JP2002241385A - ホスファチジルセリンの分画法 - Google Patents
ホスファチジルセリンの分画法Info
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- JP2002241385A JP2002241385A JP2001038430A JP2001038430A JP2002241385A JP 2002241385 A JP2002241385 A JP 2002241385A JP 2001038430 A JP2001038430 A JP 2001038430A JP 2001038430 A JP2001038430 A JP 2001038430A JP 2002241385 A JP2002241385 A JP 2002241385A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 天然あるいは人工的に調製されたリン脂質混
合物からホスファチジルセリンを簡便に濃縮する分画法
を得る。 【解決手段】 ホスファチジルセリンを含むリン脂質混
合物をアルコール類に溶解した後、該溶解液中に金属塩
を添加することによりホスファチジルセリンを不溶化せ
しめ、該不溶部を分離するもの。
合物からホスファチジルセリンを簡便に濃縮する分画法
を得る。 【解決手段】 ホスファチジルセリンを含むリン脂質混
合物をアルコール類に溶解した後、該溶解液中に金属塩
を添加することによりホスファチジルセリンを不溶化せ
しめ、該不溶部を分離するもの。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、リン脂質混合物か
らホスファチジルセリンを濃縮するための分画法に関す
るものである。
らホスファチジルセリンを濃縮するための分画法に関す
るものである。
【０００２】
【従来の技術】ホスファチジルセリン（以下、「ＰＳ」
と記載する。）は、痴呆症の予防や治療などを目的とし
た脳機能改善剤の他、免疫性疾患の治療剤や界面活性剤
としての利用が期待されている。このＰＳは動物の脳や
筋肉に含まれる他、化学合成法やホスホリパーゼＤを使
用したホスファチジル基転移反応により人工的に製造す
ることも可能である。
と記載する。）は、痴呆症の予防や治療などを目的とし
た脳機能改善剤の他、免疫性疾患の治療剤や界面活性剤
としての利用が期待されている。このＰＳは動物の脳や
筋肉に含まれる他、化学合成法やホスホリパーゼＤを使
用したホスファチジル基転移反応により人工的に製造す
ることも可能である。
【０００３】ＰＳは主に医薬や食品、化粧品として使用
されていることから、前記天然物や反応物等からＰＳを
分画し、ＰＳ含量を高めることが重要である。ところ
が、動物の脳や筋肉に含まれるＰＳ量は少なく、また化
学合成法やホスファチジル基転移反応により製造した場
合にも、ＰＳ含量の多い製品を安価に製造することは難
しいことから、使用に際してはＰＳの濃縮（精製）が必
要となる場合が多い。
されていることから、前記天然物や反応物等からＰＳを
分画し、ＰＳ含量を高めることが重要である。ところ
が、動物の脳や筋肉に含まれるＰＳ量は少なく、また化
学合成法やホスファチジル基転移反応により製造した場
合にも、ＰＳ含量の多い製品を安価に製造することは難
しいことから、使用に際してはＰＳの濃縮（精製）が必
要となる場合が多い。
【０００４】ＰＳの濃縮（精製）法としては、従来、溶
媒による分画やカラムクロマトグラフィーが用いられて
きた。しかし、溶媒分画のみでは充分なＰＳ純度を得る
ことは困難であり、一方、クロマトグラフィーのような
煩雑な操作は、コスト面、作業性の面で問題があった。
このため、ＰＳを安価かつ簡便に濃縮する方法の開発が
望まれている。
媒による分画やカラムクロマトグラフィーが用いられて
きた。しかし、溶媒分画のみでは充分なＰＳ純度を得る
ことは困難であり、一方、クロマトグラフィーのような
煩雑な操作は、コスト面、作業性の面で問題があった。
このため、ＰＳを安価かつ簡便に濃縮する方法の開発が
望まれている。
【０００５】特に、ＰＳは他のリン脂質、すなわち、ホ
スファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノー
ルアミン（ＰＥ）、ホスファチジルイノシトール（Ｐ
Ｉ）やホスファチジン酸（ＰＡ）等と分離することが困
難であるため、これらを含むリン脂質混合物から、ＰＳ
を安価に濃縮する方法を確立することが望まれている。
スファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノー
ルアミン（ＰＥ）、ホスファチジルイノシトール（Ｐ
Ｉ）やホスファチジン酸（ＰＡ）等と分離することが困
難であるため、これらを含むリン脂質混合物から、ＰＳ
を安価に濃縮する方法を確立することが望まれている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは上記課題
を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ＰＳを含むリ
ン脂質混合物をアルコール類に溶解し、さらに金属塩あ
るいはその溶液を添加することによりＰＳを沈殿せし
め、沈殿部に濃縮できることを見出した。
を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ＰＳを含むリ
ン脂質混合物をアルコール類に溶解し、さらに金属塩あ
るいはその溶液を添加することによりＰＳを沈殿せし
め、沈殿部に濃縮できることを見出した。
【０００７】本発明は、天然あるいは人工的に調製され
たリン脂質混合物からＰＳを簡便に濃縮する分画法を得
ることを目的とする。
たリン脂質混合物からＰＳを簡便に濃縮する分画法を得
ることを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】請求項１に記載された発
明に係るＰＳの分画法は、ＰＳを含むリン脂質混合物を
アルコール類に溶解した後、該溶解液中に金属塩を添加
することによりＰＳを不溶化せしめ、該不溶部を分離す
るものである。
明に係るＰＳの分画法は、ＰＳを含むリン脂質混合物を
アルコール類に溶解した後、該溶解液中に金属塩を添加
