JP2002512792A - インスリン様増殖因子ｉｉアンチセンスオリゴヌクレオチド配列および細胞増殖を調節するためのその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、哺乳動物において腫瘍細胞増殖を調節するＩＧＦ−ＩＩ遺伝子に相補的なオリゴヌクレオチドに関する。本発明はまた、哺乳動物において腫瘍細胞の増殖を阻害する際に、このような化合物を用いる方法に関する。本発明はまた、薬学的に受容可能な賦形剤および有効量の本発明の化合物を含む薬学的組成物に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （関連出願に対する参照） 本願は、１９９８年４月２３日に出願した米国仮出願番号第６０／０８２，７
９１号に対して優先権を主張する。その出願は全体として本明細書中で参考とし
て援用される。

【０００２】 （発明の背景） （発明の分野） 本発明は、哺乳動物インスリン様増殖因子ＩＩ（ＩＧＦ ＩＩ）遺伝子に相補
的なオリゴヌクレオチドに関連し、そのオリゴヌクレオチドは哺乳動物において
腫瘍細胞の増殖を調節する。本発明はまた、哺乳動物における腫瘍細胞の増殖を
阻害するのにそのような化合物を使用する方法にも関連する。本発明はまた、薬
学的に受容可能な賦形剤および有効な量の本発明の化合物を含む、薬学的組成物
にも関連する。

【０００３】 （参考文献） 以下の刊行物、特許出願、および特許が本出願において引用される。

【０００４】

【数１】 上記の全ての刊行物、特許出願、および特許は、個々の刊行物、特許出願また
は特許が具体的におよび個々に全体として参考として援用されるのと同じ程度、
本明細書中で全体として参考として援用される。

【０００５】 （技術水準） インスリン様増殖因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）は、発生中のヒト胚組織に広く発
現し、および種々の組織の成長および分化に関連する、６７アミノ酸のポリペプ
チド増殖因子である。誕生後、その発現はほとんど全てのヒト組織でだんだんと
失われる。成体ヒトでは、約１００ｎｇ／ｍｌの血清中レベルは主に肝臓によっ
て産生される。ＩＧＦ−ＩＩの生物学的な機能は、ＩＧＦ−ＩＩレセプター（炭
水化物の代謝、悪性細胞の運動性、および／または腫瘍により誘導される脈管形
成に関連する）またはＩＧＦ−Ｉレセプター（シグナル伝達経路および有糸分裂
誘発に関連する）のいずれかへの結合を介して媒介される。

【０００６】 ＩＧＦ−ＩＩは、多くの腫瘍において、種々の機構によって腫瘍の進行および
転移に関係している（（１、２）で概説されている）。ＩＧＦ−ＩＩが大きく関
与している腫瘍は、横紋筋肉腫、ウィルムス腫瘍および神経芽腫のような小児期
腫瘍を含む。これらの腫瘍はＩＧＦ−ＩＩの過剰発現を示し、パラクリンまたは
オートクリンループの存在を示し、そしてこのループが妨害された際に腫瘍の増
殖または転移の阻害を生じる。ＩＧＦ−ＩＩは、骨肉腫、乳ガン、肝芽腫、生殖
細胞腫瘍、肝細胞ガン、副腎皮質ガン、肺腫瘍、平滑筋肉腫、脳腫瘍および結腸
ガンを含む種々の腫瘍において、様々な程度に腫瘍の増殖および転移に寄与する
。さらに、腫瘍形成におけるＩＧＦ−ＩＩの直接の役割が、トランスジェニック
マウスおよびそれを過剰発現するヒト細胞株によって解明された（３−５）。

【０００７】 ヒトＩＧＦ−ＩＩ遺伝子は、インスリン遺伝子のすぐ下流、染色体１１ｐ１５
に位置し、３０ｋｂにわたる（（６）で概説されている；図１参照のこと）。そ
れは９つのエキソンを含み、そのエキソン７、８、および９の一部が前駆体タン
パク質をコードする。エキソン１、４、５、および６の前にはそれぞれ別々のプ
ロモーターＰ１、Ｐ２、Ｐ３、およびＰ４が存在する。プロモーターＰ１は、成
体肝臓でのみ活性であり、一方Ｐ２〜４はほとんどの胎児組織で活性である。Ｐ
２、３、および４からの少量の転写物（胎児転写物）を発現しているいくつかの
成体組織が存在する。４つの主なｍＲＮＡ種（胎児転写物では６Ｋｂ、４．８〜
５Ｋｂ、および２．２Ｋｂ、成体転写物では５．３Ｋｂ）が同定されており、そ
れらは別々のプロモーターから異なるスプライシングによって産生される。種々
の原発性ガンおよび細胞株で観察されるＩＧＦ−ＩＩの過剰発現は、胎児ｍＲＮ
Ａ種の再活性化（肝臓において）または過剰発現（他の器官において）から生じ
るようであり、その発現は主にＰ３およびＰ４由来である。これらの胎児転写物
は、Ｐ１に由来する成体転写物（エキソン１、２および３を含む５’ＵＴＲ）に
は存在しない、独特の５’非翻訳領域（エキソン４または５または６を含む５’
ＵＴＲ）を含む。

【０００８】 アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳ−ＯＤＮ）は、標的ｍＲＮＡに対する
配列特異的ハイブリダイゼーションによって、標的特異的な方法で遺伝子発現を
阻害するために広く利用されてきた。多くの研究で、アンチセンスオリゴヌクレ
オチドに媒介されるガン遺伝子の抑制は、これらの化合物はガン遺伝子を支配す
る生化学的機構を詳細に描写するのに非常に有用であるだけでなく（７）、ヒト
ガンの治療のために新規治療化合物として大いに将来有望であること（８、９）
を明らかにした。さらに、オリゴヌクレオチドを基礎にした治療は、比較的毒性
が少ないとされた（１０）。

【０００９】 少数の研究（１１、１５〜１７）が、ヒトまたはマウス成体ＩＧＦ−ＩＩ転写
物に対して標的化された特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、インビトロ
で腫瘍細胞の増殖を妨げるのに有効であったことを示した。１つの研究では（１
５）、ヒト成体転写物の翻訳開始部位に対して標的化されたアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドによるＩＧＦ−ＩＩ産生の抑制が、ヒト肝細胞ガン細胞株、ＨｕＨ
−７およびＨｅｐＧ２の増殖阻害を生じた。ヒト子宮頸ガン細胞株を利用する別
の研究では（１６、１７）、ＩＧＦ−ＩＩのタンパク質をコードする領域に対し
て標的化されたアンチセンスオリゴヌクレオチドが、上皮増殖因子（ＥＧＦ）誘
導有糸分裂誘発効果を阻害したことを示した。

【００１０】 従って、より高い特異性およびより少ない毒性でＩＧＦ−ＩＩの発現および産
生を阻害するように作用する、ＩＧＦ−ＩＩに対するアンチセンスオリゴヌクレ
オチドを同定することが望ましい。

【００１１】 （発明の要旨） 本発明は、哺乳動物においてＩＧＦ−ＩＩ遺伝子の発現およびＩＧＦ−ＩＩの
産生を調節するアンチセンスオリゴヌクレオチド、ならびにそのようなアンチセ
ンスオリゴヌクレオチドを含む薬学的組成物に関する。本発明はまた、そのよう
なアンチセンスオリゴヌクレオチドを哺乳動物における腫瘍の増殖および転移を
阻害するために使用する方法にも関連する。

【００１２】 従って、その組成物の局面の１つでは、本発明は、哺乳動物胎児ＩＧＦ−ＩＩ
ｍＲＮＡに相補的なヌクレオチドを含む、約３から約１００ヌクレオチドのオ
リゴヌクレオチドである、アンチセンスオリゴヌクレオチドに関する。そのアン
チセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ耐性であり得、そして１つ以上の
ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有し得る。そのアンチセンスオリゴヌ
クレオチドは、さらにＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡに相補的でない追加のヌクレオチ
ドを含み得る。そのオリゴヌクレオチドは、表１の配列番号１から１５からなる
群より選択される配列を含み得る。

【００１３】 本発明はまた、表２の配列番号１７〜３１からなる群より選択される、哺乳動
物成体ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡに相補的なヌクレオチドを含む、約２０から約１
００ヌクレオチドのオリゴヌクレオチドである、アンチセンスオリゴヌクレオチ
ドにも関する。

【００１４】 別の組成物の局面では、本発明は、哺乳動物胎児ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡの５
’非翻訳領域に相補的な配列を含む、約３から１００ヌクレオチドのアンチセン
スオリゴヌクレオチド配列を含むベクターに関する。

【００１５】 別の組成物の局面では、本発明は、表２の配列番号１７〜３１からなる群より
選択される配列を含む、約２０から１００ヌクレオチドのアンチセンスオリゴヌ
クレオチド配列を含むベクターに関する。

【００１６】 さらに別の組成物の局面では、本発明は、薬学的に受容可能な賦形剤、および
哺乳動物胎児ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡに相補的なヌクレオチドを含む約３から約
１００ヌクレオチドの有効な量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む薬学的
組成物に関する。そのオリゴヌクレオチドは、表１の配列番号１から１５からな
る群より選択される配列を含み得る。

【００１７】 さらに別の組成物の局面では、本発明は、薬学的に受容可能な賦形剤、および
表２の配列番号１７〜３１からなる群より選択される配列を含む約２０から約１
００ヌクレオチドの有効な量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む薬学的組
成物に関する。

【００１８】 その方法の局面の１つでは、本発明は、腫瘍を有すると疑われる哺乳動物に、
哺乳動物胎児ＩＧＦ〜ＩＩ ｍＲＮＡに相補的な、約３ヌクレオチドから約１０
０ヌクレオチドの、有効な量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、腫瘍の増殖
が阻害される条件下で投与する工程を包含する、哺乳動物腫瘍の増殖を阻害する
方法に関する。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、化学療法剤と共に投与され
得る。オリゴヌクレオチドは、表１の配列番号１から１５からなる群より選択さ
れる配列を含み得る。

【００１９】 本発明はまた、腫瘍を有すると疑われる哺乳動物に、表２の配列番号１７〜３
１からなる群より選択される、哺乳動物成体ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡに相補的な
、約２０ヌクレオチドから約１００ヌクレオチドの、有効な量のアンチセンスオ
リゴヌクレオチドを、腫瘍の増殖が阻害される条件下で投与する工程を包含する
、哺乳動物腫瘍の増殖を阻害する方法に関する。

【００２０】 別の方法の局面では、本発明は、転移性腫瘍を有すると疑われる哺乳動物に、
哺乳動物胎児ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡに相補的な約３ヌクレオチドから約１００
ヌクレオチドの、有効な量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、腫瘍の転移が
阻害される条件下で投与する工程を包含する、哺乳動物腫瘍の転移を阻害する方
法に関する。このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、化学療法剤と共に投与さ
れ得る。このオリゴヌクレオチドは、表１の配列番号１から１５からなる群より
選択される配列を含み得る。

【００２１】 本発明はまた、転移性腫瘍を有すると疑われる哺乳動物に、表２の配列番号１
７〜３１からなる群より選択される、哺乳動物成体ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡに相
補的な約２０ヌクレオチドから約１００ヌクレオチドの、有効な量のアンチセン
スオリゴヌクレオチドを、腫瘍の転移が阻害される条件下で投与する工程を包含
する、哺乳動物腫瘍の転移を阻害する方法に関する。

