CN114698592A - 一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用 - Google Patents
一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114698592A CN114698592A CN202210472055.7A CN202210472055A CN114698592A CN 114698592 A CN114698592 A CN 114698592A CN 202210472055 A CN202210472055 A CN 202210472055A CN 114698592 A CN114698592 A CN 114698592A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mouse
- freund
- antigen
- adjuvant
- renal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 title claims abstract description 47
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 title claims abstract description 47
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 230000006378 damage Effects 0.000 title claims abstract description 31
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 77
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 77
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 75
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 40
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 claims description 28
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 8
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 8
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 8
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 claims description 6
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims description 5
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims description 5
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims description 5
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 4
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 claims description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 2
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 abstract description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 67
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 28
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 16
- 210000001913 submandibular gland Anatomy 0.000 description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 13
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 11
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- 206010061481 Renal injury Diseases 0.000 description 10
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 208000034943 Primary Sjögren syndrome Diseases 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 241001523209 Antissa Species 0.000 description 8
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 7
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 7
- 210000004926 tubular epithelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 6
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 6
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 5
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 4
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 4
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 4
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 4
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- QCHFTSOMWOSFHM-WPRPVWTQSA-N (+)-Pilocarpine Chemical compound C1OC(=O)[C@@H](CC)[C@H]1CC1=CN=CN1C QCHFTSOMWOSFHM-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 3
- 208000031873 Animal Disease Models Diseases 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M Pentobarbital sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)[N-]C1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QCHFTSOMWOSFHM-UHFFFAOYSA-N SJ000285536 Natural products C1OC(=O)C(CC)C1CC1=CN=CN1C QCHFTSOMWOSFHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 238000011558 animal model by disease Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 3
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 3
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 3
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 229960001416 pilocarpine Drugs 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 3
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 235000009161 Espostoa lanata Nutrition 0.000 description 2
- 240000001624 Espostoa lanata Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 2
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 2
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 229960002275 pentobarbital sodium Drugs 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000004018 waxing Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000035 BCA protein assay Methods 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022461 Glomerular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 208000019025 Hypokalemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 1
- 102100026383 Vasopressin-neurophysin 2-copeptin Human genes 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 208000005946 Xerostomia Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N bicinchoninic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C=3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C21 AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000010428 chromatin condensation Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000078 claw Anatomy 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010064 diabetes insipidus Diseases 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000000804 eccrine gland Anatomy 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 210000003499 exocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001703 glandular epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000852 glomerular disease Toxicity 0.000 description 1
