および置換カルボキサミド基からなる群から独立して選択されるメンバーであ
    る） を有するピリジニオ（Ｚ４）からなる群から選択され、 あるいは、 Ｒ1は、アルキル、置換アルキル、−アリール、置換アリール、−アリールア
    ルキル、−Ｐｈ−ＣＨ3、アリールアルコキシ、−Ｐｈ−ＯＣＨ3、ニトロアリー
    ル、−Ｐｈ−ＮＯ2、および−（ＣＨ2）n−Ｘ基（ここで、Ｘは、ハロゲンであ
    り、そしてｎは１〜６の整数である）であり、 Ｒ2は、−Ｈ、−ＣＨ3、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2および−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3基から
    なる群から選択され、 Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5は、Ｈ、ハロゲン、−ＮＯ2、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＮＨ2、お
    よび−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3基からなる群から独立して選択されるメンバーであり
    ； Ｒ6は、−Ｈ、アルキル、−ＣＨ3、置換アルキル、アリール、置換アリール、
    およびアリールアルキル基からなる群から選択され、 Ｒ7、Ｒ8、またはＲ9のいずれかが（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）−Ｇ’（ここで、Ｇ’は、
    −ＮＨ2、−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−アリール、−ＮＨ−アシル、アリール−
    ＮＨ2、ニトロアリール、アリール−ＮＨ−アシル、およびアリール−ＮＨ−ア
    ルキル基からなる群から選択される）であり得ることを除いて、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9
    、Ｒ10およびＲ11はＨである； （ｂ） テンプレートＩＩＩおよびテンプレートＩＶからなる群から選択される
    式を有するチオールエステルであって、ここで、テンプレートＩＩＩおよびテン
    プレートＩＶが以下の構造を有する： 【化４】 ここで、Ｇは、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、およびア
    ルキルアリール基からなる群から選択され、 Ｒ6は、−Ｈ、アルキル、−ＣＨ3、置換アルキル、アリール、置換アリール、
    およびアリールアルキル基からなる群から選択され； Ｒ7、Ｒ8、またはＲ9のいずれかが、（Ｏ＝Ｓ＝Ｏ）−Ｇ’（ここで、Ｇ’は
    、−ＮＨ2、−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−アリール、−ＮＨ−アシル、アリール
    −ＮＨ2、ニトロアリール、アリール−ＮＨ−アシル、およびアリール−ＮＨ−
    アルキル基からなる群から選択される）であり得ることを除いて、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ 9 、Ｒ10およびＲ11はＨであり； テンプレートＶおよびテンプレートＶＩからなる群から選択される式を有する
    チオールエステルであって、ここで、テンプレートＶおよびテンプレートＶＩが
    以下の構造を有する： 【化５】 ここで、ｎは任意の整数であり、Ｒ2〜Ｒ5、Ｒ6およびＲ12〜Ｒ16は上記であ
    り、 Ｙは、上記で定義され、 Ｒ17は、−Ｈまたは−ＣＨ3であり、 Ｒ18は、−Ｈ、−ＣＨ3、アルキル、アリール、アリールアルキル、またはア
    ミノ酸側鎖であり、ここで、Ｒ18が結合される炭素原子についての立体化学配置
    は、ＲまたはＳであり得る、 Ｒ19は、−ＯＨ、−ＮＨ2、Ｎ−置換アミド窒素、またはエステル基（−ＯＲ
    ）であり； 以下の構造を有する、テンプレートＶＩＩの式を有するチオールエステル： 【化６】 ここで、Ｒ0は、硫黄原子に直接結合した、任意の置換または非置換アリール
    もしくはヘテロアリール環系であり、 ＹおよびＲ12〜Ｒ16は、上記のように定義され； ならびに （ｃ） 以下の式を有するピリジニオアルカノイルチオールエステル： 【化７】 ここで、ｍは１〜６の整数であり、ｎは０または１から６の整数であり、そし