【００２２】 （発明の詳細な説明） 本発明は、哺乳動物ＩＧＦ−ＩＩ遺伝子に相補的なオリゴヌクレオチドに関連
し、このオリゴヌクレオチドは哺乳動物において腫瘍細胞の増殖を調節する。種
々のヒト原発性ガンおよび細胞株で観察されるＩＧＦ−ＩＩの過剰発現は、胎児
ｍＲＮＡ種の再活性化（肝臓において）または過剰発現（他の器官おいて）から
生じるようである。従って、５’ＵＴＲにおける胎児転写物を特異的に標的化し
、成体転写物をそのままに残すように設計したアンチセンスオリゴヌクレオチド
は、標的腫瘍細胞に高度に特異的である。

【００２３】 理論または機構に限られることなく、これらのアンチセンス化合物は、腫瘍細
胞のオートクリン増殖を抑制し、そしておそらくアポトーシスを誘導するだけで
なく、腫瘍細胞運動性および／または内皮細胞移動および脈管形成の誘導のよう
な、ＩＧＦ−ＩＩのオートクリン／パラクリン機能を阻害することによって、そ
れらの抗腫瘍活性を発揮する。

【００２４】 （定義） 本明細書中で使用される場合、以下の用語は以下の意味を有する。

【００２５】 本明細書中で使用される「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、
所望のｍＲＮＡに相補的なヌクレオチド配列を意味する。アンチセンスオリゴヌ
クレオチドは、ＩＧＦ−ＩＩの発現を阻害するための標的として有効に作用する
哺乳動物ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡの任意の部分に相補的である。好ましくは、ア
ンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＩＧＦ−ＩＩ胎児転写物の５’非翻訳領域に
相補的である。より好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、図１１Ａ
〜Ｃに示すようなエキソン４、５または６のヌクレオチド配列に相補的である。

【００２６】 いかなる理論または機構に限定されることなく、一般的に、アンチセンスオリ
ゴヌクレオチドの活性は、オリゴヌクレオチドの標的核酸（例えば少なくとも一
部のゲノム領域、遺伝子またはそのｍＲＮＡ転写物）への結合、従ってハイブリ
ダイゼーションによる停止またはＲＮａｓｅＨによる標的ＲＮＡの破壊（ＲＮＡ
にハイブリダイズした場合のＲＮａｓｅＨを活性化する能力）のいずれかによる
、標的の機能の破壊に依存すると考えられている。

【００２７】 「オリゴヌクレオチド」という用語は、天然に存在する塩基、糖、および糖間
（骨格）結合からなる、ヌクレオチドのオリゴマーもしくはポリマー、またはヌ
クレオシドモノマーをいう。この用語はまた、同様に機能する、天然には存在し
ないモノマーまたはその一部を含む、修飾または置換オリゴマーを含む。そのよ
うな修飾または置換オリゴマーは、増強された細胞への取り込み、またはヌクレ
アーゼ存在下での増加した安定性のような性質のために、天然に存在する形態よ
りも好ましくあり得る。この用語はまた、２つ以上の化学的に別の領域を含むキ
メラオリゴヌクレオチドを含む。例えば、キメラオリゴヌクレオチドは、有益な
性質を与える（例えば増加したヌクレアーゼ耐性、増加した細胞への取り込み）
修飾ヌクレオチドの少なくとも１つの領域を含み得るか、または２つ以上の本発
明のオリゴヌクレオチドが結合してキメラオリゴヌクレオチドを形成し得る。

【００２８】 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、リボ核酸またはデオキシリボ核
酸であり得、そして、アデニン、グアニン、シトシン、チミンおよびウラシルを
含む、天然に存在するかまたは合成の単量体塩基を含み得る。オリゴヌクレオチ
ドはまた、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、２
−プロピルおよび他のアルキルアデニン、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン
、６−アザウラシル、６−アザシトシンおよび６−アザチミン、プソイドウラシ
ル、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオール
アデニン、８−チオールアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、および
他の８−置換アデニン、８−ハログアニン、８−アミノグアニン、８−チオール
グアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニン、および他の
８−置換グアニン、他のアザおよびデアザウラシル、チミジン、シトシン、また
はグアニン、５−トリフルオロメチルウラシルおよび５−トリフルオロシトシン
のような、修飾塩基も含み得る。修飾はまた、メチル基、エチル基、プロピル基
のような他の化学基の、糖、塩基、または骨格構成要素を含むオリゴヌクレオチ
ドの種々の部分への結合を含み得る。

【００２９】 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、リン酸骨格に修飾亜リン酸
酸素へテロ原子、短鎖アルキルまたはシクロアルキル糖間結合または短鎖へテロ
原子または複素環式糖間結合を含み得る。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオ
チドはメチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホス
ホトリエステル、およびモルホリノオリゴマーを含み得る。アンチセンスオリゴ
ヌクレオチドは、４から６の３’末端ヌクレオチドの間を結合するホスホロチオ
エート結合を含み得る。ホスホロチオエート結合は全てのヌクレオチドを結合し
得る。ホスホロチオエート結合はＲ_pおよびＳ_pエナンチオマーの混合であり得る
か、あるいはＲ_pまたはＳ_p形態のいずれかで立体規則性または実質的に立体規則
性であり得る。

【００３０】 アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、糖模倣物を有し得る。オリゴヌクレ
オチドは、２’−Ｏ−置換リボヌクレオチドのような修飾塩基および／または糖
を有する、少なくとも１つのヌクレオチドを有し得る。本発明の目的のために、
「２’−Ｏ−置換」という用語は、５炭糖部分の２’位の、１〜６の飽和または
不飽和炭素原子を含む−Ｏ−低級アルキル基による、または２〜６の炭素原子を
有する−Ｏ−アリールまたはアリル基による置換を意味する。ここでそのような
アルキル、アリールまたはアリル基は、置換されなくても、例えばハロ、ヒドロ
キシ、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、アシル、アシルオキシ、アルコキ
シ、カルボキシル、カルバルコキシル（ｃａｒｂａｌｋｏｘｙｌ）、またはアミ
ノ基で置換されていてもよい。本発明のオリゴヌクレオチドは５’末端で２’−
Ｏ−アリル化された４または５のリボヌクレオチド、および／または３’末端で
２’−Ｏ−アルキル化された４または５のリボヌクレオチドを含み得る。

【００３１】 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、ヌクレオチドの構造が根本
的に変化したヌクレオチドアナログを含み得る。そのようなオリゴヌクレオチド
アナログの１つの例は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）である。ここで、ＤＮＡ（また
はＲＮＡ）におけるデオキシリボース（またはリボース）リン酸骨格は、ペプチ
ドで見られるものと同様のポリアミド骨格に置換されている（Ｎｉｅｌｓｅｎら ²⁹ ；ＧｏｏｄおよびＮｉｅｌｓｅｎ³⁰；Ｂｕｃｈａｒｄｔ、故人、ら³¹；米国特
許第５，７６６，８５５号；Ｂｕｃｈａｒｄｔ、故人、ら³²；米国特許第５，７
１９，２６２号）。ＰＮＡアナログは酵素による分解に抵抗性であり、そしてイ
ンビボおよびインビトロで延長した寿命を有することが示された。ＰＮＡはまた
、ＰＮＡ鎖とＤＮＡ鎖との間に電荷の反発が無いために、天然に存在する核酸分
子よりも強く相補的なＤＮＡ配列に結合する。

【００３２】 本発明のオリゴヌクレオチドはまた、ポリマー骨格、環状骨格、または非環状
骨格を含む他のヌクレオチドを含み得る。例えば、ヌクレオチドはモルホリノ骨
格構造を含み得る（米国特許第５，０３４，５０６号（３３））。

【００３３】 本発明のオリゴヌクレオチドは、それらが修飾されてＤＮＡおよびＲＮＡヌク
レアーゼによる分解を受け難いか、またはあるいはオリゴヌクレオチドをＤＮＡ
またはＲＮＡヌクレアーゼから保護する輸送ビヒクルに置かれた場合、「ヌクレ
アーゼ耐性」である。ヌクレアーゼ耐性オリゴヌクレオチドは、例えばメチルホ
スホネート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル
、およびモルホリノオリゴマーを含む。ヌクレアーゼ耐性を与える適切な輸送ビ
ヒクルとしては、例えばリポソームが挙げられる。

【００３４】 本発明のオリゴヌクレオチドはまた、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的性質
を改善する基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的性質を改善する基のような
基を含み得る。

【００３５】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、好ましくはＩＧＦ−ＩＩ遺伝子に相補的
な配列から選択され、その結果、その配列は２重鎖形成、ヘアピン形成、および
ホモオリゴマー／配列反復を示す最も少ない見込みを示すが、ＩＧＦ−ＩＩ遺伝
子配列に結合する高度から中程度の可能性を有する。これらの性質はコンピュー
ターモデリングプログラムＯＬＩＧＯ Ｐｒｉｍｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏ
ｆｔｗａｒｅ、Ｖｅｒｓｉｏｎ ５．０（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎ
ｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ、ＭＮによって配布）を用いて決定され得
る。このコンピュータープログラムはこれら５つのパラメーターの質的な推定の
決定を可能にする。

【００３６】 あるいは、アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、２つ以上の哺乳動物種間
でＩＧＦ−ＩＩ遺伝子の配列が高度に保存されていることに基づいて選択され得
る。これらの性質は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｃｏ
ｍｐｕｔｅｒグループ（ＧＣＧ）ソフトウェア（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ Ｊ．ら（３
５））のＢＬＡＳＴＮプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌら（３４））を、Ｎａｔｉ
ｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍ
ａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）データベースと共に用いて決定され得る。

【００３７】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、置換、挿入および欠失のような変異を含
み得る。好ましくは、変異を有する配列は１０％より少ない。

【００３８】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは一般的に、少なくとも約３ヌクレオチドま
たはヌクレオチドアナログ、より好ましくは少なくとも約５ヌクレオチド、より
好ましくは少なくとも約７ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約９ヌクレ
オチド、および最も好ましくは少なくとも約２０ヌクレオチドからなる。アンチ
センスオリゴヌクレオチドは、好ましくは約１００ヌクレオチドまたはヌクレオ
チドアナログより少なく、より好ましくは約５０ヌクレオチドまたはヌクレオチ
ドアナログより少なく、最も好ましくは約３５ヌクレオチドまたはヌクレオチド
アナログより少ない。

【００３９】 好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、胎児ＩＧＦ−ＩＩ転写物の
５’非翻訳領域に相補的である。「胎児ＩＧＦ−ＩＩ転写物の非翻訳領域」は、
胎児細胞で転写され主なＩＧＦ−ＩＩ転写物を形成するし、そして成体ＩＧＦ−
ＩＩ転写物（成体細胞における主な転写物）の部分を形成しないＩＧＦ−ＩＩ遺
伝子の部分を意味する。好ましくは、「胎児ＩＧＦ−ＩＩ転写物の非翻訳領域」
は、ＩＧＦ−ＩＩ遺伝子のエキソン４、５、および６である。最も好ましくは、
「胎児ＩＧＦ−ＩＩ転写物の非翻訳領域」は、実質的に図１１Ａ〜Ｃに示すエキ
ソン４、５、および６の配列である。

【００４０】 好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは表１および２に示す配列を含
む（下記）。

