JP2002516154A

JP2002516154A - 細胞成分またはその生成物のない３次元構造のヒアルロン酸誘導体を含有した、組織細胞のインビボ再生用生体材料

Info

Publication number: JP2002516154A
Application number: JP2000550539A
Authority: JP
Inventors: パヴェシオ・アレッサンドラ; ドナ・マッシモ; カッレガロ・ランフランコ
Original assignee: フィディアアドヴァンスドバイオポリマーズソシエタアレスポンサビリタリミタータ
Priority date: 1998-05-27
Filing date: 1999-05-25
Publication date: 2002-06-04
Also published as: ES2184460T3; US6872819B1; EP1085917A1; WO1999061080A1; DE69903945T2; CA2332532A1; ATE227589T1; AU748303B2; DE69903945D1; CA2332532C; DK1085917T3; EP1085917B1; AU4368099A

Abstract

(57)【要約】ヒアルロン酸誘導体を含有した、連通する孔および／または絡み合った微細繊維またはマイクロ繊維によって作られた中空の空間を封入した３次元構造の、細胞成分またはその生成物のない、組織細胞のインビボ再生用生体適合性生体材料の用途。この再生によって得られた組織は、同じ構造を有し、また対応する自然の組織として機能し、さらに隣接する組織細胞中に良好に組み込まれる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】［発明の分野］本発明は、連通する孔および／または絡み合った微細繊維またはマイクロ繊維
によって作られた中空の空間を封入した３次元構造の、組織細胞のインビボ再生
用生体適合性生体材料を調製するためのヒアルロン酸誘導体の用途に関し、前記
生体適合性生体材料は、細胞成分またはその生成物がないことを特徴としている
。特に、本発明は、哺乳類ヒト組織を再生するための方法であって、そのような
処置を必要とする部位に対してこれらの生体適合性生体材料をインビボで適用す
る方法に関する。

【０００２】［発明の背景］ヒアルロン酸は、Ｄ−グルクロン酸とＮ−アセチル−Ｄ−グリコサミンの残基
を交互に繰り返して構成される多糖類エーテルである。ヒアルロン酸は、それが
得られたソースと、調製および決定に使用された方法とに依存して、分子量が５
０，０００〜１３，０００，０００Ｄａの間で変化する直鎖ポリマーである。ヒ
アルロン酸は、細胞周囲ゲル中に、それが主たる成分の１つである脊椎生物の接
続組織の基礎物質中に、関節の滑液中に、硝子液中に、ヒト臍帯中に、そして鶏
のとさか中に自然に存在する。

【０００３】ヒアルロン酸は、多くの生理学的過程、例えば、組織の水和、プロテオグリル
カンの組織化、細胞の分化、増殖および血管新生で生存の役割を果たす(J. Aign
er et al., L. Biomed. Mater. Res. 1998, 42, 172-181)。

【０００４】ヒアルロン酸のフラクションが、眼球内液の代用品として組織修復を促進する
ことに使用でき、あるいは関節病状を処置するために関節内経路によって投与さ
れ得ることは、欧州特許第０１３８５７２号および第０５３５２００号に記載さ
れているように周知である。

【０００５】ヒアルロン酸は、組織修復過程において基礎的な役割を果たす。特に粒状化の
最初の段階において、凝固マトリクスを安定化し、またその劣化を制御し、繊維
芽細胞や内皮細胞のような炎症性細胞の増加を好み、最後に、上皮細胞の引き続
く移動を目指す。

【０００６】ヒアルロン酸溶液の適用が、ただれ、傷およびやけどによって影響された患者
の治癒を加速できることが知られている。組織修復過程の種々の段階におけるヒ
アルロン酸の役割は、ウエイゲル等(P.H. Weigel et al.)による理論的モデルの
構築、「炎症性反応および傷治癒中の早期事象におけるヒアルロン酸およびフィ
ブリン（繊維素）の役割に対するモデル」(J. Theor. Biol., 119: 219, 1986)
によって説明されている。

【０００７】骨誘導特性を有した医薬組成物を調製するための、低分子量ヒアルロン酸フラ
クションの用途もまた知られている（ＵＳ５，６４６，１２９）。

【０００８】ヒアルロン酸誘導体は、種々の形態で処理可能であるという利点を有し、また
誘導の種類とパーセントに従って適用可能な可溶時間と劣化時間を有する、上述
したグリコサミノグルカンの全ての特性を保持している（ＥＰ０２１６４５３Ｂ
１）。

【０００９】更に、ヒアルロン酸誘導体は、特異的分子をヒアルロン酸の構造中に挿入した
結果生ずる新規な特性を有する。例えば、ヒアルロン酸の硫酸化誘導体は、抗凝
血性特性を表し、またヒアルロニダーゼに対する耐性がある（ＷＯ９５／２５７
５１）。

【００１０】ヒアルロン酸およびその架橋誘導体の全または部分エステルは、医薬品および
化粧品分野におけるそれらの用途として、また生体劣化性材料の用途としても知
られている（米国特許第４，８５１，５２１号、第４，９６５，３５３号および
第５，６７６，９６４号）。

【００１１】特許出願第ＷＯ９３／２０８５８号は、ヒアルロン酸および／またはそのエス
テル誘導体を含有した、外科手術で骨充填剤として使用される、結合溶液および
糊料について記載している。

【００１２】最後に、ヒアルロン酸エステルは、米国特許第５，５２０，９１６号に記載さ
れたプロセスに従って、不織布の形態に処理されている。

【００１３】３次元形態のヒアルロン酸誘導体、特に不織組織として処理されたヒアルロン
酸の部分および全エステルは、細胞成分および／または前記細胞成分によって生
成された生成物を含有する生物学的材料調整用の支持体として使用されている。

【００１４】例えば、以下のものに言及することができる。 −ＷＯ９６／３３７５０は、ａ）その上にケラチン生成細胞が種付けされて、培養される、ヒアルロン酸誘
導体を基礎とした微細穿孔されたメンブレンと、ｂ）繊維芽細胞が増殖のために種付けされて、残されている、ヒアルロン酸誘
導体を基礎とした下地の不織組織とを備える人工ヒト皮膚について記載している。

【００１５】 −ＷＯ９７／１８８４２は、ａ）部分的または完全に特異的接続組織細胞に分化された自己由来または相同
性骨髄幹細胞の実効的培地と、更に前記細胞によって分泌された細胞外マトリク
スとを備えるか、その代わりにａ’）完全にまたは部分的に分化された骨髄幹細胞によって分泌されたか、ま
たはその代わりに成熟組織細胞によって分泌された余分な細胞マトリクスと、ｂ）ヒアルロン酸誘導体、特に部分または全エステルからなる３次元マトリク
スとを備える生物学的材料について記載している。

