JP2002302457A - 腎疾患治療剤 - Google Patents
腎疾患治療剤Info
- Publication number
- JP2002302457A JP2002302457A JP2001402345A JP2001402345A JP2002302457A JP 2002302457 A JP2002302457 A JP 2002302457A JP 2001402345 A JP2001402345 A JP 2001402345A JP 2001402345 A JP2001402345 A JP 2001402345A JP 2002302457 A JP2002302457 A JP 2002302457A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- administration
- renal disease
- collagen
- weeks
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】本発明は、ＮＣ１又はその抗体投与により作製
した腎疾患モデルによりスクリーニングした腎疾患治療
剤に関する。 【構成】以下の通り、構成する。 イ、タイプ４コラーゲンのＮＣ１分画（又はその部分や
構成ペプタイド）又はその抗体を動物に投与して作製し
た「腎疾患」モデルを用いて開発する腎疾患治療剤。 ロ、タイプ４コラーゲンのＮＣ１分画（又はその部分や
構成ペプタイド）より成るか、これらを抗原として作製
した抗体より成る腎疾患治療剤。 ハ、免疫抑制効果や抗アレルギー効果を持つ腎疾患治療
剤。 ニ、抗ＮＣ１抗体の測定による、腎炎の初期を検出する
方法。
した腎疾患モデルによりスクリーニングした腎疾患治療
剤に関する。 【構成】以下の通り、構成する。 イ、タイプ４コラーゲンのＮＣ１分画（又はその部分や
構成ペプタイド）又はその抗体を動物に投与して作製し
た「腎疾患」モデルを用いて開発する腎疾患治療剤。 ロ、タイプ４コラーゲンのＮＣ１分画（又はその部分や
構成ペプタイド）より成るか、これらを抗原として作製
した抗体より成る腎疾患治療剤。 ハ、免疫抑制効果や抗アレルギー効果を持つ腎疾患治療
剤。 ニ、抗ＮＣ１抗体の測定による、腎炎の初期を検出する
方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、腎疾患モデル動物及び
腎疾患モデルによりスクリーニングした腎疾患治療剤に
関する。
腎疾患モデルによりスクリーニングした腎疾患治療剤に
関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、動物に腎炎モデルを作製するに
は、１）腎臓の５／６切除（発症までに２−３ヵ月と長
期間を要する）、２）抗サイ１の静注（腎炎の期間は１
週間と短くその後自然回復する）、３）片側腎の切除と
「２）」との併用（再現性が難しく、しかも発症までに
２−３ヵ月を要する）、４）アドリアマイシンなどの薬
剤静注（発症までに２−３ヵ月と長期間を要する）など
の方法がある。従来の方法はいずれも一長一短があり、
薬物のスクリーニングや副作用検出にふさわしいもので
はなかった。一方、腎炎モデルとして、腎臓の糸球体基
底膜からのタイプ４コラーゲンのＮＣ１分画を用いる方
法も文献（ラット投与による実験）に記載されている
が、投与６週間後には半数が腎不全で死ぬとも、記載さ
れており、余りにも激症であり、薬物のスクリーニング
や副作用検出にふさわしいものではなかった。又抗原と
してのＮＣ１の抽出精製の困難さもあり、薬効評価に用
いられていなかった。
は、１）腎臓の５／６切除（発症までに２−３ヵ月と長
期間を要する）、２）抗サイ１の静注（腎炎の期間は１
週間と短くその後自然回復する）、３）片側腎の切除と
「２）」との併用（再現性が難しく、しかも発症までに
２−３ヵ月を要する）、４）アドリアマイシンなどの薬
剤静注（発症までに２−３ヵ月と長期間を要する）など
の方法がある。従来の方法はいずれも一長一短があり、
薬物のスクリーニングや副作用検出にふさわしいもので
はなかった。一方、腎炎モデルとして、腎臓の糸球体基
底膜からのタイプ４コラーゲンのＮＣ１分画を用いる方
法も文献（ラット投与による実験）に記載されている
が、投与６週間後には半数が腎不全で死ぬとも、記載さ
れており、余りにも激症であり、薬物のスクリーニング
や副作用検出にふさわしいものではなかった。又抗原と
してのＮＣ１の抽出精製の困難さもあり、薬効評価に用
いられていなかった。
【０００３】
【発明が解決しょうとする課題】従来の方法は、１）発
症まで長時間を要するので、実験に直ぐ掛かれず動物飼
育費も重む、２）実験途中で自然回復するので、薬効の
判定がし難い、３）再現性がなく、追試で薬効を比較し
難い、４）激症のため、実験途中で死ぬなどの欠点があ
った。以上の欠点を解消した腎炎モデルが作製できれ
ば、腎疾患治療薬の開発や他薬剤の副作用検出（腎疾患
への影響）に利用できる。
症まで長時間を要するので、実験に直ぐ掛かれず動物飼
育費も重む、２）実験途中で自然回復するので、薬効の
判定がし難い、３）再現性がなく、追試で薬効を比較し
難い、４）激症のため、実験途中で死ぬなどの欠点があ
った。以上の欠点を解消した腎炎モデルが作製できれ
ば、腎疾患治療薬の開発や他薬剤の副作用検出（腎疾患
への影響）に利用できる。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者は、長い間腎疾
患や他疾患に伴う二次性腎疾患の治療薬開発と早期検出
方法に努めてきた。先ず、抽出精製方法を工夫し、ウシ
腎臓の糸球体基底膜から、安定的に品質維持された「タ
イプ４コラーゲンのＮＣ１分画（以降ＮＣ１と言う）」
を得た。（本発明に於いてタイプ４コラーゲンはタイプ
ＩＶコラーゲンと、ＮＣ１分画はＮＣ１領域と同義に用
いる。） つまり、１）抽出過程で蛋白分解酵素阻害剤を適量加え
