JP2002315579A - 遺伝子クラスター上の構造遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】ＭＬ−２３６Ｂの生合成を促進するＤＮＡを取
得すること。 【解決手段】以下の群から選択されるＤＮＡ。 （ａ）特定の配列を有するヌクレオチド群の１つ又は複
数含むことからなり、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内に導
入されることにより該生産微生物のＭＬ−２３６Ｂ生合
成を促進することを特徴とするＤＮＡ： （ｂ）ａ記載のＤＮＡとストリンジェントな条件下でハ
イブリダイズし、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内に導入さ
れることにより該生産微生物のＭＬ−２３６Ｂ生合成を
促進することを特徴とするＤＮＡ。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還
元酵素阻害剤ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物のＭＬ−２３６
Ｂ生合成を促進するＤＮＡ、該ＤＮＡを含有するベクタ
ー、該ベクターで形質転換された宿主細胞、該宿主細胞
を培養し、次いで該培養物からＭＬ−２３６Ｂを回収す
ることを特徴とするＭＬ−２３６Ｂの製造法等に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】プラバスタチンナトリウムは、高脂血症
改善薬として臨床において使用されている、ＨＭＧ−Ｃ
ｏＡ還元酵素阻害剤である。プラバスタチンは、ペニシ
リウム・シトリナムが生産するＭＬ−２３６Ｂをストレ
プトミセス・カルボフィラス（Streptomyces carbophil
us）により微生物変換することにより得られる（Endo,
A.,et al.,J.Antibiot.,29,1346(1976)：Matsuoka,S.,e
t al.,Eur.J.Biochem.,184,707(1989)記載：特開昭５７
−２２４０号公報記載）。

【０００３】プラバスタチンの前駆体ＭＬ−２３６Ｂ、
及び、プラバスタチンと部分構造を共有するＨＭＧ−Ｃ
ｏＡ阻害剤ロバスタチンは、ともにポリケチドを経て生
合成されることが示されている（Moore,R.N.,et al.,J.
Am.Chem.Soc.,107, 3694(1985)：Shiao,M.and Don,H.
S.,Proc.Natl.Sci.Counc.Repub.China B,11,223(1987)
記載）。

【０００４】ポリケチドとは、酢酸、プロピオン酸、酪
酸などの低分子カルボン酸残基の連続的な縮合反応から
生じるβ―ケト炭素鎖から導かれる化合物の総称であ
り、各β―ケトカルボニル基の縮合・還元様式により、
多様な構造が導かれる（Hopwood, D.A. and Sherman,
D.H., Annu.Rev.Genet., 24, 37-66(1990)：Hutchinso
n,C.R. and Fujii, I., Annu.Rev.Microbiol., 49, 201
-238(1995)記載）。

【０００５】ポリケチドの合成を担うポリケチド・シン
ターゼ（Ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈａｓｅ：以
下、「ＰＫＳ」という。）は糸状菌や細菌の有する酵素
であることが知られており、糸状菌では該酵素の分子生
物学的研究がなされている（Feng,G.H.and Leonard,T.
J.,J.Bacteriol.,177,6246(1995)：Takano,Y.,et al.Mo
l.Gen.Genet.249,162(1995)記載）。ロバスタチン生産
菌であるアスペルギルス・テレウス（Aspergillus terr
eus）については、ロバスタチン生合成に関連したＰＫ
Ｓ遺伝子の解析がなされている（特表平９−５０４４３
６号公報記載）。

【０００６】ところで、糸状菌の二次代謝産物の生合成
関連遺伝子は、ゲノム上でクラスターを形成しているこ
とが少なくない。ポリケチドの生合成系にて、該系に関
与する遺伝子クラスターの存在が知られている。アスペ
ルギルス・フラヴァス（Aspergillus flavus）、アスペ
ルギルス・パラシティカス（Aspergillus parasiticu
s）の生産するポリケチドであるアフラトキシンの生合
成では、ＰＫＳその他ポリケチドの生合成に関与する酵
素蛋白質をコードする遺伝子がクラスター構造を形成し
ていることが知られており、両菌のアフラトキシン生合
成関連遺伝子のゲノム比較解析が行なわれている（Yu,
J.,et al,Appl.Environ.Microbiol.,61,2365(1995)記
載）。アスペルギルス・ニジュランス（Aspergillus ni
dulans）の生産するステリグマトシスチン（sterigmato
cystin）の生合成関連遺伝子は、ゲノム上の連続する約
６０ｋｂの領域においてクラスター構造を形成している
ことが報告されている（Brown,D.W.,et al.,Proc.Natl.
Acad.Sci.USA,93,1418(1996)記載）。

【０００７】しかし、ＭＬ−２３６Ｂ生合成に関する分
子生物学的研究は、現在まで十分にはなされていなかっ
た。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ペニシ
リウム・シトリナムのＭＬ−２３６Ｂ生合成に関連する
ゲノムＤＮＡ（以下、「ＭＬ−２３６Ｂ生合成関連ゲノ
ムＤＮＡ」という。）を、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物の
ゲノムＤＮＡライブラリーよりクローニングし、該ゲノ
ムＤＮＡを解析して該ゲノムＤＮＡ上に構造遺伝子を見
出し、ペニシリウム・シトリナムの（全ＲＮＡに含まれ
る）ｍＲＮＡを鋳型とした逆転写−ポリメラーゼ連鎖反
応（reverse transcription - polymerase chain react
ion：以下、「ＲＴ−ＰＣＲ」という。）により該構造
遺伝子に対応するｃＤＮＡを得、該ｃＤＮＡを含有する
組換えＤＮＡベクターを用いて該生産微生物を形質転換
することにより、該生産微生物においてＭＬ−２３６Ｂ
の生合成が促進されることを見出し、本発明を完成し
た。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は、（１）以下の
群から選択されるＤＮＡ、（ａ）配列表の配列番号３７
のヌクレオチド番号１乃至１６６２で示される塩基配列
を１つ又は複数含むことからなり、ＭＬ−２３６Ｂ生産
微生物内に導入されることにより該生産微生物のＭＬ−
２３６Ｂ生合成を促進することを特徴とするＤＮＡ：
（ｂ）（ａ）記載のＤＮＡとストリンジェントな条件下
でハイブリダイズし、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内に導
入されることにより該生産微生物のＭＬ−２３６Ｂ生合
成を促進することを特徴とするＤＮＡ、（２）形質転換
大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡＫｅｘｐＥ ＳＡＮＫ
７２４９９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−７００５）より得るこ
とができる、（１）記載のＤＮＡ、（３）以下の群から
選択されるＤＮＡ、（ａ）配列表の配列番号４１のヌク
レオチド番号１乃至１３８０で示される塩基配列を１つ
又は複数含むことからなり、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物
内に導入されることにより該生産微生物のＭＬ−２３６
Ｂ生合成を促進することを特徴とするＤＮＡ：（ｂ）
（ａ）記載のＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイ
ブリダイズし、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内に導入され
ることにより該生産微生物のＭＬ−２３６Ｂ生合成を促
進することを特徴とするＤＮＡ、（４）形質転換大腸菌
Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡＫｅｘｐＲ ＳＡＮＫ ７２５
９９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−７００６）より得ることがで
きる、（３）記載のＤＮＡ、（５）（１）乃至（４）の
いずれか一つに記載のＤＮＡを含む組換えＤＮＡベクタ
ー、（６）形質転換大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡＫｅ
ｘｐＥ ＳＡＮＫ ７２４９９（ＦＥＲＭ ＢＰ−７０
０５）株より得ることができる、（５）記載の組換えＤ
ＮＡベクター、（７）形質転換大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉ
ｐＳＡＫｅｘｐＲ ＳＡＮＫ ７２５９９（ＦＥＲＭ
ＢＰ−７００６）株より得ることができる、（５）記載
の組換えＤＮＡベクター、（８）（５）乃至（７）のい
ずれか一つに記載の組換えＤＮＡベクターで形質転換さ
れた宿主細胞、（９）ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物である
ことを特徴とする、（８）記載の宿主細胞、（１０）ペ
ニシリウム・シトリナム（Penicillium citrinum）であ
ることを特徴とする、（９）記載の宿主細胞、（１１）
（９）又は（１０）記載の宿主細胞を培養し、次いで該
培養物からＭＬ−２３６Ｂを回収することを特徴とす
る、ＭＬ−２３６Ｂの製造法、（１２）大腸菌であるこ
とを特徴とする、（８）記載の宿主細胞、（１３）形質
転換大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡＫｅｘｐＥ ＳＡＮ
Ｋ ７２４９９（ＦＥＲＭ ＢＰ−７００５）株であ
る、（１２）記載の宿主細胞、（１４）形質転換大腸菌
Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡＫｅｘｐＲ ＳＡＮＫ ７２５
９９（ＦＥＲＭ ＢＰ−７００６）株である、（１２）
記載の宿主細胞、に関する。

【００１０】

【発明の実施の形態】以下、本発明をより詳細に説明す
る。

【００１１】本発明は、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内に
導入されることにより該生産微生物のＭＬ−２３６Ｂ生
合成を促進し得るｃＤＮＡ（以下、「ＭＬ−２３６Ｂ生
合成促進ｃＤＮＡ」という。）等に関する。

【００１２】ＭＬ−２３６Ｂ生合成ｃＤＮＡのような、
本発明のポリヌクレオチドは、次の群より選択される； （Ｉ）ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物のゲノム遺伝子中のＭ
Ｌ−２３６Ｂ生合成関連ゲノムＤＮＡ上に存在する構造
遺伝子から転写されたｍＲＮＡ又は該ｍＲＮＡを含む全
ＲＮＡを鋳型として合成されたＤＮＡ。 （ＩＩ）（Ｉ）記載のＤＮＡ、及び、（Ｉ）記載のＤＮ
Ａを第一鎖として合成された第二鎖ＤＮＡが会合して生
じる二本鎖ＤＮＡ。 （ＩＩ）（ＩＩ）記載の二本鎖ＤＮＡをクローニング等
の手法により複製又はは増幅することによって得られる
二本鎖ＤＮＡ。 （ＩＶ）（Ｉ）乃至（ＩＩＩ）のいずれか一つに記載の
ＤＮＡと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズ
するＤＮＡ （ＩＶ）のＤＮＡとしては、配列表の配列番号３７のヌ
クレオチド番号１乃至１６６２で示される塩基配列に１
つ若しくは２つ以上のヌクレオチドの置換、欠失、付加
及び／又は挿入が生じたものであり、且つ、ＭＬ−２３
６Ｂ生産微生物内に導入されることにより該微生物のＭ
Ｌ−２３６Ｂの生合成を促進するものを挙げることがで
きる。

【００１３】また、（ＩＶ）のＤＮＡとしては、配列表
の配列番号４１のヌクレオチド番号１乃至１３８０で示
される塩基配列に１つ若しくは２つ以上のヌクレオチド
の置換、欠失、付加及び／又は挿入が生じたものであ
り、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内に導入されることによ
り該微生物のＭＬ−２３６Ｂの生合成を促進するものを
挙げることができる。

【００１４】本発明において、ハイブリダイズとは、２
本の一本鎖核酸同士が互いに相補的な領域又は相補性の
高い領域において二本鎖を形成することをいい、ストリ
ンジェントな条件とは、ハイブリダイゼーション液の組
成が６×ＳＳＣ（１×ＳＳＣの組成は、１５０ｍＭＮａ
Ｃｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウム。）であり且つハ
イブリダイゼーションを行なう際の保温温度が５５℃の
場合をいう。

【００１５】ＭＬ−２３６Ｂ生合成促進ｃＤＮＡは、Ｍ
Ｌ−２３６Ｂ生産微生物のｃＤＮＡライブリーから所望
のｃＤＮＡを含むクローンを単離する方法、又はＭＬ−
２３６Ｂ生合成関連ゲノムＤＮＡの塩基配列に基いて作
製される一組のプライマー及びＭＬ−２３６Ｂ生産微生
物のｍＲＮＡ若しくは全ＲＮＡを使用するＲＴ−ＰＣＲ
により得ることができる。

【００１６】本発明において、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生
物とは、ＭＬ−２３６Ｂ生産能を先天的に有する微生物
をいう。ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物としては、例えば、
ペニシリウム（Penicillium）属に属するＭＬ−２３６
Ｂ生産糸状菌が挙げられ、より具体的には、ペニシリウ
ム・シトリナム、ペニシリウム・ブレビコンパクタム
（Penicilium brevicompactum：Brown,A.G.,et al.,J.C
hem.Soc.Perkin-1.,1165(1976)記載）、ペニシリウム・
シクロピウム（Penicillium cyclopium：Doss,S.L.,et
al.,J.Natl.Prod.,49,357(1986)記載）等が例示され
る。また、これら以外に、ユーペニシリウム・エスピー
Ｍ６６０３（ Eupenicillium sp.M6603：Endo,A.,et
al.,J.Antibiot.-Tokyo,39,1609(1986)記載）、ペシロ
ミセス・ビリディス ＦＥＲＭ Ｐ−６２３６（Paecil
omyces viridis FERM P-6236：特開昭５８−９８０９２
号公報記載）、ペシロミセス・エスピー Ｍ２０１６
（Paecilomyces sp.M2016：Endo,A.,et al.,J.Antibio
t.-Tokyo,39,1609(1986)記載）、トリコデルマ・ロンギ
ブラチアタム Ｍ６７３５（Trichoderma longibrachia
tum M6735：Endo,A.,et al.,J.Antibiot.-Tokyo,39,160
9(1986)記載）、ヒポミセス・クリソスペルムス ＩＦ
Ｏ ７７９８（Hypomyces chrysospermus IFO 7798：En
do,A.,et al.,J.Antibiot.-Tokyo,39,1609(1986)記
載）、グリオクラディウム・エスピー ＹＪ−９５１５
（Gliocladium sp. YJ-9515：ＷＯ９８０６８６７号公
報記載）、トリコデルマ・ビリデ ＩＦＯ ５８３６
（Trichoderma viride IFO 5836：特公昭６２−１９１
５９号公報記載）、ユーペニシリウム・レチクリスポル
ム ＩＦＯ ９０２２（Eupenicillium reticulisporum
IFO 9022：特公昭６２−１９１５９号公報記載）等を
例示することができる。

【００１７】これらのＭＬ−２３６Ｂ生産微生物のう
ち、好適にはペニシリウム・シトリナムであり、より好
適にはペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０
株である。ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３
８０株は、平成４年（１９９２年）１２月２２日付け
で、日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号の通商産業
省工業技術院生命工学工業技術研究所に国際寄託され、
受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−４１２９を付与された。これ
らのＭＬ−２３６Ｂ生産微生物には、自然界から単離さ
れた株、自然に生じた変異株及び人工的に生じさせた変
異株が包含される。

【００１８】ＭＬ−２３６Ｂ生合成関連ゲノムＤＮＡ
は、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物のゲノムＤＮＡライブラ
リーに対して、類似の機能を有するものと推測される糸
状菌由来のＤＮＡの塩基配列に基いて設計されるプロー
ブを用いてスクリーニングを行なうことにより得ること
ができる。

【００１９】ゲノムＤＮＡライブラリーの作製法として
は、通常真核生物のゲノムＤＮＡライブラリーを作製す
るための方法であれば特に限定されないが、例えば、マ
ニアティスらの方法（Maniatis,T.,et al.,Molecular c
loning,a laboratory manual,2nd ed.,Cold Spring Har
bor Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)記載）
等が挙げられる。

【００２０】ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物のゲノムＤＮＡ
は、該微生物培養物から該微生物を回収して物理的に破
砕した後、核内ＤＮＡを抽出、精製することにより得ら
れる。

【００２１】ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物の培養は、各Ｍ
Ｌ−２３６Ｂ生産微生物に適した条件下で行なうことが
できる。好適なＭＬ−２３６Ｂ生産微生物であるペニシ
リウム・シトリナムの培養は、該微生物を培養したスラ
ントから、ＭＢＧ３−８培地（組成；７％(w/v)グリセ
リン、３％(w/v)グルコース、１％(w/v)大豆粉、１％(w
/v)ペプトン（極東製薬工業（株）製）、１％(w/v)コー
ンスチープリカー（ホーネンコーポレーション（株）
製）、０．５％(w/v)硝酸ナトリウム 、０．１％(w/v)
硫酸マグネシウム七水和物、ｐＨ６．５）へ該微生物を
接種し、２２乃至２８℃、３乃至７日間、振盪しつつ保
温することにより行なうことができる。該スラントは、
溶解させたＰＧＡ寒天培地（組成；２００ｇ/Ｌ馬鈴薯
抽出液、１５％(w/v)グリセリン、２％(w/v)寒天）を試
験管に注ぎ、傾斜させつつ固化させたものに、白金耳を
用いてペニシリウム・シトリナムを接種し、２２乃至２
８℃、７乃至１５日保温することにより作製する。該ス
ラントを０乃至４℃で保存することにより、該スラント
上でＭＬ−２３６Ｂ生産微生物を継続的に生存させるこ
とができる。

【００２２】液体培地で培養したＭＬ−２３６Ｂ生産微
生物は、遠心分離により、固体培地で培養した該微生物
は、セル・スクレーパー等でかきとることにより、それ
ぞれ回収することができる。

【００２３】ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物の物理的破砕
は、該微生物を液体窒素等で凍結しつつ乳鉢と乳棒です
り潰すことにより行なうことができる。破砕された微生
物の核内ＤＮＡの抽出は、ドデシル硫酸ナトリウム（ｓ
ｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｐｈａｔｅ：以下、
「ＳＤＳ」という。）等の界面活性剤を用いて行なうこ
とができる。抽出されたゲノムＤＮＡは、フェノール・
クロロホルム抽出を行なうことにより除タンパクされ、
エタノール沈澱を行なうことにより沈澱として回収する
ことができる。

【００２４】得られたゲノムＤＮＡを適当な制限酵素で
限定分解させ、断片化する。限定分解に使用される制限
酵素としては、通常入手可能な制限酵素であれば特に限
定されないが、例えば、Ｓａｕ３ＡＩ等を挙げることが
できる。断片化されたＤＮＡをゲル電気泳動に供し、適
当なサイズのゲノムＤＮＡを含むゲルからＤＮＡを回収
する。ＤＮＡ断片のサイズには特に限定はないが、好適
には２０ｋｂ以上である。

【００２５】ゲノムＤＮＡライブラリー作製用のＤＮＡ
ベクターとしては、該ＤＮＡベクターで形質転換された
宿主細胞内で複製されるのに必要な塩基配列を有するも
のであれば特に限定されないが、例えば、プラスミドベ
クター、ファージベクター、コスミドベクター、ＢＡＣ
ベクター等が挙げられ、好適にはコスミドベクターであ
る。また、これらＤＮＡベクターは発現ベクターであっ
てもよい。さらに、該ＤＮＡベクターは、該ＤＮＡベク
ターで形質転換された宿主細胞に表現形質（ｐｈｅｎｏ
ｔｙｐｅ）の選択性を付与する塩基配列を有しているこ
とが好ましい。

【００２６】該ＤＮＡベクターは、クローニング及び機
能発現の双方に適用できるものであることが好ましい。
該ＤＮＡベクターとしては、複数の微生物群に形質転換
可能なＤＮＡベクター、すなわちシャトルベクターを用
いることが好ましい。該シャトルベクターは、少なくと
も一方の微生物群の宿主細胞において複製されるのに必
要な塩基配列を有する。また、シャトルベクターは複数
の微生物群の宿主にそれぞれ表現形質の選択性を付与す
る塩基配列を有していることが好ましい。

【００２７】このようなシャトルベクターにより形質転
換される微生物群の組合わせとしては、一方の微生物群
がクローニングに適用でき且つ他方がＭＬ−２３６Ｂ生
産能を有していれば特に限定されないが、例えば、細菌
及び糸状菌の組合わせ、酵母及び糸状菌の組合わせ等が
挙げられ、好適には細菌及び糸状菌の組合わせである。
細菌としては、通常遺伝子工学に使用されるものであれ
ば特に限定されないが、例えば、大腸菌、枯草菌等を挙
げることができ、好適には大腸菌であり、より好適には
大腸菌ＸＬ１−ＢｌｕｅＭＲ株である。酵母としては、
通常遺伝子工学に用いられるものであれば特に限定され
ないが、例えば、サッカロミセス・セレビシエ（Saccha
romyces cerevisiae）等を挙げることができる。糸状菌
としては、上述のＭＬ−２３６Ｂ生産微生物等が挙げら
れる。なお、本発明において微生物群は、細菌、糸状菌
及び酵母から選択される。

【００２８】このようなシャトルベクターとしては、例
えば、適当な表現形質選択マーカー遺伝子及びコス（ｃ
ｏｓ）部位を有するコスミドベクター等を挙げることが
でき、好適には大腸菌ハイグロマイシンＢホスフォトラ
ンスフェラーゼ遺伝子配列を有するプラスミドｐＳＡＫ
３３３（特開平３−２６２４８６号公報記載）にコスミ
ドベクターｐＷＥ１５（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ社製）の
有するコス（ｃｏｓ）部位を挿入して作製されたｐＳＡ
Ｋｃｏｓ１が挙げられるが、これらに限定されない。ｐ
ＳＡＫｃｏｓ１の構築手順については図１に記載されて
いる。

【００２９】上述のＭＬ−２３６Ｂ生産微生物ゲノムＤ
ＮＡ断片をライゲーションしたシャトルベクターを宿主
細胞に導入することにより、所望のゲノムＤＮＡライブ
ラリーが完成する。宿主細胞には、好適には大腸菌、よ
り好適には大腸菌ＸＬ１−ＢｌｕｅＭＲ株がそれぞれ使
用される。宿主細胞が大腸菌の場合、該導入はｉｎｖｉ
ｔｒｏパッケージングにより行なう。本発明において、
形質転換とは、ｉｎｖｉｔｒｏパッケージングによる外
来ＤＮＡの導入も意味し、ｉｎ ｖｉｔｒｏパッケージ
ングにより外来ＤＮＡを導入された細胞も形質転換細胞
の意味に包含される。

【００３０】所望のクローンのスクリーニングには、抗
体又は核酸プローブを用い、好適には、核酸プローブを
用いる。該核酸プローブは、糸状菌のポリケチド生合成
関連遺伝子の塩基配列に基づいて作製することができ
る。このような遺伝子としては、ポリケチドの生合成へ
の関与が確認され且つ塩基配列が公知のものであれば特
に限定されないが、例えば、アスペルギルス・フラヴァ
ス（Aspergillus flavus）、アスペルギルス・パラシテ
ィカス（Aspergillus parasiticus）のアフラトキシン
ＰＫＳ遺伝子、アスペルギルス・ニデュランス（Asperg
illus nidulans）のストリグマトシスチンＰＫＳ遺伝子
等を挙げることができる。

【００３１】該核酸プローブは、上述の公知の塩基配列
に基づいて、ゲノムＤＮＡの部分塩基配列からなるオリ
ゴヌクレオチドプローブの合成により、またオリゴヌク
レオチドプライマーを作製し、ゲノムＤＮＡを鋳型とし
たポリメラーゼ連鎖反応（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈ
ａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ：以下、「ＰＣＲ」とい
う。：Saiki,R.K.,et al.,Science,239,487(1988)記
載）を行なうことにより、又は、ｍＲＮＡを鋳型とした
ＲＴ−ＰＣＲ等により、取得することができる。

【００３２】核酸プローブのＭＬ−２３６Ｂ生産微生物
からのＰＣＲ又はＲＴ−ＰＣＲによる取得方法は、以下
に述べる通りである。

【００３３】ＰＣＲ又はＲＴ−ＰＣＲに使用するプライ
マー（以下、「ＰＣＲ用プライマー」という。）の設計
は、塩基配列が公知であるところのポリケチド生合成関
連遺伝子の塩基配列に基づいて、好適にはアスペルギル
ス・フラヴァス（Aspergillus flavus）、アスペルギル
ス・パラシティカス（Aspergillus parasiticus）のア
フラトキシンＰＫＳ遺伝子又はアスペルギルス・ニデュ
ランス（Aspergillusnidulans）のストリグマトシスチ
ンＰＫＳ遺伝子の塩基配列に基づいて設計することがで
きる。これらのうちいずれか一つのＰＫＳのアミノ酸配
列上で種間保存性の高いアミノ酸配列を塩基配列に還元
することにより、ＰＣＲ用プライマーを設計することが
できる。アミノ酸配列から塩基配列に還元する方法とし
ては、宿主のコドン使用頻度を考慮して単一の配列を導
く方法又は多重コドンを使用して混合配列（以下、「ミ
ックス・プライマー」という。）を導く方法の二通りが
使用できる。後者の場合、塩基配列にヒポキサンチンを
含有させることにより多重度を下げることができる。

【００３４】また、ＰＣＲ用プライマーには、鋳型鎖と
アニーリングするための塩基配列に加え、該プライマー
の５’−末端に適宜塩基配列を付加させることが可能で
ある。そのような塩基配列としては、該プライマーがＰ
ＣＲに使用可能であれば特に限定されないが、例えば、
ＰＣＲ産物についてその後のクローニング操作を行なう
のに便利な塩基配列等が挙げられ、このような塩基配列
としては、制限酵素認識配列を含有するか又は該認識配
列からなる塩基配列を例示することができる。

【００３５】さらに、ＰＣＲ用プライマーの設計におい
ては、グアニン塩基の数とシトシン塩基の数の和が総塩
基数の４０乃至６０％であることが好ましい。また、自
己アニーリングし難いことが好ましい。一組のＰＣＲ用
プライマーにおいては、双方のＰＣＲ用プライマー同士
がアニーリングし難いことが好ましい。

【００３６】また、ＰＣＲ用プライマーの塩基数は、Ｐ
ＣＲに適用できれば特に限定されないが、その範囲の下
限は１０乃至１４、上限は４０乃至６０であり、好適な
範囲は１４乃至４０である。

【００３７】さらに、ＰＣＲ用プライマーは、好適には
ＤＮＡである。該プライマーを構成するヌクレオシドと
しては、デオキシアデノシン、デオキシシチジン、デオ
キシチミジン及びデオキシグアノシンに加え、デオキシ
イノシンが挙げられる。また、ＰＣＲ用プライマーの
５’−末端に位置するヌクレオシドの５’−位は、水酸
基であるか、又は、該水酸基に一リン酸がエステル結合
した状態である。

【００３８】さらに、ＰＣＲ用プライマーの合成は、通
常核酸の合成に使用される方法、例えば、ホスフォロア
ミダイト法により行なうことができ、このような方法に
は、ＤＮＡ自動合成機が好適に使用される。

【００３９】ＰＣＲの鋳型としては、ＭＬ−２３６Ｂ生
産微生物のゲノムＤＮＡが、ＲＴ−ＰＣＲの鋳型として
は、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物のｍＲＮＡが、それぞれ
使用できる。なお、ＲＴ−ＰＣＲの鋳型としては、ｍＲ
ＮＡの代わりに全ＲＮＡを使用することも可能である。

【００４０】ＰＣＲ産物又はＲＴ−ＰＣＲ産物をこのも
のに適したＤＮＡベクターに組込むことにより、該ＰＣ
Ｒ産物又はＲＴ−ＰＣＲ産物をクローニングすることが
できる。該クローニングに用いるＤＮＡベクターとして
は、通常ＤＮＡ断片をクローニングするのに使用される
ＤＮＡベクターであれば特に限定されない。また、ＰＣ
Ｒ産物又はＲＴ−ＰＣＲ産物のクローニングを簡便に行
なうキットが市販されており、このようなキットとし
て、例えば、Ｏｒｉｇｉｎａｌ ＴＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ
Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製：ＤＮＡベクターと
してｐＣＲ２．１を使用している。）が好適に使用され
る。

【００４１】クローニングしたＰＣＲ産物の取得は、所
望のＰＣＲ産物を含んでいることを確認した形質転換宿
主細胞を培養し、該細胞からプラスミドを抽出、精製
し、得られたプラスミドから挿入ＤＮＡ断片を回収する
ことにより行なうことができる。

【００４２】形質転換宿主細胞の培養は、各宿主細胞に
適した条件下で行なうことができる。好適な宿主細胞で
ある大腸菌の形質転換体の培養は、ＬＢ培地（１％(w/
v)トリプトン、０．５％(w/v)イーストエキストラク
ト、０．５％(w/v)塩化ナトリウム）で、３０乃至３７
℃、１８時間乃至２日間、振盪しつつ保温することによ
り行なうことができる。

【００４３】形質転換宿主細胞の培養物からのプラスミ
ドの調製は、該宿主細胞体を回収し、ゲノムＤＮＡやタ
ンパク質を除去することによりなされる。好適な宿主細
胞である大腸菌の形質転換体の培養物からのプラスミド
の調製は、マニアティスらのアルカリ法（Maniatis,T.,
et al.,Molecular cloning,a laboratory manual,2nde
d.,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbo
r,N.Y.(1989)記載）により行なうことができる。また、
より純度の高いプラスミドを得るためのキットが市販さ
れており、このようなキットとして、例えば、Ｐｌａｓ
ｍｉｄ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）が好適
に使用される。さらに、プラスミドの大量調製を行うキ
ットが市販されており、このようなキットとして、例え
ば、Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍａｘｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ
社製）が好適に使用される。

【００４４】得られたプラスミドのＤＮＡ濃度は、ＤＮ
Ａ試料を適宜希釈して波長２６０ｎｍにおける吸光度を
測定し、５０μｇ／ｍｌ濃度のＤＮＡ水溶液の波長２６
０ｎｍにおける吸光度を１として算出することができ
る。ＤＮＡの純度は、波長２８０及び２６０ｎｍの吸光
度の比率から算出することができる（いずれもManiati
s,T.,et al.,Molecular cloning,a laboratory manual,
2nd ed.,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring
Harbor,N.Y.(1989)記載）。

【００４５】核酸プローブの標識は、放射性標識及び非
放射性標識に大別される。放射性標識に使用される放射
性核種としては、通常使用されるものであれば特に限定
されないが、例えば、³²Ｐ，³⁵Ｓ、¹⁴Ｃ等を挙げること
ができ、好適には³²Ｐである。非放射性標識に用いる試
薬としては、通常核酸の標識に用いられるものであれば
特に限定されないが、例えば、ジゴキシゲニン、ビオチ
ン等が挙げられ、好適にはジゴキシゲニンである。核酸
プローブを標識する方法としては、通常使用される方法
であれば特に限定されないが、例えば、標識基質を用い
たＰＣＲにより該産物中に取り込ませる方法、ニック・
トランスレーション法、ランダム・プライマー法、末端
標識法、標識基質を用いてオリゴヌクレオチドＤＮＡを
合成する方法等を挙げることができ、核酸プローブの種
類等によりこれらの方法から適宜選択できる。

【００４６】核酸プローブの塩基配列と同一の塩基配列
がＭＬ−２３６Ｂ生産微生物のゲノム中に存在すること
は、該微生物のゲノムＤＮＡに対するサザンブロット・
ハイブリダイゼーションにより確認することができる。

【００４７】サザンブロット・ハイブリダイゼーション
は、マニアティスらの方法（Maniatis,T.,et al.,Molec
ular cloning,a laboratory manual,2nd ed.,Cold Spri
ng Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)
記載）により行なうことができる。

【００４８】上述の通り作製された標識核酸プローブを
用い、ゲノムＤＮＡライブラリーから目的クローンをス
クリーニングすることができる。該スクリーニング法と
しては、通常遺伝子クローニングに使用される方法であ
れば特に限定されないが、好適にはコロニー・ハイブリ
ダイゼーション法（Maniatis,T.,et al.,Molecular clo
ning,a laboratory manual,2nd ed.,Cold Spring Harbo
r Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)記載）を
使用することができる。

【００４９】コロニー・ハイブリダイゼーションに用い
るコロニーの培養は、各宿主細胞に適した条件下で行な
うことができ、好適な宿主細胞である大腸菌の形質転換
体の培養は、ＬＢ寒天培地（１％(w/v)トリプトン、
０．５％(w/v)イーストエキストラクト、０．５％(w/v)
塩化ナトリウム、１．５％(w/v)アガロース）上で、３
０乃至３７℃、１８時間乃至２日間保温することにより
行なうことができる。

【００５０】コロニー・ハイブリダイゼーションにより
得られる陽性クローンからの組換えＤＮＡベクターの調
製は、該陽性クローンの培養物からプラスミドを抽出及
び精製することによりなされる。

【００５１】本発明において得られた陽性クローンであ
る形質転換大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉｐＭＬ４８ ＳＡＮＫ
７１１９９株は、平成１１年（１９９９年）７月７日付
けで、日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号の通商産
業省工業技術院生命工学工業技術研究所に国際寄託さ
れ、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６７８０を付された。

【００５２】Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＭＬ４８ ＳＡＮＫ７１
１９９株が保持する組換えＤＮＡベクターはｐＭＬ４８
と命名された。

【００５３】陽性クローンの保持する組換えＤＮＡベク
ターが所望のＭＬ−２３６Ｂ生合成関連ゲノムＤＮＡを
含んでいることは、該組換えＤＮＡベクターの挿入塩基
配列の決定、サザンブロット・ハイブリダイゼーション
又は機能発現により確認できる。

【００５４】ＤＮＡの塩基配列は、マキサム−ギルバー
トの化学修飾法 （Maxiam,A.M.M. and Gilbert,W.,Meth
ods in Enzymology,65,499(1980)記載）又はジデオキシ
ヌクレオチド鎖終結法 （Messing,J. and Vieira,J.,Ge
ne,19,269(1982)記載）等により決定できる。なお、塩
基配列決定に供するプラスミドＤＮＡとしては、より純
度の高い標品が好ましい。

【００５５】ｐＭＬ４８の挿入塩基配列は配列表の配列
番号１で示される。配列表の配列番号２で示される塩基
配列は、配列番号１で示される塩基配列に対して完全に
相補的である。通常ゲノムＤＮＡの塩基配列は同種内に
おいて遺伝的多型（ポリモルフィズム：ｐｏｌｙｍｏｒ
ｐｈｙｓｍ）を有している。また、ＤＮＡクローニング
の過程及び塩基配列決定の過程において、ヌクレオチド
の置換等が一定の確率で生じ得る。従って、本発明のＭ
Ｌ−２３６Ｂ生合成関連ゲノムＤＮＡは、配列表の配列
番号１又は２のヌクレオチド番号１乃至３４２０３に示
される塩基配列を有するＤＮＡにハイブリダイズするゲ
ノムＤＮＡ、及び配列表の配列番号１又は２のヌクレオ
チド番号１乃至３４２０３に示される塩基配列を有する
ＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブリダイズす
るゲノムＤＮＡをも包合する。これらゲノムＤＮＡとし
ては、配列表の配列番号１又は２のヌクレオチド番号１
乃至３４２０３で示される塩基配列に１つ又は２つ以上
のヌクレオチドの置換、欠失、付加及び／又は挿入が生
じたもの、並びに、ＭＬ−２３６Ｂ又はその誘導体を生
産する、ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８
０株以外の微生物に由来し、且つ該微生物によるＭＬ−
２３６又はその誘導体の生合成に関連するものが包合さ
れる。

【００５６】ＭＬ−２３６Ｂ生合成関連ゲノムＤＮＡの
解析法は次の１）乃至３）に従う。 １）遺伝子解析ソフトによる解析 ゲノムＤＮＡ配列中の遺伝子領域の推定は、既存の遺伝
子解析プログラム（Ｇｅｎｅ Ｆｉｎｄｉｎｇプログラ
ム（以下、「ＧＲＡＩＬ」という。）、及び配列の相同
性検索プログラム（ＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＸ）に
より行うことができる。

【００５７】ＧＲＡＩＬはゲノム配列の「遺伝子配列ら
しさ」を評価する７つのパラメータに分割し、それらの
結果をニューラルネット法を用いて統合することによ
り、ゲノムＤＮＡ上の構造遺伝子を検索するプログラム
（Uberbacher,E.C.& Mural,R.J.,Proc.Natl.Acad.Sci.U
SA.,88,11261(1991)記載）であり、ＡｐｏＣｏｍ ＧＲ
ＡＩＬ Ｔｏｏｌｋｉｔ（ＡＰＯＣＯＭ社製）が好適に
使用される。

【００５８】ＢＬＡＳＴは核酸配列及びアミノ酸配列の
相同性検索を行なうアルゴリズム（Altechul,S.F.,Madd
en,T.L.,et al.,Nucl.Acids Res.,25,3389(1997)記載）
を用いたプログラムである。

【００５９】ゲノムＤＮＡ配列を適当な長さに分割し、
ＢＬＡＳＴＮを用いて遺伝子データベースに対し相同性
検索することにより、被検ＤＮＡ配列上の構造遺伝子の
位置及び方向を推定することができる。また、分割され
たゲノムＤＮＡ配列を６つの翻訳フレーム（センス配列
及びアンチセンス配列に各々３つずつ）に従ってアミノ
酸配列に翻訳し、該アミノ酸配列のペプチド・データベ
ースに対する相同性検索をＢＬＡＳＴＸを用いて行なう
ことにより、被検ＤＮＡ配列上の構造遺伝子の位置及び
方向の推定を行なうこともできる。さらに、真核生物に
おいては、ゲノムＤＮＡ配列中に含まれる構造遺伝子の
コード領域がイントロン配列により分断されている場合
があり、このようなギャップを有する構造遺伝子の解析
にはギャップ含有配列用のＢＬＡＳＴがより有効であ
り、Ｇａｐｐｅｄ−ＢＬＡＳＴ（ＢＬＡＳＴ２：ＷＩＳ
ＣＯＮＳＩＮ ＧＣＧ ｐａｃｋａｇｅ ｖｅｒ． １
０．０に搭載）が好適に使用される。 ２）ノーザンブロット・ハイブリダイゼーション法によ
る解析 ノーザンブロット・ハイブリダイゼーション法により、
１）記載の解析法により推定される構造遺伝子の発現を
調べることができる。

【００６０】ノーザンブロットに供するＭＬ−２３６Ｂ
生産微生物の全ＲＮＡは、該微生物の培養物より得るこ
とができる。好適なＭＬ−２３６Ｂ生産微生物であるペ
ニシリウム・シトリナムの培養は、該菌のスラントから
ＭＧＢ３−８培地に該菌を接種し、２２乃至２８℃、１
乃至４日間、振盪しつつ保温することにより行うことが
できる。

【００６１】ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物からのＲＮＡの
抽出は、通常全ＲＮＡを調製するのに使用される方法で
あれば特に限定されないが、例えば、グアニジン・チオ
シアネート・ホットフェノール法、グアニジン・チオシ
アネート−グアニジン・塩酸法等が挙げられる。また、
より純度の高い全ＲＮＡを調製するための市販キットと
しては、例えば、ＲＮｅａｓｙ Ｐｌａｎｔ Ｍｉｎｉ
Ｋｉｔ（キアゲン社製）等が挙げられる。さらに、ｍ
ＲＮＡは、全ＲＮＡをオリゴ（ｄＴ）カラムに添加し、
該カラムに吸着した画分を回収することにより得ること
ができる。

【００６２】ＲＮＡのメンブレンへのトランスファー、
プローブの調製、ハイブリダイゼーション及びシグナル
の検出は、上述のサザンブロット・ハイブリダイゼーシ
ョンと同様に行なうことができる。 ３）５’−末端及び３’−末端の解析 各構造遺伝子の５’−末端及び３’−末端の解析は、Ｒ
ＡＣＥ（ｒａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ）法により行なうことができる。
ＲＡＣＥは、ｍＲＮＡを鋳型とし、塩基配列が決定され
ている領域から塩基配列が決定されていない５’−末端
又は３’−末端領域までを含むｃＤＮＡを、ＲＴ−ＰＣ
Ｒの応用により取得する方法である（Frohman,M.A.,Met
hods in Enzymol.,218,340(1993)記載）。

【００６３】５’ＲＡＣＥは以下の方法に従う。ｍＲＮ
Ａを鋳型とし、塩基配列中の公知の部分に基いて設計さ
れたアンチセンス側のオリゴヌクレオチドＤＮＡ（１）
をプライマーとした逆転写酵素反応によりｃＤＮＡ第一
鎖を合成した後、ターミナルデオキシヌクレオチヂルト
ランスフェラーゼにより該ｃＤＮＡ第一鎖の３’−末端
にホモポリメリックな（ｈｏｍｏｐｏｌｙｍｅｒｉｃ：
単一塩基からなる）ヌクレオチド鎖を付加させる。該ｃ
ＤＮＡ第一鎖を鋳型とし且つ該ホモポリメリックな塩基
配列に相補的な塩基配列を含むセンス側のオリゴヌクレ
オチドＤＮＡ、及び、アンチセンス側に存在し且つオリ
ゴヌクレオチドＤＮＡ（１）より３’−側に存在するオ
リゴヌクレオチドＤＮＡ（２）をプライマーとしたＰＣ
Ｒによって、５’−末端領域の二本鎖ｃＤＮＡを増幅さ
せる方法である（Frohman,M.A.,Methods in Enzymol.,2
18,340(1993)記載）。５’ＲＡＣＥ用のキットが市販さ
れており、このようなキットとして、例えば、５’ＲＡ
ＣＥ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ Ｒａｐｉｄ Ａｍｐｌｉ
ｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ，Ｖｅｒ
ｓｉｏｎ ２．０（ＧＩＢＣＯ社製）等が好適に使用さ
れる。

【００６４】３’ＲＡＣＥは、ｍＲＮＡの３’−末端に
存在するポリＡ領域を利用する方法である。すなわち、
ｍＲＮＡを鋳型として、オリゴｄ（Ｔ）アダプターをプ
ライマーとした逆転写酵素反応によりｃＤＮＡ第一鎖を
合成した後、該ｃＤＮＡ第一鎖を鋳型として、塩基配列
中の公知の部分に基いて設計されたセンス側のオリゴヌ
クレオチドＤＮＡ（３）、及び、アンチセンス側のオリ
ゴｄ（Ｔ）アダプターをプライマーとしたＰＣＲによっ
て、３’−末端領域の二本鎖ｃＤＮＡを増幅させる方法
である。３’ＲＡＣＥ用のキットが市販されており、こ
のようなキットとして、例えば、Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇ
ｏ Ｔ−ｐｒｉｍｅｄ Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ Ｋ
ｉｔ（Ｐｈｒａｍａｃｉａ社製）が好適に使用される。

【００６５】ＲＡＣＥにおける塩基配列中の公知の部分
に基いたプライマーの設計には、上記１）及び２）の解
析結果が好適に利用できる。

【００６６】以上、１）乃至３）に記載した解析法によ
り、ゲノムＤＮＡ配列上の構造遺伝子の方向、並びに、
構造遺伝子中の転写開始点の位置、転写終始点の位置、
翻訳開始コドンの位置、翻訳終止コドン及びその位置を
推定することができる。これらの情報に基づいて、各構
造遺伝子及びそれに対応するｃＤＮＡ、すなわちＭＬ−
２３６Ｂ生合成促進ｃＤＮＡを取得し、その塩基配列を
決定することが可能である。また、ＲＴ−ＰＣＲ法を用
いた転写産物の塩基配列解析に基づき、各構造遺伝子に
対応する完全長のｃＤＮＡを取得せずに、コード領域及
び対応するｃＤＮＡの塩基配列を決定することができ
る。

【００６７】本発明において得られた組換えＤＮＡベク
ター ｐＭＬ４８の挿入配列上には、６つの構造遺伝子
の存在が推定され、それぞれｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍｌ
ｃＣ、ｍｌｃＤ、ｍｌｃＥ及びｍｌｃＲと命名された。
このうちｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍｌｃＥ及びｍｌｃＲは
配列表の配列番号２に示される塩基配列上にコード領域
を有し、ｍｌｃＣ及びｍｌｃＤは配列表の配列番号１に
示される塩基配列上にコード領域を有しているものと推
定された。各構造遺伝子の転写レベルでの発現解析に
は、ＲＴ−ＰＣＲ法又はノーザンブロット・ハイブリダ
イゼーション法が好適に使用され得る。

【００６８】上述の６つの構造遺伝子に対応するＭＬ−
２３６Ｂ生合成促進ｃＤＮＡを取得する方法としては、
各構造遺伝子の塩基配列に基づいて設計され得るプライ
マーを用いたＲＴ−ＰＣＲによるクローニング、該塩基
配列に基いて得られるＤＮＡプローブを用いたｃＤＮＡ
ライブラリーからのクローニング等が挙げられる。ま
た、これらの方法で取得されるｃＤＮＡを機能発現させ
るためには、完全長のｃＤＮＡを得ることが好ましい。

【００６９】ＲＴ−ＰＣＲによるＭＬ−２３６Ｂ生合成
促進ｃＤＮＡの取得について述べる。

【００７０】ＭＬ−２３６Ｂ生合成促進ｃＤＮＡを取得
するための一組のＲＴ−ＰＣＲ用プライマーは、各鋳型
鎖と選択的にアニーリングし且つｃＤＮＡを取得するべ
く設計されなければならないが、この条件を満たす限り
において、一組のＲＴ−ＰＣＲの一方又は双方は各鋳型
鎖の一部と完全に相補的でなくてもよい。アンチセンス
鎖にアニーリングするＲＴ−ＰＣＲ用プライマー（以
下、「センスプライマー」という。）としては、アンチ
センス鎖の一部と完全に相補的なセンスプライマー（以
下、「無置換センスプライマー」という）又はアンチセ
ンス鎖の一部と完全には相補的でないセンスプライマー
（以下、「一部置換センスプライマー」という。）を使
用することができる。センス鎖にアニーリングするＲＴ
−ＰＣＲ用プライマー（以下、「アンチセンスプライマ
ー」という。）としては、センス鎖の一部と完全に相補
的なアンチセンスプライマー（以下、「無置換アンチセ
ンスプライマー」という）又はセンス鎖の一部と完全に
は相補的でないアンチセンスプライマー（以下、「一部
置換アンチセンスプライマー」という。）を使用するこ
とができる。

【００７１】センスプライマーは、それを一方のプライ
マーとするＲＴ−ＰＣＲ産物が本来の位置に翻訳開始コ
ドンａｔｇを含み且つ該翻訳開始コドンより開始される
翻訳フレーム中には本来の位置以外に翻訳終止コドンを
含まないように設計される（なお、配列表の配列番号１
のヌクレオチド番号１乃至３４２０３に示される塩基配
列及び配列表の配列番号２のヌクレオチド番号１乃至３
４２０３に示される塩基配列における、本発明において
推定された各構造遺伝子の翻訳開始コドンの位置は、表
４に記載されている）。

【００７２】無置換センスプライマーは、ｃＤＮＡの翻
訳開始コドンａｔｇ中のａ又はそれより５’−側の塩基
を５’−末端とする。

【００７３】一部置換センスプライマーは、配列表の配
列番号１のヌクレオチド番号１乃至３４２０３に示され
る塩基配列又は配列表の配列番号２のヌクレオチド番号
１乃至３４２０３に示される塩基配列上の特定の領域と
選択的にアニーリングする（配列表の配列番号２の全塩
基配列は、配列表の配列番号１の全塩基配列に対して完
全に相補的である）。

【００７４】また、一部置換センスプライマーが翻訳開
始コドンａｔｇより３’−側の塩基配列を含む場合、翻
訳開始コドンａｔｇより３’−側の塩基配列上に開始コ
ドンａｔｇから始まる翻訳フレーム中に終始コドンとな
るような塩基配列（ｔａａ、ｔａｇ又はｔｇａ）は含ま
れない。なお、開始コドンａｔｇから始まる翻訳フレー
ムとは、翻訳開始コドンａｔｇより３’−側の塩基配列
を翻訳開始コドンａｔｇから３塩基単位に分割したとき
に生じる３塩基からなる配列をいう。

【００７５】さらに、一部置換センスプライマーが、翻
訳開始コドンのａ、ａｔ又はａｔｇ（「塩基又は塩基配
列ｍ」という。）にその位置で対応する塩基又は塩基配
列（「塩基又は塩基配列ｍ’」という。）を含む場合、
塩基又は塩基配列ｍがａのとき、塩基又は塩基配列ｍ’
はａであり、且つ、塩基又は塩基配列ｍ’のａは、その
一部置換センスプライマーの３’−末端に位置する。塩
基又は塩基配列ｍがａｔのとき、塩基又は塩基配列ｍ’
はａｔであり、且つ、塩基又は塩基配列ｍ’のａｔは、
その一部置換センスプライマーの３’−末端に位置す
る。塩基又は塩基配列ｍがａｔｇのとき、塩基又は塩基
配列ｍ’はａｔｇであり、且つ、塩基又は塩基配列ｍ’
のａｔｇ中のａから３’−方向に数えて３×ｎ＋１（ｎ
は１以上の整数）番目のヌクレオチドを５’−末端とす
るトリヌクレオチドがその一部置換センスプライマーに
存在する場合、該トリヌクレオチドの塩基配列がｔａ
ａ、ｔａｇ及びｔｇａのいずれかであることはない。

【００７６】また、一部置換センスプライマーの３’−
末端が、翻訳開始コドンａｔｇ中のａから３’−方向に
数えて３×ｎ＋１（ｎは１以上の整数）番目のヌクレオ
チドであるとき、その一部置換センスプライマーを一方
のプライマーとし、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物のＲＮＡ
若しくはｍＲＮＡを鋳型とするＲＴ−ＰＣＲ産物又はゲ
ノムＤＮＡ若しくはｃＤＮＡを鋳型とするＰＣＲ産物に
おいて、３×ｎ＋１番目のヌクレオチド及びその３’−
側に隣接するジヌクレオチドからなるトリヌクレオチド
の塩基配列がｔａａ、ｔａｇ及びｔｇａのいずれかであ
ることはない。

【００７７】さらに、一部置換センスプライマーのいず
れか一つの３’−末端が、翻訳開始コドンａｔｇ中のａ
から３’−方向に数えて３×ｎ＋２（ｎは１以上の整
数）番目のヌクレオチドであるとき、その一部置換セン
スプライマーを一方のプライマーとし、ＭＬ−２３６Ｂ
生産微生物のＲＮＡ若しくはｍＲＮＡを鋳型とするＲＴ
−ＰＣＲ産物又はゲノムＤＮＡ若しくはｃＤＮＡを鋳型
とするＰＣＲ産物において、３×ｎ＋２番目のヌクレオ
チド及びその３’−側並びに５’−側に隣接する２つの
モノヌクレオチドからなるトリヌクレオチドの塩基配列
がｔａａ、ｔａｇ及びｔｇａのいずれかであることはな
い。

【００７８】また、一部置換センスプライマーの３’−
末端が、翻訳開始コドンａｔｇ中のａから３’−方向に
数えて３×ｎ＋３（ｎは１以上の整数）番目のヌクレオ
チドであるとき、３×ｎ＋１乃至３×ｎ＋３番目のヌク
レオチドからなるトリヌクレオチドの塩基配列がｔａ
ａ、ｔａｇ及びｔｇａのいずれかであることはない。

【００７９】以上がセンスプライマーの要件である。

【００８０】アンチセンスプライマーは、それ自体及び
上述のセンスプライマーを一組のプライマーとして使用
するＲＴ−ＰＣＲにより、各構造遺伝子（ｍｌｃＡ、ｍ
ｌｃＢ、ｍｌｃＣ、ｍｌｃＤ、ｍｌｃＥ及びｍｌｃＲ）
にコードされるペプチドのＮ末端からＣ末端までをコー
ドしたｃＤＮＡを増幅できるように設計される。

【００８１】無置換アンチセンスプライマーは、ｃＤＮ
Ａ上の翻訳終止領域附近の塩基配列に対して相補的な塩
基配列を有するアンチセンスプライマーであれば特に限
定されないが、好適には翻訳終止コドンの３’−末端の
塩基に対して相補的な塩基又はそれより５’−側の塩基
を５’−末端とする塩基配列を有し、より好適には翻訳
終止コドンに対して相補的な３塩基の配列を有する（な
お、本発明において推定された各構造遺伝子の翻訳終止
コドン、該翻訳終止コドンの相補配列、各構造遺伝子に
コードされるペプチドのＣ末端のアミノ酸残基、該アミ
ノ酸残基をコードした塩基配列、並びに、配列表の配列
番号１のヌクレオチド番号１乃至３４２０３に示される
塩基配列及び配列表の配列番号２のヌクレオチド番号１
乃至３４２０３に示される塩基配列におけるそれらの位
置は、表８乃至１０に記載されている）。

【００８２】一部置換アンチセンスプライマーは、配列
表の配列番号１のヌクレオチド番号１乃至３４２０３に
示される塩基配列上又は配列表の配列番号２のヌクレオ
チド番号１乃至３４２０３に示される塩基配列上の特定
の領域と選択的にアニーリングする。

【００８３】以上がアンチセンスプライマーの要件であ
る。

【００８４】また、一部置換センスプライマー及び一部
置換アンチセンスプライマーは、上述の要件を満たす限
りにおいて、それぞれの５’−末端に適宜塩基配列を付
加させることが可能である。そのような塩基配列として
は、該プライマーがＰＣＲに使用可能であれば特に限定
されないが、例えば、ＰＣＲ産物についてその後のクロ
ーニング操作を行なうのに便利な塩基配列等が挙げら
れ、このような塩基配列として、制限酵素認識配列を含
有するか又は該認識配列からなる塩基配列が挙げられ
る。

【００８５】さらに、センスプライマー及びアンチセン
スプライマーの設計は、前述のＰＣＲ用プライマーの設
計に関する記述に従って行なう。

【００８６】上述の通り、ＲＴ−ＰＣＲの鋳型には、Ｍ
Ｌ−２３６Ｂ生産微生物のｍＲＮＡ又は全ＲＮＡを使用
する。例えば、ｐＭＬ４８挿入配列中に存在する構造遺
伝子ｍｌｃＥのコード領域全域を増幅できるような一組
のプライマー（それぞれの塩基配列は、配列表の配列番
号３５及び３６参照）を設計及び合成し、ペニシリウム
・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株等の全ＲＮＡ又は
ｍＲＮＡを鋳型してＲＴ−ＰＣＲを行うことにより、構
造遺伝子ｍｌｃＥに対応するＭＬ−２３６Ｂ生合成促進
ｃＤＮＡが得られる。同様に、ｐＭＬ４８挿入配列中に
存在する構造遺伝子ｍｌｃＲのコード領域全域を増幅で
きるような一組のプライマー（それぞれの塩基配列は、
配列表の配列番号３９及び４０参照）を設計及び合成
し、ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株
等の全ＲＮＡ又はｍＲＮＡを鋳型してＲＴ−ＰＣＲを行
うことにより、構造遺伝子ｍｌｃＲに対応するＭＬ−２
３６Ｂ生合成促進ｃＤＮＡが得られる。

【００８７】また、上述の通り、ＲＴ−ＰＣＲ産物を適
当なＤＮＡベクターに組込むことにより、該ＲＴ−ＰＣ
Ｒ産物をクローニングすることができる。そのようなク
ローニングに用いるＤＮＡベクターとしては、通常ＤＮ
Ａ断片をクローニングするのに使用されるＤＮＡベクタ
ーであれば特に限定されない。ＲＴ−ＰＣＲ産物のクロ
ーニングを簡便に行なうキットが市販されており、この
ようなキットとして、例えば、Ｏｒｉｇｉｎａｌ ＴＡ
Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製：
ＤＮＡベクターとしてｐＣＲ２．１を使用している。）
が好適に使用される。

【００８８】このようにして取得されるＭＬ−２３６Ｂ
生合成促進ｃＤＮＡがＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内で機
能発現し得ることは、該ｃＤＮＡをＭＬ−２３６Ｂ生産
微生物体内での機能発現に適したＤＮＡベクターに組換
え、その組換えＤＮＡベクターで細胞を形質転換し、該
形質転換細胞及び宿主細胞のＭＬ−２３６Ｂ生合成能を
比較することにより確認できる。すなわち、ＭＬ−２３
６Ｂ生合成促進ｃＤＮＡが形質転換細胞内で機能発現し
ていれば、該形質転換細胞のＭＬ−２３６Ｂ生合成能が
宿主細胞のそれよりも改善されている。

【００８９】ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物体内での機能発
現に適したＤＮＡベクター（以下、「発現ベクター」と
いう。）としては、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物を形質転
換することができ、且つＭＬ−２３６Ｂ生合成促進ｃＤ
ＮＡの塩基配列に対応するアミノ酸配列を含むことから
なるポリペプチドをＭＬ−２３６Ｂ生産微生物体内で機
能発現させることができ、且つ宿主細胞内で安定に保持
され、且つ宿主細胞内で複製されるのに必要な塩基配列
を有しているものであれば、特に限定されない。

【００９０】また、発現ベクターは、宿主細胞に表現形
質の選択性を付与する塩基配列を有していること、及び
シャトルベクターであることが、それぞれ好ましい。

【００９１】さらに、宿主細胞に付与され得る表現形質
の選択性としては、薬剤耐性等が挙げられ、好適には抗
生物質耐性、より好適にはアンピシリン耐性、ハイグロ
マイシンＢ耐性である。

【００９２】また、発現ベクターがシャトルベクターで
ある場合、一方の微生物群の宿主細胞において複製され
るのに必要な塩基配列を有し、且つ他方の宿主細胞にお
いて挿入配列にコードされたポリペプチドを機能発現さ
せるのに必要な塩基配列を有していなければならない。
また、形質転換される複数の微生物群の宿主にそれぞれ
異なった表現形質の選択性を付与する塩基配列を有して
いることが好ましい。複数の微生物群の組み合わせは、
本明細書中に記載されたＭＬ−２３６Ｂ生合成関連ゲノ
ムＤＮＡのクローニング及び機能発現に使用されるシャ
トルベクターの要件に準ずる。本発明においては、この
ようなシャトルベクターとして、ＤＮＡベクターｐＳＡ
Ｋ３３３（特開平３−２６２４８６号公報記載）に、該
ＤＮＡベクター上に存在するアスペルギルス・ニデュラ
ンス由来の３−ホスホグリセレートキナーゼ（3-phosph
oglycerate kinase：以下、「ｐｇｋ」という。）遺伝
子プロモータ、外来遺伝子挿入用のアダプター、及び該
ＤＮＡ上に存在するｐｇｋターミネータを、この順で組
込むことにより作製されたＤＮＡベクターｐＳＡＫ７０
０ （図４参照）が好適に使用される。

【００９３】上述のような発現ベクターに本発明のＭＬ
−２３６Ｂ生合成促進ｃＤＮＡを挿入して得られる組換
えＤＮＡベクター（組換え発現ベクター）をＭＬ−２３
６Ｂ生産微生物体内に導入することにより、該ｃＤＮＡ
の塩基配列に対応するアミノ酸配列を含むことからなる
ポリペプチドを機能発現させることができる。

【００９４】本発明の組換え発現ベクターは、構造遺伝
子ｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍｌｃＣ、ｍｌｃＤ、ｍｌｃＥ
若しくはｍｌｃＲ又はそれに対応するｃＤＮＡを１つ又
は２つ以上含有してもよく、好適には、構造遺伝子ｍｌ
ｃＥ若しくはｍｌｃＲに対応するｃＤＮＡを１つ又は２
つ以上含有する。

【００９５】構造遺伝子ｍｌｃＥ、ｍｌｃＲに対応する
ｃＤＮＡをｐＳＡＫ７００のアダプター部位にそれぞれ
挿入することにより、組換え発現ベクターｐＳＡＫｅｘ
ｐＥ及びｐＳＡＫｅｘｐＲが得られた。ｐＳＡＫｅｘｐ
Ｅの挿入配列は配列表の配列番号３７に、ｐＳＡＫｅｘ
ｐＲの挿入配列は配列表の配列番号４１に、それぞれ記
載されている。

【００９６】ｐＳＡＫｅｘｐＥで形質転換された大腸菌
Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡＫｅｘｐＥＳＡＮＫ ７２４９
９株は、平成１２年（２０００年）１月２５日付けで通
商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所（日本国茨
城県つくば市東町１丁目１番３号）に国際寄託され、受
託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７００５を付された。