【００１６】 −ＷＯ９８／５６８９７は、その上で内皮、腺細胞が成長される、少なくとも１
つのヒアルロン酸誘導体からなる３次元マトリクスを有する生物学的材料を扱っ
ている。

【００１７】これら全ての生体材料は、それらの主たる用途が、移植片外科の分野であるが
、組織再生が必要とされる部位に同じものが移植される前に、複雑で長い培養工
程を必要とする。加えて、細胞成分を含有する前記材料は、低温保存のような高
価な貯蔵手順を必要とする。ＷＯ９７／１８８４２に開示されているような、細
胞外マトリクスだけを含有する生物学的材料は、細胞培養の他に、細胞成分除去
の工程を必要とする。

【００１８】上述した欠点を示していない生体適合性生体材料を処分する必要性が感じられ
る。

【００１９】［発明の要約］出願人は、孔および／または絡み合った微細繊維またはマイクロ繊維によって
作られた連通する中空の空間を封入した３次元構造に作られたヒアルロン酸誘導
体が、細胞成分またはその生成物の不存在下で、新組織の形成に導く組織再生を
誘導することを意外にも見出した。この新組織は、通常の組織と同じ構造及び機
能を有し、且つ異なる種類の隣接する組織とも良好に一体化されるものである。

【００２０】実際に、前記生体材料は、驚くことに、哺乳類の胎児に見られる、組織再生を
刺激する胚環境と同様の細胞外環境を作り出す能力を提供する。

【００２１】ヒアルロン酸誘導体は、劣化するときに、オリゴマーを放出し、前駆細胞の増
加を刺激し、そして生体材料が移植された組織が構成される細胞腺に向けて発達
することを好む。

【００２２】連通する孔および／または絡み合った微細繊維またはマイクロ繊維によって作
られた中空の空間を封入した生体材料の構造は、宿主細胞がその生体材料中へ浸
透すること、およびそれらが骨格へ付着することを促進する。

【００２３】さらに、前記構造は、再生プロセスの動力学に適合する再吸収の特性を有する
。

【００２４】従って、本発明は、連通する孔および／または絡み合った微細繊維またはマイ
クロ繊維によって作られた中空の空間を封入した３次元構造の、組織細胞をイン
ビボで再生する生体適合性生体材料を調製するためのヒアルロン酸誘導体の用途
に関し、前記生体適合性生体材料は、細胞成分またはその生成物がないことを特
徴としている。

【００２５】本発明は更に、再生されるべき組織の部位に対してこの生体適合性生体材料を
インビボで適用する組織再生プロセスに関する。

【００２６】孔および／または絡み合った微細繊維またはマイクロ繊維によって作られた連
通する中空の空間を有する３次元構造形態のヒアルロン酸誘導体を含有した、細
胞成分のない、前記生体適合性生体材料は、特に表皮、皮膚、骨、軟骨、神経、
心臓血管、脂肪および肝臓の各組織からなる群から選択された組織を再生するこ
とが可能である。

【００２７】［発明の詳細な説明］生体適合性生体材料は、好ましくは、孔および／または互いに絡み合った微細
繊維またはマイクロ繊維によって形成された連通する中空の空間を有する３次元
構造中に、以下のものから選択される少なくとも１つのヒアルロン酸誘導体を含
有する。Ａ）カルボキシ機能の一部または全部が脂肪族、芳香族、アリル脂肪族、シク
ロ脂肪族、複素環式系のアルコールによってエステル化されているヒアルロン酸
のエステル。これらは、ＵＳＰ４，８５１，５２１に開示されており、参照によ
りその全容がここに組み込まれる。Ｂ）カルボキシ基の一部または全部が同じ多糖類鎖または他の鎖のアルコール
機能によってエステル化されているヒアルロン酸の自己架橋エステル。これらは
、ＵＳＰ５，６７６，９５に開示されており、参照によりその全容がここに組み
込まれる。Ｃ）カルボキシ基の一部または全部が脂肪族、芳香族、アリル脂肪族、シクロ
脂肪族、複素環式系のポリアルコールによってエステル化され、スペーサ鎖によ
る架橋を生成しているヒアルロン酸の架橋エステル。これらは、ＵＳＰ４，９５
７，７４４に開示されており、参照によりここに組み込まれる。Ｄ）ヒアルロン酸との、またはヒアルロン酸の部分または全エステルとの、コ
ハク酸のヘミエステル、またはコハク酸のヘミエステルの重金属塩。これらは、
ＷＯ９６／３５７２０７に開示されており、参照によりここに組み込まれる。Ｅ）ヒアルロン酸の硫酸化誘導体（ＷＯ９５／２５７５１）またはＮ−硫酸化
誘導体（特許出願第ＷＯ９８／４５３３５号）。

【００２８】特に好ましいものは、エステル化度が８５％より低い前述したタイプ（Ａ）の
ヒアルロン酸の部分エステルを含有し、且つ不織組織の形態に処理されている生
体材料である。これらは、ＵＳＰ５，５２０，９１６に開示されており、参照に
よりここに組み込まれる。

【００２９】実際に、孔および／または互いに絡み合った微細繊維またはマイクロ繊維によ
って形成された連通する中空の空間を封入した３次元構造を有する前記エステル
は、細胞成分および／またはその生成物の不存在下で、８５％を越えるエステル
化度のパーセントによって得られ、且つ同じ形態に作られたものよりも大きく組
織再生を刺激するという、驚くべき能力を提供する。

【００３０】好ましい実施形態によると、前記エステル化度は、４０〜８５％の間にあり、
より好ましくは、前記エステル化度は、４５〜７５％の間にあり、更に好ましく
は６０〜７０％の間にある。

【００３１】また、部分ヒアルロン酸エステルは、ベンジルアルコールによるものが好まし
い。

【００３２】上述した範囲にあるエステル化度を有するヒアルロン酸の部分エステルを含有
した生体適合性生体材料は、微細繊維またはマイクロ繊維を有する３次元マトリ
クスの不織布形態であることが好ましい。ここで、「繊維」または「マイクロ繊
維」は、直径１〜４０μｍ、好ましくは５〜２０μｍの繊維を意味する。

【００３３】他の好ましい生体適合性生体材料は、ヒアルロン酸誘導体として、好ましくは
前述したクラス（Ｂ）の自己架橋エステルを含有しているものである。

【００３４】孔によって作られた連通する中空の空間を封入した３次元構造形態の自己架橋
誘導体は、それらが上述した特性を全て与えるので、骨軟骨再生に特に好ましい
ものである。

【００３５】これらのケースで、自己架橋ヒアルロン酸誘導体を含有した生体材料の構造中
の中空空間が、連通する孔によって代表されるときは、それらの寸法は、８０％
以上の多孔性を有しながら、１０〜７００μｍの間で変化すべきである。

【００３６】本発明の目的は、連通する孔および／または互いに絡み合った微細繊維または
マイクロ繊維を封入した３次元構造の形態のヒアルロン酸誘導体を含有する、再
生特性を有した、生体適合性で生体劣化性の生体材料を提供することにある。

【００３７】本発明による用途のための生体適合性生体材料は、本質的に、孔および／また
は互いに絡み合った微細繊維またはマイクロ繊維によって形成された連通する中
空の空間を有する３次元構造の形態である前記ヒアルロン酸誘導体からなるもの
か、またはその代わりに、他の生体適合性の天然、半合成および／または合成ポ
リマーを含有するものである。

【００３８】この目的のために使用できる天然ポリマーは、コラーゲン、コラーゲンとグリ
コサミノグルカンの共沈物、セルロース、あるいはゲルの形態の多糖類である。
ゲルの形態の多糖類には、キチン、キトサン、ペクチンまたはペクチン酸、寒天
、アガロース、キサンタン、ジェラン、アルギン酸またはアルギン酸塩、ポリマ
ンナンまたはポリグリカン、デンプン、天然ガムおよびその混合物等が含まれる
。好ましい半合成ポリマーは、薬剤と架橋結合したコラーゲンである。薬剤には
、アルデヒドまたはその前駆体、ジカルボン酸またはそれらのハロゲン化物、ジ
アミン、セルロースの誘導体、ヒアルロン酸、キチンまたはキトサン、ジェラン
、キサンタン、ペクチンまたはペクチン酸、ポリグリカン、ポリマンナン、寒天
、アガロース、天然ガム、グリコサミノグルカンおよびその混合物等が含まれる
。

【００３９】好ましい合成ポリマーは、ポリ乳酸、ポリグリコール酸またはそのコポリマー
またはそれらの誘導体、ポリジオキサン、ポリフォスファゼン、ポリスルホン酸
樹脂、ポリウレタン、ＰＴＦＥ、およびそれらの混合物である。

【００４０】本発明に係る生体適合性で生体劣化性の生体材料は、医薬的または生物学的に
活性な物質、例えば、抗炎症剤、抗生物質、成長因子等を含有することができる
。

【００４１】前記３次元構造は、内部に、不織布、コード、リオフィリック(liophylic)組
成物を含有することができる。

【００４２】本発明に係る生体材料は、人間および獣医外科、特に形成および美容外科で、
整形外科、歯科で、神経外科で、心臓血管外科で、そして一般には物質を失った
場合の軟組織に対する充填剤として、これらを利するために使用することができ
る。

【００４３】［実施例１］粉末形態のヒアルロン酸によって、またエステル化のパーセントを変化させた
ヒアルロン酸のベンジルエステルによって誘導されたラットモデルの、不織布形
態にされた微細繊維形態の、骨再生のパーセントの評価。

【００４４】この実験の目的は、微細繊維の形態に作られ、不織布の形態にされたヒアルロ
ン酸誘導体の骨再生特性を、エステル化のパーセントを異ならせて比較すること
である。

【００４５】リバプール(Liverpool)のリスター(Lister)からの、体重３００〜３５０ｇの
１５匹の黒と白のオスのラットが使用された。これらの動物は、体重１００ｇ当
たり０．１ｍｌのドーズのイムノブリン(Immunobolin, C-Vet Ltd, Bury St Edm
umds, UK)によって麻酔をかけられた。手術される領域は剃られ、その皮膚が洗
浄され、大腿骨が切断排膿法によって露出された。

【００４６】豊富な生理食塩水により洗浄しながら、直径１．７６ｍｍの孔が両足の骨に穿
孔された。

【００４７】下地の筋肉を保護するために、骨膜の支持体が、その骨の下に固定された。

【００４８】インプラントを骨の表面のレベルまで傷中に挿入してから、骨膜と軟組織が傷
の表面上に戻され、縫合された。

【００４９】外側の傷は、感染の危険性を低減するために、アクリル性スプレー、ノベクタ
ン（Ｎｏｂｅｃｕｔａｎｅ；登録商標）(Astra Pharmaceutica, Kings Langley,
UK)の被膜によってシールされた。これらの動物は、体重１００ｇ当たり０．０
５ｍｌのドーズのリバイボン（Ｒｅｖｉｖｏｎ；登録商標）(Reckitt & Coleman
)によって生き返らされた。

【００５０】これらの動物は、以下に報告されているように処置された。

【００５１】

【表１】

【００５２】ＨＡ：ヒアルロン酸フラクションであるヒアラスチン（ｈｙａｌａｓｔｉｎｅ
；登録商標）とヒアレクチン（ｈｙａｌｅｃｔｉｎ；登録商標）（ＥＰ０１３８
５７２）；ＨＹＡＦＦ１１（不織布）：不織布形態にされた微細繊維形態の１００％エス
テル化されたヒアルロン酸のベンジルエステル（ＵＳ５，５２０，９１６）；ＨＹＡＦＦ１１ｐ６５（不織布）：不織布形態にされた微細繊維形態の６５％
エステル化されたヒアルロン酸のベンジルエステル（ＵＳ５，５２０，９１６）
；ＨＹＡＦＦ１１ｐ８０（不織布）：不織布形態にされた微細繊維形態の８０％
エステル化されたヒアルロン酸のベンジルエステル（ＵＳ５，５２０，９１６）
。

【００５３】４週間後に、これらの動物は標準的な方法で犠牲にされた。それらの大腿は、
処置された部分を分離するように、取り出され、切断された。インプラントを含
んだ部分に損傷を与えないように注意しながら、４０％メタノールを注意深く注
入することによって、骨髄が取り出された。

【００５４】これらのサンプルは、固定され、リリー（Ｌｉｌｌｉｅ）溶液によって３日間
脱灰され、７５％アルコール中で２日間洗浄され、パーセントを増加したアルコ
ールによって脱水され、最後にパラフィン内に包埋された。その後、これらのサ
ンプルは、骨表面に直交し且つ欠陥の直径と平行に区分され、厚さ７ミクロンの
セクションが得られた。

【００５５】各サンプルの最も中心に近い４つのセクションは、ヘマトトキシリン−エオジ
ン染色法およびマロリーの３重染色法を使用して染色された。

【００５６】画像分析用の顕微鏡を使用して、組織形態計測的評価が行われた（ＩＢＡＳ）
。

【００５７】２４日後の骨再生のパーセントがグラフ１に示されている。このグラフから判
るように、微細繊維形態の不織布形態にされたヒアルロン酸の６５％エステル化
されたベンジルエステルは、同じ形態にされた全ベンジルエステルや、粉末形態
のヒアルロン酸と比べて驚くほど大きな骨再生度を誘導している。

