JP2002176987A5 - - Google Patents

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【特許請求の範囲】
【請求項１】 核酸の3'末端に結合できるドナー領域と、ドナー領域に結合した、ポリエチレングリコールを主成分としたPEG領域と、PEG領域に結合した、ペプチド転移反応によってペプチドと結合し得る基を含むペプチドアクセプター領域とを含むスペーサー分子。
【請求項２】 ペプチドアクセプター領域が、ピューロマイシンもしくはその誘導体、又は、ピューロマイシンもしくはその誘導体と1残基もしくは２残基のデオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドからなる請求項１に記載のスペーサー分子。
【請求項３】 ドナー領域とPEG領域との間に、少なくとも１つの機能付与ユニットを含む請求項１又は２に記載のスペーサー分子。
【請求項４】 機能付与ユニットが、少なくとも1残基のデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチドの塩基に機能修飾を施したものである請求項３に記載のスペーサー分子。
【請求項５】 転写プロモーターおよび翻訳エンハンサーを含む5'非翻訳領域と、5'非翻訳領域の3'側に結合した、タンパク質をコードするORF領域と、ORF領域の3'側に結合した、ポリA配列を含む3'末端領域を含む核酸であるコード分子。
【請求項６】 転写プロモーターがSP6のRNAポリメラーゼのプロモーターである請求項５記載のコード分子。
【請求項７】 翻訳エンハンサーがタバコモザイクウイルスのTMVオメガ配列の一部(O29)である請求項５又は６に記載のコード分子。
【請求項８】 ORF領域の下流部分に親和性タグ配列を含む請求項５〜７のいずれか１項に記載のコード分子。
【請求項９】 親和性タグ配列が、抗原抗体反応によるアフィニティー分離分析用タグであるFlag-tag配列である請求項８記載のコード分子。
【請求項１０】 転写プロモーターおよび翻訳エンハンサーを含む5'非翻訳領域と、5'非翻訳領域の3'側に結合した、タンパク質をコードするORF領域と、ORF領域の3'側に結合した、ポリA配列を含む3'末端領域を含む核酸であるコード分子の3'末端と、請求項１〜４のいずれか１項に記載のスペーサー分子のドナー領域とが結合してなる遺伝子型分子。
【請求項１１】 転写プロモーターがSP6のRNAポリメラーゼのプロモーターである請求項１０記載の遺伝子型分子。
【請求項１２】 翻訳エンハンサーがタバコモザイクウイルスのTMVオメガ配列の一部(O29)である請求項１０又は１１に記載の遺伝子型分子。
【請求項１３】 3'末端領域が、制限酵素XhoIが認識する配列をポリA配列の5'側に含む請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の遺伝子型分子。
【請求項１４】 ORF領域の下流部分に親和性タグ配列を含む請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子型分子。
【請求項１５】 親和性タグ配列が、抗原抗体反応によるアフィニティー分離分析用タグであるFlag-tag配列である請求項１４記載の遺伝子型分子。
【請求項１６】 (a)転写プロモーターおよび翻訳エンハンサーを含む5'非翻訳領域と、5'非翻訳領域の3'側に結合した、タンパク質をコードするORF領域と、ORF領域の3'側に結合した、ポリA配列を含む3'末端領域を含むRNAであるコード分子の3'末端と、(b)請求項１〜４のいずれか１項に記載のスペーサー分子のドナー領域とを、遊離のポリエチレングリコールの存在下で、RNAリガーゼにより結合させることを含む、遺伝子型分子の製造方法。
【請求項１７】 請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の遺伝子型分子を、ペプチド転移反応で、遺伝子型分子内のORF領域によりコードされたタンパク質である表現型分子と連結してなる対応付け分子。
【請求項１８】 請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の遺伝子型分子を無細胞翻訳系で翻訳することにより、ペプチド転移反応で、遺伝子型分子内のORF領域によりコードされたタンパク質である表現型分子と連結することを含む、対応付け分子の製造方法。
【請求項１９】 無細胞翻訳系が小麦胚芽の無細胞翻訳系である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】 無細胞翻訳系がウサギ網状赤血球の無細胞翻訳系である請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】 複数の、請求項１７に記載の対応付け分子からなるライブラリーであって、少なくとも一部の対応付け分子のコード部のORF領域が異なる配列を有しているライブラリーを用いて、対応付け分子のデコード部と目的物質との相互作用を測定し、相互作用のある対応付け分子のコード部の塩基配列を検出することを含む、目的物質に作用するタンパク質をコードする塩基配列のスクリーニング方法。
【請求項２２】 (1)複数の、請求項１７に記載の対応付け分子からなるライブラリーであって、少なくとも一部の対応付け分子のコード部のORF領域が異なる配列を有しているライブラリーを用いて、対応付け分子のデコード部と目的物質との相互作用を測定し、(2)相互作用のある対応付け分子のコード部の塩基配列を検出し、(3)該塩基配列に変異を導入することにより得られるデコード部を有する対応付け分子を含むライブラリーを調製し、(1)から(3)の工程を繰り返すことを含む、目的物質に作用するタンパク質をコードする塩基配列のスクリーニング方法。
【請求項２３】 請求項１７に記載の対応付け分子を少なくとも１０ 3 以上含むライブラリー。
【請求項２４】 請求項２３に記載のライブラリーを用いて、対応付け分子のデコード部と目的物質との相互作用を測定し、相互作用のある対応付け分子のコード部の塩基配列を検出することを含む、目的物質に作用するタンパク質をコードする塩基配列のスクリーニング方法。
【請求項２５】 (1)請求項２３に記載のライブラリーを用いて、対応付け分子のデコード部と目的物質との相互作用を測定し、(2)相互作用のある対応付け分子のコード部の塩基配列を検出し、(3)該塩基配列に変異を導入することにより得られるデコード部を有する対応付け分子を含むライブラリーを調製し、(1)から(3)の工程を繰り返すことを含む、目的物質に作用するタンパク質をコードする塩基配列のスクリーニング方法。
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