JP2002327000A - 新規なb型肝炎ウイルス - Google Patents
新規なb型肝炎ウイルスInfo
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Abstract
の新規な表面変異体を提供する。 【解決手段】 本発明の変異体はHBs・Agおよび同
等に長期に持続する抗HBコア(c)IgM抗体(A
b)を伴う抗HBs・Ab(抗B型肝炎表面抗体)の両
方に対して一定して陽性であることが知られているダウ
ン症候群の症状を有する症候性の患者から単離した。
Description
変異体に関し、特に、ダウン症候群を有する症候性患者
から単離した変異体に関する。
スであるB型肝炎ウイルス(HBV)は無症候保菌者状
態、急性の自己限定性肝炎、劇症肝炎、および慢性肝
炎、肝硬変、および肝細胞癌を含む慢性肝臓病のような
広範囲の臨床的現象を生じ得る。このウイルスは318
2個乃至3221個の塩基対(bp)の円形ゲノムを有
している。
(subtypes)が同定されていて、HBV表面上の異なる
エピトープを認識する抗体により分化できる。HBs・
Ag(B型肝炎表面抗原)粒子は共通の決定因子
「a」、ならびに、「d」または「y」および「w」ま
たは「r」の亜類型決定因子を担持しており、4種類の
主な亜類型、すなわち、adw,adr,aywおよび
ayrに分類される。稀な血清において、これら全ての
4種類の亜類型決定因子(adywr)を含むHBs・
Ag粒子が含有されている。これらの主なHBV亜類型
adw,adr,aywおよびayrに対応する抗原性
決定因子は表面すなわち「S」ポリペプチド内に存在し
ている。特に、コドン位置122およびコドン位置16
0においてS遺伝子によりコード化される2種類のアミ
ノ酸残基がこれらの異なる抗原性亜類型を決定すると考
えられてきた。一方、プレC(preC)領域がHBe・A
g陰性を生じる変異を示すことが頻繁に報告されてい
る。このウイルスはそのプレゲノム(pregenomic)RN
Aの逆トランスクプターゼによる複製モードにより、そ
の他のDNAウイルスに比較して高い変異速度を示す。
この新規な変異体の重要性はワクチン・エスケープ(va
ccine escape)およびHBs・Ag検出不全、公共衛生
問題との関わりにおいて反映できる。
な表面変異体を同定して特徴付けた。この変異体はHB
s・Agおよび同等に長期に持続する抗HBコア(c)
IgM抗体(Ab)を伴う抗HBs・Ab(抗B型肝炎
表面抗体)の両方に対して一定して陽性であることが知
られているダウン症候群を有する症候性の患者から単離
した。HBs・Agに対する6種類のモノクローナル抗
体(m・Ab(s))のパネルにより、本発明者は
「a」決定因子の抗原性の主要エピトープにおける変異
の影響を評価した。
ディカル・センターのアメリカン・ユニバーシティに対
して黄疸症状を示していたダウン症候群を有する43才
の白人男性の患者からサンプルを採取した。この患者は
HBVに対する免疫の経験が無く、輸血、静脈内薬物、
ホモセクシュアル、家族のHBV感染または血液透析を
含む感染性の危険因子を有していない。調査中におい
て、この患者は上昇した肝機能検査(LFT)結果、す
なわち、ALT:450IU/L(範囲10IU/L乃
至35IU/L)、AST:250IU/L(範囲10
IU/L乃至40IU/L)、ガンマ−GT:383I
U/L(範囲10IU/L乃至50IU/L)を有して
おり、ビリルビン(Bilirubin)は3.8/2.6mg
/dL(合計/直接値)(範囲、合計:0.1IU/L
乃至1.2IU/Lおよび直接値:0.0IU/L乃至
0.2IU/L)であることが分かった。さらに重要な
ことは、本発明者はHBV血液検査における不調和性を
発見したことである。また、酵素免疫測定法(EIA)
によるHBVマーカー検査結果は、HBs・Ag:陽性
(>2/0.051)、抗HBs・Ab:陽性(0.4
17/0.206)、抗HBc・IgM・Ab:低度の
陽性(0.371/0.208)、抗HBc・IgG・
Ab:高度の陽性(>2/0.412)、HBe・A
g:陰性、および抗HBe・Ab:陽性(0.197/
0.830、競合検定)であった。抗A型肝炎Ab(抗
体)および抗C型肝炎抗体Ab(抗体)の両方は陰性で
あった。HBVマーカーにおける不一致性により、HB
V抗原(Ag)を確認するために分子法(molecular me
thods)を使用した。
て、AST結果:80IU/Lを含み、後続の10ヶ月
間に渡り一定に減少したことが分かった。しかしなが
ら、初期的な表示の後に10ヶ月間繰り返して用いられ
たHBVマーカーはHBs・Ag:陽性(>2/0.0
56)(DiaSorin、イタリア国)および抗HBs・A
b:陽性(56/5)(BioMerieux、Mini-Vidas、フラ
ンス国)であることを示し、持続して低度の陽性の抗H
Bc・IgM・Ab(0.303/0.221)(DiaS
orin、イタリア国)が保たれていることを示した。
殖 グアニジニウム−チオシアネート(GuSCN)溶解法
に基づいて40μLのサンプルからDNAを単離して精
製した。酸/グアニジニウム−チオシアネート−フェノ
ール−クロロホルム抽出処理によるRNA単離の単一工
程処理方法を一部変更して採用した。5倍容量の溶解溶
液[5.75モルのGuSCN、50ミリモルのトリス
−Cl(pH7.5)、100ミリモルの2−メルカプ
トエタノールおよび15μg/mLのポリ(A)]を1
倍容量の血清に加えた。短時間の渦混合処理の後に、こ
の混合物を60℃で10分間加熱した。その後、イソプ
ロパノール沈降処理によりDNAペレットを得て、75
%エタノールにより洗浄した。さらに、乾燥したDNA
ペレットを50μLのPCR反応溶液の中にそれぞれ4
0マイクロモルの第1回目プライマー(F1−6および
R1−6)と共に再懸濁した。この混合物を95℃で3
分間加熱した後に、サーマル・サイクラー(thermal cy
cler)(米国、Perkin Elmer社、GeneAmp PCR System 9
600)において94℃/45秒間、55℃/45秒間お
よび72℃/45秒間から成る30回のPCR工程によ
り処理した。次に、0.5μLの第1回目PCR生成物
を、アニーリング温度を60℃まで上昇させたことを除
いて、同一の処理工程から成るF1−7およびR13−
2dの各プライマーによる第2回目PCR増殖処理のた
めのテンプレートとして用いた。予想したような604
塩基対(bp)のDNA帯域である陽性のPCR生成物
がアガロース・ゲル電気泳動において検出できた。
n number)J02203)から誘導した上記のPCRプ
ライマー・シーケンス(ヌクレオチド・シーケンス)は
以下のようである。 第1回目プライマーの組 F1−6(231乃至252):CCTCACAATACCGCAGAGTC
TA R1−6(816乃至842):AGGGTTTAAATGTATACCCA
AAGACAA 第2回目プライマーの組 F1−7(246乃至268):GAGTCTAGACTCGTGGTGGA
CTT R13−2d(822乃至843):ccgaattcTAGGGTTT
AAATGTATACCCA クローニングの目的でEcoR−I部位をR13−2d
の5’端部に添加した。
統分析 増殖したPCR生成物をQIAクイック・スピン・カラ
ム(Qiagen)により洗浄し、これに続いて、DNAシー
ケンスおよび蛋白発現に対応してクローニングした。信
頼性の高いDNAシーケンス決定を行なうためにDNA
シーケンス用の5種類のクローンを準備した。ABI 377
DNA シーケンサー(米国、PE Applied Biosystems
社)においてBigDye Terminator Ready Reaction kit装
置(米国、PE Applied Biosystems社)により両方のス
トランド(鎖)に対応してヌクレオチド・シーケンスを
決定した。その後、Lasergeneパッケージ(米国、ウィ
スコンシン州、マディソンのDNAStar社)のSeqMan 4.00
モジュールを用いてシーケンス分析を行なった。さら
に、Lasergeneパッケージ(米国、ウィスコンシン州、
マディソンのDNAStar社)のMegAlign 4.00モジュールに
よりシーケンスの位置合わせおよび系統樹の構成を計算
処理した。収集した多数個のシーケンス位置合わせ結果
をシーケンスの重み付けにおいて用いた。遺伝子型類別
処理用の28個の対照標準株を文献に記載されているシ
ーケンスから誘導した。
および過渡的蛋白発現 上記のPCR生成物をXba−I/EcoR−I制限酵
素により消化した。595個の塩基対フラグメントによ
りアミノ酸のロイシン(32)から端部(イソロイシン
(226))までS−HBsAg蛋白の86%をコード
化した。その後、このフラグメントを予め構成しておい
た哺乳類の発現ベクターに結合して、CMWプロモータ
ーの下流側に配置されていた野生型ayw・S−HBs
・Agフラグメントと置き換えた。次に、LIPOFECTAMIN
E Plus試薬(米国、メリーランド州のLife technologie
s社)を用いてCOS−7細胞系についてトランスフェ
クションを行なった。その後、COS−7細胞感染によ
り分泌した変異体S−HBs・Agを含有している培養
液の上澄み液を収集して、新鮮な培地をトランスフェク
ション後の72時間おきに加えた。野生型ayw(wt
(ayw))・S−HBs・Ag(GeneBank受け入れ番
号J02203)もまた対照として使用するために発現
した。
測定およびエピトープ分析 組換え型wt(ayw)およびLBN変異体S−HBs
・Agの発現をサンドイッチ形式における固相EIA
(酵素免疫測定)により決定した。1種類のポリクロー
ナル抗体および6種類のモノクローナル抗体(mAb
(s))のパネルを用いてこの調査を行なった。これら
はヤギの抗HBs・Ag(ay/ad)(米国、マサチ
ューセッツ州、フィッツジェラルド社)、HB−1、H
B−8、HB−9、HB−13、HB−14およびHB
−16である。6種類全てのモノクローナル抗体mAb
(s)を血清誘導した野生型のHBs・Agに対応して
培養し、これらはadおよびayの両方の亜類型に対し
て反応性を有していた。EIA(酵素免疫測定)により
血清および組換え型HBs・Agの反応性を測定した。
基本的に、精製したモノクローナル抗体mAb(s)ま
たはポリクローナル抗HBs・Agをマイクロタイター
・プレート上に塗布して使用時まで4℃に維持した。酵
素免疫測定(EIA)を行なう前に、各プレートをBS
Aを含有するPBSにより25℃で2時間遮断した。さ
らに、50μLのHRP接合体の各モノクローナル抗体
と混合した150μLのサンプル(血清または希釈した
組換え型HBs・Ag培養体)により抗体酵素免疫測定
(EIA)を1工程のサンドイッチ形式で行なった。各
プレートを37℃で90分インキュベートした後に、
0.005%のTween 20を含有するPBSにより6回洗
浄した。次に、200μLのOPD溶液(米国、シグマ
社)を伴う30分間の最終的なインキュベーションによ
り各プレートを現像した。その後、50μLの4規定
(4N)硫酸により着色現像を停止した。この吸光度を
自動マイクロタイター・プレート読取装置(米国、Mole
cular Devices社)上で読み取り、これらの結果を49
0nm(ナノメートル)における光学密度(OD)とし
て表現した。未変性または原生のHBs・Agおよび合
成ペプチドに対する各モノクローナル抗体(mAb)の
反応性を評価するために、直接酵素免疫測定(direct E
IA)法を行なった。すなわち、精製して量的に調節した
各モノクローナル抗体(mAb)の一連の希釈物をプレ
ート上でインキュベートし、これらの各プレートは精製
した未変性のHBs・Agまたは酸化処理したペプチド
により予め塗布していた。ホースラディッシュ・ペルオ
キシダーゼ接合したラビット抗マウスIgGを伴う次の
インキュベーションにより結合したマウスIgGを検出
した。この反応性を酵素触媒化OPD着色現像処理によ
り確認した。組換え型変異体および野生型S−HBs・
Agもウエスタン免疫ブロット法により分析した。HB
s・Agの培養液の上澄み液を遠心フィルター(米国、
Millipore社、Biomax-100)により15倍に濃縮した。
この濃縮物をNuPAGE10%ビス−トリスSDSゲル(米
国、サンデイエゴ、Novex社)上で展開した後に、ニト
ロセルロース膜に移した。移した蛋白をHBs・Agモ
ノクローナル抗体(mAb)により免疫ブロット処理し
た。この結合は免疫ブロット・システム(米国、BioRa
d, GAM-AP社)を用いて検出した。
およびアミノ酸シーケンスの分析 新規なLebanese(LBN)変異体のHBs・DNAシー
ケンスを遺伝子型について分析した。変異体のHBs・
DNAシーケンスとその他の28種類の特定のHBs遺
伝子型株との間のシーケンス比較によりこの変異体HB
sを遺伝子型D群に分類した(図1)。この患者の血清
についての血清学的な型の類別は行なわなかったが、こ
のHBs変異体のアミノ酸シーケンスはayw2・HB
s亜類型に対して最も高い相同性を示した。5種類の全
てのクローン体において上記LBN変異体の位置32乃
至位置226内における5種類のアミノ酸変異が見られ
た。これらは位置103のM(メチオニン)(ATG)
→I(イソロイシン)(ATT)、位置118のT(ト
レオニン)(ACG)→K(リジン)(AAG)、位置
120のP(プロリン)(CCA)→Q(グルタミン)
(CAA)、位置170のL(ロイシン)(TTA)→
S(セリン)(TCA)および位置213L(ロイシ
ン)(TTA)→S(セリン)(TCA)である。アミ
ノ酸位置122においては、3種類のクローン体がAr
g(アルギニン)(AGA)のシーケンスを有していた
が、2種類のクローン体はLys(リジン)(AAA)
のシーケンスを有していた。組換え型LBNのHBs・
Ag発現においては、Arg(アルギニン)(位置12
2)を有するシーケンスを用いた。 102 - 110 - 120 - 130 - 140 - 150 wt(ayw2) GMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDGNCTCI LBN -I--------------K-Q------------------------------
ケンス(共通配列)を遺伝子型D群の別の3種類の株
(X02496、M32138およびS7)から誘導した。太字は
「a」決定因子領域を示している(Stirk HJ、Thornton
JM、Howard CRの「B型肝炎の表面抗原に対応するトポ
ロジカル・モデル(A topological model for hepatiti
s Bsurface antigen)」(Intervirology、1992
年、33(3)、第148頁乃至第158頁))。
型HBs・Agの過渡的発現 分泌した組換え型HBs・Ag発現は精製した野生型の
組換え型HBs・Agで換算して0.1mg/リットル
乃至0.2mg/リットルの範囲内であった。培養液の
上澄み液内の分泌したHBs・Agのみの発現について
調べた。この結果、72時間および144時間の各時点
における発現量において有意差はなかった。72時間お
よび144時間において収集した上澄み液に比較して2
16時間において収集した培養液の上澄み液は1/5の
みの発現したHBs・Agを示した。
Bs・Ag(LBN)の各培養液の上澄み液を6種類の
モノクローナル抗体(mAb(s))から成るパネルに
よりそれぞれの反応性について調べた。各培養液の上澄
み液を1:40または40倍に希釈して同量の抗原濃度
を確保した。この結果、各アミノ酸変異体は野生型(w
t)HBs・Agに対する4種類のモノクローナル抗体
(mAb(s))の結合親和性に明らかに影響を及ぼし
た。HB−16が最も影響を受けて、約90%の結合強
度が失われた。一方、予想外に、2種類のモノクローナ
ル抗体(mAb(s))、すなわち、HB−13および
HB−14のLBN変異体に対する結合強度は5倍乃至
6倍に有意差をもって増加した。ペプチド・マッピング
により、上記の2種類の抗体が最初のループ領域内の線
形シーケンスに対して特異的であり、モノクローナル抗
体(mAb)のHB−9は第2のループ領域に配置され
ている位置137乃至位置147のシーケンスに対して
特異的であることが分かった。さらにHB−1,HB−
8およびHB−16の3種類のモノクローナル抗体(m
Ab(s))は全て一致した特異性を示した。これらは
免疫ブロット処理においてSDS変性したHBs・Ag
に対して反応しないが、直接酵素免疫測定(EIA)に
おいて比較的高い希釈タイター(滴定量または力価)を
示した。一方、モノクローナル抗体(mAb(s))の
HB−13およびHB−14は野生型およびLBN型の
両方のHBs・Agに対して良好にブロットされ、これ
ら2種類のモノクローナル抗体(mAb(s))が変異
部位に関係なく変性した各エピトープを認識しているこ
とを示した。
原を発現するための発現ベクターであって、請求項1に
記載の変異体B型肝炎表面抗原をコード化する組換え型
遺伝子を含有しているベクター。 (2)請求項1に記載の変異体B型肝炎表面抗原に対応
して培養したモノクローナル抗体。 (3)実施態様(2)のモノクローナル抗体を分泌する
ハイブリドーマ細胞系。 (4)B型肝炎表面抗原に対して特異的に結合する少な
くとも1種類のモノクローナル抗体を含有するコンテナ
を備えている検査サンプル中のB型肝炎の存在を決定す
るための検定装置であって、前記モノクローナル抗体が
実施態様(3)に記載のハイブリドーマ細胞系により分
泌されたモノクローナル抗体である装置。
ルス表面抗原(HBs・Ag)の新規な表面変異体が提
供できる。
統樹および受け入れ番号(accession numbers)を示す
図である。一連のS1株乃至S13株を文献(Norder
H、Hammas B、Lofdahl S、Courouce AM、およびMagnius
LOの「B型肝炎の9種類の異なる血清型のアミノ酸シ
ーケンスの比較および対応するB型肝炎ウイルス株のゲ
ノム分類」(J Gen Virol.1992年5月、73(第5
部)、第1201頁乃至第1208頁)に基づいて入手
した。GenBank受け入れ番号を残りの各株に対して記載
した。
Claims (3)
- 【請求項1】 アミノ酸シーケンスを含む単離した変異
体B型肝炎表面抗原において、B型肝炎野生型ayw2
株からの変異が、位置103においてイソロイシンがメ
チオニンの代わりに存在し、位置118においてリジン
がトレオニンの代わりに存在し、位置120においてグ
ルタミンがプロリンの代わりに存在し、位置170にお
いてセリンがロイシンの代わりに存在し、位置213に
おいてセリンがロイシンの代わりに存在するように生じ
る変異体B型肝炎表面抗原。 - 【請求項2】 検査サンプル中におけるB型肝炎の存在
を決定するための方法において、 (a)検査サンプルを請求項1に記載の変異体B型肝炎
表面抗原に対応して培養した固相に付着した少なくとも
1種類のモノクローナル抗体に接触させて混合物を形成
する工程と、 (b)前記混合物を抗原−抗体の複合体を形成するのに
十分な時間および条件下でインキュベートする工程と、 (c)前記複合体を当該複合体に対して特異的な信号発
生試薬に接合している抗体に接触させる工程と、 (d)前記発生された信号を検出することにより前記検
査サンプル中におけるB型肝炎の存在を決定する工程と
を備えている方法。 - 【請求項3】 検査サンプル中におけるB型肝炎の存在
を決定するための方法において、 (a)検査サンプルを固相に付着した少なくとも1種類
のモノクローナル抗体に接触させて混合物を形成する工
程と、 (b)前記混合物を抗原−抗体の複合体を形成するのに
十分な時間および条件下でインキュベートする工程と、 (c)前記複合体を当該複合体に対して特異的な信号発
生試薬に接合している抗体に接触させる工程と、 (d)前記信号発生試薬から発生された信号を検出する
ことにより前記検査サンプル中におけるB型肝炎の存在
を決定する工程とを備えており、 前記モノクローナル抗体がアミノ酸シーケンスを含む変
異体B型肝炎表面抗原に対応して培養されたモノクロー
ナル抗体であり、当該変異体B型肝炎表面抗原におい
て、B型肝炎野生型ayw2株からの変異が、位置10
3においてイソロイシンがメチオニンの代わりに存在
し、位置118においてリジンがトレオニンの代わりに
存在し、位置120においてグルタミンがプロリンの代
わりに存在し、位置170においてセリンがロイシンの
代わりに存在し、位置213においてセリンがロイシン
の代わりに存在するように生じる方法。
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JP2007534296A (ja) * | 2003-06-20 | 2007-11-29 | デイド・ベーリング・マルブルク・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | B型肝炎ウィルスの新規の表面タンパク質(HBsAg)変異体 |
JP4898434B2 (ja) * | 2003-06-20 | 2012-03-14 | シーメンス・ヘルスケア・ダイアグノスティックス・プロダクツ・ゲーエムベーハー | B型肝炎ウィルスの新規の表面タンパク質(HBsAg)変異体 |
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KR101646830B1 (ko) * | 2013-05-31 | 2016-08-08 | (주)셀트리온 | B형 간염 바이러스를 중화시킬 수 있는 결합 분자 |
CN107001429B (zh) * | 2014-11-28 | 2022-01-04 | 赛特瑞恩股份有限公司 | 乙型肝炎病毒表面抗原的表位及与其特异性结合以中和乙型肝炎病毒的结合分子 |
BR112022005687A2 (pt) | 2019-09-30 | 2022-06-21 | Gilead Sciences Inc | Vacinas contra o hbv e métodos para tratar o hbv |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61153569A (ja) * | 1984-12-11 | 1986-07-12 | メデイカル・アンド・サイエンテイフイツク・リサーチ・アソシエイツ | B型肝炎ウイルス特異性モノクローナル抗体 |
WO1994011495A1 (en) * | 1992-11-06 | 1994-05-26 | Sandoz, Ltd. | Production of human monoclonal antibodies active against hepatitis b surface antigen |
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Patent Citations (3)
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---|---|---|---|---|
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WO1994011495A1 (en) * | 1992-11-06 | 1994-05-26 | Sandoz, Ltd. | Production of human monoclonal antibodies active against hepatitis b surface antigen |
WO1997040164A1 (en) * | 1996-04-25 | 1997-10-30 | Murex Diagnostics Corporation | Hepatitis b monoclonal antibodies |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007534296A (ja) * | 2003-06-20 | 2007-11-29 | デイド・ベーリング・マルブルク・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | B型肝炎ウィルスの新規の表面タンパク質(HBsAg)変異体 |
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JP4898434B2 (ja) * | 2003-06-20 | 2012-03-14 | シーメンス・ヘルスケア・ダイアグノスティックス・プロダクツ・ゲーエムベーハー | B型肝炎ウィルスの新規の表面タンパク質(HBsAg)変異体 |
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