【００４１】

【表１】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡに相補的な
配列から選択され、その結果、その配列は２重鎖形成、ヘアピン形成、およびホ
モオリゴマー／配列反復を示す最も少ない見込みを示すが、ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲ
ＮＡ配列に結合する高い可能性を有し、そしてＧＣクランプ（ｃｌａｍｐ）を含
む。さらに、ヒトおよびマウスにおいて他の頻繁に存在するまたは反復する配列
に対する誤ったプライミングが排除された。これらの性質は、コンピューターモ
デリングプログラムＯＬＩＧＯ（登録商標）Ｐｒｉｍｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｖｅｒｓｉｏｎ ５．０（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ、ＭＮによって配布）を用いて決定し
た。

【００４２】

【表２】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡに相補的な
配列から選択され、その結果、その配列は２重鎖形成、ヘアピン形成、およびホ
モオリゴマー／配列反復を示す最も少ない見込みを示すが、ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲ
ＮＡ配列に結合する高い可能性を有し、そしてＧＣクランプを含む。さらに、ヒ
トおよびマウスにおいて他の頻繁に存在するまたは反復する配列に対する誤った
プライミングが排除された。これらの性質は、コンピューターモデリングプログ
ラムＯＬＩＧＯ（登録商標）Ｐｒｉｍｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒ
ｅ、Ｖｅｒｓｉｏｎ ５．０（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉ
ｎｃ．、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ、ＭＮによって配布）を用いて決定した。

【００４３】 表１および２において、「Ｔｍ」は最近接（ｎｅａｒｅｓｔ−ｎｅｉｇｈｂｏ
ｕｒ）の熱力学値によって計算したオリゴヌクレオチド２重鎖の溶解温度である
。この温度で５０％の核酸分子が２重鎖であり、そして５０％が変性する。「Δ
Ｇ」は、オリゴヌクレオチドの自由エネルギーであり、それはオリゴヌクレオチ
ド２重鎖の安定性の測定値である。

【００４４】 「アルキル」という用語は、好ましくは１から２０の炭素原子、およびより好
ましくは１から６の炭素原子を有する、１価のアルキル基をいう。この用語は、
メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、
ｎ−ヘキシル等のような基によって例示される。

【００４５】 「アリール」という用語は、単一の環（例えばフェニル）または複数の縮合し
た（融合した）環（例えばナフチルまたはアントリル）を有する、６から１４炭
素原子の不飽和芳香族炭素環式基をいう。好ましいアリールは、フェニル、ナフ
チル等を含む。

【００４６】 「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、およ
びヨードを指し、そして好ましくはフルオロまたはクロロのいずれかである。

【００４７】 １つ以上の置換基を含む上記の任意の基に関して、もちろんそのような基は立
体的に実行不可能な、および／または合成的に実行不可能な任意の置換または置
換パターンを含まないことが理解される。さらに、本発明の化合物はこれらの化
合物の置換により発生する全ての立体化学的異性体を含む。

【００４８】 「薬学的に受容可能な」という用語は、活性成分の生物学的活性の有効性を妨
害しない、無毒性の物質を意味する。その物質は細胞、細胞培養物、組織または
器官のような生物学的系に適合する。

【００４９】 「薬学的に受容可能な塩」という用語は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレ
オチドの生物学的有効性および性質を保持し、そして生物学的にまたは他の点で
有害でない塩をいう。多くの場合、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは
、アミノおよび／またはカルボキシル基またはそれと同様の基の存在によって酸
性塩および／または塩基性塩を形成し得る。

【００５０】 薬学的に受容可能な塩基を加えた塩は、無機および有機塩基から調製され得る
。無機塩基に由来する塩は、単なる例証として、ナトリウム、カリウム、リチウ
ム、アンモニウム、カルシウムおよびマグネシウム塩を含む。有機塩基に由来す
る塩は、アルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換アルキ
ルアミン、ジ（置換アルキル）アミン、トリ（置換アルキル）アミン、アルケニ
ルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換アルケニルアミン
、ジ（置換アルケニル）アミン、トリ（置換アルケニル）アミン、シクロアルキ
ルアミン、ジ（シクロアルキル）アミン、トリ（シクロアルキル）アミン、置換
シクロアルキルアミン、ジ置換シクロアルキルアミン、トリ置換シクロアルキル
アミン、シクロアルケニルアミン、ジ（シクロアルケニル）アミン、トリ（シク
ロアルケニル）アミン、置換シクロアルケニルアミン、ジ置換シクロアルケニル
アミン、トリ置換シクロアルケニルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン
、トリアリールアミン、ヘテロアリールアミン、ジヘテロアリールアミン、トリ
へテロアリールアミン、複素環式アミン、ジ複素環式アミン、トリへテロサイク
リックアミン、混合ジ−およびトリ−アミン（少なくとも２つのアミンの置換基
が異なり、そしてアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、シク
ロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、
アリール、ヘテロアリール、複素環等からなる群より選択される）のような、一
級、二級および三級アミンの塩を含むがこれらに限定されない。２つまたは３つ
の置換基が、アミノ窒素と共に、複素環またはヘテロアリール基を形成するアミ
ンもまた含まれる。

【００５１】 適切なアミンの例は、単なる例証として、イソプロピルアミン、トリメチルア
ミン、ジエチルアミン、トリ（イソプロピル）アミン、トリ（ｎ−プロピル）ア
ミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、トロメタミン、リシ
ン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン
、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、Ｎ−アルキルグルカミン、テオ
ブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ−エチルピペリジ
ン等を含む。他のカルボン酸誘導体、例えばカルボキサミド、低級アルキルカル
ボキサミド、ジアルキルカルボキサミド等を含むカルボン酸アミドが、本発明の
実施において有用であることも理解される。

【００５２】 薬学的に受容可能な酸を加えた塩は、無機および有機酸から調製され得る。無
機酸に由来する塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等を含む。有機酸
に由来する塩は、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、蓚酸、リン
ゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香
酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエン
スルホン酸、サリチル酸等を含む。

【００５３】 「ＩＧＦ−ＩＩ遺伝子」または「インスリン様増殖因子ＩＩ」という用語は、
ＩＧＦ−ＩまたはＩＧＦ−ＩＩレセプターに結合できるタンパク質をコードする
任意の遺伝子をいう。好ましくは、ＩＧＦ−ＩＩ遺伝子は、図１１Ａ〜Ｄに示す
エキソン４、５、６または７〜９の配列と実質的に同様なヌクレオチド配列を有
する、１つ以上の領域を有する。

【００５４】 「〜に相補的な」という用語は、アンチセンスオリゴヌクレオチド配列が標的
配列、すなわちＩＧＦ−ＩＩ遺伝子（またはｍＲＮＡ）に結合し得ることを意味
する。好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチドは生理的な条件下で、例え
ばワトソン−クリック型塩基対（オリゴヌクレオチドと１本鎖核酸との間の相互
作用）によって、またはフーグスティーン型塩基対（オリゴヌクレオチドおよび
２本鎖核酸の間の相互作用）によって、またはオリゴヌクレオチドがＲＮＡに結
合して擬節（ｐｓｅｕｄｏｋｎｏｔ）の形成を生じる場合を含む任意の手段によ
って、核酸配列に結合する。生理的条件下でのワトソン−クリックまたはフーグ
スティーン型塩基対による結合は、実施上の問題として、核酸配列の機能の妨害
を観察することによって測定される。

【００５５】 好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチド配列は、標的配列と少なくとも
約７５％同一であり、好ましくは少なくとも約９０％同一、および最も好ましく
は標的配列と少なくとも約９５％同一であり、いくつかの塩基でギャップまたは
ミスマッチを可能にする。同一性は、例えばＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉ
ｓｃｏｎｓｉｎ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）ソフトウェアのＢＬ
ＡＳＴＮプログラムを用いることによって決定され得る。本明細書中で記載した
ＯＬＩＧＯ Ｐｒｉｍｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ｖｅｒｓｉ
ｏｎ５．０プログラムによって決定されるように、好ましくは、アンチセンスオ
リゴヌクレオチド配列は、少なくとも４５℃、より好ましくは少なくとも約５０
℃、および最も好ましくは少なくとも約５５℃の溶解温度で、ＩＧＦ−ＩＩ ｍ
ＲＮＡとハイブリダイズする。

【００５６】 「増殖の阻害」という用語は、少なくとも１つの腫瘍細胞型の、好ましくは少
なくとも１０％、より好ましくは少なくとも５０％、および最も好ましくは少な
くとも７５％の、増殖の抑制または阻害を意味する。腫瘍の増殖の阻害は、ヌー
ドマウスにおける腫瘍の大きさ、またはインビトロにおいて腫瘍細胞がコロニー
を形成できないことを測定することによって決定され得る。

【００５７】 「転移の阻害」という用語は、発達する転移腫瘍の数を、好ましくは少なくと
も１０％、およびより好ましくは少なくとも５０％抑制または阻害することを意
味する。これは実施例に示す方法および当該分野で公知の他の方法によって決定
され得る。

【００５８】 「ＩＧＦ−ＩＩの発現の阻害」という用語は、オリゴヌクレオチドを細胞に投
与した場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドがＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡレベル
または細胞によって産生されるＩＧＦ−ＩＩタンパク質レベルを抑制することを
意味する。

【００５９】 「哺乳動物」または「哺乳動物の」という用語は、ヒト、ヒツジ、ウシ、ウマ
、ブタ、イヌ、ネコ、およびマウス等を含む全ての哺乳動物を意味し、好ましく
はヒトを意味する。

【００６０】 「腫瘍を有すると疑われる哺乳動物」は、哺乳動物が増殖性障害または腫瘍を
有し得ること、または増殖性障害または腫瘍と診断されたこと、または以前に増
殖性疾障害または腫瘍と診断され、腫瘍は外科的に除去され、そして哺乳動物が
残留するいくらかの腫瘍細胞を有すると疑われることを意味する。

【００６１】 （アンチセンスオリゴヌクレオチドの調製） 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、従来のおよび周知の技術によっ
て調製され得る。例えば、オリゴヌクレオチドは固相合成を用いて、および特に
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｃａｎａｄａ，Ｉｎｃ．、Ｍｉｓｓｉ
ｓｓａｕｇａ、Ｃａｎａｄａから入手可能な装置のような、市販の装置を用いて
調製され得る。オリゴヌクレオチドはまた、当該分野で公知の方法によって、天
然に存在するＩＧＦ−ＩＩ遺伝子を酵素的に消化することによって調製され得る
。

【００６２】 これらのオリゴヌクレオチドは、ホスホロアミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍ
ｉｄａｔｅ）またはＨ−ホスホエート化学のような、当該分野で認められた方法
によって調製され得る。それはＵｈｌｍａｎｎら（２１）およびＡｇｒａｗａｌ
ら（２２）によって記載されたように、手動で、または自動化合成機によって行
われ得る。

【００６３】 （アンチセンスオリゴヌクレオチドの単離および精製） 本明細書中で記載したアンチセンスオリゴヌクレオチドの単離および精製は、
所望であれば、例えば濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層ク
ロマトグラフィー、厚層（ｔｈｉｃｋ−ｌａｙｅｒ）クロマトグラフィー、分離
低圧液体クロマトグラフィーもしくは分離高圧液体クロマトグラフィー、または
これらの手順を組み合せたもののような、任意の適切な分離または精製によって
実施され得る。しかし、もちろん他の同等な分離または単離手順も使用され得る
。