【００９７】ｐＳＡＫｅｘｐＲで形質転換された大腸菌
Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡＫｅｘｐＲＳＡＮＫ ７２５９
９株は、平成１２年（２０００年）１月２５日付けで通
商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所（日本国茨
城県つくば市東町１丁目１番３号）に国際寄託され、受
託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７００６を付された。

【００９８】また、本発明の組換え発現ベクターは、単
独で又は組合せによりＭＬ−２３６Ｂ生産微生物による
ＭＬ−２３６Ｂ生合成を促進し得るＤＮＡを１種又は２
種以上、それぞれ１つ又は２つ以上含有してもよい。そ
のようなＤＮＡとしては、構造遺伝子ｍｌｃＡ、ｍｌｃ
Ｂ、ｍｌｃＣ、ｍｌｃＤ、ｍｌｃＥ若しくはｍｌｃＲ又
はそれに対応するｃＤＮＡ、ＭＬ−２３６Ｂ生合成関連
ゲノムＤＮＡ、ＭＬ−２３６Ｂ生合成促進ｃＤＮＡの発
現調節因子をコードしたＤＮＡ等が例示できる。

【００９９】本発明のＭＬ−２３６Ｂ生合成促進ｃＤＮ
Ａ、ＭＬ−２３６Ｂ生合成関連ゲノムＤＮＡ又はそれら
のいずれかの断片を機能発現させるための形質転換法
は、宿主細胞により適宜選択される。好適なＭＬ−２３
６Ｂ生産微生物でるペニシリウム・シトリナムの形質転
換は、ペニシリウム・シトリナムの胞子からプロトプラ
ストを調製し、該プロトプラストに組換えＤＮＡベクタ
ーを導入することにより行なうことができる（Nara,F.,
et al.,Curr.Genet.23,28(1993)記載）。

【０１００】ペニシリウム・シトリナムを培養したスラ
ントからＰＧＡ寒天培地のプレートへ該菌を接種し、２
２乃至２８℃、１０乃至１４日間保温し、該プレートか
ら胞子を回収し、該胞子１×１０⁷乃至１×１０⁹個を５
０乃至１００ｍｌのＹＰＬ−２０培地（組成；０．１％
(w/v)イーストエキストラクト（Ｄｉｆｃｏ社製）、
０．５％(w/v)ポリペプトン（日本製薬（株）製）、２
０％(w/v)ラクトース、ｐＨ５．０）に接種し、２２乃
至２８℃、１８時間乃至２日間保温する。該培養物から
発芽胞子を回収し、細胞壁分解酵素で処理し、プロトプ
ラストを得る。細胞壁分解酵素としては、ペニシリウム
・シトリナムの細胞壁を分解するものであり且つ該菌に
有害な作用を及ぼさないものであれば特に限定されない
が、例えば、ザイモリアーゼ、キチナーゼ等が挙げられ
る。

【０１０１】ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物又はそのプロト
プラストに、ＭＬ−２３６Ｂ生合成促進ｃＤＮＡを挿入
した組換え発現ベクターを接触させると、該組換え発現
ベクターがプロトプラストの中に取り込まれ、形質転換
体が得られる。

【０１０２】ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物の形質転換体の
培養は、各宿主細胞に適した条件下で行なうことができ
るが、好適なＭＬ−２３６Ｂ生産微生物であるペニシリ
ウム・シトリナムの形質転換体の場合は、予め形質転換
させたプロトプラストを適当な条件下で培養することに
より細胞壁を再生させ、その後培養する。すなわち、形
質転換されたペニシリウム・シトリナムのプロトプラス
トを封入したＶＧＳ中層寒天培地（組成；Ｖｏｇｅｌ最
小培地、２％(w/v)グルコース、１Ｍグルシトール、２
％(w/v)寒天）をＶＧＳ下層寒天培地（組成；Ｖｏｇｅ
ｌ最小培地、２％(w/v)グルコース、１Ｍグルシトー
ル、２．７％(w/v)寒天）及びＶＧＳ上層寒天培地（組
成；Ｖｏｇｅｌ最小培地、２％(w/v)グルコース、１Ｍ
グルシトール、１．５％(w/v)寒天、８００μｇ／ｍｌ
ハイグロマイシン（ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ）Ｂ）で挟
み、２２乃至２８℃、７乃至１５日間保温することによ
り行なうことができる。得られた菌株はＰＧＡ培地上
で、２２乃至２８℃で保温しつつ継代培養する。該菌株
をＰＧＡ培地で作製したスラントに白金耳を用いて接種
し、２２乃至２８℃、１０乃至１４日間保温し、０乃至
４℃で保存する。

【０１０３】上述の通り細胞壁を再生させたペニシリウ
ム・シトリナムの形質転換体を培養したスラントから、
ＭＢＧ３−８培地へ該形質転換体を接種し、２２乃至２
８℃、７乃至１２日間、振盪しつつ保温することによ
り、ＭＬ−２３６Ｂを効率よく生産することができる。
なお、宿主細胞のペニシリウム・シトリナムについて
も、全く同様の液体培養によりＭＬ−２３６Ｂを生産さ
せることができる。

【０１０４】ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物の形質転換体の
培養物からのＭＬ−２３６Ｂの精製は、通常天然物の精
製に使用される諸技法を組み合わせることによりなされ
る。該諸技法としては、特に限定されないが、例えば、
遠心分離、濾過による固液分離、アルカリ又は酸処理、
有機溶媒による抽出、転溶、吸着及び分配等の各種クロ
マトグラフィー、結晶化等が挙げられる。ＭＬ−２３６
Ｂは、ヒドロキシ酸体とラクトン体の両方の形をとり、
相互に変換し、更に、ヒドロキシ酸体は安定な塩を形成
する。このような物理化学的特質を利用して、ＭＬ−２
３６Ｂのヒドロキシ酸体（以下、「遊離型ヒドロキシ
酸」という。）、ＭＬ−２３６Ｂのヒドロキシ酸塩（以
下、「ヒドロキシ酸塩」という。）、又はＭＬ−２３６
Ｂのラクトン体（以下、「ラクトン」という。）を得る
ことができる。

【０１０５】該培養物を、加熱下又は常温下でアルカリ
加水分解することにより開環し、ヒドロキシ酸塩に変換
し、該反応溶液を酸性にした後濾過し、濾液を水と混和
しない有機溶媒で抽出することにより、目的化合物を遊
離型ヒドロキシ酸として得ることができる。水と混和し
ない有機溶媒としては、特に限定されるものではない
が、例えば、ヘキサン、ヘプタン等の脂肪族炭化水素
類、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類、メチレ
ンクロリド、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、
ジエチルエーテル等のエーテル類、蟻酸エチル、酢酸エ
チル等のエステル類、それら２種以上の混合溶媒等が挙
げられる。

【０１０６】また、この遊離型ヒドロキシ酸を、水酸化
ナトリウム等のアルカリ金属塩類の水溶液に転溶するこ
とにより、目的化合物をヒドロキシ酸塩として得ること
ができる。

【０１０７】さらに、この遊離型ヒドロキシ酸を、有機
溶媒中で加熱して脱水するか、又は他の方法により閉環
することにより、目的化合物をラクトンとして得ること
ができる。

【０１０８】このようにして得ることができる遊離型ヒ
ドロキシ酸、ヒドロキシ酸塩及びラクトンは、カラムク
ロマトグラフィー等により精製、単離することが可能で
ある。カラムクロマトグラフィーの担体としては、特に
限定されるものではないが、例えば、セファデックス
ＬＨ−２０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製）、ダイヤイオン
ＨＰ−２０（三菱化学（株）製）、シリカゲル、逆相
系担体等が挙げられ、好適にはＣ１８系の担体である。

【０１０９】ＭＬ−２３６Ｂの定量法としては、通常有
機化合物の定量に用いられる方法であれば特に限定され
ないが、例えば、逆相高性能クロマトグラフィー（ｒｅ
ｖｅｒｓｅ ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａ
ｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ
ｙ：以下、「逆相ＨＰＬＣ」という。）法等が挙げられ
る。逆相ＨＰＬＣ法による定量は、ＭＬ−２３６Ｂ生産
微生物の培養物をアルカリ加水分解し、可溶性画分をＣ
１８カラムを用いた逆相ＨＰＬＣに供し、紫外吸収を測
定し、該吸収を定量化することにより行なうことがき
る。Ｃ１８カラムラムとしては、通常の逆相ＨＰＬＣに
使用されるＣ１８カラムであれば特に限定されないが、
例えば、ＳＳＣ−ＯＤＳ−２６２（直径６ｍｍ、長さ１
００ｍｍ：センシュー科学（株）製）等が挙げられる。
移動相としては、通常逆相ＨＰＬＣに使用される溶媒で
あれば特に限定されないが、例えば、７５％(v/v)メタ
ノール−０．１％(v/v)トリエチルアミン−０．１％(v/
v)酢酸等が挙げられる。移動相に流速２ｍｌ／分の７５
％(v/v)メタノール−０．１％(v/v)トリエチルアミン−
０．１％(v/v)酢酸を用いてＳＳＣ−ＯＤＳ−２６２カ
ラムにＭＬ−２３６Ｂを室温で添加すると、４．０分後
に溶出される。ＭＬ−２３６Ｂの検出は、ＨＰＬＣ用Ｕ
Ｖ検出器を用いて行なうことができ、ＵＶ検出器の吸収
波長は、２２０乃至２８０ｎｍであり、好適には２２０
乃至２６０ｎｍ、より好適には２３６ｎｍである。

【０１１０】なお、本明細書においては、アデニンを
「ａ」、グアニンを「ｇ」、チミンを「ｔ」、シトシン
を「ｃ」とそれぞれ記載する。配列表の各配列番号に示
される塩基配列は、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む
明細書等の作成のためのガイドライン（特許庁公表、平
成１０年６月）」に従って記載した。

【０１１１】

【実施例】以下に実施例及び試験例を挙げ、本発明をさ
らに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるも
のではない。

【０１１２】実施例１．ｐＳＡＫｃｏｓ１ベクターの作
製 １）大腸菌由来のハイグロマイシンＢホスフォトランス
フェラーゼ遺伝子（hygromycin B phosphotransferase
gene：以下、「ＨＰＴ」という。）を含有するプラスミ
ドｐＳＡＫ３３３（特開平３−２６２４８６号公報記
載）を制限酵素ＢａｍＨＩ（宝酒造（株）製）で消化
し、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼ（宝酒造（株）製）で末端
を平滑化した。 ２）ＤＮＡ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｋｉｔ Ｖｅｒ．２
（宝酒造（株）製）を用いて上記ＤＮＡ断片を自己環状
化し、大腸菌のコンピーテント・セルＪＭ１０９株（宝
酒造（株）製）を形質転換した。形質転換大腸菌からＢ
ａｍＨＩ部位を欠失したプラスミドを保有する株を選抜
し、この株が保有するプラスミドをｐＳＡＫ３６０と命
名した。 ３）ｐＳＡＫ３６０を制限酵素Ｐｖｕ２で消化した後、
アルカリフォスファターゼ処理を行い、５’末端の脱リ
ン酸化を行なった。コスミドベクターｐＷＥ１５（ＳＴ
ＲＡＴＡＧＥＮＥ社製）からコス（ｃｏｓ）部位を含む
［Ｓａｌ１−Ｓｃａ１］断片（約３ｋｂ）を取得し、Ｔ
４ ＤＮＡポリメラーゼにより末端を平滑化した後、ｐ
ＳＡＫ３６０のＰｖｕ２部位に連結し、ＪＭ１０９株を
形質転換した。該形質転換大腸菌から［Ｓａｌ１−Ｓｃ
ａ１］断片（約３ｋｂ）をＰｖｕ２部位に挿入したプラ
スミドを保有する株を選抜し、この株が保有するプラス
ミドをｐＳＡＫｃｏｓ１と命名した。ｐＳＡＫｃｏｓ１
は、ｐＷＥ１５由来のＢａｍＨ１、ＥｃｏＲ１及びＮｏ
ｔ１の各制限酵素認識部位を１つずつ有する。また、ｐ
ＳＡＫｃｏｓ１は選択マーカーとして、アンピシリン耐
性遺伝子及びハイグロマイシン耐性遺伝子を有してい
る。以下の実施例において、大腸菌を宿主とする場合、
ｐＳＡＫｃｏｓ１又は外来ＤＮＡを挿入したｐＳＡＫｃ
ｏｓ１による形質転換体の選択は、４０μｇ／ｍｌのア
ンピシリン（Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ：Ｓｉｇｍａ社製）
を培地に添加して行なった。ペニシリウム・シトリナム
ＳＡＮＫ１３３８０を宿主とする場合、ｐＳＡＫｃｏ
ｓ１又は外来ＤＮＡを挿入したｐＳＡＫｃｏｓ１による
形質転換体の選択は、２００μｇ／ｍｌのハイグロマシ
シンＢ（ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ Ｂ：Ｓｉｇｍａ社製）
を培地に添加して行なった。

【０１１３】ｐＳＡＫｃｏｓ１の構築手順を図１に記載
した。 実施例２．ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３
８０株のゲノムＤＮＡの調製 １）ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株
の培養 ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株の種
菌の培養はＰＧＡ寒天培地を用いたスラントにて行なっ
た。すなわち、ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１
３３８０株を白金耳により接種し、２６℃にて１４日間
保温した。このスラントは４℃で保存した。

【０１１４】本培養は、液体通気培養にて行なった。上
述のスラント５ｍｍ角の菌体を５０ｍｌのＭＢＧ３−８
培地を入れた５００ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２
６℃、２１０ｒｐｍの条件下で５日間振盪培養した。 ２）ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株
の培養物からのゲノムＤＮＡの調製 １）の培養物を、室温、１０００×Ｇの条件下で１０分
間遠心分離し、菌体を回収した。湿重量３ｇの菌体を、
ドライアイスで冷却した乳鉢上で粉末になるまで破砕し
た。菌体破砕物を２０ｍｌの６２．５ｍＭ ＥＤＴＡ・
２Ｎａ（和光純薬（株）製）−５％(w/v)ＳＤＳ−５０
ｍＭ Ｔｒｉｓ（和光純薬（株）製）−塩酸（和光純薬
（株）製）緩衝液（ｐＨ８．０）で満たした遠心管に入
れ、穏やかに混合した後、０℃にて１時間静置した。１
０ｍＭ Ｔｒｉｓ-塩酸−０．１ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎ
ａ（ｐＨ８．０：以下「ＴＥ」という。）で飽和した１
０ｍｌのフェノールを添加し、５０℃にて１時間穏やか
に攪拌した。室温、１００００×Ｇの条件下で１０分間
遠心分離した後、１５ｍｌの上層（水相）を別の遠心管
に分注した。

【０１１５】この上層（水相）に０．５倍容のＴＥ飽和
フェノール及び０．５倍容のクロロホルム溶液を加え、
２分間穏やかに攪拌した後、室温、１００００×Ｇの条
件下で１０分間遠心分離した（以下、「フェノール・ク
ロロホルム抽出」という。）。

【０１１６】１０ｍｌの上層（水相）に１０ｍｌの８Ｍ
酢酸アンモニウム（ｐＨ７．５）及び２５ｍｌの２−
プロパノール（和光純薬（株）製）を添加し、−８０℃
にて１５分間冷却した後、４℃、１００００×Ｇの条件
下で１０分間遠心分離した。沈澱を５ｍｌのＴＥに溶解
させた後、２０μｌの１０ｍｇ／ｍｌリボヌクレアーゼ
Ａ（Ｓｉｇｍａ社製）及び２５０単位のリボヌクレアー
ゼＴ１（ＧＩＢＣＯ社製）を添加し、３７℃にて２０分
間保温した。これに２０ｍｌの２−プロパノールを添加
し、穏やかに混合した後、糸状のゲノムＤＮＡをパスツ
ールピペットの先端に巻きつけ、１ｍｌのＴＥに溶解さ
せた。

【０１１７】このＤＮＡ溶液に０．１倍容の３Ｍ 酢酸
ナトリウム（ｐＨ６．５）及び２．５倍容のエタノール
を加え、−８０℃にて１５分冷却した後、４℃、１００
００×Ｇの条件下で５分間遠心分離した（以下、「エタ
ノール沈澱」という。）。

【０１１８】得られた沈澱を２００μｌのＴＥに溶解
し、ゲノムＤＮＡ画分とした。 実施例３．ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３
８０株のゲノムＤＮＡライブラリーの作製 １）ゲノムＤＮＡ断片の調製 実施例２において得られたペニシリウム・シトリナム
ＳＡＮＫ１３３８０株のゲノムＤＮＡ（５０μｇ）を含
む１００μｌの水溶液に、０．２５単位のＳａｕ３Ａ１
（宝酒造（株）製）を添加した後、１０、３０、６０、
９０及び１２０秒経過後に２０μｌずつサンプリング
し、各サンプルに２０μｌずつの０．５ＭＥＤＴＡ（ｐ
Ｈ８．０）を加えて制限酵素反応を停止した。アガロー
スゲル電気泳動により、得られた部分消化ＤＮＡ断片を
分離し、３０ｋｂ以上の大きさをもつＤＮＡ断片を含む
アガロースゲルを回収した。

【０１１９】回収したゲルを細かく砕き、ウルトラフリ
ーＣ３遠心式ろ過ユニット（日本ミリポア（株）製）に
入れた。−８０℃にて１５分間冷却し、ゲルを凍結した
後、３７℃にて１０分間保温してゲルを融解した。５０
００×Ｇ、５分間遠心分離し、ＤＮＡ抽出液を得た。こ
のＤＮＡ抽出液について、フェノール・クロロホルム抽
出及びエタノール沈澱を行ない、得られた沈澱を少量の
ＴＥに溶解した。 ２）ＤＮＡベクター ｐＳＡＫｃｏｓ１の前処理 ｐＳＡＫｃｏｓ１を制限酵素ＢａｍＨ１（宝酒造（株）
社製）により消化した後、６５℃にて３０分間アルカリ
フォスファターゼ（宝酒造（株）製）反応を行った。反
応終了液について、フェノール・クロロホルム抽出及び
エタノール沈澱を行ない、得られた沈澱を少量のＴＥに
溶解した。 ３）ライゲーション及びｉｎ ｖｉｔｒｏパッケージン
グ 上記１）記載のゲノムＤＮＡ断片（２μｇ）及び上記
２）記載の前処理済みｐＳＡＫｃｏｓ１（１μｇ）を混
合し、ＤＮＡ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｋｉｔ Ｖｅｒ．２
（宝酒造（株）製）を用い、１６℃にて１６時間ライゲ
ーション反応を行なった。反応終了液について、フェノ
ール・クロロホルム抽出及びエタノール沈澱を行ない、
得られた沈澱を５μｌのＴＥに溶解させた。ライゲーシ
ョン生成物溶液を、ＧＩＧＡＰＡＫ ＩＩ Ｇｏｌｄ
（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ社製）キットを用いたｉｎ ｖ
ｉｔｒｏパッケージングに供し、組換えＤＮＡベクター
を含む形質転換大腸菌を得た。形質転換大腸菌のコロニ
ーを形成させたプレートに３ｍｌのＬＢ培地を注ぎ、セ
ルスクレーパーを用いてプレート上のコロニーを回収し
た（回収液１という）。さらに３ｍｌのＬＢ培地でプレ
ートを洗浄、回収した（回収液２という。）。回収液１
及び２の混合液にグリセリンを終濃度１８％となるよう
加えたものを大腸菌菌体液と称し、ペニシリウム・シト
リナム ＳＡＮＫ１３３８０株のゲノムＤＮＡライブラ
リーとして、−８０℃にて保存した。 実施例４．ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３
８０株のゲノムＤＮＡを鋳型としたＰＣＲによるＰＫＳ
遺伝子断片の増幅 １）ＰＣＲ用プライマーの設計及び合成 アスペルギルス・フラヴァス（Aspergillus flavus）の
ＰＫＳ遺伝子のアミノ酸配列（Brown,D.W.,et al.,Pro
c.Natl.Acad.Sci.USA,93,1418(1996)記載）に基づき、
配列表の配列番号３及び４に示されるミックス・プライ
マーを設計及び合成した。該合成はホスフォロアミダイ
ト法により行った。

【０１２０】 配列表の配列番号３：gayacngcntgyasttc 配列表の配列番号４：tcnccnknrcwgtgncc なお、配列表の配列番号３及び４に示される塩基配列に
おいて、nはイノシンの塩基（ヒポキサンチン）を、yは
t又はcを、sはg又はcを、kはg又はtを、rはg又はaを、w
はa又はtを、それぞれ表わす。 ２）ＰＣＲによるＤＮＡ断片の増幅 上記２）記載のＰＣＲ用プライマー（各１００ｐｍｏ
ｌ）、実施例２で得られたペニシリウム・シトリナム
ＳＡＮＫ１３３８０株のゲノムＤＮＡ（５００ｎｇ）、
０．２ｍＭ ｄＡＴＰ、０．２ｍＭ ｄＣＴＰ、０．２
ｍＭ ｄＧＴＰ、０．２ｍＭ ｄＴＴＰ、５０ｍＭ 塩
化カリウム、２ｍＭ 塩化マグネシウム及び１．２５単
位のＥｘ．Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（宝酒造（株）
製）を含む５０μｌの反応液を、９４℃にて１分間、５
８℃にて２分間、７０℃にて３分間、の連続する３工程
からなるサイクル反応に供した。このサイクルを３０回
繰り返すことによりＤＮＡ断片を増幅した。ＰＣＲは、
ＴａＫａＲａ ＰＣＲ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ
ＭＰ ＴＰ３０００（宝酒造（株）製）を使用して行
なった。

【０１２１】増幅されたＤＮＡ断片を、アガロースゲル
電気泳動に供した後、約１．０乃至２．０ｋｂの大きさ
をもつＤＮＡ断片を含むアガロースゲルを回収した。ゲ
ルからＤＮＡを回収し、フェノール・クロロホルム抽出
及びエタノール沈澱を行ない、得られた沈澱を少量のＴ
Ｅに溶解した。 ３）ライゲーション及び形質転換 ２）で得られたＤＮＡ断片、及び、ＴＡクローニング・
システムｐＣＲ２．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を
用いて、このキットに含まれるプラスミドｐＣＲ２．１
にライゲーションし、形質転換株を得た。

【０１２２】得られたクローンを数個選び、マニアティ
スら（Maniatis,T.,et al.,Molecular cloning,a labor
atory manual,2nd ed.,Cold Spring Harbor Laborator
y,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)記載）の方法に従っ
て培養した。すなわち、２ｍｌのＬＢ培地を含む２４ｍ
ｌ容の試験管に各コロニーを接種し、３７℃にて１８時
間、振盪培養した。

【０１２３】この培養物からの組換えＤＮＡベクターの
調製は、アルカリ法（Maniatis,T.,et al.,Molecular c
loning,a laboratory manual,2nd ed.,Cold Spring Har
borLaboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)記載）
に従った。すなわち、１．５ｍｌの培養液を、室温、１
００００×Ｇの条件下で２分間遠心分離し、沈澱より菌
体を回収した。菌体に１００μｌの５０ｍＭ グルコー
ス−２５ｍＭ Ｔｒｉｓ-塩酸−１０ｍＭ ＥＤＴＡ
（ｐＨ８．０） を加えて懸濁し、２００μｌの０．２
規定水酸化ナトリウム−１％(w/v)ＳＤＳを加えて穏や
かに攪拌し、溶菌させた。これに１５０μｌの３Ｍ 酢
酸カリウム−１１．５％(w/v)氷酢酸を加えてタンパク
質を変成させ、室温、１００００×Ｇの条件下で１０分
間遠心分離し、上清を回収した。上清について、フェノ
ール・クロロホルム抽出及びエタノール沈澱を行ない、
得られた沈澱を４０μｇ／ｍｌのリボヌクレアーゼＡ
（Ｓｉｇｍａ社製）を含有する５０μｌのＴＥに溶解さ
せた。

【０１２４】各組換えＤＮＡベクターを制限酵素消化し
て電気泳動に供し、電気泳動パターンの異なる組換えＤ
ＮＡベクター中の挿入塩基配列を、ＤＮＡシークエンサ
ー（モデル３７７：パーキンエルマー・ジャパン社製）
を用いて決定した。

【０１２５】その結果、ＰＫＳ遺伝子断片を含む組換え
ＤＮＡベクターを保有する株の存在が確認された。

【０１２６】実施例５．ペニシリウム・シトリナム Ｓ
ＡＮＫ１３３８０株のゲノミック・サザンブロットハイ
ブリダイゼーション １）電気泳動及びメンブレンへのトランスファー 実施例２において得られたのペニシリウム・シトリナム
ＳＡＮＫ１３３８０株のゲノムＤＮＡ（１０μｇ）
を、制限酵素ＥｃｏＲＩ、ＳａｌＩ、Ｈｉｎｄ３又はＳ
ａｃ１（いずれも宝酒造（株）製）を用いて消化し、ア
ガロースゲル電気泳動に供した。アガロースゲルの調製
には、Ａｇａｒｏｓｅ Ｌ０３「ＴＡＫＡＲＡ」（宝酒
造（株）製）を用いた。泳動後、ゲルを０．２５規定塩
酸（和光純薬（株）製）に浸し、室温にて１０分間穏や
かに振盪した。このゲルを０．４規定水酸化ナトリウム
（和光純薬（株）製）中に移し、室温にて３０分間穏や
かに振盪した。マニアティスらのアルカリトランスファ
ー法（Maniatis,T.,et al.,Molecular cloning,a labor
atory manual,2nd ed.,Cold Spring Harbor Laborator
y,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)記載）により、ゲル
中のＤＮＡをナイロン・メンブレンＨｙｂｏｎｄ^TM−Ｎ
+（アマシャム社製）にトランスファーし、固定した。
メンブレンを２×ＳＳＣ（１×ＳＳＣの組成は、１５０
ｍＭ ＮａＣｌ、１５ｍＭ クエン酸三ナトリウム）で
洗浄した後風乾した。 ２）ハイブリダイゼーション及びシグナルの検出 １）で得られたメンブレンに対し、実施例４で得られた
ＰＫＳ遺伝子断片をプローブとして用いたハイブリダイ
ゼーションを行なった。

【０１２７】プローブには、実施例４において得られた
ＰＫＳ遺伝子断片ＤＮＡ（１μｇ）をＤＩＧ ＤＮＡ
Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ（ベーリンガー・マンハイム
社製）で標識し、使用直前に１０分間煮沸後急冷したも
のを用いた。

【０１２８】ハイブリダイゼーション液（ＤＩＧイージ
ーハイブ：ベーリンガー・マンハイム社製）に１）記載
のメンブレンを浸し、２０ｒｐｍで振盪しつつ、４２℃
にて２時間プレハイブリダイゼーションを行なった後、
上述の標識プローブをハイブリダイゼーション液に添加
し、マルチシェーカー・オーブンＨＢ（ＴＡＩＴＥＣ社
製）を用い、２０ｒｐｍで振盪しつつ４２℃にて１８時
間ハイブリダイゼーションを行なった。ハイブリダイゼ
ーションを行なったメンブレンについて、２×ＳＳＣを
用いた室温、２０分間の洗浄を３回、０．１×ＳＳＣを
用いた５５℃、３０分間の洗浄を２回、それぞれ行なっ
た。

【０１２９】洗浄したメンブランをＤＩＧ Ｌｕｍｉｎ
ｅｓｃｅｎｔ ＤｅｔｅｃｔｉｏｎＫｉｔ ｆｏｒ Ｎ
ｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ（ベーリンガー・マンハイム
社製）で処理し、Ｘ線フィルム（ルミフィルム：ベーリ
ンガー・マンハイム社製）に露光した。感光は富士メデ
ィカルフィルムプロセサーＦＰＭ８００Ａ（Ｆｕｊｉ
Ｆｉｌｍ社製）を用いて行なった。

【０１３０】その結果、実施例４において得られたＰＫ
Ｓ遺伝子断片はペニシリウム・シトリナムのゲノム上に
存在することが確認された。

【０１３１】実施例６．ＰＫＳ遺伝子断片をプローブと
したペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株
のゲノムＤＮＡライブラリーのスクリーニング ＰＫＳ遺伝子を含むゲノムＤＮＡのクローニングは、コ
ロニーハイブリダイゼーション法により行なった。 １）メンブレンの調製 ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株のゲ
ノムＤＮＡライブラリーとして保存した大腸菌菌体液
（実施例３記載）を、ＬＢ寒天培地のプレートに、プレ
ート１枚あたり５０００乃至１００００個のコロニーが
生育するよう希釈して撒いた。このプレートを２６℃に
て１８時間保温した後、４℃にて１時間冷却した。Ｈｙ
ｂｏｎｄ^TM−Ｎ＋（アマシャム社製）をプレートにの
せ、１分間接触させた。コロニーを付着させたメンブレ
ンをプレートから注意深く離し、コロニー接触面を上に
して、２００ｍｌの１．５Ｍ 塩化ナトリウム−０．５
規定水酸化ナトリウムに７分、２００ｍｌの１．５Ｍ
塩化ナトリウム−０．５ＭＴｒｉｓ-塩酸−１ｍＭ Ｅ
ＤＴＡ（ｐＨ７．５）に３分ずつ２回浸した後、４００
ｍｌの２×ＳＳＣで洗浄した。洗浄したメンブレンを３
０分風乾した。 ２）ハイブリダイゼーション プローブには、実施例４において得られたＰＫＳ遺伝子
断片ＤＮＡ（１μｇ）をＤＩＧ ＤＮＡ Ｌａｂｅｌｉ
ｎｇ Ｋｉｔ（ベーリンガー・マンハイム社製）で標識
し、使用直前に１０分間煮沸後急冷したものを用いた。

【０１３２】ハイブリダイゼーション液（ＤＩＧイージ
ーハイブ：ベーリンガー・マンハイム社製）に１）記載
のメンブレンを浸し、２０ｒｐｍで振盪しつつ、４２℃
にて２時間プレハイブリダイゼーションを行なった後、
上述の標識プローブをハイブリダイゼーション液に加
え、マルチシェーカー・オーブンＨＢ（ＴＡＩＴＥＣ社
製）を用い、２０ｒｐｍで振盪しつつ４２℃にて１８時
間ハイブリダイゼーションを行なった。ハイブリダイゼ
ーションを行なったメンブレンについて、２×ＳＳＣを
用いた室温、２０分間の洗浄を３回、０．１×ＳＳＣを
用いた６８℃、３０分間の洗浄を２回、それぞれ行なっ
た。

【０１３３】洗浄したメンブランをＤＩＧ Ｌｕｍｉｎ
ｅｓｃｅｎｔ ＤｅｔｅｃｔｉｏｎＫｉｔ ｆｏｒ Ｎ
ｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ（ベーリンガー・マンハイム
社製）で処理し、Ｘ線フィルム（ルミフィルム：ベーリ
ンガー・マンハイム社製）に露光した。感光は富士メデ
ィカルフィルムプロセサーＦＰＭ８００Ａ：Ｆｕｊｉ
Ｆｉｌｍ社製）を用いて行なった。

【０１３４】以上、１）及び２）記載の操作をスクリー
ニングという。

【０１３５】一回目のスクリーニングで陽性シグナルが
検出されたクローンのコロニー周辺をかきとってＬＢ培
地に懸濁した後、適宜希釈してプレートに撒いて培養
し、同様に二回目のスクリーニングを行ない、陽性クロ
ーンを純化した。

【０１３６】なお、本実施例で得られた陽性クローン、
すなわち形質転換大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＭＬ４８
ＳＡＮＫ７１１９９は、平成１１年（１９９９年）７月
７日付けで通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究
所（日本国茨城県つくば市東町１丁目１番３号）に国際
寄託され、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６７８０を付され
た。

【０１３７】実施例７．組換えＤＮＡベクターｐＭＬ４
８の挿入配列の解析（１） 実施例６で得られたＥ．ｃｏｌｉ ｐＭＬ４８ ＳＡＮ
Ｋ７１１９９株の培養及び該培養物からの組換えＤＮＡ
ベクターの調製は、実施例４記載の方法に準じて行なっ
た。

【０１３８】得られた組換えＤＮＡベクターをｐＭＬ４
８と命名した。ＭＬ−２３６Ｂ生合成関連ゲノムＤＮＡ
である、ｐＭＬ４８挿入配列を、各種制限酵素消化し、
ｐＵＣ１１９（宝酒造（株）製）に組込むことにより、
サブクローニングした。得られたサブクローンをプロー
ブとして、実施例５記載の方法に準じてサザンブロット
・ハイブリダイゼーションを行なった。すなわち、ｐＭ
Ｌ４８の各種制限酵素消化物を電気泳動に供し、ＤＮＡ
をメンブレンへトランスファーしたものに対して、ハイ
ブリダイゼーションを行なった。

【０１３９】その結果、ｐＭＬ４８挿入配列の制限酵素
地図が作成された。

【０１４０】また、上述の各サブクローンの挿入配列の
塩基配列を、ＤＮＡシークエンサーモデル３７７（パー
キンエルマー・ジャパン社製）を用いて決定し、ｐＭＬ
４８の全塩基配列を決定した。

【０１４１】ｐＭＬ４８の挿入配列は全３４２０３塩基
であった。

【０１４２】ｐＭＬ４８の挿入配列の塩基配列は、配列
表の配列番号１及び２に記載されている。配列表の配列
番号１及び２に示される塩基配列は、互いに、完全に相
補的である。

【０１４３】該挿入配列上の構造遺伝子の存在につい
て、遺伝子検索プログラムＧＲＡＩＬ（ＡｐｏＣｏｍ
ＧＲＡＩＬ Ｔｏｏｌｋｉｔ：ＡＰＯＣＯＭ社製）及び
相同性検索プログラムＢＬＡＳＴ（Ｇａｐｐｅｄ−ＢＬ
ＡＳＴ（ＢＬＡＳＴ２）：ＷＩＳＣＯＮＳＩＮ ＧＣＧ
ｐａｃｋａｇｅ ｖｅｒ．１０．０に搭載）を用いて
解析した。

【０１４４】その結果、ｐＭＬ４８の挿入塩基配列中に
は、６種類の異なる構造遺伝子の存在が推定され、それ
ぞれをｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍｌｃＣ、ｍｌｃＤ、ｍｌ
ｃＥ及びｍｌｃＲと命名した。また、ｍｌｃＡ、ｍｌｃ
Ｂ、ｍｌｃＥ及びｍｌｃＲは配列表の配列番号２記載の
塩基配列中に、ｍｌｃＣ及びｍｌｃＤは配列表の配列番
号１に示される塩基配列中に、それぞれコード領域を有
していることが推定された。さらに、該挿入配列におけ
る各推定構造遺伝子の相対的位置及び大きさが推定され
た。

【０１４５】本実施例の結果を図２に記載した。 実施例８．組換えＤＮＡベクターｐＭＬ４８の挿入配列
の解析（２） ノーザンブロット・ハイブリダイゼーション法及びＲＡ
ＣＥにより、実施例７において存在が示唆された構造遺
伝子の発現解析、及び５’−末端並びに３’−末端領域
の解析を行なった。 １）ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０の
全ＲＮＡの調製 ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株を培
養したスラント（実施例２記載）より５ｍｍ角の菌体を
１０ｍｌのＭＧＢ３−８培地を入れた１００ｍｌ容の三
角フラスコに接種し、２６℃にて３日間、振盪培養し
た。

【０１４６】培養物からの全ＲＮＡの調製は、グアニジ
ン・イソチオシアネート法を利用したＲＮｅａｓｙ Ｐ
ｌａｎｔ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（キアゲン社製）を用いて
行った。すなわち、培養物を、室温、５０００×Ｇの条
件下で１０分間遠心分離して菌体を回収し、湿重量２ｇ
の菌体を液体窒素により凍結した後、乳鉢上で粉末にな
るまで破砕した。この破砕物をグアニジン・イソチオシ
アネートを含む４ｍｌの菌体溶解バッファー（このキッ
トに含まれる。）に懸濁した。懸濁液をこのキットに含
まれるＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒスピンカラム１０本に４
５０μｌずつ分注し、室温、１０００×Ｇ、１０分間遠
心分離した後、溶出液をそれぞれ回収した：各溶出液に
２２５μずつのエタノールを加えた後、このキットに含
まれるＲＮＡミニスピンカラムに添加した。このカラム
をこのキットに含まれる洗浄用緩衝液で洗浄した後、５
０μｌずつのリボヌクレアーゼ・フリー蒸留水で吸着物
を溶出させ、溶出液を全ＲＮＡ画分とした。 ２）ノーザンブロット・ハイブリダイゼーション ２０μｇのペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３
８０の全ＲＮＡを含む２．２５μｌの水溶液に、１μｌ
の１０×ＭＯＰＳ（組成；２００ｍＭ ３−モルフォリ
ノプロパンスルホン酸、５０ｍＭ 酢酸ナトリウム、１
０ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ、ｐＨ７．０：１２１℃にて
２０分間オートクレーブ滅菌してから使用した。：同仁
化学研究所（株）製）、１．７５μｌのホルムアルデヒ
ド及び５μｌのホルムアミドを添加して混合し、ＲＮＡ
サンプルとした。このＲＮＡサンプルを、６５℃にて１
０分間保温した後、氷水中で急冷し、アガロースゲル電
気泳動に供した。電気泳動のゲルは、１０ｍｌの１０×
ＭＯＰＳ及び１ｇの Ａｇａｒｏｓｅ Ｌ０３「ＴＡＫ
ＡＲＡ」（宝酒造（株）製）を７２ｍｌのピロカルボニ
ック・アシッド・ジエチルエステル（Ｓｉｇｍａ社製）
処理水に混合し、加熱してアガロースを溶解させた後冷
却させ、１８ｍｌのホルムアルデヒドを添加することに
より作製した。サンプルバッファーは、１×ＭＯＰＳ
（１０×ＭＯＰＳを水で１０倍希釈したもの。）を使用
した。ゲル中のＲＮＡを、１０×ＳＳＣ中でＨｙｂｏｎ
ｄ^ＴＭ−Ｎ+（アマシャム社）へトランスファーした。

【０１４７】プローブには、ｐＭＬ４８挿入配列を下記
表１記載の制限酵素１及び２で消化することにより得ら
れるＤＮＡ断片（a、b、c、d及びe）を用いた。

【０１４８】

【表１】

【０１４９】プローブの標識、ハイブリダイゼーション
及びシグナルの検出は、実施例５のサザンブロット・ハ
イブリダイゼーションに従って行なった。

【０１５０】本実施例の結果を図３に記載した。

【０１５１】各シグナルは各プローブの塩基配列と相同
な転写産物の存在を示す。

【０１５２】本実施例でｐＭＬ４８挿入配列上に存在が
推定された６つの構造遺伝子ｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍｌ
ｃＣ、ｍｌｃＤ、ｍｌｃＥ及びｍｌｃＲはペニシリウム
・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株内で転写されてい
ることが確認された。

【０１５３】各シグナルの位置は、転写産物の相対的な
サイズを示すものではない。 ３）５’ＲＡＣＥによる５’−末端配列の決定 各構造遺伝子の５’−末端領域を含むｃＤＮＡの取得
は、５’ＲＡＣＥ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ Ｒａｐｉｄ
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡｅｎｄ
ｓ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０（ＧＩＢＣＯ社製）を用い
て行なった。

【０１５４】実施例７及び本実施例の２）の結果より推
定されたｐＭＬ４８の挿入配列上の各構造遺伝子におい
て、コード領域であり且つ該遺伝子の５’−末端近傍に
位置すると考えられる塩基配列に基いて設計されたアン
チセンス側のオリゴヌクレオチドＤＮＡを２種類作製し
た。

【０１５５】表２に、各構造遺伝子の、より３’−側に
位置する塩基配列に基いて設計されたアンチセンス側の
オリゴヌクレオチドＤＮＡ（１）の塩基配列を、表３
に、より５’−側に位置する塩基配列に基いて設計され
たアンチセンス側のオリゴヌクレオチドＤＮＡ（２）の
塩基配列を、それぞれ記載した。

【０１５６】

【表２】

【０１５７】

【表３】

【０１５８】オリゴヌクレオチドＤＮＡ（１）をプライ
マーとし、ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３
８０株の全ＲＮＡを鋳型とした逆転写反応によりｃＤＮ
Ａ第一鎖を合成した。すなわち、１μｇの全ＲＮＡ、
２．５ｐｍｏｌのオリゴヌクレオチドＤＮＡ（１）、１
μｌのＳＵＰＥＲ ＳＣＲＩＰＴＴＭ ＩＩ ｒｅｖｅ
ｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（このキットに含
まれる。）を含む２４μｌの反応液を、１６℃にて１時
間保温した後、生成物をこのキットに含まれるＧＬＡＳ
ＳＭＡＸスピンカートリッジに添加してｃＤＮＡ第一鎖
を精製した。

【０１５９】ｃＤＮＡ第一鎖の３’−末端に、このキッ
トに含まれるｔｅｒｍｉｎａｌ ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎ
ｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅにより
ポリＣ鎖を付加させた。

【０１６０】３’−末端にポリＣ鎖の付加したｃＤＮＡ
第一鎖、４０ｐｍｏｌのオリゴヌクレオチドＤＮＡ
（２）及び４０ｐｍｏｌのＡｂｒｉｇｅｄ Ａｎｃｈｏ
ｒ Ｐｒｉｍｅｒ（このキットに含まれる）を含む５０
μｌの反応液を、９４℃にて２分間保温し、続いて、９
４℃にて３０秒、５５℃にて３０秒、及び、７２℃にて
２分間を１サイクルとする反応を３５回行なった後、７
２℃にて５分間、４℃にて１８時間保温した。得られた
産物をアガロースゲル電気泳動に供した後、ゲルからＤ
ＮＡを回収し、フェノール・クロロホルム抽出及びエタ
ノール沈澱により産物を精製し、実施例４記載の方法に
準じてｐＣＲ２．１を用いてクローニングした。

【０１６１】以上の操作を５’ＲＡＣＥという。

【０１６２】５’−末端を含むｃＤＮＡ断片の塩基配列
を決定し、転写開始点及び翻訳開始コドンの位置を推定
した。

【０１６３】５’ＲＡＣＥにより得られた各構造遺伝子
に対応する５’−末端ｃＤＮＡ断片の塩基配列を記載し
た配列表の配列番号を表４に表示した。また、表５に、
各構造遺伝子の転写開始点及び翻訳開始の存在する配列
番号、転写開始点の位置及び翻訳開始点の位置を記載し
た。

【０１６４】

【表４】

【０１６５】

【表５】

【０１６６】４）３’ＲＡＣＥによる３’−末端配列の
決定 各構造遺伝子の３’−末端領域を含むｃＤＮＡの取得
は、Ｒｅａｄｙ ＴｏＧｏ：Ｔ−Ｐｒｉｍｅｄ Ｆｉｒ
ｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ ｋｉｔ（ファルマシア社製）を用
いて行なった。

【０１６７】実施例７及び本実施例の２）の結果より推
定されたｐＭＬ４８の挿入塩基配列上の各構造遺伝子に
おいて、コード領域であり、構造遺伝子の３’−末端近
傍に位置すると考えられるセンス側のオリゴヌクレオチ
ドＤＮＡ（３）を１種類ずつを作製した。

【０１６８】表６に各構造遺伝子について作製したオリ
ゴヌクレオチドＤＮＡ（３）の塩基配列を表示した。

【０１６９】

【表６】

【０１７０】オリゴヌクレオチドＤＮＡ（３）をプライ
マーとし、ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３
８０株の全ＲＮＡ（１μｇ）を鋳型とした逆転写反応に
よりｃＤＮＡ第一鎖を合成した。

【０１７１】ｃＤＮＡ第一鎖、４０ｐｍｏｌのオリゴヌ
クレオチドＤＮＡ（３）及びＮｏｔＩ−ｄ（Ｔ）１８プ
ライマー（このキットに含まれる。）を含む１００μｌ
の反応液を、９４℃にて２分間保温し、続いて、９４℃
にて３０秒、５５℃にて３０秒、及び、７２℃にて２分
間を１サイクルとする反応を３５回行なった後、７２℃
にて５分間、４℃にて１８時間保温した。得られた産物
をアガロースゲル電気泳動に供した後、ゲルからＤＮＡ
を回収し、フェノール・クロロホルム抽出及びエタノー
ル沈澱により産物を精製し、実施例４記載の方法に準じ
てｐＣＲ２．１を用いてクローニングした。

【０１７２】以上の操作を３’ＲＡＣＥという。

【０１７３】得られたｃＤＮＡの３’−側断片の塩基配
列を決定し、翻訳終止コドンの位置を推定した。

【０１７４】３’ＲＡＣＥにより得られた各構造遺伝子
に対応する３’−末端ｃＤＮＡ断片の塩基配列を記載し
た配列表の配列番号を表７にまとめた。また、表８に、
各構造遺伝子の翻訳終止コドン及び該コドンの位置を配
列表の配列番号１又は２に基いて記載した。

【０１７５】

【表７】

【０１７６】

【表８】

【０１７７】さらに、各構造遺伝子がコードすると推定
されるポリペプチドのＣ末端のアミノ酸残基、そのアミ
ノ酸残基をコードするトリヌクレオチドの塩基配列及び
そのトリヌクレオチドの位置を表９に記載した。

【０１７８】

【表９】

【０１７９】さらに、表８記載の翻訳終止コドンに対す
る相補配列、該相補配列の存在する配列番号、及び、該
相補配列の位置を表１０にまとめた。

【０１８０】

【表１０】

【０１８１】以上の通り、各構造遺伝子の存在、その方
向及びその位置が明らかとなった。これらの情報に基い
て、各構造遺伝子の転写産物及び翻訳産物を取得するこ
とが可能である。 実施例９．構造遺伝子ｍｌｃＥに対応するｃＤＮＡの取
得 １）全ＲＮＡの調製 ペニシリウム・シトリナムの全ＲＮＡは実施例８の方法
に従って調製した。 ２）プライマーの設計 実施例８により決定された構造遺伝子ｍｌｃＥに対応す
る完全長のｃＤＮＡを取得するために、ｍｌｃＥの５’
−上流域のヌクレオチド配列よりセンス・プライマー
（5'-gttaacatgtcagaacctctaccccc-3'：配列表の配列番
号３５番参照）を、３’−下流域のヌクレオチド配列よ
りアンチセンス・プライマー（5'-aatatttcaagcatcagtc
tcaggcac-3'：配列表の配列番号３６番参照）を、それ
ぞれ設計及び合成した。該合成はホスフォロアミダイト
法により行った。 ３）ＲＴ−ＰＣＲ ｍｌｃＥの遺伝子産物をコードする完全長のｃＤＮＡを
取得するために、Ｔａｋａｒａ ＲＮＡ ＬＡ ＰＣＲ
ｋｉｔ（ＡＭＶ）Ｖｅｒ．１．１を用いた。

【０１８２】１μｇの全ＲＮＡ、キットに添付のＲａｎ
ｄｏｍ ９ｍｅｒｓプライマーを２．５ｐｍｏｌ、１μ
ｌの逆転写酵素（キットに含まれる。）を含む２０μｌ
の反応液を４２℃にて３０分保温し、ｃＤＮＡ第１鎖を
合成した後、９９℃にて５分間加熱して逆転写酵素を失
活させた。

【０１８３】ｃＤＮＡ第１鎖反応溶液全量、４０ｐｍｏ
ｌのセンス・プライマー及び４０ｐｍｏｌのアンチセン
ス・プライマーを含む総容１００μｌの反応液を、９４
℃にて２分間保温し、続いて、９４℃にて３０秒、６０
℃にて３０秒、及び、７２℃にて２分間を１サイクルと
する反応を３０回行なった後、７２℃にて５分間、４℃
にて１８時間保温した。得られた産物をアガロースゲル
電気泳動に供した後、ゲルからＤＮＡを回収し、フェノ
ール・クロロホルム抽出及びエタノール沈澱により産物
を精製した。つづいて、実施例４記載の方法に準じてｐ
ＣＲ２．１を用いて、大腸菌のコンピーテント・セルＪ
Ｍ１０９株（宝酒造（株）製）を形質転換し、形質転換
大腸菌から該ＤＮＡ断片を所有したプラスミドを保持す
る株を選抜し、この株が保有するプラスミドをｐＣＲｅ
ｘｐＥと命名した。

【０１８４】得られた組換えＤＮＡベクターｐＣＲｅｘ
ｐＥ中の挿入ＤＮＡの塩基配列を決定したところ、該挿
入ＤＮＡは構造遺伝子ｍｌｃＥに対応する完全長のｃＤ
ＮＡを含んでいた。その塩基配列及びその塩基配列によ
りコードされるポリペプチドの推定アミノ酸配列は、配
列表の配列番号３７及び／又は３８に記載されている。 実施例１０．構造遺伝子ｍｌｃＲに対応するｃＤＮＡの
取得 １）全ＲＮＡの調製 ペニシリウム・シトリナムの全ＲＮＡは実施例８の方法
に従って調製した。 ２）プライマーの設計 実施例８により決定された構造遺伝子ｍｌｃＲに対応す
る完全長のｃＤＮＡを取得するために、ｍｌｃＲの５’
−上流域のヌクレオチド配列よりセンス・プライマー
（5'-ggatccatgtccctgccgcatgcaacgattc-3'：配列表の
配列番号３９参照）を、３’−下流域のヌクレオチド配
列よりアンチセンス・プライマー（5'-ggatccctaagcaat
attgtgtttcttcgc-3'：配列表の配列番号４０参照）を、
それぞれ設計及び合成した。該合成はホスフォロアミダ
イト法により行った。 ３）ＲＴ−ＰＣＲ ｍｌｃＲの遺伝子産物をコードする完全長のｃＤＮＡを
取得するために、Ｔａｋａｒａ ＲＮＡ ＬＡ ＰＣＲ
ｋｉｔ（ＡＭＶ）Ｖｅｒ．１．１を用いた。

【０１８５】１μｇの全ＲＮＡ、キットに添付のＲａｎ
ｄｏｍ ９ｍｅｒｓプライマーを２．５ｐｍｏｌ、１μ
ｌの逆転写酵素（キットに含まれる。）を含む２０μｌ
の反応液を４２℃にて３０分保温し、ｃＤＮＡ第１鎖を
合成した後、９９℃にて５分間加熱して逆転写酵素を失
活させた。

【０１８６】ｃＤＮＡ第１鎖反応溶液全量、４０ｐｍｏ
ｌのセンス・プライマー及び４０ｐｍｏｌのアンチセン
ス・プライマーを含む総容１００μｌの反応液を、９４
℃にて２分間保温し、続いて、９４℃にて３０秒、６０
℃にて３０秒、及び、７２℃にて２分間を１サイクルと
する反応を３０回行なった後、７２℃にて５分間、４℃
にて１８時間保温した。得られた産物をアガロースゲル
電気泳動に供した後、ゲルからＤＮＡを回収し、フェノ
ール・クロロホルム抽出及びエタノール沈澱により産物
を精製した。つづいて、実施例４記載の方法に準じてｐ
ＣＲ２．１を用いて、大腸菌のコンピーテント・セルＪ
Ｍ１０９株（宝酒造（株）製）を形質転換し、形質転換
大腸菌から該ＤＮＡ断片を所有したプラスミドを保持す
る株を選抜し、この株が保有するプラスミドをｐＣＲｅ
ｘｐＲと命名した。

【０１８７】得られた組換えＤＮＡベクターｐＣＲｅｘ
ｐＲ中の挿入ＤＮＡの塩基配列を決定したところ、該挿
入ＤＮＡは構造遺伝子ｍｌｃＲに対応する完全長のｃＤ
ＮＡを含んでいた。その塩基配列及びその塩基配列によ
りコードされるポリペプチドの推定アミノ酸配列は、配
列表の配列番号４１及び／又は４２に記載されている。 実施例１１．発現ベクターｐＳＡＫ７００の構築 実施例１記載のベクターｐＳＡＫ３３３及びｐＳＡＫ３
６０を用いて、ｃＤＮＡ発現ベクターｐＳＡＫ７００の
構築を行なった。 １）ｐＳＡＫ３３３を制限酵素ＢａｍＨ１とＨｉｎｄ３
（宝酒造（株）製）で二重消化し、アガロースゲル電気
泳動後、４．１ｋｂ断片をゲルより回収し、Ｔ４ＤＮＡ
ポリメラーゼ（宝酒造（株）製）で該ＤＮＡ断片の末端
を平滑化した。 ２）ＤＮＡ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｋｉｔ Ｖｅｒ．２
（宝酒造（株）製）を用いて上記ＤＮＡ断片に、Ｅｃｏ
Ｒ１−Ｎｏｔ１−ＢａｍＨ１アダプター（宝酒造（株）
製）を連結し、大腸菌のコンピーテント・セルＪＭ１０
９株（宝酒造（株）製）を形質転換した。形質転換大腸
菌からアダプターを所有したプラスミドを保有する株を
選抜し、この株が保有するプラスミドをｐＳＡＫ４１０
と命名した。 ３）ｐＳＡＫ３６０を制限酵素Ｐｖｕ２及びＳｓｐ１で
二重消化した後、電気泳動を行ない、アスペルギルス・
ニデュランス由来の３−ホスホグリセレートキナーゼ
（3-phosphoglycerate kinase：以下、「ｐｇｋ」とい
う。）遺伝子のプロモーター及びターミネーター、大腸
菌由来のＨＰＴを含有するＤＮＡ断片（約２．９ｋｂ）
をゲルより回収した。 ４）回収した上記ＤＮＡ断片を、ｐＳＡＫ４１０のＰｖ
ｕ２部位に、ＤＮＡ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｋｉｔ Ｖｅ
ｒ．２（宝酒造（株）製）を用いて連結し、大腸菌のコ
ンピーテント・セルＪＭ１０９株（宝酒造（株）製）を
形質転換した。形質転換大腸菌から該ＤＮＡ断片を所有
したプラスミドを保持する株を選抜し、この株が保有す
るプラスミドをｐＳＡＫ７００と命名した。

【０１８８】ｐＳＡＫ７００の構築手順を図４に記載す
る。

【０１８９】ｐＳＡＫ７００は、アダプター由来のＢａ
ｍＨＩ及びＮｏｔＩの各制限酵素認識部位を１つずつ有
する。また、ｐＳＡＫ７００は選択マーカーとして、ア
ンピシリン耐性遺伝子（Ampicillin resistant gene：
以下、「Ａｍｐ^r」という。）及びハイグロマイシン耐
性遺伝子であるＨＴＰを有している。以下の実施例にお
いて、大腸菌を宿主とする場合、ｐＳＡＫ７００又は外
来ＤＮＡを挿入したｐＳＡＫ７００による形質転換体の
選択は、４０μｇ／ｍｌのアンピシリンを培地に添加し
て行なった。ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３
３８０を宿主とする場合、ｐＳＡＫ７００又は外来ＤＮ
Ａを挿入したｐＳＡＫ７００による形質転換体の選択
は、２００μｇ／ｍｌのハイグロマシシンＢを培地に添
加して行なった。 実施例１２．組換え発現ベクターｐＳＡＫｅｘｐＥの構
築 １）実施例９で得られた組換えＤＮＡベクターｐＣＲｅ
ｘｐＥを制限酵素ＨｐａＩ及びＳｓｐＩ（ともに，宝酒
造（株）製）の存在下で３７℃にて２時間反応させ、該
反応物をアガロースゲル電気泳動に供し、ｍｌｃＥの完
全長ｃＤＮＡを含む１．７ｋｂ付近のバンドをゲルより
回収した。 ２）ｐＳＡＫ７００を制限酵素ＮｏｔＩ（宝酒造（株）
製）で３７℃１時間反応させた後、Ｔ４ＤＮＡポリメラ
ーゼ（宝酒造（株）製）と３７℃５分間反応させること
により末端を平滑化し、フェノール・クロロホルム抽出
及びエタノール沈殿を行った。得られた沈殿を少量のＴ
Ｅに溶解させ、アルカリホスファターゼ（宝酒造（株）
製）を添加し、６５℃３０分間反応させた。このように
平滑末端化したｐＳＡＫ７００のＮｏｔ１消化物と、
１）で得られた１．７ｋｂのＤＮＡ断片を、ＤＮＡ ｌ
ｉｇａｔｉｏｎ ｋｉｔ Ｖｅｒ．２（宝酒造（株）
製）を用いて連結し、大腸菌のコンピーテント・セルＪ
Ｍ１０９株（宝酒造（株）製）を形質転換した。その結
果、組換え発現ベクターで形質転換された大腸菌株が得
られた。

【０１９０】本実施例で得られた形質転換大腸菌 Ｅ．
ｃｏｌｉ ｐＳＡＫｅｘｐＥ ＳＡＮＫ ７２４９９株
は、平成１２年（２０００年）１月２５日付けで通商産
業省工業技術院生命工学工業技術研究所（日本国茨城県
つくば市東町１丁目１番３号）に国際寄託され、受託番
号ＦＥＲＭ ＢＰ−７００５を付与された。実施例１
３．組換え発現ベクターｐＳＡＫｅｘｐＲの構築 １）実施例１０で得られた組換えＤＮＡベクターｐＣＲ
ｅｘｐＲを制限酵素ＢａｍＨ１（宝酒造（株）製）の存
在下で３７℃にて２時間反応させ、該反応物をアガロー
スゲル電気泳動に供し、ｍｌｃＲの完全長ｃＤＮＡを含
む１．４ｋｂ付近のバンドをゲルより回収した。 ２）ｐＳＡＫ７００を制限酵素ＢａｍＨＩ（宝酒造
（株）製）で３７℃１時間反応させた後、アルカリフォ
スファターゼ（宝酒造（株）製）を添加して６５℃にて
３０分間反応させた。このようにＢａｍＨ１消化された
ｐＳＡＫ７００と、１）で得られた１．４ｋｂのＤＮＡ
断片を、ＤＮＡ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｋｉｔＶｅｒ．２
（宝酒造（株）製）を用いて連結し、大腸菌のコンピー
テント・セルＪＭ１０９株（宝酒造（株）製）を形質転
換した。その結果、組換え発現ベクターで形質転換され
た大腸菌株が得られた。

