JP2002234581A - 感光性染料のための包装 - Google Patents
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Abstract
を確保する蛍光色素のために利用しうる包装を提供す
る。 【解決手段】 びんに入れられた、可視光に感光性の蛍
光色素を含む包装であり、そのびんの少なくとも側壁は
200〜900nmの光スペクトル放射に対して有効な
遮蔽を形成する。そして貯蔵の間に可視光に感光性の蛍
光を保護する方法であり、そこでは該蛍光はびんの中に
入れられ、その少なくとも側壁は200〜900nmの
光スペクトル放射に対して有効な遮蔽を形成する。
Description
新しい包装および細胞計測法(cytometry)の
ための試薬にもとづく蛍光色素の包装のための新しい方
法に関する。
etry)は何10年間も多く使用されてきた細胞の分
析法である。この方法は少くとも1つの蛍光色素を用い
る。
ある。この方法は蛍光色素へ接合された抗体の組合わせ
のおかげで同時にいくつかの抗原標的を分析することを
可能にする。細胞計測法に用いられる主要な蛍光色素は
フルオレセインイソシアナート(FITC)、フィコエ
リスリン(PE)、アロフィコシアニン(APC)、P
ercP、フィコエリスリン−シアニン5(PC5)、
フィコエリスリン−シアニン7(PC7)およびフィコ
エリスリン−テキサスレッド(ECDもしくはPET
R)タンデムである。これらの蛍光色素は細胞計測計で
使用されるレーザーの主要な放出波長である、特に48
8nmおよび633nmで光放射を吸収する。PC5,PC
7,ECDタンデムはエネルギー転移法則を使用する。
すなわち、細胞計測計は、フィコエリスリンのスペクト
ル範囲の分子を励起し、フィコエリスリンはアクセプタ
ー分子(シアニン5、シアニン7もしくはテキサスレッ
ド)により吸収されたエネルギーをもどし、アクセプタ
ー分子は放出波長における放射形態にそれをもどす。
は、全スペクトル範囲にわたって、特に可視光範囲(4
00〜800nm)で光を吸収し、そして出願人はこれら
の蛍光色素が単独でもしくはタンデムで(ペアで)、貯
蔵の間にかなりの分解(degradation)を受
けることに気づいた。
蛍光強度の増加を導くエネルギー転移効率の劣化(de
terioration)を誘起する。この現象はフィ
コエリスリン管(canal)(FL2)における蛍光
の増加(消耗(loss)と呼ばれる)により細胞計測
法で翻訳されるが、異なった問題をもたしうる: −偽の陽性細胞の出現 −初期の蛍光強度値を回復するために補償を増加させる
必要性 最後の点はコンピュータ化された自動補償システムの場
合に特に重大である。
ンデムは約20年前に記載され(GlazerらのBi
ophys.J.(1983)83,383〜386
頁)、そしてフィコエリスリン−シアニン5タンデムは
約10年前に記載された(LanierらのMetho
ds(1991)Vol2 No.3,192〜199
頁)。その後ずっと、この種の製品はBECTON D
ICKINSON,PHARMINGEN,DAKO,
IQP、もしくはCALTAG社により茶色もしくはコ
ハク色のガラスびんで市販されている。
た期間にわたって該蛍光色素の貯蔵を確保する蛍光色素
のために利用しうる包装を有することが望ましい。
出願人はこれらの蛍光色素が可視光に感光性でありうる
という仮説を提案した。そして出願人は可視光を吸収す
る熱収縮しうるスリーブで蛍光色素を含むびんの側壁を
覆った。すると、非常に明らかな改良が観察されたが、
それは十分に満足すべきものではなかった。そこで出願
人は他の試験を開始したが、さらなる進展はみられなか
った。
きことに、次の事実を見出した。すなわち、スリーブを
つけたびんの底は、びんが底を下にして置かれる代わり
に側面を下にして取り扱われ、もしくはひっくり返され
たときには、蛍光色素が分解するのを十分には保護され
ないことである。そして、出願人は、これらの蛍光色素
は、200〜900nmの波長、特に可視光、特に400
〜700nm、そして著しくは400〜600nmの波長に
非常に感光性であることを理解した。
された光酸化現象であり、そこではその分子は光増感剤
の役割を演じ、すなわち、それらは酸素を活性化しう
る: −一重項酸素(singlet oxygen)の発生
で吸収された光エネルギーの移動により(いわゆるII型
のメカニズム)、 −酸素化されたラジカルの発生で励起状態への電子移動
により(いわゆるI型のメカニズム)。
約200〜900nm、そして特に400〜800nm、に
鈍い(opaque)びんの使用に関する。
m、そして特に400〜600nmの波長に感光性の蛍光
色素およびびんを含む包装に関し、そのびんの少くとも
側壁が200〜900nmの光スペクトル放射に対して、
特に400〜800nm、もっと好適には400〜700
nm、特に400〜600nmの波長に対して、有効な遮蔽
を形成し、その中に該蛍光色素が入れられるかの理由で
ある。
色素」という用語は、その構造が述べられた波長におけ
る放出により分解される蛍光色素をいい、たとえばフル
オロセインイソチオシアナート(FITC)、フィコエ
リスリン(PE)、アロフィコシアニン(APC)、P
ercP、フィコエリスリン−シアニン7(PC7)、
フィコエリスリン−シアニン5(PC5)およびフィコ
エリスリン−テキサスレッド(ECDもしくはPET
R)タンデム、好ましくは最後の2つである。「放射に
対して有効な遮蔽を形成する」(“forms an
effective screen agaist r
adiation”)という用語は、可視光放射の少く
とも95%、好ましくは少くとも98%、特に99%、
そしてもっと好ましくは100%が、びんの側壁によ
り、その構造(自然、処理もしくはスリーブ)のために
さえぎられることを意味する。「びん」という用語は、
小さいびんを意味し、好適にはねじぶた(screw−
topped)を有し、隔壁(septum)のある、
もしくはない、栓(stopper)を備える。そのび
んはポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート
でつくられていてもよいが、好ましくはガラスである。
その容量は好ましくは50μL〜50mL、特に100μ
L〜20mL、さらに特に500μL〜10mL、そしても
っと好ましくは1mL〜10mLである。たとえば、5mLび
んは1〜2mLの溶液により充填される。約5mLのガラス
びんは特に好適である。
んの底も可視スペクトル放射に対して有効な遮蔽を形成
する。
製造技術において、可視スペクトル放射に対して有効な
遮蔽を形成することは、美的な目的にも使用され、すで
に知られている。
より貫かれる隔壁を有するびんの周囲からなる静電粉砕
(electrostatic powdering)
による被覆が、たとえば挙げられうる。びんは粉砕され
た粉末を含む密閉空間内に置かれ、びんの空間で反対の
態様に帯電される。ついで、粉末はびんに堆積され、た
とえば、約180℃で炉において焼成することにより固
定される。本発明の範囲内で、上述の波長、特に600
〜800nm、特に黒もしくは青の色で好ましくはエポ
キシ樹脂吸収剤が、たとえば使用されうる。
した熱収縮可能なスリーブで被覆されうる。
うる。
実施され得、びんの底を被覆することのできる利点を提
供する。
有する。上述のような被覆もしくは処理されたびんの使
用は光誘起酸化の現象を抑制し、蛍光色素−抗体もしく
はタンデム−抗体接合体に優れた安定性を与える。
る。
ム接合体ならびに流動細胞計測法で用いられるすべての
蛍光色素に適用される。
600nmで、貯蔵の間に感光性である蛍光色素を保護
する方法に関し、そこで該蛍光色素はびん内におかれ、
その少なくとも側壁は200〜800nm、特に400
〜700nm、そして特に400〜600nm、の光ス
ペクトル放射に対して有効な遮蔽を形成する。
件は、上述の発明の他の目的に、特に蛍光色素保護方法
に適用される。
収容するように意図された、IOTEST範囲からの市
販Beckman Coulter Immunote
chガラスびんが次の段階を用いる製造ラインに置かれ
る:びんが洗浄される。
る隔壁で被覆される。
の電荷を有するマットブラック(Matte blac
k)AKZOエポキシ樹脂粉末対照NOIR MAT
1P2008391(新対照AN052)が、びんの表
面に静電現象により付着され、ついで180℃で焼成炉
を通過する。 実施例2:熱収縮可能なポリエチレンスリーブを用いる
ガラスびんの被覆 抗CD3−フィコエリスリン−シアニン5抗体接合体を
収容するように意図されたIOTEST範囲から市販の
6mLのBekman Colter Immunot
echガラスびんの側部および首部がSLEEVER
INTERNATOIONAL社により市販された熱収
縮可能なポリエチレンスリーブを用いて被覆された。 実施例3:抗CD3−フィコエリスリン−シアニン5抗
体接合体のPBS,2mg/mL BSA,0.1%ア
ジ化ナトリウム溶液で充填されたエポキシ樹脂で被覆さ
れたガラスびんの製造。
−フィコエリスリン−シアニン5抗体接合体のリン酸塩
/子ウシ血清アルブミン(2mg/mL)/0.1%
窒化ナトリウムバッファー溶液2mLを充填された。 実施例4:抗−CD3−フィコエリスリン−シアニン5
抗体接合体 本発明方法の有効性を示すために、PC5およびECD
に接合された抗CD3抗体を含む、市販および変更され
たびんが米国食品医薬品局のGMPに記載された方法に
よる強制分解試験に供された。
lter Immunoteck びん −Cytostat範囲からの市販Beckman C
oulter Immunoteckびん −静電粉砕法によりエポキシワニス層で被覆されたIO
TESTから市販Beckman Coulter I