することによりＰＳを不溶化せしめ、該不溶部を分離す
るものである。
【０００９】請求項２に記載された発明に係るＰＳの分
画法は、請求項１に記載の金属塩として、リチウム塩、
カリウム塩及びナトリウム塩から選ばれる１種又は２種
以上を用いるものである。
画法は、請求項１に記載の金属塩として、リチウム塩、
カリウム塩及びナトリウム塩から選ばれる１種又は２種
以上を用いるものである。
【００１０】請求項３に記載された発明に係るＰＳの分
画法は、請求項１又は２に記載の金属塩として、塩化リ
チウム、塩化カリウム又は塩化ナトリウムを用いるもの
である。
画法は、請求項１又は２に記載の金属塩として、塩化リ
チウム、塩化カリウム又は塩化ナトリウムを用いるもの
である。
【００１１】請求項４に記載された発明に係るＰＳの分
画法は、請求項１〜３の何れかに記載のアルコール類と
して、エチルアルコールを用いるものである。
画法は、請求項１〜３の何れかに記載のアルコール類と
して、エチルアルコールを用いるものである。
【００１２】
【発明の実施の形態】本発明においては、ＰＳを含むリ
ン脂質混合物をアルコール類に溶解した後、該溶解液中
に金属塩を添加するという簡略な操作によって、ＰＳを
不溶化（沈殿、凝集等）させることにより、不溶物（沈
殿部、凝集部等）を分離・濃縮する。これにより、天然
あるいは人工的に調製されたリン脂質混合物からＰＳを
簡便に濃縮することができる。
ン脂質混合物をアルコール類に溶解した後、該溶解液中
に金属塩を添加するという簡略な操作によって、ＰＳを
不溶化（沈殿、凝集等）させることにより、不溶物（沈
殿部、凝集部等）を分離・濃縮する。これにより、天然
あるいは人工的に調製されたリン脂質混合物からＰＳを
簡便に濃縮することができる。
【００１３】本発明に用いられるＰＳを含むリン脂質混
合物としては、天然物、天然物からの抽出物又は該抽出
物を精製したもの、或いは合成リン脂質等ＰＳを含む混
合物であれば、いずれを用いてもよい。具体的には、大
豆レシチン、菜種レシチン、卵黄レシチン、トウモロコ
シレシチン或いは綿実レシチンや、化学合成法やホスフ
ァチジル基転移反応により調製したリン脂質混合物、牛
脳の溶媒抽出物等が挙げられる。中でも、ホスファチジ
ル基転移反応により調製したＰＳを含むリン脂質混合物
を用いれば、金属塩を添加した場合の濃縮効果が高く、
原料の確保のしやすさやコスト面からも好ましい。
合物としては、天然物、天然物からの抽出物又は該抽出
物を精製したもの、或いは合成リン脂質等ＰＳを含む混
合物であれば、いずれを用いてもよい。具体的には、大
豆レシチン、菜種レシチン、卵黄レシチン、トウモロコ
シレシチン或いは綿実レシチンや、化学合成法やホスフ
ァチジル基転移反応により調製したリン脂質混合物、牛
脳の溶媒抽出物等が挙げられる。中でも、ホスファチジ
ル基転移反応により調製したＰＳを含むリン脂質混合物
を用いれば、金属塩を添加した場合の濃縮効果が高く、
原料の確保のしやすさやコスト面からも好ましい。
【００１４】また、本発明に用いられる金属塩として
は、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウ
ム塩、マグネシウム塩等の金属塩、あるいはこれらを豊
富に含む天然物、例えば、食塩、苦汁、かん水、ドロマ
イト、食用真珠層粉等いずれを用いても良いが、リチウ
ム塩、ナトリウム塩またはカリウム塩を用いることが濃
縮効率の点から好ましく、特に塩化リチウム、塩化ナト
リウムまたは塩化カリウムが好ましい。これらの金属塩
は、１種または２種以上を組み合わせて用いることがで
きる。
は、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウ
ム塩、マグネシウム塩等の金属塩、あるいはこれらを豊
富に含む天然物、例えば、食塩、苦汁、かん水、ドロマ
イト、食用真珠層粉等いずれを用いても良いが、リチウ
ム塩、ナトリウム塩またはカリウム塩を用いることが濃
縮効率の点から好ましく、特に塩化リチウム、塩化ナト
リウムまたは塩化カリウムが好ましい。これらの金属塩
は、１種または２種以上を組み合わせて用いることがで
きる。
【００１５】これら金属塩の添加量は、ＰＳを沈殿させ
得る量であれば特に限定されないが、リン脂質１ｇあた
り、０．１５〜１０ミリモル、特に０．５〜５ミリモル
であることが、ＰＳの回収率および沈殿中のＰＳ含量が
高い点から好ましい。
得る量であれば特に限定されないが、リン脂質１ｇあた
り、０．１５〜１０ミリモル、特に０．５〜５ミリモル
であることが、ＰＳの回収率および沈殿中のＰＳ含量が
高い点から好ましい。
【００１６】また、本発明に用いられるアルコール類と
しては、リン脂質混合物を溶解可能なアルコール類であ
ればいずれも好適に用いられるが、中でもメチルアルコ
ール、エチルアルコール、ブチルアルコール、プロピル
アルコール、イソプロピルアルコール等の低級アルコー
ル類が好ましい。また、これらの混合物を利用すること
もできるが、エチルアルコールは食品へ利用し易く、安
全面での問題も少ないため、これを用いることが特に好
ましい。
しては、リン脂質混合物を溶解可能なアルコール類であ
ればいずれも好適に用いられるが、中でもメチルアルコ
ール、エチルアルコール、ブチルアルコール、プロピル
アルコール、イソプロピルアルコール等の低級アルコー
ル類が好ましい。また、これらの混合物を利用すること
もできるが、エチルアルコールは食品へ利用し易く、安
全面での問題も少ないため、これを用いることが特に好
ましい。
【００１７】リン脂質混合物をアルコール類に溶解する
際の濃度は特に限定されないが、この混合物が完全に溶
解できる以上の量とすることが好ましく、アルコール類
の重量に対し１〜５０％、特に２〜２０％とすること
が、ＰＳ濃縮効率や操作性の点から好ましい。
際の濃度は特に限定されないが、この混合物が完全に溶
解できる以上の量とすることが好ましく、アルコール類
の重量に対し１〜５０％、特に２〜２０％とすること
が、ＰＳ濃縮効率や操作性の点から好ましい。
【００１８】本発明において、リン脂質混合物からのＰ
Ｓの分画は、例えば以下のようにして行うことができ
る。まず、ホスファチジル基転移反応法等により調製さ
れ、ＰＣ、ＰＥ又はＰＡ等ＰＳ以外のリン脂質を成分中
