JP2002501496A

JP2002501496A - 哺乳動物サイトカイン；関連の試薬および方法

Info

Publication number: JP2002501496A
Application number: JP54608798A
Authority: JP
Inventors: エイ．ヘドリック，ジョセフ; アール．サナ，セオドア; バザン，ジェイ．フェルナンド; エイ．キャステレイン，ロバート
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme Corp
Priority date: 1997-04-21
Filing date: 1998-04-17
Publication date: 2002-01-15
Also published as: AU7103198A; EP0977779A1; WO1998047921A1; CA2287254A1; WO1998047921A9

Abstract

(57)【要約】哺乳動物、例えば、齧歯類のIL-1δ、IL-1ε、精製IL-1δ、および精製IL-1εタンパク質、ならびにそれらのフラグメントをコードする核酸。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方の抗体もまた、提供される。診断的有用性および治療的な有用性の両方のために組成物を使用する方法が、提供される。

Description

【発明の詳細な説明】哺乳動物サイトカイン；関連の試薬および方法発明の分野本発明は、形態形成または免疫系の機能を含む、哺乳動物の生理に影響を与えるための組成物および方法に関する。特に、本発明は、発生および／または免疫系を調節する、核酸、タンパク質、および抗体を提供する。これらの物質の診断的および治療的な使用もまた、開示される。発明の背景組換えDNA技術とは、一般に、ドナー供給源からの遺伝情報を、例えば、宿主への導入を介して、その後のプロセシングのためにベクター中に組み込み、それによって移入された遺伝情報が、新規な環境においてコピーおよび／または発現される、技術をいう。一般に、遺伝情報は、所望のタンパク質産物をコードするメッセンジャーRNA（mRNA）に由来する相補的DNA（cDNA）の形態において存在する。キャリアは、しばしば、宿主において後の複製のためにcDNAを組み込む能力、および、いくつかの場合において、cDNAの発現を実際に制御し、それによって宿主においてコードされる産物の合成を指向する能力を有するプラスミドである。かなりの間、哺乳動物の免疫応答は、「免疫ネットワーク」と呼ばれる、一連の複雑な細胞相互作用に基づくことが知られている。近年の研究は、このネットワークの内部作用についての新たな洞察を提供した。免疫応答の多くが、実際、リンパ球、マクロファージ、顆粒球、および他の細胞のネットワーク様の相互作用を中心に動くことは明らかなままであるが、免疫学者らは、現在、一般に、リンホカイン、サイトカイン、またはモノカインとして知られる可溶性タンパク質が、これらの細胞相互作用の制御において重要な役割を果たすという意見を主張する。従って、細胞調節因子の単離、特徴付け、および作用機構にかなりの興味があり、これらを理解することは、多数の医学的異常（例えば、免疫系障害）の診断および治療において重大な進歩を導く。リンホカインは、多様な方法において、細胞活性を明らかに媒介する。これらは、多能性の造血肝細胞の増殖、成長、および／または、複雑な免疫系を構成する多様な細胞系譜を含む膨大な数の子孫への、分化を支持することを示した。細胞成分の間の適切なおよび釣合いのとれた相互作用は、健常な免疫応答のために必要である。異なる細胞系譜は、リンホカインが、他の薬剤と組合わせて投与される場合、しばしば、異なる様式において応答する。免疫応答のために特に重要な細胞系譜は、２つのクラスのリンパ球を含む：Ｂ細胞（これは免疫グロブリン（外来物質を認識し、そして結合してその除去を達成する能力を有するタンパク質）を生成および分泌し得る）、ならびに種々のサブセットのＴ細胞（これは、リンホカインを分泌し、そしてＢ細胞および免疫ネットワークを構成する種々の他の細胞（他のＴ細胞を含む）を誘導または抑制する）。これらのリンパ球は、他の多くの細胞型と相互作用する。別の重要な細胞系譜は、肥満細胞（これは、全ての哺乳動物種において明確に同定されているわけではない）であり、これは身体全体の毛細管の近位に位置する顆粒含有結合組織細胞である。これらの細胞は、肺、皮膚、ならびに胃腸管および尿生殖器管において、特に高濃度で見出される。肥満細胞は、アレルギー関連性障害、特にアナフィラキシーにおいて、以下のような中心的な役割を果たす：選択された抗原が、肥満細胞表面におけるレセプターに結合される免疫グロブリンの１つのクラスに架橋する場合、肥満細胞は、顆粒消失し、そしてメディエーター（例えば、ヒスタミン、セロトニン、ヘパリン、およびプロスタグランジン）を放出し、これはアレルギー性応答（例えば、アナフィラキシー）を引き起こす。種々の免疫障害をより良好に理解しおよび処置するための研究は、インビトロで免疫系の細胞を維持することが一般に不可能であることによって、妨げられてきた。免疫学者らは、これらの細胞の多くの培養が、Ｔ細胞および他の細胞の上清（これは、多くのリンホカインを含む種々の増殖因子を含む）の使用を介して、達成され得ることを発見した。タンパク質のインターロイキン-１ファミリーは、IL-1α、IL-1β、IL-1RA、および近年、IL-1γ（インターフェロンγ誘導因子、IGIFとも称される）を含む。この関連の遺伝子のファミリーは、広範な範囲の生物学的機能に関係している。 Dinarello（1994）FASEB J ．8:1314-1325；Dlnarello（1991）Blood 77:1627-16 52；およびOkamuraら（1995）Nature 378:88-91を参照のこと。さらに、形態形成的発生を調節する、種々の増殖因子および調節因子が存在する。これは、例えば、Tollリガンドを含み、これは、IL-1レセプターに特有の構造的および機構的な特徴を共有するレセプターへの結合を介して、シグナル伝達する。例えば、Lemaitreら（1996）Cell 86:973-983；ならびにBelvinおよびAnd erson（1996）Ann ．Rev．Cell & Develop．Biol．12:393-416を参照のこと。上述から、新規な可溶性タンパク質の発見および開発（リンホカインに類似のタンパク質を含む）が、例えば、免疫系および／または造血細胞の発生、分化、または機能を、直接的または間接的に含む、広範囲の変性状態または異常な状態についての新たな治療に貢献するにちがいないことが明らかである。特に、他のリンホカインの有益な活性を増強または強力にする、新規なリンホカイン様分子の発見および理解は、非常に有利である。本発明は、新規なインターロイキン- １様組成物および関連の化合物、ならびにそれらの使用のための方法を提供する。発明の要旨本発明は、インターロイキン-1δ（IL-1δ）およびインターロイキン-1ε（IL -1ε）と称される、２つの新規な哺乳動物（例えば、齧歯類）のインターロイキン-1様分子の、発見、精製、およびその生物学的活性の特徴づけに基づく。IL-1 δおよびIL-1εの両方は、例えば、相同性比較によって、IL-1ファミリーの分子の公知のメンバーに、構造類似性および配列類似性の両方を示す。第１の局面において、本発明は、IL-1δおよびIL-1εポリペプチド、ならびにこれらのポリペプチドをコードする核酸、それらの生成および使用のための方法を提供する。本発明の核酸は、本明細書中に含まれるクローン化された相補的DN A（cDNA）配列に対するそれらの相同性によって、および／またはこれらの核酸によって代表的にコードされるポリペプチドに適用される、IL-1δ活性またはIL -1ε活性についての機能性アッセイによって、一部、特徴付けられる。免疫応答の制御を調節または介入するための方法はまた、単一でまたは他の分子との組合わせのいずれかでの、IL-1δまたはIL-1εの使用によって提供される。新たなIL-1δまたはIL-1ε遺伝子産物の生物学的機能は、公知のIL-1ファミリーのメンバーによって使用されるシグナル伝達経路のレセプターもしくは部分に類似するはずであり、およびそれらを良好に共有し得る。等価なベクターが、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）技術およびインサートの配列を使用することによって構築され得る。別の局面において、本発明は、規定されたアミノ酸セグメントの12個の連続したアミノ酸残基（すなわち、配列番号２または６）に対して生じるポリクローナル抗体に特異的に結合する、単離されたかまたは組換えのIL-1δまたはIL-1εポリペプチドを提供する。これらのIL-1δまたはIL-1εポリペプチドはさらに、さらなる規定されたアミノ酸の選択配列を含むことによって規定される。さらに、別の実施態様において、IL-1δまたはIL-1εポリペプチドを含む融合タンパク質が提供される。さらに別の局面において、フラグメント、天然の対立遺伝子、標識、およびIL-1δまたはIL-1εポリペプチドの改変を含む、改変体が提供される。また、このようなフラグメント、改変体、または改変されたポリペプチドをコードする核酸が提供される。特定のポリペプチドの実施態様は、単離されたかまたは組換えのポリペプチドを含み、これは：Ａ）配列番号２の12個の連続したアミノ酸のセグメントに対して生じるポリクローナル抗体に対して特異的に結合し；そして以下（配列番号２を参照のこと）：から選択される少なくとも１つの配列を含むか、またはＢ）配列番号６の12個の連続したアミノ酸セグメントに対して生じるポリクロ- ナル抗体に特異的に結合し；そして以下（配列番号6を参照のこと）：から選択される少なくとも１つの配列を含む。好ましい実施態様は、このようなポリペプチドを含み：ここでポリペプチドは、複数の記載される配列を含む。好ましくは、12個の連続したアミノ酸のセグメントは、IL-1δ配列：；または、IL-1ε配列：に由来する。特に好ましい実施態様において、ポリペプチドは：成熟タンパク質を含むか；翻訳後修飾を欠損するか；マウスを含む齧歯類由来であるか；IL-1δ もしくはIL-1εの天然の対立遺伝子改変体であるか；少なくとも約30個のアミノ酸長を有するか；齧歯類IL-1δに特異的である、少なくとも２つの重複しないエピトープを示すか；配列番号２に対して、少なくとも約20個のアミノ酸の長さにわたって、少なくとも約90%の配列同一性を示すか；齧歯類IL-1εに特異的である、少なくとも２つの重複しないエピトープを示すか；配列番号６に対して、少なくとも約20アミノ酸の長さにわたって少なくとも約90%の配列同一性を示すか；グリコシル化されるか；天然のグリコシル化を伴って、少なくとも10kDの分子量を有するか；合成ポリペプチドであるか；固体基体に付着されるか；別の化学部分に結合されるか；天然の配列からの５つ以下の置換物であるか；または、天然の配列からの欠失改変体もしくは挿入改変体である。他の好ましい実施態様は、例えば、以下を含む可溶性ポリペプチドを含む：滅菌ポリペプチド；滅菌ポリペプチドおよびキャリア（ここでキャリアは：水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む、水性化合物であり；ならびに／または経口、直腸、鼻腔、局所、もしくは非経口投与のために処方される）。融合タンパク質の実施態様は、記載されるようなポリペプチド配列を有する融合タンパク質を含み、さらに、以下：成熟タンパク質；FLAG、His6、もしくはIg配列を含む、検出タグもしくは精製タグ；または別のサイトカインもしくはケモカインの配列、を含有する。キットの実施態様は、記載されるようなタンパク質もしくはポリペプチド、ならびに：タンパク質もしくはポリペプチドを含有する区画；および／またはキットにおける試薬の使用または処分についての取扱説明書を含むキットを含む。他の実施態様は、種々の投与における使用のための適切なキャリアとともに滅菌IL-1δまたはIL-1εタンパク質またはペプチドを含有する薬学的組成物を含む。本発明はまた、IL-1δまたはIL-1εタンパク質またはペプチド配列に特異的に結合する、抗体からの抗原結合部位を含有する結合化合物を提供する。種々の好ましい結合化合物は、抗体からの抗原結合部位を含有し、これは記載されるように、ポリペプチドの成熟タンパク質に特異的に結合し、ここで：成熟タンパク質がIL-1δまたはIL-1εタンパク質であるか；結合化合物が、Fv、Fab、もしくはF ab2フラグメントであるか；結合化合物が別の化学部分に結合されるか；あるいは、抗体は：配列番号２もしくは６の12個の連続したアミノ酸のセグメントに対して惹起されるか；成熟IL-1δもしくはIL-1εタンパク質に対して惹起されるか；精製された齧歯類IL-1δもしくはIL-1εに対して惹起されるか；免疫選択されるか；ポリクローナル抗体であるか；変性されたIL-1δもしくはIL-1εに結合するか；少なくとも30μMの、抗原に対するKdを示すか；ビーズもしくはプラスチックメンブレンを含む固体基体に付着しているか；滅菌組成物中にあるか；または放射性標識もしくは蛍光標識を含んで、検出可能に標識される。他の結合化合物は、抗体からの抗原結合部位を含有する結合化合物を含み、抗原結合部位は：記載されるように、齧歯類タンパク質に特異的に結合し、ここで：タンパク質がマウスタンパク質であるか；結合化合物が、Fv、Fab、またはFab 2フラグメントであるか；結合化合物が、別の化学部分に結合されるか；または抗体が：配列番号２もしくは６の12個の連続したアミノ酸のセグメントを含む成熟ポリペプチドのペプチド配列に対して惹起されるか；成熟齧歯類IL-1δもしくはIL-1εに対して惹起されるか；精製された齧歯類IL-1δもしくはIL-1εに対して惹起されるか；免疫選択されるか；ポリクローナル抗体であるか；変性された齧歯類IL-1δもしくはIL-1εに結合するか；少なくとも30μMの、抗原に対するK dを示すか；ビーズもしくはプラスチックメンブレンを含む、固体基体に付着しているか；滅菌組成物中にあるか；または、放射性標識もしくは蛍光標識を含んで検出可能に標識される。このような結合化合物を使用する方法が提供され、例えば、記載されるように、抗体を作製する方法であって、免疫原性量の：齧歯類 IL-1δポリペプチド；配列番号２の12個の連続したアミノ酸のセグメントを含有するペプチド配列；齧歯類IL-εポリペプチド；もしくは配列番号６の12個の連続したアミノ酸のセグメントを含有するペプチド配列で、免疫系を免疫する工程を包含し；それによって抗体を生成させる、方法；または、抗原：抗体複合体を生成する方法であって、齧歯類IL-1δタンパク質もしくはペプチドと、記載されるような抗体とを；または齧歯類IL-1εタンパク質もしくはペプチドと、記載されるような抗体とを；接触させる工程を包含し、それによって複合体を形成させる、方法。記載されるような結合化合物、ならびに：結合化合物を含有する区画；および／またはキットにおける試薬の使用もしくは処分についての取扱説明書を含む、キットが提供される。他の形態の組成物は、記載されるような滅菌結合化合物を含むか、または結合化合物およびキャリアを含有し、ここでキャリアは：水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む、水性化合物であり；ならびに／または経口、直腸、鼻腔、局所、もしくは非経口投与のために処方される。代表的には、キットは、記載される結合化合物、ならびに：この結合化合物を含有する区画；および／またはキットにおける試薬の使用もしくは処分についての取扱説明書を含む。キットはまた、定性的または定量的な分析を行うい得る。他の組成物は：上記の滅菌結合化合物を含むか、または結合化合物およびキャリアを含み得、ここでキャリアは：水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む、水性化合物であり；ならびに／または経口、直腸、鼻腔、局所、もしくは非経口投与のために処方される。核酸の実施態様は、記載されるような、タンパク質またはペプチドまたは融合タンパク質をコードする、単離されたかまたは組換えの核酸を含み、ここで：IL -1δまたはIL-1εが、哺乳動物由来であるか、あるいは；核酸が：配列番号２、４、もしくは６の１つの抗原性ペプチド配列をコードするか；配列番号２、４、もしくは６の複数の抗原性ペプチド配列をコードするか；上記セグメントをコードする天然のcDNAに少なくとも約80%の同一性を示すか；発現ベクターであるか；複製起点をさらに含むか；天然の供給源由来であるか；検出可能な標識を含むか；合成ヌクレオチド配列を含むか；６kb未満、好ましくは３kb未満であるか；齧歯類を含む、哺乳動物由来であるか；天然の完全長のコード配列を含むか；上記のIL-1δもしくはIL-1εをコードする遺伝子についてのハイブリダイゼーションプローブであるか；またはプライマー、PCR産物、もしくは変異誘発プライマーである。本発明はさらに、記載されるように、タンパク質またはペプチドまたは融合タンパク質をコードする単離されたかまたは組換えの核酸を含み、ここで：タンパク質、ペプチド、もしくは融合タンパク質が、齧歯類からのIL-1δもしくはIL-1εであるか；あるいは核酸は：配列番号２もしくは配列番号６の１つの抗原性ペプチド配列をコードするか；配列番号２もしくは配列番号６の複数の異なる抗原性ペプチド配列をコードするか；セグメントをコードする天然のcDNAに少なくとも約80%の同一性を示すか；発現ベクターであるか；複製起点をさらに含むか；天然の供給源由来であるか；検出可能な標識を含むか；合成ヌクレオチド配列を含むか；６kb未満、好ましくは３kb未満であるか；齧歯類由来であるか；天然の完全長のコード配列を含むか；IL-1δもしくはIL-1εをコードする遺伝子についてのハイブリダイゼーションプローブであるか；またはPCRプライマー、PCR産物、もしくは変異誘発プライマーであるか；IL-1δまたはIL-1ε タンパク質をコードし；ここで、IL-1δまたはIL-1εタンパク質は、配列番号２のポリペプチド；または配列番号６のポリペプチドから選択された免疫原に対して生じるポリクローナル抗体に特異的に結合する。他の実施態様は、記載される核酸で形質転換された細胞を含む。種々の場合において、細胞は：原核生物細胞；真核生物細胞；細菌細胞；酵母細胞；昆虫細胞；哺乳動物細胞；マウス細胞；霊長類細胞；またはヒト細胞である。特定のキットは、記載される核酸、ならびに：核酸を含有する区画；IL-1δもしくはIL-1εタンパク質もしくはポリペプチドを含有する区画；および／またはキットにおける試薬の使用もしくは処分についての取扱説明書を含む。好ましくは、キットは定性的または定量的分析を行い得る。あるいは、本発明は、核酸を提供し、これは：30℃および２M未満の塩の洗浄条件下で、配列番号１にハイブリダイズするか；30℃および２M未満の塩の洗浄条件下で、配列番号３もしくは５にハイブリダイズするか；齧歯類IL-1δに対して、少なくとも約30ヌクレオチドのストレッチにわたって、少なくとも約85%の配列同一性を示すか；または、齧歯類IL-1εに対して、少なくとも約30ヌクレオチドのストレッチにわたって、少なくとも約85%の同一性を示す。好ましくは、記載される核酸は：洗浄条件が、45℃および／もしくは500mMの塩である場合にハイブリダイズするか；または、少なくとも約90%の、および／もしくは少なくとも55個のヌクレオチドのストレッチにわたって、同一性を示す。より好ましくは、上記の核酸は、55℃および／もしくは150mMの塩の洗浄条件でハイブリダイズするか；または、少なくとも約95%、および／もしくは少なくとも75個のヌクレオチドのストレッチにわたって、同一性を示す。本発明はまた、これらの組成物または化合物を作製するまたは使用する方法を提供する。このような方法は、上記細胞と、哺乳動物IL-1δまたはIL-1εのアゴニストまたはアンタゴニストとを接触させる工程を包含する、細胞または組織培養細胞の生理および発生を調節する方法を含む。代表的には、接触させる工程は、IL-1α、IL-1RA、IL-1β、IL-1γ、IL-2、および／もしくはIL-12のアゴニストまたはアンタゴニストとの組合わせであるか：接触させる工程は、IL-1δもしくはIL-1εを特異的に結合する抗体結合部位を含有する結合組成物を含む、アンタゴニストとであるか；または調節する工程は、IFN-γ生成の調節である。図面の簡単な説明図１Ａは、予測されるIL-1δまたはIL-1εタンパク質の中心軸を通しての平面図（top down view）を示す図であり、その３重の対称的な位相を有する特徴的な三次β三つ葉型構造を実証する。IL-1レセプターサブユニットを結合すると予測されるIL-1δまたはIL-1εタンパク質の接触部位が、部位Ａ、Ｂ、またはＣとして記載される（表２）。接触部位ＡおよびＣは、IL-1の第ｌのレセプターサブユニットに結合するが、接触部位Ｂは、IL-1の第２のレセプターサブユニットに結合する。図１Ｂは、予測されるIL-1δおよびIL-1εタンパク質の側面図を示す図であり、12個のβドメインおよびマッシュルーム様キャップによって形成されるバレル構造を実証する。発明の詳細な説明Ｉ．総論本発明の組成物、処方物、および方法が記載される前に、本発明は、本明細書中に記載される特定の方法、組成物、および細胞株に制限されないことが、理解されるべきである。なぜなら、このような方法、組成物、および細胞株は、もちろん、様々であり得るからである。本明細書中で使用される用語法は、特定の実施態様のみを記載することを目的とし、そして添付の請求の範囲によってのみ規定される本発明の範囲を制限することを意図しないことがまた理解される。添付の請求の範囲も含めて、本明細書中で使用されるように、単語の単数形態（例えば、「ａ」、「an」、および「the」は、文脈が他で明らかに指図しない限り、それらの対応する複数の指示対象物を含む。従って、例えば、「生物」に関しては、１つ以上の異なる生物を含み、「細胞」に関しては、１つ以上のこのような細胞を含み、「方法」に関しては、当業者に公知の等価な工程および方法に関して含むなどである。他で規定されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料に類似のまたは等価な方法および材料が、本発明の実施または試験において使用され得るが、適切な方法および材料が、以下に記載される。上述で考察される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、本出願の出願日前のそれらの開示のためにのみ提供される。本発明は、その穿孔発明による、いかなるこのような開示をも遡及される権利を与えないことを許容するものとして、解釈されるものは本明細書中に存在しない。本明細書中に言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、全ての図および図面を含めてそれらの全体が、本明細書中に参考として援用される。本発明は、構造的および生物学的の両方の、特定の規定された特性を有する、哺乳動物（例えば、齧歯類）のインターロイキン-1様分子のアミノ酸配列および DNA配列を提供する。これらは本明細書中で、インターロイキン-1δ（IL-1δ）およびインターロイキン-1ε（IL-1ε）として、それぞれ、称されており、ならびにIL-1ファミリーのメンバーの数を４から６に増加する。これらの分子をコードする種々のcDNAは、齧歯類（例えば、マウス）のcDNA配列ライブラリーから得られた。霊長類の対応物もまた、存在するべきである。本明細書中に含まれる核酸は、IL-1δおよびIL-1εをコードするDNA、cDNA、およびRNA配列を含む。IL-1 δおよびIL-1εポリペプチドの全てまたは部分をコードする核酸はまた、それらがIL-1δまたはIL-1ε活性を有するポリペプチドをコードする限り含まれることが理解される。このような核酸は、天然に存在する核酸および意図的に操作される核酸の両方を含む。例えば、IL-1δまたはIL-1εは、部位特異的変異誘発に供され得る。適用可能な標準的な方法のいくつかは、例えば、Manlatisら（1982）Molecula r Cloning ，A Laboratory Manual 、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spri ng Harbor Press；Sambrookら、（1989）Molecular Clonlng:A Laboratory Manu al 、（第２版）、第１〜３巻、CSH Press、NY；Ausubelら、Biology、Greene Pu blishing Associates、Brooklyn、NY；またはAusubelら（1987および定期的な補遺）Current Protocols in Molecular Biology、Greene/Wiley、New York；（これらのそれぞれは、本明細書中に参考として援用される）において記載または参照される。哺乳動物（齧歯類）のIL-1δコードセグメントの完全なヌクレオチドおよび対応するアミノ酸配列は、配列番号１および配列番号２において、それぞれ、示される。コード配列は、IL-1ファミリーの他のメンバーをコードするメッセージの種々の形態について報告されているシグナル配列を示さない。