mmunoteckびん −市販BECTON DICKINSON Pharm
ingenびん抗体タンデム接合体を含むこれらのびん
は蛍光管を備えたチャンバに導入され、1.2×106
Lux.h.の合計光照射に供された。
んの中味に与えられた優れた保護を示す。実際、静電粉
砕法によりエポキシワニス層で被覆された、IOTES
T範囲からのBeckman Coulter Imm
unotechに導入されたタンデムは照射されていな
い対照の自己蛍光と同一の、FL2蛍光を示す。一方、
他のすべての種類のびんはFL2の「消耗」(“los
s”),すなわち偽の陽性細胞の出現による自己蛍光の
増加、により翻訳される光への透過性を示す。 実施例5:抗CD19−フィコエリスリン−テキサスレ
ッド抗体接合体の試験 その方法は、抗CD19−フィコエリスリン−テキサス
レッド抗体接合体を用いることを除いて実施例4と同一
の方法で実施される。結果は図6〜9に示される。その
結果の分析は実施例4におけるのと同一の結論を導く。
た抗CD3−フィコエリスリン−シアニン5抗体接合体
の試料で得られた蛍光成績を示す。さらに詳しくは、対
照として役に立つ、光から保護された接合体に関する。
た抗CD3−フィコエリスリン−シアニン5抗体接合体
の試料で得られた蛍光成績を示す。さらに詳しくは、I
OTEST範囲からの市販Beckman Coult
er Immunotechガラスびんに包装された接
合体に関する。
た抗CD3−フィコエリスリン−シアニン5抗体接合体
の試料で得られた蛍光成績を示す。さらに詳しくは、C
ytostat範囲からの市販Beckman Cou
lter Immunotechガラスびんに包装され
る接合体に関する。
た抗CD3−フィコエリスリン−シアニン5抗体接合体
の試料で得られた蛍光成績を示す。さらに詳しくは、市
販BECTON DICKINSON Pharmin
genガラスびんに包装された接合合体に関する。
を受けた抗CD3−フィコエリスリン−シアニン5抗体
接合体の試料で得られた蛍光成績を示す。さらに詳しく
は、実施例1の静電粉砕法によりエポキシワニス層で被
覆された、IOTEST範囲からの市販Beckman
Coulter Immunoteckガラスびんに
包装された接合体に関する。
た抗CD−19−フィコエリスリン−テキサスレッド抗
体接合体の試料で得られた蛍光成績を示す。さらに詳し
くは、対照として役に立つ、光から保護された接合体に
関する。
た抗CD−19−フィコエリスリン−テキサスレッド抗
体接合体の試料で得られた蛍光成績を示す。さらに詳し
くは、IOTEST範囲からの市販Beckmann
Coulter Immunotechガラスびんに包
装された接合体に関する。
た抗CD−19−フィコエリスリン−テキサスレッド抗
体接合体の試料で得られた蛍光成績を示す。さらに詳し
くは、Cytostat範囲からの市販Beckman
Coulter Immunotechガラスびんに
包装される接合体に関する。
を受けた抗CD−19−フィコエリスリン−テキサスレ
ッド抗体接合体の試料で得られた蛍光成績を示す。さら
に詳しくは、実施例1の静電粉砕法によりエポキシワニ
ス層で被覆された、IOTEST範囲からの市販Bec
kman Coulter Immunoteckガラ
スびんに包装された接合体に関する。
Claims (7)
- 【請求項1】 可視光に感光性の蛍光色素および該蛍光
色素が入れられるびんからなる包装であり、該びんの少
くとも側壁は200〜900nmの光スペクトル放射に対
する有効な遮蔽を形成する、包装。 - 【請求項2】 びんの底も可視スペクトル放射に対する
有効な遮蔽を形成する請求項1記載の包装。 - 【請求項3】 放射に対して有効な遮蔽効果が静電粉末
化による被覆により、スリーブでびんを覆うことによ
り、γ線放射によりある種のガラスを照射することによ
り、または注型成形により得られる請求項1もしくは2
記載の包装。 - 【請求項4】 蛍光色素がフルオロセインイソチオシア
ナート(FITC)、フィコエリスリン(PE)、アロ
フィコシアニン(APC)、PercPから選ばれる
か、またはフィコエリスリン−シアニン7(PC7)、
フィコエリスリン−シアニン5(PC5)およびフィコ
エリスリン−テキサスレッド(ECDもしくはPET
R)タンデムの一部である請求項1〜3のいずれかに記
載の包装。 - 【請求項5】 びんの側壁が可視光放射の少くとも95
%をさえぎる構造を有する請求項1〜4のいずれかに記
載の包装。 - 【請求項6】 貯蔵の間に可視光に感光性の蛍光色素を
保護する方法であり、該蛍光色素はびんの中に入れら
れ、その少くとも側壁は200〜900nmの間の光スペ
クトル放射に対する有効な遮蔽を形成する方法。 - 【請求項7】 びんの側壁は可視光放射の少くとも95
%をさえぎる構造を有する請求項6記載の方法。
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