に含むリン脂質混合物を、エチルアルコール等のアルコ
ール類に溶解する。この時、溶解温度等の溶解の条件は
特に限定されず、混合物の成分の種類、それらの量等に
合わせ好適な条件を選択し用いればよい。
Ｓの分画は、例えば以下のようにして行うことができ
る。まず、ホスファチジル基転移反応法等により調製さ
れ、ＰＣ、ＰＥ又はＰＡ等ＰＳ以外のリン脂質を成分中
に含むリン脂質混合物を、エチルアルコール等のアルコ
ール類に溶解する。この時、溶解温度等の溶解の条件は
特に限定されず、混合物の成分の種類、それらの量等に
合わせ好適な条件を選択し用いればよい。
【００１９】こうして得られる溶液中では、ＰＳやＰ
Ｃ、ＰＡ等のリン脂質は溶媒層に抽出されるが、場合に
よっては一部の不溶性成分が生成する。このため、遠心
分離、ろ過等の手段により溶媒から不溶性成分（沈殿
物、凝集物等）を除いてから金属塩の添加を行う。不溶
性成分中にも少量のＰＳが残存している場合には、前記
アルコール類による抽出処理は、数度繰り返し行っても
よい。
Ｃ、ＰＡ等のリン脂質は溶媒層に抽出されるが、場合に
よっては一部の不溶性成分が生成する。このため、遠心
分離、ろ過等の手段により溶媒から不溶性成分（沈殿
物、凝集物等）を除いてから金属塩の添加を行う。不溶
性成分中にも少量のＰＳが残存している場合には、前記
アルコール類による抽出処理は、数度繰り返し行っても
よい。
【００２０】次いで、アルコール溶液に対して、金属塩
を添加し、溶媒層に抽出されたＰＳを分画する。すなわ
ち、溶媒層中のＰＳ以外のリン脂質の大部分は、金属塩
の添加によっても沈殿しないが、ＰＳはその大部分が沈
殿するため、これを回収することによりＰＳの濃縮を行
うことができる。このとき、金属塩は粉末のまま加えて
も、水やアルコール等の溶媒に溶かしてから加えてもよ
い。その際の各種条件も特に限定されず、混合物の成分
の種類、それらの量等に合わせ好適な条件を選択すれば
よい。具体的には１０℃〜３０℃で３０分以上保持して
ＰＳを不溶化させればよい。
を添加し、溶媒層に抽出されたＰＳを分画する。すなわ
ち、溶媒層中のＰＳ以外のリン脂質の大部分は、金属塩
の添加によっても沈殿しないが、ＰＳはその大部分が沈
殿するため、これを回収することによりＰＳの濃縮を行
うことができる。このとき、金属塩は粉末のまま加えて
も、水やアルコール等の溶媒に溶かしてから加えてもよ
い。その際の各種条件も特に限定されず、混合物の成分
の種類、それらの量等に合わせ好適な条件を選択すれば
よい。具体的には１０℃〜３０℃で３０分以上保持して
ＰＳを不溶化させればよい。
【００２１】金属塩の添加により不溶化されたＰＳは、
遠心分離、ろ過、静置分離等の手段により、回収するこ
とができる。また、公知の精製手段、例えばカラムクロ
マトグラフィー等の手段により、更に精製することも可
能である。本発明のＰＳ濃縮物は他のリン脂質等の含量
が顕著に低下しているため、このような精製手段も比較
的簡便に行うことができる。
遠心分離、ろ過、静置分離等の手段により、回収するこ
とができる。また、公知の精製手段、例えばカラムクロ
マトグラフィー等の手段により、更に精製することも可
能である。本発明のＰＳ濃縮物は他のリン脂質等の含量
が顕著に低下しているため、このような精製手段も比較
的簡便に行うことができる。
【００２２】本発明のＰＳ濃縮物は、医薬品、食品、化
粧品等の形態で投与することができる。例えばリン脂質
の生理効果を訴求する医薬品や栄養補助食品等の形態で
用いる場合であれば、カプセル剤、顆粒剤、錠剤、散剤
等の固形製剤、或いはシロップ剤等の液状製剤として経
口投与することができる。また、経口投与剤でなくと
も、注射剤、皮膚外用剤、直腸投与剤等非経口形態で投
与することも可能である。
粧品等の形態で投与することができる。例えばリン脂質
の生理効果を訴求する医薬品や栄養補助食品等の形態で
用いる場合であれば、カプセル剤、顆粒剤、錠剤、散剤
等の固形製剤、或いはシロップ剤等の液状製剤として経
口投与することができる。また、経口投与剤でなくと
も、注射剤、皮膚外用剤、直腸投与剤等非経口形態で投
与することも可能である。
【００２３】各製剤の製造時には、乳糖、澱粉、結晶セ
ルロース、乳酸カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグ
ネシウム、無水ケイ酸等の賦形剤、白糖、ヒドロキシプ
ロピルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、
カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロ
ースカルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウ
ム、タルク、モノグリセリド、蔗糖脂肪酸エステル等の
滑沢剤や、その他、医薬・食品として許容され得る成分
を適宜使用すればよい。
ルロース、乳酸カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグ
ネシウム、無水ケイ酸等の賦形剤、白糖、ヒドロキシプ
ロピルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、
カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロ
ースカルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウ
ム、タルク、モノグリセリド、蔗糖脂肪酸エステル等の
滑沢剤や、その他、医薬・食品として許容され得る成分
を適宜使用すればよい。
【００２４】また、同様の生理効果を期待して一般食品
形態（「明らか食品」の形態）で用いる場合には、本発
明の方法により得られたＰＳ濃縮物をそのまま或いは適
宜精製処理したものを油脂、錠菓、発酵乳、飴、調味
料、ふりかけ等の飲食品に添加し、常法を用いて製造す
ればよい。
形態（「明らか食品」の形態）で用いる場合には、本発
明の方法により得られたＰＳ濃縮物をそのまま或いは適
宜精製処理したものを油脂、錠菓、発酵乳、飴、調味
料、ふりかけ等の飲食品に添加し、常法を用いて製造す
ればよい。
【００２５】これら医薬品、食品等の形態での使用に際
しては、本発明の方法により得られたＰＳが濃縮された