- 231100000853 glomerular lesion Toxicity 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 208000013403 hyperactivity Diseases 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 208000037806 kidney injury Diseases 0.000 description 1
- 210000004561 lacrimal apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 230000007108 local immune response Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000003681 parotid gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 206010036067 polydipsia Diseases 0.000 description 1
- 208000024896 potassium deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 210000000512 proximal kidney tubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000006748 scratching Methods 0.000 description 1
- 230000002393 scratching effect Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
- A61K49/0008—Screening agents using (non-human) animal models or transgenic animal models or chimeric hosts, e.g. Alzheimer disease animal model, transgenic model for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
- A01K2267/0387—Animal model for diseases of the immune system
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用，本发明首次发现只采用小鼠肾小管抗原和佐剂免疫小鼠的方法即可构建得到同时表现为干燥综合征和肾损害的小鼠模型，所述方法不仅具有高效、快速、经济的优点，而且极易推广并广泛适用，具有很好的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，具体地，本发明涉及一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用。
背景技术
干燥综合征(Sjogren Syndrome，SS)是一种主要累及外分泌腺体的慢性炎症性自身免疫性疾病，干燥综合征根据发病原因可分为原发性干燥综合征(primary SjogrenSyndrome，pSS)和继发性干燥综合征(secondary Sjogren Syndrome，sSS)两种，随着疾病的进展，pSS可造成多器官、多系统受累。pSS的患病率约为0.1％-1％，仅次于类风湿关节炎，居第二位，男女比例为1:9，目前其发病机制仍不明确，pSS被认为是一个起源于遗传因素与能够触发异常自身免疫应答的外源性因素之间的相互作用而发病的多因素致病过程。在特定表观遗传因素、遗传易感性和激素调节的作用下，触发外分泌腺上皮细胞(SGEC)功能失调，在pSS的发病中至关重要，是T淋巴细胞、B细胞过活跃和自身抗体产生的基础。除涎腺、腮腺、泪腺等外分泌腺以外，pSS还可累及皮肤、关节、肺、肾、心脏、血管等多种器官以及周围神经系统。肾间质损害是pSS肾损伤中最常见的病理类型，其次为肾小球肾炎。干燥综合征肾损害非常隐匿，临床症状不突出，只有约4.2％的患者有明显肾脏损害的临床表现，可见对干燥综合征肾损害的发病病因和病理机制的研究至关重要。
干燥综合征肾损害不仅起病隐蔽病程长，而且发病的病因和病理机制尚无明确的定论，所以对该病的研究就显得异常的迫切。建立动物模型并利用动物疾病模型来研究人类疾病，可以克服平时一些不易见到，而且不便于在病人身上进行实验的各种人类疾病的研究。同时还可克服人类疾病发生发展缓慢、潜伏期长、发病原因多样、经常伴有各种其它疾病等因素的干扰，可以用单一的病因，在短时间内复制出典型的动物疾病模型，对于研究人类各种疾病的发生、发展规律和防治疾病疗效的机理等是极为重要的手段和工具。实验动物是生物医学研究中不可或缺的工具，实验动物在探究基因基础功能、探寻疾病的发病机制以及应用药物的临床前筛选等方面都有着十分重要的作用。小鼠在发育和代谢上与人类具有极大的相似性，其基因与人类基因也具有极高的相似度(小鼠99％的基因能在人类基因组中找到同源基因)，且其生命周期短，被认为是哺乳动物中理想的模式生物。随着生物医学研究的不断发展，目前本领域仍缺乏干燥综合征肾损害相关的动物疾病模型，因此，提供一种成模率高、造模时间短、操作简单的干燥综合征肾损害小鼠疾病模型的构建方法仍是本领域亟待解决的问题。
发明内容
为了弥补本领域存在的干燥综合征肾损害小鼠模型这一技术空白，本发明的目的在于提供一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用。
本发明的上述目的通过以下技术方案得以实现：
本发明的第一方面提供了一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法。
进一步，所述方法包括如下步骤：
对小鼠施用含有小鼠肾小管抗原和弗氏佐剂的乳化剂，得到干燥综合征肾损害小鼠模型。
进一步，所述小鼠为C57BL/6小鼠；
优选地，所述C57BL/6小鼠为雌性C57BL/6小鼠；
更优选地，所述雌性C57BL/6小鼠为8周龄的雌性C57BL/6小鼠。
进一步，所述含有小鼠肾小管抗原和弗氏佐剂的乳化剂的施用方式包括皮下注射、静脉注射、腹腔注射或肌肉注射；
优选地，所述含有小鼠肾小管抗原和弗氏佐剂的乳化剂的施用方式为皮下注射。
在本发明的具体实施例中，所述含有小鼠肾小管抗原和弗氏佐剂的乳化剂的施用方式为皮下注射，皮下注射刺激免疫系统产生的应答显著强于其他途径。
进一步，所述小鼠肾小管抗原的制备包括如下步骤：
