JP2002223749A

JP2002223749A - 新規酸性プロテアーゼ

Info

Publication number: JP2002223749A
Application number: JP2001021556A
Authority: JP
Inventors: Tsuyoshi Komai; 強駒井; Yoshihiro Kawabata; 兆宏川端; Heiro Ri; 秉魯李; Eiji Ichishima; 英治一島
Original assignee: T Hasegawa Co Ltd
Current assignee: T Hasegawa Co Ltd
Priority date: 2001-01-30
Filing date: 2001-01-30
Publication date: 2002-08-13
Anticipated expiration: 2021-01-30
Also published as: JP4717225B2

Abstract

(57)【要約】【課題】タンパク質分子中のペプチド結合鎖に作用し
て低分子のペプチドを容易に製造することができ、例え
ば、生理活性ペプチドとしての利用の如き医薬品分野、
飲食品分野、その他のプロテアーゼ利用分野において有
用な新規酸性プロテアーゼを提供すること。【解決手段】イカ肝臓由来の新規酸性プロテアーゼ。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、タンパク質分子中
のペプチド結合鎖に作用して低分子のペプチドを容易に
製造することができ、例えば、生理活性ペプチドとして
の利用の如き医薬品分野、飲食品分野、その他のプロテ
アーゼ利用分野において有用な酸性プロテアーゼに関
し、更に詳しくは、イカ肝臓由来の新規酸性プロテアー
ゼに関する。

【０００２】

【従来の技術】プロテアーゼはタンパク質、ペプチド中
のペプチド結合を加水分解する一群の酵素であり、これ
まで微生物由来、動植物由来の種々の酵素が開発され、
飲食品分野、医薬品分野、その他の分野で有効に利用さ
れてきた。例えば、飲食品分野においては呈味の改善、
物性の改善等に利用され、また、医薬品分野においては
生理活性ペプチドの生産、生体の生理作用の制御等に利
用されている。

【０００３】プロテアーゼはその作用により、タンパク
質のＣ末端、もしくはＮ末端のペプチド結合から順に作
用してアミノ酸を１個ずつ切り離していくエキソ型ペプ
チダーゼと、タンパク質分子内部のペプチド結合鎖に作
用して低分子のペプチドを生産するエンド型ペプチダー
ゼの２つに分類され、動物の筋肉中等に存在するカテプ
シン系の酵素群の中で、カテプシンＢ、Ｌ、ＨおよびＤ
はこのエンド型ペプチダーゼに属する。

【０００４】イカの筋肉および肝臓中に存在するカテプ
シン系の酵素についてはこれまで種々の検討がなされ、
例えば、イカ肝臓中に存在するカテプシンＢの精製およ
びその性質（Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４０
（６），１１５９−１１６５（１９７６））、イカ外套
膜中に存在するカテプシンＤ様のプロテアーゼの精製
（Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，６８
Ｂ（３），３８９−３９５（１９８１）、同，７０Ｂ
（４），７９１−７９４（１９８１）、同，７５Ｂ
（３），４０９−４１４（１９８３））、イカ消化腺中
のカテプシンＤの精製およびその性質（Ｊ．Ｓｃｉ．Ｆ
ｏｏｄＡｇｒｉｃ．，３９，８５−９４（１９８
７））、イカ塩辛熟成中の組織の軟化に及ぼすカテプシ
ンの影響（日本水産学会誌，５９（９），１６２５−１
６２９（１９９３））などが報告されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】上述した如き、食品工
業および医薬品分野等で利用できる生理活性ペプチドを
安全かつ効率よく得ることができる、新規な酸性プロテ
アーゼの開発が望まれている。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは先に、イカ
肝臓より得られる新規酸性カルボキシペプチダーゼおよ
び該酸性カルボキシペプチダーゼを用いた蛋白質加水分
解物の呈味改善方法について提案した（特許第２９０１
２０７号公報、特開平７−１１５９１３号公報参照）。
さらに鋭意研究を重ねた結果、イカ肝臓中に上記酸性カ
ルボキシペプチダーゼ以外に新規な酸性のエンド型プロ
テアーゼが存在し、該酸性プロテアーゼが生理活性ペプ
チドとしての利用の如き医薬品分野、飲食品分野、その
他のプロテアーゼ利用分野において有用であることを見
いだし本発明を完成するに至った。