る（ＮＥＭ及びＰＭＳＦを抽出溶液中にそれぞれ最終濃
度０．１Ｍから０．０１ｍＭになるように、望ましく
は、１０ｍＭから０．１ｍＭになるように加える）、
２）精製途中で加熱（４０度以上５０度以下で５分以
上）する、３）電気泳動で特定バンド（４９〜３３ｋＤ
ａの間及び２８〜２０ｋＤａ）を示すものをカラム抽出
（吸光度が７Ｓのピークの９０％以上で、４倍以内のも
の）する−である。このＮＣ１は常に一定の生化学的特
性と保存性を示す。
患や他疾患に伴う二次性腎疾患の治療薬開発と早期検出
方法に努めてきた。先ず、抽出精製方法を工夫し、ウシ
腎臓の糸球体基底膜から、安定的に品質維持された「タ
イプ４コラーゲンのＮＣ１分画（以降ＮＣ１と言う）」
を得た。（本発明に於いてタイプ４コラーゲンはタイプ
ＩＶコラーゲンと、ＮＣ１分画はＮＣ１領域と同義に用
いる。） つまり、１）抽出過程で蛋白分解酵素阻害剤を適量加え
る（ＮＥＭ及びＰＭＳＦを抽出溶液中にそれぞれ最終濃
度０．１Ｍから０．０１ｍＭになるように、望ましく
は、１０ｍＭから０．１ｍＭになるように加える）、
２）精製途中で加熱（４０度以上５０度以下で５分以
上）する、３）電気泳動で特定バンド（４９〜３３ｋＤ
ａの間及び２８〜２０ｋＤａ）を示すものをカラム抽出
（吸光度が７Ｓのピークの９０％以上で、４倍以内のも
の）する−である。このＮＣ１は常に一定の生化学的特
性と保存性を示す。
【０００５】さらに腎炎モデルを作製する時、ＮＣ１の
投与方法は、ＮＣ１と同容量のＦＣＡとを混和し、両後
足のフットパット（又は、尾根部や背部の皮内）に投与
する。サルでは、例えばカニクイザル（投与時体重２ｋ
ｇから３．５ｋｇが望ましい）は、３ｍｇ／ｋｇから
０．１ｍｇ／ｋｇまでの量を投与し、望ましくは、１ｍ
ｇ／ｋｇである。ラット（投与時４週令から２０週令）
やマウス（投与時４週令から２０週令）では、２ｍｇ／
匹から５μｇ／匹までの量を投与し、望ましくは、５μ
ｇ／匹から２００μｇ／匹であり、より望ましくは、１
０μｇ／匹から１００μｇ／匹である。抗体投与の場合
は、抗体を動物の静脈や腹腔に単独投与する。抗体は、
ポリクロでも、モノクロでも良い。モノクロは、ＩｇＧ
１でもＩｇＧ２でも良いが、ＩｇＧ１の方が弱い腎炎を
惹起する。ポリクロはポリクロを作製する時、動物種
間、個体間で抗体価がばらつくので、使用時に留意する
必要があるが、モノクロはいつも一定の抗体価を示すも
のが得られるので、作製の手間は要するが使用は楽であ
る。サルでのモノクロ投与は、例えばカニクイザル（投
与時体重２ｋｇから３．５ｋｇが望ましい）は、２ｍｇ
／ｋｇから１０μｇ／ｋｇまでの量を投与し、望ましく
は、１ｍｇ／ｋｇから５０μｇ／ｋｇである。ラット
（投与時４週令から１５週令）やマウス（投与時４週令
から１５週令）では、１ｍｇ／匹から５μｇ／匹までの
量を投与し、望ましくは、２００μｇ／匹から５μｇ／
匹である。その結果、提示の投与法と量でラットやマウ
ス等のげっ歯類及びサルなどの哺乳動物に感作した時
に、確実に腎炎を発症させながら、実験途中で死亡など
の激症を生じさせない特徴を持つ。
投与方法は、ＮＣ１と同容量のＦＣＡとを混和し、両後
足のフットパット（又は、尾根部や背部の皮内）に投与
する。サルでは、例えばカニクイザル（投与時体重２ｋ
ｇから３．５ｋｇが望ましい）は、３ｍｇ／ｋｇから
０．１ｍｇ／ｋｇまでの量を投与し、望ましくは、１ｍ
ｇ／ｋｇである。ラット（投与時４週令から２０週令）
やマウス（投与時４週令から２０週令）では、２ｍｇ／
匹から５μｇ／匹までの量を投与し、望ましくは、５μ
ｇ／匹から２００μｇ／匹であり、より望ましくは、１
０μｇ／匹から１００μｇ／匹である。抗体投与の場合
は、抗体を動物の静脈や腹腔に単独投与する。抗体は、
ポリクロでも、モノクロでも良い。モノクロは、ＩｇＧ
１でもＩｇＧ２でも良いが、ＩｇＧ１の方が弱い腎炎を
惹起する。ポリクロはポリクロを作製する時、動物種
間、個体間で抗体価がばらつくので、使用時に留意する
必要があるが、モノクロはいつも一定の抗体価を示すも
のが得られるので、作製の手間は要するが使用は楽であ
る。サルでのモノクロ投与は、例えばカニクイザル（投
与時体重２ｋｇから３．５ｋｇが望ましい）は、２ｍｇ
／ｋｇから１０μｇ／ｋｇまでの量を投与し、望ましく
は、１ｍｇ／ｋｇから５０μｇ／ｋｇである。ラット
（投与時４週令から１５週令）やマウス（投与時４週令
から１５週令）では、１ｍｇ／匹から５μｇ／匹までの
量を投与し、望ましくは、２００μｇ／匹から５μｇ／
匹である。その結果、提示の投与法と量でラットやマウ
ス等のげっ歯類及びサルなどの哺乳動物に感作した時
に、確実に腎炎を発症させながら、実験途中で死亡など
の激症を生じさせない特徴を持つ。
【０００６】本発明に用いるＮＣ１は、ウシ以外の動物
でも良く、例えば、ヒト、サル、ブタ、羊、ヤギ等の哺
乳類、ニワトリ等の鳥類、ラット、マウス等のげっし
類、鮭、鮫などの魚類、昆虫類、その他の動物や、細
菌、微生物でも良い。又、ＮＣ１の由来臓器は、腎臓に
限らず、胎盤、眼その他いずれの臓器でも良いが、腎臓
又は胎盤が望ましい。他の臓器に比較し、大量に入手し
やすく精製の費用も安くなる。更に、ＮＣ１は、抽出精
製のみでなく合成しても良く、遺伝子操作で、その全体
又は、部分を合成させて使用しても良い。しかし、ＮＣ
１全体を用いることは、特定α鎖（α３やα４）のＮＣ
１を用いるより発症を緩やかにする。
でも良く、例えば、ヒト、サル、ブタ、羊、ヤギ等の哺
乳類、ニワトリ等の鳥類、ラット、マウス等のげっし
類、鮭、鮫などの魚類、昆虫類、その他の動物や、細
菌、微生物でも良い。又、ＮＣ１の由来臓器は、腎臓に
限らず、胎盤、眼その他いずれの臓器でも良いが、腎臓
又は胎盤が望ましい。他の臓器に比較し、大量に入手し
やすく精製の費用も安くなる。更に、ＮＣ１は、抽出精
製のみでなく合成しても良く、遺伝子操作で、その全体
又は、部分を合成させて使用しても良い。しかし、ＮＣ
１全体を用いることは、特定α鎖（α３やα４）のＮＣ
１を用いるより発症を緩やかにする。
【０００７】次に、この疾患モデルを用いて、薬物のス
クリーニングを行い腎炎治療薬を見出だした。サイクロ
スポリンを始めとする免疫抑制剤は、腎炎治療薬と成り
得るし、従来、抗炎症剤、抗アレルギー剤、アトピー治
療剤として用いられていた薬剤も、腎炎治療薬として効
能が拡大できる。同時に、本発明のスクリーニング方法
の有効性も確認できた。更に腎炎に伴う二次性疾患の治
療剤、例えば透析剤、腎性貧血剤、降圧剤、骨疾患治療
剤のスクリーニングや評価にも使える。一方、長期に薬
剤を服用する糖尿病、高血圧、骨粗鬆症、高脂血症、そ
の他の慢性疾患では、長期の服用による腎臓への影響が
懸念される。特に、これらの薬を利用する機会の多い中
高年は、若年者にくらべ腎臓の代謝能力が著しく劣って
いるので、より留意する必要がある。その点、本発明の
腎炎モデルを、一般薬剤の長期連用による腎機能の劣化
している中高年者への影響を検討するのにもふさわし
い。もちろん、短期間投与の薬剤、例えば抗生物質など
の腎疾患患者への影響を確認するにも適している。
クリーニングを行い腎炎治療薬を見出だした。サイクロ
スポリンを始めとする免疫抑制剤は、腎炎治療薬と成り
得るし、従来、抗炎症剤、抗アレルギー剤、アトピー治
療剤として用いられていた薬剤も、腎炎治療薬として効
能が拡大できる。同時に、本発明のスクリーニング方法
の有効性も確認できた。更に腎炎に伴う二次性疾患の治
療剤、例えば透析剤、腎性貧血剤、降圧剤、骨疾患治療
剤のスクリーニングや評価にも使える。一方、長期に薬
剤を服用する糖尿病、高血圧、骨粗鬆症、高脂血症、そ
の他の慢性疾患では、長期の服用による腎臓への影響が
懸念される。特に、これらの薬を利用する機会の多い中
高年は、若年者にくらべ腎臓の代謝能力が著しく劣って
いるので、より留意する必要がある。その点、本発明の
腎炎モデルを、一般薬剤の長期連用による腎機能の劣化
している中高年者への影響を検討するのにもふさわし
い。もちろん、短期間投与の薬剤、例えば抗生物質など
の腎疾患患者への影響を確認するにも適している。
【０００８】又、ＮＣ１や、抗ＮＣ１抗体は、腎炎治療
薬となり得る。ＮＣ１や、抗ＮＣ１抗体の事前投与で腎
炎発症を抑制する。この場合は、感作に先立つ薬物の事
前投与によるスクリーニングである。本方法もスクリー
ニング方法として有効である。更に、血清中の抗ＮＣ１
抗体の検出は、蛋白尿に先立つので、腎疾患の早期検出
に有用である。
薬となり得る。ＮＣ１や、抗ＮＣ１抗体の事前投与で腎
炎発症を抑制する。この場合は、感作に先立つ薬物の事
前投与によるスクリーニングである。本方法もスクリー
ニング方法として有効である。更に、血清中の抗ＮＣ１
抗体の検出は、蛋白尿に先立つので、腎疾患の早期検出
に有用である。
【０００９】血液中の抗ＮＣ１抗体を免疫反応を用いて
測定する方法とその試薬。ラット血清中の抗ＮＣ１抗体
を、酵素免疫反応（ＥＬＩＳＡ）で測定する時、試薬と
して、１）ＮＣ１をコートしたプレート、２）酵素標識
抗ラットＩｇＧ抗体、３）発色基質（ＴＭＢ，過酸化水
素）、４）反応停止液（硫酸）を用いて測定する。もち
ろん、免疫反応として、酵素免疫反応に限定されず、Ａ
Ｂ法、ＲＩＡ，免疫発光法、沈降反応、凝集反応他を含
み、酵素標識の抗体としては、ポリクローナル又はモノ
クローナル抗体を問わず、又それを放射性物質、発光物
質で標識した物、無標識物でも良い。反応形式は、サン
ドイッチ法に囚われず、競合法等でも良い。プレートに
替え、ガラス、磁性物質、ラテックスにしても良く、無
しにして固相法を用いないことでも良い。プレートにＮ
Ｃ１をコートする時、コート物質をアビジン、ビオチ
ン、又はこれらの結合した成分を介しても良い。コート
時に用いるＮＣ１の動物種としては、検体と同一の種が
望ましく（ここではラット）又、ウシ、ヒト、サル、ブ
タ、羊、ヤギ等の哺乳類、ニワトリ等の鳥類、マウス等
のげっし類、魚類、その他の動物でも良い。ＮＣ１の由
来臓器は、腎臓が望ましいが、これに限定されない。プ
レートにコートするＮＣ１は、複数種を混合したもので
も良い。又、ＮＣ１は、生体抽出物やリコンビナントの
みでなく、構成ペプタイド（特定分画、合成品を含む）
でも良い。更に第二抗体は、抗検体ＩｇＧ抗体に限定さ
れず、抗検体ＩｇＭ抗体、抗検体ＩｇＡ抗体、抗検体イ
ムノグロブリン抗体でも良いが、抗検体ＩｇＧ抗体が望
ましい。測定する検体がヒト，サル、マウスなどラット
以外の時は、前述のラット用試薬成分を検体に合わせ
る。
測定する方法とその試薬。ラット血清中の抗ＮＣ１抗体
を、酵素免疫反応（ＥＬＩＳＡ）で測定する時、試薬と
して、１）ＮＣ１をコートしたプレート、２）酵素標識
抗ラットＩｇＧ抗体、３）発色基質（ＴＭＢ，過酸化水
素）、４）反応停止液（硫酸）を用いて測定する。もち
ろん、免疫反応として、酵素免疫反応に限定されず、Ａ
Ｂ法、ＲＩＡ，免疫発光法、沈降反応、凝集反応他を含
み、酵素標識の抗体としては、ポリクローナル又はモノ
クローナル抗体を問わず、又それを放射性物質、発光物
質で標識した物、無標識物でも良い。反応形式は、サン
ドイッチ法に囚われず、競合法等でも良い。プレートに
替え、ガラス、磁性物質、ラテックスにしても良く、無
しにして固相法を用いないことでも良い。プレートにＮ
Ｃ１をコートする時、コート物質をアビジン、ビオチ
ン、又はこれらの結合した成分を介しても良い。コート
時に用いるＮＣ１の動物種としては、検体と同一の種が
望ましく（ここではラット）又、ウシ、ヒト、サル、ブ
タ、羊、ヤギ等の哺乳類、ニワトリ等の鳥類、マウス等
のげっし類、魚類、その他の動物でも良い。ＮＣ１の由
来臓器は、腎臓が望ましいが、これに限定されない。プ
レートにコートするＮＣ１は、複数種を混合したもので
も良い。又、ＮＣ１は、生体抽出物やリコンビナントの
みでなく、構成ペプタイド（特定分画、合成品を含む）
でも良い。更に第二抗体は、抗検体ＩｇＧ抗体に限定さ
れず、抗検体ＩｇＭ抗体、抗検体ＩｇＡ抗体、抗検体イ
ムノグロブリン抗体でも良いが、抗検体ＩｇＧ抗体が望
ましい。測定する検体がヒト，サル、マウスなどラット
以外の時は、前述のラット用試薬成分を検体に合わせ
る。
【００１０】
【実施例１】１．ＮＣ１の特性；（付表１、付表２） ウシ腎臓の糸球体基底膜よりタイプ４コラーゲンのＮＣ
１を精製し、その特徴は下記の通りである。 ・ＮＣ１の電気泳動像は一定（４９〜３３ｋＤａの間及
び２８〜２０ｋＤａ） ・抗タイプ４コラーゲン（三本鎖領域）抗体と反応しな
いが、作製した各種の抗ＮＣ１抗体（ポリクロ／ウサ
ギ、ラット、モノクロ／マウス）と反応する。 ・同上の抗ＮＣ１抗体は別途用意したタイプ４コラーゲ
ン（Ｋ３４ ヒト胎盤由来タイプ４コラーゲン コラー
ゲン技術研修会製）と反応しない。 ・提示方法で、動物に投与した時、腎炎の発症率１００
％で、投与６週後の生存率９５％以上となるタイプ４コ
ラーゲンのＮＣ１。
１を精製し、その特徴は下記の通りである。 ・ＮＣ１の電気泳動像は一定（４９〜３３ｋＤａの間及
び２８〜２０ｋＤａ） ・抗タイプ４コラーゲン（三本鎖領域）抗体と反応しな
いが、作製した各種の抗ＮＣ１抗体（ポリクロ／ウサ
ギ、ラット、モノクロ／マウス）と反応する。 ・同上の抗ＮＣ１抗体は別途用意したタイプ４コラーゲ
ン（Ｋ３４ ヒト胎盤由来タイプ４コラーゲン コラー
ゲン技術研修会製）と反応しない。 ・提示方法で、動物に投与した時、腎炎の発症率１００
％で、投与６週後の生存率９５％以上となるタイプ４コ
ラーゲンのＮＣ１。
【００１１】
【実施例２】２．ＮＣ１感作によるラット腎炎モデル （以降実施例で用いるＮＣ１は、上記「実施例１」で得
たものである） １）発症試験１ ラット；ウイスター系・雌・５週令・３匹×２群（チャ
ールスリバー社） 投与部位；尾根部皮内 投与量；ＦＣＡと共に初回ＮＣ１を０．０５ｍｇ／匹、
以降２週間毎に０．１ｍｇ×４回 結果；投与個体は全て強蛋白尿を示した。 実験終了後は全て生存した。実験中の挙動（投与部位の
足腫れ有り）・体重には健常群と投与群とに大差がなか
った。し初回投与後３５日で抗体ＯＤ値は８０００倍稀
釈も原血清も同じだった。初回投与後４２日の測定で随
時尿の蛋白は最高濃度を示した。 結論；追加免疫の繰り返しで、抗体価が上昇し、全て発
症、全て生存し、腎炎モデルとして、使用可能である。 ２）発症試験２ ラット；ＷＫＹ／ＮＣｒｊ・雌・７週令・投与１０匹非
投与５匹 投与部位；両後足フットパット 投与量；ＦＣＡ（１対１）と共にＮＣ１として０．１ｍ
ｇ（片足０．０５ｍｇ）×１回 結果；投与個体は３週間後に全て強蛋白尿を示した。 実験終了の６週間まで全て生存した。剖検で糸球体の破
壊が認められた。実験中の挙動・体重には非投与群とに
差が無かった。 （投与部位の腫れで４−５日足を引きずる）蛋白尿は、
投与後２週間で２匹が、３週間後で全１０匹が陽性を示
した。血清中抗体価は投与後２週間で全１０匹が２００
０以上、４週間で４４００より１００００以上まで上昇
した（抗体価は吸光度１．００になる稀釈倍率で示
す）。尿中抗体価は投与後２週間で２匹の蛋白尿陽性検
体のみで１０と２０、４週間で全１０匹が５０〜１００
０を示した。（添付３、添付４） 結論；血清中の抗体は、尿中蛋白や尿中抗体に先行して
検出されるので、腎疾患の早期検出に有用である。抗体
価は、血清中が尿中の１０倍以上であったので、血清測
定が望ましい。 ３）発症試験３ ラット；ウイスター・雌・８週令・３匹 投与部位；背部皮内 投与量；ＦＣＡ（１対１）と共にＮＣ１として０．１ｍ
ｇ、追加免疫２週後同量 測定；尿試験紙（テルモウリエース；蛋白陽性は＋１〜
＋４） 結果；投与１週後より５週まで、±から＋１で、６週以
降３か月間、＋１又は＋２で弱い蛋白尿を継続し、同時
に潜血反応も示した。 結論；軽微で長期の蛋白尿出現は、軽症の腎炎モデルと
して有用である。
たものである） １）発症試験１ ラット；ウイスター系・雌・５週令・３匹×２群（チャ
ールスリバー社） 投与部位；尾根部皮内 投与量；ＦＣＡと共に初回ＮＣ１を０．０５ｍｇ／匹、
以降２週間毎に０．１ｍｇ×４回 結果；投与個体は全て強蛋白尿を示した。 実験終了後は全て生存した。実験中の挙動（投与部位の
足腫れ有り）・体重には健常群と投与群とに大差がなか
った。し初回投与後３５日で抗体ＯＤ値は８０００倍稀
釈も原血清も同じだった。初回投与後４２日の測定で随
時尿の蛋白は最高濃度を示した。 結論；追加免疫の繰り返しで、抗体価が上昇し、全て発
症、全て生存し、腎炎モデルとして、使用可能である。 ２）発症試験２ ラット；ＷＫＹ／ＮＣｒｊ・雌・７週令・投与１０匹非
投与５匹 投与部位；両後足フットパット 投与量；ＦＣＡ（１対１）と共にＮＣ１として０．１ｍ
ｇ（片足０．０５ｍｇ）×１回 結果；投与個体は３週間後に全て強蛋白尿を示した。 実験終了の６週間まで全て生存した。剖検で糸球体の破
壊が認められた。実験中の挙動・体重には非投与群とに
差が無かった。 （投与部位の腫れで４−５日足を引きずる）蛋白尿は、
投与後２週間で２匹が、３週間後で全１０匹が陽性を示
した。血清中抗体価は投与後２週間で全１０匹が２００
０以上、４週間で４４００より１００００以上まで上昇
した（抗体価は吸光度１．００になる稀釈倍率で示
す）。尿中抗体価は投与後２週間で２匹の蛋白尿陽性検
体のみで１０と２０、４週間で全１０匹が５０〜１００
０を示した。（添付３、添付４） 結論；血清中の抗体は、尿中蛋白や尿中抗体に先行して
検出されるので、腎疾患の早期検出に有用である。抗体
価は、血清中が尿中の１０倍以上であったので、血清測
定が望ましい。 ３）発症試験３ ラット；ウイスター・雌・８週令・３匹 投与部位；背部皮内 投与量；ＦＣＡ（１対１）と共にＮＣ１として０．１ｍ
ｇ、追加免疫２週後同量 測定；尿試験紙（テルモウリエース；蛋白陽性は＋１〜
＋４） 結果；投与１週後より５週まで、±から＋１で、６週以
降３か月間、＋１又は＋２で弱い蛋白尿を継続し、同時
に潜血反応も示した。 結論；軽微で長期の蛋白尿出現は、軽症の腎炎モデルと
して有用である。
【００１２】
【実施例３】３．ＮＣ１感作によるサル腎炎モデル
発症試験４ サル；カニクイザル・雌・２匹（３．０ｋｇ，２．６ｋ
ｇ、共に４歳） 投与部位；両後足フットパット 投与量；ＦＣＡ（１対１）と共にＮＣ１として４ｍｇ
（片足２ｍｇ）×１回 結果；中蛋白尿を示した。１匹は２週後（１５４ｍｇ／
２４ｈｒ）、１匹は３週間後（８１ｍｇ／２４ｈｒ）で
ある。実験終了時（６週間）は強蛋白尿（３３９ｍｇ／
２４ｈｒ，２４９ｍｇ／２４ｈｒ）で、臓器の変化は、
肺臓、肝臓にはなく腎臓のみで、糸球体に破壊があっ
た。 結論；哺乳類であるサルで、１００％発症し、実験中１
００％生存する安定した腎炎モデルを作製できる。
発症試験４ サル；カニクイザル・雌・２匹（３．０ｋｇ，２．６ｋ
ｇ、共に４歳） 投与部位；両後足フットパット 投与量；ＦＣＡ（１対１）と共にＮＣ１として４ｍｇ
（片足２ｍｇ）×１回 結果；中蛋白尿を示した。１匹は２週後（１５４ｍｇ／
２４ｈｒ）、１匹は３週間後（８１ｍｇ／２４ｈｒ）で
ある。実験終了時（６週間）は強蛋白尿（３３９ｍｇ／
２４ｈｒ，２４９ｍｇ／２４ｈｒ）で、臓器の変化は、
肺臓、肝臓にはなく腎臓のみで、糸球体に破壊があっ
た。 結論；哺乳類であるサルで、１００％発症し、実験中１
００％生存する安定した腎炎モデルを作製できる。
【００１３】
【実施例４】４．ＮＣ１感作によるマウス腎炎モデル
発症試験５ マウス；ＢＡＬＢ／ｃ・雌・５週令・３匹（チャールズ
リバー社） 投与部位；背部皮内 投与量；ＦＣＡ（１対１）と共にＮＣ１として０．１ｍ
ｇ、追加免疫２週後同量 測定；尿試験紙（テルモウリエース；蛋白陽性は＋１〜
＋４） 結果；投与１週後より７週まで＋１又は＋２で、弱い蛋
白尿を継続した。
発症試験５ マウス；ＢＡＬＢ／ｃ・雌・５週令・３匹（チャールズ
リバー社） 投与部位；背部皮内 投与量；ＦＣＡ（１対１）と共にＮＣ１として０．１ｍ
ｇ、追加免疫２週後同量 測定；尿試験紙（テルモウリエース；蛋白陽性は＋１〜
＋４） 結果；投与１週後より７週まで＋１又は＋２で、弱い蛋
白尿を継続した。
【００１４】
【実施例５】５．抗ＮＣ１抗体投与によるマウス腎炎モ
デル 発症試験６ マウス；ＢＡＬＢ／ｃ・雌・５週令・９匹（チャールズ
リバー社） 投与部位；腹腔内 投与量；抗ＮＣ１抗体（マウスモノクロ抗体、ＩｇＧ
１、１２Ｄ）を、１０，２０，５０μｇを各３匹に投与
し、２週後同量追加投与した。 測定；尿試験紙（テルモウリエース；蛋白陽性は＋１〜
＋４） 結果；投与１週後より７週まで＋１又は＋２で、弱い蛋
白尿を継続した。 結論；軽微で長期の蛋白尿出現は、軽症の腎炎モデルと
して有用である。 ６．抗ＮＣ１抗体投与によるラット腎炎モデル 発症
試験７ ラット；ウイスター・雌・８週令・３匹（チャールズリ
バー社） 投与部位；腹腔内 投与量；抗ＮＣ１抗体（マウスモノクロ抗体、ＩｇＧ
１、１２Ｄ）を、５０μｇを各３匹に投与、２週後同量
追加投与した。 測定；尿試験紙（テルモウリエース；蛋白陽性は＋１〜
＋４） 結果；投与１週後より４か月間、＋１、±又は＋２で、
弱い蛋白尿を継続した。−はなかった。 結論；軽微で長期の蛋白尿出現は、軽症の腎炎モデルと
して有用である。
デル 発症試験６ マウス；ＢＡＬＢ／ｃ・雌・５週令・９匹（チャールズ
リバー社） 投与部位；腹腔内 投与量；抗ＮＣ１抗体（マウスモノクロ抗体、ＩｇＧ
１、１２Ｄ）を、１０，２０，５０μｇを各３匹に投与
し、２週後同量追加投与した。 測定；尿試験紙（テルモウリエース；蛋白陽性は＋１〜
＋４） 結果；投与１週後より７週まで＋１又は＋２で、弱い蛋
白尿を継続した。 結論；軽微で長期の蛋白尿出現は、軽症の腎炎モデルと
して有用である。 ６．抗ＮＣ１抗体投与によるラット腎炎モデル 発症
試験７ ラット；ウイスター・雌・８週令・３匹（チャールズリ
バー社） 投与部位；腹腔内 投与量；抗ＮＣ１抗体（マウスモノクロ抗体、ＩｇＧ
１、１２Ｄ）を、５０μｇを各３匹に投与、２週後同量
追加投与した。 測定；尿試験紙（テルモウリエース；蛋白陽性は＋１〜
＋４） 結果；投与１週後より４か月間、＋１、±又は＋２で、
弱い蛋白尿を継続した。−はなかった。 結論；軽微で長期の蛋白尿出現は、軽症の腎炎モデルと
して有用である。
【００１５】
【実施例６】７．薬効試験１ ラット；ＷＫＹ／ＮＣｒｊ・雌・８週令・３匹 試験法；「発症試験２」を用いた。 投与薬剤；免疫抑制剤の例として、サイクロスポリンＡ
を使用 投与量；感作翌々日より５０ｍｇ／ｋｇ／日を経口投与
で連日投与 結果；感作４週間後で、２匹には微弱な（尿試験紙）蛋
白尿、１匹は陰性しか認められなかった。 結論；本発明のスクリーニング方法は、薬効評価に有用
である。 ８．薬効試験２ ラット；ＷＫＹ／ＮＣｒｊ・雌・５週令・６匹（１薬剤
２匹）対照２匹計８匹 試験法；「発症試験２」を用いた。 投与薬剤；ＮＣ１、抗ＮＣ１ポリクロ抗体（ウサギ由
来）、抗ＮＣ１モノクロ抗体（マウス由来） 投与量；各薬剤（蛋白量として）０．４ｍｇ／匹を連日
４週間の経口投与後、感作した。 結果；感作４週間後で、対照は強呈色であったが、投与
群はいずれも微弱から中の蛋白呈色であった。 結論；本発明のスクリーニング方法が、薬効評価に有用
であるのみならず、ＮＣ１及びその抗体は、腎炎治療剤
となり得る。
を使用 投与量；感作翌々日より５０ｍｇ／ｋｇ／日を経口投与
で連日投与 結果；感作４週間後で、２匹には微弱な（尿試験紙）蛋
白尿、１匹は陰性しか認められなかった。 結論；本発明のスクリーニング方法は、薬効評価に有用
である。 ８．薬効試験２ ラット；ＷＫＹ／ＮＣｒｊ・雌・５週令・６匹（１薬剤
２匹）対照２匹計８匹 試験法；「発症試験２」を用いた。 投与薬剤；ＮＣ１、抗ＮＣ１ポリクロ抗体（ウサギ由
来）、抗ＮＣ１モノクロ抗体（マウス由来） 投与量；各薬剤（蛋白量として）０．４ｍｇ／匹を連日
４週間の経口投与後、感作した。 結果；感作４週間後で、対照は強呈色であったが、投与
群はいずれも微弱から中の蛋白呈色であった。 結論；本発明のスクリーニング方法が、薬効評価に有用
であるのみならず、ＮＣ１及びその抗体は、腎炎治療剤
となり得る。
【００１６】
【実施例７】９．抗ＮＣ１抗体の測定 検体；ＮＣ１感作後１０日目のラット血清（５匹）及び
未処理ラット（５匹） 測定法；ＥＬＩＳＡ法とラテックス凝集法 ＥＬＩＳＡ法の概要； 試薬１、ＮＣ１（ウシ腎糸球体基底膜由来タイプ４コラ
ーゲンのＮＣ１）を０．５μｇ／穴をコートしたマイク
ロプレート 試薬２、ＨＲＰ標識抗ラットＩｇＧ抗体（ウサギ由来ポ
リクローナル） 試薬３、ＴＭＢ試薬（ＴＭＢ０．１％，過酸化水素０．
０２％、０．１Ｍクエン酸緩衝液） 試薬４、反応停止液（０．５Ｍ硫酸） 検体は、リン酸緩衝液で２０００倍に希釈し、１００μ
ｌ／穴を用いた。 測定方法：試薬１に検体１００μｌ／穴→２時間インキ
ュベーション及び洗浄→試薬２、１００μｌ／穴→１時
間インキュベーションおよび洗浄→試薬３、１００μｌ
→３０分インキュベーション→試薬４、５０μｌ→測定
（吸光度４５０ｎｍ） 結果：感作５検体中、抗ＮＣ１抗体は、全てに認められ
た。未投与検体５例ではまったく認められなかった。
（付表４） よって、本法は、腎疾患で蛋白尿が出現する前の早期血
清中の抗ＮＣ１抗体の存在を検出でき、腎疾患発症を予
知できる。なおラテックス凝集法を用いた時は、検体の
稀釈が１００倍で同じ結果を得た。 結論；本発明の抗ＮＣ１抗体測定法は、実験動物の評価
及び、腎炎の早期検出に有用である。
未処理ラット（５匹） 測定法；ＥＬＩＳＡ法とラテックス凝集法 ＥＬＩＳＡ法の概要； 試薬１、ＮＣ１（ウシ腎糸球体基底膜由来タイプ４コラ
ーゲンのＮＣ１）を０．５μｇ／穴をコートしたマイク
ロプレート 試薬２、ＨＲＰ標識抗ラットＩｇＧ抗体（ウサギ由来ポ
リクローナル） 試薬３、ＴＭＢ試薬（ＴＭＢ０．１％，過酸化水素０．
０２％、０．１Ｍクエン酸緩衝液） 試薬４、反応停止液（０．５Ｍ硫酸） 検体は、リン酸緩衝液で２０００倍に希釈し、１００μ
ｌ／穴を用いた。 測定方法：試薬１に検体１００μｌ／穴→２時間インキ
ュベーション及び洗浄→試薬２、１００μｌ／穴→１時
間インキュベーションおよび洗浄→試薬３、１００μｌ
→３０分インキュベーション→試薬４、５０μｌ→測定
（吸光度４５０ｎｍ） 結果：感作５検体中、抗ＮＣ１抗体は、全てに認められ
た。未投与検体５例ではまったく認められなかった。
（付表４） よって、本法は、腎疾患で蛋白尿が出現する前の早期血
清中の抗ＮＣ１抗体の存在を検出でき、腎疾患発症を予
知できる。なおラテックス凝集法を用いた時は、検体の
稀釈が１００倍で同じ結果を得た。 結論；本発明の抗ＮＣ１抗体測定法は、実験動物の評価
及び、腎炎の早期検出に有用である。
【００１７】
【発明の効果】腎疾患の治療と早期検出とに役立つ。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 13/12 Ａ６１Ｐ 13/12 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 33/50 33/50 Ｚ 33/53 33/53 Ｄ
Claims (7)
- 【請求項１】タイプ４コラーゲンのＮＣ１分画又はその
部分やそのペプタイドを抗原として又はそれらの抗体投
与で作製した腎疾患動物によりスクリーニングした腎疾
患治療剤。 - 【請求項２】タイプ４コラーゲンのＮＣ１分画又はその
部分やそのペプタイドを抗原として又はそれらの抗体投
与で作製した腎疾患動物によりスクリーニングした免疫
抑制剤。 - 【請求項３】タイプ４コラーゲンのＮＣ１分画（又はそ
の部分や構成ペプタイド）より成るか、これらを抗原と
して作製した抗体より成る腎疾患治療剤。 - 【請求項４】抗ＮＣ１抗体の測定による、腎炎の初期を
検出する方法。 - 【請求項５】動物に投与した時、腎炎の発症率１００％
で、投与６週後の生存率９５％以上となるタイプ４コラ
ーゲンのＮＣ１分画 - 【請求項６】タイプ４コラーゲンのＮＣ１分画又はその
部分やそのペプタイドを抗原として又はそれらの抗体投
与で作製した腎疾患動物 - 【請求項７】タイプ４コラーゲンのＮＣ１分画又はその
部分やそのペプタイドを抗原として又はそれらの抗体投
与で作製した腎疾患動物により医薬品や食品の腎臓への
影響を検討する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001402345A JP5024695B2 (ja) | 2000-12-01 | 2001-11-30 | 腎疾患治療剤 |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000403795 | 2000-12-01 | ||
| JP2000403795 | 2000-12-01 | ||
| JP2000-403795 | 2000-12-01 | ||
| JP2001402345A JP5024695B2 (ja) | 2000-12-01 | 2001-11-30 | 腎疾患治療剤 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2012094217A Division JP2013009664A (ja) | 2000-12-01 | 2012-04-01 | 腎疾患治療剤 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002302457A true JP2002302457A (ja) | 2002-10-18 |
| JP2002302457A5 JP2002302457A5 (ja) | 2005-07-14 |
| JP5024695B2 JP5024695B2 (ja) | 2012-09-12 |
Family
ID=26607269
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001402345A Expired - Lifetime JP5024695B2 (ja) | 2000-12-01 | 2001-11-30 | 腎疾患治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP5024695B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007145192A1 (ja) * | 2006-06-12 | 2007-12-21 | Tsukao Yokoyama | Ｉｖ型コラーゲン様免疫活性ペプチド |
| JP2014163924A (ja) * | 2013-02-21 | 2014-09-08 | Morisuke Yokoyama | 高血圧検出試薬 |
| CN114698592A (zh) * | 2022-04-29 | 2022-07-05 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000214163A (ja) * | 1999-01-22 | 2000-08-04 | Morisuke Yokoyama | 測定試薬 |
| WO2002085924A2 (en) * | 2001-04-23 | 2002-10-31 | Abgenix, Inc. | ANTI-α3(IV)NC1 MONOCLONAL ANTIBODIES AND ANIMAL MODEL FOR HUMAN ANTI-GLOMERULAR BASEMENT MEMBRANE AUTOANTIBODY DISEASE |
-
2001
- 2001-11-30 JP JP2001402345A patent/JP5024695B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000214163A (ja) * | 1999-01-22 | 2000-08-04 | Morisuke Yokoyama | 測定試薬 |
| WO2002085924A2 (en) * | 2001-04-23 | 2002-10-31 | Abgenix, Inc. | ANTI-α3(IV)NC1 MONOCLONAL ANTIBODIES AND ANIMAL MODEL FOR HUMAN ANTI-GLOMERULAR BASEMENT MEMBRANE AUTOANTIBODY DISEASE |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007145192A1 (ja) * | 2006-06-12 | 2007-12-21 | Tsukao Yokoyama | Ｉｖ型コラーゲン様免疫活性ペプチド |
| US8114607B2 (en) | 2006-06-12 | 2012-02-14 | Tsukao Yokoyama | Type IV collagen-like immunoreactive peptide |
| JP5156997B2 (ja) * | 2006-06-12 | 2013-03-06 | 司甫 横山 | Ｉｖ型コラーゲン様免疫活性ペプチド |
| US8420331B2 (en) | 2006-06-12 | 2013-04-16 | Tsukao Yokoyama | Type IV collagen-like immunoreactive peptide |
| CN101466732B (zh) * | 2006-06-12 | 2013-04-17 | 横山司甫 | Iv型胶原样免疫反应性多肽 |
| JP2014163924A (ja) * | 2013-02-21 | 2014-09-08 | Morisuke Yokoyama | 高血圧検出試薬 |
| CN114698592A (zh) * | 2022-04-29 | 2022-07-05 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用 |
| CN114698592B (zh) * | 2022-04-29 | 2022-11-04 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP5024695B2 (ja) | 2012-09-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69621645T2 (de) | Zwischenverbindungen von fortgeschrittenen glykosylierung-endprodukten und post-amadorische inhibitor | |
| Smith et al. | Detection of antibodies against therapeutic proteins in the presence of residual therapeutic protein using a solid-phase extraction with acid dissociation (SPEAD) sample treatment prior to ELISA | |
| DE102005029845B4 (de) | Verfahren zur Diagnose von rheumatischen Erkrankungen | |
| DE60025008T2 (de) | Bestimmung von adrenomedullin-bindenden proteinen | |