取小鼠的肾脏组织，加入消化酶进行消化，过滤制得悬液，对悬液进行离心取上清，制得小鼠肾小管抗原溶液；
优选地，所述小鼠为C57BL/6小鼠；
更优选地，所述C57BL/6小鼠为雌性C57BL/6小鼠；
最优选地，所述雌性C57BL/6小鼠为8周龄的雌性C57BL/6小鼠；
优选地，所述消化酶为胶原酶Ⅳ。
进一步，在本发明的具体实施方式中，所述小鼠肾小管抗原的制备包括如下步骤：按需要取C57BL/6小鼠，脱颈椎处死，75％酒精消毒，无菌条件下取出双侧肾脏，剥离包膜及结缔组织，用PBS洗净后放入无菌青霉素小瓶中，按照每个肾脏加入0.5mL PBS的量，向无菌青霉素小瓶中加入PBS，将瓶内的肾脏剪碎并转移到2mL细胞冻存管中，加入1.25mg/mL的胶原酶Ⅳ2mL于37℃的条件下消化1小时，每15分钟吹打一次使其消化更均匀，先后使用70μm和40μm的筛网进行过滤去除未消化组织以及肾小球，得悬液。在冰浴中将悬液充分匀浆，3000r、20min、4℃的条件离心，取上清液，采用BCA蛋白定量法定量肾脏抗原浓度，用PBS将肾小管抗原浓度调整至2mg/mL(或1mg/mL)。
进一步，所述BCA蛋白定量法是本领域技术人员常用的一种蛋白定量的方法。BCA(bicinchoninic acid，二喹啉甲酸)是一种稳定的水溶性复合物，在碱性条件下，二价铜离子可以被蛋白质还原成一价铜离子，一价铜离子可以和BCA相互作用，两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的络合物，该复合物为水溶性的，在562nm处显示强吸光性，在一定浓度范围内，吸光度与蛋白质含量呈良好的线性关系，制作标准曲线，因此，可以根据待测蛋白在562nm处的吸光度计算待测蛋白的浓度。
进一步，所述弗氏佐剂包括FCA弗氏完全佐剂或FIA弗氏不完全佐剂。
进一步，所述弗氏佐剂是目前动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂(FIA)是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1-5：1，可根据需要而定，通常为2：1。不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2-20mg/mL)或死的结核分枝杆菌，即得完全弗氏佐剂(FCA)。一般首次注射时用1/2体积FCA加上1/2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成“油包水”乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。
进一步，所述佐剂与抗原乳化的方法包括但不限于如下方法：
(1)研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。该法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大；
(2)注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净空气，然后交替推动针管，直至形成粘稠的乳剂为止。本法优点是容易做到无菌操作，抗原损失少，适用于制备少量的抗原乳剂。但同时难以乳化完全，个别抗原，用塑料注射器推动较为困难，而用玻璃注射器又有渗漏。制备好的乳化剂经鉴定才能使用。鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴状浮于水面，即乳化完全，为合格的可用于后续实验研究的油包水剂；
(3)超声法：采用超声破碎仪进行佐剂与抗原的乳化，操作过程中一定要控制超声频率和时间，超声容易激发一些自由基，对抗原有未知损害。乳化方法要根据抗原和需要而定。
在本发明的具体实施例中，所述佐剂与抗原乳化的方法为注射器混合法。
进一步，所述含有小鼠肾小管抗原和弗氏佐剂的乳化剂的制备包括如下步骤：
在2mg/mL的肾小管抗原溶液中加入等量FCA弗氏完全佐剂制备得到FCA弗氏完全佐剂配制的1mg/mL小鼠肾小管抗原乳化剂；
在1mg/mL的肾小管抗原溶液中加入等量FIA弗氏不完全佐剂制备得到FIA弗氏不完全佐剂配制的0.5mg/mL小鼠肾小管抗原乳化剂。
进一步，加入等量FCA弗氏完全佐剂或FIA弗氏不完全佐剂，将小鼠肾小管抗原浓度稀释至1mg/mL后，需反复吹打直至两液互溶并呈乳白色状。
进一步，分别在第0天、第7天于小鼠的颈背部皮下注射FCA弗氏完全佐剂配制的1mg/mL小鼠肾小管抗原乳化剂，在第14天于小鼠的颈背部皮下注射FIA弗氏不完全佐剂配制的0.5mg/mL小鼠肾小管抗原乳化剂；
优选地，所述注射的量为0.1mL/只。
进一步，本发明通过具体的实施例证明了以1mg/mL的浓度给予0.1mL/只较适宜，过高或过低易诱导免疫耐受。
在本发明的具体实施例中，本发明将C57BL/6小鼠的肾小管匀浆与弗氏佐剂制成乳化剂，通过皮下多点注射进入同种小鼠的颈背部，介导炎症免疫反应，使小鼠产生淋巴细胞浸润，干扰其免疫系统。皮下多处注射的方式可以产生较强的免疫应答。抗原的注射分3次进行，在第0天和第7天用弗氏完全佐剂调整抗原浓度，第14天用弗氏不完全佐剂平行操作，加强局部免疫应答。
进一步，本发明所述的注射抗原的次数和间隔适宜，频繁注射可能引起小鼠生理和精神状态低下，易于死亡。
本发明的第二方面提供了小鼠肾小管抗原在制备干燥综合征肾损害小鼠模型中的应用；
优选地，所述小鼠肾小管抗原为根据上述的制备方法制备得到的小鼠肾小管抗原。
在本发明的具体实施例中，本发明首次发现只采用小鼠肾小管抗原+佐剂免疫小鼠的方法即可构建得到干燥综合征肾损害的小鼠模型，为本领域提供了一种干燥综合征肾损害小鼠模型，为干燥综合征肾损害的发病机制和干预策略的研究提供了基础。
本发明的第三方面提供了根据本发明的第一方面所述的构建方法构建得到的小鼠模型在筛选用于治疗和/或预防干燥综合征肾损害的药物中的应用。
本发明的第四方面提供了一种筛选用于治疗和/或预防干燥综合征肾损害的药物的方法。
进一步，所述方法包括如下步骤：
(1)将待测试药物施用于本发明第一方面所述的构建方法构建得到的小鼠模型中；
(2)分析待测试药物的治疗效果并进行评价，选择能够明显改善小鼠模型干燥综合征肾损害病理特征的测试药物。
进一步，本发明还提供了对制备得到的干燥综合征肾损害小鼠模型进行验证的方法，所述方法包括如下步骤：
将C57BL/6小鼠随机分组，保证各组的小鼠数量、体重、状态尽可能地相近；用剪刀或电动剃须刀将小鼠颈背部的毛剃掉以备注射抗原，正常对照组小鼠不作处理；