【００６４】 アンチセンスオリゴヌクレオチド配列を含む発現ベクターは、オリゴヌクレオ
チドの配列を考慮して、および当該分野で公知の手順を用いて構築され得る。

【００６５】 ベクターは、当業者によって、アンチセンスオリゴヌクレオチド配列の所望の
転写を達成するのに必要な全ての発現エレメントを含むように、構築され得る。
従って、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドをコードする配列に作動可
能に連結された転写調節配列を含むベクターを提供する。適切な転写および翻訳
エレメントは、細菌、真菌、ウイルス、哺乳動物または昆虫遺伝子を含む種々の
供給源に由来し得る。適切なエレメントの選択は、選択した宿主細胞に依存する
。

【００６６】 リポーター遺伝子がベクターに含まれ得る。適切なリポーター遺伝子は、βガ
ラクトシダーゼ（例えばｌａｃＺ）、クロラムフェニコール、アセチルトランス
フェラーゼ、ホタルルシフェラーゼ、または免疫グロブリンもしくはその一部を
含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドの転写を、リポーター遺伝子の発現をモ
ニターすることによってモニターし得る。

【００６７】 当該分野で公知の、種々の任意の方法によってベクターを細胞または組織に導
入し得る。そのような方法はＳａｍｂｒｏｏｋら²⁴；Ａｕｓｕｂｅｌら²⁵；Ｃｈ
ａｎｇら³⁶；Ｖｅｇａら³⁷およびＶｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕ
ｓｅｓ³⁸において一般的に記載されているのを見出すことができ、そして例えば
安定または一過性トランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレー
ション、および組換えウイルスベクターを用いた感染を含む。

【００６８】 感染による核酸の導入は、いくつかの利点を提供する。組織の型に対するより
高い有効性および特異性を得ることができる。ウイルスは代表的には特定の細胞
の型に感染し、そして増殖する。従って、ウイルスの特異性を、インビボまたは
組織もしくは細胞の混合培養物において、ベクターを特定の細胞の型に標的化す
るのに使用し得る。ウイルスベクターを特異的なレセプターまたはリガンドで修
飾し、レセプターが媒介する事象によって標的特異性を変化させ得る。

【００６９】 本発明のオリゴヌクレオチドがｍＲＮＡを切断するリボザイムであり得ること
が意図される。リボザイムは、好ましくは本発明のオリゴヌクレオチドの配列と
相同な配列、およびｍＲＮＡの切断に必要な触媒中心を有する。例えば、ＩＧＦ
−ＩＩ ｍＲＮＡを破壊する、相同なリボザイムの配列を選択し得る。本発明で
利用されるリボザイムの型は、当該分野で公知の型から選択され得る。グループ
Ｉイントロン、ＲＮａｓｅＰ、肝炎デルタウイルスリボザイム、ハンマーヘッド
リボザイムおよびもともとはｔｏｂａｃｃｏ ｒｉｎｇｓｐｏｔウイルスサテラ
イトＲＮＡ（ｓＴＲＳＶ）のマイナス鎖に由来するヘアピンリボザイムを含む、
いくつかのリボザイム構造ファミリーが同定された（Ｓｕｌｌｉｖａｎ １９９
４、米国特許第５，２２５，３４７³⁹）。ハンマーヘッドおよびヘアピンリボザ
イムモチーフが、遺伝子治療におけるｍＲＮＡのトランス切断のために最も一般
に適応される（Ｓｕｌｌｉｖａｎ １９９４）。好ましくはヘアピンリボザイム
が本発明において使用される。一般的に、リボザイムは３０から１００ヌクレオ
チドの長さである。

【００７０】 本発明のオリゴヌクレオチドは、不溶化し得る。例えば、オリゴヌクレオチド
は適切なキャリアに結合し得る。適切なキャリアの例は、アガロース、セルロー
ス、デキストラン、セファデックス、セファロース、カルボキシメチルセルロー
ス、ポリスチレン、濾紙、イオン交換樹脂、プラスチックフィルム、プラスチッ
クチューブ、ガラスビーズ、ポリアミン−メチルビニル−エーテル−マレイン酸
コポリマー、アミノ酸コポリマー、エチレン−マレイン酸コポリマー、ナイロン
、絹等である。キャリアは例えば、チューブ、テストプレート、ビーズディスク
、球等の形状であり得る。

【００７１】 不溶化オリゴヌクレオチドを、物質を適切な不溶性キャリアと、公知の化学的
または物理的方法、例えば臭化シアンカップリングによって反応させることによ
って調製し得る。

【００７２】 （薬学的処方物） 医薬品として採用される場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドは通常、薬学
的組成物の形態で投与される。これらの化合物は、経口、直腸、経皮、皮下、静
脈内、筋肉内、および鼻腔内を含む種々の経路によって投与され得る。これらの
化合物は注射用および経口用組成物のどちらとしても有効である。そのような組
成物は、薬学的な分野で周知の方法で調製され、そして少なくとも１つの活性化
合物を含む。薬学的組成物は、例えば静脈内投与される。薬学的組成物は処置さ
れる腫瘍に直接投与され得ることが意図される。

【００７３】 本発明はまた、活性成分として薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と関
連した１つ以上のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む薬学的組成物を含む。
本発明の組成物を作成する場合、活性成分を通常、賦形剤と混合し、賦形剤によ
って希釈し、またはカプセル、サシェ、紙または他の容器の形態であり得るその
ようなキャリアに封入する。賦形剤が希釈剤として作用する場合、それは固体、
半固体、または液体の物質であり得、活性成分のビヒクル、キャリア、または媒
体として作用する。従って、組成物は錠剤、丸薬、粉末、トローチ剤、サシェ、
カシェ剤、エリキシル、懸濁液、エマルション、溶液、シロップ、エアロゾル（
固体としてまたは液体の媒体中で）、例えば重量で１０％までの活性化合物を含
む軟膏、ソフトおよびハードゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射溶液、および滅
菌包装粉末の形態であり得る。

【００７４】 処方を調製する場合、他の成分と組み合せる前に、適切な粒子の大きさを提供
するために、活性化合物を製粉する必要があり得る。活性化合物が実質的に不溶
性の場合、通常２００メッシュより小さい粒子の大きさに製粉される。活性化合
物が実質的に水溶性の場合、粒子の大きさは通常、製粉によって、処方中で実質
的に均一な分布を提供するために、例えば約４０メッシュに調節される。

【００７５】 適切な賦形剤のいくつかの例は、ラクトース、デキストロース、スクロース、
ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、ア
ルギン酸塩、トラガカントゴム、ゼラチン、珪酸カルシウム、微結晶性セルロー
ス、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセル
ロースを含む。処方物はさらに次のものを含み得る。すなわち、タルク、ステア
リン酸マグネシウム、および鉱油のような潤滑剤；湿潤剤；乳化および懸濁剤；
メチル−およびプロピルヒドロキシ−安息香酸塩のような保存剤；甘味料；およ
び香料。本発明の組成物は、当該分野で公知の手順を採用することによって、患
者に投与した後、活性成分の迅速な、持続する、または遅延する放出を提供する
ために処方され得る。

【００７６】 組成物は、好ましくは単位投薬量形態で処方され、それぞれの投薬量は約１％
から約９５％まで、より通常には約５％から約９０％までの活性成分を含む。「
単位投薬量形態」という用語は、ヒト被験体および他の哺乳動物における単位投
薬量として適切な物理的に別々の単位をいい、それぞれの単位は所望の治療効果
を産生するために計算した、前もって決定した量の活性物質を、適切な薬剤学的
賦形剤と共に含む。

【００７７】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは広い投薬量の範囲で有効であり、および一
般的に薬剤学的に有効な量で投与される。有効な量は、投与した時に症状を軽減
する量である。好ましくは、有効な量は腫瘍細胞の増殖を阻害できる量である。
好ましくは、有効な量は約０．１ｍｇ／ｋｇ体重から約２０ｍｇ／ｋｇ体重であ
る。しかし、実際に投与されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの量は、処置さ
れる状態、選択した投与経路、投与する実際の化合物、個々の患者の年齢、体重
、および反応、患者の症状の重症度等を含む関連する状況を考慮して、医師によ
って決定されることが理解される。治療の過程は数日から数ヶ月、または疾患の
縮小が達成されるまで続き得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、他の公知
の治療と組み合せて投与され得る。１つ以上の他の治療と共に投与される場合、
オリゴヌクレオチドは他の処置と同時、または連続的のいずれかで投与され得る
。連続的に投与される場合、他の治療と組み合せたオリゴヌクレオチドの投与の
適切な順序を、担当の医師が決定する。

【００７８】 錠剤のような固体の組成物を調製するために、主な活性成分／アンチセンスオ
リゴヌクレオチドを薬学的賦形剤と混合して、本発明の化合物の均一な混合物を
含む、固体の予備処方組成物を形成する。これらの予備処方組成物が均一である
という場合、それは活性成分が組成物中で均一に分散し、その結果、組成物を容
易に、錠剤、丸薬、およびカプセルのような同等に有効な単位投薬量形態にさら
に分け得ることを意味する。

【００７９】 本発明の錠剤または丸薬は、延長した作用の利点を与える投薬量形態を提供す
るために、コーティングされるか、またはそうでなければ調合され得る。例えば
、錠剤または丸薬は、内部投薬成分および外部投薬成分を含み得、後者は前者を
覆う被膜の形態である。２つの成分は、胃における分解に抵抗し、そして内部成
分をそのまま十二指腸に通過させるために、または放出を遅らせるために働く腸
溶性の膜で分離され得る。種々の物質をそのような腸溶性の膜またはコーティン
グに使用し得、そのような物質は、多くのポリマー性酸（ｐｌｙｍｅｒｉｃ ａ
ｃｉｄ）、およびセラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースのような
物質とポリマー性酸の混合物を含む。

【００８０】 本発明の新規組成物が経口または注射によって投与するために組み込まれ得る
液体形態は、水溶液、適切に味付けしたシロップ、水性または油性懸濁液、およ
びコーン油、綿実油、ごま油、ココナッツオイル、またはピーナッツオイルのよ
うな食用油で味付けしたエマルジョン、およびエリキシルおよび同様の薬学的ビ
ヒクルを含む。

【００８１】 吸入（ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ）または吹送（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｉｏｎ）のた
めの組成物は、薬学的に受容可能な水性または有機溶媒の溶液または懸濁液、ま
たはそれらの混合物、および粉末を含む。液体組成物または固体組成物は、本明
細書中で記載したような、適切な薬学的に受容可能な賦形剤を含み得る。好まし
くは、組成物は、局所または全身性の効果のために、経口または鼻呼吸経路で投
与される。好ましくは薬学的に受容可能な溶媒中の組成物を、不活性ガスの使用
によって噴霧し得る。噴霧された溶液は、噴霧デバイスから直接吸入され得るか
、または噴霧デバイスは、フェイスマスクテント（ｆａｃｅ ｍａｓｋ ｔｅｎ
ｔ）または間欠性の加圧呼吸器に連結され得る。溶液組成物、懸濁液組成物、ま
たは粉末組成物を、好ましくは経口または鼻腔内に、処方物を適切な方法で送達
するデバイスから投与し得る。

【００８２】 本発明の薬学的組成物は、リポソームの形態であり得、ここでオリゴヌクレオ
チドは、他の薬学的に受容可能なキャリアに加えて、水溶液中でミセル、不溶性
の単層膜、液晶または層状の層として凝集した形態で存在する脂質のような両親
媒性の試薬と組み合せられる。リポソーム処方物に適切な脂質は、モノグリセリ
ド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸
などを含むがこれらに限定されない。１つの特に有用な脂質キャリアは、リポフ
ェクチンである。そのようなリポソーム処方物の調製は、当該分野における技術
、例えば国際特許第ＷＯ９７／２１８０８号（２８）の範囲内である。薬学的組
成物はさらに、オリゴヌクレオチドの細胞中への送達を増強するシクロデキスト
リンなど、または徐放性のポリマーのような化合物を含み得る。