リン脂質組成物を適宜配合することができる。また、Ｐ
Ｓの生理効果を訴求する場合であれば、その効果を得ら
れかつ過剰摂取等の問題が生じない程度の量、５０ｍｇ
〜１０００ｍｇ／日程度の摂取が見込まれる量を適宜配
合しておけばよい。
しては、本発明の方法により得られたＰＳが濃縮された
リン脂質組成物を適宜配合することができる。また、Ｐ
Ｓの生理効果を訴求する場合であれば、その効果を得ら
れかつ過剰摂取等の問題が生じない程度の量、５０ｍｇ
〜１０００ｍｇ／日程度の摂取が見込まれる量を適宜配
合しておけばよい。
【００２６】更に、本発明のリン脂質は乳化剤として用
いてもよく、その際には、医薬品、食品、化粧品等へ
０．０１〜１０％添加するのが好ましい。
いてもよく、その際には、医薬品、食品、化粧品等へ
０．０１〜１０％添加するのが好ましい。
【００２７】
【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明を説明する
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２８】実施例１ 大豆レシチン（ＰＣ８０：クロクラーン社製）１０．０
ｇと大豆油２．０ｇを１００ｃｃメジウム瓶に取り、こ
こに９０．０ｇ（１００ｍＬ）の酢酸エチルを加えてス
ターラーで撹拌しながら加温溶解した。Ｌ−セリン１．
２ｇとＰＬＤ−Ｙ１（（株）ヤクルト本社製）１，５０
０単位を秤り取り、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．０）５．８ｍＬを加えて溶解した。
ｇと大豆油２．０ｇを１００ｃｃメジウム瓶に取り、こ
こに９０．０ｇ（１００ｍＬ）の酢酸エチルを加えてス
ターラーで撹拌しながら加温溶解した。Ｌ−セリン１．
２ｇとＰＬＤ−Ｙ１（（株）ヤクルト本社製）１，５０
０単位を秤り取り、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．０）５．８ｍＬを加えて溶解した。
【００２９】ＰＣ８０溶液全量の入ったメジウム瓶を５
０℃に保温しておき、ここに５０℃に保温した（Ｌ−セ
リン＋ＰＬＤ−Ｙ１）溶液の全量を加えて反応を開始
し、スターラーで緩やかに攪拌しながら５０℃で５時間
反応させた。３０分間氷冷してリン脂質を沈殿させて回
収した後、熱湯中に２０分放置して酵素を失活させた。
０℃に保温しておき、ここに５０℃に保温した（Ｌ−セ
リン＋ＰＬＤ−Ｙ１）溶液の全量を加えて反応を開始
し、スターラーで緩やかに攪拌しながら５０℃で５時間
反応させた。３０分間氷冷してリン脂質を沈殿させて回
収した後、熱湯中に２０分放置して酵素を失活させた。
【００３０】回収したリン脂質層にエタノール４０ｍＬ
を加えて良く混合し、４℃に一晩放置することにより沈
殿を形成させ、上清を回収した。沈殿部にはさらにエタ
ノール１２ｍＬを加えて良く混合後３０分間放置し、遠
心分離により上清を集め、先の上清と混合することによ
り大豆転移レシチン／エタノール溶液を得た。
を加えて良く混合し、４℃に一晩放置することにより沈
殿を形成させ、上清を回収した。沈殿部にはさらにエタ
ノール１２ｍＬを加えて良く混合後３０分間放置し、遠
心分離により上清を集め、先の上清と混合することによ
り大豆転移レシチン／エタノール溶液を得た。
【００３１】このようにして得た大豆転移レシチン／エ
タノール溶液２．０ｍＬ（固形分約０．３３ｇ，リン脂
質中のＰＳ含量＝３２．５％）に０．１Ｍ酢酸ナトリウ
ム／エタノール溶液を１．０ｍＬ加えて−２０℃で１時
間放置し、生じた沈殿（６０ｍｇ）を遠心操作により分
離してエタノールで洗浄した（ＰｐｔＮａ−１）。上清
を−２０℃で数日間保存した結果、さらに沈澱（７ｍ
ｇ）を生じたので遠心操作により上清（ＳｕｐＮａ，乾
固重量＝２２７ｍｇ）と分離し、エタノールで洗浄した
（ＰｐｔＮａ−２）。
タノール溶液２．０ｍＬ（固形分約０．３３ｇ，リン脂
質中のＰＳ含量＝３２．５％）に０．１Ｍ酢酸ナトリウ
ム／エタノール溶液を１．０ｍＬ加えて−２０℃で１時
間放置し、生じた沈殿（６０ｍｇ）を遠心操作により分
離してエタノールで洗浄した（ＰｐｔＮａ−１）。上清
を−２０℃で数日間保存した結果、さらに沈澱（７ｍ
ｇ）を生じたので遠心操作により上清（ＳｕｐＮａ，乾
固重量＝２２７ｍｇ）と分離し、エタノールで洗浄した
（ＰｐｔＮａ−２）。
【００３２】各試料を乾固した後、希釈溶媒（ヘキサ
ン：ジエチルエーテル：イソプロパノール＝２：２：
１）に溶解し、薄層クロマトグラフィー（展開溶媒：ク
ロロホルム：メタノール：酢酸＝１３：５：２）で展開
してから、Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅｓｔｅｒ試薬によりリ
ン脂質を発色させ、ゲルパターン画像解析システムによ
りリン脂質含量を定量した。結果を次の表１に示す。
ン：ジエチルエーテル：イソプロパノール＝２：２：
１）に溶解し、薄層クロマトグラフィー（展開溶媒：ク
ロロホルム：メタノール：酢酸＝１３：５：２）で展開
してから、Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅｓｔｅｒ試薬によりリ
ン脂質を発色させ、ゲルパターン画像解析システムによ
りリン脂質含量を定量した。結果を次の表１に示す。
【００３３】表１に示す通り、リン脂質中のＰＳ含量
（モル％）は分画前は３２．５％であったのに対して、
分画後のＰｐｔＮａでは８１．９％、ＳｕｐＮａでは
５．６％であることがわかり、ＰＳが効率よく濃縮でき
ることが確認された。
（モル％）は分画前は３２．５％であったのに対して、
分画後のＰｐｔＮａでは８１．９％、ＳｕｐＮａでは
５．６％であることがわかり、ＰＳが効率よく濃縮でき
ることが確認された。
【００３４】
【表１】
【００３５】実施例２ 実施例１で調製した大豆転移レシチン／エタノール溶液
を減圧乾燥し、そのうちの９００ｍｇを５０ｃｃメジウ
ム瓶に取り、クロロホルム２２．５ｍＬとメタノール１
５ｍＬの混合液に溶解させた。こうして調製した大豆転
移レシチン／クロメタ溶液を４．０ｍＬずつ６．０ｃｃ
メジウム瓶に分注し、ここに１Ｍ塩類溶液（ａ．塩化リ
チウム、ｂ．塩化カリウム、ｃ．塩化ナトリウム、ｄ．
塩化マグネシウム、ｅ．塩化カルシウム、ｆ．塩化アン