分别在第0天，第7天于小鼠的颈背部皮下多点注射上述制备得到的FCA配制的1mg/mL小鼠肾小管抗原乳化剂；在第14天用同样的方法注射等量的上述制备得到的FIA配制的肾小管抗原(0.5mg/mL)乳化剂，注射量为0.1mL/只；对照组小鼠用同样的方法注射等量的生理盐水；
造模6周左右，检测指标，筛选造模成功的小鼠模型，所述检测指标包括：小鼠状态观察、饮水量检测、唾液量检测、血清生化分析、尿液生化分析、肾脏及颌下腺组织病理学检测、透射电镜观察肾小管上皮细胞超微结构；
优选地，所述血清生化分析方法为：于6周末处死小鼠，留取血清检测肌酐、尿素氮、钾；
优选地，所述尿液生化分析方法为：处死小鼠前代谢笼留取24小时尿液，检测尿量、尿渗透压、尿总蛋白、尿微量白蛋白、尿磷、尿钾、尿钙；
优选地，所述肾脏及颌下腺组织病理学检测方法为：于6周末处死小鼠，取肾脏及颌下腺做病理检查，用H&E染色法进行检测，光镜下观察模型组小鼠的病理学改变。
优选地，所述唾液量检测方法为：测量前小鼠腹腔注射1％的戊巴比妥钠0.2mL，以呼吸平稳，眼角膜反射消失，四肢肌群松弛为麻醉标准；完全麻醉后使小鼠处于头低的稍倾斜状态，可以用保温垫给予温度，腹腔注射0.025mg/mL毛果芸香碱溶液0.1mL，5分钟后，将事先称好的棉花小球塞入小鼠口中，10分钟后取出；用湿重法求出小鼠唾液重量。
优选地，所述肾脏及颌下腺组织病理学检测方法为：于6周末处死小鼠，取肾脏及颌下腺做病理检查，用H&E染色法检测，组织的处理应先放于10％的福尔马林中浸泡24小时后，依次进行冲洗、脱水和透明、浸蜡、包埋、石蜡切片以及最终的H&E染色。
相对于现有技术，本发明具有的优点和有益效果：
(1)本发明首次提供了一种干燥综合征肾损害的小鼠模型，并提供了所述干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法，解决了目前本领域存在的缺乏干燥综合征肾损害小鼠模型这一技术问题，为干燥综合征肾损害的发病机制和干预策略的研究提供了基础；
(2)本发明提供的干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法具有成模率高、造模时间短、操作简单等优点，对构建得到的干燥综合征肾损害小鼠模型进行实验验证发现，该小鼠模型具有干燥综合征肾损害的病理特征，可用于干燥综合征肾损害治疗药物的筛选中；
(3)与现有技术相比，本发明首次发现只采用小鼠肾小管抗原+佐剂免疫小鼠的方法即可构建得到干燥综合征肾损害小鼠模型，本发明提供的这一构建方法不仅具有高效、快速、经济的优点，而且极易推广并广泛使用，具有很好的应用价值。
附图说明
图1为本发明所述的干燥综合征肾损害小鼠模型的构建与验证实验流程图；
图2为本发明构建得到的干燥综合征肾损害小鼠饮水量、唾液量、24小时尿量、血生化及尿生化分析结果；
图3为ELISA法检测小鼠血清中抗SSA/SSB抗体水平结果图，其中，A图：anti-SSA，B图：anti-SSB；
图4为肾脏HE染色光镜图，其中，A图：对照组，放大400倍，B图：肾小管蛋白免疫组，放大400倍；
图5为颌下腺HE染色光镜图，其中，A图：对照组，分别放大100倍和放大400倍，B图：肾小管蛋白免疫组，分别放大100倍和放大400倍；
图6为肾脏透射电镜图，其中，A图：对照组近端小管上皮细胞刷状缘，放大11000倍，B图：对照组近端小管上皮细胞线粒体，放大13000倍，C图，肾小管蛋白免疫组近端小管上皮细胞刷状缘，放大11000倍，D-F图，肾小管蛋白免疫组近端小管上皮细胞线粒体，放大13000倍。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解为：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例干燥综合征肾损害小鼠模型的构建与验证
本发明所述的干燥综合征肾损害小鼠模型的构建与验证实验流程图详见图1。
1、实验材料
C57BL/6小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，6周龄，雌性，饲养于北京协和医院实验动物中心SPF级实验室，温度23±1℃，湿度50％-60％，不限制饮食。动物购进实验室前进行了1周的检验检疫，结果合格，1周后转入指定实验室进行适应性饲养1周。该小鼠实验方案已受北京协和医院实验动物福利伦理委员会批准。
2、药物和试剂
弗氏完全佐剂(CFA)：购自美国Sigma公司(F5881)；
弗氏不完全佐剂(IFA)：购自美国Sigma公司(F5506)；
磷酸盐缓冲液(PBS)：购自北京索莱宝科技有限公司(P1020)；
胶原酶Ⅳ：购自美国sigma公司(C0130)。称取100mg溶于10mL PBS中配制成10mg/mL，使用时稀释成所需浓度(1.25mg/mL)；
戊巴比妥钠：购自美国sigma公司。白色粉末，称取1.0g溶于100mL双蒸水配制成溶液(1.0％)，剂量以体重20g的小鼠腹腔注射0.2mL；
毛果芸香碱：购自美国selleck公司(S4231)。白色粉末，称取10mg溶于10mL双蒸水中配制成1mg/mL，使用时稀释成所需浓度(0.025mg/mL)，剂量以体重20g的小鼠腹腔注射0.1mL；
BCA蛋白浓度测定试剂盒：购自北京索莱宝科技有限公司(PC0020)；
红细胞裂解液：购自北京索莱宝科技有限公司(R1010)；
苏木素伊红(H&E)染色试剂盒：购自北京索莱宝科技有限公司(G1120)。3、干燥综合征肾损害小鼠模型的构建过程
(1)小鼠肾小管抗原的制备：按需要取C57BL/6小鼠，脱颈椎处死，75％酒精消毒，无菌条件下取出双侧肾脏，剥离包膜及结缔组织，用PBS洗净后放入无菌青霉素小瓶中，按照每个肾脏加入0.5mL PBS的量，向无菌青霉素小瓶中加入PBS，将瓶内的肾脏剪碎并转移到2mL细胞冻存管中，加入1.25mg/mL的胶原酶Ⅳ2mL于37℃消化1小时，每15分钟吹打一次使其消化更均匀，先后使用70μm和40μm的筛网进行过滤去除未消化的组织以及肾小球，得悬液。在冰浴中将悬液充分匀浆，3000r/20min/4℃的条件离心，取上清液，采用BCA蛋白定量法定量肾脏抗原浓度，用PBS将肾小管抗原浓度调整至2mg/mL，加入等量FCA弗氏完全佐剂或FIA弗氏不完全佐剂，将小鼠肾小管抗原浓度稀释至1mg/mL(或0.5mg/mL)，反复吹打直至两液互溶并呈乳白色状，即制得注射用的1mg/mL(或0.5mg/mL)小鼠肾小管抗原；