【０１９１】本実施例で得られた形質転換大腸菌 Ｅ．
ｃｏｌｉ ｐＳＡＫｅｘｐＲ ＳＡＮＫ ７２５９９株
は、平成１２年（２０００年）１月２５日付けで通商産
業省工業技術院生命工学工業技術研究所（日本国茨城県
つくば市東町１丁目１番３号）に国際寄託され、受託番
号ＦＥＲＭ ＢＰ−７００６を付与された。 実施例１４．ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物の形質転換 １）プロトプラストの調製 ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株を培
養したスラントより、白金耳を用いてＰＧＡ寒天培地に
接種し、２６℃にて１４日間保温した。該培養物よりペ
ニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株の胞子
を回収し、１×１０⁸個の胞子を８０ｍｌのＹＰＬ−２
０培地に接種し、２６℃にて１日間保温した。胞子の発
芽を顕微鏡観察により確認した後、発芽胞子を、室温、
５０００×Ｇの条件下で１０分間遠心分離して胞子を沈
澱として回収した。胞子を滅菌水で３回洗浄した後、プ
ロトプラスト化を行なった。すなわち、２００ｍｇのザ
イモリアーゼ２０Ｔ（生化学工業（株）製）及び１００
ｍｇのキチナーゼ（Ｓｉｇｍａ社製）を１０ｍｌの０．
５５Ｍ 塩化マグネシウムに溶解し、室温、５０００×
Ｇの条件下で１０分間遠心分離して得られた上清を酵素
液とし、２０ｍｌの酵素液及び湿重量０．５ｇの発芽胞
子を１００ｍｌ容三角フラスコに入れ、３０℃にて６０
分間穏やかに振盪し、発芽胞子がプロトプラスト化した
ことを顕微鏡観察により確認した後、反応液を３Ｇ−２
ガラスフィルター（ＨＡＲＩＯ社製）で濾過した。該濾
液を、室温、１０００×Ｇの条件下で１０分間遠心分離
し、プロトプラストを沈澱として回収した。 ２）形質転換 １）で得られたプロトプラストを３０ｍｌの０．５５Ｍ
塩化マグネシウム溶液で２回、３０ｍｌの０．５５Ｍ
塩化マグネシウム−５０ｍＭ 塩化カルシウム−１０
ｍＭ ３−モルフォリノプロパンスルホン酸（ｐＨ６．
３：以下、「ＭＣＭ溶液」という。）で１回それぞれ洗
浄し、１００μｌの４％(w/v)ポリエチレングリコール
８０００−１０ｍＭ ３−モルフォリノプロパンスルホ
ン酸−０．００２５％(w/v)ヘパリン（Ｓｉｇｍａ社
製）−５０ｍＭ 塩化マグネシウム（ｐＨ６．３：以
下、「形質転換用溶液」という。）に懸濁した。約５×
１０⁷個のプロトプラストを含む９６μｌの形質転換溶
液及び１２０μｇのｐＳＡＫｅｘｐＥ（実施例１２記
載）又はｐＳＡＫｅｘｐＲ（実施例１３記載）を含む１
０μｌのＴＥを混合し、氷上で３０分間静置した。これ
に１．２ｍｌの２０％(w/v)ポリエチレングリコール−
５０ｍＭ 塩化マグネシウム−１０ｍＭ ３−モルフォ
リノプロパンスルホン酸（ｐＨ６．３）を加えて穏やか
にピペッティングし、室温、２０分間静置した。これに
１０ｍｌのＭＣＭ溶液を加えて穏やかに混合し、室温、
１０００×Ｇの条件下で１０分間遠心分離した。沈澱よ
り形質転換プロトプラストを回収した。 ３）形質転換プロトプラストにおける細胞壁の再生 ２）で得られた形質転換プロトプラストを５ｍｌの液状
のＶＧＳ中層寒天培地に懸濁し、固化した１０ｍｌのＶ
ＧＳ下層寒天培地プレートに重層した。該プレートを、
２６℃にて１日間培養した後、プレート１枚につき５ｍ
ｇのハイグロマイシンＢ（Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ Ｂ：
Ｓｉｇｍａ社製）を含む１０ｍｌの液状のＶＧＳ上層寒
天培地を重層した（ハイグロマイシンＢの終濃度は２０
０μｇ／ｍｌ）。２６℃にて１４日間保温して得られた
菌株を、２００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンＢを含有
するＰＧＡ寒天培地上で継代培養した後、ＰＧＡ寒天培
地で作製したスラントに植え継ぎ、２６℃にて１４日間
保温した。

【０１９２】該スラントは４℃で保存した。 実施例１５．構造遺伝子ｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍｌｃＣ
及びｍｌｃＤに対応する各ｃＤＮＡ配列の決定 １）構造遺伝子ｍｌｃＡに対応するｃＤＮＡ配列の決定 ＴＡＫＡＲＡ ＬＡ ＰＣＲ ｋｉｔ ｖｅｒ１．１
（宝酒造（株）製）を用いてｃＤＮＡ第１鎖を合成し
た。

【０１９３】所望のｃＤＮＡの全長又はその部分領域を
増幅するために多種のプライマーを設計し、該ｃＤＮＡ
第１鎖を鋳型として以下の条件によるＰＣＲを行った；
Ｔｈｅ Ｂｉｇ Ｄｙｅ Ｐｒｉｍｅｒ／Ｔｅｒｍｉｎ
ａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｉｎｇ及びＫ
ｉｔとＴｈｅ ＡＢ１ Ｐｒｉｓｍ ３７７ Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅｒ（ともに、ＰＥアプライド・バイオシステム
ズ社製）を用い、９４℃にて３０秒、６２℃にて３０
秒、７２℃にて５分からなる反応サイクルを３０回反復
した。

【０１９４】ＰＣＲ産物をそれぞれプラスミドｐＣＲ
２．１へ挿入した。

【０１９５】組換プラスミドでそれぞれ大腸菌を形質転
換した。

【０１９６】形質転換大腸菌から得られた組換プラスミ
ドの各挿入配列のヌクレオチド配列と構造遺伝子ｍｌｃ
Ａのヌクレオチド配列とを比較することにより、エキソ
ンとイントロンの構造を決定した。

【０１９７】このようにして、構造遺伝子ｍｌｃＡに対
応するｃＤＮＡの配列が決定され（配列表の配列番号４
３）、該ｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドのア
ミノ酸配列が推定された（配列表の配列番号４４）。ま
た、該ポリペプチドの機能が、アミノ酸配列の相同性検
索により推定された。

【０１９８】構造遺伝子ｍｌｃＡによりコードされるポ
リペプチドと最も高い相同性を示すアミノ酸配列を有す
る公知物質はロバスタチン生合成遺伝子クラスター上に
存在するＬＮＫＳ（ｌｏｖＥ）であり、６０％同一であ
った。 ２）構造遺伝子ｍｌｃＢに対応するｃＤＮＡ配列の決定 １）と同様に、構造遺伝子ｍｌｃＢに対応するｃＤＮＡ
のヌクレオチド配列が決定され（配列表の配列番号４
５）、該ｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドのア
ミノ酸配列が推定された（配列表の配列番号４６）。ま
た、該ポリペプチドの機能が、アミノ酸配列の相同性検
索により推定された。

【０１９９】構造遺伝子ｍｌｃＢによりコードされるポ
リペプチドと最も高い相同性を示すアミノ酸配列を有す
る公知物質はロバスタチン生合成遺伝子クラスター上に
存在するＬＤＫＳ（ｌｏｖＦ）であり、６１％同一であ
った。 ３）構造遺伝子ｍｌｃＣに対応するｃＤＮＡ配列の決定 １）と同様に、構造遺伝子ｍｌｃＣに対応するｃＤＮＡ
のヌクレオチド配列が決定され（配列表の配列番号４
７）、該ｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドのア
ミノ酸配列が推定された（配列表の配列番号４８）。ま
た、該ポリペプチドの機能が、アミノ酸配列の相同性検
索により推定された。

【０２００】構造遺伝子ｍｌｃＣによりコードされるポ
リペプチドと最も高い相同性を示すアミノ酸配列を有す
る公知物質はロバスタチン生合成遺伝子クラスター上に
存在するｌｏｖＡであり、７２％同一であった。 ４）構造遺伝子ｍｌｃＤに対応するｃＤＮＡ配列の決定 １）と同様に、構造遺伝子ｍｌｃＤに対応するｃＤＮＡ
のヌクレオチド配列が決定され（配列表の配列番号４
９）、該ｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドのア
ミノ酸配列が推定された（配列表の配列番号５０）。ま
た、該ポリペプチドの機能が、アミノ酸配列の相同性検
索により推定された。

【０２０１】構造遺伝子ｍｌｃＤによりコードされるポ
リペプチドと最も高い相同性を示すアミノ酸配列を有す
る公知物質はロバスタチン生合成遺伝子クラスター上に
存在するＯＲＦ８であり、６３％同一であった。 ５）構造遺伝子ｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍｌｃＣ及びｍｌ
ｃＤの各エキソンの、ｐＭＬ４８挿入配列上の位置は、
表１３に示す通りである。

【０２０２】

【表１１】

【０２０３】また、構造遺伝子ｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍ
ｌｃＣ、ｍｌｃＤ、ｍｌｃＥ及びｍｌｃＲの転写終結点
の、ｐＭＬ４８挿入配列上の位置は、表１２に示す通り
である。

【０２０４】

【表１２】

【０２０５】実施例１６．構造遺伝子ｍｌｃＡ、ｍｌｃ
Ｂ又はｍｌｃＤの破壊 ＤＮＡの相同組換（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｃｏｍ
ｂｉｎａｔｉｏｎ）手法を用いた部位特異的変異（ｓｉ
ｔｅ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）に
より、ペニシリウム・シトリナムの構造遺伝子ｍｌｃ
Ａ、ｍｌｃＢ又はｍｌｃＤを破壊した。１）構造遺伝子
ｍｌｃＡ破壊株の取得とその解析 ｐＳＡＫ３３３を用い、ペニシリウム・シトリナムの構
造遺伝子ｍｌｃＡを破壊するための組換プラスミドを作
製した。

【０２０６】ｐＭＬ４８挿入配列を制限酵素Ｋｐｎ１で
消化し、構造遺伝子ｍｌｃＡ中の４．１断片を回収、精
製した後、ＤＮＡ Ｂｌｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ（宝酒造
（株）製）を用いて平滑末端化し、制限酵素Ｐｖｕ２で
消化したｐＳＡＫ３３３に連結した。得られたプラスミ
ドをｐｄｉｓｍｌｃＡと命名した。

【０２０７】ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ １
３３８０株をｐｄｉｓｍｌｃＡで形質転換した。

【０２０８】ｐｄｉｓｍｌｃＡ形質転換株のゲノムＤＮ
Ａを用いてサザンブロット・ハイブリダイゼーションを
行い、構造遺伝子ｍｌｃＡの破壊を確認した。

【０２０９】得られた構造遺伝子ｍｌｃＡ破壊株は、Ｍ
Ｌ−２３６Ｂ及びその前駆体を全く生産しなかった。 ２）構造遺伝子ｍｌｃＢ破壊株の取得とその解析 ｐＳＡＫ３３３を用い、ペニシリウム・シトリナムの構
造遺伝子ｍｌｃＢを破壊するための組換プラスミドを作
製した。

【０２１０】ｐＭＬ４８挿入配列を制限酵素Ｐｓｔ１及
びＢａｍＨ１で消化し、構造遺伝子ｍｌｃＢ中の１．４
ｋｂ断片を回収、精製した後、ＤＮＡ Ｂｌｕｎｔｉｎ
ｇＫｉｔ（宝酒造（株）製）を用いて平滑末端化し、制
限酵素Ｐｖｕ２で消化したｐＳＡＫ３３３に連結した。
得られたプラスミドをｐｄｉｓｍｌｃＢと命名した。

【０２１１】ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ １
３３８０株をｐｄｉｓｍｌｃＢで形質転換した。

【０２１２】ｐｄｉｓｍｌｃＢ形質転換株のゲノムＤＮ
Ａを用いてサザンブロット・ハイブリダイゼーションを
行い、構造遺伝子ｍｌｃＢの破壊を確認した。

【０２１３】得られた構造遺伝子ｍｌｃＢ破壊株は、Ｍ
Ｌ−２３６Ｂを生産せず、ＭＬ−２３６Ｂの前駆体であ
るＭＬ−２３６Ａを生産した。 ３）構造遺伝子ｍｌｃＤ破壊株の取得とその解析 ｐＳＡＫ３３３を用い、ペニシリウム・シトリナムの構
造遺伝子ｍｌｃＤを破壊するための組換プラスミドを作
製した。

【０２１４】ｐＭＬ４８挿入配列を制限酵素Ｋｐｎ１及
びＢａｍＨ１で消化し、構造遺伝子ｍｌｃＤ中の１．４
ｋｂ断片を回収、精製した後、ＤＮＡ Ｂｌｕｎｔｉｎ
ｇＫｉｔ（宝酒造（株）製）を用いて平滑末端化し、制
限酵素Ｐｖｕ２で消化したｐＳＡＫ３３３に連結した。
得られたプラスミドをｐｄｉｓｍｌｃＤと命名した。

【０２１５】ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ １
３３８０株をｐｄｉｓｍｌｃＤで形質転換した。

【０２１６】ｐｄｉｓｍｌｃＤ形質転換株のゲノムＤＮ
Ａを用いてサザンブロット・ハイブリダイゼーションを
行い、構造遺伝子ｍｌｃＤの破壊を確認した。

【０２１７】得られた構造遺伝子ｍｌｃＤ破壊株のＭＬ
−２３６Ｂ生産量は、対照のｍｌｃＤ非破壊株の３０％
であった。 実施例１７．ｐＳＡＫｅｘｐＲ形質転換株における構造
遺伝子ｍｌｃＲの機能解析 実施例１３において得られた２つのｐＳＡＫｅｘｐＲ形
質転換株（ＴＲ１及びＴＲ２）及び対照の非形質転換株
（ペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株）
を、それぞれＭＢＧ３−８培地に接種し、実施例８記載
の方法により培養した。

【０２１８】培養終了後、実施例８記載の方法により、
全ＲＮＡを抽出した。

【０２１９】全ＲＮＡを鋳型とし、構造遺伝子ｍｌｃ
Ａ、ｍｌｃＢ、ｍｌｃＣ、ｍｌｃＤ、ｍｌｃＥ又はｍｌ
ｃＲのヌクレオチド配列に基づいて設計されたオリゴヌ
クレオチド（表１３参照）をプライマーとして、ＲＴ−
ＰＣＲを行った。

【０２２０】

【表１３】

【０２２１】ＴＲ１、ＴＲ２及びペニシリウム・シトリ
ナム ＳＡＮＫ１３３８０株に関するＲＴ−ＰＣＲ分析
の結果を図５に示す。

【０２２２】形質転換株（ＴＲ１及びＴＲ２）におい
て、構造遺伝子ｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍｌｃＣ、ｍｌｃ
Ｄ並びにｍｌｃＲは、培養１日目、２日目及び３日目の
いずれにおいても発現していた。

【０２２３】これに対し、非形質転換対照株（ペニシリ
ウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株）において、
これらの構造遺伝子は、培養３日目においてのみ発現し
ていた。

【０２２４】構造遺伝子ｍｌｃＥの発現は、形質転換株
と非形質転換対照株とで、差が見られなかった。

【０２２５】これらの結果は、構造遺伝子ｍｌｃＲに対
応するｃＤＮＡによりコードされるタンパク質が、ＭＬ
−２３６Ｂ生合成関連ゲノムＤＮＡ上に位置する他の構
造遺伝子（ｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍｌｃＣ、ｍｌｃＤ
等）のいくつかの転写を誘導することを示唆するもので
ある。 実施例１８．ｐＳＡＫｅｘｐＥ形質転換株における構造
遺伝子ｍｌｃＥの機能解析 実施例１３において得られたｐＳＡＫｅｘｐＲ形質転換
株（ＴＥ１）及び対照の非形質転換株（ペニシリウム・
シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株）を、それぞれＭＢ
Ｇ３−８培地に接種し、実施例８記載の方法により培養
した。

【０２２６】培養終了後、実施例８記載の方法により、
全ＲＮＡを抽出した。

【０２２７】全ＲＮＡを鋳型とし、実施例１７の表１３
に記載オリゴヌクレオチドをプライマーとして、ＲＴ−
ＰＣＲを行った。

【０２２８】ＴＥ１及びペニシリウム・シトリナム Ｓ
ＡＮＫ１３３８０株に関する、構造遺伝子ｍｌｃＥのＲ
Ｔ−ＰＣＲ分析の結果を図６に示す。

【０２２９】形質転換株（ＴＥ１）において、構造遺伝
子ｍｌｃＥは、培養１日目、２日目及び３日目のいずれ
においても発現していた。

【０２３０】これに対し、非形質転換対照株（ペニシリ
ウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３８０株）において、
構造遺伝子ｍｌｃＥは、培養３日目においてのみ発現し
ていた。

【０２３１】一方、構造遺伝子ｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍ
ｌｃＣ、ｍｌｃＤ及びｍｌｃＲの発現は、形質転換株と
非形質転換対照株とで、差が見られなかった。

【０２３２】これらの結果は、構造遺伝子ｍｌｃＥに対
応するｃＤＮＡによりコードされるタンパク質が、ＭＬ
−２３６Ｂ生合成関連ゲノムＤＮＡ上に位置する他の構
造遺伝子ｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍｌｃＣ、ｍｌｃＤ及び
ｍｌｃＲの転写誘導を伴わずに、ＭＬ−２３６Ｂの生合
成を促進し得ることを示唆するものである。 試験例１．形質転換株及び親株の有するＭＬ−２３６Ｂ
生合成能の比較 実施例１４において得られた形質転換株及び対照の非形
質転換株であるペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１
３３８０株を培養し、該培養物中のＭＬ−２３６Ｂ量を
測定した。

【０２３３】形質転換株を培養した実施例１４記載のス
ラント又はペニシリウム・シトリナム ＳＡＮＫ１３３
８０株を培養した実施例２記載のスラントより、５ｍｍ
角の菌体を、１０ｍｌのＭＢＧ３−８培地を入れた１０
０ｍｌ容の三角フラスコに接種し、２４℃にて２日間、
振盪培養した後、３．５ｍｌの５０％(w/v)グリセリン
溶液を添加し、さらに２４℃にて１０日間、振盪培養し
た。

【０２３４】該培養物１０ｍｌに５０ｍｌの０．２規定
水酸化ナトリウムを加え、２６℃にて１時間、振盪しつ
つ保温した後、室温、３０００×Ｇの条件下で２分間遠
心分離し、１ｍｌの上清を回収し、９ｍｌの５０％メタ
ノールと混合してＨＰＬＣに供した。

【０２３５】ＨＰＬＣのカラムには、ＳＳＣ−ＯＤＳ−
２６２（直径６ｍｍ、長さ１００ｍｍ：センシュー科学
（株）製）を用い、移動相には７５％(v/v)メタノール
−０．１％(v/v)トリエチルアミン−０．１％(v/v)酢酸
を用い、室温にて２ｍｌ／分の流速で溶出した。これら
条件下において、ＭＬ−２３６Ｂはカラム添加後４．０
分に溶出された。検出はＵＶ検出器の吸収波長を２３６
ｎｍに設定して行なった。

【０２３６】ｐＳＡＫｅｘｐＥ形質転換株のうち、ＭＬ
−２３６Ｂ生合成能の上昇した株３つが得られた。これ
らのＭＬ−２３６Ｂ生合成能は、対照の非形質転換株よ
り平均１０％高かった。これら３株のＭＬ−２３６Ｂ生
合成能は、モノスポア処理等の継代を行なった後も安定
に維持された。

【０２３７】ｐＳＡＫｅｘｐＲ形質転換株のうち、ＭＬ
−２３６Ｂ生合成能の上昇した株５つが得られた。これ
らのＭＬ−２３６Ｂ生合成能は、対照の非形質転換株よ
り平均１５％高かった。これら５株のＭＬ−２３６Ｂ生
合成能は、モノスポア処理等の継代を行なった後も安定
に維持された。

【０２３８】これらの結果より、ｐＳＡＫｅｘｐＥ又は
ｐＳＡＫｅｘｐＲの挿入配列は、ＭＬ−２３６Ｂ生合成
促進ｃＤＮＡであることが示された。

【０２３９】

【発明の効果】本発明においてＭＬ−２３６Ｂ生産微生
物より得られたＭＬ−２３６Ｂ生合成促進ｃＤＮＡは、
ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内に導入されることにより該
生産微生物のＭＬ−２３６Ｂ生合成を促進する。

【図面の簡単な説明】

【図１】大腸菌及び糸状菌に導入させることができ且つ
長いＤＮＡを挿入することができるＤＮＡベクターｐＳ
ＡＫｃｏｓ１の構築図。

【図２】ｐＭＬ４８挿入配列の構造遺伝子解析。

【図３】ｐＭＬ４８挿入配列のノーザンブロット・ハイ
ブリダイゼーション。

【図４】大腸菌及び糸状菌に導入させることができる発
現ベクターｐＳＡＫ７００の構築図。

【図５】ｐＳＡＫｅｘｐＲ形質転換株及び非形質転換対
照株における、構造遺伝子ｍｌｃＡ、ｍｌｃＢ、ｍｌｃ
Ｃ、ｍｌｃＤ、ｍｌｃＥ及びｍｌｃＲの、ＲＴ−ＰＣＲ
を用いた発現解析。

【図６】ｐＳＡＫｅｘｐＥ形質転換株及び非形質転換対
照株における、構造遺伝子ｍｌｃＥの、ＲＴ−ＰＣＲを
用いた発現解析。

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Sankyo Company, Limited <120> The cDNAs which enhance the biosynthesis of ML-236B in ML-236B-pro ducing microorganisms. <130> 2001019SW <140> <141> <150> JP 2000-116591 <151> 2000-04-18 <150> JP 2000-117458 <151> 2000-04-19 <160> 62 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 34203 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 1 gatcaatact acgtcgttgt tatttccttg tcagtaatga ctaacaaatt ccccagaaca 60 gacgaagtca cagctcacac cacaagagaa aatgagtcca gcgaggatta cagatttctc 120 gccaggcaaa ccgagaaaag ctctcttatg catccacggt gccgggtgct cagcagccat 180 attccgcgtc cagatctcta aactgcgcgt ggcgttgaaa aacgagtttg aattcgtata 240 tgcgaccgcg ccgtttagct ccagccccgg acccggcgtg cttcctgtct tccaaggcat 300 gggtccatac tacacctggt tccaaaagca tcatgacgcc gttacaaaca cgacaacccc 360 cacggtgggc gatagagtag cggctgtgat cgggcctgtg caaaagaccg tccaagattg 420 gtctataact aacccacagg cacccattgt cggcatagtg gccttctctg agggcgcatt 480 ggtcgccact ttgctgctcc atcaacagca aatgggaaaa ctgccatggt ttccgaaaat 540 gagcattgct gttttgattt gctgtttcta tagcgatgaa gccagagatt acatgagagc 600 cgaggcgcaa gacgacgacg acaagctaat aatcaacgtg ccgacactgc atcttcacgg 660 tcgtcaagat tttgctctcc aagggtcgag acagatggtt gaaacacatt acctgcctca 720 gaatgcagat gtactcgagt ttcagggaaa gcataatttt cccaacagac cgagtgatgt 780 ccaggagacg gtcaagcgct tccaacagct atatcaaaag gtcaagatgt caggttcatt 840 tgtctaggtg agacaacagg gtatatagca aggctctggc tctcatgcct agtccatacc 900 acatttttac tgaacaaatt tgaatagttc taatcttaca cggtttgaat gctcaccttc 960 caagggtgat ttagttatag tggtcgcgac catctcataa atatttcgtg aacatatttt 1020 ggatagatca tggaaggctc gttctgaaca ggcatgacag acatctaaaa ccactcgatc 1080 accacaacaa ggcactaaac cagtaactat ggaactattt gcaatggcgt cgaatttata 1140 tacaggatgg attgaaatca attccaagcc ttggaggttt caccttcctc acagagtctt 1200 tcgaaacgcg ctaccgaggt atatttatca ccgttacggt actctgaacc gcgctatcta 1260 acttgatgtt acgattgctg caataaagaa gagcaacgaa ggtagaagta attttgacaa 1320 agatacaaga cgaattcgct atttgtagat gaatatgcgt gtgtcaattg acgccgaatt 1380 caggatagat ttgccatctg ctctattgcc aatttctaat ccatctttat catgaacaac 1440 actcaaacca cacatctgaa ttcacggcgc tgaacgatct aggccaactt cagagccggg 1500 ttcatcgaga acatagtgag gattgaagaa aagtggtcta caaaggcctg agcgtgctca 1560 gggccataca gcgagctctg aagtttgaca tgaatgagtg ggtccttggt agggtcatcc 1620 cacatctcga gaacgatgtc ataaggagtg cgctcacggg aagcgagaac actcgtcatt 1680 ttggcattgc caattgagcc actctccgct tgaccctgct tgtaatcaaa gacagcctgg 1740 aacaaggggg cgtgtgtctg agtcttgggt tcctcgcctg aggtagggag attcaggcct 1800 agacagtcga ggatgacgcc atacggcacc cgcgcgtgtt gcatggcctc acgcacactg 1860 tccttggtgg ctacaaggtg ctcgccgaat gtcttgctgc cgacgaactc atcaaagcgc 1920 aggggaagca cgttagcgaa aaagcccatc gccgaaattt cttccatggt ggatcggttg 1980 gtttcggcga ggccgatggt tatgtctttg ctgccggtaa gacgcgccaa caaaacgtgg 2040 taggcggcca ggtagaactg catgggggtt gccttgtgct tgcggctccg ctctttgatt 2100 cggaaggcga ccatgggatc taaacgagca attgcttcat actgctgcca cgtgaatggc 2160 tgtatttgct gctgctctga attggcagca gggtcattga tcagattcat gatgggaagc 2220 acggttggcg cagatgacga gactttgcta tgcatggact tccagaacgc gatatcgtcc 2280 cccattcgcc cattttccag gttttcccgc tgttggacgg ctagatcaga gaattgggtc 2340 gatggtcgct gcattttcac cccgctgtaa atctgcccga tctcattgaa caggttttct 2400 gttgttgagc catcaccaac taatctgtgg tagccgatta ccaacaggtg gtcatctgtg 2460 ccccagtaga aatcaacgag tctgagagtg tcacctgtgg agatgctata gtttgtcttc 2520 tcgagtttcc ggtactcttc ctctgcctcc gcagcgttgt tcacctgaac aaagtgcact 2580 ctgttctccg ggttcttgag aaccacttgg acgggaccat ttaaatcgct gctatagtca 2640 tcgccagtaa caaagcacgt acggaagatc tcgtgacggc gcaatgaggc tttcagagcc 2700 cgcctcaacc ggtcgaggtc aatggtaccc ttcatgaaca tgccaatagt gttgttgaag 2760 atggtatgat cttttaccat ttgttgctgc ctccaggaat actcctggcc aagggacaac 2820 ctctcgcgac gaagaatctt acggcctccc tgctcattat cgtcctcttg ctcttcatcc 2880 tcttcggctg acgacgcatc tgtgctggta gcagagcttg cttcatcatg gctgtctgtt 2940 ggtgtcggag aagccccgct gtccgaggtt cccgtggaat caccaatttg caacagcagc 3000 ggaatggatg tagctgggag tcgggtggcc gcgtcgtcgg caagatcagc gacagaagca 3060 ccgccaagta ccctcaagag tgggaggtca aggtagagtt gctttgagaa ccatgagccg 3120 acagtcactg cacccaagga gtcgacacct tgatcaatga gaggaatggt tgggtccacg 3180 ctctccccgt ccgaaacttg gagggtaaca cggagtttct cagatagacc atctgcaact 3240 ttgttagttt gaactcgata tcaggaaacg catgagagat aacttaccaa tcacgatttg 3300 ccgaacttgg tctaaagttg ttgcttgttt gagctggtcg gcaatggagc ctttagaccc 3360 tgatccattg tcgccaccgt ctccgcgttg accgggaatt ttgaagtttc cgaaacgagg 3420 gtcgttgaag taaataattc gatcttgaag cgcagggtca agatctggga tacccgtggt 3480 aagctcaagg tccgccatgt caatgaccgt cttgcgctgt ggttgctgcc gggcacgctg 3540 gtcagacacg accgcttcgg cgaaaagcgt gtgcagctca tgctcttcaa ctgagtcaaa 3600 catgaaacgg atagcatcaa agtcctcctc catctcggcc ctcgtgacaa accctacacc 3660 gtaaacggca ccaatatcga tggttgatcc ctgtggttgt gcgttagtaa cttgacgtcg 3720 atgcatgata attcaggggt agaaaatacc gccaatcctc tggcgcaccg ttgctgggcc 3780 agagcctgta ggtaggcatt cgcagcgcca tagttggact ggccaggatt gccaataact 3840 gcaacaatgg acgaaaacat gatgaagaag tcgagcgcct tgctgcccgt ctgttcggag 3900 aaccgttcat gaagaatgcg tgctccttgt accttgggct tcaacaccat gtccatcatc 3960 tggtggtcca tgttcttcag catgacatcc tgcagcacca aaggcccgaa cgcgatgccg 4020 gcaacaggtg gcaacttcat atcgacaagc ttgccaaggc cagcatcgac tgaatcctca 4080 ttggcaacat ccctaaagaa agtaattgga taagtaaacg aggatgtggt agcaaggtgt 4140 gatgtgatat caatcaactt acattgacag aacggtgatg tcaccaccaa gtgcctccat 4200 gttggcgatc catttgggat caagtcgagg gttccggcta gtgagcacaa catggcgggc 4260 gccatgcaag atcatccagc gacagagaga gcgaccaagg tccccggtaa gaccaacaag 4320 caaatacgtc ttcttgttgg aaaataagtt accagagtcg atggggcaaa tcctagcgga 4380 cacctcattt tccttccagt cgatgacggt ggccagattg aagcgttggt cattgtggtt 4440 gacagagagc tgaccaggca agagaatttg tgtggctgta ataactttct cagtgtcgtc 4500 gacagtcgac gcagagacgg tattttttgc cattgccaca gagtgctcga ggattggaat 4560 atcctcaaca tgactaactt tgtatgtgga agctgtactt cggataagat agtcaccact 4620 gtacatgaag caactgggtg gtagcaactt ggccaaacgg ttggttatcc cggcagcagt 4680 ccggtcggta gacaagtcaa agaatgccat catgtttgtc ggcaggctgt gtttcagccg 4740 agcgtcggtt tccttggcat gtaatcggat ccaaggagcc ggaatagttt tgacgtcgga 4800 cagagttgtt gccaaatgaa cctgaacacc gtaggttttg gccgactcca gaattgcttt 4860 gacgcagaag attgggggct ccataatcag aattgatgca tcagagccaa aggactgagc 4920 gctagagaga attgtttcgg caaggagggc tgcagctgtg gacaacaaga aggaactatc 4980 ctcgccttcc gccatgttat cgggcagact atgcatgtag tttctcggta catgcagtat 5040 agatccattc ttctcagcca gggcgactac aggcacctca catgtattct ccagaatact 5100 gccctgcacg acatggaagt atccgagatg gcccacgcga attgcctggg gaagagcgta 5160 gcgaacacga acagttgctt ttccagcatg acgagcgtct tctaacgaat cacacgtctc 5220 ggttgactca agatagtaca tcgatgagga tgctcccctc gcctctttca gtgcaatggc 5280 cgtcttggac gaattaaagt taccgaaaat tggacgacga gacgagttca tacggtcgtt 5340 cctagcaata tcctgcttca aacgagggac ccaggcacga cccttgcacc agtacacttc 5400 gggctcatga gtccatgtta ttgattccaa aagctgatca tcgctctcct cgaagcgcaa 5460 aagttgctca acgaagaatt tggtgtctag gttctccaca gtatcgacat cgaagacgtg 5520 cgttcccaag tcagggttct cgagcttgat tgtcctcaac attccgatgg tgctggcctg 5580 gtggggatga tcaatccagg cattctctgt cagccacatc atgcgtccgg cgtagaagag 5640 aagagacttg actgcctcaa acttgtcctc ttcaaggttg caaaacactt catcatcaag 5700 ttccgagagg atgacaaaag tcgacttagg ctgcaaggcc gggtcgtcga gaacactttc 5760 cagccgcttg acggagtgga tgtgtctatg cggtagggca gctttcatgt cgttcaaaat 5820 gcgttcggtt tttgtcgatt cgccaccgat aaccactaat ggcgggtatg agtccttcaa 5880 tggagcagaa agtggatcat acaaacgctc aacggtggca tccacagcat gtgtactgaa 5940 gacagacggg atcaaatcat cctctcgatc aagtgtccga ctatcgacgc cagagaaccc 6000 aactctcttg agggtatgct cccattggtc aacggacccc gaggcactca aagcacgagt 6060 ttcgtcttct ccagtccatc gatcagcgaa aagcccagag atgaaggcga ggcgagcagg 6120 ctcgcgatgg gtgaccccga aagtaaccaa gtgaccaccc ggcttgagca aggaccttat 6180 gtgagccaat ttttcctcga agttggagct ggcatggagg acatcggatg caataatcag 6240 atcgtaggag tgaggcttga atccttgctc tgctgggctt ctgttgatgt ctagtgcctc 6300 aaactgcatg agaccgtcga attcggaaag ttgttcacgg gccttgccaa taacatccgc 6360 cgagatgtca gtgcaagtgt aactgttgaa accaagttga ggtgatgcaa gaacgcgctt 6420 cgtggcgatg cctgtaccca agcctaaaaa gcgaacgaca gattagcaaa ctgcctagtt 6480 acttacattt cagattcgac ttaccgatct caaggatatc aatggattgg tagcgatgag 6540 caatttggct aaccagatcc tgaacgacgt gtattgctga gccaaaggcg agcttgttgg 6600 tatagtactc ggtgaacaac ccatcgcggt tcatgatatc caaaggatcc ccgttcccgc 6660 gaacaattga aattaattct ttgcctaccc tttggatcag gcgcacatgt gggtgggacg 6720 agttgcttca agtaaaaggt taatataaaa gaatgaaaaa acacggaaca gctttgggtg 6780 tacctttcac acatttgctc aatgtgaaca gaagtgtcct cctcccaaga ctcctggtac 6840 cactgatggt ggccagcccg agcatcggcc tgaacctggt cacaccattc aatgtacttc 6900 tgggaatgga ggtcggcatt ttgacggtcg tcgggggtta tctgggctag gaaggatttg 6960 atgtagaagt aaacgattcg ctcgatggtc agaatgtcct ccttgtcccg agctatgatc 7020 aacgtcgcag ggtcctccag cagtttttcg ggcgtgaggg gtccccagac ccactttgcg 7080 aagattcggt ggtcggtcga agcagtcggg ggagagaaag gcttaaagac aatgttatca 7140 acttggaaaa gcgttgtctt ggtcgaatcg tacaccgtga tgtcgccgct caggaaatca 7200 cccttgtcgt gtgtgttgat tgtgtcaaac gcaagctcgg tttcaccaga attacccgcc 7260 gatatacaga gcgatggaat cagagtcact ctgtcaacgt gagtaggcac gtacaatgag 7320 cgtaggcgac gatctcctgg agaggaatac gctccaatga cagtctggaa cgcgatgtcc 7380 aggggcgctg ggtggagcaa gaggggctca ttgcgcaatt catccttaag tggaaggaaa 7440 gccaaggtgc cgctagcttt ggagtcggcc cttctcatgg tctgcaaacg acggaagtct 7500 ttgctgtagt catacccaag gaggtcaagt tcccgataga agaaatcgat gttgacattg 7560 ttcatctggg ggtactcttc ctcaggtggc ggcaaaagct gcgatgacgg tgatgcctcg 7620 ccaagggtta tgacgatttg gcctttggcg gatgtcgaaa gctcactctc ctttgccaga 7680 caggaatcaa taacaaattt gaccgtgact tggccatccg catcattgtc actggtgact 7740 tcggctgtca agttcagctc cacggaggtg ttttcatctt caaacacgat ggctttgttg 7800 atgctcatgt ccaagatttc caggagctga acttgggcgg cacgctcacc agccaccttc 7860 atggcagctt ccatggccat aattatgtac ccagcagcgg ggaacacagt ctggccttgt 7920 agcgcatgac cgtcgagcca ttccagatcc cggggcctga tgaagtttgt ccactggaag 7980 gtcgatgctg tgctgtaaga agaaagcttt ccaagcagaa gatggggcgc acctccacga 8040 agatgctggc gggtggagcg agattctgcc cagtattgac gagtatgatc ccaagagtat 8100 gtgggcaatg actttgacag gttttgaacg gcacgatcgg gccggacttg ttgtacgaag 8160 ccctcggcgt cgatactccg aactccgaaa cgctcccaaa tgtatcccag acctccagca 8220 aaagcgtcca catcgtcaac gtttcgtgcc aagcacccgg tatacggcag ctccacaccg 8280 gcaagagcat ccttgatggt ggctagacac ggacccttga gagcagggtg ggcgccaatt 8340 tcgatggcga cgtcgattag acgatgagtg atgactgctt tctgcacagc ctgcgagaac 8400 aagaccggag agacgagatt gtctttccaa taagcgggca tcacatcctg tacagtcatt 8460 tgcttgctgg tctcgtggac ggcagagaac caagcaacac tatcgttacc ttggccatcg 8520 gcaacagcac agtcgcactc cagcaatgcc ttgacatatg gagctgcgca tgggtgcatg 8580 tgatgcgaat ggtaggcctt gtcaactctc aagattctgg caaaagtgga ttcatcctcc 8640 aagacacctt caacgtgctg gatagcatcc atgtcgccgg agaaggtcac actatccggt 8700 gaattgctag cggcgacgca gacccgaccc tcaaaggctt cgagctcgca tagttccttt 8760 gcgtcatcgt acgacatacc tgccgctagc atagcgcctg tctggccgct tggagaagag 8820 gcatgctccg cggacacaac tccacgcaga tgcgcaatac ggatagcttg agtggcactg 8880 atgaatcctg ccgcaaaggc acaggcaatc tcacctgaac tgtggccgac aattgcactg 8940 aactcgatac cagctgcagc gagaagtcgg accagaacga tttgtacggc gcagcataga 9000 ggctgggaga agctggcgag tctgacgttt gaggcatccc cttcaagcat gagctggtca 9060 tacagtgtcc acgtaggccg atacttttca ggcagtgttt gcagtgaatt atccagctct 9120 tcgagaatgc ctctcacaaa tggcataccc accatgagct tcttcagcat gcccggccac 9180 tgtgcacctt ggccagtaaa gacacctagt acgcgagggt tgtcattcgc gtcggtgcgg 9240 aagtcggtga cgacctcacc gtccgcgatg gcagcctcca gtgccgcgcg ggctacttcc 9300 ttgttgtgtg ctgcaatcgc acgacggaag ggcaagatag accgtttctc aagtaaggta 9360 tatgcgatat catgcatgtc cacgtcatca tgcgtttcca gaaattggag catattttct 9420 agcgttgcct tcatggagcg ctgcgacttc gatgaaagca caaggggcaa gctgcatgca 9480 tctgcatctg aggtcacctc tgttaccact gctgtcggct tgtgtggagg agccatatac 9540 tcttcgataa tagcatgggc atttgtacca ccaaatcctg atgtgtttat atgtttagct 9600 aacttcactt tcgttctcaa gaagtgcagt tgaatcctta ccaaatgaat taacgctgac 9660 tctgcgaggc tgcccgggcg caacaatcgg ccattctgtg gcctccgttg caattttcaa 9720 gtgcgtatag aacggagcga cacggggact gatcttctca aacagcaggt ttggcgggat 9780 cacgccattt cgtacagcaa acgatgcctt cattaagccc gcaataccag cagtgccttc 9840 cgtgtgaccg agaactgtct tgatgctgcc gacaaaaagc tcatctttct cgccgtcgct 9900 gtcgattgtt ccatccttgt gtccgaagaa ggctgttgca atagcctcag cttcctgtgg 9960 gtcaccggct ggtgtaccag ttcctgggat cttcgtgtta gggagagaga gactttctgc 10020 aacttccata aggctgatac ttccagggaa taccacttac catgggcttc aaagaactgg 10080 cagcgttcct gggggttggt aatatcaaga ccagccttgg catatgtggc ccgaatgagg 10140 gcttcttgtg cgctatggtt tggcattgtg atacctgtcg ttcggccatc ttggttgata 10200 ccggtctctc ggataacaca ctcgatactg tccccgtcgc gcagtgcctg gctcagcgtt 10260 ttcaggacaa tagagcaaac accttcctaa aaagcagtta caggaggtca gtgccatctt 10320 gctttttttg aaaggaattg atgcattgtc aacttactcc tctggcatat ccatcggcag 10380 cagcatccca cattcgagat ctaccattgg gggacagcat gttcaatttg ctctccatta 10440 caaaggtcat ggggcccaat atcagattcg caccggctgc aaccgccatg gtactctcgc 10500 ccgttctaag ctgttggacg gccagatgca cggcagctaa ggatgaacta caggctgtgt 10560 cgatcgtcat ctgcagaatc agtcaggaat ctgtcagcac ttgacgaagt cgggctcgct 10620 caatgagtgg cactcacact cggcccatgc cagtcgaaga agtatgatac acggttggag 10680 gccacactga cagctacccc cgtggcagag tatgtaggaa tactatccaa ttcacgcgtc 10740 acgatagtct catagtcatg cgtcatcata ccgacgtaca cagcagtaga ggatccttga 10800 aggccttgga tccgtaggcc tgcgttggat acagcttcat agaccgtctc cagcagcagc 10860 ctttgctgtg ggtcaatcgt ttcggcctct ccagcttgga tgttgaagaa agaggcatca 10920 aaaccgcgta gatcctcctg cagcaagtat gcaaagggtg cgttcgtgcg cccggggtga 10980 gtgccatcgg ggctgtaaaa tgtatcgacg tcaaatctct ccttagggat cttggtctgt 11040 acatcccggg gctctttgag cagctcccaa agttttgatg gtgtgttgac accacctgga 11100 aaccgacaac cgcttcccac taccacaatt ggctcgtttg gatagttggc ttgatccata 11160 actgctgatc ctgtttttgg gcgataggat tgggattaaa ccttgtcttg cgtcagtaga 11220 tcttctcact gcatgccggg cacaacattt gttcttacag aatcgcagag ttgaatctct 11280 gagcgaacaa gccggccttg caaccgatac cgtcgttata tttacttgca cgtatcagta 11340 ctcatctaga ttcggacaat ttcaagatcc attctagtac tcaaatgccc ccacttccca 11400 gcaatgcaag ctcggcacct agcaaaccct cccggcgtca ttcggtgcac gaatagccat 11460 tcctccatac ggcgttattc ggtcacacga ggctgaatga atcaaacgtg aatatcaatt 11520 ggctgtatca aggtgaaacc gagtttttca ctcggattgt tcttgtgctg ctcggtgaag 11580 ctgctcctaa aggaaacaac cgaactgccc catccaggta aacttcgatt gggggggggg 11640 tttttttttt ttcaaggttg actggaagag tgctctcggc cacaaaatcc cagaagcatt 11700 agtgctgtta ttcgattata aaccgtcgca gcgctctcat tcttcgctct ttcttctttt 11760 ccactggtgt gcataggtcc tatctgtctc acgcaatgct cggccaggtt cttctgaccg 11820 tcgaatcgta ccaatgggta tcgacccctc aagcccttgt ggcggtcgca gtgcttctta 11880 gtctcatcgc ctaccgtttg cgggggcgcc agtccgaact gcaagtctat aatcccaaaa 11940 aatggtggga gttgacgacc atgagggcta ggcaggactt cgatacgtat ggtccgagct 12000 ggatcgaagc ttggttctcg aaaaacgaca agcccctgcg cttcattgtt gattccggct 12060 attgcaccat cctcccatcg tccatggccg acgagtttcg gaaaatcaaa gatatgtgca 12120 tgtacaagtt tttggcggat gtatgacctc tgaattttcc attgttgtaa ctcaatgacg 12180 tctctaagat tctgatgaat gtataggact ttcactctca tctccctgga ttcgacgggt 12240 tcaaggaaat ctgccaggat gcacatcttg tcaacaaagt tgttttgaac cagttacaaa 12300 cccaagcccc caagtacaca aagccattgg ctaccttggc cgacgctact attgccaagt 12360 tgttcggtaa aagcgagggt aagtgtcaat ttttctgtct tgagcattga gcctctggct 12420 gacataccgc gaatatacta gagtggcaaa ccgcacctgt ctattccaat ggattggacc 12480 ttgtcacacg aacagtcaca ctcattatgg tcggcgacaa aatctgccac aatgaggagt 12540 ggctggatat tgcaaagaac catgccgtga gtgtggcggt acaagctcgc caacttcgcg 12600 tatggcccat gctactgcga ccgctcgctc actggtttca accgcaagga cgcaaattgc 12660 gtgaccaagt gcgccgcgca cgaaagatca ttgatcctga gattcagcga cgacgtgctg 12720 aaaaggccgc atgtgtagcg aagggcgtgc agccgcccca gtacgtcgat accatgcaat 12780 ggtttgaaga caccgccgac ggccgctggt acgatgtggc gggtgctcag ctcgctatgg 12840 atttcgccgg catctacgcc tcgacggatc ttttcgtcgg tgcccttgtg gacattgcca 12900 ggcacccaga ccttattcag cctctccgcc aagagatccg cactgtaatc ggagaagggg 12960 gctggacgcc tgcctctctg ttcaagctga agctcctcga cagctgcatg aaagagacgc 13020 agcgaatcaa gccggtcgag tgcgccacta tgcgcagtac cgctctcaga gacatcactc 13080 tatccaatgg cctcttcatt cccaagggcg agttggccgc tgtggctgca gaccgcatga 13140 acaaccctga tgtgtgggaa aaccccgaaa attatgatcc ctaccgattt atgcgcatgc 13200 gcgaggatcc agacaaggcc ttcaccgctc aattggagaa taccaacggt gatcacatcg 13260 gcttcggctg gaacccacgc gcttgtcccg ggcggttctt cgcctcgaag gaaatcaaga 13320 ttctcctcgc tcatatactg attcagtatg atgtgaagcc tgtaccagga gacgatgaca 13380 aatactaccg tcacgctttt agcgttcgta tgcatccaac cacaaagctc atggtacgcc 13440 ggcgcaacga ggacatcccg ctccctcatg accggtgcta agatataaca cgcaaactaa 13500 aacaaatatg catccgtccc caggcttatt ccaatagttt ccgtcccaga gaaactaggt 13560 gctgtattag tcgagtaggt tagtaaaata aaacgcattt tattcgattg tgatgccttc 13620 tttgtaatcg aacgtggtgt agactttggc tatgtgcgag agacagaaac acagagagag 13680 agaagggaga gagtgtgtat tcctgctacg cagagcggcc atctgcttct ataccgccag 13740 ctacaccgcc acgtagggaa gtcggcagta atgaagcttt tctcccggta caatcaccga 13800 tctccccatt ctctcaggcg ttgactggcg cttacgatga cgagggctta ggctctgtta 13860 agtcttgatg ttcctactca acatccccga ctaggcgaaa gagaggacgg cgcaacgacg 13920 tggacacaag tactccctcc cgccttccga ctacatatcc acaatctgta cccactgccc 13980 gtgccaacgc ctttcgaccg ttcaacgcgc atttacaagg cttgcgggaa tcataatgga 14040 gagaaaaaga gagaactttt gacagtcaag cctccgaggt gctaagacag cttccctggt 14100 agtataaaaa gcattcactc ttccgacttc gagaacgagt gcacatgtgt actttgttgc 14160 ttctcagggc cactgtaatg gtatttcagg tatctctatt tactgctatc cagaagtcag 14220 gcattaaata gtcaggctca gcccaggctc gattcagatt ggattcaggc ttcagaccat 14280 ggccgctatg ctccttcgta ctatacctcc gtcgagctat acccgcttgg ccagacaaaa 14340 ggcttcactg aacccttcaa cttaactgca tttcgccaca actaactcga cgaggccggc 14400 gatggtgtta ccattcatga gctcaaagat cgacacatca acatggattt cagatgtgat 14460 ccagtttcga agttcaatgg cgacgagtga gtctacgccg acacctgcca ggtttttgga 14520 cgaggacatg tcgtcttctg ccagaccaaa cattcgcatc agcttttccg tcattgcttt 14580 gaggacgata gaaatggcct cgtcgtgaga ggtgaccctg cttagttggg cccgcacgcc 14640 atctggtcct tttttatgcg aagagacaaa ggattggtct gcatgaagga cttggcggta 14700 tttaagtccc acaaaccgct gttcctgtat ccagtttgcc tcggtccagt gagcacccgg 14760 ggatgtgttg attcctgtaa ccacagctgc gggaggtgat ggaaattgag gggaagaaca 14820 caggattgcc ttctccaaca catccatgac gtccttttca tgcataggct tgtaacctat 14880 tctagcgagc cggtcggcca caccacggcc agtttcagcc acgtatccaa cagacttgac 14940 catgcccaag tcaatggtga cagccggcat gccatgggct ctccggtggt gcgcaagtgc 15000 gtcctggaat gcaccagcag ctgcgtaatt ggcctggcct gccccaccca tgaccccaac 15060 aagggatgag agcatcacga agaagtcaac atcctgtgcg atcttgtgaa gataccaact 15120 accctgtact tttgggcgtg ttgctgcatt aaattcatcc aatgtcattc gcgatagaag 15180 cgcgtccttg agaaccatgg caccttgtat gatacctcga attggcggtg catgtgcttc 15240 ttcgcacaac cggagcacct tggtgacctg atcttgatct gagatgtcac atgcgtgtag 15300 atagacagcg cactgttgat tttgcaagct ggttatgaat ggactggcct ttgcacttct 15360 cgataggata atcaagtgct tcgcgccatg atcaacaagc cactgacaga tctgctttcc 15420 aattcccccc agcccaccag caactaggta agaactgtca ggcttcagct tcagcgagaa 15480 ccctccatcg ccgactggga ccagttcgtc cccagataca ttgaccacaa ctttgccaac 15540 atgctgacca ctctgcatcg tacggaaggc cttctcgatg tttgacaagg agtgctgctg 15600 gattggacca atcaagccaa tcgcttttgt ctcgaggagt tttgtgacat ggttcaacgc 15660 ttcggatact tcttcacttt tggctctttg ccacgagaga agatcaattg atgtgaaaga 15720 gacgtcccgg gtgaatggca gcatgtcaag tctgctgttt tgctccaggt ccttttttcc 15780 aatctcaaca aatctgccga attcggccat gcagtcaaag cttgcttgga ggagttgacc 15840 tgccaatgag tttagaacga catgaacgcc aagtccgccc gtgtaggctt tgatgccgtc 15900 gacgaataag tcattcctgc tcgagaagat atgatccgga ttgatgccga atttatcgcc 15960 gacaaagtca cgcttggctt gagttcccgc tgtgacgaag acctcggcac ccgcaagctg 16020 ggacaaaatg atcgctgctt gaccgacgcc tccagctcca ctgtggatca agactctttc 16080 gcctcgtcgt agctttgccg tggtataaag cgcaatatat gcggtagtga aagccagggg 16140 gaccgaagcg gcttctggga agcccatttc gtccggaata cggacgacat tagtgtacgg 16200 cgtctgtgtt ctggtcgccc aatggccttt cagtagtgca catacgcggt cccctaatct 16260 gaggccttgg ctagcggcag cagctccacc gagctttgtg atcactccgg cgcattcgaa 16320 gcccatcaca cggttggcct ccaattgacc catggcaacc atgacatccc gaaaattgag 16380 accgaaagct ttgggttcga tttctaccca atcatccgga agatccttgc cttcacgtcc 16440 ttcgtcgtct cgaaattgca gggagtctaa gagccctggc gtctcaacct ccatccgcag 16500 acgacgcccg ggttgctcga acggctgcag tgtgacctca accgcttctt ggtccttcca 16560 gtgcgggtca ttgaaaagtc gcggtacgtg gatgacgccg tttctctctg caaattcaaa 16620 ctccttgtct tcggaaaggt cgccgaggcg gccattgaag atattgcaga tagcatacag 16680 ggactcgtgg gtgtatgcgt ttcgagaagg atcgagatcc aacgatacat attccttccc 16740 gttattttcg ttgcggatgg tacgcagcag accaatatgt agagctttcc atggatcctc 16800 ggagctcatg gctgctcctc tagacaccca gagaagtgcg ttgcagttat tcagcatcgc 16860 ggtgatggat ttgaaggtct cgcttcccac ctctccaagg agcgaggact ccatttcccc 16920 aagaaaaatg catgtccttc cagtggtatc tacctcgccc agagcgttga tcgatgggct 16980 agaactggtc ttttcacaaa ttgctgcctg gagactttcc agccaagatg aaggaggtcg 17040 gagcgctccg tgcagcaaaa gcacctccga ttctgccact gtatccgggg ttgtattctc 17100 ttttctagcc gtcgatagca ttgtgctgat catgtaaaac tcatcgtctt cacaatcacg 17160 aacctccaat tccacaccgt tgaaaccgct cgtgtccaac atggtgttcc aaagatcggt 17220 agtgagcgat ggcgtcgact tccgctcagg ctcctcactg agccaccaac ctggcaacag 17280 tccgaaggta aagaacaaat cgagctgatc cctggtagtc tcaaccaaaa tcaagttgcc 17340 cccaggcttg agcaattttc gaacgttact cagtgttcgt ttcatgcatc gagttgcatg 17400 caggacctgg caagccacga ccacatcgta ggtggcacat tcaaaccctt gttgctcggg 17460 atcgctttca atatccaatt ttttgaaagt catcacgtct tgccaatccg caaattgctc 17520 acgcgccgac tcgaaaaacc cggcagacac atcggtgaag tcataacgat cgatcggctt 17580 ggtgtttccc aatgcattga caataagctt tgtgcagccg cccgtgcctc cgccaatctc 17640 caaaatgcga gaacgcgggt tcttgtgggc gcaaagtcgg atcagctcgc tggcttgtgc 17700 gtttgatcgg ctccatttga ttgcgttgac gtagtatctg cttagcagct gatcttgcat 17760 catcaactca agtggctctg tttcgcggcg tagcattgct attaactgag gtcctagacg 17820 agaaatcatc tcgccattga cgctttctcc agcgactctg gcctgtaggc atttcttctg 17880 ctcagcatcg tcacttagcc agtcgcaact ggctgggctg agcttgtttt gtctcgcaag 17940 gtccaattgg acattcatcc aatcgaaata cttctgaagg tggccatcca gatgttggat 18000 atcagaattt gtcaaatcag tgacagcctc ctgtataaag ttgatcgtgc atcttcggag 18060 gtccatcatg agttccgttt ctttcgtctc agcctcagtg ctcaactttt ctttgagcca 18120 agtggagtca cccaagctga tgtcaggggc ccaaacccag gagctgcagg cattttctgt 18180 gtcgttggag tctgactttt ggtcagagaa gctgcttcca accgactgga aaacaaggcc 18240 ttcaatctct atgactggga ttccgtccga gggagaagaa ccgctatcat agtcatcaaa 18300 cactgccaag tcggtagaga aggattgaga gttgcgatcc ttgatgctgg cctgtgcgtc 18360 cagagcatca ccagcctcca agtcagccag gctagaggat attttgacat ttcttagcct 18420 ccttggtacc atggccgttt tcatacgtgt tcccgcgtag ggtaacaccg tgtatgccgc 18480 ctggatcacc gagtccagag tagtaggatg gacgatgtgt cgattctcgt acgagtgagg 18540 catagccgag gcagtgtcag caatggaaaa tctgcaaaac gagccctgtc cattgttttg 18600 aattcgctga atgttctgaa aaatgggtcc gtggcatatc ccattcgcgt gtaaggactc 18660 ccagagatcg ttgggatcaa tgctccggtt atctgagcct agattcaacc tgcgtgaggc 18720 ttccacagtt gaacagtcaa ggtggcttct ttcgctctcc gaacgtatta atccggtgca 18780 gtgttctgtc caggtattat tttcgcccga aattgagtgc acagaaaatt gatgccagtt 18840 ctttgtgccg agggaccttt cctcacatga acggatcgtt aggcgcaggt caacctctgc 18900 ttctgcatca gcgggtatta tgagagcctg cgcgagttca acgtcacgca agttgtagtt 18960 gatgctagcc cccgcaactg gtgggcagac ttgtgaaaac ccctcgatgg ccatgctgat 19020 gaagccagct cccggaaaga tgatgctcga accaacgacg tgatctcgta tccatggaat 19080 atctgacaga cggagaacat gtttccattt aggcgcgaaa tgaggagaga gagattcccg 19140 tgagcctatc aaagtgtgag gcggatgggt tctctgtttg gactcacgac tgccgcgagg 19200 ctctctccaa taacgggttt ggtgattcca cgggtacgcc ggcaaatcgc tcagtacctt 19260 cactctgggc tcttttcttc catgaggaaa gtttatagcg tccattttga gcccataacc 19320 cttgcttatc aactccgtag cagcacgata cattgtctcc aacgagcttc tgccgcgaga 19380 aaggcaactg agatagttta tatctgttcc tttcagaccc agatcctgca tgacttggtt 19440 gattggacca ccaagcgctc cgtgaggccc tatttcaata atcacatcga cggctttctc 19500 tttggtgttg ggatcaaagc acatctcgcg gagtgaggac tcgaactcta ccggctgtag 19560 catactatcc atccagtgtg tgggatccaa tagcaattta agatcggtca tgcgactacc 19620 agtcttaggt gatgaatata atacaccctt tgaggtgtca gcattgggat tgtcgttgtt 19680 gttatccgag ttgaacagat ctctcagtga cgccccaaag gcatctgcca ttggtcgcat 19740 gtggcttgaa tggaaggctt cagtgacttt cagtttcctg gtaaagatgc catcggcgtg 19800 taacaacttt tcaagtttct cgattgcacc caaatctccc gacaccgtca cactacattg 19860 actgttgata catccaacca ccacacagcc gtcctcctgg ttgagacgcg aaatgtaaac 19920 attggtctca ctgcgaccaa gacccaccgc catcattcct cctttggctg ccaatgcggg 19980 cttgggctta gtggtcaata caccgcgtat ataagtgatc ccaatggccg accgcgcgga 20040 taaagcccca gctgcgtagg cagcagcagc ctctccactt gagtgactgg ttatccccgt 20100 tggccgaatt ccccatgacc aaaggagacg cacaagtgca atttggatag cggttgacag 20160 tggtagactg tattcggcat catttacccg agtcgtcagc tcatcacggt ggagctcctc 20220 tgtgcaattg aatgttagta cctcaagctt gatacagtat tacttttccc gggctcgcaa 20280 cttacccata aaattccaac tcgcgcccag ttgcttgatg tagccatcac attcaagaat 20340 cgcctgtttg aatactggga atgtattgac cagctctctg cccattgcat gccactgcgc 20400 cccctgaccg gtgaatacaa atccgagccg tactttctca ttcgctcgtt ttggttgatt 20460 ggactcatcg ctgagggcag aaacaaggcc gccaaggctg tctgctacat acactgacgt 20520 ccatggcaga atggaacggc gagagcctag tgtataggcg aggctggcga ggaagggttc 20580 cccgtcaatg tcagcgacgg atttaatgta gtctcgcagg cttgctatcg ttcgccgaca 20640 agcttgctcg tccttggcac gcacaacgta tatgcggctc tgtttggaac catcctcaac 20700 cctaccatgc tcagagttac cattgacatg cacttgatcc tctggcaggg ccaatgatgc 20760 gcgatcatat gattccaaaa tgacgtgagc attcgaacca ccaaagccga agttattgac 20820 agatgcgcga cgagtcccat ctttcacagg ccagtcttga gcagacatgg ggatctttga 20880 aacattaacc tttgaaacat ataactgaat ctgcgaatgc gcaaagcctt accttgatgt 20940 tcttttggtc aagcatcagc ttgctgttct tttgcaggaa ccgcgcatta gggggaatca 21000 agcccttctc caaggccaag gccaccttga ttatactggc caggccactg gcggcttctg 21060 tatggccaat atttgctttc acagagccaa ggtgcagagg atgtccttta aaagctgctg 21120 aaattgctga gatttcaagg gggtcaccag ttggtgttcc agttccgtgg gcctccacgt 21180 acgaggtcaa cgacatatct agcccagcct tatcgtaaca ctcctggatc agacttttct 21240 gcgccacatc actcggcgca gtaattgcgg gtgttttgcc atcctggttc agcgctgtct 21300 ctcgaatgac ggctcggata gggtcttggt ctcgcaacgc gttagggagg gcctttatta 21360 ccagagcggc aattccttcc ccgcgaccat atccattcgc tcgaggatca aaagagtacg 21420 agataccatc cggggacaaa aatctgtcat tgagcaacaa ggattgctta gttcaagact 21480 ctcgatctgg aatcttcttc ggaaaactca ccccaggttt gacatcgtaa caaaaacatc 21540 gggattgagc agaagatttg caccgataac gatggctgta tctgactccc cagtacgtaa 21600 gctctggcac gccaagtgca gtgcggtcaa tgtcgtcgaa caggccgtgt caaccgtcac 21660 gctgggacca cgtaagtcgt agaagtgtga tatccggttc gaaagcattg ttcctgagtt 21720 gccagttatg aaataacgcg gaactgtctc ggggtcacga ttgagcgaat cctgatagtc 21780 gtggtacatg acacccccaa acaccgacgt attagagcct gccataccat cgatggtgat 21840 accggctgga tgatggtcag tgacgtttgc ttacagtgag gatgacccac actacatacc 21900 actctccagc gattcgtaga ccacctcaag cataagccga tactgcggat ccatgcactg 21960 tccaatatta gatctctgcg tcccgggtta gatcaattga aataatcata cgctggcgac 22020 ctctgtggtc atgttgaaga acgcggcgtc aaataaagca ggatcctcgt cgatgaagtg 22080 tccacccttt acgtgggtct atccagtcat ccttggagtc agtaaccaag cttcagtgat 22140 gctcaaatct tgtgtcaaat attcaaaaca agatataaat gcatgcatgt tagatactca 22200 cggacccgac cctttcgcca ttcgggtggt atactcctct cacattgaat cgcgaggagg 22260 ggaccttaga ccaggcactg cctcctcttt caaccatttc ccaaagcttc tgtggactcg 22320 ttgcatctcc agcaaatcga catcccattc caactatggc aatgggcgtg gatgtgttag 22380 agcaagccga gcctgccatt gcggttgcgg ttgcggttgc ggttgcggtt gcggttacgg 22440 cgggggtatt gttcattcca acgttgtttc attgactgat atatcagtcg ccctggtgat 22500 aaaaccgttg atagtcttcc aacagtctac aggtccctgg catagctata gatgcataag 22560 ctgcccccga cacgtgattc atagttcggg gtttgttttc atcttggacg tgacacgata 22620 ttcgctctgt gcccatggga aaccccggac caccatgcta tgctcggggc aataccttag 22680 aggtaccggt tcgggaggca ttgtctgtcg tcacgataat cccgagtcaa aacgccgatg 22740 ggaaaccgtc gaacaagacg aaacaggtca ggccggccag gtagttttcg ggtataatgg 22800 aggctgtcag aatccgatac tccgtacaca gatgcgaaat acgcatacga gctatcaaac 22860 caaacgaatc caaaagcctt ggaaaagctt ggaaaggctt agtgggtaat cctgtcccaa 22920 ggtttgttga gggcctgagc gcagggtggg tcctgtaagc agttggtaat tcaatttcca 22980 acaatacaca atccccaaaa tttgcattat cggttgacta agacaagcaa acaaaatata 23040 tgcaggaagc gcaattcatc gcgagcaaac gatcatcatg agcatgtgac cctttcctct 23100 tttttctact tcggaaggcg gcatgatcat ctgtcagaac tcccaatcgg gagcaatacc 23160 ataccttacg gcaccccact cagacccatg cacaaagaaa atccatgcgc cgaatattga 23220 agccttggca acaaagcccc gtgtaactcc gaaggtatcc aaagaccgag agacgccgat 23280 ttgagagaca cgtacggagg tccacacaaa atgttcccga gtctatacac tatactccaa 23340 actgacttct tgtctacctg ggtatcttgt tcaggttgct gtttactgag ataaatgata 23400 ccgggggggg gggggggggg gggggttgac actggctttt cgtggacaga ataataccca 23460 tacatccctg cgtaagtagt cgtttcgaga agaatgtgtt tcgtggtgca ttactccgta 23520 ggcacaatat atttccattc ctcacgaagt ggcctcgtcc gggcgtgatc gatgcagctt 23580 gccgccccac caaaaaagga ccacaatacg agtcagatta gaaacgtcta acaggacgtc 23640 tatgtaagag gacgctcctt tgtatgtcgg atctaggcat gacaaaataa ctatacctag 23700 gtagtgttct gtcttattgg tcatttggcc tactttcgga acaatcttgg aagttcacat 23760 tcctaggtat cagggcaatt gattggtgtc cccagaattc ttttttctcg aataaaggat 23820 aaatttatgc ataaaaacct tggaaactga gcatagttat gagcacaaat actagttttc 23880 agtgcaattg gtcctactat cctttgcttg gtacccctta ccaattatac cctaggcagc 23940 agttgacacc ggtcatgaat ccattcataa aggtggacca gatgcaggga taaggaagcg 24000 aatctttccg ctgcctcagc ctcaggggcg cgcgccattt gttattttct tctactcatt 24060 tcccgtacct aggaactgtt cagttgtccc tcccaacccc ttgggccgaa caaccttcct 24120 ccaatctacg acggcagatt atacctaggc gcctaaccga ttaggttgct cattcgattt 24180 tggaggtatg cactttatct caagccctaa ttcccaattg aagtgctttt ccgtccccat 24240 ttgcagagct gactagattc ttttctcaga gactacctag ctataggtac cactccaagc 24300 tgtagcacag acctttcagc atggtcgctt cgttgctacc ctctcgcttt cgcggtaggg 24360 aatcaatgaa tcagcagcac cctctacgct cgggaaatcg ggcattgacc tccacactcc 24420 aatttctatc caaaacggcg tgtctacacc cgatccatac cgtttgcacc atagctattc 24480 tagctagtac cacatacgtt ggactactca aagacagctt cttccatggc cccgcaaacg 24540 ttgataaagc agaatggggc tctttggtcg aaggaagtcg aagcttgatc accggcccac 24600 agaatggctg gaagtggcag agcttcgacg gggatgcaga tgttctcgga gatttcaacc 24660 atcaagcact aatgaccttg gtattcccgg ggtcatatgg ggttgcatct caagcagcct 24720 caccattcct tgctcccctc cctgtgaacc tatctgtgat tgaccttccc tcaacgtcga 24780 gccctttaac cgcctattcg aaagataaag ttttcgcctt ctctgtggaa tacagcagcg 24840 cgccggaact cgtggctgct gttcaagaaa tccccaacaa cagtgccgac ctgaaattgc 24900 aggagacgca attgatcgag atggaacgcc agatgtggat catgaaggct gccagggctc 24960 acacaaaacg cagccttgct caatgggtgc acgatacctg gacagagtct cttgatctta 25020 tcaagagcgc tcaaacgctc gacgtggttg tcatggtgct aggttatata tcaatgcact 25080 tgactttcgt ctcactcttc ctcagcatga aaaaattggg atcgaaggtt tggctggcta 25140 caagcgtcct tttgtcgtca acatttgcct ttctcctcgg tctcgacgtg gccataagac 25200 taggggttcc gatgagcatg aggttgctat ccgaaggcct ccccttcttg gtggtgatcg 25260 ttggctttga gaagagcatc actctgacca gggctgtttt gtcctatgct gtgcagcacc 25320 gaaagcccca gaagatacag tctgaccagg gtagcgtgac agccattgct gaaagtacca 25380 tcaattacgc cgtacgaagc gccattcggg agaagggtta caatatcgtg tgccactacg 25440 tggtcgagat cctgctccta gttatcggtg ctgtcttagg catccaaggt gggctacagc 25500 acttctgtgt tctagctgca ttgatcctgt tctttgactg tctgctgctg tttacattct 25560 acactgcgat tctgtctatc aagctcgagg taaaccgcct caaacgtcat atcaacatgc 25620 ggtacgcgtt ggaagatgag ggtctcagtc agcggacggc ggagagtgtc gcgaccagca 25680 atgatgccca agacagtgca cgtacatatc tgtttggcaa tgatatgaaa ggcagcagtg 25740 ttccgaagtt caaattctgg atggtcgttg gtttccttat cgtcaacctc gtcaacatcg 25800 gctccaccct tttccaagcc tcttctagtg gatcgttgtc cagtatatca tcttggaccg 25860 aaagtctgag cggatcggcc attaaacccc cgcttgagcc cttcaaggta gctggaagtg 25920 gactagatga actacttttc caggcaagag ggcgcggtca atcgactatg gtcactgtcc 25980 tcgcccccat caagtacgaa ctagagtatc cttccattca ccgtggtacc tcgcagctac 26040 acgagtatgg agttggtgga aaaatggtcg gtagcctgct caccagcctg gaagatcccg 26100 tcctctccaa atgggtgttt gtggcacttg ccctaagtgt cgctctgaac agctatctgt 26160 tcaaggccgc cagactggga atcaaagatc ctaatctccc gagtcaccca gttgatccag 26220 ttgagcttga ccaggccgaa agcttcaacg ctgcccagaa ccagacccct cagattcaat 26280 caagtctcca agctcctcag accagagtgt tcactcctac caccaccgac agtgacagtg 26340 atgcctcatt agtcttaatt aaagcatctc taaaggtcac taagcgagca gaaggaaaga 26400 cagccactag tgaacttccc gtgtctcgca cacaaatcga actggacaat ttgctgaagc 26460 agaacacaat cagcgagttg aacgatgagg atgtcgttgc cttgtctttg cggggaaagg 26520 ttcccgggta tgccctagag aagagtctca aagactgcac tcgtgccgtc aaggttcgcc 26580 gctctatcat ttcgaggaca ccggctaccg cagagcttac aagtatgctg gagcactcga 26640 agctgccgta cgaaaactac gcctgggaac gcgtgctcgg tgcatgttgc gagaacgtta 26700 ttggctatat gccagtccct gttggcgtcg ccggtcctat tgttatcgac ggcaagagtt 26760 atttcattcc tatggcaacc accgagggcg tcctcgtcgc tagtgctagc cgtggcagta 26820 aggcaatcaa cctcggtggc ggtgccgtga cagtcctgac tggcgacggt atgacacgag 26880 gcccgtgtgt gaagtttgat gtccttgaac gagctggtgc tgctaagatc tggctcgatt 26940 cggacgtcgg ccagaccgta atgaaagaag ccttcaattc aaccagcaga tttgcgcgct 27000 tacaaagtat gcggacaact atcgccggta ctcacttata tattcgattt aagactacta 27060 ctggcgacgc tatgggaatg aatatgattt ctaagggcgt ggagcatgca ctgaatgtta 27120 tggcgacaga ggcaggtttc agcgatatga atattattac cctatcagga aattactgta 27180 cggataagaa accttcagct ttgaattgga tcgatggacg gggcaagggc attgtggccg 27240 aagccatcat accggcgaac gttgtcaggg atgtcttaaa gagcgatgtg gatagcatgg 27300 ttcagctcaa catatcgaaa aatctgattg ggtccgctat ggctggctca gttggcggct 27360 tcaacgccca agctgccaat cttgcggcag ccattttcat tgccacaggt caggatccgg 27420 cgcaagttgt ggagagcgct aactgcatca ctctcatgaa caagtaagtt gaaagcggcc 27480 gcttacttgg aaacattcac taatcctgtt tagtcttcgc ggatcgcttc aaatctctgt 27540 ctccatgccg tctattgagg ttggaacgtt gggcggtggt acgattctgg agccccaggg 27600 cgcaatgctt gacatgcttg gtgtccgcgg atcacacccg accactcccg gtgagaatgc 27660 acgtcaactt gcgcgcatca tcggaagcgc tgttttggct ggggagctct cgctatgtgc 27720 tgccctagcc gccggtcacc tggtcaaggc gcacatggcg cacaaccgtt ctgccccggc 27780 atcttcagcc ccttctcgaa gtgtctcccc gtcaggcgga accaggacag tccctgttcc 27840 taacaatgca ctgaggccga gtgctgcagc tactgatcgg gctcgacgct gattaggtcg 27900 gaatcttagg agcattccaa gctccgtacc ccctccagtg gattcattgc aggaggatca 27960 tattttttct cattggttgt tattgtcata attttcaaaa gcacaatgca atgagacagg 28020 caggtggtag agtgaacggc cagaaagggt atctcatgtt tatatgttgt tgaaatttac 28080 gatgcaagta gtagggaaga agaatatata aagagatggt ccttttccag agagtgttta 28140 ggtctgatcc ctcataatta tttaatgagt gaaagctttg ttcaagctat aacttactga 28200 gtaggttgaa tgttgatctg attcattcct gaggtatcag gattgatgcc tgaaacatca 28260 atcatccatt gtcagatgcc gtaactaact aactatgaat ctcaacatag ttatatgttg 28320 ccaatctagc cacggtgact agaaccttga gatggactta gactagacat gggtcgcggg 28380 caatgacata tagaatcttt gaaatcgaca ttaattaagt atgtggagat tctttgtgga 28440 ggcacggtaa tgtgtctatc tagcaacgcg gtcaagcatc agtctcaggc acagcccggg 28500 tgtcgttttt ggttgcaatc ttccgccatc ccattccaaa ggcaaacaca aacgtgcacg 28560 ccgtagctcc cactgctaag taaaaagtat gatcaacggc gagactgtaa gcttttacaa 28620 cccctggaag gttattcttg ctgaccacat ctctgaagcc agtcgcccct gctgccgtca 28680 cggcctgcgt gtcgacagtg ggcgcatact tgctcaggcc agttctcaaa ccggacccaa 28740 agacaaggtt agcaaagtcc aggaagagcg atcctccaaa cgtctgtcca aacacggcga 28800 gagaaattcc gagggcacct tgttcgggcg aaagcgtgct ttggatggcg atgataggct 28860 ggccattgag tattgatgtc agcgtctagc ggttgcatgc tcttcttgct ttgatacaaa 28920 gccgaaagcg tgagagatga tcaaaggttt catagcttac cgtttgcatg ccacaaccac 28980 gaccgaagcc cgcgataaat tggtacatga cccatttcac agttgatgta tggggctgga 29040 aggtggatac cagacctgcg cctatggcga cgagaacagc gctgcctagg gcccaaggca 29100 aatagtatcc tgtctttcca actggtgcgt catatgtcag tatacacgat atccaagccc 29160 gatgtcagac ggttgtggca agaaaggagc catagaaatg gacggggtgg agaaaaatgt 29220 gtacgcgagt ttcacttact tgcgaagcca gaaaccatag ccataatgac ttgtccaaga 29280 attccaggca acatgtacac accactcagt gtgggagaaa catccttcac agcctggaag 29340 tagatcggta gatagtagga aaagacaagc aaggagccag agaaaaagcc cataaataaa 29400 caagagcacc acacttgtcg tttaccagcc actgagccag gaatcatggc aacagcatcg 29460 ccaacatgac gctcccatag cacgaacgca atcagagcaa accctccgcc acagaacagg 29520 ccgatgatga cggaacttcg ccaggtgtag gtcgaccctc cccattctag tgcgagggaa 29580 atcatggttg cgaaggctgc aaagaccaca aagcctacaa ggtccagttt gcgaagtgtg 29640 gattttatgt tggccattgg tttgtcggtc gagagttcgc tgtccgtgga tgaaattcgg 29700 tcgggtatgg tgatgacgag aaggaggaat gcagcgacag cgccgatggg gagattgata 29760 taaaagcctg aattccaagt gagaacatgg acaacaatca taaaaaggcc aaaggtcaac 29820 atacaccatc gccaagtggc gtgttgagtg aaagcacctc cgagcagtgg tccacagaca 29880 atggcaatct gactaactga aaacatattg tcagacgacg aaccgttcgt ttggggtaca 29940 tcagatcttg agatgacata cgacccatca tcactccaat caaaacttca tatgcgaggt 30000 cagcgtgtac acggcaccca gcagacttcc aaaaatcggt tcccttacct ggttgcttgt 30060 gcttaggagc agctgttgag aggattgtga gggctccgtt gacaagacct gagcctccca 30120 ttccagcaac ggcccgccca acaatcaaca tggtggaaga tcttgcggca ccgcatagca 30180 ccgagcctag ttcaaaaata cagaggaagg caaagaaagt gtacttcaag cccaagagtg 30240 tatacaattt accggccagg ggctggagag cacagctaaa tatgatgtta gctaatctgt 30300 tcgtacaatg aacaaggtca aggagaacag agccatactt agccagaaga taagcactgc 30360 cgtaccaccc tacatcgttc agagagtgga actcgcttgt gatatgtggg attgcctgtg 30420 gctggagtca attgactgtg ctgcgctctg ttctgaggta gccaccatct taccgtgacg 30480 ataatggaca tatcaaggag catcaaaaat gctacgaaag taactgaagc aaccaccagc 30540 ccgagcttga ggcctgtgat gtgctgggac ttggactcag tcgcttcgag cgtgtcattt 30600 tgactttctt ccttctgtgg ccttggttcc ccttctttag ggggtagagg ttctgacatc 30660 gcgcaattcc ttccgacttt tgcttcaagg ggcggtgtga atctctactg cgcggcgctt 30720 ctatagtacc tgtgttttgg tgtatgaatg atctcgctct cgttgtttcg ttaaggtccg 30780 ctagcctgaa gtcagattga tggatgggga tcaggggaaa ttggcgacgt ctttaatttt 30840 gcttttcttt gttaccggaa gtgttgcggt attagcgtgt ctgggcttat ttacgacgca 30900 caagatgcat tgaactggcc ccactgctag atctcactag tattgtggtt gtaatttacc 30960 tatactccat attgactggg caggttttga acacaaccca caccccccca tactacacat 31020 tagttttgca tattttcctg ggggccaaaa aaaccccaaa aggcttcaat attttgcggc 31080 caatggagag tgtaactaat ttggcccaca ctccggtggt atcaatcgga tctcactgca 31140 tatatgatga aagcaagagg gggcaggaga tacgctcttt attggctgtc tgcgcgaagc 31200 tgggcaaatg caaataaaaa gacaaacaac cagctggaag accgggcgac aaacatggtt 31260 tacctaacac cctcgatccc aacaatgtgc atgttaatca atgtgctccg tggggagtat 31320 gaactataac atacgaagca gccattcatg tcaaaaaaaa aaccaggcga atgggcgtcg 31380 tcaacggttt cacataagta ctatattgta ctaactaccc gtgagactgg agagaacagt 31440 ctcgcgcgaa gaaacgataa gagcatcggt catatcggtc catctcggtc taagtgtatg 31500 agaatattcc gacgtgaatc catccgtcag tgatcaatgt ctccaagtaa ttcatcattt 31560 caattaccct cgctttactc cgtagaatac aagaccttac tagcgcaaac aagtgggggc 31620 taacggtgtg atctccttcc gttgcggccg ccacctcggt tccagccgta atacgacgac 31680 ccgtctatcg cgacccccta gccttggcca tttttggcgt tacagtaaag ctttggagag 31740 aaacgccaag ggaaaatgct agccaccaat tctataaatt actcttcaca tgcagctagt 31800 atcactggta agtctacggg gcacatgtaa aatttttatt actttctaat aatctttcca 31860 agttcttttc cacggggccc caatgcttaa aatactcaaa agacgtgaaa aacctgcaag 31920 ccgccagtga tatcacacgt aatgcctcaa cagcctgatt ccgagccatt atatgctgtt 31980 tgatgatctc aaattgagat ggcgagcgct ggatctggga aattggtagt gggattggta 32040 tagaaacgta agtgcagaag accatgtaat aagtacatat ggaggctatg tgatggcccg 32100 atctagtttc ttcaatatag cgctgggtat aaaaaaaagc aggggctttc tcagggtaat 32160 gtcgcagtct acaacgagtg gcgtccactg acagggaaag gcgagcgggg ctatgctacc 32220 ttcaatttcc atagaggggg gatgcaccat ctccgacaat ctatagttac tcaaacaggt 32280 acggtactaa gcaatattgt gtttcttcgc taatgcgaat atttccttat agcaacgtcg 32340 caacacattt atcgtcttcc ctgaggcctt tgttgacttg ggctcttcgt ctccggcttc 32400 gtcactccaa agcacagata ggagacgaga ggccggcgtt atggttttat tttcagcgcc 32460 aaggatttgc cacgatgtgc ttggcatatc tgataggacc tattccccct ctcccggtca 32520 gcgcattgct gatgtatgca agggaagaaa agactggtgg ttatcggtcc cacttactag 32580 acgaatagat gccgcagccc cgtgctcctg tgctatcccc aaagcagtct caatctcact 32640 caatagtcga aggcttacac gcaatgtcgt gcatgcagaa gataaggcgt gcatgaatgg 32700 gtcgagatgt gaaatgagct cgccgatatg aagattagag tgaaacgagg gaagtgcttc 32760 ggctcttcca ttgtcatttc tagtggttga gccagaccag taccaatcca ttcgtgtgct 32820 ttgcttttgt ccacaaggtt gggctttcat cacctcggat agtagcagct gggaaagtga 32880 tgtcatgatt ttgacagaca acatgtagca atgcaccgcc atgaacaagt tcttggtttg 32940 cagacaccca tctaacatgc tgctattgct gctcgtgatc acacgttctt gaagatgtag 33000 tagcaatcta ccaaaggcat tcaaaaagtc ccctatcggg tctaggaaga agctttagcg 33060 acaatcaaga ggcagtaaac aggcagaatt gaaaatctca cagcttaaaa ttttttgctt 33120 gggccattcc acagtcaccc cgtggagtat tacctctagg tcctgtgaca catccgacag 33180 actttcgaaa aggtctcgtt gcgtgttgct tgtgttggat tgtccggatg acgagttccc 33240 ctctacttcg aggtcaaaca gcgatggcga gacaggcgcc gttgcatcca aagggccttc 33300 aaagtcgtag cctagatctg gtatccccga agattcattg ctgttggcat cgtcgcgaaa 33360 tgtatttggc tgaggccagc cgccgggaaa cgactcggga tcatcaaagt tgattgatgt 33420 atcatagaat tgcagggttg ccgctgatgg ttctgataat gtttccttga gtgccgaggt 33480 gccaatatgc gtaggtggtg agcagtaagg tggaggagtc tctgccaatg atgagaagac 33540 cgtagaagat gtcgcggtca tcggttgtga ggtttctgtg gctcttgtag ttccagctgc 33600 ggcttcttta tgtaaattgc gcttgggtag cctttcgctg tacacacacc ttaatccggc 33660 ttgttgacaa cgttgacact gagcacggac taaattggca ttgctaccgg tacatttgag 33720 cttttgtgca tgacaccggt cacatgagcg tcgaaacgcg cgacggcgta ggttcgtcgg 33780 aatcgttgca tgcggcaggg acataattat tggattaaga tcaaataatg tgaggtgaga 33840 ctttgcatgt tcctggatct ttatgtattg gaattggaga gtaagctcgt gcaggagata 33900 agttcaggtc gtcttgctgg aagacttact aagttatatg caaacaagtg ttttcgagcg 33960 gacaccaaaa gccaatagtc ttactatgaa tgtcttttca gtcacccgga gaaatactct 34020 tagcctctgc tcttatgcga gctcatcaaa gctgggcata cataccccat ccagcgccac 34080 gtattacact agaaagagtt ctaaaagaaa tagattcggc cccccatctg gctatcatat 34140 atgccagatg aaatacctgt aacgtggggc ataaaaaggc aggctctagt ctaccagcag 34200 atc 34203 <210> 2 <211> 34203 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 2 gatctgctgg tagactagag cctgcctttt tatgccccac gttacaggta tttcatctgg 60 catatatgat agccagatgg ggggccgaat ctatttcttt tagaactctt tctagtgtaa 120 tacgtggcgc tggatggggt atgtatgccc agctttgatg agctcgcata agagcagagg 180 ctaagagtat ttctccgggt gactgaaaag acattcatag taagactatt ggcttttggt 240 gtccgctcga aaacacttgt ttgcatataa cttagtaagt cttccagcaa gacgacctga 300 acttatctcc tgcacgagct tactctccaa ttccaataca taaagatcca ggaacatgca 360 aagtctcacc tcacattatt tgatcttaat ccaataatta tgtccctgcc gcatgcaacg 420 attccgacga acctacgccg tcgcgcgttt cgacgctcat gtgaccggtg tcatgcacaa 480 aagctcaaat gtaccggtag caatgccaat ttagtccgtg ctcagtgtca acgttgtcaa 540 caagccggat taaggtgtgt gtacagcgaa aggctaccca agcgcaattt acataaagaa 600 gccgcagctg gaactacaag agccacagaa acctcacaac cgatgaccgc gacatcttct 660 acggtcttct catcattggc agagactcct ccaccttact gctcaccacc tacgcatatt 720 ggcacctcgg cactcaagga aacattatca gaaccatcag cggcaaccct gcaattctat 780 gatacatcaa tcaactttga tgatcccgag tcgtttcccg gcggctggcc tcagccaaat 840 acatttcgcg acgatgccaa cagcaatgaa tcttcgggga taccagatct aggctacgac 900 tttgaaggcc ctttggatgc aacggcgcct gtctcgccat cgctgtttga cctcgaagta 960 gaggggaact cgtcatccgg acaatccaac acaagcaaca cgcaacgaga ccttttcgaa 1020 agtctgtcgg atgtgtcaca ggacctagag gtaatactcc acggggtgac tgtggaatgg 1080 cccaagcaaa aaattttaag ctgtgagatt ttcaattctg cctgtttact gcctcttgat 1140 tgtcgctaaa gcttcttcct agacccgata ggggactttt tgaatgcctt tggtagattg 1200 ctactacatc ttcaagaacg tgtgatcacg agcagcaata gcagcatgtt agatgggtgt 1260 ctgcaaacca agaacttgtt catggcggtg cattgctaca tgttgtctgt caaaatcatg 1320 acatcacttt cccagctgct actatccgag gtgatgaaag cccaaccttg tggacaaaag 1380 caaagcacac gaatggattg gtactggtct ggctcaacca ctagaaatga caatggaaga 1440 gccgaagcac ttccctcgtt tcactctaat cttcatatcg gcgagctcat ttcacatctc 1500 gacccattca tgcacgcctt atcttctgca tgcacgacat tgcgtgtaag ccttcgacta 1560 ttgagtgaga ttgagactgc tttggggata gcacaggagc acggggctgc ggcatctatt 1620 cgtctagtaa gtgggaccga taaccaccag tcttttcttc ccttgcatac atcagcaatg 1680 cgctgaccgg gagaggggga ataggtccta tcagatatgc caagcacatc gtggcaaatc 1740 cttggcgctg aaaataaaac cataacgccg gcctctcgtc tcctatctgt gctttggagt 1800 gacgaagccg gagacgaaga gcccaagtca acaaaggcct cagggaagac gataaatgtg 1860 ttgcgacgtt gctataagga aatattcgca ttagcgaaga aacacaatat tgcttagtac 1920 cgtacctgtt tgagtaacta tagattgtcg gagatggtgc atcccccctc tatggaaatt 1980 gaaggtagca tagccccgct cgcctttccc tgtcagtgga cgccactcgt tgtagactgc 2040 gacattaccc tgagaaagcc cctgcttttt tttataccca gcgctatatt gaagaaacta 2100 gatcgggcca tcacatagcc tccatatgta cttattacat ggtcttctgc acttacgttt 2160 ctataccaat cccactacca atttcccaga tccagcgctc gccatctcaa tttgagatca 2220 tcaaacagca tataatggct cggaatcagg ctgttgaggc attacgtgtg atatcactgg 2280 cggcttgcag gtttttcacg tcttttgagt attttaagca ttggggcccc gtggaaaaga 2340 acttggaaag attattagaa agtaataaaa attttacatg tgccccgtag acttaccagt 2400 gatactagct gcatgtgaag agtaatttat agaattggtg gctagcattt tcccttggcg 2460 tttctctcca aagctttact gtaacgccaa aaatggccaa ggctaggggg tcgcgataga 2520 cgggtcgtcg tattacggct ggaaccgagg tggcggccgc aacggaagga gatcacaccg 2580 ttagccccca cttgtttgcg ctagtaaggt cttgtattct acggagtaaa gcgagggtaa 2640 ttgaaatgat gaattacttg gagacattga tcactgacgg atggattcac gtcggaatat 2700 tctcatacac ttagaccgag atggaccgat atgaccgatg ctcttatcgt ttcttcgcgc 2760 gagactgttc tctccagtct cacgggtagt tagtacaata tagtacttat gtgaaaccgt 2820 tgacgacgcc cattcgcctg gttttttttt tgacatgaat ggctgcttcg tatgttatag 2880 ttcatactcc ccacggagca cattgattaa catgcacatt gttgggatcg agggtgttag 2940 gtaaaccatg tttgtcgccc ggtcttccag ctggttgttt gtctttttat ttgcatttgc 3000 ccagcttcgc gcagacagcc aataaagagc gtatctcctg ccccctcttg ctttcatcat 3060 atatgcagtg agatccgatt gataccaccg gagtgtgggc caaattagtt acactctcca 3120 ttggccgcaa aatattgaag ccttttgggg tttttttggc ccccaggaaa atatgcaaaa 3180 ctaatgtgta gtatgggggg gtgtgggttg tgttcaaaac ctgcccagtc aatatggagt 3240 ataggtaaat tacaaccaca atactagtga gatctagcag tggggccagt tcaatgcatc 3300 ttgtgcgtcg taaataagcc cagacacgct aataccgcaa cacttccggt aacaaagaaa 3360 agcaaaatta aagacgtcgc caatttcccc tgatccccat ccatcaatct gacttcaggc 3420 tagcggacct taacgaaaca acgagagcga gatcattcat acaccaaaac acaggtacta 3480 tagaagcgcc gcgcagtaga gattcacacc gccccttgaa gcaaaagtcg gaaggaattg 3540 cgcgatgtca gaacctctac cccctaaaga aggggaacca aggccacaga aggaagaaag 3600 tcaaaatgac acgctcgaag cgactgagtc caagtcccag cacatcacag gcctcaagct 3660 cgggctggtg gttgcttcag ttactttcgt agcatttttg atgctccttg atatgtccat 3720 tatcgtcacg gtaagatggt ggctacctca gaacagagcg cagcacagtc aattgactcc 3780 agccacaggc aatcccacat atcacaagcg agttccactc tctgaacgat gtagggtggt 3840 acggcagtgc ttatcttctg gctaagtatg gctctgttct ccttgacctt gttcattgta 3900 cgaacagatt agctaacatc atatttagct gtgctctcca gcccctggcc ggtaaattgt 3960 atacactctt gggcttgaag tacactttct ttgccttcct ctgtattttt gaactaggct 4020 cggtgctatg cggtgccgca agatcttcca ccatgttgat tgttgggcgg gccgttgctg 4080 gaatgggagg ctcaggtctt gtcaacggag ccctcacaat cctctcaaca gctgctccta 4140 agcacaagca accaggtaag ggaaccgatt tttggaagtc tgctgggtgc cgtgtacacg 4200 ctgacctcgc atatgaagtt ttgattggag tgatgatggg tcgtatgtca tctcaagatc 4260 tgatgtaccc caaacgaacg gttcgtcgtc tgacaatatg ttttcagtta gtcagattgc 4320 cattgtctgt ggaccactgc tcggaggtgc tttcactcaa cacgccactt ggcgatggtg 4380 tatgttgacc tttggccttt ttatgattgt tgtccatgtt ctcacttgga attcaggctt 4440 ttatatcaat ctccccatcg gcgctgtcgc tgcattcctc cttctcgtca tcaccatacc 4500 cgaccgaatt tcatccacgg acagcgaact ctcgaccgac aaaccaatgg ccaacataaa 4560 atccacactt cgcaaactgg accttgtagg ctttgtggtc tttgcagcct tcgcaaccat 4620 gatttccctc gcactagaat ggggagggtc gacctacacc tggcgaagtt ccgtcatcat 4680 cggcctgttc tgtggcggag ggtttgctct gattgcgttc gtgctatggg agcgtcatgt 4740 tggcgatgct gttgccatga ttcctggctc agtggctggt aaacgacaag tgtggtgctc 4800 ttgtttattt atgggctttt tctctggctc cttgcttgtc ttttcctact atctaccgat 4860 ctacttccag gctgtgaagg atgtttctcc cacactgagt ggtgtgtaca tgttgcctgg 4920 aattcttgga caagtcatta tggctatggt ttctggcttc gcaagtaagt gaaactcgcg 4980 tacacatttt tctccacccc gtccatttct atggctcctt tcttgccaca accgtctgac 5040 atcgggcttg gatatcgtgt atactgacat atgacgcacc agttggaaag acaggatact 5100 atttgccttg ggccctaggc agcgctgttc tcgtcgccat aggcgcaggt ctggtatcca 5160 ccttccagcc ccatacatca actgtgaaat gggtcatgta ccaatttatc gcgggcttcg 5220 gtcgtggttg tggcatgcaa acggtaagct atgaaacctt tgatcatctc tcacgctttc 5280 ggctttgtat caaagcaaga agagcatgca accgctagac gctgacatca atactcaatg 5340 gccagcctat catcgccatc caaagcacgc tttcgcccga acaaggtgcc ctcggaattt 5400 ctctcgccgt gtttggacag acgtttggag gatcgctctt cctggacttt gctaaccttg 5460 tctttgggtc cggtttgaga actggcctga gcaagtatgc gcccactgtc gacacgcagg 5520 ccgtgacggc agcaggggcg actggcttca gagatgtggt cagcaagaat aaccttccag 5580 gggttgtaaa agcttacagt ctcgccgttg atcatacttt ttacttagca gtgggagcta 5640 cggcgtgcac gtttgtgttt gcctttggaa tgggatggcg gaagattgca accaaaaacg 5700 acacccgggc tgtgcctgag actgatgctt gaccgcgttg ctagatagac acattaccgt 5760 gcctccacaa agaatctcca catacttaat taatgtcgat ttcaaagatt ctatatgtca 5820 ttgcccgcga cccatgtcta gtctaagtcc atctcaaggt tctagtcacc gtggctagat 5880 tggcaacata taactatgtt gagattcata gttagttagt tacggcatct gacaatggat 5940 gattgatgtt tcaggcatca atcctgatac ctcaggaatg aatcagatca acattcaacc 6000 tactcagtaa gttatagctt gaacaaagct ttcactcatt aaataattat gagggatcag 6060 acctaaacac tctctggaaa aggaccatct ctttatatat tcttcttccc tactacttgc 6120 atcgtaaatt tcaacaacat ataaacatga gatacccttt ctggccgttc actctaccac 6180 ctgcctgtct cattgcattg tgcttttgaa aattatgaca ataacaacca atgagaaaaa 6240 atatgatcct cctgcaatga atccactgga gggggtacgg agcttggaat gctcctaaga 6300 ttccgaccta atcagcgtcg agcccgatca gtagctgcag cactcggcct cagtgcattg 6360 ttaggaacag ggactgtcct ggttccgcct gacggggaga cacttcgaga aggggctgaa 6420 gatgccgggg cagaacggtt gtgcgccatg tgcgccttga ccaggtgacc ggcggctagg 6480 gcagcacata gcgagagctc cccagccaaa acagcgcttc cgatgatgcg cgcaagttga 6540 cgtgcattct caccgggagt ggtcgggtgt gatccgcgga caccaagcat gtcaagcatt 6600 gcgccctggg gctccagaat cgtaccaccg cccaacgttc caacctcaat agacggcatg 6660 gagacagaga tttgaagcga tccgcgaaga ctaaacagga ttagtgaatg tttccaagta 6720 agcggccgct ttcaacttac ttgttcatga gagtgatgca gttagcgctc tccacaactt 6780 gcgccggatc ctgacctgtg gcaatgaaaa tggctgccgc aagattggca gcttgggcgt 6840 tgaagccgcc aactgagcca gccatagcgg acccaatcag atttttcgat atgttgagct 6900 gaaccatgct atccacatcg ctctttaaga catccctgac aacgttcgcc ggtatgatgg 6960 cttcggccac aatgcccttg ccccgtccat cgatccaatt caaagctgaa ggtttcttat 7020 ccgtacagta atttcctgat agggtaataa tattcatatc gctgaaacct gcctctgtcg 7080 ccataacatt cagtgcatgc tccacgccct tagaaatcat attcattccc atagcgtcgc 7140 cagtagtagt cttaaatcga atatataagt gagtaccggc gatagttgtc cgcatacttt 7200 gtaagcgcgc aaatctgctg gttgaattga aggcttcttt cattacggtc tggccgacgt 7260 ccgaatcgag ccagatctta gcagcaccag ctcgttcaag gacatcaaac ttcacacacg 7320 ggcctcgtgt cataccgtcg ccagtcagga ctgtcacggc accgccaccg aggttgattg 7380 ccttactgcc acggctagca ctagcgacga ggacgccctc ggtggttgcc ataggaatga 7440 aataactctt gccgtcgata acaataggac cggcgacgcc aacagggact ggcatatagc 7500 caataacgtt ctcgcaacat gcaccgagca cgcgttccca ggcgtagttt tcgtacggca 7560 gcttcgagtg ctccagcata cttgtaagct ctgcggtagc cggtgtcctc gaaatgatag 7620 agcggcgaac cttgacggca cgagtgcagt ctttgagact cttctctagg gcatacccgg 7680 gaacctttcc ccgcaaagac aaggcaacga catcctcatc gttcaactcg ctgattgtgt 7740 tctgcttcag caaattgtcc agttcgattt gtgtgcgaga cacgggaagt tcactagtgg 7800 ctgtctttcc ttctgctcgc ttagtgacct ttagagatgc tttaattaag actaatgagg 7860 catcactgtc actgtcggtg gtggtaggag tgaacactct ggtctgagga gcttggagac 7920 ttgattgaat ctgaggggtc tggttctggg cagcgttgaa gctttcggcc tggtcaagct 7980 caactggatc aactgggtga ctcgggagat taggatcttt gattcccagt ctggcggcct 8040 tgaacagata gctgttcaga gcgacactta gggcaagtgc cacaaacacc catttggaga 8100 ggacgggatc ttccaggctg gtgagcaggc taccgaccat ttttccacca actccatact 8160 cgtgtagctg cgaggtacca cggtgaatgg aaggatactc tagttcgtac ttgatggggg 8220 cgaggacagt gaccatagtc gattgaccgc gccctcttgc ctggaaaagt agttcatcta 8280 gtccacttcc agctaccttg aagggctcaa gcgggggttt aatggccgat ccgctcagac 8340 tttcggtcca agatgatata ctggacaacg atccactaga agaggcttgg aaaagggtgg 8400 agccgatgtt gacgaggttg acgataagga aaccaacgac catccagaat ttgaacttcg 8460 gaacactgct gcctttcata tcattgccaa acagatatgt acgtgcactg tcttgggcat 8520 cattgctggt cgcgacactc tccgccgtcc gctgactgag accctcatct tccaacgcgt 8580 accgcatgtt gatatgacgt ttgaggcggt ttacctcgag cttgatagac agaatcgcag 8640 tgtagaatgt aaacagcagc agacagtcaa agaacaggat caatgcagct agaacacaga 8700 agtgctgtag cccaccttgg atgcctaaga cagcaccgat aactaggagc aggatctcga 8760 ccacgtagtg gcacacgata ttgtaaccct tctcccgaat ggcgcttcgt acggcgtaat 8820 tgatggtact ttcagcaatg gctgtcacgc taccctggtc agactgtatc ttctggggct 8880 ttcggtgctg cacagcatag gacaaaacag ccctggtcag agtgatgctc ttctcaaagc 8940 caacgatcac caccaagaag gggaggcctt cggatagcaa cctcatgctc atcggaaccc 9000 ctagtcttat ggccacgtcg agaccgagga gaaaggcaaa tgttgacgac aaaaggacgc 9060 ttgtagccag ccaaaccttc gatcccaatt ttttcatgct gaggaagagt gagacgaaag 9120 tcaagtgcat tgatatataa cctagcacca tgacaaccac gtcgagcgtt tgagcgctct 9180 tgataagatc aagagactct gtccaggtat cgtgcaccca ttgagcaagg ctgcgttttg 9240 tgtgagccct ggcagccttc atgatccaca tctggcgttc catctcgatc aattgcgtct 9300 cctgcaattt caggtcggca ctgttgttgg ggatttcttg aacagcagcc acgagttccg 9360 gcgcgctgct gtattccaca gagaaggcga aaactttatc tttcgaatag gcggttaaag 9420 ggctcgacgt tgagggaagg tcaatcacag ataggttcac agggagggga gcaaggaatg 9480 gtgaggctgc ttgagatgca accccatatg accccgggaa taccaaggtc attagtgctt 9540 gatggttgaa atctccgaga acatctgcat ccccgtcgaa gctctgccac ttccagccat 9600 tctgtgggcc ggtgatcaag cttcgacttc cttcgaccaa agagccccat tctgctttat 9660 caacgtttgc ggggccatgg aagaagctgt ctttgagtag tccaacgtat gtggtactag 9720 ctagaatagc tatggtgcaa acggtatgga tcgggtgtag acacgccgtt ttggatagaa 9780 attggagtgt ggaggtcaat gcccgatttc ccgagcgtag agggtgctgc tgattcattg 9840 attccctacc gcgaaagcga gagggtagca acgaagcgac catgctgaaa ggtctgtgct 9900 acagcttgga gtggtaccta tagctaggta gtctctgaga aaagaatcta gtcagctctg 9960 caaatgggga cggaaaagca cttcaattgg gaattagggc ttgagataaa gtgcatacct 10020 ccaaaatcga atgagcaacc taatcggtta ggcgcctagg tataatctgc cgtcgtagat 10080 tggaggaagg ttgttcggcc caaggggttg ggagggacaa ctgaacagtt cctaggtacg 10140 ggaaatgagt agaagaaaat aacaaatggc gcgcgcccct gaggctgagg cagcggaaag 10200 attcgcttcc ttatccctgc atctggtcca cctttatgaa tggattcatg accggtgtca 10260 actgctgcct agggtataat tggtaagggg taccaagcaa aggatagtag gaccaattgc 10320 actgaaaact agtatttgtg ctcataacta tgctcagttt ccaaggtttt tatgcataaa 10380 tttatccttt attcgagaaa aaagaattct ggggacacca atcaattgcc ctgataccta 10440 ggaatgtgaa cttccaagat tgttccgaaa gtaggccaaa tgaccaataa gacagaacac 10500 tacctaggta tagttatttt gtcatgccta gatccgacat acaaaggagc gtcctcttac 10560 atagacgtcc