モニウム、ｇ．硫酸アンモニウム）を０．８ｍＬ加え
た。瓶を振って数回混合した後、静置してクロロホルム
層を回収し、その内の１．０ｍＬを秤量した試験管に取
り窒素下に乾燥した。
を減圧乾燥し、そのうちの９００ｍｇを５０ｃｃメジウ
ム瓶に取り、クロロホルム２２．５ｍＬとメタノール１
５ｍＬの混合液に溶解させた。こうして調製した大豆転
移レシチン／クロメタ溶液を４．０ｍＬずつ６．０ｃｃ
メジウム瓶に分注し、ここに１Ｍ塩類溶液（ａ．塩化リ
チウム、ｂ．塩化カリウム、ｃ．塩化ナトリウム、ｄ．
塩化マグネシウム、ｅ．塩化カルシウム、ｆ．塩化アン
モニウム、ｇ．硫酸アンモニウム）を０．８ｍＬ加え
た。瓶を振って数回混合した後、静置してクロロホルム
層を回収し、その内の１．０ｍＬを秤量した試験管に取
り窒素下に乾燥した。
【００３６】こうして得られた乾燥物（約５０ｍｇ，リ
ン脂質含量＝約２５ｍｇ）に対して０．１０ｍｌのジエ
チルエーテルを加えて溶解し、ここに１．０ｍＬのエタ
ノールを徐々に加えて沈澱を形成させ、懸濁液全体を遠
心分離して上清と沈澱とを分けた。
ン脂質含量＝約２５ｍｇ）に対して０．１０ｍｌのジエ
チルエーテルを加えて溶解し、ここに１．０ｍＬのエタ
ノールを徐々に加えて沈澱を形成させ、懸濁液全体を遠
心分離して上清と沈澱とを分けた。
【００３７】エタノール抽出液は２．５倍希釈液を５μ
Ｌ、沈澱は全体を２．５ｍＬのクロロホルムに溶解した
もの５μＬを薄層板にアプライし、実施例１の条件で展
開後、Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅｓｔｅｒ試薬によりリン脂
質を発色させゲルパターン画像解析システムによりリン
脂質含量を定量した。結果を次の表２に示す。
Ｌ、沈澱は全体を２．５ｍＬのクロロホルムに溶解した
もの５μＬを薄層板にアプライし、実施例１の条件で展
開後、Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅｓｔｅｒ試薬によりリン脂
質を発色させゲルパターン画像解析システムによりリン
脂質含量を定量した。結果を次の表２に示す。
【００３８】表２に示すように、使用した８種類の塩の
中で塩化リチウムが最も成績が良く、１回のエタノール
沈澱により純度８０％のＰＳ標品を得ることができた。
さらに、塩化リチウムでは全ＰＡのうちの約４分の３が
エタノール上清に分画されており、ＰＡの除去効率が際
立って良いことがわかった。
中で塩化リチウムが最も成績が良く、１回のエタノール
沈澱により純度８０％のＰＳ標品を得ることができた。
さらに、塩化リチウムでは全ＰＡのうちの約４分の３が
エタノール上清に分画されており、ＰＡの除去効率が際
立って良いことがわかった。
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】なお、全体的な傾向としては陽イオンの原
子番号が小さいほどＰＡの除去効率が良く、２価の陽イ
オンではＰＣも沈澱することがわかった。また、アンモ
ニウム塩の場合にはＰＳを含む大部分のリン脂質が沈殿
せず分離には適さなかった。沈殿の成績のよい塩化リチ
ウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムに関して、エタノ
ール沈澱および上清画分中のリン脂質含量を表３に示
す。
子番号が小さいほどＰＡの除去効率が良く、２価の陽イ
オンではＰＣも沈澱することがわかった。また、アンモ
ニウム塩の場合にはＰＳを含む大部分のリン脂質が沈殿
せず分離には適さなかった。沈殿の成績のよい塩化リチ
ウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムに関して、エタノ
ール沈澱および上清画分中のリン脂質含量を表３に示
す。
【００４２】実施例３ 実施例１で調製した大豆転移レシチン／エタノール溶液
を減圧乾燥し、そのうちの９００ｍｇを５０ｃｃメジウ
ム瓶に取り、クロロホルム２２．５ｍＬとメタノール１
５ｍＬの混合液に溶解させた。こうして調製した大豆転
移レシチン／クロロホルム−メタノール溶液に１Ｍ塩化
リチウム溶液を８．０ｍＬ加え、瓶を振って数回混合し
た後、静置してクロロホルム層を回収し減圧乾固した。
を減圧乾燥し、そのうちの９００ｍｇを５０ｃｃメジウ
ム瓶に取り、クロロホルム２２．５ｍＬとメタノール１
５ｍＬの混合液に溶解させた。こうして調製した大豆転
移レシチン／クロロホルム−メタノール溶液に１Ｍ塩化
リチウム溶液を８．０ｍＬ加え、瓶を振って数回混合し
た後、静置してクロロホルム層を回収し減圧乾固した。
【００４３】得られた乾燥物に５．０ｍLのジエチルエ
ーテルを加えて溶解し、ここに４０ｍＬのエタノールを
徐々に加えて溶解し（２０℃）、懸濁液全体を遠心分離
して上清（Ｓ１）と沈澱（Ｐ１）とを分離した。Ｐ１に
再び５．０ｍLのジエチルエーテルを加えて溶解し、こ
こに５０ｍＬのエタノールを徐々に加えて溶解し（２０
℃）、懸濁液全体を遠心分離して上清（Ｓ２）と沈澱
（Ｐ２）とを分けた。
ーテルを加えて溶解し、ここに４０ｍＬのエタノールを
徐々に加えて溶解し（２０℃）、懸濁液全体を遠心分離
して上清（Ｓ１）と沈澱（Ｐ１）とを分離した。Ｐ１に
再び５．０ｍLのジエチルエーテルを加えて溶解し、こ
こに５０ｍＬのエタノールを徐々に加えて溶解し（２０
℃）、懸濁液全体を遠心分離して上清（Ｓ２）と沈澱
（Ｐ２）とを分けた。
【００４４】大豆転移レシチンは１０ｍｇ／ｍＬ、Ｐ２
（湿潤状態）は２０ｍｇ／ｍＬのクロロホルムに溶解し
たものを５μＬ，Ｓ１はクロロホルムで２．５倍に希釈
したものを５μＬ、そしてＳ２は原液１０μＬを薄層板
にアプライし、実施例１の条件で展開後、Ｄｉｔｔｍｅ
ｒ−Ｌｅｓｔｅｒ試薬によりリン脂質を発色させゲルパ
ターン画像解析システムによりリン脂質含量を定量し
た。
（湿潤状態）は２０ｍｇ／ｍＬのクロロホルムに溶解し
たものを５μＬ，Ｓ１はクロロホルムで２．５倍に希釈
したものを５μＬ、そしてＳ２は原液１０μＬを薄層板
にアプライし、実施例１の条件で展開後、Ｄｉｔｔｍｅ
ｒ−Ｌｅｓｔｅｒ試薬によりリン脂質を発色させゲルパ
ターン画像解析システムによりリン脂質含量を定量し
た。
【００４５】エタノール沈澱物をもう一度エタノールで
洗浄して得たＰ２画分中のＰＳ含量は９６．９％であっ
た。ＣＭセルロースを用いたイオン交換法における回収
率は２０％程度（参考例参照）であったが、本発明によ
る分画法における回収率は約９０％と高く、高純度品を
用いた効力評価や作用機構の解明、あるいは医薬品開発
に際しての有用な精製手段となり得る。
洗浄して得たＰ２画分中のＰＳ含量は９６．９％であっ
た。ＣＭセルロースを用いたイオン交換法における回収
率は２０％程度（参考例参照）であったが、本発明によ
る分画法における回収率は約９０％と高く、高純度品を
用いた効力評価や作用機構の解明、あるいは医薬品開発
に際しての有用な精製手段となり得る。
【００４６】
【表４】
【００４７】実施例４ 実施例１で調製した大豆転移レシチン／エタノール溶液
を減圧乾燥し、そのうちの９００ｍｇを５０ｃｃメジウ
ム瓶に取り、クロロホルム２２．５ｍＬとメタノール１
５ｍＬの混合液に溶解させた。こうして調製した大豆転
移レシチン／クロロホルム−メタノール溶液を４．０ｍ
Ｌずつ６．０ｃｃメジウム瓶に分注し、ここに種々のｐ
Ｈのクエン酸−クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．
８，３．６，４．１，４．６，５．０）に溶解した２Ｍ
食塩水を０．８ｍＬ加えた。瓶を振って数回混合した
後、静置してクロロホルム層を回収し、その内の２．５
ｍＬを秤量した試験管に取り窒素下に乾燥した。
を減圧乾燥し、そのうちの９００ｍｇを５０ｃｃメジウ
ム瓶に取り、クロロホルム２２．５ｍＬとメタノール１
５ｍＬの混合液に溶解させた。こうして調製した大豆転
移レシチン／クロロホルム−メタノール溶液を４．０ｍ
Ｌずつ６．０ｃｃメジウム瓶に分注し、ここに種々のｐ
Ｈのクエン酸−クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．
８，３．６，４．１，４．６，５．０）に溶解した２Ｍ
食塩水を０．８ｍＬ加えた。瓶を振って数回混合した
後、静置してクロロホルム層を回収し、その内の２．５
ｍＬを秤量した試験管に取り窒素下に乾燥した。
【００４８】乾燥物（約１２０ｍｇ）に対して０．２ｍ
Ｌのジエチルエーテルを加えて溶解し、ここに２．０ｍ
Ｌのエタノールを徐々に加えて溶解し、懸濁液全体を遠
心分離して上清と沈澱とを分離した。エタノール抽出液
は１０倍希釈液を１０μＬ、沈澱は全体を１０．０ｍＬ
のクロロホルムに溶解したものを５μＬ、薄層板にアプ
ライし、実施例１の条件で展開後Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅ
ｓｔｅｒ試薬によりリン脂質を発色させ、ゲルパターン
画像解析システムによりリン脂質含量を定量した。
Ｌのジエチルエーテルを加えて溶解し、ここに２．０ｍ
Ｌのエタノールを徐々に加えて溶解し、懸濁液全体を遠
心分離して上清と沈澱とを分離した。エタノール抽出液
は１０倍希釈液を１０μＬ、沈澱は全体を１０．０ｍＬ
のクロロホルムに溶解したものを５μＬ、薄層板にアプ
ライし、実施例１の条件で展開後Ｄｉｔｔｍｅｒ−Ｌｅ
ｓｔｅｒ試薬によりリン脂質を発色させ、ゲルパターン
画像解析システムによりリン脂質含量を定量した。
【００４９】ｐＨ３．６以上の条件ではＰＳもＰＡも共
に沈澱画分に回収され（ＰＡ／ＰＳ＝０．２３）、両者
を分離することはできなかった。これに対してｐＨ２．
８では沈澱に含まれるＰＡ量が相対的に低く（ＰＡ／Ｐ
Ｓ＝０．１５）、この条件でのエタノール処理を繰り返
せばナトリウム塩の状態でＰＳを分画できる可能性が示
された。
に沈澱画分に回収され（ＰＡ／ＰＳ＝０．２３）、両者
を分離することはできなかった。これに対してｐＨ２．
８では沈澱に含まれるＰＡ量が相対的に低く（ＰＡ／Ｐ
Ｓ＝０．１５）、この条件でのエタノール処理を繰り返
せばナトリウム塩の状態でＰＳを分画できる可能性が示
された。
【００５０】実施例５ ＰＣ含量４０％の大豆レシチン２００ｇにセリン水溶液
１９０ｇ（セリン７０ｇ＋水１２０ｇ）とホスホリパー
ゼＤ（ＰＬＤ−Ｙ１、（株）ヤクルト本社製）の水溶液
（２４ｍｇ／ｍＬ）を１０ｍＬ練り込んで５５℃で５時
間反応させた結果、リン脂質中のＰＳ含量が４６．７％
の反応生成物が得られた。
１９０ｇ（セリン７０ｇ＋水１２０ｇ）とホスホリパー
ゼＤ（ＰＬＤ−Ｙ１、（株）ヤクルト本社製）の水溶液
（２４ｍｇ／ｍＬ）を１０ｍＬ練り込んで５５℃で５時
間反応させた結果、リン脂質中のＰＳ含量が４６．７％
の反応生成物が得られた。
【００５１】反応生成物５．０ｇにエチルアルコール２
０ｍＬを加え４５℃で抽出後、残渣（沈殿）をさらにエ
チルアルコール５ｍＬで２回抽出した。３回の抽出液を
混合し、そのうちの５ｍＬに２５％食塩水０．２０ｍＬ
を加え、４５℃に加温後、室温に放置して沈殿を形成さ
せた。その結果、上清中のＰＳ含量は乾燥固形分中３．
３％であったのに対して、沈殿物では６２．１％であ
り、ＰＳは沈殿部に効率よく濃縮されることがわかっ
た。
０ｍＬを加え４５℃で抽出後、残渣（沈殿）をさらにエ
チルアルコール５ｍＬで２回抽出した。３回の抽出液を
混合し、そのうちの５ｍＬに２５％食塩水０．２０ｍＬ
を加え、４５℃に加温後、室温に放置して沈殿を形成さ
せた。その結果、上清中のＰＳ含量は乾燥固形分中３．
３％であったのに対して、沈殿物では６２．１％であ
り、ＰＳは沈殿部に効率よく濃縮されることがわかっ
た。
【００５２】実施例６ 実施例５で調製した抽出液の混合物５ｍＬに酢酸ナトリ
ウム粉末５０ｍｇを加え４５℃に加温後、室温に放置し
て沈殿を形成させた。その結果、上清中のＰＳ含量は乾
燥固形分中３．５％であったのに対して、沈殿物では６
１．８％であり、食塩水を用いた場合と同じく、ＰＳは
沈殿部に効率よく濃縮されることがわかった。
ウム粉末５０ｍｇを加え４５℃に加温後、室温に放置し
て沈殿を形成させた。その結果、上清中のＰＳ含量は乾
燥固形分中３．５％であったのに対して、沈殿物では６
１．８％であり、食塩水を用いた場合と同じく、ＰＳは
沈殿部に効率よく濃縮されることがわかった。
【００５３】実施例７ 実施例５で調製した抽出液の混合物に対して２５％食塩
水を加えてＰＳの不溶物を形成させ、沈殿リン脂質中の
ＰＳ含量と、沈殿部に回収されるＰＳ量とを測定した。
その結果として、食塩添加量と沈殿へのＰＳ回収率及び
リン脂質中のＰＳ含量との関係を表５に示す。
水を加えてＰＳの不溶物を形成させ、沈殿リン脂質中の
ＰＳ含量と、沈殿部に回収されるＰＳ量とを測定した。
その結果として、食塩添加量と沈殿へのＰＳ回収率及び
リン脂質中のＰＳ含量との関係を表５に示す。
【００５４】
【表５】
【００５５】表５に示す通り、何れの条件でもＰＳは沈
殿画分に濃縮されたが、特に抽出液混合物中のリン脂質
１ｇあたりに加える食塩の量が１０ミリモル以下の範囲
において、沈殿リン脂質中のＰＳ含量は５５％以上であ
り、沈殿部にＰＳが効率よく濃縮されていた。一方、食
塩添加量が０．０５ミリモル以下の場合には、沈殿への
ＰＳの回収率は６０％以下であり、４０％以上が上清部
に存在していた。以上の結果から、何れの添加量でもＰ
Ｓを沈殿に濃縮することが可能であるが、アルコールに
溶解したリン脂質１ｇに対する食塩の添加量が０．１５
〜１０ミリモルの範囲が特に実用に適した添加量と考え
られた。
殿画分に濃縮されたが、特に抽出液混合物中のリン脂質
１ｇあたりに加える食塩の量が１０ミリモル以下の範囲
において、沈殿リン脂質中のＰＳ含量は５５％以上であ
り、沈殿部にＰＳが効率よく濃縮されていた。一方、食
塩添加量が０．０５ミリモル以下の場合には、沈殿への
ＰＳの回収率は６０％以下であり、４０％以上が上清部
に存在していた。以上の結果から、何れの添加量でもＰ
Ｓを沈殿に濃縮することが可能であるが、アルコールに
溶解したリン脂質１ｇに対する食塩の添加量が０．１５
〜１０ミリモルの範囲が特に実用に適した添加量と考え
られた。
【００５６】参考例 ＣＭ−セルロース・カラムクロマ
トグラフィーによる精製 牛脳からのＰＳの精製例（新生化学実験講座４、脂質II
リン脂質、ｐ．１２７）に準じて実施例１で得た大豆転
移レシチンからＰＳを精製することを試みた。
トグラフィーによる精製 牛脳からのＰＳの精製例（新生化学実験講座４、脂質II
リン脂質、ｐ．１２７）に準じて実施例１で得た大豆転
移レシチンからＰＳを精製することを試みた。
【００５７】（１） Ｎａ＋型ＣＭ−セルロースの調
製：ＣＭ−５２（Ｗｈａｔｍａｎｎ社、膨潤型）５０ｇ
を０．５Ｎ水酸化ナトリウム５００ｍＬ中に徐々に加え
て約３０分間静置した後に吸引瀘過した。瀘液が中性に
なるまで蒸留水で洗浄（５００ｍＬ×２回）した後、
０．５Ｎ塩酸５００ｍＬを流し蒸留水で瀘液が中性にな
るまで再度洗浄（５００ｍＬ×２回）した。このゲルを
０．５Ｎ水酸化ナトリウム５００ｍＬ中にかきまぜなが
ら加え３０分間静置したのち、蒸留水で中性になるまで
洗浄（５００ｍＬ×１回）し、さらにメタノール５００
ｍＬで洗浄後、最終的にメタノール懸濁液として室温に
保存した。
製：ＣＭ−５２（Ｗｈａｔｍａｎｎ社、膨潤型）５０ｇ
を０．５Ｎ水酸化ナトリウム５００ｍＬ中に徐々に加え
て約３０分間静置した後に吸引瀘過した。瀘液が中性に
なるまで蒸留水で洗浄（５００ｍＬ×２回）した後、
０．５Ｎ塩酸５００ｍＬを流し蒸留水で瀘液が中性にな
るまで再度洗浄（５００ｍＬ×２回）した。このゲルを
０．５Ｎ水酸化ナトリウム５００ｍＬ中にかきまぜなが
ら加え３０分間静置したのち、蒸留水で中性になるまで
洗浄（５００ｍＬ×１回）し、さらにメタノール５００
ｍＬで洗浄後、最終的にメタノール懸濁液として室温に
保存した。
【００５８】（２） クロマトグラフィー：（１）で調
整したＣＭ−５２を内径３０ｍｍのカラムに充填（ベッ
ド体積７０ｍＬ）し、クロロホルムを５００ｍＬ流して
コンディショニングした後、実施例１の大豆転移レシチ
ン１．０ｇを１０ｍＬのクロロホルムに溶解して沈澱を
除いた溶液をカラムにアプライした後、クロロホルムで
溶出させ、２００ｍＬのクロロホルム溶出画分（Ｆｒ．
１）を得た。
整したＣＭ−５２を内径３０ｍｍのカラムに充填（ベッ
ド体積７０ｍＬ）し、クロロホルムを５００ｍＬ流して
コンディショニングした後、実施例１の大豆転移レシチ
ン１．０ｇを１０ｍＬのクロロホルムに溶解して沈澱を
除いた溶液をカラムにアプライした後、クロロホルムで
溶出させ、２００ｍＬのクロロホルム溶出画分（Ｆｒ．
１）を得た。
【００５９】更に、クロロホルム−メタノール（８５：
１５，ｖ／ｖ）４００ｍＬ（Ｆｒ．２＋３）、クロロホ
ルム−メタノール（７５：２５，ｖ／ｖ）４００ｍＬ
（Ｆｒ．４＋５）、クロロホルム−メタノール（６５：
３５，ｖ／ｖ）４００ｍＬ（Ｆｒ．６＋７）、クロロホ
ルム−メタノール（５０：５０，ｖ／ｖ）４００ｍＬ
（Ｆｒ．８＋９）を流して２００ｍＬずつを分画し、シ
リカゲル薄層クロマトグラフィーによりリン脂質を分析
した。
１５，ｖ／ｖ）４００ｍＬ（Ｆｒ．２＋３）、クロロホ
ルム−メタノール（７５：２５，ｖ／ｖ）４００ｍＬ
（Ｆｒ．４＋５）、クロロホルム−メタノール（６５：
３５，ｖ／ｖ）４００ｍＬ（Ｆｒ．６＋７）、クロロホ
ルム−メタノール（５０：５０，ｖ／ｖ）４００ｍＬ
（Ｆｒ．８＋９）を流して２００ｍＬずつを分画し、シ
リカゲル薄層クロマトグラフィーによりリン脂質を分析
した。
【００６０】その結果、クロロホルム溶出画分（Ｆｒ．
１）にはほとんどリン脂質が検出されなかったが、クロ
ロホルム−メタノール（８５：１５，ｖ／ｖ）画分の前
半（Ｆｒ．２）には白濁状態でアプライしたエタノール
沈澱物とほぼ同じ組成の物が０．２９ｇ（乾燥重量）溶
出された。クロロホルム−メタノール（７５：２５，ｖ
／ｖ）画分（Ｆｒ．４＋５）にはＰＣは含まれなかった
がＰＳとＰＡの両方が含まれており、特にＰＡが多く溶
出されていた。そして、クロロホルム−メタノール（６
５：３５，ｖ／ｖ）画分の前半（Ｆｒ．６）にはまだ
８．０％のＰＡが含まれていたが、後半（Ｆｒ．７）以
降にはＰＡが含まれておらず、ＰＳ以外には原点にわず
かの発色が見られるのみで純度は９７．７％であった。
なお、クロロホルム−メタノール（５０：５０，ｖ／
ｖ）画分の前半（Ｆｒ．８）には相当量のＰＳが含まれ
ていたが、後半（Ｆｒ．９）にはほとんど溶出物がなか
った。
１）にはほとんどリン脂質が検出されなかったが、クロ
ロホルム−メタノール（８５：１５，ｖ／ｖ）画分の前
半（Ｆｒ．２）には白濁状態でアプライしたエタノール
沈澱物とほぼ同じ組成の物が０．２９ｇ（乾燥重量）溶
出された。クロロホルム−メタノール（７５：２５，ｖ
／ｖ）画分（Ｆｒ．４＋５）にはＰＣは含まれなかった
がＰＳとＰＡの両方が含まれており、特にＰＡが多く溶
出されていた。そして、クロロホルム−メタノール（６
５：３５，ｖ／ｖ）画分の前半（Ｆｒ．６）にはまだ
８．０％のＰＡが含まれていたが、後半（Ｆｒ．７）以
降にはＰＡが含まれておらず、ＰＳ以外には原点にわず
かの発色が見られるのみで純度は９７．７％であった。
なお、クロロホルム−メタノール（５０：５０，ｖ／
ｖ）画分の前半（Ｆｒ．８）には相当量のＰＳが含まれ
ていたが、後半（Ｆｒ．９）にはほとんど溶出物がなか
った。
【００６１】以上の結果から、大豆転移レシチンからも
牛脳分画物とほぼ同様の条件の陽イオン交換クロマトに
よりＰＳを精製できることが明らかになったが、回収率
は極めて低く（Ｆｒ．７以降のみを回収した場合，２０
％程度）、大量の精製ＰＳを得るには適さない方法であ
ることがわかった。
牛脳分画物とほぼ同様の条件の陽イオン交換クロマトに
よりＰＳを精製できることが明らかになったが、回収率
は極めて低く（Ｆｒ．７以降のみを回収した場合，２０
％程度）、大量の精製ＰＳを得るには適さない方法であ
ることがわかった。
【００６２】
【発明の効果】本発明は以上説明した通り、天然あるい
は人工的に調製されたリン脂質混合物からＰＳを簡便に
濃縮する分画法を得ることができるという効果がある。
は人工的に調製されたリン脂質混合物からＰＳを簡便に
濃縮する分画法を得ることができるという効果がある。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 工藤 聰 東京都港区東新橋１丁目１番19号 株式会 社ヤクルト本社内 Ｆターム(参考） 4H050 AA02 AD15 AD17 AD30 BB14 BE61
Claims (4)
- 【請求項１】 ホスファチジルセリンを含むリン脂質混
合物をアルコール類に溶解した後、該溶解液中に金属塩
を添加することによりホスファチジルセリンを不溶化せ
しめ、該不溶部を分離することを特徴とするホスファチ
ジルセリンの分画法。 - 【請求項２】 前記金属塩として、リチウム塩、カリウ
ム塩及びナトリウム塩から選ばれる１種又は２種以上を
用いることを特徴とする請求項１に記載のホスファチジ
ルセリンの分画法。 - 【請求項３】 前記金属塩として、塩化リチウム、塩化
カリウム又は塩化ナトリウムを用いることを特徴とする
請求項１又は２に記載のホスファチジルセリンの分画
法。 - 【請求項４】 前記アルコール類として、エチルアルコ
ールを用いることを特徴とする請求項１〜３の何れかに
記載のホスファチジルセリンの分画法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001038430A JP4009066B2 (ja) | 2001-02-15 | 2001-02-15 | ホスファチジルセリンの分画法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001038430A JP4009066B2 (ja) | 2001-02-15 | 2001-02-15 | ホスファチジルセリンの分画法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002241385A true JP2002241385A (ja) | 2002-08-28 |
| JP4009066B2 JP4009066B2 (ja) | 2007-11-14 |
Family
ID=18901400
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001038430A Expired - Lifetime JP4009066B2 (ja) | 2001-02-15 | 2001-02-15 | ホスファチジルセリンの分画法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4009066B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007506733A (ja) * | 2003-09-25 | 2007-03-22 | エンジィモテック リミテッド | ホスファチジルセリンの安定化された配合物 |
| WO2007123425A1 (en) * | 2006-04-20 | 2007-11-01 | David Stevenson | Process for separating lipid materials |
| US7709238B2 (en) * | 2004-03-18 | 2010-05-04 | Nagase Chemtex Corporation | Method for removing enzyme and method of base exchange or hydrolysis of phospholipid using the same |
| US7968112B2 (en) | 2003-10-22 | 2011-06-28 | Enzymotec Ltd. | Lipids containing omega-3 and omega-6 fatty acids |
| US8052992B2 (en) | 2003-10-22 | 2011-11-08 | Enzymotec Ltd. | Glycerophospholipids containing omega-3 and omega-6 fatty acids and their use in the treatment and improvement of cognitive functions |
-
2001
- 2001-02-15 JP JP2001038430A patent/JP4009066B2/ja not_active Expired - Lifetime
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US8324187B2 (en) | 2003-09-25 | 2012-12-04 | Enzymotec Ltd. | Stabilized formulations of phosphatidylserine |
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