    てＲは、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アルキルアリール
    、カルボキサミド、カルボキサミド、置換カルボキサミド、置換カルボキサミド
    、−ＮＨ2基、および置換−ＮＨ2基からなる群から選択される。
  2. 【請求項２】 Ｘが、−（ＣＨ2）m−（ここで、ｍは１〜６の整数である）
    、および−ＣＨ2（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−からなる群から選択されるメンバーである、
    請求項１に記載のチオールエステル。
  3. 【請求項３】 Ｒ1が、−ＣＨ3、−（ＣＨ2）n−ＣＨ3、−ＣＨ（ＣＨ3）2
    、−Ｃ（ＣＨ3）3、−（ＣＨ2）n−Ｃｌ、−（ＣＨ2）n−Ｂｒ、および−（ＣＨ 2 ）n−Ｉ基からなる群から選択される、請求項１に記載のチオールエステル。
  4. 【請求項４】 Ｇが、−ＣＨ（ＣＨ3）2、−Ｃ（ＣＨ3）3、および２，６−
    ジメチルフェニル基からなる群から選択される、請求項１に記載のチオールエス
    テル。
  5. 【請求項５】 前記ピリジニオアルカノイルチオールエステルのＲ基が、−
    ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ3、−Ｃ6Ｈ4ＮＯ2、−Ｃ6Ｈ4ＮＨＳＯ2ＣＨ2Ｃ6Ｈ4ＮＯ2お
    よび、−Ｃ6Ｈ4ＮＨＣＯＣＨ3基からなる群から選択される、請求項１に記載の
    チオールエステル。
  6. 【請求項６】 前記ピリジニオアルカノイルチオールエステルは、ｍが整数
    ４であり、そしてｎが０であるか、あるいは１または２の整数である構造を有す
    る、請求項１に記載のチオールエステル。
  7. 【請求項７】 前記チオールエステルが、インビトロでジンクフィンガーか
    ら金属イオンを解離することができる、請求項１に記載のチオールエステル。
  8. 【請求項８】 前記チオールエステルが、抗ウイルス活性を有する、請求項
    １に記載のチオールエステル。
  9. 【請求項９】 ジンクフィンガー含有タンパク質から金属イオンを解離させ
    るための方法であって、該方法は、該ジンクフィンガーを請求項１に記載のチオ
    ールエステルと接触させる工程を含む、方法。
  10. 【請求項１０】 前記金属イオンが亜鉛である、請求項９に記載の方法。
  11. 【請求項１１】 前記ジンクフィンガーがウイルスタンパク質を含む、請求
    項９に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 前記ウイルスタンパク質が、ヌクレオカプシドタンパク質
    、Ｇａｇタンパク質、またはＧａｇ−Ｐｏｌタンパク質である、請求項１１に記
    載の方法。
  13. 【請求項１３】 前記ジンクフィンガー含有タンパク質が、インタクトなウ
    イルスに取り込まれる、請求項９に記載の方法。
  14. 【請求項１４】 前記ウイルスと前記化合物との前記接触工程が、インビト
    ロで実施される、請求項９に記載の方法。
  15. 【請求項１５】 前記ウイルスと前記化合物との前記接触工程が、インビボ
    で実施される、請求項９に記載の方法。
  16. 【請求項１６】 前記ジンクフィンガーが、鳥類肉腫ウイルスおよび白血症
    レトロウイルス群、哺乳動物Ｂ型レトロウイルス群、ヒトＴ細胞白血病およびウ
    シ白血病レトロウイルス群、Ｄ型レトロウイルス群、マウスの白血病関連群、ま
    たはレンチウイルス群に由来するレトロウイルスタンパク質を包含する、請求項
    ９に記載の方法。
  17. 【請求項１７】 前記レトロウイルスタンパク質が、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−
    ２、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＥＩＡＶ、Ｖｉｓｎａ、ＣａＥＶ、ＨＴＬＶ−１、ＢＬＶ
    、ＭＰＭＶ、ＭＭＴＶ、ＲＳＶ、ＭｕＬＶ、ＦｅＬＶ、ＢａＥＶ、またはＳＳＶ
    レトロウイルス由来である、請求項１６に記載の方法。
  18. 【請求項１８】 前記レトロウイルスタンパク質が、ＨＩＶ−１タンパク質
    である、請求項１７に記載の方法。
  19. 【請求項１９】 前記ウイルスタンパク質の前記ジンクフィンガーから前記
    金属イオンの解離を検出する工程をさらに包含する、請求項９に記載の方法。
  20. 【請求項２０】 前記ジンクフィンガーから前記金属イオンの解離を検出す
    る工程が、キャピラリー電気泳動法、免疫ブロット法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、
    高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、放射性亜鉛−６５の放出を検出する
    工程、蛍光を検出する工程、およびゲル移動度シフトを検出する工程からなる群
    から選択される方法を使用して実施される、請求項１９に記載の方法。
  21. 【請求項２１】 ウイルスを不活化するための方法であり、該方法は、該ウ
    イルスと請求項１に記載の化合物とを接触させる工程を包含し、ここで、該ウイ
    ルスと該化合物との接触工程は、該ウイルスを不活化する、方法。
  22. 【請求項２２】 前記化合物が、ジンクフィンガーからジ亜鉛イオンを解離
    させる、請求項２１に記載の方法。
  23. 【請求項２３】 前記ウイルスは、鳥類肉腫ウイルスおよび白血症レトロウ
    イルス群、哺乳動物Ｂ型レトロウイルス群、ヒトＴ細胞白血病およびウシ白血病
    レトロウイルス群、Ｄ型レトロウイルス群、マウスの白血病関連群、またはレン
    チウイルス群に由来するレトロウイルである、請求項２１に記載の方法。
  24. 【請求項２４】 前記レトロウイルスが、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ
    、ＢＩＶ、ＥＩＡＶ、Ｖｉｓｎａ、ＣａＥＶ、ＨＴＬＶ−１、ＢＬＶ、ＭＰＭＶ
    、ＭＭＴＶ、ＲＳＶ、ＭｕＬＶ、ＦｅＬＶ、ＢａＥＶ、またはＳＳＶレトロウイ
    ルスである、請求項２３に記載の方法。
  25. 【請求項２５】 前記ウイルスが、ＨＩＶ−１レトロウイルスである、請求
    項２４に記載の方法。
  26. 【請求項２６】 前記ウイルスと前記化合物との接触工程が、インビボで実
    施される、請求項２１に記載の方法。
  27. 【請求項２７】 前記化合物が、前記ウイルスの伝播を阻害するために投与
    される、請求項２６に記載の方法。
  28. 【請求項２８】 前記化合物が、前記ウイルスの伝播を阻害するために、膣
    内にまたは直腸内に投与される、請求項２６に記載の方法。
  29. 【請求項２９】 前記化合物が、薬学的処方物としてヒトに投与される、請
    求項２６に記載の方法。
  30. 【請求項３０】 前記化合物が、獣医学的薬学処方物として動物に投与され
    る、請求項２６に記載の方法。
  31. 【請求項３１】 前記方法が、前記ウイルスと、非チオールエステル抗レト
    ロウイルス剤とを接触させる工程をさらに包含する、請求項２６に記載の方法。
  32. 【請求項３２】 前記抗レトロウイルス剤が、ヌクレオチドアナログまたは
    プロテアーゼインヒビターである、請求項３１に記載の方法。
  33. 【請求項３３】 前記ヌクレオチドアナログが、ＡＺＴ、ｄｄＣＴＰまたは
    ＤＤＩである、請求項３２に記載の方法。
  34. 【請求項３４】 前記レトロウイルスと前記化合物との接触工程が、インビ
    トロで実施される、請求項２１に記載の方法。
  35. 【請求項３５】 前記レトロウイルスと前記化合物との接触工程が、血液製
    剤、血漿、栄養培地、タンパク質、医薬品、化粧品、精液または卵母細胞の調製
    物、細胞、細胞培養物、細菌、ウイルス、食品、あるいは飲料において実施され
    る、請求項３４に記載の方法。
  36. 【請求項３６】 単離し、そして不活化したウイルスであって、ここで、ウ
    イルスは、該ウイルスと、請求項１に記載の化合物との接触工程を包含する方法
    により不活化され、ここで、該ウイルスと該化合物との接触工程が、該ウイルス
    を不活化する、ウイルス。
  37. 【請求項３７】 ウイルスが、さらに、ワクチン処方物を構成する、請求項
    ３６に記載の単離し、そして不活化したウイルス。
  38. 【請求項３８】 前記ウイルスが、鳥類肉腫ウイルスおよび白血症レトロウ
    イルス群、哺乳動物Ｂ型レトロウイルス群、ヒトＴ細胞白血病およびウシ白血病
    レトロウイルス群、Ｄ型レトロウイルス群、マウスの白血病関連群、またはレン
    チウイルス群に由来するレトロウイルスである、請求項３６に記載の単離し、そ
    して不活化したウイルス。
  39. 【請求項３９】 前記ウイルスが、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ＢＩ
    Ｖ、ＥＩＡＶ、Ｖｉｓｎａ、ＣａＥＶ、ＨＴＬＶ−１、ＢＬＶ、ＭＰＭＶ、ＭＭ
    ＴＶ、ＲＳＶ、ＭｕＬＶ、ＦｅＬＶ、ＢａＥＶ、またはＳＳＶレトロウイルスで
    ある、請求項３８に記載の単離し、そして不活化したウイルス。
  40. 【請求項４０】 前記レトロウイルスがＨＩＶ−１である、請求項３９に記
    載の、単離し、そして不活化したレトロウイルス。
  41. 【請求項４１】 ウイルスタンパク質のジンクフィンガーでキレート化され
    た金属イオンの解離が可能な化合物を選択する方法であって、該方法は、以下の
    工程： （ａ）該ジンクフィンガーをチオールと接触させる工程；および （ｂ）該ウイルスタンパク質の該ジンクフィンガーからの該金属イオンの解離
    を検出する工程、 を包含する、方法。
  42. 【請求項４２】 前記金属イオンが亜鉛である、請求項４１に記載の方法。
  43. 【請求項４３】 前記ジンクフィンガーからの前記金属イオンの解離を検出
    する前記工程が、キャピラリー電気泳動法、免疫ブロット法、核磁気共鳴（ＮＭ
    Ｒ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、放射性亜鉛−６５の放出を検
    出する工程、蛍光を検出する工程、ゲル移動度シフトを検出する工程を使用して
    実施される、請求項４１に記載の方法。
  44. 【請求項４４】 ウイルスタンパク質のジンクフィンガーから金属イオンを
    解離させることが可能な化合物を選択するためのキットであって、該キットは、
    レトロウイルスタンパク質、および該ウイルスタンパク質からの該金属イオンの
    解離を検出するための使用説明書、請求項１に記載のチオールエステルの選択の
    ための指示を含む使用説明書を含む、キット。
  45. 【請求項４５】 前記ウイルスタンパク質が、前記ウイルスタンパク質のジ
    ンクフィンガーでキレート化された亜鉛イオンと共に供給される、請求項４４に
    記載のキット。
  46. 【請求項４６】 前記ウイルスタンパク質が、インタクトなレトロウイルス
    に取り込まれる、請求項４４に記載のキット。
  47. 【請求項４７】 前記ジンクフィンガーが、鳥類肉腫ウイルスおよび白血症
    レトロウイルス群、哺乳動物Ｂ型レトロウイルス群、ヒトＴ細胞白血病およびウ
    シ白血病レトロウイルス群、Ｄ型レトロウイルス群、マウスの白血病関連群、ま
    たはレンチウイルス群に由来する、請求項４４に記載のキット。
  48. 【請求項４８】 前記ジンクフィンガーが、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩ
    Ｖ、ＢＩＶ、ＥＩＡＶ、Ｖｉｓｎａ、ＣａＥＶ、ＨＴＬＶ−１、ＢＬＶ、ＭＰＭ
    Ｖ、ＭＭＴＶ、ＲＳＶ、ＭｕＬＶ、ＦｅＬＶ、ＢａＥＶ、またはＳＳＶレトロウ
    イルスに由来する、請求項４７に記載のキット。
  49. 【請求項４９】 前記ジンクフィンガーが、ＨＩＶ−１に由来する、請求項
    ４８に記載のキット。
  50. 【請求項５０】 前記使用説明書が、キャピラリー電気泳動法、免疫ブロッ
    ト法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、放射
    性亜鉛−６５の放出を検出する工程、蛍光を検出する工程、ゲル移動度シフトを
    検出する工程を使用して、前記タンパク質からの前記金属イオンの解離を検出す
    る工程に関する、請求項４４に記載のキット。
  51. 【請求項５１】 請求項１に記載のチオールエステルを含有する殺ウイルス
    組成物。
  52. 【請求項５２】 血漿、栄養培地、タンパク質、医薬品、化粧品、精液また
    は卵母細胞の調製物、細胞、細胞培養物、細菌、ウイルス、食品または飲料をさ
    らに包含する、請求項５１に記載の殺ウイルス組成物。
  53. 【請求項５３】 請求項１に記載のチオールエステルを含有する、薬学的処
    方物。
  54. 【請求項５４】 薬学的賦形剤をさらに含有する、請求項５３に記載の薬学
    的処方物。
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