【０００７】かくして、本発明は、次の理化学的性質を
有する新規な酸性プロテアーゼを提供するものである。（１）酵素作用：タンパク質分子内部のペプチド結合鎖
に作用して、低分子のペプチドを生産するエンド型プロ
テアーゼである。（２）基質特異性：酸性条件下において乳カゼイン、ヘ
モグロビン、牛血清アルブミンおよび糖蛋白質である卵
白アルブミンを良く分解する。また、カテプシンDの特
異的基質の１つであるMOCAc-Gly-Lys-Pro-Ile-Leu-Phe-
Phe-Arg-Leu-Lys(Dnp)-D-Arg-NH２（J. Biochem.，１２
５（６），１１３７−１１４３（１９９９））をPhe- -
Pheの間で切断し、蛍光強度を増加させる。さらにb-セ
クレターゼの特異的基質の１つであるMOCAc-Ser-Glu-Va
l-Asn-Leu-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-Lys(Dnp)-Arg-Arg-NH
２（J. Biochem.，１２６（１），２３５−２４２（１
９９９））を分解し、蛍光強度を増加させる。カイネテ
ィクパラメーター(kｃａｔ/Kｍ)は、基質のP1位が疎水
性のアミノ酸である場合が高い値を示す。（３）至適ｐＨ：カゼインを基質としたときの至適ｐＨ
が２．４であり、ヘモグロビンを基質としたときの至適
ｐＨが３．０である。また、MOCAc-Gly-Lys-Pro-Ile-Le
u-Phe-Phe-Arg-Leu-Lys(Dnp)-D-Arg-NH２を基質とした
場合、至適ｐＨは３．０であり、ｐＨ６．０においても
約５０％の活性を示す。（４）安定ｐＨ範囲：ｐＨ２〜６のｐＨ域で安定である
（基質としてヘモグロビンを用いて測定）。（５）至適温度：３０℃である（基質としてカゼインを
用いて測定）。（６）安定温度範囲：２０〜５０℃の温度範囲で安定で
ある（基質としてカゼインを用いて測定）。（７）５５℃、１０分の加熱でほぼ完全に失活する（基
質としてカゼインを用いて測定）。（８）阻害剤：ペプスタチン（Ｐｅｐｓｔａｔｉｎ）Ａ
により完全に阻害され、１，２−エポキシ−３−（ｐ−
ニトロフェノキシ）−プロパン（ＥＰＮＰ）およびジア
ゾアセチル−ＤＬ−ノルロイシンメチルエステル（ＤＡ
Ｎ）により約５０％の活性が阻害される。（９）相対分子質量：３６．５キロダルトン（ｋＤａ）
である（ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる）。（１０）等電点：８．３０である（等電点電気泳動によ
る）。（１１）Ｎ末端アミノ酸配列：A-P-T-P-E-P-L-S-N-Y-L-
D-A-Q-Y-Y-G-V-I-S-I-G-T-P-A-Q-N-F-K-V-V-F-Dで示さ
れ、各種カテプシンDと高い相同性を有する。例えば、
ミバエ(Drosophila melanogaster)のカテプシンDとは８
４％、ヒトのカテプシンＤとは６３％の相同性がある。
以下、本発明の酵素の製法、理化学的性質等につい
て、更に詳細に説明する。

【０００８】

【発明の実施の形態】本発明により提供される新規酸性
プロテアーゼはイカ類の肝臓から採取することができ、
採取することのできるイカ類としては、例えば、アカイ
カ、スルメイカ、マイカ、アオリイカ、ヤリイカ、ケン
サキイカ、コウイカ、ヒナイカ、ミミイカ、ホタルイ
カ、ドスイカ、ダイオウイカ、ソデイカ等の各種のイカ
類を挙げることができるが、殊に、肝臓重量が大きく、
また水揚げ量が多いスルメイカ、アカイカ及びマイカが
好適である。これらのイカ類の肝臓は、生鮮品、冷凍品
及び塩蔵品のいずれも利用することができる。