tgttagacgt ttctaatctg actcgtattg tggtcctttt ttggtggggc 10620 ggcaagctgc atcgatcacg cccggacgag gccacttcgt gaggaatgga aatatattgt 10680 gcctacggag taatgcacca cgaaacacat tcttctcgaa acgactactt acgcagggat 10740 gtatgggtat tattctgtcc acgaaaagcc agtgtcaacc cccccccccc cccccccccc 10800 cggtatcatt tatctcagta aacagcaacc tgaacaagat acccaggtag acaagaagtc 10860 agtttggagt atagtgtata gactcgggaa cattttgtgt ggacctccgt acgtgtctct 10920 caaatcggcg tctctcggtc tttggatacc ttcggagtta cacggggctt tgttgccaag 10980 gcttcaatat tcggcgcatg gattttcttt gtgcatgggt ctgagtgggg tgccgtaagg 11040 tatggtattg ctcccgattg ggagttctga cagatgatca tgccgccttc cgaagtagaa 11100 aaaagaggaa agggtcacat gctcatgatg atcgtttgct cgcgatgaat tgcgcttcct 11160 gcatatattt tgtttgcttg tcttagtcaa ccgataatgc aaattttggg gattgtgtat 11220 tgttggaaat tgaattacca actgcttaca ggacccaccc tgcgctcagg ccctcaacaa 11280 accttgggac aggattaccc actaagcctt tccaagcttt tccaaggctt ttggattcgt 11340 ttggtttgat agctcgtatg cgtatttcgc atctgtgtac ggagtatcgg attctgacag 11400 cctccattat acccgaaaac tacctggccg gcctgacctg tttcgtcttg ttcgacggtt 11460 tcccatcggc gttttgactc gggattatcg tgacgacaga caatgcctcc cgaaccggta 11520 cctctaaggt attgccccga gcatagcatg gtggtccggg gtttcccatg ggcacagagc 11580 gaatatcgtg tcacgtccaa gatgaaaaca aaccccgaac tatgaatcac gtgtcggggg 11640 cagcttatgc atctatagct atgccaggga cctgtagact gttggaagac tatcaacggt 11700 tttatcacca gggcgactga tatatcagtc aatgaaacaa cgttggaatg aacaataccc 11760 ccgccgtaac cgcaaccgca accgcaaccg caaccgcaac cgcaatggca ggctcggctt 11820 gctctaacac atccacgccc attgccatag ttggaatggg atgtcgattt gctggagatg 11880 caacgagtcc acagaagctt tgggaaatgg ttgaaagagg aggcagtgcc tggtctaagg 11940 tcccctcctc gcgattcaat gtgagaggag tataccaccc gaatggcgaa agggtcgggt 12000 ccgtgagtat ctaacatgca tgcatttata tcttgttttg aatatttgac acaagatttg 12060 agcatcactg aagcttggtt actgactcca aggatgactg gatagaccca cgtaaagggt 12120 ggacacttca tcgacgagga tcctgcttta tttgacgccg cgttcttcaa catgaccaca 12180 gaggtcgcca gcgtatgatt atttcaattg atctaacccg ggacgcagag atctaatatt 12240 ggacagtgca tggatccgca gtatcggctt atgcttgagg tggtctacga atcgctggag 12300 agtggtatgt agtgtgggtc atcctcactg taagcaaacg tcactgacca tcatccagcc 12360 ggtatcacca tcgatggtat ggcaggctct aatacgtcgg tgtttggggg tgtcatgtac 12420 cacgactatc aggattcgct caatcgtgac cccgagacag ttccgcgtta tttcataact 12480 ggcaactcag gaacaatgct ttcgaaccgg atatcacact tctacgactt acgtggtccc 12540 agcgtgacgg ttgacacggc ctgttcgacg acattgaccg cactgcactt ggcgtgccag 12600 agcttacgta ctggggagtc agatacagcc atcgttatcg gtgcaaatct tctgctcaat 12660 cccgatgttt ttgttacgat gtcaaacctg gggtgagttt tccgaagaag attccagatc 12720 gagagtcttg aactaagcaa tccttgttgc tcaatgacag atttttgtcc ccggatggta 12780 tctcgtactc ttttgatcct cgagcgaatg gatatggtcg cggggaagga attgccgctc 12840 tggtaataaa ggccctccct aacgcgttgc gagaccaaga ccctatccga gccgtcattc 12900 gagagacagc gctgaaccag gatggcaaaa cacccgcaat tactgcgccg agtgatgtgg 12960 cgcagaaaag tctgatccag gagtgttacg ataaggctgg gctagatatg tcgttgacct 13020 cgtacgtgga ggcccacgga actggaacac caactggtga cccccttgaa atctcagcaa 13080 tttcagcagc ttttaaagga catcctctgc accttggctc tgtgaaagca aatattggcc 13140 atacagaagc cgccagtggc ctggccagta taatcaaggt ggccttggcc ttggagaagg 13200 gcttgattcc ccctaatgcg cggttcctgc aaaagaacag caagctgatg cttgaccaaa 13260 agaacatcaa ggtaaggctt tgcgcattcg cagattcagt tatatgtttc aaaggttaat 13320 gtttcaaaga tccccatgtc tgctcaagac tggcctgtga aagatgggac tcgtcgcgca 13380 tctgtcaata acttcggctt tggtggttcg aatgctcacg tcattttgga atcatatgat 13440 cgcgcatcat tggccctgcc agaggatcaa gtgcatgtca atggtaactc tgagcatggt 13500 agggttgagg atggttccaa acagagccgc atatacgttg tgcgtgccaa ggacgagcaa 13560 gcttgtcggc gaacgatagc aagcctgcga gactacatta aatccgtcgc tgacattgac 13620 ggggaaccct tcctcgccag cctcgcctat acactaggct ctcgccgttc cattctgcca 13680 tggacgtcag tgtatgtagc agacagcctt ggcggccttg tttctgccct cagcgatgag 13740 tccaatcaac caaaacgagc gaatgagaaa gtacggctcg gatttgtatt caccggtcag 13800 ggggcgcagt ggcatgcaat gggcagagag ctggtcaata cattcccagt attcaaacag 13860 gcgattcttg aatgtgatgg ctacatcaag caactgggcg cgagttggaa ttttatgggt 13920 aagttgcgag cccgggaaaa gtaatactgt atcaagcttg aggtactaac attcaattgc 13980 acagaggagc tccaccgtga tgagctgacg actcgggtaa atgatgccga atacagtcta 14040 ccactgtcaa ccgctatcca aattgcactt gtgcgtctcc tttggtcatg gggaattcgg 14100 ccaacgggga taaccagtca ctcaagtgga gaggctgctg ctgcctacgc agctggggct 14160 ttatccgcgc ggtcggccat tgggatcact tatatacgcg gtgtattgac cactaagccc 14220 aagcccgcat tggcagccaa aggaggaatg atggcggtgg gtcttggtcg cagtgagacc 14280 aatgtttaca tttcgcgtct caaccaggag gacggctgtg tggtggttgg atgtatcaac 14340 agtcaatgta gtgtgacggt gtcgggagat ttgggtgcaa tcgagaaact tgaaaagttg 14400 ttacacgccg atggcatctt taccaggaaa ctgaaagtca ctgaagcctt ccattcaagc 14460 cacatgcgac caatggcaga tgcctttggg gcgtcactga gagatctgtt caactcggat 14520 aacaacaacg acaatcccaa tgctgacacc tcaaagggtg tattatattc atcacctaag 14580 actggtagtc gcatgaccga tcttaaattg ctattggatc ccacacactg gatggatagt 14640 atgctacagc cggtagagtt cgagtcctca ctccgcgaga tgtgctttga tcccaacacc 14700 aaagagaaag ccgtcgatgt gattattgaa atagggcctc acggagcgct tggtggtcca 14760 atcaaccaag tcatgcagga tctgggtctg aaaggaacag atataaacta tctcagttgc 14820 ctttctcgcg gcagaagctc gttggagaca atgtatcgtg ctgctacgga gttgataagc 14880 aagggttatg ggctcaaaat ggacgctata aactttcctc atggaagaaa agagcccaga 14940 gtgaaggtac tgagcgattt gccggcgtac ccgtggaatc accaaacccg ttattggaga 15000 gagcctcgcg gcagtcgtga gtccaaacag agaacccatc cgcctcacac tttgataggc 15060 tcacgggaat ctctctctcc tcatttcgcg cctaaatgga aacatgttct ccgtctgtca 15120 gatattccat ggatacgaga tcacgtcgtt ggttcgagca tcatctttcc gggagctggc 15180 ttcatcagca tggccatcga ggggttttca caagtctgcc caccagttgc gggggctagc 15240 atcaactaca acttgcgtga cgttgaactc gcgcaggctc tcataatacc cgctgatgca 15300 gaagcagagg ttgacctgcg cctaacgatc cgttcatgtg aggaaaggtc cctcggcaca 15360 aagaactggc atcaattttc tgtgcactca atttcgggcg aaaataatac ctggacagaa 15420 cactgcaccg gattaatacg ttcggagagc gaaagaagcc accttgactg ttcaactgtg 15480 gaagcctcac gcaggttgaa tctaggctca gataaccgga gcattgatcc caacgatctc 15540 tgggagtcct tacacgcgaa tgggatatgc cacggaccca tttttcagaa cattcagcga 15600 attcaaaaca atggacaggg ctcgttttgc agattttcca ttgctgacac tgcctcggct 15660 atgcctcact cgtacgagaa tcgacacatc gtccatccta ctactctgga ctcggtgatc 15720 caggcggcat acacggtgtt accctacgcg ggaacacgta tgaaaacggc catggtacca 15780 aggaggctaa gaaatgtcaa aatatcctct agcctggctg acttggaggc tggtgatgct 15840 ctggacgcac aggccagcat caaggatcgc aactctcaat ccttctctac cgacttggca 15900 gtgtttgatg actatgatag cggttcttct ccctcggacg gaatcccagt catagagatt 15960 gaaggccttg ttttccagtc ggttggaagc agcttctctg accaaaagtc agactccaac 16020 gacacagaaa atgcctgcag ctcctgggtt tgggcccctg acatcagctt gggtgactcc 16080 acttggctca aagaaaagtt gagcactgag gctgagacga aagaaacgga actcatgatg 16140 gacctccgaa gatgcacgat caactttata caggaggctg tcactgattt gacaaattct 16200 gatatccaac atctggatgg ccaccttcag aagtatttcg attggatgaa tgtccaattg 16260 gaccttgcga gacaaaacaa gctcagccca gccagttgcg actggctaag tgacgatgct 16320 gagcagaaga aatgcctaca ggccagagtc gctggagaaa gcgtcaatgg cgagatgatt 16380 tctcgtctag gacctcagtt aatagcaatg ctacgccgcg aaacagagcc acttgagttg 16440 atgatgcaag atcagctgct aagcagatac tacgtcaacg caatcaaatg gagccgatca 16500 aacgcacaag ccagcgagct gatccgactt tgcgcccaca agaacccgcg ttctcgcatt 16560 ttggagattg gcggaggcac gggcggctgc acaaagctta ttgtcaatgc attgggaaac 16620 accaagccga tcgatcgtta tgacttcacc gatgtgtctg ccgggttttt cgagtcggcg 16680 cgtgagcaat ttgcggattg gcaagacgtg atgactttca aaaaattgga tattgaaagc 16740 gatcccgagc aacaagggtt tgaatgtgcc acctacgatg tggtcgtggc ttgccaggtc 16800 ctgcatgcaa ctcgatgcat gaaacgaaca ctgagtaacg ttcgaaaatt gctcaagcct 16860 gggggcaact tgattttggt tgagactacc agggatcagc tcgatttgtt ctttaccttc 16920 ggactgttgc caggttggtg gctcagtgag gagcctgagc ggaagtcgac gccatcgctc 16980 actaccgatc tttggaacac catgttggac acgagcggtt tcaacggtgt ggaattggag 17040 gttcgtgatt gtgaagacga tgagttttac atgatcagca caatgctatc gacggctaga 17100 aaagagaata caaccccgga tacagtggca gaatcggagg tgcttttgct gcacggagcg 17160 ctccgacctc cttcatcttg gctggaaagt ctccaggcag caatttgtga aaagaccagt 17220 tctagcccat cgatcaacgc tctgggcgag gtagatacca ctggaaggac atgcattttt 17280 cttggggaaa tggagtcctc gctccttgga gaggtgggaa gcgagacctt caaatccatc 17340 accgcgatgc tgaataactg caacgcactt ctctgggtgt ctagaggagc agccatgagc 17400 tccgaggatc catggaaagc tctacatatt ggtctgctgc gtaccatccg caacgaaaat 17460 aacgggaagg aatatgtatc gttggatctc gatccttctc gaaacgcata cacccacgag 17520 tccctgtatg ctatctgcaa tatcttcaat ggccgcctcg gcgacctttc cgaagacaag 17580 gagtttgaat ttgcagagag aaacggcgtc atccacgtac cgcgactttt caatgacccg 17640 cactggaagg accaagaagc ggttgaggtc acactgcagc cgttcgagca acccgggcgt 17700 cgtctgcgga tggaggttga gacgccaggg ctcttagact ccctgcaatt tcgagacgac 17760 gaaggacgtg aaggcaagga tcttccggat gattgggtag aaatcgaacc caaagctttc 17820 ggtctcaatt ttcgggatgt catggttgcc atgggtcaat tggaggccaa ccgtgtgatg 17880 ggcttcgaat gcgccggagt gatcacaaag ctcggtggag ctgctgccgc tagccaaggc 17940 ctcagattag gggaccgcgt atgtgcacta ctgaaaggcc attgggcgac cagaacacag 18000 acgccgtaca ctaatgtcgt ccgtattccg gacgaaatgg gcttcccaga agccgcttcg 18060 gtccccctgg ctttcactac cgcatatatt gcgctttata ccacggcaaa gctacgacga 18120 ggcgaaagag tcttgatcca cagtggagct ggaggcgtcg gtcaagcagc gatcattttg 18180 tcccagcttg cgggtgccga ggtcttcgtc acagcgggaa ctcaagccaa gcgtgacttt 18240 gtcggcgata aattcggcat caatccggat catatcttct cgagcaggaa tgacttattc 18300 gtcgacggca tcaaagccta cacgggcgga cttggcgttc atgtcgttct aaactcattg 18360 gcaggtcaac tcctccaagc aagctttgac tgcatggccg aattcggcag atttgttgag 18420 attggaaaaa aggacctgga gcaaaacagc agacttgaca tgctgccatt cacccgggac 18480 gtctctttca catcaattga tcttctctcg tggcaaagag ccaaaagtga agaagtatcc 18540 gaagcgttga accatgtcac aaaactcctc gagacaaaag cgattggctt gattggtcca 18600 atccagcagc actccttgtc aaacatcgag aaggccttcc gtacgatgca gagtggtcag 18660 catgttggca aagttgtggt caatgtatct ggggacgaac tggtcccagt cggcgatgga 18720 gggttctcgc tgaagctgaa gcctgacagt tcttacctag ttgctggtgg gctgggggga 18780 attggaaagc agatctgtca gtggcttgtt gatcatggcg cgaagcactt gattatccta 18840 tcgagaagtg caaaggccag tccattcata accagcttgc aaaatcaaca gtgcgctgtc 18900 tatctacacg catgtgacat ctcagatcaa gatcaggtca ccaaggtgct ccggttgtgc 18960 gaagaagcac atgcaccgcc aattcgaggt atcatacaag gtgccatggt tctcaaggac 19020 gcgcttctat cgcgaatgac attggatgaa tttaatgcag caacacgccc aaaagtacag 19080 ggtagttggt atcttcacaa gatcgcacag gatgttgact tcttcgtgat gctctcatcc 19140 cttgttgggg tcatgggtgg ggcaggccag gccaattacg cagctgctgg tgcattccag 19200 gacgcacttg cgcaccaccg gagagcccat ggcatgccgg ctgtcaccat tgacttgggc 19260 atggtcaagt ctgttggata cgtggctgaa actggccgtg gtgtggccga ccggctcgct 19320 agaataggtt acaagcctat gcatgaaaag gacgtcatgg atgtgttgga gaaggcaatc 19380 ctgtgttctt cccctcaatt tccatcacct cccgcagctg tggttacagg aatcaacaca 19440 tccccgggtg ctcactggac cgaggcaaac tggatacagg aacagcggtt tgtgggactt 19500 aaataccgcc aagtccttca tgcagaccaa tcctttgtct cttcgcataa aaaaggacca 19560 gatggcgtgc gggcccaact aagcagggtc acctctcacg acgaggccat ttctatcgtc 19620 ctcaaagcaa tgacggaaaa gctgatgcga atgtttggtc tggcagaaga cgacatgtcc 19680 tcgtccaaaa acctggcagg tgtcggcgta gactcactcg tcgccattga acttcgaaac 19740 tggatcacat ctgaaatcca tgttgatgtg tcgatctttg agctcatgaa tggtaacacc 19800 atcgccggcc tcgtcgagtt agttgtggcg aaatgcagtt aagttgaagg gttcagtgaa 19860 gccttttgtc tggccaagcg ggtatagctc gacggaggta tagtacgaag gagcatagcg 19920 gccatggtct gaagcctgaa tccaatctga atcgagcctg ggctgagcct gactatttaa 19980 tgcctgactt ctggatagca gtaaatagag atacctgaaa taccattaca gtggccctga 20040 gaagcaacaa agtacacatg tgcactcgtt ctcgaagtcg gaagagtgaa tgctttttat 20100 actaccaggg aagctgtctt agcacctcgg aggcttgact gtcaaaagtt ctctcttttt 20160 ctctccatta tgattcccgc aagccttgta aatgcgcgtt gaacggtcga aaggcgttgg 20220 cacgggcagt gggtacagat tgtggatatg tagtcggaag gcgggaggga gtacttgtgt 20280 ccacgtcgtt gcgccgtcct ctctttcgcc tagtcgggga tgttgagtag gaacatcaag 20340 acttaacaga gcctaagccc tcgtcatcgt aagcgccagt caacgcctga gagaatgggg 20400 agatcggtga ttgtaccggg agaaaagctt cattactgcc gacttcccta cgtggcggtg 20460 tagctggcgg tatagaagca gatggccgct ctgcgtagca ggaatacaca ctctctccct 20520 tctctctctc tgtgtttctg tctctcgcac atagccaaag tctacaccac gttcgattac 20580 aaagaaggca tcacaatcga ataaaatgcg ttttatttta ctaacctact cgactaatac 20640 agcacctagt ttctctggga cggaaactat tggaataagc ctggggacgg atgcatattt 20700 gttttagttt gcgtgttata tcttagcacc ggtcatgagg gagcgggatg tcctcgttgc 20760 gccggcgtac catgagcttt gtggttggat gcatacgaac gctaaaagcg tgacggtagt 20820 atttgtcatc gtctcctggt acaggcttca catcatactg aatcagtata tgagcgagga 20880 gaatcttgat ttccttcgag gcgaagaacc gcccgggaca agcgcgtggg ttccagccga 20940 agccgatgtg atcaccgttg gtattctcca attgagcggt gaaggccttg tctggatcct 21000 cgcgcatgcg cataaatcgg tagggatcat aattttcggg gttttcccac acatcagggt 21060 tgttcatgcg gtctgcagcc acagcggcca actcgccctt gggaatgaag aggccattgg 21120 atagagtgat gtctctgaga gcggtactgc gcatagtggc gcactcgacc ggcttgattc 21180 gctgcgtctc tttcatgcag ctgtcgagga gcttcagctt gaacagagag gcaggcgtcc 21240 agcccccttc tccgattaca gtgcggatct cttggcggag aggctgaata aggtctgggt 21300 gcctggcaat gtccacaagg gcaccgacga aaagatccgt cgaggcgtag atgccggcga 21360 aatccatagc gagctgagca cccgccacat cgtaccagcg gccgtcggcg gtgtcttcaa 21420 accattgcat ggtatcgacg tactggggcg gctgcacgcc cttcgctaca catgcggcct 21480 tttcagcacg tcgtcgctga atctcaggat caatgatctt tcgtgcgcgg cgcacttggt 21540 cacgcaattt gcgtccttgc ggttgaaacc agtgagcgag cggtcgcagt agcatgggcc 21600 atacgcgaag ttggcgagct tgtaccgcca cactcacggc atggttcttt gcaatatcca 21660 gccactcctc attgtggcag attttgtcgc cgaccataat gagtgtgact gttcgtgtga 21720 caaggtccaa tccattggaa tagacaggtg cggtttgcca ctctagtata ttcgcggtat 21780 gtcagccaga ggctcaatgc tcaagacaga aaaattgaca cttaccctcg cttttaccga 21840 acaacttggc aatagtagcg tcggccaagg tagccaatgg ctttgtgtac ttgggggctt 21900 gggtttgtaa ctggttcaaa acaactttgt tgacaagatg tgcatcctgg cagatttcct 21960 tgaacccgtc gaatccaggg agatgagagt gaaagtccta tacattcatc agaatcttag 22020 agacgtcatt gagttacaac aatggaaaat tcagaggtca tacatccgcc aaaaacttgt 22080 acatgcacat atctttgatt ttccgaaact cgtcggccat ggacgatggg aggatggtgc 22140 aatagccgga atcaacaatg aagcgcaggg gcttgtcgtt tttcgagaac caagcttcga 22200 tccagctcgg accatacgta tcgaagtcct gcctagccct catggtcgtc aactcccacc 22260 attttttggg attatagact tgcagttcgg actggcgccc ccgcaaacgg taggcgatga 22320 gactaagaag cactgcgacc gccacaaggg cttgaggggt cgatacccat tggtacgatt 22380 cgacggtcag aagaacctgg ccgagcattg cgtgagacag ataggaccta tgcacaccag 22440 tggaaaagaa gaaagagcga agaatgagag cgctgcgacg gtttataatc gaataacagc 22500 actaatgctt ctgggatttt gtggccgaga gcactcttcc agtcaacctt gaaaaaaaaa 22560 aaaccccccc cccaatcgaa gtttacctgg atggggcagt tcggttgttt cctttaggag 22620 cagcttcacc gagcagcaca agaacaatcc gagtgaaaaa ctcggtttca ccttgataca 22680 gccaattgat attcacgttt gattcattca gcctcgtgtg accgaataac gccgtatgga 22740 ggaatggcta ttcgtgcacc gaatgacgcc gggagggttt gctaggtgcc gagcttgcat 22800 tgctgggaag tgggggcatt tgagtactag aatggatctt gaaattgtcc gaatctagat 22860 gagtactgat acgtgcaagt aaatataacg acggtatcgg ttgcaaggcc ggcttgttcg 22920 ctcagagatt caactctgcg attctgtaag aacaaatgtt gtgcccggca tgcagtgaga 22980 agatctactg acgcaagaca aggtttaatc ccaatcctat cgcccaaaaa caggatcagc 23040 agttatggat caagccaact atccaaacga gccaattgtg gtagtgggaa gcggttgtcg 23100 gtttccaggt ggtgtcaaca caccatcaaa actttgggag ctgctcaaag agccccggga 23160 tgtacagacc aagatcccta aggagagatt tgacgtcgat acattttaca gccccgatgg 23220 cactcacccc gggcgcacga acgcaccctt tgcatacttg ctgcaggagg atctacgcgg 23280 ttttgatgcc tctttcttca acatccaagc tggagaggcc gaaacgattg acccacagca 23340 aaggctgctg ctggagacgg tctatgaagc tgtatccaac gcaggcctac ggatccaagg 23400 ccttcaagga tcctctactg ctgtgtacgt cggtatgatg acgcatgact atgagactat 23460 cgtgacgcgt gaattggata gtattcctac atactctgcc acgggggtag ctgtcagtgt 23520 ggcctccaac cgtgtatcat acttcttcga ctggcatggg ccgagtgtga gtgccactca 23580 ttgagcgagc ccgacttcgt caagtgctga cagattcctg actgattctg cagatgacga 23640 tcgacacagc ctgtagttca tccttagctg ccgtgcatct ggccgtccaa cagcttagaa 23700 cgggcgagag taccatggcg gttgcagccg gtgcgaatct gatattgggc cccatgacct 23760 ttgtaatgga gagcaaattg aacatgctgt cccccaatgg tagatctcga atgtgggatg 23820 ctgctgccga tggatatgcc agaggagtaa gttgacaatg catcaattcc tttcaaaaaa 23880 agcaagatgg cactgacctc ctgtaactgc tttttaggaa ggtgtttgct ctattgtcct 23940 gaaaacgctg agccaggcac tgcgcgacgg ggacagtatc gagtgtgtta tccgagagac 24000 cggtatcaac caagatggcc gaacgacagg tatcacaatg ccaaaccata gcgcacaaga 24060 agccctcatt cgggccacat atgccaaggc tggtcttgat attaccaacc cccaggaacg 24120 ctgccagttc tttgaagccc atggtaagtg gtattccctg gaagtatcag ccttatggaa 24180 gttgcagaaa gtctctctct ccctaacacg aagatcccag gaactggtac accagccggt 24240 gacccacagg aagctgaggc tattgcaaca gccttcttcg gacacaagga tggaacaatc 24300 gacagcgacg gcgagaaaga tgagcttttt gtcggcagca tcaagacagt tctcggtcac 24360 acggaaggca ctgctggtat tgcgggctta atgaaggcat cgtttgctgt acgaaatggc 24420 gtgatcccgc caaacctgct gtttgagaag atcagtcccc gtgtcgctcc gttctatacg 24480 cacttgaaaa ttgcaacgga ggccacagaa tggccgattg ttgcgcccgg gcagcctcgc 24540 agagtcagcg ttaattcatt tggtaaggat tcaactgcac ttcttgagaa cgaaagtgaa 24600 gttagctaaa catataaaca catcaggatt tggtggtaca aatgcccatg ctattatcga 24660 agagtatatg gctcctccac acaagccgac agcagtggta acagaggtga cctcagatgc 24720 agatgcatgc agcttgcccc ttgtgctttc atcgaagtcg cagcgctcca tgaaggcaac 24780 gctagaaaat atgctccaat ttctggaaac gcatgatgac gtggacatgc atgatatcgc 24840 atatacctta cttgagaaac ggtctatctt gcccttccgt cgtgcgattg cagcacacaa 24900 caaggaagta gcccgcgcgg cactggaggc tgccatcgcg gacggtgagg tcgtcaccga 24960 cttccgcacc gacgcgaatg acaaccctcg cgtactaggt gtctttactg gccaaggtgc 25020 acagtggccg ggcatgctga agaagctcat ggtgggtatg ccatttgtga gaggcattct 25080 cgaagagctg gataattcac tgcaaacact gcctgaaaag tatcggccta cgtggacact 25140 gtatgaccag ctcatgcttg aaggggatgc ctcaaacgtc agactcgcca gcttctccca 25200 gcctctatgc tgcgccgtac aaatcgttct ggtccgactt ctcgctgcag ctggtatcga 25260 gttcagtgca attgtcggcc acagttcagg tgagattgcc tgtgcctttg cggcaggatt 25320 catcagtgcc actcaagcta tccgtattgc gcatctgcgt ggagttgtgt ccgcggagca 25380 tgcctcttct ccaagcggcc agacaggcgc tatgctagcg gcaggtatgt cgtacgatga 25440 cgcaaaggaa ctatgcgagc tcgaagcctt tgagggtcgg gtctgcgtcg ccgctagcaa 25500 ttcaccggat agtgtgacct tctccggcga catggatgct atccagcacg ttgaaggtgt 25560 cttggaggat gaatccactt ttgccagaat cttgagagtt gacaaggcct accattcgca 25620 tcacatgcac ccatgcgcag ctccatatgt caaggcattg ctggagtgcg actgtgctgt 25680 tgccgatggc caaggtaacg atagtgttgc ttggttctct gccgtccacg agaccagcaa 25740 gcaaatgact gtacaggatg tgatgcccgc ttattggaaa gacaatctcg tctctccggt 25800 cttgttctcg caggctgtgc agaaagcagt catcactcat cgtctaatcg acgtcgccat 25860 cgaaattggc gcccaccctg ctctcaaggg tccgtgtcta gccaccatca aggatgctct 25920 tgccggtgtg gagctgccgt ataccgggtg cttggcacga aacgttgacg atgtggacgc 25980 ttttgctgga ggtctgggat acatttggga gcgtttcgga gttcggagta tcgacgccga 26040 gggcttcgta caacaagtcc ggcccgatcg tgccgttcaa aacctgtcaa agtcattgcc 26100 cacatactct tgggatcata ctcgtcaata ctgggcagaa tctcgctcca cccgccagca 26160 tcttcgtgga ggtgcgcccc atcttctgct tggaaagctt tcttcttaca gcacagcatc 26220 gaccttccag tggacaaact tcatcaggcc ccgggatctg gaatggctcg acggtcatgc 26280 gctacaaggc cagactgtgt tccccgctgc tgggtacata attatggcca tggaagctgc 26340 catgaaggtg gctggtgagc gtgccgccca agttcagctc ctggaaatct tggacatgag 26400 catcaacaaa gccatcgtgt ttgaagatga aaacacctcc gtggagctga acttgacagc 26460 cgaagtcacc agtgacaatg atgcggatgg ccaagtcacg gtcaaatttg ttattgattc 26520 ctgtctggca aaggagagtg agctttcgac atccgccaaa ggccaaatcg tcataaccct 26580 tggcgaggca tcaccgtcat cgcagctttt gccgccacct gaggaagagt acccccagat 26640 gaacaatgtc aacatcgatt tcttctatcg ggaacttgac ctccttgggt atgactacag 26700 caaagacttc cgtcgtttgc agaccatgag aagggccgac tccaaagcta gcggcacctt 26760 ggctttcctt ccacttaagg atgaattgcg caatgagccc ctcttgctcc acccagcgcc 26820 cctggacatc gcgttccaga ctgtcattgg agcgtattcc tctccaggag atcgtcgcct 26880 acgctcattg tacgtgccta ctcacgttga cagagtgact ctgattccat cgctctgtat 26940 atcggcgggt aattctggtg aaaccgagct tgcgtttgac acaatcaaca cacacgacaa 27000 gggtgatttc ctgagcggcg acatcacggt gtacgattcg accaagacaa cgcttttcca 27060 agttgataac attgtcttta agcctttctc tcccccgact gcttcgaccg accaccgaat 27120 cttcgcaaag tgggtctggg gacccctcac gcccgaaaaa ctgctggagg accctgcgac 27180 gttgatcata gctcgggaca aggaggacat tctgaccatc gagcgaatcg tttacttcta 27240 catcaaatcc ttcctagccc agataacccc cgacgaccgt caaaatgccg acctccattc 27300 ccagaagtac attgaatggt gtgaccaggt tcaggccgat gctcgggctg gccaccatca 27360 gtggtaccag gagtcttggg aggaggacac ttctgttcac attgagcaaa tgtgtgaaag 27420 gtacacccaa agctgttccg tgttttttca ttcttttata ttaacctttt acttgaagca 27480 actcgtccca cccacatgtg cgcctgatcc aaagggtagg caaagaatta atttcaattg 27540 ttcgcgggaa cggggatcct ttggatatca tgaaccgcga tgggttgttc accgagtact 27600 ataccaacaa gctcgccttt ggctcagcaa tacacgtcgt tcaggatctg gttagccaaa 27660 ttgctcatcg ctaccaatcc attgatatcc ttgagatcgg taagtcgaat ctgaaatgta 27720 agtaactagg cagtttgcta atctgtcgtt cgctttttag gcttgggtac aggcatcgcc 27780 acgaagcgcg ttcttgcatc acctcaactt ggtttcaaca gttacacttg cactgacatc 27840 tcggcggatg ttattggcaa ggcccgtgaa caactttccg aattcgacgg tctcatgcag 27900 tttgaggcac tagacatcaa cagaagccca gcagagcaag gattcaagcc tcactcctac 27960 gatctgatta ttgcatccga tgtcctccat gccagctcca acttcgagga aaaattggct 28020 cacataaggt ccttgctcaa gccgggtggt cacttggtta ctttcggggt cacccatcgc 28080 gagcctgctc gcctcgcctt catctctggg cttttcgctg atcgatggac tggagaagac 28140 gaaactcgtg ctttgagtgc ctcggggtcc gttgaccaat gggagcatac cctcaagaga 28200 gttgggttct ctggcgtcga tagtcggaca cttgatcgag aggatgattt gatcccgtct 28260 gtcttcagta cacatgctgt ggatgccacc gttgagcgtt tgtatgatcc actttctgct 28320 ccattgaagg actcataccc gccattagtg gttatcggtg gcgaatcgac aaaaaccgaa 28380 cgcattttga acgacatgaa agctgcccta ccgcatagac acatccactc cgtcaagcgg 28440 ctggaaagtg ttctcgacga cccggccttg cagcctaagt cgacttttgt catcctctcg 28500 gaacttgatg atgaagtgtt ttgcaacctt gaagaggaca agtttgaggc agtcaagtct 28560 cttctcttct acgccggacg catgatgtgg ctgacagaga atgcctggat tgatcatccc 28620 caccaggcca gcaccatcgg aatgttgagg acaatcaagc tcgagaaccc tgacttggga 28680 acgcacgtct tcgatgtcga tactgtggag aacctagaca ccaaattctt cgttgagcaa 28740 cttttgcgct tcgaggagag cgatgatcag cttttggaat caataacatg gactcatgag 28800 cccgaagtgt actggtgcaa gggtcgtgcc tgggtccctc gtttgaagca ggatattgct 28860 aggaacgacc gtatgaactc gtctcgtcgt ccaattttcg gtaactttaa ttcgtccaag 28920 acggccattg cactgaaaga ggcgagggga gcatcctcat cgatgtacta tcttgagtca 28980 accgagacgt gtgattcgtt agaagacgct cgtcatgctg gaaaagcaac tgttcgtgtt 29040 cgctacgctc ttccccaggc aattcgcgtg ggccatctcg gatacttcca tgtcgtgcag 29100 ggcagtattc tggagaatac atgtgaggtg cctgtagtcg ccctggctga gaagaatgga 29160 tctatactgc atgtaccgag aaactacatg catagtctgc ccgataacat ggcggaaggc 29220 gaggatagtt ccttcttgtt gtccacagct gcagccctcc ttgccgaaac aattctctct 29280 agcgctcagt cctttggctc tgatgcatca attctgatta tggagccccc aatcttctgc 29340 gtcaaagcaa ttctggagtc ggccaaaacc tacggtgttc aggttcattt ggcaacaact 29400 ctgtccgacg tcaaaactat tccggctcct tggatccgat tacatgccaa ggaaaccgac 29460 gctcggctga aacacagcct gccgacaaac atgatggcat tctttgactt gtctaccgac 29520 cggactgctg ccgggataac caaccgtttg gccaagttgc taccacccag ttgcttcatg 29580 tacagtggtg actatcttat ccgaagtaca gcttccacat acaaagttag tcatgttgag 29640 gatattccaa tcctcgagca ctctgtggca atggcaaaaa ataccgtctc tgcgtcgact 29700 gtcgacgaca ctgagaaagt tattacagcc acacaaattc tcttgcctgg tcagctctct 29760 gtcaaccaca atgaccaacg cttcaatctg gccaccgtca tcgactggaa ggaaaatgag 29820 gtgtccgcta ggatttgccc catcgactct ggtaacttat tttccaacaa gaagacgtat 29880 ttgcttgttg gtcttaccgg ggaccttggt cgctctctct gtcgctggat gatcttgcat 29940 ggcgcccgcc atgttgtgct cactagccgg aaccctcgac ttgatcccaa atggatcgcc 30000 aacatggagg cacttggtgg tgacatcacc gttctgtcaa tgtaagttga ttgatatcac 30060 atcacacctt gctaccacat cctcgtttac ttatccaatt actttcttta gggatgttgc 30120 caatgaggat tcagtcgatg ctggccttgg caagcttgtc gatatgaagt tgccacctgt 30180 tgccggcatc gcgttcgggc ctttggtgct gcaggatgtc atgctgaaga acatggacca 30240 ccagatgatg gacatggtgt tgaagcccaa ggtacaagga gcacgcattc ttcatgaacg 30300 gttctccgaa cagacgggca gcaaggcgct cgacttcttc atcatgtttt cgtccattgt 30360 tgcagttatt ggcaatcctg gccagtccaa ctatggcgct gcgaatgcct acctacaggc 30420 tctggcccag caacggtgcg ccagaggatt ggcggtattt tctacccctg aattatcatg 30480 catcgacgtc aagttactaa cgcacaacca cagggatcaa ccatcgatat tggtgccgtt 30540 tacggtgtag ggtttgtcac gagggccgag atggaggagg actttgatgc tatccgtttc 30600 atgtttgact cagttgaaga gcatgagctg cacacgcttt tcgccgaagc ggtcgtgtct 30660 gaccagcgtg cccggcagca accacagcgc aagacggtca ttgacatggc ggaccttgag 30720 cttaccacgg gtatcccaga tcttgaccct gcgcttcaag atcgaattat ttacttcaac 30780 gaccctcgtt tcggaaactt caaaattccc ggtcaacgcg gagacggtgg cgacaatgga 30840 tcagggtcta aaggctccat tgccgaccag ctcaaacaag caacaacttt agaccaagtt 30900 cggcaaatcg tgattggtaa gttatctctc atgcgtttcc tgatatcgag ttcaaactaa 30960 caaagttgca gatggtctat ctgagaaact ccgtgttacc ctccaagttt cggacgggga 31020 gagcgtggac ccaaccattc ctctcattga tcaaggtgtc gactccttgg gtgcagtgac 31080 tgtcggctca tggttctcaa agcaactcta ccttgacctc ccactcttga gggtacttgg 31140 cggtgcttct gtcgctgatc ttgccgacga cgcggccacc cgactcccag ctacatccat 31200 tccgctgctg ttgcaaattg gtgattccac gggaacctcg gacagcgggg cttctccgac 31260 accaacagac agccatgatg aagcaagctc tgctaccagc acagatgcgt cgtcagccga 31320 agaggatgaa gagcaagagg acgataatga gcagggaggc cgtaagattc ttcgtcgcga 31380 gaggttgtcc cttggccagg agtattcctg gaggcagcaa caaatggtaa aagatcatac 31440 catcttcaac aacactattg gcatgttcat gaagggtacc attgacctcg accggttgag 31500 gcgggctctg aaagcctcat tgcgccgtca cgagatcttc cgtacgtgct ttgttactgg 31560 cgatgactat agcagcgatt taaatggtcc cgtccaagtg gttctcaaga acccggagaa 31620 cagagtgcac tttgttcagg tgaacaacgc tgcggaggca gaggaagagt accggaaact 31680 cgagaagaca aactatagca tctccacagg tgacactctc agactcgttg atttctactg 31740 gggcacagat gaccacctgt tggtaatcgg ctaccacaga ttagttggtg atggctcaac 31800 aacagaaaac ctgttcaatg agatcgggca gatttacagc ggggtgaaaa tgcagcgacc 31860 atcgacccaa ttctctgatc tagccgtcca acagcgggaa aacctggaaa atgggcgaat 31920 gggggacgat atcgcgttct ggaagtccat gcatagcaaa gtctcgtcat ctgcgccaac 31980 cgtgcttccc atcatgaatc tgatcaatga ccctgctgcc aattcagagc agcagcaaat 32040 acagccattc acgtggcagc agtatgaagc aattgctcgt ttagatccca tggtcgcctt 32100 ccgaatcaaa gagcggagcc gcaagcacaa ggcaaccccc atgcagttct acctggccgc 32160 ctaccacgtt ttgttggcgc gtcttaccgg cagcaaagac ataaccatcg gcctcgccga 32220 aaccaaccga tccaccatgg aagaaatttc ggcgatgggc tttttcgcta acgtgcttcc 32280 cctgcgcttt gatgagttcg tcggcagcaa gacattcggc gagcaccttg tagccaccaa 32340 ggacagtgtg cgtgaggcca tgcaacacgc gcgggtgccg tatggcgtca tcctcgactg 32400 tctaggcctg aatctcccta cctcaggcga ggaacccaag actcagacac acgccccctt 32460 gttccaggct gtctttgatt acaagcaggg tcaagcggag agtggctcaa ttggcaatgc 32520 caaaatgacg agtgttctcg cttcccgtga gcgcactcct tatgacatcg ttctcgagat 32580 gtgggatgac cctaccaagg acccactcat tcatgtcaaa cttcagagct cgctgtatgg 32640 ccctgagcac gctcaggcct ttgtagacca cttttcttca atcctcacta tgttctcgat 32700 gaacccggct ctgaagttgg cctagatcgt tcagcgccgt gaattcagat gtgtggtttg 32760 agtgttgttc atgataaaga tggattagaa attggcaata gagcagatgg caaatctatc 32820 ctgaattcgg cgtcaattga cacacgcata ttcatctaca aatagcgaat tcgtcttgta 32880 tctttgtcaa aattacttct accttcgttg ctcttcttta ttgcagcaat cgtaacatca 32940 agttagatag cgcggttcag agtaccgtaa cggtgataaa tatacctcgg tagcgcgttt 33000 cgaaagactc tgtgaggaag gtgaaacctc caaggcttgg aattgatttc aatccatcct 33060 gtatataaat tcgacgccat tgcaaatagt tccatagtta ctggtttagt gccttgttgt 33120 ggtgatcgag tggttttaga tgtctgtcat gcctgttcag aacgagcctt ccatgatcta 33180 tccaaaatat gttcacgaaa tatttatgag atggtcgcga ccactataac taaatcaccc 33240 ttggaaggtg agcattcaaa ccgtgtaaga ttagaactat tcaaatttgt tcagtaaaaa 33300 tgtggtatgg actaggcatg agagccagag ccttgctata taccctgttg tctcacctag 33360 acaaatgaac ctgacatctt gaccttttga tatagctgtt ggaagcgctt gaccgtctcc 33420 tggacatcac tcggtctgtt gggaaaatta tgctttccct gaaactcgag tacatctgca 33480 ttctgaggca ggtaatgtgt ttcaaccatc tgtctcgacc cttggagagc aaaatcttga 33540 cgaccgtgaa gatgcagtgt cggcacgttg attattagct tgtcgtcgtc gtcttgcgcc 33600 tcggctctca tgtaatctct ggcttcatcg ctatagaaac agcaaatcaa aacagcaatg 33660 ctcattttcg gaaaccatgg cagttttccc atttgctgtt gatggagcag caaagtggcg 33720 accaatgcgc cctcagagaa ggccactatg ccgacaatgg gtgcctgtgg gttagttata 33780 gaccaatctt ggacggtctt ttgcacaggc ccgatcacag ccgctactct atcgcccacc 33840 gtgggggttg tcgtgtttgt aacggcgtca tgatgctttt ggaaccaggt gtagtatgga 33900 cccatgcctt ggaagacagg aagcacgccg ggtccggggc tggagctaaa cggcgcggtc 33960 gcatatacga attcaaactc gtttttcaac gccacgcgca gtttagagat ctggacgcgg 34020 aatatggctg ctgagcaccc ggcaccgtgg atgcataaga gagcttttct cggtttgcct 34080 ggcgagaaat ctgtaatcct cgctggactc attttctctt gtggtgtgag ctgtgacttc 34140 gtctgttctg gggaatttgt tagtcattac tgacaaggaa ataacaacga cgtagtattg 34200 atc 34203 <210> 3 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: A mixed primer which has a DNA sequence decuced from the amino acid sequence of PKS of Aspergillus flavus. <220> <221> modified base <222> (6) <223> i <220> <221> modified base <222> (9) <223> i <400> 3 gayacngcnt gyasttc 17 <210> 4 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: A mixed primer which has a DNA sequence deduced from the amino acid sequence of PKS of Aspergillus flavus. <220> <221> modified base <222> (3) <223> i <220> <221> modified base <222> (6) <223> i <220> <221> modified base <222> (8) <223> i <220> <221> modified base <222> (15) <223> i <400> 4 tcnccnknrc wgtgncc 17 <210> 5 <211> 19 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 5 gcatgttcaa tttgctctc 19 <210> 6 <211> 19 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 6 ctggatcaga cttttctgc 19 <210> 7 <211> 18 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 7 gtcgcagtag catgggcc 18 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 8 gtcagagtga tgctcttctc 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 9 gttgagagga ttgtgagggc 20 <210> 10 <211> 19 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 10 ttgcttgtgt tggattgtc 19 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 11 catggtactc tcgcccgttc 20 <210> 12 <211> 19 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 12 ctccccagta cgtaagctc 19 <210> 13 <211> 21 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 13 ccataatgag tgtgactgtt c 21 <210> 14 <211> 19 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 14 gaacatctgc atccccgtc 19 <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 15 ggaaggcaaa gaaagtgtac 20 <210> 16 <211> 21 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 16 agattcattg ctgttggcat c 21 <210> 17 <211> 722 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 17 ggccacgcgt cgactagtac gggggggggg gggggggggg gcttgttcgc tcagagattc 60 aactctgcga ttctgtttaa tcccaatcct atcgcccaaa aacaggatca gcagttatgg 120 atcaagccaa ctatccaaac gagccaattg tggtagtggg aagcggttgt cggtttccag 180 gtggtgtcaa cacaccatca aaactttggg agctgctcaa agagccccgg gatgtacaga 240 ccaagatccc taaggagaga tttgacgtcg atacatttta cagccccgat ggcactcacc 300 ccgggcgcac gaacgcaccc tttgcatact tgctgcagga ggatctacgc ggttttgatg 360 cctctttctt caacatccaa gctggagagg ccgaaacgat tgacccacag caaaggctgc 420 tgctggagac ggtctatgaa gctgtatcca acgcaggcct acggatccaa ggccttcaag 480 gatcctctac tgctgtgtac gtcggtatga tgacgcatga ctatgagact atcgtgacgc 540 gtgaattgga tagtattcct acatactctg ccacgggggt agctgtcagt gtggcctcca 600 accgtgtatc atacttcttc gactggcatg ggccgagtat gacgatcgac acagcctgta 660 gttcatcctt agctgccgtg catctggccg tccaacagct tagaacgggc gagagtacca 720 tg 722 <210> 18 <211> 760 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 18 ggccacgcgt cgactagtac gggggggggg gggggggggg gactatcaac ggttttatca 60 ccagggcgac tgatatatca gtcaatgaaa caacgttgga atgaacaata cccccgccgt 120 aaccgcaacc gcaaccgcaa ccgcaaccgc aaccgcaatg gcaggctcgg cttgctctaa 180 cacatccacg cccattgcca tagttggaat gggatgtcga tttgctggag atgcaacgag 240 tccacagaag ctttgggaaa tggttgaaag aggaggcagt gcctggtcta aggtcccctc 300 ctcgcgattc aatgtgagag gagtatacca cccgaatggc gaaagggtcg ggtccaccca 360 cgtaaagggt ggacacttca tcgacgagga tcctgcttta tttgacgccg cgttcttcaa 420 catgaccaca gaggtcgcca gctgcatgga tccgcagtat cggcttatgc ttgaggtggt 480 ctacgaatcg ctggagagtg ccggtatcac catcgatggt atggcaggct ctaatacgtc 540 ggtgtttggg ggtgtcatgt accacgacta tcaggattcg ctcaatcgtg accccgagac 600 agttccgcgt tatttcataa ctggcaactc aggaacaatg ctttcgaacc ggatatcaca 660 cttctacgac ttacgtggtc ccagcgtgac ggttgacacg gcctgttcga cgacattgac 720 cgcactgcac ttggcgtgcc agagcttacg tactggggag 760 <210> 19 <211> 773 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 19 ggccacgcgt cgactagtac gggggggggg ggtttttttt ttttcaaggt tgactggaag 60 agtgctctcg gccacaaaat cccagaagca ttagtgctgt tattcgatta taaaccgtcg 120 cagcgctctc attcttcgct ctttcttctt ttccactggt gtgcataggt cctatctgtc 180 tcacgcaatg ctcggccagg ttcttctgac cgtcgaatcg taccaatggg tatcgacccc 240 tcaagccctt gtggcggtcg cagtgcttct tagtctcatc gcctaccgtt tgcgggggcg 300 ccagtccgaa ctgcaagtct ataatcccaa aaaatggtgg gagttgacga ccatgagggc 360 taggcaggac ttcgatacgt atggtccgag ctggatcgaa gcttggttct cgaaaaacga 420 caagcccctg cgcttcattg ttgattccgg ctattgcacc atcctcccat cgtccatggc 480 cgacgagttt cggaaaatca aagatatgtg catgtacaag tttttggcgg atgactttca 540 ctctcatctc cctggattcg acgggttcaa ggaaatctgc caggatgcac atcttgtcaa 600 caaagttgtt ttgaaccagt tacaaaccca agcccccaag tacacaaagc cattggctac 660 cttggccgac gctactattg ccaagttgtt cggtaaaagc gaggagtggc aaaccgcacc 720 tgtctattcc aatggattgg accttgtcac acgaacagtc acactcatta tgg 773 <210> 20 <211> 527 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 20 ggccacgcgt cgactagtac gggggggggg gtacctagga actgttcagt tgtccctccc 60 aaccccttgg gccgaacaac cttcctccaa tctacgacgg cagattatac ctaggcgcct 120 aaccgattag gttgctcatt cgattttgga gagactacct agctataggt accactccaa 180 gctgtagcac agacctttca gcatggtcgc ttcgttgcta ccctctcgct ttcgcggtag 240 ggaatcaatg aatcagcagc accctctacg ctcgggaaat cgggcattga cctccacact 300 ccaatttcta tccaaaacgg cgtgtctaca cccgatccat accgtttgca ccatagctat 360 tctagctagt accacatacg ttggactact caaagacagc ttcttccatg gccccgcaaa 420 cgttgataaa gcagaatggg gctctttggt cgaaggaagt cgaagcttga tcaccggccc 480 acagaatggc tggaagtggc agagcttcga cggggatgca gatgttc 527 <210> 21 <211> 522 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 21 ggccacgcgt cgactagtac gggggggggg gggggggggg ggatccatca atctgacttc 60 aggctagcgg accttaacga aacaacgaga gcgagatcat tcatacacca aaacacaggt 120 actatagaag cgccgcgcag tagagattca caccgcccct tgaagcaaaa gtcggaagga 180 attgcgcgat gtcagaacct ctacccccta aagaagggga accaaggcca cagaaggaag 240 aaagtcaaaa tgacacgctc gaagcgactg agtccaagtc ccagcacatc acaggcctca 300 agctcgggct ggtggttgct tcagttactt tcgtagcatt tttgatgctc cttgatatgt 360 ccattatcgt cacggcaatc ccacatatca caagcgagtt ccactctctg aacgatgtag 420 ggtggtacgg cagtgcttat cttctggcta actgtgctct ccagcccctg gccggtaaat 480 tgtatacact cttgggcttg aagtacactt tctttgcctt cc 522 <210> 22 <211> 541 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 22 ggccacgcgt cgactagtac gggggggggg ggctcacctc acattatttg atcttaatcc 60 aataattatg tccctgccgc atgcaacgat tccgacgaac ctacgccgtc gcgcgtttcg 120 acgctcatgt gaccggtgtc atgcacaaaa gctcaaatgt accggtagca atgccaattt 180 agtccgtgct cagtgtcaac gttgtcagca agccggatta aggtgtgtgt acagcgaaag 240 gctacccaag cgcaatttac ataaagaagc cgcagctgga actacaagag ccacagaaac 300 ctcacaaccg atgaccgcga catcttctac ggtcttctca tcattggcag agactcctcc 360 accttactgc tcaccaccta cgcatattgg cacctcggca ctcaaggaaa cattatcaga 420 accatcagcg gcaaccctgc aattctatga tacatcaatc aactttgatg atcccgagtc 480 gtttcccggc ggctggcctc agccaaatac atttcgcgac gatgccaaca gcaatgaatc 540 t 541 <210> 23 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 23 atcataccat cttcaacaac 20 <210> 24 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 24 gctagaatag gttacaagcc 20 <210> 25 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 25 acattgccag gcacccagac 20 <210> 26 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 26 caacgcccaa gctgccaatc 20 <210> 27 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 27 gtcttttcct actatctacc 20 <210> 28 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 28 ctttcccagc tgctactatc 20 <210> 29 <211> 1524 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 29 aactggaaga attcgcggcc gcaggaattt tttttttttt tttttttcaa cgaaggtaga 60 agtaattttg acaaagatac aagacgaatt cgctatttgt agatgaatat gcgtgtgtca 120 attgaagccg aattcaggat agatttgcca tctgctctat tgccaatttc taatccatct 180 ttatcatgaa caacactcaa accacacatc tgaattcacg gcgctgaacg atctaggcca 240 acttcagagc cgggttcatc gagaacatag tgaggattga agaaaagtgg tctacaaagg 300 cctgagcgtg ctcagggcca tacagcgagc tctgaagttt gacatgaatg agtgggtcct 360 tggtagggtc atcccacatc tcgagaacga tgtcataagg agtgcgctca cgggaagcga 420 gaacactcgt cattttggca ttgccaattg agccactctc cgcttgaccc tgcttgtaat 480 caaagacagc ctggaacaag ggggcgtgtg tctgagtctt gggttcctcg cctgaggtag 540 ggagattcag gcctagacag tcgaggatga cgccatacgg cacccgcgcg tgttgcatgg 600 cctcacgcac actgtccttg gtggctacaa ggtgctcgcc gaatgtcttg ctgccgacga 660 actcatcaaa gcgcagggga agcacgttag cgaaaaagcc catcgccgaa atttcttcca 720 tggtggatcg gttggtttcg gcgaggccga tggttatgtc tttgctgccg gtaagacgcg 780 ccaacaaaac gtggtaggcg gccaggtaga actgcatggg ggttgccttg tgcttgcggc 840 tccgctcttt gattcggaag gcgaccatgg gatctaaacg agcaattgct tcatactgct 900 gccacgtgaa tggctgtatt tgctgctgct ctgaattggc agcagggtca ttgatcagat 960 tcatgatggg aagcacggtt ggcgcagatg acgagacttt gctatgcatg gacttccaga 1020 acgcgatatc gtcccccatt cgcccatttt ccaggttttc ccgctgttgg acggctagat 1080 cagagaattg ggtcgatggt cgctgcattt tcaccccgct gtaaatctgc ccgatctcat 1140 tgaacaggtt ttctgttgtt gagccatcac caactaatct gtggtagccg attaccaaca 1200 ggtggtcatc tgtgccccag tagaaatcaa cgagtctgag agtgtcacct gtggagatgc 1260 tatagtttgt cttctcgagt ttccggtact cttcctctgc ctccgcagcg ttgttcacct 1320 gaacaaagtg cactctgttc tccgggttct tgagaaccac ttggacggga ccatttaaat 1380 cgctgctata gtcatcgcca gtaacaaagc acgtacggaa gatctcgtga cggcgcaatg 1440 aggctttcag agcccgcctc aaccggtcga ggtcaatggt acccttcatg aacatgccaa 1500 tagtgttgtt gaagatggta tgat 1524 <210> 30 <211> 784 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 30 aactggaaga attcgcggcc gcaggaattt tttttttttt tttttttttc tttgttgctt 60 ctcagggcca ctgtaatggt atttcaggta tctctattta ctgctatcca gaagtcaggc 120 attaaatagt caggctcagc ccaggctcga ttcagattgg attcaggctt cagaccatgg 180 ccgctatgct ccttcgtact atacctccgt cgagctatac ccgcttggcc agacaaaagg 240 cttcactgaa cccttcaact taactgcatt tcgccacaac taactcgacg aggccggcga 300 tggtgttacc attcatgagc tcaaagatcg acacatcaac atggatttca gatgtgatcc 360 agtttcgaag ttcaatggcg acgagtgagt ctacgccgac acctgccagg tttttggacg 420 aggacatgtc gtcttctgcc agaccaaaca ttcgcatcag cttttccgtc attgctttga 480 ggacgataga aatggcctcg tcgtgagagg tgaccctgct tagttgggcc cgcacgccat 540 ctggtccttt tttatgcgaa gagacaaagg attggtctgc atgaaggact tggcggtatt 600 taagtcccac aaaccgctgt tcctgtatcc agtttgcctc ggtccagtga gcacccgggg 660 atgtgttgat tcctgtaacc acagctgcgg gaggtgatgg aaattgaggg gaagaacaca 720 ggattgcctt ctccaacaca tccatgacgt ccttttcatg cataggcttg taacctattc 780 tagc 784 <210> 31 <211> 764 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 31 aactggaaga attcgcggcc gcaggaattt tttttttttt tttttttttc gaataaaatg 60 cgttttattt tactaaccta ctcgactaat acagcaccta gtttctctgg gacggaaacc 120 attggaataa gcctggggac ggatgcatat ttgttttagt ttgcgtgtta tatcttagca 180 ccggtcatga gggagcggga tgtcctcgtt gcgccggcgt accatgagct ttgtggttgg 240 atgcatacga acgctaaaag cgtgacggta gtatttgtca tcgtctcctg gtacaggctt 300 cacatcatac tgaatcagta tatgagcgag gagaatcttg atttccttcg aggcgaagaa 360 ccgcccggga caagcgcgtg ggttccagcc gaagccgatg tgatcaccgt tggtattctc 420 caattgagcg gtgaaggcct tgtctggatc ctcgcgcatg cgcataaatc ggtagggatc 480 ataattttcg gggttttccc acacatcagg gttgttcatg cggtctgcag ccacagcggc 540 caactcgccc ttgggaatga agaggccatt ggatagagtg atgtctctga gagcggtact 600 gcgcatagtg gcgcactcga ccggcttgat tcgctgcgtc tctttcatgc agctgtcgag 660 gagcttcagc ttgaacagag aggcaggcgt ccagccccct tctccgatta cagtgcggat 720 ctcttggcgg agaggctgaa taaggtctgg gtgcctggca atgt 764 <210> 32 <211> 765 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 32 aactggaaga attcgcggcc gcaggaattt tttttttttt ttttttctgg aaaaggacca 60 tctctttata tattcttctt ccctactact tgcatcgtaa atttcaacaa catataaaca 120 tgagataccc tttctggccg ttcactctac cacctgcctg tctcattgca ttgtgctttt 180 gaaaattatg acaataacaa ccaatgagaa aaaatatgat cctcctgcaa tgaatccact 240 ggagggggta cggagcttgg aatgctccta agattccgac ctaatcagcg tcgagcccga 300 tcagtagctg cagcactcgg cctcagtgca ttgttaggaa cagggactgt cctggttccg 360 cctgacgggg agacacttcg agaaggggct gaagatgccg gggcagaacg gttgtgcgcc 420 atgtgcgcct tgaccaggtg accggcggct agggcagcac atagcgagag ctccccagcc 480 aaaacagcgc ttccgatgat gcgcgcaagt tgacgtgcat tctcaccggg agtggtcggg 540 tgtgatccgc ggacaccaag catgtcaagc attgcgccct ggggctccag aatcgtacca 600 ccgcccaacg ttccaacctc aatagacggc atggagacag agatttgaag cgatccgcga 660 agattgttca tgagagtgat gcagttagcg ctctccacaa cttgcgccgg atcctgacct 720 gtggcaatga aaatggctgc cgcaagattg gcagcttggg cgttg 765 <210> 33 <211> 802 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 33 aactggaaga attcgcggcc gcaggaattt tttttttttt tttttataga atctttgaaa 60 tcgacattaa ttaagtatgt ggagattctt tgtggaggca cggtaatgtg tctatctagc 120 aacgcggtca agcatcagtc tcaggcacag cccgggtgtc gtttttggtt gcaatcttcc 180 gccatcccat tccaaaggca aacacaaacg tgcacgccgt agctcccact gctaagtaaa 240 aagtatgatc aacggcgaga ctgtaagctt ttacaacccc tggaaggtta ttcttgctga 300 ccacatctct gaagccagtc gcccctgctg ccgtcacggc ctgcgtgtcg acagtgggcg 360 catacttgct caggccagtt ctcaaaccgg acccaaagac aaggttagca aagtccagga 420 agagcgatcc tccaaacgtc tgtccaaaca cggcgagaga aattccgagg gcaccttgtt 480 cgggcgaaag cgtgctttgg atggcgatga taggcgtttg catgccacaa ccacgaccga 540 agcccgcgat aaattggtac atgacccatt tcacagttga tgtatggggc tggaaggtgg 600 ataccagacc tgcgcctatg gcgacgagaa cagcgctgcc tagggcccaa ggcaaatagt 660 atcctgtctt tccaattgcg aagccagaaa ccatagccat aatgacttgt ccaagaattc 720 caggcaacat gtacacacca ctcagtgtgg gagaaacatc cttcacagcc tggaagtaga 780 tcggtagata gtaggaaaag ac 802 <210> 34 <211> 562 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 34 aactggaaga attcgcggcc gcaggaattt tttttttttt ttttttttac taagcaatat 60 tgtgtttctt cgctaatgcg aatatttcct tatagcaacg tcgcaacaca tttatcgtct 120 tccctgaggc ctttgttgac ttgggctctt cgtctccggc ttcgtcactc caaagcacag 180 ataggagacg agaggccggc gttatggttt tattttcagc gccaaggatt tgccacgatg 240 tgcttggcat atctgatagg actagacgaa tagatgccgc agccccgtgc tcctgtgcta 300 tccccaaagc agtctcaatc ccactcaata gtcgaaggct tacacgcaat gtcgtgcatg 360 cagaagataa ggcgtgcatg aatgggtcga gatgtgaaat gagctcgccg atatgaagat 420 tagagtgaaa cgagggaagt gcttcggctc ttccattgtc atttctagtg gttgagccag 480 accagtacca atccattcgt gtgctttgct tttgtccaca aggttgggct ttcatcacct 540 cggatagtag cagctgggaa ag 562 <210> 35 <211> 26 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 35 gttaacatgt cagaacctct accccc 26 <210> 36 <211> 27 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 36 aatatttcaa gcatcagtct caggcac 27 <210> 37 <211> 1662 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <220> <221> CDS <222> (1)..(1662) <400> 37 atg tca gaa cct cta ccc cct aaa gaa ggg gaa cca agg cca cag aag 48 Met Ser Glu Pro Leu Pro Pro Lys Glu Gly Glu Pro Arg Pro Gln Lys 1 5 10 15 gaa gaa agt caa aat gac acg ctc gaa gcg act gag tcc aag tcc cag 96 Glu Glu Ser Gln Asn Asp Thr Leu Glu Ala Thr Glu Ser Lys Ser Gln 20 25 30 cac atc aca ggc ctc aag ctc ggg ctg gtg gtt gct tca gtt act ttc 144 His Ile Thr Gly Leu Lys Leu Gly Leu Val Val Ala Ser Val Thr Phe 35 40 45 gta gca ttt ttg atg ctc ctt gat atg tcc att atc gtc acg gca atc 192 Val Ala Phe Leu Met Leu Leu Asp Met Ser Ile Ile Val Thr Ala Ile 50 55 60 cca cat atc aca agc gag ttc cac tct ctg aac gat gta ggg tgg tac 240 Pro His Ile Thr Ser Glu Phe His Ser Leu Asn Asp Val Gly Trp Tyr 65 70 75 80 ggc agt gct tat ctt ctg gct aac tgt gct ctc cag ccc ctg gcc ggt 288 Gly Ser Ala Tyr Leu Leu Ala Asn Cys Ala Leu Gln Pro Leu Ala Gly 85 90 95 aaa ttg tat aca ctc ttg ggc ttg aag tac act ttc ttt gcc ttc ctc 336 Lys Leu Tyr Thr Leu Leu Gly Leu Lys Tyr Thr Phe Phe Ala Phe Leu 100 105 110 tgt att ttt gaa cta ggc tcg gtg cta tgc ggt gcc gca aga tct tcc 384 Cys Ile Phe Glu Leu Gly Ser Val Leu Cys Gly Ala Ala Arg Ser Ser 115 120 125 acc atg ttg att gtt ggg cgg gcc gtt gct gga atg gga ggc tca ggt 432 Thr Met Leu Ile Val Gly Arg Ala Val Ala Gly Met Gly Gly Ser Gly 130 135 140 ctt gtc aac gga gcc ctc aca atc ctc tca aca gct gct cct aag cac 480 Leu Val Asn Gly Ala Leu Thr Ile Leu Ser Thr Ala Ala Pro Lys His 145 150 155 160 aag caa cca gtt ttg att gga gtg atg atg ggt ctt agt cag att gcc 528 Lys Gln Pro Val Leu Ile Gly Val Met Met Gly Leu Ser Gln Ile Ala 165 170 175 att gtc tgt gga cca ctg ctc gga ggt gct ttc act caa cac gcc act 576 Ile Val Cys Gly Pro Leu Leu Gly Gly Ala Phe Thr Gln His Ala Thr 180 185 190 tgg cga tgg tgc ttt tat atc aat ctc ccc atc ggc gct gtc gct gca 624 Trp Arg Trp Cys Phe Tyr Ile Asn Leu Pro Ile Gly Ala Val Ala Ala 195 200 205 ttc ctc ctt ctc gtc atc acc ata ccc gac cga att tca tcc acg gac 672 Phe Leu Leu Leu Val Ile Thr Ile Pro Asp Arg Ile Ser Ser Thr Asp 210 215 220 agc gaa ctc tcg acc gac aaa cca atg gcc aac ata aaa tcc aca ctt 720 Ser Glu Leu Ser Thr Asp Lys Pro Met Ala Asn Ile Lys Ser Thr Leu 225 230 235 240 cgc aaa ctg gac ctt gta ggc ttt gtg gtc ttt gca gcc ttc gca acc 768 Arg Lys Leu Asp Leu Val Gly Phe Val Val Phe Ala Ala Phe Ala Thr 245 250 255 atg att tcc ctc gca cta gaa tgg gga ggg tcg acc tac acc tgg cga 816 Met Ile Ser Leu Ala Leu Glu Trp Gly Gly Ser Thr Tyr Thr Trp Arg 260 265 270 agt tcc gtc atc atc ggc ctg ttc tgt ggc gga ggg ttt gct ctg att 864 Ser Ser Val Ile Ile Gly Leu Phe Cys Gly Gly Gly Phe Ala Leu Ile 275 280 285 gcg ttc gtg cta tgg gag cgt cat gtt ggc gat gct gtt gcc atg att 912 Ala Phe Val Leu Trp Glu Arg His Val Gly Asp Ala Val Ala Met Ile 290 295 300 cct ggc tca gtg gct ggt aaa cga caa gtg tgg tgc tct tgt tta ttt 960 Pro Gly Ser Val Ala Gly Lys Arg Gln Val Trp Cys Ser Cys Leu Phe 305 310 315 320 atg ggc ttt ttc tct ggc tcc ttg ctt gtc ttt tcc tac tat cta ccg 1008 Met Gly Phe Phe Ser Gly Ser Leu Leu Val Phe Ser Tyr Tyr Leu Pro 325 330 335 atc tac ttc cag gct gtg aag gat gtt tct ccc aca ctg agt ggt gtg 1056 Ile Tyr Phe Gln Ala Val Lys Asp Val Ser Pro Thr Leu Ser Gly Val 340 345 350 tac atg ttg cct gga att ctt gga caa gtc att atg gct atg gtt tct 1104 Tyr Met Leu Pro Gly Ile Leu Gly Gln Val Ile Met Ala Met Val Ser 355 360 365 ggc ttc gca att gga aag aca gga tac tat ttg cct tgg gcc cta ggc 1152 Gly Phe Ala Ile Gly Lys Thr Gly Tyr Tyr Leu Pro Trp Ala Leu Gly 370 375 380 agc gct gtt ctc gtc gcc ata ggc gca ggt ctg gta tcc acc ttc cag 1200 Ser Ala Val Leu Val Ala Ile Gly Ala Gly Leu Val Ser Thr Phe Gln 385 390 395 400 ccc cat aca tca act gtg aaa tgg gtc atg tac caa ttt atc gcg ggc 1248 Pro His Thr Ser Thr Val Lys Trp Val Met Tyr Gln Phe Ile Ala Gly 405 410 415 ttc ggt cgt ggt tgt ggc atg caa acg cct atc atc gcc atc caa agc 1296 Phe Gly Arg Gly Cys Gly Met Gln Thr Pro Ile Ile Ala Ile Gln Ser 420 425 430 acg ctt tcg ccc gaa caa ggt gcc ctc gga att tct ctc gcc gtg ttt 1344 Thr Leu Ser Pro Glu Gln Gly Ala Leu Gly Ile Ser Leu Ala Val Phe 435 440 445 gga cag acg ttt gga gga tcg ctc ttc ctg gac ttt gct aac ctt gtc 1392 Gly Gln Thr Phe Gly Gly Ser Leu Phe Leu Asp Phe Ala Asn Leu Val 450 455 460 ttt ggg tcc ggt ttg aga act ggc ctg agc aag tat gcg ccc act gtc 1440 Phe Gly Ser Gly Leu Arg Thr Gly Leu Ser Lys Tyr Ala Pro Thr Val 465 470 475 480 gac acg cag gcc gtg acg gca gca ggg gcg act ggc ttc aga gat gtg 1488 Asp Thr Gln Ala Val Thr Ala Ala Gly Ala Thr Gly Phe Arg Asp Val 485 490 495 gtc agc aag aat aac ctt cca ggg gtt gta aaa gct tac agt ctc gcc 1536 Val Ser Lys Asn Asn Leu Pro Gly Val Val Lys Ala Tyr Ser Leu Ala 500 505 510 gtt gat cat act ttt tac tta gca gtg gga gct acg gcg tgc acg ttt 1584 Val Asp His Thr Phe Tyr Leu Ala Val Gly Ala Thr Ala Cys Thr Phe 515 520 525 gtg ttt gcc ttt gga atg gga tgg cgg aag att gca acc aaa aac gac 1632 Val Phe Ala Phe Gly Met Gly Trp Arg Lys Ile Ala Thr Lys Asn Asp 530 535 540 acc cgg gct gtg cct gag act gat gct tga 1662 Thr Arg Ala Val Pro Glu Thr Asp Ala 545 550 <210> 38 <211> 553 <212> PRT <213> Penicillium citrinum <400> 38 Met Ser Glu Pro Leu Pro Pro Lys Glu Gly Glu Pro Arg Pro Gln Lys 1 5 10 15 Glu Glu Ser Gln Asn Asp Thr Leu Glu Ala Thr Glu Ser Lys Ser Gln 20 25 30 His Ile Thr Gly Leu Lys Leu Gly Leu Val Val Ala Ser Val Thr Phe 35 40 45 Val Ala Phe Leu Met Leu Leu Asp Met Ser Ile Ile Val Thr Ala Ile 50 55 60 Pro His Ile Thr Ser Glu Phe His Ser Leu Asn Asp Val Gly Trp Tyr 65 70 75 80 Gly Ser Ala Tyr Leu Leu Ala Asn Cys Ala Leu Gln Pro Leu Ala Gly 85 90 95 Lys Leu Tyr Thr Leu Leu Gly Leu Lys Tyr Thr Phe Phe Ala Phe Leu 100 105 110 Cys Ile Phe Glu Leu Gly Ser Val Leu Cys Gly Ala Ala Arg Ser Ser 115 120 125 Thr Met Leu Ile Val Gly Arg Ala Val Ala Gly Met Gly Gly Ser Gly 130 135 140 Leu Val Asn Gly Ala Leu Thr Ile Leu Ser Thr Ala Ala Pro Lys His 145 150 155 160 Lys Gln Pro Val Leu Ile Gly Val Met Met Gly Leu Ser Gln Ile Ala 165 170 175 Ile Val Cys Gly Pro Leu Leu Gly Gly Ala Phe Thr Gln His Ala Thr 180 185 190 Trp Arg Trp Cys Phe Tyr Ile Asn Leu Pro Ile Gly Ala Val Ala Ala 195 200 205 Phe Leu Leu Leu Val Ile Thr Ile Pro Asp Arg Ile Ser Ser Thr Asp 210 215 220 Ser Glu Leu Ser Thr Asp Lys Pro Met Ala Asn Ile Lys Ser Thr Leu 225 230 235 240 Arg Lys Leu Asp Leu Val Gly Phe Val Val Phe Ala Ala Phe Ala Thr 245 250 255 Met Ile Ser Leu Ala Leu Glu Trp Gly Gly Ser Thr Tyr Thr Trp Arg 260 265 270 Ser Ser Val Ile Ile Gly Leu Phe Cys Gly Gly Gly Phe Ala Leu Ile 275 280 285 Ala Phe Val Leu Trp Glu Arg His Val Gly Asp Ala Val Ala Met Ile 290 295 300 Pro Gly Ser Val Ala Gly Lys Arg Gln Val Trp Cys Ser Cys Leu Phe 305 310 315 320 Met Gly Phe Phe Ser Gly Ser Leu Leu Val Phe Ser Tyr Tyr Leu Pro 325 330 335 Ile Tyr Phe Gln Ala Val Lys Asp Val Ser Pro Thr Leu Ser Gly Val 340 345 350 Tyr Met Leu Pro Gly Ile Leu Gly Gln Val Ile Met Ala Met Val Ser 355 360 365 Gly Phe Ala Ile Gly Lys Thr Gly Tyr Tyr Leu Pro Trp Ala Leu Gly 370 375 380 Ser Ala Val Leu Val Ala Ile Gly Ala Gly Leu Val Ser Thr Phe Gln 385 390 395 400 Pro His Thr Ser Thr Val Lys Trp Val Met Tyr Gln Phe Ile Ala Gly 405 410 415 Phe Gly Arg Gly Cys Gly Met Gln Thr Pro Ile Ile Ala Ile Gln Ser 420 425 430 Thr Leu Ser Pro Glu Gln Gly Ala Leu Gly Ile Ser Leu Ala Val Phe 435 440 445 Gly Gln Thr Phe Gly Gly Ser Leu Phe Leu Asp Phe Ala Asn Leu Val 450 455 460 Phe Gly Ser Gly Leu Arg Thr Gly Leu Ser Lys Tyr Ala Pro Thr Val 465 470 475 480 Asp Thr Gln Ala Val Thr Ala Ala Gly Ala Thr Gly Phe Arg Asp Val 485 490 495 Val Ser Lys Asn Asn Leu Pro Gly Val Val Lys Ala Tyr Ser Leu Ala 500 505 510 Val Asp His Thr Phe Tyr Leu Ala Val Gly Ala Thr Ala Cys Thr Phe 515 520 525 Val Phe Ala Phe Gly Met Gly Trp Arg Lys Ile Ala Thr Lys Asn Asp 530 535 540 Thr Arg Ala Val Pro Glu Thr Asp Ala 545 550 <210> 39 <211> 31 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 39 ggatccatgt ccctgccgca tgcaacgatt c 31 <210> 40 <211> 30 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 40 ggatccctaa gcaatattgt gtttcttcgc 30 <210> 41 <211> 1380 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <220> <221> CDS <222> (1)..(1380) <400> 41 atg tcc ctg ccg cat gca acg att ccg acg aac cta cgc cgt cgc gcg 48 Met Ser Leu Pro His Ala Thr Ile Pro Thr Asn Leu Arg Arg Arg Ala 1 5 10 15 ttt cga cgc tca tgt gac cgg tgt cat gca caa aag ctc aaa tgt acc 96 Phe Arg Arg Ser Cys Asp Arg Cys His Ala Gln Lys Leu Lys Cys Thr 20 25 30 ggt agc aat gcc aat tta gtc cgt gct cag tgt caa cgt tgt caa caa 144 Gly Ser Asn Ala Asn Leu Val Arg Ala Gln Cys Gln Arg Cys Gln Gln 35 40 45 gcc gga tta agg tgt gtg tac agc gaa agg cta ccc aag cgc aat tta 192 Ala Gly Leu Arg Cys Val Tyr Ser Glu Arg Leu Pro Lys Arg Asn Leu 50 55 60 cat aaa gaa gcc gca gct gga act aca aga gcc aca gaa acc tca caa 240 His Lys Glu Ala Ala Ala Gly Thr Thr Arg Ala Thr Glu Thr Ser Gln 65 70 75 80 ccg atg acc gcg aca tct tct acg gtc ttc tca tca ttg gca gag act 288 Pro Met Thr Ala Thr Ser Ser Thr Val Phe Ser Ser Leu Ala Glu Thr 85 90 95 cct cca cct tac tgc tca cca cct acg cat att ggc acc tcg gca ctc 336 Pro Pro Pro Tyr Cys Ser Pro Pro Thr His Ile Gly Thr Ser Ala Leu 100 105 110 aag gaa aca tta tca gaa cca tca gcg gca acc ctg caa ttc tat gat 384 Lys Glu Thr Leu Ser Glu Pro Ser Ala Ala Thr Leu Gln Phe Tyr Asp 115 120 125 aca tca atc aac ttt gat gat ccc gag tcg ttt ccc ggc ggc tgg cct 432 Thr Ser Ile Asn Phe Asp Asp Pro Glu Ser Phe Pro Gly Gly Trp Pro 130 135 140 cag cca aat aca ttt cgc gac gat gcc aac agc aat gaa tct tcg ggg 480 Gln Pro Asn Thr Phe Arg Asp Asp Ala Asn Ser Asn Glu Ser Ser Gly 145 150 155 160 ata cca gat cta ggc tac gac ttt gaa ggc cct ttg gat gca acg gcg 528 Ile Pro Asp Leu Gly Tyr Asp Phe Glu Gly Pro Leu Asp Ala Thr Ala 165 170 175 cct gtc tcg cca tcg ctg ttt gac ctc gaa gta gag ggg aac tcg tca 576 Pro Val Ser Pro Ser Leu Phe Asp Leu Glu Val Glu Gly Asn Ser Ser 180 185 190 tcc gga caa tcc aac aca agc aac acg caa cga gac ctt ttc gaa agt 624 Ser Gly Gln Ser Asn Thr Ser Asn Thr Gln Arg Asp Leu Phe Glu Ser 195 200 205 ctg tcg gat gtg tca cag gac cta gag gta ata ctc cac ggg gtg act 672 Leu Ser Asp Val Ser Gln Asp Leu Glu Val Ile Leu His Gly Val Thr 210 215 220 gtg gaa tgg ccc aag caa aaa att tta agc tac ccg ata ggg gac ttt 720 Val Glu Trp Pro Lys Gln Lys Ile Leu Ser Tyr Pro Ile Gly Asp Phe 225 230 235 240 ttg aat gcc ttt ggt aga ttg cta cta cat ctt caa gaa cgt gtg atc 768 Leu Asn Ala Phe Gly Arg Leu Leu Leu His Leu Gln Glu Arg Val Ile 245 250 255 acg agc agc aat agc agc atg tta gat ggg tgt ctg caa acc aag aac 816 Thr Ser Ser Asn Ser Ser Met Leu Asp Gly Cys Leu Gln Thr Lys Asn 260 265 270 ttg ttc atg gcg gtg cat tgc tac atg ttg tct gtc aaa atc atg aca 864 Leu Phe Met Ala Val His Cys Tyr Met Leu Ser Val Lys Ile Met Thr 275 280 285 tca ctt tcc cag ctg cta cta tcc gag gtg atg aaa gcc caa cct tgt 912 Ser Leu Ser Gln Leu Leu Leu Ser Glu Val Met Lys Ala Gln Pro Cys 290 295 300 gga caa aag caa agc aca cga atg gat tgg tac tgg tct ggc tca acc 960 Gly Gln Lys Gln Ser Thr Arg Met Asp Trp Tyr Trp Ser Gly Ser Thr 305 310 315 320 act aga aat gac aat gga aga gcc gaa gca ctt ccc tcg ttt cac tct 1008 Thr Arg Asn Asp Asn Gly Arg Ala Glu Ala Leu Pro Ser Phe His Ser 325 330 335 aat ctt cat atc ggc gag ctc att tca cat ctc gac cca ttc atg cac 1056 Asn Leu His Ile Gly Glu Leu Ile Ser His Leu Asp Pro Phe Met His 340 345 350 gcc tta tct tct gca tgc acg aca ttg cgt gta agc ctt cga cta ttg 1104 Ala Leu Ser Ser Ala Cys Thr Thr Leu Arg Val Ser Leu Arg Leu Leu 355 360 365 agt gag att gag act gct ttg ggg ata gca cag gag cac ggg gct gcg 1152 Ser Glu Ile Glu Thr Ala Leu Gly Ile Ala Gln Glu His Gly Ala Ala 370 375 380 gca tct att cgt cta gtc cta tca gat atg cca agc aca tcg tgg caa 1200 Ala Ser Ile Arg Leu Val Leu Ser Asp Met Pro Ser Thr Ser Trp Gln 385 390 395 400 atc ctt ggc gct gaa aat aaa acc ata acg ccg gcc tct cgt ctc cta 1248 Ile Leu Gly Ala Glu Asn Lys Thr Ile Thr Pro Ala Ser Arg Leu Leu 405 410 415 tct gtg ctt tgg agt gac gaa gcc gga gac gaa gag ccc aag tca aca 1296 Ser Val Leu Trp Ser Asp Glu Ala Gly Asp Glu Glu Pro Lys Ser Thr 420 425 430 aag gcc tca ggg aag acg ata aat gtg ttg cga cgt tgc tat aag gaa 1344 Lys Ala Ser Gly Lys Thr Ile Asn Val Leu Arg Arg Cys Tyr Lys Glu 435 440 445 ata ttc gca tta gcg aag aaa cac aat att gct tag 1380 Ile Phe Ala Leu Ala Lys Lys His Asn Ile Ala 450 455 460 <210> 42 <211> 459 <212> PRT <213> Penicillium citrinum <400> 42 Met Ser Leu Pro His Ala Thr Ile Pro Thr Asn Leu Arg Arg Arg Ala 1 5 10 15 Phe Arg Arg Ser Cys Asp Arg Cys His Ala Gln Lys Leu Lys Cys Thr 20 25 30 Gly Ser Asn Ala Asn Leu Val Arg Ala Gln Cys Gln Arg Cys Gln Gln 35 40 45 Ala Gly Leu Arg Cys Val Tyr Ser Glu Arg Leu Pro Lys Arg Asn Leu 50 55 60 His Lys Glu Ala Ala Ala Gly Thr Thr Arg Ala Thr Glu Thr Ser Gln 65 70 75 80 Pro Met Thr Ala Thr Ser Ser Thr Val Phe Ser Ser Leu Ala Glu Thr 85 90 95 Pro Pro Pro Tyr Cys Ser Pro Pro Thr His Ile Gly Thr Ser Ala Leu 100 105 110 Lys Glu Thr Leu Ser Glu Pro Ser Ala Ala Thr Leu Gln Phe Tyr Asp 115 120 125 Thr Ser Ile Asn Phe Asp Asp Pro Glu Ser Phe Pro Gly Gly Trp Pro 130 135 140 Gln Pro Asn Thr Phe Arg Asp Asp Ala Asn Ser Asn Glu Ser Ser Gly 145 150 155 160 Ile Pro Asp Leu Gly Tyr Asp Phe Glu Gly Pro Leu Asp Ala Thr Ala 165 170 175 Pro Val Ser Pro Ser Leu Phe Asp Leu Glu Val Glu Gly Asn Ser Ser 180 185 190 Ser Gly Gln Ser Asn Thr Ser Asn Thr Gln Arg Asp Leu Phe Glu Ser 195 200 205 Leu Ser Asp Val Ser Gln Asp Leu Glu Val Ile Leu His Gly Val Thr 210 215 220 Val Glu Trp Pro Lys Gln Lys Ile Leu Ser Tyr Pro Ile Gly Asp Phe 225 230 235 240 Leu Asn Ala Phe Gly Arg Leu Leu Leu His Leu Gln Glu Arg Val Ile 245 250 255 Thr Ser Ser Asn Ser Ser Met Leu Asp Gly Cys Leu Gln Thr Lys Asn 260 265 270 Leu Phe Met Ala Val His Cys Tyr Met Leu Ser Val Lys Ile Met Thr 275 280 285 Ser Leu Ser Gln Leu Leu Leu Ser Glu Val Met Lys Ala Gln Pro Cys 290 295 300 Gly Gln Lys Gln Ser Thr Arg Met Asp Trp Tyr Trp Ser Gly Ser Thr 305 310 315 320 Thr Arg Asn Asp Asn Gly Arg Ala Glu Ala Leu Pro Ser Phe His Ser 325 330 335 Asn Leu His Ile Gly Glu Leu Ile Ser His Leu Asp Pro Phe Met His 340 345 350 Ala Leu Ser Ser Ala Cys Thr Thr Leu Arg Val Ser Leu Arg Leu Leu 355 360 365 Ser Glu Ile Glu Thr Ala Leu Gly Ile Ala Gln Glu His Gly Ala Ala 370 375 380 Ala Ser Ile Arg Leu Val Leu Ser Asp Met Pro Ser Thr Ser Trp Gln 385 390 395 400 Ile Leu Gly Ala Glu Asn Lys Thr Ile Thr Pro Ala Ser Arg Leu Leu 405 410 415 Ser Val Leu Trp Ser Asp Glu Ala Gly Asp Glu Glu Pro Lys Ser Thr 420 425 430 Lys Ala Ser Gly Lys Thr Ile Asn Val Leu Arg Arg Cys Tyr Lys Glu 435 440 445 Ile Phe Ala Leu Ala Lys Lys His Asn Ile Ala 450 455 <210> 43 <211> 9099 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <220> <221> CDS <222> (1)..(9099) <400> 43 atg gat caa gcc aac tat cca aac gag cca att gtg gta gtg gga agc 48 Met Asp Gln Ala Asn Tyr Pro Asn Glu Pro Ile Val Val Val Gly Ser 1 5 10 15 ggt tgt cgg ttt cca ggt ggt gtc aac aca cca tca aaa ctt tgg gag 96 Gly Cys Arg Phe Pro Gly Gly Val Asn Thr Pro Ser Lys Leu Trp Glu 20 25 30 ctg ctc aaa gag ccc cgg gat gta cag acc aag atc cct aag gag aga 144 Leu Leu Lys Glu Pro Arg Asp Val Gln Thr Lys Ile Pro Lys Glu Arg 35 40 45 ttt gac gtc gat aca ttt tac agc ccc gat ggc act cac ccc ggg cgc 192 Phe Asp Val Asp Thr Phe Tyr Ser Pro Asp Gly Thr His Pro Gly Arg 50 55 60 acg aac gca ccc ttt gca tac ttg ctg cag gag gat cta cgc ggt ttt 240 Thr Asn Ala Pro Phe Ala Tyr Leu Leu Gln Glu Asp Leu Arg Gly Phe 65 70 75 80 gat gcc tct ttc ttc aac atc caa gct gga gag gcc gaa acg att gac 288 Asp Ala Ser Phe Phe Asn Ile Gln Ala Gly Glu Ala Glu Thr Ile Asp 85 90 95 cca cag caa agg ctg ctg ctg gag acg gtc tat gaa gct gta tcc aac 336 Pro Gln Gln Arg Leu Leu Leu Glu Thr Val Tyr Glu Ala Val Ser Asn 100 105 110 gca ggc cta cgg atc caa ggc ctt caa gga tcc tct act gct gtg tac 384 Ala Gly Leu Arg Ile Gln Gly Leu Gln Gly Ser Ser Thr Ala Val Tyr 115 120 125 gtc ggt atg atg acg cat gac tat gag act atc gtg acg cgt gaa ttg 432 Val Gly Met Met Thr His Asp Tyr Glu Thr Ile Val Thr Arg Glu Leu 130 135 140 gat agt att cct aca tac tct gcc acg ggg gta gct gtc agt gtg gcc 480 Asp Ser Ile Pro Thr Tyr Ser Ala Thr Gly Val Ala Val Ser Val Ala 145 150 155 160 tcc aac cgt gta tca tac ttc ttc gac tgg cat ggg ccg agt atg acg 528 Ser Asn Arg Val Ser Tyr Phe Phe Asp Trp His Gly Pro Ser Met Thr 165 170 175 atc gac aca gcc tgt agt tca tcc tta gct gcc gtg cat ctg gcc gtc 576 Ile Asp Thr Ala Cys Ser Ser Ser Leu Ala Ala Val His Leu Ala Val 180 185 190 caa cag ctt aga acg ggc gag agt acc atg gcg gtt gca gcc ggt gcg 624 Gln Gln Leu Arg Thr Gly Glu Ser Thr Met Ala Val Ala Ala Gly Ala 195 200 205 aat ctg ata ttg ggc ccc atg acc ttt gta atg gag agc aaa ttg aac 672 Asn Leu Ile Leu Gly Pro Met Thr Phe Val Met Glu Ser Lys Leu Asn 210 215 220 atg ctg tcc ccc aat ggt aga tct cga atg tgg gat gct gct gcc gat 720 Met Leu Ser Pro Asn Gly Arg Ser Arg Met Trp Asp Ala Ala Ala Asp 225 230 235 240 gga tat gcc aga gga gaa ggt gtt tgc tct att gtc ctg aaa acg ctg 768 Gly Tyr Ala Arg Gly Glu Gly Val Cys Ser Ile Val Leu Lys Thr Leu 245 250 255 agc cag gca ctg cgc gac ggg gac agt atc gag tgt gtt atc cga gag 816 Ser Gln Ala Leu Arg Asp Gly Asp Ser Ile Glu Cys Val Ile Arg Glu 260 265 270 acc ggt atc aac caa gat ggc cga acg aca ggt atc aca atg cca aac 864 Thr Gly Ile Asn Gln Asp Gly Arg Thr Thr Gly Ile Thr Met Pro Asn 275 280 285 cat agc gca caa gaa gcc ctc att cgg gcc aca tat gcc aag gct ggt 912 His Ser Ala Gln Glu Ala Leu Ile Arg Ala Thr Tyr Ala Lys Ala Gly 290 295 300 ctt gat att acc aac ccc cag gaa cgc tgc cag ttc ttt gaa gcc cat 960 Leu Asp Ile Thr Asn Pro Gln Glu Arg Cys Gln Phe Phe Glu Ala His 305 310 315 320 gga act ggt aca cca gcc ggt gac cca cag gaa gct gag gct att gca 1008 Gly Thr Gly Thr Pro Ala Gly Asp Pro Gln Glu Ala Glu Ala Ile Ala 325 330 335 aca gcc ttc ttc gga cac aag gat gga aca atc gac agc gac ggc gag 1056 Thr Ala Phe Phe Gly His Lys Asp Gly Thr Ile Asp Ser Asp Gly Glu 340 345 350 aaa gat gag ctt ttt gtc ggc agc atc aag aca gtt ctc ggt cac acg 1104 Lys Asp Glu Leu Phe Val Gly Ser Ile Lys Thr Val Leu Gly His Thr 355 360 365 gaa ggc act gct ggt att gcg ggc tta atg aag gca tcg ttt gct gta 1152 Glu Gly Thr Ala Gly Ile Ala Gly Leu Met Lys Ala Ser Phe Ala Val 370 375 380 cga aat ggc gtg atc ccg cca aac ctg ctg ttt gag aag atc agt ccc 1200 Arg Asn Gly Val Ile Pro Pro Asn Leu Leu Phe Glu Lys Ile Ser Pro 385 390 395 400 cgt gtc gct ccg ttc tat acg cac ttg aaa att gca acg gag gcc aca 1248 Arg Val Ala Pro Phe Tyr Thr His Leu Lys Ile Ala Thr Glu Ala Thr 405 410 415 gaa tgg ccg att gtt gcg ccc ggg cag cct cgc aga gtc agc gtt aat 1296 Glu Trp Pro Ile Val Ala Pro Gly Gln Pro Arg Arg Val Ser Val Asn 420 425 430 tca ttt gga ttt ggt ggt aca aat gcc cat gct att atc gaa gag tat 1344 Ser Phe Gly Phe Gly Gly Thr Asn Ala His Ala Ile Ile Glu Glu Tyr 435 440 445 atg gct cct cca cac aag ccg aca gca gtg gta aca gag gtg acc tca 1392 Met Ala Pro Pro His Lys Pro Thr Ala Val Val Thr Glu Val Thr Ser 450 455 460 gat gca gat gca tgc agc ttg ccc ctt gtg ctt tca tcg aag tcg cag 1440 Asp Ala Asp Ala Cys Ser Leu Pro Leu Val Leu Ser Ser Lys Ser Gln 465 470 475 480 cgc tcc atg aag gca acg cta gaa aat atg ctc caa ttt ctg gaa acg 1488 Arg Ser Met Lys Ala Thr Leu Glu Asn Met Leu Gln Phe Leu Glu Thr 485 490 495 cat gat gac gtg gac atg cat gat atc gca tat acc tta ctt gag aaa 1536 His Asp Asp Val Asp Met His Asp Ile Ala Tyr Thr Leu Leu Glu Lys 500 505 510 cgg tct atc ttg ccc ttc cgt cgt gcg att gca gca cac aac aag gaa 1584 Arg Ser Ile Leu Pro Phe Arg Arg Ala Ile Ala Ala His Asn Lys Glu 515 520 525 gta gcc cgc gcg gca ctg gag gct gcc atc gcg gac ggt gag gtc gtc 1632 Val Ala Arg Ala Ala Leu Glu Ala Ala Ile Ala Asp Gly Glu Val Val 530 535 540 acc gac ttc cgc acc gac gcg aat gac aac cct cgc gta cta ggt gtc 1680 Thr Asp Phe Arg Thr Asp Ala Asn Asp Asn Pro Arg Val Leu Gly Val 545 550 555 560 ttt act ggc caa ggt gca cag tgg ccg ggc atg ctg aag aag ctc atg 1728 Phe Thr Gly Gln Gly Ala Gln Trp Pro Gly Met Leu Lys Lys Leu Met 565 570 575 gtg ggt atg cca ttt gtg aga ggc att ctc gaa gag ctg gat aat tca 1776 Val Gly Met Pro Phe Val Arg Gly Ile Leu Glu Glu Leu Asp Asn Ser 580 585 590 ctg caa aca ctg cct gaa aag tat cgg cct acg tgg aca ctg tat gac 1824 Leu Gln Thr Leu Pro Glu Lys Tyr Arg Pro Thr Trp Thr Leu Tyr Asp 595 600 605 cag ctc atg ctt gaa ggg gat gcc tca aac gtc aga ctc gcc agc ttc 1872 Gln Leu Met Leu Glu Gly Asp Ala Ser Asn Val Arg Leu Ala Ser Phe 610 615 620 tcc cag cct cta tgc tgc gcc gta caa atc gtt ctg gtc cga ctt ctc 1920 Ser Gln Pro Leu Cys Cys Ala Val Gln Ile Val Leu Val Arg Leu Leu 625 630 635 640 gct gca gct ggt atc gag ttc agt gca att gtc ggc cac agt tca ggt 1968 Ala Ala Ala Gly Ile Glu Phe Ser Ala Ile Val Gly His Ser Ser Gly 645 650 655 gag att gcc tgt gcc ttt gcg gca gga ttc atc agt gcc act caa gct 2016 Glu Ile Ala Cys Ala Phe Ala Ala Gly Phe Ile Ser Ala Thr Gln Ala 660 665 670 atc cgt att gcg cat ctg cgt gga gtt gtg tcc gcg gag cat gcc tct 2064 Ile Arg Ile Ala His Leu Arg Gly Val Val Ser Ala Glu His Ala Ser 675 680 685 tct cca agc ggc cag aca ggc gct atg cta gcg gca ggt atg tcg tac 2112 Ser Pro Ser Gly Gln Thr Gly Ala Met Leu Ala Ala Gly Met Ser Tyr 690 695 700 gat gac gca aag gaa cta tgc gag ctc gaa gcc ttt gag ggt cgg gtc 2160 Asp Asp Ala Lys Glu Leu Cys Glu Leu Glu Ala Phe Glu Gly Arg Val 705 710 715 720 tgc gtc gcc gct agc aat tca ccg gat agt gtg acc ttc tcc ggc gac 2208 Cys Val Ala Ala Ser Asn Ser Pro Asp Ser Val Thr Phe Ser Gly Asp 725 730 735 atg gat gct atc cag cac gtt gaa ggt gtc ttg gag gat gaa tcc act 2256 Met Asp Ala Ile Gln His Val Glu Gly Val Leu Glu Asp Glu Ser Thr 740 745 750 ttt gcc aga atc ttg aga gtt gac aag gcc tac cat tcg cat cac atg 2304 Phe Ala Arg Ile Leu Arg Val Asp Lys Ala Tyr His Ser His His Met 755 760 765 cac cca tgc gca gct cca tat gtc aag gca ttg ctg gag tgc gac tgt 2352 His Pro Cys Ala Ala Pro Tyr Val Lys Ala Leu Leu Glu Cys Asp Cys 770 775 780 gct gtt gcc gat ggc caa ggt aac gat agt gtt gct tgg ttc tct gcc 2400 Ala Val Ala Asp Gly Gln Gly Asn Asp Ser Val Ala Trp Phe Ser Ala 785 790 795 800 gtc cac gag acc agc aag caa atg act gta cag gat gtg atg ccc gct 2448 Val His Glu Thr Ser Lys Gln Met Thr Val Gln Asp Val Met Pro Ala 805 810 815 tat tgg aaa gac aat ctc gtc tct ccg gtc ttg ttc tcg cag gct gtg 2496 Tyr Trp Lys Asp Asn Leu Val Ser Pro Val Leu Phe Ser Gln Ala Val 820 825 830 cag aaa gca gtc atc act cat cgt cta atc gac gtc gcc atc gaa att 2544 Gln Lys Ala Val Ile Thr His Arg Leu Ile Asp Val Ala Ile Glu Ile 835 840 845 ggc gcc cac cct gct ctc aag ggt ccg tgt cta gcc acc atc aag gat 2592 Gly Ala His Pro Ala Leu Lys Gly Pro Cys Leu Ala Thr Ile Lys Asp 850 855 860 gct ctt gcc ggt gtg gag ctg ccg tat acc ggg tgc ttg gca cga aac 2640 Ala Leu Ala Gly Val Glu Leu Pro Tyr Thr Gly Cys Leu Ala Arg Asn 865 870 875 880 gtt gac gat gtg gac gct ttt gct gga ggt ctg gga tac att tgg gag 2688 Val Asp Asp Val Asp Ala Phe Ala Gly Gly Leu Gly Tyr Ile Trp Glu 885 890 895 cgt ttc gga gtt cgg agt atc gac gcc gag ggc ttc gta caa caa gtc 2736 Arg Phe Gly Val Arg Ser Ile Asp Ala Glu Gly Phe Val Gln Gln Val 900 905 910 cgg ccc gat cgt gcc gtt caa aac ctg tca aag tca ttg ccc aca tac 2784 Arg Pro Asp Arg Ala Val Gln Asn Leu Ser Lys Ser Leu Pro Thr Tyr 915 920 925 tct tgg gat cat act cgt caa tac tgg gca gaa tct cgc tcc acc cgc 2832 Ser Trp Asp His Thr Arg Gln Tyr Trp Ala Glu Ser Arg Ser Thr Arg 930 935 940 cag cat ctt cgt gga ggt gcg ccc cat ctt ctg ctt gga aag ctt tct 2880 Gln His Leu Arg Gly Gly Ala Pro His Leu Leu Leu Gly Lys Leu Ser 945 950 955 960 tct tac agc aca gca tcg acc ttc cag tgg aca aac ttc atc agg ccc 2928 Ser Tyr Ser Thr Ala Ser Thr Phe Gln Trp Thr Asn Phe Ile Arg Pro 965 970 975 cgg gat ctg gaa tgg ctc gac ggt cat gcg cta caa ggc cag act gtg 2976 Arg Asp Leu Glu Trp Leu Asp Gly His Ala Leu Gln Gly Gln Thr Val 980 985 990 ttc ccc gct gct ggg tac ata att atg gcc atg gaa gct gcc atg aag 3024 Phe Pro Ala Ala Gly Tyr Ile Ile Met Ala Met Glu Ala Ala Met Lys 995 1000 1005 gtg gct ggt gag cgt gcc gcc caa gtt cag ctc ctg gaa atc ttg 3069 Val Ala Gly Glu Arg Ala Ala Gln Val Gln Leu Leu Glu Ile Leu 1010 1015 1020 gac atg agc atc aac aaa gcc atc gtg ttt gaa gat gaa aac acc 3114 Asp Met Ser Ile Asn Lys Ala Ile Val Phe Glu Asp Glu Asn Thr 1025 1030 1035 tcc gtg gag ctg aac ttg aca gcc gaa gtc acc agt gac aat gat 3159 Ser Val Glu Leu Asn Leu Thr Ala Glu Val Thr Ser Asp Asn Asp 1040 1045 1050 gcg gat ggc caa gtc acg gtc aaa ttt gtt att gat tcc tgt ctg 3204 Ala Asp Gly Gln Val Thr Val Lys Phe Val Ile Asp Ser Cys Leu 1055 1060 1065 gca aag gag agt gag ctt tcg aca tcc gcc aaa ggc caa atc gtc 3249 Ala Lys Glu Ser Glu Leu Ser Thr Ser Ala Lys Gly Gln Ile Val 1070 1075 1080 ata acc ctt ggc gag gca tca ccg tca tcg cag ctt ttg ccg cca 3294 Ile Thr Leu Gly Glu Ala Ser Pro Ser Ser Gln Leu Leu Pro Pro 1085 1090 1095 cct gag gaa gag tac ccc cag atg aac aat gtc aac atc gat ttc 3339 Pro Glu Glu Glu Tyr Pro Gln Met Asn Asn Val Asn Ile Asp Phe 1100 1105 1110 ttc tat cgg gaa ctt gac ctc ctt ggg tat gac tac agc aaa gac 3384 Phe Tyr Arg Glu Leu Asp Leu Leu Gly Tyr Asp Tyr Ser Lys Asp 1115 1120 1125 ttc cgt cgt ttg cag acc atg aga agg gcc gac tcc aaa gct agc 3429 Phe Arg Arg Leu Gln Thr Met Arg Arg Ala Asp Ser Lys Ala Ser 1130 1135 1140 ggc acc ttg gct ttc ctt cca ctt aag gat gaa ttg cgc aat gag 3474 Gly Thr Leu Ala Phe Leu Pro Leu Lys Asp Glu Leu Arg Asn Glu 1145 1150 1155 ccc ctc ttg ctc cac cca gcg ccc ctg gac atc gcg ttc cag act 3519 Pro Leu Leu Leu His Pro Ala Pro Leu Asp Ile Ala Phe Gln Thr 1160 1165 1170 gtc att gga gcg tat tcc tct cca gga gat cgt cgc cta cgc tca 3564 Val Ile Gly Ala Tyr Ser Ser Pro Gly Asp Arg Arg Leu Arg Ser 1175 1180 1185 ttg tac gtg cct act cac gtt gac aga gtg act ctg att cca tcg 3609 Leu Tyr Val Pro Thr His Val Asp Arg Val Thr Leu Ile Pro Ser 1190 1195 1200 ctc tgt ata tcg gcg ggt aat tct ggt gaa acc gag ctt gcg ttt 3654 Leu Cys Ile Ser Ala Gly Asn Ser Gly Glu Thr Glu Leu Ala Phe 1205 1210 1215 gac aca atc aac aca cac gac aag ggt gat ttc ctg agc ggc gac 3699 Asp Thr Ile Asn Thr His Asp Lys Gly Asp Phe Leu Ser Gly Asp 1220 1225 1230 atc acg gtg tac gat tcg acc aag aca acg ctt ttc caa gtt gat 3744 Ile Thr Val Tyr Asp Ser Thr Lys Thr Thr Leu Phe Gln Val Asp 1235 1240 1245 aac att gtc ttt aag cct ttc tct ccc ccg act gct tcg acc gac 3789 Asn Ile Val Phe Lys Pro Phe Ser Pro Pro Thr Ala Ser Thr Asp 1250 1255 1260 cac cga atc ttc gca aag tgg gtc tgg gga ccc ctc acg ccc gaa 3834 His Arg Ile Phe Ala Lys Trp Val Trp Gly Pro Leu Thr Pro Glu 1265 1270 1275 aaa ctg ctg gag gac cct gcg acg ttg atc ata gct cgg gac aag 3879 Lys Leu Leu Glu Asp Pro Ala Thr Leu Ile Ile Ala Arg Asp Lys 1280 1285 1290 gag gac att ctg acc atc gag cga atc gtt tac ttc tac atc aaa 3924 Glu Asp Ile Leu Thr Ile Glu Arg Ile Val Tyr Phe Tyr Ile Lys 1295 1300 1305 tcc ttc cta gcc cag ata acc ccc gac gac cgt caa aat gcc gac 3969 Ser Phe Leu Ala Gln Ile Thr Pro Asp Asp Arg Gln Asn Ala Asp 1310 1315 1320 ctc cat tcc cag aag tac att gaa tgg tgt gac cag gtt cag gcc 4014 Leu His Ser Gln Lys Tyr Ile Glu Trp Cys Asp Gln Val Gln Ala 1325 1330 1335 gat gct cgg gct ggc cac cat cag tgg tac cag gag tct tgg gag 4059 Asp Ala Arg Ala Gly His His Gln Trp Tyr Gln Glu Ser Trp Glu 1340 1345 1350 gag gac act tct gtt cac att gag caa atg tgt gaa agc aac tcg 4104 Glu Asp Thr Ser Val His Ile Glu Gln Met Cys Glu Ser Asn Ser 1355 1360 1365 tcc cac cca cat gtg cgc ctg atc caa agg gta ggc aaa gaa tta 4149 Ser His Pro His Val Arg Leu Ile Gln Arg Val Gly Lys Glu Leu 1370 1375 1380 att tca att gtt cgc ggg aac ggg gat cct ttg gat atc atg aac 4194 Ile Ser Ile Val Arg Gly Asn Gly Asp Pro Leu Asp Ile Met Asn 1385 1390 1395 cgc gat ggg ttg ttc acc gag tac tat acc aac aag ctc gcc ttt 4239 Arg Asp Gly Leu Phe Thr Glu Tyr Tyr Thr Asn Lys Leu Ala Phe 1400 1405 1410 ggc tca gca ata cac gtc gtt cag gat ctg gtt agc caa att gct 4284 Gly Ser Ala Ile His Val Val Gln Asp Leu Val Ser Gln Ile Ala 1415 1420 1425 cat cgc tac caa tcc att gat atc ctt gag atc ggc ttg ggt aca 4329 His Arg Tyr Gln Ser Ile Asp Ile Leu Glu Ile Gly Leu Gly Thr 1430 1435 1440 ggc atc gcc acg aag cgc gtt ctt gca tca cct caa ctt ggt ttc 4374 Gly Ile Ala Thr Lys Arg Val Leu Ala Ser Pro Gln Leu Gly Phe 1445 1450 1455 aac agt tac act tgc act gac atc tcg gcg gat gtt att ggc aag 4419 Asn Ser Tyr Thr Cys Thr Asp Ile Ser Ala Asp Val Ile Gly Lys 1460 1465 1470 gcc cgt gaa caa ctt tcc gaa ttc gac ggt ctc atg cag ttt gag 4464 Ala Arg Glu Gln Leu Ser Glu Phe Asp Gly Leu Met Gln Phe Glu 1475 1480 1485 gca cta gac atc aac aga agc cca gca gag caa gga ttc aag cct 4509 Ala Leu Asp Ile Asn Arg Ser Pro Ala Glu Gln Gly Phe Lys Pro 1490 1495 1500 cac tcc tac gat ctg att att gca tcc gat gtc ctc cat gcc agc 4554 His Ser Tyr Asp Leu Ile Ile Ala Ser Asp Val Leu His Ala Ser 1505 1510 1515 tcc aac ttc gag gaa aaa ttg gct cac ata agg tcc ttg ctc aag 4599 Ser Asn Phe Glu Glu Lys Leu Ala His Ile Arg Ser Leu Leu Lys 1520 1525 1530 ccg ggt ggt cac ttg gtt act ttc ggg gtc acc cat cgc gag cct 4644 Pro Gly Gly His Leu Val Thr Phe Gly Val Thr His Arg Glu Pro 1535 1540 1545 gct cgc ctc gcc ttc atc tct ggg ctt ttc gct gat cga tgg act 4689 Ala Arg Leu Ala Phe Ile Ser Gly Leu Phe Ala Asp Arg Trp Thr 1550 1555 1560 gga gaa gac gaa act cgt gct ttg agt gcc tcg ggg tcc gtt gac 4734 Gly Glu Asp Glu Thr Arg Ala Leu Ser Ala Ser Gly Ser Val Asp 1565 1570 1575 caa tgg gag cat acc ctc aag aga gtt ggg ttc tct ggc gtc gat 4779 Gln Trp Glu His Thr Leu Lys Arg Val Gly Phe Ser Gly Val Asp 1580 1585 1590 agt cgg aca ctt gat cga gag gat gat ttg atc ccg tct gtc ttc 4824 Ser Arg Thr Leu Asp Arg Glu Asp Asp Leu Ile Pro Ser Val Phe 1595 1600 1605 agt aca cat gct gtg gat gcc acc gtt gag cgt ttg tat gat cca 4869 Ser Thr His Ala Val Asp Ala Thr Val Glu Arg Leu Tyr Asp Pro 1610 1615 1620 ctt tct gct cca ttg aag gac tca tac ccg cca tta gtg gtt atc 4914 Leu Ser Ala Pro Leu Lys Asp Ser Tyr Pro Pro Leu Val Val Ile 1625 1630 1635 ggt ggc gaa tcg aca aaa acc gaa cgc att ttg aac gac atg aaa 4959 Gly Gly Glu Ser Thr Lys Thr Glu Arg Ile Leu Asn Asp Met Lys 1640 1645 1650 gct gcc cta ccg cat aga cac atc cac tcc gtc aag cgg ctg gaa 5004 Ala Ala Leu Pro His Arg His Ile His Ser Val Lys Arg Leu Glu 1655 1660 1665 agt gtt ctc gac gac ccg gcc ttg cag cct aag tcg act ttt gtc 5049 Ser Val Leu Asp Asp Pro Ala Leu Gln Pro Lys Ser Thr Phe Val 1670 1675 1680 atc ctc tcg gaa ctt gat gat gaa gtg ttt tgc aac ctt gaa gag 5094 Ile Leu Ser Glu Leu Asp Asp Glu Val Phe Cys Asn Leu Glu Glu 1685 1690 1695 gac aag ttt gag gca gtc aag tct ctt ctc ttc tac gcc gga cgc 5139 Asp Lys Phe Glu Ala Val Lys Ser Leu Leu Phe Tyr Ala Gly Arg 1700 1705 1710 atg atg tgg ctg aca gag aat gcc tgg att gat cat ccc cac cag 5184 Met Met Trp Leu Thr Glu Asn Ala Trp Ile Asp His Pro His Gln 1715 1720 1725 gcc agc acc atc gga atg ttg agg aca atc aag ctc gag aac cct 5229 Ala Ser Thr Ile Gly Met Leu Arg Thr Ile Lys Leu Glu Asn Pro 1730 1735 1740 gac ttg gga acg cac gtc ttc gat gtc gat act gtg gag aac cta 5274 Asp Leu Gly Thr His Val Phe Asp Val Asp Thr Val Glu Asn Leu 1745 1750 1755 gac acc aaa ttc ttc gtt gag caa ctt ttg cgc ttc gag gag agc 5319 Asp Thr Lys Phe Phe Val Glu Gln Leu Leu Arg Phe Glu Glu Ser 1760 1765 1770 gat gat cag ctt ttg gaa tca ata aca tgg act cat gag ccc gaa 5364 Asp Asp Gln Leu Leu Glu Ser Ile Thr Trp Thr His Glu Pro Glu 1775 1780 1785 gtg tac tgg tgc aag ggt cgt gcc tgg gtc cct cgt ttg aag cag 5409 Val Tyr Trp Cys Lys Gly Arg Ala Trp Val Pro Arg Leu Lys Gln 1790 1795 1800 gat att gct agg aac gac cgt atg aac tcg tct cgt cgt cca att 5454 Asp Ile Ala Arg Asn Asp Arg Met Asn Ser Ser Arg Arg Pro Ile 1805 1810 1815 ttc ggt aac ttt aat tcg tcc aag acg gcc att gca ctg aaa gag 5499 Phe Gly Asn Phe Asn Ser Ser Lys Thr Ala Ile Ala Leu Lys Glu 1820 1825 1830 gcg agg gga gca tcc tca tcg atg tac tat ctt gag tca acc gag 5544 Ala Arg Gly Ala Ser Ser Ser Met Tyr Tyr Leu Glu Ser Thr Glu 1835 1840 1845 acg tgt gat tcg tta gaa gac gct cgt cat gct gga aaa gca act 5589 Thr Cys Asp Ser Leu Glu Asp Ala Arg His Ala Gly Lys Ala Thr 1850 1855 1860 gtt cgt gtt cgc tac gct ctt ccc cag gca att cgc gtg ggc cat 5634 Val Arg Val Arg Tyr Ala Leu Pro Gln Ala Ile Arg Val Gly His 1865 1870 1875 ctc gga tac ttc cat gtc gtg cag ggc agt att ctg gag aat aca 5679 Leu Gly Tyr Phe His Val Val Gln Gly Ser Ile Leu Glu Asn Thr 1880 1885 1890 tgt gag gtg cct gta gtc gcc ctg gct gag aag aat gga tct ata 5724 Cys Glu Val Pro Val Val Ala Leu Ala Glu Lys Asn Gly Ser Ile 1895 1900 1905 ctg cat gta ccg aga aac tac atg cat agt ctg ccc gat aac atg 5769 Leu His Val Pro Arg Asn Tyr Met His Ser Leu Pro Asp Asn Met 1910 1915 1920 gcg gaa ggc gag gat agt tcc ttc ttg ttg tcc aca gct gca gcc 5814 Ala Glu Gly Glu Asp Ser Ser Phe Leu Leu Ser Thr Ala Ala Ala 1925 1930 1935 ctc ctt gcc gaa aca att ctc tct agc gct cag tcc ttt ggc tct 5859 Leu Leu Ala Glu Thr Ile Leu Ser Ser Ala Gln Ser Phe Gly Ser 1940 1945 1950 gat gca tca att ctg att atg gag ccc cca atc ttc tgc gtc aaa 5904 Asp Ala Ser Ile Leu Ile Met Glu Pro Pro Ile Phe Cys Val Lys 1955 1960 1965 gca att ctg gag tcg gcc aaa acc tac ggt gtt cag gtt cat ttg 5949 Ala Ile Leu Glu Ser Ala Lys Thr Tyr Gly Val Gln Val His Leu 1970 1975 1980 gca aca act ctg tcc gac gtc aaa act att ccg gct cct tgg atc 5994 Ala Thr Thr Leu Ser Asp Val Lys Thr Ile Pro Ala Pro Trp Ile 1985 1990 1995 cga tta cat gcc aag gaa acc gac gct cgg ctg aaa cac agc ctg 6039 Arg Leu His Ala Lys Glu Thr Asp Ala Arg Leu Lys His Ser Leu 2000 2005 2010 ccg aca aac atg atg gca ttc ttt gac ttg tct acc gac cgg act 6084 Pro Thr Asn Met Met Ala Phe Phe Asp Leu Ser Thr Asp Arg Thr 2015 2020 2025 gct gcc ggg ata acc aac cgt ttg gcc aag ttg cta cca ccc agt 6129 Ala Ala Gly Ile Thr Asn Arg Leu Ala Lys Leu Leu Pro Pro Ser 2030 2035 2040 tgc ttc atg tac agt ggt gac tat ctt atc cga agt aca gct tcc 6174 Cys Phe Met Tyr Ser Gly Asp Tyr Leu Ile Arg Ser Thr Ala Ser 2045 2050 2055 aca tac aaa gtt agt cat gtt gag gat att cca atc ctc gag cac 6219 Thr Tyr Lys Val Ser His Val Glu Asp Ile Pro Ile Leu Glu His 2060 2065 2070 tct gtg gca atg gca aaa aat acc gtc tct gcg tcg act gtc gac 6264 Ser Val Ala Met Ala Lys Asn Thr Val Ser Ala Ser Thr Val Asp 2075 2080 2085 gac act gag aaa gtt att aca gcc aca caa att ctc ttg cct ggt 6309 Asp Thr Glu Lys Val Ile Thr Ala Thr Gln Ile Leu Leu Pro Gly 2090 2095 2100 cag ctc tct gtc aac cac aat gac caa cgc ttc aat ctg gcc acc 6354 Gln Leu Ser Val Asn His Asn Asp Gln Arg Phe Asn Leu Ala Thr 2105 2110 2115 gtc atc gac tgg aag gaa aat gag gtg tcc gct agg att tgc ccc 6399 Val Ile Asp Trp Lys Glu Asn Glu Val Ser Ala Arg Ile Cys Pro 2120 2125 2130 atc gac tct ggt aac tta ttt tcc aac aag aag acg tat ttg ctt 6444 Ile Asp Ser Gly Asn Leu Phe Ser Asn Lys Lys Thr Tyr Leu Leu 2135 2140 2145 gtt ggt ctt acc ggg gac ctt ggt cgc tct ctc tgt cgc tgg atg 6489 Val Gly Leu Thr Gly Asp Leu Gly Arg Ser Leu Cys Arg Trp Met 2150 2155 2160 atc ttg cat ggc gcc cgc cat gtt gtg ctc act agc cgg aac cct 6534 Ile Leu His Gly Ala Arg His Val Val Leu Thr Ser Arg Asn Pro 2165 2170 2175 cga ctt gat ccc aaa tgg atc gcc aac atg gag gca ctt ggt ggt 6579 Arg Leu Asp Pro Lys Trp Ile Ala Asn Met Glu Ala Leu Gly Gly 2180 2185 2190 gac atc acc gtt ctg tca atg gat gtt gcc aat gag gat tca gtc 6624 Asp Ile Thr Val Leu Ser Met Asp Val Ala Asn Glu Asp Ser Val 2195 2200 2205 gat gct ggc ctt ggc aag ctt gtc gat atg aag ttg cca cct gtt 6669 Asp Ala Gly Leu Gly Lys Leu Val Asp Met Lys Leu Pro Pro Val 2210 2215 2220 gcc ggc atc gcg ttc ggg cct ttg gtg ctg cag gat gtc atg ctg 6714 Ala Gly Ile Ala Phe Gly Pro Leu Val Leu Gln Asp Val Met Leu 2225 2230 2235 aag aac atg gac cac cag atg atg gac atg gtg ttg aag ccc aag 6759 Lys Asn Met Asp His Gln Met Met Asp Met Val Leu Lys Pro Lys 2240 2245 2250 gta caa gga gca cgc att ctt cat gaa cgg ttc tcc gaa cag acg 6804 Val Gln Gly Ala Arg Ile Leu His Glu Arg Phe Ser Glu Gln Thr 2255 2260 2265 ggc agc aag gcg ctc gac ttc ttc atc atg ttt tcg tcc att gtt 6849 Gly Ser Lys Ala Leu Asp Phe Phe Ile Met Phe Ser Ser Ile Val 2270 2275 2280 gca gtt att ggc aat cct ggc cag tcc aac tat ggc gct gcg aat 6894 Ala Val Ile Gly Asn Pro Gly Gln Ser Asn Tyr Gly Ala Ala Asn 2285 2290 2295 gcc tac cta cag gct ctg gcc cag caa cgg tgc gcc aga gga ttg 6939 Ala Tyr Leu Gln Ala Leu Ala Gln Gln Arg Cys Ala Arg Gly Leu 2300 2305 2310 gcg gga tca acc atc gat att ggt gcc gtt tac ggt gta ggg ttt 6984 Ala Gly Ser Thr Ile Asp Ile Gly Ala Val Tyr Gly Val Gly Phe 2315 2320 2325 gtc acg agg gcc gag atg gag gag gac ttt gat gct atc cgt ttc 7029 Val Thr Arg Ala Glu Met Glu Glu Asp Phe Asp Ala Ile Arg Phe 2330 2335 2340 atg ttt gac tca gtt gaa gag cat gag ctg cac acg ctt ttc gcc 7074 Met Phe Asp Ser Val Glu Glu His Glu Leu His Thr Leu Phe Ala 2345 2350 2355 gaa gcg gtc gtg tct gac cag cgt gcc cgg cag caa cca cag cgc 7119 Glu Ala Val Val Ser Asp Gln Arg Ala Arg Gln Gln Pro Gln Arg 2360 2365 2370 aag acg gtc att gac atg gcg gac ctt gag ctt acc acg ggt atc 7164 Lys Thr Val Ile Asp Met Ala Asp Leu Glu Leu Thr Thr Gly Ile 2375 2380 2385 cca gat ctt gac cct gcg ctt caa gat cga att att tac ttc aac 7209 Pro Asp Leu Asp Pro Ala Leu Gln Asp Arg Ile Ile Tyr Phe Asn 2390 2395 2400 gac cct cgt ttc gga aac ttc aaa att ccc ggt caa cgc gga gac 7254 Asp Pro Arg Phe Gly Asn Phe Lys Ile Pro Gly Gln Arg Gly Asp 2405 2410 2415 ggt ggc gac aat gga tca ggg tct aaa ggc tcc att gcc gac cag 7299 Gly Gly Asp Asn Gly Ser Gly Ser Lys Gly Ser Ile Ala Asp Gln 2420 2425 2430 ctc aaa caa gca aca act tta gac caa gtt cgg caa atc gtg att 7344 Leu Lys Gln Ala Thr Thr Leu Asp Gln Val Arg Gln Ile Val Ile 2435 2440 2445 gat ggt cta tct gag aaa ctc cgt gtt acc ctc caa gtt tcg gac 7389 Asp Gly Leu Ser Glu Lys Leu Arg Val Thr Leu Gln Val Ser Asp 2450 2455 2460 ggg gag agc gtg gac cca acc att cct ctc att gat caa ggt gtc 7434 Gly Glu Ser Val Asp Pro Thr Ile Pro Leu Ile Asp Gln Gly Val 2465 2470 2475 gac tcc ttg ggt gca gtg act gtc ggc tca tgg ttc tca aag caa 7479 Asp Ser Leu Gly Ala Val Thr Val Gly Ser Trp Phe Ser Lys Gln 2480 2485 2490 ctc tac ctt gac ctc cca ctc ttg agg gta ctt ggc ggt gct tct 7524 Leu Tyr Leu Asp Leu Pro Leu Leu Arg Val Leu Gly Gly Ala Ser 2495 2500 2505 gtc gct gat ctt gcc gac gac gcg gcc acc cga ctc cca gct aca 7569 Val Ala Asp Leu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Arg Leu Pro Ala Thr 2510 2515 2520 tcc att ccg ctg ctg ttg caa att ggt gat tcc acg gga acc tcg 7614 Ser Ile Pro Leu Leu Leu Gln Ile Gly Asp Ser Thr Gly Thr Ser 2525 2530 2535 gac agc ggg gct tct ccg aca cca aca gac agc cat gat gaa gca 7659 Asp Ser Gly Ala Ser Pro Thr Pro Thr Asp Ser His Asp Glu Ala 2540 2545 2550 agc tct gct acc agc aca gat gcg tcg tca gcc gaa gag gat gaa 7704 Ser Ser Ala Thr Ser Thr Asp Ala Ser Ser Ala Glu Glu Asp Glu 2555 2560 2565 gag caa gag gac gat aat gag cag gga ggc cgt aag att ctt cgt 7749 Glu Gln Glu Asp Asp Asn Glu Gln Gly Gly Arg Lys Ile Leu Arg 2570 2575 2580 cgc gag agg ttg tcc ctt ggc cag gag tat tcc tgg agg cag caa 7794 Arg Glu Arg Leu Ser Leu Gly Gln Glu Tyr Ser Trp Arg Gln Gln 2585 2590 2595 caa atg gta aaa gat cat acc atc ttc aac aac act att ggc atg 7839 Gln Met Val Lys Asp His Thr Ile Phe Asn Asn Thr Ile Gly Met 2600 2605 2610 ttc atg aag ggt acc att gac ctc gac cgg ttg agg cgg gct ctg 7884 Phe Met Lys Gly Thr Ile Asp Leu Asp Arg Leu Arg Arg Ala Leu 2615 2620 2625 aaa gcc tca ttg cgc cgt cac gag atc ttc cgt acg tgc ttt gtt 7929 Lys Ala Ser Leu Arg Arg His Glu Ile Phe Arg Thr Cys Phe Val 2630 2635 2640 act ggc gat gac tat agc agc gat tta aat ggt ccc gtc caa gtg 7974 Thr Gly Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Leu Asn Gly Pro Val Gln Val 2645 2650 2655 gtt ctc aag aac ccg gag aac aga gtg cac ttt gtt cag gtg aac 8019 Val Leu Lys Asn Pro Glu Asn Arg Val His Phe Val Gln Val Asn 2660 2665 2670 aac gct gcg gag gca gag gaa gag tac cgg aaa ctc gag aag aca 8064 Asn Ala Ala Glu Ala Glu Glu Glu Tyr Arg Lys Leu Glu Lys Thr 2675 2680 2685 aac tat agc atc tcc aca ggt gac act ctc aga ctc gtt gat ttc 8109 Asn Tyr Ser Ile Ser Thr Gly Asp Thr Leu Arg Leu Val Asp Phe 2690 2695 2700 tac tgg ggc aca gat gac cac ctg ttg gta atc ggc tac cac aga 8154 Tyr Trp Gly Thr Asp Asp His Leu Leu Val Ile Gly Tyr His Arg 2705 2710 2715 tta gtt ggt gat ggc tca aca aca gaa aac ctg ttc aat gag atc 8199 Leu Val Gly Asp Gly Ser Thr Thr Glu Asn Leu Phe Asn Glu Ile 2720 2725 2730 ggg cag att tac agc ggg gtg aaa atg cag cga cca tcg acc caa 8244 Gly Gln Ile Tyr Ser Gly Val Lys Met Gln Arg Pro Ser Thr Gln 2735 2740 2745 ttc tct gat cta gcc gtc caa cag cgg gaa aac ctg gaa aat ggg 8289 Phe Ser Asp Leu Ala Val Gln Gln Arg Glu Asn Leu Glu Asn Gly 2750 2755 2760 cga atg ggg gac gat atc gcg ttc tgg aag tcc atg cat agc aaa 8334 Arg Met Gly Asp Asp Ile Ala Phe Trp Lys Ser Met His Ser Lys 2765 2770 2775 gtc tcg tca tct gcg cca acc gtg ctt ccc atc atg aat ctg atc 8379 Val Ser Ser Ser Ala Pro Thr Val Leu Pro Ile Met Asn Leu Ile 2780 2785 2790 aat gac cct gct gcc aat tca gag cag cag caa ata cag cca ttc 8424 Asn Asp Pro Ala Ala Asn Ser Glu Gln Gln Gln Ile Gln Pro Phe 2795 2800 2805 acg tgg cag cag tat gaa gca att gct cgt tta gat ccc atg gtc 8469 Thr Trp Gln Gln Tyr Glu Ala Ile Ala Arg Leu Asp Pro Met Val 2810 2815 2820 gcc ttc cga atc aaa gag cgg agc cgc aag cac aag gca acc ccc 8514 Ala Phe Arg Ile Lys Glu Arg Ser Arg Lys His Lys Ala Thr Pro 2825 2830 2835 atg cag ttc tac ctg gcc gcc tac cac gtt ttg ttg gcg cgt ctt 8559 Met Gln Phe Tyr Leu Ala Ala Tyr His Val Leu Leu Ala Arg Leu 2840 2845 2850 acc ggc agc aaa gac ata acc atc ggc ctc gcc gaa acc aac cga 8604 Thr Gly Ser Lys Asp Ile Thr Ile Gly Leu Ala Glu Thr Asn Arg 2855 2860 2865 tcc acc atg gaa gaa att tcg gcg atg ggc ttt ttc gct aac gtg 8649 Ser Thr Met Glu Glu Ile Ser Ala Met Gly Phe Phe Ala Asn Val 2870 2875 2880 ctt ccc ctg cgc ttt gat gag ttc gtc ggc agc aag aca ttc ggc 8694 Leu Pro Leu Arg Phe Asp Glu Phe Val Gly Ser Lys Thr Phe Gly 2885 2890 2895 gag cac ctt gta gcc acc aag gac agt gtg cgt gag gcc atg caa 8739 Glu His Leu Val Ala Thr Lys Asp Ser Val Arg Glu Ala Met Gln 2900 2905 2910 cac gcg cgg gtg ccg tat ggc gtc atc ctc gac tgt cta ggc ctg 8784 His Ala Arg Val Pro Tyr Gly Val Ile Leu Asp Cys Leu Gly Leu 2915 2920 2925 aat ctc cct acc tca ggc gag gaa ccc aag act cag aca cac gcc 8829 Asn Leu Pro Thr Ser Gly Glu Glu Pro Lys Thr Gln Thr His Ala 2930 2935 2940 ccc ttg ttc cag gct gtc ttt gat tac aag cag ggt caa gcg gag 8874 Pro Leu Phe Gln Ala Val Phe Asp Tyr Lys Gln Gly Gln Ala Glu 2945 2950 2955 agt ggc tca att ggc aat gcc aaa atg acg agt gtt ctc gct tcc 8919 Ser Gly Ser Ile Gly Asn Ala Lys Met Thr Ser Val Leu Ala Ser 2960 2965 2970 cgt gag cgc act cct tat gac atc gtt ctc gag atg tgg gat gac 8964 Arg Glu Arg Thr Pro Tyr Asp Ile Val Leu Glu Met Trp Asp Asp 2975 2980 2985 cct acc aag gac cca ctc att cat gtc aaa ctt cag agc tcg ctg 9009 Pro Thr Lys Asp Pro Leu Ile His Val Lys Leu Gln Ser Ser Leu 2990 2995 3000 tat ggc cct gag cac gct cag gcc ttt gta gac cac ttt tct tca 9054 Tyr Gly Pro Glu His Ala Gln Ala Phe Val Asp His Phe Ser Ser 3005 3010 3015 atc ctc act atg ttc tcg atg aac ccg gct ctg aag ttg gcc tag 9099 Ile Leu Thr Met Phe Ser Met Asn Pro Ala Leu Lys Leu Ala 3020 3025 3030 <210> 44 <211> 3032 <212> PRT <213> Penicillium citrinum <400> 44 Met Asp Gln Ala Asn Tyr Pro Asn Glu Pro Ile Val Val Val Gly Ser 1 5 10 15 Gly Cys Arg Phe Pro Gly Gly Val Asn Thr Pro Ser Lys Leu Trp Glu 20 25 30 Leu Leu Lys Glu Pro Arg Asp Val Gln Thr Lys Ile Pro Lys Glu Arg 35 40 45 Phe Asp Val Asp Thr Phe Tyr Ser Pro Asp Gly Thr His Pro Gly Arg 50 55 60 Thr Asn Ala Pro Phe Ala Tyr Leu Leu Gln Glu Asp Leu Arg Gly Phe 65 70 75 80 Asp Ala Ser Phe Phe Asn Ile Gln Ala Gly Glu Ala Glu Thr Ile Asp 85 90 95 Pro Gln Gln Arg Leu Leu Leu Glu Thr Val Tyr Glu Ala Val Ser Asn 100 105 110 Ala Gly Leu Arg Ile Gln Gly Leu Gln Gly Ser Ser Thr Ala Val Tyr 115 120 125 Val Gly Met Met Thr His Asp Tyr Glu Thr Ile Val Thr Arg Glu Leu 130 135 140 Asp Ser Ile Pro Thr Tyr Ser Ala Thr Gly Val Ala Val Ser Val Ala 145 150 155 160 Ser Asn Arg Val Ser Tyr Phe Phe Asp Trp His Gly Pro Ser Met Thr 165 170 175 Ile Asp Thr Ala Cys Ser Ser Ser Leu Ala Ala Val His Leu Ala Val 180 185 190 Gln Gln Leu Arg Thr Gly Glu Ser Thr Met Ala Val Ala Ala Gly Ala 195 200 205 Asn Leu Ile Leu Gly Pro Met Thr Phe Val Met Glu Ser Lys Leu Asn 210 215 220 Met Leu Ser Pro Asn Gly Arg Ser Arg Met Trp Asp Ala Ala Ala Asp 225 230 235 240 Gly Tyr Ala Arg Gly Glu Gly Val Cys Ser Ile Val Leu Lys Thr Leu 245 250 255 Ser Gln Ala Leu Arg Asp Gly Asp Ser Ile Glu Cys Val Ile Arg Glu 260 265 270 Thr Gly Ile Asn Gln Asp Gly Arg Thr Thr Gly Ile Thr Met Pro Asn 275 280 285 His Ser Ala Gln Glu Ala Leu Ile Arg Ala Thr Tyr Ala Lys Ala Gly 290 295 300 Leu Asp Ile Thr Asn Pro Gln Glu Arg Cys Gln Phe Phe Glu Ala His 305 310 315 320 Gly Thr Gly Thr Pro Ala Gly Asp Pro Gln Glu Ala Glu Ala Ile Ala 325 330 335 Thr Ala Phe Phe Gly His Lys Asp Gly Thr Ile Asp Ser Asp Gly Glu 340 345 350 Lys Asp Glu Leu Phe Val Gly Ser Ile Lys Thr Val Leu Gly His Thr 355 360 365 Glu Gly Thr Ala Gly Ile Ala Gly Leu Met Lys Ala Ser Phe Ala Val 370 375 380 Arg Asn Gly Val Ile Pro Pro Asn Leu Leu Phe Glu Lys Ile Ser Pro 385 390 395 400 Arg Val Ala Pro Phe Tyr Thr His Leu Lys Ile Ala Thr Glu Ala Thr 405 410 415 Glu Trp Pro Ile Val Ala Pro Gly Gln Pro Arg Arg Val Ser Val Asn 420 425 430 Ser Phe Gly Phe Gly Gly Thr Asn Ala His Ala Ile Ile Glu Glu Tyr 435 440 445 Met Ala Pro Pro His Lys Pro Thr Ala Val Val Thr Glu Val Thr Ser 450 455 460 Asp Ala Asp Ala Cys Ser Leu Pro Leu Val Leu Ser Ser Lys Ser Gln 465 470 475 480 Arg Ser Met Lys Ala Thr Leu Glu Asn Met Leu Gln Phe Leu Glu Thr 485 490 495 His Asp Asp Val Asp Met His Asp Ile Ala Tyr Thr Leu Leu Glu Lys 500 505 510 Arg Ser Ile Leu Pro Phe Arg Arg Ala Ile Ala Ala His Asn Lys Glu 515 520 525 Val Ala Arg Ala Ala Leu Glu Ala Ala Ile Ala Asp Gly Glu Val Val 530 535 540 Thr Asp Phe Arg Thr Asp Ala Asn Asp Asn Pro Arg Val Leu Gly Val 545 550 555 560 Phe Thr Gly Gln Gly Ala Gln Trp Pro Gly Met Leu Lys Lys Leu Met 565 570 575 Val Gly Met Pro Phe Val Arg Gly Ile Leu Glu Glu Leu Asp Asn Ser 580 585 590 Leu Gln Thr Leu Pro Glu Lys Tyr Arg Pro Thr Trp Thr Leu Tyr Asp 595 600 605 Gln Leu Met Leu Glu Gly Asp Ala Ser Asn Val Arg Leu Ala Ser Phe 610 615 620 Ser Gln Pro Leu Cys Cys Ala Val Gln Ile Val Leu Val Arg Leu Leu 625 630 635 640 Ala Ala Ala Gly Ile Glu Phe Ser Ala Ile Val Gly His Ser Ser Gly 645 650 655 Glu Ile Ala Cys Ala Phe Ala Ala Gly Phe Ile Ser Ala Thr Gln Ala 660 665 670 Ile Arg Ile Ala His Leu Arg Gly Val Val Ser Ala Glu His Ala Ser 675 680 685 Ser Pro Ser Gly Gln Thr Gly Ala Met Leu Ala Ala Gly Met Ser Tyr 690 695 700 Asp Asp Ala Lys Glu Leu Cys Glu Leu Glu Ala Phe Glu Gly Arg Val 705 710 715 720 Cys Val Ala Ala Ser Asn Ser Pro Asp Ser Val Thr Phe Ser Gly Asp 725 730 735 Met Asp Ala Ile Gln His Val Glu Gly Val Leu Glu Asp Glu Ser Thr 740 745 750 Phe Ala Arg Ile Leu Arg Val Asp Lys Ala Tyr His Ser His His Met 755 760 765 His Pro Cys Ala Ala Pro Tyr Val Lys Ala Leu Leu Glu Cys Asp Cys 770 775 780 Ala Val Ala Asp Gly Gln Gly Asn Asp Ser Val Ala Trp Phe Ser Ala 785 790 795 800 Val His Glu Thr Ser Lys Gln Met Thr Val Gln Asp Val Met Pro Ala 805 810 815 Tyr Trp Lys Asp Asn Leu Val Ser Pro Val Leu Phe Ser Gln Ala Val 820 825 830 Gln Lys Ala Val Ile Thr His Arg Leu Ile Asp Val Ala Ile Glu Ile 835 840 845 Gly Ala His Pro Ala Leu Lys Gly Pro Cys Leu Ala Thr Ile Lys Asp 850 855 860 Ala Leu Ala Gly Val Glu Leu Pro Tyr Thr Gly Cys Leu Ala Arg Asn 865 870 875 880 Val Asp Asp Val Asp Ala Phe Ala Gly Gly Leu Gly Tyr Ile Trp Glu 885 890 895 Arg Phe Gly Val Arg Ser Ile Asp Ala Glu Gly Phe Val Gln Gln Val 900 905 910 Arg Pro Asp Arg Ala Val Gln Asn Leu Ser Lys Ser Leu Pro Thr Tyr 915 920 925 Ser Trp Asp His Thr Arg Gln Tyr Trp Ala Glu Ser Arg Ser Thr Arg 930 935 940 Gln His Leu Arg Gly Gly Ala Pro His Leu Leu Leu Gly Lys Leu Ser 945 950 955 960 Ser Tyr Ser Thr Ala Ser Thr Phe Gln Trp Thr Asn Phe Ile Arg Pro 965 970 975 Arg Asp Leu Glu Trp Leu Asp Gly His Ala Leu Gln Gly Gln Thr Val 980 985 990 Phe Pro Ala Ala Gly Tyr Ile Ile Met Ala Met Glu Ala Ala Met Lys 995 1000 1005 Val Ala Gly Glu Arg Ala Ala Gln Val Gln Leu Leu Glu Ile Leu 1010 1015 1020 Asp Met Ser Ile Asn Lys Ala Ile Val Phe Glu Asp Glu Asn Thr 1025 1030 1035 Ser Val Glu Leu Asn Leu Thr Ala Glu Val Thr Ser Asp Asn Asp 1040 1045 1050 Ala Asp Gly Gln Val Thr Val Lys Phe Val Ile Asp Ser Cys Leu 1055 1060 1065 Ala Lys Glu Ser Glu Leu Ser Thr Ser Ala Lys Gly Gln Ile Val 1070 1075 1080 Ile Thr Leu Gly Glu Ala Ser Pro Ser Ser Gln Leu Leu Pro Pro 1085 1090 1095 Pro Glu Glu Glu Tyr Pro Gln Met Asn Asn Val Asn Ile Asp Phe 1100 1105 1110 Phe Tyr Arg Glu Leu Asp Leu Leu Gly Tyr Asp Tyr Ser Lys Asp 1115 1120 1125 Phe Arg Arg Leu Gln Thr Met Arg Arg Ala Asp Ser Lys Ala Ser 1130 1135 1140 Gly Thr Leu Ala Phe Leu Pro Leu Lys Asp Glu Leu Arg Asn Glu 1145 1150 1155 Pro Leu Leu Leu His Pro Ala Pro Leu Asp Ile Ala Phe Gln Thr 1160 1165 1170 Val Ile Gly Ala Tyr Ser Ser Pro Gly Asp Arg Arg Leu Arg Ser 1175 1180 1185 Leu Tyr Val Pro Thr His Val Asp Arg Val Thr Leu Ile Pro Ser 1190 1195 1200 Leu Cys Ile Ser Ala Gly Asn Ser Gly Glu Thr Glu Leu Ala Phe 1205 1210 1215 Asp Thr Ile Asn Thr His Asp Lys Gly Asp Phe Leu Ser Gly Asp 1220 1225 1230 Ile Thr Val Tyr Asp Ser Thr Lys Thr Thr Leu Phe Gln Val Asp 1235 1240 1245 Asn Ile Val Phe Lys Pro Phe Ser Pro Pro Thr Ala Ser Thr Asp 1250 1255 1260 His Arg Ile Phe Ala Lys Trp Val Trp Gly Pro Leu Thr Pro Glu 1265 1270 1275 Lys Leu Leu Glu Asp Pro Ala Thr Leu Ile Ile Ala Arg Asp Lys 1280 1285 1290 Glu Asp Ile Leu Thr Ile Glu Arg Ile Val Tyr Phe Tyr Ile Lys 1295 1300 1305 Ser Phe Leu Ala Gln Ile Thr Pro Asp Asp Arg Gln Asn Ala Asp 1310 1315 1320 Leu His Ser Gln Lys Tyr Ile Glu Trp Cys Asp Gln Val Gln Ala 1325 1330 1335 Asp Ala Arg Ala Gly His His Gln Trp Tyr Gln Glu Ser Trp Glu 1340 1345 1350 Glu Asp Thr Ser Val His Ile Glu Gln Met Cys Glu Ser Asn Ser 1355 1360 1365 Ser His Pro His Val Arg Leu Ile Gln Arg Val Gly Lys Glu Leu 1370 1375 1380 Ile Ser Ile Val Arg Gly Asn Gly Asp Pro Leu Asp Ile Met Asn 1385 1390 1395 Arg Asp Gly Leu Phe Thr Glu Tyr Tyr Thr Asn Lys Leu Ala Phe 1400 1405 1410 Gly Ser Ala Ile His Val Val Gln Asp Leu Val Ser Gln Ile Ala 1415 1420 1425 His Arg Tyr Gln Ser Ile Asp Ile Leu Glu Ile Gly Leu Gly Thr 1430 1435 1440 Gly Ile Ala Thr Lys Arg Val Leu Ala Ser Pro Gln Leu Gly Phe 1445 1450 1455 Asn Ser Tyr Thr Cys Thr Asp Ile Ser Ala Asp Val Ile Gly Lys 1460 1465 1470 Ala Arg Glu Gln Leu Ser Glu Phe Asp Gly Leu Met Gln Phe Glu 1475 1480 1485 Ala Leu Asp Ile Asn Arg Ser Pro Ala Glu Gln Gly Phe Lys Pro 1490 1495 1500 His Ser Tyr Asp Leu Ile Ile Ala Ser Asp Val Leu His Ala Ser 1505 1510 1515 Ser Asn Phe Glu Glu Lys Leu Ala His Ile Arg Ser Leu Leu Lys 1520 1525 1530 Pro Gly Gly His Leu Val Thr Phe Gly Val Thr His Arg Glu Pro 1535 1540 1545 Ala Arg Leu Ala Phe Ile Ser Gly Leu Phe Ala Asp Arg Trp Thr 1550 1555 1560 Gly Glu Asp Glu Thr Arg Ala Leu Ser Ala Ser Gly Ser Val Asp 1565 1570 1575 Gln Trp Glu His Thr Leu Lys Arg Val Gly Phe Ser Gly Val Asp 1580 1585 1590 Ser Arg Thr Leu Asp Arg Glu Asp Asp Leu Ile Pro Ser Val Phe 1595 1600 1605 Ser Thr His Ala Val Asp Ala Thr Val Glu Arg Leu Tyr Asp Pro 1610 1615 1620 Leu Ser Ala Pro Leu Lys Asp Ser Tyr Pro Pro Leu Val Val Ile 1625 1630 1635 Gly Gly Glu Ser Thr Lys Thr Glu Arg Ile Leu Asn Asp Met Lys 1640 1645 1650 Ala Ala Leu Pro His Arg His Ile His Ser Val Lys Arg Leu Glu 1655 1660 1665 Ser Val Leu Asp Asp Pro Ala Leu Gln Pro Lys Ser Thr Phe Val 1670 1675 1680 Ile Leu Ser Glu Leu Asp Asp Glu Val Phe Cys Asn Leu Glu Glu 1685 1690 1695 Asp Lys Phe Glu Ala Val Lys Ser Leu Leu Phe Tyr Ala Gly Arg 1700 1705 1710 Met Met Trp Leu Thr Glu Asn Ala Trp Ile Asp His Pro His Gln 1715 1720 1725 Ala Ser Thr Ile Gly Met Leu Arg Thr Ile Lys Leu Glu Asn Pro 1730 1735 1740 Asp Leu Gly Thr His Val Phe Asp Val Asp Thr Val Glu Asn Leu 1745 1750 1755 Asp Thr Lys Phe Phe Val Glu Gln Leu Leu Arg Phe Glu Glu Ser 1760 1765 1770 Asp Asp Gln Leu Leu Glu Ser Ile Thr Trp Thr His Glu Pro Glu 1775 1780 1785 Val Tyr Trp Cys Lys Gly Arg Ala Trp Val Pro Arg Leu Lys Gln 1790 1795 1800 Asp Ile Ala Arg Asn Asp Arg Met Asn Ser Ser Arg Arg Pro Ile 1805 1810 1815 Phe Gly Asn Phe Asn Ser Ser Lys Thr Ala Ile Ala Leu Lys Glu 1820 1825 1830 Ala Arg Gly Ala Ser Ser Ser Met Tyr Tyr Leu Glu Ser Thr Glu 1835 1840 1845 Thr Cys Asp Ser Leu Glu Asp Ala Arg His Ala Gly Lys Ala Thr 1850 1855 1860 Val Arg Val Arg Tyr Ala Leu Pro Gln Ala Ile Arg Val Gly His 1865 1870 1875 Leu Gly Tyr Phe His Val Val Gln Gly Ser Ile Leu Glu Asn Thr 1880 1885 1890 Cys Glu Val Pro Val Val Ala Leu Ala Glu Lys Asn Gly Ser Ile 1895 1900 1905 Leu His Val Pro Arg Asn Tyr Met His Ser Leu Pro Asp Asn Met 1910 1915 1920 Ala Glu Gly Glu Asp Ser Ser Phe Leu Leu Ser Thr Ala Ala Ala 1925 1930 1935 Leu Leu Ala Glu Thr Ile Leu Ser Ser Ala Gln Ser Phe Gly Ser 1940 1945 1950 Asp Ala Ser Ile Leu Ile Met Glu Pro Pro Ile Phe Cys Val Lys 1955 1960 1965 Ala Ile Leu Glu Ser Ala Lys Thr Tyr Gly Val Gln Val His Leu 1970 1975 1980 Ala Thr Thr Leu Ser Asp Val Lys Thr Ile Pro Ala Pro Trp Ile 1985 1990 1995 Arg Leu His Ala Lys Glu Thr Asp Ala Arg Leu Lys His Ser Leu 2000 2005 2010 Pro Thr Asn Met Met Ala Phe Phe Asp Leu Ser Thr Asp Arg Thr 2015 2020 2025 Ala Ala Gly Ile Thr Asn Arg Leu Ala Lys Leu Leu Pro Pro Ser 2030 2035 2040 Cys Phe Met Tyr Ser Gly Asp Tyr Leu Ile Arg Ser Thr Ala Ser 2045 2050 2055 Thr Tyr Lys Val Ser His Val Glu Asp Ile Pro Ile Leu Glu His 2060 2065 2070 Ser Val Ala Met Ala Lys Asn Thr Val Ser Ala Ser Thr Val Asp 2075 2080 2085 Asp Thr Glu Lys Val Ile Thr Ala Thr Gln Ile Leu Leu Pro Gly 2090 2095 2100 Gln Leu Ser Val Asn His Asn Asp Gln Arg Phe Asn Leu Ala Thr 2105 2110 2115 Val Ile Asp Trp Lys Glu Asn Glu Val Ser Ala Arg Ile Cys Pro 2120 2125 2130 Ile Asp Ser Gly Asn Leu Phe Ser Asn Lys Lys Thr Tyr Leu Leu 2135 2140 2145 Val Gly Leu Thr Gly Asp Leu Gly Arg Ser Leu Cys Arg Trp Met 2150 2155 2160 Ile Leu His Gly Ala Arg His Val Val Leu Thr Ser Arg Asn Pro 2165 2170 2175 Arg Leu Asp Pro Lys Trp Ile Ala Asn Met Glu Ala Leu Gly Gly 2180 2185 2190 Asp Ile Thr Val Leu Ser Met Asp Val Ala Asn Glu Asp Ser Val 2195 2200 2205 Asp Ala Gly Leu Gly Lys Leu Val Asp Met Lys Leu Pro Pro Val 2210 2215 2220 Ala Gly Ile Ala Phe Gly Pro Leu Val Leu Gln Asp Val Met Leu 2225 2230 2235 Lys Asn Met Asp His Gln Met Met Asp Met Val Leu Lys Pro Lys 2240 2245 2250 Val Gln Gly Ala Arg Ile Leu His Glu Arg Phe Ser Glu Gln Thr 2255 2260 2265 Gly Ser Lys Ala Leu Asp Phe Phe Ile Met Phe Ser Ser Ile Val 2270 2275 2280 Ala Val Ile Gly Asn Pro Gly Gln Ser Asn Tyr Gly Ala Ala Asn 2285 2290 2295 Ala Tyr Leu Gln Ala Leu Ala Gln Gln Arg Cys Ala Arg Gly Leu 2300 2305 2310 Ala Gly Ser Thr Ile Asp Ile Gly Ala Val Tyr Gly Val Gly Phe 2315 2320 2325 Val Thr Arg Ala Glu Met Glu Glu Asp Phe Asp Ala Ile Arg Phe 2330 2335 2340 Met Phe Asp Ser Val Glu Glu His Glu Leu His Thr Leu Phe Ala 2345 2350 2355 Glu Ala Val Val Ser Asp Gln Arg Ala Arg Gln Gln Pro Gln Arg 2360 2365 2370 Lys Thr Val Ile Asp Met Ala Asp Leu Glu Leu Thr Thr Gly Ile 2375 2380 2385 Pro Asp Leu Asp Pro Ala Leu Gln Asp Arg Ile Ile Tyr Phe Asn 2390 2395 2400 Asp Pro Arg Phe Gly Asn Phe Lys Ile Pro Gly Gln Arg Gly Asp 2405 2410 2415 Gly Gly Asp Asn Gly Ser Gly Ser Lys Gly Ser Ile Ala Asp Gln 2420 2425 2430 Leu Lys Gln Ala Thr Thr Leu Asp Gln Val Arg Gln Ile Val Ile 2435 2440 2445 Asp Gly Leu Ser Glu Lys Leu Arg Val Thr Leu Gln Val Ser Asp 2450 2455 2460 Gly Glu Ser Val Asp Pro Thr Ile Pro Leu Ile Asp Gln Gly Val 2465 2470 2475 Asp Ser Leu Gly Ala Val Thr Val Gly Ser Trp Phe Ser Lys Gln 2480 2485 2490 Leu Tyr Leu Asp Leu Pro Leu Leu Arg Val Leu Gly Gly Ala Ser 2495 2500 2505 Val Ala Asp Leu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Arg Leu Pro Ala Thr 2510 2515 2520 Ser Ile Pro Leu Leu Leu Gln Ile Gly Asp Ser Thr Gly Thr Ser 2525 2530 2535 Asp Ser Gly Ala Ser Pro Thr Pro Thr Asp Ser His Asp Glu Ala 2540 2545 2550 Ser Ser Ala Thr Ser Thr Asp Ala Ser Ser Ala Glu Glu Asp Glu 2555 2560 2565 Glu Gln Glu Asp Asp Asn Glu Gln Gly Gly Arg Lys Ile Leu Arg 2570 2575 2580 Arg Glu Arg Leu Ser Leu Gly Gln Glu Tyr Ser Trp Arg Gln Gln 2585 2590 2595 Gln Met Val Lys Asp His Thr Ile Phe Asn Asn Thr Ile Gly Met 2600 2605 2610 Phe Met Lys Gly Thr Ile Asp Leu Asp Arg Leu Arg Arg Ala Leu 2615 2620 2625 Lys Ala Ser Leu Arg Arg His Glu Ile Phe Arg Thr Cys Phe Val 2630 2635 2640 Thr Gly Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Leu Asn Gly Pro Val Gln Val 2645 2650 2655 Val Leu Lys Asn Pro Glu Asn Arg Val His Phe Val Gln Val Asn 2660 2665 2670 Asn Ala Ala Glu Ala Glu Glu Glu Tyr Arg Lys Leu Glu Lys Thr 2675 2680 2685 Asn Tyr Ser Ile Ser Thr Gly Asp Thr Leu Arg Leu Val Asp Phe 2690 2695 2700 Tyr Trp Gly Thr Asp Asp His Leu Leu Val Ile Gly Tyr His Arg 2705 2710 2715 Leu Val Gly Asp Gly Ser Thr Thr Glu Asn Leu Phe Asn Glu Ile 2720 2725 2730 Gly Gln Ile Tyr Ser Gly Val Lys Met Gln Arg Pro Ser Thr Gln 2735 2740 2745 Phe Ser Asp Leu Ala Val Gln Gln Arg Glu Asn Leu Glu Asn Gly 2750 2755 2760 Arg Met Gly Asp Asp Ile Ala Phe Trp Lys Ser Met His Ser Lys 2765 2770 2775 Val Ser Ser Ser Ala Pro Thr Val Leu Pro Ile Met Asn Leu Ile 2780 2785 2790 Asn Asp Pro Ala Ala Asn Ser Glu Gln Gln Gln Ile Gln Pro Phe 2795 2800 2805 Thr Trp Gln Gln Tyr Glu Ala Ile Ala Arg Leu Asp Pro Met Val 2810 2815 2820 Ala Phe Arg Ile Lys Glu Arg Ser Arg Lys His Lys Ala Thr Pro 2825 2830 2835 Met Gln Phe Tyr Leu Ala Ala Tyr His Val Leu Leu Ala Arg Leu 2840 2845 2850 Thr Gly Ser Lys Asp Ile Thr Ile Gly Leu Ala Glu Thr Asn Arg 2855 2860 2865 Ser Thr Met Glu Glu Ile Ser Ala Met Gly Phe Phe Ala Asn Val 2870 2875 2880 Leu Pro Leu Arg Phe Asp Glu Phe Val Gly Ser Lys Thr Phe Gly 2885 2890 2895 Glu His Leu Val Ala Thr Lys Asp Ser Val Arg Glu Ala Met Gln 2900 2905 2910 His Ala Arg Val Pro Tyr Gly Val Ile Leu Asp Cys Leu Gly Leu 2915 2920 2925 Asn Leu Pro Thr Ser Gly Glu Glu Pro Lys Thr Gln Thr His Ala 2930 2935 2940 Pro Leu Phe Gln Ala Val Phe Asp Tyr Lys Gln Gly Gln Ala Glu 2945 2950 2955 Ser Gly Ser Ile Gly Asn Ala Lys Met Thr Ser Val Leu Ala Ser 2960 2965 2970 Arg Glu Arg Thr Pro Tyr Asp Ile Val Leu Glu Met Trp Asp Asp 2975 2980 2985 Pro Thr Lys Asp Pro Leu Ile His Val Lys Leu Gln Ser Ser Leu 2990 2995 3000 Tyr Gly Pro Glu His Ala Gln Ala Phe Val Asp His Phe Ser Ser 3005 3010 3015 Ile Leu Thr Met Phe Ser Met Asn Pro Ala Leu Lys Leu Ala 3020 3025 3030 <210> 45 <211> 7692 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <220> <221> CDS <222> (1)..(7692) <400> 45 atg aac aat acc ccc gcc gta acc gca acc gca acc gca acc gca acc 48 Met Asn Asn Thr Pro Ala Val Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr 1 5 10 15 gca acc gca atg gca ggc tcg gct tgc tct aac aca tcc acg ccc att 96 Ala Thr Ala Met Ala Gly Ser Ala Cys Ser Asn Thr Ser Thr Pro Ile 20 25 30 gcc ata gtt gga atg gga tgt cga ttt gct gga gat gca acg agt cca 144 Ala Ile Val Gly Met Gly Cys Arg Phe Ala Gly Asp Ala Thr Ser Pro 35 40 45 cag aag ctt tgg gaa atg gtt gaa aga gga ggc agt gcc tgg tct aag 192 Gln Lys Leu Trp Glu Met Val Glu Arg Gly Gly Ser Ala Trp Ser Lys 50 55 60 gtc ccc tcc tcg cga ttc aat gtg aga gga gta tac cac ccg aat ggc 240 Val Pro Ser Ser Arg Phe Asn Val Arg Gly Val Tyr His Pro Asn Gly 65 70 75 80 gaa agg gtc ggg tcc acc cac gta aag ggt gga cac ttc atc gac gag 288 Glu Arg Val Gly Ser Thr His Val Lys Gly Gly His Phe Ile Asp Glu 85 90 95 gat cct gct tta ttt gac gcc gcg ttc ttc aac atg acc aca gag gtc 336 Asp Pro Ala Leu Phe Asp Ala Ala Phe Phe Asn Met Thr Thr Glu Val 100 105 110 gcc agc tgc atg gat ccg cag tat cgg ctt atg ctt gag gtg gtc tac 384 Ala Ser Cys Met Asp Pro Gln Tyr Arg Leu Met Leu Glu Val Val Tyr 115 120 125 gaa tcg ctg gag agt gcc ggt atc acc atc gat ggt atg gca ggc tct 432 Glu Ser Leu Glu Ser Ala Gly Ile Thr Ile Asp Gly Met Ala Gly Ser 130 135 140 aat acg tcg gtg ttt ggg ggt gtc atg tac cac gac tat cag gat tcg 480 Asn Thr Ser Val Phe Gly Gly Val Met Tyr His Asp Tyr Gln Asp Ser 145 150 155 160 ctc aat cgt gac ccc gag aca gtt ccg cgt tat ttc ata act ggc aac 528 Leu Asn Arg Asp Pro Glu Thr Val Pro Arg Tyr Phe Ile Thr Gly Asn 165 170 175 tca gga aca atg ctt tcg aac cgg ata tca cac ttc tac gac tta cgt 576 Ser Gly Thr Met Leu Ser Asn Arg Ile Ser His Phe Tyr Asp Leu Arg 180 185 190 ggt ccc agc gtg acg gtt gac acg gcc tgt tcg acg aca ttg acc gca 624 Gly Pro Ser Val Thr Val Asp Thr Ala Cys Ser Thr Thr Leu Thr Ala 195 200 205 ctg cac ttg gcg tgc cag agc tta cgt act ggg gag tca gat aca gcc 672 Leu His Leu Ala Cys Gln Ser Leu Arg Thr Gly Glu Ser Asp Thr Ala 210 215 220 atc gtt atc ggt gca aat ctt ctg ctc aat ccc gat gtt ttt gtt acg 720 Ile Val Ile Gly Ala Asn Leu Leu Leu Asn Pro Asp Val Phe Val Thr 225 230 235 240 atg tca aac ctg gga ttt ttg tcc ccg gat ggt atc tcg tac tct ttt 768 Met Ser Asn Leu Gly Phe Leu Ser Pro Asp Gly Ile Ser Tyr Ser Phe 245 250 255 gat cct cga gcg aat gga tat ggt cgc ggg gaa gga att gcc gct ctg 816 Asp Pro Arg Ala Asn Gly Tyr Gly Arg Gly Glu Gly Ile Ala Ala Leu 260 265 270 gta ata aag gcc ctc cct aac gcg ttg cga gac caa gac cct atc cga 864 Val Ile Lys Ala Leu Pro Asn Ala Leu Arg Asp Gln Asp Pro Ile Arg 275 280 285 gcc gtc att cga gag aca gcg ctg aac cag gat ggc aaa aca ccc gca 912 Ala Val Ile Arg Glu Thr Ala Leu Asn Gln Asp Gly Lys Thr Pro Ala 290 295 300 att act gcg ccg agt gat gtg gcg cag aaa agt ctg atc cag gag tgt 960 Ile Thr Ala Pro Ser Asp Val Ala Gln Lys Ser Leu Ile Gln Glu Cys 305 310 315 320 tac gat aag gct ggg cta gat atg tcg ttg acc tcg tac gtg gag gcc 1008 Tyr Asp Lys Ala Gly Leu Asp Met Ser Leu Thr Ser Tyr Val Glu Ala 325 330 335 cac gga act gga aca cca act ggt gac ccc ctt gaa atc tca gca att 1056 His Gly Thr Gly Thr Pro Thr Gly Asp Pro Leu Glu Ile Ser Ala Ile 340 345 350 tca gca gct ttt aaa gga cat cct ctg cac ctt ggc tct gtg aaa gca 1104 Ser Ala Ala Phe Lys Gly His Pro Leu His Leu Gly Ser Val Lys Ala 355 360 365 aat att ggc cat aca gaa gcc gcc agt ggc ctg gcc agt ata atc aag 1152 Asn Ile Gly His Thr Glu Ala Ala Ser Gly Leu Ala Ser Ile Ile Lys 370 375 380 gtg gcc ttg gcc ttg gag aag ggc ttg att ccc cct aat gcg cgg ttc 1200 Val Ala Leu Ala Leu Glu Lys Gly Leu Ile Pro Pro Asn Ala Arg Phe 385 390 395 400 ctg caa aag aac agc aag ctg atg ctt gac caa aag aac atc aag atc 1248 Leu Gln Lys Asn Ser Lys Leu Met Leu Asp Gln Lys Asn Ile Lys Ile 405 410 415 ccc atg tct gct caa gac tgg cct gtg aaa gat ggg act cgt cgc gca 1296 Pro Met Ser Ala Gln Asp Trp Pro Val Lys Asp Gly Thr Arg Arg Ala 420 425 430 tct gtc aat aac ttc ggc ttt ggt ggt tcg aat gct cac gtc att ttg 1344 Ser Val Asn Asn Phe Gly Phe Gly Gly Ser Asn Ala His Val Ile Leu 435 440 445 gaa tca tat gat cgc gca tca ttg gcc ctg cca gag gat caa gtg cat 1392 Glu Ser Tyr Asp Arg Ala Ser Leu Ala Leu Pro Glu Asp Gln Val His 450 455 460 gtc aat ggt aac tct gag cat ggt agg gtt gag gat ggt tcc aaa cag 1440 Val Asn Gly Asn Ser Glu His Gly Arg Val Glu Asp Gly Ser Lys Gln 465 470 475 480 agc cgc ata tac gtt gtg cgt gcc aag gac gag caa gct tgt cgg cga 1488 Ser Arg Ile Tyr Val Val Arg Ala Lys Asp Glu Gln Ala Cys Arg Arg 485 490 495 acg ata gca agc ctg cga gac tac att aaa tcc gtc gct gac att gac 1536 Thr Ile Ala Ser Leu Arg Asp Tyr Ile Lys Ser Val Ala Asp Ile Asp 500 505 510 ggg gaa ccc ttc ctc gcc agc ctc gcc tat aca cta ggc tct cgc cgt 1584 Gly Glu Pro Phe Leu Ala Ser Leu Ala Tyr Thr Leu Gly Ser Arg Arg 515 520 525 tcc att ctg cca tgg acg tca gtg tat gta gca gac agc ctt ggc ggc 1632 Ser Ile Leu Pro Trp Thr Ser Val Tyr Val Ala Asp Ser Leu Gly Gly 530 535 540 ctt gtt tct gcc ctc agc gat gag tcc aat caa cca aaa cga gcg aat 1680 Leu Val Ser Ala Leu Ser Asp Glu Ser Asn Gln Pro Lys Arg Ala Asn 545 550 555 560 gag aaa gta cgg ctc gga ttt gta ttc acc ggt cag ggg gcg cag tgg 1728 Glu Lys Val Arg Leu Gly Phe Val Phe Thr Gly Gln Gly Ala Gln Trp 565 570 575 cat gca atg ggc aga gag ctg gtc aat aca ttc cca gta ttc aaa cag 1776 His Ala Met Gly Arg Glu Leu Val Asn Thr Phe Pro Val Phe Lys Gln 580 585 590 gcg att ctt gaa tgt gat ggc tac atc aag caa ctg ggc gcg agt tgg 1824 Ala Ile Leu Glu Cys Asp Gly Tyr Ile Lys Gln Leu Gly Ala Ser Trp 595 600 605 aat ttt atg gag gag ctc cac cgt gat gag ctg acg act cgg gta aat 1872 Asn Phe Met Glu Glu Leu His Arg Asp Glu Leu Thr Thr Arg Val Asn 610 615 620 gat gcc gaa tac agt cta cca ctg tca acc gct atc caa att gca ctt 1920 Asp Ala Glu Tyr Ser Leu Pro Leu Ser Thr Ala Ile Gln Ile Ala Leu 625 630 635 640 gtg cgt ctc ctt tgg tca tgg gga att cgg cca acg ggg ata acc agt 1968 Val Arg Leu Leu Trp Ser Trp Gly Ile Arg Pro Thr Gly Ile Thr Ser 645 650 655 cac tca agt gga gag gct gct gct gcc tac gca gct ggg gct tta tcc 2016 His Ser Ser Gly Glu Ala Ala Ala Ala Tyr Ala Ala Gly Ala Leu Ser 660 665 670 gcg cgg tcg gcc att ggg atc act tat ata cgc ggt gta ttg acc act 2064 Ala Arg Ser Ala Ile Gly Ile Thr Tyr Ile Arg Gly Val Leu Thr Thr 675 680 685 aag ccc aag ccc gca ttg gca gcc aaa gga gga atg atg gcg gtg ggt 2112 Lys Pro Lys Pro Ala Leu Ala Ala Lys Gly Gly Met Met Ala Val Gly 690 695 700 ctt ggt cgc agt gag acc aat gtt tac att tcg cgt ctc aac cag gag 2160 Leu Gly Arg Ser Glu Thr Asn Val Tyr Ile Ser Arg Leu Asn Gln Glu 705 710 715 720 gac ggc tgt gtg gtg gtt gga tgt atc aac agt caa tgt agt gtg acg 2208 Asp Gly Cys Val Val Val Gly Cys Ile Asn Ser Gln Cys Ser Val Thr 725 730 735 gtg tcg gga gat ttg ggt gca atc gag aaa ctt gaa aag ttg tta cac 2256 Val Ser Gly Asp Leu Gly Ala Ile Glu Lys Leu Glu Lys Leu Leu His 740 745 750 gcc gat ggc atc ttt acc agg aaa ctg aaa gtc act gaa gcc ttc cat 2304 Ala Asp Gly Ile Phe Thr Arg Lys Leu Lys Val Thr Glu Ala Phe His 755 760 765 tca agc cac atg cga cca atg gca gat gcc ttt ggg gcg tca ctg aga 2352 Ser Ser His Met Arg Pro Met Ala Asp Ala Phe Gly Ala Ser Leu Arg 770 775 780 gat ctg ttc aac tcg gat aac aac aac gac aat ccc aat gct gac acc 2400 Asp Leu Phe Asn Ser Asp Asn Asn Asn Asp Asn Pro Asn Ala Asp Thr 785 790 795 800 tca aag ggt gta tta tat tca tca cct aag act ggt agt cgc atg acc 2448 Ser Lys Gly Val Leu Tyr Ser Ser Pro Lys Thr Gly Ser Arg Met Thr 805 810 815 gat ctt aaa ttg cta ttg gat ccc aca cac tgg atg gat agt atg cta 2496 Asp Leu Lys Leu Leu Leu Asp Pro Thr His Trp Met Asp Ser Met Leu 820 825 830 cag ccg gta gag ttc gag tcc tca ctc cgc gag atg tgc ttt gat ccc 2544 Gln Pro Val Glu Phe Glu Ser Ser Leu Arg Glu Met Cys Phe Asp Pro 835 840 845 aac acc aaa gag aaa gcc gtc gat gtg att att gaa ata ggg cct cac 2592 Asn Thr Lys Glu Lys Ala Val Asp Val Ile Ile Glu Ile Gly Pro His 850 855 860 gga gcg ctt ggt ggt cca atc aac caa gtc atg cag gat ctg ggt ctg 2640 Gly Ala Leu Gly Gly Pro Ile Asn Gln Val Met Gln Asp Leu Gly Leu 865 870 875 880 aaa gga aca gat ata aac tat ctc agt tgc ctt tct cgc ggc aga agc 2688 Lys Gly Thr Asp Ile Asn Tyr Leu Ser Cys Leu Ser Arg Gly Arg Ser 885 890 895 tcg ttg gag aca atg tat cgt gct gct acg gag ttg ata agc aag ggt 2736 Ser Leu Glu Thr Met Tyr Arg Ala Ala Thr Glu Leu Ile Ser Lys Gly 900 905 910 tat ggg ctc aaa atg gac gct ata aac ttt cct cat gga aga aaa gag 2784 Tyr Gly Leu Lys Met Asp Ala Ile Asn Phe Pro His Gly Arg Lys Glu 915 920 925 ccc aga gtg aag gta ctg agc gat ttg ccg gcg tac ccg tgg aat cac 2832 Pro Arg Val Lys Val Leu Ser Asp Leu Pro Ala Tyr Pro Trp Asn His 930 935 940 caa acc cgt tat tgg aga gag cct cgc ggc agt cgt gag tcc aaa cag 2880 Gln Thr Arg Tyr Trp Arg Glu Pro Arg Gly Ser Arg Glu Ser Lys Gln 945 950 955 960 aga acc cat ccg cct cac act ttg ata ggc tca cgg gaa tct ctc tct 2928 Arg Thr His Pro Pro His Thr Leu Ile Gly Ser Arg Glu Ser Leu Ser 965 970 975 cct cat ttc gcg cct aaa tgg aaa cat gtt ctc cgt ctg tca gat att 2976 Pro His Phe Ala Pro Lys Trp Lys His Val Leu Arg Leu Ser Asp Ile 980 985 990 cca tgg ata cga gat cac gtc gtt ggt tcg agc atc atc ttt ccg gga 3024 Pro Trp Ile Arg Asp His Val Val Gly Ser Ser Ile Ile Phe Pro Gly 995 1000 1005 gct ggc ttc atc agc atg gcc atc gag ggg ttt tca caa gtc tgc 3069 Ala Gly Phe Ile Ser Met Ala Ile Glu Gly Phe Ser Gln Val Cys 1010 1015 1020 cca cca gtt gcg ggg gct agc atc aac tac aac ttg cgt gac gtt 3114 Pro Pro Val Ala Gly Ala Ser Ile Asn Tyr Asn Leu Arg Asp Val 1025 1030 1035 gaa ctc gcg cag gct ctc ata ata ccc gct gat gca gaa gca gag 3159 Glu Leu Ala Gln Ala Leu Ile Ile Pro Ala Asp Ala Glu Ala Glu 1040 1045 1050 gtt gac ctg cgc cta acg atc cgt tca tgt gag gaa agg tcc ctc 3204 Val Asp Leu Arg Leu Thr Ile Arg Ser Cys Glu Glu Arg Ser Leu 1055 1060 1065 ggc aca aag aac tgg cat caa ttt tct gtg cac tca att tcg ggc 3249 Gly Thr Lys Asn Trp His Gln Phe Ser Val His Ser Ile Ser Gly 1070 1075 1080 gaa aat aat acc tgg aca gaa cac tgc acc gga tta ata cgt tcg 3294 Glu Asn Asn Thr Trp Thr Glu His Cys Thr Gly Leu Ile Arg Ser 1085 1090 1095 gag agc gaa aga agc cac ctt gac tgt tca act gtg gaa gcc tca 3339 Glu Ser Glu Arg Ser His Leu Asp Cys Ser Thr Val Glu Ala Ser 1100 1105 1110 cgc agg ttg aat cta ggc tca gat aac cgg agc att gat ccc aac 3384 Arg Arg Leu Asn Leu Gly Ser Asp Asn Arg Ser Ile Asp Pro Asn 1115 1120 1125 gat ctc tgg gag tcc tta cac gcg aat ggg ata tgc cac gga ccc 3429 Asp Leu Trp Glu Ser Leu His Ala Asn Gly Ile Cys His Gly Pro 1130 1135 1140 att ttt cag aac att cag cga att caa aac aat gga cag ggc tcg 3474 Ile Phe Gln Asn Ile Gln Arg Ile Gln Asn Asn Gly Gln Gly Ser 1145 1150 1155 ttt tgc aga ttt tcc att gct gac act gcc tcg gct atg cct cac 3519 Phe Cys Arg Phe Ser Ile Ala Asp Thr Ala Ser Ala Met Pro His 1160 1165 1170 tcg tac gag aat cga cac atc gtc cat cct act act ctg gac tcg 3564 Ser Tyr Glu Asn Arg His Ile Val His Pro Thr Thr Leu Asp Ser 1175 1180 1185 gtg atc cag gcg gca tac acg gtg tta ccc tac gcg gga aca cgt 3609 Val Ile Gln Ala Ala Tyr Thr Val Leu Pro Tyr Ala Gly Thr Arg 1190 1195 1200 atg aaa acg gcc atg gta cca agg agg cta aga aat gtc aaa ata 3654 Met Lys Thr Ala Met Val Pro Arg Arg Leu Arg Asn Val Lys Ile 1205 1210 1215 tcc tct agc ctg gct gac ttg gag gct ggt gat gct ctg gac gca 3699 Ser Ser Ser Leu Ala Asp Leu Glu Ala Gly Asp Ala Leu Asp Ala 1220 1225 1230 cag gcc agc atc aag gat cgc aac tct caa tcc ttc tct acc gac 3744 Gln Ala Ser Ile Lys Asp Arg Asn Ser Gln Ser Phe Ser Thr Asp 1235 1240 1245 ttg gca gtg ttt gat gac tat gat agc ggt tct tct ccc tcg gac 3789 Leu Ala Val Phe Asp Asp Tyr Asp Ser Gly Ser Ser Pro Ser Asp 1250 1255 1260 gga atc cca gtc ata gag att gaa ggc ctt gtt ttc cag tcg gtt 3834 Gly Ile Pro Val Ile Glu Ile Glu Gly Leu Val Phe Gln Ser Val 1265 1270 1275 gga agc agc ttc tct gac caa aag tca gac tcc aac gac aca gaa 3879 Gly Ser Ser Phe Ser Asp Gln Lys Ser Asp Ser Asn Asp Thr Glu 1280 1285 1290 aat gcc tgc agc tcc tgg gtt tgg gcc cct gac atc agc ttg ggt 3924 Asn Ala Cys Ser Ser Trp Val Trp Ala Pro Asp Ile Ser Leu Gly 1295 1300 1305 gac tcc act tgg ctc aaa gaa aag ttg agc act gag gct gag acg 3969 Asp Ser Thr Trp Leu Lys Glu Lys Leu Ser Thr Glu Ala Glu Thr 1310 1315 1320 aaa gaa acg gaa ctc atg atg gac ctc cga aga tgc acg atc aac 4014 Lys Glu Thr Glu Leu Met Met Asp Leu Arg Arg Cys Thr Ile Asn 1325 1330 1335 ttt ata cag gag gct gtc act gat ttg aca aat tct gat atc caa 4059 Phe Ile Gln Glu Ala Val Thr Asp Leu Thr Asn Ser Asp Ile Gln 1340 1345 1350 cat ctg gat ggc cac ctt cag aag tat ttc gat tgg atg aat gtc 4104 His Leu Asp Gly His Leu Gln Lys Tyr Phe Asp Trp Met Asn Val 1355 1360 1365 caa ttg gac ctt gcg aga caa aac aag ctc agc cca gcc agt tgc 4149 Gln Leu Asp Leu Ala Arg Gln Asn Lys Leu Ser Pro Ala Ser Cys 1370 1375 1380 gac tgg cta agt gac gat gct gag cag aag aaa tgc cta cag gcc 4194 Asp Trp Leu Ser Asp Asp Ala Glu Gln Lys Lys Cys Leu Gln Ala 1385 1390 1395 aga gtc gct gga gaa agc gtc aat ggc gag atg att tct cgt cta 4239 Arg Val Ala Gly Glu Ser Val Asn Gly Glu Met Ile Ser Arg Leu 1400 1405 1410 gga cct cag tta ata gca atg cta cgc cgc gaa aca gag cca ctt 4284 Gly Pro Gln Leu Ile Ala Met Leu Arg Arg Glu Thr Glu Pro Leu 1415 1420 1425 gag ttg atg atg caa gat cag ctg cta agc aga tac tac gtc aac 4329 Glu Leu Met Met Gln Asp Gln Leu Leu Ser Arg Tyr Tyr Val Asn 1430 1435 1440 gca atc aaa tgg agc cga tca aac gca caa gcc agc gag ctg atc 4374 Ala Ile Lys Trp Ser Arg Ser Asn Ala Gln Ala Ser Glu Leu Ile 1445 1450 1455 cga ctt tgc gcc cac aag aac ccg cgt tct cgc att ttg gag att 4419 Arg Leu Cys Ala His Lys Asn Pro Arg Ser Arg Ile Leu Glu Ile 1460 1465 1470 ggc gga ggc acg ggc ggc tgc aca aag ctt att gtc aat gca ttg 4464 Gly Gly Gly Thr Gly Gly Cys Thr Lys Leu Ile Val Asn Ala Leu 1475 1480 1485 gga aac acc aag ccg atc gat cgt tat gac ttc acc gat gtg tct 4509 Gly Asn Thr Lys Pro Ile Asp Arg Tyr Asp Phe Thr Asp Val Ser 1490 1495 1500 gcc ggg ttt ttc gag tcg gcg cgt gag caa ttt gcg gat tgg caa 4554 Ala Gly Phe Phe Glu Ser Ala Arg Glu Gln Phe Ala Asp Trp Gln 1505 1510 1515 gac gtg atg act ttc aaa aaa ttg gat att gaa agc gat ccc gag 4599 Asp Val Met Thr Phe Lys Lys Leu Asp Ile Glu Ser Asp Pro Glu 1520 1525 1530 caa caa ggg ttt gaa tgt gcc acc tac gat gtg gtc gtg gct tgc 4644 Gln Gln Gly Phe Glu Cys Ala Thr Tyr Asp Val Val Val Ala Cys 1535 1540 1545 cag gtc ctg cat gca act cga tgc atg aaa cga aca ctg agt aac 4689 Gln Val Leu His Ala Thr Arg Cys Met Lys Arg Thr Leu Ser Asn 1550 1555 1560 gtt cga aaa ttg ctc aag cct ggg ggc aac ttg att ttg gtt gag 4734 Val Arg Lys Leu Leu Lys Pro Gly Gly Asn Leu Ile Leu Val Glu 1565 1570 1575 act acc agg gat cag ctc gat ttg ttc ttt acc ttc gga ctg ttg 4779 Thr Thr Arg Asp Gln Leu Asp Leu Phe Phe Thr Phe Gly Leu Leu 1580 1585 1590 cca ggt tgg tgg ctc agt gag gag cct gag cgg aag tcg acg cca 4824 Pro Gly Trp Trp Leu Ser Glu Glu Pro Glu Arg Lys Ser Thr Pro 1595 1600 1605 tcg ctc act acc gat ctt tgg aac acc atg ttg gac acg agc ggt 4869 Ser Leu Thr Thr Asp Leu Trp Asn Thr Met Leu Asp Thr Ser Gly 1610 1615 1620 ttc aac ggt gtg gaa ttg gag gtt cgt gat tgt gaa gac gat gag 4914 Phe Asn Gly Val Glu Leu Glu Val Arg Asp Cys Glu Asp Asp Glu 1625 1630 1635 ttt tac atg atc agc aca atg cta tcg acg gct aga aaa gag aat 4959 Phe Tyr Met Ile Ser Thr Met Leu Ser Thr Ala Arg Lys Glu Asn 1640 1645 1650 aca acc ccg gat aca gtg gca gaa tcg gag gtg ctt ttg ctg cac 5004 Thr Thr Pro Asp Thr Val Ala Glu Ser Glu Val Leu Leu Leu His 1655 1660 1665 gga gcg ctc cga cct cct tca tct tgg ctg gaa agt ctc cag gca 5049 Gly Ala Leu Arg Pro Pro Ser Ser Trp Leu Glu Ser Leu Gln Ala 1670 1675 1680 gca att tgt gaa aag acc agt tct agc cca tcg atc aac gct ctg 5094 Ala Ile Cys Glu Lys Thr Ser Ser Ser Pro Ser Ile Asn Ala Leu 1685 1690 1695 ggc gag gta gat acc act gga agg aca tgc att ttt ctt ggg gaa 5139 Gly Glu Val Asp Thr Thr Gly Arg Thr Cys Ile Phe Leu Gly Glu 1700 1705 1710 atg gag tcc tcg ctc ctt gga gag gtg gga agc gag acc ttc aaa 5184 Met Glu Ser Ser Leu Leu Gly Glu Val Gly Ser Glu Thr Phe Lys 1715 1720 1725 tcc atc acc gcg atg ctg aat aac tgc aac gca ctt ctc tgg gtg 5229 Ser Ile Thr Ala Met Leu Asn Asn Cys Asn Ala Leu Leu Trp Val 1730 1735 1740 tct aga gga gca gcc atg agc tcc gag gat cca tgg aaa gct cta 5274 Ser Arg Gly Ala Ala Met Ser Ser Glu Asp Pro Trp Lys Ala Leu 1745 1750 1755 cat att ggt ctg ctg cgt acc atc cgc aac gaa aat aac ggg aag 5319 His Ile Gly Leu Leu Arg Thr Ile Arg Asn Glu Asn Asn Gly Lys 1760 1765 1770 gaa tat gta tcg ttg gat ctc gat cct tct cga aac gca tac acc 5364 Glu Tyr Val Ser Leu Asp Leu Asp Pro Ser Arg Asn Ala Tyr Thr 1775 1780 1785 cac gag tcc ctg tat gct atc tgc aat atc ttc aat ggc cgc ctc 5409 His Glu Ser Leu Tyr Ala Ile Cys Asn Ile Phe Asn Gly Arg Leu 1790 1795 1800 ggc gac ctt tcc gaa gac aag gag ttt gaa ttt gca gag aga aac 5454 Gly Asp Leu Ser Glu Asp Lys Glu Phe Glu Phe Ala Glu Arg Asn 1805 1810 1815 ggc gtc atc cac gta ccg cga ctt ttc aat gac ccg cac tgg aag 5499 Gly Val Ile His Val Pro Arg Leu Phe Asn Asp Pro His Trp Lys 1820 1825 1830 gac caa gaa gcg gtt gag gtc aca ctg cag ccg ttc gag caa ccc 5544 Asp Gln Glu Ala Val Glu Val Thr Leu Gln Pro Phe Glu Gln Pro 1835 1840 1845 ggg cgt cgt ctg cgg atg gag gtt gag acg cca ggg ctc tta gac 5589 Gly Arg Arg Leu Arg Met Glu Val Glu Thr Pro Gly Leu Leu Asp 1850 1855 1860 tcc ctg caa ttt cga gac gac gaa gga cgt gaa ggc aag gat ctt 5634 Ser Leu Gln Phe Arg Asp Asp Glu Gly Arg Glu Gly Lys Asp Leu 1865 1870 1875 ccg gat gat tgg gta gaa atc gaa ccc aaa gct ttc ggt ctc aat 5679 Pro Asp Asp Trp Val Glu Ile Glu Pro Lys Ala Phe Gly Leu Asn 1880 1885 1890 ttt cgg gat gtc atg gtt gcc atg ggt caa ttg gag gcc aac cgt 5724 Phe Arg Asp Val Met Val Ala Met Gly Gln Leu Glu Ala Asn Arg 1895 1900 1905 gtg atg ggc ttc gaa tgc gcc gga gtg atc aca aag ctc ggt gga 5769 Val Met Gly Phe Glu Cys Ala Gly Val Ile Thr Lys Leu Gly Gly 1910 1915 1920 gct gct gcc gct agc caa ggc ctc aga tta ggg gac cgc gta tgt 5814 Ala Ala Ala Ala Ser Gln Gly Leu Arg Leu Gly Asp Arg Val Cys 1925 1930 1935 gca cta ctg aaa ggc cat tgg gcg acc aga aca cag acg ccg tac 5859 Ala Leu Leu Lys Gly His Trp Ala Thr Arg Thr Gln Thr Pro Tyr 1940 1945 1950 act aat gtc gtc cgt att ccg gac gaa atg ggc ttc cca gaa gcc 5904 Thr Asn Val Val Arg Ile Pro Asp Glu Met Gly Phe Pro Glu Ala 1955 1960 1965 gct tcg gtc ccc ctg gct ttc act acc gca tat att gcg ctt tat 5949 Ala Ser Val Pro Leu Ala Phe Thr Thr Ala Tyr Ile Ala Leu Tyr 1970 1975 1980 acc acg gca aag cta cga cga ggc gaa aga gtc ttg atc cac agt 5994 Thr Thr Ala Lys Leu Arg Arg Gly Glu Arg Val Leu Ile His Ser 1985 1990 1995 gga gct gga ggc gtc ggt caa gca gcg atc att ttg tcc cag ctt 6039 Gly Ala Gly Gly Val Gly Gln Ala Ala Ile Ile Leu Ser Gln Leu 2000 2005 2010 gcg ggt gcc gag gtc ttc gtc aca gcg gga act caa gcc aag cgt 6084 Ala Gly Ala Glu Val Phe Val Thr Ala Gly Thr Gln Ala Lys Arg 2015 2020 2025 gac ttt gtc ggc gat aaa ttc ggc atc aat ccg gat cat atc ttc 6129 Asp Phe Val Gly Asp Lys Phe Gly Ile Asn Pro Asp His Ile Phe 2030 2035 2040 tcg agc agg aat gac tta ttc gtc gac ggc atc aaa gcc tac acg 6174 Ser Ser Arg Asn Asp Leu Phe Val Asp Gly Ile Lys Ala Tyr Thr 2045 2050 2055 ggc gga ctt ggc gtt cat gtc gtt cta aac tca ttg gca ggt caa 6219 Gly Gly Leu Gly Val His Val Val Leu Asn Ser Leu Ala Gly Gln 2060 2065 2070 ctc ctc caa gca agc ttt gac tgc atg gcc gaa ttc ggc aga ttt 6264 Leu Leu Gln Ala Ser Phe Asp Cys Met Ala Glu Phe Gly Arg Phe 2075 2080 2085 gtt gag att gga aaa aag gac ctg gag caa aac agc aga ctt gac 6309 Val Glu Ile Gly Lys Lys Asp Leu Glu Gln Asn Ser Arg Leu Asp 2090 2095 2100 atg ctg cca ttc acc cgg gac gtc tct ttc aca tca att gat ctt 6354 Met Leu Pro Phe Thr Arg Asp Val Ser Phe Thr Ser Ile Asp Leu 2105 2110 2115 ctc tcg tgg caa aga gcc aaa agt gaa gaa gta tcc gaa gcg ttg 6399 Leu Ser Trp Gln Arg Ala Lys Ser Glu Glu Val Ser Glu Ala Leu 2120 2125 2130 aac cat gtc aca aaa ctc ctc gag aca aaa gcg att ggc ttg att 6444 Asn His Val Thr Lys Leu Leu Glu Thr Lys Ala Ile Gly Leu Ile 2135 2140 2145 ggt cca atc cag cag cac tcc ttg tca aac atc gag aag gcc ttc 6489 Gly Pro Ile Gln Gln His Ser Leu Ser Asn Ile Glu Lys Ala Phe 2150 2155 2160 cgt acg atg cag agt ggt cag cat gtt ggc aaa gtt gtg gtc aat 6534 Arg Thr Met Gln Ser Gly Gln His Val Gly Lys Val Val Val Asn 2165 2170 2175 gta tct ggg gac gaa ctg gtc cca gtc ggc gat gga ggg ttc tcg 6579 Val Ser Gly Asp Glu Leu Val Pro Val Gly Asp Gly Gly Phe Ser 2180 2185 2190 ctg aag ctg aag cct gac agt tct tac cta gtt gct ggt ggg ctg 6624 Leu Lys Leu Lys Pro Asp Ser Ser Tyr Leu Val Ala Gly Gly Leu 2195 2200 2205 ggg gga att gga aag cag atc tgt cag tgg ctt gtt gat cat ggc 6669 Gly Gly Ile Gly Lys Gln Ile Cys Gln Trp Leu Val Asp His Gly 2210 2215 2220 gcg aag cac ttg att atc cta tcg aga agt gca aag gcc agt cca 6714 Ala Lys His Leu Ile Ile Leu Ser Arg Ser Ala Lys Ala Ser Pro 2225 2230 2235 ttc ata acc agc ttg caa aat caa cag tgc gct gtc tat cta cac 6759 Phe Ile Thr Ser Leu Gln Asn Gln Gln Cys Ala Val Tyr Leu His 2240 2245 2250 gca tgt gac atc tca gat caa gat cag gtc acc aag gtg ctc cgg 6804 Ala Cys Asp Ile Ser Asp Gln Asp Gln Val Thr Lys Val Leu Arg 2255 2260 2265 ttg tgc gaa gaa gca cat gca ccg cca att cga ggt atc ata caa 6849 Leu Cys Glu Glu Ala His Ala Pro Pro Ile Arg Gly Ile Ile Gln 2270 2275 2280 ggt gcc atg gtt ctc aag gac gcg ctt cta tcg cga atg aca ttg 6894 Gly Ala Met Val Leu Lys Asp Ala Leu Leu Ser Arg Met Thr Leu 2285 2290 2295 gat gaa ttt aat gca gca aca cgc cca aaa gta cag ggt agt tgg 6939 Asp Glu Phe Asn Ala Ala Thr Arg Pro Lys Val Gln Gly Ser Trp 2300 2305 2310 tat ctt cac aag atc gca cag gat gtt gac ttc ttc gtg atg ctc 6984 Tyr Leu His Lys Ile Ala Gln Asp Val Asp Phe Phe Val Met Leu 2315 2320 2325 tca tcc ctt gtt ggg gtc atg ggt ggg gca ggc cag gcc aat tac 7029 Ser Ser Leu Val Gly Val Met Gly Gly Ala Gly Gln Ala Asn Tyr 2330 2335 2340 gca gct gct ggt gca ttc cag gac gca ctt gcg cac cac cgg aga 7074 Ala Ala Ala Gly Ala Phe Gln Asp Ala Leu Ala His His Arg Arg 2345 2350 2355 gcc cat ggc atg ccg gct gtc acc att gac ttg ggc atg gtc aag 7119 Ala His Gly Met Pro Ala Val Thr Ile Asp Leu Gly Met Val Lys 2360 2365 2370 tct gtt gga tac gtg gct gaa act ggc cgt ggt gtg gcc gac cgg 7164 Ser Val Gly Tyr Val Ala Glu Thr Gly Arg Gly Val Ala Asp Arg 2375 2380 2385 ctc gct aga ata ggt tac aag cct atg cat gaa aag gac gtc atg 7209 Leu Ala Arg Ile Gly Tyr Lys Pro Met His Glu Lys Asp Val Met 2390 2395 2400 gat gtg ttg gag aag gca atc ctg tgt tct tcc cct caa ttt cca 7254 Asp Val Leu Glu Lys Ala Ile Leu Cys Ser Ser Pro Gln Phe Pro 2405 2410 2415 tca cct ccc gca gct gtg gtt aca gga atc aac aca tcc ccg ggt 7299 Ser Pro Pro Ala Ala Val Val Thr Gly Ile Asn Thr Ser Pro Gly 2420 2425 2430 gct cac tgg acc gag gca aac tgg ata cag gaa cag cgg ttt gtg 7344 Ala His Trp Thr Glu Ala Asn Trp Ile Gln Glu Gln Arg Phe Val 2435 2440 2445 gga ctt aaa tac cgc caa gtc ctt cat gca gac caa tcc ttt gtc 7389 Gly Leu Lys Tyr Arg Gln Val Leu His Ala Asp Gln Ser Phe Val 2450 2455 2460 tct tcg cat aaa aaa gga cca gat ggc gtg cgg gcc caa cta agc 7434 Ser Ser His Lys Lys Gly Pro Asp Gly Val Arg Ala Gln Leu Ser 2465 2470 2475 agg gtc acc tct cac gac gag gcc att tct atc gtc ctc aaa gca 7479 Arg Val Thr Ser His Asp Glu Ala Ile Ser Ile Val Leu Lys Ala 2480 2485 2490 atg acg gaa aag ctg atg cga atg ttt ggt ctg gca gaa gac gac 7524 Met Thr Glu Lys Leu Met Arg Met Phe Gly Leu Ala Glu Asp Asp 2495 2500 2505 atg tcc tcg tcc aaa aac ctg gca ggt gtc ggc gta gac tca ctc 7569 Met Ser Ser Ser Lys Asn Leu Ala Gly Val Gly Val Asp Ser Leu 2510 2515 2520 gtc gcc att gaa ctt cga aac tgg atc aca tct gaa atc cat gtt 7614 Val Ala Ile Glu Leu Arg Asn Trp Ile Thr Ser Glu Ile His Val 2525 2530 2535 gat gtg tcg atc ttt gag ctc atg aat ggt aac acc atc gcc ggc 7659 Asp Val Ser Ile Phe Glu Leu Met Asn Gly Asn Thr Ile Ala Gly 2540 2545 2550 ctc gtc gag tta gtt gtg gcg aaa tgc agt taa 7692 Leu Val Glu Leu Val Val Ala Lys Cys Ser 2555 2560 <210> 46 <211> 2563 <212> PRT <213> Penicillium citrinum <400> 46 Met Asn Asn Thr Pro Ala Val Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr 1 5 10 15 Ala Thr Ala Met Ala Gly Ser Ala Cys Ser Asn Thr Ser Thr Pro Ile 20 25 30 Ala Ile Val Gly Met Gly Cys Arg Phe Ala Gly Asp Ala Thr Ser Pro 35 40 45 Gln Lys Leu Trp Glu Met Val Glu Arg Gly Gly Ser Ala Trp Ser Lys 50 55 60 Val Pro Ser Ser Arg Phe Asn Val Arg Gly Val Tyr His Pro Asn Gly 65 70 75 80 Glu Arg Val Gly Ser Thr His Val Lys Gly Gly His Phe Ile Asp Glu 85 90 95 Asp Pro Ala Leu Phe Asp Ala Ala Phe Phe Asn Met Thr Thr Glu Val 100 105 110 Ala Ser Cys Met Asp Pro Gln Tyr Arg Leu Met Leu Glu Val Val Tyr 115 120 125 Glu Ser Leu Glu Ser Ala Gly Ile Thr Ile Asp Gly Met Ala Gly Ser 130 135 140 Asn Thr Ser Val Phe Gly Gly Val Met Tyr His Asp Tyr Gln Asp Ser 145 150 155 160 Leu Asn Arg Asp Pro Glu Thr Val Pro Arg Tyr Phe Ile Thr Gly Asn 165 170 175 Ser Gly Thr Met Leu Ser Asn Arg Ile Ser His Phe Tyr Asp Leu Arg 180 185 190 Gly Pro Ser Val Thr Val Asp Thr Ala Cys Ser Thr Thr Leu Thr Ala 195 200 205 Leu His Leu Ala Cys Gln Ser Leu Arg Thr Gly Glu Ser Asp Thr Ala 210 215 220 Ile Val Ile Gly Ala Asn Leu Leu Leu Asn Pro Asp Val Phe Val Thr 225 230 235 240 Met Ser Asn Leu Gly Phe Leu Ser Pro Asp Gly Ile Ser Tyr Ser Phe 245 250 255 Asp Pro Arg Ala Asn Gly Tyr Gly Arg Gly Glu Gly Ile Ala Ala Leu 260 265 270 Val Ile Lys Ala Leu Pro Asn Ala Leu Arg Asp Gln Asp Pro Ile Arg 275 280 285 Ala Val Ile Arg Glu Thr Ala Leu Asn Gln Asp Gly Lys Thr Pro Ala 290 295 300 Ile Thr Ala Pro Ser Asp Val Ala Gln Lys Ser Leu Ile Gln Glu Cys 305 310 315 320 Tyr Asp Lys Ala Gly Leu Asp Met Ser Leu Thr Ser Tyr Val Glu Ala 325 330 335 His Gly Thr Gly Thr Pro Thr Gly Asp Pro Leu Glu Ile Ser Ala Ile 340 345 350 Ser Ala Ala Phe Lys Gly His Pro Leu His Leu Gly Ser Val Lys Ala 355 360 365 Asn Ile Gly His Thr Glu Ala Ala Ser Gly Leu Ala Ser Ile Ile Lys 370 375 380 Val Ala Leu Ala Leu Glu Lys Gly Leu Ile Pro Pro Asn Ala Arg Phe 385 390 395 400 Leu Gln Lys Asn Ser Lys Leu Met Leu Asp Gln Lys Asn Ile Lys Ile 405 410 415 Pro Met Ser Ala Gln Asp Trp Pro Val Lys Asp Gly Thr Arg Arg Ala 420 425 430 Ser Val Asn Asn Phe Gly Phe Gly Gly Ser Asn Ala His Val Ile Leu 435 440 445 Glu Ser Tyr Asp Arg Ala Ser Leu Ala Leu Pro Glu Asp Gln Val His 450 455 460 Val Asn Gly Asn Ser Glu His Gly Arg Val Glu Asp Gly Ser Lys Gln 465 470 475 480 Ser Arg Ile Tyr Val Val Arg Ala Lys Asp Glu Gln Ala Cys Arg Arg 485 490 495 Thr Ile Ala Ser Leu Arg Asp Tyr Ile Lys Ser Val Ala Asp Ile Asp 500 505 510 Gly Glu Pro Phe Leu Ala Ser Leu Ala Tyr Thr Leu Gly Ser Arg Arg 515 520 525 Ser Ile Leu Pro Trp Thr Ser Val Tyr Val Ala Asp Ser Leu Gly Gly 530 535 540 Leu Val Ser Ala Leu Ser Asp Glu Ser Asn Gln Pro Lys Arg Ala Asn 545 550 555 560 Glu Lys Val Arg Leu Gly Phe Val Phe Thr Gly Gln Gly Ala Gln Trp 565 570 575 His Ala Met Gly Arg Glu Leu Val Asn Thr Phe Pro Val Phe Lys Gln 580 585 590 Ala Ile Leu Glu Cys Asp Gly Tyr Ile Lys Gln Leu Gly Ala Ser Trp 595 600 605 Asn Phe Met Glu Glu Leu His Arg Asp Glu Leu Thr Thr Arg Val Asn 610 615 620 Asp Ala Glu Tyr Ser Leu Pro Leu Ser Thr Ala Ile Gln Ile Ala Leu 625 630 635 640 Val Arg Leu Leu Trp Ser Trp Gly Ile Arg Pro Thr Gly Ile Thr Ser 645 650 655 His Ser Ser Gly Glu Ala Ala Ala Ala Tyr Ala Ala Gly Ala Leu Ser 660 665 670 Ala Arg Ser Ala Ile Gly Ile Thr Tyr Ile Arg Gly Val Leu Thr Thr 675 680 685 Lys Pro Lys Pro Ala Leu Ala Ala Lys Gly Gly Met Met Ala Val Gly 690 695 700 Leu Gly Arg Ser Glu Thr Asn Val Tyr Ile Ser Arg Leu Asn Gln Glu 705 710 715 720 Asp Gly Cys Val Val Val Gly Cys Ile Asn Ser Gln Cys Ser Val Thr 725 730 735 Val Ser Gly Asp Leu Gly Ala Ile Glu Lys Leu Glu Lys Leu Leu His 740 745 750 Ala Asp Gly Ile Phe Thr Arg Lys Leu Lys Val Thr Glu Ala Phe His 755 760 765 Ser Ser His Met Arg Pro Met Ala Asp Ala Phe Gly Ala Ser Leu Arg 770 775 780 Asp Leu Phe Asn Ser Asp Asn Asn Asn Asp Asn Pro Asn Ala Asp Thr 785 790 795 800 Ser Lys Gly Val Leu Tyr Ser Ser Pro Lys Thr Gly Ser Arg Met Thr 805 810 815 Asp Leu Lys Leu Leu Leu Asp Pro Thr His Trp Met Asp Ser Met Leu 820 825 830 Gln Pro Val Glu Phe Glu Ser Ser Leu Arg Glu Met Cys Phe Asp Pro 835 840 845 Asn Thr Lys Glu Lys Ala Val Asp Val Ile Ile Glu Ile Gly Pro His 850 855 860 Gly Ala Leu Gly Gly Pro Ile Asn Gln Val Met Gln Asp Leu Gly Leu 865 870 875 880 Lys Gly Thr Asp Ile Asn Tyr Leu Ser Cys Leu Ser Arg Gly Arg Ser 885 890 895 Ser Leu Glu Thr Met Tyr Arg Ala Ala Thr Glu Leu Ile Ser Lys Gly 900 905 910 Tyr Gly Leu Lys Met Asp Ala Ile Asn Phe Pro His Gly Arg Lys Glu 915 920 925 Pro Arg Val Lys Val Leu Ser Asp Leu Pro Ala Tyr Pro Trp Asn His 930 935 940 Gln Thr Arg Tyr Trp Arg Glu Pro Arg Gly Ser Arg Glu Ser Lys Gln 945 950 955 960 Arg Thr His Pro Pro His Thr Leu Ile Gly Ser Arg Glu Ser Leu Ser 965 970 975 Pro His Phe Ala Pro Lys Trp Lys His Val Leu Arg Leu Ser Asp Ile 980 985 990 Pro Trp Ile Arg Asp His Val Val Gly Ser Ser Ile Ile Phe Pro Gly 995 1000 1005 Ala Gly Phe Ile Ser Met Ala Ile Glu Gly Phe Ser Gln Val Cys 1010 1015 1020 Pro Pro Val Ala Gly Ala Ser Ile Asn Tyr Asn Leu Arg Asp Val 1025 1030 1035 Glu Leu Ala Gln Ala Leu Ile Ile Pro Ala Asp Ala Glu Ala Glu 1040 1045 1050 Val Asp Leu Arg Leu Thr Ile Arg Ser Cys Glu Glu Arg Ser Leu 1055 1060 1065 Gly Thr Lys Asn Trp His Gln Phe Ser Val His Ser Ile Ser Gly 1070 1075 1080 Glu Asn Asn Thr Trp Thr Glu His Cys Thr Gly Leu Ile Arg Ser 1085 1090 1095 Glu Ser Glu Arg Ser His Leu Asp Cys Ser Thr Val Glu Ala Ser 1100 1105 1110 Arg Arg Leu Asn Leu Gly Ser Asp Asn Arg Ser Ile Asp Pro Asn 1115 1120 1125 Asp Leu Trp Glu Ser Leu His Ala Asn Gly Ile Cys His Gly Pro 1130 1135 1140 Ile Phe Gln Asn Ile Gln Arg Ile Gln Asn Asn Gly Gln Gly Ser 1145 1150 1155 Phe Cys Arg Phe Ser Ile Ala Asp Thr Ala Ser Ala Met Pro His 1160 1165 1170 Ser Tyr Glu Asn Arg His Ile Val His Pro Thr Thr Leu Asp Ser 1175 1180 1185 Val Ile Gln Ala Ala Tyr Thr Val Leu Pro Tyr Ala Gly Thr Arg 1190 1195 1200 Met Lys Thr Ala Met Val Pro Arg Arg Leu Arg Asn Val Lys Ile 1205 1210 1215 Ser Ser Ser Leu Ala Asp Leu Glu Ala Gly Asp Ala Leu Asp Ala 1220 1225 1230 Gln Ala Ser Ile Lys Asp Arg Asn Ser Gln Ser Phe Ser Thr Asp 1235 1240 1245 Leu Ala Val Phe Asp Asp Tyr Asp Ser Gly Ser Ser Pro Ser Asp 1250 1255 1260 Gly Ile Pro Val Ile Glu Ile Glu Gly Leu Val Phe Gln Ser Val 1265 1270 1275 Gly Ser Ser Phe Ser Asp Gln Lys Ser Asp Ser Asn Asp Thr Glu 1280 1285 1290 Asn Ala Cys Ser Ser Trp Val Trp Ala Pro Asp Ile Ser Leu Gly 1295 1300 1305 Asp Ser Thr Trp Leu Lys Glu Lys Leu Ser Thr Glu Ala Glu Thr 1310 1315 1320 Lys Glu Thr Glu Leu Met Met Asp Leu Arg Arg Cys Thr Ile Asn 1325 1330 1335 Phe Ile Gln Glu Ala Val Thr Asp Leu Thr Asn Ser Asp Ile Gln 1340 1345 1350 His Leu Asp Gly His Leu Gln Lys Tyr Phe Asp Trp Met Asn Val 1355 1360 1365 Gln Leu Asp Leu Ala Arg Gln Asn Lys Leu Ser Pro Ala Ser Cys 1370 1375 1380 Asp Trp Leu Ser Asp Asp Ala Glu Gln Lys Lys Cys Leu Gln Ala 1385 1390 1395 Arg Val Ala Gly Glu Ser Val Asn Gly Glu Met Ile Ser Arg Leu 1400 1405 1410 Gly Pro Gln Leu Ile Ala Met Leu Arg Arg Glu Thr Glu Pro Leu 1415 1420 1425 Glu Leu Met Met Gln Asp Gln Leu Leu Ser Arg Tyr Tyr Val Asn 1430 1435 1440 Ala Ile Lys Trp Ser Arg Ser Asn Ala Gln Ala Ser Glu Leu Ile 1445 1450 1455 Arg Leu Cys Ala His Lys Asn Pro Arg Ser Arg Ile Leu Glu Ile 1460 1465 1470 Gly Gly Gly Thr Gly Gly Cys Thr Lys Leu Ile Val Asn Ala Leu 1475 1480 1485 Gly Asn Thr Lys Pro Ile Asp Arg Tyr Asp Phe Thr Asp Val Ser 1490 1495 1500 Ala Gly Phe Phe Glu Ser Ala Arg Glu Gln Phe Ala Asp Trp Gln 1505 1510 1515 Asp Val Met Thr Phe Lys Lys Leu Asp Ile Glu Ser Asp Pro Glu 1520 1525 1530 Gln Gln Gly Phe Glu Cys Ala Thr Tyr Asp Val Val Val Ala Cys 1535 1540 1545 Gln Val Leu His Ala Thr Arg Cys Met Lys Arg Thr Leu Ser Asn 1550 1555 1560 Val Arg Lys Leu Leu Lys Pro Gly Gly Asn Leu Ile Leu Val Glu 1565 1570 1575 Thr Thr Arg Asp Gln Leu Asp Leu Phe Phe Thr Phe Gly Leu Leu 1580 1585 1590 Pro Gly Trp Trp Leu Ser Glu Glu Pro Glu Arg Lys Ser Thr Pro 1595 1600 1605 Ser Leu Thr Thr Asp Leu Trp Asn Thr Met Leu Asp Thr Ser Gly 1610 1615 1620 Phe Asn Gly Val Glu Leu Glu Val Arg Asp Cys Glu Asp Asp Glu 1625 1630 1635 Phe Tyr Met Ile Ser Thr Met Leu Ser Thr Ala Arg Lys Glu Asn 1640 1645 1650 Thr Thr Pro Asp Thr Val Ala Glu Ser Glu Val Leu Leu Leu His 1655 1660 1665 Gly Ala Leu Arg Pro Pro Ser Ser Trp Leu Glu Ser Leu Gln Ala 1670 1675 1680 Ala Ile Cys Glu Lys Thr Ser Ser Ser Pro Ser Ile Asn Ala Leu 1685 1690 1695 Gly Glu Val Asp Thr Thr Gly Arg Thr Cys Ile Phe Leu Gly Glu 1700 1705 1710 Met Glu Ser Ser Leu Leu Gly Glu Val Gly Ser Glu Thr Phe Lys 1715 1720 1725 Ser Ile Thr Ala Met Leu Asn Asn Cys Asn Ala Leu Leu Trp Val 1730 1735 1740 Ser Arg Gly Ala Ala Met Ser Ser Glu Asp Pro Trp Lys Ala Leu 1745 1750 1755 His Ile Gly Leu Leu Arg Thr Ile Arg Asn Glu Asn Asn Gly Lys 1760 1765 1770 Glu Tyr Val Ser Leu Asp Leu Asp Pro Ser Arg Asn Ala Tyr Thr 1775 1780 1785 His Glu Ser Leu Tyr Ala Ile Cys Asn Ile Phe Asn Gly Arg Leu 1790 1795 1800 Gly Asp Leu Ser Glu Asp Lys Glu Phe Glu Phe Ala Glu Arg Asn 1805 1810 1815 Gly Val Ile His Val Pro Arg Leu Phe Asn Asp Pro His Trp Lys 1820 1825 1830 Asp Gln Glu Ala Val Glu Val Thr Leu Gln Pro Phe Glu Gln Pro 1835 1840 1845 Gly Arg Arg Leu Arg Met Glu Val Glu Thr Pro Gly Leu Leu Asp 1850 1855 1860 Ser Leu Gln Phe Arg Asp Asp Glu Gly Arg Glu Gly Lys Asp Leu 1865 1870 1875 Pro Asp Asp Trp Val Glu Ile Glu Pro Lys Ala Phe Gly Leu Asn 1880 1885 1890 Phe Arg Asp Val Met Val Ala Met Gly Gln Leu Glu Ala Asn Arg 1895 1900 1905 Val Met Gly Phe Glu Cys Ala Gly Val Ile Thr Lys Leu Gly Gly 1910 1915 1920 Ala Ala Ala Ala Ser Gln Gly Leu Arg Leu Gly Asp Arg Val Cys 1925 1930 1935 Ala Leu Leu Lys Gly His Trp Ala Thr Arg Thr Gln Thr Pro Tyr 1940 1945 1950 Thr Asn Val Val Arg Ile Pro Asp Glu Met Gly Phe Pro Glu Ala 1955 1960 1965 Ala Ser Val Pro Leu Ala Phe Thr Thr Ala Tyr Ile Ala Leu Tyr 1970 1975 1980 Thr Thr Ala Lys Leu Arg Arg Gly Glu Arg Val Leu Ile His Ser 1985 1990 1995 Gly Ala Gly Gly Val Gly Gln Ala Ala Ile Ile Leu Ser Gln Leu 2000 2005 2010 Ala Gly Ala Glu Val Phe Val Thr Ala Gly Thr Gln Ala Lys Arg 2015 2020 2025 Asp Phe Val Gly Asp Lys Phe Gly Ile Asn Pro Asp His Ile Phe 2030 2035 2040 Ser Ser Arg Asn Asp Leu Phe Val Asp Gly Ile Lys Ala Tyr Thr 2045 2050 2055 Gly Gly Leu Gly Val His Val Val Leu Asn Ser Leu Ala Gly Gln 2060 2065 2070 Leu Leu Gln Ala Ser Phe Asp Cys Met Ala Glu Phe Gly Arg Phe 2075 2080 2085 Val Glu Ile Gly Lys Lys Asp Leu Glu Gln Asn Ser Arg Leu Asp 2090 2095 2100 Met Leu Pro Phe Thr Arg Asp Val Ser Phe Thr Ser Ile Asp Leu 2105 2110 2115 Leu Ser Trp Gln Arg Ala Lys Ser Glu Glu Val Ser Glu Ala Leu 2120 2125 2130 Asn His Val Thr Lys Leu Leu Glu Thr Lys Ala Ile Gly Leu Ile 2135 2140 2145 Gly Pro Ile Gln Gln His Ser Leu Ser Asn Ile Glu Lys Ala Phe 2150 2155 2160 Arg Thr Met Gln Ser Gly Gln His Val Gly Lys Val Val Val Asn 2165 2170 2175 Val Ser Gly Asp Glu Leu Val Pro Val Gly Asp Gly Gly Phe Ser 2180 2185 2190 Leu Lys Leu Lys Pro Asp Ser Ser Tyr Leu Val Ala Gly Gly Leu 2195 2200 2205 Gly Gly Ile Gly Lys Gln Ile Cys Gln Trp Leu Val Asp His Gly 2210 2215 2220 Ala Lys His Leu Ile Ile Leu Ser Arg Ser Ala Lys Ala Ser Pro 2225 2230 2235 Phe Ile Thr Ser Leu Gln Asn Gln Gln Cys Ala Val Tyr Leu His 2240 2245 2250 Ala Cys Asp Ile Ser Asp Gln Asp Gln Val Thr Lys Val Leu Arg 2255 2260 2265 Leu Cys Glu Glu Ala His Ala Pro Pro Ile Arg Gly Ile Ile Gln 2270 2275 2280 Gly Ala Met Val Leu Lys Asp Ala Leu Leu Ser Arg Met Thr Leu 2285 2290 2295 Asp Glu Phe Asn Ala Ala Thr Arg Pro Lys Val Gln Gly Ser Trp 2300 2305 2310 Tyr Leu His Lys Ile Ala Gln Asp Val Asp Phe Phe Val Met Leu 2315 2320 2325 Ser Ser Leu Val Gly Val Met Gly Gly Ala Gly Gln Ala Asn Tyr 2330 2335 2340 Ala Ala Ala Gly Ala Phe Gln Asp Ala Leu Ala His His Arg Arg 2345 2350 2355 Ala His Gly Met Pro Ala Val Thr Ile Asp Leu Gly Met Val Lys 2360 2365 2370 Ser Val Gly Tyr Val Ala Glu Thr Gly Arg Gly Val Ala Asp Arg 2375 2380 2385 Leu Ala Arg Ile Gly Tyr Lys Pro Met His Glu Lys Asp Val Met 2390 2395 2400 Asp Val Leu Glu Lys Ala Ile Leu Cys Ser Ser Pro Gln Phe Pro 2405 2410 2415 Ser Pro Pro Ala Ala Val Val Thr Gly Ile Asn Thr Ser Pro Gly 2420 2425 2430 Ala His Trp Thr Glu Ala Asn Trp Ile Gln Glu Gln Arg Phe Val 2435 2440 2445 Gly Leu Lys Tyr Arg Gln Val Leu His Ala Asp Gln Ser Phe Val 2450 2455 2460 Ser Ser His Lys Lys Gly Pro Asp Gly Val Arg Ala Gln Leu Ser 2465 2470 2475 Arg Val Thr Ser His Asp Glu Ala Ile Ser Ile Val Leu Lys Ala 2480 2485 2490 Met Thr Glu Lys Leu Met Arg Met Phe Gly Leu Ala Glu Asp Asp 2495 2500 2505 Met Ser Ser Ser Lys Asn Leu Ala Gly Val Gly Val Asp Ser Leu 2510 2515 2520 Val Ala Ile Glu Leu Arg Asn Trp Ile Thr Ser Glu Ile His Val 2525 2530 2535 Asp Val Ser Ile Phe Glu Leu Met Asn Gly Asn Thr Ile Ala Gly 2540 2545 2550 Leu Val Glu Leu Val Val Ala Lys Cys Ser 2555 2560 <210> 47 <211> 1557 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <220> <221> CDS <222> (1)..(1557) <400> 47 atg ctc ggc cag gtt ctt ctg acc gtc gaa tcg tac caa tgg gta tcg 48 Met Leu Gly Gln Val Leu Leu Thr Val Glu Ser Tyr Gln Trp Val Ser 1 5 10 15 acc cct caa gcc ctt gtg gcg gtc gca gtg ctt ctt agt ctc atc gcc 96 Thr Pro Gln Ala Leu Val Ala Val Ala Val Leu Leu Ser Leu Ile Ala 20 25 30 tac cgt ttg cgg ggg cgc cag tcc gaa ctg caa gtc tat aat ccc aaa 144 Tyr Arg Leu Arg Gly Arg Gln Ser Glu Leu Gln Val Tyr Asn Pro Lys 35 40 45 aaa tgg tgg gag ttg acg acc atg agg gct agg cag gac ttc gat acg 192 Lys Trp Trp Glu Leu Thr Thr Met Arg Ala Arg Gln Asp Phe Asp Thr 50 55 60 tat ggt ccg agc tgg atc gaa gct tgg ttc tcg aaa aac gac aag ccc 240 Tyr Gly Pro Ser Trp Ile Glu Ala Trp Phe Ser Lys Asn Asp Lys Pro 65 70 75 80 ctg cgc ttc att gtt gat tcc ggc tat tgc acc atc ctc cca tcg tcc 288 Leu Arg Phe Ile Val Asp Ser Gly Tyr Cys Thr Ile Leu Pro Ser Ser 85 90 95 atg gcc gac gag ttt cgg aaa atc aaa gat atg tgc atg tac aag ttt 336 Met Ala Asp Glu Phe Arg Lys Ile Lys Asp Met Cys Met Tyr Lys Phe 100 105 110 ttg gcg gat gac ttt cac tct cat ctc cct gga ttc gac ggg ttc aag 384 Leu Ala Asp Asp Phe His Ser His Leu Pro Gly Phe Asp Gly Phe Lys 115 120 125 gaa atc tgc cag gat gca cat ctt gtc aac aaa gtt gtt ttg aac cag 432 Glu Ile Cys Gln Asp Ala His Leu Val Asn Lys Val Val Leu Asn Gln 130 135 140 tta caa acc caa gcc ccc aag tac aca aag cca ttg gct acc ttg gcc 480 Leu Gln Thr Gln Ala Pro Lys Tyr Thr Lys Pro Leu Ala Thr Leu Ala 145 150 155 160 gac gct act att gcc aag ttg ttc ggt aaa agc gag gag tgg caa acc 528 Asp Ala Thr Ile Ala Lys Leu Phe Gly Lys Ser Glu Glu Trp Gln Thr 165 170 175 gca cct gtc tat tcc aat gga ttg gac ctt gtc aca cga aca gtc aca 576 Ala Pro Val Tyr Ser Asn Gly Leu Asp Leu Val Thr Arg Thr Val Thr 180 185 190 ctc att atg gtc ggc gac aaa atc tgc cac aat gag gag tgg ctg gat 624 Leu Ile Met Val Gly Asp Lys Ile Cys His Asn Glu Glu Trp Leu Asp 195 200 205 att gca aag aac cat gcc gtg agt gtg gcg gta caa gct cgc caa ctt 672 Ile Ala Lys Asn His Ala Val Ser Val Ala Val Gln Ala Arg Gln Leu 210 215 220 cgc gta tgg ccc atg cta ctg cga ccg ctc gct cac tgg ttt caa ccg 720 Arg Val Trp Pro Met Leu Leu Arg Pro Leu Ala His Trp Phe Gln Pro 225 230 235 240 caa gga cgc aaa ttg cgt gac caa gtg cgc cgc gca cga aag atc att 768 Gln Gly Arg Lys Leu Arg Asp Gln Val Arg Arg Ala Arg Lys Ile Ile 245 250 255 gat cct gag att cag cga cga cgt gct gaa aag gcc gca tgt gta gcg 816 Asp Pro Glu Ile Gln Arg Arg Arg Ala Glu Lys Ala Ala Cys Val Ala 260 265 270 aag ggc gtg cag ccg ccc cag tac gtc gat acc atg caa tgg ttt gaa 864 Lys Gly Val Gln Pro Pro Gln Tyr Val Asp Thr Met Gln Trp Phe Glu 275 280 285 gac acc gcc gac ggc cgc tgg tac gat gtg gcg ggt gct cag ctc gct 912 Asp Thr Ala Asp Gly Arg Trp Tyr Asp Val Ala Gly Ala Gln Leu Ala 290 295 300 atg gat ttc gcc ggc atc tac gcc tcg acg gat ctt ttc gtc ggt gcc 960 Met Asp Phe Ala Gly Ile Tyr Ala Ser Thr Asp Leu Phe Val Gly Ala 305 310 315 320 ctt gtg gac att gcc agg cac cca gac ctt att cag cct ctc cgc caa 1008 Leu Val Asp Ile Ala Arg His Pro Asp Leu Ile Gln Pro Leu Arg Gln 325 330 335 gag atc cgc act gta atc gga gaa ggg ggc tgg acg cct gcc tct ctg 1056 Glu Ile Arg Thr Val Ile Gly Glu Gly Gly Trp Thr Pro Ala Ser Leu 340 345 350 ttc aag ctg aag ctc ctc gac agc tgc atg aaa gag acg cag cga atc 1104 Phe Lys Leu Lys Leu Leu Asp Ser Cys Met Lys Glu Thr Gln Arg Ile 355 360 365 aag ccg gtc gag tgc gcc act atg cgc agt acc gct ctc aga gac atc 1152 Lys Pro Val Glu Cys Ala Thr Met Arg Ser Thr Ala Leu Arg Asp Ile 370 375 380 act cta tcc aat ggc ctc ttc att ccc aag ggc gag ttg gcc gct gtg 1200 Thr Leu Ser Asn Gly Leu Phe Ile Pro Lys Gly Glu Leu Ala Ala Val 385 390 395 400 gct gca gac cgc atg aac aac cct gat gtg tgg gaa aac ccc gaa aat 1248 Ala Ala Asp Arg Met Asn Asn Pro Asp Val Trp Glu Asn Pro Glu Asn 405 410 415 tat gat ccc tac cga ttt atg cgc atg cgc gag gat cca gac aag gcc 1296 Tyr Asp Pro Tyr Arg Phe Met Arg Met Arg Glu Asp Pro Asp Lys Ala 420 425 430 ttc acc gct caa ttg gag aat acc aac ggt gat cac atc ggc ttc ggc 1344 Phe Thr Ala Gln Leu Glu Asn Thr Asn Gly Asp His Ile Gly Phe Gly 435 440 445 tgg aac cca cgc gct tgt ccc ggg cgg ttc ttc gcc tcg aag gaa atc 1392 Trp Asn Pro Arg Ala Cys Pro Gly Arg Phe Phe Ala Ser Lys Glu Ile 450 455 460 aag att ctc ctc gct cat ata ctg att cag tat gat gtg aag cct gta 1440 Lys Ile Leu Leu Ala His Ile Leu Ile Gln Tyr Asp Val Lys Pro Val 465 470 475 480 cca gga gac gat gac aaa tac tac cgt cac gct ttt agc gtt cgt atg 1488 Pro Gly Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Arg His Ala Phe Ser Val Arg Met 485 490 495 cat cca acc aca aag ctc atg gta cgc cgg cgc aac gag gac atc ccg 1536 His Pro Thr Thr Lys Leu Met Val Arg Arg Arg Asn Glu Asp Ile Pro 500 505 510 ctc cct cat gac cgg tgc taa 1557 Leu Pro His Asp Arg Cys 515 <210> 48 <211> 518 <212> PRT <213> Penicillium citrinum <400> 48 Met Leu Gly Gln Val Leu Leu Thr Val Glu Ser Tyr Gln Trp Val Ser 1 5 10 15 Thr Pro Gln Ala Leu Val Ala Val Ala Val Leu Leu Ser Leu Ile Ala 20 25 30 Tyr Arg Leu Arg Gly Arg Gln Ser Glu Leu Gln Val Tyr Asn Pro Lys 35 40 45 Lys Trp Trp Glu Leu Thr Thr Met Arg Ala Arg Gln Asp Phe Asp Thr 50 55 60 Tyr Gly Pro Ser Trp Ile Glu Ala Trp Phe Ser Lys Asn Asp Lys Pro 65 70 75 80 Leu Arg Phe Ile Val Asp Ser Gly Tyr Cys Thr Ile Leu Pro Ser Ser 85 90 95 Met Ala Asp Glu Phe Arg Lys Ile Lys Asp Met Cys Met Tyr Lys Phe 100 105 110 Leu Ala Asp Asp Phe His Ser His Leu Pro Gly Phe Asp Gly Phe Lys 115 120 125 Glu Ile Cys Gln Asp Ala His Leu Val Asn Lys Val Val Leu Asn Gln 130 135 140 Leu Gln Thr Gln Ala Pro Lys Tyr Thr Lys Pro Leu Ala Thr Leu Ala 145 150 155 160 Asp Ala Thr Ile Ala Lys Leu Phe Gly Lys Ser Glu Glu Trp Gln Thr 165 170 175 Ala Pro Val Tyr Ser Asn Gly Leu Asp Leu Val Thr Arg Thr Val Thr 180 185 190 Leu Ile Met Val Gly Asp Lys Ile Cys His Asn Glu Glu Trp Leu Asp 195 200 205 Ile Ala Lys Asn His Ala Val Ser Val Ala Val Gln Ala Arg Gln Leu 210 215 220 Arg Val Trp Pro Met Leu Leu Arg Pro Leu Ala His Trp Phe Gln Pro 225 230 235 240 Gln Gly Arg Lys Leu Arg Asp Gln Val Arg Arg Ala Arg Lys Ile Ile 245 250 255 Asp Pro Glu Ile Gln Arg Arg Arg Ala Glu Lys Ala Ala Cys Val Ala 260 265 270 Lys Gly Val Gln Pro Pro Gln Tyr Val Asp Thr Met Gln Trp Phe Glu 275 280 285 Asp Thr Ala Asp Gly Arg Trp Tyr Asp Val Ala Gly Ala Gln Leu Ala 290 295 300 Met Asp Phe Ala Gly Ile Tyr Ala Ser Thr Asp Leu Phe Val Gly Ala 305 310 315 320 Leu Val Asp Ile Ala Arg His Pro Asp Leu Ile Gln Pro Leu Arg Gln 325 330 335 Glu Ile Arg Thr Val Ile Gly Glu Gly Gly Trp Thr Pro Ala Ser Leu 340 345 350 Phe Lys Leu Lys Leu Leu Asp Ser Cys Met Lys Glu Thr Gln Arg Ile 355 360 365 Lys Pro Val Glu Cys Ala Thr Met Arg Ser Thr Ala Leu Arg Asp Ile 370 375 380 Thr Leu Ser Asn Gly Leu Phe Ile Pro Lys Gly Glu Leu Ala Ala Val 385 390 395 400 Ala Ala Asp Arg Met Asn Asn Pro Asp Val Trp Glu Asn Pro Glu Asn 405 410 415 Tyr Asp Pro Tyr Arg Phe Met Arg Met Arg Glu Asp Pro Asp Lys Ala 420 425 430 Phe Thr Ala Gln Leu Glu Asn Thr Asn Gly Asp His Ile Gly Phe Gly 435 440 445 Trp Asn Pro Arg Ala Cys Pro Gly Arg Phe Phe Ala Ser Lys Glu Ile 450 455 460 Lys Ile Leu Leu Ala His Ile Leu Ile Gln Tyr Asp Val Lys Pro Val 465 470 475 480 Pro Gly Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Arg His Ala Phe Ser Val Arg Met 485 490 495 His Pro Thr Thr Lys Leu Met Val Arg Arg Arg Asn Glu Asp Ile Pro 500 505 510 Leu Pro His Asp Arg Cys 515 <210> 49 <211> 3522 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <220> <221> CDS <222> (1)..(3522) <400> 49 atg gtc gct tcg ttg cta ccc tct cgc ttt cgc ggt agg gaa tca atg 48 Met Val Ala Ser Leu Leu Pro Ser Arg Phe Arg Gly Arg Glu Ser Met 1 5 10 15 aat cag cag cac cct cta cgc tcg gga aat cgg gca ttg acc tcc aca 96 Asn Gln Gln His Pro Leu Arg Ser Gly Asn Arg Ala Leu Thr Ser Thr 20 25 30 ctc caa ttt cta tcc aaa acg gcg tgt cta cac ccg atc cat acc gtt 144 Leu Gln Phe Leu Ser Lys Thr Ala Cys Leu His Pro Ile His Thr Val 35 40 45 tgc acc ata gct att cta gct agt acc aca tac gtt gga cta ctc aaa 192 Cys Thr Ile Ala Ile Leu Ala Ser Thr Thr Tyr Val Gly Leu Leu Lys 50 55 60 gac agc ttc ttc cat ggc ccc gca aac gtt gat aaa gca gaa tgg ggc 240 Asp Ser Phe Phe His Gly Pro Ala Asn Val Asp Lys Ala Glu Trp Gly 65 70 75 80 tct ttg gtc gaa gga agt cga agc ttg atc acc ggc cca cag aat ggc 288 Ser Leu Val Glu Gly Ser Arg Ser Leu Ile Thr Gly Pro Gln Asn Gly 85 90 95 tgg aag tgg cag agc ttc gac ggg gat gca gat gtt ctc gga gat ttc 336 Trp Lys Trp Gln Ser Phe Asp Gly Asp Ala Asp Val Leu Gly Asp Phe 100 105 110 aac cat caa gca cta atg acc ttg gta ttc ccg ggg tca tat ggg gtt 384 Asn His Gln Ala Leu Met Thr Leu Val Phe Pro Gly Ser Tyr Gly Val 115 120 125 gca tct caa gca gcc tca cca ttc ctt gct ccc ctc cct gtg aac cta 432 Ala Ser Gln Ala Ala Ser Pro Phe Leu Ala Pro Leu Pro Val Asn Leu 130 135 140 tct gtg att gac ctt ccc tca acg tcg agc cct tta acc gcc tat tcg 480 Ser Val Ile Asp Leu Pro Ser Thr Ser Ser Pro Leu Thr Ala Tyr Ser 145 150 155 160 aaa gat aaa gtt ttc gcc ttc tct gtg gaa tac agc agc gcg ccg gaa 528 Lys Asp Lys Val Phe Ala Phe Ser Val Glu Tyr Ser Ser Ala Pro Glu 165 170 175 ctc gtg gct gct gtt caa gaa atc ccc aac aac agt gcc gac ctg aaa 576 Leu Val Ala Ala Val Gln Glu Ile Pro Asn Asn Ser Ala Asp Leu Lys 180 185 190 ttg cag gag acg caa ttg atc gag atg gaa cgc cag atg tgg atc atg 624 Leu Gln Glu Thr Gln Leu Ile Glu Met Glu Arg Gln Met Trp Ile Met 195 200 205 aag gct gcc agg gct cac aca aaa cgc agc ctt gct caa tgg gtg cac 672 Lys Ala Ala Arg Ala His Thr Lys Arg Ser Leu Ala Gln Trp Val His 210 215 220 gat acc tgg aca gag tct ctt gat ctt atc aag agc gct caa acg ctc 720 Asp Thr Trp Thr Glu Ser Leu Asp Leu Ile Lys Ser Ala Gln Thr Leu 225 230 235 240 gac gtg gtt gtc atg gtg cta ggt tat ata tca atg cac ttg act ttc 768 Asp Val Val Val Met Val Leu Gly Tyr Ile Ser Met His Leu Thr Phe 245 250 255 gtc tca ctc ttc ctc agc atg aaa aaa ttg gga tcg aag gtt tgg ctg 816 Val Ser Leu Phe Leu Ser Met Lys Lys Leu Gly Ser Lys Val Trp Leu 260 265 270 gct aca agc gtc ctt ttg tcg tca aca ttt gcc ttt ctc ctc ggt ctc 864 Ala Thr Ser Val Leu Leu Ser Ser Thr Phe Ala Phe Leu Leu Gly Leu 275 280 285 gac gtg gcc ata aga cta ggg gtt ccg atg agc atg agg ttg cta tcc 912 Asp Val Ala Ile Arg Leu Gly Val Pro Met Ser Met Arg Leu Leu Ser 290 295 300 gaa ggc ctc ccc ttc ttg gtg gtg atc gtt ggc ttt gag aag agc atc 960 Glu Gly Leu Pro Phe Leu Val Val Ile Val Gly Phe Glu Lys Ser Ile 305 310 315 320 act ctg acc agg gct gtt ttg tcc tat gct gtg cag cac cga aag ccc 1008 Thr Leu Thr Arg Ala Val Leu Ser Tyr Ala Val Gln His Arg Lys Pro 325 330 335 cag aag ata cag tct gac cag ggt agc gtg aca gcc att gct gaa agt 1056 Gln Lys Ile Gln Ser Asp Gln Gly Ser Val Thr Ala Ile Ala Glu Ser 340 345 350 acc atc aat tac gcc gta cga agc gcc att cgg gag aag ggt tac aat 1104 Thr Ile Asn Tyr Ala Val Arg Ser Ala Ile Arg Glu Lys Gly Tyr Asn 355 360 365 atc gtg tgc cac tac gtg gtc gag atc ctg ctc cta gtt atc ggt gct 1152 Ile Val Cys His Tyr Val Val Glu Ile Leu Leu Leu Val Ile Gly Ala 370 375 380 gtc tta ggc atc caa ggt ggg cta cag cac ttc tgt gtt cta gct gca 1200 Val Leu Gly Ile Gln Gly Gly Leu Gln His Phe Cys Val Leu Ala Ala 385 390 395 400 ttg atc ctg ttc ttt gac tgt ctg ctg ctg ttt aca ttc tac act gcg 1248 Leu Ile Leu Phe Phe Asp Cys Leu Leu Leu Phe Thr Phe Tyr Thr Ala 405 410 415 att ctg tct atc aag ctc gag gta aac cgc ctc aaa cgt cat atc aac 1296 Ile Leu Ser Ile Lys Leu Glu Val Asn Arg Leu Lys Arg His Ile Asn 420 425 430 atg cgg tac gcg ttg gaa gat gag ggt ctc agt cag cgg acg gcg gag 1344 Met Arg Tyr Ala Leu Glu Asp Glu Gly Leu Ser Gln Arg Thr Ala Glu 435 440 445 agt gtc gcg acc agc aat gat gcc caa gac agt gca cgt aca tat ctg 1392 Ser Val Ala Thr Ser Asn Asp Ala Gln Asp Ser Ala Arg Thr Tyr Leu 450 455 460 ttt ggc aat gat atg aaa ggc agc agt gtt ccg aag ttc aaa ttc tgg 1440 Phe Gly Asn Asp Met Lys Gly Ser Ser Val Pro Lys Phe Lys Phe Trp 465 470 475 480 atg gtc gtt ggt ttc ctt atc gtc aac ctc gtc aac atc ggc tcc acc 1488 Met Val Val Gly Phe Leu Ile Val Asn Leu Val Asn Ile Gly Ser Thr 485 490 495 ctt ttc caa gcc tct tct agt gga tcg ttg tcc agt ata tca tct tgg 1536 Leu Phe Gln Ala Ser Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Ile Ser Ser Trp 500 505 510 acc gaa agt ctg agc gga tcg gcc att aaa ccc ccg ctt gag ccc ttc 1584 Thr Glu Ser Leu Ser Gly Ser Ala Ile Lys Pro Pro Leu Glu Pro Phe 515 520 525 aag gta gct gga agt gga cta gat gaa cta ctt ttc cag gca aga ggg 1632 Lys Val Ala Gly Ser Gly Leu Asp Glu Leu Leu Phe Gln Ala Arg Gly 530 535 540 cgc ggt caa tcg act atg gtc act gtc ctc gcc ccc atc aag tac gaa 1680 Arg Gly Gln Ser Thr Met Val Thr Val Leu Ala Pro Ile Lys Tyr Glu 545 550 555 560 cta gag tat cct tcc att cac cgt ggt acc tcg cag cta cac gag tat 1728 Leu Glu Tyr Pro Ser Ile His Arg Gly Thr Ser Gln Leu His Glu Tyr 565 570 575 gga gtt ggt gga aaa atg gtc ggt agc ctg ctc acc agc ctg gaa gat 1776 Gly Val Gly Gly Lys Met Val Gly Ser Leu Leu Thr Ser Leu Glu Asp 580 585 590 ccc gtc ctc tcc aaa tgg gtg ttt gtg gca ctt gcc cta agt gtc gct 1824 Pro Val Leu Ser Lys Trp Val Phe Val Ala Leu Ala Leu Ser Val Ala 595 600 605 ctg aac agc tat ctg ttc aag gcc gcc aga ctg gga atc aaa gat cct 1872 Leu Asn Ser Tyr Leu Phe Lys Ala Ala Arg Leu Gly Ile Lys Asp Pro 610 615 620 aat ctc ccg agt cac cca gtt gat cca gtt gag ctt gac cag gcc gaa 1920 Asn Leu Pro Ser His Pro Val Asp Pro Val Glu Leu Asp Gln Ala Glu 625 630 635 640 agc ttc aac gct gcc cag aac cag acc cct cag att caa tca agt ctc 1968 Ser Phe Asn Ala Ala Gln Asn Gln Thr Pro Gln Ile Gln Ser Ser Leu 645 650 655 caa gct cct cag acc aga gtg ttc act cct acc acc acc gac agt gac 2016 Gln Ala Pro Gln Thr Arg Val Phe Thr Pro Thr Thr Thr Asp Ser Asp 660 665 670 agt gat gcc tca tta gtc tta att aaa gca tct cta aag gtc act aag 2064 Ser Asp Ala Ser Leu Val Leu Ile Lys Ala Ser Leu Lys Val Thr Lys 675 680 685 cga gca gaa gga aag aca gcc act agt gaa ctt ccc gtg tct cgc aca 2112 Arg Ala Glu Gly Lys Thr Ala Thr Ser Glu Leu Pro Val Ser Arg Thr 690 695 700 caa atc gaa ctg gac aat ttg ctg aag cag aac aca atc agc gag ttg 2160 Gln Ile Glu Leu Asp Asn Leu Leu Lys Gln Asn Thr Ile Ser Glu Leu 705 710 715 720 aac gat gag gat gtc gtt gcc ttg tct ttg cgg gga aag gtt ccc ggg 2208 Asn Asp Glu Asp Val Val Ala Leu Ser Leu Arg Gly Lys Val Pro Gly 725 730 735 tat gcc cta gag aag agt ctc aaa gac tgc act cgt gcc gtc aag gtt 2256 Tyr Ala Leu Glu Lys Ser Leu Lys Asp Cys Thr Arg Ala Val Lys Val 740 745 750 cgc cgc tct atc att tcg agg aca ccg gct acc gca gag ctt aca agt 2304 Arg Arg Ser Ile Ile Ser Arg Thr Pro Ala Thr Ala Glu Leu Thr Ser 755 760 765 atg ctg gag cac tcg aag ctg ccg tac gaa aac tac gcc tgg gaa cgc 2352 Met Leu Glu His Ser Lys Leu Pro Tyr Glu Asn Tyr Ala Trp Glu Arg 770 775 780 gtg ctc ggt gca tgt tgc gag aac gtt att ggc tat atg cca gtc cct 2400 Val Leu Gly Ala Cys Cys Glu Asn Val Ile Gly Tyr Met Pro Val Pro 785 790 795 800 gtt ggc gtc gcc ggt cct att gtt atc gac ggc aag agt tat ttc att 2448 Val Gly Val Ala Gly Pro Ile Val Ile Asp Gly Lys Ser Tyr Phe Ile 805 810 815 cct atg gca acc acc gag ggc gtc ctc gtc gct agt gct agc cgt ggc 2496 Pro Met Ala Thr Thr Glu Gly Val Leu Val Ala Ser Ala Ser Arg Gly 820 825 830 agt aag gca atc aac ctc ggt ggc ggt gcc gtg aca gtc ctg act ggc 2544 Ser Lys Ala Ile Asn Leu Gly Gly Gly Ala Val Thr Val Leu Thr Gly 835 840 845 gac ggt atg aca cga ggc ccg tgt gtg aag ttt gat gtc ctt gaa cga 2592 Asp Gly Met Thr Arg Gly Pro Cys Val Lys Phe Asp Val Leu Glu Arg 850 855 860 gct ggt gct gct aag atc tgg ctc gat tcg gac gtc ggc cag acc gta 2640 Ala Gly Ala Ala Lys Ile Trp Leu Asp Ser Asp Val Gly Gln Thr Val 865 870 875 880 atg aaa gaa gcc ttc aat tca acc agc aga ttt gcg cgc tta caa agt 2688 Met Lys Glu Ala Phe Asn Ser Thr Ser Arg Phe Ala Arg Leu Gln Ser 885 890 895 atg cgg aca act atc gcc ggt act cac tta tat att cga ttt aag act 2736 Met Arg Thr Thr Ile Ala Gly Thr His Leu Tyr Ile Arg Phe Lys Thr 900 905 910 act act ggc gac gct atg gga atg aat atg att tct aag ggc gtg gag 2784 Thr Thr Gly Asp Ala Met Gly Met Asn Met Ile Ser Lys Gly Val Glu 915 920 925 cat gca ctg aat gtt atg gcg aca gag gca ggt ttc agc gat atg aat 2832 His Ala Leu Asn Val Met Ala Thr Glu Ala Gly Phe Ser Asp Met Asn 930 935 940 att att acc cta tca gga aat tac tgt acg gat aag aaa cct tca gct 2880 Ile Ile Thr Leu Ser Gly Asn Tyr Cys Thr Asp Lys Lys Pro Ser Ala 945 950 955 960 ttg aat tgg atc gat gga cgg ggc aag ggc att gtg gcc gaa gcc atc 2928 Leu Asn Trp Ile Asp Gly Arg Gly Lys Gly Ile Val Ala Glu Ala Ile 965 970 975 ata ccg gcg aac gtt gtc agg gat gtc tta aag agc gat gtg gat agc 2976 Ile Pro Ala Asn Val Val Arg Asp Val Leu Lys Ser Asp Val Asp Ser 980 985 990 atg gtt cag ctc aac ata tcg aaa aat ctg att ggg tcc gct atg gct 3024 Met Val Gln Leu Asn Ile Ser Lys Asn Leu Ile Gly Ser Ala Met Ala 995 1000 1005 ggc tca gtt ggc ggc ttc aac gcc caa gct gcc aat ctt gcg gca 3069 Gly Ser Val Gly Gly Phe Asn Ala Gln Ala Ala Asn Leu Ala Ala 1010 1015 1020 gcc att ttc att gcc aca ggt cag gat ccg gcg caa gtt gtg gag 3114 Ala Ile Phe Ile Ala Thr Gly Gln Asp Pro Ala Gln Val Val Glu 1025 1030 1035 agc gct aac tgc atc act ctc atg aac aat ctt cgc gga tcg ctt 3159 Ser Ala Asn Cys Ile Thr Leu Met Asn Asn Leu Arg Gly Ser Leu 1040 1045 1050 caa atc tct gtc tcc atg ccg tct att gag gtt gga acg ttg ggc 3204 Gln Ile Ser Val Ser Met Pro Ser Ile Glu Val Gly Thr Leu Gly 1055 1060 1065 ggt ggt acg att ctg gag ccc cag ggc gca atg ctt gac atg ctt 3249 Gly Gly Thr Ile Leu Glu Pro Gln Gly Ala Met Leu Asp Met Leu 1070 1075 1080 ggt gtc cgc gga tca cac ccg acc act ccc ggt gag aat gca cgt 3294 Gly Val Arg Gly Ser His Pro Thr Thr Pro Gly Glu Asn Ala Arg 1085 1090 1095 caa ctt gcg cgc atc atc gga agc gct gtt ttg gct ggg gag ctc 3339 Gln Leu Ala Arg Ile Ile Gly Ser Ala Val Leu Ala Gly Glu Leu 1100 1105 1110 tcg cta tgt gct gcc cta gcc gcc ggt cac ctg gtc aag gcg cac 3384 Ser Leu Cys Ala Ala Leu Ala Ala Gly His Leu Val Lys Ala His 1115 1120 1125 atg gcg cac aac cgt tct gcc ccg gca tct tca gcc cct tct cga 3429 Met Ala His Asn Arg Ser Ala Pro Ala Ser Ser Ala Pro Ser Arg 1130 1135 1140 agt gtc tcc ccg tca ggc gga acc agg aca gtc cct gtt cct aac 3474 Ser Val Ser Pro Ser Gly Gly Thr Arg Thr Val Pro Val Pro Asn 1145 1150 1155 aat gca ctg agg ccg agt gct gca gct act gat cgg gct cga cgc 3519 Asn Ala Leu Arg Pro Ser Ala Ala Ala Thr Asp Arg Ala Arg Arg 1160 1165 1170 tga 3522 <210> 50 <211> 1173 <212> PRT <213> Penicillium citrinum <400> 50 Met Val Ala Ser Leu Leu Pro Ser Arg Phe Arg Gly Arg Glu Ser Met 1 5 10 15 Asn Gln Gln His Pro Leu Arg Ser Gly Asn Arg Ala Leu Thr Ser Thr 20 25 30 Leu Gln Phe Leu Ser Lys Thr Ala Cys Leu His Pro Ile His Thr Val 35 40 45 Cys Thr Ile Ala Ile Leu Ala Ser Thr Thr Tyr Val Gly Leu Leu Lys 50 55 60 Asp Ser Phe Phe His Gly Pro Ala Asn Val Asp Lys Ala Glu Trp Gly 65 70 75 80 Ser Leu Val Glu Gly Ser Arg Ser Leu Ile Thr Gly Pro Gln Asn Gly 85 90 95 Trp Lys Trp Gln Ser Phe Asp Gly Asp Ala Asp Val Leu Gly Asp Phe 100 105 110 Asn His Gln Ala Leu Met Thr Leu Val Phe Pro Gly Ser Tyr Gly Val 115 120 125 Ala Ser Gln Ala Ala Ser Pro Phe Leu Ala Pro Leu Pro Val Asn Leu 130 135 140 Ser Val Ile Asp Leu Pro Ser Thr Ser Ser Pro Leu Thr Ala Tyr Ser 145 150 155 160 Lys Asp Lys Val Phe Ala Phe Ser Val Glu Tyr Ser Ser Ala Pro Glu 165 170 175 Leu Val Ala Ala Val Gln Glu Ile Pro Asn Asn Ser Ala Asp Leu Lys 180 185 190 Leu Gln Glu Thr Gln Leu Ile Glu Met Glu Arg Gln Met Trp Ile Met 195 200 205 Lys Ala Ala Arg Ala His Thr Lys Arg Ser Leu Ala Gln Trp Val His 210 215 220 Asp Thr Trp Thr Glu Ser Leu Asp Leu Ile Lys Ser Ala Gln Thr Leu 225 230 235 240 Asp Val Val Val Met Val Leu Gly Tyr Ile Ser Met His Leu Thr Phe 245 250 255 Val Ser Leu Phe Leu Ser Met Lys Lys Leu Gly Ser Lys Val Trp Leu 260 265 270 Ala Thr Ser Val Leu Leu Ser Ser Thr Phe Ala Phe Leu Leu Gly Leu 275 280 285 Asp Val Ala Ile Arg Leu Gly Val Pro Met Ser Met Arg Leu Leu Ser 290 295 300 Glu Gly Leu Pro Phe Leu Val Val Ile Val Gly Phe Glu Lys Ser Ile 305 310 315 320 Thr Leu Thr Arg Ala Val Leu Ser Tyr Ala Val Gln His Arg Lys Pro 325 330 335 Gln Lys Ile Gln Ser Asp Gln Gly Ser Val Thr Ala Ile Ala Glu Ser 340 345 350 Thr Ile Asn Tyr Ala Val Arg Ser Ala Ile Arg Glu Lys Gly Tyr Asn 355 360 365 Ile Val Cys His Tyr Val Val Glu Ile Leu Leu Leu Val Ile Gly Ala 370 375 380 Val Leu Gly Ile Gln Gly Gly Leu Gln His Phe Cys Val Leu Ala Ala 385 390 395 400 Leu Ile Leu Phe Phe Asp Cys Leu Leu Leu Phe Thr Phe Tyr Thr Ala 405 410 415 Ile Leu Ser Ile Lys Leu Glu Val Asn Arg Leu Lys Arg His Ile Asn 420 425 430 Met Arg Tyr Ala Leu Glu Asp Glu Gly Leu Ser Gln Arg Thr Ala Glu 435 440 445 Ser Val Ala Thr Ser Asn Asp Ala Gln Asp Ser Ala Arg Thr Tyr Leu 450 455 460 Phe Gly Asn Asp Met Lys Gly Ser Ser Val Pro Lys Phe Lys Phe Trp 465 470 475 480 Met Val Val Gly Phe Leu Ile Val Asn Leu Val Asn Ile Gly Ser Thr 485 490 495 Leu Phe Gln Ala Ser Ser Ser Gly Ser Leu Ser Ser Ile Ser Ser Trp 500 505 510 Thr Glu Ser Leu Ser Gly Ser Ala Ile Lys Pro Pro Leu Glu Pro Phe 515 520 525 Lys Val Ala Gly Ser Gly Leu Asp Glu Leu Leu Phe Gln Ala Arg Gly 530 535 540 Arg Gly Gln Ser Thr Met Val Thr Val Leu Ala Pro Ile Lys Tyr Glu 545 550 555 560 Leu Glu Tyr Pro Ser Ile His Arg Gly Thr Ser Gln Leu His Glu Tyr 565 570 575 Gly Val Gly Gly Lys Met Val Gly Ser Leu Leu Thr Ser Leu Glu Asp 580 585 590 Pro Val Leu Ser Lys Trp Val Phe Val Ala Leu Ala Leu Ser Val Ala 595 600 605 Leu Asn Ser Tyr Leu Phe Lys Ala Ala Arg Leu Gly Ile Lys Asp Pro 610 615 620 Asn Leu Pro Ser His Pro Val Asp Pro Val Glu Leu Asp Gln Ala Glu 625 630 635 640 Ser Phe Asn Ala Ala Gln Asn Gln Thr Pro Gln Ile Gln Ser Ser Leu 645 650 655 Gln Ala Pro Gln Thr Arg Val Phe Thr Pro Thr Thr Thr Asp Ser Asp 660 665 670 Ser Asp Ala Ser Leu Val Leu Ile Lys Ala Ser Leu Lys Val Thr Lys 675 680 685 Arg Ala Glu Gly Lys Thr Ala Thr Ser Glu Leu Pro Val Ser Arg Thr 690 695 700 Gln Ile Glu Leu Asp Asn Leu Leu Lys Gln Asn Thr Ile Ser Glu Leu 705 710 715 720 Asn Asp Glu Asp Val Val Ala Leu Ser Leu Arg Gly Lys Val Pro Gly 725 730 735 Tyr Ala Leu Glu Lys Ser Leu Lys Asp Cys Thr Arg Ala Val Lys Val 740 745 750 Arg Arg Ser Ile Ile Ser Arg Thr Pro Ala Thr Ala Glu Leu Thr Ser 755 760 765 Met Leu Glu His Ser Lys Leu Pro Tyr Glu Asn Tyr Ala Trp Glu Arg 770 775 780 Val Leu Gly Ala Cys Cys Glu Asn Val Ile Gly Tyr Met Pro Val Pro 785 790 795 800 Val Gly Val Ala Gly Pro Ile Val Ile Asp Gly Lys Ser Tyr Phe Ile 805 810 815 Pro Met Ala Thr Thr Glu Gly Val Leu Val Ala Ser Ala Ser Arg Gly 820 825 830 Ser Lys Ala Ile Asn Leu Gly Gly Gly Ala Val Thr Val Leu Thr Gly 835 840 845 Asp Gly Met Thr Arg Gly Pro Cys Val Lys Phe Asp Val Leu Glu Arg 850 855 860 Ala Gly Ala Ala Lys Ile Trp Leu Asp Ser Asp Val Gly Gln Thr Val 865 870 875 880 Met Lys Glu Ala Phe Asn Ser Thr Ser Arg Phe Ala Arg Leu Gln Ser 885 890 895 Met Arg Thr Thr Ile Ala Gly Thr His Leu Tyr Ile Arg Phe Lys Thr 900 905 910 Thr Thr Gly Asp Ala Met Gly Met Asn Met Ile Ser Lys Gly Val Glu 915 920 925 His Ala Leu Asn Val Met Ala Thr Glu Ala Gly Phe Ser Asp Met Asn 930 935 940 Ile Ile Thr Leu Ser Gly Asn Tyr Cys Thr Asp Lys Lys Pro Ser Ala 945 950 955 960 Leu Asn Trp Ile Asp Gly Arg Gly Lys Gly Ile Val Ala Glu Ala Ile 965 970 975 Ile Pro Ala Asn Val Val Arg Asp Val Leu Lys Ser Asp Val Asp Ser 980 985 990 Met Val Gln Leu Asn Ile Ser Lys Asn Leu Ile Gly Ser Ala Met Ala 995 1000 1005 Gly Ser Val Gly Gly Phe Asn Ala Gln Ala Ala Asn Leu Ala Ala 1010 1015 1020 Ala Ile Phe Ile Ala Thr Gly Gln Asp Pro Ala Gln Val Val Glu 1025 1030 1035 Ser Ala Asn Cys Ile Thr Leu Met Asn Asn Leu Arg Gly Ser Leu 1040 1045 1050 Gln Ile Ser Val Ser Met Pro Ser Ile Glu Val Gly Thr Leu Gly 1055 1060 1065 Gly Gly Thr Ile Leu Glu Pro Gln Gly Ala Met Leu Asp Met Leu 1070 1075 1080 Gly Val Arg Gly Ser His Pro Thr Thr Pro Gly Glu Asn Ala Arg 1085 1090 1095 Gln Leu Ala Arg Ile Ile Gly Ser Ala Val Leu Ala Gly Glu Leu 1100 1105 1110 Ser Leu Cys Ala Ala Leu Ala Ala Gly His Leu Val Lys Ala His 1115 1120 1125 Met Ala His Asn Arg Ser Ala Pro Ala Ser Ser Ala Pro Ser Arg 1130 1135 1140 Ser Val Ser Pro Ser Gly Gly Thr Arg Thr Val Pro Val Pro Asn 1145 1150 1155 Asn Ala Leu Arg Pro Ser Ala Ala Ala Thr Asp Arg Ala Arg Arg 1160 1165 1170 <210> 51 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 51 gcaagctctg ctaccagcac 20 <210> 52 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 52 ctaggccaac ttcagagccg 20 <210> 53 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 53 agtcatgcag gatctgggtc 20 <210> 54 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 54 gcagacacat cggtgaagtc 20 <210> 55 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 55 aaaccgcacc tgtctattcc 20 <210> 56 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 56 ctttgtggtt ggatgcatac 20 <210> 57 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 57 cgctctatca tttcgaggac 20 <210> 58 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 58 tcaatagacg gcatggagac 20 <210> 59 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 59 atgtcagaac ctctaccccc 20 <210> 60 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 60 tcaagcatca gtctcaggca 20 <210> 61 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 61 atgtccctgc cgcatgcaac 20 <210> 62 <211> 20 <212> DNA <213> Penicillium citrinum <400> 62 ctaagcaata ttgtgtttct 20

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:80） (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:80） (72)発明者 吉川 博治 福島県いわき市泉町下川字大剱389−４ 三共株式会社内 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA80 CA04 DA06 DA11 EA04 GA11 4B064 AE46 CA02 CA05 CA19 CC24 DA06 4B065 AA26X AA67X AA67Y AB01 AC14 BA02 CA44

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】以下の群から選択されるＤＮＡ。 （ａ）配列表の配列番号３７のヌクレオチド番号１乃至
   １６６２で示される塩基配列を１つ又は複数含むことか
   らなり、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内に導入されること
   により該生産微生物のＭＬ−２３６Ｂ生合成を促進する
   ことを特徴とするＤＮＡ： （ｂ）（ａ）記載のＤＮＡとストリンジェントな条件下
   でハイブリダイズし、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内に導
   入されることにより該生産微生物のＭＬ−２３６Ｂ生合
   成を促進することを特徴とするＤＮＡ。
2. 【請求項２】形質転換大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡＫ
   ｅｘｐＥ ＳＡＮＫ ７２４９９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−
   ７００５）より得ることができる、請求項１記載のＤＮ
   Ａ。
3. 【請求項３】以下の群から選択されるＤＮＡ。 （ａ）配列表の配列番号４１のヌクレオチド番号１乃至
   １３８０で示される塩基配列を１つ又は複数含むことか
   らなり、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内に導入されること
   により該生産微生物のＭＬ−２３６Ｂ生合成を促進する
   ことを特徴とするＤＮＡ： （ｂ）（ａ）記載のＤＮＡとストリンジェントな条件下
   でハイブリダイズし、ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物内に導
   入されることにより該生産微生物のＭＬ−２３６Ｂ生合
   成を促進することを特徴とするＤＮＡ。
4. 【請求項４】形質転換大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡＫ
   ｅｘｐＲ ＳＡＮＫ ７２５９９株（ＦＥＲＭ ＢＰ−
   ７００６）より得ることができる、請求項３記載のＤＮ
   Ａ。
5. 【請求項５】請求項１乃至４のいずれか一つに記載のＤ
   ＮＡを含む組換えＤＮＡベクター。
6. 【請求項６】形質転換大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡＫ
   ｅｘｐＥ ＳＡＮＫ ７２４９９（ＦＥＲＭ ＢＰ−７
   ００５）株より得ることができる、請求項５記載の組換
   えＤＮＡベクター。
7. 【請求項７】形質転換大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡＫ
   ｅｘｐＲ ＳＡＮＫ ７２５９９（ＦＥＲＭ ＢＰ−７
   ００６）株より得ることができる、請求項５記載の組換
   えＤＮＡベクター。
8. 【請求項８】請求項５乃至７のいずれか一つに記載の組
   換えＤＮＡベクターで形質転換された宿主細胞。
9. 【請求項９】ＭＬ−２３６Ｂ生産微生物であることを特
   徴とする請求項８記載の宿主細胞。
10. 【請求項１０】ペニシリウム・シトリナム（Penicilliu
    m citrinum）であることを特徴とする、請求項９記載の
    宿主細胞。
11. 【請求項１１】請求項９又は１０記載の宿主細胞を培養
    し、次いで該培養物からＭＬ−２３６Ｂを回収すること
    を特徴とする、ＭＬ−２３６Ｂの製造法。
12. 【請求項１２】大腸菌であることを特徴とする、請求項
    ８記載の宿主細胞。
13. 【請求項１３】形質転換大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡ
    ＫｅｘｐＥ ＳＡＮＫ ７２４９９（ＦＥＲＭ ＢＰ−
    ７００５）株である、請求項１２記載の宿主細胞。
14. 【請求項１４】形質転換大腸菌 Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＳＡ
    ＫｅｘｐＲ ＳＡＮＫ ７２５９９（ＦＥＲＭ ＢＰ−
    ７００６）株である、請求項１２記載の宿主細胞。