メッセージの別の形態は、おそらく、転換酵素様酵素によって切断されるIL-1βプロドメインに非常に似たシグナル配列をコードする。Dinarello（1994）FASEB J ．1314-1325を参照のこと。配列番号３〜６は、哺乳動物（齧歯類）のIL-1εコードセグメントの部分的なヌクレオチド（配列番号３）および対応するアミノ酸配列（配列番号４）、ならびに完全長の核酸（配列番号５）および対応するアミノ酸配列（配列番号６）を示す。表１は、IL-1δおよびIL-1εについてのβコンホメーション境界を示す。βコンホメーションのβ4とβ5との間のアミノ酸残基の存在は、IL-1アゴニストの特徴である。IL-1ファミリー分子は、βコンホメーションのβ9およびβ10を含む領域において非常に保存された残基を有する。表２は、IL-1ファミリーメンバーの関係を示し、および表３は、選択されたメンバーのアラインメントを提供する。本明細書中で使用されるように、用語IL-1δは、配列番号２において示されるアミノ酸配列もしくはその実質的なフラグメントを有するか、または共有するタンパク質またはペプチドセグメントを含むタンパク質を記載するために使用される。IL-1εならびに配列番号４および６でも同様である。本発明はまた、その配列が提供されるIL-1δ対立遺伝子のタンパク質改変体（例えば、ムテインアゴニストまたはアンタゴニスト）を含む。代表的に、このようなアゴニストまたはアンタゴニストは、約10%未満の配列差異を示し、従って、しばしば、１と11との間の（例えば、２、３、５、７など）の置換を有する。本発明はまた、記載されるタンパク質の対立遺伝子および他の改変体（例えば、天然の多型改変体）を含む。本明細書中で使用されるように、「天然」は、技術によって改変されていないことを意味する。代表的に、例えば、少なくとも約100nMの、通常は約30nMよりも良好な、好ましくは約10nMよりも良好な、およびより好ましくは約３nMよりも良好な、非常に高い親和性で、その対応する生物学的レセプターに結合する。この用語はまた、関連の天然に存在する形態（例えば、対立遺伝子、多型改変体、および哺乳動物タンパク質の代謝改変体）をいうために、本明細書中で使用される。本発明はまた、配列番号２、４、または６におけるアミノ酸配列と実質的なアミノ酸配列相同性を有するタンパク質またはペプチドを含む。これは、比較的少ない置換（例えば、好ましくは約３〜５個未満）を有する配列改変体を含む。実質的なポリペプチド「フラグメント」または「セグメント」は、少なくとも約８個のアミノ酸、一般に少なくとも10個のアミノ酸、より一般に少なくとも12 個のアミノ酸、しばしば少なくとも14個のアミノ酸、よりしばしば少なくとも16 個のアミノ酸、代表的には少なくとも18個のアミノ酸、より代表的には少なくとも20個のアミノ酸、通常には少なくとも22個のアミノ酸、より通常には少なくとも24個のアミノ酸、好ましくは少なくとも26個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも28個のアミノ酸、および特に好ましい実施態様において、少なくとも約30 個以上のアミノ酸のアミノ酸残基のストレッチである。異なるタンパク質のセグメントの配列は、適切な長さのストレッチにわたって互いに比較され得る。アミノ酸配列相同性、または配列同一性は、残基のマッチを至適化することによって、必要であれば、必要に応じてギャップが導入されることによって、決定される。例えば、Needlehamら（1970）J ．Mol．Biol. 48:443-453；Sankoffら（ 1983）第１章Time Warps ，String Edits，and Macromolecules：The Theory and Practice of Sequence Comparison 、Addison-Wesley、Reading、MA；およびInt elliGenetics、Mountain View、CAからのソフトウエアパッケージ；およびUnive rsity of Wisconsin Genetics Computer Group（GCG）、Madison、WIを参照のこと；これらのそれぞれは、本明細書中に参考として援用される。保存的置換をマッチとして考慮する場合、これは変化する。保存的な置換は、代表的に以下の群内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。相同なアミノ酸配列は、サイトカイン配列における天然の対立遺伝子変化および種間変化を含むことが意図される。代表的な相同タンパク質またはペプチドは、表１または２のアミノ酸配列セグメントと、50〜100%の相同性（ギャップが導入され得る場合）から 60〜100%の相同性（保存的置換が含まれる場合）を有する。ホモロジー測定は、少なくとも約70%、一般に少なくとも76%、より一般に少なくとも約81%、しばしば少なくとも85%、よりしばしば少なくとも88%、代表的に少なくとも90%、より代表的には少なくとも92%、通常少なくとも94%、より通常少なくとも95%、好ましくは少なくとも96%、およびより好ましくは少なくとも97%、および特に好ましい実施態様において、少なくとも98%以上である。相同性の程度は、比較されるセグメントの長さとともに変化する。相同なタンパク質またはペプチド（例えば、対立遺伝子改変体）は、表１および／または２において記載される実施態様と、最も生物学的な活性を共有する。本明細書中で使用されるように、用語「生物学的活性」は、炎症応答および／または生得的な免疫に対する効果を記載するために、制限なく使用される。例えば、それらは、IL-1γのように、抗Ｉ型もしくは抗II型IL-1レセプター抗体を伴ってもしくは伴わないで、IL-12もしくはIL-2 と組合わせた、脾細胞によるIL-1γの相乗的な誘導を示し得るか、または哺乳動物IL-1δまたはIL-1εの同じまたは多型改変体に対して惹起される抗体とのレセプター結合および交差反応性としてのより構造的な特性を示し得る。例えば、IL-1δの、用語、リガンド、アゴニスト、アンタゴニスト、およびアナログは、IL-1δまたはIL-1δ様タンパク質に対する特徴的な細胞性応答を調節する分子、ならびに、例えば、レセプターが天然のレセプターまたは抗体である場合、リガンドーレセプター相互作用のより標準的な構造的な結合競合の特徴を有する分子を含む。細胞性応答は、Ｉ型またはII型IL-1レセプターに関連するが、おそらくこれとは異なる細胞性レセプターへのIL-1δまたはIL-1εの結合を介して媒介されるようである。また、リガンドは、このレセプター、もしくはそのアナログが結合する天然のリガンド、または天然のリガンドの機能的なアナログである分子のいずれかとして作用する分子である。機能的なアナログは、構造的な改変が伴うリガンドであり得るか、または適切なリガンド結合決定基と相互作用する分子形状を有する全く未関連の分子であり得る。リガンドは、アゴニストまたはアンタゴニストとして作用し得、例えば、Goodmanら（編）（1990）Goodm an & Gilman's ：The Pharmacological Bases of Therapeutics 、Pergamon Press 、New Yorkを参照のこと。合理的な薬物設計はまた、レセプターまたは抗体および他のエフェクターまたはリガンドの分子形状の構造的研究に基づき得る。エフェクターは、リガンド結合に応答して他の機能を媒介する他のタンパク質、またはレセプターと通常相互作用する他のタンパク質であり得る。どの部位が特定の他のタンパク質と相互作用するのかを決定するための１つの手段は、物理的構造決定（例えば、Ｘ線結晶学または二次元NMR技術）である。これらは、どのアミノ酸残基が分子の接触領域を形成するのかに関して、手引きを提供する。タンパク質の構造的決定の詳述される記載について、例えば、BlundellおよびJohnson（1976）Protein Crystal lography 、Academic Press、New York（これは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。 II．活性 IL-1δまたはIL-1εタンパク質は、例えば、免疫系において、多くの異なる生物学的活性を有し、そして炎症機能または他の生得的な免疫応答を含む。IL-1δ またはIL-1εタンパク質は、他のIL-1タンパク質に相同であるが、それぞれは構造的に異なる。例えば、ヒトIL-1γ遺伝子のコード配列は、おそらくマウスIL-1 γのヌクレオチドコード配列と約70%の同一性を有し、そして類似性の同様な測定が、IL-1δおよびIL-1εに対して適用される。アミノ酸レベルで、約60%の同一性がまたあるようである。類似性のレベルは、新たなIL-1δおよびIL-1εタンパク質が他のIL-1αおよびIL-1βならびにIL-1RAに関連することを示唆する。マウスIL-1γ分子は、脾臓細胞においてNK活性を増加するIFN-γ生成を刺激する能力を有する。Okamuraら（1995）Nature 378:88-91を参照のこと。マウスIL-1α、IL-1β、およびIL-1γは、IFN-γを誘導するそれらの能力に関して、SCID脾細胞および精製されたNK細胞において、単独で、またはIL-2もしくはIL-12と組合わせて比較された。Hunterら（1995）J ．Immunol．155:4347-4354 ；およびBancroftら（1991）Immunol ．Revs．124:5-xxxを参照のこと。IL-1γは、IL-1αまたはIL-1βのいずれよりもIFN-1γを刺激することにおいて非常により強力であることが見出された。IL-1δおよびIL-1ε、ならびにそれらのアゴニストまたはアンタゴニストは、関連した活性を有するべきであり、代表的に、炎症応答を含む類似の免疫機能に影響を及ぼす。 IL-2活性化NK細胞において、IFN-γ生成は、抗IL-1β抗体の添加によってブロックされる。Hunterら（1995）を参照のこと。しかし、マウスIL-1γはこのブロックを克服し得、そしてIFN-γを誘導し得る。これを行い得ることが知られているのは、サイトカインのみである。さらに、インビボで、寄生虫T．Cruziに感染したマウスへのマウスIL-1γの投与は、寄生虫血症を有意に減少した。IL-1δおよびIL-1ε、ならびにそれらのアゴニストまたはアンタゴニストは、関連した機構およびエフェクターを介して操作するべきである。本開示はまた、マウスIL-1δまたはIL-1ε分子について予測される活性についての新たなアッセイを記載する。対応する活性は、霊長類を含む他の哺乳動物系において見出されるべきである。ヒトIL-1γタンパク質に類似の組換え手段によって生成される新たなマウスIL-1様分子は、IFN-γの生成においてリンパ球細胞を調節する生物学的活性を示すべきである。例えば、de Waal Malefytら、de Vr ies and de Waal Malefyt（編、1995）「インターロイキン-10」Landes Co.、Au stin、TXにおいて記載されるアッセイを参照のこと。さらに、他のIL-1またはIL -12関連のアゴニストまたはアンタゴニストと相乗作用するという実質的な可能性が存在する。複数の異なるポリペプチド鎖を含むことが予測されるレセプターは、それらの対応するリガンドに対して種特異性を示すようである。IL-1αおよびIL-1βリガンドの両方は、ヘテロ二量体のレセプターを介してシグナル伝達する。 III．核酸本発明は、例えば、本発明のタンパク質もしくは密接に関連するタンパク質をコードする、単離された核酸もしくはフラグメント、または、例えば、生物学的に活性な対応するポリペプチドをコードするための、そのフラグメントの使用を意図する。本明細書中で使用されるように、用語「単離された核酸またはフラグメント」は、それが由来する生物の天然に存在するゲノムに存在する場合、すぐに連続しない核酸（例えば、DNAまたはRNA分子）を意味する。従って、この用語は、例えば、ベクター（例えば、プラスミドまたはウイルスベクター）に組込まれる核酸；異種細胞のゲノムに（または同種細胞のゲノムであるが、それが通常存在する部位とは異なる部位で）組込まれる核酸；および別個の分子として存在する核酸（例えば、PCR増幅または制限酵素消化によって生成されるDNAフラグメント、またはインビトロ転写によって生成されるRNA分子）を記載する。この用語はまた、例えば、融合タンパク質の生成において使用され得るさらなるポリペプチド配列をコートするハイブリッド遺伝子の部分を形成する組換え（すなわち、遺伝子操作された）核酸を記載する。さらに、本発明は、特徴的なIL-1δまたはIL-1ε活性を有する生物学的に活性なタンパク質またはポリペプチドをコードする、技術によって作製される任意の操作されたまたは核酸分子を具体的に示す。代表的に、核酸は、適切な条件下で、配列番号１、３、または５において示される核酸配列セグメントと、ハイブリダイズし得る。この生物学的に活性なタンパク質またはポリペプチドは、完全長タンパク質またはフラグメントであり得、そして代表的に、配列番号２、４、または６において示されるアミノ酸配列に高度に相同なアミノ酸配列のセグメントを有する。さらに、本発明は、新たに開示されるIL-1様タンパク質に相同であるフラグメントを有するタンパク質をコードする、単離された核酸もしくは組換え核酸、またはそのフラグメントの使用を含む。単離された核酸は、５'および３'隣接において、それぞれの調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリA付加シグナル、および天然の遺伝子に由来する他の配列）を有し得る。「単離された」核酸は、例えば、ネイティブな配列（例えば、リボソーム、ポリメラーゼ、および起源種に由来する隣接するゲノム配列）を天然に伴う他の成分から分離される核酸（例えば、RNA、DNA、または混合されたポリマー）であり、これは、実質的に純粋である。この用語は、その天然に存在する環境から取り出された核酸配列を包含し、ならびに組換えまたはクローン化され、それによって天然に存在する組成物から区別可能であるDNA単離物、および化学的に合成されたアナログまたは異種系によって生物学的に合成されるアナログを含む。実質的に純粋な分子は、完全にまたは実質的に純粋にのいずれかで単離された分子の形態を含む。単離された核酸は、一般に、分子の均一な組成物であるが、いくつかの実施態様において、不均質、好ましくは微量を含む。この不均質は、代表的に、所望の生物学的機能または活性に重要でない、ポリマー末端または部分で見出される。「組換え」核酸は、その生成の方法またはその構造のいずれかによって、規定される。その生成の方法に関して、例えば、産物はプロセスによって作製され、プロセスは、例えば、ヌクレオチド配列におけるヒトの介入を含む組換え核酸技術の使用である。代表的に、この介入は、インビトロ操作を含むが、特定の情況下で、これは、より伝統的な動物育種技術を含み得る。あるいは、これは、互いに天然に連続でない２つのフラグメントの融合を含む配列を作製することによって作製される、核酸であり得るが、天然の産物（例えば、それらの天然の状態において見出されるような、天然に存在する変異体）を排除することが意味される。従って、例えば、任意の天然に存在しないベクターで細胞を形質転換することによって作製される産物が含まれ、同様に任意の合成オリゴヌクレオチドプロセスを使用して得られる配列を含む核酸が含まれる。このようなプロセスは、しばしば、代表的に、制限酵素配列認識部位を導入または除去しながら、同じまたは保存的なアミノ酸をコードする縮重コドンでコドンを置換するために行われる。あるいは、このプロセスは、通常利用可能な天然の形態において見出されない、機能の所望の組み合わせを含む単一の遺伝子実体（例えば、融合タンパク質をコードする）を作製するために、所望の機能の核酸セグメントと共に結合するために行われる。制限酵素認識部位は、しばしば、このような人工的な操作の標的であるが、他の部位特異的な標的（例えば、プロモーター、DNA複製部位、調節配列、制御配列、または他の有用な特徴）が、設計によって組込まれ得る。類似の概念が、組換えの、例えば、融合ポリペプチドについて意図される。これは、二量体反復を含む。具体的に含まれるのは、遺伝コード縮重によって、IL-1δまたは IL-1εのフラグメントに類似のポリペプチド、および種々の異なるインターロイキンまたは関連した分子（例えば、増殖因子）からの配列の融合物をコードする、合成核酸である。核酸の情況において、「フラグメント」は、少なくとも約17個のヌクレオチド、一般に少なくとも21個のヌクレオチド、より一般に少なくとも25個のヌクレオチド、通常少なくとも30個のヌクレオチド、より通常少なくとも35個のヌクレオチド、しばしば少なくとも39個のヌクレオチド、よりしばしば少なくとも45個のヌクレオチド、代表的に少なくとも50個のヌクレオチド、より代表的に少なくとも55個のヌクレオチド、通常少なくとも60個のヌクレオチド、より通常少なくとも66個のヌクレオチド、好ましくは少なくとも72個のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも79個のヌクレオチドの連続するセグメントであり、および特に好ましい実施態様において、少なくとも85個以上のヌクレオチドであり、例えば、 100個、150個、200個、250個などを含む。代表的に、異なる遺伝子配列のフラグメントは、適切な長さのストレッチ、以下に記載されるドメインのような特に規定されるセグメントにわたって、互いに比較され得る。 IL-1δまたはIL-1εをコードする核酸は、それ自体または密接に関連するタンパク質をコードする遺伝子、mRNA、およびcDNA種、ならびに、例えば、異なる個体または関連した種由来の、多型、対立遺伝子、または他の遺伝子改変体をコードするDNAを同定するために特に有用である。このようなスクリーニングのために好ましいプローブは、異なる多型改変体間で保存されるか、または特異性を欠損するヌクレオチドを含むインターロイキンのそれらの領域であり、および好ましくは完全長またはほぼ完全長である。他の状況において、多型改変体特異的な配列は、より有用である。本発明はさらに、本明細書中で記載される単離されたDNAに同一な、または高度に相同な核酸配列を有する、組換え核酸分子およびフラグメントを含む。特に、配列は、しばしば、転写、翻訳、およびDNA複製を制御するDNAセグメントに作動可能に連結される。これらのさらなるセグメントは、代表的に、所望の核酸セグメントの発現を補助する。相同な核酸配列は、互いに、または配列番号１、３、もしくは５に示される１つまたは複数の別の配列に比較される場合、有意な類似性を示す。核酸における相同性についての基準は、配列比較によって当該分野において一般に使用される相同性についての測定であるか、またはハイブリダイゼーション条件に基づくかのいずれかである。比較のハイブリダイゼーション条件は、以下により詳細に記載される。核酸配列比較の情況における実質的な同一性は、セグメントまたはそれらの相補的な鎖のいずれかが、比較される場合、適切な核酸挿入または欠失を伴って至適にアラインメントされる場合に、少なくとも約60%、一般に少なくとも66%、通常少なくとも71%、しばしば少なくとも76%、よりしばしば少なくとも80%、通常少なくとも84%、より通常少なくとも88%、代表的に約91%、より代表的に少なくとも約93%、好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも約96%〜98%以上のヌクレオチドにおいて、および特定の実施態様において、約99%以上のヌクレオチドでの高さとして、同一であることを意味し、例えば、以下に記載されるセグメントのような構造ドメインをコードするセグメントを含む。あるいは、実質的な同一性は、セグメントが、選択的なハイブリダイゼーション条件下で、代表的に表１または２に由来する配列を使用して、鎖またはその相補物にハイブリダイズする場合、存在する。代表的に、選択的なハイブリダイゼーションは、少なくとも約14個のヌクレオチドのストレッチにわたって、少なくとも約55%、より代表的には少なくとも約65%、好ましくは少なくとも約75%、およびより好ましくは少なくとも約90%の相同性が存在する場合に生じる。Kanehisa（1984）Nuc ． Acids Res． 12:203-213を参照のこと。記載されるように、相同性比較の長さは、より長いストレッチにわたり得、そしてある実施態様において、少なくとも約17 個のヌクレオチド、一般に少なくとも約20個のヌクレオチド、通常少なくとも約 24個のヌクレオチド、通常少なくとも約28個のヌクレオチド、代表的に少なくとも約32個のヌクレオチド、より代表的に少なくとも約40個のヌクレオチド、好ましくは少なくとも50個のヌクレオチド、およびより好ましくは少なくとも約75個〜100個以上のヌクレオチドである。ハイブリダイゼーション情況における相同性に関して、ストリンジェントな条件は、塩、温度、有機溶媒、およびハイブリダイゼーション反応において代表的に制御される他のパラメーターのストリンジェントな組合わせの条件である。ストリンジェントな温度条件は、通常、約30℃を上回り、より通常約37℃を上回り、代表的に約45℃を上回り、より代表的に約55℃を上回り、好ましくは約65℃を上回り、より好ましくは約70℃を上回る温度を含む。ストリンジェントな塩条件は、通常約500mM未満であり、通常約400mM未満であり、より通常約300mM未満であり、代表的に約200mM未満であり、好ましくは約100mM未満であり、およびより好ましくは約80mM未満であり、さらに約20mM未満に減少される。しかし、パラメーターの組み合わせは、任意の単一のパラメーターの測定よりも非常に重要である。例えば、WetmurおよびDavidson（1968）J ．Mol．Biol．31:349-370（これはそれによって本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。単離されたDNAは、ヌクレオチド置換、ヌクレオチド欠失、ヌクレオチド挿入、およびヌクレオチドストレッチの反転によって容易に改変され得る。これらの改変は、本発明のタンパク質またはその誘導体をコードする新規なDNA配列を生じる。これらの改変された配列は、変異体タンパク質（ムテイン）を生成するためにまたは改変体種の発現を増強するために使用され得る。増強された発現は、遺伝子増幅、増加された転写、増加された翻訳、および他の機構を含み得る。このような変異体IL-1様誘導体は、タンパク質またはそのフラグメントの予め決定された変異または部位特異的な変異を包含し、遺伝コード縮重を使用するサイレント変異を含む。本明細書中で使用されるように「変異体IL-1δ」は、他の点では上述に記載されるようなIL-1δの相同性の規定の中にあるが、欠失、置換、または挿入の手段によって、天然において見出されるような他のIL-1様タンパク質のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有する、ポリペプチドを含む。特に、「部位特異的変異体IL-1δ」は、表１のタンパク質と実質的な相同性を有するタンパク質を含み、および代表的に、本明細書中で開示される形態の生物学的活性の大部分を共有する。部位特異的変異部位は、予め決定されるが、変異は部位特異的である必要はない。哺乳動物IL-1δ変異誘発は、発現と連関して、遺伝子においてアミノ酸挿入または欠失を作製することによって達成され得る。置換、欠失、挿入、または任意の組合わせが、最終的な構築物に到達するために作製され得る。挿入は、アミノ末端またはカルボキシ末端の融合を含む。ランダムな変異誘発は、標的コドンで行われ得、次いで、発現される哺乳動物IL-1δ変異体は、所望の活性についてスクリーニングされ得る。公知の配列を有するDNAにおいて予め決定された部位で置換変異を作製するための方法は、当該分野において周知であり、例えば、M1 3プライマー変異による。Sambrookら（1989）およびAusubelら（1987および定期的な増刊）をまた参照のこと。 DNAにおける変異誘発は、通常、リーディングフレームの外側にコード配列を置くべきではなく、好ましくは、ループまたはヘアピンのような２次mRNA構造を生成するためにハイブリダイズし得る相補的な領域を作製しない。 BeaucageおよびCarruthers（1981）Tetra ．Letts．22:1859-1862によって記載されるホスホラミダイト法は、適切な合成DNAフラグメントを生成する。２本鎖フラグメントは、しばしば、相補的な鎖を合成し、そして適切な条件下で、鎖を共にアニーリングすることによって、または適切なプライマー配列とともにDNA ポリメラーゼを使用して、相補的な鎖を付加することによってのいずれかで、得られる。ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）技術は、しばしば、変異誘発において適用され得る。あるいは、変異誘発プライマーは、一般に、予め決定された部位で規定された変異を作製するための方法において使用される。例えば、Innisら（編、199 0）PCR Protocols ：A Guide to Method and Applications Academic Press、San Diego、CA；およびDieffenbachおよびDveksler（1995；編）PCR Primer ：A Lab oratory Manual Cold Spring Harbor Press、CSH、NYを参照のこと。 IV．タンパク質、ペプチド上記されるように、本発明は、哺乳動物IL-1δまたはIL-1εを含み、例えば、その配列は、配列番号２、４、または６において開示され、および上記される。対立遺伝子または他の改変体もまた意図され、例えば、他の配列（エピトープ、タグ、および機能的ドメインを含む）と、このような配列の部分とを組合わせる融合タンパク質を含む。本発明はまた、組換えタンパク質（例えば、これらの齧歯類タンパク質からのセグメントを使用する異種融合タンパク質）を提供する。異種融合タンパク質は、天然で同じ様式において通常融合されないタンパク質またはセグメントの融合である。従って、インターロイキンと増殖因子との融合産物は、代表的なペプチド結合において融合される配列を有する連続的なタンパク質分子であり、代表的に単一の翻訳産物として作製され、そして各供給源ペプチドに由来する特性を示す。同様の概念が、異種核酸配列に適用される。さらに、新規な構築物は、他の関連のタンパク質（例えば、増殖因子または他のサイトカイン）からの類似の機能的または構造ドメインを組合わせることから作製され得る。例えば、レセプター結合または他のセグメントは、異なる新規な融合ポリペプチドまたはフラグメント間で「交換され」得る。例えば、Cunningh amら（1989）Science 243:1330-1336；およびO'Dowdら（1988）J ．Biol．Chem． 263:15985-15992（これらのそれぞれは本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。従って、特異性の新規な組合わせを示す新規なキメラポリペプチドは、レセプター結合特異性の機能的な結合から生じる。例えば、他の関連のリガンド分子からのレセプター結合ドメインは、付加され得るか、または本発明のタンパク質または関連のタンパク質の他のドメインを置換し得る。得られるタンパク質は、しばしば、ハイブリッド機能および特性を有する。例えば、融合タンパク質は、特定の器官への、融合タンパク質の隔離を提供するために作用し得る、標的化ドメイン（例えば、脾臓細胞によって特異的に結合され、および脾臓に蓄積するように作用するリガンド部分）を含み得る。候補融合パートナーおよび配列は、種々の配列データベース（例えば、GenBan k、c/o IntelliGenetics、Mountain View、CA；およびBCG、University of Wisc onsin Biotechnology Computing Group、Madison，WT（これらは、各々本明細書中に参考として援用される）から選択され得る。本発明は特に、IL-1δまたはIL-1εのアゴニストまたはアンタゴニストとして作用するムテインを提供する。IL-1ファミリーの他のメンバーと、マウスIL-1δ およびマウスIL-1εとの構造アラインメントは、保存された特徴／残基を、特に β-三つ葉型折畳みに折畳まれる12個のβ鎖、を示す（図１Ａ；表１および表３を参照のこと）。IL-1δの12個のβ鎖ドメインはそれぞれ（表１）、配列番号２のLeu8-Asp14、Val19-Asn24、Leu27-Gly31、Ile43-Asn48、Ser56-Val62、Gln67- Thr73、Pro77-Glu82、Phe99-Met106、Leu108-Ser114、Phe121-Ser125、Gln130-T hr135、およびGln153-Asp156として引用され；一方、IL-1εの12個のβ鎖ドメインはそれぞれ（表１）、配列番号６のSer13-Asp19、Val24-Asn29、Ile31-Val35 、Ile46-Cys51、Asp63-Val69、Ser74-Lys80、Pro85-Gly90、Ser107-Ser114、Thr 116-Ser122、Phe129-Cys133、Cys138-Thr143、およびIle157-Hls160として引用される。 II-1ファミリーの他のメンバーとの、マウスIL-1δおよびIL-1ε配列のアラインメント（met開始残基を、第１のアミノ酸として使用する）は、βコンホメーションが、他のII-1ファミリーメンバーにおける類似の配列に対応したことを示す（表１、２、および３を参照のこと）。Bazanら（1996）Nature 379:591；Lod iら（1994）Science 263:1762-1766；SayleおよびMilner-White（1995）TIBS 20 :374-376；およびGronenbergら（1991）Protein Engineering 4:263-269をまた、参照のこと。 IL-1αおよびIL-1βリガンドは、一次レセプターとしてIL-1レセプターＩ型を結合し、次いで、この複合体は、IL-1レセプターIII型と高い親和性のレセプター複合体を形成する。このようなレセプターサブユニットは、おそらく、新規な IL-1ファミリーメンバーと共有される。マウスIL-1γは、公知のマウスIL-1レセプターＩ型、II型（デコイレセプター）、またはIII型に結合しない。さらに、マウスIGIFの生物学的活性は、抗Ｉ型、II型、またはIII型抗体でブロックされ得ない。このことは、関連のマウスI GIFは、すでに単離されたが、IGIFについてのレセプターとして未だ同定されていないIL-1レセプターに関連されるレセプターに結合することを示唆する。しかし、IL-1β、天然のIL-1レセプターアンタゴニスト（IL-1Ra）、およびIL -1Ra/IL-1レセプターＩ型の共存構造（co-structure）について解明された構造は、マウスIL-1δまたはIL-1εアンタゴニストをどのように作製するのかを示唆する（例えば、IL-1ファミリーメンバーの種々の種の例について、登録番号：U6 5590、gbU19844、gbU19845、gi2173679、gi2170133、gi2172939、gbM15300、gbM 28983、gbU65590、gbM74294、embx04964、gi2169698、gi2169368、emb270047、g i914939、gi220782、embX52731、embX56972、およびembX12497を参照のこと）。成熟IL-1δまたはIL-1εの構造解析は、そのβ三つ葉型構造が、３つの結合部位（Ａ、Ｂ、およびＣと称される；図１Ａ）にわたってIL-1レセプターと接触することを示唆する。部位ＡおよびＣは、IL-1の第１のレセプターサブユニット（α ）に結合するが、部位Ｂは、IL-1の第２のレセプターサブユニット（β）に結合する。IL-1ファミリーメンバーのホモロジー配列比較は、IL-1レセプターに対する唯一の公知のアンタゴニスト（IL-1ra；表２）のみが、β4およびβ５構造によって結合されるアミノ酸ドメインを欠いていることを示す。このドメインは、 IL-1の第２のレセプターサブユニットに結合するIL-1δまたはIL-1εにおける部位Ｂの部分（表２）にマップされ、その不在は、他のIL-1ファミリーメンバー間のホモロジー比較によって証明されるように、その不在が、アンタゴニスト活性を付与することを示唆する。接触部位Ｂのこのループ部分は、約７〜10個のアミノ酸残基にわたるが、IL-1RAにおいて、ループは、わずか２残基を残存して、「切り取られる」。それゆえ、IL-1RAは、通常、レセプターＩ型に結合するが、レセプターIII型と相互作用し得ない。これは、IL-1RAを、有効なIL-1アンタゴニストにする。 IL-1δまたはIL-1εにおける対応する位置（β4とβ5との間）は、IL-1レセプター型に対する主な結合セグメントの部分であるポリペプチドループを形成するドメインを規定する（表２における部位Ｂ）。ループは、成熟IL-1δまたはIL-1 εタンパク質の中心軸に突出するとして、図１Ａにおいて絵で描かれ、矢印４と５との間に位置される。より正確には、ループは、IL-1δについて、配列番号２のアミノ酸残基Pro47〜Ala53によって、およびIL-1εについて、配列番号６のアミノ酸残基Pro50〜Glu58によって、規定される。従って、IL-1δまたはIL-1εアンタゴニスト活性は、β4とβ5との間に位置されるアミノ酸の対応する部分の全てまたは適切な部分の除去によって、作製されるべきである。このことは、β4 鎖とβ5鎖との間のループに対する類似の改変が、予測可能な生物学的活性を伴う改変体を導くことを示唆する。マウスIL-1RAを使用して、マウスIL-1RA残基の、それらのマウスIL-1β残基での置換えが、IL-1RA改変体にIL-1活性を導入したことが示された（次いで、IL-1RAは、III型レセプターに結合し得た）。類似の置換は、III型レセプターが、おそらく、マウスIL-1δもしくはIL-1εタンパク質、またはムテインによって使用され得ることを確立する。さらなる部位Ｂの接触は、IL-1δにおいて、配列番号２のアミノ酸残基８〜11、13、112、114〜117 、158、および160によって、規定される。対応するさらなる部位Ｂの接触は、IL -1εにおいて、配列番号２のアミノ酸残基３〜６、８、104、106〜109、154、および156によって規定される。部位ＡおよびＣ（表２）は、第ｌのIL-1レセプターサブユニット（例えば、α レセプターサブユニット）への、IL-1δまたはIL-1εの結合を媒介する。部位Ａ接触は、IL-1δにおいて、配列番号２のアミノ酸残基13〜16、22〜24、29、31〜 37、39、126〜131、151、および153に対応し；一方、部位Ｃ接触は、IL-1δにおいて、配列番号２のアミノ酸残基74〜98に対応する。部位Ａ接触は、IL-1εにおいて、配列番号２のアミノ酸残基18〜21、21〜29、33、35〜42、134〜139、155 、および157によって規定され；一方、部位Ｃ接触は、IL-1εにおいて、配列番号２のアミノ酸残基81〜106に対応する。例えば、対応する領域における、IL-1δまたはIL-1εリガンド配列の他の種対応物における類似の改変は、レセプターと類似の相互作用を提供するべきである。マウス配列またはヒト配列のいずれかでの置換が示される。逆に、レセプター結合相互作用領域から離れた保存的な置換は、おそらく、大部分の生物学的活性を保存する。哺乳動物IL-1δの「誘導体」は、アミノ酸配列変異体、グリコシル化改変体、代謝誘導体、および他の化学部分との共有結合体または凝集結合体を含む。共有結合誘導体は、例えば、当該分野において周知である手段によって、IL-1δアミノ酸側鎖において、またはＮもしくはＣ末端で見出される基への、機能性の連結によって調製され得る。これらの誘導体としては、カルボキシル末端、またはカルポキシル側鎖を含む残基の脂肪族エステルまたはアミド、水酸基を含有する残基のO-アシル誘導体、およびアミノ末端アミノ酸もしくはアミノ基を含有する残基（例えば、リジンまたはアルギニン）のN-アシル誘導体が挙げられ得るが、これらに限定されない。アシル基は、C3〜C18の通常のアルキルを含むアルキル部分の群から選択され、それによってアルカノイルアロイル種を形成する。特に、グリコシル化改変が含まれ、例えば、その合成およびプロセシングの間に、またはさらなるプロセシング工程において、ポリペプチドのグリコシル化パターンを改変することによって作製される。これを達成するための特に好ましい手段は、このようなプロセシングを通常提供する細胞に由来するグリコシル化酵素（例えば、哺乳動物グリコシル化酵素）に、ポリペプチドを曝露することによる。脱グリコシル化酵素もまた、意図される。他のマイナーな改変（リン酸化アミノ酸残基（例えば、ホスホチロシン、ホスホセリン、またはホスホスレオニン）を含む）を有する、同じ一次アミノ酸配列のバージョンがまた、包含される。誘導体の主要な群は、ポリペプチドの他のタンパク質と、インターロイキンまたはそのフラグメントとの共有結合体である。これらの誘導体は、ＮまたはＣ末端融合のような組換え培養において、または反応性の側鎖を介する架橋タンパク質におけるそれらの有用性について当該分野において公知の試薬の使用によって、合成され得る。架橋剤での好ましい誘導体化部位は、遊離アミノ基、炭水化物部分、およびシステイン残基である。インターロイキンと、他の相同タンパク質または異種タンパク質との間の融合ポリペプチドもまた、提供される。同種ポリペプチドは、異なる増殖因子間の融合物であり得、例えば、複数の異なるレセプターにリガンド特異性を示すハイブリッドタンパク質、またはそのレセプターへの結合の広げられた特異性または弱められた特異性を有し得るリガンドを生じる。同様に、異種融合物が構築され得、これは由来するタンパク質の特性または活性の組合せを示す。代表的な例は、レセプターポリペプチド（例えば、ルシフェラーゼ）と、レセプターのセグメントまたはドメイン（例えば、リガンド結合セグメント）との融合物であり、それによって、所望のリガンドの存在または位置が、容易に決定され得る。例えば、Du llら、米国特許第4,859,609号（これは、それによって本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。他の遺伝子融合パートナーとしては、グルタチオン -S-トランスフェラーゼ（GST）、細菌のβガラクトシダーゼ、trpE、プロテインＡ、β-ラクタマーゼ、αアミラーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、および酵母α接合因子が挙げられる。例えば、Godowskiら（1988）Science 241:812-816 を参照のこと。 BeaucageおよびCarruthers（1981）Tetra ．Letts．22:1859-1862によって記載されるホスホルアミダイト法は、適切な合成DNAフラグメントを生成する。２本鎖フラグメントは、しばしば、相補的な鎖を合成し、そして適切な条件下で、鎖を共にアニーリングすることによって、または適切なプライマー配列とともにDN Aポリメラーゼを使用して、相補的な鎖を付加することによってのいずれかで、得られる。このようなポリペプチドはまた、リン酸化、スルホン化、ビオチン化、または他の部分（特に、リン酸基に類似の分子形状を有する部分）の付加もしくは除去によって化学的に改変されたアミノ酸残基を有し得る。いくつかの実施態様において、改変は、有用な標識化試薬であるか、または精製標的（例えば、親和性リガンド）として作用する。融合タンパク質は、代表的に、組換え核酸法によってまたは合成ポリペプチド法によってのいずれかで作製され得る。核酸操作および発現についての技術は、例えば、Sambrookら（1989）Molecular Cloning ：A Laboratory Manual（第２版）第１〜３巻、Coldspring Harbor Laboratory、およびAusubelら（編）（1987 および定期的な増刊）Current Protocols in Molecular Biology、Greene/Wiley 、New York（これらはそれぞれ、本明細書中に参考として援用される）において、一般に記載される。ポリペプチドの合成についての技術は、例えば、Merrifie ld（1963）J ．Amer．Chem．Soc．85:2149-2156；Merrifield（1986）Science 23 2:341-347；およびAthertonら（1989）Solid Phase Peptide Synthesis ：A Prac tical Approach 、IRL Press、Oxford；これらのそれぞれは、本明細書中に参考として援用される、において記載される。より長いポリペプチドを作製するための方法について、Dawsonら（1994）Science 266:776-779もまた参照のこと。別の実施態様において、本発明は、IL-1ファミリーメンバーと標的レセプターとの間の結合をブロックする、IL-1δまたはIL-1εの実質的に精製されたペプチドフラグメントに関する。このようなペプチドフラグメントは、抗原投与に対する炎症反応の研究、およびより有効な抗炎症療法の開発において、研究および診断の道具を示し得る。さらに、IL-1δまたはIL-1εの単離されたおよび精製されたペプチドフラグメントを含有する薬学的組成物は、有効な抗炎症療法を示し得る。本明細書中で使用されるように、用語「実質的に精製された」は、天然で関連される他のタンパク質、脂質、炭水化物、核酸、または他の生物学的材料を実質的に含有しない、ペプチドのような分子をいう。例えば、実質的に純粋な、ポリペプチドのような分子は、目的の分子の少なくとも60乾燥重量%であり得る。当業者は、標準的な精製方法を使用して、IL-1δまたはIL-1εペプチドを精製し得、そしてポリペプチドの純度は、標準的な方法（例えば、ポリアクリルアミド電気泳動（例えば、SDS-PAGE）、カラムクロマトグラフィー（例えば、高速液体クロマトグラフィー（HPLC））、およびアミノ末端アミノ酸配列分析を含む）を使用して決定され得る。本発明は、天然に存在するIL-1δまたはIL-1εのフラグメントのみでなく、IL -1ファミリーメンバーと標的細胞との間の結合をブロックする、IL-1δまたはIL -1ε変異体、ならびにIL-1δおよびIL-1εの化学的に合成された誘導体にも関する。例えば、IL-1δまたはIL-1εのアミノ酸配列における変化は、本発明において意図される。IL-1δまたはIL-1εは、タンパク質をコードする核酸配列を変化することによって、変化され得る。好ましくは、同じまたは類似の特性を有するアミノ酸を使用して、保存的なアミノ酸変化のみが行われる。例示的なアミノ酸置換は、以下の変化を含む：アラニンからセリン；アルギニンからリジン；アスパラギンからグルタミンまたはヒスチジン；アスパラギン酸からグルタミン酸；システインからセリン；グルタミンからアスパラギン；グルタミン酸からアスパラギン酸；グリシンからプロリン；ヒスチジンからアスパラギンまたはグルタミン；イソロイシンからロイシンまたはバリン；ロイシンからバリンまたはイソロイシン；リジンからアルギニン、グルタミン、またはグルタミン酸；メチオニンからロイシンまたはイソロイシン；フェニルアラニンからチロシン、ロイシン、またはメチオニン；セリンからスレオニン；スレオニンからセリン；トリプトファンからチロシン；チロシンからトリプトファンまたはフェニルアラニン；バリンからイソロイシンまたはロイシン。さらに、IL-1δまたはIL-1εの他の改変体およびフラグメントは、本発明において使用され得る。改変体は、アナログ、ホモログ、誘導体、ムテイン、および IL-1ファミリーメンバーと標的レセプターとの間の結合をブロックする能力を保持するIL-1δまたはIL-1εの模倣物を含む。IL-1δまたはIL-1εのフラグメントとは、この能力をまた保持する、配列番号２、４、または６において規定されるようなIL-1δまたはIL-1εのアミノ酸配列の部分をいう。改変体またはフラグメントは、化学的な改変によって、タンパク質分解性の酵素消化によって、またはそれらの組合わせによって、IL-1δまたはIL-1ε自身から直接的に作製され得る。さらに、遺伝子操作技術、ならびにアミノ酸残基から直接的にポリペプチドを合成する方法が、用いられ得る。 IL-1δまたはIL-1εの結合および機能を模倣する非ペプチド化合物（「模倣物」）は、Saragoviら（1991）Science 253:792-95によって概説されるアプローチによって生成され得る。模倣物は、タンパク質の二次構造のエレメントを模倣物分子である。例えば、Johnsonら「Peptide Turn Mimetics」、Pezzutoら（編、1 993）Biotechnology and Pharmacy、ChapmanおよびHall、New Yorkを参照のこと。ペプチド模倣物の使用の背後にある基礎の原理は、主に分子の相互作用を容易にするような方向にアミノ酸側鎖を向けるように、タンパク質のペプチド骨格が存在することである。本発明の目的のために、適切な模倣物が、IL-1δまたはIL -1ε自体の等価物であるとして考慮され得る。改変体およびフラグメントはまた、ゲノムクローニング法またはcDNAクローニング法を用いる組換え技術によって作製され得る。部位特異的および領域特異的変異誘発技術が、用いられ得る。例えば、Ausubelら（編、1989および定期的な更新）第１巻、第８章、Current Protocols in Molecular Biology Wiley and S ons；およびOxenderおよびFox（編）Protein Engineering Liss、Inc.を参照のこと。さらに、リンカー−スキャニングおよびPCR媒介性の技術が、変異誘発のために用いられ得る。例えば、Erlich（編、1989）PCR Technology Stockton Pr essを参照のこと。上述の任意の技術とともに使用するための、タンパク質配列決定、構造およびモデリングアプローチが、例えば、OxenderおよびFox（編）Pr otein Engineering Liss、Inc；およびAusubelら（編、1989および定期的な更新）Current Protocols in Molecular Biology Wiley and Sonsにおいて開示される。本発明はまた、アミノ酸配列における改変またはグリコシル化以外のIL-1δの誘導体の使用を意図する。このような誘導体は、化学部分との共有結合的なまたは凝集的な会合を含み得る。これらの誘導体は、一般に、３つのクラスに分類される：（１）塩、（２）側鎖および末端残基の共有結合的な改変、ならびに（３）例えば、細胞膜との、吸着複合体。このような共有結合誘導体または凝集誘導体は、免疫原として、イムノアッセイにおける試薬として、またはレセプターまたは他の結合因子（例えば、抗体）のアフィニティー精製のためのような精製方法において、有用である。例えば、IL-1δリガンドは、IL-1δレセプター、抗体、または他の類似の分子のアッセイまたは精製における使用のために、当該分野において周知である方法により、臭化シアン活性化SEPHAROSEのような固体支持体へ共有結合によって固定化され得るか、または、グルタルアルデヒド架橋を用いるかまたは用いないで、ポリオレフィン表面上に吸着され得る。IL-1δはまた、検出可能な基で標識され得、例えばクロラミンＴ手順によって放射性ヨウ素化され得るか、希土類キレートに共有結合され得るか、または診断アッセイにおける使用のために、別の蛍光部分に結合され得る。本発明のIL-1δは、インターロイキンまたは任意のそのフラグメントに特異的な（例えば、他のIL-1ファミリーメンバーとIL-1δとの間を区別し得る）、抗血清または抗体の生成のための免疫原として使用され得る。精製されたインターロイキンは、モノクローナル抗体、またはタンパク質を含有する不純な調製物の種々の形態での免疫によって調製された抗原結合フラグメントを、スクリーニングするために使用され得る。特に、用語「抗体」はまた、天然の抗体の抗原結合フラグメントを包含する。精製されたインターロイキンはまた、上昇したレベルの発現の存在に応答して産生された任意の抗体、または内因性サイトカインに対する抗体産生を導く免疫障害を検出するための試薬として使用され得る。さらに、IL-1δフラグメントはまた、すぐ下に記載されるように、本発明の抗体を産生するための免疫原として役立ち得る。例えば、本発明は、結合親和性を有する、または配列番号２において示されるアミノ酸配列、そのフラグメント、または相同なペプチドに対して惹起される抗体を意図する。特に、本発明は、ネイティブなサイトカインの外部タンパク質表面で曝露されることが予測されるか、または実際に曝露される、特異的なフラグメントに対し、結合親和性を有するかまたはそれに対して惹起された抗体を意図する。これらのインターロイキンに対する生理学的応答のブロックは、おそらく競合的阻害を介する、レセプターに対するリガンドの結合の阻害から生じ得る。従って、本発明のインビトロアッセイにおいて、抗体、またはこれらの抗体のリガンド結合セグメント、または固相基体に付着されるフラグメントを、しばしば使用する。これらのアッセイはまた、結合領域の変異および改変、またはリガンドの変異または改変（例えば、リガンドアナログ）のいずれかの効果の診断的な決定を許容する。本発明はまた、競合的な薬物スクリーニングアッセイの使用を意図し、例えば、インターロイキンまたはフラグメントに対する中和抗体は、レセプターまたは抗体への結合について、試験化合物と競合する。この様式において、中和抗体またはフラグメントは、レセプターに対する１つ以上の結合部位を共有する任意のポリペプチドの存在を検出するために使用され得、およびそうでなければインターロイキンを結合し得る、レセプターにおける結合部位を占有するために使用され得る。Ｖ．核酸およびタンパク質の作製タンパク質またはそのフラグメントをコードするDNAは、化学合成、cDNAライブラリーのスクリーニングによって、または広範に多様な細胞株または組識サンプルから調製されたゲノムライブラリーのスクリーニングによって、得られ得る。天然の配列は、標準的な方法、および本明細書中に、例えば、配列番号１において提供される配列を使用して、単離され得る。他の種対応物は、ハイブリダイゼーション技術によって、または種々のPCR技術によって、配列データベースにおける検索と組合わせて、またはこの検索によって、同定され得る。このDNAは、完全長のインターロイキンまたはフラグメントの合成のために、広範に多様な宿主細胞において発現され得、次いで完全長のインターロイキンまたはフラグメントは、例えば、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を生成するために；結合研究のために；改変されたアゴニスト／アンタゴニスト分子の構築および発現のために；および構造／機能研究のために、使用され得る。各改変体またはそのフラグメントは、適切な発現ベクターで形質転換またはトランスフェクトされる宿主細胞において発現され得る。これらの分子は、組換え宿主に由来する分子以外のタンパク質または細胞性の混入物を実質的に含有しないかもしれず、それゆえ、薬学的に受容可能なキャリアおよび／または希釈剤と組合わされる場合、薬学的組成物において特に有用である。タンパク質、またはその部分は、他のタンパク質との融合物として発現され得る。発現ベクターは、代表的に、所望のレセプター遺伝子またはそのフラグメント（通常、適切な宿主細胞において認識される適切な遺伝子制御エレメントに作動可能に連結される）を含有する自律複製するDNAまたはRNA構築物である。これらのコントロールエレメントは、適切な宿主内における発現を生じ得る。発現を生じるために必要な制御エレメントの特定のタイプは、結果として使用される宿主細胞に依存する。一般に、遺伝子制御エレメントは、原核生物プロモーター系または真核生物プロモーター発現制御系を含み得、そして代表的に、転写プロモーター、必要に応じて、転写の開始を制御するオペレーター、mRNAの発現のレベルを上昇する転写エンハンサー、適切なリボソーム結合部位をコードする配列、ならびに転写および翻訳を終結する配列を含み得る。発現ベクターはまた、通常、ベクターが宿主細胞から独立して複製することを許容する、複製の起点を含む。本発明のベクターとしては、記載されるようなタンパク質をコードするDNA、または生物学的に活性な等価なポリペプチドをコードするそのフラグメントを含むベクターが挙げられる。DNAは、ウイルスプロモーターの制御下にあり得、そして選択マーカーをコードし得る。本発明はさらに、原核生物宿主または真核生物宿主において、このようなタンパク質をコードする真核生物cDNAを発現し得る、このような発現ベクターの使用を意図し、ここでベクターは、宿主と適合性であり、およびここでレセプターをコードする真核生物cDNAはベクターに挿入され、それによってベクターを含む宿主の増殖は、問題のcDNAを発現する。通常、発現ベクターは、それらの宿主細胞における安定な複製にのために、または細胞当たりの所望の遺伝子の総コピー数を非常に増加する増幅のために、設計される。発現ベクターが、宿主細胞において複製することが、いつも必要であるわけではなく、例えば、宿主細胞によって認識される複製起点を含まないベクターを使用して、種々の宿主細胞において、インターロイキンタンパク質またはそのフラグメントの一過性の発現を生じることが可能である。組換えによる、宿主DNAへの、タンパク質をコードする部分またはそのフラグメントの組込みを引き起こすベクターの使用はまた、可能である。本明細書中で使用されるように、ベクターは、プラスミド、ウイルス、バクテリオファージ、組込み可能なDNAフラグメント、および宿主のゲノムへのDNAフラグメントの組込みを可能にする他のビヒクルを含む。発現ベクターは、作動可能に連結された遺伝子の発現を達成する遺伝子制御エレメントを含む特殊化されたベクターである。プラスミドは、ベクターの最も一般に使用される形態であるが、等価な機能を提供し、および当該分野において公知であるか、または公知になる、全ての他の形態は、本明細書における使用に適切である。例えば、Pouwels ら（1985および増刊）Cloning Vectors ：A Laboratory Manual、Elsevier、N.Y. 、およびRodriquezら（編）Vectors ：A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses 、Buttersworth、Boston、1988（これらは本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。形質転換された細胞は、組換えDNA技術を使用して構築されたレセプターベクターで形質転換されたまたはトランスフェクトされた細胞、好ましくは哺乳動物細胞である。形質転換された宿主細胞は、通常、所望のタンパク質またはそのフラグメントを発現するが、そのDNAをクローニングする、増幅する、および操作する目的のために、対象のタンパク質を発現する必要はない。本発明はさらに、栄養培地において、形質転換された細胞を培養することを意図し、従って、インターロイキンが、培養物中に蓄積することを許容する。タンパク質は、培養物または培養培地のいずれかから、回収され得る。本発明の目的のために、核酸配列は、互いに機能的に関連する場合、作動可能に連結される。例えば、プレ配列または分泌リーダーのDNAは、DNAがプレタンパク質として発現されるか、またはポリペプチドの細胞膜への方向付けにおいて、またはポリペプチドの分泌に関与する場合、ポリペプチドに作動可能に連結される。プロモーターは、これがポリペプチドの転写を制御する場合、コード配列に作動可能に連結され；リポソーム結合部位は、これが翻訳を許容するように配置される場合、コード配列に作動可能に連結される。通常、作動可能に連結されるというのは、連続なこと、およびリーディングフレーム内を意味するが、特定の遺伝的エレメント（例えば、リプレッサー遺伝子）は、連続して連結されないが、次いで発現を制御するオペレーター配列になお結合する。適切な宿主細胞は、原核生物、下等真核生物、および高等真核生物を含む。原核生物は、グラム陽性菌生物およびグラム陰性菌生物（例えば、E.coliおよびB. subtilis ）の両方を含む。下等真核生物は、酵母（例えば、S.cerevisiaeおよびPichia ）、およびDictyostelium属の種を含む。高等真核生物は、非哺乳動物起源（例えば、昆虫細胞、およびトリ）、ならびに哺乳動物起源（例えば、ヒト、霊長類、および齧歯類）の両方の、動物細胞からの樹立された組織培養細胞株を含む。原核生物宿主−ベクター系は、多くの異なる種についての広範に多様なベクターを含む。本明細書中で使用されるように、E.coliおよびそのベクターは一般に使用され、他の原核生物において使用される等価なベクターを含む。DNAを増幅するための代表的なベクターは、pBR322または多くのその誘導体である。レセプターまたはそのフラグメントを発現するために使用され得るベクターとしては、 lacプロモーター（pUCシリーズ）；trpプロモーター（pBR322-trp）；Ippプロモーター（pINシリーズ）；λpPまたはpRプロモーター（pOTS）；またはptacのようなハイブリッドプロモーター（pDR540）を含むベクターが挙げられるが、これらに限定されない。Brosiusら（1988）「λ-、trp-、lac-、およびIpp-由来のプロモーターを用いる発現ベクター」、Vactors ：A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses 、（RodriguezおよびDenhardt編）Buttersworth、Bost on、10章、205-236頁（これは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。下等真核生物（例えば、酵母およびDictyostelium）は、IL-1γ配列を含有するベクターで形質転換され得る。本発明の目的のために、大部分の一般の下等真核生物宿主は、パン酵母、Saccharomyces cerevisiaeである。これは下等真核生物を代表するために一般に使用されるが、多くの他の株および種がまた利用可能である。酵母ベクターは、代表的に、複製起点（組込み型でない限り）、選択遺伝子、プロモーター、レセプターまたはそのフラグメントをコードするDNA、ならびに翻訳終止配列、ポリアデニル化配列、および転写終結の配列からなる。酵母についての適切な発現ベクターとしては、3-ホスホグリセリン酸キナーゼおよび種々の他の解糖酵素遺伝子のプロモーターのような構成性プロモーター、またはアルコールデヒドロゲナーゼ２プロモーターまたはメタロチオネインプロモーターのような誘導性のプロモーターを含む。適切なベクターは、以下のタイプの誘導体を含む：自律複製低コピー数型（例えば、YRpシリーズ）、自律複製高コピー数型（例えば、YEpシリーズ）；組込み型（例えば、YIpシリーズ）またはミ二染色体（例えば、YCpシリーズ）。高等真核生物組織培養細胞は、通常、機能的に活性なインターロイキンタンパク質の発現のための、好ましい宿主細胞である。おおむね、無脊椎動物供給源からであっても、脊椎動物供給源からであっても、任意の高等真核生物組織培養細胞株（例えば、昆虫バキュロウイルス発現系）が、作用可能である。しかし、哺乳動物細胞が好ましい。このような細胞の形質転換またはトランスフェクション、および増殖は、日常的な手順となった。有用な細胞株の例としては、HeLa細胞、チャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞株、ベビーラット腎臓（BRK）細胞株、昆虫細胞株、トリ細胞株、およびサル（COS）細胞株が挙げられる。このような細胞株についての発現ベクターは、通常、複製起点、プロモーター、翻訳開始部位、RNAスプライス部位（ゲノムDNAが使用される場合）、ポリアデニル化部位、および転写終結部位を含む。これらのベクターはまた、通常、選択遺伝子または増幅遺伝子を含む。適切な発現ベクターは、プラスミド、ウイルス、またはレトロウイルス（例えば、アデノウイルス、SV40、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、またはサイトメガロウイルスのような、供給源に由来する、プロモーターを保有する）であり得る。適切な発現ベクターの代表的な例としては、pCDNA1； pCD（Okayamaら（1985）Mol ．Cell Biol．5:1136-1142を参照のこと）；pMC1neo ポリA（Thomasら（1987）Cell 5l:503-512を参照のこと）；およびpAC373または pAC610のようなバキュロウイルスベクターが挙げられる。分泌されるタンパク質について、オープンリーディングフレームは、通常、そのＮ末端で、シグナルペプチドに共有結合される、成熟産物または分泌産物からなるポリペプチドをコードする。シグナルペプチドは、成熟な、または活性な、ポリペプチドの分泌の前に切断される。切断部位は、経験則から非常に高い程度の正確さで予測され得（例えば、von-Heijne（1986）Nucleic Acids Research 1 4：4683-4690）、そしてシグナルペプチドの正確なアミノ酸組成は、その機能に重要でないようである（例えば、Randallら（1989）Science 243:1156-1159；Ka iserら（1987）Science 235:312-317）。特定のまたは規定されたグリコシル化パターンを提供する系において、これらのポリペプチドを発現することが、しばしば所望される。この場合において、通常のパターンは、発現系によって天然に提供されるパターンである。しかし、パターンは、ポリペプチド（例えば、非グリコシル化形態）を、異種発現系に導入される適切なグリコシル化するタンパク質に曝露することによって、改変可能である。例えば、インターロイキン遺伝子は、哺乳動物または他のグリコシル化酵素をコードする１つ以上の遺伝子と同時トランスフェクトされ得る。このアプローチを使用して、特定の哺乳動物のグリコシル化パターンが、原核生物または他の細胞において達成される。 IL-1δまたはIL-1εの供給源は、上記のような、組換えIL-1δまたはIL-1εの DNAを発現する真核生物宿主または原核生物宿主であり得る。供給源はまた、マウスSwiss 3T3線維芽細胞のような細胞株であり得るが、他の哺乳動物細胞株もまた、本発明によって意図され、好ましい細胞株は、ヒト由来である。現在、完全な配列が公知であるので、齧歯類IL-1δ、そのフラグメントまたは誘導体は、ペプチド合成のための従来のプロセスによって調製され得る。これらとしては、StewartおよびYoung（1984）Solid Phase Peptide Synthesis、Pierc e Chemical Co.、Rockford、IL；BodanszkyおよびBodanszky（1984）The Practi ce of Peptide Synthesis 、Springer-Verlag、New York；ならびにBodanszky（1 984）The Principles of Peptide Synthesis、Springer-Verlag、New York；（これらのそれぞれは、本明細書中に参考として援用される）、に記載されるプロセスを含む。例えば、アジ化合物プロセス、酸塩化物プロセス、および酸無水物プロセス、混合無水物プロセス、活性エステルプロセス（例えば、p-ニトロフェニルエステル、N-ヒドロキシスクシンイミドエステル、またはシアノメチルエステル）、カルボジイミダゾールプロセス、酸化-還元プロセス、またはジシクロヘキシルカルボジイミド（DCCD）/付加プロセスが、使用され得る。固相および液相合成は、上述のプロセスに共に適応可能である。類似の技術が、IL-1ε部分配列とともに使用され得る。 IL-1δタンパク質、フラグメント、または誘導体は、一般的に配列において１つずつ、末端アミノ酸にアミノ酸を縮合する工程を包含するいわゆる段階的な工程によって、または末端のアミノ酸にペプチドフラグメントを結合することによってのいずれかで、ペプチド合成において代表的に用いられる上述のプロセスに従って、適切に調製される。カップリング反応において使用されないアミノ基は、代表的に、不正確な位置でのカップリングを防ぐために、保護されなくてはならない。固相合成が採用される場合、Ｃ末端アミノ酸は、不溶性のキャリアまたは支持体に、そのカルボキシル基を介して結合される。不溶性のキャリアは、反応性のカルボキシル基に対する結合能力を有する限り、特に制限されない。このような不溶性のキャリアの例としては、ハロメチル樹脂（例えば、クロロメチル樹脂またはブロモメチル樹脂）、ヒドロキシメチル樹脂、フェノール樹脂、tert-アルキルオキシカルボニルヒドラジド化（tert-alkyloxycarbonylhydraz idated）樹脂などが挙げられる。アミノ基が保護されたアミノ酸は、以前に形成されたペプチドまたは鎖の、その活性化されたカルボキシル基および反応性のアミノ基の縮合を介して、配列中に結合され、段階的にペプチドを合成する。完全な配列を合成した後、ペプチドは不溶性のキャリアから分離され、ペプチドを生成する。この固相アプローチは、一般に、Merrifieldら（1963）J ．Am．Chem．Soc．85:2149-2156（これは、本明細書中に参考として援用される）によって記載される。調製されたタンパク質およびそのフラグメントは、ペプチド分離の手段によって（例えば、抽出、沈殿、電気泳動、種々の形態のクロマトグラフィー、などによって）、反応混合物から単離および精製され得る。本発明のインターロイキンは、その所望の使用に依存する、種々の程度の純度において得られ得る。精製は、本明細書中に開示されるタンパク質精製技術を使用することによって（以下を参照のこと）、または免疫吸着アフィニティークロマトグラフィーの方法において、本明細書中に記載される抗体の使用によって、達成され得る。この免疫吸着アフィニティークロマトグラフィーは、先ず、抗体を固相支持体に連結し、次いで連結された抗体と、適切な細胞の可溶化された溶解物、インターロイキンを発現する他の細胞の溶解物、またはDNA技術の結果としてタンパク質を生成する細胞の溶解物もしくは上清とを、接触することによって行われる（以下を参照のこと）。一般に、精製されたタンパク質は、少なくとも約40%純粋であり、通常少なくとも約50%純粋であり、通常少なくとも約60%純粋であり、代表的に少なくとも約 70%純粋であり、より代表的に少なくとも約80%純粋であり、好ましくは少なくとも約90%純粋であり、より好ましくは少なくとも約95%純粋であり、および特定の実施態様において、97%〜99%以上純粋である。純度は、通常、重量基準であるが、またモル基準であり得る。異なるアッセイが、適切であるとして適用される。 VI．抗体本発明において使用されるように、用語「抗体」または「抗体分子」とは、インタクトな分子ならびにそのフラグメント（例えば、エピトープ決定基を結合し得るFab、F(ab')₂、およびFv）を含む。これらの抗体フラグメントは、その抗原またはレセプターと選択的に結合するいくらかの能力を保持し、そして以下のように規定される：（１）Fab、抗体分子の一価の抗原結合フラグメントを含むフラグメントは、全抗体を、酵素パパインで消化して、インタクトな軽鎖および１つの重鎖の部分を得ることによって、生成され得る；（２）Fab'、抗体分子のフラグメントは、全抗体をペプシンで処置し、次いで還元して、インタクトな軽鎖および重鎖の部分を得ることによって、得られ得る；抗体分子当たり、２つのFa b'フラグメントが得られる。；（３）F(ab')₂、全抗体を、その後の還元を伴わなずに、酵素ペプシンで処理することによって得られ得る抗体のフラグメント； F(ab')₂は、２つのジスルフィド結合によって互いに保持される２つのFab'フラグメントの二量体である；（４）Fv、２つの鎖として発現される、軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含む、遺伝子操作されたフラグメントとして規定される；ならびに（５）１本鎖抗体（「SCA」）、遺伝子融合された１本鎖分子として、適切なポリペプチドリンカーによって連結される軽鎖の可変領域、重鎖の可変領域を含む遺伝子操作された分子として規定される。これらのフラグメントを作製する方法は、当該分野において公知である。例えば、HarlowおよびLane（最新版）Antibodies ：A Laboratory Manual、Cold Spri ng Harbor Laboratory、New Yorkを参照のこと。従って、本明細書中で使用されるように、種々の形態における句「抗体分子」とは、インタクトな抗体（免疫グロブリン）分子および抗体（免疫グロブリン）分子の免疫学的に活性な部分の両方を意図する。組換え方法は、これらのフラグメントを作製するために適用され得る。用語「モノクローナル抗体」とは、抗原特異性の抗体分子の１つの種の集団をいう。モノクローナル抗体は、特定の抗原と免疫反応し得る、１つのみの種の抗体結合部位を含み、従って、代表的に、その抗原についての単一の結合親和性を示す。従って、モノクローナル抗体は、異なる抗原にそれぞれ免疫特異的な、２つの抗体結合部位を有する二重特異性の抗体分子を含み得る。１つの実施態様において、第１の抗体分子は、固体支持体に固定される。さらに、ファージディスプレイコンビナトリアルライブラリーにおける抗体分子はまた、モノクローナル抗体である。本発明で使用される場合、用語「エピトープ」とは、抗体のパラトープが結合する抗原上の任意の抗原性決定基を意味する。エピトープ決定基は、通常、アミノ酸または糖側鎖のような分子の化学的に活性な表面群からなり、ならびに、通常、特異的な三次元構造特徴および特異的な電荷特徴を有する。本明細書中で使用される場合、語「複合体」とは、特異的な結合因子−リガンド反応の産物をいう。例示的な複合体は、抗体−抗原反応によって形成される免疫反応産物である。用語「抗原」とは、抗体に特異的に結合（免疫反応）し得、そして免疫反応産物（免疫複合体）を形成し得るポリペプチドまたはタンパク質をいう。抗体が結合する、抗原における部位は、抗原性決定基またはエピトープといわれ、そして標識化は、例えば、バックグラウンドの２倍、５倍以上で検出可能であるべきである。サンプル中の新規なエピトープに結合する抗体の検出のための本発明の方法は、例えば、抗体が液相中で同定され得るかまたは固相キャリアに結合され得るイムノアッセイにおいて、インビトロで行われる。好ましくは、方法は、固体支持体に結合される捕獲抗体を用いて行われる。好ましくは、捕獲抗体は、モノクローナル抗体分子である。サンプル中の新規な抗体を検出するために利用され得るイムノアッセイのタイプの例は、直接的な形式または間接的な形式のいずれかにおける、競合的イムノアッセイおよび非競合的イムノアッセイを含む。このようなイムノアッセイの例は、放射性イムノアッセイ（RIA）およびサンドイッチ（イムノメトリック）アッセイである。抗体の検出は、生理学的なサンプルに対する競合イムノアッセイ、および免疫組識学的アッセイを含む、正方向（forward）様式、逆方向（rever se）様式、または同時（simultaneous）様式のいずれかにおいて行われるイムノアッセイを利用して行われ得る。好ましくは、本発明の方法は、正方向のイムノアッセイを利用する。当業者は、過度の実験を伴わないで、他のイムノアッセイ形式を知るか、または容易に認識し得る。固相結合された抗体分子は、水性媒体から吸着によって結合されるが、固定の他の様式（例えば、共有結合）、または固体マトリクスへの固定化の他の周知の手段が使用され得る。好ましくは、第１の抗体分子は、抗原と免疫複合体を形成する前に支持体に結合されるが、免疫複合体は、固体支持体に複合体を結合する前に形成され得る。固相支持体の表面上の非特異的なタンパク質結合部位は、好ましくはブロックされる。固相に結合された抗体の吸着後、アッセイとの干渉がないタンパク質（例えば、抗原の混入がまたない、ウシ、ウマ、または他の血清アルブミン）の水溶液が、固相と混合され、抗体分子によって占有されない表面におけるタンパク質結合部位で、抗体を含む固体支持体の表面上に混合されたタンパク質を吸着する。代表的なタンパク質水溶液は、約７〜８のpHで、PBS中に、約２〜10重量パーセントのウシ血清アルブミンを含む。タンパク質水溶液−固体支持体混合物は、代表的に、約４〜37℃の温度で、少なくとも１時間の期間の間、維持され、そして得られる固相は、その後、遊離の未結合のタンパク質がリンスされる。第１の予め選択された抗体は、多くの異なるキャリアに結合され得、そしてサンプル中の、抗体に結合する新規なエピトープを検出するために使用され得る。周知のキャリアの例としては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミロース、天然のおよび改変されたセルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびに磁鉄鉱が挙げられる。キャリアの性質は、本発明の目的のために、可溶性または不溶性のいずれかであり得る。当業者は、抗体を結合するための他の適切なキャリアを十分に知るか、または日常的な実験を使用して、これらを確かめることができる。さらに、所望であれば、これらのイムノアッセイにおける検出のための抗体は、種々の方法で検出可能に標識され得る。当業者に公知の多くの異なる標識、および標識する方法が存在する。本発明において使用され得る標識の型の例としては、酵素、放射性同位体、蛍光化合物、コロイド性の金属、化学発光化合物、および生物発光化合物が挙げられる。当業者は、本発明のモノクローナル抗体に結合するための他の適切な標識を知るか、または日常的な実験を使用して、これらを確かめることができる。さらに、本発明の方法において使用される抗体へのこれらの標識の結合は、当業者に対して共通の標準的な方法を使用して行われ得る。本発明のIL-1δまたはIL-1εポリペプチドに結合する抗体は、インタクトなポリペプチド、または免疫化抗原のような目的の小ペプチドを含有するフラグメントを使用して、調製され得る。動物を免疫するために使用されるポリペプチドまたはペプチドは、所望される場合、翻訳されたcDNAまたはキャリアタンパク質に結合され得る化学合成に由来し得る。ペプチドに化学的に結合されるこのような一般に使用されるキャリアとしては、キーホールリンペットヘモシアニン（KLH ）、チログロブリン、ウシ血清アルブミン（BSA）、および破傷風トキソイドが挙げられる。次いで、結合されたペプチドが、動物（例えば、マウス、ラット、またはウサギ）を免疫するために使用される。所望される場合、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体は、抗体が惹起されるポリペプチドまたはペプチドが結合されたマトリクスに結合し、そしてこれから溶出することによって、さらに精製され得る。当業者は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の精製および／または濃縮についての、免疫学の分野における共通の種々の技術を知る（例えば、Coliganら（最新編）Unit 9、Cur rent Protocols in Immunology 、Wiley Interscienceを参照のこと）。エピトープを模倣するモノクローナル抗体を生成するために、抗イディオタイプ技術を使用することがまた、可能である。例えば、第１のモノクローナル抗体に対して作製された抗イディオタイプモノクローナル抗体は、第１のモノクローナル抗体によって結合されるエピトープの「像（image）」である超可変領域において結合ドメインを有する。ポリクローナル抗体の調製は、当業者に周知である。例えば、Greenら「Produ ction of Polyclonal Antlsera」１〜５頁、Manson（編）Immunochemical Proto cols Humana Press：Production of Polyclonal Antisera in Rabbits 、Rats、M ice and Hamsters 第2.4.1節、Coliganら、Current Protocols in Immunologyを参照のこと。同様にモノクローナル抗体の調製は、従来的である。例えば、KohlerおよびMi lstein、Nature 256:495（1975）；Collganら、第2.5.1-2.6.7節；およびHarlow ら、Antibodies ：A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Pressを参照のこと。簡潔には、モノクローナル抗体は、抗原を含む組成物をマウスに注射し、血清サンプルを取り除くことにより抗体生成の存在を確認し、Ｂリンパ球を得るために脾臓を取り除き、骨髄腫細胞とＢリンパ球とを融合してハイブリドーマを生成し、ハイブリドーマをクローニングし、抗原に対する抗体を生成するポジティブなクローンを選択し、そしてハイブリドーマ培養物から抗体を単離することによって得られ得る。モノクローナル抗体は、十分に確立された種々の技術によってハイブリドーマ培養物から単離および精製され得る。このような単離技術としては、プロテインＡセファロースを用いるアフィニティークロマトグラフィー、およびサイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。例えば、Coliganら、第2.7.1〜2.7.12節および第2.9.1〜2.9.3節；Barnes ら「Purification of Immunogloblin G（IgG）」Methods in Molecular Biology 、第10巻、79〜104頁（Humana Press、最新版）を参照のこと。モノクローナル抗体のインビトロおよびインビボでの増殖の方法は、当業者に周知である。インビトロでの増殖は、例えば、哺乳動物血清（例えば、ウシ胎児血清）または微量元素、および増殖維持補充剤（growth-sustainingsupplement）（例えば、正常なマウスの腹膜滲出液（peritoneal exudate）細胞、脾臓細胞、骨髄マクロファージ）によって、必要に応じて補充された、ダルベッコ改変イーグル培地または RPMI 1640培地のような適切な培養培地において行われ得る。インビトロでの生成は、比較的純粋な抗体調製物を提供し、および大量の所望の抗体を得るための規模拡大を可能にする。大規模のハイブリドーマ培養は、エアリフトリアクター（airlift reactor）において、連続的な攪拌リアクターにおける、または固定化（immobilized）もしくは捕捉化（entrapped）細胞培養における、均一な懸濁培養物によって行われ得る。インビボでの増殖は、抗体生成腫瘍の増殖を引き起こすために、親細胞と組織適合性の哺乳動物（例えば、同系マウス）に、細胞クローンを注入することによって行われ得る。必要に応じて、動物は、注入の前に、炭化水素、特に油類（例えば、プリスタン（テトラメチルペンタデカン））で感作される。１〜３週間後、所望のモノクローナル抗体が、動物の体液から回収される。治療学的適用は、本発明の抗体について考えられる。例えば、本発明の抗体はまた、ヒトに近い霊長類の抗体に由来し得る。ヒヒにおいて治療学的に有用な抗体を惹起するための一般的な技術は、例えば、Goldenbergら（1991）WO 91/1146 5；およびLosmanら（1990）Int ．J．Cancer 46:310において見出され得る。あるいは、治療学的に有用な抗IL-1δまたは抗IL-1ε抗体は、「ヒト化」モノクローナル抗体に由来し得る。ヒト化モノクローナル抗体は、マウスの免疫グロブリンの重可変鎖および軽可変鎖からのマウス相補性決定領域を、ヒト可変ドメインに移入し、次いで、マウス対応物のフレームワーク領域においてヒト残基を置換することによって生成される。ヒト化モノクローナル抗体に由来する抗体成分の使用は、マウス定常領域の免疫原性と関連する潜在的な問題を回避する。マウス免疫グロブリン可変ドメインをクローニングするための一般的な技術は、例えば、Orlandiら（1989）Proc ．Nat'l．Acad．Sci．USA 86:3833によって記載される。ヒト化モノクローナル抗体を生成するための技術は、例えば、Jonesら（1 986）Nature 321:522；Riechmanら（1988）Nature 332:323；Verhoeyenら（1988 ）Science 239:1534；Carterら（1992）Proc ．Nat'l．Acad．Sci．USA 89:4285 ；Sandhu（1992）Crit ．Rev．Biotech．12:437；およびSingerら（1933）J ．Imm unol 150:2844によって記載される。本発明の抗体はまた、コンビナトリアル（combinatorial）免疫グロブリンライブラリーから単離されるヒト抗体フラグメントに由来し得る。例えば、Barbasら（1991）Methods ：A Companion to Methods in Enzymology、第２巻、119頁；およびWinterら（1994）Ann ．Rev．Immunol．12:433を参照のこと。ヒト免疫グロブリンファージライブラリーを生成するために有用であるクローニングベクターおよび発現ベクターが、例えば、STRATAGENE Cloning Systems（La Jolla、CA）から得られ得る。さらに、本発明の抗体は、ヒトモノクローナル抗体に由来し得る。このような抗体は、抗原投与に応答して特異的なヒト抗体を生成するように「操作された」トランスジェニックマウスから得られる。この技術において、ヒト重鎖および軽鎖の遺伝子座のエレメントは、標的化された内因性の重鎖および軽鎖の遺伝子座の破壊を含む胚幹細胞株に由来するマウスの系統に、導入される。トランスジェニックマウスは、ヒト抗原に特異的なヒト抗体を合成し得、およびそのマウスは、ヒト抗体を分泌するハイブリドーマを生成するために使用され得る。トランスジェニックマウスからヒト抗体を得るための方法は、Greenら（1994）Nature Ge net ． 7:13；Lonbergら（1994）Nature 368:856；およびTaylorら（1994）Int ．I mm unol ． 6:579によって記載される。本発明の抗体フラグメントは、抗体のタンパク質分解性加水分解によって、またはフラグメントをコードするDNAの、E.coliにおける発現によって、調製され得る。抗体フラグメントは、従来の方法により、抗体全体の、ペプシンまたはパパイン消化によって得られ得る。例えば、抗体フラグメントは、F(ab')₂と示される5Sフラグメントを提供するペプシンで抗体を酵素学的に切断することによって、生成され得る。このフラグメントは、チオール還元剤、および必要に応じてジスルフィド結合の切断から生じるスルフヒドリル基についてのブロッキング基を使用してさらに切断され得、3.5S Fab'の一価フラグメントを生成する。あるいは、パパインを使用する酵素学的切断は、２つの一価のFabフラグメントおよびFcフラグメントを、直接的に生成する。これらの方法は、例えば、Goldenberg 、米国特許第4,036,945号および同第4,331,647号、ならびにそこに含まれる参考文献によって記載される。これらの特許は、それらの全体（全ての図、図面、および説明を含む）が本明細書中に参考として援用される。Nisonhoffら（1960）A rch ．Biochem．Biophys． 89:230；Porter（1959）Biochem．J．73:119；Edelman ら（1967）Methods in Enzymology、第１巻、Academic Press；およびColiganら、第2.8.1〜2.8.10節および第2.10.1〜2.10.4節をまた参照のこと。抗体を切断する他の方法（例えば、一価の軽−重鎖フラグメントを形成するための重鎖の分離）、フラグメントのさらなる切断、または他の酵素学的、化学的、もしくは遺伝学的な技術はまた、フラグメントがインタクトな抗体によって認識される抗原に結合する限り、使用され得る。例えば、Fvフラグメントは、V_H鎖およびV_L鎖の会合を含む。この会合は、Inba rら（1972）Proc ．Nat'l Acad．Sci．USA 69:2659において記載されるように、非共有結合的であり得る。あるいは、可変鎖は、分子間ジスルフィド結合によって連結され得るか、またはグルタルアルデヒドのような化学薬品によって架橋され得る。例えば、Sandhu（1992）Crit ．Rev．Biotech．12:437を参照のこと。好ましくは、Fvフラグメントは、ペプチドリンカーによって連結されたV_H鎖および V_L鎖を含む。これらの単鎖抗原結合タンパク質（sFv）は、オリゴヌクレオチドによって連結されるV_HドメインおよびV_LドメインをコードするDNA配列を含む構造遺伝子を構築することによって調製される。構造遺伝子は、発現ベクターに挿入され、これはE.coliのような宿主細胞に、続いて挿入される。組換え宿主細胞は、２つのＶドメインを架橋するリンカーペプチドを有する１本のポリペプチド鎖を合成する。sFvを生成するための方法は、例えば、Whitlowら（1991）Method s ：a Companion to Methods in Enzymology 、第２巻、97頁；Birdら（1988）sci ence 242:423-426；Ladnerら、米国特許第4,946,778号；Packら（1993）Bio/Tec hnology 11:1271-77；およびSandhu（1992）Crit ．Rev．Biotech．12:437によって記載される。抗体フラグメントの別の形態は、単一の相補性決定領域（CDR）をコードするペプチドである。CDRペプチド（「最小認識単位」）は、目的の抗体のCDRをコードする遺伝子の構築によって得られ得る。このような遺伝子は、例えば、抗体産生細胞のRNAから可変領域を合成するために、ポリメラーゼ連鎖反応を使用することによって、調製される。例えば、Larrickら（1991）Methods ：A Companion to Methods in Enzymology 、第２巻、106頁を参照のこと。抗体は、種々の哺乳動物（例えば、齧歯類）のIL-1δおよび／またはIL-1εタンパク質ならびにそのフラグメント（天然に存在するネイティブな形態においておよびそれらの組換え形態においての両方）に対して、惹起され得、その差異は、活性なリガンドに対する抗体が、ネイティブなコンホメーションにおいてのみ存在するエピトープを、より認識するようであるということである。変性された抗原の検出はまた、例えば、ウエスタン分析において、有用であり得る。抗イディオタイプ抗体がまた、意図され、これは、天然のレセプターまたは抗体のアゴニストまたはアンタゴニストとして有用である。多くの免疫原が、チモカイン（thymokine）タンパク質と特異的に反応性の抗体を生成するために使用され得る。組換えタンパク質は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の生成のための好ましい免疫原である。天然に存在するタンパク質はまた、純粋な形態または不純な形態のいずれかにおいて、使用され得る。本明細書中に記載されるヒトまたはマウスのリンホタクチン（lymphotact in）タンパク質配列を使用して作製される合成ペプチドはまた、チモカインに対する抗体の生成のための免疫原として使用され得る。組換えタンパク質は、本明細書中に記載されるように真核生物細胞または原核生物細胞において発現され得、そして記載されるように精製され得る。次いで、生成物は、抗体を生成し得る動物に注入される。モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれかは、タンパク質を測定するためのイムノアッセイにおける、その後の使用のために作製され得る。ポリクローナル抗体を生成する方法は、当業者に公知である。簡潔には、免疫原、好ましくは精製されたタンパク質は、アジュバントと混合され、そして動物はその混合物で免疫される。免疫原調製物に対する動物の免疫応答は、試験採血を行い、そして目的のチモカインタンパク質に対する反応性の力価を決定することによって、モニターされる。免疫原に対する抗体の適切に高い力価が得られる場合、血液は、動物から回収され、そして抗血清が調製される。所望であれば、タンパク質に対して反応性の抗体を富化するために、抗血清のさらなる分画化が、行われ得る。HarlowおよびLaneを参照のこと。モノクローナル抗体は、当業者に周知の種々の技術によって得られ得る。簡潔には、所望の抗原で免疫された動物からの脾臓細胞が、一般に骨髄肺細胞との融合によって不死化される。不死化の代替の方法としては、エプスタインバールウイルス、ガン遺伝子、もしくはレトロウイルスでの形質転換、または当該分野において周知の他の方法が挙げられる。単一の不死化細胞から生じるコロニーは、抗原に対して所望の特異性および親和性の抗体の生成について、スクリーニングされ、そしてこのような細胞によって生成されるモノクローナル抗体の収量は、種々の技術（脊椎動物宿主の腹腔への注入を含む）よって増強され得る。あるいは、Huseら（1989）Science 246:1275-1281によって概説される一般的なプロトコルに従って、ヒトＢ細胞からのDNAライブラリーをスクリーニングすることによって、モノクローナル抗体またはその結合フラグメントをコードするDNA配列を単離し得る。タンパク質の予め決定されたフラグメントに対する、抗体（結合フラグメントおよび単鎖バージョンを含む）は、免疫原性タンパク質とフラグメントとの結合体での、動物の免疫化によって惹起され得る。モノクローナル抗体は、所望の抗体を分泌する細胞から調製される。これらの抗体は、正常なタンパク質もしくは欠陥タンパク質への結合についてスクリーニングされ得るか、またはアゴニスト活性もしくはアンタゴニスト活性についてスクリーニングされ得る。これらのモノクローナル抗体は通常、少なくとも約１mM、より通常には少なくとも約300μM 、代表的には少なくとも約100μM、より代表的には少なくとも約30μM、好ましくは少なくとも約10μM、およびより好ましくは少なくとも約３μMまたはそれよりも良好な（１μM、300nM、100nM、30nMなどを含む）、K_Dで結合する。本発明の抗体（抗原結合フラグメントを含む）は、有意な診断的または治療学的な価値を有し得る。それらは、インターロイキンに結合し、そしてレセプターへの結合を阻害するか、または生物学的応答を誘発するIL-1δまたはIL-1εの能力を阻害する、強力なアンタゴニストであり得る。それらはまた、非中和抗体として有用であり得、および産生細胞、またはインターロイキンの供給源に局在化される細胞を結合させるために、トキシンまたは放射性核種に結合され得る。さらに、これらの抗体は、薬物または他の治療学的薬剤に、直接的に、またはリンカーの手段によって間接的にのいずれかで、結合され得る。本発明の抗体はまた、診断的適用において有用であり得る。捕獲抗体または非中和抗体として、これらは、レセプター結合を阻害することなくインターロイキンに結合し得る。中和抗体として、これらは、競合結合アッセイにおいて有用である。これらはまた、IL-1δを検出、または定量するのに有用である。これらは、ウエスタンブロット分析のための、またはそれぞれのタンパク質の免疫沈降もしくは免疫精製のための、試薬として使用され得る。タンパク質フラグメントは、免疫原として使用されるべく融合されたか、または共有結合的に結合されたポリペプチドとして、他の物質（特にポリペプチド）に結合され得る。哺乳動物IL-1δおよびそのフラグメントは、種々の免疫原（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、破傷風トキソイドなど）に融合されるか、または共有結合的に連結され得る。ポリクローナル抗血清を調製する方法の記載について、Microbiology、Hoeber Medical Divisio n、Harper and Row、1969；Landsteiner（1962）Specificity of Serological R eactions 、Dover Publications、New York；およびWilllamsら（1967）Methods in Immunology and Immunochemistry 、第１巻Academic Press、New York；（これらのそれぞれは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。代表的な方法は、抗原での動物の過剰免疫化を含む。次いで、動物の血液は、反復された免疫化のすぐ後に回収され、そしてγグロブリンが、単離される。いくつかの例において、種々の哺乳動物宿主（例えば、マウス、齧歯類、霊長類、ヒトなど）からモノクローナル抗体を調製することが望ましい。このようなモノクローナル抗体を調製するための技術の記載は、例えば、Stitesら（編）Ba sic and Clinical Immunology （第４版）、Lange Medical Publicatlons、Los A ltos、CAおよびそこに引用される参考文献；HarlowおよびLane（1998）Antibodi es ：A Laboratory Manual 、CSH Press；Goding（1986）Monoclonal Antibodies ：Principles and Practice （第２版）Academic Press、New York；および特に、KohlerおよびMilstein（1975）Nature 256:495-497（これは、モノクローナル抗体を作製する１つの方法を議論する）において、見出され得る。これらの参考文献のそれぞれは、本明細書中に参考として援用される。簡潔にまとめると、この方法は、免疫原を用いて動物に注射する工程を包含する。次いで、動物は屠殺され、そして細胞はその脾臓から採取され、次いで、細胞は骨髄肺細胞と融合される。結果は、ハイブリッド細胞あるいは「ハイブリドーマ」であり、これはインビトロで増殖させる（reproducing）ことが可能である。次いで、ハイブリドーマの集団は、個々のクローンを単離するためにスクリーニングされ、そのそれぞれが、免疫原に対する単一の抗体種を分泌する。この様式において、得られる個々の抗体種は、免疫原性物質において認識される特異的な部位に応答して作製される、免疫された動物からの、不死化およびクローン化された単一のＢ細胞の産物である。他の適切な技術としては、抗原性ポリペプチドへの、あるいはファージまたは同様のベクターにおける抗体のライブラリーの選択への、インビトロでのリンパ球の曝露を含む。Huseら（1989）「Generation of a Large Combinatorial Libr ary of the Immunoglobulin Repertorie in Pharge Lambda」、Science 246:127 5-1281；およびWardら（1989）Nature 341:544-546（これらのそれぞれは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。本発明のポリペプチドおよび抗体は、改変を伴うか、または伴わないで使用され得、これにはキメラ抗体またはヒト化抗体を含む。しばしば、ポリペプチドおよび抗体は、共有結合的にまたは非共有結合的にのいずれかで、検出可能なシグナルを提供する物質を結合することによって標識される。広範な種々の標識および結合技術が公知であり、そして科学文献および特許文献の両方において、広範に報告される。適切な標識としては、放射性核種、酵素、基質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発光部分、磁性粒子などが挙げられる。このような標識の使用を教示する特許としては、米国特許第3,817,837号；同第3,850,752号；同第3,939,350号；同第3,996,345号；同第4,277,437号；同第4,275,149号；および同第4,336,241号が挙げられる。また、組換え免疫グロブリンまたはキメラ免疫グロブリンが生成され得るか（Ca billy、米国特許第4,816,567号を参照のこと）；またはトランスジェニックマウスにおいて作製され得る（Mendezら（1997）Nature Genetics 15:146-156を参照のこと）。これらの参考文献は、本明細書中に参考として援用される。本発明の抗体はまた、IL-1δの単離において、アフィニティークロマトグラフィーについて使用され得る。カラムが調製され得、抗体は固体支持体（例えば、アガロース、SEPHADEXなどのような粒子）に連結され、細胞溶解物は、カラムを介して通過され得、カラムは洗浄され、続いて、漸増濃度の軽度の変性剤で洗浄され、これにより、精製されたタンパク質は放出される。タンパク質は、抗体を精製するために使用され得る。抗体はまた、特定の発現産物について、発現ライブラリーをスクリーニングするために使用され得る。通常、このような手順において使用される抗体は、抗体の結合によって抗原の存在の容易な検出を可能にする部分で標識される。 IL-1δまたはIL-1εに対して惹起される抗体はまた、抗イディオタイプ抗体を惹起するために使用される。これらは、タンパク質の発現、またはそのタンパク質についてのレセプターを発現する細胞に関連する、種々の免疫学的状態を検出または診断するのに有用である。これらはまた、インターロイキンのアゴニストまたはアンタゴニストとして有用であり、天然に存在するリガンドについての、競合的なインヒビターまたは置換体であり得る。結合剤:IL-1δ/IL-1εタンパク質複合体例えば、配列番号２、４または６のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントあるいは配列番号１、３または５の核酸から生成されたポリペプチドからなる、例えば、免疫原などの規定された免疫原に対して生成された抗体（例えば、ポリクローナル抗体）と特異的に結合するか、または特異的に免疫反応するIL-1δまたはIL-1εタンパク質を、代表的には、イムノアッセイで測定する。本明細書において構造的および機能的に規定したように、原型のIL-1δまたはIL-1εタンパク質に対して生成されたポリクローナル抗体に結合するポリペプチドをコードする本明細書中に記載される核酸配列（機能的変種を含む）が本発明の境界および限界内に含まれる。イムノアッセイは、代表的には、例えば、配列番号２、４または６のタンパク質に対して惹起されたポリクローナル抗血清を使用する。この抗血清は、他のIL-1ファミリーメンバーに対して低い交差反応性を有する（好ましくは、同じ種を形成する）ように選択され、そしてこのような交差反応性はいずれも、イムノアッセイで使用する前に、免疫吸着法により除去される。イムノアッセイで使用する抗血清を生成するため、配列番号２、４または６のタンパク質を本明細書に記載したように単離する。例えば、組換えタンパク質を哺乳動物の細胞株で生成し得る。適切な宿主、例えば、Balb/cなどのマウスの同型交配系を、フロイントのアジュバントなどの標準的アジュバント、および標準的マウス免疫プロトコル（HarlowおよびLaneを参照）を使用して、配列番号２、４または６のタンパク質で免疫する。あるいは、本明細書に開示した配列に由来し、そしてキャリアタンパク質に結合させた合成ペプチドを免疫原に使用し得る。ポリクローナル血清を収集し、イムノアッセイ（例えば、固体支持体上に固定化した免疫原による固相イムノアッセイ）で免疫原タンパク質に対して力価測定する。力価が10⁴以上のポリクローナル抗血清を選択し、他のIL-1ファミリーメンバー、例えば、IL-1α、IL-1β、IL-1 RA、およびIL-1γに対する交差反応性について、HarlowおよびLane、上記、570-573頁に記載されるような競合結合イムノアッセイを使用して試験した。好ましくは、少なくとも二つのIL-1ファミリーメンバーを、IL-1δまたはIL-1εの一方と組み合わせて、この測定に使用する。これらのIL-1ファミリーメンバーを組換えタンパク質として生成し、そして本明細書に記載のように、標準的分子生物学およびタンパク質化学技術を使用して単離し得る。競合結合フォーマットにおけるイムノアッセイを交差反応性測定に使用し得る。例えば、配列番号２、４または６のタンパク質を固体支持体に固定化し得る。このアッセイに添加したタンパク質は、固定化された抗原に対する抗血清の結合と競合する。固定化されたタンパク質に対する抗血清との結合と競合する上記タンパク質の能力を配列番号２、４または６のタンパク質と比較する。上記タンパク質のパーセント交差反応性を、標準的算出法により算出する。上記に列挙した各タンパク質との交差反応性が10%より低い抗血清を選択し、プールする。次に、上記に列挙したタンパク質との免疫吸着法により、交差反応抗体をプール抗血清から除去する。次に、免疫吸着したプール抗血清を、上記に記載のように、競合結合イムノアッセイで使用し、第二のタンパク質を免疫原タンパク質（例えば、配列番号２、４または６のIL-1様タンパク質）と比較する。この比較を行うため、二つのタンパク質を広範囲の濃度でそれぞれアッセイし、そして固定化されたタンパク質への抗血清の結合を50％阻害するのに必要な各タンパク質量を測定する。必要とされる第二のタンパク質量が、必要とされる配列番号２のタンパク質量の二倍より少ない場合、第二のタンパク質は、免疫原に対して生成した抗体と特異的に結合するという。これらのIL-1δまたはIL-1εタンパク質は、これまで同定された少なくとも５つの遺伝子を含む相同性タンパク質のファミリーのメンバーであることが理解される。IL-1δまたはIL-1εタンパク質などの特定の遺伝子生成物に対して、この用語は、本明細書に開示したアミノ酸配列だけではなく、対立遺伝子、非対立遺伝子または種改変体の他のタンパク質をいう。また、「IL-1δ」または「IL-1ε 」という用語は、単一の部位突変異など従来の組換え技術を使用する故意変異により、または各タンパク質をコードするDNAの短部分を切除することにより、または新アミノ酸の置換もしくは付加により導入された非天然の変異を含むことが理解される。このようなマイナーな改変は、本来の分子の免疫学的同一性および／またはその生物学的活性を実質的に維持しなければならない。このように、これらの改変には、示された天然に存在するIL-1関連タンパク質と特異的に免疫反応するタンパク質（例えば、配列番号２、４または６で示したIL-1δまたはIL -１εタンパク質）が含まれる。タンパク質を適切な細胞株で発現させ、そしてリンパ球に及ぼす適切な作用を測定することにより、改変タンパク質の生物学的特性を測定し得る。マイナーと考えられる特定のタンパク質の改変には、IL-1ファミリーについて、上で総括して記載したように、類似した化学特性を有するアミノ酸の同類置換が含まれるものと考えられる。タンパク質を配列番号２、４および６のタンパク質と最適にアラインメントさせることにより、および本明細書に記載した従来のイムノアッセイを使用して免疫学的同一性を測定することにより、本発明のタンパク質組成物を測定し得る。 VII.キットおよび定量本発明のIL-1様分子の天然に存在するおよび組換え型は共に、キットおよびアッセイ法において特に有用である。例えば、これらの方法もまた、結合活性（例えば、これらのタンパク質のレセプター）についてのスクリーニングに適用され得る。いくつかの自動化アッセイ法が近年に開発されており、１年当たり何万もの化合物のスクリーニングを可能にしている。例えば、BIOMEK自動化ワークステーション、Beckman Instruments,Palo Alto,California、およびFodorら、(1991 )Science 251:767-773（これは、参考として本明細書中に援用される）を参照。後者は、固体基質上に合成された複数の規定されたポリマーによる結合を試験する手段を記載している。レセプターまたはアゴニスト／アンタゴニスト相同性タンパク質のスクリーニングに適したアッセイの開発は、本発明により提供されるように、大量の精製可溶性IL-1δまたはIL-1εが活性状態で入手可能なことにより、非常に容易であり得る。精製IL-1δをプレートに直接コートし、前述のレセプタースクリーニング技術において使用し得る。しかし、これらのタンパク質に対する非中和抗体を捕獲抗体として使用し、例えば、診断的な使用において、有用な固相上に各インターロイキンを固定化し得る。本発明は、様々な診断用キットにおける、IL-1δ、そのフラグメント、ペプチド、およびその融合産物の使用、ならびにタンパク質またはそのレセプターの存在を検出する方法での使用もまた意図される。あるいは、またはさらに、この分子に対する抗体が、キットおよび方法に組み込まれ得る。代表的には、キットは、規定されたIL-1δペプチド、または遺伝子セグメント、あるいは一方もしくは他方を認識する試薬のいずれがを含む区画を有する。代表的には、ペプチドの場合、認識試薬はレセプターまたは抗体であり、あるいは遺伝子セグメントの場合、通常、ハイブリダイゼーションプローブである。試料（例えば、IL-1δ）の濃度測定に好ましいキットは、代表的には、IL-1δ に対する公知の結合親和性を有する標識化化合物（例えばレセプターまたは抗体）、ポジティブコントロールとしてIL-1δの供給源（天然に存在する、または組換え体）、および遊離の標識化化合物（例えば、試験試料中のIL-1δを固定化する固相）から結合を分離する手段、を含む。試薬、および説明書を包含する区画もまた、通常提供される。哺乳動物のIL-1δまたはペプチドフラグメントに特異的な抗体（抗原結合フラグメントを含む）、あるいはレセプターフラグメントは、漸増レベルのIL-1δおよび／またはそのフラグメントの存在を検出するための診断的な適用に有用である。診断アッセイは、均質性（遊離試薬と抗体-抗原複合体との間の分離工程を含まない）または異質性（分離工程を含む）であり得る。種々の市販のアッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ(RIA)、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)、酵素イムノアッセイ(EIA)、酵素増幅イムノアッセイ技術(EMIT)、基質-標識化蛍光イムノアッセイ(SLFIA)など）が存在する。例えば、IL-1δまたはその特定のフラグメントに対する抗体を認識する、標識された二次抗体を使用することにより、非標識化抗体を使用し得る。これらのアッセイもまた、文献で広範囲に議論されている。例えば、HarlowおよびLane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual,C SH.、ならびにColigan(編)(1991)および定期的な補遺、Current Protocols In I mmunology Greene/Wiley,New Yorkを参照。抗イディオタイプの抗体は、IL-1δのアゴニストまたはアンタゴニストとして作用する類似の有用性を有し得る。これらは、適切な状況下で治療用試薬として有用であり得る。しばしば、診断アッセイの試薬は、アッセイの感受性を最適化するために、キットに適用される。本発明について、アッセイの性質、プロトコル、および標識に基づいて、標識化または非標識化抗体あるいは標識化レセプターのいずれかが提供される。これは、通常、緩衝剤、安定化剤、酵素の基質などのシグナルの産生に必要な材料などの他の添加物と組み合わされる。好ましくは、キットはまた、適切な使用および使用後の含有物の廃棄についての説明書もまた包含する。代表的には、キットは、有用な各試薬の区画を有し、そして適切な使用および試薬の廃棄についての説明書を含む。望ましくは、試薬は乾燥した凍結乾燥粉末として供され、試薬は、アッセイを行うのに適した濃度を有する水性培地で再構成され得る。任意の前述の診断用アッセイの成分を改変しないで使用し得るか、または種々の様式で改変し得る。例えば、検出シグナルを直接的または間接的に提供する部分を共有結合または非共有結合により結合することにより、標的化を達成し得る。これらの任意のアッセイにおいて、試験化合物、IL-1δまたはそれに対する抗体のいずれかを、直接的または間接的に標識化し得る。直接標識化の可能性として、¹²⁵Iなどの放射性標識、ペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼなどの酵素（米国特許第3,645,090号）、および蛍光強度、波長シフト、または蛍光極性化の変化をモニター可能な蛍光標識（米国特許第3,940,475号）が含まれる。両特許は、本明細書において参考として援用される。間接的標識化の可能性として、１つの成分のビオチン化、続いて上記標識群の一つに結合させたアビジンへの結合が含まれる。遊離リガンドから結合を分離する方法、または代替的に、遊離試験化合物から結合を分離す方法もまた多く存在する。IL-1δを、種々のマトリックス上に固定化した後、洗浄し得る。適切なマトリックスには、ELISAプレート、フィルターおよびビーズなどのプラスチックが含まれる。マトリックスにレセプターを固定化する方法には、プラスチックへの直接的な付着、捕獲抗体の使用、化学結合およびビオチン-アビジンなどが挙げられるが、これらに限定されない。このアプローチの最後の工程は、例えば、有機溶媒（例えば、ポリエチレングリコール）または塩（例えば、硫酸アンモニウム）を利用する方法を含む、任意のいくつかの方法による抗体／抗原複合体の沈殿を含む。他の適切な分離技術として、Ratt leら、(1984)Clin.Chem.30(9):1457-1461に記載されたフルオレセイン抗体磁気性粒子法、および米国特許第4,659,678号に記載された二重抗体磁気性粒子分離が含まれ、これらはそれぞれ、本明細書において参考として援用されるが、これらに限定されない。種々の標識にタンパク質またはフラグメントを結合させる方法は、文献において広範囲に報告されており、ここで詳細に議論する必要はない。技術の多くは、ペプチド結合を形成するためのカルボジイミドまたは活性エステルの使用、または、結合のために、メルカプト基を、活性化ハロゲン（例えば、クロロアセチル）もしくは活性化オレフィン（例えば、マレイミド）と反応させることによるチオエーテルの形成、のいずれかを介する活性化カルボキシル基の使用を含む。融合タンパク質はまた、これらの適用における有用性を見出す。本発明の別の診断的局面は、IL-1δの配列から取り出したオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド配列の使用を含む。これらの配列は、免疫障害を有すると思われる患者のIL-1δレベルを検出するプローブとして使用され得る。RNAおよびDNAの両ヌクレオチド配列の調製、配列の標識化および好ましいサイズの配列は、文献で十分に説明および議論がなされている。普通、オリゴヌクレオチドプローブは、少なくとも約14ヌクレオチド、通常、少なくとも約18ヌクレオチドを有するべきであり、そしてポリヌクレオチドプローブは、数キロベースまでであり得る。種々の標識、最も一般的には放射核、特に、³²Pを使用し得る。しかし、ポリヌクレオチドへの導入のためのビオチン修飾ヌクレオチドの使用のような、他の技術もまた用い得る。次に、ビオチンは、アビジンまたは抗体に結合する部位として働き、これを放射核、蛍光剤、酵素などの様々な標識で標識化し得る。あるいは、DNA二重鎖、RNA二重鎖、DNA-RNAハイブリッド二重鎖またはDNA- タンパク質二重鎖を含む特異的二重鎖を認識し得る抗体を用い得る。次に、抗体を標識し、アッセイを行い得る。このとき、二重鎖は表面に結合し、その結果、表面上の二重鎖形成に基づいて、二重鎖に結合した抗体の存在を検出し得る。新規なアンチセンスRNAに対するプローブの使用を、核酸ハイブリダイゼーション、プラスおよびマイナススクリーニング、組換えプローブによる検出、ハイブリッド放出翻訳(HRT)、およびハイブリッド阻止翻訳(HART)のような、従来の任意の技術で実施し得る。これはまた、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)のような増幅技術を含む。他のマーカーの存在を定性的または定量的に試験する診断用キットもまた意図される。診断または予後は、マーカーとして使用される多くの指標の組み合わせに依存し得る。このように、キットは、マーカーの組み合わせについて試験し得る。例えば、Vialletら、(1989)Progress in Growth Factor Res.1:89-97を参照。 VIII.治療的有用性本発明は、有意な治療価値をもつ試薬を提供する。IL-1δまたはIL-1ε（天然型または組換え体）、そのフラグメント、ムテインアゴニストおよびアンタゴニスト、および抗体は、インターロイキンまたはそのレセプターあるいは抗体に対して結合親和性を有すると同定された化合物と共に、インターロイキンの異常な発現を示す状態の処置に有用であるべきである。このような異常性は、代表的には、免疫障害により明白である。さらに、本発明は、インターロイキンに対する応答の異常な発現または異常な誘発を伴う種々の疾病または障害において治療価値を提供するべきである。マウスIL-1γは、腫瘍、アレルギー並びに感染性疾病（例えば、肺結核、らい病、劇症肝炎およびウイルス感染症（例えば、HIV））に関連することが示唆されている。IL-1δおよび／またはIL-1εあるいはアンタゴニストは、類似した機能を有し得る。さらに、樹状細胞発現のプロフィールは、活性化された樹状細胞で主として発現したヒトIL-1γを示す。活性化された樹状細胞もまた、IL-12の主要なプロデューサーであり、この樹状細胞生成IL-12は、Th1型応答を指令する上で主要な役割を果たしている。IL-1γおよびIL-12の組み合わせは、IFN-γの誘導で極めて強力であるはずであり、IL-1δまたはIL-1εあるいはそのアンタゴニストが類似の機能を有し得ることを示唆する。特定状況下での前炎症性サイトカインの組み合わせにより、敗血症性ショックが起こり得る可能性がある。アンタゴニスト、ムテイン、または抗体は、この状況で非常に有用であることが判明し得る。Rich (編)Clinical Immunology:Principles and Practice,Mosbyを参照。さらに、IL-1ファミリーのメンバーに相同なIL-1δまたはIL-1ε（表２）は、血流の増強、化学誘因物質の誘導、および接着分子（炎症部位でのマクロファージおよび好中球のような炎症性細胞の蓄積を生じる）の増強および接着を介して、局所的および全身的な炎症性過程の改変において役割を果たすようである(Dur umら、(1986)Ann.Rev.Immunol.3:253)。さらに、IL-1δまたはIL-1εは、繊維芽細胞の増殖を誘導するようであり、そして慢性関節リウマチまたは歯周疾患におけるような慢性炎症の病因に寄与する上で役割を果たし得る。また、IL-1δまたはIL-1εは、全身性炎症応答（例えば、発熱、低血糖症、肝臓の急性期反応、血漿中の鉄および亜鉛の減少、ならびに血漿中の銅の増加）において役割を果たすようである。敗血症ショックのような全身性反応は、IL-1に起因して、おそらく、例えば、TNF、IFN-γおよび白血病阻害因子(LIF)を含む他のサイトカインとの組み合わせにより、血管拡張に関与する。新たに記載したIL -1δまたはIL-1εもまた、同様に関与するようである。以下では、IL-1δについて記載し、IL-1εを同様に置き換えることもまた適切であり得る。組換えIL-1δ、ムテインアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはIL-1δ抗体を精製し、次いで患者に投与し得る。これらの試薬は、治療目的で使用するため、さらなる有効成分（例えば、従来の薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤における）を、生理学的に無害の安定化剤および賦形剤と組み合わせ得る。これらの組み合わせ物を、例えば、ろ過して滅菌し、そして投薬バイアル中の凍結乾燥または安定化水性調製物にして貯蔵することによるような投薬形態にし得る。本発明はまた、抗体または、その相補的結合ではない結合フラグメントの使用も意図する。 IL-1δまたはそのフラグメントを使用するレセプタースクリーニングを行い、インターロイキンに対して結合親和性を有する分子を同定し得る。次に、生物学的アッセイを利用して、レセプターが、内因性の刺激活性をブロックし得る競合結合を提供し得るか否かを決定し得る。レセプターフラグメントを、IL-1δの活性をブロックするブロッカーまたはアンタゴニストとして使用し得る。同様に、内因性刺激活性を有する化合物はレセプターを活性化し得、従って、これはIL-1 δの活性を剌激するアゴニストである。さらに、本発明は、アンタゴニストとしてIL-1δに対する抗体を治療に使用することを意図する。有効な治療に必要な試薬量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態および投与される他の薬剤を含む多くの異なる因子に依存する。従って、処置投薬量は、安全性および有効性を至適にするために滴定されるべきである。代表的には、インビトロで使用される投薬量は、これらの試薬のインサイチュ投与に有用な量について有用な指針を提供し得る。特定の障害の処置に有効な用量で動物試験することにより、さらにヒト投薬量の予想される効能が提供される。例えば、Gi lman,ら(1990年、編)Goodman and Gilman's:The Pharmacological Bases of The rapeutics,第８版,Pergamon Press;およびRemington's Pharmaceutical Science s,(現行版),Mack Publishing Co.,Easton,Penn.において様々に考察される。これらの各々は、本明細書において参考として援用される。その中および以下に、例えば、経口、静脈内、腹腔内または筋肉内投与、経皮拡散その他について投与方法が考察される。薬学的に受容可能なキャリアには、水、生理食塩水、緩衝液および、例えば、Merck Index,Merck & Co.Rahway,New Jerseyに記載された他の化合物などが挙げられる。IL-1δとそのレセプターとの間の予想される高親和性結合のために、まず、低用量のこれらの試薬が、低投薬量で有効であることが予想される。そして、シグナリング経路により、極めて少量のリガンドが効果を有し得ることが示唆される。従って、投薬量範囲は、通常、1mM濃度よりも低い量であり、代表的には、約10μM濃度より低く、通常、約100nMより低く、好ましくは約10pM（ピコモル）より低く、そして最も好ましくは約1fM（フェムトモル）より低い量で、適切なキャリアを含むことが予想される。除放性処方物または除放性装置が、しばしば、連続投与に使用される。そのIL-1δフラグメント、および抗体またはそのフラグメント、アンタゴニストおよびアゴニストが、処置される宿主に直接投与され得るか、または化合物のサイズに応じて、オボアルブミンまたは血清アルブミンなどのキャリアタンパク質にそれらを結合させた後、投与するのが望ましくあり得る。治療用処方物を、従来の任意の投薬量処方において投与し得る。有効成分の単独投与は可能だが、薬学的処方物として有効成分を包含させるのが好ましい。処方物は、上記に規定したような少なくとも一種の有効成分を、一種以上のその受容可能なキャリアと共に含む。各キャリアは、他の成分と適合性があり、患者にとって有害ではないという意味で、薬学的および生理学的の両方で受容可能でなければならない。処方物は、経口、直腸内、鼻腔内または非経口的（皮下、筋肉内、静脈内および皮内など）投与に適したものを含む。処方物は、都合良く、単位投薬量剤型で提供され得、薬学分野において周知の任意の方法により調製し得る。例えば、Gilman ,ら(1990年、編)Goodman and Gilman's:The Pharmacological Bases of Therape utics,第８版,Pergamon Press;およびRemington's Pharmaceutical Sciences,第 17版(1990),Mack Publishing Co.,Easton,Penn.;Avisら(1993年、編)Pharmaceut ical Dosage Forms:Parenteral Medications Dekker,NY;Liebermanら(1990年、編)Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets Dekker,NY;およびLiebermanら(1990 年、編)Pharmaceutical Dosage Forms:Disperse Systems Dekker,NYを参照。発明内に包含される別の治療的アプローチは、従来の任意の投与技術（例えば、局所注射、吸入または全身系投与があるが、これらに限定されない）による炎症性障害を有する被験体への試薬または組成物の直接投与を含む。また、試薬、処方物、または組成物を、本明細書に記載した任意の方法により特定の細胞またはレセプターに対して標的化し得る。炎症性障害を調節する試薬、処方物または組成物の実際の投薬量は、生物のサイズおよび健康を含む多くの因子に依存するが、当業者は、臨床上の投薬量を決定するための方法および技術を記載した以下の教示を使用し得る。例えば、Spilker(1984)Guide to Clinical Studies and D eveloping Protocols,Raven Press,New York,特に7-13頁、54-60頁;Spilker(199 1)Guide to Clinical Trials,Raven Press,New York,特に、93-101頁;CraigおよびStitzel(1986年、編)Modern Pharmacology第２版,Little,Brown,Boston,特に1 27-33頁；Speight(1987年、編)Avery's Drug Treatment:Principles and Practi ce of Clinical Pharmacology and Therapeutics,第３版,WilliamsおよびWilkin s,Baltimore,50-56頁；およびTallaridaら(1988)Principles in General Pharma cology,Springer-Verlag,New York,18-20頁を参照。これらは適切な投薬量の決定方法について記載しているが、一般的には、薬学的に受容可能なキャリア中に、１日当たり、約0.5ng/ml〜500μg/mlの範囲の最終濃度を成人に投与する。本発明の治療法を、他の治療剤、特に、他のIL-1ファミリーメンバーのアゴニストまたはアンタゴニストと併用または関連して使用し得る。 IX.レセプター本明細書におけるIL-1δの説明は、上記に記載したように、レセプターを同定する手段を提供する。このようなレセプターは、適度に高い親和性を有するIL-1 δと特異的に結合するべきである。IL-1δを標識し、そのレセプターを検出可能にする種々の構築物が、利用可能である。例えば、二次標識のためのマーカー（例えば、FLAGまたは他のエピトープタグ等）を融合させるIL-1δの直接標識により、レセプターが検出される。これは、生化学的精製のための親和性方法、または発現クローニングアプローチでの標識化もしくは選択のように、組織学的であり得る。２ハイブリッド選択系もまた、利用可能なIL-1δ配列を有する適切な構築物の作成に適用し得る。例えば、FieldsおよびSong(1989)Nature 340:245-246 を参照。代表的には、サイトカインは、少なくとも約30μM、好ましくは少なくとも約10μM、さらに好ましくは少なくとも約3μM以下（1μM、300nM、100nM、3 0nMなどを含む）のKdでそのレセプターに結合する。一般的に、IL-1δの作製方法の説明は、IL-1ε試薬および組成物に関する実施態様と同様に適用し得る。本発明の広い範囲は、以下の実施例を参照すれば最も理解されるが、これらは特定の実施態様に発明を限定しようとするものではない。本明細書に例証により記載した発明は、本明細書において特に開示していない任意の一つまたは複数の要素、一つまたは複数の制限なしに、適当に実行し得る。用いてきた用語および表現は、説明の用語として使用するもので、限定するものではない。また、このような用語を使用するにおいて、本明細書中に示されそして記載される特徴の任意の等価物またはその部分を排除するという表現の意図はないが、種々の変更が請求される発明の範囲内で可能であることが認められる。従って、本発明が、好ましい実施態様および任意的な特徴より具体的に開示されたが、本明細書において開示された概念の改変および変更は、当業者により採用され得、そしてこのような改変および変更は、添付の請求の範囲に規定されたように、本発明の範囲内であるとみなされると理解されるべきである。実施例Ｉ．一般的方法いくつかの標準的方法は、例えば、Maniatisら(1982)Molecular Cloning,A La boratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor Press;S ambrookら(1989)Molecular Cloning:A Laboratory Manual,(第二版),1-3巻、CSH Press,NY;Ausubelら,Biology,Greene Publishing Associates,Brooklyn,NY;またはAusubelら(1987および増刊)Current Protocols in Molecular Biology,Gree ne/Wiley,New Yorkに記載され、これらにおいて参照される。タンパク質の精製方法には、硫酸アンモニウム沈殿、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化等の方法が挙げられる。例えば、Ausubelら(1987および定期増刊) ；Deutscher(1990)「Guide t Protein Purification」Meth.Enzymol.,182巻およびこのシリーズの他の巻；およびタンパク質精製製品の使用に関する製造業者の文献（例えば、Pharmacla,Piscataway,N.J.またはBio-Rad,Richmond,CA）を参照。組換え技術を併用することにより、適切なセグメント（例えば、プロテアーゼ除去配列により融合され得るFLAG配列または等価物）に融合させる。例えば、Ho chuli(1989)Chemische Industrie 12:69-70;Hochuli(1990)「Purification of R ecombinant Proteins with Metal Chelate Absorbentl Setlow(編)Genetic Engi neering,Principle and Methods 12:87-98,Plenum Press,N.Y.;およびCroweら(1 992)0IAexpress:The High Level Expression & Protein Purification System Q IAGEN,Inc.,Chatsworth,CAを参照。例えば、GCG(U.Wisconsin)およびGenBankのプログラムなど、利用可能なソフトウエアプログラムを使用して、コンピューター配列分析を行う。例えば、GenB ank等の公の配列データベースもまた使用した。 IL-4およびIL-10に適用可能な多くの技術を、例えば、米国特許第5,017,691号 (IL-4)、USSN 07/453,951(IL-10)、およびUSSN 08/110,683(IL-10レセプター)に記載のように、IL-1δおよび／またはIL-1εに適用し得る。これらの各々が、あらゆる目的のため、本明細書において参照として援用される。 II．PCRによるIL-1δまたはIL-1εフラグメントの増幅 IL-1δおよびIL-1εタンパク質をコードするDNA配列を単離する様々な方法がある。例えば、DNAを本明細書に開示した配列と同じか、または相補的な配列を有する標識化オリゴヌクレオチドプローブを使用して、ゲノムまたはcDNAライブラリーから単離する。完全長プローブを使用し得るか、または開示した配列を比較することにより、オリゴヌクレオチドプローブを生成し得る。このようなプローブをハイブリダイゼーションアッセイで直接使用し、チモカインタンパク質をコードするDNAを単離す得るか、またはPCRなどの増幅技術に使用するプローブを設計し、IL-1δおよびIL-1εタンパク質をコードするDNAを単離し得る。ポリメラーゼ連鎖反応など、標的配列を増幅する種々の方法もまた、IL-1δおよびIL-1εタンパク質をコードするDNAを調製するために使用し得る。ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)技術を使用して、このような核酸配列を直接mRNAから、cDNA から、およびゲノムライブラリーまたはcDNAライブラリーから増幅する。IL-1δ またはIL-1εタンパク質をコードする単離配列も、PCR増幅の鋳型として使用し得る。 PCR技術において、増幅されるDNA領域の二つの5'領域に相補的なオリゴヌクレオチドプライマーを合成する。次に、二つのプライマーを使用してポリメラーゼ連鎖反応を行う。Innisら(現行版)PCR Protocols：A Gulde to Methods and App lications Academic Press,San Diego,CAを参照。プライマーを選択し、完全長I L-1δまたはIL-1εタンパク質をコードする全領域を増幅するか、または所望により、さらに小さなDNAセグメントを増幅し得る。一旦、このような領域がPCR増幅されると、これらを配列決定し、標準的技術を使用して、得られた配列からオリゴヌクレオチドプローブを調製し得る。次に、これらのプローブを使用して、 tIL-1δまたはIL-1εタンパク質をコードするDNAを単離し得る。プローブとして使用するオリゴヌクレオチドを、BeaucageおよびCarruthers(1 983)Tetrahedron Lett.22(20):1859-1862により最初に記載された固相ホスホルアミダイトトリエステル法に従うか、またはNeedham-VanDevanterら(1984)Nucle ic Acids Res.12:6159-6168により記載の自動合成装置を使用して化学的に合成する。オリゴヌクレオチドの精製を、例えば、PersonおよびRegnier(1983)J.Chr om.255:137-149に記載のように、天然アクリルアミドゲル電気泳動によるか、または陰イオン交換HPLCにより行う。合成オリゴヌクレオチドの配列を、Maxam.A. M.およびGilbert,W．Grossman,L.およびMoldave(編)(1980)Methods in Enzymolo gy 65:499-560 Academic Press,New Yorkの化学的分解方法を使用して確認し得る。相同遺伝子との比較と共に、ペプチドセグメントを使用しても、ライブラリーのスクリーニングに適切なオリゴヌクレオチドを生成し得る。遺伝コードを使用して、スクリーニングのプローブとして有用な適切なオリゴヌクレオチドを選択し得る。ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)技術との組み合わせにおいて、合成オリゴヌクレオチドは、ライブラリーから所望のクローンを選択する上で有用になる。相補的配列もまた、プローブまたはプライマーとして使用する。それらしいアミノ末端の同定に基づき、他のペプチドは、例えば、アンカーベクターまたはポリＡ相補性PCR技術あるいは他のペプチドの相補性DNAと共役させて、特に有用になるはずである。相同IL-1δまたはIL-1εタンパク質を同定するために、公知IL-1ファミリーメンバー間の保存的領域に相当する縮重オリゴヌクレオチドを設計する。プライマーをマウスゲノムDNAによるポリメラーゼ連鎖反応に使用した後、プライマーの5 '末端に位置する制限部位を使用してPCR生成物をサブクローン化し、これらのサブクローン化した挿入物を保有する個々のE.coliコロニーを選び取り、そしてランダム配列決定およびハイブリダイゼーション分析を組み合わせて使用し、公知のIL-1ファミリーメンバーを除去する。続いて、PCR生成物をゲルにより精製し、適切な制限酵素で消化した後、再度ゲル精製し、そしてブルースクリプトベクターにサブクローン化する(Stratagen e,San Diego,CA)。個々のサブクローンを保有する細菌コロニーを、96ウエルマイクロタイタープレートに選び取り、そして細胞をニトロセルロースにプレートすることにより、多数の複製を調製する。複製フィルターを公知のIL-1ファミリーメンバーを代表するプローブにハイブリダイゼーションさせた後、DNAを非ハイブリダイゼーションコロニーから調製し、配列分析を行う。適切な二つの正方向および逆方向プライマーを、本明細書に供した配列（配列番号１、３および５を参照）および一般的な知識を使用して選択する。例えば、 Innisら(現行版)PCR Protocols:A Guide to Methods and Applications Academi c Press,San Diego,CA;およびDieffenbachおよびDveksler(現行版)PCRPrimer:A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Press,CSH,NYを参照。RT-PCRを、例えば、cDNAを生成するメッセージの存在について選択した適切なmRNA試料、例えば、単球またはマクロファージ細胞試料で使用する。IL-1δの元の単離物は、全マウスcDNAライブラリー由来であり、IL-1εについては、マウス胎盤由来であった。完全長クローンを、PCRシグナルにより予め選択した適切な組織由来のcDNAライブラリーをハイブリダイゼーションさせることにより単離し得る。一般的に知られているように、PCRプライマーは、代表的には、例えば、15〜3 0ヌクレオチドの少なくとも15ヌクレオチドを含むように設計される。21ヌクレオチドを含有するIL-1δまたはIL-1ε特異的プライマー（例えば、IL-1δまたは IL-1εドメイン由来の少なくとも４アミノ酸を含むIL-1δまたはIL-1εポリペプチドをコードするプライマー）の設計を以下に記載する。他のIL-1δまたはIL-1 εポリペプチドフラグメントを増幅するように設計された他のPCRプライマー、例えば、突然変異誘発プライマーを、同様の方法で設計する。好ましくは、このようなプライマーのヌクレオチドのほとんどまたはすべてが、保存的アミノ酸（例えば、本明細書に記載のIL-1δまたはIL-1ε特異的アミノ酸を含む、配列番号２、４、６のアミノ残基）をコードする。例えば、少なくとも40％IL-1δまたは IL-1ε保存的アミノ酸を含有するプライマーを使用し得る。21ヌクレオチドを含むこのようなプライマーは、少なくとも、3/7、4/7、5/7、6/7または7/7 IL-1δ またはIL-1ε保存的アミノ酸をコードする配列を含み得る。一旦、IL-1δまたは IL-1εアミノ酸が設計されるプライマー配列に対する鋳型として選択されれば、プライマーを、例えば、標準的化学的方法を使用して合成し得る。遺伝コードの縮重および好ましい種改変体の偏向のため、このようなプライマーは、一般的な知識を使用して容易に測定し得るように、適切な縮重配列を含むように設計されるべきである。上記に提示したガイドラインに基づいて、IL-1δまたはIL-1Iε特異的プライマーの設計に鋳型として使用し得るIL-1δまたはIL-1ε保存的アミノ酸ペプチド例は、以下の通りである。IL-1δまたはIL-1εポリペプチド（配列番号２、４および５）の配列アラインメントを分析することにより、さらなる例を認め得る。プライマーを設計し、種々の構造的特徴またはドメイン（例えば、この戦略を使用して増幅し得る12βストランドのいずれか１つに相当するIL-1δまたはIL-1ε ペプチドのいずれかの４〜10アミノ酸領域）を増幅し得る。プライマーの長さに応じて、例えば、以下に示すセグメントのいずれかの４〜７連続アミノ酸に相当する所望のプライマーを設計し得る。１．LeuCysPheArgMetLysAsp(マウスIL-1δのアミノ酸残基８〜１４に相当（配列番号２を参照）)。２．ValLeuTyrLeuHisAsn(マウスIL-1δのアミノ酸残基19〜24に相当（配列番号２を参照）)。３．GlnLeuLeuAlaGly(マウスIL-1δのアミノ酸残基26〜30に相当（配列番号２を参照）)。４．IleSerValValProAsn(マウスIL-1δのアミノ酸残基43〜48に相当（配列番号２を参照）)。５．SerProValIleLeuGlyVal(マウスIL-1δのアミノ酸残基56〜62に相当（配列番号２を参照）)。６．GlnCysLeuSerCysGlyThr(マウスIL-1δのアミノ酸残基67〜73に相当（配列番号２を参照）)。７．ProIleLeuLysLeuGlu(マウスIL-1δのアミノ酸残基77〜82に相当（配列番号２を参照）)。８．PheTyrArgArgAspMetGly(マウスIL-1δのアミノ酸残基101〜107に相当（配列番号２を参照）)。９．LeuThrSerSerPheGluSer(マウスIL-1δのアミノ酸残基108〜114に相当（配列番号２を参照）)。 10．PheLeuCysThrSer(マウスIL-1δのアミノ酸残基121〜125に相当（配列番号２を参照）)。 11．GlnProValArgLeuThr(マウスIL-1δのアミノ酸残基130〜135に相当（配列番号２を参照）)。 12．PheTyrPheGlnGln(マウスIL-1δのアミノ酸残基150〜154に相当（配列番号２を参照）)。 13．ArgAlaLeuAspAlaSerLeu(マウスIL-1δのアミノ酸残基49〜55に相当（配列番号２を参照）)。 IL-1εについては、１．SerLeuArgHisValGlnAsp(マウスIL-1εのアミノ酸残基13〜19に相当（配列番号６を参照）)。２．ValTrpIleLeuGlnAsn(マウスIL-1εのアミノ酸残基24〜29に相当（配列番号６を参照）)。３．IleLeuThrAlaVal(マウスIL-1εのアミノ酸残基31〜35に相当（配列番号６を参照）)。４．IleThrLeuLeuProCys(マウスIL-1εのアミノ酸残基46〜51に相当（配列番号６を参照）)。５．AspProThrTyrMetGlyVal(マウスIL-1εのアミノ酸残基63〜69に相当（配列番号６を参照）)。６．SerCysLeuPheCysThrLys(マウスIL-1εのアミノ酸残基74〜80に相当（配列番号６を参照）)。７．ProValLeuGlnLeuGly(マウスIL-1εのアミノ酸残基85〜90に相当（配列番号６を参照）)。８．PheTyrHisLysLysSerGly(マウスIL-1εのアミノ酸残基109〜115に相当（配列番号６を参照）)。９．ThrThrSeluSer(マウスIL-1εのアミノ酸残基116〜122に相当（配列番号６を参照）)。 10．PheIleAlaValCys(マウスIL-1εのアミノ酸残基129〜133に相当（配列番号６を参照）)。 11．CysProLeuIleLeuThr(マウスIL-1εのアミノ酸残基138〜143に相当（配列番号６を参照）)。 12．PheGluMetIleVal(マウスIL-1εのアミノ酸残基154〜158に相当（配列番号６を参照）)。上記に記載したように、IL-1εまたはIL-1δプライマー、例えば、上記に示すようなIL-1εまたはIL-1δ特異的ペプチドまたはその部分に基づくプライマーを PCR反応に使用し、IL-1εまたはIL-1δプローブを生成し得る。このプローブを標準的スクリーニング方法で使用し、IL-1εまたはIL-1δファミリーメンバーをコードする核酸を同定し得る（例えば、Ausubelら、前出を参照）。 III．IL-1δまたはIL-1εの組織分布 IL-1δをコードする遺伝子のメッセージは、マウスcDNAライブラリーで検出されている。IL-1εのメッセージは、胎盤組織で検出されている。サザン分析：一次増幅cDNAライブラリー由来のDNA(5μg)を適切な制限酵素で消化し、挿入物を放出させ、１%アガロースゲルで分析し、そしてナイロン膜に移す(Schleicher and Schuell,Keene,NH)。ヒトmRNAの単離のための試料には、末梢血単核細胞（単球、Ｔ細胞、NK細胞、顆粒球、Ｂ細胞）、休止(T100);末梢血単核細胞、抗CD3で２、６、12時間活性化し、プールした(T101);Ｔ細胞、TH0クローンMot72、休止(T102);Ｔ細胞、TH0クローンMot72、抗CD28および抗CD3で３、６、12時間活性化し、プールした(T103) ;Ｔ細胞、TH0クローンMot72、特異的ペプチドで２、７、12時間アネルギー処理し、プールした(T104);Ｔ細胞、TH1クローンHY06、休止(T107);Ｔ細胞、TH1クローンHY06、抗CD28および抗CD3で３、６、12時間活性化し、プールした(T108);Ｔ細胞、TH1クローンHY06、特異的ペプチドで２、６、12時間アネルギー処理し、プールした(T109);Ｔ細胞、TH2クローンHY935、休止(T110);Ｔ細胞、TH2クローンHY935、抗CD28および抗CD3で２、７、12時間活性化し、プールした(T111);Ｔ細胞CD4+CD45RO−Ｔ細胞を抗CD28、IL-4、および抗IFN-γにおいて27日間極性化し、TH2を極性化し、抗CD3および抗CD28で４時間活性化した(T116);Ｔ細胞腫瘍株JurkatおよびHut78、休止(T117);Ｔ細胞クローン、プールしたAD130.2、Tc783 .12、Tc783.13、Tc783.58、Tc782.69、休止(T118);Ｔ細胞ランダムγδＴ細胞クローン、休止(T119);脾細胞(splenocyte)、休止(B100)；脾細胞、抗CD40およびI L-4で活性化した(B101);Ｂ細胞EBV株、プールしたWT49、RSB、JY、CVIR、721.22 1、RM3、HSY、休止(B102);Ｂ細胞株JY、PMAおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした(B103);プールしたNK20クローン、休止(K100);プールしたNK20クローン、PMAおよびイオノマイシンで６時間活性化した(K101);NKLクローン、LGL白血病患者の末梢血由来、IL-2処理した(K106);NK細胞傷害性クローン640-A30-1、休止(K107);造血前駆細胞株TF1、PMAおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした(C100);U937前単球性細胞株、休止(M100);U937前単球性細胞株、PMAおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした(M101 );溶離した単球(elutriated monocyte)、LPS、IFNγ、抗IL-10で１、２、６、12 、24時間活性化し、プールした(M102);溶離した単球、LPS、IFNγ、IL-10で１、２、６、12、24時間活性化し、プールした(M103);溶離した単球、LPS、IFNγ、抗IL-10で４、16時間活性化し、プールした(M106);溶離した単球、LPS、IFNγ、 IL-10で４、16時間活性化し、プールした(M107);溶離した単球、LPSで１時間活性化した(M108);溶離した単球、LPSで６時間活性化した(M109);DC70％CD1a+、CD 34+GM-CSF、TNFα12日間由来、休止(D101);DC70％CD1a+、CD34+ GM-CSF、TNFα1 2日間由来、PMAおよびイオノマイシンで１時間活性化した(D102);DC70％CD1a+、 CD34+ GM-CSF、TNFα12日間由来、PMAおよびイオノマイシンで６時間活性化した (D103);DC 95％CD1a+、CD34+ GM-CSF、TNFα12日間FACS選別由来、PMAおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした(D104)；DC 95％CD14+、ex CD3 4+ GM-CSF、TNFα12日間FACS選別由来、PMAおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした(D105);DC CD1a+ CD86+、CD34+ GM-CSF、TNFα12日間FACS 選別由来、PMAおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした(D106) ；DC、単球GM-CSF、IL-4 5日間由来、休止(D107)；DC、単球GM-CSF、IL-4 5日間由来、休止(D108)；DC、単球GM-CSF、IL-4 5日間由来、４、16時間LPS活性化し、プールした(D109)；DC、単球GM-CSF、IL-4 5日間由来、TNFα、単球(上清(sup e))で４、16時間活性化し、プールした(D110);平滑筋腫L11良性腫瘍(X101);正常子宮筋層M5(0115);悪性平滑筋肉腫GS1(X103)；肺繊維芽細胞肉腫細胞株MRC5、PM Aおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした(C101);腎臓上皮癌細胞株CHA、PMAおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした(C102);2 8週齢雄性胎児腎(0100);28週齢雄性胎児肺(0101);28週齢雄性胎児肝臓(0102);28 週齢雄性胎児心臓(0103);28週齢雄性胎児脳(0104);28週齢雄性胎児胆嚢(0106);2 8週齢雄性胎児小腸(0107);28週齢雄性胎児脂肪組織(010 8);25週齢雌性胎児卵巣(0109);25週齢雌性胎児子宮(0110);28週齢雄性胎児精巣( 0111);28週齢雄性胎児脾臓(0112);成人の(adult)28週齢胎盤(0113);および12歳由来の炎症扁桃腺(X100)。クローニング種改変体について、本明細書中に記載の情報を使用して、ヒトIL -1εまたはIL-1δの発現を、検出可能なプローブに関しては、ヒトホモログを使用して上記のように決定し得る。 IL-1δおよびIL-1ε由来の転写物の組織分布を、RNAse保護アッセイを使用する実験で決定した。成人脳、脾臓、肺、肝臓および腎臓から、チオシアン酸グアニジウム(guanidium thiocyantae)でホモジネートし、フェノールで抽出した後、5.7M塩化セシウムで遠心分離することにより全RNAを調製した(Sambrook,ら、M olecular Cloning:A Laboratory Manual,現行版,Cold Spring Harbor Laborator y Press，Cold Spring Harbor,NewYork)。各組織からの全RNA 10μgまたは酵母t RNA 10μgを、RNAse保護アッセイに使用した。pBluescriptにクローン化した線状化鋳型で、T7またはT3 RNAポリメラーゼのいずれかを使用してリボプローブを合成した。各マウスIL-1δおよびIL-1εプローブは、ベクター配列の25〜50ヌクレオチドに結合したアンチセンス鎖由来の150〜200ヌクレオチドを含有した。試薬を、標準的製造業者プロトコールに従って、Ambion(Austin,Texas)から得た。 IL-1δおよびIL-1ε由来の転写物の組織分布をIL-1γと比較した。その結果は、IL-ε発現が胚、出生後および成体マウスにおいて検出可能であることが示された。IL-1ε転写物（約1.35kD）は、妊娠７日目および出生後１日目に検出可能であり、成体のIL-1δ転写物（約1.35kD）は、肺および腎臓の両方で検出可能であったが、脳、脾臓および肝臓では検出されなかった。IL-1δについては、約1. 35KD転写物は、妊娠15日目で強く検出可能であったが、より大きなサイズの転写物（約3.5kD）は、より弱く検出された。同様の結果が、出生後１日目に観察された。成体組織では、単一サイズのIL-1δ転写物（約1.8kD）が、肺、肝臓および腎臓で検出された。 IV．IL-1δおよびIL-1εの種相当物のクローニング種々の戦略を用いて、マウスIL-1δおよびIL-1εの種相当物を得る。方法の一つは、密接に関連した種DNAプローブを使用する交叉ハイブリダイゼーションによる。マウスとヒトIL-1相当物との間の同一性の程度は、代表的には、70%の高さである。中間段階として、進化的に類似した種を検討するのは有用であり得る。別の方法は、ヒトとマウスIL-1相当物との間の類似性のブロック（例えば、高度に保存されたポリペプチド配列の領域）の同定に基づく特異的PCRプライマーを用いることによる。さらに、IL-1α、IL-1β、およびIL-1RA遺伝子は、同じヒト染色体上でクラスター形成する。IL-1βと最も密接に関連する第４の公知のIL-1ファミリーのメンバー、IL-1γを、異なるヒト染色体にマッピングした。インタクトなIL-1α、IL -1β、IL-1RA遺伝子クラスターの重複（さらなるファミリーメンバーの増幅を説明する潜在的な遺伝的事象）は、IL-1γ遺伝子座の位置に、なお未同定のIL-1遺伝子としての２つの存在を示唆する。IL-1δおよびIL-1εは、潜在的な候補であり、そしてヒトIL-1γ遺伝子座の配列決定は、新規なIL-1遺伝子の同定を十分導き得る。Ｖ．哺乳動物IL-1δタンパク質の生成適切な、例えば、GSTの融合構築物を、例えば、E.coliで発現させるために操作する。例えば、マウスIGIF pGexプラスミドを構築し、そしてE.coliに形質転換する。新たに形質転換した細胞を、50μg/mlアンピシリン含有LB培地で増殖させ、そしてIPTG(Sigma,St.Louis,MO)で誘導する。一晩の誘導後、細菌を収集し、そしてIL-1δを含むペレットを単離する。ペレットを、TE緩衝液（50mM Tris- 塩基pH8.0，10mM EDTAおよび2mMペファブロック(pefabloc)）２リットル中でホモジネートする。この物質を微量流動化装置(microfluidizer)(Microfluidics,N ewton,MA)を三回通過させる。流動化上清を、Sorval1 GS-3ローターにより13,00 0rpmで１時間スピンダウンさせる。得られたIL-1δ含有上清を濾過し、そして50 mM Tris-塩基pH8.0で平衡化したグルタチオン-SEPHAROSEカラムに通す。IL-1δ- GST融合タンパク質を含む画分をプールし、そしてトロンビン（Enzyme Research Laboratorles,Inc.，South Bend,IN）で切断する。次に、切断したプールを、5 0mM Tris-塩基で平衡化したQ-SEPHAROSEカラムに通す。IL-1δを含む画分をプールし、そして冷却した蒸留H₂Oで希釈し伝導率を低下させ、そして新鮮なQ-SEPHA ROSEカラムに戻して通す。IL-1δを含む画分をプールし、アリコートにし、そして-70℃の冷凍庫で保存する。マウスIL-1βとCDスペクトルとの比較により、タンパク質が正確に折り畳まれることが示唆される。Hazudaら、(1969)J.Biol.Chem.264:1689-1693を参照。同様の技術を完全長IL-1εに適用可能である。 VI．IL-1δまたはIL-1εに関する生物学的アッセイ生物学的アッセイにより、Ｔ細胞上のIL-1γによるIFN-γ誘導活性を確認した。IL-1γは、精製されたNK細胞によるIFN-γの産生を刺激し、そしてその誘導は、IL-12またはIL-2と強力に相乗作用を与えられる。類似の生物学的活性は、IL- 1δおよび／またはIL-1εあるいはそれらのアンタゴニストにより示されるべきである。インターロイキン１のファミリーは、その各々が炎症性疾患の重要な媒介物質である分子を含有する。包括的な概説については、Dinarello(1996)「Biologic basis for interleukin-1 in desease」Blood 87:2095-2147を参照。最近、同定されたIGIF/IL-1γ（例えば、Rotheら、（1997）「Active stage of autoimmune diabetes is associated with the expression of a novel cytokine，IGIF，wh ich is located near Idd2」J.Clin.Invest.99:469-474）を含む、種々のIL-1が、疾患の開始において重要な役割を果たすという指示がある。IL-1ファミリーに関連した新規タンパク質の知見は、疾患の開始に関する分子学的基礎(molecular basis)を提供し、そして増加した範囲および効力の治療戦略の開発を可能にする分子の同定を促進する。ファミリーの他の公知のメンバーに適用されるのと類似の生物学的アッセイが、精製されたIL-1δまたはIL-1εを用いて実施されるべきである。 VII．IL-1δまたはIL-1εに特異的な抗体の調製同系Balb/cマウスを、組換え形態のタンパク質（例えば、精製した可溶性IL-1 δ-FLAGまたはIL-1ε-FLAGあるいは安定にトランスフェクトしたNIH-3T3細胞で腹腔内免疫する。動物を、適切な時点で、タンパク質（さらなるアジュバントを含むか、または含まない）で追加免疫し、抗体の産生をさらに刺激する。血清を収集するか、またはハイブリドーマを収集した脾臓で生成する。あるいは、Balb/cマウスを、遺伝子またはそのフラグメントで形質転換した細胞（内因性または外因性細胞のいずれか）で免疫するか、または抗原の発現を富化した単離された膜で免疫する。血清を適切な時点で、代表的には多くのさらなる投与後に収集する。種々の遺伝子治療技術は、例えば、免疫反応を生成するためのインサイチュでのタンパク質産生において有用であり得る。モノクローナル抗体を作製し得る。例えば、脾細胞を、適切な融合パートナーと融合し、そしてハイブリドーマを標準手順により増殖培地で選択する。ハイブリドーマの上清を、所望のIL-1γに結合する抗体の存在について、例えば、ELIS Aまたは他のアッセイによりスクリーニングする。IL-1δまたはIL-1εを特異的に認識する抗体もまた、選択または調製され得る。別の方法において、合成ペプチドまたは精製タンパク質を免疫系に提示し、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を生成する。例えば、Coligan(1991 )Current Protocols in Immunology Wiley/Greene；ならびにHarlowおよびLane( 1989)Antibodies:A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Pressを参照。適切な状況において、結合試薬を上記のように（例えば、蛍光または他の方法で）標識するか、またはパンニング法の基質に固定化する。核酸はまた、動物の細胞に導入されて抗原（これは、免疫反応を誘発するのに役立つ）を産生し得る。例えば、Wangら、(1993)Proc.Nat'l.Acad.Sci.90:4156-4160;Barryら、(1994)Bio Te chniquesl6:616-619;およびXiangら、(1995)Immunity 2:129−135を参照。 VIII．IL-1δまたはIL-1εを有する融合タンパク質の生成様々な融合構築物を、IL-1δまたはIL-1εで作製する。この遺伝子の部分を、エピトープタグ（例えば、FLAGタグ）、またはツーハイブリッドシステム構築物に融合する。例えば、FieldsおよびSong(1989)Nature 340:245-246を参照。エピトープタグを、結合パートナー（例えば、それぞれのIL-1についてのレセプター）を検出する抗FLAG抗体での検出を用いる発現クローニング手順に使用し得る。ツーハイブリッドシステムはまた、IL-1δまたはIL-1εに特異的に結合するタンパク質を単離するために使用され得る。 IX．IL-1δまたはIL-1εのマッピング染色体スプレッドを調製した。インサイチュハイブリダイゼーションを、72時間培養したフィトヘマグルチニン刺激リンパ球から入手された染色体調製物で実施した。培養の最後の７時間に、5-ブロモデオキシウリジンを添加し(60μg/ml 培地)、良質のハイブリダイゼーション後染色体バンディングを確実にさせた。適切なフラグメント（例えば、PCRフラグメント）を、全Ｂ細胞cDNA鋳型でプライマーの助けをかりて増幅し、適切なベクターにクローン化した。3Hでのニック翻訳(nick−translation)により、ベクターを標識した。放射標識プローブを、Matteiら、(1985)Hum.Genet.69:327-331に記載のように、中期スプレッドにハイブリダイズさせた。核トラックエマルジョン（nuclear track emulsion)(KODAK NTB₂)で被覆後、スライドを、例えば、４℃で18時間曝露した。バンディング手順間に、銀粒子のすべりを回避するため、まず、緩衝化Giemsa溶液で染色し、中期を写真撮影した。次いで、R-バンディングを、蛍光色素光分解-Giemsa(FPG)法によって行い、そして中期を再度写真撮影した後、分析した。結果は、マウス染色体２、IL-1A、IL-1BおよびIL-1RNの動原体領域へのIL-1δ およびIL-1εの両方のマッピングが、IL-1δおよびIL-1εと遠位にある450Kb長の染色体２(2q13)を占めることを示す。Ｘ．構造活性関係特定の残基の臨界に関する情報を、標準的手順および分析を使用して決定する。標準的変異誘発分析を、例えば、測定位置、例えば、上記で同定した位置で多くの異なる改変体を生成し、そして改変体の生物学的活性を評価することにより行う。これを、活性を改変する位置を決定する程度まで、または生物学的活性を保持、ブロック、もしくは調節させるために置換され得る残基を測定する特定の位置上の焦点まで実施され得る。あるいは、天然の改変体の分析は、どの位置が天然の変異体に寛容かを示し得る。これは、個体間、または株もしくは種間の改変体の集団分析から生じ得る。選択した個体からの試料を、例えば、PCR分析および配列決定により分析する。これにより、集団多型の評価が可能になる。 XI．IL-1δまたはIL-1εについてのレセプターの単離 IL-1δを、特異的結合試薬として使用し、抗体が使用されるのと同様に、その結合特異性の利点を利用することにより、結合パートナーを同定し得る。結合試薬は、上記のように（例えば、蛍光または他の方法で）標識するか、またはパンニング方法の基質に固定化する。結合組成物を使用して、結合パートナー（すなわち、レセプター）を発現する細胞株から作製した発現ライブラリーのスクリーニングを行う。標準的染色技術を使用して、細胞内または表面発現レセプターを検出または選別するか、または表面発現形質転換細胞をパンニングによりスクリーニングする。細胞内発現のスクリーニングを、種々の染色または免疫蛍光手順により行う。McMahanら、(1991 )EMBO J.10:2821-2832もまた参照。例えば、０日目に、２チャンバーパーマノックス(permanox)スライドを、チャンバーあたり1mlのフィブロネクチン（PBS中10ng/ml）で、室温にて30分間、予め被覆する。PBSで1回リンスする。次に、COS細胞を、1.5mlの増殖培地中、2〜3 ×10⁵細胞／チャンバーでプレーティングする。37℃で一晩インキュベートする。各試料について、１日目に、66μg/ml IDEAE-デキストラン、無血清DME中、66 μMクロロキン、および４μg DNAの溶液0.5mlを調製する。各セットについて、例えば、１および1/200希釈のIL-1γ-FLAG cDNAの陽性コントロールおよび陰性模造物を調製する。細胞を無血清DMEでリンスする。DNA溶液を添加し、そして37 ℃で５時間インキュベートする。培地を除去し、そしてDME中、0.5mlの10％DMS0 を2.5分間添加する。これを除去し、DMEで一度洗浄する。1.5mlの増殖培地を添加し、そして一晩インキュベートする。２日目、培地を交換する。３または４日目、細胞を固定し、そして染色する。細胞をHank緩衝化生理食塩水溶液（Hank's Buffered Saline Solution）(HBSS) で二回リンスし、そして４%パラホルムアルデヒド(PFA)/グルコースで５分間固定する。HBSSで３回洗浄する。すべての液体を除去した後、スライドを-80℃で保存し得る。各チャンバーについて、0.5mlインキュベーションを以下のように行う。32μl/mlの1M NaN₃を含むHBSS/サポニン(0.1%）を、20分間添加する。次に、細胞をHBSS/サポニンで１回洗浄する。適切なIL-1δまたはIL-1δ／抗体複合体を細胞に添加し、そして30分間インキュベートする。細胞をHBSS/サポニンで二回洗浄する。適切な場合、第１の抗体を30分間添加する。第２の抗体、例えば、ベクター抗マウス抗体を1/200希釈で添加し、そして30分間インキュベートする。ELISA溶液（例えば、Vector Elite ABC西洋ワサビペルオキシダーゼ溶液）を調製し、そして30分間プレインキュベートする。例えば、HBSS/サポニン2.5 ml当たり、Ａ溶液（アビジン）１滴およびＢ溶液（ビオチン）１滴を使用する。細胞をHBSS/サポニンで二回洗浄する。ABC HRP溶液を添加し、そして30分間インキュベートする。細胞をHBSSで二回洗浄し、二回目の洗浄を２分間行い、細胞を閉鎖する。次いで、Vectorジアミノ安息香酸(DAB)を５〜10分間添加する。ガラス蒸留水5ml当たり、緩衝液２滴に加えてDAB 4滴およびH₂O₂ 2滴を使用する。チャンバーを注意深く除去し、そしてスライドを水中でリンスする。数分間、風乾し、次いでCrystal Mount 1滴を添加し、そしてカバーを置く。85〜90℃で５分間焼く。プールの陽性染色を評価し、そして結合の原因となる単一遺伝子を単離するまで進行的にサブクローニングする。あるいは、IL-1δ試薬を使用し、レセプターを発現する細胞をアフィニティー精製するか、または選別する。例えば、Sambrookら、またはAusubelらを参照。別の戦略は、パンニングにより膜結合レセプターについてスクリーニングすることである。レセプターcDNAを、上記のように構築する。リガンドを、固定化し、使用して、発現細胞を固定化し得る。固定化は、例えば、IL-1δ融合構築物の FLAG配列を認識する適切な抗体を使用するか、または第１の抗体に対して惹起された抗体を使用することにより達成され得る。選択および増幅の反復周期により、適切なクローンが富化され、その結果、レセプターを発現するクローンが単離される。ファージ発現ライブラリーを、哺乳動物IL-1δによりスクリーニングし得る。適切な標識技術、例えば、抗FLAG抗体は、適切なクローンの特異的な標識化を可能にする。本明細書中におけるすべての引用物は、各個々の刊行物または特許出願が、すべての図面および図を含めて参考として援用されることが特別にかつ個々に示されるのと同程度に、本明細書中において参考として援用される。当業者にとって明白なように、本発明の多くの改変および変更は、本発明の目的、精神および範囲を維持するように、特定の状況、材料、物質の組成物、プロセス、プロセス工程に適合され得る。このような改変はすべて、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本明細書に添付した請求の範囲内にあることが意図される。本明細書中に記載される特定の実施態様は、例示として提供するだけであり、そして本発明は、添付の請求の範囲の用語に加えて、このような請求の範囲が権利を付与される等価物の全範囲により制限されるもので、本発明は本明細書に実施例として提示した特定の実施態様により制限されるものではない。配列の提出配列番号１は、齧歯類IL-1δのヌクレオチド配列を提供する。配列番号２は、齧歯類IL-1δのポリペプチド配列を提供する。配列番号３は、齧歯類IL-1εの部分的ヌクレオチド配列を提供する。配列番号４は、齧歯類IL-1εの部分的ポリペプチド配列を提供する。配列番号５は、齧歯類IL-1εの完全長核酸配列を提供する。配列番号６は、齧歯類IL-1εの完全長ポリペプチド配列を提供する。配列番号７は、ヒトIL-1Rの前駆体ポリペプチド配列を提供する。配列番号８は、ヒトIL-1γ（IGIF）の前駆体ポリペプチド配列を提供する。配列番号９は、マウスIL-1γ（IGIF）の前駆体ポリペプチド配列を提供する。配列番号１０は、ヒトIL-1βの前駆体ポリペプチド配列を提供する。配列番号１１は、ヒトIL-1αの前駆体ポリペプチド配列を提供する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/08 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＣ１２Ｐ 21/08 5/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者バザン，ジェイ．フェルナンドアメリカ合衆国カリフォルニア 94025, メンロパーク，ユニバーシティドライブ 775 (72)発明者キャステレイン，ロバートエイ. アメリカ合衆国カリフォルニア 94062, レッドウッドシティ，サミットドライブ 463

Claims

【特許請求の範囲】１．単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチドであって：Ａ）ａ）配列番号２の12個の連続したアミノ酸のセグメントに対して生じるポリクローナル抗体に対して特異的に結合し；そしてｂ）以下の群（配列番号２を参照のこと）：から選択される少なくとも１つの配列を含むか、またはＢ）ａ）配列番号６の12個の連続したアミノ酸のセグメントに対して生じるポリクローナル抗体に特異的に結合し；そしてｂ）以下の群（配列番号６を参照のこと）：から選択される少なくとも１つの配列を含む、ポリペプチド。２．請求項１に記載のポリペプチドであって：ａ）前記ポリペプチドが１Ａ部のｂ）節における前記群から選択される複数の前記配列を含むか；ｂ）該ポリペプチドが、１Ｂ部のｂ）節における前記群から選択される複数の該配列を含むか；またはｃ）以下の群：ｉ）配列番号２のポリペプチド；および ii）配列番号６のポリペプチドから選択される免疫原に対して生じるポリクローナル抗体に特異的に結合する、ポリペプチド。３．ポリペプチドであって、該ポリペプチドが、Ａ）請求項１のＡに記載のポリペプチドであって、ここで前記12個の連続したアミノ酸のセグメントが、以下（配列番号２を参照のこと）：から選択されるポリペプチドであるか、またはＢ）請求項１のＢに記載のポリペプチドであって、ここで前記12個の連続したアミノ酸のセグメントが、以下（配列番号６を参照のこと）：から選択されるポリペプチドである、ポリペプチド。３．請求項２に記載のポリペプチドであって、該ポリペプチドは：ｉ）成熟タンパク質を含むか； ii）翻訳後修飾を欠損するか； iii）マウスを含む齧歯類由来であるか； iv）IL-1δまたはIL-1εの天然の対立遺伝子改変体であるか；ｖ）少なくとも約30個のアミノ酸長を有するか； vi）齧歯類IL-1δに特異的である、少なくとも２つの重複しないエピトープを示すか； vii）配列番号２に対して、少なくとも約20アミノ酸の長さにわたって、少なくとも約90%の配列同一性を示すか； viii）齧歯類IL-1εに特異的である、少なくとも２つの重複しないエピトープを示すか； ix）配列番号６に対して、少なくとも約20アミノ酸の長さにわたって少なくとも約90%の配列同一性を示すか；ｘ）グリコシル化されるか； xi）天然のグリコシル化を伴って、少なくとも10kDの分子量を有するか； xii）合成ポリペプチドであるか； xiii）固体支持体に付着しているか； xiv）別の化学部分に結合しているか； xv）天然の配列から５未満の置換であるか；または xvi）天然の配列からの欠失改変体もしくは挿入改変体である、ポリペプチド。４．可溶性のポリペプチドであって：ａ）請求項２に記載の滅菌ポリペプチドを含むか；あるいはｂ）請求項２に記載の滅菌ポリペプチドおよびキャリアを含み、ここで該キャリアは：ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む、水性化合物である；ならびに／または ii）経口、直腸、鼻腔、局所、もしくは非経口投与のために処方される、ポリペプチド。５．請求項２に記載のポリペプチド配列を有する融合タンパク質であって、さらに、以下：ａ）請求項２に記載の成熟タンパク質；ｂ）FLAG、His6、もしくはIg配列を含む、検出タグもしくは精製タグ；またはｃ）別のサイトカインもしくはケモカインの配列、を含有する、融合タンパク質。６．キットであって、請求項２に記載のタンパク質またはポリペプチド、ならびに：ａ）該タンパク質もしくはポリペプチドを含有する区画；および／またはｂ）該キットにおける試薬の使用もしくは処分についての取扱説明書を含む、キット。７．抗体からの抗原結合部位を含む結合化合物であって、請求項２に記載のポリペプチドの成熟タンパク質に特異的に結合し、ここで：ａ）該成熟タンパク質が、IL-1δまたはIL-1ε哺乳動物タンパク質であるか；ｂ）該結合化合物が、Fv、Fab、またはFab2フラグメントであるか；ｃ）該結合化合物が、別の化学部分に結合しているか；あるいはｄ）該抗体が：ｉ）配列番号２もしくは６の12個の連続したアミノ酸のセグメントに対して惹起されるか； ii）成熟IL-1εに対して惹起されるか； iii）精製された齧歯類IL-1δもしくはIL-1εに対して惹起されるか； iv）免疫選択されるか； v）ポリクローナル抗体であるか； vi）変性されたIL-1δまたはIL-1εに結合するか； vii）少なくとも30μMの、抗原に対するKdを示すか； viii）ビーズまたはプラスチックメンブレンを含む、固体基体に付着しているか； ix）滅菌組成物中にあるか；またはｘ）放射性標識または蛍光標識を含んで、検出可能に標識される結合化合物。８．キットであって、請求項７に記載の結合化合物、ならびに：ａ）該結合化合物を含有する区画；および／またはｂ）該キットにおける試薬の使用もしくは処分についての取扱説明書を含む、キット。９．組成物であって、以下：ａ）請求項７に記載の滅菌結合化合物を含むか、またはｂ）請求項７に記載の結合化合物およびキャリアを含み、ここで該キャリアは：ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む、水性化合物であり；ならびに／または ii）経口、直腸、鼻腔、局所、もしくは非経口投与のために処方される、組成物。１０．請求項２に記載のタンパク質もしくはペプチドもしくは融合タンパク質をコードする、単離された核酸もしくは組換え核酸であって：ａ）請求項２に記載のタンパク質、ペプチド、もしくは融合タンパク質は、哺乳動物からのIL-1δまたはIL-1εであるか、あるいはｂ）該核酸は：ｉ）配列番号２もしくは配列番号６の１つの抗原性ペプチド配列をコードするか； ii）配列番号２もしくは配列番号６の複数の抗原性ペプチド配列をコードするか； iii）前記セグメントをコードする天然のcDNAに少なくとも約80%の同一性を示すか； iv）発現ベクターであるか；ｖ）複製起点をさらに含むか； vi）天然の供給源由来であるか； vii）検出可能な標識を含むか； viii）合成ヌクレオチド配列を含むか； ix）６kb未満、好ましくは３kb未満であるか；ｘ）齧歯類由来であるか； xi）天然の完全長のコード配列を含むか； xii）該IL-1δもしくはIL-1εをコードする遺伝子についてのハイブリダイゼーションプローブであるか；または xiii）PCRプライマー、PCR産物、もしくは変異誘発プライマーであるか；または xiv）IL-1δまたはIL-1εタンパク質をコードする、核酸。１１．請求項１０に記載の核酸で形質転換された、細胞。１２．請求項１１に記載の細胞であって、ここで該細胞が：ａ）原核生物細胞；ｂ）真核生物細胞；ｃ）細菌細胞；ｄ）酵母細胞；ｅ）昆虫細胞；ｆ）哺乳動物細胞；ｇ）マウス細胞；ｈ）霊長類細胞；またはｉ）ヒト細胞、である、細胞。１３．キットであって、請求項１０に記載の核酸、ならびに：ａ）該核酸を含有する区画；ｂ）哺乳動物IL-1δもしくはIL-1εタンパク質もしくはポリペプチドをさらに含有する区画；および／またはｃ）該キットにおける試薬の使用および処分についての取扱説明書を含む、キット。１４．単離された核酸または組換え核酸であって、ａ）30℃および２M未満の塩の洗浄条件下で、配列番号１にハイブリダイズするか；またはｂ）30℃および２M未満の塩の洗浄条件下で、配列番号３または５にハイブリダイズする、核酸。１５．請求項１４に記載の核酸であって、ここで：ａ）洗浄条件が、45℃および／もしくは500mMの塩であるか；またはｂ）上記同一性が、少なくとも90%である、および／もしくはストレッチが、少なくとも55個のヌクレオチドである、核酸。１６．請求項１５に記載の核酸であって、ここで：ａ）洗浄条件が、55℃および／もしくは150mMの塩であり；またはｂ）前記同一性が、少なくとも95%である、および／もしくは前記ストレッチが、少なくとも75個のヌクレオチドである、核酸。１７．炎症応答に関与する細胞を調節する方法であって、該細胞と、請求項１または２に記載の哺乳動物IL-1δまたはIL-1εポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストとを接触させる工程を包含する、方法。１８．請求項１７に記載の方法であって、ここで：ａ）前記接触させる工程が、IL-1α、IL-1RA、IL-1β、IL-1γ、IL-2、および／もしくはIL-12のアゴニストもしくはアンタゴニストとの組合わせであるか、ｂ）該接触させる工程が、IL-1δもしくはIL-1εを特異的に結合する抗体結合部位を含有する結合化合物を含む、アンタゴニストとであるか；またはｃ）前記調節が、IFN-γの生成の調節である、方法。１９．抗体からの抗原結合部位を含有する結合化合物であって、該化合物は、以下：Ａ）請求項１のＡに記載の齧歯類タンパク質であって、ここで：ａ）該タンパク質はマウスタンパク質であるか；ｂ）該結合化合物は、Fv、Fab、もしくはFab2フラグメントであるか；ｃ）該結合化合物は、別の化学部分に結合されるか：またはｄ）該抗体が：ｉ）配列番号２の12個の連続したアミノ酸のセグメントを含む成熟ポリペプチドのペプチド配列に対して惹起されるか； ii）成熟齧歯類IL-1δに対して惹起されるか； iii）精製された齧歯類IL-1δに対して惹起されるか； iv）免疫選択されるか； v）ポリクローナル抗体であるか； vi）変性された齧歯類IL-1δに結合するか； vii）少なくとも30μMの、抗原に対するKdを示すか； viii）ビーズもしくはプラスチックメンブレンを含む、固体基体に付着しているか； ix）滅菌組成物中にあるか；またはｘ）放射性標識もしくは蛍光標識を含んで、検出可能に標識される、齧歯類タンパク質、あるいはＢ）請求項１のＢに記載の齧歯類タンパク質であって、ここで：ａ）該タンパク質は成熟タンパク質であるか；ｂ）該結合化合物は、Fv、Fab、もしくはFab2フラグメントであるか；ｃ）該結合化合物は、別の化学部分に結合されるか；またはｄ）該抗体が：ｉ）配列番号６の12個の連続したアミノ酸のセグメントを含む成熟ポリペプチドのペプチド配列に対して惹起されるか； ii）成熟齧歯類IL-1εに対して惹起されるか； iii）精製された齧歯類IL-1εに対して惹起されるか； iv）免疫選択されるか； v）ポリクローナル抗体であるか； vi）変性された齧歯類IL-1εに結合するか； vii）少なくとも30μMの、抗原に対するKdを示すか； viii）ビーズもしくはプラスチックメンブレンを含む固体基体に付着しているか； ix）滅菌組成物中にあるか；またはｘ）放射性標識または蛍光標識を含んで、検出可能に標識される、齧歯類タンパク質に、特異的に結合する、結合化合物。２０．方法であって、Ａ）請求項１９に記載の抗体を作製する方法であって、免疫原性量の：ａ）齧歯類IL-1δポリペプチド；ｂ）配列番号２の12個の連続したアミノ酸のセグメントを含有するペプチド配列；ｃ）齧歯類IL-εポリペプチド；もしくはｄ）配列番号６の12個の連続したアミノ酸のセグメントを含有する、ペプチド配列で、免疫系を免疫する工程を包含し；それによって該抗体を生成させる、方法；またはＢ）抗原：抗体複合体を生成する方法であって、ａ）齧歯類IL-1δタンパク質もしくはペプチドと、請求項１９のＡに記載の抗体とを；またはｂ）齧歯類IL-1εタンパク質もしくはペプチドと、請求項１９のＢに記載の抗体とを；接触させる工程を包含し；それによって該複合体を形成させる、方法。