【００８３】 本発明の方法において用いられる別の好ましい処方物は、経皮送達デバイス（
「パッチ」）を用いる。そのような経皮パッチは、制御された量において、本発
明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続的または非連続的な注入を提供する
ために使用され得る。薬学的薬剤の送達のための、経皮パッチの構築および使用
は、当該分野で周知である。例えば、米国特許第５，０２３，２５２号⁴⁰（本明
細書中で参考として援用される）を参照のこと。そのようなパッチは、薬学的薬
剤の連続的な、拍動性の、または要求による送達のために構築され得る。

【００８４】 別の好ましい送達方法は、皮膚の層を横切る、裸のアンチセンスオリゴヌクレ
オチドの「ショットガン」送達を含む。「裸」のアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドの送達は、当該分野で周知である。例えば、Ｆｅｌｇｎｅｒら、米国特許第５
，５８０，８５９号⁴¹を参照のこと。アンチセンスオリゴヌクレオチドが、アン
チセンスオリゴヌクレオチドの「ショットガン」送達の前に脂質小胞に封入され
得ることが意図される。

【００８５】 以下の処方例は、本発明の代表的な薬学的組成物を説明する。

【００８６】 （処方例１） 以下の成分を含むハードゼラチンカプセルを調製する。 成分 量（ｍｇ／カプセル） 活性成分 ３０．０ デンプン ３０５．０ ステアリン酸マグネシウム ５．０ 上記の成分を混合して、そして３４０ｍｇの量をハードゼラチンカプセルに充
填する。

【００８７】 （処方例２） 錠剤処方物を下記の成分を用いて調製する。 成分 量（ｍｇ／錠） 活性成分 ２５．０ セルロース、微結晶性 ２００．０ コロイド状二酸化珪素 １０．０ ステアリン酸 ５．０ 化合物を混和および圧縮して、それぞれ２４０ｍｇの重さの錠剤を形成する。

【００８８】 （処方例３） 以下の成分を含む乾燥粉末吸入処方物を調製する。 成分 重量％ 活性成分 ５ ラクトース ９５ 活性成分をラクトースと混合し、そしてこの混合物を乾燥粉末吸入装置に加え
る。

【００８９】 （処方例４） それぞれ３０ｍｇの活性成分を含む錠剤を以下のように調製する。 成分 量（ｍｇ／錠） 活性成分 ３０．０ｍｇ デンプン ４５．０ｍｇ 微結晶性セルロース ３５．０ｍｇ ポリビニルピロリドン（滅菌水中の１０％溶液として） ４．０ｍｇ カルボキシメチルデンプンナトリウム ４．５ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ０．５ｍｇ タルク １．０ｍｇ 合計 １２０ｍｇ 活性成分、デンプンおよびセルロースを２０番メッシュのＵ．Ｓ．ふるい（ｓ
ｉｅｖｅ）に通し、そして完全に混合する。ポリビニルピロリドンの溶液を得ら
れた粉末と混合し、それを次いで１６番メッシュＵ．Ｓ．ふるい（ｓｉｅｖｅ）
に通す。そのように産生した顆粒を５０℃から６０℃で乾燥し、そして１６メッ
シュＵ．Ｓ．ふるいに通す。次いで、予め３０番Ｕ．Ｓ．ふるいに通したカルボ
キシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、およびタルクを顆
粒に加え、混合した後にそれを打錠機で圧縮して、それぞれ１２０ｍｇの重量の
錠剤を産生する。

【００９０】 （処方例５） それぞれ４０ｍｇの薬剤を含むカプセルを以下のように作製する。 成分 量（ｍｇ／カプセル） 活性成分 ４０．０ｍｇ デンプン １０９．０ｍｇ ステアリン酸マグネシウム １．０ｍｇ 合計 １５０．０ｍｇ 活性成分、デンプン、およびステアリン酸マグネシウムを混和し、２０番メッ
シュＵ．Ｓ．ふるいに通し、そして１５０ｍｇの量をハードゼラチンカプセルに
充填する。

【００９１】 （処方例６） それぞれ２５ｍｇの活性成分を含む坐剤を、以下のように作製する。 成分 量 活性成分 ２５ｍｇ 飽和脂肪酸グリセリド ２，０００ｍｇまで 活性成分を６０番メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通し、そして必要最低限の熱を用
いて予め融解した飽和脂肪酸グリセリドに懸濁する。次いで混合物を公称（ｎｏ
ｍｉｎａｌ）２．０ｇの容量の坐剤鋳型に注ぎ、そして冷却する。

【００９２】 （処方例７） ５．０ｍＬの投与量あたりそれぞれ５０ｍｇの薬剤を含む懸濁液を以下のよう
に作製する。 成分 量 活性成分 ５０．０ｍｇ キサンタンガム ４．０ｍｇ カルボキシメチルセルロースナトリウム（１１％） 微結晶性セルロース（８９％） ５０．０ｍｇ スクロース １．７５ｇ 安息香酸ナトリウム １０．０ｍｇ 香料および色素 適量 精製水 ５．０ｍＬまで 活性成分、スクロースおよびキサンタンガムを混和し、１０番メッシュＵ．Ｓ
．ふるいに通し、次いで、水中で予め作製した微結晶性セルロースおよびカルボ
キシメチルセルロースナトリウムの溶液と混合する。安息香酸ナトリウム、香料
、および色素をいくらかの水で希釈し、そして攪拌しながら加える。次いで十分
な水を加えて必要な容量を産生する。

【００９３】 （処方例８）

【００９４】

【表３】 活性成分、デンプン、およびステアリン酸マグネシウムを混和し、２０番メッ
シュＵ．Ｓ．ふるい（ｓｉｅｖｅ）に通し、そして４２５．０ｍｇの量をハード
ゼラチンカプセルに充填する。

【００９５】 （処方例９） 処方を以下のように調製し得る。

【００９６】

【表４】 （処方例１０） 局所用の処方を以下のように調製し得る。

【００９７】

【表５】 白色ソフトパラフィンを溶解するまで加熱する。流動パラフィンおよび乳化ワ
ックスを組み入れ、そして溶解するまで攪拌する。活性成分を加え、そして分散
するまで攪拌を続ける。次いで混合物を固くなるまで冷却する。

【００９８】 本発明で使用するのに適切な他の処方物を、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２３）に見ることができる。

【００９９】 アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドを含
む薬学的組成物を、適切な容器に包装した必要な材料を提供する、便利なキット
に包装し得る。

【０１００】 治療処方物の形態である本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、腫瘍の
増殖に関連する疾患、ならびに障害および状態を治療するのに有用である。その
ような方法では、ＩＧＦ−ＩＩの胎児転写物の発現を阻害するのに有効な、治療
的な量のオリゴヌクレオチドが、細胞に投与される。この細胞は、細胞培養物、
組織培養の一部であり得、またはヒトのような哺乳動物の体全体の一部であり得
る。

【０１０１】 本発明のオリゴヌクレオチドおよびリボザイムは、腫瘍細胞の増殖を調整する
。従って、腫瘍または腫瘍細胞を、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドと
接触させる工程を含む、哺乳動物において腫瘍細胞の増殖を妨害または阻害する
方法が提供される。

【０１０２】 「接触」という用語は、オリゴヌクレオチド、リボザイム等を細胞懸濁液また
は組織試料に加えること、またはオリゴヌクレオチド等を直接または間接に、動
物内の細胞または組織に投与することを指す。

【０１０３】 本方法を用いて、白血病、リンパ腫（ホジキンおよび非ホジキン）、肉腫、黒
色腫、腺腫、固形組織のガン腫、低酸素腫瘍、口、咽喉、喉頭および肺の扁平上
皮細胞ガン、子宮頸ガンおよび膀胱ガンのような尿生殖器ガン、造血性ガン、結
腸ガン、乳ガン、膵臓ガン、腎臓ガン、脳のガン、皮膚ガン、肝臓ガン、頭部お
よび首部のガン、および神経系のガン、ならびに乳頭腫のような良性の病変のよ
うな、種々の形態のガンまたは腫瘍を含む、増殖性障害を治療し得る。乾癬のよ
うな他の増殖性障害および関節硬化症を含む増殖性障害も含まれる。

【０１０４】 本発明のオリゴヌクレオチドはまた、薬剤耐性腫瘍を処置するために使用され
得る。薬剤耐性腫瘍の例は、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、メトト
レキサート、またはヒドロキシウレアのような化学療法剤に耐性の腫瘍、ならび
にコルヒチン、ビンブラスチン、およびドキソルビシンのような複数の抗癌剤に
対する耐性を与えることが知られているＰ−糖タンパク質を高レベルに発現して
いる腫瘍；またはＤｒｅｅｌｅｙら（２８）によって記載されたような多剤耐性
タンパク質を発現している腫瘍である。従って、本発明のオリゴヌクレオチドが
公知の抗癌化合物または化学療法剤と組み合せて、またはそれに加えて投与され
得ることが意図される。化学療法剤は、腫瘍の増殖を阻害し得る化合物である。
そのような薬剤は、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、メトトレキサー
トおよびヒドロキシウレアを含むがこれらに限定されない。化学療法剤の量は、
有効な量、すなわち腫瘍の増殖を阻害するのに十分な量、または有効な量より少
ない量のいずれかであり得ることが意図される。

【０１０５】 本発明のオリゴヌクレオチドは、Ｃ８１６１黒色腫細胞のような転移性の腫瘍
の増殖を減少させることが見い出された。本発明の実施態様では、哺乳動物胎児
ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡの５’非翻訳領域に相補的な配列を含む、約３から約１
００ヌクレオチドの、有効な量のオリゴヌクレオチドを投与する工程を含む、哺
乳動物において転移性腫瘍の増殖を減少させる方法が提供される。その配列は、
表１に示したオリゴヌクレオチドの群から選択され得る。別の実施態様では、表
２に示した配列番号１７〜３１の群から選択される配列を含む、約２０から約１
００ヌクレオチドの、有効な量のオリゴヌクレオチドを投与する工程を含む、哺
乳動物において転移性腫瘍の増殖を減少させる方法が提供される。

【０１０６】 オリゴヌクレオチドは、ウイルス性ベクターまたは非ウイルス性ベクターを用
いて送達され得る。配列は、本発明のオリゴヌクレオチドが細胞内で発現される
ように、カセットまたは構築物に組み込まれ得る。好ましくは、構築物は、オリ
ゴヌクレオチドが細胞内で転写されることを可能にする、適切な転写制御領域を
含む。

【０１０７】 従って、本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドをコードする配列に作動可能
に連結した転写制御配列を含むベクターを提供する。本発明はさらに、これらの
ベクターで形質転換される、適切な真核生物細胞および原核生物細胞から選択さ
れた宿主細胞を提供する。

【０１０８】 適切なベクターは公知であり、そして好ましくは配列の望ましい転写を達成す
るのに必要な全ての発現エレメントを含む。ファージミドは、プラスミドまたは
バクテリオファージベクターのいずれかとして使用され得るので、そのような有
用なベクターの特定の例である。ベクターの例は、バクテリオファージ、バキュ
ロウイルス、レトロウイルス、ＤＮＡウイルスのようなウイルス、リポソームお
よび他の組換えベクターを含む。ベクターはまた、原核生物宿主系または真核生
物宿主系のいずれかで使用するためのエレメントを含み得る。当業者は、どの宿
主系が特定のベクターと適合性であるかをわかる。

【０１０９】 ベクターは、安定なまたは一過性のトランスフェクション、リポフェクション
、エレクトロポレーション、および組換えウイルスベクターでの感染によって細
胞に導入され得る。

【０１１０】 その安全性を保証するためおよび／またはその治療的効力を増強するために、
さらなる特徴をベクターに加え得る。そのような特徴は、例えば、組換えウイル
スに感染した細胞をネガティブ選択するのに使用され得るマーカーを含む。その
ようなネガティブ選択マーカーの例は、抗ウイルス剤ガンシクロビルに対する感
受性を与えるＴＫ遺伝子である。特定の細胞の型へ発現を制限する特徴も含まれ
得る。そのような特徴は、例えば、望ましい細胞の型に特異的なプロモーターお
よび調節エレメントを含む。

【０１１１】 レトロウイルスベクターは、側方感染および標的化特異性のような利点を提供
するので、望ましい核酸のインビボ導入に有用なベクターの別の例である。側方
感染は、１つの感染細胞が、隣接細胞に感染する多くの子孫ビリオンを産生する
過程である。結果として大きな領域が迅速に感染される。

【０１１２】 本発明の方法で使用されるベクターは、標的とされる望ましい細胞の型に依存
して選択され得る。例えば、乳ガンを治療する場合、上皮細胞に特異的なベクタ
ーを使用し得る。同様に、造血系の細胞を治療する場合、血球に特異的なウイル
スベクターが好ましい。

【０１１３】 （有用性） 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、種々の目的に使用され得る。本
発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、哺乳動物細胞におけるＩＧＦ−ＩＩ
遺伝子の発現を阻害するのに使用され得る。それはその細胞の増殖阻害を引き起
こす。このオリゴヌクレオチドは、哺乳動物細胞においてＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮ
Ａの存在を検出するためのハイブリダイゼーションプローブとして使用され得る
。そのように使用される場合、このオリゴヌクレオチドは、適切な検出基（例え
ば、放射性同位元素、リガンド、特異的な結合対の別のメンバー、例えば、ビオ
チン）で標識され得る。最後に、このオリゴヌクレオチドは、分子量マーカーと
して使用され得る。

【０１１４】 本発明およびその利点をさらに説明するために、以下の特定の実施例が与えら
れるが、いかなる方法でも本特許請求の範囲を制限することを意味しない。

【０１１５】 （実施例） 下記の実施例で、全ての温度は摂氏であり（他に述べない限り）、および全て
の％は重量％である（これもまた、他に述べない限り）。

【０１１６】 下記の実施例で、以下の省略は以下の意味を有する。省略が定義されない場合
、それは一般に受け入れられた意味を有する。 ＡＳ＝アンチセンス ｃＤＮＡ＝相補的デオキシリボ核酸 ＯＤＮ＝オリゴデオキシヌクレオチド μＭ＝マイクロモル濃度 ｍＭ＝ミリモル濃度 Ｍ＝モル濃度 ｍｌ＝ミリリットル μｌ＝マイクロリットル ｍｇ＝ミリグラム μｇ＝マイクログラム ＰＡＧＥ＝ポリアクリルアミドゲル電気泳動 ｒｐｍ＝１分あたりの回転数 ΔＧ＝自由エネルギー、オリゴヌクレオチド二重鎖安定性の測定値 ｋｃａｌ＝キロカロリー ＦＢＳ＝ウシ胎児血清 ＤＴＴ＝ジチオトレイトール ＳＤＳ＝ドデシル硫酸ナトリウム ＰＢＳ＝リン酸緩衝化生理食塩水 ＰＭＳＦ＝フェニルメチルスルホニルフルオリド ＧＤＰＤＨ＝グリセルアルデヒド三リン酸デヒドロゲナーゼ ＩｇＧ＝免疫グロブリンＧ ｋＤａ＝キロダルトン ＰＣＲ＝ポリメラーゼ連鎖反応 Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ＝トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸 ＴＲＩｚｏｌ＝全ＲＮＡ単離試薬 ＥＣＬ＝ウェスタンブロッティング検出試薬 ＩＧＦ−Ｉ＝インスリン様増殖因子Ｉ ＩＧＦ−ＩＩ＝インスリン様増殖因子ＩＩ ＵＴＲ＝非翻訳領域 （分子生物学における一般的な方法） 当該分野で公知であり、具体的に記載されていない標準的な分子生物学技術は
、一般的にＳａｍｂｒｏｏｋら²⁴、Ａｕｓｕｂｅｌ²⁵、およびＰｅｒｂａｌ²⁶に
従った。

【０１１７】 （オリゴヌクレオチド） アンチセンスオリゴヌクレオチドは、その配列が、二重鎖形成、ヘアピン形成
、およびホモオリゴマー／配列反復を示す可能性は最も少ないが、ＩＧＦ−ＩＩ
ｍＲＮＡ配列に結合する高い可能性を有するように、ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡ
に相補的な配列から選択した。それに加えて、ヒトおよびマウスにおいて他の頻
繁に存在する配列、または反復配列に対する誤ったプライミングを排除した。こ
れらの特質をコンピューターモデリングプログラムＯＬＩＧＯ（登録商標） Ｐ
ｒｉｍｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０（Ｉ
ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． Ｐｌｙｍｏｕ
ｔｈ ＭＮ）を用いて決定した。この分析に基づいて、ホスホロチオエートアン
チセンスオリゴヌクレオチドを設計し、そして次いで当該分野で周知の方法によ
って作製した。

【０１１８】 （細胞株） 胎児性横紋筋肉腫（ＲＤ）、神経芽腫（ＳＫ−Ｎ−ＡＳ）、ウィルムス腫瘍（
Ｇ４０１）、黒色腫（Ｃ８１６１）、ヒト前立腺ガン（ＰＣ−３）、転移性膵臓
腺ガン（ＡｓＰＣ−１）を含む５つの異なるヒトガン細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａ
ｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から得た。
細胞株を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充したα−ＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃ
ｏ ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）中で維持した。

【０１１９】 （実施例１．ＩＧＦ−ＩＩに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドによる
、ガン細胞株の増殖阻害） 異なるホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドによって処理した
ガン細胞株のコロニー形成能を、前に記載された（Ｃｈｏｙら¹⁸）方法を用いて
評価した。具体的には、腫瘍細胞懸濁液のアリコートを６０ｍｍの組織培養皿に
約１×１０⁴の密度で播種し、そして１０％ＦＢＳを補充したα−ＭＥＭ培地中
で、３７℃で一晩インキュベートした。細胞を５ｍｌのＰＢＳで１回洗浄し、そ
して陽イオン性脂質（リポフェクチン試薬、最終濃度５μｇ／ｍｌ、Ｇｉｂｃｏ
−ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）の存在下で４時間、０．２μＭの
示したアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理した。そのアンチセンスオリゴヌ
クレオチドを、細胞をＰＢＳで１回洗浄することによって除去し、そしてこの細
胞を増殖培地（１０％ＦＢＳを補充したα−ＭＥＭ培地）中で、７から１０日間
、３７℃で培養した。コロニーをメチレンブルーで染色し、そして記載された（
Ｃｈｏｙら¹⁸およびＨｕａｎｇおよびＷｒｉｇｈｔ²⁰）ように直接計数すること
によってスコアした。パーセント阻害を、アンチセンスオリゴヌクレオチドの非
存在下で増殖した培養物に存在するコロニーの数と比較することによって計算し
た。全ての実験を４連で行った。

【０１２０】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒト腫瘍細胞株のコロニー形成能に対し
て阻害効果を発揮した。それぞれのアンチセンスオリゴヌクレオチドのパーセン
ト阻害を、横紋筋肉腫（ＲＤ）に関しては図２Ａに、ヒト前立腺ガン細胞株（Ｐ
Ｃ−３）に関しては図２Ｂに、ヒト膵臓ガン細胞株（ＡｓＰＣ−１）に関しては
図２Ｃに、およびヒト神経芽腫細胞株（ＳＫ−Ｎ−ＡＳ）に関しては図２Ｄに示
す。

【０１２１】 （実施例２．ＩＧＦ−ＩＩに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理
した後、減少したｍＲＮＡレベル） ヒト神経芽腫細胞（ＳＫ−Ｎ−ＡＳ）または横紋筋肉腫細胞（ＲＤ）をサブコ
ンフルエント（ｓｕｂｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ）（７０−８０％）になるまで増殖
させ、そして陽イオン性脂質（リポフェクチン試薬、最終濃度５μｇ／ｍｌ、Ｇ
ｉｂｃｏ−ＢＲＬ）およびＯｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）存在下で、
０．２μＭのＩＧＦ−ＩＩに相補的なホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌ
クレオチドで４時間処理した。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、そして１０％ＦＢＳ
を含むα−ＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）中で１６時間インキュベートした
。全ＲＮＡをＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）中で調製し、そしてノー
ザンブロット分析を、ＨｕｒｔａおよびＷｒｉｇｈｔ（２７）に記載のように、
いくらか改変して行った。ブロットを、順方向プライマー（５’−ＴＡＣ ＣＧ
Ｃ ＣＣＣ ＡＧＴ ＧＡＧ ＡＣＣ ＣＴ−３’）［配列番号３２］、逆方向
プライマー（５’−ＴＧＡ ＣＧＴ ＴＴＧ ＧＣＣ ＴＣＣ ＣＴＧ ＡＡ−
３’）［配列番号３３］、およびヒト結腸直腸腺ガン５’−ストレッチプラスｃ
ＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ）を鋳型
として用いて合成した、³²Ｐ標識した３８９ｂｐのＰＣＲ断片と、ハイブリダイ
ズさせた。ヒトＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡは、約６ｋｂのヌクレオチド転写物とし
て発現した（Ｗｅｒｎｅｒら⁶）。同等のＲＮＡのローディングを、ハイブリダ
イゼーションの前に、ブロットのメチレンブルー染色によって実施した。

【０１２２】 図３は、アンチセンスオリゴヌクレオチドがＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡレベルを
少なくともコントロールレベルの５０％まで減少することを示す。

【０１２３】 （実施例３．ＩＧＦ−ＩＩに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理
した後、減少したＩＧＦ−ＩＩタンパク質レベル） ヒト神経芽腫細胞（ＳＫ−Ｎ−ＡＳ）または横紋筋肉腫細胞（ＲＤ）をサブコ
ンフルエント（７０−８０％）になるまで増殖させ、そして陽イオン性脂質（リ
ポフェクチン試薬、最終濃度５μｇ／ｍｌ、Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）およびＯｐｔ
ｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）の存在下で、０．２μＭのＩＧＦ−ＩＩに相
補的なホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドで４時間処理した。
細胞をＰＢＳで１回洗浄し、そして１０％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培地（Ｇｉｂ
ｃｏ−ＢＲＬ）中で２０時間インキュベートした。処理およびインキュベーショ
ンをもう１回繰り返し、全細胞タンパク質抽出物を２×試料ローディング緩衝液
（１００ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６．８、０．２ＭのＤＴＴ、４％のＳＤ
Ｓ、２０％のグリセロール、および０．０１５％のブロモフェノールブルー）中
で調製した。

【０１２４】 ウェスタンブロット分析を、前に記載された（Ｃｈｏｙら（１８）、Ｆａｎら
（１９））ように、いくらか改変して行った。ＩＧＦ−ＩＩの発現を、抗ＩＧＦ
−ＩＩ抗体（１−２μｇ／ｍｌ）（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ
Ｉｎｃ．、Ｆｌａｎｄｅｒｓ ＮＪ）で、続いて１：７，０００希釈の西洋ワ
サビペルオキシダーゼ結合抗ヤギＩｇＧ（ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ ＭＯ
）で検出した。約７．５ｋＤａのタンパク質を、ＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ａ
ｒｌｉｎｇｔｏｎ ｈｅｉｇｈｔｓ、ＩＬ）によって可視化した。

【０１２５】 図４は、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチド処理後の、ヒト神経芽腫細胞
におけるＩＧＦ−ＩＩタンパク質の減少を示す。

【０１２６】 図５は、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチド処理後の、ヒト横紋筋肉腫細
胞におけるＩＧＦ−ＩＩタンパク質の減少を示す。

【０１２７】 （実施例４．ＩＧＦ−ＩＩに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを用い
た静脈内処置による、マウスにおけるヒト腫瘍細胞増殖の阻害） ＣＤ−１無胸腺症ヌードマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ（Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃａｎａｄａ）から購入した。ＳＫ−Ｎ−Ａ
Ｓヒト神経芽腫細胞（代表的には１００μｌのＰＢＳ中で３×１０⁶細胞）を６
−７週齢のＣＤ−１無胸腺症雌ヌードマウスの右横腹に皮下注射した。各実験群
は５匹のマウスを含んだ。腫瘍の大きさが約１００ｍｍ³の体積に達した後（代
表的には腫瘍細胞注射後６日）、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、１
０ｍｇ／ｋｇで１日おきに尾静脈にボーラス注入によって投与した。コントロー
ル動物には同じ期間、生理食塩水のみを投与した。処置は代表的にはその後１４
日間続いた。

【０１２８】 図６Ａは、ＣＤ−１ヌードマウスにおけるヒト神経芽腫の増殖に対する、種々
のアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果を示す。抗腫瘍活性を、１４日間にわ
たる２日間隔の平均値をカリパーで測定する、腫瘍体積の阻害によって評価した
。図のそれぞれの点は、実験群あたり５匹の動物から計算した平均腫瘍体積を表
す。それぞれの処置群内の、時間に対するマウスの回帰曲線を比較するために、
共分散分析を使用した。傾きの同等性または傾きが同じ場合の切片の同等性の特
定の仮説を、この分析から得る。全ての分析はＳＡＳ（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ
Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ）ｖｅｒｓｉｏｎ６．１２を使用した。生理
食塩水のコントロールと比較した場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与
は、腫瘍の増殖を０．０００１以下のｐ値で阻害した。

【０１２９】 処置の終了時（通常最後の処置の２４時間後）、動物を屠殺し、そして腫瘍の
重量を測定した。図６Ｂは腫瘍の平均重量を示す。アンチセンスオリゴヌクレオ
チドは、腫瘍の増殖に対して有意な阻害効果を示した。分散の一方向分析を使用
して、処置群の平均値を比較した。群全体の効果が有意である場合、最小二乗平
均値を用いた先験的な複数の比較を使用して、有意に異なる処置群の組を見出し
た。腫瘍重量を比較した場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、生理食
塩水コントロールと比較した場合統計学的に有意な阻害を示した。

【０１３０】 （実施例５．ＩＧＦ−ＩＩに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを用い
た静脈内処置による、マウスにおけるヒト腫瘍細胞増殖の阻害） ＣＤ−１無胸腺症ヌードマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ（Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃａｎａｄａ）から購入した。Ｇ４０１ヒト
ウィルムス腫瘍細胞（代表的には１００μｌのＰＢＳ中で３×１０⁶細胞）を、
６−７週齢のＣＤ−１無胸腺症雌ヌードマウスの右横腹に皮下注射した。各実験
群は５匹のマウスを含んだ。腫瘍の大きさが約１００ｍｍ³の体積に達した後（
代表的には腫瘍細胞注射後８日）、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドを１
０ｍｇ／ｋｇで１日おきに尾静脈にボーラス注入によって投与した。コントロー
ル動物には同じ期間、生理食塩水のみを投与した。処置は代表的にはその後１８
日間続いた。

【０１３１】 図７Ａは、ＣＤ−１ヌードマウスにおけるヒトウィルムス腫瘍の増殖に対する
、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果を示す。１８日間にわたる２日
間隔の平均値をカリパーで測定する腫瘍体積の阻害によって、抗腫瘍活性を評価
した。図のそれぞれの点は、実験群あたり５匹の動物から計算した平均腫瘍体積
を表す。共分散分析を使用して、それぞれの処置群内のマウスの時間に対する回
帰曲線を比較した。傾きの同等性または傾きが同じ時切片の同等性の特定の仮説
を分析から得る。全ての分析はＳＡＳ（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓ
ｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ）ｖｅｒｓｉｏｎ６．１２を使用した。生理食塩水のコント
ロールと比較した場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与は、腫瘍の増殖
を０．０００２以下のｐ値で阻害した。

【０１３２】 処置の終了時（通常最後の処置の２４時間後）、動物を屠殺し、そして腫瘍の
重量を測定した。図７Ｂは腫瘍の平均重量を示す。アンチセンスオリゴヌクレオ
チドは、腫瘍の増殖に対して有意な阻害効果を示した。分散の一方向分析を使用
して、処置群の平均値を比較した。群全体の効果が有意である場合、最小二乗平
均値を用いた先験的な複数の比較を使用して、有意に異なる処置群の組を見出し
た。腫瘍重量を比較した場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、生理食
塩水コントロールと比較した場合統計学的に有意な阻害を示した。

【０１３３】 （実施例６．ＩＧＦ−ＩＩに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを用い
た静脈内処置による、マウス内のヒト腫瘍におけるＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡレベ
ルの減少） ＣＤ−１無胸腺症ヌードマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ（Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃａｎａｄａ）から購入した。ＳＫ−Ｎ−Ａ
Ｓヒト神経芽腫細胞（代表的には１００μｌのＰＢＳ中で３×１０⁶細胞）を６
−７週齢のＣＤ−１無胸腺症雌ヌードマウスの右横腹に皮下注射した。各実験群
は、５匹のマウスを含んだ。腫瘍の大きさが約１００ｍｍ³の体積に達した後（
代表的には腫瘍細胞注射後６日）、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドを１
０ｍｇ／ｋｇで１日おきに尾静脈にボーラス注入によって投与した。コントロー
ル動物には同じ期間、生理食塩水のみを投与した。７回注射した後マウスを屠殺
し、そして同様の大きさの摘出腫瘍断片をすぐにＴＲＩｚｏｌ試薬（ＧＩＢＣＯ
ＢＲＬ）中に採取し、そしてｍＲＮＡの調製のために迅速にホモジナイズした
。

【０１３４】 ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡレベルに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの効
果を測定するために、ノーザンブロット分析を、前に記載された（Ｈｕｒｔａお
よびＷｒｉｇｈｔ（２７））ように、いくらか改変して行った。ブロットを、順
方向プライマー（５’−ＴＡＣ ＣＧＣ ＣＣＣ ＡＧＴ ＧＡＧ ＡＣＣ Ｃ
Ｔ−３’）［配列番号３２］、逆方向プライマー（５’−ＴＧＡ ＣＧＴ ＴＴ
Ｇ ＧＣＣ ＴＣＣ ＣＴＧ ＡＡ−３’）［配列番号３３］、およびヒト結腸
直腸腺ガン５’−ストレッチプラスｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ
、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ）を鋳型として用いて合成した、³²Ｐ標識した３８
９ｂｐのＰＣＲ断片とハイブリダイズさせた。ヒトＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡは、
約６ｋｂのヌクレオチド転写物として発現し（Ｗｅｒｎｅｒら⁶）、そしてその
レベルを、前に記載された（ＨｕｒｔａおよびＷｒｉｇｈｔ（２７））ように、
グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡと比
較した。

【０１３５】 図８は、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドＧＴＩ４００６［配列番号
６］によって処置した腫瘍において、ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡレベルが減少した
ことを示す。

【０１３６】 （実施例７．ＩＧＦ−ＩＩに相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを用い
た静脈内処置による、マウス内のヒト腫瘍におけるＩＧＦ−ＩＩタンパク質レベ
ルの減少） ＣＤ−１無胸腺症ヌードマウスをＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ（Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃａｎａｄａ）から購入した。ＳＫ−Ｎ−Ａ
Ｓヒト神経芽腫細胞（代表的には１００μｌのＰＢＳ中で３×１０⁶細胞）を、
６−７週齢のＣＤ−１無胸腺症雌ヌードマウスの右横腹に皮下注射した。各実験
群は５匹のマウスを含んだ。腫瘍の大きさが約１００ｍｍ³の体積に達した後（
代表的には腫瘍細胞注射後６日）、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドを１
０ｍｇ／ｋｇで１日おきに尾静脈にボーラス注入によって投与した。コントロー
ル動物には同じ期間、生理食塩水のみを投与した。７回注射した後マウスを屠殺
し、そして同様の大きさの摘出腫瘍断片をすぐにＲＩＰＡ抽出緩衝液（５０ｍＭ
のＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのロイペプチン）中に採取し、そ
してタンパク質の調製のために迅速にホモジナイズした。

【０１３７】 ＩＧＦ−ＩＩタンパク質レベルに対するアンチセンスオリゴデオキシヌクレオ
チドの効果を測定するために、ウェスタンブロット分析を、前に記載された（Ｃ
ｈｏｙら（１８）、Ｆａｎら（１９））ように、いくらか改変して行った。タン
パク質抽出物（１０−２０μｇ）を１５％のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで分画し、そ
してニトロセルロース膜に移して、そしてＩｎｄｉａインク染色によって可視化
した。抗ＩＧＦ−ＩＩ抗体（１−２μｇ／ｍｌ）（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉａｇ
ｎｏｓｔｉｃｓ Ｉｎｃ．、Ｆｌａｎｄｅｒｓ ＮＪ）、続いて１：７，０００
希釈の西洋ワサビペルオキシダーゼ結合抗ヤギＩｇＧ（ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏ
ｕｉｓ ＭＯ）によって、ＩＧＦ−ＩＩの発現を検出した。約７．５ｋＤａのタ
ンパク質がＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ、
ＩＬ）によって可視化された。

【０１３８】 図９は、腫瘍細胞から抽出したタンパク質のウェスタンブロットを示す。試験
したアンチセンスオリゴヌクレオチドはそれぞれ、腫瘍におけるＩＧＦ−ＩＩタ
ンパク質レベルを減少させた。それぞれのレーンにおける同等のローディングを
実証するために、Ｉｎｄｉａインクで染色したブロットの一部をすぐ下に示す。

【０１３９】 （実施例８．アンチセンスオリゴヌクレオチドによる実験的転移の阻害） 異なるアンチセンスオリゴヌクレオチドによって処理したＣ８１６１ヒト黒色
腫細胞の実験的転移を、前に記載された（Ｆａｎら、１９９６¹⁹）ように評価し
た。細胞懸濁液のアリコートを、１００ｍｍの組織培養皿に２×１０⁶の密度で
播種し、そして１０％ＦＢＳを補充したα−ＭＥＭ培地中で、３７℃で一晩イン
キュベートした。細胞を１０ｍｌのＰＢＳで１回洗浄し、そして陽イオン性脂質
（リポフェクチン試薬、最終濃度５μｇ／ｍｌ、Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）の存在下
で、０．２μｌのオリゴヌクレオチドで４時間処理した。そのアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドを、細胞をＰＢＳで１回洗浄することによって除去し、そして細
胞をトリプシン処理した。次いで細胞を遠心分離によって回収し、そして０．１
ｍｌのＰＢＳに懸濁した約１×１０⁵の細胞を、６−８週齢のＣＤ−１無胸腺症
雌ヌードマウスの尾静脈に注射した。５週間後に、肺腫瘍の数を個々のマウスか
ら摘出した肺をピクリン酸色素溶液（７５％のピクリン酸、２０％のホルムアル
デヒド、５％の氷酢酸）で染色した後、推定した。

【０１４０】 図１０は、肺腫瘍細胞を種々のアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドで処
理した後、雌ヌードマウスにおいて減少された肺腫瘍の数を示す。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、ヒトＩＧＦ−ＩＩ遺伝子および選択的に転写およびスプライシングさ
れたｍＲＮＡの地図である。数字の付いた箱（１〜９）は、ＩＧＦ−ＩＩ遺伝子
のエキソンを示す。４つのプロモーター（Ｐ１〜Ｐ４）もまた矢印で示す。種々
のＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡ種をその対応する大きさとともに、図の下の部分に描
く。ぬりつぶした箱は、ＩＧＦ−ＩＩ前駆体タンパク質をコードする領域を表す
。

【図２Ａ】 図２Ａ〜Ｄは、示したアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与による、異なっ
た細胞株におけるコロニー形成能の、阻害割合のグラフである。図２Ａはヒト横
紋筋肉腫細胞株ＲＤの阻害割合を示す。

【図２Ｂ】 図２Ａ〜Ｄは、示したアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与による、異なっ
た細胞株におけるコロニー形成能の、阻害割合のグラフである。図２Ｂはヒト前
立腺ガン細胞株ＰＣ−３の阻害割合を示す。

【図２Ｃ】 図２Ａ〜Ｄは、示したアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与による、異なっ
た細胞株におけるコロニー形成能の、阻害割合のグラフである。図２Ｃはヒト膵
臓ガン細胞株ＡｓＰＣ−１の阻害割合を示す。

【図２Ｄ】 図２Ａ〜Ｄは、示したアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与による、異なっ
た細胞株におけるコロニー形成能の、阻害割合のグラフである。図２Ｄはヒト神
経芽腫細胞株ＳＫ−Ｎ−ＡＳの阻害割合を示す。

【図３】 図３は、アンチセンスオリゴヌクレオチド：ＧＴＩ４００６（配列番号６）ま
たはＧＴＩ４０１１（配列番号１１）の投与後、ヒト神経芽腫細胞株ＳＫ−Ｎ−
ＡＳまたは横紋筋肉腫細胞株（ＲＤ）のいずれかにおける、ＲＮＡのノーザンブ
ロットのオートラジオグラフである。

【図４】 図４は、異なるアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドを用いた処理後の、
ヒト神経芽腫細胞におけるＩＧＦ−ＩＩ発現のウェスタンブロットの写真である
。

【図５】 図５は、異なるアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドを用いた処理後の、
ヒト横紋筋肉腫細胞におけるＩＧＦ−ＩＩ発現のウェスタンブロットの写真であ
る。

【図６】 図６Ａは、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与を伴う、または伴わ
ない（コントロール）、マウスにおけるヒト神経芽腫細胞（ＳＫ−Ｎ−ＡＳ）の
注射後の、腫瘍の体積のグラフである。 図６Ｂは、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与を伴う、または伴わ
ない（コントロール）、マウスにおけるヒト神経芽腫細胞（ＳＫ−Ｎ−ＡＳ）の
注射から２０日後の、腫瘍の重量のグラフである。

【図７】 図７Ａは、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与を伴う、または伴わ
ない（コントロール）、マウスにおけるヒトウィルムス腫瘍細胞（Ｇ４０１）の
注射後の、腫瘍の体積のグラフである。 図７Ｂは、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与を伴う、または伴わ
ない（コントロール）、マウスにおけるヒトウィルムス腫瘍細胞（Ｇ４０１）の
注射から２０日後の、腫瘍の重量のグラフである。

【図８】 図８は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＧＴＩ４００６（配列番号６）を用
いた処理後、ヒト神経芽腫（ＳＫ−Ｎ−ＡＳ）腫瘍におけるＩＧＦ−ＩＩ ｍＲ
ＮＡレベルの、ノーザンブロットのオートラジオグラフである。

【図９】 図９は、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた処理後の、ヒト神経
芽腫（ＳＫ−Ｎ−ＡＳ）腫瘍におけるＩＧＦ−ＩＩタンパク質レベルの、ウェス
タンブロットの写真である。下のバンドはロードした全体のタンパク質を示すた
めに墨で染色したゲルの写真である。

【図１０】 図１０は、種々のアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いたヒト黒色腫細胞株
（Ｃ８１６１）の治療後のこの細胞による肺転移の、１マウスあたりの平均数の
グラフである。

【図１１Ａ】 図１１は、ヒトＩＧＦ−ＩＩ遺伝子のヌクレオチド配列の一部である。図１１
Ａは、エキソン４の配列である（配列番号３４）。

【図１１Ｂ】 図１１は、ヒトＩＧＦ−ＩＩ遺伝子のヌクレオチド配列の一部である。図１１
Ｂは、エキソン５の配列である（配列番号３５）。

【図１１Ｃ】 図１１は、ヒトＩＧＦ−ＩＩ遺伝子のヌクレオチド配列の一部である。図１１
Ｃは、エキソン６の配列である（配列番号３６）。

【図１１Ｄ】 図１１は、ヒトＩＧＦ−ＩＩ遺伝子のヌクレオチド配列の一部である。図１１
Ｄは、エキソン７〜９の配列である（配列番号３７）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (72)発明者 ヤング， エイピング エイチ． カナダ国 エム２アール １ピー３ オン タリオ， ノース ヨーク， センラック ロード 201 (72)発明者 リー， ユーン エス． カナダ国 エル５エイ ２エル７ オンタ リオ， ミシサウガ， コルサー ロード 2219 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 CA20 DA02 EA04 GA11 HA17 4C084 AA13 AA19 AA20 MA02 NA14 ZB261 4C086 AA01 AA02 EA16 NA14 ZB26

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 約３〜約１００ヌクレオチドを含むアンチセンスオリゴヌク
   レオチドであって、ここで該オリゴヌクレオチドは、哺乳動物胎児性ＩＧＦ−Ｉ
   Ｉ ｍＲＮＡの５’非翻訳領域に相補的な配列を含む、アンチセンスオリゴヌク
   レオチド。
2. 【請求項２】 １つ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合をさらに
   含む、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
3. 【請求項３】 ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡに相補的ではないさらなるヌクレオ
   チドをさらに含む、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
4. 【請求項４】 前記配列が、表１の配列番号１〜１５からなる群より選択さ
   れる、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
5. 【請求項５】 約２０〜約１００ヌクレオチドを含むアンチセンスオリゴヌ
   クレオチドであって、ここで該オリゴヌクレオチドが、表２の配列番号１７〜３
   １からなる群より選択される配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
6. 【請求項６】 １つ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合をさらに
   含む、請求項５に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
7. 【請求項７】 ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡに相補的ではないさらなるヌクレオ
   チドをさらに含む、請求項５に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
8. 【請求項８】 約３〜１００ヌクレオチドのアンチセンスオリゴヌクレオチ
   ド配列を含むベクターであって、該オリゴヌクレオチド配列が、哺乳動物胎児性
   ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡの５’非翻訳領域に相補的な配列を含む、ベクター。
9. 【請求項９】 約２０〜約１００ヌクレオチドのアンチセンスオリゴヌクレ
   オチド配列を含むベクターであって、ここで該オリゴヌクレオチド配列が、表２
   の配列番号１７〜３１からなる群より選択される配列を含む、ベクター。
10. 【請求項１０】 薬学的に受容可能な賦形剤および有効量の約３〜約１００
    ヌクレオチドのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む薬学的組成物であって、
    該オリゴヌクレオチドが、哺乳動物胎児性ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡの５’非翻訳
    領域に相補的な配列を含む、薬学的組成物。
11. 【請求項１１】 前記配列が、表１の配列番号１〜１５からなる群より選択
    される、請求項１０に記載の薬学的組成物。
12. 【請求項１２】 薬学的に受容可能な賦形剤および有効量の約２０〜１００
    ヌクレオチドのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む薬学的組成物であって、
    ここで該オリゴヌクレオチドが、表２の配列番号１７〜３１からなる群より選択
    される配列を含む、薬学的組成物。
13. 【請求項１３】 哺乳動物腫瘍の増殖を阻害するための方法であって、該方
    法は、該腫瘍を有すると疑われる哺乳動物に、該腫瘍の増殖が阻害されるような
    条件下で、有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を包含し、
    該オリゴヌクレオチドが、哺乳動物胎児性ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡの５’非翻訳
    領域に相補的な配列を含む、約３〜１００ヌクレオチドを含む、方法。
14. 【請求項１４】 前記哺乳動物に化学療法剤を投与する工程をさらに包含す
    る、請求項１３に記載の方法。
15. 【請求項１５】 前記オリゴヌクレオチドが、表１の配列番号１〜１５から
    なる群より選択される配列を含む、請求項１３に記載の方法。
16. 【請求項１６】 前記オリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ耐性である、請求
    項１３に記載の方法。
17. 【請求項１７】 哺乳動物腫瘍の増殖を阻害するための方法であって、該方
    法は、該腫瘍を有すると疑われる哺乳動物に、該腫瘍の増殖が阻害されるような
    条件下で、有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を包含し、
    該オリゴヌクレオチドが、表２の配列番号１７〜３１からなる群より選択される
    配列を含む、約２０〜１００ヌクレオチドを含む、方法。
18. 【請求項１８】 前記オリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ耐性である、請求
    項１７に記載の方法。
19. 【請求項１９】 前記哺乳動物に化学療法剤を投与する工程をさらに包含す
    る、請求項１７に記載の方法。
20. 【請求項２０】 哺乳動物の腫瘍の転移を阻害するための方法であって、該
    方法は、転移性の腫瘍を有すると疑われる哺乳動物に、該腫瘍の転移が阻害され
    るような条件下で、有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を
    包含し、該オリゴヌクレオチドが、哺乳動物胎児性ＩＧＦ−ＩＩ ｍＲＮＡの５
    ’非翻訳領域に相補的な配列を含む、約３〜１００ヌクレオチドを含む、方法。
21. 【請求項２１】 前記哺乳動物に化学療法剤を投与する工程をさらに包含す
    る、請求項２０に記載の方法。
22. 【請求項２２】 前記オリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ耐性である、請求
    項２０に記載の方法。
23. 【請求項２３】 前記オリゴヌクレオチドが、表１の配列番号１〜１５から
    なる群より選択される配列を含む、請求項２０に記載の方法。
24. 【請求項２４】 哺乳動物腫瘍の転移を阻害するための方法であって、該方
    法は、転移性の腫瘍を有すると疑われる哺乳動物に、該腫瘍の転移が阻害される
    ような条件下で、有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を包
    含し、該オリゴヌクレオチドが、表２の配列番号１７〜３１からなる群より選択
    される配列を含む、約２０〜１００ヌクレオチドを含む、方法。
25. 【請求項２５】 前記哺乳動物に化学療法剤を投与する工程をさらに包含す
    る、請求項２４に記載の方法。
26. 【請求項２６】 前記オリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ耐性である、請求
    項２５に記載の方法。