RU2215294C2 - Способ получения моноспецифических поликлональных антисывороток к антигенно родственным белкам - Google Patents
Способ получения моноспецифических поликлональных антисывороток к антигенно родственным белкам Download PDFInfo
- Publication number
- RU2215294C2 RU2215294C2 RU2001128465A RU2001128465A RU2215294C2 RU 2215294 C2 RU2215294 C2 RU 2215294C2 RU 2001128465 A RU2001128465 A RU 2001128465A RU 2001128465 A RU2001128465 A RU 2001128465A RU 2215294 C2 RU2215294 C2 RU 2215294C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antigen
- related proteins
- preparing
- animal
- polyclonal antisera
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения моноспецифических поликлональных антисывороток к близкородственным белкам при диагностике ряда заболеваний. Способ предусматривает иммунизацию животного путем однократного многоточечного введения в область спины внутрикожно иммунохимически чистого белка-антигена в количестве 100-500 мкг на животное, в присутствии трех объемов полного адъюванта Фрейнда относительно объема раствора белка-антигена, забор крови животного через 2 месяца и в течение полугода после иммунизации, получение иммунной сыворотки и избирательную адсорбцию ее другими антигенно родственными белками. Техническим результатом изобретения является разработка упрощенного, относительно дешевого и технологичного способа получения моноспецифических поликлональных антисывороток к антигенно родственным белкам.
Description
Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к способам получения моноспецифических антисывороток и антител к родственным белкам, имеющим общие антигенные детерминанты, например подклассы иммуноглобулинов G.
Наиболее эффективным по специфичности из современных способов получения моноспецифических поликлональных антисывороток к антигенно родственным белкам является способ создания толерантности к общим антигенным детерминантам белков подклассов IgG (IgGI, IgG2, IgG3 и IgG4) с последующей иммунизацией целевым белком одного из подклассов [1]. Этот способ предусматривает получение моноспецифических антисывороток путем проведения пяти процедур для создания толерантности и трех процедур для иммунизации. Для этого используются обязательно новорожденные животные (от 6 до 20 ч от момента рождения). Толерантность создается введением высоких доз иммуногена, содержащего общие детерминанты для этих родственных белков, а иммунизация проводится низкими дозами целевого антигена.
Однако даже при этом способе не удается избежать необходимости последующей адсорбции в полученных антисыворотках антител к общим эпитопам белков. Кроме того, этот метод трудоемок, дорог и поэтому не имеет промышленных перспектив.
Задачей заявленного изобретения является разработка способа, позволяющего получать моноспецифические поликлональные антисыворотки к близкородственным белкам простым, более дешевым и технологически пригодным способом. Такие антисыворотки могут быть использованы для дифференциального определения родственных белков в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах с помощью иммуноферментных тест-систем или радиальной иммунодиффузии.
Поставленная задача достигается путем разработки способа, который предусматривает иммунизацию животного путем однократного многоточечного введения в область спины внутрикожно иммунохимически чистого белка-антигена в количестве 100-500 мкг на животное, в присутствии трех объемов полного адъюванта Фрейнда относительно объема раствора белка-антигена, забор крови животного через 2 месяца и в течение полугода после иммунизации, получение иммунной сыворотки и избирательную адсорбцию ее другими антигенно родственными белками.
Техническим результатом заявленного изобретения является разработка упрощенного, относительно дешевого и технологичного способа получения моноспецифических поликлональных антисывороток к антигенно родственным белкам, поскольку позволяет получить иммунный ответ ко всем и слабым, и сильным антигенным детерминантам. Для того чтобы родственные белки можно было различать между собой, антисыворотки к ним должны содержать антитела к наибольшему числу различающихся антигенных детерминант. Родственные белки могут различаться как слабыми, так и сильными антигенами, поэтому для решения задачи раздельного определения этих белков важно иметь антисыворотки с таким набором антител. Такие антисыворотки могут быть использованы для дифференциального определения родственных белков в сыворотке крови человека при диагностика ряда заболеваний и в биологических препаратах с помощью иммуноферментных тест-систем или радиальной иммунодиффузии.
Пример. Получение моноспецифических поликлональных антисывороток к подклассам IgG человека. 100-500 мкг иммунохимически чистого IgG определенного подкласса, растворенного в 0,5 мл физиологического раствора, смешивают с 1,5 мл полного адъюванта Фрейнда и вводят кролику (или козе) внутрикожно в 10 точек спины. Через 2 месяца у животных берут кровь из вены для получения иммунной сыворотки. Интенсивная линия иммунопреципитации в γ-зоне для антител к IgG, двойные линии (для антител к IgG3) или наличие "шпоры" в β2-зоне (для антител к IgGI, IgG2, IgG4) с нормальной сывороткой человека при иммуноэлектрофорезе свидетельствуют о наличии в иммунных сыворотках антител к подклассам IgG. Иммуннизированные животные используются в качестве продуцентов иммунной сыворотки в течение 6 месяцев. Дополнительная адсорбция иммунных сывороток белками иммуноглобулинов G других подклассов с учетом их антигенного родства приводит к получению антисыворотки, специфичной к определенному подклассу. Такая антисыворотка при радиальной иммунодиффузии в геле в присутствии 5% полиэтиленгликоля с мол. массой 6000 Да выявляет IgG соответствующего подкласса в нормальной сыворотке и в сыворотках больных множественной миеломой и не дает преципитации с миеломными белками IgG других подклассов в концентрации 0,1 мг/мл.
ЛИТЕРАТУРА
1. Michaelsen Т.Е., Haug E. Human IgG subclass-specific rabbit antisera suitable for immunoprecipitation in gel, ELISA and multiplayer haemagglutination techniques. Journal of Immunological Methods. 1985. V.84. P.203-220.
1. Michaelsen Т.Е., Haug E. Human IgG subclass-specific rabbit antisera suitable for immunoprecipitation in gel, ELISA and multiplayer haemagglutination techniques. Journal of Immunological Methods. 1985. V.84. P.203-220.
Claims (1)
- Способ получения моноспецифических поликлональных антисывороток к антигенно родственным белкам, предусматривающий иммунизацию животного путем однократного многоточечного введения в область спины внутрикожно иммунохимически чистого белка-антигена в количестве 100-500 мкг на животное в присутствии трех объемов полного адъюванта Фрейнда относительно объема раствора белка-антигена, забор крови животного через 2 месяца и в течение полугода после иммунизации, получение иммунной сыворотки и избирательную адсорбцию ее другими антигенно родственными белками.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001128465A RU2215294C2 (ru) | 2001-10-23 | 2001-10-23 | Способ получения моноспецифических поликлональных антисывороток к антигенно родственным белкам |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001128465A RU2215294C2 (ru) | 2001-10-23 | 2001-10-23 | Способ получения моноспецифических поликлональных антисывороток к антигенно родственным белкам |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2001128465A RU2001128465A (ru) | 2003-08-27 |
| RU2215294C2 true RU2215294C2 (ru) | 2003-10-27 |
Family
ID=31988442
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001128465A RU2215294C2 (ru) | 2001-10-23 | 2001-10-23 | Способ получения моноспецифических поликлональных антисывороток к антигенно родственным белкам |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2215294C2 (ru) |
-
2001
- 2001-10-23 RU RU2001128465A patent/RU2215294C2/ru not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| McKearn et al. | Anti-Idiotypic Antibody in Rat Transplantation Immunity: I. Production of anti-Idiotypic Antibody in Animals Repeatedly Immunized with Alloantigens | |
| Kaushal et al. | Monoclonal antibodies against surface determinants on gametes of Plasmodium gallinaceum block transmission of malaria parasites to mosquitoes. | |
| Johansson et al. | Immunological studies of an atypical (myeloma) immunoglobulin | |
| Brindley et al. | Role of host antibody in the chemotherapeutic action of praziquantel against Schistosoma mansoni: identification of target antigens | |
| Notkins et al. | Elevated γ-globulin and increased antibody production in mice infected with lactic dehydrogenase virus | |
| Pierce et al. | IMMUNE RESPONSES IN VITRO: III. Development of Primary γM, γG, and γA Plaque-Forming Cell Responses in Mouse Spleen Cell Cultures Stimulated with Heterologous Erythrocytes | |
| Maizels et al. | Cross-reactive surface antigens on three stages of Brugia malayi, B. pahangi and B. timori | |
| ES2155450T5 (es) | Anticuerpos opsonicos fuertemente reactivos, que reaccionan a los antigenos comunes de los staphylococcus. | |
| Jordon et al. | The complement system in bullous pemphigoid. III. Fixation of C1q and C4 by pemphigoid antibody | |
| Murgita et al. | Production of a runting syndrome and selective γA deficiency in mice by the administration of anti-heavy chain antisera | |
| Florin-Christensen et al. | Cryoglobulins in acute and chronic liver diseases | |
| Ogra et al. | Immunosuppressive activity of mouse amniotic fluid | |
| Leslie et al. | Studies on the Secretory Immunologic System of Fowl: I. Presence of Immunoglobulins in Chicken Secretions | |
| EP0211001B1 (en) | Liver fluke antigens | |
| Pichichero et al. | Mucosal antibody response to parenteral vaccination with Haemophilus influenzae type b capsule | |
| JPH01501793A (ja) | 透明帯に対する免疫化による避妊のための方法 | |
| CHANG-YUAN et al. | A Mab-based ELISA for detecting circulating antigen in CSF of patients with neurocysticercosis | |
| Triftshauser et al. | Procedures for the immunization of goats with human immunoglobulins and complement | |
| Molinari et al. | Investigation of secretory immunoglobulins in saliva from germfree mice | |
| Mellbye et al. | Experimentally produced antibodies to the pepsin site of IgG due to untreated autologous IgG in immune complexes | |
| Coleman et al. | Immunogenicity and phylogenetic relationship of tapeworm antigens produced by Hymenolepis nana and Hymenolepis diminuta | |
| RU2215294C2 (ru) | Способ получения моноспецифических поликлональных антисывороток к антигенно родственным белкам | |
| De Carvalho et al. | Influence of splenectomy in rats on the formation of 19S and 7S antibodies | |
| Koyama et al. | Effect of chemical cationization of antigen on glomerular localization of immune complexes in active models of serum sickness nephritis in rabbits. | |
| Nakamura et al. | Oligomeric IgA: the major component of the in vitro primary response of mouse spleen fragments |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181024 |