(2)将8周龄的雌性C57BL/6小鼠随机分组，保证各组的小鼠数量、体重、状态尽可能地相近；用剪刀或电动剃须刀将小鼠颈背部的毛剃掉以备注射抗原，正常对照组小鼠不作处理；
(3)分别在第0天，第7天于小鼠的颈背部皮下多点注射步骤(1)中制备得到的FCA弗氏完全佐剂配制的1mg/mL小鼠肾小管抗原，注射量为0.1mL/只；在第14天用同样的方法注射等量的步骤(1)制备得到的FIA弗氏不完全佐剂配制的肾小管抗原(肾小管抗原的终浓度为0.5mg/mL)；对照组小鼠用同样的方法注射等量的生理盐水；
(4)造模6周左右，检测指标，所述检测指标包括小鼠状态观察、饮水量检测、唾液量检测、血清生化分析、尿液生化分析、肾脏及颌下腺组织病理学检测、透射电镜观察肾小管上皮细胞超微结构，筛选造模成功的小鼠；
小鼠状态观察：在造模后第3周左右，小鼠出现搔抓口唇、舔爪现象，随后这种现象逐渐明显；
饮水量检测：于造模前一周开始检测，每周测一次；造模后饮水量开始逐渐上升；
唾液量检测：在造模后第5周进行；在造模第5周及此后，模型组小鼠的唾液量应比正常组低，并且逐渐减少；
血清生化分析：于6周末处死小鼠，留取血清检测肌酐、尿素氮、钾；
尿液生化分析：处死小鼠前代谢笼留取24小时尿液，检测尿量、尿渗透压、尿总蛋白、尿微量白蛋白、尿磷、尿钾、尿钙；
肾脏及颌下腺组织病理学检测：于6周末处死小鼠，取肾脏及颌下腺做病理检查，用H&E染色法进行检测，光镜下可见模型组小鼠的肾小管上皮细胞肿胀、空泡样改变，管腔内可见脱落细胞，间质灶状淋巴细胞浸润，不伴有肾小球病变及小管萎缩，模型组小鼠的颌下腺存在明显的淋巴细胞浸润、成灶，而正常组无明显浸润；
唾液量检测的方法为：测量前小鼠腹腔注射1％的戊巴比妥钠0.2mL，以呼吸平稳，眼角膜反射消失，四肢肌群松弛为麻醉标准；完全麻醉后使小鼠处于头低的稍倾斜状态，可以用保温垫给予温度，腹腔注射0.025mg/mL毛果芸香碱溶液0.1mL，5分钟后，将事先称好的棉花小球塞入小鼠口中，10分钟后取出；用湿重法求出小鼠唾液重量；
肾脏及颌下腺组织病理学检测方法为：于6周末处死小鼠，取肾脏及颌下腺做病理检查，用H&E染色法检测，组织的处理应先放于10％的福尔马林中浸泡24小时后，依次进行冲洗、脱水和透明、浸蜡、包埋、石蜡切片以及最终的H&E染色；
此外，采用ELISA法检测小鼠血清中抗SSA/SSB抗体水平，以验证各组小鼠血清抗SSA/SSB抗体的水平。
4、实验分组
实验组为本实施例中构建得到的干燥综合征肾损害小鼠模型3只，对照组为采用同样的方法注射等量的生理盐水得到8周龄的雌性C57BL/6小鼠3只，阳性对照组为皮下注射颌下腺蛋白抗原(2mg/mL)得到8周龄的雌性C57BL/6小鼠3只。
5、实验结果
结果显示，与对照组相比，皮下注射肾小管蛋白组小鼠有抓挠口唇的现象，且饮水量、尿量显著增加，唾液量显著减少；与对照组相比，皮下注射肾小管蛋白组小鼠血清肌酐、尿素氮无变化，血钾则显著降低；与对照组相比，皮下注射肾小管蛋白模型组小鼠出现低渗尿，皮下注射肾小管蛋白组小鼠24小时尿钾、尿磷、尿钙、尿蛋白及尿微量白蛋白排泄均显著增加(见图2)；
ELISA法检测小鼠血清中抗SSA/SSB抗体水平的结果显示，与对照组相比，皮下注射肾小管蛋白组(1mg/mL)小鼠血清抗SSA/SSB抗体水平显著升高；皮下注射肾小管蛋白组(1mg/mL)小鼠血清抗SSA/SSB抗体水平与阳性对照组(皮下注射颌下腺蛋白抗原组(2mg/mL)作为阳性对照组)无显著差异(见图3)；
肾脏HE染色光镜结果图显示，与对照组相比，光镜下可见皮下注射肾小管蛋白组(1mg/mL)小鼠肾小管上皮细胞肿胀、空泡样改变，间质灶状淋巴细胞浸润，不伴有肾小球病变及小管萎缩，黑色箭头所指为肾小管上皮细胞肿胀、空泡样改变，白色箭头所指为间质灶状淋巴细胞浸润(见图4)；
颌下腺HE染色光镜结果图显示，皮下注射肾小管蛋白组(1mg/mL)小鼠颌下腺存在明显的淋巴细胞浸润、成灶，而正常组无明显浸润，白色箭头所指为灶状淋巴细胞浸润(见图5)；
肾脏透射电镜结果图显示，皮下注射肾小管蛋白组(1mg/mL)小鼠肾小管上皮细胞刷状缘倒伏、断裂，线粒体变小、膜密度增加、嵴减少或消失、外膜断裂，细胞核大小正常，但缺乏染色质凝聚(见图6)；
以上得到的唾液分泌减少、多饮、尿崩、低血钾、血清抗SSA/SSB阳性、肾脏及颌下腺组织间质灶状淋巴细胞浸润等结果均表明了本发明构建得到的小鼠模型为干燥综合征肾损害的小鼠模型。且结果显示以1mg/mL小鼠肾小管抗原的浓度给予0.1mL/只小鼠最优，过高或过低均易诱导免疫耐受。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (10)
1.一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
对小鼠施用含有小鼠肾小管抗原和弗氏佐剂的乳化剂，得到干燥综合征肾损害小鼠模型。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述小鼠为C57BL/6小鼠；
优选地，所述C57BL/6小鼠为雌性C57BL/6小鼠；
更优选地，所述雌性C57BL/6小鼠为8周龄的雌性C57BL/6小鼠。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述含有小鼠肾小管抗原和弗氏佐剂的乳化剂的施用方式包括皮下注射、静脉注射、腹腔注射或肌肉注射；
优选地，所述含有小鼠肾小管抗原和弗氏佐剂的乳化剂的施用方式为皮下注射。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述小鼠肾小管抗原的制备包括如下步骤：
取小鼠的肾脏组织，加入消化酶进行消化，过滤制得悬液，对悬液进行离心取上清，制得小鼠肾小管抗原溶液；
优选地，所述小鼠为C57BL/6小鼠；
更优选地，所述C57BL/6小鼠为雌性C57BL/6小鼠；
最优选地，所述雌性C57BL/6小鼠为8周龄的雌性C57BL/6小鼠；
优选地，所述消化酶为胶原酶Ⅳ。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述弗氏佐剂包括FCA弗氏完全佐剂或FIA弗氏不完全佐剂。
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述含有小鼠肾小管抗原和弗氏佐剂的乳化剂的制备包括如下步骤：
在2mg/mL的肾小管抗原溶液中加入等量FCA弗氏完全佐剂制备得到FCA弗氏完全佐剂配制的1mg/mL小鼠肾小管抗原乳化剂；