【０００９】これらのイカ類の肝臓から酸性プロテアー
ゼを分離採取する方法としては、例えば、生鮮イカまた
は冷凍イカの肝臓を分別し、これを磨砕処理した後、磨
砕物１重量部に対して通常約３〜約２０重量部、好まし
くは約５〜約１０重量部の水もしくはｐＨ約３〜６の緩
衝液を加えて攪拌抽出し、好ましくは抽出液を再度ｐＨ
約３〜４に調整した後、得られる抽出水層部を遠心分離
し、脂肪を分離除去し、更にこの水層部をケイソウ土、
セルロースなどの濾過助剤を用いて濾過し、清澄な粗酵
素液を得る方法を例示することができる。得られる粗酵
素液は、場合により、凍結濃縮、減圧濃縮、限外濾過な
どの適宜な濃縮手段を用いて、該酵素の活性低下をきた
さない温度、例えば、約５０℃以下の温度で濃縮するこ
とにより粗酵素液濃縮物とすることができる。この濃縮
物はそのまま粗酵素として利用することができるが、更
に望ましくは該濃縮物を直接あるいはデキストリン類な
どの適当なバインダーを添加した後、真空乾燥、凍結乾
燥等によって乾燥粉末化することが保存上有利である。

【００１０】さらに、該濃縮物は、硫安アンモニウム塩
析、陽イオン交換樹脂、例えば、Ｒｅｓｏｕｒｃｅ
Ｓ、ＳＳｅｐｈａｒｏｓｅ（ファルマシアバイテク社
製）など、あるいは疎水性カラム、例えば、Ｐｈｅｎｙ
ｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ６ＦＦ（ファルマシアバイテ
ク社製）などで分離・溶出し、この溶出液について、例
えば、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７
５（ファルマシアバイテク社製）などのゲル濾過カラム
を用いて活性画分を分取し、単一成分として分離精製す
ることができる。

【００１１】本発明のイカ肝臓由来の新規な酸性プロテ
アーゼは、タンパク質分子内のペプチド結合鎖に作用し
て低分子のペプチドを生産するエンド型プロテアーゼで
あり、イカ肝臓から初めて見いだされた新規な酵素であ
る。

【００１２】以下、本発明の酸性プロテアーゼの酵素学
的性質について説明する。

【００１３】（１）酵素作用タンパク質分子内部のペプチド結合鎖に作用して、低分
子のペプチドを生産するエンド型プロテアーゼである。

【００１４】牛血清アルブミンを該酸性プロテアーゼに
て作用した結果、図１に示すように低分子のペプチドに
分解した。また、糖蛋白質である卵白アルブミンに作用
した結果、低分子化していることが確認された。さらに
アミロイドb-タンパク質（１〜４２）残基に該酸性プロ
テアーゼを作用した結果、図２のＨＰＬＣクロマトグラ
ムが示すように３本のペプチド鎖に分解した。

【００１５】（２）基質特異性酸性条件下において乳カゼイン、ヘモグロビン、牛血清
アルブミンおよび糖蛋白質である卵白アルブミンを良く
分解した。また、カテプシンDの特異的基質の１つであ
るMOCAc-Gly-Lys-Pro-Ile-Leu-Phe-Phe-Arg-Leu-Lys(Dn
p)-D-Arg-NH２１ｍｇをDMSO５７０mｌに溶解し、１ｍＭ
の基質溶液とし、Ｂｕｆｆｅｒ９８０mｌに上記保存液
を加え、酵素活性を蛍光強度の増加（Ｅｘ＝３２８ｎ
ｍ、Ｅｍ＝３９８ｎｍ）により測定した。その結果、MO
CAc-Gly-Lys-Pro-Ile-Leu-Phe-Phe-Arg-Leu-Lys(Dnp)-D
-Arg-NH２をPhe- -Pheの間で切断し、蛍光強度を増加さ
せた。さらにb-セクレターゼの特異的基質の１つである
MOCAc-Ser-Glu-Val-Asn-Leu-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-Lys
(Dnp)-Arg-Arg-NH２を分解し、蛍光強度を増加させた。
カイネティクパラメーター(kｃａｔ/Kｍ)は、基質のP1
位が疎水性のアミノ酸である場合が高い値を示した。

【００１６】（３）至適ｐＨ本発明の酸性プロテアーゼを基質としてヘモグロビンお
よびカゼインを用い、ｐＨはそれぞれの基質について２
種類の緩衝液にてｐＨ１〜３．５の範囲で測定を行い相
対活性を求めた。その結果を図３に示すが、基質として
カゼインを用いたときの至適ｐＨは２．４であり、基質
としてヘモグロビンを用いたときの至適ｐＨは３．０で
あった。この至適ｐＨより本発明の酸性プロテアーゼは
カテプシンＤに属する酵素であることが推測された。

【００１７】（４）安定ｐＨ範囲本発明の酸性プロテアーゼを基質としてヘモグロビンを
用い、ｐＨは５種類の緩衝液にてｐＨ１〜９の範囲での
安定性を調べた。その結果を図４に示すが、本発明の酸
性プロテアーゼはｐＨ２〜６の範囲で約８０％の活性を
維持し、ｐＨ７においても５０％以上の活性を示した。

【００１８】（５）至適温度本発明の酸性プロテアーゼを基質としてカゼインを用い
（ｐＨ２．４）、至適温度の測定を行った。その結果を
図５に示すが、基質としてカゼインを用いたときの至適
温度は３０℃であった。

【００１９】（６）安定温度範囲本発明の酸性プロテアーゼを基質としてカゼインを用い
（ｐＨ２．４）、１０〜７０℃で１０分および３０分で
の残存活性を測定した。その結果を図６に示すが、１０
分の反応では２０〜５０℃まで約８０％の活性を示した
が、３０分の反応では５０℃で５０％以下の残存活性で
あった。

【００２０】（７）温度による失活の条件上記図６の結果より、本発明の酸性プロテアーゼの失活
は５５℃、１０分の加熱で行えることがわかった。

【００２１】（８）阻害剤本発明の酸性プロテアーゼについて表１に示す１８種類
のプロテアーゼ阻害剤の影響を調べた。反応条件は基質
としてヘモグロビン溶液を用い、ｐＨ３．０、５℃にて
２４時間（ＥＰＮＰおよびＤＡＮは４８時間）反応し、
プロテアーゼ阻害剤を添加していないものの酵素活性と
の比較を行った。その結果を下記表１に示す。

【００２２】

【表１】表１：阻害剤の影響

【００２３】＊コントロールは阻害剤を添加しないとき
の酵素活性で、表中の活性はこのコントロールを１００
としたときの相対活性で示す。

【００２４】＊＊各略記号の意味は次のとおりである。ＥＰＮＰ：１，２−エポキシ−３−（ｐ−ニトロフェノ
キシ）−プロパンＤＡＮ：ジアゾアセチル−ＤＬ−ノルロイシンメチルエ
ステルＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸ＥＧＴＡ：エチレングリコール−ビス−b−アミノエチ
ルエーテルＥ−６４：L-3-トランスカルボキシラン-2-カルボニル-
L-ロイシル-アグマチンＮＥＭ：Ｎ−エチルマレイミドＰＣＭＢ：パラクロロマーキュリー安息香酸ＰＭＳＦ：フェニルメタンスルフォニルフルオライドＡＰＭＳＦ：４−（アミヂノフェニル）メタンスルフォ
ニルフルオライドＴＬＣＫ：トシルリジルクロロメタンＺＰＣＫ：ベンジロキシカルボニルフェニルアラニルク
ロロメタンＴＰＣＫ：トシルフェニルアラニルクロロメタンこの結果より、本発明の酸性プロテアーゼはペプスタチ
ンＡにより完全に阻害され、ＥＰＮＰおよびＤＡＮによ
り半分以下の活性が阻害されたことから、本発明の酸性
プロテアーゼは活性中心にアスパラギン酸残基を有する
アスパルティックプロテアーゼであることがわかる。ま
た、他のプロテアーゼ阻害剤によってはほとんど阻害を
受けなかった。さらに、ペプスタチンＡの濃度の変化に
よる阻害活性の影響（反応時間：３０分）について測定
した結果を図７に示し、ＥＰＮＰおよびＤＡＮによる本
発明の酸性プロテアーゼの阻害を経時的に測定した結果
を図８に示すが、３０分の反応ではペプスタチンＡの濃
度が１ｍＭ以上で完全に酵素活性が阻害され、ＥＰＮＰ
およびＤＡＮによる阻害は７２時間までの測定で経時的
に阻害されてくる傾向が確認された。図８の結果から、
ＥＰＮＰと比較してＤＡＮによる阻害がつよいことから
本発明の酸性プロテアーゼはカテプシンＤであると予測
される。

【００２５】（９）相対分子質量本発明の酸性プロテアーゼの相対分子質量を非連続のド
デシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドスクラブゲ
ル電気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）（Ｎａｔｕｒｅ２２
７，６８０，１９７０）により求めたところ、図９に示
した如く３６．４ｋＤａであった。

【００２６】（１０）等電点等電点電気泳動により等電点を測定したところ本発明の
酸性プロテアーゼの等電点は図１０に明らかな如く、
８．３０であった。

【００２７】（１１）Ｎ末端アミノ酸解析本発明の酸性プロテアーゼのＮ末端アミノ酸配列をプロ
テインシークエンサーにより解析し、その結果を図１１
に示す。図１１に示す３３残基のアミノ酸配列が確認さ
れ、この３３残基の分子量は約４．２ｋＤａとなり、全
分子の約１／８．７である。このアミノ酸配列を用い
て、ＢＬＡＳＴによるホモロジー検索を試みた結果、本
酵素のＮ末端アミノ酸配列は各種のカテプシンＤと非常
に高い相同性をもつことが確認された。例えば、ミバエ
（Drosophila melanogaster）のカテプシンＤとは８４
％、ヒトのカテプシンＤとは６３％の相同性がある。こ
の結果より、本発明の酸性プロテアーゼはカテプシンＤ
に属することが確認された。

【００２８】以下、実施例により、本発明を更に具体的
に説明する。

【００２９】

【実施例】実施例１３０℃のイオン交換水４２００ｇに生のスルメイカ肝臓
（北海道産）６００ｇを添加し、ｐＨ４．０に調整して
充分にかき混ぜた後、３０℃で２時間静置した。次にデ
カント分離により水層部を得た。この水層部をセライト
濾過し、抽出液３７５０ｇを得た。この抽出液のｐＨ
３．０における０．６％ミルクカゼイン溶液を基質とす
る酵素活性を測定した結果、２．５６（ｎｋａｔ／ｍ
ｌ）であった（以下、この抽出液を「酸性プロテアーゼ
１」と称する）。

【００３０】実施例２実施例１で得られた酸性プロテアーゼ１の３７５０ｇを
限外濾過により濃縮し、濃縮液６８７ｇを得た。この濃
縮液の酵素活性を測定した結果、１３．１（ｎｋａｔ／
ｍｌ）であった（以下、この抽出液を「酸性プロテアー
ゼ２」と称する）。

【００３１】実施例３実施例２で得られた酸性プロテアーゼ２の６８７ｇに硫
酸アンモニウム１２０．９ｇを加え、かき混ぜて溶解し
た後、４℃で１５時間静置した。次いで、遠心分離に
より不溶物を除き分離液８０２ｇを得た。この分離液に
硫酸アンモニウム２５７．７ｇを加えて溶解し、４℃で
１５時間静置して塩析処理をおこない析出物３５．７ｇ
を得た。この析出物をｐＨ４．０の２０ｍＭ酢酸緩衝液
４５ｇに溶解し、得られた溶液を透析チューブ（Ｕｎｉ
ｏｎＣａｒｂｉｄｅｃｏｒｐ．）を用いて同じ緩衝
液で透析処理して脱塩したその結果、酵素液１２２．４
ｇを得た。この酵素液の酵素活性を測定した結果、６
４．９（ｎｋａｔ／ｍｌ）であった。

【００３２】実施例４３０℃のイオン交換水３．０Ｋｇに冷凍アカイカ肝臓
（ニュージーランド産）６００ｇを添加し、ｐＨ４．０
に調整して充分にかき混ぜた後、３０℃で２時間静置し
た。次にデカント分離により水層部を採取し、ケイソウ
土濾過して濾液２８００ｇを得た。この濾液を減圧下に
濃縮して濃縮液９００Ｋｇを得た。この濃縮液の酵素活
性は７．２（ｎｋａｔ／ｍｌ）であった。

【００３３】

【発明の効果】本発明のイカ肝臓由来の酸性プロテアー
ゼは、酸性域でカゼイン、ヘモグロビン、コラーゲンな
どのタンパク質、ペプチドを選択的に分解する基質特異
性を有し、ペプチドを容易に製造することができ、例え
ば、生理活性ペプチドとしての利用の如き医薬品分野、
飲食品分野、その他のプロテアーゼ利用分野において有
用である。

【００３４】

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明酵素の酵素作用を示す図である。

【図２】本発明酵素の酵素作用を示す図である。

【図３】本発明酵素の至適ｐＨを示す図である。

【図４】本発明酵素の安定ｐＨ範囲を示す図である。

【図５】本発明酵素の至適温度を示す図である。

【図６】本発明酵素の安定温度範囲を示す図である。

【図７】本発明酵素のペプスタチンＡによる阻害作用を
示す図である。

【図８】本発明酵素のＥＰＮＰおよびＤＡＮによる阻害
作用を示す図である。

【図９】本発明酵素のＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す図であ
る。

【図１０】本発明酵素の等電点電気泳動を示す図であ
る。

【図１１】本発明酵素のＮ末端アミノ酸配列を示す図で
ある。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成１３年８月３１日（２００１．８．３
１）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３３

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３３】

【発明の効果】本発明のイカ肝臓由来の酸性プロテアー
ゼは、酸性域でカゼイン、ヘモグロビンコラーゲンなど
のタンパク質、ペプチドを選択的に分解する基質特異性
を有し、ペプチドを容易に製造することができ、例え
ば、生理活性ペプチドとしての利用の如き医薬品分野、
飲食品分野、その他のプロテアーゼ利用分野において有
用である。

【配列表】 <110> 長谷川香料株式会社 T. HASEGAWA CO. LTD <120> New acidic protease <130> HASE 0102 <140> JP 2001-021556 <141> 2001-01-30 <160> 1 <210> 1 <211> 33 <212> PRT <213> Todarodes pacificus <400> 1 Ala Pro Thr Pro Glu Pro Leu Ser Asn Tyr Leu Asp Ala Gln Tyr Tyr 1 5 10 15 Gly Val Ile Ser Ile Gly Thr Pro Ala Gln Asn Phe Lys Val Val Phe 20 25 30 Asp

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者李秉魯東京都八王子市犬目町162−１エルタウン須崎203号 (72)発明者一島英治東京都世田谷区粕谷３−15−17−101 Ｆターム(参考） 4B050 CC01 DD11 FF04E FF05E LL01 LL02

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次の理化学的性質を有する酸性プロテア
ーゼ。（１）酵素作用：タンパク質分子内部のペプチド結合鎖
に作用して、低分子のペプチドを生産するエンド型プロ
テアーゼである。（２）基質特異性：酸性条件下において乳カゼイン、ヘ
モグロビン、牛血清アルブミンおよび糖蛋白質である卵
白アルブミンを良く分解する。また、カテプシンDの特
異的基質の１つであるMOCAc-Gly-Lys-Pro-Ile-Leu-Phe-
Phe-Arg-Leu-Lys(Dnp)-D-Arg-NH２をPhe- -Pheの間で切
断し、蛍光強度を増加させる。さらにb-セクレターゼの
特異的基質の１つであるMOCAc-Ser-Glu-Val-Asn-Leu-As
p-Ala-Glu-Phe-Arg-Lys(Dnp)-Arg-Arg-NH２を分解し、
蛍光強度を増加させる。カイネティクパラメーター(kｃ
ａｔ/Kｍ)は、基質のP1位が疎水性のアミノ酸である場
合が高い値を示す。（３）至適ｐＨ：カゼインを基質としたときの至適ｐＨ
が２．４であり、ヘモグロビンを基質としたときの至適
ｐＨが３．０である。また、MOCAc-Gly-Lys-Pro-Ile-Le
u-Phe-Phe-Arg-Leu-Lys(Dnp)-D-Arg-NH２を基質とした
場合、至適ｐＨは３．０であり、ｐＨ６．０においても
約５０％の活性を示す。（４）安定ｐＨ範囲：ｐＨ２〜６のｐＨ域で安定である
（基質としてヘモグロビンを用いて測定）。（５）至適温度：３０℃である（基質としてカゼインを
用いて測定）。（６）安定温度範囲：２０〜５０℃の温度範囲で安定で
ある（基質としてカゼインを用いて測定）。（７）５５℃、１０分の加熱でほぼ完全に失活する（基
質としてカゼインを用いて測定）。（８）阻害剤：ペプスタチン（Ｐｅｐｓｔａｔｉｎ）Ａ
により完全に阻害され、１，２−エポキシ−３−（ｐ−
ニトロフェノキシ）−プロパン（ＥＰＮＰ）およびジア
ゾアセチル−ＤＬ−ノルロイシンメチルエステル（ＤＡ
Ｎ）により約５０％の活性が阻害される。（９）相対分子質量：３６．５キロダルトン（ｋＤａ）
である（ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる）。（１０）等電点：８．３０である（等電点電気泳動によ
る）。（１１）Ｎ末端アミノ酸配列：A-P-T-P-E-P-L-S-N-Y-L-
D-A-Q-Y-Y-G-V-I-S-I-G-T-P-A-Q-N-F-K-V-V-F-Dで示さ
れ、各種カテプシンDと高い相同性を有する。例えば、
ミバエ(Drosophila melanogaster)のカテプシンDとは８
４％、ヒトのカテプシンＤとは６３％の相同性がある。