【００５８】［実施例２］６５〜１００％エステル化されたヒアルロン酸のベンジルエステルを使用した
ピッグモデルの、不織布形態にされた微細繊維形態の、再上皮化のパーセントの
評価。

【００５９】この実験の目的は、６５〜１００％エステル化されたヒアルロン酸の２種類の
ベンジルエステルが有する、ピッグの傷モデルに再上皮化を誘導する能力を、イ
ンビボでテストすることである。

【００６０】生後約１年で、体重約２５〜３０ｋｇの６匹のオスのユカタン（Ｙｕｃａｔａ
ｎ）マイクロピッグが使用された。

【００６１】これらの動物には、キシラジン（Ｘｉｌａｚｉｎｅ；登録商標）（２０ｍｇ／
ｍｌ）とケタミン（Ｋｅｔａｍｉｎｅ；登録商標）（５０ｍｇ／ｍｌ）を１：２
の比で含有する溶液８ｍｌを筋肉内注射することによって、この実験全体を通し
て麻酔をかけた。麻酔は、必要時に、濃度６０ｍｇ／ｍｌのペントバルビタール
の溶液５〜１０ｍｇ／ｋｇを静脈注射することによって急増された。各動物は、
麻酔がきいている間に剃られた。

【００６２】剃られた部分は、先ず外科洗浄剤で洗浄され、それからヨウ素溶液で消毒され
た。直径４ｃｍの円形傷を６個（片側に３ずつ）形成し、皮膚組織と表皮組織の
双方を完全に取り除き、下地の筋肉筋膜をそのまま残した。

【００６３】ＰＴＦＥのチャンバが、その傷床上に配置され、皮膚の端部を使用してチャン
バの基部が皮下のレベルに固定された。このチャンバは、周囲の皮膚に縫い合わ
せた２／０シルク縫合により閉じられた。

【００６４】不織布形態に処理された微細繊維形態の６５〜１００％エステル化されたヒア
ルロン酸のベンジルエステルは、以下に示すようにして、傷に対して適用された
。

【００６５】

【表２】

【００６６】ＨＹＡＦＦ１１ｐ６５（不織布）：不織布形態にされた微細繊維形態の６５％
エステル化されたヒアルロン酸のベンジルエステル（ＵＳ５，５２０，９１６）
；ＨＹＡＦＦ１１（不織布）：不織布形態にされた微細繊維形態の１００％エス
テル化されたヒアルロン酸のベンジルエステル（ＵＳ５，５２０，９１６）。 **：手術の日と、その後７，１４，２１，２８日目に行われた適用。

【００６７】処置後に、傷はワセリンをしみ込ませたガーゼで覆われ、そして動物は弾性包
帯で包まれた。傷を保護するために、軽量硬質のジャケットが動物の胴体に巻き
付けられた。

【００６８】再上皮化のパーセントは、画像分析用の顕微鏡を使用して計算された（ＩＢＡ
Ｓ）。

【００６９】グラフ２は、処置毎の再上皮化のパーセントを示している。

【００７０】グラフ２から判るように、不織布の形態にされた微細繊維形態のＨＹＡＦＦ１
１ｐ６５で処置された傷は、同じ形態にされた全エステルで処置されたものと比
べて、驚くほど高い再上皮化の結果を与えた。

【００７１】上皮組織細胞は、その傷が完全な厚さの傷であったために、頭髪の毛穴から生
ずることができず、またそれらの細胞がＰＴＦＥのチャンバによる処置部位から
分離されていたために、傷の端部からも生ずることができなかったので、テスト
材料の存在下で形成された上皮は、生体材料により増加された傷床からの前駆細
胞に由来していなければならなかった。

【００７２】［実施例３］ヒアルロン酸の自己架橋誘導体（ＡＣＰ）と８５％以上エステル化されたヒア
ルロン酸のベンジルエステル（ＨＹＡＦＦ１１）とにより構築された連通する孔
によって形成された中空の空間を封入した３次元構造の形態の、ラビットの骨軟
骨性欠陥の処置における生体材料。

【００７３】骨折の修復における主要成分は、その部位自身の血管再生によって、または宿
主前駆細胞の骨膜からの移動、および／または、骨髄から修復芽体に向かう移動
によって、通常は傷の部位に到達する骨形成細胞に対する必要性である。しかし
ながら、軟骨は、血管化された組織ではないばかりでなく、多量の前駆細胞に容
易に接近するので、その修復はしばしば不成功に終わる。

【００７４】軟骨形成細胞は、発展的な潜在性を保有しなければならず、また局部的キュー
イング（編み込み）に責任をもたなけれならず、さらに正しい濃度で好適に分布
して十分な数で存在しなければならない。間葉性前駆細胞（ＭＰＣ）は、インビ
ボで有系分裂的に拡大でき、また軟骨表現型に分化できなくてはならない。最後
に、宿主の生物学的反応は、自然の急性炎症反応の抑制と血管再生の抑制とを必
要とする自然の急性メカニズムの修復を支持しなければならない。

【００７５】メカニズム環境は、発展性のキュー（弁髪）と再生する組織とを支持するため
に制御されなければならない。宿主部位と侵略する軟骨形成細胞との間のこの相
互作用は、胚の事象の発生反復と、典型的な成人のヒアリン軟骨への軟骨形成細
胞の拡張および分化とを支持する環境を必要とする。

【００７６】宿主部位は、間葉性前駆細胞の他に、形質転換成長因子β１のような必要な信
号分子を、細胞の移動およびそれらの有系分裂的拡張の双方と、成人の軟骨細胞
への究極的分化とを支持するために、与えなければならない。

【００７７】成人の関節軟骨は、それ故、それ自身を修復するに十分なほど備わっていない
。自然の修復反応を強化するために今日まで使用されている方法は、ヒアリン様
の軟骨の再生を正に可能にするものであるが、変化する量の繊維軟骨の形成が続
いて起こる。これは、非機能的修復組織を代表するものである。

【００７８】驚くべきことに、ヒアルロン酸誘導体の使用は、自然の傷治癒反応を促進し、
内因性前駆細胞が傷ついた組織を再生できる胚の環境に非常に近い環境を創生す
るものであることが発見されている。

【００７９】この研究の目的は、ヒアルロン酸誘導体を、ラビットの骨軟骨性欠陥処置にイ
ンプラントとして使用するための材料として、テストすることである。

【００８０】標準的欠陥が、骨の荷重を受ける側の大腿関節丘の表面上に創生された。これ
らの欠陥は、４つのグループに分割された。１つのグループは、処置を受けなか
ったものであるが、他の３つのグループは、ＡＣＰ生体材料、ＨＹＡＦＦ１１生
体材料、および新鮮な自己由来骨髄を付加したＡＣＰ生体材料によって、それぞ
れ処置されたものである。これらのラビットは、術後４週後または１２週後のい
ずれかに犠牲にされ、その関節丘は、組織学的分析を受けた。これらのテスト材
料の性能は、オードリスコール（O'Driscoll）の２４点スケールの修正バージョ
ンに基づいて、組織学的セクションの半定量的等級付けにより立証された。

【００８１】空の未処置の欠陥は、骨と軟骨の間のタイドマークまで、またはそれを越えて
、骨組織によって充填された。これらの点において、灰化されていない最上層は
、繊維質の未分化の組織から、更にヒアリン様の組織に変化した。空の欠陥のい
ずれもが、完全には修復されなかった。

【００８２】ＡＣＰで処置された欠陥は、術後４週目に、骨と軟骨の間のタイドマークまで
達する骨の充填を呈し、そして、その上層は、良好に組み込まれたヒアリン軟骨
を与えた。１２週目の標本の軟骨は、通常の軟骨の半分の厚みであった。

【００８３】ＨＹＡＦＦ１１によって処置された欠陥は、欠陥と宿主組織の界面に軟骨形成
細胞の縁を呈したが、欠陥の中央部では、空の海綿状組織だけが存在していた。
その上層は、変化可能であったが、隣接する細胞とは良好に一体化されていた。
１２週目に、殆どの欠陥は、繊維状組織を有するか又は有しない中央領域による
骨充填を与えた。殆どの表面は、いくつかのケースで割れや裂傷を有するヒアリ
ン様の軟骨を与えた。

【００８４】骨髄間質を付加したＡＣＰで処置されたグループは、両時点における最上層の
ヒアリン軟骨が高いパーセントで存在した点を除けば、ＡＣＰ単独で処置された
グループと同様の特徴を与えた。

【００８５】組織診断テストの採点は、ＡＣＰで処置された欠陥が、ＨＹＡＦＦ１１で処置
された欠陥（ｐ＜０．０５）および空の未処置の欠陥（ｐ＜０．００２）よりも
良好な修復を与えたことを示した。ＨＹＡＦＦ１１で処置された欠陥と未処置の
欠陥（ｐ＝０．２９）との間で、有意な違いは何も観察されなかった。

【００８６】同様に、ＡＣＰ単独で処置された欠陥と、骨髄間質を付加したＡＣＰで処置さ
れた欠陥との間でも、４週目（ｐ＝０．１５）および１２週目（ｐ＝０．０６）
に、有意な違いは何も観察されなかった。

【００８７】骨軟骨性欠陥が外科的に膝に誘導された４匹のラビットを使用して、試験的研
究が予備的に行われた。これらの欠陥は、直径３ｍｍ、深さ３ｍｍの標準的なも
ので、大腿の負荷を受ける関節丘の表面に対して形成された。これらの欠陥は、
テスト材料で充填された。ラビットは、術後１週目に犠牲にされ、その材料が欠
陥の内部に存在していることを確かめるために、それらの欠陥が組織診断的に分
析された。

【００８８】３６匹のニュージランドホワイトのオスのラビットが使用された。それらは、
生後４ヶ月で、体重２．５ｋｇであった。各ラビットは、番号付けされた。欠陥
は、上述したように大腿関節丘の表面上に形成され、そしてラビットは以下の計
画に従って処置された。

【００８９】

【表３】

【００９０】欠陥は、オードリスコールの２４点スケールの修正によって、組織診断的に採
点された。処置および未処置双方の欠陥の採点は、マン・ウイットニー(Mann-Wh
itney)のランク総計テストによって比較された。ＡＣＰで処置された欠陥に起因
した採点と、ＡＣＰ＋骨髄間質で処置された欠陥に起因した採点が、ウイルコキ
ソンのサイン化ランクテストによって比較された。更に、残留組織の存在は、テ
スト材料のインビボモデル中への再吸収を採点するために、犠牲の異なる２つの
時点で評価された。

【００９１】ＡＣＰが付加された骨髄間質は、以下の手順に従って、ラビットの脛骨から得
られた。

【００９２】［実験手順］ＡＣＰに対する骨髄間質の付加：ラビットは麻酔され、そして脛骨の近端中央表面が小さな切開を介して露出さ
れた。皮下組織と骨膜が切開され、そして骨表面を露出するために収縮された。
脛骨は１６ゲージの針で穿孔され、そして１ｍｌのヘパリン溶液（３，０００ユ
ニット／ｍｌ）を含む１０ｍｌのシリンジに接続された予めヘパリン化されてい
るプラスチック管によって、骨髄間質が脛骨軸から吸い込まれた。

【００９３】これらの材料は、一辺３ｍｍの小さな立方体に切断され、それらはタイロード
の生理食塩水中にフィブロネクチン１００μｇ／ｍｌを含む溶液への浸漬によっ
て被覆された。材料は、４℃で１時間培養した後に、溶液から取り出され、室温
で一昼夜乾燥するために放置された。

【００９４】新鮮な自己由来骨髄が、５ｍｌのテストチューブ内でＡＣＰ海綿体中に組み込
まれた。このチューブは蓋をされ、それから２０ゲージの針が嵌合された２０ｍ
ｌのシリンジを使用して負圧がかけられた。骨髄を材料に完全に含浸させるため
に、真空の創生で気泡の排出を促進する。

【００９５】この組成物は、移植前に、室温で２０分間培養された。

【００９６】外科的手順：３６匹の動物が麻酔をかけられ、そしてそれらの膝関節が、膝蓋の中央端から
中央側枝靱帯の遠端挿入の前端まで、切開を介して露出された。四頭筋筋肉の遠
端部分が切開され、そして関節皮膜を切開する前に、小さな血管が腐食された。
膝蓋は横方向に移動され、そして膝は最大限自由にされた。幅および深さ３ｍｍ
の骨軟骨性欠陥は、関節丘中央の、中央半月板の端部から１．５ｍｍ上方で穿孔
された。中央領域はキューレットによって、また端部は外科用メスによって、全
ての残骸が除去された。

【００９７】インプラントは欠陥中に配置され、膝蓋は減少され、被膜と筋肉は２重４−０
デキソン縫合によって、また皮膚は連続４−０デキソン縫合によって、閉じられ
た。

【００９８】組織診断プロセス：ラビットは、術後４および１２週目に犠牲にされ、そして関節丘はホルマリン
中に固定され、脱灰され、パラフィン中に包埋され、区画され、そしてトルイジ
ンブルーで染色された。全ての１２週後の欠陥は、オードリスコールの２４点ス
ケールの修正によって採点され、以下に報告されている。

【００９９】ヒアリン関節軟骨のパーセント８０〜１００％・・・８６０〜８０％・・・６４０〜６０％・・・４２０〜４０％・・・２０〜２０％・・・０

【０１００】表面規則性滑らかで元のまま・・・３表面的水平積層・・・２裂傷・・・１繊維形成を含む重度の崩壊・・・０

【０１０１】退化性変化厳しい超細胞性・・・１軽度または中間的な超細胞性・・・２通常の細胞性、無クラスター、通常の染色・・・３通常の細胞性、軽度のクラスター、中間的な染色・・・２軽度または中間的な超細胞性、僅かな染色・・・１重度の超細胞性、貧または無染色・・・０

【０１０２】構造的完全性通常・・・２包嚢を含む僅かな崩壊・・・１重度の崩壊統合・・・０

【０１０３】厚さ通常の軟骨の１２１〜１５０％・・・１通常の軟骨の８１〜１２０％・・・２通常の軟骨の５１〜８０％・・・１通常の軟骨の０〜５０％・・・０

【０１０４】左組込み接着された・・・２部分的に接着された・・・１接着されなかった・・・０

【０１０５】右組込み接着された・・・２部分的に接着された・・・１接着されなかった・・・０

【０１０６】骨充填１０１％〜１２５％・・・２７６〜１００％・・・３５１〜７５％・・・２２６〜５０％・・・１０〜２５％・・・０

【０１０７】タイドマーク有・・・１無・・・０

【０１０８】隣接軟骨の退化性変化通常の細胞性、無クラスター、通常の染色・・・３通常の細胞性、軽度のクラスター、中間的な染色・・・２軽度または中間的な超細胞性、僅かな染色・・・１重度の超細胞性、貧または無染色・・・０

【０１０９】統計学的分析：処置された欠陥の採点は、マン・ウイットニーのランク総計テストによって、
未処置の欠陥の採点と比較された。ＡＣＰで処置された欠陥の採点と、ＡＣＰ＋
骨髄間質で処置された欠陥の採点が、ウイルコキソンのサイン化ランクテストに
よって比較された。

【０１１０】［結果］未処置欠陥の修復組織は、２回の観測時点で同様であった。これらの欠陥は、
骨と軟骨との間のタイドマークまでの、およびそれを越えた骨組織を与えたが、
灰化されていない最上層は、未分化繊維組織から、繊維軟骨性組織に、そして更
にヒアリン様の特徴を有する組織にまで変化した。

【０１１１】空の未処置の欠陥の殆どは、変化する量の３つのタイプの組織を与え、１２週
目に観察された標本は、一層薄い最上層を与えた。

【０１１２】術後４週目に、ＡＣＰで処置された欠陥は、肥大軟骨が観察された欠陥の中央
部分を除いて、骨と軟骨の間のタイドマークのレベルまで充填されている急速な
置換骨を与えた。最上層は、隣接する軟骨と印象的に一体化されたヒアリン様の
軟骨で構成されていた。より上層は、変化可能であった。いくつかのケースでは
、ヒアリン様の軟骨によって、また他のケースでは、繊維軟骨よってである。１
２週目に、殆どの欠陥は、繊維組織の中央部分で充填された骨を与えた。いくつ
かの欠陥は、肥大軟骨の存在を明らかにした。鉱化されていない上層は、主とし
てヒアリン軟骨によって、時として割れや裂傷を伴って構成されていた。インプ
ラント材料は４週目の標本で見ることができたが、１２週目には材料の残査は何
も見ることができなかった。

【０１１３】４週目に、ＡＣＰ＋骨髄間質によって処置された標本は、再生組織の最上層中
のヒアリン軟骨の高いパーセントの存在を除いて、ＡＣＰによって処置された標
本と同じ特徴を与えた。

【０１１４】１２週目に、ＡＣＰ＋骨髄間質によって処置された標本全体の外観は、骨と軟
骨の間のタイドマークを越えた骨充填と、隣接する通常の軟骨よりは薄い軟骨組
織の層を伴って、ＡＣＰによって処置された標本の外観と非常に近いものであっ
た。しかしながら、灰化されていない表面層は、ＡＣＰ＋骨髄間質によって処置
された欠陥中で僅かに厚く、またそれは通常の軟骨の染色パターンに一層近い染
色パターンを呈した。

【０１１５】再生組織と周囲の組織との一体化は、ＡＣＰ＋骨髄間質によって処置されたグ
ループでは大きいものであった。残留材料は、どの標本中でも発見されなかった
。

【０１１６】サンプルによって１２週目に採点された点が、以下に示されている。

【０１１７】

【表４】

【０１１８】標本の組織学採点は、以下に報告されるように、ＡＣＰで処置された欠陥と、
骨髄間質を付加したＡＣＰで処置された欠陥との間で、４週目（ｐ＝０．１５）
および１２週目（ｐ＝０．０６）に、有意な違いを何も示さなかった。

【０１１９】

【表５】

【０１２０】［結論］異なる細胞のプール（骨髄間質、滑膜細胞、軟骨細胞）が骨軟骨性欠陥の修復
プロセスに貢献することが可能であるとしても、骨髄からの間葉形成細胞は、自
然修復プロセスに対する主たる貢献者であろう。未処置の欠陥中の自然修復組織
は、通常の関節軟骨の機能に耐えることに失敗し、そのうちに退化する。

【０１２１】欠陥中に移植する生体適合性で生体劣化性の多孔性材料は、適切な化学組成を
有していなければならず、修復細胞の分化を許容し、またそのような細胞が再生
し、一体化できる良好な骨格を与えるものでなければならない。ヒアルロン酸誘
導体は、細胞に対する優れたビヒクルを代表し、またそれらの組成物は、再生プ
ロセスを好む胚環境と同様の環境を創生するものである。

【０１２２】さらに、ＡＣＰの多孔質構造は、修復プロセスの動力学に驚くほど適合する再
吸収特性を与える。この研究は、ＡＣＰによって構成される多孔性生体材料それ
自体が、骨髄間質を付加された同じ生体材料によって得られるものと同様の骨軟
骨性再生を可能にすることを証明している。

【０１２３】［実施例４］７５％エステル化されたヒアルロン酸の部分ベンジルエステル（ＨＹＡＦＦ１１
ｐ７５）によって誘導された骨再生の、全ベンジルエステル（ＨＹＡＦＦ１１）
によって誘導されたものと比較した評価

