JPH01501793A - 透明帯に対する免疫化による避妊のための方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 透明帯に対する免疫化による避妊のための方法発明の技術分野 この発明は雌性の生殖能力の制御に関する。さらに特定的には、この発明は、透 明帯に対する能動的免疫化の手段により、雌性哺乳動物を免疫化することを包含 する避妊の方法に関する。この発明に従うと、透明帯に対する能動的免疫化応を 誘発し、それによって妊娠を防止することを目的として、透明帯の抗原反応決定 因子の内部写像表現する、透明帯への抗体に対する抗特発型抗体を雌性哺乳動物 に投与する。

発明の背景 通常の避妊方法には、受精に対する機械的または化学的障壁の使用、ホルモンの 投与、もしくは受精卵子の着床を防止するｔ；めの機械的手段の使用がある。一 般にこれらの方法は、実用上の不便、有効性の不完全さならびに種々の好ましく ない副作用などの重大な欠陥を持っている。機械的手段による避妊は感染を生じ ることがあり、また、充分に有効でないこともしばしばである。通常「ビル」と 称されるホルモンの経口投与は、各種形態のガンを含む多くの生理学的問題が関 与している。

そのような各処置の不利益を考慮に入れて、妊娠防止のために体の免疫系を利用 することに努力が向けられてきている。たとえば、避妊のために、卵胞刺激ホル モン（ＦＳＩＩ）またはヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ＨＣＧ）などのホルモン に対する免疫化が先に報告されている〔米国特許第４．５０，７１６号〕。しか しながら、これらの方法もまた、種々の副作用を持つという特質がある。

透明帯（２Ｆ）は、哺乳動物の卵母細胞を包絡する糖蛋白質基質のものであって 、生殖過程において重要な役割を演する。その第一次的な機能は、その精子結合 受容体による精子の結合、受精後の多重受精の防止、ならびに着床の直前に２Ｐ が流出するまで受精卵を保護することを含んでいる。生殖制御の一つの方法は、 未分化胎細胞の２Ｆを除去することによるその裸出を包含する〔米国特許第４， ２４３８６４号〕。

精製されたｚＰは、その２Ｐ製剤を誘導するのに用いられた種の場合を除き、注 射すると特定の抗体を高水準で誘発するので有効な免疫原である。雌性動物が２ Ｆで免疫化されｔ：ときに誘発されるＩＰに対する抗体が、妊娠防止の能力があ ることを根拠とする避妊の方法が開発された〔米国特許第３．９０，５２０号〕 。

しかし、精製２Ｆの使用を含む処置の有効性には、免疫反応を誘発するのに必須 の精製蛋白質が大量に必要であるということを含めて、種々の要因により限度が あっ！；。２Ｐの精製は、長時間を要しかつ高コストであって、大量の純粋ＩＰ を必要とするそのような避妊方法を非実際的なものとしていた。

それに加えて、全２Ｐの精製物あるいはその主要な部分単位を使用して免疫化す ることは、２Ｆによって示されている多数の抗原反応決定因子に対応する異種抗 体群を誘発することになる。このようにして誘発された抗体の多くは、有効な避 妊と関係があるとは限らない。

ある種のモノクローナル抗ｚＰ抗体が避妊性ではないということが研究によって 示されているＣＤ、Ｗ、　ＤｒｅｌｌおよびＢ、Ｓ、　Ｄｕｎｂｘｒ、　”Ｍｏ ｌ１ｏ−ｃｌｏ＋＋ｓｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　Ｔｏ　Ｒａｂｂｉｔムｎｄ　 Ｐｉ（１ｏｎａ　Ｐｓｌｌｕｃｉｄｅ　Ｄｉｓｔｉｍ−１＋＋ｉｓｂ　５ｐｅｃ ｉｅｓ　−−５ｐｅｃｉｔｉｃ　Ａｎｄ　５ｈａｒｅｄ　Ａｎｔｉ（ｅｎｉｃ　 ＤｅＬ＊ｒ＋ｍ１ｎｓ＋＋ｔｓ”、Ｂｉａｌｏ（ｙ　Ｏｆ　１ｅｐｒｅｄＩｌｅ ｔｉｏｎ、第３０巻、４４５ページ（１９０））　、この取組み方は、こうして 誘発された抗２Ｆ抗体の特異性にはコントロールがきかないことを考慮に入れた ものであり、無駄が多いばかりでなく、有害な場合がある。ウサギを使用した実 験において、全２Ｆを用いる免疫化は、血清の性腺刺激ホルモンのレベルの異常 な上昇を伴なう濾胞細胞の分化における変質を含む重大なマイナスの副作用を生 じるかもしれないということが示されてきている〔Ｊ」。

５ｋｉｎｎｅｒら、”Ｉｍ＋＋＋＋＋ａｉｚ＊Ｌｉｏｎ　Ｗｉｔｈ　２ｏｎｓ　 Ｐｓｌｌ＋＋ｃｉｄｉ　ＰｒｏｔｅｉｎｓＲｓｓｍｌｔｓ　Ｉ＋　Ａｂ＋＋ｏｒ ＋ｕｌ　Ｏｖ＊ｒｉｕ＋　Ｆｏｌｌｉｅｗｌｉｒ　Ｄｉｆｆｅｒｅ＋＋Ｌｉ＊１ ｉｏｉムｎＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　Ｏｆ　Ｇｏ＋＋ｓｄｏＬｒａｐｉｍ−［ｎｄ ｉｃｓｄ　５ｔｅｒｏｉｄ　５ｓｅｒｅｔｉｏｎ”、本発明は、抗２Ｐ抗体に対 する抗特発を抗体、すなわち、２Ｆの抗原決定因子の「内部写像」を表現する抗 体をもって雌性哺乳動物を免疫化することを包含する避妊の方法を提供する。本 発明の方法は、２Ｆに対する抗特発型抗体の避妊有効量を含有する組成物を雌性 哺乳動物に投与することによる２Ｆ特特異性体の誘発を包含する。

本発明はまた、前記の避妊方法、とくには雌性哺乳動物に投与するための避妊用 組成物の製造に用いられた場合に有用な、抗特発型抗体に関する。

発明の詳細な説明 ここに記載された発明がより一層完全に理解され得るようにするために、つぎの 詳細な記述が提示されている。この記述中においては、つぎの用語が用いられて いる。

透明帯（２Ｐ）　・・・　透明帯とは、卵母細胞を被包する強靭で無反応性の細 胞外糖蛋白質基質である。その特徴的な縞状外観は、これを貫通する無数の微細 な導孔に起因する。濾胞細胞からの細胞原形質的過程はＩＦを透して波及し、時 には卵母細胞の原形質膜を陥入させる。濾胞細胞の細胞厚形質的過程はまた、栄 養物質を卵母細胞の表面に輸送する。それに加えて、卵母細胞の微絨毛は２Ｐ中 に延伸していて、卵母細胞の表面での吸収容量を増大させている。〔一般的には 、Ｗ、Ｊ、　ｌｌａｍｊＨｏｉ編、”Ｈａｍｉｌｔｏｎ、　Ｂｏｙ＋ｌ　ｘｎｄ 　Ｎｏ５ｓ＋ａｓｎ’ｓ　！ｌｎｍｘｎＥｍｂｒｙｏｌｏｇｙ”、２７〜３２ペ ージおよび５４〜６４ページ（＋９７２）　；Ｊ、Ｂ、　Ｌｒ５ｂｘｖ編、”Ｔ ｈｅ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃｘｌ　Ｂｘｓｉｓ　Ｏｆ　Ｒｅｐｒｏｄｕｅｔｉｏｎ　 ＡｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅＩｌｔｓｌ　Ｍｔｄｉｃｉｃｅ″、（＋９７３）を見 よ〕。

この出願において用いられている限りでは、ｒ２ＰＪには２Ｆに対する抗体を誘 発する能力がある糖蛋白質基質のすべての形態が含まれる。これらの中には、゛ 排卵後に発現する抗原決定基と並んで、卵母細胞発達の後期において、腔段階お よび排卵前段階中に発現するＸＰ抗原決定基が包含される。

用語ｒ２ＰＪは、ここに用いられている限りでは、全２Ｐ抽出物、ｚＰを包含す る３ｍの個別糖蛋白質分画物、酵素的に消化されＩ；形態もしくは化学的に変性 された形態のＩＰのいずれか、またはそれらの組合せのいずれをも含んでいる。

その上、本質的には免疫原性ではないが、免疫原性担体分子（たとえばカギアナ カサガイ血青素、ジフテリア毒素など）と化学的に結合した場合には免疫原とし て利用され得る遊離２ＰｖＬ［反応決定因子もｒ２ＰＪに含まれる。

挾持発型　・・・　抗体の超可変領域は抗原反応決定因子（抗原決定基）として 作用する能力を持っている。免疫グロブリン分子のこの領域に配向する抗体は高 度に特異的であることがある。抗体形成を誘発する抗原反応決定因子は、特発型 抗原反応決定因子、または特発型と称され、それから誘発される抗抗体は「挾持 発型」と称される。（Ａ、　Ｎ１５ｏｎｏｆｌ、“Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　 Ｔｏ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｉｍ＋ａ＋＋＋＋ｏｌｏ（ｙ”（１９８４）；　Ｊ 、　Ｏ＋＋ｄｉｎおよびＭ、　Ｍｉｃｈｅｌ、“［ｌｎｅ　ｎｏｕｖｒｌｌｓｆ ｏｒｍ　ｄ’ｘｌｌｏ−ｔｙｐｉｃ　ｄｏｓ　（ｌｏｂ＋＋ｌｉ＋＋ｓ　７　ｄ ｉ　ｓｅｒｕｍ　ｄｔ　１ａｐｉ１１．　＊ｐｐｘｒｒｅｍｅ＋＋ｔ　１ｉｃｅ 　１挾持発型抗体は、速切抗体の対象となった抗原決定基の「内部写像」を表現 することができる。したがって、そのような挾持発型抗体は、抗体の結合部位と 結合する（Ｅ、Ｓ、　Ｇｏｌｕｂ、“ＴｈｅＣｅｌｌ＋＋１ａｒＢａｓｉｓ　ｏ ｆ　ｔｈｅ　Ｉｍ＋＋＋ｕ＋＋ｅ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ”、１０〜１７９ページ（ ＋９７９）を見よ〕。

内部写像　・・・　抗体によって表現される抗原決定基であって、他の（一般的 には外部の）抗原分子のいくつかによって表現される抗原反応決定因子と免疫学 的交差反応性を共有する。

モノクローナル抗体　・・・　モノクローナル抗体は、単一種の抗体分子を分泌 する抗体生産細胞と骨髄腫細胞との融合によって得られる。ついで融合細胞系統 から一つの細胞系統が広がってゆく。雑種体と称される融合細胞系統は、腫瘍細 胞系統に特徴的な不滅性を持っており、所望の抗体を大量に分泌する。Ｇ、　Ｋ ｏｈｌｓｒおよびＣ，Ｍｉｌ−ｓｔｅｉｃの方法（”Ｃｅｖｔｉｉｉａ＋＋ｓ　 Ｃ１１ｔ＋＋ｒｅｓ　ｏｆ　Ｆｕｓｅｄ　Ｃｅ１ｌｓ　５ｅｅｒｅｔｉｅ（Ａｎ ｔｉｂｏｄｉ＊ｓｏｆ　ＰｒｅｄＣｆｉｎｅｄ　５ｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ″ 、Ｎｓｔ＋＋ｒｅ、第２５６巻、１９５ページ（＋９７５））で作られる雑種体 は、均質抗体の主要な供給源となる。この方法で形成される無制限量のモノクロ ーナル抗体を所要の抗原まｔ；は付着体に対応して生産できる（Ｃ，Ｍｉｌｓｔ ｅｉｍ、“Ｍｏｎｏｃｌｅ−ｎ＊ｌ　Ａ１１ｂｏｄｉｅｓ”、　５ｃｉｅｌｉｆ ｉｃ　Ａｍｅｒｉｅａｎ、第２４３巻、６６ページ（＋９１０）；　Ａ、　Ｎ１ ５ｏＩｌｏｆｆ％Ｍｏ１ｓｅｕｌｓｒ　１ｍｍｎ＋＋ｏｌｏｇｙ　（第２版）　 、１６９〜ＩＨページ（＋９０）を見よ〕。

能動的免疫化　・・・　抗原または付潜体に対応する体液性の免疫反応を誘発す る過程でであって、その抗体または付着体に対して形成された抗体を付加するこ とによる体の免疫系の補強（すなわち、受動的免疫化）とは反対のもの。

この発明は、雌性哺乳動物に対して、抗透明帯抗体に対する挾持発型抗体の避妊 有効量を含む組成物を投与する段階を包含する避妊のｔ；めの方法に関する。前 述の挾持発型抗体は、２Ｐの抗原結合部位（抗原決定基）に対応するポリクロー ナル抗体またはモノクローナル抗体の生産と、それに続く抗抗体誘発のためのこ れら抗体の使用とによって得ることができる。これらの抗抗体は、ｚＰ上の類似 の抗原反応決定因子と免疫化学的に交差反応する抗原反応決定因子を保有する。

抗ＩＰ抗体の抗原結合部位との結合力がある抗抗体中の部分は、抗２Ｐ抗体が対 応する２Ｐ抗原反応決定因子の内部写像を保有する。

この発明の方法は、２Ｆの抗原反応決定因子の内部写像を表現する抗イド抗体に 対応する雌性哺乳動物による抗体の生産を考慮に入れたものである点において有 利なものである。これらの抗イド抗体は、２Ｆに特異的な抗体を誘発し、それに より妊娠を防止するための手段として実際の抗原の代わりに用いられる。本発明 は、２Ｆによって表現される多数の抗原反応決定因子に対応する異質の抗体群を 誘発する全ｚＰまたはその部分単位にまさる顕著な利益を提供するものである。

この発明の内部写像ワクチンは、抗２Ｆ反応の異質性の精密な制御を考慮に入れ たものであり、有害な副作用の可能性を示すものではない。さらに、この発明の 内部写像ワクチンは、ワクチン投与プログラムに必要とされる大量を安価に製造 することができる。

この発明の方法において用いられる２Ｆは、卵母細胞の発達のどの段階からでも 取出すことができる。ある種の２Ｆ抗原決定基は、卵形成の進行過程で一時的に 発現される。たとえば、ある種の抗原決定基は卵母細胞の発達過程での巣内段階 および排卵直前段階において出現し、また、他の抗原決定基は、排卵中および排 卵後に発現される。

本発明の好ましい一態様においては、挾持発型抗体は、卵母細胞発達の初期段階 において表現される２Ｆ抗原決定基に対応するよりも、むしろ卵形成の晩期に、 まＩ；は排卵直後に発達する２Ｆ抗原決定基（後発ＩＰ抗原決定基）に対応して いる。後発２Ｐ抗原決定基に特異な抗体は、卵母細胞発達の初期段階に連関する ２Ｐとは反応しない、後発ＺＰ抗原決定基に対して誘発される抗体は、排卵に際 して卵巣を発出する前の短時間だけ、目標と結合する能力がある。このようにし て、有効な避妊活性が付与される一方で、卵巣中にある結合された２Ｆ−抗体複 合物の潜在的なマイナスの副作用が極小化される。

この発明の一態様によると、適切なｚＰ製剤はハツカネズミを免疫化するのに用 いられ、そのハツカネズミの抗ＩＦ抗体のレベルは標準の血清学的方法によって 検定される。抗２Ｐ抗体の力価が満足な水準に達すると、抗２Ｆ抗体は目標種に おける体外または体内妊娠を阻止する能力について試験される。受精を阻止する 抗体を持つ／＼ツカネズミからの細胞が、ついで雑種体を造るために用いられる 。２Ｆに特異的なモノクローナル抗体が選択され、抗ＩＰ抗体を分泌するモノク ローナル細胞系列が成立する。モノクローナル抗ＩＰ免疫グロブリンは、その後 、体外または体内受精を阻止する能力を基礎として、避妊能力に関して選別され る。目標種において避妊性であるノ１ツカネズミモノクローナル抗体は、ついで 、２Ｆ抗原反応決定因子の内部写像を表現する抗抗体を発現させるために用いら れる〔後記１２ページ、例１を見よ〕。ハツカネズミを抗ＩＰモノクローナル抗 体で免疫化しようとする場合は、モノクローナル抗体は免疫原性を増大させるた めに抗原「担体」蛋白質と結合されなければならない。他の種をハツカネズミ免 疫グロブリンで免疫化する場合には、このようなことは必要とされない。抗２Ｐ で免疫化され、かつ明確な力価を示す動物は、さらに免疫化を進め、採血するこ とによって、血清挾持発塑抗体の生産に用いることができる。ハツカネズミおよ びラットもまた、標準の雑種体技術によって誘導されるモノクローナル抗特発型 抗体の生産のＩ；めの抗体生産細胞供給源として役立つ。

挾持発型抗体の育成に供される種の選択は、意図されｌ；抗体の用途に応じて指 示される。もし、内部写像を発現するモノクローナル抗特発型抗体の生産が希望 されているのであれば、／島ツカネズミおよびラットは好ましい種である。もし 、血清を挾持発塁抗体の供給源として役立てることを考えるのであれば、もっと 大型の動物（たとえばウマまたはブタ）はより大量の血清を提供してくれるので 好ましい。ヒト、イヌ、ネコその他の大型哺乳動物に使用するためのワクチンを 調製するには、大型の種、！二とえばバロウ、ウマまたはヤギが好まれる。内部 写像は免疫化されるべき種以外の種に発生させることが好ましく、そうすれば免 疫反応を発生させる！こめに内部写像抗体を抗原担体と結合させることは必要で なくなる。

この発明の方法は、イヌ、ウサギ、ラット、ハツカネズミ、ブタまたはヒトを含 む霊長類を包含する哺乳類のいずれを処理するのにも使用できるが、それらに限 定されるものではない。哺乳類の特定の種において避妊防止に有効な、抗２Ｆ抗 体に対する挾持発を抗体は、すべての哺乳動物において避妊性であるとは示ぎら ない。このことは、異なる種のＺＰにおける抗原の差に基づくものである。ｔ； とえば、ブタＩＦを用いる免疫化は、イヌ、ウサギおよび各種の霊長類（たとえ ばカニクイザル）において妊娠を防止するが、ラットおよびハツカネズミにおい ては無効である。それは、ラットやハツカネズミはブタ２Ｆに対する抗体を生産 するにもかかわらずその抗体がラットまたはハツカネズミのＩＦと交差反応しな いからである。上述のことを考慮に入れると、本発明の方法の実施において、最 初の抗１１に２Ｆが受精制御の目標となる種のｚＰと反応し得る避妊抗体を発生 する能力を持つものでなければならぬということが理解されよう。２Ｆは目標と なる種またはそれに代わる適当な他の種から得ることができる。

上記のようにして得られた挾持発型抗体の避妊能力は、目標の種において次のよ うにして試験される。１種または２種以上の２Ｐ抗原反応決定因子の内部写像を 表現する挾持発星抗体の精製された製剤または中間精製段階の製剤で動物を免疫 化し、抗２Ｆ抗体の力価を検査する。力価が満足な水準に達しているときには、 抗２Ｆ抗体は、目的の種における体外まｔ；は体内での受精を禁止する能力につ いて試験される。目的雌性動物中で抗ｚＰ反応を発生する挾持発型抗体は、避妊 ワクチンの調製に用いられると、妊娠を効果的に防止する。各回の投与ワクチン は、目標種の雌において避妊効果を発生するのに充分な量の抗２Ｆ抗体の生産を 誘発するような量の挾持発型抗体を含んでいなければならない。

抗２Ｆ抗体がどのようにして妊娠を防止するのかは、完全には立証されていない 。われわれは、理論にとられれることなく、われわれのワクチンの避妊効果が透 明帯の周辺の立体障害に基づくものであって、精子が２Ｆを通過して卵子を受精 させるのを防止していることによるものであると信じている。２Ｆに対して形成 された抗体が２Ｆ抗原決定基と結合するときには、精子は透明体を通過して浸透 してゆくことが物理的に不可能となる。他の機構として、正常な卵巣機能が変化 するということも考えられる。免疫過程の停止に統いて抗ＩＦ抗体の水準が後退 すると、受精は回復する。

この発明のワクチンは、１価または多価のいずれかである。すなわち、単一の２ Ｆ内部写像を表現する単一のモノクローナル抗体種を含んでいるか、またはモノ クローナル抗体種の混合物を含んでいて、その抗体のそれぞれが、抗原的に異な る２Ｆの内部写像を表現している。それに加えて、血清抗体は、抗２Ｐ避妊反応 を誘発させるのに用いることができる。

これらの挾持発型抗体、または製薬上支障のないその誘導物の投与は、ＩＰ抗原 決定基に対する免疫原性を示す薬剤の、通常認められた投与方式によつて行なわ れる。これらの中には、皮下、筋肉内、腹腔内および静脈内の投与を含む種々の 非経口的径路が含まれるが、それらに限定はされない。

これらの療法に使用される組成物もまた、多様な剤層のものとすることができる 。一般的に前述の各方法によって投与が行なわれる挾持発型抗体は、また、ワク チン処方に用いられている通常製薬上認められた基剤の典型的なもの、たとえば 滅菌水または滅菌食塩水を含んでいることが望ましい。抗抗体を包含するワクチ ン組成物はまた、他の医薬品、助剤、賦形剤などを含んでいてもよい。この発明 の組成物は、単位薬量形式のものとしておくことが望ましい。ワクチンとして１ 回に、または一定期間内に投与される挾持発型抗体の量は、処置を受ける対象、 投与の方法と形式、ならびに処置をする医師まＩ；は獣医師の判断に依存する。

しかしながら、避妊的に有効な投与量は、約１　ｎ９／Ｊ２９から約Ｉ　ｌ１ｅ ｌｋｅの範囲、好ましくは約１０μ９／ｋＷから約１００μｇ／ｋｇの範囲であ る。それよりも少い投与量および多い投与量もまた有用であるということが認め られている。一般的に、ワクチンのその程度の投与−回で約６ケ月間避妊効果を 与え得るものと期待されている。したがって、最初の免疫化の後でほぼ６ケ月ご とに免疫化を施すことが望ましい。

ここに記載された発明が一層充分に理解されるように、つぎの６例が提示されて いる。これらの例が例示の目的のみを持つものであり、いかなる意味においても この発明を限定するものと解釈されるべきではないと理解されるべき、である。

われわれは、ブタＺＰに対して免疫化されたハツカネズミからモノクローナル抗 ＩＰ抗体を製造しｔ；。われわれは、多種間交差反応性があることのためにブタ ２Ｆを選択したのである。われわれのｚＰ抗原を創製するために、われわれは可 溶化されｔ；ブタ２Ｐを加熱し、ブタ２Ｆを脱糖し、ＤＪ、　Ｄｒｔｌｌおよび Ｂ、Ｓ、　Ｄｕｎｂｓｒの方法〔Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｒＲｃｐｒｏｄｕｅｔｉｅ ｎ″、第３０巻、４４５ページ（１９Ｎ））に従ってブタＩＰの分子量９０ｋｄ 、６５ｋｄおよび５５ｋｄの各フラクションを分離した。

われわれは、ハツカネズミにおける免疫学的研究において標準的免疫助剤として 用いられるＦｃＡ（Ｈ３７Ｒａ）中に乳化したブタ２Ｆ７０〜１００ｐ９を方今 １のＣＡＦ　、系雌ハツカネズミ４頭の腹腔内に注射することにより、２Ｐ特異 性のモノクローナル抗体を生成させた。われわれは４週の間隔で追加の注射を施 した。各回の注射は、塩水中に含まれＩ：２Ｐ１００Ｐ９からなるものであって 、腹腔内に投与されｔ；。エピネフリン（０，１ｄＸ１　：５ＯＯＯ）が各回の ２Ｐ（塩水）増刃物と共に腹腔内に注射されＩ；。われわれは、こうして、全Ｉ Ｐ、脱糖２Ｆ、全２Ｐの９０ｋｄ。

６５０および５５ｋｄ各７ラクシヨンならびに２Ｆによって表現される炭水化物 抗原決定基に対して特異的な抗体の生産を行った。

ハツカネズミが２Ｐ特異性の抗体を生産しつつあるかどうかを確めるために、わ れわれは酵素結合免疫吸収剤検定（“ＥＬＩＳＡつを実施した。この検定におい ては、抗体は（放射免疫検定において用いられる放射性標識の代りに）共有結合 的に付着させた酵素によって標識付けされる。抗体に付着させた酵素は、無色の 基質と反応して有色の生成物を与え得るようなものである。一定時間内に放出さ れる生成物の量は酵素の濃度に依存し、このことは、ひいては存在する抗体の量 の目安となる。専用の分光測光装置で光学密度（０，Ｄ、）が読み取られるが、 その値は結合された抗体の量に関係する。

われわれはつぎのようにしてわれわれの検定法を確立した。：われわれは、ｌａ ｗｎ　ｌ　ｏ　ｎ■（Ｄｙｎａｔｃｃｈ製造）ＩＪＵ−プレートのくぼみに、抗 原の塗布用緩衝液（，１モルグリシン、　ｐＨ−ＬＳ）中の溶液（２Ｆ。

脱糖２Ｐ１９０ｋｄ、６５ｋｄまたは５５ｋｄ蛋白質）としてのグリシン緩衝液 （０，１モル、　ｐＨ−９，５）中２〜ｌ　Ｏｐｇ／ｍｌのもの２５ｐｎを塗付 し、塗付されたくぼみを４℃に一夜保持した。くぼみは、丁ｖｅｅｎ　−２００ ，５％とＮａＮ３０．０２％を添加された塩水洗浄溶液で４回すすがれた。われ われはくぼみ一つあたり２５μｇの抗体（全２Ｆで免疫化されたハツカネズミか ら得られた抗ＩＰ血清の１Ｏ−１から１０−′までの逐次１０倍希釈液、または 細胞培養液の上澄み）を添加し、２２°Ｃで１時間保温した。われわれはついで 再びくぼみをすすいだ。われわれは、ウサギの抗ハツカネズミＩｇ（多角特異的 または単一特異的同型試薬、ＦＴ人血液凝集緩衝液＋０．０５％Ｔｖｅｓ＋＋　 −２０＋０．０２％Ｎ！ＮＳ　１　：ｌ０００）またはビオチン化（ｂｉｏｔｉ ｎｙｌｉｔｅｄ）したウサギの抗ハツカネズミ＋１（１：１０００）のいずれか からなる第２次抗体を各くぼみごとにその２５μＣを用いてこのことを繰返し、 ２２℃で１時間保温しｌ；。われわれはくぼみを再びすすぎ洗いし、ついでそれ ぞれのくぼみに、ヤギの抗ウサギ！ｇとアルカリ性フォスファターゼとの複合体 （１：２ＯＮ）またはアビジンとアルカリ性フォスファターゼとの複合体（１： ２ＯＮ）のいずれか各２５μＮを加え、２２℃で１時間保温しＩ；。つぎにわれ われはくぼみをもう一度すすぎ洗いしｔ；。われわれはくぼみを再びすすぎ洗い し、１　ｍｇ／ｒａｎのｐ−ニトロフェニル燐酸エステル（１０％ジェタノール アミン、０．５ミリ％ルＭｇＣ５，１１，０２％ＮｌＮ５、ｐＨ−９，８）２５ μｋを各くぼみに加えて５〜３０分間発色するのを待った。われわれは光学密度 をＤｙ＋＋ａｔｅｃｈ製Ｍｉｃｒｏｅｌｉｓｉ　Ｒｅａｄｅｒで測定した。われ われの希釈用溶液はＴｗｅｅｔ　−２ＯＬ０５％およびＮ＊Ｎ３０．０２％を添 加しｔニーＦＴ人血液凝集緩衝液（ｐｌ！−７，２）からなるものであっｔ；。

鶏卵リソシーム、ウシ血清アルブミン、ニワトリ卵白アルブミンなど他の蛋白質 抗原を抗体特異性に関する陰性対照としてプレートに塗付し、上記と類似の方法 でそれらを分析しＩ；。

われわれは、　２Ｆで免疫化されＩ；ハツカネズミの尾部静脈採血から得られた 血清の、われわれの希釈用溶液を用いた逐次１０倍希釈液についてＥＬＩＳＡＩ ！施した。われわれの検定によって、われわれの免疫化実験手順は、抗原の第２ 回注射後７日以内にｌＯＳ以上の抗２Ｐ力価を恒常的に生じさせるものであるこ とが示されＩ；。われわれの検定においてはまた、２Ｆでの免疫化は、熱で可溶 化された２Ｆによって表現される構造的な抗原反応決定因子、炭水化物について 特異的な抗原反応決定因子、ならびに９０口、６５ｋｄおよび５５ｋｄの分画物 によって表現される抗原反応決定因子に対応する抗体を誘発するものであること が示された。したがって、われわれの免疫化過程では、われわれのＩＰ−抗原調 製物のすべてについて特異的な抗体が誘発されることになる。このように、その ようなハツカネズミから得られた細胞は、種々の２Ｆ抗原調製物に対する抗体を 分泌する雑種を得るための融合対象として使用できることになる。

に従い、細胞融合を実施した。われわれは、ｚＰで免疫化されたＰ３１１１瘍細 胞を持つハツカネズミから得た牌朦細胞をポリエチレングリコールを用いて融合 させることにより、モノクローナル抗ｚＰ抗体を生産する雑種体を創製した。わ れわれは、ハイポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＢＡＴ）で補力され た媒体を与え、ついでＥＬＩＳＡによって特定の抗体の生産に関して取捨するこ とにより、われわれの雑種を選別しｔ；。２種の融合体（Ｆ１２３８よびＦ２８ Ｇ）が、それぞれ異なるいくつかの雑種体系列を形成した。融合体Ｈ３から得ら れた雑種は、現有の（２Ｐ増力された）免疫反応を増進するためにｚＰに対して 再接触させられ、先に定義されたＥＬＩＳＡ実験手順を用いてｚＰに対する反応 性を通じて選別されたハツカネズミから導かれたものである。

雑種系列が確立されたあと、われわれは、われわれの雑種が全２Ｆ。

脱糖２Ｆ、それらの５５ｋ１１および９０ロフラクシヨンならびにＩＰの炭水化 物抗原反応決定因子を含む種々のＩＰ抗原調製物に対応するモノクローナル抗体 を分泌していることを確証した。融合体２８６からの雑種は、　ＩＰ、　９０ｋ ｄフラクシ」ンおよび６５ｋｄフラクシ璽ンの混合物で増力されたハツカネズミ から導かれたものである。われわれは、細胞系列が、そのクローニング効率が１ ００％に達したときに確立されているものと考えた。確立された細胞系列の試料 は、凍結され、液体Ｎ２温度で貯蔵された。

われわれは、上記Ｍｉｓｈｅｌｌの方法に従って、ハッカネズミの腹腔内の腹水 腫瘍として作業所要量のモノクローナル抗体を生成させ、腹水を集めＩ；。われ われはＣＡＦ、ハッカネズミにＰｒｉｓＬｔａｔＬＳｍｆｆｉの腹腔内注射を行 なった。３日後、われわれはＬ５ｍＡの塩水に懸濁させた２Ｘ１０＠個の雑種細 胞をそのハッカネズミに対し腹腔内注射した。ハツカネズミの腹腔から腹水を集 めたのち、われわれは細胞を除去するＩこめにその液を遠心分離（４００ｘ１． ．１０分間）にかけた。

さて、表１について述べると、われわれはその中に上記のようにしてわれわれが 得たモノクローナル抗体を、それらの同形体ならびに特異性と共に列挙した。わ れわれは上記したＥＬＩＳＡによって同形体を決定し、また、２Ｐおよび各種の ２Ｆ成分に対するＥＬＩＳＡ中での反応性を基礎として特異性を決定した。われ われは、既知の方法〔Ｉ；とえば、上記Ｄｒｒｌｌｔ−具よ〕に従って、ｖｔｓ ｔｔｒｎの斑点分析によりこのデータの裏付けをしＩ；。

表　１ ＋２３−３　１ｒＧ−１９０Ｋｄ ＋２３−５　１１Ｇ−１ｃｏカｆ９京 ＋２３−フ　ＩＨＧ−Ｉ　ｃｏｎｆ。

１２３−Ｂ　ＩｇＧ−３Ｃｌｌ０本本 １２３−ＩＩ　ＩｇＧ−１ｃｏｎＩ。

１２３−１２　１寥Ｇ−１５５Ｋｄ １２３−１３　１ｔＧ−１ｃｅｎｔ。

２８６−１　１ｇＭ　ｃｎ。

０６−ｊ　ＩｇＧ−１９０に６ ２に６−３　１ｒＧ−１９０Ｋｄ ０６−４　１ｒＧ−１９０Ｋｄ Ｈ６−５１１Ｇ−１９０Ｋｄ ２１６−６　夏ｇＧ−１９０Ｋｄ ２Ｈ−７１ｒＧ−２＊　９０Ｋｄ ２８Ｇ−１１！Ａ　９０Ｋｄ 本　ｃｏｎｆ、　−熱可溶化されたＺＰが成分フラクシヨンに分離されｔ；際に 失なわれた構造的抗原反応決定因子 ＊本Ｃ［ｌＯ−炭水化物に依存する抗原反応決定因子であって、脱糖と共に失な われＩ；もの われわれは、１．Ｊ、　ＥｉｓｔおよびＪ、　ＤｅＩの手法〔Ｊｏ＋＋ｒｎ＊Ｉ 　ｏｆ　ＣｓＣ５１ｌＢｉｏｌｏ”、第９８巻、７９５ページ（１９８４））を 用いる免疫蛍光法により、モノクローナル抗体について、新しく区分されたブタ 卵母細胞から得られｔ；卵母細胞つきの２Ｐと結合するだめの受容力を評価しｔ ；。われわれが選別したすべてのモノクローナル（すなわち１２３系統）につい て卵母細胞つきのｚＰと結合することが示され、したがって、生産されｔ；抗体 の反応性が明らかにされた。

われわれは、融合体＋２３から得たわれわれのモノクローナル抗体を、抗原蛋白 質であるカギアナカサガイ血青素（“ＫＬＢ”）と、抗体とＫＬＨの量を等しく して化学的に結合させることにより、われわれの抗原を調製しＩ；。

われわれは、硫酸アンモニウム中の血リンパ沈降物として購入されたＫＬＨを、 懸濁沈降物の０．５モルＮａＣｌに対する透析とそれに統くＳ！ｐｂｘｃｒｙｌ ’！１４００カラム上へのゲルろ過（５０ｘ　１．ｓｃｍ、　３ＩＩＱ／時、１ モルＮ５ＣＩ）とによって単離しｔ；。われわれはＫＬＨを含むフラクションを 集め、Ｇｌｌｆｏｒｄ分光光度計：：　２６０（Ａ２８Ｇ測定）を使用する標準 的分光光度測定技術を用いて蛋白質濃度を定量し、かつ、０．５モルＮａＣｌに 対して７ラクシヨンの合体物を透析しＩ；。われわれはつぎにＡｍ１ｃｏｎ′濃 縮器によって透析物を５　ｍｙ／ｍｌまで濃縮しＩ；。

われわれは、腹水＋２３−３．１２３−５．１２３−７．１１３−８．　＋２３ −ＩＩ。

＋２３−１２および１２３−１３（ＥＬＩＳΔによって定量されに力価の大きさ は、１０倍以内の範囲）の各等容量を合体させた。われわれのモノクローナル抗 体の混合物を精製するために、われわれはそれを硫酸アンモニウム（４０％）で 沈澱させ、沈降物をＨ，Ｏに対して透析し、さらに透析された溶液を凍結乾燥し た。われわれは、凍結乾燥されｔ；１２３抗体の混合物を、ＫＬＢ５　、Ｄｔｎ ｇを含む０．５モルＮｌＣｌ　２．５ｖａｌ中に溶解した。少量の不純物を除去 するために混合物を遠心分離（２０００Ｘ　ｔ、、１０分間）にかけたのち、わ れわれは、ｌ−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩 酸塩５０＋ａｙを撹拌しながら添加した。われわれは、室温で１６時間反応を進 行させ、ついで混合物を０．５モルＮｇＣＩに対して透析した。われわれは透析 された混合物を凍結させて貯蔵し、使用の直前にそれを解凍しｔ；。

われわれは、上記１２〜１３ページに記載されたのと同一の実験手順により、ｚ Ｆに対して免疫化するために、　０．ｌ＋ｎｆｉの注射（１回の注射につき複合 物１００μ９を含む）によってＣＡＦ　、ハッカネズミを免疫化した。われわれ は、各回注射のあと、いろいろのの間隔をおいて尾部静脈から採血して血清を得 た。

われわれは、抗２Ｆモノクローナル抗体（１２３モノクローナル）の２Ｐとの結 合を阻止する能力を基礎として、ハッカネズミの挾持発型抗体の存在を決定する ため、入手し！；血清を検定した。われわれは、Ｈ３で免疫化したハツカネズミ から集められた血清を、希釈用ＥＬＩＳ五緩衝液で１：１０”に希釈し、つぎに 希釈された血清を、１：１０’。

１０″または１０’に希釈されｔ；抗２Ｆモノクローナル抗体の試料とｌ：ｌに 混合した。これらの試料は、硫酸アンモニウムで沈澱させられたＨ３の混合物を 、その混合物を包含する個別の（腹水）モノクローナルのそれぞれと共に含んで いた。それぞれの混合物を室温で１時間保温したのち、われわれは各混合物２５ μｌづつを、２Ｐを塗布したＥＬＩＳＡプレートのくぼみに注加した。これに続 いて、抗２Ｆ特異性を確認するために、われわれは標準的なＩＰ　ＥＬＩＳＡ実 験手順をたどった。対照として、正常ハッカネズミ血清と共にあらかじめ適当な 希釈率で保温処理された挾持発型血清およびモノクローナル抗体の両者を含めた 。

表■は、ハツカネズミの挾持発塁血清の阻止活性の程度を、抗２Ｆモノクローナ ル抗体のＩＰとの結合に対する抑制の百分率として示しｔ；ものである。

表■に示されているように、挾持発型血清は、融合体１２３からのモノクローナ ルの混合物の結合を３７％抑制した。このことは、特発型に対して特異的な抗体 が血清中に存在することを示したものである。われわれは、つぎに、個別のモノ クローナル抗体のそれぞれが抑制を受けた程度を確認することによって、挾持発 型血清がそれぞれのモノクローナル抗体を抑制する能力を試験した。抗体１２ト ５は７９％抑制され、抗体１２３−７は４７％抑制された。＋２３−５および７ に対して得られた高度の抑制は、強い挾持発型反応を示唆している。

＋２３−１．Ｈ３−１１，Ｈ３−１２および＋２３−１３においては、相対的に 弱い反応が誘発されている。Ｈ３−３では実質的に挾持発型の性質が発揮されて いない。われわれのデータは、われわれの血清が、混合物中にあるそれぞれのモ ノクローナル抗体のいくつかに対する挾持発型抗体の高い力価を含んでいること を確証した。

Ｂ）ウサギにおける挾持発型抗体の生成われわれは、融合体１２３からのモノク ローナル抗体の、先に記載されたような、塩水中に溶解されＩ；混合物０．５ｍ ｇを用いてウサギを免疫化した。われわれは、抗１［１，ＯＢをミョウバン上に 共沈澱させ、全容量０．５ｍｌをウサギの背部に皮下注射しＩ；〔上記Ｍｉｓｈ ｅｌｌおよび５ｈｉｉ（ｉ、　４７ヘージを見よ〕。われわれは第１回の注射の １か月後に同一の注射の投与を行なった。それぞれにＩ　、ｔＪｒｔｒｇの抗原 を塩水中に含む追加の注射が１か月の間隔で与えられｔ；。われわれは、耳の中 枢動脈から採血して血清の試料を得た。

われわれは、抑制ＥＬＩＳＡにより、挾持発型活性の存在についてウサギの血清 試料を検定した。その検定は、正常ハツカネズミの血清１％が（１２３の特発型 とは無関係な、ウサギの抗ハッカネズミ免疫グロブリン（ｒｌｇＪ）活性を吸収 除去するために）希釈用緩衝液中に含有させたことを除いては、ハツカネズミの 挾持発型活性の定量に関して記述されｔ；のと同一の方法で実施されｔ；。表■ は、ウサギの挾持発型血清による、抗ＺＰモノクローナル抗体の２Ｆとの結合の 抑制の百分率を示している。

表　■ 表■中のデータが示しているように、ウサギの血清は、１２３混合物の結合を７ ４％抑制することが可能であった。このことは、ウサギ血清に含まれる抗体の高 い力価によって説明できる。われわれは、つぎにウサギ血清がそれぞれのモノク ローナル抗体を抑制する能力をチェックした。１２３−３．１２３−５および！ ２３−７に対しては強い挾持発を反応が発揮され、＋２３−Ｌ　Ｉ＋および１３ に対しては中等度の活性が。

対応したが、１２３−１２によっては相対的に弱い反応が示された。したがって 、１つを除くほとんどのモノクローナルにウサギ血清がよく反応したことになる 。

われわれは、つぎに挾持発型抗体での免疫化により、ウサギおよびハッカ不ズミ において抗ＩＰ抗体を誘発した。

Ａ）ハッカ不ズミの挾持発型抗体でのウサギの免疫化われわれは、上記１９〜２ ０ページの記述のようにして生成させた血清を使用して、ハッカ不ズミの挾持発 型抗体によりウサギを免疫化しＩ；。われわれは、飽和硫酸アンモニウムの添加 によって、１２３モノクローナル抗体に対する挾持発型活性を含むハツカネズミ 血清を、硫酸アンモニウムの最終濃度が４０％になるようにして沈澱させた。わ れわれは、ついでその沈澱物をＦＴＡ血液血液凝集緩衝液５中ｌ中溶解し、同じ 緩衝液に対して透析した。われわれはこの調製物１．ＯｒｎｇをＦＣＡ中に乳化 し、　０．２ｍ１１をウサギの背部に皮下注射した。それ以後の接種は塩水に添 加することによって１か月の間隔で同一部位に投与された。われわれは第１回の 追加免疫では１．Ｏｍｇの抗原を、第２回目には２．０ｍｇの抗原を注射した。

ウサギの耳の中枢動脈から、血液が定期的に抜き取られた。われわれは、第１回 の注射の１４日後および３２日後にウサギから採血した。われわれは第２回の注 射を３２日目に施し、第４０．５４および６２日にそのウサギから採血した。第 ３回の注射が第６８日に施され、第８３日に再びそのウサギから採血した。

われわれは、標準の２Ｐ　ＥＬＩＳＡを用いて、１０倍ずつの逐次希釈で血清試 料を検定した。免疫学的に２Ｐとは無関係な非特異的な結合は、ウィルス蛋白質 （ＶＰ）抗原に対してチェックされた。２Ｐとは対応しない抗体を含む硫酸アン モニウムで沈降させｊ；腹水によって免疫化されたウサギから陰性対照血清が得 られた。図１に見られるように、抗２Ｐ抗体の水準は、採血を順次行なうごとに 累進的に増大し、（抗原の投与量が倍増された）第３回の注射の後では劇的に上 昇した。

したがって、挾持発型での免疫化の結果として抗体の力価が増大したことになる 。

ｖＰに対する非特異的結合は比較的一定に保持されｔ；。未知の特異性を伴なう 抗ＩＰ活性における幾分の上昇が、対照動物の血清に検出された。われわれは、 新しく区分されたブタ卵母細胞を利用する間接の免疫蛍光法的研究により、ハッ カ不ズミの挾持発方で免疫化されたウサギの血清中に抗２Ｆ活性の存在を実証し た。われわれの対照血清は陰性であった。したがって、われわれは、先に得たＥ ＬＩＳＡの結果を立証し、われわれが抗２Ｆ抗体を誘発したことの別の証拠をつ け加えた。その上、われわれは、挾持発型で免疫化されたウサギからの抗２Ｆ抗 体は、それが生体中に存在する時にはＺＰと結合し得るということを示した。

ハツカネズミの挾持発型で誘発された抗ｌＰ抗体の特異性を評価するｔ；めに、 われわれは種々の抗原調製物に対して種々の希釈度でウサギの血清を検定した。

表■は、第５回の採血をＥＬＩＳＡ希釈用緩衝液で１：１０”に希釈しｔ；もの のｚＰに対する反応性を表示するＥＬＩＳＡでのＯ，Ｄ、を表している。

＊バックグラウンドー陰性の対照ウサギから採られた血清を用いて得られた基線 ０．Ｄ。

表■に示されているように、ｚＰおよび脱糖２Ｆに対してのみ顕著な反応性が得 られており、そのことは、ハツカネズミの挾持発型血清が、構造的な抗原反応決 定因子に対して特異的なウサギ抗体を誘発しｔ；ことを示唆している。

Ｂ）ウサギの挾持発型抗体でのハッカネズミの免疫化われわれは、２２〜２３ペ ージに記述されたようにして生成させた血清を使用して、ウサギの挾持発型抗体 でハッカ不ズミを免疫化した。われわれは、１２３モノクローナル抗体に対応す る挾持発型活性を含有するウサギ血清を、最終濃度４０％まで飽和ｉ酸アンモニ ウムで沈降させ、ついでＦＴ人血液凝集緩衝液ト社中に溶解して、さらにＰＴＡ 血液凝集緩衝液に対して透析した。非特発型ハッカネズミ＋ｇ抗原反応決定因子 に対して特異的なウサギ抗体は、ハッカネズミ＋１−５ｅｐｈｘｒｏｓｅ　ＣＬ −４８カラム（カラム容積−７ｔｎｆｔ、流下緩衝液−ＦＴＡ。

０、Ｓ峠／分）に（２回）通すことにより除去された。われわれは、抗２Ｐ特発 型とは無関係なハッカネズミの免疫グロブリン反応決定因子に関して特異的なウ サギ抗体の除去と、挾持発型阻止活性の保持とをＥＬＩＳＡによって確認した。

挾持発型抗体は、１ｍ１ｃｏｎ装置で６　ｔｎｇ／ｒｎｌまで濃縮された。

われわれは、ウサギの挾持発型（ＦＣＡ）３３０μ９の第１回の腹腔内注射によ り、方今１の雌のＣＡＦ、ハッカネズミ６頭を免疫化した。最初の注射の後、わ れわれは追加の注射を３回施した。１か月の間隔で投与された第２回および第３ 回の注射は、エピネフリン（１：５０００）０．１ｍｆｉと共に腹腔内に与えら れたものであって、ＦＴＡ中に１００Ｎ９の抗原を含有していた。第４回の注射 においては、われわれはハッカネズミに対して種々の量（１μ９、＋００ｐｇま たはＩ　Ｂ）を与えた。われわれは、尾部静脈から一定間隔で採血することによ って血清試料を得た〔図２を見よ〕。ハッカ不ズミは初日に採血され注射を受け た。

第３１日にそれらのハツカネズミは第２回の注射を受け、第４２日および第５６ 日に採血されｌ；。ハッカネズミは第５７日に第３回の注射を受け、第６７日に 採血された。われわれは最終回の注射を第７４日に投与し、その１０日後に採血 した。

われわれは抗２Ｐ力価を標準の２Ｐ　ＥＬＩＳＡによって評価した。われわれは ＶＰを陰性の対照抗原として用いた。図２に見られるように、ウサギの挾持発型 抗体はハツカネズミに抗２Ｆ反応を誘発し、これはその後の接種によって増加を 続けた。抗ＶＰ抗体の水準は、免疫化の全過程を通じて無変化のままに保たれた 。しｔ；がって、われわれがＥＬＩＳＡの０．Ｄ、で確認した平均の抗体水準は 、挾持発型抗体での免疫化の結果として著しい上昇を示しｔ；ことになる。

われわれは、上記Ｎ１５ｈｅ！＋および５ｂｉｉ（ｉの２９９ページに記述され Ｉ；間接の免疫蛍光性技術を用いて、免疫化後のハツカネズミの血清が、新しく 区分されたブタの卵母細胞中の２Ｆと結合する抗体を含有することを明示するこ とによってわれわれの結果を実証した。われわれ−は、洗浄されたブタ卵母細胞 をハッカネズミ抗血清の（ＰＴＡ血液凝集緩衝液での）ｌ　：４０希釈液で１時 間、２２°Ｃにおいて処理した。卵母細胞は（ＦＴＡ中で）洗浄され、ついで蛍 光性のウサギ用抗ハツカネズミ免疫グロブリン試薬のｌ：ｌＮ希釈液に２２℃で １時間接触させＩ；。最後に、われわれは卵母細胞を洗浄し、蛍光顕微鏡法で検 査しｔ二。

われわれがこれまでにこの発明の態様を多数提示してきたので、われわれの基本 的な構成が、この発明の方法と組成物とを利用するそれ以外の態様を提供するよ うに改変されてもよいことは明白である。それ故に、この発明の要旨がここに添 付された請求の範囲によって定義されるべきであって、例としてこれまでに示さ れた特定の態様によるべきではないということが認められるであろう。

図　２ ウサギの挾持発型抗体で免疫化されたハツカネズミの血清中での抗ｚｐ活性の平 均値 ＥＬＩＳＡＯ，Ｄ、対　血清希釈率 （Ｂ１＝採血４１、以下同様） 血清希釈率 国際調査報告

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．雌性哺乳動物に対し、抗透明帯抗体に対応して形成された抗特発型抗体の避 妊有効量を包含する組成物を投与する段階を包含し、その抗特発型抗体が、避妊 反応を誘発することが可能な抗透明帯抗原反応決定因子の内部写像を表現するも のである、避妊のための方法。
2. ２．避妊性の抗透明帯反応の誘発に用いられる抗特発型抗体がモノクローナル抗 体である、請求の範囲第１項に記載の方法。
3. ３．避妊性の抗透明帯反応の誘発に用いられる抗特発型抗体が血清抗体である、 請求の範囲第１項に記載の方法。
4. ４．抗特発型抗体が、排卵の直前または直後に形成されるＺＰ抗原反応決定因子 の内部写像を表現するものである、請求の範囲第１項に記載の方法。
5. ５．組成物が約１ｎｇ／ｋｇから約１０μｇ／ｋｇまでの投与量で投与されるも のである、請求の範囲第１項に記載の方法。
6. ６．投与薬量が約１０μｇ／ｋｇである請求の範囲第５項に記載の方法。
7. ７．抗透明帝抗体に対する抗特発型抗体の避妊有効量ならびに製薬上認め得る担 体を包含し、抗特発型抗体が、避妊反応を誘発することが可能な抗透明帯抗原反 応決定因子の内部写像を表現するものである避妊用組成物。
8. ８．該量が約１ｎｇ／ｋｇ約１ｎｇ／ｋｇの間にある請求の範囲第７項に記載の 組成物。
9. ９．該量が約１０μｇ／ｋｇである請求の範囲第７項に記載の組成物。
10. １０．抗特発型抗体が、避妊反応を誘発することが可能な透明帯抗原反応決定因 子の内部写像を表現する、製薬上認め得る避妊用組成物の製造のための、抗透明 帯抗体に対する抗特発型抗体の避妊有効量の使用。