在1mg/mL的肾小管抗原溶液中加入等量FIA弗氏不完全佐剂制备得到FIA弗氏不完全佐剂配制的0.5mg/mL小鼠肾小管抗原乳化剂。
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，分别在第0天、第7天于小鼠的颈背部皮下注射FCA弗氏完全佐剂配制的1mg/mL小鼠肾小管抗原乳化剂，在第14天于小鼠的颈背部皮下注射FIA弗氏不完全佐剂配制的0.5mg/mL小鼠肾小管抗原乳化剂；
优选地，所述注射的量为0.1mL/只。
8.小鼠肾小管抗原在制备干燥综合征肾损害小鼠模型中的应用；
优选地，所述小鼠肾小管抗原为根据权利要求4中所述的制备方法制备得到的小鼠肾小管抗原。
9.根据权利要求1-7任一项所述的构建方法构建得到的小鼠模型在筛选用于治疗和/或预防干燥综合征肾损害的药物中的应用。
10.一种筛选用于治疗和/或预防干燥综合征肾损害的药物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)将待测试药物施用于权利要求1-7任一项所述的构建方法构建得到的小鼠模型中；
(2)分析待测试药物的治疗效果并进行评价，选择能够明显改善小鼠模型干燥综合征肾损害病理特征的测试药物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210472055.7A CN114698592B (zh) | 2022-04-29 | 2022-04-29 | 一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210472055.7A CN114698592B (zh) | 2022-04-29 | 2022-04-29 | 一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114698592A true CN114698592A (zh) | 2022-07-05 |
| CN114698592B CN114698592B (zh) | 2022-11-04 |
Family
ID=82175623
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210472055.7A Active CN114698592B (zh) | 2022-04-29 | 2022-04-29 | 一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114698592B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1310625A (zh) * | 1998-05-22 | 2001-08-29 | 博伊斯镇国家研究医院 | α1β1整合蛋白受体抑制剂和TGF－β1抑制剂在治疗肾病中的用途 |
| JP2002302457A (ja) * | 2000-12-01 | 2002-10-18 | Morisuke Yokoyama | 腎疾患治療剤 |
| CN1399514A (zh) * | 1999-10-06 | 2003-02-26 | 黑川清 | 肾小球膜细胞增生性肾炎动物模型 |
| CN1546108A (zh) * | 2003-12-09 | 2004-11-17 | 湖北省医药工业研究院有限公司 | 一种治疗慢性肾炎的药物及其制备方法 |
| CN105585627A (zh) * | 2015-12-02 | 2016-05-18 | 北京大学第一医院 | 一种抗原多肽及由其构建抗gbm肾炎模型的应用 |
| CN106110315A (zh) * | 2016-07-15 | 2016-11-16 | 魏伟 | 一种干燥综合征小鼠模型的造模方法 |
-
2022
- 2022-04-29 CN CN202210472055.7A patent/CN114698592B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1310625A (zh) * | 1998-05-22 | 2001-08-29 | 博伊斯镇国家研究医院 | α1β1整合蛋白受体抑制剂和TGF－β1抑制剂在治疗肾病中的用途 |
| CN1399514A (zh) * | 1999-10-06 | 2003-02-26 | 黑川清 | 肾小球膜细胞增生性肾炎动物模型 |
| JP2002302457A (ja) * | 2000-12-01 | 2002-10-18 | Morisuke Yokoyama | 腎疾患治療剤 |
| CN1546108A (zh) * | 2003-12-09 | 2004-11-17 | 湖北省医药工业研究院有限公司 | 一种治疗慢性肾炎的药物及其制备方法 |
| CN105585627A (zh) * | 2015-12-02 | 2016-05-18 | 北京大学第一医院 | 一种抗原多肽及由其构建抗gbm肾炎模型的应用 |
| CN106110315A (zh) * | 2016-07-15 | 2016-11-16 | 魏伟 | 一种干燥综合征小鼠模型的造模方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| XIAOXIAO SHI 等: "Primary Sjogren’s syndrome with renal Fanconi syndrome: Good", 《SEMINARS IN ARTHRITIS AND RHEUMATISM》 * |
| 冯金忠 等: "Heymann肾炎的发病机制", 《国外医学.泌尿系统分册》 * |
| 刘湘源 等: "干燥综合征与肾小管性酸中毒", 《中国实用内科杂志》 * |
| 张卓莉 等: "原发性干燥综合征并发肾小管酸中毒的预后与治疗", 《中华风湿病学杂志》 * |
| 张莉峰 等: "以顽固性低钾型周期性瘫痪首诊神经内科的原发性干燥综合征临床分析", 《中国实用神经疾病杂志》 * |
| 王婧 等: "原发干燥综合征肾脏损害临床病理特点及治疗进展", 《中国医学科学院学报》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114698592B (zh) | 2022-11-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Schnyder et al. | Clinical, laboratory and pathological findings in cats experimentally infected with Aelurostrongylus abstrusus | |
| Doyle et al. | Detergent exposure induces epithelial barrier dysfunction and eosinophilic inflammation in the esophagus | |
| WO2019100602A1 (zh) | 一种溃疡性结肠炎动物模型的构建方法和应用 | |
| CN107921132A (zh) | 糖尿病和igfbp3/tmem219轴抑制剂 | |
| Fitzpatrick et al. | A new model of chronic hapten-induced colitis in young rats | |
| Montesinos et al. | Effects of meloxicam on hematologic and plasma biochemical analyte values and results of histologic examination of kidney biopsy specimens of African grey parrots (Psittacus erithacus) | |
| WO2021013214A1 (zh) | 中性粒细胞在制备治疗和/或预防自身免疫性肝炎的药物中的用途 | |
| Jackson et al. | Pulmonary consequences of prenatal inflammatory exposures: clinical perspective and review of basic immunological mechanisms | |
| Girish et al. | Persistence of Lgr5+ colonic epithelial stem cells in mouse models of inflammatory bowel disease | |
| CN114698592B (zh) | 一种干燥综合征肾损害小鼠模型的构建方法及其应用 | |
| Sha et al. | DNA vaccines targeting amyloid-β oligomer ameliorate cognitive deficits of aged APP/PS1/tau triple-transgenic mouse models of Alzheimer’s disease | |
| Bernstein et al. | Methods for the determination of the hazardous properties for human health of man made mineral fibers (MMMF) | |
| Masciarella et al. | A Mouse Model of MHV‐1 Virus Infection for Study of Acute and Long COVID Infection | |
| Li et al. | Histopathological and immunological changes during the acute and recovery phase in Henoch–Schönlein purpura rabbit model | |
| CN113230260A (zh) | 一种持续性痛风性关节炎动物疾病模型的构建方法 | |
| Selvaraj et al. | In vivo determination of mouse olfactory mucus cation concentrations in normal and inflammatory states | |
| RU2410761C1 (ru) | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у крыс | |
| Cresti et al. | Safety evaluations of a synthetic antimicrobial peptide administered intravenously in rats and dogs | |
| Khalaniia et al. | Pathomorphology of peripheral organs of immunogenesis in cats with spontaneous feline infectious peritonitis | |
| Kuang et al. | Toxicological effects of microplastics in renal ischemia–reperfusion injury | |
| Heath | The developmental biology of larval cyclophyllidean cestodes in mammals | |
| Henck et al. | Growth and development in rats given recombinant human epidermal growth factor1-48 as neonates | |
| Gologorsky et al. | The abundance and morphology of human large intestinal goblet and tuft cells during chronic schistosomiasis | |
| Ezzell et al. | Thermal injury-induced changes in the rat intestine brush border cytoskeleton | |
| Rosa et al. | BDNF is altered in a brain-region specific manner and rescues deficits in Spinocerebellar Ataxia Type 1 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |