JP2002360267A - 新規ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質およびそのｄｎａ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 新規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質を検索
し、機能を解明する。 【解決手段】 配列番号：１で表わされるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
新規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩およ
びそれをコードするポリヌクレオチドを提供する。それ
らの医薬用等の用途も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト脾臓由来の新
規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩および
それをコードするＤＮＡに関する。

【０００２】

【従来の技術】多くのホルモンや神経伝達物質などの生
理活性物質は、細胞膜に存在する特異的なレセプター蛋
白質を通じて生体の機能を調節している。これらのレセ
プター蛋白質のうち多くは共役しているguanine nucleo
tide-binding protein（以下、Ｇ蛋白質と略称する場合
がある）の活性化を通じて細胞内のシグナル伝達を行な
い、また、７個の膜貫通領域を有する共通した構造をも
っていることから、Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質あ
るいは７回膜貫通型レセプター蛋白質（７ＴＭＲ）と総
称される。Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質は生体の細
胞や臓器の各機能細胞表面に存在し、それら細胞や臓器
の機能を調節する分子、例えば、ホルモン、神経伝達物
質および生理活性物質等の標的として生理的に重要な役
割を担っている。レセプターは生理活性物質との結合を
介してシグナルを細胞内に伝達し、このシグナルにより
細胞の賦活や抑制といった種々の反応が惹起される。各
種生体の細胞や臓器の内の複雑な機能を調節する物質
と、その特異的レセプター蛋白質、特にはＧ蛋白質共役
型レセプター蛋白質との関係を明らかにすることは、各
種生体の細胞や臓器の機能を解明し、それら機能と密接
に関連した医薬品開発に非常に重要な手段を提供するこ
ととなる。

【０００３】例えば、生体の種々の器官では、多くのホ
ルモン、ホルモン様物質、神経伝達物質あるいは生理活
性物質による調節のもとで生理的な機能の調節が行なわ
れている。特に、生理活性物質は生体内の様々な部位に
存在し、それぞれに対応するレセプター蛋白質を通して
その生理機能の調節を行っている。生体内には未だ未知
のホルモンや神経伝達物質その他の生理活性物質も多
く、それらのレセプター蛋白質の構造に関しても、これ
まで報告されていないものが多い。さらに、既知のレセ
プター蛋白質においてもサブタイプが存在するかどうか
についても分かっていないものが多い。生体における複
雑な機能を調節する物質と、その特異的レセプター蛋白
質との関係を明らかにすることは、医薬品開発に非常に
重要な手段である。また、レセプター蛋白質に対するア
ゴニスト、アンタゴニストを効率よくスクリーニング
し、医薬品を開発するためには、生体内で発現している
レセプター蛋白質の遺伝子の機能を解明し、それらを適
当な発現系で発現させることが必要であった。近年、生
体内で発現している遺伝子を解析する手段として、ｃＤ
ＮＡの配列をランダムに解析する研究が活発に行なわれ
ており、このようにして得られたｃＤＮＡの断片配列が
Expressed Sequence Tag（ＥＳＴ）としてデータベース
に登録され、公開されている。しかし、多くのＥＳＴは
配列情報のみであり、その機能を推定することは困難で
ある。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】従来、Ｇ蛋白質共役型
レセプターと生理活性物質（すなわち、リガンド）との
結合を阻害する物質や、結合して生理活性物質（すなわ
ち、リガンド）と同様なシグナル伝達を引き起こす物質
は、これらレセプターの特異的なアンタゴニストまたは
アゴニストとして、生体機能を調節する医薬品として活
用されてきた。従って、このように生体内での生理発現
において重要であるばかりでなく、医薬品開発の標的と
もなりうるＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質を新規に見
出し、その遺伝子（例えばｃＤＮＡ）をクローニングす
ることは、新規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質の特異
的リガンドや、アゴニスト、アンタゴニストを見出す際
に、非常に重要な手段となる。しかし、Ｇ蛋白質共役型
レセプターはその全てが見出されているわけではなく、
現時点でもなお、未知のＧ蛋白質共役型レセプター、ま
た対応するリガンドが同定されていない、いわゆるオー
ファンレセプターが多数存在しており、新たなＧ蛋白質
共役型レセプターの探索および機能解明が切望されてい
る。Ｇ蛋白質共役型レセプターは、そのシグナル伝達作
用を指標とする、新たな生理活性物質（すなわち、リガ
ンド）の探索、また、該レセプターに対するアゴニスト
またはアンタゴニストの探索に有用である。一方、生理
的なリガンドが見出されなくても、該レセプターの不活
化実験（ノックアウト動物）から該レセプターの生理作
用を解析することにより、該レセプターに対するアゴニ
ストまたはアンタゴニストを作製することも可能であ
る。これら該レセプターに対するリガンド、アゴニスト
またはアンタゴニストなどは、Ｇ蛋白質共役型レセプタ
ーの機能不全に関連する疾患の予防／治療薬や診断薬と
して活用することが期待できる。さらにまた、Ｇ蛋白質
共役型レセプターの遺伝子変異に基づく、生体での該レ
セプターの機能の低下または昂進が、何らかの疾患の原
因となっている場合も多い。この場合には、該レセプタ
ーに対するアンタゴニストやアゴニストの投与だけでな
く、該レセプター遺伝子の生体内（またはある特定の臓
器）への導入や、該レセプター遺伝子に対するアンチセ
ンス核酸の導入による、遺伝子治療に応用することもで
きる。この場合には該レセプターの塩基配列は遺伝子上
の欠失や変異の有無を調べるために必要不可欠な情報で
あり、該レセプターの遺伝子は、該レセプターの機能不
全に関与する疾患の予防／治療薬や診断薬に応用するこ
ともできる。本発明は、上記のように有用な新規Ｇ蛋白
質共役型レセプター蛋白質を提供するものである。すな
わち、新規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質もしくはそ
の部分ペプチドまたはその塩、該Ｇ蛋白質共役型レセプ
ター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするポリヌ
クレオチド（ＤＮＡ、ＲＮＡおよびそれらの誘導体）を
含有するポリヌクレオチド（ＤＮＡ、ＲＮＡおよびそれ
らの誘導体）、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベ
クター、該組換えベクターを保持する形質転換体、該Ｇ
蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩の製造法、
該Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質もしくはその部分ペ
プチドまたはその塩に対する抗体、該Ｇ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質の発現量を変化させる化合物、該Ｇ蛋白
質共役型レセプターに対するリガンドの決定方法、リガ
ンドと該Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質との結合性を
変化させる化合物（アンタゴニスト、アゴニスト）また
はその塩のスクリーニング方法、該スクリーニング用キ
ット、該スクリーニング方法もしくはスクリーニングキ
ットを用いて得られうるリガンドと該Ｇ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質との結合性を変化させる化合物（アンタ
ゴニスト、アゴニスト）またはその塩、およびリガンド
と該Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質との結合性を変化
させる化合物（アンタゴニスト、アゴニスト）もしくは
該Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質の発現量を変化させ
る化合物またはその塩を含有してなる医薬などを提供す
る。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
を重ねた結果、ヒト脾臓由来の新規なＧ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質をコードするｃＤＮＡを単離し、その全
塩基配列を解析することに成功した。そして、この塩基
配列をアミノ酸配列に翻訳したところ、第１〜第７膜貫
通領域が疎水性プロット上で確認され、これらのｃＤＮ
Ａにコードされる蛋白質が７回膜貫通型のＧ蛋白質共役
型レセプター蛋白質であることを確認した。本発明者ら
は、これらの知見に基づいて、さらに研究を重ねた結
果、本発明を完成するに至った。

【０００６】すなわち、本発明は、（１）配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有することを特徴とするＧ蛋白質共
役型レセプター蛋白質またはその塩、（２）配列番号：
３、配列番号：４、配列番号：５または配列番号：６で
表わされるアミノ酸配列を含有する上記（１）記載のＧ
蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩、（３）上
記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質の部分
ペプチドまたはその塩、（４）上記（１）記載のＧ蛋白
質共役型レセプター蛋白質をコードするポリヌクレオチ
ドを含有するポリヌクレオチド、（５）ＤＮＡである上
記（４）記載のポリヌクレオチド、（６）配列番号：２
で表される塩基配列を有する上記（４）記載のポリヌク
レオチド、（７）配列番号：７、配列番号：８、配列番
号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：
１２または配列番号：１３で表される塩基配列を有する
上記（４）記載のポリヌクレオチド、（８）上記（４）
記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、
（９）上記（８）記載の組換えベクターで形質転換させ
た形質転換体、（１０）上記（９）記載の形質転換体を
培養し、上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋
白質を生成せしめることを特徴とする上記（１）記載の
Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩の製造
法、（１１）上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプタ
ー蛋白質もしくは上記（３）記載の部分ペプチドまたは
その塩に対する抗体、（１２）上記（１）記載のＧ蛋白
質共役型レセプター蛋白質のシグナル伝達を不活性化す
る中和抗体である上記（１１）記載の抗体、（１３）上
記（１１）記載の抗体を含有してなる診断薬、（１４）
上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質もし
くは上記（３）記載の部分ペプチドまたはその塩を用い
ることにより得られうる上記（１）記載のＧ蛋白質共役
型レセプター蛋白質またはその塩に対するリガンド、
（１５）上記（１４）記載のＧ蛋白質共役型レセプター
のリガンドを含有してなる医薬、（１６）上記（１）記
載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質もしくは上記
（３）記載の部分ペプチドまたはその塩を用いることを
特徴とする上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター
蛋白質またはその塩に対するリガンドの決定方法、（１
７）上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質
もしくは上記（３）記載の部分ペプチドまたはその塩を
用いることを特徴とするリガンドと上記（１）記載のＧ
蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩との結合性
を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方
法、（１８）上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプタ
ー蛋白質もしくは上記（３）記載の部分ペプチドまたは
その塩を含有することを特徴とするリガンドと上記
（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはそ
の塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスク
リーニング用キット、（１９）上記（１７）記載のスク
リーニング方法または上記（１８）記載のスクリーニン
グ用キットを用いて得られうるリガンドと上記（１）記
載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩との
結合性を変化させる化合物またはその塩、（２０）上記
（１７）記載のスクリーニング方法または上記（１８）
記載のスクリーニング用キットを用いて得られうるリガ
ンドと上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白
質またはその塩との結合性を変化させる化合物またはそ
の塩を含有してなる医薬、（２１）上記（４）記載のポ
リヌクレオチドとハイストリンジェントな条件下でハイ
ブリダイズするポリヌクレオチド、（２２）上記（４）
記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列またはその
一部を含有してなるポリヌクレオチド、（２３）上記
（４）記載のポリヌクレオチドまたはその一部を用いる
ことを特徴とする上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセ
プター蛋白質のｍＲＮＡの定量方法、（２４）上記（１
１）記載の抗体を用いることを特徴とする上記（１）記
載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質の定量方法、（２
５）上記（２３）または上記（２４）記載の定量方法を
用いることを特徴とする上記（１）記載のＧ蛋白質共役
型レセプターの機能が関連する疾患の診断方法、（２
６）上記（２３）記載の定量方法を用いることを特徴と
する上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質
の発現量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニ
ング方法、（２７）上記（２４）記載の定量方法を用い
ることを特徴とする細胞膜における上記（１）記載のＧ
蛋白質共役型レセプター蛋白質量を変化させる化合物ま
たはその塩のスクリーニング方法、（２８）上記（２
６）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる上記
（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質の発現量
を変化させる化合物またはその塩、（２９）上記（２
７）記載のスクリーニング方法を用いて得られうる細胞
膜における上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター
蛋白質量を変化させる化合物またはその塩等に関する。

【０００７】さらには、（３０）蛋白質が、配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列、配列番号：１で表わ
されるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましく
は、１〜３０個程度、より好ましくは１〜９個程度、さ
らに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が欠失し
たアミノ酸配列、配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列に１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程
度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは
数個（１〜５個））のアミノ酸が付加したアミノ酸配
列、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１ま
たは２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ま
しくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５
個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸
配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含
有する蛋白質である上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質またはその塩、（３１）上記（１）記載
のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質もしくはその塩また
は上記（３）記載の部分ペプチドもしくはその塩と、試
験化合物とを接触させることを特徴とする上記（１６）
記載のリガンドの決定方法、（３２）リガンドが、例え
ば、アンギオテンシン、ボンベシン、カナビノイド、コ
レシストキニン、グルタミン、セロトニン、メラトニ
ン、ニューロペプチドＹ、オピオイド、プリン、バソプ
レッシン、オキシトシン、ＰＡＣＡＰ（例、ＰＡＣＡＰ
２７，ＰＡＣＡＰ３８）、セクレチン、グルカゴン、カ
ルシトニン、アドレノメジュリン、ソマトスタチン、Ｇ
ＨＲＨ、ＣＲＦ、ＡＣＴＨ、ＧＲＰ、ＰＴＨ、ＶＩＰ
（バソアクティブ インテスティナル ポリペプチ
ド）、ソマトスタチン、ドーパミン、モチリン、アミリ
ン、ブラジキニン、ＣＧＲＰ（カルシトニンジーンリレ
ーティッドペプチド）、ロイコトリエン、パンクレアス
タチン、プロスタグランジン、トロンボキサン、アデノ
シン、アドレナリン、ケモカインスーパーファミリー
（例、ＩＬ−８，ＧＲＯα，ＧＲＯβ，ＧＲＯγ，ＮＡ
Ｐ−２，ＥＮＡ−７８，ＧＣＰ−２，ＰＦ４，ＩＰ−１
０，Ｍｉｇ，ＰＢＳＦ／ＳＤＦ−１などのＣＸＣケモカ
インサブファミリー；ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１，ＭＣＰ−
２，ＭＣＰ−３，ＭＣＰ−４，ｅｏｔａｘｉｎ，ＲＡＮ
ＴＥＳ，ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β，ＨＣＣ−１，Ｍ
ＩＰ−３α／ＬＡＲＣ、ＭＩＰ−３β／ＥＬＣ，Ｉ−３
０９，ＴＡＲＣ，ＭＩＰＦ−１，ＭＩＰＦ−２／ｅｏｔ
ａｘｉｎ−２，ＭＤＣ，ＤＣ−ＣＫ１／ＰＡＲＣ，ＳＬ
ＣなどのＣＣケモカインサブファミリー；ｌｙｍｐｈｏ
ｔａｃｔｉｎなどのＣケモカインサブファミリー；ｆｒ
ａｃｔａｌｋｉｎｅなどのＣＸ３Ｃケモカインサブファ
ミリー等）、エンドセリン、エンテロガストリン、ヒス
タミン、ニューロテンシン、ＴＲＨ、パンクレアティッ
クポリペプタイド、ガラニン、リゾホスファチジン酸
（ＬＰＡ）またはスフィンゴシン１−リン酸である上記
（２９）記載のリガンドの決定方法、

【０００８】（３３）（ｉ）上記（１）記載のＧ蛋白質
共役型レセプター蛋白質もしくはその塩または上記
（３）記載の部分ペプチドもしくはその塩と、リガンド
とを接触させた場合と、（ii）上記（１）記載のＧ蛋白
質共役型レセプター蛋白質もしくはその塩または上記
（３）記載の部分ペプチドもしくはその塩と、リガンド
および試験化合物とを接触させた場合との比較を行なう
ことを特徴とする上記（１７）記載のスクリーニング方
法、（３４）（ｉ）標識したリガンドを上記（１）記載
のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質もしくはその塩また
は上記（３）記載の部分ペプチドもしくはその塩に接触
させた場合と、（ii）標識したリガンドおよび試験化合
物を上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質
もしくはその塩または上記（３）記載の部分ペプチドも
しくはその塩に接触させた場合における、標識したリガ
ンドの上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白
質もしくはその塩または上記（３）記載の部分ペプチド
もしくはその塩に対する結合量を測定し、比較すること
を特徴とするリガンドと上記（１）記載のＧ蛋白質共役
型レセプター蛋白質またはその塩との結合性を変化させ
る化合物またはその塩のスクリーニング方法、（３５）
（ｉ）標識したリガンドを上記（１）記載のＧ蛋白質共
役型レセプター蛋白質を含有する細胞に接触させた場合
と、（ii）標識したリガンドおよび試験化合物を上記
（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質を含有す
る細胞に接触させた場合における、標識したリガンドの
該細胞に対する結合量を測定し、比較することを特徴と
するリガンドと上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプ
ター蛋白質またはその塩との結合性を変化させる化合物
またはその塩のスクリーニング方法、（３６）（ｉ）標
識したリガンドを上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセ
プター蛋白質を含有する細胞の膜画分に接触させた場合
と、（ii）標識したリガンドおよび試験化合物を上記
（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質を含有す
る細胞の膜画分に接触させた場合における、標識したリ
ガンドの該細胞の膜画分に対する結合量を測定し、比較
することを特徴とするリガンドと上記（１）記載のＧ蛋
白質共役型レセプター蛋白質またはその塩との結合性を
変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、

【０００９】（３７）（ｉ）標識したリガンドを上記
（９）記載の形質転換体を培養することによって該形質
転換体の細胞膜に発現したＧ蛋白質共役型レセプター蛋
白質に接触させた場合と、（ii）標識したリガンドおよ
び試験化合物を上記（９）記載の形質転換体を培養する
ことによって該形質転換体の細胞膜に発現したＧ蛋白質
共役型レセプター蛋白質に接触させた場合における、標
識したリガンドの該Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質に
対する結合量を測定し、比較することを特徴とするリガ
ンドと上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白
質またはその塩との結合性を変化させる化合物またはそ
の塩のスクリーニング方法、（３８）（ｉ）上記（１）
記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩を
活性化する化合物を上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質を含有する細胞に接触させた場合と、
（ii）上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白
質またはその塩を活性化する化合物および試験化合物を
上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質を含
有する細胞に接触させた場合における、Ｇ蛋白質共役型
レセプター蛋白質を介した細胞刺激活性を測定し、比較
することを特徴とするリガンドと上記（１）記載のＧ蛋
白質共役型レセプター蛋白質またはその塩との結合性を
変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３９）上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋
白質またはその塩を活性化する化合物を上記（９）記載
の形質転換体を培養することによって該形質転換体の細
胞膜に発現したＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質に接触
させた場合と、上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプ
ター蛋白質またはその塩を活性化する化合物および試験
化合物を上記（９）記載の形質転換体を培養することに
よって該形質転換体の細胞膜に発現したＧ蛋白質共役型
レセプター蛋白質に接触させた場合における、Ｇ蛋白質
共役型レセプター蛋白質を介する細胞刺激活性を測定
し、比較することを特徴とするリガンドと上記（１）記
載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩との
結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニン
グ方法、

【００１０】（４０）上記（１）記載のＧ蛋白質共役型
レセプター蛋白質を活性化する化合物が、アンギオテン
シン、ボンベシン、カナビノイド、コレシストキニン、
グルタミン、セロトニン、メラトニン、ニューロペプチ
ドＹ、オピオイド、プリン、バソプレッシン、オキシト
シン、ＰＡＣＡＰ（例、ＰＡＣＡＰ２７，ＰＡＣＡＰ３
８）、セクレチン、グルカゴン、カルシトニン、アドレ
ノメジュリン、ソマトスタチン、ＧＨＲＨ、ＣＲＦ、Ａ
ＣＴＨ、ＧＲＰ、ＰＴＨ、ＶＩＰ（バソアクティブ イ
ンテスティナル ポリペプチド）、ソマトスタチン、ド
ーパミン、モチリン、アミリン、ブラジキニン、ＣＧＲ
Ｐ（カルシトニンジーンリレーティッドペプチド）、ロ
イコトリエン、パンクレアスタチン、プロスタグランジ
ン、トロンボキサン、アデノシン、アドレナリン、ケモ
カインスーパーファミリー（例、ＩＬ−８，ＧＲＯα，
ＧＲＯβ，ＧＲＯγ，ＮＡＰ−２，ＥＮＡ−７８，ＧＣ
Ｐ−２，ＰＦ４，ＩＰ−１０，Ｍｉｇ，ＰＢＳＦ／ＳＤ
Ｆ−１などのＣＸＣケモカインサブファミリー；ＭＣＡ
Ｆ／ＭＣＰ−１，ＭＣＰ−２，ＭＣＰ−３，ＭＣＰ−
４，ｅｏｔａｘｉｎ，ＲＡＮＴＥＳ，ＭＩＰ−１α、Ｍ
ＩＰ−１β，ＨＣＣ−１，ＭＩＰ−３α／ＬＡＲＣ、Ｍ
ＩＰ−３β／ＥＬＣ，Ｉ−３０９，ＴＡＲＣ，ＭＩＰＦ
−１，ＭＩＰＦ−２／ｅｏｔａｘｉｎ−２，ＭＤＣ，Ｄ
Ｃ−ＣＫ１／ＰＡＲＣ，ＳＬＣなどのＣＣケモカインサ
ブファミリー；ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎなどのＣケモ
カインサブファミリー；ｆｒａｃｔａｌｋｉｎｅなどの
ＣＸ３Ｃケモカインサブファミリー等）、エンドセリ
ン、エンテロガストリン、ヒスタミン、ニューロテンシ
ン、ＴＲＨ、パンクレアティックポリペプタイド、ガラ
ニン、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）またはスフィン
ゴシン１−リン酸である上記（３８）または（３９）記
載のスクリーニング方法、（４１）上記（３３）〜（４
０）記載のスクリーニング方法で得られうるリガンドと
上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質また
はその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩、
（４２）上記（３３）〜（４０）記載のスクリーニング
方法で得られうるリガンドと上記（１）記載のＧ蛋白質
共役型レセプター蛋白質またはその塩との結合性を変化
させる化合物またはその塩を含有することを特徴とする
医薬、

【００１１】（４３）上記（１）記載のＧ蛋白質共役型
レセプター蛋白質を含有する細胞を含有することを特徴
とする上記（１８）記載のスクリーニング用キット、
（４４）上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋
白質を含有する細胞の膜画分を含有することを特徴とす
る上記（１８）記載のスクリーニング用キット、（４
５）上記（９）記載の形質転換体を培養することによっ
て該形質転換体の細胞膜に発現したＧ蛋白質共役型レセ
プター蛋白質を含有することを特徴とする上記（１８）
記載のスクリーニング用キット、（４６）上記（４３）
〜（４５）記載のスクリーニング用キットを用いて得ら
れうる、リガンドと上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質またはその塩との結合性を変化させる化
合物またはその塩、（４７）上記（４３）〜（４５）記
載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、リガ
ンドと上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白
質またはその塩との結合性を変化させる化合物またはそ
の塩を含有することを特徴とする医薬、（４８）上記
（１１）記載の抗体と、上記（１）記載のＧ蛋白質共役
型レセプター蛋白質もしくは上記（３）記載の部分ペプ
チドまたはその塩とを接触させることを特徴とする上記
（１）のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質もしくは上記
（３）記載の部分ペプチドまたはその塩の定量法、（４
９）上記（１１）記載の抗体と、被検液および標識化さ
れた上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質
もしくは上記（３）記載の部分ペプチドまたはその塩と
を競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化された上
記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質もしく
は上記（３）記載の部分ペプチドまたはその塩の割合を
測定することを特徴とする被検液中の上記（１）記載の
Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質もしくは上記（３）記
載の部分ペプチドまたはその塩の定量法、（５０）被検
液と担体上に不溶化した上記（１１）記載の抗体および
標識化された上記（１１）記載の抗体とを同時あるいは
連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の活性
を測定することを特徴とする被検液中の上記（１）記載
のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質もしくは上記（３）
記載の部分ペプチドまたはその塩の定量法、（５１）上
記（２６）記載のスクリーニング方法を用いて得られう
る上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質の
発現量を変化させる化合物またはその塩を含有してなる
医薬、（５２）上記（２７）記載のスクリーニング方法
を用いて得られうる細胞膜における上記（１）記載のＧ
蛋白質共役型レセプター蛋白質量を変化させる化合物ま
たはその塩を含有してなる医薬、（５３）中枢疾患、炎
症性疾患、循環器疾患、癌、糖尿病、免疫系疾患または
消化器系疾患の予防・治療剤である上記（２０）、（５
１）または（５２）記載の医薬、（５４）哺乳動物に対
して、上記（１７）記載のスクリーニング方法または
（１８）記載のスクリーニング用キットを用いて得られ
うるリガンドと上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプ
ター蛋白質またはその塩との結合性を変化させる化合物
またはその塩の有効量を投与することを特徴とする中枢
疾患、炎症性疾患、循環器疾患、癌、糖尿病、免疫系疾
患または消化器系疾患の予防・治療方法、（５５）哺乳
動物に対して、上記（２６）記載のスクリーニング方法
を用いて得られうる上記（１）記載のＧ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質の発現量を変化させる化合物またはその
塩の有効量を投与することを特徴とする中枢疾患、炎症
性疾患、循環器疾患、癌、糖尿病、免疫系疾患または消
化器系疾患の予防・治療方法、（５６）哺乳動物に対し
て、上記（２７）記載のスクリーニング方法を用いて得
られうる細胞膜における上記（１）記載のＧ蛋白質共役
型レセプター蛋白質量を変化させる化合物またはその塩
の有効量を投与することを特徴とする中枢疾患、炎症性
疾患、循環器疾患、癌、糖尿病、免疫系疾患または消化
器系疾患の予防・治療方法、（５７）中枢疾患、炎症性
疾患、循環器疾患、癌、糖尿病、免疫系疾患または消化
器系疾患の予防・治療剤を製造するための上記（１７）
記載のスクリーニング方法または上記（１８）記載のス
クリーニング用キットを用いて得られうるリガンドと上
記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質または
その塩との結合性を変化させる化合物またはその塩の使
用、（５８）中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、癌、
糖尿病、免疫系疾患または消化器系疾患の予防・治療剤
を製造するための上記（２６）記載のスクリーニング方
法を用いて得られうる上記（１）記載のＧ蛋白質共役型
レセプター蛋白質の発現量を変化させる化合物またはそ
の塩の使用、および（５９）中枢疾患、炎症性疾患、循
環器疾患、癌、糖尿病、免疫系疾患または消化器系疾患
の予防・治療剤を製造するための上記（２７）記載のス
クリーニング方法を用いて得られうる細胞膜における上
記（１）記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質を変化
させる化合物またはその塩の使用等を提供する。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明のＧ蛋白質共役型レセプタ
ー蛋白質（以下、レセプター蛋白質と略記する場合があ
る）は、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と同一
もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプ
ター蛋白質である。配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列において第１６番目のXaaおよび第１６０番目のXaa
はいずれもSerまたはGlyを示す。配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ
酸配列を含有するレセプター蛋白質としては、例えば配
列番号：３で表わされるアミノ酸配列を含有するレセプ
ター蛋白質、配列番号：４で表わされるアミノ酸配列を
含有するレセプター蛋白質、配列番号：５で表わされる
アミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、配列番号：
６で表わされるアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白
質が挙げられる。本発明のレセプター蛋白質は、例え
ば、ヒトや哺乳動物（例えば、モルモット、ラット、マ
ウス、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなど）のあら
ゆる細胞（例えば、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵
臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハン
ス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、
繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロフ
ァージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満
細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑
膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺
細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前
駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞など）や血球系の細
胞、またはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例え
ば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁頭核、大脳基底球、
海馬、視床、視床下部、視床下核、大脳皮質、延髄、小
脳、後頭葉、前頭葉、側頭葉、被殻、尾状核、脳染、黒
質）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、
甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管
（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下
腺、末梢血、末梢血球、前立腺、睾丸、精巣、卵巣、胎
盤、子宮、骨、関節、骨格筋などに由来する蛋白質であ
ってもよく、また合成蛋白質であってもよい。

【００１３】配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と
実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列と約５０％以上、好ま
しくは約６０％以上、より好ましくは約７０％以上、さ
らに好ましくは約８０％以上、なかでも好ましくは約９
０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有す
るアミノ酸配列などが挙げられ、具体的には配列番号：
３、４、５または６で表わされるアミノ酸配列と約５０
％以上、好ましくは約６０％以上、より好ましくは約７
０％以上、さらに好ましくは約８０％以上、なかでも好
ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の
相同性を有するアミノ酸配列が挙げられる。本発明の配
列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一の
アミノ酸配列を含有する蛋白質としては、例えば、配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のア
ミノ酸配列を有し、配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列と実質的に同質の活性を有する蛋白質などが好まし
い。実質的に同質の活性としては、例えば、リガンド結
合活性、シグナル情報伝達作用などが挙げられる。実質
的に同質とは、それらの活性が性質的に同質であること
を示す。したがって、リガンド結合活性やシグナル情報
伝達作用などの活性が同等（例、約０．０１〜１００
倍、好ましくは約０．５〜２０倍、より好ましくは約
０．５〜２倍）であることが好ましいが、これらの活性
の程度や蛋白質の分子量などの量的要素は異なっていて
もよい。リガンド結合活性やシグナル情報伝達作用など
の活性の測定は、自体公知の方法に準じて行なうことが
できるが、例えば、後に記載するリガンドの決定方法や
スクリーニング方法に従って測定することができる。

【００１４】また、本発明のレセプター蛋白質として
は、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１ま
たは２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ま
しくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５
個））のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列に１または２個以上
（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１
０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミ
ノ酸が付加したアミノ酸配列、配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、
１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さら
に好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が他のアミ
ノ酸で置換されたアミノ酸配列、またはそれらを組み
合わせたアミノ酸配列を含有する蛋白質なども用いられ
る。具体的には例えば配列番号：３、４、５または６
で表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ま
しくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程
度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が
欠失したアミノ酸配列、配列番号：３、４、５または
６で表わされるアミノ酸配列に１または２個以上（好ま
しくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程
度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が
付加したアミノ酸配列、配列番号：３、４、５または
６で表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好
ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個
程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸
が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、またはそ
れらを組み合わせたアミノ酸配列を含有する蛋白質など
が用いられる。

【００１５】本明細書におけるレセプター蛋白質は、ペ
プチド標記の慣例に従って、左端がＮ末端（アミノ末
端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列を含有するレセプタ
ー蛋白質をはじめとする、本発明のレセプター蛋白質
は、Ｃ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキ
シレート(−ＣＯＯ^-)、アミド（−ＣＯＮＨ₂）またはエ
ステル（−ＣＯＯＲ）の何れであってもよい。ここでエ
ステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、
ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどの
Ｃ_1-6アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘ
キシルなどのＣ_3-8シクロアルキル基、例えば、フェニ
ル、α−ナフチルなどのＣ_6-12アリール基、例えば、ベ
ンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ_1-2アルキル基
もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ
_1-2アルキル基などのＣ_7-14アラルキル基のほか、経口
用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチル基
などが用いられる。本発明のレセプター蛋白質がＣ末端
以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有
している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステ
ル化されているものも本発明のレセプター蛋白質に含ま
れる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ
末端のエステルなどが用いられる。さらに、本発明のレ
セプター蛋白質には、上記した蛋白質において、Ｎ末端
のメチオニン残基のアミノ基が保護基（例えば、ホルミ
ル基、アセチルなどのＣ_{2- 6}アルカノイル基などのＣ_1-6
アシル基など）で保護されているもの、Ｎ端側が生体内
で切断され生成したグルタミル基がピログルタミン酸化
したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例え
ば、−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、イン
ドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例え
ば、ホルミル基、アセチルなどのＣ_2-6アルカノイル基
などのＣ_1-6アシル基など）で保護されているもの、あ
るいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白
質なども含まれる。本発明のレセプター蛋白質の具体例
としては、例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列を含有するレセプター蛋白質などが用いられる。具
体的には配列番号：３、４、５または６で表わされるア
ミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質などが用いられ
る。

【００１６】本発明のレセプター蛋白質の部分ペプチド
（以下、部分ペプチドと略記する場合がある）として
は、上記した本発明のレセプター蛋白質の部分ペプチド
であれば何れのものであってもよいが、例えば、本発明
のレセプター蛋白質分子のうち、細胞膜の外に露出して
いる部位であって、レセプター結合活性を有するものな
どが用いられる。具体的には、配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列を有するレセプター蛋白質の部分ペプチ
ドとしては、疎水性プロット解析において細胞外領域
（親水性（Hydrophilic）部位）であると分析された部
分を含むペプチドである。また、疎水性（Hydrophobi
c）部位を一部に含むペプチドも同様に用いることがで
きる。個々のドメインを個別に含むペプチドも用い得る
が、複数のドメインを同時に含む部分のペプチドでも良
い。本発明の部分ペプチドのアミノ酸の数は、上記した
本発明のレセプター蛋白質の構成アミノ酸配列のうち少
なくとも２０個以上、好ましくは５０個以上、より好ま
しくは１００個以上のアミノ酸配列を有するペプチドな
どが好ましい。実質的に同一のアミノ酸配列とは、これ
らアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約６０％以
上、より好ましくは約７０％以上、さらに好ましくは約
８０％以上、なかでも好ましくは約９０％以上、最も好
ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列を
示す。ここで、「実質的に同質の活性」とは、上記と同
意義を示す。「実質的に同質の活性」の測定は上記と同
様に行なうことができる。

【００１７】また、本発明の部分ペプチドは、上記アミ
ノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０
個程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ
酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１または２個
以上（好ましくは、１〜２０個程度、より好ましくは１
〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））の
アミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列中の１ま
たは２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好ま
しくは数個、さらに好ましくは１〜５個程度）のアミノ
酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。また、本発
明の部分ペプチドはＣ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯ
Ｈ）、カルボキシレート（−ＣＯＯ^-）、アミド（−Ｃ
ＯＮＨ₂）またはエステル（−ＣＯＯＲ）の何れであっ
てもよい。さらに、本発明の部分ペプチドには、上記し
た本発明のレセプター蛋白質と同様に、Ｎ末端のメチオ
ニン残基のアミノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ
端側が生体内で切断され生成したGlnがピログルタミン
酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適
当な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合
したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含ま
れる。本発明のレセプター蛋白質またはその部分ペプチ
ドの塩としては、酸または塩基との生理学的に許容され
る塩が挙げられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加
塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸
（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、
あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、
フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、
リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼ
ンスルホン酸）との塩などが用いられる。

【００１８】本発明のレセプター蛋白質またはその塩
は、上記したヒトや哺乳動物の細胞または組織から自体
公知のレセプター蛋白質の精製方法によって製造するこ
ともできるし、後に記載する本発明のレセプター蛋白質
をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養するこ
とによっても製造することができる。また、後に記載す
る蛋白質合成法またはこれに準じて製造することもでき
る。ヒトや哺乳動物の組織または細胞から製造する場
合、ヒトや哺乳動物の組織または細胞をホモジナイズし
た後、酸などで抽出を行ない、該抽出液を逆相クロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィーなどのクロ
マトグラフィーを組み合わせることにより精製単離する
ことができる。

【００１９】本発明のレセプター蛋白質もしくはその部
分ペプチドまたはその塩またはそのアミド体の合成に
は、通常市販の蛋白質合成用樹脂を用いることができ
る。そのような樹脂としては、例えば、クロロメチル樹
脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹
脂、アミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジルア
ルコール樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、
PAM樹脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニルアセト
アミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−
（２’，４’−ジメトキシフェニル−ヒドロキシメチ
ル）フェノキシ樹脂、４−（２’，４’−ジメトキシフ
ェニル−Ｆmocアミノエチル）フェノキシ樹脂などを挙
げることができる。このような樹脂を用い、α−アミノ
基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、目的とす
る蛋白質の配列通りに、自体公知の各種縮合方法に従
い、樹脂上で縮合させる。反応の最後に樹脂から蛋白質
を切り出すと同時に各種保護基を除去し、さらに高希釈
溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実施し、目
的の蛋白質またはそのアミド体を取得する。上記した保
護アミノ酸の縮合に関しては、蛋白質合成に使用できる
各種活性化試薬を用いることができるが、特に、カルボ
ジイミド類がよい。カルボジイミド類としては、ＤＣ
Ｃ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、Ｎ−エ
チル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロリル）カルボジ
イミドなどが用いられる。これらによる活性化にはラセ
ミ化抑制添加剤（例えば、ＨＯＢt、 ＨＯＯＢt)とと
もに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するか、または、対
称酸無水物またはＨＯＢtエステルあるいはＨＯＯＢtエ
ステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なっ
た後に樹脂に添加することができる。

【００２０】保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用
いられる溶媒としては、蛋白質縮合反応に使用しうるこ
とが知られている溶媒から適宜選択されうる。例えば、
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，Ｎ，Ｎ−ジメチルアセ
トアミド，Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド類、塩
化メチレン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素
類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、ジメ
チルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジン，ジ
オキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル類、アセ
トニトリル，プロピオニトリルなどのニトリル類、酢酸
メチル，酢酸エチルなどのエステル類あるいはこれらの
適宜の混合物などが用いられる。反応温度は蛋白質結合
形成反応に使用され得ることが知られている範囲から適
宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範囲から適宜選
択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常１.５〜
４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応を用いたテス
トの結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行う
ことなく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行
なうことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得
られないときには、無水酢酸またはアセチルイミダゾー
ルを用いて未反応アミノ酸をアセチル化することができ
る。

【００２１】原料のアミノ基の保護基としては、例え
ば、Ｚ、Ｂoc、ターシャリーペンチルオキシカルボニ
ル、イソボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベン
ジルオキシカルボニル、Ｃl-Ｚ、Ｂr-Ｚ、アダマンチル
オキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイ
ル、ホルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフ
ェニルホスフィノチオイル、Ｆmocなどが用いられる。
カルボキシル基は、例えば、アルキルエステル化（例え
ば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ターシャリー
ブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプ
チル、シクロオクチル、２−アダマンチルなどの直鎖
状、分枝状もしくは環状アルキルエステル化）、アラル
キルエステル化（例えば、ベンジルエステル、４−ニト
ロベンジルエステル、４−メトキシベンジルエステル、
４−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル
化）、フェナシルエステル化、ベンジルオキシカルボニ
ルヒドラジド化、ターシャリーブトキシカルボニルヒド
ラジド化、トリチルヒドラジド化などによって保護する
ことができる。セリンの水酸基は、例えば、エステル化
またはエーテル化によって保護することができる。この
エステル化に適する基としては、例えば、アセチル基な
どの低級アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル
基、ベンジルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル
基などの炭酸から誘導される基などが用いられる。ま
た、エーテル化に適する基としては、例えば、ベンジル
基、テトラヒドロピラニル基、t-ブチル基などである。
チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、例え
ば、Ｂzl、Ｃl₂-Ｂzl、２−ニトロベンジル、Ｂr-Z、タ
ーシャリーブチルなどが用いられる。ヒスチジンのイミ
ダゾールの保護基としては、例えば、Ｔos、４-メトキ
シ-２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、ＤＮ
Ｐ、ベンジルオキシメチル、Ｂum、Ｂoc、Ｔrt、Ｆmoc
などが用いられる。

【００２２】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、２，４，５−トリクロロフェノール、２，４−ジニ
トロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロ
フェノール、ＨＯＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ
−ヒドロキシフタルイミド、ＨＯＢt）とのエステル〕
などが用いられる。原料のアミノ基の活性化されたもの
としては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられ
る。保護基の除去（脱離）方法としては、例えば、Ｐd-
黒あるいはＰd-炭素などの触媒の存在下での水素気流中
での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンスルホ
ン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢
酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジイソ
プロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリジ
ン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモニ
ア中ナトリウムによる還元なども用いられる。上記酸処
理による脱離反応は、一般に約−２０℃〜４０℃の温度
で行なわれるが、酸処理においては、例えば、アニソー
ル、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、パ
ラクレゾール、ジメチルスルフィド、１，４−ブタンジ
チオール、１，２−エタンジチオールなどのようなカチ
オン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンのイ
ミダゾール保護基として用いられる２，４−ジニトロフ
ェニル基はチオフェノール処理により除去され、トリプ
トファンのインドール保護基として用いられるホルミル
基は上記の１，２−エタンジチオール、１，４−ブタン
ジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外に、
希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニアなどによるアル
カリ処理によっても除去される。

【００２３】原料の反応に関与すべきでない官能基の保
護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関
与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段
から適宜選択しうる。蛋白質のアミド体を得る別の方法
としては、例えば、まず、カルボキシ末端アミノ酸のα
−カルボキシル基をアミド化して保護した後、アミノ基
側にペプチド（蛋白質）鎖を所望の鎖長まで延ばした
後、該ペプチド鎖のＮ末端のα−アミノ基の保護基のみ
を除いた蛋白質とＣ末端のカルボキシル基の保護基のみ
を除去した蛋白質とを製造し、この両蛋白質を上記した
ような混合溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細につい
ては上記と同様である。縮合により得られた保護蛋白質
を精製した後、上記方法によりすべての保護基を除去
し、所望の粗蛋白質を得ることができる。この粗蛋白質
は既知の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍
結乾燥することで所望の蛋白質のアミド体を得ることが
できる。蛋白質のエステル体を得るには、例えば、カル
ボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基を所望のアル
コール類と縮合しアミノ酸エステルとした後、蛋白質の
アミド体と同様にして、所望の蛋白質のエステル体を得
ることができる。

【００２４】本発明の蛋白質の部分ペプチドまたはその
塩は、自体公知のペプチドの合成法に従って、あるいは
本発明の蛋白質を適当なペプチダーゼで切断することに
よって製造することができる。ペプチドの合成法として
は、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによって
も良い。すなわち、本発明の蛋白質を構成し得る部分ペ
プチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成
物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより
目的のペプチドを製造することができる。公知の縮合方
法や保護基の脱離としては、例えば、以下の〜に記
載された方法が挙げられる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ ペプチド(The Peptide),
Academic Press, NewYork (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 蛋白
質の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド合成
広川書店 また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留
・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー
・再結晶などを組み合わせて本発明の部分ペプチドを精
製単離することができる。上記方法で得られる部分ペプ
チドが遊離体である場合は、公知の方法によって適当な
塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合
は、公知の方法によって遊離体に変換することができ
る。

【００２５】本発明のレセプター蛋白質をコードするポ
リヌクレオチドとしては、上記した本発明のレセプター
蛋白質をコードする塩基配列（ＤＮＡまたはＲＮＡ、好
ましくはＤＮＡ）を含有するものであればいかなるもの
であってもよい。該ポリヌクレオチドとしては、本発明
のレセプター蛋白質をコードするＤＮＡ、ｍＲＮＡ等の
ＲＮＡであり、二本鎖であっても、一本鎖であってもよ
い。二本鎖の場合は、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡまた
はＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドでもよい。一本鎖の場
合は、センス鎖（すなわち、コード鎖）であっても、ア
ンチセンス鎖（すなわち、非コード鎖）であってもよ
い。本発明のレセプター蛋白質をコードするポリヌクレ
オチドを用いて、例えば、公知の実験医学増刊「新ＰＣ
Ｒとその応用」15(7)、1997記載の方法またはそれに準
じた方法により、本発明のレセプター蛋白質のｍＲＮＡ
を定量することができる。本発明のレセプター蛋白質を
コードするＤＮＡとしては、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮ
Ａライブラリー、上記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、
上記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成
ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリーに使用するベク
ターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、
ファージミドなどいずれであってもよい。また、上記し
た細胞・組織よりtotalＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調
製したものを用いて直接Reverse Transcriptase Polyme
raseChain Reaction（以下、ＲＴ-ＰＣＲ法と略称す
る）によって増幅することもできる。具体的には、本発
明のレセプター蛋白質をコードするＤＮＡとしては、例
えば、配列番号：２で表わされる塩基配列を含有するＤ
ＮＡ、または配列番号：２で表わされる塩基配列とハイ
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配
列を有し、本発明のレセプター蛋白質と実質的に同質の
活性（例、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用な
ど）を有するレセプター蛋白質をコードするＤＮＡであ
れば何れのものでもよい。配列番号：２で表わされる塩
基配列において第４６番目、第４７８番目および第９１
５番目のRはAまたはGを示す。配列番号：２で表わされ
る塩基配列を含有するＤＮＡとしては具体的には配列番
号：７、８、９、１０、１１、１２または１３で表わさ
れる塩基配列を含有するＤＮＡが挙げられる。配列番
号：２で表わされる塩基配列とハイブリダイズできるＤ
ＮＡとしては、例えば、配列番号：２で表わされる塩基
配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好
ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の
相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いら
れ、より具体的には配列番号：７、８、９、１０、１
１、１２または１３で表わされる塩基配列と約７０％以
上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％
以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩
基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。

【００２６】ハイブリダイゼーションは、自体公知の方
法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・
クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook
etal., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記
載の方法などに従って行なうことができる。また、市販
のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記
載の方法に従って行なうことができる。より好ましく
は、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことが
できる。該ハイストリンジェントな条件とは、例えば、
ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９
〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６
０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１
９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。より具
体的には、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を含
有するレセプター蛋白質をコードするＤＮＡとしては、
配列番号：２で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡな
どが用いられる。また、配列番号：３で表わされるアミ
ノ酸配列を含有するレセプター蛋白質をコードするＤＮ
Ａとしては、配列番号：７で表わされる塩基配列を含有
するＤＮＡ、配列番号：８で表わされる塩基配列を含有
するＤＮＡなどが用いられる。配列番号：４で表わされ
るアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質をコードす
るＤＮＡとしては、配列番号：１１で表わされる塩基配
列を含有するＤＮＡ、配列番号：１２で表わされる塩基
配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。配列番号：５
で表わされるアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質
をコードするＤＮＡとしては、配列番号：９で表わされ
る塩基配列を含有するＤＮＡ、配列番号：１０で表わさ
れる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。配列
番号：６で表わされるアミノ酸配列を含有するレセプタ
ー蛋白質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：１３
で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられ
る。本発明のレセプター蛋白質をコードするＤＮＡの塩
基配列の一部、または該ＤＮＡと相補的な塩基配列の一
部を含有してなるポリヌクレオチドとは、下記の本発明
の部分ペプチドをコードするＤＮＡを包含するだけでは
なく、ＲＮＡをも包含する意味で用いられる。本発明に
従えば、Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質遺伝子の複製
または発現を阻害することのできるアンチセンス・ポリ
ヌクレオチド（核酸）を、クローン化した、あるいは決
定されたＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質をコードする
ＤＮＡの塩基配列情報に基づき設計し、合成しうる。そ
うしたポリヌクレオチド（核酸）は、Ｇ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質遺伝子のＲＮＡとハイブリダイズするこ
とができ、該ＲＮＡの合成または機能を阻害することが
できるか、あるいはＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質関
連ＲＮＡとの相互作用を介してＧ蛋白質共役型レセプタ
ー蛋白質遺伝子の発現を調節・制御することができる。
Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質関連ＲＮＡの選択され
た配列に相補的なポリヌクレオチド、およびＧ蛋白質共
役型レセプター蛋白質関連ＲＮＡと特異的にハイブリダ
イズすることができるポリヌクレオチドは、生体内およ
び生体外でＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質遺伝子の発
現を調節・制御するのに有用であり、また病気などの治
療または診断に有用である。用語「対応する」とは、遺
伝子を含めたヌクレオチド、塩基配列または核酸の特定
の配列に相同性を有するあるいは相補的であることを意
味する。ヌクレオチド、塩基配列または核酸とペプチド
（蛋白質）との間で「対応する」とは、ヌクレオチド
（核酸）の配列またはその相補体から誘導される指令に
あるペプチド（蛋白質）のアミノ酸を通常指している。
Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質遺伝子の５’端ヘアピ
ンループ、５’端６−ベースペア・リピート、５’端非
翻訳領域、ポリペプチド翻訳開始コドン、蛋白質コード
領域、ＯＲＦ翻訳開始コドン、３’端非翻訳領域、３’
端パリンドローム領域、および３’端ヘアピンループは
好ましい対象領域として選択しうるが、Ｇ蛋白質共役型
レセプター蛋白質遺伝子内の如何なる領域も対象として
選択しうる。

【００２７】目的核酸と、対象領域の少なくとも一部に
相補的なポリヌクレオチドとの関係は、対象物とハイブ
リダイズすることができるポリヌクレオチドとの関係
は、「アンチセンス」であるということができる。アン
チセンス・ポリヌクレオチドは、２−デオキシ−Ｄ−リ
ボースを含有しているポリデオキシヌクレオチド、Ｄ−
リボースを含有しているポリデオキシヌクレオチド、プ
リンまたはピリミジン塩基のＮ−グリコシドであるその
他のタイプのポリヌクレオチド、あるいは非ヌクレオチ
ド骨格を有するその他のポリマー（例えば、市販の蛋白
質核酸および合成配列特異的な核酸ポリマー）または特
殊な結合を含有するその他のポリマー（但し、該ポリマ
ーはＤＮＡやＲＮＡ中に見出されるような塩基のペアリ
ングや塩基の付着を許容する配置をもつヌクレオチドを
含有する）などが挙げられる。それらは、２本鎖ＤＮ
Ａ、１本鎖ＤＮＡ、２本鎖ＲＮＡ、１本鎖ＲＮＡ、さら
にＤＮＡ：ＲＮＡハイブリッドであることができ、さら
に非修飾ポリヌクレオチド（または非修飾オリゴヌクレ
オチド）、さらには公知の修飾の付加されたもの、例え
ば当該分野で知られた標識のあるもの、キャップの付い
たもの、メチル化されたもの、１個以上の天然のヌクレ
オチドを類縁物で置換したもの、分子内ヌクレオチド修
飾のされたもの、例えば非荷電結合（例えば、メチルホ
スホネート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデー
ト、カルバメートなど）を持つもの、電荷を有する結合
または硫黄含有結合（例えば、ホスホロチオエート、ホ
スホロジチオエートなど）を持つもの、例えば蛋白質
（ヌクレアーゼ、ヌクレアーゼ・インヒビター、トキシ
ン、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リジンなど）
や糖（例えば、モノサッカライドなど）などの側鎖基を
有しているもの、インターカレント化合物（例えば、ア
クリジン、プソラレンなど）を持つもの、キレート化合
物（例えば、金属、放射活性をもつ金属、ホウ素、酸化
性の金属など）を含有するもの、アルキル化剤を含有す
るもの、修飾された結合を持つもの（例えば、αアノマ
ー型の核酸など）であってもよい。ここで「ヌクレオシ
ド」、「ヌクレオチド」および「核酸」とは、プリンお
よびピリミジン塩基を含有するのみでなく、修飾された
その他の複素環型塩基をもつようなものを含んでいて良
い。こうした修飾物は、メチル化されたプリンおよびピ
リミジン、アシル化されたプリンおよびピリミジン、あ
るいはその他の複素環を含むものであってよい。修飾さ
れたヌクレオチドおよび修飾されたヌクレオチドはまた
糖部分が修飾されていてよく、例えば、１個以上の水酸
基がハロゲンとか、脂肪族基などで置換されていたり、
あるいはエーテル、アミンなどの官能基に変換されてい
てよい。

【００２８】本発明のアンチセンス・ポリヌクレオチド
（核酸）は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、あるいは修飾された核酸
（ＲＮＡ、ＤＮＡ）である。修飾された核酸の具体例と
しては核酸の硫黄誘導体やチオホスフェート誘導体、そ
してポリヌクレオシドアミドやオリゴヌクレオシドアミ
ドの分解に抵抗性のものが挙げられるが、それに限定さ
れるものではない。本発明のアンチセンス核酸は次のよ
うな方針で好ましく設計されうる。すなわち、細胞内で
のアンチセンス核酸をより安定なものにする、アンチセ
ンス核酸の細胞透過性をより高める、目標とするセンス
鎖に対する親和性をより大きなものにする、そしてもし
毒性があるならアンチセンス核酸の毒性をより小さなも
のにする。こうして修飾は当該分野で数多く知られてお
り、例えば J. Kawakami et al.,Pharm Tech Japan, Vo
l. 8, pp.247, 1992; Vol. 8, pp.395, 1992; S. T. Cr
ooke et al. ed., Antisense Research and Applicatio
ns, CRC Press, 1993 などに開示がある。本発明のアン
チセンス核酸は、変化せしめられたり、修飾された糖、
塩基、結合を含有していて良く、リポゾーム、ミクロス
フェアのような特殊な形態で供与されたり、遺伝子治療
により適用されたり、付加された形態で与えられること
ができうる。こうして付加形態で用いられるものとして
は、リン酸基骨格の電荷を中和するように働くポリリジ
ンのようなポリカチオン体、細胞膜との相互作用を高め
たり、核酸の取込みを増大せしめるような脂質（例え
ば、ホスホリピド、コレステロールなど）といった粗水
性のものが挙げられる。付加するに好ましい脂質として
は、コレステロールやその誘導体（例えば、コレステリ
ルクロロホルメート、コール酸など）が挙げられる。こ
うしたものは、核酸の３’端あるいは５’端に付着させ
ることができ、塩基、糖、分子内ヌクレオシド結合を介
して付着させることができうる。その他の基としては、
核酸の３’端あるいは５’端に特異的に配置されたキャ
ップ用の基で、エキソヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅなどの
ヌクレアーゼによる分解を阻止するためのものが挙げら
れる。こうしたキャップ用の基としては、ポリエチレン
グリコール、テトラエチレングリコールなどのグリコー
ルをはじめとした当該分野で知られた水酸基の保護基が
挙げられるが、それに限定されるものではない。アンチ
センス核酸の阻害活性は、本発明の形質転換体、本発明
の生体内や生体外の遺伝子発現系、あるいはＧ蛋白質共
役型レセプター蛋白質の生体内や生体外の翻訳系を用い
て調べることができる。該核酸それ自体公知の各種の方
法で細胞に適用できる。

【００２９】本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡ
としては、上記した本発明の部分ペプチドをコードする
塩基配列を含有するものであればいかなるものであって
もよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリ
ー、上記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、上記した細胞
・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいず
れでもよい。ライブラリーに使用するベクターは、バク
テリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミド
などいずれであってもよい。また、上記した細胞・組織
よりｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接Reverse
TranscriptasePolymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ
-ＰＣＲ法と略称する）によって増幅することもでき
る。具体的には、本発明の部分ペプチドをコードするＤ
ＮＡとしては、例えば、（１）配列番号：２で表わされ
る塩基配列を有するＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮ
Ａ、または（２）配列番号：２で表わされる塩基配列と
ハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩
基配列を有し、本発明のレセプター蛋白質と実質的に同
質の活性（例、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作
用など）を有するレセプター蛋白質をコードするＤＮＡ
の部分塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられる。より
具体的には、本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡ
としては、例えば、（１）配列番号：７、８、９、１
０、１１、１２または１３で表わされる塩基配列を有す
るＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または（２）
配列番号：７、８、９、１０、１１、１２または１３で
表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明のレセプタ
ー蛋白質と実質的に同質の活性を有するレセプター蛋白
質をコードするＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡな
どが用いられる。配列番号：２で表わされる塩基配列ハ
イブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番
号：２で表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましく
は約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好
ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有
するＤＮＡなどが用いられる。また、配列番号：７、
８、９、１０、１１、１２または１３で表わされる塩基
配列ハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配
列番号：７、８、９、１０、１１、１２または１３で表
わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％
以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約
９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡ
などが用いられる。

【００３０】本発明のレセプター蛋白質またはその部分
ペプチド（以下、本発明のレセプター蛋白質と略記する
場合がある）を完全にコードするＤＮＡのクローニング
の手段としては、本発明のレセプター蛋白質の部分塩基
配列を有する合成ＤＮＡプライマーを用いてＰＣＲ法に
よって増幅するか、または適当なベクターに組み込んだ
ＤＮＡを本発明のレセプター蛋白質の一部あるいは全領
域をコードするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて
標識したものとのハイブリダイゼーションによって選別
することができる。ハイブリダイゼーションの方法は、
例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular Clon
ing）２nd（J. Sambrook et al., ColdSpring Harbor L
ab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行なうこ
とができる。また、市販のライブラリーを使用する場
合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうこと
ができる。

【００３１】ＤＮＡの塩基配列の置換は、ＰＣＲや公知
のキット、例えば、Mutan^TM−superExpress Km（宝酒造
（株））、Mutan^TM−K（宝酒造（株））等を用いて、OD
A−LA PCR法、gapped duplex法、Kunkel法等の公知の方
法あるいはそれらに準じる方法に従って行なうことがで
きる。クローン化されたレセプター蛋白質をコードする
ＤＮＡは目的によりそのまま、または所望により制限酵
素で消化したり、リンカーを付加したりして使用するこ
とができる。該ＤＮＡはその５’末端側に翻訳開始コド
ンとしてのＡＴＧを有し、また３’末端側には翻訳終止
コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有してい
てもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドン
は、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付加すること
もできる。本発明のレセプター蛋白質の発現ベクター
は、例えば、（イ）本発明のレセプター蛋白質をコード
するＤＮＡから目的とするＤＮＡ断片を切り出し、
（ロ）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター中のプロモー
ターの下流に連結することにより製造することができ
る。

【００３２】ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミ
ド（例、ｐＣＲ４、ｐＣＲ２．１、ｐＢＲ３２２、ｐＢ
Ｒ３２５、ｐＵＣ１２、ｐＵＣ１３）、枯草菌由来のプ
ラスミド（例、ｐＵＢ１１０、ｐＴＰ５、ｐＣ１９
４）、酵母由来プラスミド（例、ｐＳＨ１９、ｐＳＨ１
５）、λファージなどのバクテリオファージ、レトロウ
イルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルスなどの
動物ウイルスなどの他、ｐＡ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲ
ｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏな
どが用いられる。本発明で用いられるプロモーターとし
ては、遺伝子の発現に用いる宿主に対応して適切なプロ
モーターであればいかなるものでもよい。例えば、動物
細胞を宿主として用いる場合は、ＳＲαプロモーター、
ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶプ
ロモーター、ＨＳＶ-ＴＫプロモーターなどが挙げられ
る。これらのうち、ＣＭＶプロモーター、ＳＲαプロモ
ーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア
属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモ
ーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰ_Lプロモーター、
ｌｐｐプロモーターなどが、宿主がバチルス属菌である
場合は、ＳＰＯ１プロモーター、ＳＰＯ２プロモータ
ー、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主が酵母である場合
は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡ
Ｐプロモーター、ＡＤＨプロモーターなどが好ましい。
宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘドリンプロモータ
ー、Ｐ１０プロモーターなどが好ましい。

【００３３】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（Ｍ
ＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐ
^rと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子
（以下、Ｎｅｏ^rと略称する場合がある、Ｇ４１８耐
性）等が挙げられる。特に、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）細胞
を用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マーカーとして使用する
場合、目的遺伝子をチミジンを含まない培地によっても
選択できる。また、必要に応じて、宿主に合ったシグナ
ル配列を、本発明のレセプター蛋白質のＮ端末側に付加
する。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、PhoＡ・
シグナル配列、OmpＡ・シグナル配列などが、宿主がバ
チルス属菌である場合は、α−アミラーゼ・シグナル配
列、サブチリシン・シグナル配列などが、宿主が酵母で
ある場合は、ＭＦα・シグナル配列、ＳＵＣ２・シグナ
ル配列など、宿主が動物細胞である場合には、インシュ
リン・シグナル配列、α−インターフェロン・シグナル
配列、抗体分子・シグナル配列などがそれぞれ利用でき
る。このようにして構築された本発明のレセプター蛋白
質をコードするＤＮＡを含有するベクターを用いて、形
質転換体を製造することができる。

【００３４】宿主としては、例えば、エシェリヒア属
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞な
どが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例としては、
エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２・ＤＨ
１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６０巻，１６０
(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクイレック・アシッズ・
リサーチ，（Nucleic Acids Research），９巻，３０９
(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オブ・モレキ
ュラー・バイオロジー（Journal of Molecular Biolog
y），１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ１０１〔ジ
ャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，４１
巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネティックス
（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕，ＤＨ５α
〔Inoue,H.,Nojima,H.and Okayama,H.,Gene,96,23-28
(1990)〕，ＤＨ１０Ｂ〔プロシージングズ・オブ・ザ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ
・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳ
Ａ），８７巻，４６４５−４６４９(１９９０)〕などが
用いられる。バチルス属菌としては、例えば、バチルス
・サブチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４〔ジー
ン，２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１〔ジャ
ーナル・オブ・バイオケミストリー（Journal of Bioch
emistry），９５巻，８７(１９８４)〕などが用いられ
る。酵母としては、例えば、サッカロマイセス セレビ
シエ（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２
Ｒ^-，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ、２０Ｂ−１
２、シゾサッカロマイセス ポンベ（Schizosaccharomy
ces pombe）ＮＣＹＣ１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、ピ
キア パストリス（Pichia pastoris）などが用いられ
る。

【００３５】昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡ
ｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Spodop
tera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia ni
の中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来のH
igh Five^TM 細胞、Mamestrabrassicae由来の細胞または
Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイル
スがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（Bombyx mor
i N；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ細胞とし
ては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、Ｓｆ２１
細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴィボ（In Viv
o）,13, 213-217,(1977)）などが用いられる。昆虫とし
ては、例えば、カイコの幼虫などが用いられる〔前田
ら、ネイチャー（Nature），３１５巻，５９２(１９８
５)〕。動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ−
７，Vero，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、
ＣＨＯ細胞と略記）、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニーズ
ハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）細
胞と略記）、マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２０、マウ
スミエローマ細胞、ラットＧＨ３、ヒトＦＬ細胞などが
用いられる。

【００３６】エシェリヒア属菌を形質転換するには、例
えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンジイズ・オブ・ザ・ユーエスエ
ー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６９巻，２１
１０(１９７２)やジーン（Gene），１７巻，１０７(１
９８２)などに記載の方法に従って行なうことができ
る。バチルス属菌を形質転換するには、例えば、モレキ
ュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティックス（Mole
cular ＆ General Genetics），１６８巻，１１１(１９
７９)などに記載の方法に従って行なうことができる。
酵母を形質転換するには、例えば、メッソズ・イン・エ
ンザイモロジー（Methods in Enzymology），１９４
巻，１８２−１８７（１９９１）、プロシージングズ・
オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシ
イズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sc
i. ＵＳＡ），７５巻，１９２９(１９７８）などに記載
の方法に従って行なうことができる。昆虫細胞または昆
虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノロジー
（Bio/Technology）,6, 47-55(1988)）などに記載の方
法に従って行なうことができる。動物細胞を形質転換す
るには、例えば、細胞工学別冊８新細胞工学実験プロト
コール．２６３−２６７（１９９５）（秀潤社発行）、
ヴィロロジー（Virology），５２巻，４５６(１９７３)
に記載の方法に従って行なうことができる。このように
して、Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質をコードするＤ
ＮＡを含有する発現ベクターで形質転換された形質転換
体が得られる。宿主がエシェリヒア属菌、バチルス属菌
である形質転換体を培養する際、培養に使用される培地
としては液体培地が適当であり、その中には該形質転換
体の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有
せしめられる。炭素源としては、例えば、グルコース、
デキストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源として
は、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチ
ープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆
粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物質、無機
物としては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナ
トリウム、塩化マグネシウムなどが挙げられる。また、
酵母エキス、ビタミン類、生長促進因子などを添加して
もよい。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。

【００３７】エシェリヒア属菌を培養する際の培地とし
ては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地
〔ミラー（Miller），ジャーナル・オブ・エクスペリメ
ンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journa
l of Experiments in Molecular Genetics），４３１−
４３３，Cold Spring Harbor Laboratory, New York１
９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを
効率よく働かせるために、例えば、３β−インドリル
アクリル酸のような薬剤を加えることができる。宿主が
エシェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で
約３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加え
ることもできる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通
常約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により
通気や撹拌を加えることもできる。宿主が酵母である形
質転換体を培養する際、培地としては、例えば、バーク
ホールダー（Burkholder）最小培地〔Bostian, K. L.
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），７７巻，４５０
５(１９８０)〕や０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培
地〔Bitter, G. A. ら、プロシージングズ・オブ・ザ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ
・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳ
Ａ），８１巻，５３３０（１９８４）〕が挙げられる。
培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は
通常約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要
に応じて通気や撹拌を加える。

【００３８】宿主が昆虫細胞または昆虫である形質転換
体を培養する際、培地としては、Grace's Insect Mediu
m（Grace, T.C.C.,ネイチャー（Nature）,195,788(196
2)）に非動化した１０％ウシ血清等の添加物を適宜加え
たものなどが用いられる。培地のｐＨは約６．２〜６．
４に調整するのが好ましい。培養は通常約２７℃で約３
〜５日間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。宿
主が動物細胞である形質転換体を培養する際、培地とし
ては、例えば、約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ
培地〔サイエンス（Science），１２２巻，５０１(１９
５２)〕，ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジー（Virology），
８巻，３９６(１９５９)〕，ＲＰＭＩ １６４０培地
〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・メディカル・ア
ソシエーション（The Journal of the American Medica
l Association）１９９巻，５１９(１９６７)〕，１９
９培地〔プロシージング・オブ・ザ・ソサイエティ・フ
ォー・ザ・バイオロジカル・メディスン（Proceeding o
fthe Society for the Biological Medicine），７３
巻，１(１９５０)〕などが用いられる。ｐＨは約６〜８
であるのが好ましい。培養は通常約３０℃〜４０℃で約
１５〜６０時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加え
る。以上のようにして、形質転換体の細胞内、細胞膜ま
たは細胞外に本発明のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質
を生成せしめることができる。

【００３９】上記培養物から本発明のレセプター蛋白質
を分離精製するには、例えば、下記の方法により行なう
ことができる。本発明のレセプター蛋白質を培養菌体あ
るいは細胞から抽出するに際しては、培養後、公知の方
法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩衝液に懸
濁し、超音波、リゾチームおよび／または凍結融解など
によって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠心分離や
ろ過によりレセプター蛋白質の粗抽出液を得る方法など
が適宜用いられる。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジン
などの蛋白質変性剤や、トリトンＸ−１００^TMなどの界
面活性剤が含まれていてもよい。培養液中にレセプター
蛋白質が分泌される場合には、培養終了後、それ自体公
知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを分離し、上清を
集める。このようにして得られた培養上清、あるいは抽
出液中に含まれるレセプター蛋白質の精製は、自体公知
の分離・精製法を適切に組み合わせて行なうことができ
る。これらの公知の分離、精製法としては、塩析や溶媒
沈澱法などの溶解度を利用する方法、透析法、限外ろ過
法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方
法、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利
用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの
特異的新和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグ
ラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気
泳動法などの等電点の差を利用する方法などが用いられ
る。

【００４０】かくして得られるレセプター蛋白質が遊離
体で得られた場合には、自体公知の方法あるいはそれに
準じる方法によって塩に変換することができ、逆に塩で
得られた場合には自体公知の方法あるいはそれに準じる
方法により、遊離体または他の塩に変換することができ
る。なお、組換え体が産生するレセプター蛋白質を、精
製前または精製後に適当な蛋白修飾酵素を作用させるこ
とにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチドを部分
的に除去することもできる。蛋白修飾酵素としては、例
えば、トリプシン、キモトリプシン、アルギニルエンド
ペプチダーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダーゼな
どが用いられる。かくして生成する本発明のレセプター
蛋白質またはその塩の活性は、標識したリガンドとの結
合実験および特異抗体を用いたエンザイムイムノアッセ
イなどにより測定することができる。

【００４１】本発明のレセプター蛋白質もしくはその部
分ペプチドまたはその塩に対する抗体は、本発明のレセ
プター蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を
認識し得る抗体であれば、ポリクローナル抗体、モノク
ローナル抗体の何れであってもよい。本発明のレセプタ
ー蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩（以
下、本発明のレセプター蛋白質等と略記する場合があ
る）に対する抗体は、本発明のレセプター蛋白質等を抗
原として用い、自体公知の抗体または抗血清の製造法に
従って製造することができる。

【００４２】〔モノクローナル抗体の作製〕 （ａ）モノクロナール抗体産生細胞の作製 本発明のレセプター蛋白質等は、哺乳動物に対して投与
により抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、
希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産生能を
高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全フロ
イントアジュバントを投与してもよい。投与は通常２〜
６週毎に１回ずつ、計２〜１０回程度行なわれる。用い
られる哺乳動物としては、例えば、サル、ウサギ、イ
ヌ、モルモット、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギが挙げ
られるが、マウスおよびラットが好ましく用いられる。
モノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、抗原を
免疫された温血動物、例えば、マウスから抗体価の認め
られた個体を選択し最終免疫の２〜５日後に脾臓または
リンパ節を採取し、それらに含まれる抗体産生細胞を骨
髄腫細胞と融合させることにより、モノクローナル抗体
産生ハイブリドーマを調製することができる。抗血清中
の抗体価の測定は、例えば、後記の標識化レセプター蛋
白質等と抗血清とを反応させたのち、抗体に結合した標
識剤の活性を測定することにより行なうことができる。
融合操作は既知の方法、例えば、ケーラーとミルスタイ
ンの方法〔ネイチャー（Nature)、２５６巻、４９５頁
（１９７５年）〕に従い実施することができる。融合促
進剤としては、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥ
Ｇ）やセンダイウィルスなどが挙げられるが、好ましく
はＰＥＧが用いられる。骨髄腫細胞としては、例えば、
ＮＳ−１、Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０などが挙げられるが、
Ｐ３Ｕ１が好ましく用いられる。用いられる抗体産生細
胞（脾臓細胞）数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は
１：１〜２０：１程度であり、ＰＥＧ（好ましくは、Ｐ
ＥＧ１０００〜ＰＥＧ６０００）が１０〜８０％程度の
濃度で添加され、約２０〜４０℃、好ましくは約３０〜
３７℃で約１〜１０分間インキュベートすることにより
効率よく細胞融合を実施できる。

【００４３】モノクローナル抗体産生ハイブリドーマの
スクリーニングには種々の方法が使用できるが、例え
ば、レセプター蛋白質等の抗原を直接あるいは担体とと
もに吸着させた固相（例、マイクロプレート）にハイブ
リドーマ培養上清を添加し、次に放射性物質や酵素など
で標識した抗免疫グロブリン抗体（細胞融合に用いられ
る細胞がマウスの場合、抗マウス免疫グロブリン抗体が
用いられる）またはプロテインＡを加え、固相に結合し
たモノクローナル抗体を検出する方法、抗免疫グロブリ
ン抗体またはプロテインＡを吸着させた固相にハイブリ
ドーマ培養上清を添加し、放射性物質や酵素などで標識
したレセプター蛋白質等を加え、固相に結合したモノク
ローナル抗体を検出する方法などが挙げられる。モノク
ローナル抗体の選別は、自体公知あるいはそれに準じる
方法に従って行なうことができるが、通常はＨＡＴ（ヒ
ポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加した
動物細胞用培地などで行なうことができる。選別および
育種用培地としては、ハイブリドーマが生育できるもの
ならばどのような培地を用いても良い。例えば、１〜２
０％、好ましくは１０〜２０％の牛胎児血清を含むＲＰ
ＭＩ １６４０培地、１〜１０％の牛胎児血清を含むＧ
ＩＴ培地（和光純薬工業（株））またはハイブリドーマ
培養用無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬（株））
などを用いることができる。培養温度は、通常２０〜４
０℃、好ましくは約３７℃である。培養時間は、通常５
日〜３週間、好ましくは１週間〜２週間である。培養
は、通常５％炭酸ガス下で行なうことができる。ハイブ
リドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清中の抗体価
の測定と同様にして測定できる。

【００４４】（ｂ）モノクロナール抗体の精製 モノクローナル抗体の分離精製は、通常のポリクローナ
ル抗体の分離精製と同様に免疫グロブリンの分離精製法
〔例、塩析法、アルコール沈殿法、等電点沈殿法、電気
泳動法、イオン交換体（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着
法、超遠心法、ゲルろ過法、抗原結合固相またはプロテ
インＡあるいはプロテインＧなどの活性吸着剤により抗
体のみを採取し、結合を解離させて抗体を得る特異的精
製法〕に従って行なうことができる。

【００４５】〔ポリクローナル抗体の作製〕本発明のポ
リクローナル抗体は、それ自体公知あるいはそれに準じ
る方法にしたがって製造することができる。例えば、免
疫抗原（レセプター蛋白質等の抗原）とキャリアー蛋白
質との複合体をつくり、上記のモノクローナル抗体の製
造法と同様に哺乳動物に免疫を行ない、該免疫動物から
本発明のレセプター蛋白質等に対する抗体含有物を採取
して、抗体の分離精製を行なうことにより製造できる。
哺乳動物を免疫するために用いられる免疫抗原とキャリ
アー蛋白質との複合体に関し、キャリアー蛋白質の種類
およびキャリアーとハプテンとの混合比は、キャリアー
に架橋させて免疫したハプテンに対して抗体が効率良く
できれば、どの様なものをどの様な比率で架橋させても
よいが、例えば、ウシ血清アルブミン、ウシサイログロ
ブリン、キーホール・リンペット・ヘモシアニン等を重
量比でハプテン１に対し、約０.１〜２０、好ましくは
約１〜５の割合でカプルさせる方法が用いられる。ま
た、ハプテンとキャリアーのカプリングには、種々の縮
合剤を用いることができるが、グルタルアルデヒドやカ
ルボジイミド、マレイミド活性エステル、チオール基、
ジチオビリジル基を含有する活性エステル試薬等が用い
られる。縮合生成物は、温血動物に対して、抗体産生が
可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投
与される。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全
フロイントアジュバントや不完全フロイントアジュバン
トを投与してもよい。投与は、通常約２〜６週毎に１回
ずつ、計約３〜１０回程度行なうことができる。ポリク
ローナル抗体は、上記の方法で免疫された哺乳動物の血
液、腹水など、好ましくは血液から採取することができ
る。抗血清中のポリクローナル抗体価の測定は、上記の
血清中の抗体価の測定と同様にして測定できる。ポリク
ローナル抗体の分離精製は、上記のモノクローナル抗体
の分離精製と同様の免疫グロブリンの分離精製法に従っ
て行なうことができる。

【００４６】本発明のレセプター蛋白質またはその塩、
その部分ペプチドまたはその塩、および該レセプター蛋
白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡは、
（１）本発明のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質に対す
るリガンド（アゴニスト）の決定、（２）本発明のＧ蛋
白質共役型レセプター蛋白質の機能不全に関連する疾患
の予防および／または治療剤、（３）遺伝子診断剤、
（４）本発明のレセプター蛋白質またはその部分ペプチ
ドの発現量を変化させる化合物のスクリーニング方法、
（５）本発明のレセプター蛋白質またはその部分ペプチ
ドの発現量を変化させる化合物を含有する各種疾病の予
防および／または治療剤、（６）本発明のＧ蛋白質共役
型レセプター蛋白質に対するリガンドの定量法、（７）
本発明のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質とリガンドと
の結合性を変化させる化合物（アゴニスト、アンタゴニ
ストなど）のスクリーニング方法、（８）本発明のＧ蛋
白質共役型レセプター蛋白質とリガンドとの結合性を変
化させる化合物（アゴニスト、アンタゴニスト）を含有
する各種疾病の予防および／または治療剤、（９）本発
明のレセプター蛋白質もしくはその部分ペプチドまたは
その塩の定量、（１０）細胞膜における本発明のレセプ
ター蛋白質またはその部分ペプチドの量を変化させる化
合物のスクリーニング方法、（１１）細胞膜における本
発明のレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの量を
変化させる化合物を含有する各種疾病の予防および／ま
たは治療剤、（１２）本発明のレセプター蛋白質もしく
はその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体による中
和、（１３）本発明のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質
をコードするＤＮＡを有する非ヒト動物の作製などに用
いることができる。特に、本発明の組換え型Ｇ蛋白質共
役型レセプター蛋白質の発現系を用いたレセプター結合
アッセイ系を用いることによって、ヒトや哺乳動物に特
異的なＧ蛋白質共役型レセプターに対するリガンドの結
合性を変化させる化合物（例、アゴニスト、アンタゴニ
ストなど）をスクリーニングすることができ、該アゴニ
ストまたはアンタゴニストを各種疾病の予防・治療剤な
どとして使用することができる。本発明のレセプター蛋
白質もしくは部分ペプチドまたはその塩（以下、本発明
のレセプター蛋白質等と略記する場合がある）、本発明
のレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードす
るＤＮＡ（以下、本発明のＤＮＡと略記する場合があ
る）および本発明のレセプター蛋白質等に対する抗体
（以下、本発明の抗体と略記する場合がある）の用途に
ついて、以下に具体的に説明する。

【００４７】（１）本発明のＧ蛋白質共役型レセプター
蛋白質に対するリガンド（アゴニスト）の決定 本発明のレセプター蛋白質もしくはその塩または本発明
の部分ペプチドもしくはその塩は、本発明のレセプター
蛋白質またはその塩に対するリガンド（アゴニスト）を
探索し、または決定するための試薬として有用である。
すなわち、本発明は、本発明のレセプター蛋白質もしく
はその塩または本発明の部分ペプチドもしくはその塩
と、試験化合物とを接触させることを特徴とする本発明
のレセプター蛋白質に対するリガンドの決定方法を提供
する。試験化合物としては、公知のリガンド（例えば、
アンギオテンシン、ボンベシン、カナビノイド、コレシ
ストキニン、グルタミン、セロトニン、メラトニン、ニ
ューロペプチドＹ、オピオイド、プリン、バソプレッシ
ン、オキシトシン、ＰＡＣＡＰ（例、ＰＡＣＡＰ２７，
ＰＡＣＡＰ３８）、セクレチン、グルカゴン、カルシト
ニン、アドレノメジュリン、ソマトスタチン、ＧＨＲ
Ｈ、ＣＲＦ、ＡＣＴＨ、ＧＲＰ、ＰＴＨ、ＶＩＰ（バソ
アクティブ インテスティナル アンドリレイテッド
ポリペプチド）、ソマトスタチン、ドーパミン、モチリ
ン、アミリン、ブラジキニン、ＣＧＲＰ（カルシトニン
ジーンリレーティッドペプチド）、ロイコトリエン、パ
ンクレアスタチン、プロスタグランジン、トロンボキサ
ン、アデノシン、アドレナリン、ケモカインスーパーフ
ァミリー（例、ＩＬ−８，ＧＲＯα，ＧＲＯβ，ＧＲＯ
γ，ＮＡＰ−２，ＥＮＡ−７８，ＧＣＰ−２，ＰＦ４，
ＩＰ−１０，Ｍｉｇ，ＰＢＳＦ／ＳＤＦ−１などのＣＸ
Ｃケモカインサブファミリー；ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１，
ＭＣＰ−２，ＭＣＰ−３，ＭＣＰ−４，ｅｏｔａｘｉ
ｎ，ＲＡＮＴＥＳ，ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β，ＨＣ
Ｃ−１，ＭＩＰ−３α／ＬＡＲＣ、ＭＩＰ−３β／ＥＬ
Ｃ，Ｉ−３０９，ＴＡＲＣ，ＭＩＰＦ−１，ＭＩＰＦ−
２／ｅｏｔａｘｉｎ−２，ＭＤＣ，ＤＣ−ＣＫ１／ＰＡ
ＲＣ，ＳＬＣなどのＣＣケモカインサブファミリー；ｌ
ｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎなどのＣケモカインサブファミ
リー；ｆｒａｃｔａｌｋｉｎｅなどのＣＸ３Ｃケモカイ
ンサブファミリー等）、エンドセリン、エンテロガスト
リン、ヒスタミン、ニューロテンシン、ＴＲＨ、パンク
レアティックポリペプタイド、ガラニン、リゾホスファ
チジン酸（ＬＰＡ）、スフィンゴシン１−リン酸など）
の他に、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、マウ
ス、ラット、ブタ、ウシ、ヒツジ、サルなど）の組織抽
出物、細胞培養上清などが用いられる。例えば、該組織
抽出物、細胞培養上清などを本発明のレセプター蛋白質
に添加し、細胞刺激活性などを測定しながら分画し、最
終的に単一のリガンドを得ることができる。

【００４８】具体的には、本発明のリガンド決定方法
は、本発明のレセプター蛋白質もしくはその部分ペプチ
ドもしくはその塩を用いるか、または組換え型レセプタ
ー蛋白質の発現系を構築し、該発現系を用いたレセプタ
ー結合アッセイ系を用いることによって、本発明のレセ
プター蛋白質に結合して細胞刺激活性（例えば、アラキ
ドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、
細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトー
ルリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸
化、ｃ−ｆｏｓ活性化、ｐＨの低下などを促進する活性
または抑制する活性）を有する化合物（例えば、ペプチ
ド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生
産物など）またはその塩を決定する方法である。本発明
のリガンド決定方法においては、本発明のレセプター蛋
白質またはその部分ペプチドと試験化合物とを接触させ
た場合の、例えば、該レセプター蛋白質または該部分ペ
プチドに対する試験化合物の結合量や、細胞刺激活性な
どを測定することを特徴とする。

【００４９】より具体的には、本発明は、 標識した試験化合物を、本発明のレセプター蛋白質も
しくはその塩または本発明の部分ペプチドもしくはその
塩に接触させた場合における、標識した試験化合物の該
蛋白質もしくはその塩、または該部分ペプチドもしくは
その塩に対する結合量を測定することを特徴とする本発
明のレセプター蛋白質またはその塩に対するリガンドの
決定方法、 標識した試験化合物を、本発明のレセプター蛋白質を
含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合に
おける、標識した試験化合物の該細胞または該膜画分に
対する結合量を測定することを特徴とする本発明のレセ
プター蛋白質またはその塩に対するリガンドの決定方
法、 標識した試験化合物を、本発明のレセプター蛋白質を
コードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養すること
によって細胞膜上に発現したレセプター蛋白質に接触さ
せた場合における、標識した試験化合物の該レセプター
蛋白質またはその塩に対する結合量を測定することを特
徴とする本発明のレセプター蛋白質に対するリガンドの
決定方法、

【００５０】試験化合物を、本発明のレセプター蛋白
質を含有する細胞に接触させた場合における、レセプタ
ー蛋白質を介した細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸
遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内
ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン
酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ
−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性また
は抑制する活性など）を測定することを特徴とする本発
明のレセプター蛋白質またはその塩に対するリガンドの
決定方法、および 試験化合物を、本発明のレセプター蛋白質をコードす
るＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって
細胞膜上に発現したレセプター蛋白質に接触させた場合
における、レセプター蛋白質を介する細胞刺激活性（例
えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内
Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生
成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内
蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下な
どを促進する活性または抑制する活性など）を測定する
ことを特徴とする本発明のレセプター蛋白質またはその
塩に対するリガンドの決定方法を提供する。特に、上記
〜の試験を行ない、試験化合物が本発明のレセプタ
ー蛋白質に結合することを確認した後に、上記〜の
試験を行なうことが好ましい。

【００５１】まず、リガンド決定方法に用いるレセプタ
ー蛋白質としては、上記した本発明のレセプター蛋白質
または本発明の部分ペプチドを含有するものであれば何
れのものであってもよいが、動物細胞を用いて大量発現
させたレセプター蛋白質が適している。本発明のレセプ
ター蛋白質を製造するには、上記の発現方法が用いられ
るが、該レセプター蛋白質をコードするＤＮＡを哺乳動
物細胞や昆虫細胞で発現することにより行なうことが好
ましい。目的とする蛋白質部分をコードするＤＮＡ断片
には、通常、相補ＤＮＡが用いられるが、必ずしもこれ
に制約されるものではない。例えば、遺伝子断片や合成
ＤＮＡを用いてもよい。本発明のレセプター蛋白質をコ
ードするＤＮＡ断片を宿主動物細胞に導入し、それらを
効率よく発現させるためには、該ＤＮＡ断片を昆虫を宿
主とするバキュロウイルスに属する核多角体病ウイルス
（nuclear polyhedrosis virus；ＮＰＶ）のポリヘドリ
ンプロモーター、ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロ
ウイルスのプロモーター、メタロチオネインプロモータ
ー、ヒトヒートショックプロモーター、サイトメガロウ
イルスプロモーター、ＳＲαプロモーターなどの下流に
組み込むのが好ましい。発現したレセプターの量と質の
検査はそれ自体公知の方法で行うことができる。例え
ば、文献〔Nambi，P．ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイ
オロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）,267巻,1
9555〜19559頁,1992年〕に記載の方法に従って行うこと
ができる。

【００５２】したがって、本発明のリガンド決定方法に
おいて、本発明のレセプター蛋白質もしくはその部分ペ
プチドまたはその塩を含有するものとしては、それ自体
公知の方法に従って精製したレセプター蛋白質もしくは
その部分ペプチドまたはその塩であってもよいし、該レ
セプター蛋白質を含有する細胞またはその細胞膜画分を
用いてもよい。本発明のリガンド決定方法において、本
発明のレセプター蛋白質を含有する細胞を用いる場合、
該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固定化
してもよい。固定化方法はそれ自体公知の方法に従って
行なうことができる。本発明のレセプター蛋白質を含有
する細胞としては、本発明のレセプター蛋白質を発現し
た宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、大腸菌、枯
草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが用いられる。細
胞膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の
方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをい
う。細胞の破砕方法としては、Potter−Elvehjem型ホモ
ジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダ
ーやポリトロン（Kinematica社製）による破砕、超音波
による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を
細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙げら
れる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠
心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられ
る。例えば、細胞破砕液を低速（５００ｒｐｍ〜３００
０ｒｐｍ）で短時間（通常、約１分〜１０分）遠心し、
上清をさらに高速（１５０００ｒｐｍ〜３００００ｒｐ
ｍ）で通常３０分〜２時間遠心し、得られる沈澱を膜画
分とする。該膜画分中には、発現したレセプター蛋白質
と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含
まれる。

【００５３】該レセプター蛋白質を含有する細胞やその
膜画分中のレセプター蛋白質の量は、１細胞当たり１０
³〜１０⁸分子であるのが好ましく、１０⁵〜１０⁷分子で
あるのが好適である。なお、発現量が多いほど膜画分当
たりのリガンド結合活性（比活性）が高くなり、高感度
なスクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、
同一ロットで大量の試料を測定できるようになる。本発
明のレセプター蛋白質またはその塩に対するリガンドを
決定する上記の〜の方法を実施するためには、適当
なレセプター蛋白質画分と、標識した試験化合物が必要
である。レセプター蛋白質画分としては、天然型のレセ
プター蛋白質画分か、またはそれと同等の活性を有する
組換え型レセプター画分などが望ましい。ここで、同等
の活性とは、同等のリガンド結合活性、シグナル情報伝
達作用などを示す。標識した試験化合物としては、〔³
Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで標識した
アンギオテンシン、ボンベシン、カナビノイド、コレシ
ストキニン、グルタミン、セロトニン、メラトニン、ニ
ューロペプチドＹ、オピオイド、プリン、バソプレッシ
ン、オキシトシン、ＰＡＣＡＰ（例、ＰＡＣＡＰ２７，
ＰＡＣＡＰ３８）、セクレチン、グルカゴン、カルシト
ニン、アドレノメジュリン、ソマトスタチン、ＧＨＲ
Ｈ、ＣＲＦ、ＡＣＴＨ、ＧＲＰ、ＰＴＨ、ＶＩＰ（バソ
アクティブ インテスティナル アンド リイテッド
ポリペプチド）、ソマトスタチン、ドーパミン、モチリ
ン、アミリン、ブラジキニン、ＣＧＲＰ（カルシトニン
ジーンリレーティッドペプチド）、ロイコトリエン、パ
ンクレアスタチン、プロスタグランジン、トロンボキサ
ン、アデノシン、アドレナリン、ケモカインスーパーフ
ァミリー（例、ＩＬ−８，ＧＲＯα，ＧＲＯβ，ＧＲＯ
γ，ＮＡＰ−２，ＥＮＡ−７８，ＧＣＰ−２，ＰＦ４，
ＩＰ−１０，Ｍｉｇ，ＰＢＳＦ／ＳＤＦ−１などのＣＸ
Ｃケモカインサブファミリー；ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１，
ＭＣＰ−２，ＭＣＰ−３，ＭＣＰ−４，ｅｏｔａｘｉ
ｎ，ＲＡＮＴＥＳ，ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β，ＨＣ
Ｃ−１，ＭＩＰ−３α／ＬＡＲＣ、ＭＩＰ−３β／ＥＬ
Ｃ，Ｉ−３０９，ＴＡＲＣ，ＭＩＰＦ−１，ＭＩＰＦ−
２／ｅｏｔａｘｉｎ−２，ＭＤＣ，ＤＣ−ＣＫ１／ＰＡ
ＲＣ，ＳＬＣなどのＣＣケモカインサブファミリー；ｌ
ｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎなどのＣケモカインサブファミ
リー；ｆｒａｃｔａｌｋｉｎｅなどのＣＸ３Ｃケモカイ
ンサブファミリー等）、エンドセリン、エンテロガスト
リン、ヒスタミン、ニューロテンシン、ＴＲＨ、パンク
レアティックポリペプタイド、ガラニン、リゾホスファ
チジン酸（ＬＰＡ）、スフィンゴシン１−リン酸などが
好適である。

【００５４】具体的には、本発明のレセプター蛋白質ま
たはその塩に対するリガンドの決定方法を行なうには、
まず本発明のレセプター蛋白質を含有する細胞または細
胞の膜画分を、決定方法に適したバッファーに懸濁する
ことによりレセプター標品を調製する。バッファーに
は、ｐＨ４〜１０（望ましくはｐＨ６〜８）のリン酸バ
ッファー、トリス−塩酸バッファーなどのリガンドとレ
セプター蛋白質との結合を阻害しないバッファーであれ
ばいずれでもよい。また、非特異的結合を低減させる目
的で、ＣＨＡＰＳ、Ｔｗｅｅｎ−８０^TM（花王−アトラ
ス社）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面活性
剤やウシ血清アルブミンやゼラチンなどの各種蛋白質を
バッファーに加えることもできる。さらに、プロテアー
ゼによるリセプターやリガンドの分解を抑える目的でＰ
ＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−６４（ペプチド研究所
製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加す
ることもできる。０.０１ｍｌ〜１０ｍlの該レセプター
溶液に、一定量（５０００ｃｐｍ〜５０００００ｃｐ
ｍ）の〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで
標識した試験化合物を共存させる。非特異的結合量（Ｎ
ＳＢ）を知るために大過剰の未標識の試験化合物を加え
た反応チューブも用意する。反応は約０℃〜５０℃、望
ましくは約４℃〜３７℃で、約２０分〜２４時間、望ま
しくは約３０分〜３時間行なう。反応後、ガラス繊維濾
紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラ
ス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレーション
カウンターあるいはγ−カウンターで計測する。全結合
量（Ｂ）から非特異的結合量（ＮＳＢ）を引いたカウン
ト（Ｂ−ＮＳＢ）が０ｃｐｍを越える試験化合物を本発
明のレセプター蛋白質またはその塩に対するリガンド
（アゴニスト）として選択することができる。

【００５５】本発明のレセプター蛋白質またはその塩に
対するリガンドを決定する上記の〜の方法を実施す
るためには、該レセプター蛋白質を介する細胞刺激活性
（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細
胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ
生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞
内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下
などを促進する活性または抑制する活性など）を公知の
方法または市販の測定用キットを用いて測定することが
できる。具体的には、まず、レセプター蛋白質を含有す
る細胞をマルチウェルプレート等に培養する。リガンド
決定を行なうにあたっては前もって新鮮な培地あるいは
細胞に毒性を示さない適当なバッファーに交換し、試験
化合物などを添加して一定時間インキュベートした後、
細胞を抽出あるいは上清液を回収して、生成した産物を
それぞれの方法に従って定量する。細胞刺激活性の指標
とする物質（例えば、アラキドン酸など）の生成が、細
胞が含有する分解酵素によって検定困難な場合は、該分
解酵素に対する阻害剤を添加してアッセイを行なっても
よい。また、ｃＡＭＰ産生抑制などの活性については、
フォルスコリンなどで細胞の基礎的産生量を増大させて
おいた細胞に対する産生抑制作用として検出することが
できる。

【００５６】本発明のレセプター蛋白質またはその塩に
結合するリガンド決定用キットは、本発明のレセプター
蛋白質もしくはその塩、本発明の部分ペプチドもしくは
その塩、本発明のレセプター蛋白質を含有する細胞、ま
たは本発明のレセプター蛋白質を含有する細胞の膜画分
などを含有するものである。本発明のリガンド決定用キ
ットの例としては、次のものが挙げられる。 １．リガンド決定用試薬 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、０.
０５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたも
の。孔径０.４５μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃
で保存するか、あるいは用時調製しても良い。 Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質標品 本発明のレセプター蛋白質を発現させたＣＨＯ細胞を、
１２穴プレートに５×１０⁵個／穴で継代し、３７℃、
５％ＣＯ₂、９５％ａｉｒで２日間培養したもの。 標識試験化合物 市販の〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで
標識した化合物、または適当な方法で標識化したもの水
溶液の状態のものを４℃あるいは−２０℃にて保存し、
用時に測定用緩衝液にて１μＭに希釈する。水に難溶性
を示す試験化合物については、ジメチルホルムアミド、
ＤＭＳＯ、メタノール等に溶解する。 非標識試験化合物 標識化合物と同じものを１００〜１０００倍濃い濃度に
調製する。

【００５７】２．測定法 １２穴組織培養用プレートにて培養した本発明のレセ
プター蛋白質発現ＣＨＯ細胞を、測定用緩衝液１ｍｌで
２回洗浄した後、４９０μｌの測定用緩衝液を各穴に加
える。 標識試験化合物を５μｌ加え、室温にて１時間反応さ
せる。非特異的結合量を知るためには非標識試験化合物
を５μｌ加えておく。 反応液を除去し、１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄す
る。細胞に結合した標識試験化合物を０.２Ｎ ＮａＯ
Ｈ−１％ＳＤＳで溶解し、４ｍｌの液体シンチレーター
Ａ（和光純薬製）と混合する。 液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）
を用いて放射活性を測定する。

【００５８】本発明のレセプター蛋白質またはその塩に
結合することができるリガンドとしては、例えば、脳、
下垂体、心臓、膵臓、脾臓、精巣などに特異的に存在す
る物質などが挙げられ、具体的には、アンギオテンシ
ン、ボンベシン、カナビノイド、コレシストキニン、グ
ルタミン、セロトニン、メラトニン、ニューロペプチド
Ｙ、オピオイド、プリン、バソプレッシン、オキシトシ
ン、ＰＡＣＡＰ（例、ＰＡＣＡＰ２７，ＰＡＣＡＰ３
８）、セクレチン、グルカゴン、カルシトニン、アドレ
ノメジュリン、ソマトスタチン、ＧＨＲＨ、ＣＲＦ、Ａ
ＣＴＨ、ＧＲＰ、ＰＴＨ、ＶＩＰ（バソアクティブ イ
ンテスティナル アンド リレイテッド ポリペプチ
ド）、ソマトスタチン、ドーパミン、モチリン、アミリ
ン、ブラジキニン、ＣＧＲＰ（カルシトニンジーンリレ
ーティッドペプチド）、ロイコトリエン、パンクレアス
タチン、プロスタグランジン、トロンボキサン、アデノ
シン、アドレナリン、ケモカインスーパーファミリー
（例、ＩＬ−８，ＧＲＯα，ＧＲＯβ，ＧＲＯγ，ＮＡ
Ｐ−２，ＥＮＡ−７８，ＧＣＰ−２，ＰＦ４，ＩＰ−１
０，Ｍｉｇ，ＰＢＳＦ／ＳＤＦ−１などのＣＸＣケモカ
インサブファミリー；ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１，ＭＣＰ−
２，ＭＣＰ−３，ＭＣＰ−４，ｅｏｔａｘｉｎ，ＲＡＮ
ＴＥＳ，ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β，ＨＣＣ−１，Ｍ
ＩＰ−３α／ＬＡＲＣ、ＭＩＰ−３β／ＥＬＣ，Ｉ−３
０９，ＴＡＲＣ，ＭＩＰＦ−１，ＭＩＰＦ−２／ｅｏｔ
ａｘｉｎ−２，ＭＤＣ，ＤＣ−ＣＫ１／ＰＡＲＣ，ＳＬ
ＣなどのＣＣケモカインサブファミリー；ｌｙｍｐｈｏ
ｔａｃｔｉｎなどのＣケモカインサブファミリー；ｆｒ
ａｃｔａｌｋｉｎｅなどのＣＸ３Ｃケモカインサブファ
ミリー等）、エンドセリン、エンテロガストリン、ヒス
タミン、ニューロテンシン、ＴＲＨ、パンクレアティッ
クポリペプタイド、ガラニン、リゾホスファチジン酸
（ＬＰＡ）、スフィンゴシン１−リン酸などが用いられ
る。

【００５９】（２）本発明のＧ蛋白質共役型レセプター
蛋白質の機能不全に関連する疾患の予防および／または
治療剤 上記（１）の方法において、本発明のレセプター蛋白質
に対するリガンドが明らかになれば、該リガンドが有す
る作用に応じて、本発明のレセプター蛋白質または
該レセプター蛋白質をコードするＤＮＡを、本発明のレ
セプター蛋白質の機能不全に関連する疾患の予防および
／または治療剤などの医薬として使用することができ
る。例えば、生体内において本発明のレセプター蛋白質
が減少しているためにリガンドの生理作用が期待できな
い（該レセプター蛋白質の欠乏症）患者がいる場合に、
本発明のレセプター蛋白質を該患者に投与し該レセプ
ター蛋白質の量を補充したり、（イ）本発明のレセプ
ター蛋白質をコードするＤＮＡを該患者に投与し発現さ
せることによって、あるいは（ロ）対象となる細胞に本
発明のレセプター蛋白質をコードするＤＮＡを挿入し発
現させた後に、該細胞を該患者に移植することなどによ
って、患者の体内におけるレセプター蛋白質の量を増加
させ、リガンドの作用を充分に発揮させることができ
る。すなわち、本発明のレセプター蛋白質をコードする
ＤＮＡは、安全で低毒性な本発明のレセプター蛋白質の
機能不全に関連する疾患の予防および／または治療剤と
して有用である。本発明のレセプター蛋白質は、Ｇ蛋白
共役型レセプター蛋白質であるＭＡＳ（Cell 45、 711-7
19(1986)、 NATURE 335、437-440(1988)）にアミノ酸配
列レベルで、約２９％程度の相同性が認められる新規７
回膜貫通型受容体蛋白質である。本発明のレセプター蛋
白質または該レセプター蛋白質をコードするＤＮＡは中
枢疾患(例えば、アルツハイマー病、痴呆、摂食障害な
ど)、炎症性疾患(例えば、アレルギー、喘息、リュウマ
チなど)、循環器疾患(例えば、高血圧症、心肥大、狭心
症、動脈硬化症等)、癌（例えば、非小細胞肺癌、卵巣
癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸部癌、結腸
癌、直腸癌等）、代謝性疾患（例えば、糖尿病、糖尿病
合併症、肥満、動脈硬化、痛風、白内障等）、免疫系疾
患（例えば、自己免疫性疾患等）、消化器系疾患（例え
ば、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃炎、逆流性食道炎等）な
どの予防および／または治療に有用である。本発明のレ
セプター蛋白質を上記予防・治療剤として使用する場合
は、常套手段に従って製剤化することができる。一方、
本発明のレセプター蛋白質をコードするＤＮＡ（以下、
本発明のＤＮＡと略記する場合がある）を上記予防・治
療剤として使用する場合は、本発明のＤＮＡを単独ある
いはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクタ
ー、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクター
などの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って
実施することができる。本発明のＤＮＡは、そのまま
で、あるいは摂取促進のための補助剤とともに、遺伝子
銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによっ
て投与できる。例えば、本発明のレセプター蛋白質ま
たは該レセプター蛋白質をコードするＤＮＡは、必要
に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル
剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは
水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性
溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使
用できる。例えば、本発明のレセプター蛋白質または
該レセプター蛋白質をコードするＤＮＡを生理学的に
認められる公知の担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防
腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製
剤実施に要求される単位用量形態で混和することによっ
て製造することができる。これら製剤における有効成分
量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにする
ものである。

【００６０】錠剤、カプセル剤などに混和することがで
きる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアル
コール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート
８０^TM、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液
としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶
解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール
などと併用してもよい。

【００６１】また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝
剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝
液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸
プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、
ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤な
どと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当な
アンプルに充填される。このようにして得られる製剤は
安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例
えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、
ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができ
る。本発明のレセプター蛋白質の投与量は、投与対象、
対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経
口投与の場合、一般的に例えば、癌患者（６０ｋｇとし
て）においては、一日につき約０.１ｍｇ〜１００ｍ
ｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約
１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、
その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法
などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常
例えば、癌患者（６０ｋｇとして）においては、一日に
つき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜
２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度
を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物
の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与すること
ができる。本発明のＤＮＡの投与量は、投与対象、対象
臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投
与の場合、一般的に例えば、癌患者（６０ｋｇとして）
においては、一日につき約０.１ｍｇ〜１００ｍｇ、好
ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０
〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１
回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などに
よっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例え
ば、癌患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき
約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０
ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静
脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場
合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することがで
きる。

【００６２】（３）遺伝子診断剤 本発明のＤＮＡは、プローブとして使用することによ
り、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウ
サギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に
おける本発明のレセプター蛋白質またはその部分ペプチ
ドをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異
常）を検出することができるので、例えば、該ＤＮＡま
たはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは発現低下や、該
ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺
伝子診断剤として有用である。本発明のＤＮＡを用いる
上記の遺伝子診断は、例えば、自体公知のノーザンハイ
ブリダイゼーションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミック
ス（Genomics），第５巻，８７４〜８７９頁（１９８９
年）、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ユーエスエー
（Proceedings ofthe National Academy of Sciences o
f the United States of America），第８６巻，２７６
６〜２７７０頁（１９８９年））などにより実施するこ
とができる。

【００６３】（４）本発明のレセプター蛋白質またはそ
の部分ペプチドの発現量を変化させる化合物のスクリー
ニング方法 本発明のＤＮＡは、プローブとして用いることにより、
本発明のレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発
現量を変化させる化合物のスクリーニングに用いること
ができる。すなわち、本発明は、例えば、（ｉ）非ヒト
哺乳動物の血液、特定の臓器、臓器から単離した
組織もしくは細胞、または（ii）形質転換体等に含まれ
る本発明のレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの
ｍＲＮＡ量を測定することによる、本発明のレセプター
蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を変化させる化
合物のスクリーニング方法を提供する。

【００６４】本発明のレセプター蛋白質またはその部分
ペプチドのｍＲＮＡ量の測定は具体的には以下のように
して行なう。 （ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例え
ば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど、より具体的には痴呆ラット、肥満
マウス、動脈硬化ウサギ、担癌マウスなど）に対して、
薬剤（例えば、抗痴呆薬、血圧低下薬、抗癌剤、抗肥満
薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレ
ス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定
時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例え
ば、脳、肝臓、腎臓、心臓、膵臓、脾臓、精巣など）、
または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。得
られた細胞に含まれる本発明のレセプター蛋白質または
その部分ペプチドのｍＲＮＡは、例えば、通常の方法に
より細胞等からｍＲＮＡを抽出し、例えば、TaqManPCR
などの手法を用いることにより定量することができ、自
体公知の手段によりノザンブロットを行うことにより解
析することもできる。 （ii）本発明のレセプター蛋白質もしくはその部分ペプ
チドを発現する形質転換体を上記の方法に従い作製し、
該形質転換体に含まれる本発明のレセプター蛋白質また
はその部分ペプチドのｍＲＮＡを同様にして定量、解析
することができる。

【００６５】本発明のレセプター蛋白質またはその部分
ペプチドの発現量を変化させる化合物のスクリーニング
は、（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対
して、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一定時
間前（３０分前〜２４時間前、好ましくは３０分前〜１
２時間前、より好ましくは１時間前〜６時間前）もしく
は一定時間後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後
〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、ま
たは薬剤あるいは物理的ストレスと同時に被検化合物を
投与し、投与後一定時間経過後（３０分後〜３日後、好
ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜
２４時間後）、細胞に含まれる本発明のレセプター蛋白
質またはその部分ペプチドのｍＲＮＡ量を定量、解析す
ることにより行なうことができ、（ii）形質転換体を常
法に従い培養する際に被検化合物を培地中に混合させ、
一定時間培養後（１日後〜７日後、好ましくは１日後〜
３日後、より好ましくは２日後〜３日後）、該形質転換
体に含まれる本発明のレセプター蛋白質またはその部分
ペプチドのｍＲＮＡ量を定量、解析することにより行な
うことができる。

【００６６】本発明のスクリーニング方法を用いて得ら
れる化合物またはその塩は、本発明のレセプター蛋白質
またはその部分ペプチドの発現量を変化させる作用を有
する化合物であり、具体的には、（イ）本発明のレセプ
ター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させ
ることにより、Ｇ蛋白質共役型レセプターを介する細胞
刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン
遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内
ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変
動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐ
Ｈの低下などを促進する活性または抑制する活性など）
を増強させる化合物、（ロ）本発明のレセプター蛋白質
またはその部分ペプチドの発現量を減少させることによ
り、該細胞刺激活性を減弱させる化合物である。このよ
うな本発明のレセプター蛋白質またはその部分ペプチド
の発現量を変化させる作用を有する化合物は中枢疾患
(例えば、アルツハイマー病、痴呆、摂食障害など)、炎
症性疾患(例えば、アレルギー、喘息、リュウマチな
ど)、循環器疾患(例えば、高血圧症、心肥大、狭心症、
動脈硬化症等)、癌（例えば、非小細胞肺癌、卵巣癌、
前立腺癌、胃癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸部癌、結腸癌、
直腸癌等）、代謝性疾患（例えば、糖尿病、糖尿病合併
症、肥満、動脈硬化、痛風、白内障等）、免疫系疾患
（例えば、自己免疫性疾患等）、消化器系疾患（例え
ば、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃炎、逆流性食道炎等）な
どの予防および／または治療に有用である。該化合物と
しては、ペプチド、蛋白、非ペプチド性化合物、合成化
合物、発酵生産物などが挙げられ、これら化合物は新規
な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよ
い。該細胞刺激活性を増強させる化合物は、本発明のレ
セプター蛋白質等の生理活性を増強するための安全で低
毒性な医薬として有用である。該細胞刺激活性を減弱さ
せる化合物は、本発明のレセプター蛋白質等の生理活性
を減少させるための安全で低毒性な医薬として有用であ
る。

【００６７】本発明のスクリーニング方法を用いて得ら
れる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場
合、常套手段に従って実施することができる。例えば、
上記した本発明のレセプター蛋白質を含有する医薬と同
様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロ
カプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすることがで
きる。このようにして得られる製剤は安全で低毒性であ
るので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マ
ウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サル
など）に対して投与することができる。該化合物または
その塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方
法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的
に、例えば、癌患者（６０ｋｇとして）においては、一
日につき約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜
５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。
非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対
象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なる
が、例えば、注射剤の形では通常例えば、癌患者（６０
ｋｇとして）においては、一日につき約０．０１〜３０
ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好
ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与
するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当
たりに換算した量を投与することができる。

【００６８】（５）本発明のレセプター蛋白質またはそ
の部分ペプチドの発現量を変化させる化合物を含有する
各種疾病の予防および／または治療剤 本発明のレセプター蛋白質は上記のとおり、例えば、中
枢機能など生体内で何らかの重要な役割を果たしている
と考えられる。したがって、本発明のレセプター蛋白質
またはその部分ペプチドの発現量を変化させる化合物
は、本発明のレセプター蛋白質の機能不全に関連する疾
患〔中枢疾患(例えば、アルツハイマー病、痴呆、摂食
障害など)、炎症性疾患(例えば、アレルギー、喘息、リ
ュウマチなど)、循環器疾患(例えば、高血圧症、心肥
大、狭心症、動脈硬化症等)、癌（例えば、非小細胞肺
癌、卵巣癌、前立腺癌、胃癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸部
癌、結腸癌、直腸癌等）、代謝性疾患（例えば、糖尿
病、糖尿病合併症、肥満、動脈硬化、痛風、白内障
等）、免疫系疾患（例えば、自己免疫性疾患等）、消化
器系疾患（例えば、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃炎、逆流
性食道炎等）など〕の予防および／または治療剤として
用いることができる。該化合物を本発明のレセプター蛋
白質の機能不全に関連する疾患の予防および／または治
療剤として使用する場合は、常套手段に従って製剤化す
ることができる。例えば、該化合物は、必要に応じて糖
衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロ
カプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそ
れ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または
懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例
えば、該化合物を生理学的に認められる公知の担体、香
味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤など
とともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用
量形態で混和することによって製造することができる。
これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当
な用量が得られるようにするものである。

【００６９】錠剤、カプセル剤などに混和することがで
きる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアル
コール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート
８０^TM、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液
としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶
解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール
などと併用してもよい。

【００７０】また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝
剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝
液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸
プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、
ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤な
どと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当な
アンプルに充填される。このようにして得られる製剤は
安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例
えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、
ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができ
る。該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象
臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投
与の場合、一般的に例えば、癌患者（６０ｋｇとして）
においては、一日につき約０.１〜１００ｍｇ、好まし
くは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２
０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投
与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっ
ても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、癌
症患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき約
０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍ
ｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈
注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合
も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができ
る。

【００７１】（６）本発明のＧ蛋白質共役型レセプター
蛋白質に対するリガンドの定量法 本発明のレセプター蛋白質等は、リガンドに対して結合
性を有しているので、生体内におけるリガンド濃度を感
度良く定量することができる。本発明の定量法は、例え
ば、競合法と組み合わせることによって用いることがで
きる。すなわち、被検体を本発明のレセプター蛋白質等
と接触させることによって被検体中のリガンド濃度を測
定することができる。具体的には、例えば、以下のま
たはなどに記載の方法あるいはそれに準じる方法に従
って用いることができる。 入江寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和４
９年発行） 入江寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和
５４年発行）

【００７２】（７）本発明のＧ蛋白質共役型レセプター
蛋白質とリガンドとの結合性を変化させる化合物（アゴ
ニスト、アンタゴニストなど）のスクリーニング方法 本発明のレセプター蛋白質等を用いるか、または組換え
型レセプター蛋白質等の発現系を構築し、該発現系を用
いたレセプター結合アッセイ系を用いることによって、
リガンドと本発明のレセプター蛋白質等との結合性を変
化させる化合物（例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチ
ド性化合物、合成化合物、発酵生産物など）またはその
塩を効率よくスクリーニングすることができる。このよ
うな化合物には、（イ）Ｇ蛋白質共役型レセプターを介
して細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチ
ルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生
成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細
胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの
活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する
活性など）を有する化合物（いわゆる、本発明のレセプ
ター蛋白質に対するアゴニスト）、（ロ）該細胞刺激活
性を有しない化合物（いわゆる、本発明のレセプター蛋
白質に対するアンタゴニスト）、（ハ）リガンドと本発
明のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質との結合力を増強
する化合物、あるいは（ニ）リガンドと本発明のＧ蛋白
質共役型レセプター蛋白質との結合力を減少させる化合
物などが含まれる（なお、上記（イ）の化合物は、上記
したリガンド決定方法によってスクリーニングすること
が好ましい）。すなわち、本発明は、（ｉ）本発明のレ
セプター蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩
と、リガンドとを接触させた場合と（ii）本発明のレセ
プター蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩
と、リガンドおよび試験化合物とを接触させた場合との
比較を行なうことを特徴とするリガンドと本発明のレセ
プター蛋白質もしくはその部分ペプチドまたはその塩と
の結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニ
ング方法を提供する。本発明のスクリーニング方法にお
いては、（ｉ）と（ii）の場合における、例えば、該レ
セプター蛋白質等に対するリガンドの結合量、細胞刺激
活性などを測定して、比較することを特徴とする。

【００７３】より具体的には、本発明は、 標識したリガンドを、本発明のレセプター蛋白質等に
接触させた場合と、標識したリガンドおよび試験化合物
を本発明のレセプター蛋白質等に接触させた場合におけ
る、標識したリガンドの該レセプター蛋白質等に対する
結合量を測定し、比較することを特徴とするリガンドと
本発明のレセプター蛋白質等との結合性を変化させる化
合物またはその塩のスクリーニング方法、 標識したリガンドを、本発明のレセプター蛋白質等を
含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合
と、標識したリガンドおよび試験化合物を本発明のレセ
プター蛋白質等を含有する細胞または該細胞の膜画分に
接触させた場合における、標識したリガンドの該細胞ま
たは該膜画分に対する結合量を測定し、比較することを
特徴とするリガンドと本発明のレセプター蛋白質等との
結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニン
グ方法、 標識したリガンドを、本発明のＤＮＡを含有する形質
転換体を培養することによって細胞膜上に発現したレセ
プター蛋白質等に接触させた場合と、標識したリガンド
および試験化合物を本発明のＤＮＡを含有する形質転換
体を培養することによって細胞膜上に発現した本発明の
レセプター蛋白質等に接触させた場合における、標識し
たリガンドの該レセプター蛋白質等に対する結合量を測
定し、比較することを特徴とするリガンドと本発明のレ
セプター蛋白質等との結合性を変化させる化合物または
その塩のスクリーニング方法、

【００７４】本発明のレセプター蛋白質等を活性化す
る化合物（例えば、本発明のレセプター蛋白質等に対す
るリガンドなど）を本発明のレセプター蛋白質等を含有
する細胞に接触させた場合と、本発明のレセプター蛋白
質等を活性化する化合物および試験化合物を本発明のレ
セプター蛋白質等を含有する細胞に接触させた場合にお
ける、レセプターを介した細胞刺激活性（例えば、アラ
キドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊
離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシ
トールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリ
ン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進す
る活性または抑制する活性など）を測定し、比較するこ
とを特徴とするリガンドと本発明のレセプター蛋白質等
との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリー
ニング方法、および 本発明のレセプター蛋白質等を活性化する化合物（例
えば、本発明のレセプター蛋白質等に対するリガンドな
ど）を本発明のＤＮＡを含有する形質転換体を培養する
ことによって細胞膜上に発現した本発明のレセプター蛋
白質等に接触させた場合と、本発明のレセプター蛋白質
等を活性化する化合物および試験化合物を本発明のＤＮ
Ａを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜
上に発現した本発明のレセプター蛋白質等に接触させた
場合における、レセプターを介する細胞刺激活性（例え
ば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃ
ａ ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、
イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白
質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを
促進する活性または抑制する活性など）を測定し、比較
することを特徴とするリガンドと本発明のレセプター蛋
白質等との結合性を変化させる化合物またはその塩のス
クリーニング方法を提供する。

【００７５】本発明のレセプター蛋白質等が得られる以
前は、Ｇ蛋白質共役型レセプターアゴニストまたはアン
タゴニストをスクリーニングする場合、まずラットなど
のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質を含む細胞、組織ま
たはその細胞膜画分を用いて候補化合物を得て（一次ス
クリーニング）、その後に該候補化合物が実際にヒトの
Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質とリガンドとの結合を
阻害するか否かを確認する試験（二次スクリーニング）
が必要であった。細胞、組織または細胞膜画分をそのま
ま用いれば他のレセプター蛋白質も混在するために、目
的とするレセプター蛋白質に対するアゴニストまたはア
ンタゴニストを実際にスクリーニングすることは困難で
あった。しかしながら、例えば、本発明のヒト由来レセ
プター蛋白質を用いることによって、一次スクリーニン
グの必要がなくなり、リガンドとＧ蛋白質共役型レセプ
ター蛋白質との結合を阻害する化合物を効率良くスクリ
ーニングすることができる。さらに、スクリーニングさ
れた化合物がアゴニストかアンタゴニストかを簡便に評
価することができる。本発明のスクリーニング方法の具
体的な説明を以下にする。まず、本発明のスクリーニン
グ方法に用いる本発明のレセプター蛋白質等としては、
上記した本発明のレセプター蛋白質等を含有するもので
あれば何れのものであってもよいが、本発明のレセプタ
ー蛋白質等を含有する哺乳動物の臓器の細胞膜画分が好
適である。しかし、特にヒト由来の臓器は入手が極めて
困難なことから、スクリーニングに用いられるものとし
ては、組換え体を用いて大量発現させたヒト由来のレセ
プター蛋白質等などが適している。

【００７６】本発明のレセプター蛋白質等を製造するに
は、上記の方法が用いられるが、本発明のＤＮＡを哺乳
細胞や昆虫細胞で発現することにより行なうことが好ま
しい。目的とする蛋白質部分をコードするＤＮＡ断片に
は相補ＤＮＡが用いられるが、必ずしもこれに制約され
るものではない。例えば、遺伝子断片や合成ＤＮＡを用
いてもよい。本発明のレセプター蛋白質をコードするＤ
ＮＡ断片を宿主動物細胞に導入し、それらを効率よく発
現させるためには、該ＤＮＡ断片を昆虫を宿主とするバ
キュロウイルスに属する核多角体病ウイルス（nuclear
polyhedrosis virus；ＮＰＶ）のポリヘドリンプロモー
ター、ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウイルスの
プロモーター、メタロチオネインプロモーター、ヒトヒ
ートショックプロモーター、サイトメガロウイルスプロ
モーター、ＳＲαプロモーターなどの下流に組み込むの
が好ましい。発現したレセプターの量と質の検査はそれ
自体公知の方法で行うことができる。例えば、文献〔Na
mbi，P．ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・
ケミストリー（J. Biol. Chem.）,267巻,19555〜19559
頁,1992年〕に記載の方法に従って行なうことができ
る。したがって、本発明のスクリーニング方法におい
て、本発明のレセプター蛋白質等を含有するものとして
は、それ自体公知の方法に従って精製したレセプター蛋
白質等であってもよいし、該レセプター蛋白質等を含有
する細胞を用いてもよく、また該レセプター蛋白質等を
含有する細胞の膜画分を用いてもよい。

【００７７】本発明のスクリーニング方法において、本
発明のレセプター蛋白質等を含有する細胞を用いる場
合、該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固
定化してもよい。固定化方法はそれ自体公知の方法に従
って行なうことができる。本発明のレセプター蛋白質等
を含有する細胞としては、該レセプター蛋白質等を発現
した宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、大腸菌、
枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが好ましい。細
胞膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の
方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをい
う。細胞の破砕方法としては、Potter−Elvehjem型ホモ
ジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダ
ーやポリトロン（Kinematica社製）のよる破砕、超音波
による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を
細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙げら
れる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠
心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられ
る。例えば、細胞破砕液を低速（５００ｒｐｍ〜３００
０ｒｐｍ）で短時間（通常、約１分〜１０分）遠心し、
上清をさらに高速（１５０００ｒｐｍ〜３００００ｒｐ
ｍ）で通常３０分〜２時間遠心し、得られる沈澱を膜画
分とする。該膜画分中には、発現したレセプター蛋白質
等と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く
含まれる。該レセプター蛋白質等を含有する細胞や膜画
分中のレセプター蛋白質の量は、１細胞当たり１０³〜
１０⁸分子であるのが好ましく、１０⁵〜１０⁷分子であ
るのが好適である。なお、発現量が多いほど膜画分当た
りのリガンド結合活性（比活性）が高くなり、高感度な
スクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、同
一ロットで大量の試料を測定できるようになる。

【００７８】リガンドと本発明のレセプター蛋白質等と
の結合性を変化させる化合物をスクリーニングする上記
の〜を実施するためには、例えば、適当なレセプタ
ー蛋白質画分と、標識したリガンドが必要である。レセ
プター蛋白質画分としては、天然型のレセプター蛋白質
画分か、またはそれと同等の活性を有する組換え型レセ
プター蛋白質画分などが望ましい。ここで、同等の活性
とは、同等のリガンド結合活性、シグナル情報伝達作用
などを示す。標識したリガンドとしては、標識したリガ
ンド、標識したリガンドアナログ化合物などが用いられ
る。例えば〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕な
どで標識されたリガンドなどが用いられる。具体的に
は、リガンドと本発明のレセプター蛋白質等との結合性
を変化させる化合物のスクリーニングを行なうには、ま
ず本発明のレセプター蛋白質等を含有する細胞または細
胞の膜画分を、スクリーニングに適したバッファーに懸
濁することによりレセプター蛋白質標品を調製する。バ
ッファーには、ｐＨ４〜１０（望ましくはｐＨ６〜８）
のリン酸バッファー、トリス−塩酸バッファーなどのリ
ガンドとレセプター蛋白質との結合を阻害しないバッフ
ァーであればいずれでもよい。また、非特異的結合を低
減させる目的で、ＣＨＡＰＳ、Ｔween−８０^TM（花王−
アトラス社）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界
面活性剤をバッファーに加えることもできる。さらに、
プロテアーゼによるレセプターやリガンドの分解を抑え
る目的でＰＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−６４（ペプチド
研究所製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を
添加することもできる。０.０１ｍｌ〜１０ｍｌの該レ
セプター溶液に、一定量（５０００ｃｐｍ〜５００００
０ｃｐｍ）の標識したリガンドを添加し、同時に１０^-4
Ｍ〜１０^-10Ｍの試験化合物を共存させる。非特異的結
合量（ＮＳＢ）を知るために大過剰の未標識のリガンド
を加えた反応チューブも用意する。反応は約０℃から５
０℃、望ましくは約４℃から３７℃で、約２０分から２
４時間、望ましくは約３０分から３時間行う。反応後、
ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄
した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シン
チレーションカウンターまたはγ−カウンターで計測す
る。拮抗する物質がない場合のカウント(Ｂ₀）から非特
異的結合量（ＮＳＢ）を引いたカウント（Ｂ₀−ＮＳ
Ｂ）を１００％とした時、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）
が、例えば、５０％以下になる試験化合物を拮抗阻害能
力のある候補物質として選択することができる。

【００７９】リガンドと本発明のレセプター蛋白質等と
の結合性を変化させる化合物スクリーニングする上記の
〜の方法を実施するためには、例えば、レセプター
蛋白質を介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊
離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ遊離、細胞内ｃＡ
ＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産
生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆ
ｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑
制する活性など）を公知の方法または市販の測定用キッ
トを用いて測定することができる。具体的には、まず、
本発明のレセプター蛋白質等を含有する細胞をマルチウ
ェルプレート等に培養する。スクリーニングを行なうに
あたっては前もって新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示
さない適当なバッファーに交換し、試験化合物などを添
加して一定時間インキュベートした後、細胞を抽出ある
いは上清液を回収して、生成した産物をそれぞれの方法
に従って定量する。細胞刺激活性の指標とする物質（例
えば、アラキドン酸など）の生成が、細胞が含有する分
解酵素によって検定困難な場合は、該分解酵素に対する
阻害剤を添加してアッセイを行なってもよい。また、ｃ
ＡＭＰ産生抑制などの活性については、フォルスコリン
などで細胞の基礎的産生量を増大させておいた細胞に対
する産生抑制作用として検出することができる。細胞刺
激活性を測定してスクリーニングを行なうには、適当な
レセプター蛋白質を発現した細胞が必要である。本発明
のレセプター蛋白質等を発現した細胞としては、天然型
の本発明のレセプター蛋白質等を有する細胞株、上記の
組換え型レセプター蛋白質等を発現した細胞株などが望
ましい。試験化合物としては、例えば、ペプチド、蛋
白、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細
胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが用いら
れ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公
知の化合物であってもよい。

【００８０】リガンドと本発明のレセプター蛋白質等と
の結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニ
ング用キットは、本発明のレセプター蛋白質等、本発明
のレセプター蛋白質等を含有する細胞、または本発明の
レセプター蛋白質等を含有する細胞の膜画分を含有する
ものなどである。本発明のスクリーニング用キットの例
としては、次のものが挙げられる。 １．スクリーニング用試薬 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、０.
０５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたも
の。孔径０.４５μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃
で保存するか、あるいは用時調製しても良い。 Ｇ蛋白質共役型レセプター標品 本発明のレセプター蛋白質を発現させたＣＨＯ細胞を、
１２穴プレートに５×１０⁵個／穴で継代し、３７℃、
５％ＣＯ₂、９５％ａｉｒで２日間培養したもの。 標識リガンド 市販の〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで
標識したリガンド水溶液の状態のものを４℃あるいは−
２０℃にて保存し、用時に測定用緩衝液にて１μＭに希
釈する。 リガンド標準液 リガンドを０.１％ウシ血清アルブミン（シグマ社製）
を含むＰＢＳで１ｍＭとなるように溶解し、−２０℃で
保存する。

【００８１】２．測定法 １２穴組織培養用プレートにて培養した本発明のレセ
プター蛋白質発現ＣＨＯ細胞を、測定用緩衝液１ｍｌで
２回洗浄した後、４９０μｌの測定用緩衝液を各穴に加
える。 １０^-3〜１０^-10Ｍの試験化合物溶液を５μｌ加えた
後、標識リガンドを５μｌ加え、室温にて１時間反応さ
せる。非特異的結合量を知るためには試験化合物の代わ
りに１０^-3Ｍのリガンドを５μｌ加えておく。 反応液を除去し、１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄す
る。細胞に結合した標識リガンドを０.２Ｎ ＮａＯＨ
−１％ＳＤＳで溶解し、４ｍｌの液体シンチレーターＡ
（和光純薬製）と混合する。 液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）
を用いて放射活性を測定し、Percent Maximum Binding
（ＰＭＢ）を次の式で求める。 ＰＭＢ＝［（Ｂ−ＮＳＢ）／（Ｂ₀−ＮＳＢ）］×１０
０ ＰＭＢ：Percent Maximum Binding Ｂ ：検体を加えた時の値 ＮＳＢ：Non-specific Binding（非特異的結合量） Ｂ₀ ：最大結合量

【００８２】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、リガンドと本発明のレセプター蛋白質等との結合性
を変化させる作用を有する化合物であり、具体的には、
（イ）Ｇ蛋白質共役型レセプターを介して細胞刺激活性
（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細
胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ
生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞
内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下
などを促進する活性または抑制する活性など）を有する
化合物（いわゆる、本発明のレセプター蛋白質に対する
アゴニスト）、（ロ）該細胞刺激活性を有しない化合物
（いわゆる、本発明のレセプター蛋白質に対するアンタ
ゴニスト）、（ハ）リガンドと本発明のＧ蛋白質共役型
レセプター蛋白質との結合力を増強する化合物、あるい
は（ニ）リガンドと本発明のＧ蛋白質共役型レセプター
蛋白質との結合力を減少させる化合物である。該化合物
としては、ペプチド、蛋白、非ペプチド性化合物、合成
化合物、発酵生産物などが挙げられ、これら化合物は新
規な化合物であってもよいし、公知の化合物であっても
よい。本発明のレセプター蛋白質等に対するアゴニスト
は、本発明のレセプター蛋白質等に対するリガンドが有
する生理活性と同様の作用を有しているので、該リガン
ド活性に応じて安全で低毒性な医薬として有用である。
本発明のレセプター蛋白質等に対するアンタゴニスト
は、本発明のレセプター蛋白質等に対するリガンドが有
する生理活性を抑制することができるので、該リガンド
活性を抑制する安全で低毒性な医薬として有用である。
リガンドと本発明のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質と
の結合力を増強する化合物は、本発明のレセプター蛋白
質等に対するリガンドが有する生理活性を増強するため
の安全で低毒性な医薬として有用である。リガンドと本
発明のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質との結合力を減
少させる化合物は、本発明のレセプター蛋白質等に対す
るリガンドが有する生理活性を減少させるための安全で
低毒性な医薬として有用である。

【００８３】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
を上記の医薬組成物として使用する場合、常套手段に従
って実施することができる。例えば、上記した本発明の
レセプター蛋白質を含有する医薬と同様にして、錠剤、
カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌
性溶液、懸濁液剤などとすることができる。このように
して得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、
ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒ
ツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投
与することができる。該化合物またはその塩の投与量
は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差
異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、癌患者
（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０.１〜
１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ま
しくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する
場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、
投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形
では通常例えば、癌患者（６０ｋｇとして）において
は、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは
約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１
０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合であ
る。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を
投与することができる。

【００８４】（８）本発明のＧ蛋白質共役型レセプター
蛋白質とリガンドとの結合性を変化させる化合物（アゴ
ニスト、アンタゴニスト）を含有する各種疾病の予防お
よび／または治療剤 本発明のレセプター蛋白質は上記のとおり、例えば中枢
機能、循環機能、消化機能など生体内で何らかの重要な
役割を果たしていると考えられる。従って、本発明のレ
セプター蛋白質とリガンドとの結合性を変化させる化合
物（アゴニスト、アンタゴニスト）や本発明のレセプタ
ー蛋白質に対するリガンドは、本発明のレセプター蛋白
質の機能不全に関連する疾患の予防および／または治療
剤として用いることができる。該化合物やリガンドを本
発明のレセプター蛋白質の機能不全に関連する疾患の予
防および／または治療剤として使用する場合は、常套手
段に従って製剤化することができる。例えば、該化合物
やリガンドは、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセ
ル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経
口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し
得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の
形で非経口的に使用できる。例えば、該化合物を生理学
的に認められる公知の担体、香味剤、賦形剤、ベヒク
ル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認めら
れた製剤実施に要求される単位用量形態で混和すること
によって製造することができる。これら製剤における有
効成分量は指示された範囲の適当な用量が得られるよう
にするものである。

【００８５】錠剤、カプセル剤などに混和することがで
きる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアル
コール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート
８０^TM、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液
としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶
解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール
などと併用してもよい。

【００８６】また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝
剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝
液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸
プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、
ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤な
どと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当な
アンプルに充填される。さらに、上記予防・治療剤は適
当な薬剤と組み合わせて例えば本発明のレセプター蛋白
質が高発現している臓器や組織を特異的なターゲットと
したＤＤＳ製剤として使用することもできる。このよう
にして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例え
ば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサ
ギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対
して投与することができる。該化合物またはその塩の投
与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによ
り差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、癌
患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０.
１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より
好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与
する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症
状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤
の形では通常例えば、癌患者（６０ｋｇとして）におい
ては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましく
は約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜
１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合であ
る。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を
投与することができる。

【００８７】（９）本発明のレセプター蛋白質もしくは
その部分ペプチドまたはその塩の定量 本発明の抗体は、本発明のレセプター蛋白質等を特異的
に認識することができるので、被検液中の本発明のレセ
プター蛋白質等の定量、特にサンドイッチ免疫測定法に
よる定量などに使用することができる。すなわち、本発
明は、例えば、（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標
識化レセプター蛋白質等とを競合的に反応させ、該抗体
に結合した標識化レセプター蛋白質等の割合を測定する
ことを特徴とする被検液中の本発明のレセプター蛋白質
等の定量法、（ii）被検液と担体上に不溶化した本発明
の抗体および標識化された本発明の抗体とを同時あるい
は連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の活
性を測定することを特徴とする被検液中の本発明のレセ
プター蛋白質等の定量法を提供する。上記（ii）におい
ては、一方の抗体が本発明のレセプター蛋白質等のＮ端
部を認識する抗体で、他方の抗体が本発明のレセプター
蛋白質等のＣ端部に反応する抗体であることが好まし
い。

【００８８】本発明のレセプター蛋白質等に対するモノ
クローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗体と
称する場合がある）を用いて本発明のレセプター蛋白質
等の測定を行なえるほか、組織染色等による検出を行な
うこともできる。これらの目的には、抗体分子そのもの
を用いてもよく、また、抗体分子のＦ(ａｂ')₂ 、Ｆａ
ｂ'、あるいはＦａｂ画分を用いてもよい。本発明のレ
セプター蛋白質等に対する抗体を用いる測定法は、特に
制限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量（例
えば、レセプター蛋白質量）に対応した抗体、抗原もし
くは抗体−抗原複合体の量を化学的または物理的手段に
より検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて
作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれ
の測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競
合法、イムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適
に用いられるが、感度、特異性の点で、後に記載するサ
ンドイッチ法を用いるのが特に好ましい。標識物質を用
いる測定法に用いられる標識剤としては、例えば、放射
性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などが用いられ
る。放射性同位元素としては、例えば、〔¹²⁵Ｉ〕、〔
¹³¹Ｉ〕、〔³Ｈ〕、〔¹⁴Ｃ〕などが用いられる。上記酵
素としては、安定で比活性の大きなものが好ましく、例
えば、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、ア
ルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸
脱水素酵素などが用いられる。蛍光物質としては、例え
ば、フルオレスカミン、フルオレッセンイソチオシアネ
ートなどが用いられる。発光物質としては、例えば、ル
ミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニ
ンなどが用いられる。さらに、抗体あるいは抗原と標識
剤との結合にビオチン−アビジン系を用いることもでき
る。

【００８９】抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物
理吸着を用いてもよく、また通常、蛋白質あるいは酵素
等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用い
る方法でもよい。担体としては、例えば、アガロース、
デキストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリス
チレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、
あるいはガラス等が用いられる。サンドイッチ法におい
ては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を
反応させ（１次反応）、さらに標識化した本発明のモノ
クローナル抗体を反応させ（２次反応）た後、不溶化担
体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中の本
発明のレセプター蛋白質量を定量することができる。１
次反応と２次反応は逆の順序に行なっても、また、同時
に行なってもよいし時間をずらして行なってもよい。標
識化剤および不溶化の方法は上記のそれらに準じること
ができる。また、サンドイッチ法による免疫測定法にお
いて、固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体
は必ずしも１種類である必要はなく、測定感度を向上さ
せる等の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよ
い。本発明のサンドイッチ法によるレセプター蛋白質等
の測定法においては、１次反応と２次反応に用いられる
本発明のモノクローナル抗体はレセプター蛋白質等の結
合する部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すな
わち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例
えば、２次反応で用いられる抗体が、レセプター蛋白質
のＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体
は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗
体が用いられる。

【００９０】本発明のモノクローナル抗体をサンドイッ
チ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメト
リック法あるいはネフロメトリーなどに用いることがで
きる。競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体
に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原と
(Ｆ）と抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（Ｂ
／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被検液
中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として可溶
性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコール、
上記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、およ
び、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるいは、
第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相化抗
体を用いる固相化法とが用いられる。イムノメトリック
法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識
化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離する
か、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体と
を反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体
を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。次
に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を
定量する。また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるいは
溶液中で抗原抗体反応の結果、生じた不溶性の沈降物の
量を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の
沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用す
るレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。

【００９１】これら個々の免疫学的測定法を本発明の測
定方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の
設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の
条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発
明のレセプター蛋白質またはその塩の測定系を構築すれ
ばよい。これらの一般的な技術手段の詳細については、
総説、成書などを参照することができる〔例えば、入江
寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和４９年
発行）、入江 寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談
社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定
法」（医学書院、昭和５３年発行）、石川栄治ら編「酵
素免疫測定法」（第２版）（医学書院、昭和５７年発
行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第３版）（医
学書院、昭和６２年発行）、「メソッズ・イン・エンジ
モノジー（Methods in ENZYMOLOGY）」Vol. 70(Immunoch
emical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunoch
emical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunoch
emical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunoch
emical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Mon
oclonal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodie
s))(以上、アカデミックプレス社発行)など参照〕。以
上のように、本発明の抗体を用いることによって、本発
明のレセプター蛋白質またはその塩を感度良く定量する
ことができる。さらに、本発明の抗体を用いて、生体内
での本発明のレセプター蛋白質またその塩を定量するこ
とによって、本発明のレセプター蛋白質の機能不全に関
連する各種疾患の診断をすることができる。また、本発
明の抗体は、体液や組織などの被検体中に存在する本発
明のレセプター蛋白質等を特異的に検出するために使用
することができる。また、本発明のレセプター蛋白質等
を精製するために使用する抗体カラムの作製、精製時の
各分画中の本発明のレセプター蛋白質等の検出、被検細
胞内における本発明のレセプター蛋白質の挙動の分析な
どのために使用することができる。

【００９２】（１０）細胞膜における本発明のレセプタ
ー蛋白質またはその部分ペプチドの量を変化させる化合
物のスクリーニング方法 本発明の抗体は、本発明のレセプター蛋白質もしくはそ
の部分ペプチドまたはその塩を特異的に認識することが
できるので、細胞膜における本発明のレセプター蛋白質
またはその部分ペプチドの量を変化させる化合物のスク
リーニングに用いることができる。すなわち本発明は、
例えば、（ｉ）非ヒト哺乳動物の血液、特定の臓
器、臓器から単離した組織もしくは細胞等を破壊した
後、細胞膜画分を単離し、細胞膜画分に含まれる本発明
のレセプター蛋白質またはその部分ペプチドを定量する
ことによる、細胞膜における本発明のレセプター蛋白質
またはその部分ペプチドの量を変化させる化合物のスク
リーニング方法、（ii）本発明のレセプター蛋白質もし
くはその部分ペプチドを発現する形質転換体等を破壊し
た後、細胞膜画分を単離し、細胞膜画分に含まれる本発
明のレセプター蛋白質またはその部分ペプチドを定量す
ることによる、細胞膜における本発明のレセプター蛋白
質またはその部分ペプチドの量を変化させる化合物のス
クリーニング方法、（iii）非ヒト哺乳動物の血液、
特定の臓器、臓器から単離した組織もしくは細胞等
を切片とした後、免疫染色法を用いることにより、細胞
表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化すること
により、細胞膜上の該蛋白質を確認することによる、細
胞膜における本発明のレセプター蛋白質またはその部分
ペプチドの量を変化させる化合物のスクリーニング方法
を提供する。（iv）本発明のレセプター蛋白質もしくは
その部分ペプチドを発現する形質転換体等を切片とした
後、免疫染色法を用いることにより、細胞表層での該受
容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞
膜上の該蛋白質を確認することによる、細胞膜における
本発明のレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの量
を変化させる化合物のスクリーニング方法を提供する。

【００９３】細胞膜画分に含まれる本発明のレセプター
蛋白質またはその部分ペプチドの定量は具体的には以下
のようにして行なう。 （ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例え
ば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど、より具体的には痴呆ラット、肥満
マウス、動脈硬化ウサギ、担癌マウスなど）に対して、
薬剤（例えば、抗痴呆薬、血圧低下薬、抗癌剤、抗肥満
薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレ
ス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定
時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例え
ば、脳、肝臓、腎臓、脾臓、精巣など）、または臓器か
ら単離した組織、あるいは細胞を得る。得られた臓器、
組織または細胞等を、例えば、適当な緩衝液（例えば、
トリス塩酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヘペス緩衝液など）
等に懸濁し、臓器、組織あるいは細胞を破壊し、界面活
性剤（例えば、トリトンＸ１００^TM、ツイーン２０^TMな
ど）などを用い、さらに遠心分離や濾過、カラム分画な
どの手法を用いて細胞膜画分を得る。

【００９４】細胞膜画分としては、細胞を破砕した後、
それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画
分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Potter−El
vehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリ
ングブレンダーやポリトロン（Kinematica社製）のよる
破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧し
ながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕
などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法
や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主と
して用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（５００ｒ
ｐｍ〜３０００ｒｐｍ）で短時間（通常、約１分〜１０
分）遠心し、上清をさらに高速（１５０００ｒｐｍ〜３
００００ｒｐｍ）で通常３０分〜２時間遠心し、得られ
る沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現したレセ
プター蛋白質等と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの
膜成分が多く含まれる。

【００９５】細胞膜画分に含まれる本発明のレセプター
蛋白質またはその部分ペプチドは、例えば、本発明の抗
体を用いたサンドイッチ免疫測定法、ウエスタンブロッ
ト解析などにより定量することができる。かかるサンド
イッチ免疫測定法は上記の方法と同様にして行なうこと
ができ、ウエスタンブロットは自体公知の手段により行
なうことができる。

【００９６】（ii）本発明のレセプター蛋白質もしくは
その部分ペプチドを発現する形質転換体を上記の方法に
従い作製し、細胞膜画分に含まれる本発明のレセプター
蛋白質またはその部分ペプチドを定量することができ
る。

【００９７】細胞膜における本発明のレセプター蛋白質
またはその部分ペプチドの量を変化させる化合物のスク
リーニングは、 （ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対し
て、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一定時間
前（３０分前〜２４時間前、好ましくは３０分前〜１２
時間前、より好ましくは１時間前〜６時間前）もしくは
一定時間後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜
２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、また
は薬剤あるいは物理的ストレスと同時に被検化合物を投
与し、投与後一定時間経過後（３０分後〜３日後、好ま
しくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２
４時間後）、細胞膜における本発明のレセプター蛋白質
またはその部分ペプチドの量を定量することにより行な
うことができ、 （ii）形質転換体を常法に従い培養する際に被検化合物
を培地中に混合させ、一定時間培養後（１日後〜７日
後、好ましくは１日後〜３日後、より好ましくは２日後
〜３日後）、細胞膜における本発明のレセプター蛋白質
またはその部分ペプチドの量を定量することにより行な
うことができる。

【００９８】細胞膜画分に含まれる本発明のレセプター
蛋白質またはその部分ペプチドの確認は具体的には以下
のようにして行なう。 （iii）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例え
ば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど、より具体的には痴呆ラット、肥満
マウス、動脈硬化ウサギ、担癌マウスなど）に対して、
薬剤（例えば、抗痴呆薬、血圧低下薬、抗癌剤、抗肥満
薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレ
ス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定
時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例え
ば、脳、肝臓、腎臓、心臓、膵臓、脾臓、精巣など）、
または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。得
られた臓器、組織または細胞等を、常法に従い組織切片
とし、本発明の抗体を用いて免疫染色を行う。細胞表層
での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することによ
り、細胞膜上の該蛋白質を確認することにより、定量的
または定性的に、細胞膜における本発明のレセプター蛋
白質またはその部分ペプチドの量を確認することができ
る。 （iv）本発明のレセプター蛋白質もしくはその部分ペプ
チドを発現する形質転換体等を用いて同様の手段をとる
ことにより確認することもできる。

【００９９】本発明のスクリーニング方法を用いて得ら
れる化合物またはその塩は、細胞膜における本発明のレ
セプター蛋白質またはその部分ペプチドの量を変化させ
る作用を有する化合物であり、具体的には、（イ）細胞
膜における本発明のレセプター蛋白質またはその部分ペ
プチドの量を増加させることにより、Ｇ蛋白質共役型レ
セプターを介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸
遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内
ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン
酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ
−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性また
は抑制する活性など）を増強させる化合物、（ロ）細胞
膜における本発明のレセプター蛋白質またはその部分ペ
プチドの量を減少させることにより、該細胞刺激活性を
減弱させる化合物である。該化合物としては、ペプチ
ド、蛋白、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産
物などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であっ
てもよいし、公知の化合物であってもよい。該細胞刺激
活性を増強させる化合物は、本発明のレセプター蛋白質
等の生理活性を増強するための安全で低毒性な医薬とし
て有用である。該細胞刺激活性を減弱させる化合物は、
本発明のレセプター蛋白質等の生理活性を減少させるた
めの安全で低毒性な医薬として有用である。

【０１００】本発明のスクリーニング方法を用いて得ら
れる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場
合、常套手段に従って実施することができる。例えば、
上記した本発明のレセプター蛋白質を含有する医薬と同
様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロ
カプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などとすることがで
きる。このようにして得られる製剤は安全で低毒性であ
るので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マ
ウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サル
など）に対して投与することができる。該化合物または
その塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方
法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に
例えば、癌患者（６０ｋｇとして）においては、一日に
つき約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０
ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経
口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対
象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例え
ば、注射剤の形では通常例えば、癌患者（６０ｋｇとし
て）においては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程
度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましく
は約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するの
が好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに
換算した量を投与することができる。

【０１０１】（１１）細胞膜における本発明のレセプタ
ー蛋白質またはその部分ペプチドの量を変化させる化合
物を含有する各種疾病の予防および／または治療剤 本発明のレセプター蛋白質は上記のとおり、例えば、中
枢機能など生体内で何らかの重要な役割を果たしている
と考えられる。したがって、細胞膜における本発明のレ
セプター蛋白質またはその部分ペプチドの量を変化させ
る化合物は、本発明のレセプター蛋白質の機能不全に関
連する疾患の予防および／または治療剤として用いるこ
とができる。該化合物を本発明のレセプター蛋白質の機
能不全に関連する疾患の予防および／または治療剤とし
て使用する場合は、常套手段に従って製剤化することが
できる。例えば、該化合物は、必要に応じて糖衣を施し
た錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル
剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の
薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤
などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、該
化合物を生理学的に認められる公知の担体、香味剤、賦
形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに
一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で
混和することによって製造することができる。これら製
剤における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が
得られるようにするものである。

【０１０２】錠剤、カプセル剤などに混和することがで
きる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアル
コール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート
８０^TM、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液
としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶
解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール
などと併用してもよい。

【０１０３】また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝
剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝
液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸
プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、
ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤な
どと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当な
アンプルに充填される。このようにして得られる製剤は
安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例
えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、
ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができ
る。該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象
臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投
与の場合、一般的に例えば、癌患者（６０ｋｇとして）
においては、一日につき約０.１〜１００ｍｇ、好まし
くは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２
０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投
与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっ
ても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、癌
患者（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．
０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程
度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射
により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、
６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。

【０１０４】（１２）本発明のレセプター蛋白質、その
部分ペプチドまたはそれらの塩に対する抗体による中和 本発明のレセプター蛋白質もしくはその部分ペプチドま
たはその塩に対する抗体の、それらレセプター蛋白質な
どに対する中和活性とは、すなわち、該レセプター蛋白
質の関与するシグナル伝達機能を不活性化する活性を意
味する。従って、該抗体が中和活性を有する場合は、該
レセプター蛋白質の関与するシグナル伝達、例えば、該
レセプター蛋白質を介する細胞刺激活性（例えば、アラ
キドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊
離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシ
トールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリ
ン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進す
る活性または抑制する活性など）を不活性化することが
できる。したがって、該レセプター蛋白質の過剰発現な
どに起因する疾患の予防および／または治療に用いるこ
とができる。

【０１０５】（１３）本発明のＧ蛋白質共役型レセプタ
ー蛋白質をコードするＤＮＡを有する動物の作製 本発明のＤＮＡを用いて、本発明のレセプター蛋白質等
を発現するトランスジェニック動物を作製することがで
きる。動物としては、哺乳動物（例えば、ラット、マウ
ス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルな
ど）など（以下、動物と略記する場合がある）が挙げら
れるが、特に、マウス、ウサギなどが好適である。本発
明のＤＮＡを対象動物に転移させるにあたっては、該Ｄ
ＮＡを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結
合した遺伝子コンストラクトとして用いるのが一般に有
利である。例えば、ウサギ由来の本発明のＤＮＡを転移
させる場合、これと相同性が高い動物由来の本発明のＤ
ＮＡを動物細胞で発現させうる各種プロモーターの下流
に結合した遺伝子コンストラクトを、例えば、ウサギ受
精卵へマイクロインジェクションすることによって本発
明のレセプター蛋白質等を高産生するＤＮＡ転移動物を
作出できる。このプロモーターとしては、例えば、ウイ
ルス由来プロモーター、メタロチオネイン等のユビキア
スな発現プロモーターも使用しうるが、好ましくは脳で
特異的に発現するＮＧＦ遺伝子プロモーターやエノラー
ゼ遺伝子プロモーターなどが用いられる。

【０１０６】受精卵細胞段階における本発明のＤＮＡの
転移は、対象動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在
するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽
細胞において本発明のレセプター蛋白質等が存在するこ
とは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞
の全てに本発明のレセプター蛋白質等を有することを意
味する。遺伝子を受け継いだこの種の動物の子孫はその
胚芽細胞および体細胞の全てに本発明のレセプター蛋白
質等を有する。本発明のＤＮＡ転移動物は、交配により
遺伝子を安定に保持することを確認して、該ＤＮＡ保有
動物として通常の飼育環境で飼育継代を行うことができ
る。さらに、目的ＤＮＡを保有する雌雄の動物を交配す
ることにより、導入遺伝子を相同染色体の両方に持つホ
モザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配する
ことによりすべての子孫が該ＤＮＡを有するように繁殖
継代することができる。本発明のＤＮＡが転移された動
物は、本発明のレセプター蛋白質等が高発現させられて
いるので、本発明のレセプター蛋白質等に対するアゴニ
ストまたはアンタゴニストのスクリーニング用の動物な
どとして有用である。本発明のＤＮＡ転移動物を、組織
培養のための細胞源として使用することもできる。例え
ば、本発明のＤＮＡ転移マウスの組織中のＤＮＡもしく
はＲＮＡを直接分析するか、あるいは遺伝子により発現
された本発明のレセプター蛋白質が存在する組織を分析
することにより、本発明のレセプター蛋白質等について
分析することができる。本発明のレセプター蛋白質等を
有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、こ
れらを使用して、例えば、脳や末梢組織由来のような一
般に培養困難な組織からの細胞の機能を研究することが
できる。また、その細胞を用いることにより、例えば、
各種組織の機能を高めるような医薬の選択も可能であ
る。また、高発現細胞株があれば、そこから、本発明の
レセプター蛋白質等を単離精製することも可能である。

【０１０７】本明細書および図面において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ
Commission on Biochemical Nomenclature による略号
あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであ
り、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体
があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すもの
とする。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム

【０１０８】 Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸 ＊ ：終止コドンに対応する Ｍｅ ：メチル基 Ｅｔ ：エチル基 Ｂｕ ：ブチル基 Ｐｈ ：フェニル基 ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキ
サミド基

【０１０９】また、本明細書中で繁用される置換基、保
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Ｃl₂Ｂzl ：２，６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニ
ル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニ
ル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェノール Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカル
ボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ
−４−オキソ−１,２,３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：1-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-
ジカルボキシイミド ＤＣＣ ：Ｎ,Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボ
ジイミド

【０１１０】本明細書の配列表の配列番号は、以下の配
列を示す。 配列番号：１ 本発明のヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質
ｈＴＧＲ１１のアミノ酸配列を示す。第１６番目および
第１６０番目のXaaはそれぞれSerまたはGlyを示す。 配列番号：２ 配列番号：１で示されるヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質ｈＴＧＲ１１をコードするｃＤＮＡの塩
基配列を示す。第４６番目、第４７８番目および第９１
５番目のRはAまたはGを示す。 配列番号：３ 本発明のヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質
ｈＴＧＲ１１のアミノ酸配列を示す。第１６番目のアミ
ノ酸残基はSer、第１６０番目のアミノ酸残基はSerであ
る。 配列番号：４ 本発明のヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質
ｈＴＧＲ１１のアミノ酸配列を示す。第１６番目のアミ
ノ酸残基はGly、第１６０番目のアミノ酸残基はGlyであ
る。 配列番号：５ 本発明のヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質
ｈＴＧＲ１１のアミノ酸配列を示す。第１６番目のアミ
ノ酸残基はSer、第１６０番目のアミノ酸残基はGlyであ
る。 配列番号：６ 本発明のヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質
ｈＴＧＲ１１のアミノ酸配列を示す。第１６番目のアミ
ノ酸残基はGly、第１６０番目のアミノ酸残基はSerであ
る。 配列番号：７ 配列番号：３で示されるヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質ｈＴＧＲ１１をコードするｃＤＮＡの塩
基配列を示す。第４６番目の塩基はA、第４７８番目の
塩基はA、第９１５番目の塩基はGである。 配列番号：８ 配列番号：３で示されるヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質ｈＴＧＲ１１をコードするｃＤＮＡの塩
基配列を示す。第４６番目の塩基はA、第４７８番目の
塩基はA、第９１５番目の塩基はAである。 配列番号：９ 配列番号：５で示されるヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質ｈＴＧＲ１１をコードするｃＤＮＡの塩
基配列を示す。第４６番目の塩基はA、第４７８番目の
塩基はG、第９１５番目の塩基はGである。 配列番号：１０ 配列番号：５で示されるヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質ｈＴＧＲ１１をコードするｃＤＮＡの塩
基配列を示す。第４６番目の塩基はA、第４７８番目の
塩基はG、第９１５番目の塩基はAである。 配列番号：１１ 配列番号：４で示されるヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質ｈＴＧＲ１１をコードするｃＤＮＡの塩
基配列を示す。第４６番目の塩基はG、第４７８番目の
塩基はG、第９１５番目の塩基はGである。 配列番号：１２ 配列番号：４で示されるヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質ｈＴＧＲ１１をコードするｃＤＮＡの塩
基配列を示す。第４６番目の塩基はG、第４７８番目の
塩基はG、第９１５番目の塩基はAである。 配列番号：１３ 配列番号：６で示されるヒト由来新規Ｇ蛋白質共役型レ
セプター蛋白質ｈＴＧＲ１１をコードするｃＤＮＡの塩
基配列を示す。第４６番目の塩基はG、第４７８番目の
塩基はA、第９１５番目の塩基はAである。 配列番号：１４ 以下の実施例１におけるＰＣＲ反応で使用したプライマ
ー１の塩基配列を示す。 配列番号：１５ 以下の実施例１におけるＰＣＲ反応で使用したプライマ
ー２の塩基配列を示す。 配列番号：１６ 以下の実施例２におけるＰＣＲ反応で使用したプライマ
ー１の塩基配列を示す。 配列番号：１７ 以下の実施例２におけるＰＣＲ反応で使用したプライマ
ー２の塩基配列を示す。 配列番号：１８ 以下の実施例２におけるＰＣＲ反応で使用したプローブ
の塩基配列を示す。

【０１１１】以下の実施例１で得られた形質転換体、大
腸菌（Escherichia coli）TOP10/pCR2.1-hTGR11aaは、
２００１年（平成１３年）３月５日から茨城県つくば市
東１丁目１番３号（郵便番号３０５−８５６６）の経済
産業省産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所（Ｎ
ＩＢＨ）に寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７４８３として、
２００１年（平成１３年）２月２０日から大阪府大阪市
淀川区十三本町２−１７−８５（郵便番号５３２−８６
８６）の財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号Ｉ
ＦＯ １６５７０として寄託されている。以下の実施例
１で得られた形質転換体、大腸菌（Escherichia coli）
TOP10/pCR2.1-hTGR11ggは、２００１年（平成１３年）
３月５日からＮＩＢＨに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７４
８４として、２００１年（平成１３年）２月２０日から
ＩＦＯに寄託番号ＩＦＯ １６５７１として寄託されて
いる。

【０１１２】

【実施例】以下に実施例を示して、本発明をより詳細に
説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものでは
ない。なお、大腸菌を用いての遺伝子は、モレキュラー
・クローニング(Molecular cloning)に記載されている
方法に従った。 実施例１ ヒト脾臓のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質
をコードするcDNAのクローニングと塩基配列の決定 ヒト脾臓cDNA（CLONTECH社）を鋳型とし、２個のプライ
マー、プライマー１（配列番号：１４）およびプライマ
ー２（配列番号：１５）を用いてPCR反応を行った。該
反応における反応液の組成は上記cDNAを１／１０量鋳型
として使用し、Advantage-GC2 Polymerase Mix （CLONT
ECH社）１／５０量、プライマー１（配列番号：１４）
およびプライマー２（配列番号：１５）を各０.５μM、
dNTPs２００μM、および酵素に添付のバッファーを１／
５量、GC Meltを１／５量加え、２０μlの液量とした。
PCR反応は、９４℃・５分の後、９４℃・３０秒、６０
℃・３０秒、６８℃・２分のサイクルを３５回繰り返
し、最後に６８℃・５分の伸長反応を行った。該PCR反
応産物をＴＡクローニングキット（Invitrogen社）の処
方に従いプラスミドベクターpCR2.1（Invitrogen社）へ
サブクローニングした。これを大腸菌TOP10に導入し、c
DNAを持つクローンをアンピシリンを含むLB寒天培地中
で選択した。個々のクローンの配列を解析した結果、新
規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質をコードするcDNA配
列（配列番号：２）を得た。また、この配列では４６番
目、４７８番目、９１５番目の塩基がＡまたはＧの２通
り認められた。これらのアミノ酸配列（配列番号：1）
を含有する新規Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質をhTGR
11と命名した（４６番目と４７８番目の塩基がＡからＧ
に替わると１６番目と１６０番目のアミノ酸がSerからG
lyに替わる。９１５番目の塩基がＡからＧに替わっても
アミノ酸は不変。）。また、cDNA配列（配列番号：７）
を有する形質転換体を大腸菌（Escherichia coli）TOP1
0/pCR2.1-hTGR11aa、cDNA配列（配列番号：１１）を有
する形質転換体を大腸菌（Escherichia coli）TOP10/pC
R2.1-hTGR11ggと命名した。ｈＴＧＲ１１の疎水性プロ
ット図を図１に示す。

【０１１３】実施例２ ｈＴＧＲ１１のヒト組織におけ
る発現分布解析 ｈＴＧＲ１１のヒト組織における発現分布解析はTaqMan
PCR法を用いることにより調べた。鋳型としては、Huma
n Multiple Tissue cDNA Panel（クロンテック社）を用
い、PCR用プライマーとしてプライマー１（配列番号：
１６）及びプライマー２（配列番号：１７）を、また配
列番号：１８を有するプローブを使用してTaqMan PCRを
行った。該反応における反応液組成は、TaqMan Univers
al PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズジャ
パン）を12.5μｌ、10μＭ のプライマー１とプライマ
ー２を各0.5μｌ、5μＭのプローブを1μｌ、鋳型を2μ
ｌ、蒸留水を8.5μｌの合計25μｌであり、ＰＣＲ反応
は、50℃・２分、95℃・10分保持した後、95℃・15秒、
60℃・1分のサイクルを40回繰り返した。得られた結果
を基にcDNA 1μｌ当たりのコピー数として算出した結果
を図２に示す。これよりｈＴＧＲ１１の発現量は、卵巣
・胎盤・精巣で高く発現していることがわかった。

【０１１４】

【発明の効果】本発明のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白
質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、該レセプタ
ー蛋白質またはその部分ペプチドをコードするポリヌク
レオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびそれらの誘導
体）は、リガンド（アゴニスト）の決定、抗体およ
び抗血清の入手、組換え型レセプター蛋白質の発現系
の構築、同発現系を用いたレセプター結合アッセイ系
の開発と医薬品候補化合物のスクリーニング、構造的
に類似したリガンド・レセプターとの比較にもとづいた
ドラッグデザインの実施、遺伝子診断におけるプロー
ブやＰＣＲプライマーの作成のための試薬、トランス
ジェニック動物の作製または遺伝子予防・治療剤等の
医薬等として用いることができる。

【０１１５】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Takeda Chemical Industries, Ltd. <120> Novel G Protein-Coupled Receptor Protein and its DNA <130> B01259 <150> JP 2000-203109 <151> 2000-06-30 <150> JP 2001-107568 <151> 2001-04-05 <160> 18 <210> 1 <211> 312 <212> PRT <213> Human <220> <223> Xaa of the 16^th and 160^th position means Ser or Gly respectively. <400> 1 Met Met Glu Pro Arg Glu Ala Gly Gln His Val Gly Ala Ala Asn Xaa 5 10 15 Ala Gln Glu Asp Val Ala Phe Asn Leu Ile Ile Leu Ser Leu Thr Glu 20 25 30 Gly Leu Gly Leu Gly Gly Leu Leu Gly Asn Gly Ala Val Leu Trp Leu 35 40 45 Leu Ser Ser Asn Val Tyr Arg Asn Pro Phe Ala Ile Tyr Leu Leu Asp 50 55 60 Val Ala Cys Ala Asp Leu Ile Phe Leu Gly Cys His Met Val Ala Ile 65 70 75 80 Val Pro Asp Leu Leu Gln Gly Arg Leu Asp Phe Pro Gly Phe Val Gln 85 90 95 Thr Ser Leu Ala Thr Leu Arg Phe Phe Cys Tyr Ile Val Gly Leu Ser 100 105 110 Leu Leu Ala Ala Val Ser Val Glu Gln Cys Leu Ala Ala Leu Phe Pro 115 120 125 Ala Trp Tyr Ser Cys Arg Arg Pro Arg His Leu Thr Thr Cys Val Cys 130 135 140 Ala Leu Thr Trp Ala Leu Cys Leu Leu Leu His Leu Leu Leu Ser Xaa 145 150 155 160 Ala Cys Thr Gln Phe Phe Gly Glu Pro Ser Arg His Leu Cys Arg Thr 165 170 175 Leu Trp Leu Val Ala Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Cys Cys Thr Met 180 185 190 Cys Gly Ala Ser Leu Met Leu Leu Leu Arg Val Glu Arg Gly Pro Gln 195 200 205 Arg Pro Pro Pro Arg Gly Phe Pro Gly Leu Ile Leu Leu Thr Val Leu 210 215 220 Leu Phe Leu Phe Cys Gly Leu Pro Phe Gly Ile Tyr Trp Leu Ser Arg 225 230 235 240 Asn Leu Leu Trp Tyr Ile Pro His Tyr Phe Tyr His Phe Ser Phe Leu 245 250 255 Met Ala Ala Val His Cys Ala Ala Lys Pro Val Val Tyr Phe Cys Leu 260 265 270 Gly Ser Ala Gln Gly Arg Arg Leu Pro Leu Arg Leu Val Leu Gln Arg 275 280 285 Ala Leu Gly Asp Glu Ala Glu Leu Gly Ala Val Arg Glu Thr Ser Arg 290 295 300 Arg Gly Leu Val Asp Ile Ala Ala 305 310 <210> 2 <211> 939 <212> DNA <213> Human <400> 2 atgatggagc ccagagaagc tggacagcac gtgggggccg ccaacrgcgc ccaggaggat 60 gtggccttca acctcatcat cctgtccctc accgaggggc tcggcctcgg tgggctgctg 120 gggaatgggg cagtcctctg gctgctcagc tccaatgtct acagaaaccc cttcgccatc 180 tacctcctgg acgtggcctg cgcggatctc atcttccttg gctgccacat ggtggccatc 240 gtccccgact tgctgcaagg ccggctggac ttcccgggct tcgtgcagac cagcctggca 300 acgctgcgct tcttctgcta catcgtgggc ctgagtctcc tggcggccgt cagcgtggag 360 cagtgcctgg ccgccctctt cccagcctgg tactcgtgcc gccgcccacg ccacctgacc 420 acctgtgtgt gcgccctcac ctgggccctc tgcctgctgc tgcacctgct gctcagcrgc 480 gcctgcaccc agttcttcgg ggagcccagc cgccacttgt gccggacgct gtggctggtg 540 gcagcggtgc tgctggctct gctgtgttgc accatgtgtg gggccagcct tatgctgctg 600 ctgcgggtgg agcgaggccc ccagcggccc ccaccccggg gcttccctgg gctcatcctc 660 ctcaccgtcc tcctcttcct cttctgcggc ctgcccttcg gcatctactg gctgtcccgg 720 aacctgctct ggtacatccc ccactacttc taccacttca gcttcctcat ggccgccgtg 780 cactgcgcgg ccaagcccgt cgtctacttc tgcctgggca gtgcccaggg ccgcaggctg 840 cccctccggc tggtcctcca gcgagcgctg ggagacgagg ctgagctggg ggccgtcagg 900 gagacctccc gccgrggcct ggtggacata gcagcctga 939 <210> 3 <211> 312 <212> PRT <213> Human <400> 3 Met Met Glu Pro Arg Glu Ala Gly Gln His Val Gly Ala Ala Asn Ser 5 10 15 Ala Gln Glu Asp Val Ala Phe Asn Leu Ile Ile Leu Ser Leu Thr Glu 20 25 30 Gly Leu Gly Leu Gly Gly Leu Leu Gly Asn Gly Ala Val Leu Trp Leu 35 40 45 Leu Ser Ser Asn Val Tyr Arg Asn Pro Phe Ala Ile Tyr Leu Leu Asp 50 55 60 Val Ala Cys Ala Asp Leu Ile Phe Leu Gly Cys His Met Val Ala Ile 65 70 75 80 Val Pro Asp Leu Leu Gln Gly Arg Leu Asp Phe Pro Gly Phe Val Gln 85 90 95 Thr Ser Leu Ala Thr Leu Arg Phe Phe Cys Tyr Ile Val Gly Leu Ser 100 105 110 Leu Leu Ala Ala Val Ser Val Glu Gln Cys Leu Ala Ala Leu Phe Pro 115 120 125 Ala Trp Tyr Ser Cys Arg Arg Pro Arg His Leu Thr Thr Cys Val Cys 130 135 140 Ala Leu Thr Trp Ala Leu Cys Leu Leu Leu His Leu Leu Leu Ser Ser 145 150 155 160 Ala Cys Thr Gln Phe Phe Gly Glu Pro Ser Arg His Leu Cys Arg Thr 165 170 175 Leu Trp Leu Val Ala Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Cys Cys Thr Met 180 185 190 Cys Gly Ala Ser Leu Met Leu Leu Leu Arg Val Glu Arg Gly Pro Gln 195 200 205 Arg Pro Pro Pro Arg Gly Phe Pro Gly Leu Ile Leu Leu Thr Val Leu 210 215 220 Leu Phe Leu Phe Cys Gly Leu Pro Phe Gly Ile Tyr Trp Leu Ser Arg 225 230 235 240 Asn Leu Leu Trp Tyr Ile Pro His Tyr Phe Tyr His Phe Ser Phe Leu 245 250 255 Met Ala Ala Val His Cys Ala Ala Lys Pro Val Val Tyr Phe Cys Leu 260 265 270 Gly Ser Ala Gln Gly Arg Arg Leu Pro Leu Arg Leu Val Leu Gln Arg 275 280 285 Ala Leu Gly Asp Glu Ala Glu Leu Gly Ala Val Arg Glu Thr Ser Arg 290 295 300 Arg Gly Leu Val Asp Ile Ala Ala 305 310 <210> 4 <211> 312 <212> PRT <213> Human <400> 4 Met Met Glu Pro Arg Glu Ala Gly Gln His Val Gly Ala Ala Asn Gly 5 10 15 Ala Gln Glu Asp Val Ala Phe Asn Leu Ile Ile Leu Ser Leu Thr Glu 20 25 30 Gly Leu Gly Leu Gly Gly Leu Leu Gly Asn Gly Ala Val Leu Trp Leu 35 40 45 Leu Ser Ser Asn Val Tyr Arg Asn Pro Phe Ala Ile Tyr Leu Leu Asp 50 55 60 Val Ala Cys Ala Asp Leu Ile Phe Leu Gly Cys His Met Val Ala Ile 65 70 75 80 Val Pro Asp Leu Leu Gln Gly Arg Leu Asp Phe Pro Gly Phe Val Gln 85 90 95 Thr Ser Leu Ala Thr Leu Arg Phe Phe Cys Tyr Ile Val Gly Leu Ser 100 105 110 Leu Leu Ala Ala Val Ser Val Glu Gln Cys Leu Ala Ala Leu Phe Pro 115 120 125 Ala Trp Tyr Ser Cys Arg Arg Pro Arg His Leu Thr Thr Cys Val Cys 130 135 140 Ala Leu Thr Trp Ala Leu Cys Leu Leu Leu His Leu Leu Leu Ser Gly 145 150 155 160 Ala Cys Thr Gln Phe Phe Gly Glu Pro Ser Arg His Leu Cys Arg Thr 165 170 175 Leu Trp Leu Val Ala Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Cys Cys Thr Met 180 185 190 Cys Gly Ala Ser Leu Met Leu Leu Leu Arg Val Glu Arg Gly Pro Gln 195 200 205 Arg Pro Pro Pro Arg Gly Phe Pro Gly Leu Ile Leu Leu Thr Val Leu 210 215 220 Leu Phe Leu Phe Cys Gly Leu Pro Phe Gly Ile Tyr Trp Leu Ser Arg 225 230 235 240 Asn Leu Leu Trp Tyr Ile Pro His Tyr Phe Tyr His Phe Ser Phe Leu 245 250 255 Met Ala Ala Val His Cys Ala Ala Lys Pro Val Val Tyr Phe Cys Leu 260 265 270 Gly Ser Ala Gln Gly Arg Arg Leu Pro Leu Arg Leu Val Leu Gln Arg 275 280 285 Ala Leu Gly Asp Glu Ala Glu Leu Gly Ala Val Arg Glu Thr Ser Arg 290 295 300 Arg Gly Leu Val Asp Ile Ala Ala 305 310 <210> 5 <211> 312 <212> PRT <213> Human <400> 5 Met Met Glu Pro Arg Glu Ala Gly Gln His Val Gly Ala Ala Asn Ser 5 10 15 Ala Gln Glu Asp Val Ala Phe Asn Leu Ile Ile Leu Ser Leu Thr Glu 20 25 30 Gly Leu Gly Leu Gly Gly Leu Leu Gly Asn Gly Ala Val Leu Trp Leu 35 40 45 Leu Ser Ser Asn Val Tyr Arg Asn Pro Phe Ala Ile Tyr Leu Leu Asp 50 55 60 Val Ala Cys Ala Asp Leu Ile Phe Leu Gly Cys His Met Val Ala Ile 65 70 75 80 Val Pro Asp Leu Leu Gln Gly Arg Leu Asp Phe Pro Gly Phe Val Gln 85 90 95 Thr Ser Leu Ala Thr Leu Arg Phe Phe Cys Tyr Ile Val Gly Leu Ser 100 105 110 Leu Leu Ala Ala Val Ser Val Glu Gln Cys Leu Ala Ala Leu Phe Pro 115 120 125 Ala Trp Tyr Ser Cys Arg Arg Pro Arg His Leu Thr Thr Cys Val Cys 130 135 140 Ala Leu Thr Trp Ala Leu Cys Leu Leu Leu His Leu Leu Leu Ser Gly 145 150 155 160 Ala Cys Thr Gln Phe Phe Gly Glu Pro Ser Arg His Leu Cys Arg Thr 165 170 175 Leu Trp Leu Val Ala Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Cys Cys Thr Met 180 185 190 Cys Gly Ala Ser Leu Met Leu Leu Leu Arg Val Glu Arg Gly Pro Gln 195 200 205 Arg Pro Pro Pro Arg Gly Phe Pro Gly Leu Ile Leu Leu Thr Val Leu 210 215 220 Leu Phe Leu Phe Cys Gly Leu Pro Phe Gly Ile Tyr Trp Leu Ser Arg 225 230 235 240 Asn Leu Leu Trp Tyr Ile Pro His Tyr Phe Tyr His Phe Ser Phe Leu 245 250 255 Met Ala Ala Val His Cys Ala Ala Lys Pro Val Val Tyr Phe Cys Leu 260 265 270 Gly Ser Ala Gln Gly Arg Arg Leu Pro Leu Arg Leu Val Leu Gln Arg 275 280 285 Ala Leu Gly Asp Glu Ala Glu Leu Gly Ala Val Arg Glu Thr Ser Arg 290 295 300 Arg Gly Leu Val Asp Ile Ala Ala 305 310 <210> 6 <211> 312 <212> PRT <213> Human <400> 6 Met Met Glu Pro Arg Glu Ala Gly Gln His Val Gly Ala Ala Asn Gly 5 10 15 Ala Gln Glu Asp Val Ala Phe Asn Leu Ile Ile Leu Ser Leu Thr Glu 20 25 30 Gly Leu Gly Leu Gly Gly Leu Leu Gly Asn Gly Ala Val Leu Trp Leu 35 40 45 Leu Ser Ser Asn Val Tyr Arg Asn Pro Phe Ala Ile Tyr Leu Leu Asp 50 55 60 Val Ala Cys Ala Asp Leu Ile Phe Leu Gly Cys His Met Val Ala Ile 65 70 75 80 Val Pro Asp Leu Leu Gln Gly Arg Leu Asp Phe Pro Gly Phe Val Gln 85 90 95 Thr Ser Leu Ala Thr Leu Arg Phe Phe Cys Tyr Ile Val Gly Leu Ser 100 105 110 Leu Leu Ala Ala Val Ser Val Glu Gln Cys Leu Ala Ala Leu Phe Pro 115 120 125 Ala Trp Tyr Ser Cys Arg Arg Pro Arg His Leu Thr Thr Cys Val Cys 130 135 140 Ala Leu Thr Trp Ala Leu Cys Leu Leu Leu His Leu Leu Leu Ser Ser 145 150 155 160 Ala Cys Thr Gln Phe Phe Gly Glu Pro Ser Arg His Leu Cys Arg Thr 165 170 175 Leu Trp Leu Val Ala Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Cys Cys Thr Met 180 185 190 Cys Gly Ala Ser Leu Met Leu Leu Leu Arg Val Glu Arg Gly Pro Gln 195 200 205 Arg Pro Pro Pro Arg Gly Phe Pro Gly Leu Ile Leu Leu Thr Val Leu 210 215 220 Leu Phe Leu Phe Cys Gly Leu Pro Phe Gly Ile Tyr Trp Leu Ser Arg 225 230 235 240 Asn Leu Leu Trp Tyr Ile Pro His Tyr Phe Tyr His Phe Ser Phe Leu 245 250 255 Met Ala Ala Val His Cys Ala Ala Lys Pro Val Val Tyr Phe Cys Leu 260 265 270 Gly Ser Ala Gln Gly Arg Arg Leu Pro Leu Arg Leu Val Leu Gln Arg 275 280 285 Ala Leu Gly Asp Glu Ala Glu Leu Gly Ala Val Arg Glu Thr Ser Arg 290 295 300 Arg Gly Leu Val Asp Ile Ala Ala 305 310 <210> 7 <211> 939 <212> DNA <213> Human <400> 7 atgatggagc ccagagaagc tggacagcac gtgggggccg ccaacagcgc ccaggaggat 60 gtggccttca acctcatcat cctgtccctc accgaggggc tcggcctcgg tgggctgctg 120 gggaatgggg cagtcctctg gctgctcagc tccaatgtct acagaaaccc cttcgccatc 180 tacctcctgg acgtggcctg cgcggatctc atcttccttg gctgccacat ggtggccatc 240 gtccccgact tgctgcaagg ccggctggac ttcccgggct tcgtgcagac cagcctggca 300 acgctgcgct tcttctgcta catcgtgggc ctgagtctcc tggcggccgt cagcgtggag 360 cagtgcctgg ccgccctctt cccagcctgg tactcgtgcc gccgcccacg ccacctgacc 420 acctgtgtgt gcgccctcac ctgggccctc tgcctgctgc tgcacctgct gctcagcagc 480 gcctgcaccc agttcttcgg ggagcccagc cgccacttgt gccggacgct gtggctggtg 540 gcagcggtgc tgctggctct gctgtgttgc accatgtgtg gggccagcct tatgctgctg 600 ctgcgggtgg agcgaggccc ccagcggccc ccaccccggg gcttccctgg gctcatcctc 660 ctcaccgtcc tcctcttcct cttctgcggc ctgcccttcg gcatctactg gctgtcccgg 720 aacctgctct ggtacatccc ccactacttc taccacttca gcttcctcat ggccgccgtg 780 cactgcgcgg ccaagcccgt cgtctacttc tgcctgggca gtgcccaggg ccgcaggctg 840 cccctccggc tggtcctcca gcgagcgctg ggagacgagg ctgagctggg ggccgtcagg 900 gagacctccc gccggggcct ggtggacata gcagcctga 939 <210> 8 <211> 939 <212> DNA <213> Human <400> 8 atgatggagc ccagagaagc tggacagcac gtgggggccg ccaacagcgc ccaggaggat 60 gtggccttca acctcatcat cctgtccctc accgaggggc tcggcctcgg tgggctgctg 120 gggaatgggg cagtcctctg gctgctcagc tccaatgtct acagaaaccc cttcgccatc 180 tacctcctgg acgtggcctg cgcggatctc atcttccttg gctgccacat ggtggccatc 240 gtccccgact tgctgcaagg ccggctggac ttcccgggct tcgtgcagac cagcctggca 300 acgctgcgct tcttctgcta catcgtgggc ctgagtctcc tggcggccgt cagcgtggag 360 cagtgcctgg ccgccctctt cccagcctgg tactcgtgcc gccgcccacg ccacctgacc 420 acctgtgtgt gcgccctcac ctgggccctc tgcctgctgc tgcacctgct gctcagcagc 480 gcctgcaccc agttcttcgg ggagcccagc cgccacttgt gccggacgct gtggctggtg 540 gcagcggtgc tgctggctct gctgtgttgc accatgtgtg gggccagcct tatgctgctg 600 ctgcgggtgg agcgaggccc ccagcggccc ccaccccggg gcttccctgg gctcatcctc 660 ctcaccgtcc tcctcttcct cttctgcggc ctgcccttcg gcatctactg gctgtcccgg 720 aacctgctct ggtacatccc ccactacttc taccacttca gcttcctcat ggccgccgtg 780 cactgcgcgg ccaagcccgt cgtctacttc tgcctgggca gtgcccaggg ccgcaggctg 840 cccctccggc tggtcctcca gcgagcgctg ggagacgagg ctgagctggg ggccgtcagg 900 gagacctccc gccgaggcct ggtggacata gcagcctga 939 <210> 9 <211> 939 <212> DNA <213> Human <400> 9 atgatggagc ccagagaagc tggacagcac gtgggggccg ccaacagcgc ccaggaggat 60 gtggccttca acctcatcat cctgtccctc accgaggggc tcggcctcgg tgggctgctg 120 gggaatgggg cagtcctctg gctgctcagc tccaatgtct acagaaaccc cttcgccatc 180 tacctcctgg acgtggcctg cgcggatctc atcttccttg gctgccacat ggtggccatc 240 gtccccgact tgctgcaagg ccggctggac ttcccgggct tcgtgcagac cagcctggca 300 acgctgcgct tcttctgcta catcgtgggc ctgagtctcc tggcggccgt cagcgtggag 360 cagtgcctgg ccgccctctt cccagcctgg tactcgtgcc gccgcccacg ccacctgacc 420 acctgtgtgt gcgccctcac ctgggccctc tgcctgctgc tgcacctgct gctcagcggc 480 gcctgcaccc agttcttcgg ggagcccagc cgccacttgt gccggacgct gtggctggtg 540 gcagcggtgc tgctggctct gctgtgttgc accatgtgtg gggccagcct tatgctgctg 600 ctgcgggtgg agcgaggccc ccagcggccc ccaccccggg gcttccctgg gctcatcctc 660 ctcaccgtcc tcctcttcct cttctgcggc ctgcccttcg gcatctactg gctgtcccgg 720 aacctgctct ggtacatccc ccactacttc taccacttca gcttcctcat ggccgccgtg 780 cactgcgcgg ccaagcccgt cgtctacttc tgcctgggca gtgcccaggg ccgcaggctg 840 cccctccggc tggtcctcca gcgagcgctg ggagacgagg ctgagctggg ggccgtcagg 900 gagacctccc gccggggcct ggtggacata gcagcctga 939 <210> 10 <211> 939 <212> DNA <213> Human <400> 10 atgatggagc ccagagaagc tggacagcac gtgggggccg ccaacagcgc ccaggaggat 60 gtggccttca acctcatcat cctgtccctc accgaggggc tcggcctcgg tgggctgctg 120 gggaatgggg cagtcctctg gctgctcagc tccaatgtct acagaaaccc cttcgccatc 180 tacctcctgg acgtggcctg cgcggatctc atcttccttg gctgccacat ggtggccatc 240 gtccccgact tgctgcaagg ccggctggac ttcccgggct tcgtgcagac cagcctggca 300 acgctgcgct tcttctgcta catcgtgggc ctgagtctcc tggcggccgt cagcgtggag 360 cagtgcctgg ccgccctctt cccagcctgg tactcgtgcc gccgcccacg ccacctgacc 420 acctgtgtgt gcgccctcac ctgggccctc tgcctgctgc tgcacctgct gctcagcggc 480 gcctgcaccc agttcttcgg ggagcccagc cgccacttgt gccggacgct gtggctggtg 540 gcagcggtgc tgctggctct gctgtgttgc accatgtgtg gggccagcct tatgctgctg 600 ctgcgggtgg agcgaggccc ccagcggccc ccaccccggg gcttccctgg gctcatcctc 660 ctcaccgtcc tcctcttcct cttctgcggc ctgcccttcg gcatctactg gctgtcccgg 720 aacctgctct ggtacatccc ccactacttc taccacttca gcttcctcat ggccgccgtg 780 cactgcgcgg ccaagcccgt cgtctacttc tgcctgggca gtgcccaggg ccgcaggctg 840 cccctccggc tggtcctcca gcgagcgctg ggagacgagg ctgagctggg ggccgtcagg 900 gagacctccc gccgaggcct ggtggacata gcagcctga 939 <210> 11 <211> 939 <212> DNA <213> Human <400> 11 atgatggagc ccagagaagc tggacagcac gtgggggccg ccaacggcgc ccaggaggat 60 gtggccttca acctcatcat cctgtccctc accgaggggc tcggcctcgg tgggctgctg 120 gggaatgggg cagtcctctg gctgctcagc tccaatgtct acagaaaccc cttcgccatc 180 tacctcctgg acgtggcctg cgcggatctc atcttccttg gctgccacat ggtggccatc 240 gtccccgact tgctgcaagg ccggctggac ttcccgggct tcgtgcagac cagcctggca 300 acgctgcgct tcttctgcta catcgtgggc ctgagtctcc tggcggccgt cagcgtggag 360 cagtgcctgg ccgccctctt cccagcctgg tactcgtgcc gccgcccacg ccacctgacc 420 acctgtgtgt gcgccctcac ctgggccctc tgcctgctgc tgcacctgct gctcagcggc 480 gcctgcaccc agttcttcgg ggagcccagc cgccacttgt gccggacgct gtggctggtg 540 gcagcggtgc tgctggctct gctgtgttgc accatgtgtg gggccagcct tatgctgctg 600 ctgcgggtgg agcgaggccc ccagcggccc ccaccccggg gcttccctgg gctcatcctc 660 ctcaccgtcc tcctcttcct cttctgcggc ctgcccttcg gcatctactg gctgtcccgg 720 aacctgctct ggtacatccc ccactacttc taccacttca gcttcctcat ggccgccgtg 780 cactgcgcgg ccaagcccgt cgtctacttc tgcctgggca gtgcccaggg ccgcaggctg 840 cccctccggc tggtcctcca gcgagcgctg ggagacgagg ctgagctggg ggccgtcagg 900 gagacctccc gccggggcct ggtggacata gcagcctga 939 <210> 12 <211> 939 <212> DNA <213> Human <400> 12 atgatggagc ccagagaagc tggacagcac gtgggggccg ccaacggcgc ccaggaggat 60 gtggccttca acctcatcat cctgtccctc accgaggggc tcggcctcgg tgggctgctg 120 gggaatgggg cagtcctctg gctgctcagc tccaatgtct acagaaaccc cttcgccatc 180 tacctcctgg acgtggcctg cgcggatctc atcttccttg gctgccacat ggtggccatc 240 gtccccgact tgctgcaagg ccggctggac ttcccgggct tcgtgcagac cagcctggca 300 acgctgcgct tcttctgcta catcgtgggc ctgagtctcc tggcggccgt cagcgtggag 360 cagtgcctgg ccgccctctt cccagcctgg tactcgtgcc gccgcccacg ccacctgacc 420 acctgtgtgt gcgccctcac ctgggccctc tgcctgctgc tgcacctgct gctcagcggc 480 gcctgcaccc agttcttcgg ggagcccagc cgccacttgt gccggacgct gtggctggtg 540 gcagcggtgc tgctggctct gctgtgttgc accatgtgtg gggccagcct tatgctgctg 600 ctgcgggtgg agcgaggccc ccagcggccc ccaccccggg gcttccctgg gctcatcctc 660 ctcaccgtcc tcctcttcct cttctgcggc ctgcccttcg gcatctactg gctgtcccgg 720 aacctgctct ggtacatccc ccactacttc taccacttca gcttcctcat ggccgccgtg 780 cactgcgcgg ccaagcccgt cgtctacttc tgcctgggca gtgcccaggg ccgcaggctg 840 cccctccggc tggtcctcca gcgagcgctg ggagacgagg ctgagctggg ggccgtcagg 900 gagacctccc gccgaggcct ggtggacata gcagcctga 939 <210> 13 <211> 939 <212> DNA <213> Human <400> 13 atgatggagc ccagagaagc tggacagcac gtgggggccg ccaacggcgc ccaggaggat 60 gtggccttca acctcatcat cctgtccctc accgaggggc tcggcctcgg tgggctgctg 120 gggaatgggg cagtcctctg gctgctcagc tccaatgtct acagaaaccc cttcgccatc 180 tacctcctgg acgtggcctg cgcggatctc atcttccttg gctgccacat ggtggccatc 240 gtccccgact tgctgcaagg ccggctggac ttcccgggct tcgtgcagac cagcctggca 300 acgctgcgct tcttctgcta catcgtgggc ctgagtctcc tggcggccgt cagcgtggag 360 cagtgcctgg ccgccctctt cccagcctgg tactcgtgcc gccgcccacg ccacctgacc 420 acctgtgtgt gcgccctcac ctgggccctc tgcctgctgc tgcacctgct gctcagcagc 480 gcctgcaccc agttcttcgg ggagcccagc cgccacttgt gccggacgct gtggctggtg 540 gcagcggtgc tgctggctct gctgtgttgc accatgtgtg gggccagcct tatgctgctg 600 ctgcgggtgg agcgaggccc ccagcggccc ccaccccggg gcttccctgg gctcatcctc 660 ctcaccgtcc tcctcttcct cttctgcggc ctgcccttcg gcatctactg gctgtcccgg 720 aacctgctct ggtacatccc ccactacttc taccacttca gcttcctcat ggccgccgtg 780 cactgcgcgg ccaagcccgt cgtctacttc tgcctgggca gtgcccaggg ccgcaggctg 840 cccctccggc tggtcctcca gcgagcgctg ggagacgagg ctgagctggg ggccgtcagg 900 gagacctccc gccgaggcct ggtggacata gcagcctga 939 <210> 14 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <223> Designed oligonucleotide primer to amplify DNA encoding hTGR11 <400> 14 gtcgacatga tggagcccag agaagctgga c 31 <210> 15 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <223> Designed oligonucleotide primer to amplify DNA encoding hTGR11 <400> 15 cactagttca ggctgctatg tccaccaggc c 31 <210> 16 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <223> Designed oligonucleotide primer to amplify DNA encoding hTGR11 <400> 16 gctccaatgt ctacagaaac ccc 23 <210> 17 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <223> Designed oligonucleotide primer to amplify DNA encoding hTGR11 <400> 17 gaagatgaga tccgcgcag 19 <210> 18 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <223> Designed oligonucleotide probe <400> 18 tcgccatcta cctcctggac gtgg 24

【０１１６】

【図面の簡単な説明】

【図１】 ｈＴＧＲ１１の疎水性プロット図である。

【図２】 ｈＴＧＲ１１のヒト組織における発現分布解
析である。CLONTECHHuman Multiple Tissue cDNA Panel
での発現量を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 9/00 ４Ｃ０８４ 9/00 9/04 ４Ｈ０４５ 9/04 9/10 9/10 １０１ １０１ 9/12 9/12 11/06 11/06 19/06 19/06 25/00 25/00 25/28 25/28 27/12 27/12 29/00 29/00 １０１ １０１ 35/00 35/00 37/00 37/00 37/08 37/08 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｍ 33/50 Ｚ 33/53 33/566 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/566 5/00 Ａ (72)発明者 新谷 靖 茨城県つくば市春日１丁目７番地９ 武田 春日ハイツ703号 (72)発明者 宮嶋 伸行 茨城県つくば市吾妻４−16−４ プレビュ ー吾妻403 Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 DA13 DA36 FB02 FB03 4B024 AA01 AA11 BA41 BA63 CA01 HA12 4B063 QA01 QQ53 QR32 QR55 QS34 QX01 4B064 AG20 AG27 CA19 CC24 DA01 DA13 4B065 AA93Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA17 NA14 ZA022 ZA152 ZA162 ZA332 ZA362 ZA402 ZA422 ZA452 ZA592 ZA662 ZA682 ZA702 ZA962 ZB072 ZB112 ZB132 ZB152 ZB262 ZC352 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA40 DA50 DA76 EA20 EA50 FA74

Claims (38)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号：１で表わされるアミノ酸配列
   と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
   ことを特徴とするＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質また
   はその塩。
2. 【請求項２】 配列番号：３、配列番号：４、配列番
   号：５または配列番号：６で表わされるアミノ酸配列を
   含有する請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白
   質またはその塩。
3. 【請求項３】 請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプタ
   ー蛋白質の部分ペプチドまたはその塩。
4. 【請求項４】 請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプタ
   ー蛋白質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ
   ヌクレオチド。
5. 【請求項５】 ＤＮＡである請求項４記載のポリヌクレ
   オチド。
6. 【請求項６】 配列番号：２で表される塩基配列を有す
   る請求項４記載のポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 配列番号：７、配列番号：８、配列番
   号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：
   １２または配列番号：１３で表される塩基配列を有する
   請求項４記載のポリヌクレオチド。
8. 【請求項８】 請求項４記載のポリヌクレオチドを含有
   する組換えベクター。
9. 【請求項９】 請求項８記載の組換えベクターで形質転
   換させた形質転換体。
10. 【請求項１０】 請求項９記載の形質転換体を培養し、
    請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質を生成
    せしめることを特徴とする請求項１記載のＧ蛋白質共役
    型レセプター蛋白質またはその塩の製造法。
11. 【請求項１１】 請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプ
    ター蛋白質もしくは請求項３記載の部分ペプチドまたは
    その塩に対する抗体。
12. 【請求項１２】 請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプ
    ター蛋白質のシグナル伝達を不活性化する中和抗体であ
    る請求項１１記載の抗体。
13. 【請求項１３】 請求項１１記載の抗体を含有してなる
    診断薬。
14. 【請求項１４】 請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプ
    ター蛋白質もしくは請求項３記載の部分ペプチドまたは
    その塩を用いることにより得られうる請求項１記載のＧ
    蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するリ
    ガンド。
15. 【請求項１５】 請求項１４記載のＧ蛋白質共役型レセ
    プターのリガンドを含有してなる医薬。
16. 【請求項１６】 請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプ
    ター蛋白質もしくは請求項３記載の部分ペプチドまたは
    その塩を用いることを特徴とする請求項１記載のＧ蛋白
    質共役型レセプター蛋白質またはその塩に対するリガン
    ドの決定方法。
17. 【請求項１７】 請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプ
    ター蛋白質もしくは請求項３記載の部分ペプチドまたは
    その塩を用いることを特徴とするリガンドと請求項１記
    載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩との
    結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニン
    グ方法。
18. 【請求項１８】 請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプ
    ター蛋白質もしくは請求項３記載の部分ペプチドまたは
    その塩を含有することを特徴とするリガンドと請求項１
    記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩と
    の結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニ
    ング用キット。
19. 【請求項１９】 請求項１７記載のスクリーニング方法
    または請求項１８記載のスクリーニング用キットを用い
    て得られうるリガンドと請求項１記載のＧ蛋白質共役型
    レセプター蛋白質またはその塩との結合性を変化させる
    化合物またはその塩。
20. 【請求項２０】 請求項１７記載のスクリーニング方法
    または請求項１８記載のスクリーニング用キットを用い
    て得られうるリガンドと請求項１記載のＧ蛋白質共役型
    レセプター蛋白質またはその塩との結合性を変化させる
    化合物またはその塩を含有してなる医薬。
21. 【請求項２１】 請求項４記載のポリヌクレオチドとハ
    イストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリ
    ヌクレオチド。
22. 【請求項２２】 請求項４記載のポリヌクレオチドと相
    補的な塩基配列またはその一部を含有してなるポリヌク
    レオチド。
23. 【請求項２３】 請求項４記載のポリヌクレオチドまた
    はその一部を用いることを特徴とする請求項１記載のＧ
    蛋白質共役型レセプター蛋白質のｍＲＮＡの定量方法。
24. 【請求項２４】 請求項１１記載の抗体を用いることを
    特徴とする請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋
    白質の定量方法。
25. 【請求項２５】 請求項２３または請求項２４記載の定
    量方法を用いることを特徴とする請求項１記載のＧ蛋白
    質共役型レセプターの機能が関連する疾患の診断方法。
26. 【請求項２６】 請求項２３記載の定量方法を用いるこ
    とを特徴とする請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプタ
    ー蛋白質の発現量を変化させる化合物またはその塩のス
    クリーニング方法。
27. 【請求項２７】 請求項２４記載の定量方法を用いるこ
    とを特徴とする細胞膜における請求項１記載のＧ蛋白質
    共役型レセプター蛋白質量を変化させる化合物またはそ
    の塩のスクリーニング方法。
28. 【請求項２８】 請求項２６記載のスクリーニング方法
    を用いて得られうる請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセ
    プター蛋白質の発現量を変化させる化合物またはその
    塩。
29. 【請求項２９】 請求項２７記載のスクリーニング方法
    を用いて得られうる細胞膜における請求項１記載のＧ蛋
    白質共役型レセプター蛋白質量を変化させる化合物また
    はその塩。
30. 【請求項３０】 請求項２６記載のスクリーニング方法
    を用いて得られうる請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセ
    プター蛋白質の発現量を変化させる化合物またはその塩
    を含有してなる医薬。
31. 【請求項３１】 請求項２７記載のスクリーニング方法
    を用いて得られうる細胞膜における請求項１記載のＧ蛋
    白質共役型レセプター蛋白質量を変化させる化合物また
    はその塩を含有してなる医薬。
32. 【請求項３２】 中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、
    癌、糖尿病、免疫系疾患または消化器系疾患の予防・治
    療剤である請求項２０、３０または３１記載の医薬。
33. 【請求項３３】 哺乳動物に対して、請求項１７記載の
    スクリーニング方法または請求項１８記載のスクリーニ
    ング用キットを用いて得られうるリガンドと請求項１記
    載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質またはその塩との
    結合性を変化させる化合物またはその塩の有効量を投与
    することを特徴とする中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾
    患、癌、糖尿病、免疫系疾患または消化器系疾患の予防
    ・治療方法。
34. 【請求項３４】 哺乳動物に対して、請求項２６記載の
    スクリーニング方法を用いて得られうる請求項１記載の
    Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質の発現量を変化させる
    化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とす
    る中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、癌、糖尿病、免
    疫系疾患または消化器系疾患の予防・治療方法。
35. 【請求項３５】 哺乳動物に対して、請求項２７記載の
    スクリーニング方法を用いて得られうる細胞膜における
    請求項１記載のＧ蛋白質共役型レセプター蛋白質量を変
    化させる化合物またはその塩の有効量を投与することを
    特徴とする中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、癌、糖
    尿病、免疫系疾患または消化器系疾患の予防・治療方
    法。
36. 【請求項３６】 中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、
    癌、糖尿病、免疫系疾患または消化器系疾患の予防・治
    療剤を製造するための請求項１７記載のスクリーニング
    方法または請求項１８記載のスクリーニング用キットを
    用いて得られうるリガンドと請求項１記載のＧ蛋白質共
    役型レセプター蛋白質またはその塩との結合性を変化さ
    せる化合物またはその塩の使用。
37. 【請求項３７】 中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、
    癌、糖尿病、免疫系疾患または消化器系疾患の予防・治
    療剤を製造するための請求項２６記載のスクリーニング
    方法を用いて得られうる請求項１記載のＧ蛋白質共役型
    レセプター蛋白質の発現量を変化させる化合物またはそ
    の塩の使用。
38. 【請求項３８】 中枢疾患、炎症性疾患、循環器疾患、
    癌、糖尿病、免疫系疾患または消化器系疾患の予防・治
    療剤を製造するための請求項２７記載のスクリーニング
    方法を用いて得られうる細胞膜における請求項１記載の
    Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質を変化させる化合物ま
    たはその塩の使用。