【０１２４】この研究の目的は、ヒアルロン酸誘導体によって構成された生体材料のインプ
ラントに続いて、ラビット頭蓋冠中に作られた骨欠陥中の骨再生を評価すること
である。

【０１２５】生後８ヶ月、体重約３ｋｇのオスのニュージーランドラビットが使用された。
各動物の頭蓋冠上に２つの欠陥が創生され、この動物はそれから以下に示すよう
に処置された。

【０１２６】

【表６】

【０１２７】各動物は、５ｍｌのキシラジン（２０ｍｇ／ｍｌ）と１０ｍｌのケタミン（５
０ｍｇ／ｍｌ）とを混合することによって得られたケタミン／キシラジンの溶液
４ｍｌを筋肉内(i.m.)注射することによって麻酔をかけられた。それから、局部
麻酔が手術部位の周囲に注射によって投与され、そして骨欠陥の１つは頭蓋冠上
の正中平面の後方に、また１つは前方に形成された。これらの欠陥は、円形状で
、直径８ｍｍ、深さ２〜３ｍｍであった。

【０１２８】術後、各動物は、抗生物質と鎮静剤で処置された。

【０１２９】骨修復の度合いは、術後の３つの異なる時点、即ち１０，２１，４０日目に、
動物が二酸化炭素によって犠牲にされ、そしてそれらの頭蓋冠の相対的領域が取
り外されたときに評価された。

【０１３０】取り外し後に、組織は固定され、ピクリン酸、ホルマリンおよびギ酸からなる
溶液で脱灰された（約２日間の処置）。続いて、それらは、パラフィン中に包埋
され、区分された。標本毎に３つのセクションは、ヘマトキシリン−エオジン、
マロリーの３重染色法およびｐＨ２．５のトルイジンブルーまたはアルシアンブ
ルーによって染色された。

【０１３１】染色された組織学的セクションは、コンピュータ化された形態計測システム（
ＩＢＡＳ）を使用し、欠陥の初期寸法のパーセントで表現される修復の引き続く
工程中の証拠から観察された組織再生に基づいて、組織形態計測的評価用の顕微
鏡下で分析された。

【０１３２】グラフ３に報告された結果は、エステル化度が６０％〜８５％の間のヒアルロン
酸のエステル誘導体（ＮＷｐ７５）によって構成された生体材料が、より高いエ
ステル化度（８５％〜１００％）のエステル誘導体（ＮＷ１１）で同じ形態に形
成されたものよりも高い骨再生のパーセントを誘導することを示している。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１で説明された実験によって２４日目に不織布形態にされ
た微細繊維形態の、粉末形態のヒアルロン酸によって、またエステル化のパーセ
ントを変化させたヒアルロン酸のベンジルエステルによって誘導されたラットモ
デルの、骨再生のパーセントを報告している。

【図２】６５〜１００％エステル化されたヒアルロン酸のベンジルエステ
ルを使用したピッグモデルの、実施例２で開示された実験によって得られる不織
布の形態にされた微細繊維形態の、再上皮化のパーセントを報告している。

【図３】実施例４で説明された実験によって得られ、７〜１０および２１
日目に観察されたラビットの頭蓋冠中の、８ｍｍの損傷が誘導された後の骨再生
のパーセントを報告している。ここで、 *＝Ｐ＜０．０５ＨＹＡＦＦ１１ｐ７５ＮＷ対ＨＹＡＦＦ１１ＮＷ、 °＝Ｐ＜０．０５ＨＹＡＦＦ１１ｐ７５ＮＷ対ＨＹＡＦＦ１１，ＮＷＨＹＡ
ＦＦ１１Ｐ、 ^＝Ｐ＜０．０５ＨＹＡＦＦ１１ｐ７５ＮＷ対ＨＹＡＦＦ１１，ＮＷＨＹＡ
ＦＦ１１Ｐ、ＮＷ＝不織、Ｐ＝粉末である。

【手続補正書】

【提出日】平成１３年８月２３日（２００１．８．２３）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【請求項１６】前記ヒアルロン酸誘導体は、エステル化度が４５〜７５％
の間にあるクラス（Ａ）のヒアルロン酸の部分エステルであり、不織組織の形態
に処理されている請求項１３に記載の方法。

【請求項１７】前記ヒアルロン酸誘導体は、エステル化度が６０〜７０％
の間にあるクラス（Ａ）のヒアルロン酸の部分エステルであり、不織組織の形態
に処理されている請求項１３に記載の方法。

【請求項１８】前記部分エステルは、ベンジルアルコールによるヒアルロ
ン酸の部分エステルである請求項１３に記載の方法。

【請求項１９】前記ヒアルロン酸誘導体は、クラス（Ｂ）の自己架橋エス
テルである請求項１３に記載の方法。

【請求項２０】前記ヒアルロン酸誘導体は、骨軟骨再生用の、クラス（Ｂ
）の自己架橋エステルである請求項１３に記載の方法。

【請求項２１】前記生体適合性生体材料は、本質的に、孔および／または
互いに絡み合った微細繊維またはマイクロ繊維によって形成された連通する中空
の空間を有する３次元構造の形態である前記ヒアルロン酸誘導体から構成されて
いる、請求項１３に記載の方法。

【請求項２２】前記生体適合性生体材料は、少なくとも１つの他の生体適
合性の天然、半合成および／または合成ポリマーを更に有する請求項１３に記載
の方法。

【請求項２３】前記生体適合性生体材料は、医薬的または生物学的に活性
な物質を更に含有する請求項１３に記載の方法。

【請求項２４】前記生体適合性生体材料は、内部に、不織布、コード、リ
オフィリック組成物を更に含有する請求項１３に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者カッレガロ・ランフランコイタリア国、36016 シエネ、ヴィアモンテグラッパ６Ｆターム(参考） 4C081 AB02 AB13 AB18 AB19 AB31 BA12 CD081 CE02 DA04 DB01 4C097 AA01 BB01 DD05 4L047 AA21 AB08 CA15 CB10 CC03

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】少なくとも１つのヒアルロン酸誘導体の用途であって、Ａ）カルボキシ機能の一部または全部が脂肪族、芳香族、アリル脂肪族、シク
ロ脂肪族、複素環式系のアルコールによってエステル化されているヒアルロン酸
のエステルと、Ｂ）カルボキシ基の一部または全部が同じ多糖類鎖または他の鎖のアルコール
機能によってエステル化されているヒアルロン酸の自己架橋エステルと、Ｃ）カルボキシ基の一部または全部が脂肪族、芳香族、アリル脂肪族、シクロ
脂肪族、複素環式系のポリアルコールによってエステル化され、スペーサ鎖によ
る架橋を生成しているヒアルロン酸の架橋エステルと、Ｄ）ヒアルロン酸との、またはヒアルロン酸の部分または全エステルとの、コ
ハク酸のヘミエステル、またはコハク酸のヘミエステルの重金属塩と、Ｅ）ヒアルロン酸の硫酸化誘導体またはＮ−硫酸化誘導体とからなる群から少なくとも１つのヒアルロン酸誘導体が選択され、前記ヒアルロン酸誘導体は、哺乳類の組織再生用の生体適合性生体材料を調製
するために、連通する孔および／または互いに絡み合った微細繊維またはマイク
ロ繊維によって形成された空の空間を封入した３次元構造に処理されており、ｉ）前記生体適合性生体材料は、細胞成分および／またはその生成物がなく、 ii）ヒアルロン酸誘導体が上述したクラス（Ａ）に属し、且つ不織布の形態に
処理されているとき、そのヒアルロン酸誘導体は、８５％より低いエステル化度
を有するものであることを特徴とするヒアルロン酸誘導体の用途。
【請求項２】前記哺乳類の組織は、表皮、皮膚、骨、軟骨、神経、心臓血
管、脂肪および肝臓の各組織からなる群から選択されたヒトの組織である請求項
１に記載の用途。
【請求項３】前記エステル化度は、４０〜８５％の間にある請求項１に記
載の用途。
【請求項４】前記エステル化度は、４５〜７５％の間にある請求項１また
は３に記載の用途。
【請求項５】前記エステル化度は、６０〜７０％の間にある請求項４〜６
のいずれかに記載の用途。
【請求項６】前記部分エステルは、ベンジルアルコールによるヒアルロン
酸の部分エステルである請求項３〜７のいずれかに記載の用途。
【請求項７】前記ヒアルロン酸誘導体は、クラス（Ｂ）の自己架橋エステ
ルである請求項１〜２のいずれかに記載の用途。
【請求項８】骨軟骨再生用の請求項７に記載の用途。
【請求項９】前記生体適合性生体材料は、本質的に、連通する孔および／
または互いに絡み合った微細繊維またはマイクロ繊維によって形成された中空の
空間を有する３次元構造の形態である前記ヒアルロン酸誘導体の少なくとも１つ
からなる請求項１〜８のいずれかに記載の用途。
【請求項１０】前記生体適合性生体材料は、少なくとも１つの他の生体適
合性の天然、半合成および／または合成ポリマーを更に有する請求項１〜９のい
ずれかに記載の用途。
【請求項１１】前記生体適合性生体材料は、医薬的または生物学的に活性
な物質を更に含有する請求項１〜１０のいずれかに記載の用途。
【請求項１２】前記生体適合性生体材料は、内部に、不織布、コード、リ
オフィリック組成物を更に含有する請求項１〜１１のいずれかに記載の用途。
【請求項１３】哺乳類の組織をインビボで再生するための方法であって、
そのような処置を必要とする部位に少なくとも１つのヒアルロン酸誘導体を含有
した生体適合性生体材料をインビボで適用するものであり、Ａ）カルボキシ機能の一部または全部が脂肪族、芳香族、アリル脂肪族、シク
ロ脂肪族、複素環式系のアルコールによってエステル化されているヒアルロン酸
のエステルと、Ｂ）カルボキシ基の一部または全部が同じ多糖類鎖または他の鎖のアルコール
機能によってエステル化されているヒアルロン酸の自己架橋エステルと、Ｃ）カルボキシ基の一部または全部が脂肪族、芳香族、アリル脂肪族、シクロ
脂肪族、複素環式系のポリアルコールによってエステル化され、スペーサ鎖によ
る架橋を生成しているヒアルロン酸の架橋エステルと、Ｄ）ヒアルロン酸との、またはヒアルロン酸の部分または全エステルとの、コ
ハク酸のヘミエステル、またはコハク酸のヘミエステルの重金属塩と、Ｅ）ヒアルロン酸の硫酸化誘導体またはＮ−硫酸化誘導体とからなる群から少なくとも１つのヒアルロン酸誘導体が選択され、前記ヒアルロン酸誘導体は、連通する孔および／または互いに絡み合った微細
繊維またはマイクロ繊維によって形成された中空の空間を封入した３次元構造に
処理されており、ｉ）前記生体適合性生体材料は、細胞成分および／またはその生成物がなく、 ii）前記ヒアルロン酸誘導体は、クラス（Ａ）のヒアルロン酸の部分エステル
であり、且つ不織布の形態に処理されているとき、８５％より低いエステル化度
を有するものであることを特徴とする、哺乳類の組織をインビボで再生するため
の方法。
【請求項１４】前記哺乳類の組織は、表皮、皮膚、骨、軟骨、神経、心臓
血管、脂肪および肝臓の各組織からなる群から選択されたヒトの組織である請求
項１３に記載の方法。
【請求項１５】前記ヒアルロン酸誘導体は、エステル化度が４０〜８５％
の間にあるクラス（Ａ）のヒアルロン酸の部分エステルであり、不織組織の形態
に処理されている請求項１３に記載の方法。【請求項１５】前記ヒアルロン酸誘導体は、エステル化度が４５〜７５％
の間にあるクラス（Ａ）のヒアルロン酸の部分エステルであり、不織組織の形態
に処理されている請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】前記ヒアルロン酸誘導体は、エステル化度が６０〜７０％
の間にあるクラス（Ａ）のヒアルロン酸の部分エステルであり、不織組織の形態
に処理されている請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】前記部分エステルは、ベンジルアルコールによるヒアルロ
ン酸の部分エステルである請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】前記ヒアルロン酸誘導体は、クラス（Ｂ）の自己架橋エス
テルである請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】前記ヒアルロン酸誘導体は、骨軟骨再生用の、クラス（Ｂ
）の自己架橋エステルである請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】前記生体適合性生体材料は、本質的に、孔および／または
互いに絡み合った微細繊維またはマイクロ繊維によって形成された連通する中空
の空間を有する３次元構造の形態である前記ヒアルロン酸誘導体から構成されて
いる、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】前記生体適合性生体材料は、少なくとも１つの他の生体適
合性の天然、半合成および／または合成ポリマーを更に有する請求項１３に記載
の方法。
【請求項２２】前記生体適合性生体材料は、医薬的または生物学的に活性
な物質を更に含有する請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】前記生体適合性生体材料は、内部に、不織布、コード、リ
オフィリック組成物を更に含有する請求項１３に記載の方法。