| CN109187944A (zh) | 使用IL-1α自身抗体诊断、治疗和预防血管疾病 | |
| DE10353593A1 (de) | Leptinantagonist und Verfahren zur quantitativen Messung von Leptin | |
| Niemelä | Acetaldehyde adducts in circulation | |
| JP5024695B2 (ja) | 腎疾患治療剤 | |
| Hironaka et al. | Quantitative evaluation of PEPT1 contribution to oral absorption of cephalexin in rats | |
| Rafter | Rheumatoid arthritis: a disturbance in copper homeostasis | |
| JP2013009664A (ja) | 腎疾患治療剤 | |
| JP4573188B2 (ja) | 抗ｎｃ１モノクローナル抗体 | |
| Sheerin et al. | Altered distribution of intraglomerular immune complexes in C3‐deficient mice | |
| JP3924709B2 (ja) | 測定試薬 | |
| EP0589982A1 (de) | Monoklonale antikörper gegen das humane tnf-bindende protein i (tnf-bp i) | |
| DE4120213C2 (de) | Monoklonale Antikörper gegen das TNF-bindende Protein I (TNF-BP I) | |
| EP0873136B1 (en) | High fluorescence specific immune enhancing factor and methods of use for same | |
| US6265227B1 (en) | Method for assaying antigen related to disorders caused by mental stress | |
| JP4505800B2 (ja) | 抗腎タイプｉｖモノクロ−ナル抗体 | |
| Sjölander et al. | Effects of antigen challenge on intestinal permeability and morphology in rats immunized with gliadin or ovalbumin | |
| ES2626491B1 (es) | Anticuerpos monoclonales frente a bambi y uso para tratamiento de enfermedades inflamatorias | |
| US7541027B2 (en) | Use of an epitope of vascular endothelial growth factor receptor KDR/Flk-1 | |
| RU2215294C2 (ru) | Способ получения моноспецифических поликлональных антисывороток к антигенно родственным белкам | |
| Richter et al. | Role of Non-specific Protein in the Sensitization of Red Blood Cells by Antigen | |
| Morris et al. | IgG subclasses to specific food proteins in human adults |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20041122 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20041122 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080122 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080321 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080321 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20080826 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080925 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20081104 |
|
| A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20090403 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111010 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120401 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120608 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150629 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5024695 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |